RU2005101111A

RU2005101111A - Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae

Info

Publication number: RU2005101111A
Application number: RU2005101111/13A
Authority: RU
Inventors: Леонид Романович Птицын (RU); Леонид Романович Птицын; Ирина Борисовна Альтман (RU); Ирина Борисовна Альтман; рова Вероника Александровна Котл (RU); Вероника Александровна КОТЛЯРОВА; Юрий Иванович Козлов (RU); Юрий Иванович Козлов
Original assignee: Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU); Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ)
Priority date: 2005-01-19
Filing date: 2005-01-19
Publication date: 2006-06-27
Also published as: ATE415483T1; EP1853714B1; WO2006078051A1; EP1853714A1; DE602006003873D1

Claims

1. Бактерия-продуцент L-аминокислоты, принадлежащая к семейству Enterobacteriaceae, модифицированная таким образом, что активность N-ацетилглюкозоаминопермеазы в указанной бактерии повышена.

2. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что активность N-ацетилглюкозоаминопермеазы повышена за счет усиления экспрессии гена, кодирующего N-ацетилглюкозоаминопермеазу.

3. Бактерия по п.2, отличающаяся тем, что указнная активность N-ацетилглюкозоаминопермеазы повышена за счет модификации последовательности, контролирующей экспрессию гена, кодирующего N-ацетилглюкозоаминопермеазу или за счет увеличения количества копий гена, кодирующего N-ацетилглюкозоаминопермеазу.

4. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицированная таким образом, что активность глюкокиназы в данной бактерии повышена.

5. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицированная таким образом, что активность изомеразы ксилозы в данной бактерии повышена.

6. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия выбрана из группы, состоящей из родов Escherichia, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Pantoea, Providencia, Salmonella, Serratia, Shigella и Morganella.

7. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанный ген кодирует N-ацетилглюкозоаминопермеазу, выбранную из группы, состоящей из

(A) белка, включающего аминокислотную последовательность, приведенную в Списке последовательностей под номером 2 (SEQ ID NO: 2); и

(B) вариант белка с аминокислотной последовательностью, представленной в Списке последовательностей под номером 2 SEQ ID NO: 2, и который обладает активностью N-ацетилглюкозоаминопермеазы.

8. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанный ген, кодирующий N-ацетилглюкозоаминопермеазу, включает в себя ДНК, выбранную из группы, состоящей из

(а) ДНК, которая включает в себя нуклеотидную последовательность с 1 по 1947 нуклеотид, представленной в Списке последовательностей под номером 1 (SEQ ID NO: 1); и

(b) ДНК, которая гибридизуется с нуклеотидной последовательностью с 1 по 1947 нуклеотид, представленной в Списке последовательностей под номером 1 (SEQ ID NO: 1), или с зондом, который может быть синтезирован на основе указанной нуклеотидной последовательности в жестких условиях, и кодирует белок, обладающий активностью N-ацетилглюкозоаминопермеазы.

9. Бактерия по п.8, отличающаяся тем, что указанные жесткие условия включают в себя отмывку при 60°С и концентрации солей 1 × SSC и 0.1% SDS в течение 15 минут.

10. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент L-треонина.

11. Бактерия по п.10, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что такая бактерия обладает усиленной экспрессией одного или нескольких генов, выбранных из группы, состоящей из мутантного гена thrA, кодирующего аспартокиназа-гомосериндегидрогеназу I, устойчивую к ингибированию треонином по типу обратной связи; гена thrB, кодирующего гомосеринкиназу; гена thrC, кодирующего треонинсинтазу. гена rhtA, предположительно кодирующего трансмембранный белок. гена asd, кодирующего аспартат-β-семиальдегиддегидрогеназу; и гена aspC, кодирующего аспартатаминотрансферазу (аспартаттрансаминазу).

12. Бактерия по п.11, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что такая бактерия обладает усиленной экспрессией указанного мутантного гена thrA, указанного гена thrB, указанного гена thrC и указанного гена rhtA.

13. Бактерия по п.11, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что ген crr, кодирующий регулятор катаболитной репрессии в такой бактерии инактивирован.

14. Бактерия по п.13, отличающаяся тем, что указанная бактерия далее модифицирована таким образом, что такая бактерия обладает усиленной экспрессией указанного мутантного гена thrA, указанного гена thrB, указанного гена thrC и указанного гена rhtA.

15. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент L-лизина.

16. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент L-гистидина.

17. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент L-фенилаланина.

18. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент L-аргинина.

19. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент L-триптофана.

20. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанной бактерией является бактерия - продуцент L-глутаминовой кислоты.

21. Способ получения L-аминокислоты, включающий в себя выращивание бактерии по п.1 в питательной среде, вызывающее накопление указанной L-аминокислоты в культуральной жидкости, и выделение указанной L-аминокислоты из культуральной жидкости.

22. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-треонин.

23. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-лизин.

24. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-гистидин.

25. Способ по п.19, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является - L-фенилаланин.

26. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-аргинин.

27. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-триптофан.

28. Способ по п.21, отличающийся тем, что указанной L-аминокислотой является L-глутаминовая кислота.