RU2003128420A - Полипептиды, происходящие из триптофанил-трнк-синтетазы, и их применение для регуляции развития кровеносных сосудов - Google Patents

Claims (28)

1. Выделенный водорастворимый полипептид, который в основном состоит из последовательности аминокислотных остатков или ее фрагмента, ингибирующего развитие кровеносных сосудов;

причем указанный выделенный полипептид имеет размер не более примерно 45 килодальтон.

2. Выделенный полипептид по п.1, который представляет фрагмент, ингибирующий развитие кровеносных сосудов, способный подавлять образование новых сосудов в глазу.

3. Выделенный полипептид по п.1, который представляет фрагмент, ингибирующий развитие кровеносных сосудов, способный подавлять образование новых сосудов в глазу, и включает по крайней мере одну из характеристических последовательностей аминокислотных остатков HVGH (SEQ ID No.10) и KMSAS (SEQ ID No.11).

4. Выделенный полипептид по п.1, который представляет фрагмент, ингибирующий развитие кровеносных сосудов, способный подавлять образование новых сосудов в глазу, и включает характеристическую последовательность аминокислотных остатков HVGH (SEQ ID No.10).

5. Выделенный полипептид по п.1, который представляет фрагмент, ингибирующий развитие кровеносных сосудов, способный подавлять образование новых сосудов в глазу, и имеет размер менее примерно 43 килодальтон.

6. Выделенный полипептид, имеющий последовательность аминокислотных остатков SEQ ID No.7.

7. Выделенный полинуклеотид, имеющий нуклеотидную последовательность, которая по крайней мере на 95% идентична последовательности полинуклеотида, выбираемого из группы, состоящей из полинуклеотида SEQ ID No.6, полинуклеотида, который гибридизуется с SEQ ID No.6, полинуклеотида, кодирующего полипептид SEQ ID No.7, полинуклеотида, кодирующего полипептид SEQ ID No.12, полинуклеотида, кодирующего эпитоп полипептида SEQ ID No.7, и полинуклеотида, который гибридизуется с полинуклеотидом, кодирующим эпитоп полипептида SEQ ID No.7.

8. Рекомбинантный вектор, который содержит выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п.7.

9. Рекомбинантная клетка-хозяин, которая содержит вектор по п.8.

10. Рекомбинантная клетка-хозяин, которая экспрессирует полипептид по п.1.

11. Способ ингибирования образования новых сосудов в глазу пациента, который включает введение указанному пациенту необходимого для ингибирования образования новых сосудов в глазу количества водорастворимого полипептида, состоящего в основном из последовательности аминокислотных остатков или ее фрагмента, ингибирующего образование новых сосудов в глазу.

12. Способ по п.11, в котором указанное введение осуществляют ежедневно.

13. Способ по п.11, в котором указанное введение осуществляют один раз в неделю.

14. Способ по п.11, в котором указанное введение осуществляют один раз в месяц.

15. Способ по п.11, в котором указанное введение осуществляют один раз в три месяца.

16. Способ по п.11, в котором указанное введение осуществляют один раз в шесть месяцев.

17. Способ по п.11, в котором пациенту вводят суточную дозу полипептида, составляющую от около 20 до около 100 микрограммов.

18. Способ по п.11, в котором пациенту вводят трехмесячную дозу полипептида, составляющую от около 2 до около 9 миллиграммов.

19. Способ по п.11, в котором осуществляют введение в стекловидное тело.

20. Способ по п.11, в котором осуществляют введение внутрь глаза.

21. Способ по п.11, в котором введение осуществляют с помощью устройства пролонгированной доставки.

22. Способ по п.11, в котором введение осуществляют с помощью генотерапии.

23. Способ по п.11, в котором введение осуществляют с помощью глазной доставки, основанной на клетках.

24. Инъецируемая ангиостатическая композиция, которая содержит полипептид, состоящий в основном из последовательности аминокислотных остатков или ее фрагмента, ингибирующего развитие новых сосудов, и фармакологически приемлемый водный наполнитель, причем указанная композиция содержит полипептид в концентрации, равной по крайней мере 0,1 миллиграмма на миллилитр водного наполнителя.

25. Ангиостатическая композиция по п.24, в которой полипептид имеет последовательность аминокислотных остатков SEQ ID No.7 или SEQ ID No.12 и присутствует в концентрации от около 0,1 до около 0,5 миллиграмма на миллилитр водного наполнителя.

26. Способ анализа ингибирующей развитие кровеносных сосудов активности композиции, который включает

а) приобретение новорожденных мышей в возрасте менее приблизительно 7 дней после рождения;

b) получение раствора анализируемой композиции;

с) инъецирование раствора в глаз мыши примерно на 7-ой или 8-ой день после рождения;

d) умерщвление мышей примерно на 12-й или 13-й день после рождения и удаление глаза, в который была сделана инъекция;

е) иссечение сетчатки из глаза, в который была сделана инъекция, и окрашивание сетчатки антителом кролика против коллагена IV мыши и флуоресцентномеченным антителом козы против IgG кролика для визуализации сосудистой сети сетчатки; и

f) сравнение под микроскопом степени васкуляризации в глубоком наружном сплетении сосудов сетчатки, подвергнутой воздействию анализируемой композиции, со степенью васкуляризации сетчатки в глазу мыши такого же возраста, окрашенной таким же образом, которая не была подвергнута воздействию указанной композиции;

при осуществлении которого существенно более низкий уровень васкуляризации сетчатки, подвергнутой воздействию композиции, свидетельствует об ингибировании развития кровеносных сосудов указанной композицией.

27. Набор для ингибирования образования новых сосудов в глазу, который включает полипептид по п.1 в количестве, достаточном для введения по крайней мере однократной дозы, упакованный в запаянную емкость, по крайней мере одну отдельно запечатанную иглу для шприца с калибром менее примерно 33, пригодную для инъекций в стекловидное тело, и по крайней мере один точно откалиброванный шприц.

28. Набор по п.27, который далее включает отпечатанную информационную листовку, описывающую композицию, способ ее введения и любые требуемые сведения о соблюдении мер безопасности и эффективности, которые необходимы в соответствии с государственными постановлениями.