RU1832199C

RU1832199C - Способ диагностики атопической бронхиальной астмы

Info

Publication number: RU1832199C
Application number: SU914902394A
Authority: RU
Inventors: Валентина Адамовна Русакович; Татьяна Николаевна Суковатых
Original assignee: Белорусский государственный институт усовершенствования врачей
Priority date: 1991-01-14
Filing date: 1991-01-14
Publication date: 1993-08-07

Abstract

Изобретение относитс к медицине, а именно к области клинической иммунологии и аллергологии. Целью способа вл етс повышение точности этиологической диагностики атоп ической бронхиальной астмы. Поставленна цель достигаетс благодар тому, что предложено определение содержани аллергенспецифических ИгЕ-антител к домашней пыли в составе циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови и при вы влении высокого уровн (от 400 ед. и более) аллергенспецифических ИгЕ-антител к домашней пыли диагностируют бронхиальную астму, вызванную аллергией к домашней пыли. 2 табл.

Description

Изобретение относитс к медицине, а именно к области клинической иммунологии и аллергологии.

Целью способа вл етс повышение точности этиологической диагностики бронхиальной астмы.

Выбор специфических ИгЕ-антител в составе иммунных комплексов обусловлен тем, что ИгЕ-антитела вл ютс маркером аллергического процесса.

Предлагаемый способ позвол ет.диагностировать посредством определени аллергенспецифических ИгЕ-антител причинный аллерген, вызывающий бронхиальную астму. Это важно дл своевременного назначени патогенетической терапии.

Предлагаемый способ позвол ет провести этиологическую диагностику атонической бронхиальной астмы в 9 и более раз точнее.

Дл осуществлени предлагаемого способа из сыворотки крови выдел ют циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) методом селективной преципитации с поли- этиленгликолем (М.в. 6000) в конечной концентрации 3,75%. Полученный преципитат ЦИК осаждают центрифугированием при 5000 об/мин, дважды отмывают полиэти- ленгликолем этой же концентрации. Затем отмытый осадок подвергают диссоциации 0.05М глицин -HCI буфером, рН 2,6, в термостате при 37°С в течение 1 часа..После диссоциации иммунных комплексов специфические ИгЕ-антитела определ ют в пробе на тест-системе иммуноферментной дл определени аллергенспецифических ИгЕ-антител человека, изготовленной Ставропольским НПО Аллерген.

Способ осуществл ют следующим образом .

К 0,2 мл сыворотки крови добавл ют 0,4 мл боратного буфера, рН рН 8,6, 0,1 М, перемешивают и добавл ют 5,4 мл раствора полиэтиленгликол (М.в. 6000) в конечной концентрации 3.75%, приготовленного на боратном буфере. Перемешивают и оставл ют при комнатной температуре дл образовани преципитата на 1 час. Затем переливают в пластмассовые пробирки дл центрифуги ОПН-8 и центрифугируют при

сл

с

00 Сл

го

ч

5000 об/мин 20 мин, однако с учетом времени на разгон и остановку ротора врем центрифугировани увеличиваетс до 35 мин. Супернатант сливают и добавл ют в пробирки холодный раствор полиэтиленглико- л этой же концентрации, перемешивают и снова центрифугируют. Операцию отмывки повтор ют еще раз. Слив супернатант, к осадку добавл ют 0,2 мл 0.05М глицин-НС1 буфера, рН 2,6 дл диссоциации иммунных комплексов.

Перемешивают и оставл ют в термостате при. 37°C на 1 ч. В приготовленной таким образом пробе определ ют содержание специфических ИгЕ-антител домашней пыли на тест-системе иммуноферментной дл определени аллергенспецифических ИгЕ- антител человека, изготовленной Ставропольским НПО Аллерген. Инструкци по работе прилагаетс к каждому набору тест- системы.

Учет результатов провод т инструментально , на спектрофотометре типа Мульти- скан при длине волны 492 нм. Оценка содержани специфических ИгЕ-антител производитс на основе определени оптической плотности (ОП) продукта ферментативной реакции, характеризующей содержание аллергенспецифических ИгЕ- антител. Дл этого рассчитывают среднюю арифметическую ОП дублей всех растворов (А,В,С,Д) стандарта: ИгЕ-антител и образцов тестируемых сывороток. ОП образцов сравнивают с ОП растворов (А,В,С.Д) стандарта ИгЕ-антител (см.таблицу 1).

Дл удобства расчетов единицы оптической плотности умножены на 1000 (см.табл.2).

Оценка содержани специфических ИгЕ-антител может быть произведена по степени реакции (в плюсах от 0,1,2,3,4), что соответствует отрицательному, низкому, умеренному, высокому и очень высокому уровню ИгЕ-антител. Однако такой подход не позвол ет провести тщательную и точную оценку результатов/Поэтому мы считали необходимым рассмотреть цифровые данные ОП, полученные на спектрофотометре Мультискан, которые количественно и, соответственно, более реально отражали бы истинное соотношение специфических ИгЕ-антител в сыворотке крови и составе ЦИК у детей с бронхиальной астмой . Благодар количественному анализу ОП образцов, нами установлено, что содержание специфических ИгЕ-антител домашней пыли, независимо от периода болезни у детей с бронхиальной астмы, было достоверно выше в составе ЦИК, чем в сыворотке крови (см. таблицу 2). Так, содер0

жание ИгЕ-антител к домашней пыли в составе ЦИК было в среднем 9,346 раза выше, чем в сыворотке крови в приступном периоде и ев 30, 14 раза в межприступном перио- де болезни. Значительно выше было содержание ИгЕ-антител к домашней пыли в приступном периоде по сравнению с меж- приступным периодом (Р,001). Т.о., нами установлено , что максимальное количество специфических ИгЕ-антител домашней пыли содержитс не в сыворотке крови, а в составе ЦИК. Следовательно, дл этиологической диагностики бронхиальной астмы практическое значение имеет определение аллергенспецифических ИгЕ-антител не столько в сыворотке крови, сколько в составе ЦИК. При этом определение специфических ИгЕ-антител в составе ЦИК более информативно и коррелирует с остротой аллергического процесса, выраженностью клинической симптоматики заболевани .

П р и м е р 1. Ребенок Кат Г., 2 г 11 мес. находилась в стационаре с клиническим диагнозом: бронхиальна астма, атоническа форма, т желое течение, астматический статус . Приступы бронхиальной астмы частые, причинный аллерген не вы влен. Дл установлени этиологического диагноза бронхи- альнойастмыпоставлены

скарификационные кожные пробы на аллерген домашней пыли, результаты которых были отрицательными. При иммунологическом обследовании уровень свободно циркулирующих специфических ИгЕ-антител к домашней пыли в сыворотке крови равен 105 ед, (++), т.е. умеренный, а содержание специфических ИгЕ-антител к домашней пыли по предлагаемому способу в составе ЦИК сыворотки крови - 1012 ед (++++), т.е. очень высокий, Последнее убедительно свидетельствует о наличии аллергии к домашней пыли у ребенка с бронхиальной астмой, т.е. установлен конкретный этиологический диагноз .

П р и м е р 2. Ребенок Кост Б., 9 лет, находилс в стационаре с клиническим диагнозом: бронхиальна астма, атоническа , т желое течение, приступный период. Страдает бронхиальной астмой в течение 7 лет, приступы почти ежедневные, причинный ал- лерген не вы влен. Дл установлени этиологического диагноза бронхиальной астмы в светлом промежутке поставлены скарификационные кожные пробы на аллерген домашней пыли. Результаты последних были отрицательными. При иммунологическом обследовании уровень свободно циркулирующих специфических ИгЕ-антител к домашней пыли в сыворотке крови равен 92 ед. (+) т..е низкий. Содержание специфических

0

5

0

5

0

5

0

5

ИгЕ-антител к домашней пыли по предлагаемому способу в составе ЦИК сыворотки крови - 975 ед. (+++), т.е. очень высокий, что свидетельствует о наличии аллергии к домашней пыли и позвол ет установить конк- ретный этиологический диагноз.

П р и м е р 3. Ребенок Алексей Ч., 7 лет, находилс в стационаре с клиническим диагнозом: бронхиальна астма, атоническа , средней т жести, межприступный период. Страдает бронхиальной астмой в течение 3 лет, приступы частые, хот в последний год стали реже, последний приступ за неделю до обследовани . Дл установлени этиологического диагноза бронхиальной астмы по- ставлены скарификационные кожные пробы, выраженность которых была слабой (+) и поэтому не подлежал к проведению патогенетического лечени - специфической иммунотерапии виновным аллергеном. При иммунологическом обследовании уровень свободно циркулирующих ИгЕ-антител к домашней пыли в сыворотке крови равен О ед. (-), т.е. отрицательный, а содержание специфических ИгЕ-ангител к домашней пыли по предлагаемому способу в составе ЦИК - 489 ед. (+++), т.е. высокий. Это свидетельствует о наличии аллергии к домашней пыли, т.е. установлен конкретный этиологический диагноз.

П р и м е р 4. Ребенок Андрей Д., 8 лет, находилс в стационаре с клиническим диагнозом: бронхиальна астма, атоническа , средней т жести, постприступный период. Страдает бронхиальной астмой в течение 2 лет. Дл установлени этиологического диагноза бронхиальной астмы поставлены скарификационные кожные пробы на аллерген домашней пыли, результаты которых оказались отрицательными. При иммуноло- гическом обследовании уровень свободно циркулирующих ИгЕ-антител к домашней пыли в сыворотке крови равен 63 ед. (+), т.е низкий, а содержание специфических ИгЕ- антител к домашней пыли по предлагаемо- му способу в составе ЦИК сыворотки крови -596 ед.(+++), т.е. высокий. Это свидетельствует о сенсибилизации организма аллергеном домашней пыли, т.е. установлен конкретный этиологический диагноз.

Таким образом, использование предлагаемого способа аллергенспецифической

диагностики атонической бронхиальной астмы имеет по сравнению прототипом следующие преимущества: 1) Предлагаемый способ по точности обнаружени специфических ИгЕ-антител в организме в 9 и более раз превышает ранее известный, поскольку аллергенспецифические ИгЕ-антитела в составе циркулирующих иммунных комплексов вы вл ютс даже тогда, когда в сыворотке крови свободно циркулирующие ИгЕ-антитела не обнаруживаютс или присутствуют в очень низких количествах; 2) позвол ет проводить этиологическую диагностику атонической бронхиальной астмы в любом периоде болезни, в том числе и в период приступа; 3) может быть использован с высокой степенью надежности и в межприступном периоде болезни при отрицательной реакции кожных проб, а также при поврежденной коже или наличии в анамнезе анафилактических реакций; 4) использование способа основано на выделении из сыворотки крови циркулирующих иммунных комплексов, их последующей диссоциации на антиген и антитело. Дл определени ИгЕ-антител используют им- муноферментные тест-системы; 5} способ несложен в техническом исполнении и может быть применен в любой иммунологический лаборатории при наличии спектрофотометра Мультискан и центрифуги ОПН-8.

Таким образом, предлагаемый способ вы влени аллергенспецифических ИгЕ-антител высокодостоверен и может быть использован в лечебных учреждени х в качестве теста дл вы влени причинного аллергена.

Claims

Формула изобретени Способ диагностики атопической бронхиальной астмы путем определени содержани специфических lgE-антител к домашней пыли в организме, отличающийс тем, что, с целью повышени точности способа, специфические lgE-ан- титела к домашней пыли определ ют в составе циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови и при вы влении их уровн от 400 ед. и более диагностируют бронхиальную астму, вызванную аллергией к домашней пыли.

Т а б л и ц а 1

п х jSx

1010

115,6+1 ,58 335,,it5

ИгЕ ЦИК

и г Е сы в.х j Sx

Э.,435

Примечание. efl. О.П. умножены на 1000; П - приступный, М - ме)«приступный

Таблица2

26 ,62+9 ,68

26 S i7,()7,23

30,

1,3 0,02

2,1) 40,001 1,3 0,C01 3,(i 0,001

П.H. 0,05