RU2011138706A

RU2011138706A - МУТАНТНЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ СуаА И ПРОИЗВОДНЫЕ ПОЛИПЕПТИДОВ, ПОДХОДЯЩИЕ ДЛЯ ДОСТАВКИ ИММУНОГЕННЫХ МОЛЕКУЛ В КЛЕТКУ

Info

Publication number: RU2011138706A
Application number: RU2011138706/10A
Authority: RU
Inventors: Петер СЕБО; Адриана ОСИЦКОВА; Иржи МАСИН; Катрин ФАЙОЛЬ; Ян КРУСЕК; Марек БАСЛЕР; Клод ЛЕКЛЕРК; Радим ОСИЦКА
Original assignee: Институт Пастор; ИНСТИТЬЮТ ОФ МАЙКРОБАЙОЛОДЖИ ОФ ЗЕ АСЦР, в.в.и.; ИНСТИТЬЮТ ОФ ФИЗИОЛОДЖИ ОФ ЗЕ АСЦР, в.в.и.
Priority date: 2009-03-23
Filing date: 2010-03-23
Publication date: 2013-04-27
Also published as: EP2411513B1; JP2012521207A; ES2612945T3; CN102439146A; EP2411513A1; CA2755694A1; JP5770711B2; WO2010136231A1; RU2585216C2; CN105602924A

Abstract

1. Полипептид, представляющий собой мутант белка аденилатциклазы (мутантный полипептид), и имеющий аминокислотную последовательность, которая представляет собой или включает одну из следующих последовательностей:a) аминокислотную последовательность аденилатциклазы (СуаА) из Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis или Bordetella hinzii, в которую внесены следующие мутации:(i) замена остатка глутаминовой кислоты в положении 570 на остаток глутамина (E570Q) или на консервативный аминокислотный остаток, а также(ii) замена остатка лизина в положении 860 на остаток аргинина (K860R) или на консервативный аминокислотный остаток, или;b) аминокислотную последовательность фрагмента аденилатциклазы из Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis или Bordetella hinzii, причем указанный фрагмент обладает способностью белка СуаА из Bordetella pertussis связываться с клеткой-мишенью и способностью транслоцировать N-концевой домен фермента аденилатциклазы или его часть в указанную клетку, при этом указанный фрагмент также содержит следующие измененные аминокислотные остатки, расположенные в положениях 570 и 860 в указанной аденилатциклазе: E570Q и K860R, илиc) аминокислотную последовательность, которая отличается от аминокислотной последовательности, определенной в пункте а) или b), заменой и/или вставкой одной или более аминокислоты, и которая обладает способностью белка СуаА из Bordetella pertussis связываться с клеткой-мишенью и способностью транслоцировать N-концевой домен фермента аденилатциклазы или его часть в указанную клетку, при этом указанная аминокислотная последовательность также содержит следующие измененные аминокислотные остатки, расположенные в положениях 570 и 860 в указанной аденила�

Claims

1. Полипептид, представляющий собой мутант белка аденилатциклазы (мутантный полипептид), и имеющий аминокислотную последовательность, которая представляет собой или включает одну из следующих последовательностей:

a) аминокислотную последовательность аденилатциклазы (СуаА) из Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis или Bordetella hinzii, в которую внесены следующие мутации:

(i) замена остатка глутаминовой кислоты в положении 570 на остаток глутамина (E570Q) или на консервативный аминокислотный остаток, а также

(ii) замена остатка лизина в положении 860 на остаток аргинина (K860R) или на консервативный аминокислотный остаток, или;

b) аминокислотную последовательность фрагмента аденилатциклазы из Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis или Bordetella hinzii, причем указанный фрагмент обладает способностью белка СуаА из Bordetella pertussis связываться с клеткой-мишенью и способностью транслоцировать N-концевой домен фермента аденилатциклазы или его часть в указанную клетку, при этом указанный фрагмент также содержит следующие измененные аминокислотные остатки, расположенные в положениях 570 и 860 в указанной аденилатциклазе: E570Q и K860R, или

c) аминокислотную последовательность, которая отличается от аминокислотной последовательности, определенной в пункте а) или b), заменой и/или вставкой одной или более аминокислоты, и которая обладает способностью белка СуаА из Bordetella pertussis связываться с клеткой-мишенью и способностью транслоцировать N-концевой домен фермента аденилатциклазы или его часть в указанную клетку, при этом указанная аминокислотная последовательность также содержит следующие измененные аминокислотные остатки, расположенные в положениях 570 и 860 в указанной аденилатциклазе: E570Q и K860R, или

d) аминокислотную последовательность аденилатциклазы (СуаА) из Bordetella parapertussis, в которую внесены следующие мутации:

(i) замена остатка глутаминовой кислоты в положении 569 на остаток глутамина (E569Q) или на консервативный аминокислотный остаток, а также

(ii) замена остатка лизина в положении 859 на остаток аргинина (K859R) или на консервативный аминокислотный остаток, или;

e) аминокислотную последовательность фрагмента аденилатциклазы из Bordetella bronchiseptica, причем указанный фрагмент обладает способностью белка СуаА из Bordetella pertussis связываться с клеткой-мишенью и способностью транслоцировать N-концевой домен фермента аденилатциклазы или его часть в указанную клетку, при этом указанный фрагмент также содержит следующие измененные аминокислотные остатки, расположенные в положениях 569 и 859 в указанной аденилатциклазе: E569Q и K859R, или

f) аминокислотную последовательность, которая отличается от аминокислотной последовательности, определенной в пункте d) или е), заменой и/или вставкой одной или более аминокислот, и которая обладает способностью белка СуаА из Bordetella pertussis связываться с клеткой-мишенью и способностью транслоцировать его N-концевой домен фермента аденилатциклазы или его часть в указанную клетку, при этом указанная аминокислотная последовательность также содержит следующие измененные аминокислотные остатки, расположенные в положениях 569 и 859 в указанной аденилатциклазе: E569Q и K859R.

2. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность указанной аденилатциклазы из Bordetella Pertussis соответствует SEQ ID №1.

3. Полипептид по п.2, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность указанного полипептида дополнительно отличается от последовательности SEQ ID №1 заменами, делециями и/или вставками от 1 до 200 аминокислот.

4. Полипептид по п.1, который способен связываться с клетками и транслоцировать N-концевой домен фермента аденилатциклазы в указанные клетки, при этом указанные клетки экспрессируют рецептор CD11b/CD18, и при этом связывание с указанными клетками происходит посредством связывания с указанным рецептором CD11b/CD18.

5. Полипептид по п.1, который представляет собой мутант анатоксина аденилатциклазы, аденилатциклазная активность которого в клетках полностью или частично подавлена, по сравнению с токсином СуаА из Bordetella pertussis.

6. Полипептид по п.5, отличающийся тем, что частичное или полное подавление активности аденилатциклазы достигается за счет вставки дипептида между остатками аминокислот в положениях 188 и 189 аденилатциклазы из Bordetella Pertussis, в частности, последовательности SEQ ID №1.

7. Производное полипептида, которое содержит или состоит из полипептида по п.1, который дополнительно объединен с одной или более представляющей интерес молекулой.

8. Производное полипептида по п.7, отличающееся тем, что каждая из указанных одной или более представляющих интерес молекул состоит из аминокислотной последовательности, которая способна запускать иммунный ответ.

9. Производное полипептида по п.8, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность каждой из указанных молекул, которые способны запускать иммунный ответ, содержит от 5 до 800, в частности от 300 до 600 или от 400 до 500 остатков аминокислот.

10. Производное полипептида по п.8, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность каждой из указанных молекул, которые способны запускать иммунный ответ, содержит или состоит из аминокислотной последовательности антигена вируса полиомиелита, антигена ВИЧ, антигена вируса гриппа, антигена вируса хориоменингита, опухолевого антигена или состоит из или включает в себя часть любого из указанных антигенов, которая содержит по меньшей мере один эпитоп.

11. Производное полипептида по п.8, представляющее собой рекомбинантный полипептид, отличающееся тем, что аминокислотная последовательность каждой из указанных молекул, которые способны запускать иммунный ответ, встроена в пермиссивный сайт аминокислотной последовательности аденилатциклазы мутантного полипептида, благодаря чему, сохраняется способность указанного мутантного полипептида транслоцировать N-концевой домен фермента аденилатциклазы в клетки-мишени.

12. Производное полипептида по п.8, отличающееся тем, что каждая из указанных аминокислотных последовательностей, которые способны запускать иммунный ответ, присоединена, в частности, путем химического соединения к аминокислотному остатку указанного мутантного полипептида.

13. Полипептид по п.1 для применения в терапии.

14. Полипептид по п.1 для применения в терапии с целью запуска Т-клеточного иммунного ответа, и/или с целью запуска В-клеточного иммунного ответа в организме нуждающегося в этом хозяина.

15. Производное полипептида по п.7 для профилактики или лечения заболевания, выбранного из неоплазии, рака и инфекционного заболевания, выбранного из заболевания, вызываемого вирусом, ретровирусом, бактерией, паразитомо или грибком.

16. Полипептид по п.13, отличающийся тем, что указанный полипептид предназначен для введения в комбинации с адъювантном и/или в комбинации с другой терапевтически активной молекулой.

17. Полипептид по п.13, отличающийся тем, что указанный полипептид не предназначен для введения в комбинации с адъювантном.

18. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по п.1, фармацевтически приемлемый носитель и, при необходимости, адъювант и/или терапевтически активную молекулу.

19. Применение производного полипептида по п.7 для получения терапевтической композиции для лечения заболевания, выбранного из неоплазии, рака и инфекционного заболевания, выбранного из заболевания, вызванного вирусом или ретровирусом.

20. Способ получения белкового вектора, подходящего для доставки молекулы в клетку, включающий присоединение указанной молекулы к полипептиду по п.1.