RU2005122441A

RU2005122441A - Способ и устройство для определения микроорганизмов

Info

Publication number: RU2005122441A
Application number: RU2005122441/13A
Authority: RU
Inventors: Тило ВАЙСС (DE); Тило Вайсс; Штефан ШТУМПЕ (DE); Штефан ШТУМПЕ; Фридхельм ЗИПМАНН (DE); Фридхельм ЗИПМАНН; Андреас ТЮНХЕН (DE); Андреас ТЮНХЕН; Франк ВИНХАУЗЕН (DE); Франк ВИНХАУЗЕН; Андреас КАТЕРКАМП (DE); Андреас КАТЕРКАМП; Михаель ХАЙНЦЕЛЬ (DE); Михаель ХАЙНЦЕЛЬ; Роланд БРЕВЕС (DE); Роланд БРЕВЕС; Мирко ВАЙДЕ (DE); Мирко ВАЙДЕ
Original assignee: Хенкель Кгаа (De); Хенкель КГАА
Priority date: 2002-12-17
Filing date: 2003-12-02
Publication date: 2006-02-20
Also published as: JP2006509514A; CN1726286A; DE10259302A1; AU2003292168A1; US20060024710A1; EP1573051A1; WO2004055203A1

Claims

1. Способ количественного и/или качественного определения микроорганизмов в образце, причем способ включает стадию (а) подготовки образца и стадию (b) детектирования и/или оценки, причем на стадии (а) выполняют мечение, по меньшей мере, части присутствующих в образце микроорганизмов посредством, по меньшей мере, одного флуоресцентного маркера, а на стадии (b) выполняют количественное и/или качественное детектирование и/или оценку методом флуоресцентной отражательной фотометрии, отличающийся тем, что меченые флуоресцентным маркером микроорганизмы при выполняемой на стадии (а) подготовке образца наносят на мембранный фильтр при помощи приспособления для продавливания.

2. Способ по. п.1, отличающийся тем, что на основании измеренных методом флуоресцентной отражательной фотометрии параметров может быть определено количество присутствующих в образце микроорганизмов, в частности, при помощи надлежащей калибровки.

3. Способ по. п.1, отличающийся тем, что меченые флуоресцентым маркером микроорганизмы при выполняемой на стадии (а) подготовке образца наносят на кремниевое микросито, выполненное таким образом, что оно удерживает микроорганизмы и/или является непроницаемым для микроорганизмов.

4. Способ по. п.1, отличающийся тем, что меченые флуоресцентым маркером микроорганизмы при выполняемой на стадии (а) подготовке образца наносят, в частности, на пористый мембранный фильтр, в частности, на поликарбонатный мембранный фильтр, выполненный таким образом, что он удерживает микроорганизмы и/или является непроницаемым для микроорганизмов.

5. Способ по п.3, отличающийся тем, что размер пор мембранного фильтра или кремниевого микросита выбран таким образом, что он меньше размера присутствующих в образце микроорганизмов.

6. Способ по п.3, отличающийся тем, что детектирование и/или оценку методом флуоресцентной отражательной фотометрии выполняют непосредственно на мебранном фильтре или микросите, в частности, без дополнительной обработки, подготовки или переноса образца.

7. Способ по п.5, отличающийся тем, что детектирование и/или оценку методом флуоресцентной отражательной фотометрии выполняют непосредственно на мебранном фильтре или микросите, в частности, без дополнительной обработки, подготовки или переноса образца.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что флуоресцентный маркер выбирают таким образом, что он способен проходить через мембранный фильтр, используемый при выполняемой на стадии (а) подготовке образца, или через используемое кремниевое микросито.

9. Способ по п.1, отличающийся тем, что стадия (а) подготовки образца включает также инактивацию и/или удаление, при необходимости, присутствующих в образце веществ или компонентов, угнетающих и/или умерщвляющих микроорганизмы, в частности, консервирующих средств или поверхностно-активных веществ, причем инактивация и/или удаление, при необходимости, присутствующих в образце веществ или компонентов, угнетающих и/или умерщвляющих микроорганизмы, может быть выполнена, в частности, путем осуществления контакта образца с надлежащим инактивирующим и/или кондиционирующим раствором.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что флуоресцентный маркер выбирают таким образом, что он вступает во взаимодействие с микроорганизмами, в частности, присоединяется к микроорганизмам, в частности, к их клеточной стенке (оболочке) и/или нуклеиновой кислоте, и/или поглощается микроорганизмами, в частности, метаболизирирует и/или претерпевает ферментативное превращение.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентного маркера используют неспецифичный по отношению к микроорганизмам флуоресцентный маркер, специфичный по отношению к микроорганизмам флуоресцентный маркер, смесь разных специфичных по отношению к микроорганизмам флуоресцентных маркеров, смесь неспецифичных по отношению к микроорганизмам флуоресцентных маркеров со специфичными по отношению к микроорганизмам флуоресцентными маркерами, смесь неспецифичных по отношению к микроорганизмам флуоресцентных маркеров, флуоресцентный маркер, вступающий во взаимодействие с живыми или мертвыми микроорганизмами, или смесь флуоресцентных маркеров, вступающих во взаимодействие с живыми микроорганизмами, с флуоресцентными маркерами, вступающими во взаимодействие с мертвыми микроорганизмами.

12. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентного маркера используют флуоресцентный маркер, обычно используемый для мечения микроорганизмов в эпифлуоресцентной микроскопии, методе прямой эпифлуоресцентной фильтрации (DEFT) или флуоресцентном методе мембранной фильтрации микроколоний (MMCF).

13. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентного маркера используют флуоресцентный краситель или полупродукт для такого флуоресцентного красителя, из которого путем взаимодействия с микроорганизмами, в частности, путем метаболизации и/или ферментативного превращения формируется флуоресцентный краситель.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что флуоресцентный краситель выбирают из группы, включающей 3,6-бис[диметиламино]акридин (акридиновый оранжевый), 4',6-диамидо-2-фенилиндол, бромид 3,8-диамино-5-этил-6-фенилфенантридиния (бромид этидия), дийодид 3,8-диамино-5-[3-(диэтилметиламмонио)пропил]-6-фенилфенантри-диния (йодид пропидия), родамины, в частности, родамин В и сульфородамин В, а также флуоресцеинизотиоцианат.

15. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентного маркера используют, в частности, специфичный по отношению к микроорганизмам зонд нуклеиновой кислоты, в свою очередь меченый, в частности, флуоресцирующей группой или флуоресцирующей молекулой, причем флуоресцирующая группа или флуоресцирующая молекула может быть, в частности, соединена с зондом нуклеиновой кислоты ковалентной связью или иным образом, и/или причем зондом нуклеиновой кислоты является, в частности, флуоресцентно меченый олигонуклеотид или полинуклеотид, и/или причем флуоресцентно меченый зонд является, в частности, зондом ДНК или зондом РНК.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что в качестве зонда нуклеиновой кислоты используют зонд нуклеиновой кислоты, обычно используемый для мечения в методе флуоресцентной гибридизации in situ (FISH).

17. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентного маркера используют, в частности, специфичное по отношению к микроорганизмам антитело, в свою очередь меченое, в частности, флуоресцирующей группой или флуоресцирующей молекулой, причем флуоресцирующая группа или флуоресцирующая молекула может быть, в частности, соединена с антителом ковалентной связью или иным образом.

18. Способ по п.1, отличающийся тем, что предел обнаружения микроорганизмов составляет 100 или менее, предпочтительно 10 или менее образующих колонии единиц в миллилитре образца.

19. Способ по п.1, отличающийся тем, что под подлежащими определению микроорганизмами подразумевают болезнетворные микробы любых видов, в частности, микроорганизмы любых видов, в частности, такие одноклеточные микроорганизмы, как бактерии и грибки (например, дрожжи или плесневые грибки).

20. Способ по п.1, отличающийся тем, что под образцом подразумевают пищевые продукты, содержащие поверхностно-активные вещества продукты, такие как моющие и чистящие средства, средства для обработки поверхностей, дисперсные продукты, косметические средства, средства гигиены и ухода за телом, фармацевтические средства, клеящие вещества, смазочно-охлаждающие жидкости, лаки и средства для коагуляции (лаков), сырье или исходные материалы для указанных продуктов.

21. Способ по п.1, отличающийся тем, что под образцом подразумевают пригодные для фильтрования, в частности, жидкие и/или способные к течению продукты.

22. Способ по п.1, отличающийся тем, что его осуществляют автоматизирование.

23. Способ по одному из пп.1-22, отличающийся тем, что его осуществляют в рамках производственного контроля и/или контроля качества.

24. Устройство, предназначенное для количественного и/или качественного определения микроорганизмов в образце способом, включающим подготовку образца и последующее детектирование и/или оценку, причем посредством устройства можно выполнять осуществляемое в процессе подготовки образца мечение, по меньшей мере, части присутствующих в образце микроорганизмов, по меньшей мере, одним флуоресцентным маркером и можно выполнять детектирование и/или оценку с использованием флуоресцентного маркера, в частности, устройство, предназначенное для осуществления способа по одному из предыдущих пунктов, отличающееся резервуаром (1) для приема образцов, причем резервуар (1) для приема образцов снабжен приспособлением для продавливания застаивающейся над мембранным фильтром (9) или кремниевым ситом жидкой фазы образца, поглощающей флуоресцентный маркер жидкой среды и/или промывочной жидкости, расположенным в выпускном отверстии резервуара (1) для приема образцов, в частности, в его дне, кремниевым микроситом или мембранным фильтром (9), которые выполнены таким образом, что они удерживают подлежащие детектированию микроорганизмы и/или непроницаемы для подлежащих детектированию микроорганизмов, системой детектирования (10), предназначенной для выполнения измерения методом флуоресцентной отражательной фотометрии и устанавливаемой в определенном положении по отношению к снабженному кремниевым микроситом или мембранным фильтром (9) резервуару (1) для приема образцов или предпочтительно к извлеченному из резервуара (1) кремниевому микроситу или мембранному фильтру (9) с целью детектирования и/или оценки.

25. Устройство по п.24, отличающееся тем, что управляющее и/или вычислительное устройство (11) с компьютерным управлением присутствует как часть системы детектирования (10) или предусмотрено для управления системой детектирования (10).

26. Устройство по 24, отличающееся тем, что мембранный фильтр (9) является имеющим поры мембранным фильтром, в частности, поликарбонатным мембранным фильтром.

27. Устройство по п.24, отличающееся тем, что размер пор мембранного фильтра (9) или кремниевого микросита меньше размера присутствующих в образце и/или ожидаемых микроорганизмов, подлежащих определению.

28. Устройство по п.24, отличающееся тем, что расположенный в резервуаре (1) для приема образцов мембранный фильтр (9) или кремниевое сито имеют зону (12), в частности, краевую зону, не занимаемую или практически не занимаемую микроорганизмами при подготовке образца, которая при выполнении детектирования и/или оценки служит сравнительной поверхностью.

29. Устройство по п.24, отличающееся тем, что мембранный фильтр (9) или кремниевое микросито имеет эффективный для фильтрации диаметр от примерно 5 до примерно 25 мм, в частности, от примерно 6 до примерно 12 мм, предпочтительно от примерно 8 до примерно 10 мм.

30. Устройство по одному из пп.24-29, отличающееся тем, что оно снабжено термостатирующим приспособлением (13), предназначенным для термостатирования резервуара (1) для приема образцов.

31. Применение устройства по одному из пп.24-30 для количественного и/или качественного определения микроорганизмов в пищевых продуктах, содержащих поверхностно-активные вещества продуктах, таких как моющие и чистящие средства, средства для обработки поверхностей, дисперсные продукты, косметические средства, средства личной гигиены и ухода за телом, фармацевтические средства, клеящие вещества, смазочно-охлаждающие жидкости, лаки и средства для коагуляции лаков, в сырье и исходных материалах для указанных продуктов, а также в пригодных для фильтрования, в частности, жидких и/или способных к течению продуктах, в частности, средах, растворах, жидкостях, матрицах и подобных продуктах.

32. Применение устройства по одному из пп.24-30 для предпочтительно автоматизированного производственного контроля и/или контроля качества.