JPH057765A - リポソーム - Google Patents
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- JPH057765A JPH057765A JP3166785A JP16678591A JPH057765A JP H057765 A JPH057765 A JP H057765A JP 3166785 A JP3166785 A JP 3166785A JP 16678591 A JP16678591 A JP 16678591A JP H057765 A JPH057765 A JP H057765A
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- JP
- Japan
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- liposome
- salt
- sensitive
- lipid
- phosphate
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 膜成分の主成分が、下記式（Ｉ）で示される
化合物あるいはその塩と脂質から構成されるリポソー
ム。 R1-O-PO(OH)2─（Ｉ） 式中R1はアルキル基を示す。アルキル基は飽和でも不飽
和でもよい。また側鎖に置換基を有していてもいなくて
もよい。さらに、化合物中の不斉炭素に関してはＲ体、
Ｓ体、ラセミ体のいずれでもよい。 【効果】 本発明のリポソームは塩基性域pH感受性を有
する。
化合物あるいはその塩と脂質から構成されるリポソー
ム。 R1-O-PO(OH)2─（Ｉ） 式中R1はアルキル基を示す。アルキル基は飽和でも不飽
和でもよい。また側鎖に置換基を有していてもいなくて
もよい。さらに、化合物中の不斉炭素に関してはＲ体、
Ｓ体、ラセミ体のいずれでもよい。 【効果】 本発明のリポソームは塩基性域pH感受性を有
する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、化学、高分子、膜、分
析、製剤、医薬、化粧品、写真分野等で用途を有する、
新規なpH感受性リポソームに関する。
析、製剤、医薬、化粧品、写真分野等で用途を有する、
新規なpH感受性リポソームに関する。
【０００２】
【従来の技術】リポソームとは脂質二分子膜により構成
される閉鎖小胞体である。近年、医学・薬学の分野にお
いてこのリポソームに水溶性あるいは脂溶性の薬物を担
持させリポソームを薬物運搬体や診断薬として利用する
試みが多数なされている（例えば、砂本らバイオサイエ
ンスとインダストリー、第４７巻、４７５頁、１９８９
年）。そして、多くの脂質がリポソームを作り得ること
が報告されている。
される閉鎖小胞体である。近年、医学・薬学の分野にお
いてこのリポソームに水溶性あるいは脂溶性の薬物を担
持させリポソームを薬物運搬体や診断薬として利用する
試みが多数なされている（例えば、砂本らバイオサイエ
ンスとインダストリー、第４７巻、４７５頁、１９８９
年）。そして、多くの脂質がリポソームを作り得ること
が報告されている。
【０００３】これらのリポソームの中で、pH感受性を持
つものの例として以下のものが挙げられる。パルミトイ
ルホモセリンの閉環−開環反応を利用した例（M.B.Yatv
inら、サイエンス（Science)、第２１０巻、１２５３
頁、１９８０年）、ポリマーのpHによる形態変化を利用
した例（D.A.Tirrell ら、マクロモレキュルズ（Macrom
olecules) 、第１７巻、１６９２頁、１９８４年；ジャ
ーナルオブ アメリカン ソサイアティー（J. Am. Che
m. Soc.)、第１１０巻、７４５５頁、１９８８年；H.Ki
tanoらマクロモレキュルズ（Macromolecules) 、第２３
巻、１９５８頁、１９９０年、マクロモレキュルズ（Ma
cromolecules) 、第２４巻、４２頁、１９９１年）、Ｎ
−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノールア
ミンとジオレオイルホスファチジルエタノールアミンの
混合リポソームを用いた例（R.Nayar ら、バイオケミス
トリー（Biochem.) 、第２４巻、５９６７頁、１９８５
年）、オレイン酸等の弱酸性官能基を有する両親媒性分
子を含むリポソームを用いた例（特表昭61-501897 、バ
イオヒミカ アト バイオフィジカ アクタ（Biochim.
Biophysi. Acta.) 、第８８４巻、４７４頁、１９８６
年）、さらに、血清中で安定なものとしてL.Huang らの
例（バイオヒミカ アト バイオフィジカ アクタ（Bi
ochim. Biophysi. Acta.) 、第９８１巻、２５４頁、１
９８９年、バイオヒミカ アト バイオフィジカ アク
タ（Biochim. Biophysi.Acta.) 、第１０２２巻、３４
８頁、１９９０年）、地蔵本らのトコフェロールとカル
ボキシル基を少なくとも２個有するカルボン酸との酸性
エステルを用いる例（特開平3-30632)等が挙げられる。
つものの例として以下のものが挙げられる。パルミトイ
ルホモセリンの閉環−開環反応を利用した例（M.B.Yatv
inら、サイエンス（Science)、第２１０巻、１２５３
頁、１９８０年）、ポリマーのpHによる形態変化を利用
した例（D.A.Tirrell ら、マクロモレキュルズ（Macrom
olecules) 、第１７巻、１６９２頁、１９８４年；ジャ
ーナルオブ アメリカン ソサイアティー（J. Am. Che
m. Soc.)、第１１０巻、７４５５頁、１９８８年；H.Ki
tanoらマクロモレキュルズ（Macromolecules) 、第２３
巻、１９５８頁、１９９０年、マクロモレキュルズ（Ma
cromolecules) 、第２４巻、４２頁、１９９１年）、Ｎ
−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノールア
ミンとジオレオイルホスファチジルエタノールアミンの
混合リポソームを用いた例（R.Nayar ら、バイオケミス
トリー（Biochem.) 、第２４巻、５９６７頁、１９８５
年）、オレイン酸等の弱酸性官能基を有する両親媒性分
子を含むリポソームを用いた例（特表昭61-501897 、バ
イオヒミカ アト バイオフィジカ アクタ（Biochim.
Biophysi. Acta.) 、第８８４巻、４７４頁、１９８６
年）、さらに、血清中で安定なものとしてL.Huang らの
例（バイオヒミカ アト バイオフィジカ アクタ（Bi
ochim. Biophysi. Acta.) 、第９８１巻、２５４頁、１
９８９年、バイオヒミカ アト バイオフィジカ アク
タ（Biochim. Biophysi.Acta.) 、第１０２２巻、３４
８頁、１９９０年）、地蔵本らのトコフェロールとカル
ボキシル基を少なくとも２個有するカルボン酸との酸性
エステルを用いる例（特開平3-30632)等が挙げられる。
【０００４】しかし、これらはいずれも酸性域で選択的
に内包物を放出するものであり、安定性、感受性あるい
は敏感性において十分なものは非常に少ない。また、塩
基性域で内包物を漏出するpH感受性リポソームとしてパ
ルミトイルホモセリンを用いた例（日本化学会誌、１９
９０年、１０５４頁）が挙げられる。しかしこのリポソ
ームは感受性あるいは敏感性が非常に低いこと、中性域
でも漏出すること、ホモセリン誘導体を用いているため
大量供給に適さないなどの問題があった。
に内包物を放出するものであり、安定性、感受性あるい
は敏感性において十分なものは非常に少ない。また、塩
基性域で内包物を漏出するpH感受性リポソームとしてパ
ルミトイルホモセリンを用いた例（日本化学会誌、１９
９０年、１０５４頁）が挙げられる。しかしこのリポソ
ームは感受性あるいは敏感性が非常に低いこと、中性域
でも漏出すること、ホモセリン誘導体を用いているため
大量供給に適さないなどの問題があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、以上
のような現状を踏まえ、塩基性域において非常に敏感
で、大量供給可能なpH感受性リポソームを提供すること
にある。
のような現状を踏まえ、塩基性域において非常に敏感
で、大量供給可能なpH感受性リポソームを提供すること
にある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記課題は、膜成分の主
成分が下記式（Ｉ）で示される化合物あるいはその塩と
脂質から構成されるリポソームにより達成された。 R1-O-PO(OH)2─（Ｉ） 式中R1はアルキル基、好ましくは炭素原子数１０〜２５
のアルキル基を示す。アルキル基は飽和でも不飽和でも
よい。また側鎖に置換基を有していてもいなくてもよ
い。さらに、化合物中の不斉炭素に関してはＲ体、Ｓ
体、ラセミ体のいずれでもよい。
成分が下記式（Ｉ）で示される化合物あるいはその塩と
脂質から構成されるリポソームにより達成された。 R1-O-PO(OH)2─（Ｉ） 式中R1はアルキル基、好ましくは炭素原子数１０〜２５
のアルキル基を示す。アルキル基は飽和でも不飽和でも
よい。また側鎖に置換基を有していてもいなくてもよ
い。さらに、化合物中の不斉炭素に関してはＲ体、Ｓ
体、ラセミ体のいずれでもよい。
【０００７】特に敏感なpH感受性リポソームは、膜成分
の主成分が下記式（II) で示される化合物あるいはその
塩と脂質から構成されるリポソームである。 H-(CH2-CH(CH3)-CH2-CH2)n -O-PO(OH)2─（II) ｎは２又は３を示す。化合物中の不斉炭素に関してはＲ
体、Ｓ体、ラセミ体のいずれでもよい。
の主成分が下記式（II) で示される化合物あるいはその
塩と脂質から構成されるリポソームである。 H-(CH2-CH(CH3)-CH2-CH2)n -O-PO(OH)2─（II) ｎは２又は３を示す。化合物中の不斉炭素に関してはＲ
体、Ｓ体、ラセミ体のいずれでもよい。
【０００８】式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物の
塩としてはアルカリ金属塩（Ｎａ塩、Ｋ塩、Ｌｉ塩
等）、アルカリ土類金属塩（Ｃａ塩、Ｍｇ塩等）、アル
キルアンモニウム塩等が挙げられる。以下に本発明のpH
感受性リポソームについて説明する。本発明のpH感受性
リポソームはモノアルキルホスフェートと一般にリポソ
ームを形成する脂質を膜成分の主成分とするリポソーム
である。好ましいアルキルホスフェートとしてモノミリ
スチルホスフェート、モノセチルホスフェート、モノス
テアリルホスフェート等が挙げられる。特に敏感なpH感
受性リポソームを形成する例として３，７，１１，１６
−テトラメチルヘキサデシルホスフェート（モノフィタ
ニルホスフェート）、３，７，１１−トリメチルドデシ
ルホスフェート、モノフィチルホスフェート等が挙げら
れる。
塩としてはアルカリ金属塩（Ｎａ塩、Ｋ塩、Ｌｉ塩
等）、アルカリ土類金属塩（Ｃａ塩、Ｍｇ塩等）、アル
キルアンモニウム塩等が挙げられる。以下に本発明のpH
感受性リポソームについて説明する。本発明のpH感受性
リポソームはモノアルキルホスフェートと一般にリポソ
ームを形成する脂質を膜成分の主成分とするリポソーム
である。好ましいアルキルホスフェートとしてモノミリ
スチルホスフェート、モノセチルホスフェート、モノス
テアリルホスフェート等が挙げられる。特に敏感なpH感
受性リポソームを形成する例として３，７，１１，１６
−テトラメチルヘキサデシルホスフェート（モノフィタ
ニルホスフェート）、３，７，１１−トリメチルドデシ
ルホスフェート、モノフィチルホスフェート等が挙げら
れる。
【０００９】脂質としては、一般にリポソームを形成す
る脂質が挙げられる。好ましい脂質の例として、合成ま
たは天然のホスファチジルコリン〔例えば、ジパルミト
イルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアリル
ホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホ
スファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、卵黄レシチン（ＥＰ
Ｃ）、水添レシチン、大豆レシチン〕、ホスファチジル
セリン〔例えば、ジパルミトイルホスファチジルセリン
（ＤＰＰＳ）〕、ホスファチジルエタノールアミン〔例
えば、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン
（ＤＰＰＥ）〕、ホスファチジン酸〔例えば、ジパルミ
トイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）〕等のグリセロリ
ン脂質、スフィンゴミエリン等のスフィンゴリン脂質、
スフィンゴ糖脂質等の糖脂質が挙げられる。
る脂質が挙げられる。好ましい脂質の例として、合成ま
たは天然のホスファチジルコリン〔例えば、ジパルミト
イルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアリル
ホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホ
スファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、卵黄レシチン（ＥＰ
Ｃ）、水添レシチン、大豆レシチン〕、ホスファチジル
セリン〔例えば、ジパルミトイルホスファチジルセリン
（ＤＰＰＳ）〕、ホスファチジルエタノールアミン〔例
えば、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン
（ＤＰＰＥ）〕、ホスファチジン酸〔例えば、ジパルミ
トイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）〕等のグリセロリ
ン脂質、スフィンゴミエリン等のスフィンゴリン脂質、
スフィンゴ糖脂質等の糖脂質が挙げられる。
【００１０】特に敏感なpH感受性リポソームを形成する
例として、ＤＰＰＣを用いる例が示される。また、リポ
ソームを構成する脂質は、これらの脂質が二種類以上の
混合物でもよい。さらに、膜成分としてこれらの脂質以
外にジアルキルホスフェート（例えば、ジセチルホスフ
ェート）、アルキルアミン（例えば、ステアリルアミ
ン）等のリポソームを安定化するための脂質等や膜中に
保持させる薬物等を含んでいてもよい。
例として、ＤＰＰＣを用いる例が示される。また、リポ
ソームを構成する脂質は、これらの脂質が二種類以上の
混合物でもよい。さらに、膜成分としてこれらの脂質以
外にジアルキルホスフェート（例えば、ジセチルホスフ
ェート）、アルキルアミン（例えば、ステアリルアミ
ン）等のリポソームを安定化するための脂質等や膜中に
保持させる薬物等を含んでいてもよい。
【００１１】リポソームを構成する脂質と式（Ｉ）又は
（ＩＩ）で表されるモノアルキルホスフェートの比率は
リポソームが形成可能な範囲で、目的とする敏感性に合
った比率が採用される。しかし、敏感性と比率の関係は
用いる脂質により大きく異なる。一般に重量比で９５：
５〜５０：５０、好ましくは９０：１０〜７０：３０で
ある。
（ＩＩ）で表されるモノアルキルホスフェートの比率は
リポソームが形成可能な範囲で、目的とする敏感性に合
った比率が採用される。しかし、敏感性と比率の関係は
用いる脂質により大きく異なる。一般に重量比で９５：
５〜５０：５０、好ましくは９０：１０〜７０：３０で
ある。
【００１２】ここで、本発明のpH感受性リポソームの製
造方法について説明する。本発明の、pH感受性リポソー
ムの調製法としてはヴォルテックスイング法、超音波照
射法、界面活性剤除去法、逆相蒸発法（ＲＥＶ法）、エ
タノール注入法、エーテル注入法、プレ−ベシクル法
（Pre −Vesicle 法) 、フレンチプレス押出法、エクス
トルージョン法（Extrusion 法）、アニーリング法（An
nealing 法)、凍結融解法、Ｗ／Ｏ／Ｗエマルジョン
法、さらにStable Plurilamellar Vesicle法（ＳＰＬＶ
法）等の通常の方法が全て挙げられる。
造方法について説明する。本発明の、pH感受性リポソー
ムの調製法としてはヴォルテックスイング法、超音波照
射法、界面活性剤除去法、逆相蒸発法（ＲＥＶ法）、エ
タノール注入法、エーテル注入法、プレ−ベシクル法
（Pre −Vesicle 法) 、フレンチプレス押出法、エクス
トルージョン法（Extrusion 法）、アニーリング法（An
nealing 法)、凍結融解法、Ｗ／Ｏ／Ｗエマルジョン
法、さらにStable Plurilamellar Vesicle法（ＳＰＬＶ
法）等の通常の方法が全て挙げられる。
【００１３】これらのリポソーム調製法に関してはPapa
hajopouls らによる総説（Ann. Rev. Biophys. Bioen
g.，第９巻、４６７頁、１９８０年）、野島、砂本、井
上らによる成書（リポソーム，２１−４０頁、南江堂
（１９８８年））に記載されている。リポソームの精製
に関しては通常の方法により行えばよい。（例えば、セ
ファデックスカラム、セファローズ カラム等によるゲ
ルろ過法、遠心分離法、透析法が挙げられる。）本発明
において、リポソームに内包可能な化合物としては各種
薬剤、抗生物質、色素、蛍光性物質などが挙げられる。
hajopouls らによる総説（Ann. Rev. Biophys. Bioen
g.，第９巻、４６７頁、１９８０年）、野島、砂本、井
上らによる成書（リポソーム，２１−４０頁、南江堂
（１９８８年））に記載されている。リポソームの精製
に関しては通常の方法により行えばよい。（例えば、セ
ファデックスカラム、セファローズ カラム等によるゲ
ルろ過法、遠心分離法、透析法が挙げられる。）本発明
において、リポソームに内包可能な化合物としては各種
薬剤、抗生物質、色素、蛍光性物質などが挙げられる。
【００１４】以下に本発明で用いられるモノアルキルホ
スフェート類の製造法について述べる。本発明に使用さ
れるモノアルキルホスフェート類はオキシ塩化リンと一
当量のアルキル鎖に相当するアルコールとを塩基条件下
において反応させた後、当量の水を用いて水酸基を導入
する一般的なモノアルキルホスフェートの製造法により
合成できる。
スフェート類の製造法について述べる。本発明に使用さ
れるモノアルキルホスフェート類はオキシ塩化リンと一
当量のアルキル鎖に相当するアルコールとを塩基条件下
において反応させた後、当量の水を用いて水酸基を導入
する一般的なモノアルキルホスフェートの製造法により
合成できる。
【００１５】また、ジフェニルホスホロクロリデート等
のリン酸化剤とアルキル鎖に相当するアルコールとを塩
基条件下において反応させた後に脱保護を行ない製造で
きる。
のリン酸化剤とアルキル鎖に相当するアルコールとを塩
基条件下において反応させた後に脱保護を行ない製造で
きる。
【００１６】
【実施例】実施例１ （モノフィタニルホスフェートの
合成） （７Ｒ，１１Ｒ）−フィトール２００ｇをエタノール１
０００mlに溶解し、酸化白金１ｇを加えたのち反応混合
物を水素雰囲気下６時間室温で撹拌した。反応終了後不
溶性物質をセライト濾過して除き、ろ液を減圧濃縮して
３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ，１５−テトラメチルヘキサデカ
ノール、（（３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ）−フィタノール）
２０１ｇを得た。
合成） （７Ｒ，１１Ｒ）−フィトール２００ｇをエタノール１
０００mlに溶解し、酸化白金１ｇを加えたのち反応混合
物を水素雰囲気下６時間室温で撹拌した。反応終了後不
溶性物質をセライト濾過して除き、ろ液を減圧濃縮して
３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ，１５−テトラメチルヘキサデカ
ノール、（（３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ）−フィタノール）
２０１ｇを得た。
【００１７】次に、ジフェニルホスホロクロリデート１
3.４ｇをジクロロメタン１００mlに溶解し、３ＲＳ，７
Ｒ，１１Ｒ，１５−テトラメチルヘキサデカノール１4.
９ｇ、トリエチルアミン4.０４ｇ、Ｎ，Ｎ−ジメチルア
ミノピリジン２００mgをジクロロメタン５０mlに溶解し
た溶液を滴下して一昼夜撹拌した。反応液を１０％クエ
ン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗った
後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥しジクロロメタ
ンを減圧留去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフ
ィーにて精製しヘキサン／酢酸エチル＝９５／５の画分
を集め、３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ，１５−テトラメチルヘ
キサデシルジフェニルホスフェート２７ｇを得た。
3.４ｇをジクロロメタン１００mlに溶解し、３ＲＳ，７
Ｒ，１１Ｒ，１５−テトラメチルヘキサデカノール１4.
９ｇ、トリエチルアミン4.０４ｇ、Ｎ，Ｎ−ジメチルア
ミノピリジン２００mgをジクロロメタン５０mlに溶解し
た溶液を滴下して一昼夜撹拌した。反応液を１０％クエ
ン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗った
後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥しジクロロメタ
ンを減圧留去した。残留物をシリカゲルクロマトグラフ
ィーにて精製しヘキサン／酢酸エチル＝９５／５の画分
を集め、３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ，１５−テトラメチルヘ
キサデシルジフェニルホスフェート２７ｇを得た。
【００１８】３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ，１５−テトラメチ
ルヘキサデシルジフェニルホスフェート２７ｇを酢酸２
００mlに溶解した。二酸化白金３００mgを加えて２日間
加水素分解を行った。反応終了後不溶性物質をセライト
濾過して除き、ろ液を減圧濃縮して３ＲＳ，７Ｒ，１１
Ｒ，１５−テトラメチルヘキサデシルホスフェート１4.
０ｇを得た。
ルヘキサデシルジフェニルホスフェート２７ｇを酢酸２
００mlに溶解した。二酸化白金３００mgを加えて２日間
加水素分解を行った。反応終了後不溶性物質をセライト
濾過して除き、ろ液を減圧濃縮して３ＲＳ，７Ｒ，１１
Ｒ，１５−テトラメチルヘキサデシルホスフェート１4.
０ｇを得た。
【００１９】赤外吸収スペクトル（neat) cm-1：２９６
０，２９２５，２８７０，１４６０，１３８０，１１５
０，１０３０ ＦＡＢ−ＭＡＳＳ：（Ｍ＋Ｈ）+ ３７９ 実施例２ （モノセチルホスフェートの合成） 実施例１において、３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ，１５−テト
ラメチルヘキサデカノールの代りにヘキサデカノールを
用い、同様にして合成した。
０，２９２５，２８７０，１４６０，１３８０，１１５
０，１０３０ ＦＡＢ−ＭＡＳＳ：（Ｍ＋Ｈ）+ ３７９ 実施例２ （モノセチルホスフェートの合成） 実施例１において、３ＲＳ，７Ｒ，１１Ｒ，１５−テト
ラメチルヘキサデカノールの代りにヘキサデカノールを
用い、同様にして合成した。
【００２０】ＦＡＢ−ＭＡＳＳ：（Ｍ＋Ｈ）+ ３２３
実施例３ （pH感受性リポソームの調製）
モノフィタニルホスフェート3.４１mg、ＤＰＰＣ２6.６
mgをクロロホルム３mlに溶解した後、クロロホルムを減
圧留去し薄膜を形成させた。0.１mmHgで一時間乾燥させ
た後、２００mMカルボキシルフルオレセイン（ＣＦ）−
２００mMトリス−HCl 緩衝液（pH7.０、２００mMNaCl）
3.０mlを加え６０℃でヴォルテックスミキサーで振とう
した。つぎにバス型超音波照射器を用いて４０℃で超音
波照射した後、エクストルーダー（ミクロフィルター孔
径0.２μｍ）を用いてサイジングを行いセファロース４
Ｂを用いたゲルろ過によりＣＦを内包したリポソーム分
画を得た。 実施例４ （pH感受性リポソームの調製） モノセチルホスフェート2.５６mg、ＤＰＰＣ２3.５２mg
をクロロホルム３mlに溶解した後、クロロホルムを減圧
留去し薄膜を形成させた。0.１mmHgで一時間乾燥させた
後、２００mMカルボキシルフルオレセイン（ＣＦ）−２
０mMトリス−HCl 緩衝液（pH7.０、２００mMNaCl）2.６
mlを加え、６０℃でヴォルテックス ミキサーで振とう
した。つぎにバス型超音波照射器を用いて４０℃で超音
波照射した後、エクストルーダー（0.２μｍ）を用いて
サイジングを行いセファロース４Ｂを用いたゲルろ過に
よりＣＦを内包したリポソーム分画を得た。 実施例５ （pH感受性リポソームの調製） モノセチルホスフェート2.６４mg、ＥＰＣ２5.０mgをク
ロロホルム３mlに溶解した後、クロロホルムを減圧留去
し薄膜を形成させた。0.１mmHgで一時間乾燥させた後、
２００mMＣＦ−２０mMトリス−HCl 緩衝液（pH7.０、２
００mMNaCl）2.８mlを加え、６０℃でヴォルテックス
ミキサーで振とうした。つぎにバス型超音波照射器を用
いて４０℃で超音波照射した後、エクストルーダー（0.
２μｍ）を用いてサイジングを行いセファロース４Ｂを
用いたゲルろ過によりＣＦを内包したリポソーム分画を
得た。 実施例６ （pH感受性の測定） 塩酸でpH調製した各種pHの２０mMトリス＋２００mMNaCl
緩衝液１８００μl に実施例３、４、５で得たリポソー
ム分散液２００μｌを加え２５℃で３０秒間インキュベ
ートした。
mgをクロロホルム３mlに溶解した後、クロロホルムを減
圧留去し薄膜を形成させた。0.１mmHgで一時間乾燥させ
た後、２００mMカルボキシルフルオレセイン（ＣＦ）−
２００mMトリス−HCl 緩衝液（pH7.０、２００mMNaCl）
3.０mlを加え６０℃でヴォルテックスミキサーで振とう
した。つぎにバス型超音波照射器を用いて４０℃で超音
波照射した後、エクストルーダー（ミクロフィルター孔
径0.２μｍ）を用いてサイジングを行いセファロース４
Ｂを用いたゲルろ過によりＣＦを内包したリポソーム分
画を得た。 実施例４ （pH感受性リポソームの調製） モノセチルホスフェート2.５６mg、ＤＰＰＣ２3.５２mg
をクロロホルム３mlに溶解した後、クロロホルムを減圧
留去し薄膜を形成させた。0.１mmHgで一時間乾燥させた
後、２００mMカルボキシルフルオレセイン（ＣＦ）−２
０mMトリス−HCl 緩衝液（pH7.０、２００mMNaCl）2.６
mlを加え、６０℃でヴォルテックス ミキサーで振とう
した。つぎにバス型超音波照射器を用いて４０℃で超音
波照射した後、エクストルーダー（0.２μｍ）を用いて
サイジングを行いセファロース４Ｂを用いたゲルろ過に
よりＣＦを内包したリポソーム分画を得た。 実施例５ （pH感受性リポソームの調製） モノセチルホスフェート2.６４mg、ＥＰＣ２5.０mgをク
ロロホルム３mlに溶解した後、クロロホルムを減圧留去
し薄膜を形成させた。0.１mmHgで一時間乾燥させた後、
２００mMＣＦ−２０mMトリス−HCl 緩衝液（pH7.０、２
００mMNaCl）2.８mlを加え、６０℃でヴォルテックス
ミキサーで振とうした。つぎにバス型超音波照射器を用
いて４０℃で超音波照射した後、エクストルーダー（0.
２μｍ）を用いてサイジングを行いセファロース４Ｂを
用いたゲルろ過によりＣＦを内包したリポソーム分画を
得た。 実施例６ （pH感受性の測定） 塩酸でpH調製した各種pHの２０mMトリス＋２００mMNaCl
緩衝液１８００μl に実施例３、４、５で得たリポソー
ム分散液２００μｌを加え２５℃で３０秒間インキュベ
ートした。
【００２１】次に、このインキュベートしたリポソーム
分散液２００μｌをpH7.０の２０mMトリス−HCl ＋２０
０mMNaCl緩衝液１８００μｌに加え蛍光強度を測定し
た。pH7.０の蛍光強度を基準として、３０秒後のＣＦの
漏出を評価した。結果を図１、図２に示す。 実施例７ （pH応答性の測定） pH7.０の２０mMトリス−HCl ＋２００mMNaCl緩衝液１８
００μｌに実施例３で得たリポソーム分散液２００μｌ
を加えた。５分おきに0.１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液
１０μｌを加えた。このリポソーム分散液２００μｌを
pH7.０の２０mMトリス＋２００mMNaCl緩衝液１８００μ
ｌに加え蛍光強度を測定した。
分散液２００μｌをpH7.０の２０mMトリス−HCl ＋２０
０mMNaCl緩衝液１８００μｌに加え蛍光強度を測定し
た。pH7.０の蛍光強度を基準として、３０秒後のＣＦの
漏出を評価した。結果を図１、図２に示す。 実施例７ （pH応答性の測定） pH7.０の２０mMトリス−HCl ＋２００mMNaCl緩衝液１８
００μｌに実施例３で得たリポソーム分散液２００μｌ
を加えた。５分おきに0.１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液
１０μｌを加えた。このリポソーム分散液２００μｌを
pH7.０の２０mMトリス＋２００mMNaCl緩衝液１８００μ
ｌに加え蛍光強度を測定した。
【００２２】結果を図３に示す。
【００２３】
【発明の効果】本発明のリポソームはpH感受性を有す
る。しかもその感受性あるいは敏感性を、用いるアルキ
ルホスフェート、あるいは膜を構成する脂質により調製
することが可能である。したがって、本発明により塩基
性域において瞬時に内包物を放出することや、pHの変化
の度合いに応じて内包物を漏出することが可能となっ
た。
る。しかもその感受性あるいは敏感性を、用いるアルキ
ルホスフェート、あるいは膜を構成する脂質により調製
することが可能である。したがって、本発明により塩基
性域において瞬時に内包物を放出することや、pHの変化
の度合いに応じて内包物を漏出することが可能となっ
た。
【図１】実施例３及び実施例４により製造したpH感受性
リポソームおよびＤＰＰＣの各pHにおける３０秒後のＣ
Ｆの漏出率を示す。
リポソームおよびＤＰＰＣの各pHにおける３０秒後のＣ
Ｆの漏出率を示す。
【図２】実施例５により製造したpH感受性リポソームお
よびＥＰＣの各pHにおける３０秒後のＣＦの漏出率を示
す。
よびＥＰＣの各pHにおける３０秒後のＣＦの漏出率を示
す。
【図３】実施例３により製造したpH感受性リポソームの
ＣＦ漏出に関するpH応答性を示す。
ＣＦ漏出に関するpH応答性を示す。
Claims (2)
- 【請求項１】 膜成分が、下記式（Ｉ）で示される化合
物あるいはその塩と脂質を含むリポソーム。 R1-O-PO(OH)2─（Ｉ） 式中R1はアルキル基を示す。アルキル基は飽和でも不飽
和でもよい。また側鎖に置換基を有していてもいなくて
もよい。さらに、化合物中の不斉炭素に関してはＲ体、
Ｓ体、ラセミ体のいずれでもよい。 - 【請求項２】 膜成分が、下記式（II) で示される化合
物あるいはその塩と脂質を含むリポソーム。 H-(CH2-CH(CH3)-CH2-CH2)n -O-PO(OH)2─（II) ｎは２又は３を示す。化合物中の不斉炭素に関してはＲ
体、Ｓ体、ラセミ体のいずれでもよい。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3166785A JPH057765A (ja) | 1991-07-08 | 1991-07-08 | リポソーム |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3166785A JPH057765A (ja) | 1991-07-08 | 1991-07-08 | リポソーム |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH057765A true JPH057765A (ja) | 1993-01-19 |
Family
ID=15837633
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3166785A Pending JPH057765A (ja) | 1991-07-08 | 1991-07-08 | リポソーム |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH057765A (ja) |
-
1991
- 1991-07-08 JP JP3166785A patent/JPH057765A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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| EXPY | Cancellation because of completion of term |