RU2018123601A - Ферменты биосинтеза люциферина и их применение - Google Patents

Ферменты биосинтеза люциферина и их применение Download PDF

Info

Publication number
RU2018123601A
RU2018123601A RU2018123601A RU2018123601A RU2018123601A RU 2018123601 A RU2018123601 A RU 2018123601A RU 2018123601 A RU2018123601 A RU 2018123601A RU 2018123601 A RU2018123601 A RU 2018123601A RU 2018123601 A RU2018123601 A RU 2018123601A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
amino acid
identity
acid sequence
seq
hydroxy
Prior art date
Application number
RU2018123601A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2730038C2 (ru
RU2018123601A3 (ru
Inventor
Илья Викторович ЯМПОЛЬСКИЙ
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "ПЛАНТА"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to RU2018123601A priority Critical patent/RU2730038C2/ru
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "ПЛАНТА" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "ПЛАНТА"
Priority to KR1020217002919A priority patent/KR20210038888A/ko
Priority to JP2020573517A priority patent/JP2021529536A/ja
Priority to CN201980056875.4A priority patent/CN112673101A/zh
Priority to AU2019292668A priority patent/AU2019292668A1/en
Priority to EP19825013.6A priority patent/EP3816282A4/en
Priority to BR112020026792-9A priority patent/BR112020026792A2/pt
Priority to MX2021000105A priority patent/MX2021000105A/es
Priority to PCT/RU2019/050097 priority patent/WO2020005120A1/ru
Priority to CA3104848A priority patent/CA3104848A1/en
Publication of RU2018123601A publication Critical patent/RU2018123601A/ru
Publication of RU2018123601A3 publication Critical patent/RU2018123601A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2730038C2 publication Critical patent/RU2730038C2/ru
Priority to US17/135,163 priority patent/US20210115476A1/en
Priority to US18/244,763 priority patent/US20240117385A1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K4/00—Peptides having up to 20 amino acids in an undefined or only partially defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K4/06—Peptides having up to 20 amino acids in an undefined or only partially defined sequence; Derivatives thereof from fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0069—Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
    • C12N9/0073—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one donor, and incorporation of one atom of oxygen 1.14.13
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1288—Transferases for other substituted phosphate groups (2.7.8)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/93—Ligases (6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C12P17/167—Heterorings having sulfur atoms as ring heteroatoms, e.g. vitamin B1, thiamine nucleus and open chain analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
    • C12Y114/13—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.13)
    • C12Y114/13008—Flavin-containing monooxygenase (1.14.13.8), i.e. dimethylaniline-monooxygenase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y113/00—Oxidoreductases acting on single donors with incorporation of molecular oxygen (oxygenases) (1.13)
    • C12Y113/12—Oxidoreductases acting on single donors with incorporation of molecular oxygen (oxygenases) (1.13) with incorporation of one atom of oxygen (internal monooxygenases or internal mixed function oxidases)(1.13.12)
    • C12Y113/12007—Photinus-luciferin 4-monooxygenase (ATP-hydrolysing) (1.13.12.7), i.e. firefly-luciferase

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Claims (191)

1. Белок биосинтеза люциферина грибов, выбранный из группы:
(а) гиспидин-гидроксилаза, аминокислотная последовательность которой на протяжении по крайней мере 350 аминокислот имеет не менее 60% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, или аминокислотная последовательность которой содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 29-33, где указанная гиспидин-гидроксилаза катализирует превращение 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-она, имеющего структурную формулу
Figure 00000001
,
в 6-(2-арилвинил)-3,4-дигидрокси-2H-пиран-2-он, имеющий структурную формулу
Figure 00000002
, где R - арил или гетероарил;
(б) гиспидин-синтаза, аминокислотная последовательность которой имеет не менее 45% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, или аминокислотная последовательность которой содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 56-63, где указанная гиспидин-синтаза катализирует превращение 3-арилакриловой кислоты со структурной формулой
Figure 00000003
, где R - арил или гетероарил в 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он, имеющий структурную формулу
Figure 00000001
, где R - арил или гетероарил;
(в) кофеилпируват-гидролаза, аминокислотная последовательность которой имеет не менее 60% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75, или аминокислотная последовательность которой содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 76-78, где указанная кофеилпируват-гидролаза катализирует превращение 6-арил-2-гидрокси-4-оксогекса-2,5-диеновые кислоты, имеющей структурную формулу
Figure 00000004
, где R - арил или гетероарил, в 3-арилакриловую кислоту со структурной формулой
Figure 00000003
.
2. Белок по п. 1, где аминокислотная последовательность гиспидин-гидроксилазы имеет не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28.
3. Белок по п. 2, где аминокислотная последовательность гиспидин-гидроксилазы выбрана из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или идентична ей по крайней мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 98% или 99%.
4. Белок по п. 1, где аминокислотная последовательность гиспидин-синтазы имеет не менее 50% идентичности, или не менее 55% идентичности, или не менее 60% идентичности, или не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55.
5. Белок по п. 4, где аминокислотная последовательность гиспидин-синтазы выбрана из группы SEQ ID NOs: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55 или идентична ей по крайней мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 98% или 99%.
6. Белок по п. 1, где аминокислотная последовательность кофеилпируват-гидролазы имеет не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75.
7. Белок по п. 6, где аминокислотная последовательность кофеилпируват-гидролазы выбрана из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75 или идентична ей по крайней мере на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 98% или 99%.
8. Белок слияния, в состав которого входят оперативно сшитые гиспидин-гидроксилаза и/или гиспидин-синтаза и/или кофеилпируват-гидролаза по п. 1, и люцифераза, способная окислять с выделением света люциферин грибов и/или сигнал внутриклеточной локализации и/или сигнальный пептид.
9. Белок слияния по п. 8, где аминокислотная последовательность люциферазы по крайней мере на 40% идентична, например, по крайней мере на 45% идентична, или по крайней мере на 50% идентична, или по крайней мере на 55% идентична, или по крайней мере на 60% идентична, или по крайней мере на 70% идентична, или по крайней мере на 75% идентична, или по крайней мере на 80% идентична, или по крайней мере на 85% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы SEQ ID Nos: 80, 82, 84, 86, 88, 90 , 92, 94, 96, 98.
10. Белок слияния по п. 9, аминокислотная последовательность которого показана в SEQ ID No: 101.
11. Белок по любому пп. 1-10, где 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он выбран из группы:
(Е)-6-(3,4-дигидроксистирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-стирил-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидроксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2-гидроксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2,4-дигидроксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидрокси-3,5-диметоксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидрокси-3-метоксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2-(6-гидроксинафталин-2-ил)винил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(4-аминостирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(4-(диэтиламино)стирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(2-(1Н-индол-3-ил)винил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2,3,6,7-тетрагидро-1Н,5Н-пиридо[3,2,1-ij]хинолин-9-ил)винил)-2Н-пиран-2-он.
12. Белок по любому пп. 1-7, где 3-арилакриловая кислота выбрана из группы: кофейная кислота, коричная кислота, паракумаровая кислота, кумаровая кислота, умбеллиновая кислота, синаповая кислота, феруловая кислота.
13. Применение белка биосинтеза люциферина грибов, выбранного из группы:
(а) аминокислотная последовательность которого на протяжении по крайней мере 350 аминокислот имеет не менее 60% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, или аминокислотная последовательность которого содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 29-33, в системах in vitro или in vivo как гиспидин-гидроксилазы, катализирующей реакцию превращения 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-она, имеющего структурную формулу
Figure 00000001
,
в 6-(2-арилвинил)-3,4-дигидрокси-2H-пиран-2-он, имеющий структурную формулу
Figure 00000002
, где R - арил или гетероарил.
(б) аминокислотная последовательность которого имеет не менее 45% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID Nos: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, или аминокислотная последовательность которого содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 56-63, в системах in vitro или in vivo как гиспидин-синтазы, катализирующей реакцию превращения 3-арилакриловой кислоты со структурной формулой
Figure 00000003
в 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он, имеющий структурную формулу
Figure 00000001
, где R - арил или гетероарил.
(в) аминокислотная последовательность которого имеет не менее 60% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75, или аминокислотная последовательность которого содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 76-78, в системах in vitro или in vivo как кофеилпируват-гидролазы, катализирующей реакцию превращения 6-арил-2-гидрокси-4-оксогекса-2,5-диеновые кислоты, имеющей структурную формулу
Figure 00000004
, где R - арил или гетероарил, в 3-арилакриловую кислоту со структурной формулой
Figure 00000003
.
14. Применение по п. 13, где аминокислотная последовательность гиспидин-гидроксилазы имеет не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28.
15. Применение по п. 13, где аминокислотная последовательность гиспидин-синтазы имеет не менее 50% идентичности, или не менее 55% идентичности, ли не менее 60% идентичности, или не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55.
16. Применение по п. 13, где аминокислотная последовательность кофеилпируват-гидролазы имеет не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75.
17. Применение по любому пп. 13-16, где 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он выбран из группы
(Е)-6-(3,4-дигидроксистирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он (гиспидин),
(Е)-4-гидрокси-6-стирил-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидроксистирил)-2Н-пиран-2-он (бисноръянгонин),
(Е)-4-гидрокси-6-(2-гидроксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2,4-дигидроксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидрокси-3,5-диметоксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидрокси-3-метоксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2-(6-гидроксинафталин-2-ил)винил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(4-аминостирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(4-(диэтиламино)стирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(2-(1Н-индол-3-ил)винил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2,3,6,7-тетрагидро-1Н,5Н-пиридо[3,2,1-ij]хинолин-9-ил)винил)-2Н-пиран-2-он.
18. Применение по любому пп. 13-16, где 3-арилакриловая кислота выбрана из группы: кофейная кислота, коричная кислота, паракумаровая кислота, кумаровая кислота, умбеллиновая кислота, синаповая кислота, феруловая кислота.
19. Нуклеиновая кислота, кодирующая белок биосинтеза люциферина грибов по пп.1-10, выбранный из группы:
(а) гиспидин-гидроксилаза, аминокислотная последовательность которой на протяжении по крайней мере 350 аминокислот имеет не менее 60% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, или аминокислотная последовательность которой содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 29-33, где указанная гиспидин-гидроксилаза катализирует превращение 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-она, имеющего структурную формулу
Figure 00000001
, в 6-(2-арилвинил)-3,4-дигидрокси-2H-пиран-2-он, имеющий структурную формулу
Figure 00000002
, где R - арил или гетероарил;
(б) гиспидин-синтаза, аминокислотная последовательность которой имеет не менее 45% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID Nos: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, или аминокислотная последовательность которой содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 56-63, где указанная гиспидин-синтаза катализирует превращение 3-арилакриловой кислоты со структурной формулой
Figure 00000003
в 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он, имеющий структурную формулу
Figure 00000001
, где R - арил или гетероарил;
(в) кофеилпируват-гидролаза, аминокислотная последовательность которой имеет не менее 60% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75, или аминокислотная последовательность которой содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 76-78, где указанная кофеилпируват-гидролаза катализирует превращение 6-арил-2-гидрокси-4-оксогекса-2,5-диеновые кислоты, имеющей структурную формулу
Figure 00000004
, где R - арил или гетероарил, в 3-арилакриловую кислоту со структурной формулой
Figure 00000003
.
20. Нуклеиновая кислота по п. 19, где аминокислотная последовательность гиспидин-гидроксилазы имеет не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28.
21. Нуклеиновая кислота по п. 20, где аминокислотная последовательность выбрана из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 или идентична ей по крайней мере на 96%, 97%, 98%, 98% или 99%.
22. Нуклеиновая кислота по п. 19, где аминокислотная последовательность гиспидин-синтазы имеет не менее 50% идентичности, или не менее 55% идентичности, или не менее 60% идентичности, или не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55.
23. Нуклеиновая кислота по п. 22, где аминокислотная последовательность гиспидин-синтазы выбрана из группы SEQ ID NOs: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55 или идентична ей по крайней мере на 96%, 97%, 98%, 98% или 99%.
24. Нуклеиновая кислота по п. 19, где аминокислотная последовательность кофеилпируват-гидролазы имеет не менее 65% идентичности, или не менее 70% идентичности, или не менее 75% идентичности, или не менее 80% идентичности, или не менее 85% идентичности, или не менее 90% идентичности, или не менее 95% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75.
25. Нуклеиновая кислота по п. 24, где аминокислотная последовательность кофеилпируват-гидролазы выбрана из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75 или идентична ей по крайней мере на 96%, 97%, 98%, 98% или 99%.
26. Нуклеиновая кислота, кодирующая белок слияния по любому из пп. 8-10.
27. Нуклеиновая кислота по п. 19, где 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он выбран из группы
(Е)-6-(3,4-дигидроксистирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он (гиспидин),
(Е)-4-гидрокси-6-стирил-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидроксистирил)-2Н-пиран-2-он (бисноръянгонин),
(Е)-4-гидрокси-6-(2-гидроксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2,4-дигидроксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидрокси-3,5-диметоксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(4-гидрокси-3-метоксистирил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2-(6-гидроксинафталин-2-ил)винил)-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(4-аминостирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(4-(диэтиламино)стирил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-6-(2-(1Н-индол-3-ил)винил)-4-гидрокси-2Н-пиран-2-он,
(Е)-4-гидрокси-6-(2,3,6,7-тетрагидро-1Н,5Н-пиридо[3,2,1-ij]хинолин-9-ил)винил)-2Н-пиран-2-он.
28. Нуклеиновая кислота по п. 19, где 3-арилакриловая кислота выбрана из группы: кофейная кислота, коричная кислота, паракумаровая кислота, кумаровая кислота, умбеллиновая кислота, синаповая кислота, феруловая кислота.
29. Кассета экспрессии, содержащая (а) регион инициации транскрипции функциональный в клетке-хозяине; (б) нуклеиновую кислоту по любому из пп. 19; и (в) регион терминации транскрипции, функциональный в клетке-хозяине.
30. Клетка-хозяин, содержащая по крайней мере одну кассету экспрессии по п. 29 как часть экстрахромосомного элемента или интегрированную в геном клетки как результат внедрения указанной кассеты в указанную клетку, где указанная клетка экспрессирует по крайней мере один из функциональных белков биосинтеза люциферина грибов.
31. Антитело, связывающееся по крайней мере с одним белком по любому из пп.1-7.
32. Применение нуклеиновой кислоты, кодирующей белок биосинтеза люциферина грибов, выбранный из группы:
(а) аминокислотная последовательность которого на протяжении по крайней мере 350 аминокислот имеет не менее 60% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 2, 4, 6, 8 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, или аминокислотная последовательность которого содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 29-33, для получения в системах in vitro или in vivo гиспидин-гидроксилазы, катализирующей реакцию превращения 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-она, имеющего структурную формулу
Figure 00000001
,
в 6-(2-арилвинил)-3,4-дигидрокси-2H-пиран-2-он, имеющий структурную формулу
Figure 00000002
, где R - арил или гетероарил;
(б) аминокислотная последовательность которого имеет не менее 45% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID Nos: 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, или аминокислотная последовательность которого содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 56-63, для получения в системах in vitro или in vivo гиспидин-синтазы, катализирующей реакцию превращения 3-арилакриловой кислоты со структурной формулой
Figure 00000003
в 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он, имеющий структурную формулу
Figure 00000001
, где R - арил или гетероарил;
(в) аминокислотная последовательность которого имеет не менее 60% идентичности с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы SEQ ID NOs: 65, 67, 69, 71, 73, 75, или аминокислотная последовательность которого содержит разделенные неконсервативными аминокислотными вставками консенсусные последовательности, показанные в SEQ ID NOs: 76-78, для получения в системах in vitro или in vivo кофеилпируват-гидролазы, катализирующей реакцию превращения 6-арил-2-гидрокси-4-оксогекса-2,5-диеновые кислоты, имеющей структурную формулу
Figure 00000004
, где R - арил или гетероарил, в 3-арилакриловую кислоту со структурной формулой
Figure 00000003
.
33. Применение по п.32, где нуклеиновая кислота применяется для экспрессии белка биосинтеза люциферина грибов в составе кассеты экспрессии, которая также включает регион инициации транскрипции функциональный в клетке-хозяине и регион терминации транскрипции, функциональный в клетке-хозяине.
34. Применение по п.33, где кассета экспрессии применяется в клетке-хозяине.
35. Способ биосинтеза люциферина грибов, представляющего собой 6-(2-арилвинил)-3,4-дигидрокси-2H-пиран-2-он, имеющего структурную формулу
Figure 00000002
, где R - арил или гетероарил, в системе in vitro или in vivo, включающий объединение в физиологических условиях по крайней мере одной молекулы гиспидин-гидроксилазы по любому из пп. 1-3 с по крайней мере одной молекулой 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-она со структурной формулой
Figure 00000001
, с по крайней мере одной молекулой НАД(Ф)Н и с по крайней мере одной молекулы молекулярного кислорода.
36. Способ по п. 35, где реакция осуществляется в клетке или организме, включающий введение в клетку кассеты экспрессии по п. 29, в состав которой входит нуклеиновая кислота, кодирующая гиспидин-гидроксилазу.
37. Способ по п. 36, включающий дополнительное введение в клетку или организм кассеты экспрессии, содержащей (а) регион инициации транскрипции функциональный в клетке-хозяине; (б) нуклеиновую кислоту, кодирующую люциферазу, способную окислять люциферин грибов с выделением света; и (в) регион терминации транскрипции, функциональный в клетке-хозяине, где указанная клетка или организм приобретает способность к биолюминесценции в присутствии указанного люциферина грибов.
38. Способ по п. 37, где нуклеиновая кислота, кодирующая люциферазу, оперативно слита с нуклеиновой кислотой, кодирующей гиспидин-гидроксилазу с образованием нуклеиновой кислоты по п. 26.
39. Способ биосинтеза предлюциферина грибов, представляющего собой 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он со структурной формулой
Figure 00000001
, где R - арил или гетероарил, в системе in vitro или in vivo, включающий объединение в физиологических условиях по крайней мере одной молекулы 3-арилакриловой кислоты со структурной формулой
Figure 00000003
с по крайней мере одной молекулой гиспидин-синтазы по любому из пп. 1, 4, 5, с по крайней мере одной молекулой кофермента А, с по крайней мере одной молекулой АТФ и с по крайней мере с двумя молекулами малонил-КоА.
40. Способ по п. 39, где реакция осуществляется в клетке или организме, включающий введение в клетку кассеты экспрессии по п. 29, в состав которой входит нуклеиновая кислота, кодирующая гиспидин-синтазу.
41. Способ по п. 40, включающий дополнительное введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей 4'-фосфопантотеинил трансферазу, способную осуществлять перенос 4-фосфопантетеинила от кофермента А на серин в ацилпереносящем домене поликетидсинтаз.
42. Способ по п. 41, где 4'-фосфопантотеинил трансфераза имеет аминокислотную последовательность, по крайней мере на 40% идентичную с последовательностью SEQ ID No: 105.
43. Способ по пп. 40-42, включающий дополнительное введение в клетку или организм нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты из метаболитов клетки со структурной формулой
Figure 00000003
, где R - арил или гетероарил.
44. Способ по п. 43, где ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты выбраны из группы:
(а) тирозин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой имеет по крайней мере 40% идентичности с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID No: 107; компоненты HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы, аминокислотные последовательности которых имеют по крайней мере 40% идентичности с аминокислотными последовательностями компонентов HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы E. coli, показанными в SEQ ID Nos: 109 и 111;
(б) фенилаланин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность имеет по крайней мере 40% идентичности с аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID Nos:117.
45. Способ биосинтеза люциферина грибов, представляющего собой 6-(2-арилвинил)-3,4-дигидрокси-2H-пиран-2-он со структурной формулой
Figure 00000002
, где R - арил или гетероарил, в системе in vitro или in vivo, включающий объединение в физиологических условиях по крайней мере одной молекулы 3-арилакриловой кислоты со структурной формулой
Figure 00000003
с по крайней мере одной молекулой гиспидин-синтазы по любому из пп. 1, 4, 5, с по крайней мере одной молекулой кофермента А, с по крайней мере одной молекулой АТФ, с по крайней мере с двумя молекулами малонил-КоА, с по крайней мере одной молекулой гиспидин-гидроксилазы по любому из пп. 1-3, с по крайней мере одной молекулой НАД(Ф)Н и с по крайней мере одной молекулой молекулярного кислорода.
46. Способ по п. 45, где реакция осуществляется в клетке или организме, включающий введение в клетку кассеты экспрессии по п. 29, в состав которой входит нуклеиновая кислота, кодирующая гиспидин-синтазу, и кассеты экспрессии по п. 29, в состав которой входит нуклеиновая кислота, кодирующая гиспидин-гидроксилазу.
47. Способ по п. 46, включающий дополнительное введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей 4'-фосфопантотеинил трансферазу, способную осуществлять перенос 4-фосфопантетеинила от кофермента А на серин в ацилпереносящем домене поликетидсинтаз.
48. Способ по п. 41, где 4'-фосфопантотеинил трансфераза имеет аминокислотную последовательность, по крайней мере на 40% идентичную с последовательностью SEQ ID No: 105.
49. Способ по пп. 46-48, включающий дополнительное введение в клетку или организм нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты из метаболитов клетки со структурной формулой
Figure 00000003
, где R - арил или гетероарил.
50. Способ по п. 49, где ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты выбраны из группы:
(а) тирозин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична последовательности, показанной в SEQ ID No: 107; компоненты HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы, аминокислотные последовательности которых по крайней мере на 40% идентичны последовательностями компонентов HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы E. coli, показанными в SEQ ID Nos: 109 и 111;
(б) фенилаланин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID Nos:117.
51. Способ получения трансгенной биолюминесцентной клетки или организма, включающий введение в клетку или организм кассеты экспрессии по п. 29, включающей нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-гидроксилазу, и кассеты экспрессии, содержащей (а) регион инициации транскрипции функциональный в клетке-хозяине; (б) нуклеиновую кислоту, кодирующую люциферазу, способную окислять люциферин грибов с выделением света, (в) регион терминации транскрипции; где указанная клетка приобретает способность к биолюминесценции в присутствии предлюциферина грибов, представляющего собой 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он со структурной формулой
Figure 00000001
, где R - арил или гетероарил.
52. Способ по п. 51, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей гиспидин-синтазу, по любому из пп. 19, 22, 23, в составе кассеты экспрессии по п. 29, где указанная клетка приобретает способность к биолюминесценции в присутствии экзогенного или эндогенного предшественника предлюциферина грибов, представляющего собой 3-арилакриловую кислоту со структурной формулой
Figure 00000005
, где R - арил или гетероарил.
53. Способ по п. 52, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей кофеилпируват-гидролазу, по любому из пп. 19, 24, 25.
54. Способ по любому из пп. 52-53, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей 4'-фосфопантотеинил трансферазу, способную осуществлять перенос 4-фосфопантетеинила от кофермента А на серии в ацилпереносящем домене поликетидсинтаз.
55. Способ по любому из пп. 52-54, дополнительно включающий введение в клетку или организм нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты из метаболитов клетки.
56. Способ по п. 55, где ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты выбраны из группы:
(а) тирозин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична последовательности, показанной в SEQ ID No: 107; компоненты НраВ и НраС 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы, аминокислотные последовательности которых по крайней мере на 40% идентичны последовательностями компонентов НраВ и НраС 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы Е. coli, показанными в SEQ ID Nos: 109 и 111;
(б) фенилаланин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID Nos: 117.
57. Способ получения трансгенной биолюминесцентной клетки или организма, включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты по п.26 в виде кассеты экспрессии по п. 29, где указанная клетка приобретает способность к биолюминесценции в присутствии предлюциферина грибов, представляющего собой 6-(2-арилвинил)-4-гидрокси-2H-пиран-2-он со структурной формулой
Figure 00000001
, где R - арил или гетероарил.
58. Способ по п. 57, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей гиспидин-синтазу, по любому из пп. 19, 22, 23, в составе кассеты экспрессии по п. 29, где указанная клетка приобретает способность к биолюминесценции в присутствии экзогенного или эндогенного предшественника предлюциферина грибов, представляющего собой 3-арилакриловую кислоту со структурной формулой
Figure 00000003
, где R - арил или гетероарил.
59. Способ по п. 58, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей кофеилпируват-гидролазу, по любому из пп. 19, 24, 25.
60. Способ по любому из пп. 58-59, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей 4'-фосфопантотеинил трансферазу, способную осуществлять перенос 4-фосфопантетеинила от кофермента А на серин в ацилпереносящем домене поликетидсинтаз.
61. Способ по любому из пп. 58-60, дополнительно включающий введение в клетку или организм нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты из метаболитов клетки.
62. Способ по п. 61, где ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты выбраны из группы:
(а) тирозин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична последовательности, показанной в SEQ ID No: 107; компоненты HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы, аминокислотные последовательности которых по крайней мере на 40% идентичны последовательностями компонентов HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы E. coli, показанными в SEQ ID Nos: 109 и 111;
(б) фенилаланин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID Nos:117.
63. Трансгенный организм, способный к биолюминесценции в присутствии люциферина грибов и/или предлюциферина грибов, содержащий по крайней мере нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-гидроксилазу, по любому из пп. 19-21, как части экстрахромосомного элемента или интегрированную в геном клетки как результат внедрения в указанную клетку кассеты экспрессии по п. 29 и нуклеиновую кислоту, кодирующую люциферазу, способную окислять люциферин грибов с выделением света.
64. Трансгенный организм, способный к автономной биолюминесценции, где указанный организм содержит по крайней мере нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-гидроксилазу, по любому из пп. 19-21, нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-синтазу по любому из пп. 19, 22, 23, как части экстрахромосомного элемента или интегрированную в геном клетки как результат внедрения в указанную клетку кассеты экспрессии по п. 29 и нуклеиновую кислоту, кодирующую люциферазу, способную окислять люциферин грибов с выделением света.
65. Трансгенный организм по п. 64, который содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую кофеилпируват-гидролазу, по любому из пп. 19, 24, 25.
66. Вектор для переноса нуклеиновой кислоты в клетку-хозяина, содержащий по крайней мере одну нуклеиновую кислоту по любому из пп. 19-26.
67. Набор для получения люциферина грибов и/или предлюциферина грибов, включающий гиспидин-гидроксилазу и гиспидин синтазу по п. 1.
68. Набор для получения люциферина грибов и/или предлюциферина грибов в системах in vitro и/или in vivo, включающий нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-гидроксилазу, и нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-синтазу, по п.19.
69. Набор для получения биолюминесцентной клетки или организма, включающий нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-гидроксилазу, и нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-синтазу, по п.19 и нуклеиновую кислоту, кодирующую люциферазу, способную окислять люциферин грибов с выделением света.
70. Набор по п. 69, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту по п. 19, кодирующую кофеилпируват-гидролазу.
71. Набор по любому пп. 68-70, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую 4'-фосфопантотеинил трансферазу и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты.
72. Применение поликетидсинтазы, аминокислотная последовательность которой идентична последовательности, выбранной из группы SEQ ID Nos: 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139 по крайней мере на 40%, или по крайней мере на 45%, или по крайней мере на 50%, или по крайней мере на 55%, или по крайней мере на 60%, по крайней мере на 65%, или по крайней мере на 70%, или по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 85%, или по крайней мере на 90%, или по крайней мере на 91%, или по крайней мере на 92%, или по крайней мере на 93%, или по крайней мере на 94%, или по крайней мере на 95%, или по крайней мере на 96%, или по крайней мере на 97%, или по крайней мере на 98%, или по крайней мере на 99%, для получение гиспидина в системе in vitro или in vivo.
73. Способ получения гиспидина в системе in vitro или in vivo, включающий объединение в физиологических условиях по крайней мере одной молекулы поликетидсинтазы по п. 72 с по крайней мере двумя молекулами малонил-КоА и по крайней мере одной молекулой кофеил-КоА.
74. Способ по п. 73, отличающийся тем, что вместо по крайней мере одной молекулы кофеил-КоА в реакционную смесь добавляют по крайней мере одну молекулу кофейной кислоты, по крайней мере одну молекулу кофермента А, по крайней мере одну молекулу кумарат-КоА-лигазы и по крайней мере одну молекулу АТФ.
75. Способ по п. 73 или 74, где реакция осуществляется в клетке или организме, включающий введение в клетку кассеты экспрессии, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую поликетидсинтазу III типа по п. 72.
76. Способ по п. 75, также включающий дополнительное введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей кумарат-КоА-лигазу.
77. Способ по п. 76, где кумарат-КоА-лигаза имеет аминокислотную последовательность, которая идентична последовательности, показанной в SEQ ID No:141 по крайней мере на 40%, или по крайней мере на 45%, или по крайней мере на 50%, или по крайней мере на 55%, или по крайней мере на 60%, по крайней мере на 65%, или по крайней мере на 70%, или по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 85%, или по крайней мере на 90%, или по крайней мере на 91%, или по крайней мере на 92%, или по крайней мере на 93%, или по крайней мере на 94%, или по крайней мере на 95%, или по крайней мере на 96%, или по крайней мере на 97%, или по крайней мере на 98%, или по крайней мере на 99%.
78. Способ по пп. 75-77, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты биосинтеза кофейной кислоты.
79. Способ по п. 78, где ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты выбраны из группы:
(а) тирозин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична последовательности, показанной в SEQ ID No: 107; компоненты HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы, аминокислотные последовательности которых по крайней мере на 40% идентичны последовательностями компонентов HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы E. coli, показанными в SEQ ID Nos: 109 и 111;
(б) фенилаланин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по по крайней мере на 40% идентичны аминокислотной последовательностью, показанной в SEQ ID Nos:117.
80. Способ по п. 51, также включающий введение в клетку или организм кассеты экспрессии, содержащей (а) регион инициации транскрипции функциональный в клетке-хозяине; (б) нуклеиновую кислоту, кодирующую поликетидсинтазу III типа по п. 72, (в) регион терминации транскрипции; где указанная клетка приобретает способность к биолюминесценции в присутствии экзогенного или эндогенного кофеил-КоА.
81. Способ по п. 80, также включающий введение в клетку или организм кассеты экспрессии, содержащей (а) регион инициации транскрипции функциональный в клетке-хозяине; (б) нуклеиновую кислоту, кодирующую кумарат-КоА-лигазу, (в) регион терминации транскрипции; где указанная клетка приобретает способность к биолюминесценции в присутствии кофейной кислоты.
82. Способ по п. 81, где кумарат-КоА-лигаза имеет аминокислотную последовательность, которая идентична последовательности, показанной в SEQ ID No:141 по крайней мере на 40%, или по крайней мере на 45%, или по крайней мере на 50%, или по крайней мере на 55%, или по крайней мере на 60%, по крайней мере на 65%, или по крайней мере на 70%, или по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 85%, или по крайней мере на 90%, или по крайней мере на 91%, или по крайней мере на 92%, или по крайней мере на 93%, или по крайней мере на 94%, или по крайней мере на 95%, или по крайней мере на 96%, или по крайней мере на 97%, или по крайней мере на 98%, или по крайней мере на 99%.
83. Способ по пп. 80-82, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей кофеилпируват-гидролазу, по любому из пп. 19, 24, 25.
84. Способ по пп. 80-83, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты из метаболитов клетки.
85. Способ по п. 84, где ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты выбраны из группы:
(а) тирозин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична последовательности, показанной в SEQ ID No: 107; компоненты HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы, аминокислотные последовательности которых по крайней мере на 40% идентичны последовательностям компонентов HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы E. coli, показанным в SEQ ID Nos: 109 и 111;
(б) фенилаланин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID Nos:117.
86. Способ по п. 57, также включающий введение в клетку или организм кассеты экспрессии, содержащей (а) регион инициации транскрипции функциональный в клетке-хозяине; (б) нуклеиновую кислоту, кодирующую поликетидсинтазу III типа по п. 72, (в) регион терминации транскрипции; где указанная клетка приобретает способность к биолюминесценции в присутствии экзогенного или эндогенного кофеил-КоА.
87. Способ по п. 86, также включающий введение в клетку или организм кассеты экспрессии, содержащей (а) регион инициации транскрипции функциональный в клетке-хозяине; (б) нуклеиновую кислоту, кодирующую кумарат-КоА-лигазу, (в) регион терминации транскрипции; где указанная клетка приобретает способность к биолюминесценции в присутствии кофейной кислоты.
88. Способ по п. 87, где кумарат-КоА-лигаза имеет аминокислотную последовательность, которая идентична последовательности, показанной в SEQ ID No:141 по крайней мере на 40%, или по крайней мере на 45%, или по крайней мере на 50%, или по крайней мере на 55%, или по крайней мере на 60%, по крайней мере на 65%, или по крайней мере на 70%, или по крайней мере на 80%, или по крайней мере на 85%, или по крайней мере на 90%, или по крайней мере на 91%, или по крайней мере на 92%, или по крайней мере на 93%, или по крайней мере на 94%, или по крайней мере на 95%, или по крайней мере на 96%, или по крайней мере на 97%, или по крайней мере на 98%, или по крайней мере на 99%.
89. Способ по пп. 86-88, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновой кислоты, кодирующей кофеилпируват-гидролазу, по любому из пп. 19, 24, 25.
90. Способ по пп. 87-89, также включающий введение в клетку или организм нуклеиновых кислот, кодирующих ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты из метаболитов клетки.
91. Способ по п. 90, где ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты выбраны из группы:
(а) тирозин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична последовательности, показанной в SEQ ID No: 107; компоненты HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы, аминокислотные последовательности которых по крайней мере на 40% идентичны последовательностям компонентов HpaB и HpaC 4-гидроксифенилацетат 3-монооксигеназы-редуктазы E. coli, показанными в SEQ ID Nos: 109 и 111;
(б) фенилаланин-аммоний-лиаза, аминокислотная последовательность которой по крайней мере на 40% идентична аминокислотной последовательности, показанной в SEQ ID Nos:117.
92. Трансгенный организм, способный к биолюминесценции в присутствии 3-гидроксигиспидина и/или гиспидина и/или кофейной кислоты, полученный по любому из способов 80-91.
93. Набор для получения гиспидина, включающий поликетидсинтазу по п. 72 и кумарат-КоА-лигазу или кодирующие их нуклеиновые кислоты.
94. Набор для получения биолюминесцентной клетки или организма, включающий нуклеиновую кислоту, кодирующую гиспидин-гидроксилазу, и нуклеиновую кислоту, кодирующую поликетидсинтазу по п. 72, и нуклеиновую кислоту, кодирующую люциферазу, способную окислять люциферин грибов с выделением света.
95. Набор по п. 94, также содержащий нуклеиновую кислоту по п.19, кодирующую кофеилпируват-гидролазу.
96. Набор по п. 93-94, дополнительно содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую кумарат-КоА-лигазу и/или нуклеиновые кислоты, кодирующие ферменты биосинтеза 3-арилакриловой кислоты.
RU2018123601A 2018-06-28 2018-06-28 Ферменты биосинтеза люциферина и их применение RU2730038C2 (ru)

Priority Applications (12)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018123601A RU2730038C2 (ru) 2018-06-28 2018-06-28 Ферменты биосинтеза люциферина и их применение
PCT/RU2019/050097 WO2020005120A1 (ru) 2018-06-28 2019-06-27 Ферменты биосинтеза люциферина и их применение
CN201980056875.4A CN112673101A (zh) 2018-06-28 2019-06-27 荧光素生物合成酶及其用途
AU2019292668A AU2019292668A1 (en) 2018-06-28 2019-06-27 Enzymes of luciferin biosynthesis and use thereof
EP19825013.6A EP3816282A4 (en) 2018-06-28 2019-06-27 LUCIFERIN BIOSYNTHETIC FERMENTS AND THEIR USE
BR112020026792-9A BR112020026792A2 (pt) 2018-06-28 2019-06-27 Enzimas de biossíntese de luciferina e uso das mesmas
KR1020217002919A KR20210038888A (ko) 2018-06-28 2019-06-27 루시페린 생합성 효소 및 이의 용도
JP2020573517A JP2021529536A (ja) 2018-06-28 2019-06-27 ルシフェリン生合成の酵素及びその使用
CA3104848A CA3104848A1 (en) 2018-06-28 2019-06-27 Enzymes of luciferin biosynthesis and use thereof
MX2021000105A MX2021000105A (es) 2018-06-28 2019-06-27 Enzimas de biosintesis de luciferina y su uso.
US17/135,163 US20210115476A1 (en) 2018-06-28 2020-12-28 Enzymes of luciferin biosynthesis and use thereof
US18/244,763 US20240117385A1 (en) 2018-06-28 2023-09-11 Enzymes of luciferin biosynthesis and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018123601A RU2730038C2 (ru) 2018-06-28 2018-06-28 Ферменты биосинтеза люциферина и их применение

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020123860A Division RU2809367C2 (ru) 2020-07-17 Гиспидин-синтазы и их применение
RU2020124074A Division RU2812474C2 (ru) 2020-07-20 Кофеилпируват-гидролазы и их применение

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018123601A true RU2018123601A (ru) 2019-12-30
RU2018123601A3 RU2018123601A3 (ru) 2019-12-30
RU2730038C2 RU2730038C2 (ru) 2020-08-14

Family

ID=68985133

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018123601A RU2730038C2 (ru) 2018-06-28 2018-06-28 Ферменты биосинтеза люциферина и их применение

Country Status (11)

Country Link
US (2) US20210115476A1 (ru)
EP (1) EP3816282A4 (ru)
JP (1) JP2021529536A (ru)
KR (1) KR20210038888A (ru)
CN (1) CN112673101A (ru)
AU (1) AU2019292668A1 (ru)
BR (1) BR112020026792A2 (ru)
CA (1) CA3104848A1 (ru)
MX (1) MX2021000105A (ru)
RU (1) RU2730038C2 (ru)
WO (1) WO2020005120A1 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3105977B1 (fr) 2020-01-07 2022-02-11 Woodlight Méthode de fabrication de plantes bioluminescentes
WO2022197693A2 (en) * 2021-03-15 2022-09-22 490 BioTech, Inc. System of stable gene expression in cell lines and methods of making and using the same
CN114480451B (zh) * 2021-12-28 2024-04-16 安徽中医药大学 一种何首乌查尔酮合酶基因FmCHS2及其编码产物和应用
WO2024034619A1 (ja) * 2022-08-10 2024-02-15 国立大学法人大阪大学 発光タンパク質

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5739409A (en) 1987-06-19 1998-04-14 The Regents Of The University Of California Endogenously sweetened transgenic plant products
US5256558A (en) 1989-05-03 1993-10-26 The Trustees Of Rockefeller University Gene encoding plant asparagine synthetase
US5484956A (en) 1990-01-22 1996-01-16 Dekalb Genetics Corporation Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin
US5767367A (en) 1990-06-23 1998-06-16 Hoechst Aktiengesellschaft Zea mays (L.) with capability of long term, highly efficient plant regeneration including fertile transgenic maize plants having a heterologous gene, and their preparation
DE4207358A1 (de) 1992-03-04 1993-09-09 Inst Genbiologische Forschung Expressionskassette und plasmide zur schliesszellenspezifischen expression und ihre verwendung zur herstellung transgener pflanzenzellen und pflanzen
US5633155A (en) 1992-08-19 1997-05-27 Jinro Limited Expression vector for phytolacca antiviral protein and process for preparing transgenic plant transformed therewith
DE4234131C2 (de) 1992-10-09 1995-08-24 Max Planck Gesellschaft Transgener pathogen-resistenter Organismus
US5576198A (en) 1993-12-14 1996-11-19 Calgene, Inc. Controlled expression of transgenic constructs in plant plastids
US5750870A (en) 1994-06-17 1998-05-12 Agritope, Inc. Plant genetic transformation methods and transgenic plants
KR970007864B1 (ko) 1994-07-21 1997-05-17 진로 주식회사 섬자리공의 항바이러스성 단백질(pip)을 발현하는 식물체의 제조방법
US5795737A (en) 1994-09-19 1998-08-18 The General Hospital Corporation High level expression of proteins
US5750868A (en) 1994-12-08 1998-05-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Reversible nuclear genetic system for male sterility in transgenic plants
US5629470A (en) 1995-01-20 1997-05-13 Rutgers, The State University Of New Jersey Transgenic plants and plant cells with enhanced pathogen resistance and related methods
US5674731A (en) 1995-04-27 1997-10-07 Life Technologies, Inc. Regeneration of both plant tissues and transgenic plant tissues using a new plant hormone, 5-bromoindole-3-acetic acid
US8227572B2 (en) * 2005-08-19 2012-07-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Arachnocampa luciferases
CN104975042A (zh) * 2009-12-17 2015-10-14 赛诺菲 在髓鞘碱性蛋白启动子的控制下表达荧光素酶的动物模型及其用途
US9587266B2 (en) * 2011-02-09 2017-03-07 University Of Massachusetts Mutant luciferases
EP2913400B1 (en) * 2012-10-26 2017-08-16 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Artificial bioluminescent enzyme
RU2596398C1 (ru) * 2015-02-25 2016-09-10 Закрытое акционерное общество "ЕВРОГЕН" Метод и реактивы для детекции активности люциферазы
US10954543B2 (en) * 2015-11-02 2021-03-23 Rensselaer Polytechnic Institute Microbial polycultures and methods of use thereof
RU2674894C2 (ru) * 2017-01-30 2018-12-13 Общество с ограниченной ответственностью "ПЛАНТА" Новые люциферазы и способы их использования

Also Published As

Publication number Publication date
EP3816282A1 (en) 2021-05-05
CA3104848A1 (en) 2020-01-02
KR20210038888A (ko) 2021-04-08
EP3816282A4 (en) 2022-11-23
CN112673101A (zh) 2021-04-16
JP2021529536A (ja) 2021-11-04
RU2730038C2 (ru) 2020-08-14
US20210115476A1 (en) 2021-04-22
RU2018123601A3 (ru) 2019-12-30
MX2021000105A (es) 2021-05-27
WO2020005120A1 (ru) 2020-01-02
US20240117385A1 (en) 2024-04-11
BR112020026792A2 (pt) 2021-03-30
AU2019292668A1 (en) 2021-02-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2018123601A (ru) Ферменты биосинтеза люциферина и их применение
Markel et al. Advances in ultrahigh-throughput screening for directed enzyme evolution
Eggeling et al. Novel screening methods—biosensors
AU2005327292B2 (en) Method for enhancing production of isoprenoid compounds
CN107466322B (zh) 突变型转氨酶及与其相关的方法和用途
Milke et al. Modulation of the central carbon metabolism of Corynebacterium glutamicum improves malonyl‐CoA availability and increases plant polyphenol synthesis
JP6786477B2 (ja) ３−ｈｐを生産することができる組換え酵母およびこれを利用した３−ｈｐの製造方法
EA022764B1 (ru) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ И ПОЛУЧЕНИЯ (R)-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ω-ТРАНСАМИНАЗЫ
US20220145295A1 (en) Enzymatic rna synthesis
JP6562950B2 (ja) ドリメノールシンターゼ及びドリメノールの製造方法
JP2014506466A (ja) イソ酪酸を製造するための細胞及び方法
US9988612B2 (en) T7 RNA polymerase variants with expanded substrate range and enhanced transcriptional yield
JP5140848B2 (ja) 没食子酸の製造法
US6737245B1 (en) Luciferase expression cassettes and methods of use
Gauttam et al. Metabolic engineering of Corynebacterium glutamicum for production of UDP-N-Acetylglucosamine
JP5142268B2 (ja) 改良型没食子酸合成酵素および没食子酸の製造法
US9353390B2 (en) Genetically engineered microbes and methods for producing 4-hydroxycoumarin
CN104870645A (zh) 丁二醇的制造方法
Tsunematsu Genomics-directed activation of cryptic natural product pathways deciphers codes for biosynthesis and molecular function
Prohl et al. Branched-chain-amino-acid transaminases of yeast Saccharomyces cerevisiae
Ando et al. Bacillus subtilis DEAD protein YdbR possesses ATPase, RNA binding, and RNA unwinding activities
RU2020123860A (ru) Гиспидин-синтазы и их применение
US11781120B2 (en) Biosynthesis of polyketides
Korvin et al. A molecular switch that enhances productivity of bioprocesses for heterologous metabolite production
RU2020124074A (ru) Кофеилпируват-гидролазы и их применение