RU2021372C1 - Способ получения гидролитических ферментов - Google Patents
Способ получения гидролитических ферментов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2021372C1 RU2021372C1 SU4942523/13A SU4942523A RU2021372C1 RU 2021372 C1 RU2021372 C1 RU 2021372C1 SU 4942523/13 A SU4942523/13 A SU 4942523/13A SU 4942523 A SU4942523 A SU 4942523A RU 2021372 C1 RU2021372 C1 RU 2021372C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- enzymes
- extract
- solution
- ammonium sulfate
- extraction
- Prior art date
Links
- 0 C1CC2=C=C*C2C1 Chemical compound C1CC2=C=C*C2C1 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: биотехнология, в частности производство ферментов из животного сырья. Сущность изобретения: предварительно измельченное животное сырье подвергают кислотной экстракции. Затем экстракт последовательно подвергают центрифугированию, сепарированию, ионообменной сорбции на макропористом сорбенте с pH 1,5 - 3,0 с последующей элюцией ферментов с носителя раствором сернокислого аммония в аммиаке с pH 9,0 - 10,0. 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к производству ферментов, а именно к способу получения гидролитических ферментов из животного сырья, например, протеаз, нуклеаз.
Известные способы получения ферментов из животного сырья с использованием сорбционных методов выделения предусматривают получение отдельных ферментов или нескольких протеаз в комплексе, в основном для препаративных целей.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению по технической сущности и достигаемому эффекту является промышленный способ получения комплекса четырех гидролитических ферментов (дезоксирибонуклеазы, рибонуклеазы, трипсина, химотрипсина) из поджелудочной железы крупного рогатого скота путем экстракции с последующим отделением от жмыха и дробным высаливанием с последующей очисткой, индивидуальной для каждого фермента.
Указанный способ, выбранный в качестве прототипа, обладает рядом недостатков:
- экстракцию осуществляют в течение 16-17 ч с повторной экстракцией в течение 1 ч;
- отделение экстракта от остатков жмыха и балластных веществ ведут на тканевых фильтрах в течение 3-5 сут;
- готовые формы ферментов не являются гомогенными, а содержат ряд примесей (фиг.1);
- в процессе производства имеются большие потери целевых продуктов, что приводит к низким выходам готовых препаратов.
- экстракцию осуществляют в течение 16-17 ч с повторной экстракцией в течение 1 ч;
- отделение экстракта от остатков жмыха и балластных веществ ведут на тканевых фильтрах в течение 3-5 сут;
- готовые формы ферментов не являются гомогенными, а содержат ряд примесей (фиг.1);
- в процессе производства имеются большие потери целевых продуктов, что приводит к низким выходам готовых препаратов.
Целью предлагаемого изобретения является сокращение времени процесса получения ферментов, увеличение их выхода и улучшение качества.
На фиг.1 показаны гельхроматограммы препаратов, полученных по регламентной технологии:
а) трипсин, б) химотрипсин, в) дезоксирибонуклеаза, г) рибонуклеаза; на фиг.2 - кинетика экстракции белка из поджелудочной железы; на фиг.3 - гельхроматограммы препаратов, полученных с использованием заявляемого способа получения гидролитических ферментов;
а) трипсин, б) химотрипсин, в) дезоксирибонуклеаза, г) рибонуклеаза.
а) трипсин, б) химотрипсин, в) дезоксирибонуклеаза, г) рибонуклеаза; на фиг.2 - кинетика экстракции белка из поджелудочной железы; на фиг.3 - гельхроматограммы препаратов, полученных с использованием заявляемого способа получения гидролитических ферментов;
а) трипсин, б) химотрипсин, в) дезоксирибонуклеаза, г) рибонуклеаза.
Цель достигается использованием способа получения гидролитических ферментов, который осуществляют следующим образом: предварительно измельченную поджелудочную железу подвергают экстракции раствором серной кислоты в течение 3-5 ч. Увеличение времени экстракции больше 5 ч нецелесообразно, так как может приводить к уменьшению содержания ферментов в экстракте (фиг.2). После отделения железы на шнековой центрифуге экстракт, содержащий жировые примеси и балластные вещества, подвергают сепарированию. Неоседающий, непрозрачный экстракт подают на ионообменную колонну с сорбентом со скоростью 50-150 мл/см2 ч. Увеличение и уменьшение скорости сорбции вне указанного интервала существенно не влияет на процесс. После окончания сорбции колонну промывают подкисленной до рН 1,5-3,0 водой в количестве, равном свободному объему колонны. Затем осуществляют десорбцию ферментов с ионита путем подачи сверху вниз элюента со скоростью 25-75 мл/см2 ч. В качестве элюента используют раствор сульфата аммония в аммиаке с рН 9,0-10,0. Уменьшение скорости подачи элюента и изменение рН элюента меньше 9,0 приводит к "размыванию" целевого пика, увеличению его объема, что не дает достаточной степени концентрирования. Изменение рН элюента больше 10,0 приводит к десорбции с ионита примесей и, как следствие, к ухудшению качества ферментов. Элюат, содержащий более 10 мг/мл белка, определенного по методу Лоури, используют для получения ферментов по действующей технологии со стадии дробного высаливания отдельных ферментов.
Отличительными признаками предложенного способа от прототипа является сепарирование экстракта и сорбция его на ионите с последующей элюцией ферментов, причем в качестве элюента используют раствор сернокислого аммония в аммаке.
Положительный эффект от предложенного технического решения состоит в следующем:
сокращается время технологического цикла получения ферментов в 5 раз; сокращаются потери целевых продуктов и увеличивается съем ферментов с единицы сырья в среднем на 30%; улучшается качество готовых препаратов и условия труда (см. табл. и фиг.3).
сокращается время технологического цикла получения ферментов в 5 раз; сокращаются потери целевых продуктов и увеличивается съем ферментов с единицы сырья в среднем на 30%; улучшается качество готовых препаратов и условия труда (см. табл. и фиг.3).
П р и м е р 1. 100 кг замороженной поджелудочной железы измельчают до величины частиц около 2 мм и подвергают экстракции 200 л 0,25 н. серной кислоты при 5oC в течение 3 ч при периодическом перемешивании. После окончания экстракции железу отделяют на шнековой центрифуге, а экстракт сепарируют при 5oC, после чего подают на ионообменную колонну, заполненную макропористым сульфокатионитом КУ-23 в Н+-форме в количестве 20 кг. Скорость сорбции 90 мл/см2ч. Объем пропущенного экстракта 105 л, рН 2,0. Затем сорбент промывают 15 л подкисленной водой с рН 2,0 и проводят десорбцию ферментов 1 н. раствором сульфата аммония в 0,1 н. растворе аммиака, подавая элюент сверху вниз со скоростью 45 мл/см2 ч при 5oС. рН элюента 9,5. На выходе из колонны собирают фракции объемом 5 л, в которых определяют количество белка по методу Лоури, фракции, содержащие более 10 мг/мл белка объединяют, доводят рН элюата до 3,0 и производят в нем осаждение ферментов методом дробного высаливания сернокислым аммонием по действующей технологии.
П р и м е р 2. Экстракцию ферментов из поджелудочной железы и сепарирование экстракта осуществляют как описано в примере 1. После чего экстракт подают на ионообменную колонну, заполненную макросетчатым карбоксильным катионитом СГ-1М в Н+-форме в количестве 15 кг. Скорость сорбции 90 мл/см2 ч. Объем пропущенного экстракта 105 л, рН 3,0. Затем сорбент промывают 15 л подкисленной водой с рН 3,0 и проводят десорбцию ферментов 0,1 н. раствором сульфата аммония в 0,3 н. растворе аммиака с рН 10,0, подавая элюент сверху вниз со скоростью 45 мл/см2 ч при 5oC. Далее действуют аналогично примеру 1.
Claims (4)
1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ, предусматривающий измельчение животного сырья, кислотную экстракцию, отделение экстракта от жмыха и выделение ферментов из экстракта, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, увеличения выхода и улучшения качества ферментов, отделенный от жмыха экстракт сепарируют, а выделение осуществляют сорбцией ферментов на макропористом сорбенте при рН 1,5 - 3,0 с последующей элюцией ферментов раствором сернокислого аммония в аммиаке с рН 9 - 10.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что экстракцию проводят в течение 3 - 5 ч.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве сорбента используют макропористый сульфо- или макросетчатый карбоксильный катионит.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве элюента используют 0,1 - 1,0 н раствор сульфата аммония в 0,3 -0,01 н растворе аммиака.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4942523/13A RU2021372C1 (ru) | 1991-04-30 | 1991-04-30 | Способ получения гидролитических ферментов |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4942523/13A RU2021372C1 (ru) | 1991-04-30 | 1991-04-30 | Способ получения гидролитических ферментов |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2021372C1 true RU2021372C1 (ru) | 1994-10-15 |
Family
ID=21577797
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4942523/13A RU2021372C1 (ru) | 1991-04-30 | 1991-04-30 | Способ получения гидролитических ферментов |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2021372C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2570631C2 (ru) * | 2013-10-07 | 2015-12-10 | Владимир Николаевич Иванов | Способ получения пероксидазы |
RU2658605C2 (ru) * | 2016-07-01 | 2018-06-21 | Наталья Владимировна Глазова | Способ получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота |
-
1991
- 1991-04-30 RU SU4942523/13A patent/RU2021372C1/ru active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Kang C.K., Donneiy T.H., Jodlowski R.F., Warner W.D. "J.Food Sci" 1981, 46, 3,702-704,707. * |
Авторское свидетельство СССР N 1219645, кл. C 12N 9/14, 1984. * |
Технологический регламент комплексного производства ферментных препаратов: дезоксирибонуклеазы, трипсина кристаллического, химотрипсина кристаллического, рибонуклеазы аморфной и пантрипина. Мин.мяс.-мол.пром. РСФСР змп медпрепаратов Ленмясокомбината им.С.М.Кирова, Утв. 23.12.74. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2570631C2 (ru) * | 2013-10-07 | 2015-12-10 | Владимир Николаевич Иванов | Способ получения пероксидазы |
RU2658605C2 (ru) * | 2016-07-01 | 2018-06-21 | Наталья Владимировна Глазова | Способ получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112409132B (zh) | 一种肌醇和副产物的分离方法 | |
CN101525306A (zh) | 一种章鱼下脚料中提取分离天然牛磺酸的方法 | |
CN108299278A (zh) | 一种提取分离l-色氨酸的方法 | |
CN102732589A (zh) | 一种苏氨酸母液处理的方法 | |
CN111057142B (zh) | 一种特立帕肽的纯化方法 | |
KR100726204B1 (ko) | 발효 브로쓰로부터 염기성 아미노산을 분리하는 방법 | |
CA1333779C (en) | Method for producing galactooligosaccharide | |
RU2021372C1 (ru) | Способ получения гидролитических ферментов | |
CN112159445B (zh) | β-烟酰胺单核苷酸的纯化方法和制备方法 | |
US5061627A (en) | Method for preparing enzymes from crustaceans | |
RU2126044C1 (ru) | Способ получения гиалуронидазы | |
CN101289394B (zh) | 从葵粕中提取绿原酸、分离蛋白和蛋白小肽的工艺 | |
CN102108348A (zh) | 一种木瓜蛋白酶的提取方法 | |
CN109180457B (zh) | 一种生物合成根皮素的分离提纯工艺 | |
CN110590586B (zh) | 一种分离纯化赖氨酸发酵液的方法 | |
CN113735136B (zh) | 一种利用玉米浸泡水制备钾盐并副产镁盐的工艺方法 | |
CN112409426B (zh) | 一种硫酸西索米星的制备方法 | |
JPH01244000A (ja) | 甜菜糖液を処理する方法 | |
SU1035063A1 (ru) | Способ получени пищевого пепсина | |
SU654612A1 (ru) | Способ выделени цитохрома | |
JPS6328061B2 (ru) | ||
RU2152995C1 (ru) | Способ очистки рибонуклеазы | |
Reece et al. | The evaluation of a process for the preparation of co‐enzyme A from yeast | |
CN116554310B (zh) | 一种铜离子螯合树脂固相吸附制备高纯度血红蛋白的方法 | |
CN105131053B (zh) | 一种黄霉素a组分的分离纯化方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
REG | Reference to a code of a succession state |
Ref country code: RU Ref legal event code: MM4A |
|
REG | Reference to a code of a succession state |
Ref country code: RU Ref legal event code: HK4A |