RU2010129545A - Вектор экспрессии млекопитающих - Google Patents
Вектор экспрессии млекопитающих Download PDFInfo
- Publication number
- RU2010129545A RU2010129545A RU2010129545/10A RU2010129545A RU2010129545A RU 2010129545 A RU2010129545 A RU 2010129545A RU 2010129545/10 A RU2010129545/10 A RU 2010129545/10A RU 2010129545 A RU2010129545 A RU 2010129545A RU 2010129545 A RU2010129545 A RU 2010129545A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- expression cassette
- poi
- nucleic acid
- expression
- msm
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
Landscapes
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
1. Нуклеиновая кислота вектора, применимая для экспрессии по меньшей мере одного целевого полипептида в клетках млекопитающего, включающая: ! (а) по меньшей мере одну кассету экспрессии (POI), пригодную для экспрессии целевого полипептида; ! (б) кассету экспрессии (MSM), включающую ген селективного маркера млекопитающих; ! (в) кассету экспрессии (MASM), включающую амплифицируемый ген селективного маркера млекопитающих; ! в которой кассета экспрессии (POI) фланкирована в направлении 5' кассетой экспрессии (MASM), кассета экспрессии (MSM) локализована в направлении 3' от кассеты экспрессии (POI), и в которой кассеты экспрессии (MASM), (POI) и (MSM) расположены в той же ориентации от 5' к 3'. ! 2. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой кассета экспрессии (POI) включает полинуклеотид, кодирующий целевой полипептид. ! 3. Нуклеиновая кислота вектора по п.1 или 2, которая является кольцевой, и в которой кассета экспрессии (MSM) расположена в направлении 3' кассеты экспрессии (РОГ), и в которой кассета экспрессии (MASM) расположена в направлении 3' кассеты экспрессии (MSM). ! 4. Нуклеиновая кислота вектора по п.3, в которой вектор включает уникальный сайт линеаризации рестрикции для линеаризации вектора, причем указанный сайт рестрикции для линеаризации локализован между кассетами экспрессии (MSM) и (MASM). ! 5. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой указанная кассета экспрессии (MSM) включает ген, кодирующий ферментативно функциональную неомицинфосфотрансферазу, и в которой указанная кассета экспрессии (MASM) включает ген, кодирующий ферментативно функциональную дигидрофолатрезуктазу (DHFR). ! 6. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой вектор включает по мен
Claims (26)
1. Нуклеиновая кислота вектора, применимая для экспрессии по меньшей мере одного целевого полипептида в клетках млекопитающего, включающая:
(а) по меньшей мере одну кассету экспрессии (POI), пригодную для экспрессии целевого полипептида;
(б) кассету экспрессии (MSM), включающую ген селективного маркера млекопитающих;
(в) кассету экспрессии (MASM), включающую амплифицируемый ген селективного маркера млекопитающих;
в которой кассета экспрессии (POI) фланкирована в направлении 5' кассетой экспрессии (MASM), кассета экспрессии (MSM) локализована в направлении 3' от кассеты экспрессии (POI), и в которой кассеты экспрессии (MASM), (POI) и (MSM) расположены в той же ориентации от 5' к 3'.
2. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой кассета экспрессии (POI) включает полинуклеотид, кодирующий целевой полипептид.
3. Нуклеиновая кислота вектора по п.1 или 2, которая является кольцевой, и в которой кассета экспрессии (MSM) расположена в направлении 3' кассеты экспрессии (РОГ), и в которой кассета экспрессии (MASM) расположена в направлении 3' кассеты экспрессии (MSM).
4. Нуклеиновая кислота вектора по п.3, в которой вектор включает уникальный сайт линеаризации рестрикции для линеаризации вектора, причем указанный сайт рестрикции для линеаризации локализован между кассетами экспрессии (MSM) и (MASM).
5. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой указанная кассета экспрессии (MSM) включает ген, кодирующий ферментативно функциональную неомицинфосфотрансферазу, и в которой указанная кассета экспрессии (MASM) включает ген, кодирующий ферментативно функциональную дигидрофолатрезуктазу (DHFR).
6. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой вектор включает по меньшей мере одну дополнительную кассету экспрессии (POI') для экспрессии дополнительного целевого полипептида и в которой дополнительная кассета экспрессии (POI') локализована между кассетой экспрессии (POI) и кассетой экспрессии (MSM), причем кассета экспрессии (POI') расположена в той же ориентации от 5' к 3', что и кассеты экспрессии (POI) и (MSM).
7. Нуклеиновая кислота вектора по п.6 для экспрессии молекулы иммуноглобулина, включающая в каждой кассете экспрессии (POI) и (POI') полинуклеотид, кодирующий или легкую, или тяжелую цепь молекулы иммуноглобулина, или ее функциональных фрагментов, причем каждая кассета экспрессии (POI) и (POI') включает один из указанных полинуклеотидов.
8. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, причем указанные кассеты экспрессии включают промотор и/или сайт терминации транскрипции.
9. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, причем указанные кассеты экспрессии включают энхансер и/или интрон.
10. Нуклеиновая кислота вектора по п.8 или 9, в которой при наличии кассеты экспрессии (POI) и/или кассеты экспрессии (POI') включает промотор/энхансер ЦМВ и/или в которой кассеты экспрессии (MSM) и (MASM) включают промотор/энхансер SV40 или промотор SV40.
11. Нуклеиновая кислота вектора по п.9, в которой по меньшей мере кассета экспрессии (POI) включает интрон, который расположен между промотором и стартовым кодоном полинуклеотида для экспрессии целевого полипептида.
12. Нуклеиновая кислота вектора по п.9, в которой кассета экспрессии (MASM) включает интрон, который локализован в направлении 3' амплифицируемого гена селективного маркерного млекопитающих.
13. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, включающая по меньшей мере одну дополнительную кассету экспрессии (PSM), содержащую прокариотический ген селективного маркера, в которой кассета экспрессии (PSM) локализована между кассетами экспрессии (MSM) и (MASM).
14. Нуклеиновая кислота вектора по п.13, в которой прокариотический ген селективного маркера обеспечивает устойчивость к антибиотику, причем указанный антибиотик выбран из группы, состоящей из ампициллина, канамицина, тетрациклина и хлорамфеникола.
15. Нуклеиновая кислота вектора по п.5, в которой ген DHFR выбран из группы, состоящей из DHFR дикого типа, варианта DHFR, имеющего пониженную чувствительность к МТ по сравнению с DHFR дикого типа, и вариант DHFR, имеющий повышенную чувствительность к МТ по сравнению с DHFR дикого типа.
16. Нуклеиновая кислота вектора по п.1, в которой экспрессирующий вектор выбран из группы, состоящей из:
(а) кольцевой или линейной нуклеиновой кислоты вектора, включающей следующие генетические элементы в определенном порядке, причем направление от 5' к 3' выражено стрелкой →:
I. Промотор кассеты экспрессии (MASM) (→)
II. Ген, кодирующий амплифицируемый селективный маркер для клеток млекопитающих, кассеты экспрессии (MASM) (→)
III. Интрон кассеты экспрессии (MASM) (→)
IV. ПолиА сайт кассеты экспрессии (MASM) (→)
V. Промотор кассеты экспрессии (POI) (→)
VI. Интрон кассеты экспрессии (POI) (→)
VII. Полинуклеотид, кодирующий целевой полипептид, инсертированный в кассету экспрессии (POI) (→)
VIII. ПолиА сайт кассеты экспрессии (POI) (→)
IX. Промотор кассеты экспрессии (POI') (→)
X. Интрон кассеты экспрессии (POI') (→)
XI. Полинуклеотид, кодирующий дополнительный целевой полипептид, который инсертирован в кассету экспрессии (POI') (→)
XII. ПолиА сайт кассеты экспрессии (POI') (→)
XIII. Промотор кассеты экспрессии (MSM) (→)
XIV. Ген, кодирующий селективный маркер для клеток млекопитающих, кассеты экспрессии (MSM) (→)
XV. ПолиА сайт кассеты экспрессии (MSM) (→)
XVI. Кассета экспрессии PSM (→) или (←)
XVII. Сайт рестрикции для линеаризации, если нуклеиновая кислота вектора кольцевая;
(б) нуклеиновая кислота вектора, показанная в виде Seq. ID No.1, или Seq. ID No.16, или их производного, включающая то же расположение генетических элементов.
17. Способ получения нуклеиновой кислоты вектора по меньшей мере по одному из пп.1-16, причем указанный способ включает сборку по меньшей мере следующих генетических элементов:
(а) по меньшей мере одной кассеты экспрессии (POI) для экспрессии целевого полипептида;
(б) кассеты экспрессии (MSM), включающей ген селективного маркера млекопитающих;
(в) кассеты экспрессии (MASM), включающей амплифицированный ген селективного маркера млекопитающих;
таким образом, что кассета экспрессии (POI) фланкирована в направлении 5' кассетой экспрессии (MASM), кассета экспрессии (MSM) локализована в направлении 3' от кассеты экспрессии (POI), и в которой кассеты экспрессии (MASM), (POI) и (MSM) расположены в той же ориентации от 5' к 3'.
18. Способ по п.17 для получения кольцевой нуклеиновой кислоты вектора, включающей сборку генетических элементов таким образом, что кассета экспрессии (MSM) расположена в направлении 3' от кассеты экспрессии (POI), и в которой кассета экспрессии (MASM) расположена в направлении 3' от кассеты экспрессии (MSM).
19. Клетки млекопитающих-хозяева, включающие нуклеиновую кислоту вектора по меньшей мере по одному из пп.1-16.
20. Клетки млекопитающих-хозяева по п.19, выбранные из группы, состоящей из СОР, L, С127, Sp2/0, NS-0, NS-1, NIH3T3, РС12, PC12h, BHK и СНО, COS1, COS3, COS7, CV1, Vero, HeLa, НЕК-293, производных от сетчатки клеток PER-C6, производных от диплоидных фибробластов клеток, клеток миеломы и HepG2.
21. Способ получения клеток-хозяев по п.19 или 20, в котором клетки-хозяева трансфецированы нуклеиновой кислотой вектора по меньшей мере по одному из пп.1-16.
22. Способ получения целевого полипептида, включающий культивирование по меньшей мере одной клетки-хозяина по п.19 в культуральной среде для клеток в условиях, допускающих экспрессию указанного целевого полипептида.
23. Способ по п.22, причем указанный целевой полипептид секретируется в культуральную среду клеток и выделяется из культуральной среды клеток.
24. Способ по п.22 или 23, причем целевой полипептид является молекулой иммуноглобулина или ее функциональным фрагментом.
25. Полипептид, полученный способом по меньшей мере по одному из пп.22-24.
26. Полипептид по п.25, причем указанный полипептид является молекулой иммуноглобулина или ее функциональным фрагментом.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP07150339 | 2007-12-21 | ||
| EP07150339.5 | 2007-12-21 | ||
| PCT/EP2008/067947 WO2009080720A1 (en) | 2007-12-21 | 2008-12-18 | Mammalian expression vector |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010129545A true RU2010129545A (ru) | 2012-01-27 |
| RU2494147C2 RU2494147C2 (ru) | 2013-09-27 |
Family
ID=39522442
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010129545/10A RU2494147C2 (ru) | 2007-12-21 | 2008-12-18 | Вектор экспрессии млекопитающих |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20110045536A1 (ru) |
| EP (3) | EP2227546B1 (ru) |
| JP (2) | JP5701061B2 (ru) |
| KR (1) | KR101657717B1 (ru) |
| CN (1) | CN101903523B (ru) |
| AU (1) | AU2008339985C1 (ru) |
| BR (1) | BRPI0821311B1 (ru) |
| CA (1) | CA2709894C (ru) |
| DK (1) | DK3075858T3 (ru) |
| ES (2) | ES2784926T3 (ru) |
| IL (1) | IL206170A (ru) |
| LT (1) | LT3075858T (ru) |
| PL (2) | PL2227546T3 (ru) |
| PT (2) | PT2227546T (ru) |
| RU (1) | RU2494147C2 (ru) |
| WO (1) | WO2009080720A1 (ru) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101993892A (zh) * | 2009-08-31 | 2011-03-30 | 长沙赢润生物技术有限公司 | 肿瘤细胞中靶向性表达shRNA的真核表达载体 |
| KR101868139B1 (ko) * | 2010-11-30 | 2018-06-15 | 주식회사 엘지화학 | 새로운 융합 프로모터 및 이를 포함하는 재조합 벡터 |
| US20140227708A1 (en) * | 2011-09-16 | 2014-08-14 | Oregon Health & Science University | Methods and kits used in identifying microrna targets |
| EP2771694A4 (en) | 2011-10-26 | 2015-08-05 | Novartis Tiergesundheit Ag | MONOCLONAL ANTIBODIES AND METHOD FOR THEIR USE |
| KR102080356B1 (ko) * | 2011-12-22 | 2020-02-24 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 발현 벡터 구성, 신규한 생산 세포 생성 방법 및 폴리펩티드의 재조합 생산을 위한 그의 용도 |
| US9663797B2 (en) * | 2012-11-20 | 2017-05-30 | Novartis Ag | Optimized expression cassette for expressing a polypeptide with high yield |
| LT2935320T (lt) | 2012-12-18 | 2019-11-11 | Novartis Ag | Stabilizuoti insulino tipo augimo faktoriaus polipeptidai |
| CN104884467A (zh) | 2012-12-18 | 2015-09-02 | 诺华股份有限公司 | 在遗传修饰的哺乳动物细胞中生产治疗性蛋白质 |
| WO2014141037A1 (en) | 2013-03-11 | 2014-09-18 | Novartis Ag | Method of screening cell clones |
| LT3027646T (lt) | 2013-07-31 | 2018-09-25 | Novartis Ag | Nauji atrankos vektoriai ir eukariotinių ląstelių šeimininkių atrankos būdai |
| WO2016151599A1 (en) | 2015-03-25 | 2016-09-29 | Biogenomics Limited | A bigenic mammalian expression vector |
| UY37758A (es) | 2017-06-12 | 2019-01-31 | Novartis Ag | Método de fabricación de anticuerpos biespecíficos, anticuerpos biespecíficos y uso terapéutico de dichos anticuerpos |
| CA3152236A1 (en) | 2019-09-18 | 2021-03-25 | Novartis Ag | Nkg2d fusion proteins and uses thereof |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5017478A (en) * | 1987-07-16 | 1991-05-21 | Berlex Laboratories, Inc. | Transfected cells containing plasmids having genes oriented in opposing directions and methods of using |
| AU4741090A (en) | 1988-12-08 | 1990-06-26 | Damon Biotech Inc. | Expression induction method employing mutant dhfr gene |
| NZ293461A (en) | 1994-09-22 | 1998-04-27 | Merck & Co Inc | Dna encoding human papillomavirus type 6a, compounds derived therefrom |
| US20060246540A1 (en) * | 1997-08-26 | 2006-11-02 | Ashkenazi Avi J | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
| ES2257303T3 (es) * | 1999-07-12 | 2006-08-01 | Genentech, Inc. | Vectores de expresion y procedimientos. |
| EP2278022A3 (en) * | 1999-11-01 | 2011-05-18 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Expression vectors, transfection systems, and method of use thereof |
| EP1293564A4 (en) | 2000-06-08 | 2005-08-17 | Mitsubishi Pharma Corp | EXPRESSION VECTOR FOR SCREENING CELLS HIGH EXPRESSION OF RECOMBINANT PROTEINS, TRANSFORMING HIGH EXPRESSION OF A RECOMBINANT PROTEIN AND USE THEREOF |
| US7384744B2 (en) * | 2002-11-29 | 2008-06-10 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co., Kg | Expression vector, methods for the production of heterologous gene products and for the selection of recombinant cells producing high levels of such products |
| DE10256083A1 (de) * | 2002-11-29 | 2004-08-12 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg | Expressionsvektor, Verfahren zur Herstellung von heterologen Genprodukten und Selektionsverfahren für hochproduzierende rekombinante Zellen |
| JP4751326B2 (ja) * | 2003-09-04 | 2011-08-17 | メダレックス インコーポレイテッド | 発現ベクター |
| JP4527010B2 (ja) * | 2004-07-20 | 2010-08-18 | 日本ブレーキ工業株式会社 | ブレーキシューの製造方法 |
| US20060024650A1 (en) | 2004-07-30 | 2006-02-02 | Epstein Gerald N | Kinesiology-based self-improvement process |
-
2008
- 2008-12-18 CA CA2709894A patent/CA2709894C/en active Active
- 2008-12-18 PL PL08865499.1T patent/PL2227546T3/pl unknown
- 2008-12-18 DK DK16168059.0T patent/DK3075858T3/da active
- 2008-12-18 ES ES16168059T patent/ES2784926T3/es active Active
- 2008-12-18 WO PCT/EP2008/067947 patent/WO2009080720A1/en active Application Filing
- 2008-12-18 JP JP2010538737A patent/JP5701061B2/ja active Active
- 2008-12-18 EP EP08865499.1A patent/EP2227546B1/en active Active
- 2008-12-18 PT PT88654991T patent/PT2227546T/pt unknown
- 2008-12-18 EP EP16168059.0A patent/EP3075858B1/en active Active
- 2008-12-18 PL PL16168059T patent/PL3075858T3/pl unknown
- 2008-12-18 LT LTEP16168059.0T patent/LT3075858T/lt unknown
- 2008-12-18 CN CN200880122117.XA patent/CN101903523B/zh active Active
- 2008-12-18 EP EP20153831.1A patent/EP3680337A1/en not_active Withdrawn
- 2008-12-18 ES ES08865499.1T patent/ES2585502T3/es active Active
- 2008-12-18 BR BRPI0821311A patent/BRPI0821311B1/pt active IP Right Grant
- 2008-12-18 PT PT161680590T patent/PT3075858T/pt unknown
- 2008-12-18 AU AU2008339985A patent/AU2008339985C1/en active Active
- 2008-12-18 RU RU2010129545/10A patent/RU2494147C2/ru active
- 2008-12-18 US US12/808,798 patent/US20110045536A1/en not_active Abandoned
- 2008-12-18 KR KR1020107016149A patent/KR101657717B1/ko active IP Right Grant
-
2010
- 2010-06-03 IL IL206170A patent/IL206170A/en active IP Right Grant
-
2012
- 2012-05-29 US US13/482,117 patent/US9422574B2/en not_active Ceased
-
2014
- 2014-11-28 JP JP2014240901A patent/JP2015091238A/ja active Pending
-
2018
- 2018-08-23 US US16/110,010 patent/USRE49347E1/en active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2010129545A (ru) | Вектор экспрессии млекопитающих | |
| US7129062B2 (en) | Matrix attachment regions and methods for use thereof | |
| CA2724908C (en) | Hgh polyadenylation signal | |
| US10280436B2 (en) | Site-specific integration | |
| Balasubramanian et al. | Rapid recombinant protein production from piggyBac transposon-mediated stable CHO cell pools | |
| US9708636B2 (en) | Artificial introns | |
| Bleckmann et al. | Genomic analysis and isolation of RNA polymerase II dependent promoters from Spodoptera frugiperda | |
| CN114026224B (zh) | 具有sirt-1基因敲除的哺乳动物细胞系 | |
| US9243053B2 (en) | Heterologous intron within an immunoglobulin domain | |
| CN104694571A (zh) | 哺乳动物表达载体 | |
| CA2744976C (en) | Artificial chromosome vector | |
| US20140248665A1 (en) | Novel intron sequences | |
| EP2938726B1 (en) | Heterologous intron within a signal peptide | |
| EP1862801A1 (en) | Reporter gene assay method | |
| KR102256749B1 (ko) | 고발현 세포주 확립방법 | |
| JP7264353B2 (ja) | 新規ベクターおよびその利用 | |
| EP4079858A1 (en) | Expression cassette including intron for high expression of protein of interest and use thereof | |
| US7498150B2 (en) | Materials and methods to increase peptide chain expression | |
| CN106255757B (zh) | 生产多肽的方法 | |
| TR2022009209A2 (tr) | Memeli̇ hayvan hücreleri̇nde rekombi̇nant protei̇n üreti̇mi̇ i̇çi̇n plazmi̇d | |
| ES2708830T3 (es) | Procedimiento para la selección de una célula productora a largo plazo usando acilación de histonas como marcadores | |
| US20100143896A1 (en) | Sequence capable of enhancing the expression of gene under moderately low temperature |