RU1836103C - Противоопухолева композици - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине, а именно к фармакологии, Цель изобретени  - придание композиции противовирусного и иммуномодулирующего свойств. Противоопухолева  композици  содержит днРНК и а -интерферон или интерлейкин-2 в определенных соотношени х. Изобретение позвол ет улучшить лечение рака, вирусных инфекций и иммунорегул торных расстройств у человека.

Description

i Изобретение относитс  к медицине, а именно к фармакологии. j Целью изобретени   вл етс  придание (композиции противовирусного и иммуномо- дулирующего свойств. j Применение лимфокинов сдерживаетс  |ввиду узкой области терапевтического ис- )пользовани  и значительной токсичности, котора  наблюдаетс  при высоких дозах, (необходимых дл  того, чтобы вызвать реакцию в раковой опухоли человека или при вирусных заболевани х. Существует сине- ргетическа  св зь между лимфокинами и днРНК, котора  значительно снижает необходимые дозы лимфокинов, в частности 1L- 2, и одновременно расшир ет их область (терапевтического применени . Специаль- 1ные комбинации днРНК плюс 1L-2 при ле- чении раковых, вирусных и воспалительных (заболеваний существенно увеличивают процент выживани  животных, носителей |меланомы человека.

j Лимфокины получают при помощи тех- j нологии рекомбинантной ДНК. Термин 1L-2

относитс  к клеткам-убийцам, активированным рекомбинантными лимфокинами. Последние продуцируютс  в лабораторных услови х при воздействии на кров ные клетки человека (полученные лейкаферезом) при помощи 1L-2. Затем эти клетки снова ввод т пациенту, где АК-клетки при продолжении стимулировани  1L-2 будут убивать или регулировать опухоль пациента.

Наиболее чувствительными опухол ми  вл ютс  опухоли почек и меланома. при этом насто щее изобретение имеет широкую область применени  при других видах рака, вирусных расстройствах и различных воспалительных состо ни х.

Синергетическа  комбинаци  днРНК в качестве нетоксичного элемента и лимфоки- на в качестве токсичного элемента значительно снижает необходимые дозы лимфокинов, особенно 1L-2, до умеренных, нетоксичных доз и одновременно расшир ет область их терапевтического применени . Синергетическа  комбинаци ,в частности, интерферона или различных ин00

со о

о

00

со

терлейкинов, таких как 1L-2 в качестве компонента лимфокина,  вл етс  эффективным средством дл  регулировани  развити  опухоли человека, в частности рака легких и почек и злокачественной меланомы, или при других расстройствах.

Композици ,  вл юща с  предметом изобретени , представл ет собой днРНК и интерлейкин, примен емые одновременно или последовательно, концентрации которых привод т к увеличению содержани  как К-, так и АК-клеток в организме без увеличени  токсичности. Одновременно с использованием вышеупом нутой днРНК/лимфокин-терапией, насто щее изобретение включает также применение материала, который ингибирует активатор циклооксигеназы. В качестве примера насто щее изобретение включает одновременное применение индометаци- на, ингибитора простагландина, при этом высвобождаетс  управл ющий простаг- ландин и полученна  в результате К-клетка снижает реакцию регулировани .

Таким образом, естественные ингибиторы искомых К-клеток уничтожаютс  и попул ци  К-клеток соответственно увеличиваетс .

Количество компонентов комбинации варьируетс  в соответствии с клиническими наблюдени ми и результатами терапии. Общие количества днРНК дают пиковую концентрацию в крови 0,1-1000 мкг днРНК на 1 мл в системном кровообращении сразу же после применени , измеренную в точке, удаленной от места вливани . Если лимфо- кином  вл етс  интерферон, в предпочтительном варианте а- интерферон, то обеспечиваетс  количество 0,01-100000 ИРЕд на 1 мл жидкости организма пациента . Когда лимфокином  вл етс  1L-2, топримен емое количество лежит в области.от примерно 102 1L-2 единиц на 1 кг массы пациента до значени , приближающегос  к неприемлемым уровн м токсичности, которое , может быть очень высоким, например 106 единиц. Самые эффективные, с приемлемыми значени ми токсичной реакции, величины лежат в области примерно 103-104 1L-2 единиц на 1 кг массы тела.

Исследовани  на живых организмах и в лаборатории подтверждают, что днРНК (и плохо сочетаемые днРН К, в частности) обладают синергетическим фармакологическим действием в общем случае, с интерлейки- ном (в частности, с 1L-2), которые привод т к усиленной биологической реакции (противоопухолевой , противовирусной, иммуно- модул торной) с значительно более низкой токсичностью. Доза 1L-2, необходима , например , дл  противоопухолевой реакции, может быть уменьшена в 30-100 раз. Сине- ргетический фармакологический эффект подтверждаетс  как на уровне К (натураль- ных убийц)-чувствительных, так и на уровне К-стойких опухолевых или инфицированных вирусов клеток; К-стойкие опухолевые или инфицированные вирусом клетки вызываютс  также LAK (активированными лимфокином убийцами)-клетками. Эта активность совершенно однозначна с использованием в качестве маркеров моноклональных антител , в которых наблюдаетс  значительное увеличение одновременно как К-клеток (с

5 использованием моноклональногоантитела азиало-Gml), так и LAK-клеток (с использованием моноклонального антитела Thy 1, 2). Эти антитела  вл ютс  легкодоступными реагентами моноклональных антител, Одно0 временное использование соединений,которые уменьшают биологический уровень различных естественных антагонистов К- клеток (таких, как простагландин), еще более улучшает синергетический эффект.

5ДнРНК действуют как биохимические

катализаторы, увеличива  селективное уничтожение клеток опухолей примен емых 1L-2, продуцируемым LAK-клетками, без токсического действи . Этот факт установ0 лен при проведении исследований на культурах клеток. Линию клеток рака почек человека, обозначаемую через 7860, выращивают в стандартных чашках Петри и подвергают воздействию различных

5 потенциальных клеток-убийц, Периферийные клетки крови, полученные от здорового человека, именуют клетками-эффекторами (клетками-убийцами), а клетки рака почек - клетками-жертвами. Степень уничтожени 

0 последних (именуема  цитотоксичностью) измер ют различными методами, включа  использование сверхжиэнеспособных штаммов или радиоизотопов. Погибшие клетки опухоли высвобождают ранее погло5 щенные радиоактивные метаболические предшествующие соединени  и не могут далее поглощать внеклеточные питательные вещества. Например, амплиген, плохо сочетаема  днРНК, увеличивает активность че0 ловеческих LAK-клеток (полученных из крови здорового человека) значительно больше, чем с использованием только 1L-2. При концентрации 1L-2 в 1000 единиц на 1 мл уже достигаетс  максимальна  гибель

5 клеток, и невозможно ее подн ть еще больше при помощи днРНК. Катализатор, днРНК, в этой системе, если он используетс  один, плотностью инертен. Следовательно , воздействие на клетки опухоли не  вл етс  результатом простого арифметического

суммировани  2 маргинально активных агентов.

j В отдельных экспериментах также покарано , что днРНК (плохо сочетаема  днРНК) не заставл ет лимфоциты продуцировать 1L-2. ДнРНК может работать в системе лимфокин 1L-2 при помощи различных других средств, включа  изменение плотно- ст/1 некоторых антигенов на клетках-жертвах таким образом, что эффективность действи  клеток-убийц возрастает. Кроме того, днРНК и 1L-2 вместе могут измен ть эффекты после гибели клеток, например увеличение св зывани  клеток эффекторов- или увеличение продуцировани  раз- цитотоксичных факторов, или увеличение циркул ции клеток-убийц от одной клетки-жертвы опухоли к другой клетке- ж ртве опухоли.

Исследовани  на животных показывают более высокую выживаемость и уменьшение скорости распространени  опухоли, Опухоль меланомы человека, именуема  ВР, ввод т в подушечку лапки мышей не- сшльких групп. Мыши не могут отторгнуть ка чужеродную человеческую опухоль. У необработанных мышей клетки опухоли быстро размножаютс , распростран ютс  в легкие, и животные погибают. Обработан- нь м мышам ввод т дозы в 103-104 единиц/кг 1L-2 (примерно 2500 единиц на мь шь) и днРНК (500 мкг), что эквивалентно примерно 100-300 мг дл  пациента массой 60 кг. Оба биологических препарата дают дв;э раза в неделю.

Показано значительное снижение ме- та|:тазов в легких животных, обработанных дн-РНК плюс 1L-2, что очев идно  вл етс  неожиданным по сравнению с результатами , полученными при применении двух этих агентов отдельно. Такое уменьшение мета- CTJISOB в легких коррелирует с увеличением выживани . Аналогичные результаты пол- дл  интерферона (альфа) 2000 ЕИР (единиц интерферона), когда плохо сочетаема  днРНК (500 мкг дважды в неделю) в комбинации приводит и дальнейшему увеличению ингибировани  опухоли (р 0,02). Важным фактором  вл етс  то, что комбинации лимфокина (днРНК) не вызывали обнаруживаемой токсичности у животных.

Преимущества терапевтического синергизма на уровне человека.

j Терапи  с использованием комбинаций ,  вл ющейс  предметом изобретени , снижает токсичность лимфокинов в общем случае и 1L-2 в частности в клинической медицине. 1L-42  вл етс  эффективным при низких дозах толь ко 103-10 единиц на 1 кг, если его используют в комбинации с днРНК,

в то врем  как при использовании без днРНК он совсем неэффективен при таких безопасных дозах.

При вирусных расстройствах могут быть

получены аналогичные терапевтические преимущества. Например, терапевтические вмешательства, которые воздействуют только на иммунные дефициты (чувствительны к 1L-2) при HIV-инфекци х, оказываетс ,

 вл ютс  производ щими обратный эффект . Считаетс , что клетки-помощники Т4 с ТАС-рецепторами чувствительны к лимфо- кину 1L-2, но в жертвах вируса СПИД-11.-2 вызывают размножение клеток, которые  вл ютс  непосредственно у звимыми дл  HIV-инфекции, и в результате наблюдаетс  ухудшение состо ни  пациента. При помощи добавлени  днРНКи 1L-2 можно добитьс  расширени  и улучшени  спектра 1L-2 и,

потенциально, других лимфокинов, таких как интерферон и ТНФ, в качестве полезных противовирусных агентов.

Плохо сочетаема  двунитева  РНК  вл етс  известной формой макромолекул рной

РНК, в которой дестабилизаци  двойной спирали предотвращает спаривание оснований . Плохо сочетаема  днРНК  вл етс  хорошо известной благодар  ее свойствам индуцировани  интерферона, что указывает

на механизм, не св занный с самой индукцией интерферона.

Общим терапевтическим осуществлением плохо сочетаемой двунитевой РНК  вл етс  синтетическа  днРНК, образованна 

при помощи формировани  комплексов полирибонинозиновой и полирибоцитиди- ловой уридйловой кислоты, такой как r/nr/Cx, V или G/л, где х - принимает значение от 4 до 29, например r/n r(Ci2V)n (амплиген ). Основное терапевтическое преимущество плохо сочетаемых днРНК над другими формами натуральной и/или синтетической днРНК заключаетс  в их более низкой токсичности дл  животных и человека . Далее ранние комплексы днРНК способны возбуждать различные, св занные с интерфероном, эффекты, но токсичность таких соединений мешает какому-либо клиническому применению

при лечении рака или св занных с ним расстройств .

Под плохо сочетаемой днРНК подразумевают ту РНК, в которой водородна  св зь (св зывающа  основани ) между составл ющими нит ми  вл етс  относительно неповрежденной, т.е. прерываетс  в среднем меньше, чем на одну пару оснований на каждые 29 последовательных остатков оснований, Термин плохосочетаема 

днРНК необходимо понимать соответствующим образом.

ДнРНК может быть комплексом поли- инозината и полицитидилата, содержащим долю урациловых оснований или гуанидино- вых оснований, например, от 1 в 5 до 1 в 30 таких оснований (поли 1, поли С4-29 х V или G). Плохо сочетаемой днРНК может быть поли 1.поли С, V, в котором отношение С и V составл ет примерно 13 и 1, а коэффици- енты отложени  поли I и поли С, V оба меньше 9 и содержатс  внутри единиц друг от друга, т.е. в предпочтительном варианте от 6,5 примерно до 7,5.

ДнРНК может иметь общую формулу г/п (Ci2-isV)n. Другие подход щие примеры днРНК описаны ниже.

Плохо сочетаемые днРНК;, используемые в предпочтительном варианте реализа- ции насто щего изобретени , основаны на сополинуклеотидах, выбранных из поли (Сп, V)w поли(Сп, G), в которых п- целым числом от 4 до 29, и  вл ютс  плохосочетаемыми аналогами- комплексов полирибоинозино- вой и полирибоцитидиновой кислот, образованных при помощи модификации r/n rCn с целью присоединени  непарных оснований (урацила или гуанина) вдоль нити пол- ирибоцитидилата (гСп). В качестве альтернативы днРНК можно получить из поли (1). поли (С) днРНК при помощи модификации рибозиловой основы полири- боинозиновой кислоты (г/п), например, при помощи включени  2-0-метил рибо- зиловых остатков. Из этих плохо сочетаемых аналогов r/n rCn предпочтительными  вл ютс  те, которые имеют общую форму- луг/п.г(С12У)п.

или

Специальными примерами плохо сочетаемой днРНКдл  использовани  всоответ- ствии с насто щим изобретением  вл ютс :

поли() -поли(С4, V),

поли() поли(С, V),

поли() поли(С13, V),

поли() поли(С22, V),

поли() поли(С20, G),

поли() поли(С29, G) и

поли()). поли(Ср/23 JS р).

Фармацевтическа  композици  в соответствии с насто щим изобретением включает днРНК, в предпочтительном варианте плохо сочетаемую, лимфокин и, необ зательно , соединение, которое ингибирует активатор циклооксигеназы, в качестве активных компонентов вместе с фармацевтическим носителем или разбавителем.

Использование изобретени  позволит улучшить лечение рака, вирусных инфекций и иммунорегул торных расстройств у человека .

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Противоопухолева  композици , содержаща  лифокин, в частности, интерлейкин- 2, отличающа с  тем, что, с целью придани  ей противовирусного и иммуно- модулирующего свойств, она дополнительно содержит днРНК формулы r/nr(C12-V)n, a в качестве лимфокина содержит «-интерферон или интерлейкин-2 при следующем количественном соотношении компонентов , мг:

   0,6-0,63; 60-6109-6,3-109МЕ

   7Ю4-7107МЕ.