RU2008124816A - Варианты глюкоамилазы - Google Patents

Abstract

1. Вариант родительской глюкоамилазы, полученной из рода Talaromyces, который имеет сниженное получение изомальтозы и содержит изменение в одном из следующих участков: участок 248-255, например, в одном или нескольких из положений 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254 и/или 255, участок 309-318, например, в одном или нескольких из положений 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317 и/или 318, и/или участок 409-415, например, в одном или нескольких из положений 409, 410, 411, 412, 413, 414 и/или 415, где ! (а) изменение представляет собой независимо ! (i) инсерцию аминокислоты, следующей после аминокислоты, которая занимает положение, ! (ii) делецию аминокислоты, которая занимает положение, или ! (iii) замещение аминокислоты, которая занимает положение, другой аминокислотой, ! (b) вариант имеет активность глюкоамилазы, и ! (с) каждый участок или положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или участку или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1. ! 2. Вариант по п.1, который содержит изменение в одном или нескольких из следующих положений: 252, 312, 314, 315, 412, где каждое положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1. ! 3. Вариант по п.2, который содержит одно или несколько из следующих изменений: замещение на A, F, G или V в положени

Claims (25)

1. Вариант родительской глюкоамилазы, полученной из рода Talaromyces, который имеет сниженное получение изомальтозы и содержит изменение в одном из следующих участков: участок 248-255, например, в одном или нескольких из положений 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254 и/или 255, участок 309-318, например, в одном или нескольких из положений 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317 и/или 318, и/или участок 409-415, например, в одном или нескольких из положений 409, 410, 411, 412, 413, 414 и/или 415, где

(а) изменение представляет собой независимо

(i) инсерцию аминокислоты, следующей после аминокислоты, которая занимает положение,

(ii) делецию аминокислоты, которая занимает положение, или

(iii) замещение аминокислоты, которая занимает положение, другой аминокислотой,

(b) вариант имеет активность глюкоамилазы, и

(с) каждый участок или положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или участку или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

2. Вариант по п.1, который содержит изменение в одном или нескольких из следующих положений: 252, 312, 314, 315, 412, где каждое положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

3. Вариант по п.2, который содержит одно или несколько из следующих изменений: замещение на A, F, G или V в положении 252; замещение на S в положении 312; замещение на E, F, N, R, T, W или Y в положении 314; замещение на A, D, F, H, K, L, N, Q, R, S, T или Y в положении 315; замещение на D в положении 412, или инсерцию аминокислотного остатка I между положениями 314 и 315, где каждое положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

4. Вариант по п.3, который содержит одно или несколько из следующих замещений: V312S, Q314E, Q314F, Q314N, Q314R, Q314T, Q314W, Q314Y, G315A, G315D, G315F, G315H, G315K, G315L, G315N, G315Q, G315R, G315S, G315T, G315Y, L252A, L252F, L252G, L252V, L412D, или инсерцию аминокислотного остатка I между положениями 314 и 315 (Q314QI), где каждое положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

5. Вариант по п.4, который содержит замещение G315F, где положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

6. Вариант по п.4, который содержит замещение G315Y, где положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

7. Вариант по п.4, который содержит замещение L252A, где положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

8. Вариант по п.4, который содержит одну или несколько из следующих комбинаций замещений: 314F + 315N, 314W + 315N, 314Y + 315N, 314L + 315A, 314N + 315R, 314R + 315D, 315R + 463T, 315R + 556E, 315L + 529N, где каждое положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

9. Вариант по п.4, который содержит одну или несколько из следующих комбинаций замещений: Q314F+G315N, Q314W+G315N, Q314Y+G315N, Q314L+G315A, Q314N+G315R, Q314R+G315D, G315R+A463T, G315R+K556E, G315L+D529N, где каждое положение соответствует положению аминокислотной последовательности родительской глюкоамилазы, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или положению в гомологичной глюкоамилазе, которая имеет степень идентичности, по меньшей мере, 50% с аминокислотными последовательностями, показанными в SEQ ID NO: 1.

10. Вариант по п.4, в котором родительская глюкоамилаза имеет аминокислотную последовательность, которая имеет степень идентичности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, по меньшей мере, 50%, предпочтительно, по меньшей мере, 60%, более предпочтительно, по меньшей мере, 70%, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 80%, даже более предпочтительно, по меньшей мере, 90%, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 95% и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 98%.

11. Вариант по п.4, в котором родительская глюкоамилаза получена из Talaromyces emersonii.

12. ДНК-конструкция, содержащая ДНК-последовательность, кодирующую вариант глюкоамилазы по любому из пп.1-11.

13. Рекомбинантный вектор экспрессии, который несет ДНК-конструкцию по п.12.

14. Клетка, которая трансформирована ДНК-конструкцией по п.12 или вектором по п.13.

15. Клетка по п.14, которая представляет собой микроорганизм, в частности бактерию или грибок.

16. Клетка по п.15, которая представляет собой штамм из вида Talaromyces.

17. Клетка по п.16, которая представляет собой штамм из Talaromyces emersonii.

18. Способ конверсии крахмала или частично гидролизованного крахмала в сироп, содержащий декстрозу, где указанный способ включает осахаривание гидролизата крахмала в присутствии варианта глюкоамилазы по любому из пп.1-11.

19. Способ по п.18, в котором дозировка варианта глюкоамилазы находится в интервале от 0,05 до 0,5 AGU/г сухого вещества.

20. Способ по любому из пп.18 или 19, включающий осахаривание гидролизата крахмала, предпочтительно гидролизата крахмала, по меньшей мере, 30 мас.% сухого вещества.

21. Применение варианта глюкоамилазы по любому из пп.1-11 в способе конверсии крахмала, предпочтительно в непрерывном способе конверсии крахмала.

22. Применение варианта глюкоамилазы по любому из пп.1-11 в способе получения олигосахаридов, мальтодекстринов или сиропов глюкозы.

23. Применение варианта глюкоамилазы по любому из пп.1-11 в способе получения высокофруктозного кукурузного сиропа.

24. Применение варианта глюкоамилазы по любому из пп.1-11 в способе получения алкогольного напитка, топливного или питьевого этанола.

25. Применение варианта глюкоамилазы по любому из пп.1-11 в способе ферментации для получения органического соединения.