RU2015101740A - Генетически модифицированные животные и способы их получения - Google Patents

Генетически модифицированные животные и способы их получения Download PDF

Info

Publication number
RU2015101740A
RU2015101740A RU2015101740A RU2015101740A RU2015101740A RU 2015101740 A RU2015101740 A RU 2015101740A RU 2015101740 A RU2015101740 A RU 2015101740A RU 2015101740 A RU2015101740 A RU 2015101740A RU 2015101740 A RU2015101740 A RU 2015101740A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
animal
cell
talen
cells
disease
Prior art date
Application number
RU2015101740A
Other languages
English (en)
Inventor
Даниэль Ф. КАРЛСОН
Скотт К. Фаренкруг
Original Assignee
Рекомбинетикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US13/594,694 external-priority patent/US20130117870A1/en
Application filed by Рекомбинетикс, Инк. filed Critical Рекомбинетикс, Инк.
Publication of RU2015101740A publication Critical patent/RU2015101740A/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0276—Knock-out vertebrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/873—Techniques for producing new embryos, e.g. nuclear transfer, manipulation of totipotent cells or production of chimeric embryos
    • C12N15/877—Techniques for producing new mammalian cloned embryos
    • C12N15/8771—Bovine embryos
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/873—Techniques for producing new embryos, e.g. nuclear transfer, manipulation of totipotent cells or production of chimeric embryos
    • C12N15/877—Techniques for producing new mammalian cloned embryos
    • C12N15/8778—Swine embryos
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/05—Animals modified by non-integrating nucleic acids, e.g. antisense, RNAi, morpholino, episomal vector, for non-therapeutic purpose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/072—Animals genetically altered by homologous recombination maintaining or altering function, i.e. knock in
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/15—Animals comprising multiple alterations of the genome, by transgenesis or homologous recombination, e.g. obtained by cross-breeding
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/101—Bovine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/108—Swine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/30—Bird
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/02—Animal zootechnically ameliorated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/24—Vectors characterised by the absence of particular element, e.g. selectable marker, viral origin of replication
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2999/00—Further aspects of viruses or vectors not covered by groups C12N2710/00 - C12N2796/00 or C12N2800/00
    • C12N2999/007—Technological advancements, e.g. new system for producing known virus, cre-lox system for production of transgenic animals

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

1. Способ получения генетически модифицированного животного, причем указанный способ включаетвоздействие на эмбрионы или клетки мРНК, кодирующей TALEN, при этом TALEN специфически связывается с целевым хромосомным сайтом в эмбрионах или клетках,клонирование клеток в суррогатную мать или имплантацию эмбрионов в суррогатную мать,при этом суррогатная мать, таким образом, вынашивает животное, которое является генетически модифицированным только в целевом хромосомном сайте для TALEN и не содержит репортерный ген.2. Способ по п. 1, включающий воздействие на эмбрионы TALEN без репортерного гена, при этом больше чем приблизительно 1% эмбрионов включают модификацию в целевом хромосомном сайте.3. Способ по п.1 или 2, включающий получение эмбрионов, имеющих генетическую структуру, о которой известно, что она способна экспрессировать набор признаков, и воздействие на эмбрионы TALEN без репортерного гена, и скрининг вынашиваемого животного в отношении модификации и в отношении экспрессии набора признаков.4. Способ по п. 1, включающий воздействие на клетки TALEN без репортерного гена и клонирование клеток, при этом более 1% клонированных клеток дают животных, включающих модификацию в целевом хромосомном сайте.5. Способ по п. 1, включающий воздействие на клетки TALEN без репортерного гена, получение колоний клональных клеток и тестирование субпопуляции членов колоний для идентификации колоний, включающих модификацию в целевом хромосомном сайте.6. Способ по п. 5, где тестирование субпопуляции членов колоний представляет собой деструктивный процесс.7. Способ по п. 6, где способ тестирования выбирают из группы, включающей нуклеолитический анализ, секвенирование, PAGE, ПЦР, удлинение праймера или

Claims (89)

1. Способ получения генетически модифицированного животного, причем указанный способ включает
воздействие на эмбрионы или клетки мРНК, кодирующей TALEN, при этом TALEN специфически связывается с целевым хромосомным сайтом в эмбрионах или клетках,
клонирование клеток в суррогатную мать или имплантацию эмбрионов в суррогатную мать,
при этом суррогатная мать, таким образом, вынашивает животное, которое является генетически модифицированным только в целевом хромосомном сайте для TALEN и не содержит репортерный ген.
2. Способ по п. 1, включающий воздействие на эмбрионы TALEN без репортерного гена, при этом больше чем приблизительно 1% эмбрионов включают модификацию в целевом хромосомном сайте.
3. Способ по п.1 или 2, включающий получение эмбрионов, имеющих генетическую структуру, о которой известно, что она способна экспрессировать набор признаков, и воздействие на эмбрионы TALEN без репортерного гена, и скрининг вынашиваемого животного в отношении модификации и в отношении экспрессии набора признаков.
4. Способ по п. 1, включающий воздействие на клетки TALEN без репортерного гена и клонирование клеток, при этом более 1% клонированных клеток дают животных, включающих модификацию в целевом хромосомном сайте.
5. Способ по п. 1, включающий воздействие на клетки TALEN без репортерного гена, получение колоний клональных клеток и тестирование субпопуляции членов колоний для идентификации колоний, включающих модификацию в целевом хромосомном сайте.
6. Способ по п. 5, где тестирование субпопуляции членов колоний представляет собой деструктивный процесс.
7. Способ по п. 6, где способ тестирования выбирают из группы, включающей нуклеолитический анализ, секвенирование, PAGE, ПЦР, удлинение праймера или гибридизацию.
8. Способ по п. 1, где генетическую модификацию выбирают из группы, включающей вставку, делецию, инверсию или транслокацию.
9. Способ по п. 1, где TALEN представляет собой первый TALEN, и целевой хромосомный сайт представляет собой первый сайт, при этом способ дополнительно предусматривает второй TALEN, направленный на второй целевой хромосомный сайт.
10. Способ по п. 1, дополнительно включающий воздействие на эмбрионы или клетки одноцепочечной ДНК (оцДНК), которая содержит экзогенную последовательность, при этом генетическая модификация включает экзогенную последовательность.
11. Способ по п. 10, где экзогенная последовательность включает альтернативный аллель для целевого хромосомного сайта для TALEN.
12. Способ по п. 11, где альтернативный аллель связан с количественным признаком или качественным признаком.
13. Способ по п. 11, где альтернативный аллель включает аллель миостатина, присутствующий у крупного рогатого скота породы бельгийская голубая.
14. Способ по любому из пп. 11-13, где клетка или эмбрион принадлежит первой породе, а аллель принадлежит второй породе животного.
15. Способ по п. 14, где первая порода представляет собой крупный рогатый скот породы Вагю или Нелоре, а вторая порода представляет собой крупный рогатый скот породы бельгийская голубая, при этом потомок представляет собой теленка породы Вагю или Нелоре.
16. Способ по п. 11, где аллель выбирают из группы, включающей вставку, делецию, полиморфизм и однонуклеотидный полиморфизм.
17. Способ по п. 11, где альтернативный аллель
предусматривает улучшенный признак сельскохозяйственного животного, и его выбирают из группы, включающей локус комолости, рецессивный ген, ответственный за нарушения фертильности, ген для улучшения мясной продуктивности, ген для улучшения молочной продуктивности, ген устойчивости к африканской чуме свиней и их комбинации; или
предусматривает животную модель, и его выбирают из группы, включающей ген для уменьшения размера животного, ген, который стимулирует рост опухоли, онкоген, гены гиперхолестеринемии, ген воспалительного заболевания кишечника, ген расщепленного позвоночника, ген легочной гипертензии, ген, вызывающий пороки сердца, и ген глютеновой болезни.
18. Способ по п. 1, где целевой хромосомный сайт выбирают для повреждения гена, где повреждение гена включает
вставку, делецию или замещение одного или нескольких оснований в последовательности, кодирующей ген и/или его цис-регуляторный элемент.
19. Способ по п. 1, где генетическую модификацию выбирают из группы, включающей вставку, делецию, замену на экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты, инверсию, транслокацию, конверсию гена в природный аллель, конверсию гена в синтетический аллель, межвидовую аллельную миграцию, внутривидовую аллельную миграцию и конверсию гена в новый аллель.
20. Способ по п. 1, дополнительно включающий доставку рекомбиназы в клетку или эмбрион.
21. Способ по п. 1, где мРНК TALEN напрямую вводят в клетку в виде мРНК.
22. Способ по п. 21, где прямое введение в клетку включает способ, выбранный из группы, включающей электропорацию, трансфекцию, липофекцию, липосомную трансфекцию, нуклеофекцию, трансфекцию биолистическими частицами, трансфекцию наночастицами, липидную трансфекцию, электрослияние и прямую инъекцию.
23. Способ по п. 1, где мРНК TALEN вводят в клетку в виде плазмиды, которая кодирует мРНК.
24. Способ по п. 10, где оцДНК вводят в клетку после введения в клетку вектора, кодирующего TALEN.
25. Способ по п. 24, где оцДНК вводят в клетку в интервале от приблизительно 8 часов до приблизительно 3 дней после введения в клетку вектора, экспрессирующего TALEN.
26. Способ по п. 10, где мРНК TALEN напрямую вводят в клетку приблизительно в то же самое время, что и оцДНК.
27. Способ по п. 1, где клетка представляет собой первичную клетку или стволовую клетку, и способ осуществляют без стадии отбора, которая требует либо положительного, либо отрицательного критерия отбора по выживанию.
28. Способ по п. 1, где вынашиваемое животное выбирают из группы, включающей свинью, коров, овец, коз, курицу, кролика, рыбу, данио-рерио, собаку, мышь, кошку, мышь, крысу и лабораторное животное.
29. Способ по п. 1, где клетку выбирают из группы, включающей клетку сельскохозяйственного животного, клетку парнокопытного, культивируемую клетку, первичную клетку, первичную соматическую клетку, зиготу, первичную половую клетку, стволовую клетку и зиготу, или где эмбрион представляет собой бластоцисту.
30. Способ по п. 1, где TALEN представляет собой правый TALEN и дополнительно включает левый TALEN, который вводят вместе с правым TALEN.
31. Способ по п. 1, при этом клетки представляют собой первичные соматические клетки или стволовые клетки.
32. Способ по п. 1, при этом клетки клонируют посредством переноса ядра или переноса хроматина соматической клетки.
33. Способ по п. 1, где вынашиваемое животное является гомозиготным по модификации.
34. Способ по п. 1, где вынашиваемое животное представляет собой животное-основателя.
35 Генетически модифицированное животное, полученное согласно способу по любому из пп. 1-34.
36. Животное-основатель, полученное согласно способу по любому из пп. 1-34.
37. Способ получения генетически модифицированной клетки или эмбриона животного, не являющегося человеком, включающий
воздействие на эмбрионы или клетки животного in vitro мРНК, кодирующей TALEN, при этом TALEN специфически связывается с целевым хромосомным сайтом в эмбрионах или клетках, при этом клетки или эмбрионы генетически модифицируют только в целевом хромосомном сайте, и при этом способ осуществляют без репортерного гена.
38. Способ по п. 37, включающий клетки и дополнительно включающий культивирование клеток и выделение колоний клеток.
39. Способ по п. 37 или 38, при этом способ осуществляют без добавок, которые создают положительное или отрицательное давление отбора для отбора генетически модифицированных клеток.
40. Способ по п. 37, дополнительно включающий воздействие на эмбрионы или клетки животного in vitro одноцепочечной ДНК, которая содержит экзогенную последовательность.
41. Способ по п. 37 или 40, включающий клетки и дополнительно включающий культивирование клеток и выделение колоний клеток, где тестируемую клетку отбирают из выделенной колонии, и тестирование тестируемой клетки для определения того, как была модифицирована клетка.
42. Способ по п. 41, где тестирование представляет собой деструктивный процесс, который разрушает тестируемую клетку.
43. Способ по п. 37, где клетка представляет собой первичную клетку.
44. Способ по п. 43, где первичная клетка представляет собой клетку, выбранную из группы, включающей свинью, корову, овцу, козу, кур, кролика, рыбу, данио-рерио, собаку, мышь, кошку, мышь, крысу и лабораторное животное.
45. Способ по п. 37, включающий воздействие на первичную клетку, не являющуюся человеческой, в in vitro культуре или на эмбрион, не являющийся человеческим, нуклеиновой кислотой, кодирующей TALEN, где нуклеиновая кислота кодирует N-концевую лидерную часть, имеющую по меньшей мере 80% гомологию с SEQ ID NO:132.
46. Способ по п. 37, включающий воздействие на клетки TALEN без репортерного гена, при этом более 1% клеток включают модификацию в целевом хромосомном сайте.
47. Способ по п. 37, включающий воздействие на клетки TALEN без репортерного гена, получение колоний клональных клеток и тестирование субпопуляции членов колоний для идентификации колоний, включающих модификацию в целевом хромосомном сайте.
48. Способ по п. 37, где генетическую модификацию выбирают из группы, включающей вставку, делецию, инверсию или транслокацию.
49. Способ по п. 37, где TALEN представляет собой первый TALEN, и целевой хромосомный сайт представляет собой первый сайт, при этом способ дополнительно предусматривает второй TALEN, направленный на второй целевой хромосомный сайт.
50. Способ по п. 37, дополнительно включающий воздействие на эмбрионы или клетки одноцепочечной ДНК (оцДНК), которая содержит экзогенную последовательность, при этом генетическая модификация включает экзогенную последовательность.
51. Способ по п. 37, где экзогенная последовательность включает альтернативный аллель для целевого хромосомного сайта для TALEN.
52. Способ по п. 51, где альтернативный аллель включает аллель миостатина, присутствующий у крупного рогатого скота породы бельгийская голубая.
53. Способ по п. 37 или п. 52, где аллель выбирают из группы, включающей вставку, делецию, полиморфизм и однонуклеотидный полиморфизм.
54. Способ по п. 37, где целевой хромосомный сайт выбирают для повреждения гена, где повреждение гена включает
вставку, делецию или замещение одного или нескольких оснований в последовательности, кодирующей ген и/или его цис-регуляторный элемент.
55. Способ по п. 37, дополнительно включающий доставку рекомбиназы в клетку или эмбрион.
56. Способ по п. 37, где мРНК TALEN напрямую вводят в клетку в виде мРНК.
57. Способ по п. 37, где мРНК TALEN вводят в клетку в виде плазмиды, которая кодирует мРНК.
58. Способ по п. 50, где оцДНК вводят в клетку после введения в клетку вектора, кодирующего TALEN.
59. Способ по п. 50 или 58, где оцДНК вводят в клетку в интервале от приблизительно 8 часов до приблизительно 3 дней после введения в клетку вектора, экспрессирующего TALEN.
60. Способ по п. 50 или 58, где мРНК TALEN напрямую вводят в клетку приблизительно в то же самое время, что и оцДНК.
61. Способ по п. 37, при этом клетки представляют собой первичные соматические клетки или стволовые клетки.
62. Генетически модифицированное животное, причем животное представляет собой основателя, содержащего экзогенную последовательность нуклеиновой кислоты в заданном сайте и не имеющего других генетических модификаций.
63. Животное по п. 62, где экзогенная последовательность нуклеиновой кислоты представляет собой аллель, и заданный сайт является гомологом аллеля.
64. Животное по п. 62 или 63, где животное является гомозиготным по аллелю.
65. Способ создания генетической модификации, включающий
воздействие на первичную клетку, не являющуюся человеческой, в in vitro культуре или на эмбрион, не являющийся человеческим, нуклеиновой кислотой, кодирующей TALEN, где нуклеиновая кислота кодирует N-концевую лидерную часть, имеющую по меньшей мере 80% гомологию с SEQ ID NO:132.
66. Способ по п. 65, где N-концевая лидерная часть имеет 80% гомологию с частью последовательности длиной 22 остатка в SEQ ID NO:132 и имеет общую длину не больше чем приблизительно 30 остатков.
67. Способ по п. 65 или 66, при этом нуклеиновая кислота имеет по меньшей мере 90% гомологию с SEQ ID NO: 132.
68. Животное, полученное согласно способу по любому из пп. 1-34, 37-61 или 65-67.
69. Животное по п. 68, полученное при обработке животного с получением потомства с необходимыми признаками, потомства с устойчивостью к заболеваниям, потомства, которое приобретает заболевание, или потомства, не имеющего генетического нарушения.
70. Животное по п. 68 или 69 для обработки животного с получением потомства с необходимыми признаками, где необходимый признак выбран из группы, включающей продуктивный признак, признак, характеризующий тип, признак работоспособности, признак фертильности, материнский признак, улучшенную мясную продуктивность, отсутствие рогов, улучшенную молочную продуктивность, размер животного и уменьшенный размер животного.
71. Животное по п. 68 или 69 для обработки животного с получением потомства с устойчивостью к заболеваниям, где заболевание выбрано из группы, включающей ген устойчивости к африканской чуме свиней, раку, гиперхолистеринемии, воспалительному заболеванию кишечника и заболеванию сердца.
72. Животное по п. 68 или 69 для обработки животного с получением потомства, которое приобретает устойчивость к заболеванию, где заболевание выбрано из группы, включающей рак, гиперхолестеринемию, воспалительное заболевание кишечника, расщепленный позвоночник, легочную гипертензию, нарушение сердечной деятельности и глютеновую болезнь.
73. Животное по п. 68 или 69 для обработки животного с получением потомства, не имеющего генетического нарушения, где генетическое нарушение представляет собой снижение фертильности.
74. Клетка, полученная согласно способу по любому из пп. 1-34, 37-61 или 65-67.
75. Клетка по п. 74, полученная при обработке животного с получением потомства с необходимыми признаками, потомства с устойчивостью к заболеваниям, потомства, которое приобретает заболевание, или потомства, не имеющего генетического нарушения.
76. Клетка по п. 74 или 75 для обработки животного с получением потомства с необходимыми признаками, где необходимый признак выбран из группы, включающей продуктивный признак, признак, характеризующий тип, признак работоспособности, признак фертильности, материнский признак, улучшенную мясную продуктивность, отсутствие рогов, улучшенную молочную продуктивность, размер животного и уменьшенный размер животного.
77. Клетка по п. 74 или 75 для обработки животного с получением потомства с устойчивостью к заболеваниям, где заболевание выбрано из группы, включающей ген устойчивости к африканской чуме свиней, раку, гиперхолистеринемии, воспалительному заболеванию кишечника и заболеванию сердца.
78. Клетка по п. 74 или 75 для обработки животного с получением потомства, которое приобретает устойчивость к заболеванию, где заболевание выбрано из группы, включающей рак, гиперхолестеринемию, воспалительное заболевание кишечника, расщепленный позвоночник, легочную гипертензию, нарушение сердечной деятельности и глютеновую болезнь.
79. Клетка по п. 74 или 75 для обработки животного с получением потомства, не имеющего генетического нарушения, где генетическое нарушение представляет собой снижение фертильности.
80. Эмбрион, полученный согласно способу по любому из пп. 1-34, 37-61 или 65-67.
81. Эмбрион по п. 80, полученный при обработке животного с получением потомства с необходимыми признаками, потомства с устойчивостью к заболеваниям, потомства, которое приобретает заболевание, или потомства, не имеющего генетического нарушения.
82. Эмбрион по п. 80 или 81 для обработки животного с получением потомства с необходимыми признаками, где необходимый признак выбран из группы, включающей продуктивный признак, признак, характеризующий тип, признак работоспособности, признак фертильности, материнский признак, улучшенную мясную продуктивность, отсутствие рогов, улучшенную молочную продуктивность, размер животного и уменьшенный размер животного.
83. Эмбрион по п. 80 или 81 для обработки животного с получением потомства с устойчивостью к заболеваниям, где заболевание выбрано из группы, включающей ген устойчивости к африканской чуме свиней, раку, гиперхолистеринемии, воспалительному заболеванию кишечника и заболеванию сердца.
84. Эмбрион по п. 80 или 81 для обработки животного с получением потомства, которое приобретает устойчивость к заболеванию, где заболевание выбрано из группы, включающей рак, гиперхолестеринемию, воспалительное заболевание кишечника, расщепленный позвоночник, легочную гипертензию, нарушение сердечной деятельности и глютеновую болезнь.
85. Эмбрион по п. 80 или 81 для обработки животного с получением потомства, не имеющего генетического нарушения, где генетическое нарушение представляет собой снижение фертильности.
86. Применение клетки, полученной согласно способу по любому из пп. 37-61 или 65-67, для получения генетически модифицированного животного.
87. Применение клетки по п. 86 для получения потомства с необходимым признаком, потомства с устойчивостью к заболеваниям, потомства, которое приобретает заболевание, или потомства, не имеющего генетического нарушения.
88. Применение эмбриона, полученного согласно способу по любому из пп. 37-61 или 65-67, для получения генетически модифицированного животного.
89. Применение эмбриона по п. 88 для получения потомства с необходимым признаком, потомства с устойчивостью к заболеваниям, потомства, которое приобретает заболевание, или потомства, не имеющего генетического нарушения.
RU2015101740A 2012-06-21 2013-06-19 Генетически модифицированные животные и способы их получения RU2015101740A (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261662767P 2012-06-21 2012-06-21
US61/662,767 2012-06-21
US13/594,694 2012-08-24
US13/594,694 US20130117870A1 (en) 2011-02-25 2012-08-24 Genetically modified animals and methods for making the same
PCT/US2013/046590 WO2013192316A1 (en) 2012-06-21 2013-06-19 Genetically modified animals and methods for making the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2015101740A true RU2015101740A (ru) 2016-08-20

Family

ID=49769336

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015101740A RU2015101740A (ru) 2012-06-21 2013-06-19 Генетически модифицированные животные и способы их получения

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP2863736B1 (ru)
JP (1) JP2015519923A (ru)
KR (1) KR20150029715A (ru)
CN (2) CN109321603A (ru)
AR (1) AR091482A1 (ru)
AU (1) AU2013277214C1 (ru)
CA (1) CA2877297A1 (ru)
MX (1) MX2015000074A (ru)
RU (1) RU2015101740A (ru)
WO (1) WO2013192316A1 (ru)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9528124B2 (en) * 2013-08-27 2016-12-27 Recombinetics, Inc. Efficient non-meiotic allele introgression
US10920242B2 (en) 2011-02-25 2021-02-16 Recombinetics, Inc. Non-meiotic allele introgression
CN105814214A (zh) 2013-10-25 2016-07-27 家畜改良有限公司 遗传标记和其用途
AU2015218576B2 (en) * 2014-02-24 2020-02-27 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration
CN103952424B (zh) 2014-04-23 2017-01-11 尹熙俊 生产mstn双侧基因敲除的双肌性状体细胞克隆猪的方法
AP2016009588A0 (en) * 2014-04-28 2016-11-30 Recombinetics Inc Multiplex gene editing in swine
CN103952405B (zh) * 2014-05-13 2016-02-10 扬州大学 一种山羊mstn基因定点修饰系统及其应用
US10729112B2 (en) 2014-08-28 2020-08-04 Aarhus Universitet Pig model for diabetes
CN107002098A (zh) * 2014-09-29 2017-08-01 杰克逊实验室 通过电穿孔高效率、高通量产生遗传修饰哺乳动物
CN104293833B (zh) * 2014-10-09 2017-10-10 西北农林科技大学 一种基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体及重组细胞
WO2017079428A1 (en) * 2015-11-04 2017-05-11 President And Fellows Of Harvard College Site specific germline modification
CN105567659A (zh) * 2016-01-05 2016-05-11 上海中医药大学附属曙光医院 小鼠nrdp1基因定点修饰系统及其应用
CN105543257A (zh) * 2016-01-18 2016-05-04 安徽农业大学 一种pAPN基因定点修饰猪
DK3412765T3 (da) * 2016-02-04 2023-01-30 Kao Corp Fremgangsmåde til fremstilling af mutant filamentøse svampe
GB201617559D0 (en) 2016-10-17 2016-11-30 University Court Of The University Of Edinburgh The Swine comprising modified cd163 and associated methods
CN108690840B (zh) * 2017-04-07 2020-10-09 北京百奥赛图基因生物技术有限公司 Apoe基因敲除的动物模型的构建方法及其短肽
JP7210028B2 (ja) * 2017-07-18 2023-01-23 国立大学法人京都大学 遺伝子変異導入方法
CN110484549B (zh) * 2018-04-20 2023-10-03 北京大学 基因组靶向修饰方法
CN111154801B (zh) * 2018-11-07 2021-09-10 武汉纤然生物科技有限公司 一种提高基因编辑效率的方法
CN111466338B (zh) * 2019-01-23 2022-03-22 中国科学院广州生物医药与健康研究院 Ddx5基因缺失的生精障碍小鼠模型及其构建方法
CN114829882B (zh) 2019-11-05 2023-02-28 阿比尔技术公司 植物产品中感染的预测
CN112352739A (zh) * 2020-11-11 2021-02-12 大连医科大学 一种非酒精性脂肪肝小鼠模型及其构建方法
GB202118058D0 (en) 2021-12-14 2022-01-26 Univ Warwick Methods to increase yields in crops
CN114574493A (zh) * 2022-04-02 2022-06-03 中国科学院遗传与发育生物学研究所 一种编辑绵羊SOCS2基因的sgRNA组合、扩增用引物和应用
CN114794029B (zh) * 2022-06-09 2023-02-28 上海大学 一种计数秀丽隐杆线虫子宫内发育胚胎数目的方法
GB2621813A (en) 2022-06-30 2024-02-28 Univ Newcastle Preventing disease recurrence in Mitochondrial replacement therapy
CN115341044A (zh) * 2022-10-19 2022-11-15 佛山科学技术学院 一种利用微生物及其相关snp位点预测猪日增重的方法

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4888274A (en) 1985-09-18 1989-12-19 Yale University RecA nucleoprotein filament and methods
US5763240A (en) 1992-04-24 1998-06-09 Sri International In vivo homologous sequence targeting in eukaryotic cells
US5948653A (en) 1997-03-21 1999-09-07 Pati; Sushma Sequence alterations using homologous recombination
DE69841139D1 (de) * 1997-07-14 2009-10-22 Univ Liege Mutationen im myostatingen steigern muskelmasse in säugetieren
US6632672B2 (en) 1998-08-19 2003-10-14 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for genomic modification
US6686515B1 (en) 1999-11-23 2004-02-03 Maxygen, Inc. Homologous recombination in plants
US6808925B2 (en) 2000-02-18 2004-10-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Altered recombinases for genome modification
DK1311661T3 (da) 2000-08-14 2012-11-26 Us Gov Health & Human Serv Forøget homolog rekombination medieret ved lambda-rekombinationsproteiner
US6586251B2 (en) * 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7199281B2 (en) 2001-09-07 2007-04-03 The Regents Of The University Of California Method of generating a transgenic livestock animal
AU2002951347A0 (en) * 2002-09-09 2002-09-26 Benitec Australia Ltd Genetic silencing
US7420099B2 (en) * 2004-04-22 2008-09-02 Kirin Holdings Kabushiki Kaisha Transgenic animals and uses thereof
CN1970749B (zh) * 2005-11-25 2011-09-28 上海杰隆生物工程股份有限公司 一种制备朊蛋白基因敲除家畜的方法
CN101565706A (zh) * 2008-04-25 2009-10-28 武汉市星站生物技术有限公司 构建基因重组运动发酵单胞菌应用于乙醇发酵
WO2010008562A2 (en) 2008-07-16 2010-01-21 Recombinetics Methods and materials for producing transgenic animals
US20100105140A1 (en) 2008-07-16 2010-04-29 Fahrenkrug Scott C Plaice dna transposon system
WO2010014857A2 (en) * 2008-07-30 2010-02-04 University Of Massachusetts Chromosome therapy
US20120030778A1 (en) * 2008-12-04 2012-02-02 Sigma-Aldrich Co., Llc. Genomic editing of genes involved with parkinsons disease
US20110023158A1 (en) * 2008-12-04 2011-01-27 Sigma-Aldrich Co. Bovine genome editing with zinc finger nucleases
US9314005B2 (en) * 2009-07-01 2016-04-19 Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. Genetically modified rat models for severe combined immunodeficiency (SCID)
CA2767377A1 (en) * 2009-07-24 2011-01-27 Sigma-Aldrich Co. Llc Method for genome editing
ES2550202T3 (es) 2009-08-03 2015-11-05 Recombinetics, Inc. Métodos y composiciones para la modificación dirigida de genes
KR102262704B1 (ko) * 2009-08-11 2021-06-09 상가모 테라퓨틱스, 인코포레이티드 표적화 변형에 대한 동형접합성 유기체
AU2010327998B2 (en) * 2009-12-10 2015-11-12 Iowa State University Research Foundation, Inc. TAL effector-mediated DNA modification
AU2010335107B2 (en) * 2009-12-21 2014-07-03 Keygene N.V. Improved techniques for transfecting protoplasts
US20110197290A1 (en) 2010-02-11 2011-08-11 Fahrenkrug Scott C Methods and materials for producing transgenic artiodactyls
JP5817955B2 (ja) * 2010-04-27 2015-11-18 プライムテック株式会社 血友病ａモデルブタの作出
CA2798988C (en) * 2010-05-17 2020-03-10 Sangamo Biosciences, Inc. Tal-effector (tale) dna-binding polypeptides and uses thereof
EP2392208B1 (en) * 2010-06-07 2016-05-04 Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Fusion proteins comprising a DNA-binding domain of a Tal effector protein and a non-specific cleavage domain of a restriction nuclease and their use
US20140127814A1 (en) * 2010-08-10 2014-05-08 Srinivasan Chandrasegaran Generation and use of pluripotent stem cells
BR112013021785A8 (pt) * 2011-02-25 2018-07-03 Recombinetics Inc animais geneticamente modificados e métodos para fazer os mesmos
CN102212545B (zh) * 2011-04-07 2013-05-08 北京济福霖生物技术有限公司 利用锌指核酸酶敲除牛β-乳球蛋白基因的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN105101787A (zh) 2015-11-25
JP2015519923A (ja) 2015-07-16
AR091482A1 (es) 2015-02-04
EP2863736A1 (en) 2015-04-29
CN109321603A (zh) 2019-02-12
AU2013277214B2 (en) 2019-04-18
EP2863736A4 (en) 2016-03-09
AU2013277214A1 (en) 2015-01-22
CA2877297A1 (en) 2013-12-27
WO2013192316A1 (en) 2013-12-27
CN105101787B (zh) 2018-09-14
KR20150029715A (ko) 2015-03-18
AU2013277214C1 (en) 2019-08-29
EP2863736B1 (en) 2019-12-11
MX2015000074A (es) 2015-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2015101740A (ru) Генетически модифицированные животные и способы их получения
Xiang et al. Editing porcine IGF2 regulatory element improved meat production in Chinese Bama pigs
Cooper et al. Generation of gene edited birds in one generation using sperm transfection assisted gene editing (STAGE)
AU2018200281B2 (en) Lincrna-deficient non-human animals
CN108697067A (zh) 嵌合胚胎-辅助的器官制备的组合物和方法
JP2017184639A (ja) Ｃａｓ９タンパク質を哺乳動物の受精卵に導入する方法
Hu et al. Generation of VEGF knock-in Cashmere goat via the CRISPR/Cas9 system
CN106148406B (zh) 猪ApoE基因敲除载体及其构建方法与应用
Jeong et al. Establishment of a canine model of human type 2 diabetes mellitus by overexpressing phosphoenolypyruvate carboxykinase
Xu et al. A transgene-free method for rapid and efficient generation of precisely edited pigs without monoclonal selection
Yum et al. Long-term health and germline transmission in transgenic cattle following transposon-mediated gene transfer
US20040088745A1 (en) Production of mammals which produce progeny of a single sex
CN105039402A (zh) 一种改良猪肌肉品质的方法
US11771068B2 (en) Method for producing non-human large mammal or fish each capable of producing gamete originated from different individual
Sun et al. Progress in in vitro culture and gene editing of porcine spermatogonial stem cells
KR20020057943A (ko) 트랩 벡터 및 이를 이용한 유전자 트랩법
CN108882696A (zh) 通过遗传互补对人源化肾脏的工程改造
US20200149063A1 (en) Methods for gender determination and selection of avian embryos in unhatched eggs
CN109679998A (zh) 一种定点突变MSTN并同时定点整合PPARγ的载体
WO2012158982A2 (en) Methods for transgenesis of spermatogonial stem cells (sscs) and organisms using transposon vectors
Minařík et al. Atoh1 is required for the formation of lateral line electroreceptors and hair cells, whereas Foxg1 represses an electrosensory fate
CN111073900A (zh) 一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法
KR20060057528A (ko) 동물에서 체세포 핵 전이와 연관된 유사분열 방추 결함을교정하는 방법
Syvyk et al. Customized transgenesis via modification of spermatogonial stem cells
JP2021514199A (ja) 非ヒト霊長類の体細胞クローン動物の製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
FA92 Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted)

Effective date: 20171005