RU2002112224A

RU2002112224A - Катионные виросомы DOSPER

Info

Publication number: RU2002112224A
Application number: RU2002112224/15A
Authority: RU
Inventors: Эрнст Рудольф ВЕЛТИ (CH); Эрнст Рудольф ВЕЛТИ; Райнхард ГЛЮК (CH); Райнхард Глюк; Петер КЛЯЙН (CH); Петер КЛЯЙН
Original assignee: Ника Хелт Продактс Лимитед (Li); Ника Хелт Продактс Лимитед
Priority date: 1999-10-08
Filing date: 2000-09-29
Publication date: 2004-01-10
Also published as: DK1217990T3; TR200200930T2; JP2003512306A; AU7785000A; ES2215073T3; AU778399B2; NO20021607L; CA2388053A1; SK4782002A3; CZ20021216A3; PL355231A1; PE20010703A1; EP1217990B1; DE60008006T2; DE60008006D1; NO20021607D0; CO5280052A1; KR20020063872A; EP1217990A1; HUP0202809A2

Claims

1. Липидная везикула, имеющая двухслойную мембрану с положительным результирующим зарядом при физиологическом значении рН, и где везикула дополнительно содержит, по крайней мере, один активный фузогенный пептид, являющийся гемагглютинином, отличным от вируса Сендай, который способствует встраиванию везикулы в клетки-мишени посредством рецептор-опосредованного фагоцитоза или эндоцитоза, характеризующаяся содержанием в мембране везикулы 1,3-диолеоилокси-2-(6-карбокси-спермил)-пропиламида (DOSPER) 5-30% от общей массы мембранных липидов, и соответственно 95-70% по массе других липидов, включающих фосфатидилхолин (PC) или его производное и необязательно фосфатидилэтаноламин (РЕ) и/или катионные липиды, отличные от DOSPER.

2. Везикула согласно п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит желаемый лекарственный препарат или вещество для доставки в клетки-мишени, указанный желаемый лекарственный препарат или вещество предпочтительно должны быть отрицательно заряжены и, в особенности, выбраны из группы, включающей краситель, индикаторное вещество, косметическое вещество, фармацевтически или биологически активное вещество и материал, содержащий нуклеиновые кислоты.

3. Везикула согласно п.2, отличающаяся тем, что желаемый лекарственный препарат или вещество представляет собой материал нуклеиновых кислот, выбранный из группы, включающей короткую цепь ДНК или РНК, дезоксирибонуклеотиды, олигодезоксирибонуклеотиды, олигодезоксирибонуклеотидселеноаты, олигодезоксирибонуклеотидфосфоротиоаты, олигодезоксирибонуклеотидфосфорамиды, олигодезоксирибонуклеотидметилфосфонаты, пептидные нуклеиновые кислоты, рибонуклеотиды, олигорибонуклеотиды, олигорибонуклеотидфосфоротиоаты, 2’-ОМе-олигорибонуклеотидфосфаты, 2’-ОМе-олигорибонуклеотидфосфоротиоаты, рибозимы, гены, плазмиды и векторы.

4. Везикула согласно любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что желаемый лекарственный препарат или вещество представляет собой материал нуклеиновых кислот и везикула содержит указанный материал нуклеиновых кислот в количестве, колеблющемся от 0,03 до 0,1, предпочтительно от 0,045 до 0,065 мкг нуклеиновой кислоты на 1 мкг DOSPER.

5. Везикула согласно любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что средний диаметр везикулы находится в пределах 120-180 нм.

6. Везикула согласно любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что дополнительно содержит дополнительно один клеточно-специфический маркер, связанный с мембраной везикулы.

7. Везикула согласно п.6, отличающаяся тем, что мембрана везикулы дополнительно содержит фосфатидилэтаноламин (РЕ) и бифункциональную сшивку, связанную по одному из своих мест связывания со свободной аминогруппой РЕ и по другому месту связывания с клеточно-специфическим маркером.

8. Везикула согласно п.6 или 7, отличающаяся тем, что клеточно-специфический маркер представляет собой биологически активный белок в отношении связывания рецептора клеток-мишеней, выбранный из группы, включающей антитело, фрагмент антитела, цитокин или фактор роста.

9. Везикула согласно любому из пп.1-8, отличающаяся тем, что гемагглютинин получают от вируса, выбранного из группы, включающей рабдовирус, вирус парагриппа тип III, вирус Semliki Forest и тогавирус.

10. Везикула согласно любому из пп.1-9, отличающаяся тем, что мембрана везикулы содержит DOSPER в концентрации 10-30%, предпочтительно 20-25% по массе от общего количества мембранных липидов.

11. Везикула согласно любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что мембрана везикулы содержит от общего количества мембранных липидов 25% по массе DOSPER и 75% по массе PC, предпочтительно диолеоилфосфатидилхолина (DOPC).

12. Композиция, включающая большое количество везикул, указанных в любом из пп.1-11, в комбинации с подходящим носителем для применения в косметических, фармацевтических или диагностических целях.

13. Способ получения липидной везикулы, определенной в п.1, характеризующийся наличием стадий:

а) приготовление буферного раствора, содержащего неионный детергент и дополнительно содержащего DOSPER и другие липиды и, по крайней мере, один активный фузогенный пептид, который является гемагглютинином вируса, отличного от вируса Сендай, и который позволяет везикулам встроиться в клетки-мишени посредством рецептор-опосредованного фагоцитоза или эндоцитоза; b) установление концентраций липидов - 5-30% DOSPER и, соответственно, 95-70% для указанных других липидов, включающих фосфатидилхолин (PC) или его производное и необязательно фосфатидилэтаноламин (РЕ) и/или катионные липиды, отличные от DOSPER, от общей массы мембранных липидов; и c) удаление детергента с помощью диализа или обработки раствора микробусами с получением указанных положительно заряженных липидных двухслойных везикул.

14. Способ согласно п.13, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию введения в везикулы некоторого количества желаемого лекарственного препарата или вещества для доставки в клетки-мишени, указанный желаемый лекарственный препарат или вещество предпочтительно должны быть отрицательно заряжены и, в особенности, выбраны из группы, включающей краситель, индикаторное вещество, косметическое вещество, фармацевтически или биологически активное вещество и материал, содержащий нуклеиновые кислоты.

15. Способ согласно п.13 или 14, отличающийся тем, что дополнительно включает стадию получения конъюгированных молекулярных комплексов, состоящих из фосфатидилэтаноламина (РЕ), бифункциональной сшивки и клеточно-специфического маркера таким образом, что бифункциональная сшивка связана по одному месту связывания со свободной аминогруппой РЕ и по другому месту связывания с тиольной группой клеточно-специфического маркера, удаление не связавшегося вещества и добавление молекулярных комплексов к раствору на стадии а).

16. Способ согласно п.14 или 15, отличающийся тем, что введение желаемого лекарственного препарата или вещества достигается добавлением к раствору на стадии (а) желаемого лекарственного препарата или вещества, после чего формируют на стадии (с) везикулы, содержащие желаемый лекарственный препарат или вещества.

17. Способ согласно п.14 или 15, отличающийся тем, что введение желаемого лекарственного препарата или вещества в везикулы достигается добавлением к везикулам, полученным на стадии (с), желаемого лекарственного препарата или вещества, обработки ультразвуком смеси для включения желаемого лекарственного препарата или вещества в везикулы и удалением не включившегося материала предпочтительно с помощью гель-фильтрации.

18. Способ согласно п.14 или 15, отличающийся тем, что введение желаемого лекарственного препарата или вещества в везикулы достигается добавлением к везикулам, полученным на стадии (с), положительно заряженных липидных комплексов или липосом, несущих желаемый лекарственный препарат или вещество, и обработкой ультразвуком полученной смеси для слияния липидных комплексов или липосом с указанными везикулами для включения лекарственного препарата или вещества в указанные везикулы.

19. Способ согласно п.18, отличающийся тем, что положительно заряженные липидные комплексы или липосомы содержат 50-100% по массе от общего количества липидных составляющих липида DOSPER.

20. Способ согласно любому из пп.15-19, отличающийся тем, что клеточно-специфический маркер выбирают из группы, включающей антитело, фрагмент антитела, цитокин или фактор роста.

21. Способ согласно любому из пп.14-20, отличающийся тем, что желаемый лекарственный препарат или вещество представляет собой материал, содержащий нуклеиновые кислоты, выбранный из группы, включающей короткую цепь ДНК или РНК, дезоксирибонуклеотиды, олигодезоксирибонуклеотиды, олигодезоксирибонуклеотидселеноаты, олигодезоксирибонуклеотидфосфоротиоаты, олигодезоксирибонуклеотидфосфорамидаты, олигодезоксирибонуклеотидметилфосфонаты, пептидные нуклеиновые кислоты, рибонуклеотиды, олигорибонуклеотиды, олигорибонуклеотидфосфоротиоаты, 2’-ОМе-олигорибонуклеотид-фосфаты, 2’-ОМе-олигорибонуклеотидфосфоротиоаты, рибозимы, гены, плазмиды и векторы.

22. Способ согласно п.21, отличающийся тем, что материал, содержащий нуклеиновые кислоты, включен в виросомы в концентрации от 0,03 до 0,1, предпочтительно от 0,045 до 0,065 мкг нуклеиновой кислоты на 1 мкг липида DOSPER.

23. Способ согласно любому из пп.13-22, отличающийся тем, что неионный детергент представляет собой октаэтиленгликоль монододециловый эфир (C₁₂E₈) или н-октил-олигооксиэтилен.

24. Способ согласно любому из пп.15-23, отличающийся тем, что сшивка представляет собой гетеробифункциональную органическую молекулу, содержащую, по крайней мере, одну малеинимидо и, по крайней мере, одну карбоксильную группу, и предпочтительно выбранную из группы, включающей производные бис-N-сукцинимидила и фотоактивируемые производные сукцинимидила.

25. Применение везикулы, охарактеризованной в п.1, для получения композиции, пригодной для косметических, диагностических или медицинских целей, в частности для доставки желаемого лекарственного препарата или вещества к покоящимся или пролиферирующим клеткам-мишеням.

26. Применение согласно п.25, отличающееся тем, что включает инкубирование указанных клеток-мишеней in vitro в присутствии указанных везикул и необязательно перенос инкубированных клеток-мишеней в организм in vivo.

27. Применение согласно пп.25-26, отличающееся тем, что клетки-мишени выбирают из группы, включающей малигнизированные клетки, лейкозные клетки и вирус-инфицированные клетки.

28. Применение согласно п.27, отличающееся тем, что метаболическая или пролиферативная активность указанных клеток-мишеней снижается под действием инкубации в присутствии указанных везикул.

29. Применение согласно любому из пп.25-28, отличающееся тем, что указанный желаемый лекарственный препарат или вещество представляет собой материал, содержащий нуклеиновые кислоты, который включает, по крайней мере, один антисмысловой олигонуклеотид, предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид, имеющий мишенью протоонкоген или онкоген, кодирующий мРНК.