RS59016B1 - Heteroaril-piridon i aza-piridonska jedinjenja kao inhibitori aktivnosti btk - Google Patents

Heteroaril-piridon i aza-piridonska jedinjenja kao inhibitori aktivnosti btk

Info

Publication number
RS59016B1
RS59016B1 RS20190888A RSP20190888A RS59016B1 RS 59016 B1 RS59016 B1 RS 59016B1 RS 20190888 A RS20190888 A RS 20190888A RS P20190888 A RSP20190888 A RS P20190888A RS 59016 B1 RS59016 B1 RS 59016B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
methyl
pyridin
oxo
ylamino
Prior art date
Application number
RS20190888A
Other languages
English (en)
Inventor
James John Crawford
Daniel Fred Ortwine
Binqing Wei
Wendy B Young
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of RS59016B1 publication Critical patent/RS59016B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4995—Pyrazines or piperazines forming part of bridged ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/501—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
    • A61K31/5025—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5383—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/14—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D487/14—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D495/14—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/18—Compounds having one or more C—Si linkages as well as one or more C—O—Si linkages
    • C07F7/1804—Compounds having Si-O-C linkages

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

OPIS
OBLAST NA KOJU SE PRONALAZAK ODNOSI
Pronalazak se uglavnom odnosi na jedinjenja za tretiranje poremećaja posredovanih Brutonovom tirozin-kinazom (Btk), uključujući zapaljenja, imunološke poremećaje i kancer, a konkretnije na jedinjenja koja inhibiraju aktivnost Btk. Pronalazak se takođe odnosi na jedinjenja za in vitro, in situ i in vivo dijagnozu ili lečenje ćelija sisara, ili pridruženih patoloških stanja.
OSNOVE PRONALASKA
Proteinske kinaze, najveća familija humanih enzima, obuhvataju preko 500 proteina. Brutonova tirozinska kinaza (Btk) član je Tec porodice tirozinskih kinaza i regulator je razvoja ranih B-ćelija, kao i aktivacije, signalizacije i preživljavanja zrelih B-ćelija.
Signalizacija B-ćelija posredstvom receptora B-ćelija (BCR) može dovesti do širokog spektra bioloških manifestacija, što posledično zavisi od razvojne faze B-ćelije. Magnituda i trajanje BCR signala moraju biti precizno regulisani. Aberantna signalizacija posredovana BCR može uzrokovati neregulisanu aktivaciju B-ćelija i/ili formiranje patogenih auto-antitela koja dovode do višestrukih autoimunih i/ili zapaljenskih bolesti. Mutacija Btk kod ljudi rezultira X vezanom agamaglobulinemijom (XLA). Ova bolest je povezana sa oslabljenim sazrevanjem B-ćelija, smanjenom proizvodnjom imunoglobulina, kompromitovanim imunološkim odgovorima nezavisnim od T-ćelija i izraženim slabljenjem održanog signala kalcijuma nakon BCR stimulacije. Dokazi o ulozi Btk u alergijskim poremećajima i/ili autoimunim bolestima i/ili upalnim bolestima utvrđeni su u modelima miševa s deficitom Btk. Na primer, u standardnim prekliničkim murinskim modelima sistemskog eritematoznog lupusa (SLE), pokazalo se da nedostatak Btk rezultira značajnim poboljšanjem progresije bolesti. Štaviše, miševi s deficitom Btk takođe mogu biti otporni na razvoj artritisa izazvanog kolagenom i mogu biti manje podložni artritisu izazvanom stafilokokom. Veliki broj dokaza podupire ulogu B-ćelija i humoralnog imunog sistema u patogenezi autoimunih i/ili upalnih bolesti. Terapeutici na bazi proteina (kao što je Rituxan) razvijeni da iscrpe B-ćelije, predstavljaju pristup lečenju brojnih autoimunih i/ili inflamatornih bolesti. Zbog uloge Btk u aktivaciji B-ćelija, inhibitori Btk mogu biti korisni kao inhibitori patogene aktivnosti posredovane B-ćelijama (kao što je proizvodnja autoantitela). Btk se takođe izražava u osteoklastima, mastocitima i monocitima i pokazano je da je važan za funkciju ovih ćelija. Na primer, nedostatak Btk kod miševa je povezan sa oslabljenom aktivnošću IgE posredovane mastocitima (izraženo smanjenje TNF-alfa i druga oslobađanja inflamatornog citokina), a nedostatak Btk kod ljudi povezan je sa značajno smanjenom produkcijom TNF-alfa aktiviranih monocita.
Prema tome, inhibicija aktivnosti Btk može biti korisna za lečenje alergijskih poremećaja i/ili autoimunih i/ili zapaljenskih bolesti, kao što su: SLE, reumatoidni artritis, višestruki vaskulitidis, idiopatska trombocitopenijska purpura (ITP), mijastenija gravis, alergijski rinitis i astma (Di Paolo et al (2011) Nature Chem. Biol. 7(1):41-50; Liu et al (2011) Jour. of Pharm. and Exper. Ther.338(1):154-163). Pored toga, za Btk je prijavljeno da igra ulogu u apoptozi; prema tome, inhibicija aktivnosti Btk može biti korisna za lečenje karcinoma, kao i za lečenje limfoma B-ćelija, leukemije i drugih hematoloških maligniteta. Štaviše, s obzirom na ulogu Btk u funkciji osteoklasta, inhibicija aktivnosti Btk može biti korisna za lečenje koštanih poremećaja kao što je osteoporoza. Prijavljeni su specifični Btk inhibitori, (Liu (2011) Drug Metab. and Disposition 39(10):1840-1849; US 7884108, WO 2010/056875; WO2010100070; US 7405295; US 7393848; WO 2006/053121; US 7947835; US 2008/0139557; US 7838523; US 2008/0125417; US 2011/0118233; PCT/US2011/050034 “PYRIDINONES/PYRAZINONES, METHOD OF MAKING, AND METHOD OF USE THEREOF”, filed 31 Aug 2011; PCT/US2011/050013 “PYRIDAZINONES, METHOD OF MAKING, AND METHOD OF USE THEREOF”, filed 31 Aug 2011; US Ser. No.13/102720 “PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE”, podneseni 6. maja 2011).
SAŽETAK PRONALASKA
U čitavom prikazu ovog pronalaska, generička formula (I), kao i njena medicinska upotreba, navode se samo u ilustrativne svrhe. Međutim, pronalazak se odnosi samo na predmet (tj. jedinjenja koja su prikazani kao primeri) koji spada pod definicije (I) kao što je definisano u patentnim zahtevima i njegove medicinske upotrebe, kao što je definisano u patentnim zahtevima.
Pronalazak se generalno odnosi na Formulu I, heteroaril-piridon i aza-piridonska jedinjenja sa modulativnim aktivnostima Brutonove tirozin-kinaze (Btk).
Jedinjenja formule I imaju strukture:
uključujući, njihove stereoizomere, tautomere ili farmaceutski prihvatljive soli. U nastavku su opisani različiti supstituenti.
Jedan aspekt pronalaska je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule I i farmaceutski prihvatljiv nosač, glidant, razblaživač ili ekscipijent. Farmaceutska kompozicija može dalje da sadrži drugi terapeutski agens.
Drugi aspekt ovog pronalaska je postupak za dobijanje farmaceutske kompozicije koji obuhvata kombinovanje jedinjenja formule I sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
Ovaj pronalazak obuhvata jedinjenja za upotrebu u postupku lečenja bolesti ili poremećaja, a koji obuhvata davanje terapeutski efikasne količine jedinjenja formule I pacijentu sa oboljenjem ili poremećajem izabranim iz grupe imunih poremećaja, raka, kardiovaskularnih bolesti, virusne infekcije, upale, poremećaji metabolizma/endokrinih funkcija i neurološki poremećaji, a posredovani Brutonovom tirozin-kinazom.
Ovaj pronalazak uključuje komplet za lečenje stanja posredovanog Brutonovom tirozin-kinazom, a koji sadrži: a) prvu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule I; i b) uputstva za upotrebu.
Ovaj pronalazak uključuje jedinjenje formule I za upotrebu kao medikament i za upotrebu u lečenju bolesti ili poremećaja izabranih iz grupe imunoloških poremećaja, raka, kardiovaskularnih bolesti, virusne infekcije, upale, poremećaja metabolizma/endokrinih funkcija i neuroloških poremećaja, a posredovanih Brutonovim tirozin-kinaza.
Ovaj pronalazak uključuje upotrebu jedinjenja formule I u proizvodnji leka za lečenje imunoloških poremećaja, raka, kardiovaskularnih bolesti, virusne infekcije, zapaljenja, poremećaja metabolizma / endokrinih funkcija i neuroloških poremećaja, i onda kada lek posreduje Brutonovu tirozin-kinazu.
Ovaj pronalazak uključuje postupke dobijanja jedinjenja formule I.
KRATAK OPIS SLIKA
Slika 1 prikazuje pripremu 2-(4-(hidroksimetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 101 počevši od 2,2,2-Trichloro-1-(4,5,6,7-tetrahidro-1 H-indol-2-il) ethanone 101a.
Slika 2 prikazuje pripremu 2-(4-(hidroksimetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6.-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 102 počevši od 1-metil-3-[5-(4-metil-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioksaborolan-2-il)-1H-piridin-2-on 102a
Slika 3 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 103 počevši od 2-bromo-4-hloronikotinaldehida 103a
Slika 4 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-2-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-4-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 104 počevši od 4-bromo-2-hloronikotinaldehida 104a
Slika 5 prikazuje pripremu 4-hidroksimetil-3-[l1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-okso-8-tia-5-azatriciklo-[7.4.0.0<2,7>] trideka-1(9), 2(7)-dien-5-il} piridin 105 koji počinje sa N-metoksi-N-metil-4,5,6,7-tetrahidrobenzo [b] tiofen-2-karboksamidom 105a
Slika 6 prikazuje pripremu 4-hidroksimetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-4-karbaldehid 106 počevši sa 3,3-dimetilciklopentanonom 106a
Slika 7 prikazuje pripremu 10-[4-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-4-(hidroksimetil) piridin-3-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 107 počevši od (E)-Etil 3-(2-hloro-4,4-dimetilciklopent-1-enil) akrilata 107a
Slika 8 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 108 počevši od 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a.
Slika 9 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-9-on 109 počevši od 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a.
Slika 10 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6.-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 110 počevši s 1-metil-3-(6-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 110a Slika 11 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(morfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridina-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 111, počevši od (6-Aminopiridin-3-il) (morfolino) metanon 111a
Slika 12 prikazuje pripremu 2-(4-(hidroksimetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1(2H)-on 112 počevši od metil 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilata 112a
Slika 13 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2 H) u prvoj je 113 počevši od (3-Nitro-1 H-pirazol-5-il) metanola 113a
Slika 14 prikazuje pripremu (R)-2-(4-(6-(4-(1,4-dimetil-3-oksopiperazin-2-il) fenilamino)-4-metil-5-okso-4,5-dihidropirazin-2-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2 H)-on 114 počevši od (R)-5-brom-3-(4-(1,4-dimetil-3-oksopiperazin-2-il) fenilamino)-1-metilpirazin-2 (1H)-on 114a
Slika 15 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 115 počevši od 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 115a
Slika 16 prikazuje pripremu 4-hidroksimetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin 116 počevši od 3-bromo-5-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7) 3-trien-5-il} piridin-4-karbaldehid 116a
Slika 17 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(metilsulfonil) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 117, počevši od 5-(metiltio)-2-nitropiridinom 117a Slika 18 prikazuje pripremu 2-(4-(5-(5-ciklopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)--3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino[1,2-a] indol-1(2H)-on 118 koji počinje terc-butil 5-amino-3-ciklopropil-1H-pirazol-1-karboksilatom 118a
Slika 19 prikazuje pripremu (S)-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 119 počevši od (S)-(4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetata 119a
Slika 20 prikazuje pripremu 2-(4-(5-(5-(4-(2-hidroksi-2-metilpropil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 120 počevši od 5-bromo-3-(5-(4-(2-hidroksi-2-metilpropil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 120a
Slika 21 prikazuje pripremu 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 121 počevši od 4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 121a
Slika 22 prikazuje pripremu 2-(4-(5-(5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 122 koji počinje (2R, 5S)-tert-butil 2,5-dimetil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilatom 122a
Slika 23 prikazuje pripremu 2-(4-(5-(5-(4-(2-hidroksietil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidro-pirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 123 počevši od (2-Bromoetoksi) (terc-butil) dimetilsilana 123a
Slika 24 prikazuje pripremu 3-hidroksimetil-4-[1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1 6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin 124 počevši od 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehida 124a
Slika 25 prikazuje pripremu 7,7-difluoro-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-ona, korisnog za pripremu 140, počevši od etil 1H-pirol-2-karboksilata.
Slika 26 prikazuje pripremu 5-(oksetan-3-il)-1H-pirazol-3-amina, korisnog za pripremu 266, počevši od 3-nitro-1H-pirazola.
DETALJAN OPIS PRIMERA IZVOĐENJA
Sada će biti detaljno reči o određenim izvođenjima predmetnog pronalaska, čiji primeri su ilustrovani pratećim strukturama i formulama. Mada će pronalazak biti opisan u vezi sa nabrojanim primerima izvođenja, treba razumeti da to ne predstavlja ograničavanje pronalaska na te primere izvođenja. Naprotiv, pronalazak pokriva sve alternative, modifikacije i ekvivalente koji mogu biti uključeni u oblast predmetnog pronalaska, kako je definisano patentnim zahtevima. Stručnjaci u ovoj oblasti će prepoznati brojne postupke i materijale slične, ili ekvivalentne ovima ovdeopisanim, koji se mogu koristiti u praksi za predmetni pronalazak. Predmetni pronalazak ni na koji način nije ograničen na postupke i materijale koji su opisani. U slučaju da se jedna ili više korišćenih literatura, patenata i sličnih materijala razlikuju od ove primene ili su u suprotnosti sa ovom primenom, uključujući, bez ograničenja, definisane termine, upotrebu termina, opisane tehnike ili slično, ova primena ima prednost. Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni pojmovi koji se ovde koriste imaju isto značenje kao što je poznato stručnjaku u oblasti kojoj pripada ovaj pronalazak. Iako se postupci i materijali slični ili ekvivalentni onima ovdeopisanim mogu takođe koristiti u praksi ili testiranju ovog pronalaska, u nastavku su opisano odgovarajući postupci i materijali. Sve publikacije, patentne prijave, patenti i druge reference koje se ovde pominju, obuhvaćene su u celosti u okviru referenci. Nomenklatura koja se koristi u ovoj primeni zasnovana je na sistematskoj nomenklaturi organizaciji IUPAC , osim ako nije drugačije naznačeno.
DEFINICIJE
Kada se označava broj supstituenata, termin „jedan ili više” odnosi se na opseg od jednog supstituenta do najvećeg mogućeg broja supstitucija, tj. zamene jednog vodonika sve do zamene svih vodonika supstituentima. Izraz „supstituent” opisuje atom ili grupu atoma koja zamenjuje atom vodonika u matičnom molekulu. Izraz „supstituiran” označava da određena grupa nosi jedan ili više supstituenata. Kada bilo koja grupa može da nosi višestruke supstituente, a dostupni su različiti mogući supstituenti, supstituenti se nezavisno biraju i ne moraju biti isti. Termin „nesupstituisan” znači da pomenuta grupa ne sadrži supstituente. Izraz „opciono supstituisan” označava da je navedena grupa nesupstituisana ili supstituisana jednim ili većim brojem supstituenata, nezavisno izabranih iz grupe mogućih supstituenata. Kada se označava broj supstituenata, termin „jedan ili više” označava jednog supstituenta do najvećeg mogućeg broja supstitucija, tj. zamene jednog vodonika sve do zamene svih vodonika supstituentima.
Izraz „alkil” koji se koristi u ovom dokumentu odnosi se na zasićeni linearni ili razgranati lanac monovalentnog ugljovodoničnog radikala jednog do dvanaest atoma ugljenika (C1-C12), pri čemu alkilni radikal može biti, po izboru, nezavisno supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata opisanih u nastavku. U sledećem primeru izvođenja, alkilni radikal je jedan do osam atoma ugljenika (C1-C8) ili jedan do šest atoma ugljenika (C1-C6).Primeri alkilnih grupa uključuju, bez ograničenja, metil (Me,-CH3), etil (Et,-CH2CH3), 1-propil (n-Pr, n-propil,-CH2CH2CH3), 2-propil (i-Pr, i-propil,-CH(CH3)2), 1-butil (n-Bu, nbutil,-CH2CH2CH2CH3), 2-metil-1-propil (i-Bu, i-butil,-CH2CH(CH3)2), 2-butil (s-Bu, sbutil,-CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propil (t-Bu, t-butil,-C(CH3)3), 1-pentil (n-pentil,-CH2CH2CH2CH2CH3), 2-pentil (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentil (-CH(CH2CH3)2), 2-metil-2-butil (-C(CH3)2CH2CH3), 3-metil-2-butil (-CH(CH3)CH(CH3)2) 3-metil-1-butil (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1-butil (-CH2CH(CH3)CH2CH3)), 1-heksil (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-heksil (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-heksil (-CH(CH2CH3) (CH2CH2CH3)), 2-metil-2-pentil (-C(CH3)2CH2CH(CH3)), 3-metil-2-pentil (-CH(CH3)CH (CH3)CH2CH3)), 4-metil-2-pentil (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-metil-3-pentil (-C(CH3) (CH2CH3)2), 2-metil-3-pentil (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butil (-C(CH3)2CH (CH3)2) 3,3-dimetil-2-butil (-CH(CH3)C(CH3)3), 1-heptil, 1-oktil, i slične.
.Izraz „alkilen” koji se koristi u ovom dokumentu odnosi se na zasićeni linearni ili razgranati lanac dvovalentnog ugljovodoničnog radikala jednog do dvanaest atoma ugljenika (C1-C12), pri čemu alkilnenski radikal može biti, po izboru, nezavisno supstituisan jednim ili većim brojem supstituenata opisanih u nastavku. U sledećem primeru izvođenja, alkienski radikal je jedan do osam atoma ugljenika (C1-C8) ili jedan do šest atoma ugljenika (C1-C6).Primeri alkilenske grupe uključuju, bez ograničenja, metilen (−CH2-), etilen (−CH2CH2−), propilen (−CH2CH2CH2–), i slično.
Izraz „alkenil” odnosi se na linearni ili razgranati lanac monovalentnog ugljovodoničnog radikala dva do osam atoma ugljenika (C2−C8) sa najmanje jednim mestom nezasićenosti, tj ugljenik-ugljenik, sp<2>dvostruke veze, pri čemu radikal alkenila može biti opciono supstituisan nezavisno jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata, i uključuje radikale koji imaju „cis” i „trans” orijentacije ili, alternativno, „E” i „Z” orijentacije. Primeri uključuju, bez ograničenja, etilenil ili vinil (−CH=CH2), alil (−CH2CH=CH2), i slično.
Izraz „alkenilen” odnosi se na linearni ili razgranati lanac dvovalentnog ugljovodoničnog radikala dva do osam atoma ugljenika (C2−C8) sa najmanje jednim mestom nezasićenosti, tj ugljenik-ugljenik, sp<2>dvostruke veze, pri čemu radikal alkenilena može biti opciono supstituisan nezavisno jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata, i uključuje radikale koji imaju „cis” i „trans” orijentacije ili, alternativno, „E” i „Z” orijentacije. Primeri uključuju, bez ograničenja, etilenilen ili vinilen (-CH=CH-), alil (-CH2CH=CH-), i slično.
Izraz „alkinil” odnosi se na linearni ili razgranati lanac monovalentnog ugljovodoničnog radikala dva do osam atoma ugljenika (C2-C8) sa najmanje jednim mestom nezasićenosti, tj ugljenik-ugljenik, sp trostruke veze, pri čemu radikal alkinila može biti opciono supstituisan nezavisno jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata. Primeri uključuju, bez ograničenja, etinil (-C≡CH), propinil (propargil,-CH2C≡CH), i slično.
Izraz „alkinilen” odnosi se na linearni ili razgranati lanac dvovalentnog ugljovodoničnog radikala dva do osam atoma ugljenika (C2-C8) sa najmanje jednim mestom nezasićenosti, tj ugljenik-ugljenik, sp trostruke veze, pri čemu radikal alkinil može biti opciono supstituisan nezavisno jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata. Primeri uključuju, bez ograničenja, etinilen (-C≡C-), propinilen (propargilen,-CH2C≡C-), i slično.
Izrazi „karboikl”, „karbociklil”, „karbociklični prsten” i „cikloalkil” odnose se na monovalentni nearomatični, zasićeni ili delimično nezasićeni prsten koji ima 3 do 12 atoma ugljenika (C3-C12) kao monociklički prsten ili 7 do 12 atoma ugljenika kao biciklički prsten. Biciklički karbocikli sa 7 do 12 atoma mogu biti raspoređeni, na primer, kao biciklo [4,5], [5,5], [5,6] ili [6,6] sistem i biciklički karbocikli sa 9 ili 10 prstenova, atomi mogu biti raspoređeni kao biciklo [5,6] ili [6,6] sistem, ili kao premošteni sistemi, kao što su biciklo [2.2.1] heptan, biciklo [2.2.2] oktan i biciklo [3.2.2] nonan. Spiro jedinjenja su takođe uključena u opseg ove definicije. Primeri monocikličnih karbocikala uključuju, bez ograničenja, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, 1-ciklopent-1-enil, 1-ciklopent-2-enil, 1-ciklopent-3-enil, cikloheksil, 1-cikloheks-1-enil, 1-cikloheks-2-enil, 1-cikloheks-3-enil, cikloheksadienil, cikloheptil, ciklooktil, ciklononil, ciklodecil, cikloundecil, ciklododecil i slično. Karbociklične grupe su opciono supstituisane nezavisno jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata.
„Aril” podrazumeva monovalentan aromatični radikal ugljovodonika sa 6-20 atoma ugljenika (C6−C20) izveden uklanjanjem jednog atoma vodonika od jednog atoma ugljenika matičnog aromatičnog sistema prstenova. Neke arilne grupe su predstavljene u primernim strukturama kao „Ar”. Aril sadrži biciklične radikale koji sadrže aromatični prsten spojen sa zasićenim, delimično nezasićenim prstenom ili aromatičnim karbocikličkim prstenom. Tipične arilne grupe uključuju, bez ograničenja, radikale izvedene iz benzena (fenil), supstituiranih benzena, naftalena, antracena, bifenila, indenila, indanila, 1,2-dihidronaftalena, 1,2,3,4-tetrahidronaftila i slično. Arilne grupe su opciono supstituisane nezavisno jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata.
„Arilna” podrazumeva dvovalentan aromatični radikal ugljovodonika sa 6–20 atoma ugljenika (C6-C20) izvedena uklanjanjem dva atoma vodonika iz dva atoma ugljenika matičnog sistema aromatičnog prstena. Neke arilenske grupe su predstavljene u primernim strukturama kao „Ar”. dArilen sadrži biciklične radikale koji sadrže aromatični prsten spojen sa zasićenim, delimično nezasićenim prstenom ili aromatičnim karbocikličkim prstenom.
1
Tipične arilenske grupe uključuju, bez ograničenja, radikale izvedene iz benzena (fenilen), supstituiranih benzena, naftalena, antracena, bifenilena, indenilena, indanilena, 1,2-dihidronaftalena, 1,2,3,4-tetrahidronaftila i slično. Arilenske grupe su opciono supstituisane jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata.
Termini „heterocikl”, „heterociklil” i „heterociklični prsten” ovde se koriste kao sinonimi i odnose se na zasićeni ili delimično nezasićeni (tj. koji ima jednu ili više dvostrukih i/ili trostrukih veza unutar prstena) karbociklični radikal od 3 do oko 20 atoma prstena u kojima je najmanje jedan atom prstena heteroatom, izabran od azota, kiseonika, fosfora i sumpora, preostali atomi prstena su C, pri čemu je jedan atom ili više atoma u prstenu opciono supstituisan nezavisno jednim ili većim brojem supstituenata koji su opisani u nastavku. Heterocikl može biti monocikl koji ima 3 do 7 članova prstena (2 do 6 atoma ugljenika i 1 do 4 heteroatoma izabranih od N, O, P i S) ili bicikl koji ima 7 do 10 članova prstena (4 do 9 atoma ugljenika 1 do 6 heteroatoma izabranih od N, O, P i S), na primer: sistem bicikla [4,5], [5,5], [5,6] ili [6,6]. Heterocikli su opisani u radu Paquette, Leo A; “Principles of Modem Heterocyclic Chemistry” (W.A. Benjamin, New York, 1968), posebno poglavlja 1, 3, 4, 6, 7 i 9; “The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs” (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), posebno tomovi 13, 14, 16, 19 i 28; i J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. „Heterociklil” takođe sadrži radikale gde su heterociklički radikali sjedinjeni sa zasićenim, delimično nezasićenim prstenom, ili aromatičnim karbocikličnim ili heterocikličkim prstenom. Primeri heterocikličnih prstena uključuju, bez ograničenja, morfolin-4-il, piperidin-1-il, piperazinil, piperazin-4-il-2-on, piperazin-4-il-3-on, pirolidin-1-il, tiomorfolin-4-il, S-dioksotiomorfolin-4-il, azokan-1-il, azetidin-1-il, oktahidropirido [1,2-a] pirazin-2-il, [1,4] diazepan-1-il, pirolidinil, tetrahidrofuranil, dihidrofuranil, tetrahidrotienil, tetrahidropiranil, dihidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioksanil, piperazinil, homopiperidinil, oksepanil, tiezepinil, oksazepinil, diazepinil, tiezepinil, 2-pirolinil, 3-pirolinil, indolinil, 2H-piranil, 4H-piranil, dioksanil, 1,3-dioksolanil, pirazolinil, ditianil, ditiolanil, dihidropiranil, dihidrotienil, dihidrofuranil, pirazolidinilimidazolinil, imidazolidinil, 3-azabiciko [3.1.0] heksanil, 3-azabiciklo [4.1.0] heptanil, azabiciklo [2.2.2] heksanil, 3H-indolil kinolizinil i N-piridil urea. Spiro jedinjenja su takođe uključena u opseg ove definicije. Primere heterociklične grupe u kojoj su dva atoma prstena supstituisana okso (= O) jedinicama predstavljaju pirimidinonil i 1,1-diokso-tiomorfolinil. Heterociklične grupe ovde su opciono supstituisane nezavisno jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata.
Termin „heteroaril” se odnosi na monovalentni aromatični radikal petočlanih, šestočlanih ili sedmočlanih prstenova i sadrži sjedinjene sisteme prstenova (od kojih je najmanje jedan aromatičan) od 5–20 atoma, koji sadrže jedan ili više heteroatoma nezavisno izabranih od azota, kiseonika i sumpora. Primeri za heteroarine grupe su piridinili (uključujući, na primer, 2-hidroksipiridinil) imidazolil, imidazopiridinil, pirimidinil, (uključujuči, na primer, 4-hidroksipirimidinil), pirazolil, triazolil, pirazinil, tetrazolil, furil, tienil, izoksazolil, tiazolil, oksadiazolil, oksazolil, izotiazolil, pirolil, hinolinil, izohinolinil, tretrahidroizohinolilnil, indolil, benzimidazolil, benzofuranil, cinolinil, indazolil, indolizinil, ftalazinil, piridazinil, triazinil, izoindolil, pteridinil, purinil, oksadiazolil, triazolil, tiadiazolil, tiadiazolil, furazanil, benzofurazanil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoksazolil, hinazolinil, hinoksalinil, naftiridinil i furopiridinil. Heteroarilne grupe su opciono supstituisane nezavisno jednim ili većim brojem ovdeopisanih supstituenata.
Heterociklične ili heteroarilne grupe mogu biti ugljenične (vezane uz ugljenik), ili azot (vezane za azot) tamo gde je to moguće. Kao primer, a ne ograničenje, heterocikli povezani s ugljenikom ili heteroarili vezani su na položaju 2, 3, 4, 5 ili 6 piridina, položaj 3, 4, 5 ili 6 piridazina, položaj 2, 4, 5 ili 6 pirimidina, pozicije 2, 3, 5 ili 6 pirazina, pozicije 2, 3, 4, ili 5 furana, tetrahidrofurana, tiofurana, tiofena, pirol ili tetrahidropirola, položaj 2, 4 ili 5 oksazola, imidazola ili tiazola, položaj 3, 4 ili 5 izoksazola, pirazola ili izotiazola, položaj 2 ili 3 aziridina, položaj 2, 3 ili 4 azetidina, položaj 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 kinolina ili položaja 1, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 izohinolina.
Kao primer, a ne ograničenje, heterocikli vezani azotom ili heteroarili vezani su na položaju 1 aziridina, azetidina, pirol, pirolidina, 2-pirolina, 3-pirolina, imidazola, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazola pirazolin, 2-pirazolin, 3-pirazolin, piperidin, piperazin, indol, indolin, 1H-indazol, položaj 2 izoindola, ili izoindolin, položaj 4 morfolina i položaj 9 karbazola, ili β-karbolina.
Termini „lečiti” i „lečenje” odnose se na terapeutsko lečenje čiji je cilj da se spreči ili uspori (umanji) neželjena fiziološka promena ili poremećaj, kao što je razvoj ili širenje artritisa ili kancera. U svrhu ovog pronalaska, korisni ili željeni klinički rezultati uključuju, bez ograničenja ublažavanje simptoma, smanjenje obima bolesti, stabilizovano (tj. koje se ne pogoršava) stanje bolesti, odlaganje ili usporavanje progresije bolesti, poboljšanje ili ublažavanje stanja bolesti i remisiju (delimičnu ili totalnu), bilo da može da se detektuje ili ne. „Lečenje” može takođe da znači produžavanje preživljavanja u poređenju sa očekivanim preživljavanjem bez lečenja. Oni kojima je potrebno lečenje uključuju i one koji imaju stanje ili poremećaj.
Izraz „terapeutski efikasna količina” označava količinu jedinjenja predmetnog pronalaska koja, kada se primeni na ispitanika, (i) leči ili sprečava pojavu određene bolesti, stanja ili poremećaja, (ii) ublažava, poboljšava ili eliminiše jedan simptom ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja ili (iii) sprečava ili odlaže pojavu jednog ili više simptoma ovdeopisane određene bolesti, stanja ili poremećaja. Kada je bolest maligna bolest, efektivna količina leka može redukovati broj ćelija raka; smanjiti veličinu tumora; inhibirati (tj. usporiti do izvesnog stepena i poželjno zaustaviti) infiltraciju ćelija raka u periferne organe; sprečiti (tj. usporiti do izvesnog stepena i poželjno zaustaviti) metastaze tumora; inhibirati, do određenog stepena, tumorski rast; i/ili ublažiti do izvesnog stepena jedan ili više simptoma maligne bolesti. Prema stepenu do koga lek može sprečiti rast i/ili uništiti postojeće ćelije raka, on može biti citostatični i/ili citotoksični lek. Za terapiju raka, efikasnost se može meriti, na primer, procenom vremena do progresije bolesti (TTP) i/ili određivanjem stope odgovora (RR).
„Upalni poremećaj”, kako se ovde koristi, može se odnositi na bilo koju bolest, poremećaj ili sindrom kod kojih prekomerni ili neregulisani upalni odgovor dovodi do prekomernih upalnih simptoma, oštećenja tkiva domaćina ili gubitka funkcije tkiva. „Inflamatorni poremećaj” se takođe odnosi na patološko stanje posredovano prilivom leukocita i/ili hemotaksije neutrofila.
„Upala”, kako se ovde koristi, odnosi se na lokalizovani, zaštitni odgovor izazvan povredom ili uništenjem tkiva, koji služi da uništi, razredi ili odstrani (sekvestrira) štetno sredstvo i oštećeno tkivo. Upala je posebno povezana sa prilivom leukocita i/ili hemotaksijom neutrofila. Upala može biti posledica infekcije patogenim organizmima i virusima i od neinfektivnih sredstava, kao što su trauma ili reperfuzija, nakon infarkta miokarda ili moždanog udara, imunološkog odgovora na strani antigen i autoimunih odgovora. Shodno tome, zapaljenski poremećaji pogodni za tretman jedinjenjima formule I obuhvataju poremećaje u vezi sa reakcijama specifičnog sistema odbrane, kao i reakcije nespecifičnog sistema odbrane.
„Specifični odbrambeni sistem” se odnosi na komponentu imunog sistema koja reaguje na prisustvo specifičnih antigena. Primeri upale nastali kao posledica odgovora specifičnog obrambenog sistema uključuju klasični odgovor na strane antigene, autoimune bolesti i odgođeni tip preosetljivosti posredovan T-ćelijama. Hronična zapaljnska oboljenja, odbacivanje čvrstih transplantiranih tkiva i organa, npr. transplantacija bubrega i koštane srži i reakcije ogranizma na graft (graft versus host disease – GVHD), dalji su primeri upalnih reakcija specifičnog obrambenog sistema.
1
Termin „nespecifični obrambeni sistem”, kako se ovde koristi, odnosi se na upalne poremećaje koji su posredovani leukocitima koji nisu sposobni za imunološku memoriju (npr. granulociti i makrofagi). Primeri upale koja rezultira, barem delimično, od reakcije nespecifičnog obrambenog sistema uključuju upale povezane sa stanjima, kao što su (akutni) respiratorni distres sindrom kod odraslih (ARDS) ili sindrom povrede višestrukih organa; reperfuzijska povreda; akutni glomerulonefritis; reaktivni artritis; dermatoze sa akutnim inflamatornim komponentama; akutni gnojni meningitis ili drugi upalni poremećaji centralnog nervnog sistema, kao što je moždani udar; toplotne povrede; upalna bolest creva; sindromi povezani sa transfuzijom granulocita; i toksičnost indukovana citokinima.
„Autoimuna bolest”, kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koju grupu poremećaja kod kojih je povreda tkiva povezana sa humoralnim ili ćelijski posredovanim odgovorima na sopstvene sastojke tela.
„Alergijska bolest”, kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koje simptome, oštećenje tkiva ili gubitak funkcije tkiva kao rezultat alergije. „Artritična bolest”, kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koju bolest koju karakterišu upalne lezije zglobova koje se mogu pripisati različitim etiologijama. „Dermatitis”, kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koju veliku porodicu bolesti kože koja se karakteriše upalom kože koja se može pripisati različitim etiologijama. „Odbacivanje transplantata”, kako se ovde koristi, odnosi se na svaku imunsku reakciju usmerenu protiv transplantiranog tkiva, kao što su organi ili ćelije (npr. koštana srž), koje karakteriše gubitak funkcije transplantiranog i okolnog tkiva, bol, oticanje, leukocitoza i trombocitopenija. Terapeutske metode uključuju metode za lečenje poremećaja povezanih sa aktivacijom inflamatornih ćelija.
„Inflamatorna aktivacija ćelija” se odnosi na indukciju stimulusom (uključujući, bez ograničenja, citokine, antigene ili auto-antitela) proliferativnog ćelijskog odgovora, proizvodnju rastvorljivih medijatora (uključujući, bez ograničenja, citokine, radikale kiseonika, enzime, prostanoide ili vazoaktivne amine), ili ekspresija nove ili povećane količine medijatora na površini ćelija (uključujući, bez ograničenja, antigene velike histokompatabilnosti ili molekule ćelijske adhezije) u inflamatornim ćelijama (uključujući, bez ograničenja, monocite, makrofage, T-limfocite, B-limfocite, granulocite (tj. polimorfonuklearni leukociti kao što su neutrofili, bazofili i eozinofili), mastocite, dendritičke ćelije, Langerhansove ćelije i endotelne ćelije). Stručnjaci u ovoj oblasti znaju da aktivacija jednog ili kombinacije ovih fenotipova u ovim ćelijama može doprineti inicijaciji, perpetuiranju ili pogoršanju inflamatornog poremećaja.
Termin „NSAID” je akronim za „nesteroidni antiinflamatorni lek” i terapeutsko je sredstvo sa analgetikom, antipiretikom (snižavanje povišene telesne temperature i ublažavanje bola bez narušavanja svesti) i, u višim dozama, ima protivupalno dejstvo (smanjenje upale). Termin „nesteroidni” se koristi za razlikovanje ovih lekova od steroida, koji (među širokim spektrom drugih efekata) imaju slično eikozanoidno-depresivno, protivupalno delovanje. Kao analgetici, NSAID su neobični po tome što nisu narkotični. NSAID uključuju aspirin, ibuprofen i naproksen. NSAID su obično indikovani za lečenje akutnih ili hroničnih stanja gde su prisutni bolovi i upale. NSAID su obično indikovani za simptomatsko ublažavanje sledećih stanja: reumatoidni artritis, osteoartritis, upalne artropatije (npr. ankilozantni spondilitis, psorijatični artritis, Rajterov sindrom, akutni giht, dismenoreja, metastatski bol u kostima, glavobolja i migrena, postoperativni bol, blagi do umereni bol zbog upale i povrede tkiva, pireksija, ileus i bubrežne kolike. Većina NSAID deluju kao neselektivni inhibitori enzima ciklooksigenaze, inhibirajući izoenzime ciklooksigenazu-1 (COX-1) i ciklooksigenazu-2 (COX-2). Ciklooksigenaza katalizuje formiranje prostaglandina i tromboksana iz arahidonske kiseline (sama je izvedena iz ćelijskog fosfolipidnog dvosloja fosfolipaze A2). Prostaglandini deluju (između ostalog) kao molekuli glasnici u procesu upale. COX-2 inhibitori uključuju celekoksib, etorikoksib, lumirakoksib, parekoksib, rofekoksib, rofekoksib i valdekoksib.
Termini „kancer“ odnosi se na fiziološko stanje sisara koje se tipično karakteriše neregulisanim rastom ćelija ili ga opisuje. „Tumor“ sadrži jednu ili više ćelija kancera. Primeri za kancer uključuju, bez ograničenja, karcinom, limfom, blastom, sarkom i leukemiju ili limfoidne malignitete. Konkretniji primeri za takve kancere uključuju, karcinom dojke, karcinom skvamoznih ćelija (npr. karcinom skvamoznih ćelija epitela), karcinom pluća, uključujući mikrocelularni karcinom pluća, nemikrocelularni karcinom pluća („NSCLC”), adenokarcinom pluća i skvamozni karcinom pluća, karcinom peritoneuma, hepatocelularni karcinom, gastrični karcinom ili karcinom želuca, uključujući gastrointestinalni karcinom, karcinom pankreasa, glioblastom, karcinom cerviksa, karcinom jajnika, karcinom jetre, karcinom bešike, hepatom, karcinom kolona, karcinom rektuma, kolorektalni karcinom, karcinom endometrijuma ili materice, karcinom pljuvačnih žlezda, karcinom bubrega ili renalni karcinom, karcinom prostate, karcinom vulve, tiroidni karcinom, karcinom jetre, analni karcinom, karcinom penisa, kao i kancer glave i vrata.
„Hematološki maligni poremećaji” su tipovi raka koji utiču na krv, koštanu srž i limfne čvorove. Budući da su ova tri blisko povezana putem imunološkog sistema, bolest koja pogađa jednu od tri često će uticati i na druge: iako je limfom bolest limfnih čvorova,
1
često se širi na koštanu srž, utičući na krv. Hematološki maligni poremećaji su maligne neoplazme („rak”) i oni se obično leče od strane specijalista za hematologiju i/ili onkologiju. U nekim centrima „Hematologija/onkologija” je jedinstvena supspecijalnost interne medicine, dok se u drugima smatraju zasebnim divizijama (postoje hirurški i radijacijski onkolozi). Nehematološki poremećaji su maligni („kancerogeni”); ova druga oboljenja krvi može lečiti i hematolog. Hematološki maligni poremećaji mogu nastati iz bilo koje od dve glavne linije krvnih ćelija: mijeloidnih i limfoidnih ćelijskih linija. Linija mijeloidnih ćelija normalno proizvodi granulocite, eritrocite, trombocite, makrofage i mastocite; linija limfoidnih ćelija proizvodi B, T, NK i plazma ćelije. Limfomi, limfocitne leukemije i mijelom su iz limfoidne linije, dok su akutna i hronična mijelogena leukemija, mijelodisplastični sindromi i mijeloproliferativne bolesti mijeloidnog porekla. Leukemije uključuju akutnu limfoblastičnu leukemiju (ALL), akutnu mijelogenu leukemiju (AML), hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), hroničnu mijelogenu leukemiju (CML), akutnu monocitnu leukemiju (AMOL) i mali limfocitni limfom (SLL). Limfomi uključuju Hodžkinsove limfome (sva četiri podtipa) i ne-Hodžkinsove limfome (sve podtipove).
„Hemoterapeutski agens“” je hemijsko jedinjenje koje je od koristi u lečenju kancera, nezavisno od mehanizma dejstva. Klase hemioterapeutskih agenasa uključuju, bez ograničenja, alkilujuće agense, antimetabolite, biljne aklaloide koji sprečavaju formiranje deobnog vretena, citotoksične/antitumorske antibiotike, inhibitore topoizomeraze, antitela, fotosenzitizatore i inhibitore kinaze. Hemoterapijski agensi uključuju jedinjenja koja se koriste u „ciljanoj terapiji” i konvencionalnoj hemoterapiji. Primeri za hemioterapeutske agense uključuju: erlotinib (TARCEVA<®>, Genentech/OSI Pharm.), docetaksel (TAXOTERE<®>, Sanofi-Aventis), 5-FU (fluorouracil, 5-fluorouracil, CAS br. 51-21-8), gemcitabin (GEMZAR<®>, Lilly), PD-0325901 (CAS br. 391210-10-9, Pfizer), cisplatin (cisdiamin, dihlorplatina(II), CAS br. 15663-27-1), karboplatin (CAS br. 41575-94-4), paklitaksel (TAXOL<®>, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), trastuzumab (HERCEPTIN<®>, Genentech), temozolomid (4-metil-5-okso-2,3,4,6,8-pentazabiciklo [4.3.0] nona-2,7,9-trien-9-karboksamid, CAS br. 85622-93-1, TEMODAR<®>, TEMODAL<®>, Schering Plough), tamoksifen ((Z)-2-[4-(1,2-difenilbut-1-enil)fenoksi]-N,N-dimetil-etanamin, NOLVADEX<®>, ISTUBAL<®>, VALODEX®) i doksorubicin (ADRIAMYCIN<®>), Akti-1/2, HPPD i rapamicin.
Dodatni primeri za hemioterapeutske agense uključuju: oksaliplatin (ELOXATIN<®>, Sanofi), bortezomib (VELCADE<®>, Millennium Pharm.), sutent (SUNITINIB<®>, SU11248, Pfizer), letrozol (FEMARA<®>, Novartis), imatinib mezilat (GLEEVEC<®>, Novartis), XL-518
1
(MEK inhibitor, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886 (Mek inhibitor, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (PI3K inhibitor, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (PI3K inhibitor, Novartis), XL-147 (PI3K inhibitor, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), fulvestrant (FASLODEX<®>, AstraZeneca), leukovorin (folinska kiselina), rapamicin (sirolimus, RAPAMUNE<®>, Wyeth), lapatinib (TYKERB<®>, GSK572016, Glaxo Smith Kline), lonafarnib (SARASAR™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenib (NEXAVAR<®>, BAY43-9006, Bayer Labs), gefitinib (IRESSA<®>, AstraZeneca), irinotekan (CAMPTOSAR<®>, CPT-11, Pfizer), tipifarnib (ZARNESTRA™, Johnson & Johnson), ABRAXANE™ (bez kremofora), formulacije sa nanočesticama paklitaksela konstruisane sa albuminom (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), vandetanib (rINN, ZD6474, ZACTIMA<®>, AstraZeneca), hlorambucil, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), temsirolimus (TORISEL<®>, Wyeth), pazopanib (GlaxoSmithKline), kanfosfamid (TELCYTA<®>, Telik), tiotepa i ciklosfosfamid (CYTOXAN<®>, NEOSAR<®>); alkil sulfonate, kao što je busulfan, improsulfan i piposulfan; aziridine kao što je benzodopa, karbokvon, meturedopa, i uredopa; etilenimine i metilamelamine, uključujući altretamin, trietilenemelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosforamid i trimetilomelamin; acetogenine (posebno bulatacin i bulatacinon); kamptotecin (uključujući sintetički analog topotekan); briostatin; kalistatin; CC-1065 (uključujući njegove sintetičke analoge adozelesin, karzelesin i bizelesin); kriptoficine (posebno kriptoficin 1 i kriptoficin 8); dolastatin; duokarmicin (uključujući sintetičke analoge, KW-2189 i CB1-TM1); eleuterobin; pankratistatin; sarkodiktin; spongistatin; azotne iperite, kao što su hlorambucil, hlornafazin, hlorfosfamid, estramustin, ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembicin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil iperit; nitrozouree, kao što su karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin i ranimnustin; antibiotike, kao što su endiinski antibiotici (npr. kaliheamicin, kaliheamicin gama1I, kaliheamicin omegaI1 (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); dinemicin, dinemicin A; bisfosfonate, kao što je klodronat; esperamicin; kao i neokarzinostatin hromofor i povezani hromoproteinski hromofori endiinskih antibiotika), aklacinomisine, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicine, kaktinomicin, karabicin, karminomicin, karzinofilin, hromomicine, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, morfolino-doksorubicin, cijanomorfolino-doksorubicin, 2-pirolino-doksorubicin i deoksidoksorubicin), epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicine, kao što je mitomicin C, mikofenolna kiselina, nogalamicin, olivomicini, peplomicin, porfiromicin, puromicin, kvelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, zorubicin; anti-
1
metabolite, kao što je metotreksat i 5-fluorouracil (5-FU); analoge folne kiseline, kao što je denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; analoge purina, kao što je fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamiprin, tioguanin; analoge pirimidina, kao što je ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin; androgene, kao što je kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; anti-adrenale, kao što je aminoglutetimid, mitotan, trilostan; sredstva za dopunu folne kiseline, kao što je folinska kiselina; aceglaton; aldofosfamid glikozid; aminolevulinsku kiselinu; eniluracil; amsakrin; bestrabucil; bisantren; edatraksat; defofamin; demekolcin; diazikvon; elfornitin; eliptinijum acetat; epotilon; etoglucid; galijum nitrat; hidroksiureu; lentinan; lonidainin; majtansinoide, kao što su majtansin i ansamitocini; mitoguazon; mitoksantron; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; losoksantron; podofillinsku kiselinu; 2-etilhidrazid; prokarbazin; PSK<®>kompleks polisaharida (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoksan; rizoksin; sizofiran; spirogermanijum; tenuazonsku kiselinu; triazikvon; 2,2',2”-trihlortrietilamin; trihotecene (T-2 toksin, verakurin A, roridin A i anguidin); uretan; vindezin; dakarbazin; manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; arabinozid (Ara-C); ciklofosfamid; tiotepu; 6-tioguanin; merkaptopurin; metotreksat; analoge platine, kao što je cisplatin i karboplatin; vinblastin; etopozid (VP-16); ifosfamid; mitoksantron; vinkristin; vinorelbin (NAVELBINE<®>); novantron; tenipozid; edatreksat; daunomicin; aminopterin; kapecitabin (XELODA<®>, Roche); ibandronat; CPT-11; inhibitor topoizomeraze RFS 2000; difluormetilornitin (DMFO); retinoide, kao što je retinoinska kiselina; i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline i derivate bilo kog gorepomenutog jedinjenja.
U definiciju hemoterapijskog agensa spadaju i: (i) antihormonalni agensi koji regulišu ili inhibiraju delovanje hormona na tumore, kao što su antiestrogeni i selektivni modulatori receptora estrogena (SERM), uključujući, na primer, tamoksifen (uključujući NOLVADEX<®>; tamoksifen-citrat), raloksifen, droloksifen, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY117018, onapriston i FARESTON<®>(toremifin-citrat); (ii) inhibitori aromataze koji inhibiraju enzim aromatazu, koji reguliše proizvodnju estrogena u nadbubrežnim žlezdama, kao što su, na primer, 4 (5)-imidazoli, aminoglutetimid, MEGASE<®>(megestrol -acetat), AROMASIN<®>(eksemestan; Pfizer), formestanie, fadrozol, RIVISOR<®>(vorozol), FEMARA<®>(letrozol; Novartis) i ARIMIDEX<®>(anastrozol; AstraZeneca); (iii) antiandrogeni. kao što su flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelin; kao i troksacitabin (analog 1,3-dioksolanskog nukleozida citozina); (iv) inhibitori protein kinaze, kao što su inhibitori MEK (WO 2007/044515); (v) inhibitori lipidne kinaze; (vi) antisense oligonukleotidi, posebno oni
1
koji inhibiraju ekspresiju gena u signalnim putevima koji su uključeni u aberantnu ćelijsku proliferaciju, na primer, PKC-alfa, Raf i H-Ras, kao što je oblimersen (GENASENSE<®>, Genta Inc.); (vii) ribozimi, kao što su inhibitori ekspresije VEGF (npr. ANGIOZYME<®>) i inhibitori ekspresije HER2; (viii) vakcine, kao što su vakcine za gensku terapiju, na primer, ALLOVECTIN<®>, LEUVECTIN<®>i VAXID<®>; PROLEUKIN<®>rIL-2; inhibitori topoizomeraze 1, kao što je LURTOTECAN<®>; ABARELIX<®>rmRH; (ix) antiangiogena sredstva, kao što je bevacizumab (AVASTTN<®>, Genentech); i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline i derivati bilo kojg od gorenavedenih lekova.
U definiciju „hemoterapijskog sredstva” uključena su i terapijska antitela, kao što je alemtuzumab (Campath), bevacizumab (AVASTIN<®>, Genentech); cetuksimab (ERBITUX<®>, Imclone); panitumumab (VECTIBIX<®>, Amgen), rituksimab (RITUXAN<®>, Genentech/Biogen Idec), pertuzumab (OMNITARG™, 2C4, Genentech), trastuzumab (HERCEPTIN<®>, Genentech), tositumomab (Bexxar, Corixia) i konjugat lka antitela, gemtuzumab ozogamicin (MYLOTARG<®>, Wyeth).
Humanizovana monoklonska antitela s terapeutskim potencijalom kao hemoterapeutska sredstva u kombinaciji s Btk inhibitorima iz ovog izuma uključuju: alemtuzumab, apolizumab, aselizumab, atlizumab, bapineuzumab, bevacizumab, bivatuzumab-mertansin, kantuzumab-mertansin, cedelizumab, certolizumab-pegol, cidfusituzumab, cidtuzumab, daklizumab, cidfusituzumab, cidtuzumab, duklizumab, efalizumab, epratuzumab, erlizumab, felvizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicin, inotuzumab ozogamicin, ipilimumab, labetuzumab, lintuzumab, matuzumab, mepolizumab, motavizumab, motovizumab, natalizumab, nimotuzumab, nolovizumab, numavizumab, ocrelizumab, omalizumab, palivizumab, pascolizumab, peefusituzumab, pectuzumab, pertuzumab, pexelizumab, ralivizumab, ranibizumab, reslivizumab, reslizumab, resivizumab, rovelizumab, ruplizumab, sibrotuzumab, siplizumab, sontuzumab, tacatuzumab tetraxetan, tadocizumab, talizumab, teflbazumab, tocilizumab, toralizumab, trastuzumab, tucotuzumab celmoleukin, tucusituzumab, umavizumab, urtoksazumab i visilizumab.
„Metabolit” se odnosi na proizvod koji nastaje metabolizmom određenog jedinjenja ili njegove soli u organizmu. Metaboliti jedinjenja se mogu identifikovati koristeći rutinske tehnike poznate u struci i njihove aktivnosti se određuju korišćenjem testova, kao što su oni opisani u ovom dokumentu. Takvi proizvodi mogu rezultirati, na primer, oksidacijom, redukcijom, hidrolizom, amidacijom, deamidacijom, esterifikacijom, deesterifikacijom, enzimatskim cepanjem, i slično, primenjenog jedinjenja. Shodno tome, pronalazak uključuje metabolite jedinjenja iz ovog pronalaska, uključujući jedinjenja koja su proizvedena
1
postupkom koji uključuje kontakt jedinjenja Formule I ovog pronalaska sa sisarima u periodu vremena dovoljnom da se dobije njegov metabolički proizvod.
Termin „uputstvo za upotrebu” označava uputstvo koje se obično nalazi u prodajnoj ambalaži terapeutskih proizvoda, a koje sadrži informacije o indikacijama, upotrebi, doziranju, primeni, kontraindikacijama i/ili upozorenjima u vezi sa upotrebom takvog terapeutskog proizvoda.
Izraz „hiralna” odnosi se na molekule koji imaju svojstvo nepreklapanja s partnerom koji ima strukturu kao odraz u ogledalu, a izraz „ahiralni” se odnosi na molekule koji se mogu preklopiti sa svojim partnerom koji ima strukturu kao odraz u ogledalu.
Termin „stereoizomeri” se odnosi na jedinjenja koja imaju identičnu hemijsku strukturu, ali se razlikuju u odnosu na raspored atoma ili grupa u prostoru.
„Dijastereomer“ označava stereoizomer sa dva hiralna centra ili više hiralnih centara i čiji molekuli uzajamno nisu kao odrazi u ogledalu. Dijastereomeri imaju različita fizička svojstva, npr. tačke topljenja, tačke ključanja, spektralne osobine i aktivnosti. Smeše dijastereomera mogu se odvojiti pomoću analitičkih postupaka visoke rezolucije, kao što su elektroforeza i hromatografija.
„Enantiomeri“ označavaju dva stereoizomera jednog jedinjenja koji se međusobno ne preklapaju kao odrazi u ogledalu.
Stereohemijske definicije i konvencije koje se ovde koriste uglavnom prate SP Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. i Wilen, S., “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da sadrže asimetrične ili hiralne centre i, stoga, postoje u različitim stereoizomernim oblicima. Namera je da svi stereoizomerni oblici jedinjenja iz pronalaska, uključujući, bez ograničenja, dijastereomere, enantiomere i atropizomere, kao i njihove smese, kao što su racemske smese, čine deo ovog pronalaska. Mnoga organska jedinjenja postoje u optički aktivnim oblicima, tj. Iimaju sposobnost rotiranja ravni polarizovane svetlosti. U opisivanju optički aktivnog jedinjenja, prefiksi D i L, ili R i S, koriste se za označavanje apsolutne konfiguracije molekula oko njegovog hiralnog centra ili njegovih hiralnih centara. Prefiksi d i 1 ili (+) i (-) koriste se za označavanje znaka rotacije polarizovanog svetla od strane jedinjenja, sa (-) ili 1 što znači da je jedinjenje levorotatorno. Jedinjenje s prefiksom (+) ili d je desnorotatorno. Za datu hemijsku strukturu, ovi stereoizomeri su identični osim što su odrazi iz ogledala jedan drugom. Specifični stereoizomer se takođe može nazvati enantiomerom, a smeša takvih izomera se često naziva smeša enantiomera. Smeša u odnosu 50:50 enantiomera se naziva
2
racemska smeša ili racemat, koja se može pojaviti tamo gde nije bilo stereoselekcije ili stereospecifičnosti u hemijskoj reakciji ili procesu. Izrazi „racemska smeša” i „racemat” odnose se na ekvimolarnu mešavinu dve enantiomerne vrste, lišene optičke aktivnosti. Enantiomeri se mogu odvojiti od racemske smeše postupkom hiralnog odvajanja, kao što je superkritična tečna hromatografija (SFC). Dodela konfiguracije na hiralnim centrima u odvojenim enantiomerima može biti privremena, i prikazana u strukturama Tabele 1 u ilustrativne svrhe, dok stereohemijsko određivanje čeka, kao što su rendgenski kristalografski podaci.
Izrazi „tautomer” ili „tautomerni oblik” odnose se na strukturne izomere različitih energija koji mogu da prelaze jedni u druge putem niske energetske barijere. Na primer, protonski tautomeri (takođe poznati i kao prototropni tautomeri) uključuju interkonverzije preko migracije protona, kao što su keto-enolne i imin-enamin izomerizacije. Valentni tautomeri uključuju interkonverzije preko reorganizacije nekih od vezujućih elektrona.
Izraz „farmaceutski prihvatljive soli” označava soli koje nisu biološki ili na drugi način nepoželjne. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju kisele i bazne adicione soli. Izraz „farmaceutski prihvatljiv” označava da supstanca ili kompozicija moraju biti kompatibilne hemijski i/ili toksikološki sa drugim sastojcima koji se nalaze u formulaciji, i/ili sa sisarima koji se leče njima.
Izraz „farmaceutski prihvatljiva kisela adiciona so” označava one farmaceutski prihvatljive soli formirane sa neorganskim kiselinama, kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, karbonska kiselina, fosforna kiselina i organske kiseline izabrane iz grupd alifatičnih, cikloalifatičnih, aromatičnih, aralifatičnih, heterocikličnih, karboksilnih i sulfonskih organskih kiselina, kao što su mravlja kiselina, sirćetna kiselina, propionska kiselina, glikolna kiselina, glukonska kiselina, mlečna kiselina, piruvinska kiselina, oksalna kiselina, jabučna kiselina, maleinska kiselina, malonska kiselina, ćilibarna kiselina, fumarna kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, asparaginska kiselina, askorbinska kiselina, glutaminska kiselina, antranilna kiselina, benzojeva kiselina, cimetna kiselina, bademova kiselina, embonska kiselina, fenilsirćetna kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina i saliciklična kiselina.
Izraz „farmaceutski prihvatljiva bazna adiciona so” označava one farmaceutski prihvatljive soli formirane sa organskom ili neorganskom bazom. Primeri za prihvatljive neorganske baze uključuju soli natrijuma, kalijuma, amonijaka, kalcijuma, magnezijuma, gvožđa, cinka, bakra, mangana i aluminijuma. Soli izvedene iz farmaceutski prihvatljivih organskih netoksičnih baza obuhvataju soli primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina, supstituisanih amina, uključujući i supstituisane amine koji se nalaze u prirodi, cikličnih amina i baznih jonoizmenjivačkih smola, kao što su izopropilamin, trimetilamin, dietilamin, trietilamin, tripropilamin, etanolamin, 2-dietiaminoetanol, trimetamin, dicikloheksilamin, lizin, arginin, histidin, kafein, prokain, hidrabamin, holin, betain, etilendiamin, glukozamin, metilglukamin, teobromin, purin, piperazin, piperidin, N-etilpiperidin, piperidin i poliaminske smole.
„Solvat” se odnosi na asocijaciju ili kompleks jednog ili više molekula rastvarača i jedinjenja pronalaska. Primeri rastvarača koji formiraju solvate uključuju, bez ograničenja, vodu, izopropanol, etanol, metanol, DMSO, etil-acetat, sirćetnu kiselinu i etanolamin.
Izraz „EC50” predstavlja polovinu koncentracije maksimalnog dejstva i koncentraciju određenog jedinjenja u plazmi potrebnu za dostizanje 50% maksimuma određenog dejstva in vivo.
Izraz „Ki” je konstanta inhibicije i predstavlja apsolutni afinitet vezivanje pojedinog inhibitora za receptor. Meri se pomoću testova za kompetitivno vezivanje i jednaka je koncentraciji na mestu gde bi određeni inhibitor zauzeo 50% receptora, ako nije prisutan kompetitivni ligand (npr. radioobeleženi ligand). Vrednosti Ki mogu se logaritamski konvertovati u vrednosti Pki (-log Ki), prema kojima više vrednosti ukazuju na eksponencijalnu veću potentnost.
Izraz je polovina koncentracije maksimalnog inhibitorskog dejstva i predstavlja koncentraciju određenog jedinjenja potrebnu za dostizanje 50% inhibicije biološkog procesa in vitro. Vrednosti IC50mogu se logaritamski konvertovati u vrednosti pIC50(-log IC50), prema kojima više vrednosti ukazuju na eksponencijalnu veću potentnost. IC50vrijednost nije apsolutna vrijednost, ali zavisi od eksperimentalnih uslova npr, korišćene koncentracije, i može se pretvoriti u apsolutnu konstantu inhibicije (Ki) pomoću Čeng-Prusofove jednačine (Cheng-Prusoff) (Biochem Pharmacol (1973) 22: 3099). Mogu se izračunati ostali procenti parametara inhibicije, kao što su IC70,IC90,itd.
Izrazi „jedinjenje iz ovog pronalaska” i „jedinjenja iz predmetnog pronalaska” i „jedinjenja formule I” obuhvataju jedinjenja formule I i stereoizomere, geometrijske izomere, tautomere, solvate i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
Bilo koja formula ili struktura koja je ovde data, uključujući jedinjenja Formule I, takođe treba da predstavlja hidrate, solvate i polimorfe takvih jedinjenja i njihove smeše.
Bilo koja formula i struktura koja je ovde data, uključujući jedinjenja formule I, takođe treba da predstavljaju neobeležene forme, kao i izotopski obeležene forme jedinjenja.
Izotopski obeležena jedinjenja imaju strukture opisane ovde datim formulama, osim što je jedan ili više atoma zamenjen atomom koji ima odabranu atomsku masu ili maseni broj. Primeri izotopa koji se mogu ugraditi u jedinjenja pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su, bez ograničenja 2H (deuterijum, D), 3H (tritijum), 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl i 125I. Različita izotopno obeležena jedinjenja iz ovog pronalaska, na primer ona u koja su ugrađeni radioaktivni izotopi kao što su 3H, 13C i 14C. Takva izotopski obeležena jedinjenja su korisna u metaboličkim studijama, studijama reakcione kinetike, tehnikama detekcije ili snimanja, kao što je pozitronska emisiona tomografija (PET) ili jednofotonska emisiona kompjuterska tomografija (SPECT)], uključujući analize distribucije lekova ili supstrata u tkivu, ili u radioaktivnim tretmanima pacijenata. Deuterijumom označene ili supstituisane terapeutske supstance iz ovog pronalaska mogu imati poboljšana svojstva DMPK (metabolizam lekova i farmakokinetiku), koja se odnose na distribuciju, metabolizam i izlučivanje (ADME). Zamena težim izotopima kao što je deuterijum može obezbediti određene terapijske prednosti usled veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećan in vivo poluživot ili manje potrebne doze. Jedinjenje s oznakom 18F može biti korisno za PET ili SPECT studije. Izotopski obeležena jedinjenja ovog pronalaska mogu se generalno pripremiti postupcima opisanim u šemama, ili u primerima i preparatima koji su opisani u daljem tekstu, tako što se neizotopski označeni reagens zamenjuje lako dostupnim izotopski označenim reagensom. Dalje, supstitucija težim izotopima, kao što je deuterijum (tj. 2H ili D), može pružiti neke terapeutske prednosti koje proističu iz veće metaboličke stabilnosti, npr. povećan poluživot in vivo, ili smanjenje potrebne doze. Razume se da se deuterijum, u ovom kontekstu, smatra supstituentom u jedinjenju formule (I). Koncentracija tako težeg izotopa, posebno deuterijuma, može se definisati izotopskim faktorom obogaćivanja. U jedinjenjima ovog pronalaska bilo koji atom, koji nije specifično označen kao određeni izotop, treba da predstavlja bilo koji stabilan izotop tog atoma. Ukoliko nije drugačije navedeno, kada se pozicija specifično označava kao „H” ili „vodonik”, podrazumeva se da pozicija ima vodonik u svom prirodnom izotopskom sastavu. Prema tome, u jedinjenjima ovog pronalaska bilo koji atom koji je specifično označen kao deuterijum (D) označava deuterijum.
HETEROARIL-PIRIDON I AZA-PIRIDONSKA JEDINJENJA
Ovaj pronalazak obezbeđuje heteroaril-piridon i aza-piridonska jedinjenja Formule I, uključujući Formule Ia-Ii, i njihove farmaceutske formulacije, koje su potencijalno korisne u lečenju bolesti, stanja i/ili poremećaja moduliranih Btk kinazom:
2
uključujući njihove stereoizomere, tautomere ili farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu:
X<1>je CR<1>ili N;
X<2>je CR<2>ili N;
X<3>je CR<3>ili N;
pri čemu su N jedan ili dva od X<1>, X<2>i X<3>;
R<1>, R<2>i R<3>su nezavisno odabrani od H, F, Cl, −NH2, −NHCH3, −N(CH3)2, −OH, −OCH3, −OCH2CH3, −OCH2CH2OH i C1−C3alkil;
R<4>je odabran iz H, F, Cl, CN, -CH2OH,-CH(CH3)OH, -C(CH3)2OH, -CH(CF3)OH, -CH2F, -CHF2, -CH2CHF2, -CF3, -C(O)NH2, -C(O)NHCH3, -C(O)N(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2,-NHC(O)CH3,-OH, -OCH3,-OCH2CH3,-OCH2CH2OH, ciklopropil, ciklopropilmetil, 1-hidroksiciklopropil, imidazolil, pirazolil, 3-hidroksi oksetan-3-il, oksetan-3-il i azetidin-1-il;
R<5>je opciono supstituisan C6C20aril, C3-C12karbociklil, C2-C20heterociklil, C1-C20heteroaril, -(C6C20aril)-(C2-C20heterociklil), -(C1-C20heteroaril)-(C2-C20heterociklil), -(C1-C20heteroaril)-(C2-C20heterociklil)-(C2-C20heterociklil), -(C1-C20heteroaril)-(C2-C20heterociklil)-(C1-C6alkil), -(C1-C20heteroaril)-(C1-C6alkil), -(C2)-C20heterociklil)-(C1-C6alkil), -(C2-C20heterociklil)-(C3-C12karbociklil), -(C1-C20heteroaril)-(C3-C12karbociklil), ili-(C1-C20heteroaril)-C(=O)-(C2-C20heterociklil);
R<6>je H, F, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2OH, −NH2, ili-OH;
R<7>je izabran iz struktura:
pri čemu valovita linija označava mesto vezivanja; a
Y<1>i Y<2>se nezavisno biraju između CH i N, pri čemu, Y<1>i Y<2>nisu svaki N;
2
pri čemu su alkil, karbociklil, heterociklil, aril i heteroaril opciono supstituisani jednom ili većim brojem grupa nezavisno izabrani od F, Cl, Br, I, -CN, -CH3, -CH2CH3,-CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)2, -CH2OH, -CH2OCH3, -CH2CH2OH, -C(CH3)2OH, -CH(OH)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH2OH, -CH2CH2SO2CH3, -CH2OP(O)(OH)2, -CH2F,-CHF2, −CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -CO2H, -COCH3, -CO2CH3, -CO2C(CH3)3, -COCH(OH)CH3, −CONH2, −CONHCH3, -CON(CH3)2, -C(CH3)2CONH2, −NH2, −NHCH3, −N(CH3)2, −NHCOCH3, −N(CH3)COCH3, −NHS(O)2CH3, −N(CH3)C(CH3)2CONH2, −N(CH3)CH2CH2S(O)2CH3, −NO2, = O, -OH, -OCH3, −OCH2CH3, −OCH2CH2OCH3, −OCH2CH2OH, -OCH2CH2N(CH3)2, -OP(O)(OH)2, −S(O)2N(CH3)2, −SCH3, −S(O)2CH3, −S(O)3H, ciklopropil, oksetanil, azetidinil, 1-metilazetidin-3-il) oksi, N-metil-N-oksetan-3-ilamino, azetidin-1-ilmetil i morfolino.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja Formule I uključuju jedinjenja Formule Iac:
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja Formule I takođe uključuju jedinjenja Formule Id-i:
2
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja formule I uključuju sledeće, pri čemu X<1>je N, X<1>je N, X<1>je N, X<1>i X<3>su N, X<1>i X<2>su N ili X<2>i X<3>su N, kao što je prikazano u Formulama Ic-Ii.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja formule I uključuju sledeće, pri čemu R<5>je opciono supstituisana C1−C20heteroaril odabran od pirazolila, piridinila, pirimidinila, 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-il, 5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazola [1, 5-a] pirazin-2-il, 6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-il, i 1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-il.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja formule I uključuju sledeće, pri čemu R<5>je-(C1−C20heteroaril)-(C2−C20heterociklil), pri čemu je heteroaril opciono supstituisani piridinil i heterociklil je opciono supstituisani piperazinil.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja Formule I uključuju sledeće, pri čemu R<5>je fenil, po izboru supstituiran jednom ili većim brojem grupa odabranih iz F, Cl,-CH3,-S(O)2CH3,ciklopropil, azetidinil, oksetanil i morfolino.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja Formule I uključuju sledeće, pri čemu je R<5>odabran od struktura:
2
�
�
pri čemu valovita linija označava mesto vezivanja.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja Formule I uključuju sledeće, pri čemu je R<5>:
pri čemu je R<8>odabran iz H, -CH3,- CH2OCH3,-CH2CH3,-CH(CH3)2,-CH2CH2OH, -CH2CH2OCH3,-CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2CF3, -CH2CHF2, -CH(CH3)CN, -C(CH3)2CN, -CH2CN, -C(O)CH3, C(O)CH2CH3, -C(O)CH(CH3)2, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -OH, -OCH3, -OCH2CH3,-CH2CH2OH, ciklopropil, i oksetanil.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja Formule I uključuju sledeće, pri čemu je R<6>CH3.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja Formule I uključuju sledeće, pri čemu Y<1>je CH i Y<2>je N, Y<1>N i Y<2>je CH, Y<1>i Y<2>su svaki CH, ili Y<1>i Y<2>su svaki CH i R<6>je CH3.
Egzemplarni primeri izvođenja jedinjenja Formule I uključuju jedinjenja u tabelama 1 i 2.
Jedinjenja Formule 1 iz ovog pronalaska mogu da sadrže asimetrične ili hiralne centre i, stoga, postoje u različitim stereoizomernim oblicima. Namera je da svi stereoizomerni oblici jedinjenja iz pronalaska, uključujući, bez ograničenja, dijastereomere, enantiomere i atropizomere, kao i njihove smeše, kao što su racemske smeše, čine deio ovog pronalaska.
Pored toga, ovaj pronalazak obuhvata sve dijastereomere, uključujući cis-trans (geometrijske) i konformacijske izomere. Na primer, ako jedinjenje Formule I sadrži dvostruku vezu ili sjedinjeni prsten, cis-i trans- forme, kao i njihove smeše, obuhvaćeni su opsegom predmetnog pronalaska.
U ovde prikazanim strukturama, pri čemu stereohemija bilo kog određenog hiralnog atoma nije navedena, svi stereoizomeri su razmotreani i uključeni kao jedinjenja pronalaska. Tamo gde je stereohemija označena punim klinom ili isprekidanom linijom koja predstavlja određenu konfiguraciju, onda je taj stereoizomer tako naveden i definisan.
Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu postojati u nesolventnim, kao i u solventnim oblicima, sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima, kao što su voda, etanol, i slično, i pronalazak nameravano obuhvata solventne i nesolventne oblike.
Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe postojati u različitim tautomernim oblicima, a svi takvi oblici su obuhvaćeni opsegom pronalaska. Izrazi „tautomer” ili „tautomerni oblik” odnose se na strukturne izomere različitih energija koji mogu da prelaze jedni u druge putem niske energetske barijere. Na primer, protonski tautomeri (takođe poznati i kao prototropni tautomeri) uključuju interkonverzije preko migracije protona, kao što su keto-enolne i imin-enamin izomerizacije. Valentni tautomeri uključuju interkonverzije preko reorganizacije nekih od vezujućih elektrona.
BIOLOŠKA EVALUACIJA
Relativne efikasnosti jedinjenja Formule I kao inhibitora enzimske aktivnosti (ili druge biološke aktivnosti) mogu se utvrditi određivanjem koncentracija na kojima svako jedinjenje inhibira aktivnost u predefinisanoj meri i zatim upoređuje rezultate. Tipično, poželjnije određivanje je koncentracija koja inhibira 50% aktivnosti u biohemijskom testu, odnosno 50% koncentracije inhibitora ili „IC50”.Određivanje IC50vrednosti može se postići
1
korišćenjem konvencionalnih tehnika poznatih u struci. U načelu, IC50može se odrediti merenjem aktivnosti datog enzima u prisustvu niza koncentracija inhibitora u okviru studije. Eksperimentalno dobijene vrednosti enzimske aktivnosti zatim se upoređuju u odnosu na korišćene koncentracije inhibitora. Koncentracija inhibitora koja pokazuje 50% aktivnosti enzima (u odnosu na aktivnost u odsustvu inhibitora) uzima se kao vrednost IC50. Analogno tome, druge koncentracije inhibitora mogu se definisati odgovarajućim određivanjem aktivnosti. Na primer, u nekim postavkama može biti poželjno da se uspostavi 90% koncentracije inhibitora, tj. IC90, itd.
Jedinjenja formule I su testirana standardnom biohemijskom analizom Btk kinaza (Primer 901).
Opšti postupak za standardnu ćelijsku analizu Btk kinaze koja se može koristiti za analizu jedinjenja formule I jeste Btk analiza Ramosovih ćelija (primer 902).
Standardna analiza ćelijske proliferacije B-ćelija može se koristiti za ispitivanje jedinjenja formule I sa B-ćelijama prečišćenim od slezine Balb/c miševa (primer 903).
Standardna analiza ćelijske proliferacije T-ćelija može se koristiti za ispitivanje jedinjenja formule I sa T-ćelijama prečišćenim od slezine Balb/c miševa (primer 904).
Test inhibicije CD86 može se izvesti na jedinjenjima Formule I za inhibiciju aktivnosti B-ćelija korišćenjem svih mišjih splenocita prečišćenih od slezine Balb/c miševa starih 8–16 nedelja (primer 905).
Analiza preživljavanja B-ALL ćelija može se izvesti na jedinjenjima Formule I da bi se izmerio broj živih B-ALL ćelija u kulturi (primer 906).
Analiza CD69 pune krvi može se sprovesti na jedinjenjima Formule I da bi se odredila sposobnost jedinjenja da inhibiraju produkciju CD69 B-limfocitima u humanoj punoj krvi aktiviranoj umrežavanjem površinskog IgM sa kozjim F (ab') 2 anti-humanim IgM (primer 907). CD69 je lektin tipa II tipa C, uključen u migraciju limfocita i sekreciju citokina. Ekspresija CD69 predstavlja jedan od najranije dostupnih pokazatelja aktivacije leukocita i njihova brza indukcija se odvija putem transkripcione aktivacije (Vazquez et al (2009) Jour. of Immunology Published October 19, 2009, doi:10.4049/jimmunol.0900839). Stimulacija inhibicija antigenskog receptora zavisna od koncentracije pomoću selektivnih Btk inhibitora indukuje površinsku ekspresiju ćelije markera aktivatcije limfocita CD69 (Honigberg et al (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. 107(29):13075-13080). Prema tome, inhibicija CD69 selektivnim Btk inhibitorima može biti u korelaciji sa terapijskom efikasnošću određenih poremećaja B-ćelija. Vrednosti FACS IC70 CD69 humane krvi prikazane su za primere jedinjenja Formule I u Tabelama 1 i 2.
2
Citotoksična ili citostatička aktivnost primera jedinjenja Formule I može se meriti: uspostavljanjem proliferirajuće linije tumorskih ćelija sisara u mediju za kulturu ćelija, dodavanjem jedinjenja Formule I, uzgoja ćelija za period od oko 6 sati do oko 5 dana; i merenje vijabilnosti ćelija (Primer 908). Ćelijski zasnovane in vitro analize se koriste za merenje održivosti, odnosno proliferacije (IC50), citotoksičnosti (EC50) i indukcije apoptoze (aktivacija kaspaze) i mogu biti korisne u predviđanju kliničke efikasnosti za hematološke maligne bolesti i solidne tumore.
In vitro potentnost kombinacije jedinjenja Formule I sa hemoterapeutskim agensima može se izmeriti analizom ćelijske proliferacije iz primera 908; CellTiter-Glo<®>luminiscentna analiza ćelijske vijabilnosti, komercijalno dostupna od Promega Corp., Madison, WI. Ovaj postupak homogene analize zasniva se na rekombinantnoj ekspresiji luciferaze Coleoptera (US 5583024; US 5674713; US 5700670) i određuje broj živih ćelija u kulturi na osnovu kvantifikacije prisutnog ATP, indikatora metabolički aktivnih ćelija (Crouch et al (1993) J. Immunol., Meth., 160: 81-88, US 6602677). CellTiter-Glo<®>test je sproveden u formatu sa 96 ili 384 bunarčića, što ga čini pogodnim za automatsko skeniranje visokog protoka (HTS) (Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6: 398-404). Postupak homogene analize uključuje dodavanje pojedinačnog reagensa (CellTiter-Glo<®>reagens) direktno u ćelije uzgojene u mediju sa dodatkom seruma. Ispiranje ćelija, uklanjanje medijuma i pipetiranje u više koraka nije potrebno. Sistem detektuje svega 15 ćelija/bunarčiću u formatu od 384 bunarčića za 10 minuta nakon dodavanja reagensa i mešanja.
Homogeni format „dodavanje mešovitih-mera” dovodi do lize ćelija i generisanja luminiscentnog signala proporcionalnog količini prisutnog ATP. Količina ATP je direktno proporcionalna broju ćelija prisutnih u kulturi. CellTiter-Glo<®>test generiše luminiscentni signal „svetlećeg tipa”, koji se proizvodi reakcijom luciferaze, koja ima poluživot obično veći od pet sati, u zavisnosti od tipa ćelije i korišćenog medija. Žive ćelije se reflektuju u jedinicama relativne luminiscencije (RLU). Supstrat, luciferin tvrdokrilaca (Beetle Luciferin), oksidativno se dekarboksilizuje rekombinantnom luciferazom svica uz istovremenu konverziju ATP u AMP i stvaranje fotona. Produženi poluživot eliminiše potrebu za upotrebom injektora za reagense i pruža fleksibilnost za kontinuiranu ili serijsku obradu više ploča. Ovaj test proliferacije ćelija može se koristiti sa različitim formatima za više uzoraka, npr. format 96 ili 384 bunarčića. Podaci se mogu snimiti pomoću luminometra ili uređaja za snimanje CCD kamere. Količina luminescencije je prikazana kao jedinica relativne svetlosti (RLU), merena tokom vremena.
Anti-proliferativna efikasnost jedinjenja Formule I i kombinacija sa hemoterapeutskim agensima meri se CellTiter-Glo<®>testom (primer 908) protiv određenih hematoloških tumorskih ćelijskih linija. Vrednosti EC50su utvrđene za ispitivana jedinjenja i kombinacije.
Primeri jedinjenja Formule I u tabelama 1 i 2 napravljeni su, karakterizovani i testirani u pogledu inhibicije Btk prema postupcima ovog pronalaska, i imaju sledeće strukture i odgovarajuća imena (ChemDraw Ultra, Verzija 9.0.1 i ChemBioDraw, Verzija 11.0, CambridgeSoft Corp., Cambridge MA). Kada je više od jednog imena povezano sa jedinjenjem Formule I ili intermedijerom, hemijska struktura će definisati jedinjenje (samo primeri 107, 108, 130, 141, 144, 150, 153, 158, 163, 164, 168, 173, 179, 180, 185 i 188 čine deo pronalaska).
Tabela 1.
4
4
4
4
4
4
4
4
1
2
4
Tabela 2.
1
2
4
1
2
4
1
2
4
PRIMENA JEDINJENJA FORMULE I
Jedinjenja prema pronalasku mogu se primenjivati bilo kojim putem koji odgovara stanju koje se leči. Prikladni putevi uključuju oralno, parenteralno (uključujući potkožno, intramuskularno, intravensko, intraarterijsko, intradermalno, intratekalno i epiduralno), transdermalno, rektalno, nazalno, lokalno (uključujući bukalno i sublingvalno), vaginalno, intraperitonealno, intrapulmonalno i intranazalno. Za lokalno imunosupresivno lečenje, jedinjenja se mogu primenjivati intralezionalnom administracijom, uključujući perfuziju ili na drugi način kontaktiranje transplantata sa inhibitorom pre transplantacije. Treba imati na umu da poželjni put može varirati u skladu sa, na primer, stanjem primaoca. Kada se jedinjenje daje oralno, može se formulisati kao pilula, kapsula, tableta, itd. sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijentom. Kada se jedinjenje daje parenteralno, može se formulisati sa farmaceutski prihvatljivim parenteralnim nosačem i u obliku jedinične doze za injekcije, kao što je detaljno opisano u nastavku.
Doza za lečenje ljudskih pacijenata može biti u rasponu od oko 10 mg do oko 1000 mg jedinjenja formule I. Tipična doza može biti oko 100 mg do oko 300 mg jedinjenja. Doza se može primeniti jednom dnevno (QID), dva puta dnevno (BID), ili češće, u zavisnosti od farmakokinetičkih i farmakodinamičkih svojstava, uključujući apsorpciju, distribuciju, metabolizam i izlučivanje određenog jedinjenja. Dodatno, faktori toksičnosti mogu uticati na doziranje i režim primene. Kada se daju oralno, pilula, kapsula ili tableta mogu se unositi dnevno ili ređe tokom određenog vremenskog perioda. Režim se može ponoviti u više ciklusa terapije.
JEDINJENJA ZA UPOTREBU U POSTUPCIMA LEČENJA POMOĆU JEDINJENJA FORMULE I
Samo jedinjenja za koja se tvrdi da se koriste u lečenju reumatoidnog artritisa, lupusa, urtikarije i multiple skleroze čine deo pronalaska.
Jedinjenja formule I iz ovog pronalaska su korisna za tretiranje ljudi ili pacijenata životinja koji pate od bolesti ili poremećaja koji proističu iz abnormalnog rasta ćelija, funkcije ili ponašanja povezanog sa Btk kinazom, kao što su imuni poremećaj, kardiovaskularne bolesti, virusna infekcija, upala, metabolizam/endokrini poremećaj ili neurološki poremećaj, može se tako tretirati postupkom koji se sastoji od davanja jedinjenja iz ovog pronalaska kako je gore definisano. Ljudski ili životinjski pacijent koji boluje od raka može se takođe lečiti postupkom koji obuhvata primenu jedinjenja iz ovog pronalaska kao što je gore definisano. Stanje pacijenta se time može unaprediti ili poboljšati.
Jedinjenja formule I mogu biti korisna za in vitro, in situ i in vivo dijagnozu ili tretman ćelija sisara, organizama ili povezanih patoloških stanja, kao što su sistemska i lokalna upala, imunološke upalne bolesti kao što su reumatoidni artritis, imunosupresija, odbacivanje transplantata, alergije, ulcerativni kolitis, Kronova bolest, dermatitis, astma, sistemski eritematozni lupus, Sjögrenov sindrom, multipla skleroza, skleroderma/sistemska skleroza, idiopatska trombocitopenijska purpura (ITP), vaskulitis, antineutrofilna citoplazmična antitela (ANCA), vaskulitis, hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP), psorijaza i opšta zaštitna dejstva na zglobove.
Jedinjenja za upotrebu u postupcima takođe uključuju lečenje bolesti, kao što su artritične bolesti, kao što su reumatoidni artritis, monoartikularni artritis, osteoartritis, gihtni artritis, spondilitis; Behčetov sindrom; sepsa, septički šok, endotoksični šok, gram-negativna sepsa, gram-pozitivna sepsa i sindrom toksičnog šoka; sindrom višestrukih povreda organa koji je posledica septikemije, traume ili krvarenja; oftalmološki poremećaji, kao što su alergijski konjunktivitis, vernalni konjunktivitis, uveitis i oftalmopatija povezana sa štitnjačom; eozinofilni granulom; plućni ili respiratorni poremećaji kao što su astma, hronični bronhitis, alergijski rinitis, ARDS, hronična upalna bolest pluća (npr. hronična opstruktivna plućna bolest), silikoza, plućna sarkoidoza, upala pluća, alveolitis, vaskulitis, emfizem, pneumonija, bronhiektazija i toksičnost pluća; reperfuzijske povrede miokarda, mozga ili ekstremiteta; fibroza kao što je cistična fibroza; formiranje keloida ili stvaranje ožiljnog tkiva; ateroskleroza; autoimune bolesti, kao što su sistemski eritematozni lupus (SLE), autoimuni tiroiditis, multipla skleroza, neki oblici dijabetesa i Rejnodov sindrom; i poremećaji odbacivanja transplantata kao što je GVHD i odbacivanje alografta; hronični glomerulonefritis; upalne bolesti creva, kao što su hronična upalna bolest creva (CIBD), Kronova bolest, ulcerativni kolitis i nekrotizirajući enterokolitis; upalne dermatoze, kao što su kontaktni dermatitis, atopični dermatitis, psorijaza ili urtikarija; groznica i mijalgija zbog infekcije; upalni poremećaji centralnog ili perifernog nervnog sistema, kao što su meningitis, encefalitis i povreda mozga ili kičmene moždine usled manje traume; Sjogrenov sindrom; bolesti koje uključuju dijabetes leukocita; alkoholni hepatitis; bakterijska pneumonija; bolesti posredovane kompleksom antigen-antitelo; hipovolemijski šok; dijabetes melitus tipa I; akutna i odgođena preosetljivost; stanja bolesti usled leukocitne diskrazije i metastaza; toplotne povrede; sindromi povezani s transfuzijom granulocita; i toksičnost indukovana citokinima.
Jedinjenja za upotrebu u postupcima takođe uključuju lečenje kancera izabranih iz grupe karcinoma dojke, jajnika, grlića materice, prostate, testisa, genitourinarnog trakta, jednjaka, larinksa, glioblastoma, neuroblastoma, želuca, kože, keratoakantoma, pluća,
1
epidermoidnog karcinoma, makrocelularnog karcinoma, nemikrocelulalrnog karcinom pluća ćelija (NSCLC), mikrocelularnog karcinoma, adenokarcinom pluća, kostiju, debelog creva, adenom, pankreas, adenokarcinom, karcinom štitaste žlezde, nediferencirani karcinom, papilarni karcinom, seminom, melanom, sarkom, karcinom bešike, karcinom jetre i žučnih puteva, bubrežni karcinom, karcinom pankreasa, mijeloidni poremećaji, limfom, vlasaste ćelije, bukalna šupljina, nazo-ždrelo, ždrelo, usna, jezik, usta, tanko crevo, , debelog creva, rektuma, mozga i centralnog nervnog sistema, Hodžkinsonova, leukemija, bronhije, štitnjača, jetra i intrahepatični žučni kanal, hepatocelularnu, želudačanu, gliom/glioblastomsku, endometrijsku, melanomsku, bubrežnu i bubrežnu karlicu, mokraćnu bešiku, korpus materice, vrat materice, multipli mijelom, akutna mijelogena leukemija, hronična mijelogena leukemija, limfocitna leukemija, hronična limfna leukemija (CLL), mijeloidna leukemija, usna šupljina i ždrelo, ne-Hodžkinsonov limfom, melanom i vilični adenom debelog creva.
Jedinjenja koja se koriste u postupcima mogu biti korisna u lečenju subjekata koji jesu ili mogu biti predmet reperfuzijske povrede, tj. povrede koja je rezultat situacija u kojima tkivo ili organ doživljava period ishemije praćen reperfuzijom. Termin „ishemija” se odnosi na lokalizovanu anemiju tkiva zbog opstrukcije dotoka arterijske krvi. Prolazna ishemija praćena reperfuzijom karakteristično dovodi do aktivacije neutrofila i transmigracije kroz endotelijum krvnih sudova u zahvaćenom području. Akumulacija aktiviranih neutrofila dovodi do generisanja reaktivnih metabolita kiseonika, što oštećuje komponente uključenog tkiva ili organa. Ovaj fenomen „reperfuzijske povrede” se obično povezuje sa stanjima kao što su vaskularni udar (uključujući globalnu i fokalnu ishemiju), hemoragični šok, ishemija miokarda ili infarkt, transplantaciju organa i cerebralni vazospazam. Da ilustrujemo, reperfuzijska povreda se javlja po završetku procedura za srčane premosnice ili tokom srčanog zastoja, kada srce, jednom kada je sprečeno da primi krv, počne da reperfuzira. Očekuje se da inhibicija aktivnosti Btk može rezultirati smanjenim količinama reperfuzijske povrede u takvim situacijama.
FARMACEUTSKE FORMULACIJE
Da bi se koristilo jedinjenje iz ovog pronalaska za terapeutski tretman sisara, uključujući ljude, ono je normalno formulisan u skladu sa standardnom farmaceutskom praksom kao farmaceutska kompozicija. U skladu sa ovim aspektom pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz ovog pronalaska zajedno sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačem ili nosačem.
Tipična formulacija se priprema mešanjem jedinjenja iz predmetnog pronalaska i nosača, rastvarača ili ekscipijensa. Pogodni nosači, razblaživači i ekscipijensi su dobro
2
poznati stručnjacima, i uključuju materijale kao što su ugljeni hidrati, voskovi, vodorastvorljivi i/ili bubreći polimeri, hidrofilni ili hidrofobni materijali, želatin, ulja, rastvarači, voda, i slično. Određeni nosač, razblaživač ili ekscipijens koji će se koristiti zavisi od načina i svrhe za koju se primenjuje jedinjenje iz predmetnog pronalaska.
Rastvarači se generalno biraju na osnovu rastvarača koje stručnjaci iz struke prepoznaju kao sigurne (GRAS) za davanje sisarima. Uopšteno, sigurni rastvarači su netoksični vodeni rastvarači, kao što su voda i drugi netoksični rastvarači koji su rastvorljivi ili se mešaju u vodi. Pogodni vodeni rastvarači uključuju vodu, etanol, propilen-glikol, polietilen-glikole (npr. PEG 400, PEG 300), itd. i njihove smeše. Formulacije mogu takođe sadržati jedan ili više pufera, stabilizatora, surfaktanata, sredstava za vlaženje, lubrikanata, emulgatora, sredstava za suspendovanje, konzervanasa, antioksidanasa, sredstava za zamućivanje, glidanasa, sredstava za preradu, boja, zaslađivača, mirisa, aroma i drugih poznatih aditiva koji obezbeđuju elegantnu prezentaciju leka (tj. jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutske kompozicije), ili pomažu u proizvodnji farmaceutskog proizvoda (tj. leka).
Formulacije se mogu pripremiti pomoću klasičnih postupaka rastvaranja i mešanja. Na primer, supstanca leka u rasutom stanju (tj. jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili stabilizovani oblik jedinjenja, npr. kompleks sa derivatom ciklodekstrina ili drugim poznatim kompleksirajućim agensom) rastvori se u pogodnom rastvaraču u prisustvu jednog ili više gore opisanih ekscipijenasa. Jedinjenje predmetnog pronalaska je tipično formulisano u farmaceutske dozne oblike da se obezbedi lako kontrolisano doziranje leka, i da se omogući komplijansa pacijenta sa propisanim režimom.
Farmaceutska kompozicija (ili formulacija) za primenu može biti spakovana na razne načine, u zavisnosti od postupka primene leka. Generalno, artikal za distribuciju uključuje posudu u kojoj se nalazi farmaceutska formulacija u odgovarajućoj formi. Pogodne posude su dobro poznate stručnjacima, i uključuju materijale kao što su boce (plastične i staklene), kesice, ampule, plastične kese, metalne cilindre, i slično. Posuda može takođe da sadrži neprobojnu zaštitu da se spreči neželjeni pristup sadržaju pakovanja. Pored toga, posuda ima na sebi etiketu koja opisuje sadržaj posude. Etiketa može takođe da sadrži odgovarajuća upozorenja.
Farmaceutske formulacije jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se pripremiti za različite puteve i tipove primene. Na primer, jedinjenje Formule I koje ima željeni stepen čistoće može opciono biti pomešano sa farmaceutski prihvatljivim razblaživačima, nosačima, ekscipijensima ili stabilizatorima (Remington's Pharmaceutical Sciences (1980), 16. izdanje, Osol, A. Ed.), u obliku liofilizirane formulacije, usitnjenog praha ili vodenog rastvora. Formulacija se može izvesti mešanjem na sobnoj temperaturi na odgovarajućem pH, i sa željenim stepenom čistoće, sa fiziološki prihvatljivim nosačima, tj. nosačima koji su netoksični za primaoca u primenjenim dozama i koncentracijama. pH formulacije zavisi uglavnom od konkretne primene i koncentracije jedinjenja, ali može biti od oko 3 do oko 8. Formulacija u acetatnom puferu pri pH 5 pogodna je realizacija.
Jedinjenje obično može da se čuva kao čvrsta kompozicija, liofilizovana formulacija ili vodeni rastvor.
Farmaceutske kompozicije pronalaska će biti formulisane, dozirane i primenjene na način, u pogledu količine, koncentracije, rasporeda, toka, vehikuluma i puta primene, u skladu sa dobrom medicinskom praksom. Faktori za razmatranje u ovom kontekstu uključuju konkretni poremećaj koji se leči, konkretnog sisara koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok poremećaja, mesto isporuke agensa, postupak primene, raspored primene i ostale faktore poznate lekarima. „Terapeutski efikasna količina” jedinjenja koje će se davati biće vođena takvim razmatranjima, i to je minimalna količina potrebna da se spreči, poboljša, ili leči poremećaj posredovan faktorom koagulacije.
Kao opšta pretpostavka, početna farmaceutski efikasna količina inhibitora koje se daje parenteralno po dozama, biće u opsegu od oko 0,01 mg/kg – 100 mg/kg, odnosno oko 0,1 mg/kg do 20 mg/kg telesne težine pacijenta dnevno, sa tipičnim početnim opsegom upotrebljenog jedinjenja od 0,3 mg/kg/dan do 15 mg/kg/dan.
Prihvatljivi nosači, ekscipijensi ili stabilizatori su netoksični za primaoca u primenjenim dozama i koncentracijama, i uključuju pufere, kao što je fosfatni, citratni i puferi drugih organskih kiselina; antioksidanse, uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervanse (kao što je oktadecildimetilbenzil amonijum-hlorid; heksametonijum-hlorid; benzalkonijum-hlorid, benzetonijum-hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabene, kao što je metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); polipeptide male molekulske mase (manje od 10 ostataka); proteine, kao što je serum albumin, želatin ili imunoglobulini; hidrofilne polimere, kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline, kao što je glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin ili lizin; monosaharide, disaharide i druge ugljene hidrate, uključujući glukozu, manozu ili dekstrine; helatne agense, kao što je EDTA; šećere, kao što je saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; kontra-jone koji grade soli, kao što je natrijum; metalne komplekse (npr. kompleksi Zn-protein); i/ili nejonske surfaktante, kao što je TWEEN™, PLURONICS™ ili polietilen glikol (PEG). Aktivni farmaceutski sastojci mogu takođe da se nalaze u mikrokapsulama pripremljenim, na primer,
4
tehnikama koacervacije ili interfacijalne polimerizacije, na primer, mikrokapsule od hidroksimetilceluloze, odnosno želatinske mikrokapsule i mikrokapsule od poli-(metilmetakrilata), u koloidnim sistemima za isporuku leka (na primer, lipozomi, albuminske mikrosfere, mikroemulzije, nanočestice i nanokapsule), ili u makroemulzijama. Takve tehnike su objavljene u Remington's Pharmaceutical Sciences 16. izdanje, Osol A. (izd.) (1980).
Mogu se pripremiti preparati sa zadržanim otpuštanjem jedinjenja Formule I. Prikladni primeri preparata sa produženim oslobađanjem uključuju polupropusne matrice čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže jedinjenje formule I čije su matrice u formi oblikovanih proizvoda, npr. filmova ili mikrokapsula. Primeri matrica sa produženim oslobađanjem uključuju poliestre, hidrogele (na primer, poli(2-hidroksietil-metakrilat) ili poli(vinilalkohol)), polilaktide (US 3773919), kopolimere L-glutaminske kiseline i gama-etil-L-glutamata, nerazgradivi etilen-vinil acetat, razgradive kopolimere mlečne kiseline i glikolne kiseline, kao što su LUPRON DEPOT™ (injektirajuće mikrosfere sastavljene od kopolimera mlečne kiseline, glikolne kiseline i leuprolid acetata) i poli-D-(-)-3-hidroksibutirnu kiselinu.
Farmaceutske formulacije uključuju one koje su pogodne za ovdeopisane puteve primene. Formulacije mogu pogodno biti predstavljene u jediničnom doznom obliku i mogu se dobiti bilo kojim postupkom dobro poznatom u farmaciji. Tehnike i formulacije generalno se nalaze u Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Takvi postupci uključuju korak povezivanja aktivne supstance sa nosačem koji čini jedan ili više pomoćnih supstanci. Generalno, formulacije se pripremaju jednobraznim i bliskim dovođenjem u vezu aktivnog jedinjenja sa tečnim nosačima, ili fino raspoređenim čvrstim nosačima, ili oba, a zatim, po potrebi, oblikovanjem proizvoda.
Formulacije jedinjenja Formule I koje su pogodne za oralnu primenu mogu se pripremiti kao diskretne jedinice kao što su pilule, kapsule, kašete ili tablete od kojih svaka sadrži prethodno određenu količinu jedinjenja Formule I. Komprimovane tablete se mogu pripremiti komprimovanjem u pogodnoj mašini aktivni sastojak u slobodnoj tečnoj formi kao što je prah ili granule, po izboru pomešan sa vezivom, lubrikantom, inertnim diluentom, konzervansom, površinski aktivnim ili disperzivnim sredstvom. Oblikovane tablete se mogu napraviti pomoću kalupa, odgovarajuće mašine i smeše aktivnog sastojka u prahu navlaženog inertnim tečnim diluentom. Tablete se mogu opciono obložiti ili zarezati i opciono su formulisane tako da omogućavaju sporo ili kontrolisano oslobađanje aktivnog sastojka. Tablete, pastile, lozenge, vodene ili uljane suspenzije, disperzivni praškovi ili granule, emulzije, tvrde ili meke kapsule, npr. želatinske kapsule, sirupi ili eliksiri mogu se pripremiti za oralnu upotrebu. Formulacije jedinjenja iz ovog pronalaska (npr. jedinjenja formule I ili II ili njihova izvođenja) namenjene za oralnu upotrebu mogu se pripremiti prema bilo kom postupku, koji je poznat u struci, za proizvodnju farmaceutskih kompozicija i takve kompozicije mogu da sadrže jedan ili više agenasa, uključujući agense za zaslađivanje, sredstva za poboljšanje ukusa, sredstva za bojenje i sredstva za očuvanje, kako bi se obezbedio ukusan preparat. Prihvatljive su tablete koje sadrže aktivni sastojak u smeši s netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom koji je pogodan za proizvodnju tableta. Ovi ekscipijenti mogu biti, na primer, inertni diluenti, kao što su kalcijum ili natrijumkarbonat, laktoza, kalcijum ili natrijum-fosfat; sredstva za granuliranje i dezintegraciju, kao što je kukuruzni skrob, ili alginska kiselina; sredstva za vezivanje, kao što su skrob, želatin ili akacija; i sredstva za podmazivanje, kao što su magnezijum-stearat, stearinska kiselina ili talk. Tablete mogu biti neobložene ili obložene poznatim tehnikama, uključujući mikroinkapsuliranje da bi se odložila dezintegracija i adsorpcija u gastrointestinalnom traktu i time osiguralo kontinuirano delovanje tokom dužeg perioda. Na primer, može se koristiti materijal za odloženo razlaganje, kao što je gliceril-monostearat ili gliceril-distearat, sâm ili u kombinaciji sa voskom.
Za tretman oka ili drugih spoljnih tkiva, npr. usta i kože, formulacije se poželjno primenjuju kao topikalna mast ili krema koja sadrži aktivni sastojak (aktivne sastojke) u količini od, na primer, 0,075 % w/w – 20% w/w. Kada se formuliše u obliku masti, aktivni sastojak može da se koristi sa parafinskom bazom ili bazom koja se meša sa vodom. Alternativno, aktivni sastojci mogu biti formulisani u kremu sa bazom kreme ulje-u-vodi. Po želji, vodena faza baze kreme može sadržati polihidrični alkohol, tj. alkohol koji ima dve hidroksilne grupe ili više hidroksilnih grupa, kao što su propilen-glikol, butan 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol i polietilen-glikol (uključujući PEG 400) i njihove mešavine. Topikalne formulacije mogu poželjno sadržati jedinjenje koje poboljšava apsorpciju ili penetraciju aktivnog sastojka kroz kožu ili druga zahvaćena područja. Primeri takvih pojačivača dermalne penetracije uključuju dimetil-sulfoksid i srodne analoge. Uljana faza emulzija ovog pronalaska može biti sastavljena od poznatih sastojaka na poznati način. Dok faza može sadržavati samo emulgator, poželjno je da sadrži mešavinu najmanje jednog emulgatora sa masnoćom ili uljem ili sa masnoćom i uljem. Poželjno je da je hidrofilni emulgator uključen zajedno sa lipofilnim emulgatorom koji deluje kao stabilizator. Takođe je poželjno uključiti i ulje i mast. Emulgatori zajedno sa stabilizatorom ili bez stabilizatora čine takozvani emulgirajući vosak, a vosak zajedno sa uljem i masnoćom čini takozvanu bazu za emulgirajuću mast koja formira uljanu disperznu fazu formulacije kreme. Emulgatori i stabilizatori emulzije pogodni za upotrebu u formulaciji iz pronalaska uključuju Tween<®>60, Span<®>80, cetostearil-alkohol, benzil-alkohol, miristil-alkohol, gliceril mono-stearat i natrijum-lauril-sulfat.
Vodene suspenzije jedinjenja formule I sadrže aktivne materijale u smeši sa ekscipijentima koji su pogodni za proizvodnju vodenih suspenzija. Takvi ekscipijenti uključuju agens za suspendovanje, kao što je natrijum-karboksimetilceluloza, kroskarmeloza, povidon, metilceluloza, hidroksipropil metilceluloza, natrijum-alginat, polivinilpirolidon, tragakant-guma i akacija gume, i sredstva za disperziju ili vlaženje kao što je prirodni fosfatid (npr. Lecitin) proizvod kondenzacije alkilen oksida sa masnom kiselinom (npr. polioksietilen stearat), proizvod kondenzacije etilen oksida sa dugim lancem alifatskog alkohola (npr. heptadecaetilenoksietanol), proizvod kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim esterom izvedenim iz masne kiseline i heksitol anhidrid (npr. polioksietilen sorbitan-monooleat). Vodena suspenzija može takođe da sadrži jedan ili više konzervansa kao što su etil ili npropil p-hidroksibenzoat, jedno ili više sredstava za bojenje, jedno ili više sredstava za poboljšanje ukusa i jedno ili više sredstava za zaslađivanje, kao što su saharoza ili saharin.
Farmaceutske kompozicije jedinjenja Formule I mogu biti u obliku sterilnog injektabilnog preparata, kao što je sterilna injektabilna vodena ili uljana suspenzija. Ova suspenzija može biti formulisana u skladu sa poznatim postupkom koristeći pogodna sredstva za dispergovanje ili vlaženje i sredstva za suspendovanje koja su gore pomenuta. Sterilni injektabilni preparat može takođe biti sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom diluentu ili rastvaraču, kao što je rastvor u 1,3-butandiolu ili pripremljen kao liofilizovani prah. Među prihvatljivim sredstvima i rastvaračima koji se mogu koristiti su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum-hlorida. Pored toga, sterilna fiksna ulja mogu se konvencionalno koristiti kao rastvarač ili medij za suspendiranje. U tu svrhu se može koristiti bilo koje blago fiksno ulje, uključujući sintetske mono-ili di gliceride. Pored toga, masne kiseline kao što je oleinska kiselina mogu se koristiti i za pripremu injekcija.
Količina aktivnog sastojka koji se može kombinovati sa nosećom supstancom radi proizvodnje pojedinačnog doznog oblika variraće u zavisnosti od domaćina koji se leči i konkretnog načina primene. Na primer, formulacija sa vremenskim otpuštanjem namenjena za oralno davanje ljudima može da sadrži približno 1 mg do 1000 mg aktivnog materijala koji se priprema sa odgovarajućom i pogodnom količinom materijala nosača koja može varirati od oko 5% do oko 95% od ukupnih kompozicija (težina:težina). Farmaceutska kompozicija može biti pripremljena da obezbedi lako merljive količine za administraciju. Na primer, vodeni rastvor namenjen za intravensku infuziju može da sadrži od oko 3 µg do 500 µg aktivnog sastojka po mililitru rastvora, tako da može doći do infuzije odgovarajuće zapremine brzinom od oko 30 mL/h.
Formulacije pogodne za parenteralnu primenu uključuju vodene i nevodene sterilne injekcijske rastvore koji mogu sadržavati antioksidanse, pufere, bakteriostate i rastvorene materije koje čine formulaciju izotoničnom s krvi primaoca; i vodene i nevodene sterilne suspenzije koje mogu uključivati sredstva za suspendovanje i sredstva za zgušnjavanje.
Formulacije pogodne za lokalnu primenu na oko takođe uključuju kapi za oči gde je aktivni sastojak rastvoren ili suspendovan u pogodnom nosaču, naročito vodenom rastvaraču za aktivni sastojak. Aktivni sastojak je poželjno prisutan u takvim formulacijama u koncentraciji od oko 0,5% do 20% w/w, na primer oko 0,5% do 10% w/w, na primer oko 1,5% w/w.
Formulacije pogodne za lokalnu primenu u ustima obuhvataju pastile koje sadrže aktivni sastojak na bazi arome, obično saharoza i akacija ili tragakant; pastile koje sadrže aktivni sastojak u inertnoj osnovi, kao što su želatin i glicerin, ili saharoza i akacija; i vode za ispiranje usta koje sadrže aktivni sastojak u pogodnom tečnom nosaču.
Formulacije za rektalno davanje mogu biti predstavljene kao supozitorije sa pogodnom bazom koja sadrži na primer kakao maslac ili salicilat.
Formulacije pogodne za intrapulmonalno ili nazalno davanje imaju veličinu čestica, na primer, u opsegu od 0,1 do 500 mikrona (uključujući veličine čestica u opsegu između 0,1 i 500 mikrona u koracima od mikrona kao što su 0,5, 1, 30 mikrona, 35 mikrona, itd.), koji se primenjuju brzom inhalacijom kroz nazalni prolaz ili inhalacijom kroz usta kako bi se došlo do alveolarnih vrećica. Pogodne formulacije uključuju vodene ili uljane rastvore aktivnog sastojka. Formulacije pogodne za primenu aerosola ili suvog praha mogu se pripremiti u skladu sa konvencionalnim postupcima i mogu se isporučiti sa drugim terapeutskim sredstvima, kao što su jedinjenja koja su do sada korišćena u lečenju ili profilaksi poremećaja, kao što je opisano u nastavku.
Formlacije pogodne za vaginalnu primenu mogu biti u obliku vagitorija,, tampona, kremova, gelova, pasti, pene ili sprejeva koji, pored aktivnog sastojka, sadrže takve nosače koji su u struci poznati kao prikladni.
Formulacije se mogu pakovati u kontejnere sa jediničnom dozom ili više doza, na primer, zapečaćene ampule i bočice i mogu se skladištiti u suvo smrznutom (liofilizovanom) stanju koje zahteva samo dodavanje sterilnog tečnog nosača, na primer, vode, za ubrizgavanje neposredno pre upotrebe. Nepripremljeni rastvori za injekcije i suspenzije se pripremaju iz sterilnih prašaka, granula i tableta prethodno opisane vrste. Poželjne formulacije jedinične doze su one koje sadrže dnevnu dozu ili jediničnu dnevnu subdozu, kao što je prethodno navedeno, ili odgovarajuću frakciju aktivnog sastojka.
Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje veterinarske kompozicije koje sadrže najmanje jedan aktivni sastojak kao što je prethodno definisano zajedno sa veterinarskim nosačem. Veterinarski nosači su materijali koji su korisni u svrhu davanja kompozicije i mogu biti čvrsti, tečni ili gasoviti materijali koji su inače inertni ili prihvatljivi u veterinarskoj struci i kompatibilni su sa aktivnim sastojkom. Ove veterinarske kompozicije mogu se davati parenteralno, oralno ili bilo kojim drugim željenim putem.
KOMBINACIONA TERAPIJA
Jedinjenja formule I mogu se koristiti samostalno ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvima za tretman bolesti ili poremećaja koji su ovde opisani, kao što je upala ili hiperproliferativni poremećaj (npr. rak). U određenim aspektima, jedinjenje Formule I je kombinovano u farmaceutskoj kombinovanoj formulaciji, ili režim doziranja kao kombinovana terapija, sa dodatnim, drugim terapeutskim jedinjenjem koje ima antiinflamatorna ili antihiperproliferativna svojstva ili koje je korisno za lečenje upale, poremećaja imunog odgovora, ili hiperproliferativnog poremećaja (npr. rak). Dodatni lek može biti antiinflamatorni agens, imunomodulatorno sredstvo, hemoterapijsko sredstvo, apoptoza-pojačivač, neurotropni faktor, sredstvo za lečenje kardiovaskularnih bolesti, sredstvo za lečenje bolesti jetre, anti-virusni agens, sredstvo za lečenje poremećaja krvi, sredstvo za lečenje dijabetesa i sredstvo za lečenje poremećaja imunodeficijencije. Drugi terapeutski agens može biti NSAID anti-inflamatorni agens. Drugi terapeutski agens može biti hemoterapijski agens. Drugo jedinjenje farmaceutske kombinacione formulacije ili režima doziranja poželjno ima komplementarne aktivnosti prema jedinjenju formule I tako da one ne utiču negativno jedna na drugu. Takvi molekuli su pogodno prisutni u kombinaciji u količinama koje su efikasne za nameravane svrhe. U jednom primeru izvođenja, kompozicija iz ovog pronalaska sadrži jedinjenje formule I, ili njegov stereoizomer, tautomer, solvat ili farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa terapeutskim sredstvom kao što je NSAID.
Kombinovana terapija se može primenjivati kao simultani ili sekvencijalni režim. Kada se primenjuje sekvencijalno, kombinacija se može primijeniti u dve ili više primena. Kombinovano primenjivanje obuhvata koadministracju ili istovremeno primenjivanje, korišćenjem zasebnih formulacija ili jedne farmaceutske formulacije, ili istovremenog primenjivanja bilo kojim redosledom, pri čemu poželjno, postoji vremenski period dok oba (ili svi) aktivna sredstva istovremeno dostignu svoje biološke aktivnosti.
Prikladne doze za bilo koje od gorepomenutih agenasa su one koje se trenutno koriste i mogu se smanjiti zbog kombinovanog dejstva (sinergija) novoidentifikovanog agensa i drugih terapeutskih agenasa ili tretmana.
Kombinovana terapija može da obezbedi „sinergiju” i da se pokaže kao „sinergijska”, tj. efekat postignut kada se aktivni sastojci zajedno koriste je veći od zbira efekata koji se dobijaju od odvojene primene komponenata. Sinergijski efekat se može postići kada su aktivni sastojci: (1) koformulisani i primenjeni ili isporučeni istovremeno u kombinovanoj, jediničnoj doznoj formulaciji; (2) isporučeni naizmenično ili paralelno kao odvojene formulacije; ili (3) primenjeni nekim drugim režimom. Kada se isporučuju kao naizmenična terapija, sinergijski efekat se može postići kada se komponente primenjuju ili isporučuju sekvencijalno, npr. različitim injekcijama u odvojenim brizgalicama. Generalno, tokom naizmenične terapije, efikasna doza svakog aktivnog sastojka se primenjuje sekvencijalno, tj. serijski u vremenu, dok se kod kombinovane terapije efikasne doze dva ili više aktivnih sastojaka primenjuju zajedno.
U posebnoj realizaciji terapije, jedinjenje Formule I, ili njegov stereoizomer, tautomer, solvat ili farmaceutski prihvatljiv, može se kombinovati sa drugim terapeutskim, hormonskim ili antitelnim agensima kao što su oni opisani ovde, kao i kombinovani sa hirurškom terapijom i radioterapijom. Kombinovane terapije obuhvataju davanje najmanje jednog jedinjenja formule I, ili njegovog stereoizomera, tautomera, solvata ili farmaceutski prihvatljive soli, i upotrebu najmanje jednog drugog načina lečenja raka. Količine jedinjenja (jedinjenja) Formule I i drugih farmaceutski aktivnih terapeutskih agenasa i relativna vremena primene će biti izabrani da bi se postigao željeni kombinovani terapijski efekat.
METABOLITI JEDINJENJA FORMULE I
U opseg ovog pronalaska spadaju i ovde opisani in vivo metabolički proizvodi Formule I. Takvi proizvodi mogu rezultirati, na primer, oksidacijom, redukcijom, hidrolizom, amidacijom, deamidacijom, esterifikacijom, deesterifikacijom, enzimatskim cepanjem, i slično, primenjenog jedinjenja. Prema tome, ovaj pronalazak uključuje metabolite jedinjenja Formule I, uključujući jedinjenja koja su proizvedena postupkom koji uključuje kontakt jedinjenja iz ovog pronalaska sa sisarima u periodu vremena dovoljnom da se dobije njegov metabolički proizvod.
Produkti metabolizma obično se identifikuju pripremom radioaktivnog (npr<14>C ili<3>H) izotopa jedinjenja pronalaska, parenteralnom primenom u dozi koja se može detektovati (npr. veća od oko 0,5 mg/kg) na životinje, kao što su pacov, miš, zamorac, majmun, ili čovek,
1
omogućavajući dovoljno vremena da dođe do metabolizma (obično oko 30 sekundi do 30 sati) i izolujući njegove proizvode konverzije iz urina, krvi ili drugih bioloških uzoraka. Ovi proizvodi se lako izoluju jer su obeleženi (drugi su izolovani upotrebom antitela sposobnih za vezivanje epitopa koji prežive u metabolitu). Strukture metabolita se određuju na konvencionalan način, npr. pomoću MS, LC/MS ili NMR analize. Generalno, analiza metabolita se vrši na isti način kao i konvencionalne studije metabolizma lekova, dobro poznat stručnjacima. Produkti metabolizma, sve dok se inače ne nalaze in vivo, korisni su u dijagnostičkim testovima za terapeutsko doziranje jedinjenja pronalaska.
PROIZVODI
U sledećem primeru izvođenja, pronalaska, obezbeđen je proizvod ili„komplet”, koji sadrži materijale korisne za lečenje goreopisanih bolesti i poremećaja. U jednom primeru izvođenja, komplet sadrži kontejner koji sadrži jedinjenje Formule I, ili stereoizomer, tautomer, solvat, metabolit ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili prolek. Komplet sadrži ambalažu i etiketu ili uputstvo u pakovanju ili na ambalaži. Termin „uputstvo za upotrebu” označava uputstvo koje se obično nalazi u prodajnoj ambalaži terapeutskih proizvoda, a koje sadrži informacije o indikacijama, upotrebi, doziranju, primeni, kontraindikacijama i/ili upozorenjima u vezi sa upotrebom takvog terapeutskog proizvoda. Pogodna ambalaža uključuje, na primer, boce, bočice, špriceve, blister-pakovanje, itd. Ambalaža može biti izrađena od različitih materijala, kao što je staklo ili plastika. Ambalaža sadrži jedinjenje Formule I i njegovu formulaciju koja je sama po sebi efikasna za lečenje i može da ima priključak za sterilni pristup (na primer, ambalaža može biti kesa za intravenski rastvor ili bočica sa zapušačem koji može da se probuši iglom za potkožnu injekciju). Najmanje je jedan aktivni agens u kompoziciji jedinjenje Formule I. Etiketa ili uputstvo za upotrebu ukazuje na to da se preparat koristi za tretiranje stanja po izboru, kao što je rak. Pored toga, oznaka ili umetak u pakovanju može ukazivati da je pacijent koji se leči onaj koji ima poremećaj kao što je hiperproliferativni poremećaj, neurodegeneracija, srčana hipertrofija, bol, migrena ili neurotraumatska bolest ili događaj. U jednom primeru izvođenja, oznaka ili umetak pakovanja ukazuje na to da se kompozicija koja sadrži jedinjenje Formule I može koristiti za lečenje poremećaja koji je posledica abnormalnog rasta ćelija. Oznaka ili umetak u pakovanju takođe može ukazivati na to da se preparat može koristiti za lečenje drugih poremećaja. Umesto toga, ili pored toga, proizvod može dalje da sadrži drugu ambalažu koja sadrži farmaceutski prihvatljiv pufer, kao što je bakteriostatska voda za injekcije (BWFI), fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom, Ringerov rastvor i rastvor dekstroze. Može dalje da obuhvati druge materijale poželjne sa komercijalnog i aspekta upotrebe, uključujući druge
1 1
pufere, razblaživače, filtere, igle i špriceve.
Komplet može dalje sadržati uputstva za davanje jedinjenja Formule I i, ako je prisutna, i drugih farmaceutske formulacije. Na primer, ako komplet sadrži prvu kompoziciju koja sadrži jedinjenje Formule I i drugu farmaceutsku formulaciju, komplet može dalje sadržati uputstva za simultanu, sekvencijalnu ili odvojenu administraciju prve i druge farmaceutske kompozicije pacijentu kom je to potrebno.
U sledećem primeru izvođenja, kompleti su pogodni za isporuku čvrstih oralnih oblika jedinjenja Formule I, kao što su tablete ili kapsule. Takav komplet poželjno uključuje broj jediničnih doza. Takvi kompleti mogu uključivati karticu koja ima doze prilagođene njihovoj nameni. Primer takvog kompleta je „blister pakovanje”. Blister pakovanja su dobro poznata u industriji ambalaže i široko se koriste za pakovanje farmaceutskih jediničnih oblika doziranja. Po želji, memorijska pomoć se može pružiti, na primer u obliku brojeva, slova ili drugih oznaka ili s kalendarskim umetkom, označavajući dane u rasporedu tretmana u kojima se mogu primeniti doze.
U skladu sa jednim primerom izvođenja, komplet može sadržati (a) prvi kontejner sa jedinjenjem Formule I koji je u njemu sadržan; i opciono (b) drugi kontejner sa drugom farmaceutskom formulacijom sadržanom u njemu, pri čemu druga farmaceutska formulacija sadrži drugo jedinjenje sa anti-hiperproliferativnom aktivnošću. Umesto toga, ili pored toga, komplet može dalje da sadrži treću ambalažu koja sadrži farmaceutski prihvatljiv pufer, kao što je bakteriostatska voda za injekcije (BWFI), fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom, Ringerov rastvor i rastvor dekstroze. Može dalje da obuhvati druge materijale poželjne sa komercijalnog i aspekta upotrebe, uključujući druge pufere, razblaživače, filtere, igle i špriceve.
U određenim izvođenjima predmetnog pronalaska, pri čemu komplet sadrži kompoziciju Formule I i drugi terapeutski agens, komplet može sadržati kontejner za čuvanje odvojenih kompozicija, kao što je podeljena boca ili podeljen paket od folije, međutim, odvojene kompozicije mogu takođe biti sadržane unutar jednog, nepodeljenog kontejnera. Tipično, komplet sadrži uputstva za primenu odvojenih komponenti. Oblik kompleta je posebno pogodan kada se odvojene komponente preferirano daju u različitim doznim oblicima (npr. oralno i parenteralno), primenjuju se u različitim intervalima doziranja, ili kada lekar propisuje titraciju pojedinačnih komponenti kombinacije.
PRIPREMA JEDINJENJA FORMULE I
Jedinjenja formule I mogu se sintetizovati putem sintetskih puteva koji uključuju postupke analogne onima koji su dobro poznati u hemijskoj struci, naročito u svetlu opisa
1 2
koji se ovde nalazi, i onih za druge heterocikle opisane u: Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Editors Katritzky and Rees, Elsevier, 1997, e.g. Volume 3; Liebigs Annalen der Chemie, (9):1910-16, (1985); Helvetica Chimica Acta, 41:1052-60, (1958); Arzneimittel-Forschung, 40(12):1328-31, (1990), od kojih je svaka izričito uključena referencom. Početni materijali su opštedostupni iz komercijalnih izvora kao što je Aldrich Chemicals (Milwaukee, WI) ili se lako pripremaju pomoću postupaka koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti (npr. pripremljene postupcima koji su opšte opisani u Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-23, Wiley, N.Y. (1967-2006 ed.), Ili Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, uključujući dodatke (takođe dostupne putem onlajn-baze podataka Beilstein).
Transformacije sintetičke hemije i metodologija zaštitnih grupa (zaštita i deprotekcija) korisne u sintezi jedinjenja formule I i potrebnih reagensa i intermedijera poznate su u struci i uključuju, na primer, one opisane u R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T. W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3<rd>Ed., John Wiley and Sons (1999); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) i kasnija izdanja.
Jedinjenja Formule I mogu da se pripreme pojedinačno ili kao biblioteke jedinjenja koje sadrže najmanje 2, na primer 5 do 1000 jedinjenja, ili 10 do 100 jedinjenja. Biblioteke jedinjenja Formule I mogu se pripremiti kombinatornim pristupom „razdvajanja i mešanja” ili višestrukim paralelnim sintezama koristeći ili fazu rastvora ili hemiju krute faze, postupcima poznatim stručnjacima. Prema tome, prema daljem aspektu ovog pronalaska, obezbeđena je biblioteka jedinjenja koja sadrži najmanje 2 jedinjenja, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
Slike i primeri daju egzemplarne postupke za pripremu jedinjenja Formule I. Osobe sa znanjem u struci će ceniti da se drugi sintetički putevi mogu koristiti za sintezu jedinjenja iz pronalaska. Iako se ovde opisuju specifični polazni materijali i reagensi, drugi polazni materijali i reagensi se lako mogu zameniti, kako bi se obezbedili razni derivati i/ili reakcioni uslovi. Pored toga, mnogi od primera jedinjenja koja su pripremljena opisanim postupcima mogu se dalje modifikovati u svetlu ovog otkrića, koristeći konvencionalnu hemiju dobro poznatu stručnjacima za ovu oblast.
U pripremi jedinjenja Formule I može biti potrebna zaštita udaljene funkcionalnosti (npr. primarnog ili sekundarnog amina) intermedijera. Potreba za takvom zaštitom će varirati u zavisnosti od prirode udaljene funkcionalnosti i uslova postupaka pripreme. Prikladne amino-zaštitne grupe uključuju acetil, trifluoracetil, t-butoksikarbonil (BOC),
1
benziloksikarbonil (CBz) i 9-fluorenilmetilenoksikarbonil (Fmoc). Potrebu za takvom zaštitom lako utvrđuje stručnjak za datu oblast. Za opšti opis zaštitnih grupa i njihovu upotrebu, vidi T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.
Eksperimentalne procedure, intermedijeri i reagensi korisni za upotrebu za pripremu jedinjenja formule I mogu se naći u US Ser. No. 13/102720, “PIRIDONE AND AZA-PIRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE”, podnesene 6. maja 2011. godine, koje su obuhvaćene u celosti u okviru referenci.
Slike 1–24 opisuju sintezu primera realizacija jedinjenja Formule I 101–124, potpunije opisanih u Primerima 101–124, i mogu biti korisne za dobijanje drugih jedinjenja Formule I.
OPŠTE PREPARATIVNE PROCEDURE
Opšta procedura: Suzukijevo kuplovanje
Suzukijeva reakcija kuplovanja korisna je za formiranje veza ugljenik–-ugljenik za privlačenja prstena jedinjenja formule I i intermedijera, kao što je A-3 (Suzuki (1991) Pure Appl. Chem. 63:419-422; Miyaura and Suzuki (1979) Chem. Reviews 95(7):2457-2483; Suzuki (1999) J. Organometal. Chem. 576:147-168). Suzukijevo spajanje je reakcija unakrsnog spajanja heteroarilhalida posredstvom paladijuma, kao što je B-2 ili B-4, sa
1 4
boronskom kiselinom, kao što je A-1 ili A-2. Na primer, B-2 se može kombinovati s oko 1,5 ekvivalenta 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolan) i rastvori se u oko 3 ekvivalenta natrijum-karbonata kao 1 molarni rastvor u vodi i jednaka zapremina acetonitrila. Dodaje se katalitička količina, ili više, niskovalentnog reagensa paladijuma, kao što je bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid. U nekim slučajevima, kalijum-acetat se koristi umesto natrijum-karbonata da bi se podesio pH vodenog sloja. Reakcija se zatim zagreva na oko 140° C –150° C pod pritiskom u mikrotalasnom reaktoru (Biotage AB, Uppsala, Švedska) 10 do 30 minuta. Sadržaj je ekstrahovan etil-acetatom ili nekim drugim organskim rastvaračem. Nakon isparavanja organskog sloja, bor ester A-1 može se prečistiti na silicijum-dioksidu ili reverzno-faznom HPLC. Supstituenti su kao što su definisani, ili zaštićeni oblici ili njihovi prekursori. Isto tako, bromidni intermedijer B-4 može biti boroniliran da bi se dobio A-2.
Suzuki kuplovanje B-2 i A-2, ili A-1 i B-4, daje jedinjenje Formule I ili intermedijer A-3. Boronski ester (ili kiselina) (1.5 ekv.) A-1 ili A-2, i paladijumski katalizator, kao što je bis (trifenilfosfin) paladijum (II) hlorid (0.05 ekv.) dodaje se u mešavinu halo intermedijera (1 ekv.) B-2 ili B-4 u acetonitrilu i 1 M vodenog rastvora natrijum-karbonata (jednaka zapremina kao acetonitril). Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnoj pećnici do 150°C tokom 15 minuta. LC/MS pokazuje kada je reakcija završena. U smešu se dodaje voda, a istaloženi proizvod se filtrira i prečisti pomoću HPLC da bi se dobio proizvod A-3. Supstituenti R<1',>R<2',>R<4'>mogu biti R<1,>R<2,>R<4>kako je definisano, ili zaštićeni oblici ili prekursori istih.
Različiti paladijumski katalizatori mogu se koristiti tokom Suzukijevog koraka spajanja. Različiti niskovalentni katalizatori, Pd (II) i Pd (0) mogu se koristiti u reakciji Suzuki kuplovanja, uključujući PdCl2(PPh3)2, Pd(t-Bu)3, PdCl2dppfCH2Cl2, Pd(PPH3)4,Pd(OAC)/PPH3,Cl2Pd[(Pet3)]2,Pd(DIPHOS)2,Cl2Pd(Bipy), [PdCl(Ph2PCH2PPH2)]2,Cl2Pd[P(o-tol)3]2, Pd2(dba)3/P(o-tol)3, Pd2(dba)/P(furil)3, Cl2Pd[P(furil)3]2, Cl2Pd(PMePh2)2, Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2, Cl2Pd[P(C6F6)3]2, Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2, Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2i inkapsulirani katalizatori Pd EnCat ™ 30, Pd EnCat ™ TPP30 i Pd (II) EnCat ™ BINAP30 (US 2004/0254066).
1
Opšta procedura: Buhvaldova reakcija
Buhvaldova reakcija je korisna za aminiranje 6-bromo intermedijera B-1 (Wolf i Buchwald (2004) Org. Synth Coll. Vol. 10:423; Paul et al (1994) Jour. Amer. Chem. Soc.
116: 5969-5970). U rastvor halo intermedijera B-1 u DMF dodaje se odgovarajući amin R<5>-NH2(200 mol%), Cs2CO3(50 mol%), Pd2(dba)3(5 mol%), i 4,5-bis (difenilfosfino)-9,9-dimetilksanten (Ksantfos, CAS br.161265-03-8, 10 mol%). Reakcija se zagreva na oko 110° C pod pritiskom u mikrotalasnom reaktoru (Biotage AB, Uppsala, Švedska) oko 30 min. Dobijeni rastvor je koncentrovan u vakuumu da bi se dobio B-2. Drugi paladijumski katalizatori i fosfinski ligandi mogu biti korisni.
N-heteroaril amid intermedijera B-4 može biti pripremljen u uslovima Buhvaldove reakcije sa cikličnim amidnim intermedijerima (R<7>)<,>kao što su 3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 101e i heteroaril-dibromidi B-3.
POSTUPAK SEPARACIJE
U postupcima pripreme jedinjenja Formule I, može biti povoljno da se odvajaju reakcioni proizvodi jedan od drugog i/ili od polaznih materijala. Željeni proizvodi svakog koraka ili serije koraka mogu biti odvojeni i/ili prečišćeni do željenog stepena homogenosti pomoću tehnika uobičajenih u struci. Tipično, takva razdvajanja uključuju višefaznu ekstrakciju, kristalizaciju iz rastvarača ili smeše rastvarača, destilaciju, sublimaciju ili hromatografiju. Hromatografija može uključivati bilo koji broj postupaka, uključujući, na primer, postupke i aparate za reverzno-faznu i normalno-faznu; ekskluzionu; jonoizmenjivačku; kao i hromatografiju pod visokim, srednjim i niskim pritiskom; analizu malog uzorka; simulirani pokretni sloj (SMB) i preparativnu hromatografiju na tankom ili debelom sloju, kao i tehnike tankoslojne hromatografije na malom uzorku i fleš hromatografije.
1
Druga klasa postupka razdvajanja uključuje tretiranje smeše reagensom odabranim da veže ili formira inače odvojivi željeni proizvod, nereaktivni početni materijal, reakciju prema proizvodu ili slično. Takvi reagensi uključuju adsorbente ili apsorbente, kao što su aktivni ugljen, molekularna sita, jonski izmenjivački medij ili slično. Alternativno, reagensi mogu biti kiseline u slučaju baznog materijala, baze u slučaju kiselog materijala, vezujući reagensi, kao što su antitela, vezujući proteini, selektivni kelatori kao što su krunski etri, reagensi za ekstrakciju tečno-tečnim jonima (LIX) ili slično. Izbor odgovarajućih postupaka razdvajanja zavisi od prirode uključenih materijala, kao što su: tačka ključanja i molekularna težina u destilaciji i sublimaciji, prisustvo ili odsustvo polarnih funkcionalnih grupa u hromatografiji, stabilnost materijala u kiselim i baznim medijima u višestrukoj ekstrakciji i slično.
Dijastereomerne smeše mogu se razdvojiti na pojedinačne dijastereomere na osnovu svojih fizičko hemijskih razlika, pomoću postupaka koji su dobro poznati stručnjacima za ovu oblast, kao što je, na primer, hromatografija i/ili frakciona kristalizacija. Enantiomeri se mogu razdvojiti pretvaranjem enantiomerne smese u diastereomernu smesu reakcijom s odgovarajućim optički aktivnim jedinjenjem (npr. hiralnim pomoćnim sredstvom, kao što je hiralni alkohol ili Mošerov kiselinski hlorid), odvajanjem dijastereomera i pretvaranjem (npr. hidrolizom) pojedinačnih dijastereoizomera odgovarajućim čistim enantiomerima. Takođe, neka od jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti atropizomeri (npr. supstituisani biarili) i smatraju se delom ovog pronalaska. Enantiomeri se takođe mogu razdvojiti upotrebom hiralne HPLC kolone.
Pojedinačni stereoizomer, npr. enantiomer, u suštini slobodan od njegovog stereoizomera, može se dobiti rezolucijom racemske smese koristeći postupak, kao što je formiranje dijastereomera upotrebom optički aktivnih sredstava za rastvaranje (Eliel, E. and Wilen, S. “Stereochemistry of Organic Compounds,” John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994; Lochmuller, C. H., (1975) J. Chromatogr., 113(3):283-302). Racemske smeše hiralnih jedinjenja pronalaska mogu se razdvojiti i izolovati bilo kojim pogodnim postupkom, uključujući: (1) formiranje jonskih, dijastereomernih soli sa hiralnim jedinjenjima i razdvajanje frakcionom kristalizacijom ili drugim postupcima, (2) formiranje dijastereomernih jedinjenja sa hiralnim derivatizujućim reagensima, razdvajanje dijastereomera i konverzija u čiste stereoizomere, i (3) odvajanje suštinski čistih ili obogaćenih stereoizomera direktno u hiralnim uslovima. Vidi: “Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology,” Irving W. Wainer, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1993).
Prema postupku (1), dijastereomerne soli mogu da se formiraju reakcijom
1
enantiomerno čistih hiralnih baza kao što su brucin, kinin, efedrin, strihnin, α-metil-βfeniletilamin (amfetamin) i slično, sa asimetričnim jedinjenjima koji imaju kiselu funkcionalnost, kao što su karboksilna kiselina i sulfonska kiselina. Dijastereomerne soli mogu se indukovati na razdvajanje frakcionom kristalizacijom ili jonskom hromatografijom. Za odvajanje optičkih izomera amino-jedinjenja, dodavanje hiralnih karboksilnih ili sulfonskih kiselina, kao što su kamforsulfonska kiselina, vinska kiselina, bademova kiselina ili mlečna kiselina mogu dovesti do formiranja diastereomernih soli.
Alternativno, postupkom (2), supstrat koji treba rastvoriti reaguje sa jednim enantiomerom hiralnog jedinjenja da bi se formirao dijastereomerni par (E. and Wilen, S. “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley & Sons, Inc., 1994, p. 322). Dijastereomerna jedinjenja mogu biti formirana reakcijom asimetričnih jedinjenja sa enantiomerno čistim hiralnim derivatizirajućim reagensima, kao što su derivati mentila, nakon čega sledi odvajanje dijastereomera i hidroliza da bi se dobio čist ili obogaćen enantiomer. Postupak određivanja optičke čistoće uključuje izradu hiralnih estera, kao što je mentil-ester, npr. (-) mentil-hloroformat u prisustvu baze, ili Mošer ester, α-metoksi-a-(trifluorometil) fenil-acetat (Jacob III. J. Org. Chem. (1982), 47: 4165), od racemske smeše, i analizu<1>H NMR spektra za prisustvo dva atropizomerna enantiomera ili diastereoizomera. Stabilni dijastereomeri atropizomernih jedinjenja mogu se izdvojiti i izolovati hromatografijom normalne i reverzne faze sledeći postupke za odvajanje atropizomernih naftil-izokinolina (WO 96/15111). Postupkom (3), racemska smeša dva enantiomera može da se razdvoji hromatografijom koristeći hiralnu stacionarnu fazu ("Chiral Liquid Chromatography" (1989) WJ Lough, Ed., Chapman i Hall, New York; (1990) 513: 375-378). Obogaćeni ili prečišćeni enantiomeri se mogu razlikovati po postupcima koji se koriste za razlikovanje drugih hiralnih molekula sa asimetričnim atomima ugljenika, kao što je optička rotacija i cirkularni dihroizam.
PRIMERI
Primer 101a 2,2,2-Trihloro-1-(4,5,6,7-tetrahidro-1 H-indol-2-il) etanon 101a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, kondenzatorom i ulazom za azot, prečišćena je azotom i napunjena
1
4,5,6,7-tetrahidro-1H-indolom (3,00 g, 24,8 mmol), trihloroacetil-hlorid (13,5 g, 74,4 mmol) i 1,2-dihloroetan (50 ml). Rastvor je mešan na 85° C tokom 2 sata. Nakon tog vremena, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući prinos 100% (6,50 g) 2,2,2-trihlor-1-(4,5,6,7-tetrahidro-1 H-indol-2-il) etanon 101a kao crna polučvrsta supstanca:<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.94 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 2.62 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 2.47 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 1.80 (m, 2H), 1.65 (m, 2H); MS (ESI+) m/z 266.0 (M+H)
Primer 101b etil 4,5,6,7-Tetrahidro-1 H-indole-2-karboksilata 101b
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot, prečišćena je azotom i napunjena 101a (6.50 g, 24.8 mmol), natrijum-etoksidom (17.0 mg, 0.25 mmol) i etanolom (40 mL). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Nakon tog vremena, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na molekularnim sitima dajući prinos 100% (4,80 g) etil 4,5,6,7-tetrahidro-1 H-indole-2-karboksilata 101b kao smeđa čvrsta: MP 70-72° C;<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 9.08 (e, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.25 (q, 2H, J = 7.2 Hz), 2.65 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 2.56 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,85 (m, 4H), 1,28 (t, 3H, J = 7,2 Hz); MS (ESI ) m/z 194,1 (M H)
Primer 101c etil 1-(Cijanometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1 H-indol-2-karboksilata 101c
Laboratorijska boca od 125 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot, prečišćena je sa azotom i napunjena 101b (5,76 g, 29,8 mmol) i DMF (50 mL). Rastvor je ohlađen na 0° C koristeći ledeno kupatilo. Dodaje se NaH (60% disperzija u mineralnom ulju, 1,43 g, 35,8 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Nakon tog vremena, dodat je bromoacetonitril (1,43 g, 35,8 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 14 sati. Nakon tog vremena, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između etil-acetata (150 mL) i vode (450 mL). Organski sloj je odvojen, a vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (3 × 150 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni iznad
1
natrijum-sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na molekularnim sitima dajući prinos 55% (3,80 g) etil 1-(cijanometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-karboksilata 101c kao žute polučvrste materije:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6,66 (s, 1H), 5,29 (s, 2H), 4,28 (q, 2H, J = 12 Hz), 2,62 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 2.49 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 1,92 (m, 2H), 1,75 (m, 2H), 1,33 (t, 3H, J = 12 Hz); MS (ESI+) m/z 233.1 (M+H)
Primer 101d etil 1-(2-aminoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1 H-indol-2-karboksilata 101d
Laboratorijski reaktor Parr od 200 ml -prečišćen je azotom i napunjen 10-procentnim paladijumom na ugljenu (50% vlažna, 1.28 g suve mase), 101c (3.00 g, 12.9 mmol), 12% hlorovodoničnom kiselinom (6.5 mL, 25 mmol). etil-acetatom(60 mL) i etanolom (40 mL). Boca je pričvršćena na Parov hidrogenator, evakuisana, napunjena gasom vodonika do pritiska od 50 psi i mućkana 6 h. Posle tog vremena, vodonik je ispražnjen i u bocu je napunjen azot. Dodat je filtar za dijatomejsku zemlju (CELITE<®>, Imerys Minerals California, Inc.) CELITE<®>521 (4,0 g), a smeša je filtrirana kroz podlogu CELITE<®>521. Filterski kolač je ispran etanolom (2 x 20 mL), a kombinovani filtrati su koncentrovani do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između etil-acetata (150 mL) i 10% vodenog kalijum-karbonata (100 mL). Organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan etilacetatom (3 x 75 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je trituriran etanolom (5 ml) dajući prinos 71% (1,71 g) etil 1-(2-aminoetil)-4,5,6,7-tetrahidro-1 H-indol-2-karboksilata 101d kao bela čvrsta materija: t.t.102-104° C;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 6,61 (e, 1H), 6,22 (br, 2H), 4,15 (m, 4H), 2,77 (m, 2H), 2,59 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 2,42 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 1,70 (m, 2H), 1,62 (m, 2H), 1,23 (t, 3H, J = 7,0 Hz); MS (APCI ) m/z 237,2 (M H)
Primer 101e 3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 101e
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot, prečišćena je azotom i napunjena 101d (1,80 g, 7,63 mmol), natrijum-etoksidom (1.55 g, 22.8 mmol) i etanolom (50 mL). Smeša je mešana na
11
55°C tokom 5 h. Nakon tog vremena, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između etil-acetata (200 mL) i vode (100 mL). Organski sloj je odvojen, a vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko natrijum-sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na molekularnim sitima da bi se dobio prinos od 42% (605 mg) 3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 101e kao bela čvrsta materija: mp 207-209 °C;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 (s, 1H), 6.36 (s, 1H), 3.84 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 3.42 (m, 2H), 2.51 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 2.42 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 1.76 (m, 2H), 1.65 (m, 2H); (APCI+) m/z 191.3 (M+H)
Primer 101f 3-bromo-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1 2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 101f
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 101e (300 mg, 1,57 mmol), 3,5-dibromoizonikotinaldehidom (2) (517 mg, 1,96 mmol), 4,5-bis (difenilfosfino)-9,9-dimetilksantenom (Ksantfos, 120 mg, 0,2 mmol), tris (dibenzilidenaceton) dipaladijumom (0) (180 mg, 0,2 mmol), Cs2CO3(650 mg, 2 mmol), i 1,4-dioksanom (8 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu i argonom, smeša je zagreevana na 100° C 6 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na molekularnim sitima eluiranjem pomoću DCM/MeOH (od 40:1 do 20:1) da se dobije 101f kao bledožuta čvrsta supstanca (350 mg, 40%). MS: [M+H]<+>374.
Primer 101g terc-butil 4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 101g
U rastvor 5-bromo-2-nitropiridina (30 g, 148 mmol) u DMSO (1 L) dodati su K2CO3(40 g, 296 mmol) i tert-butil piperazin-1-karboksilata (28 g, 148 mmol). Smeša je mešana na 65°C preko noći. Posle hlađenja, smeša je sipana u vodu (2 l). Istaložena čvrsta supstanca je sakupljena i osušena pod vakuumom. Zatim se dalje prečišćava fleš eluiranjem na molekularnim sitima sa 20:1 petroleum-eter/etil-acetatom, a zatim metilen-hloridom, dajući 101g kao žutu čvrstu supstancu (17 g, 37%). MS: [M+H]<+>309.
Primer 101h terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 101h
Boca od 500 mL je prečišćena sa azotom i napunjena tert-butil 4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilatom 101g (3.1 g, 10 mmol), 10% paladijum na ugljenu (50% vlažan, 1,0 g) i etanola (100 ml). Isprazni se, napuni gasom vodonika i meša 16 h na sobnoj temperaturi. Vodonik je zatim evakuisan i u bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 101h (2,7 g, 97%). MS: [M+H]<+>279
Primer 101i terc-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 101i
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (50 mL), 101h (1.3 g, 4.7 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (1.24 g, 4.7 mmol) i cezijumkarbonatom (3.8 g, 12 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, dodaju se Ksantfos (272 mg, 0,47 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (430 mg, 0,47 mmol) i reakciona smeša se zagreva na refluksu tokom 3 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature, podeljena između etil-acetata (100 mL) i vode (100 mL) i filtrirana. Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (50 ml x 2). Organski slojevi su spojeni, isprani slanom vodom (50 mL) i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš eluacijom na molekularnim sitima sa 50:1 metilen-hlorid/metanol da bi se dobilo 101i (1,3 g, 59%). MS: [M+H]<+>464.
Primer 101j 5-Bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 101j
Smeša 101i (3,6 g, 7,8 mmol) i 4,0 M HCl/dioksan (10 ml) je mešana 5 h na sobnoj temperaturi. Zatim se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak je bazifikovan vodenim 1.0M NaOH i ekstrahovan metilen-hloridom. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 101j (2,46 g, 87%). MS: [M+H]<+>364.
Primer 101k 5-Bromo-1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 101k
Smeša 101j (2,75 g, 7,5 mmol), oksetan-3-on (1,6 g, 22,7 mmol), NaBH3CN (4.75 g, 22.5 mmol), i cink-hlorida (3 g, 22,7 mmol) u metanolu (125 mL) mešan je 5 sati na 50° C. Smeša je dodata u vodu i tri puta ekstrahirana metilen-hloridom. Organski slojevi koncentrovani su pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa 25:1 metilen-hlorid/metanolom da se dobije 101k (1,92 g, 61%). MS: [M+H]<+>420.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.58 (d, J = 2,5, 1H), 8,55 (s, 1H), 7.94 (d, J = 3, 1H), 7.54 (d, J = 2,5, 1H), 7,39 (dd, J = 3, 1H), 7,25 (d, J = 4, 1H), 4,56 (t, J = 6,5, 2H), 4,46 (t, J = 6,5, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,43 (m, 1H), 3,01 (m, 4H), 2,40 (m, 4H).
Primer 101l 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3 2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l
Laboratorijska boca od 500 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 101k (10,5 g, 25 mmol), Pin2B2(15,6 g, 2,5 ekv., 62 mmol), Pd2(dba)3(1,14 g, 0,05 ekv., 1,25 mmol), X-fos (1,16 g, 0,1 ekv., 2,5 mmol), AcOK (7,35 g, 3 ekv., 75 mmol) i dioksanom (150 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu i argonom, smeša je zagrevana na 65° C 14 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i
11
rezultirajući ostatak je ispran sa PE/EA = 3/1 (80 mL) da bi se dobilo 101l kao žuta čvrsta supstanca (10.5 g, 94%). MS: [M+H]<+>468.
Primer 101m 3-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 101m
Zapečaćena epruveta je napunjena 101F (200 mg, 0,53 mmol), 101L (250 mg, 0,53 mmol), PdCl2(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4(210 mg, 1.0 mmol), i NaOAc (85 mg, 1,0 mmol) u acetonitrilu/H2O (8 ml/1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu i argonom, smeša je zagrevana na 100° C 4 h u zapečaćenoj epruveti. Zatim je filtrirana, a filtrat je evaporisan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznim kombinovanim fleš eluiranjem sa 20:1 DCM/MeOH da bi se dobilo 101m (135 mg, 40%). LCMS: [M+H]<+>635.
Primer 101 2-(4-(hidroksimetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 101
Smeša 101m(135 mg, 0,21 mmol) i NaBH4 (20 mg, 0,5 mmol) u MeOH (5 ml) mešana je na 0°C tokom 0,5 h. Smeša je ugašena vodom i ostatak je ekstrahovan EtOAc (5 mL X 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 101 (55 mg, 40%). LCMS: [M+H]<+>637.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,58 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,86 (d, J = 3,0, 1H), 7,38-7,37 (m, 2H), 7,25-7,23 (m, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,16 (t, J = 3,0, 1H), 4,56-4.40 (m, 6H), 4,19-4.12 (m, 3H), 3,95 (t, J = 3,0, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,43-3,41 (m, 1H), 3,06 (s, 4H), 2,57-2,61 (m, 2H), 2,45-2,48 (m, 6H), 1,78-1,80 (m, 2H), 1,69-1,70 (m, 2H) Primer 102a 1-Metil-3-[5-(4-metil-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioksaborolan-2-il)-1H-piridin-2-on 102a
Laboratorijska boca od 1 L sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i termoregulatorom prečišćena je azotom i napunjena 5-bromo-1-metil-3-[5-(4-metilpiperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-1H-piridin-2-on, pripremljenim prema US 2009/0318448, (10.0 g, 0.027 mol), bis (pinakolato) diboronom (8,06 g, 0,032 mol), kalijum-acetatom (10,4 g, 0,11 mol) i 1,4-dioksanom (200 mL). Nakon što je mlaz azota pušten kroz rezultujuću suspenziju u trajanju od 30 min, dodat je Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(582 mg, 0,795 mmol). Rezultujuća reakciona smeša je mešana 3 sata pri refluksu. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu, podeljena između vode (400 mL) i etil-acetata (600 mL) i filtrirana kroz podlogu CELITE<®>. Organska faza je ekstrahovana, osušena iznad natrijumsulfata, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je trituriran smešom dietil-etra (50 mL) i heksana (250 mL), a suspenzija je filtrirana. Filterski kolač se suši pod vakuumom na sobnoj temperaturi da bi se dobio 27% prinos (3,04 g) 1-metil-3-[5-(4-metil-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioksaborolan-2-il)-1H-piridin-2-on 102a kao smeđa čvrsta materija.
Primer 102b 3-(1-Metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 102b
Zapečaćena epruveta je napunjena 3-bromo-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehidom 101f (200 mg, 0,53 mmol), 1-metil-3-(5-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 102a (225 mg, 0,53 mmol), PdCl2(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4(210 mg, 1 mmol) i NaOAc (85 mg, 1 mmol) u acetonitrilu/H2O (8 ml/1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu i argonom, smeša je zagrevana na 100° C 4 h. Zatim je filtrirana, a filtrat je evaporisan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš eluacijom na molekularnim sitima sa 20:1 DCM/MeOH da se dobije 102b (135 mg, 43%). LCMS: [M+H]<+>593.
Primer 102 2-(4-(hidroksimetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 102
Smeša 3-(1-metil-5-(5-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1)-OXO-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 102b (135 mg, 0,22 mmol) i NaBH4(20 mg, 0,5 mmol) u MeOH (5 mL) je mešana na 0° C u trajanju od 0,5 h. Smeša je ugašena vodom i ostatak je ekstrahovan EtOAc (5 mL X 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 102 (18 mg, 20%). LCMS: [M+H]<+>595.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,59 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,37-7,38 (m, 2H), 7,23-7,25 (m, 1H), 6,54 (s, 1H), 5,16 (t, J=3,0, 1H), 4,40 (s, 2H), 4,14-4,18 (m, 3H), 3,93-3,95 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,09 (s, 4H), 2,60-2,61 (m, 6H), 2,48-2,34 (m, 5H), 1,78-1,79 (m, 2H), 1,69-1,70 (m, 2H)
11
Primer 103a 2-Bromo-4-hloronikotinaldehid 103a
U rastvor 2-bromo-4-hloropiridina (1,6 g, 8,0 mmol) u bezvodnom tetrahidrofuranu (40 mL), ohlađen na-70° C, dodat je rastvor litijum diizopropil-amida (5.0 mL, 10,0 mmol, 2.0 M) tokom perioda od 5 minuta i mešan na-70° C još 1 h. Bezvodni DMF (1,3 g) je uveden tokom perioda od 3 minuta i smeša je mešana još 30 minuta. Tada je ugašen zasićenom NH4Cl (30 mL) i ekstrahovan pomoću etil-acetata (20 ml x 3). Kombinovani organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (20: 1) da se dobije 103a kao žuta čvrsta materija (900 mg, 48%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10.21 (s, 1H), 8.52 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 5.0 Hz, 1H).
Primer 103b 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 103b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 103a (800 mg, 3.5 mmol), 3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 101E (665 mg, 3,5 mmol), tris (dibenzilideneaceton) dipaladijumom (0) (320 mg, 0,35 mmol), Ksantfos (400 mg, 0,7 mmol), Cs2CO3(2,3 g, 7,0 mmol) i 1,4-dioksanom (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu i argonom, smeša je zagrevana na 90° C 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80:1), dajući 103b kao žutu čvrstu supstancu (1,2 g, 50%). MS: [M+H]<+>330.
Primer 103c 4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 103c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 103b (600 mg, 1,0 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksa-borolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (468 mg, 1,0 mmol), Pd(dppf)Cl2(81 mg, 0,1 mmol), K3PO4.3H2O (678 mg, 3,0 mmol) i tetrahidrofuranom (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu i argonom, smeša je zagrevana pod refluksom 4 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40: 1), dajući 103c kao žutu čvrstu supstancu (510 mg, 73%). MS: [M+H]<+>635.
Primer 103 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il)
11
piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 103
U rastvor 103c (500 mg, 0,8 mmol) u metanolu (50 mL) dodat je natrijum-borohidrid (91 mg, 2.4 mmol) na 0° C i mešano još 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (3 mL) i koncentrirana. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 103 (224 mg, 45%). LCMS: [M+H]<+>637.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,61 (d, J = 3,0, 1H), 8,48 (d, J = 6,0, 1H), 7,92 (d, J = 3,5, 1H), 7,81 (d, J = 3,0)., 1H), 7,78 (s, 1H), 7,38 (d, J = 6,0, 1H), 7,24-7,27 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,81 (d, J = 11,5, 1H)., 5,01-5,04 (m, 1H), 4,60-4,71 (m, 5H), 4,32-4,49 (m, 2H), 3,83-4,15 (m, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,53-3,59 (m, 1H), 3,13-3,16 (m, 4H), 2,55-2,61 (m, 4H), 2,49-2,52 (m, 4H), 1,78-1,90 (m, 4H)
Primer 104a 4-Bromo-2-hlornikotinaldehid 104a
U rastvor 4-brom-2-hloropiridina (12,0 g, 60,0 mmol) u bezvodnom tetrahidrofuranu (300 mL), ohlađen na-70° C, dodat je rastvor litijum diizopropilamida (30,0 mL, 60,0 mmol, 2,0 M) preko u trajanju od 30 minuta i mešaju se na drugom mestu na-70° C 2 h. Bezvodni DMF (12,0 g) je uveden tokom perioda od 10 minuta i mešan još 30 minuta. Zatim je ugašen sa zasićenim NaHCO3(200 ml), ekstrahovan etil-acetatom (100 ml x 3). Kombinovan organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etilacetatom (20: 1), dajući 104a kao žutu čvrstu supstancu (4.0 g, 29%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10,23 (s, 1H), 8,44 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 5,5 Hz, 1H).
Primer 104b 2-hlor-4-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 104b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 104a (1,1 g, 5.0 mmol), 3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 101e (477 mg, 2,5 mmol), tris (dibenzilideneaceton) dipaladijumom (0) (230 mg, 0.25 mmol), Ksantfos (430 mg, 0,75
11
mmol), Cs2CO3(1,6 g, 5,0 mmol) i 1,4-dioksanom (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 65° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40: 1), dajući 104b kao žutu čvrstu supstancu (1,1 g, 80%). MS: [M+H]<+>330.
Primer 104c 2-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-4-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 104c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 104b (658 mg, 1,0 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksa-borolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (622 mg, 2,0 mmol), Pd(dppf)Cl2(65 mg, 0,08 mmol), K3PO4.3H2O (361 mg, 1,6 mmol) i tetrahidrofuranom (40 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 4 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40: 1) da se dobije 104c kao žuta čvrsta supstanca (400 mg, 63%). MS: [M+H]<+>635.
Primer 104 2-(3-(hidroksimetil)-2-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-4-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 104
U rastvor 104c (360 mg, 0,6 mmol) u metanolu (50 mL) dodat je natrijum-borohidrid (70 mg, 1,8 mmol) na 0° C i mešano još 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (2 mL) i koncentrirana. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 104 (63 mg, 16%) u obliku beličaste čvrste materije. LCMS: [M+H]<+>637.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,70 (d, J=3.0, 1H), 8,65 (d, J=5,5, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,85 (d, J=3,0, 1H), 7,60 (d, J=2,5, 1H), 7,36-7,37 (m, 2H), 7,22-7,23 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,12 (t, J=5,5, 1H), 4,55-4,56 (m, 2H), 4,43-4,45 (m, 4H), 4,14-4,16 (m, 3H), 3,93-3,95 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,43-3,44 (m, 1H), 3,05-3,08 (m, 4H), 2,61-2,63 (m, 2H), 2,46-2,47 (m, 2H), 2,36-2,39 (m, 4H), 1,68-1,78 (m, 4H).
Primer 105a N-Metoksi-N-metil-4,5,6,7-tetrahidrobenzo [b] tiofen-2-karboksamid 105a
11
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom prečišćena je azotom, napunjena 4,5,6,7-tetrahidrobenzo [b] tiofen-2-karboksilnom kiselinom (3,00 g, 16,5 mmol), metilen-hloridom (80 mL) i DMF (60 mg, 0,825 mmol) i ohlađena na 0° C. Dobijenom rastvoru, dodat je kap po kap oksalil-hlorid (2,31 g, 18,2 mmol). Nakon što je ovo dodavanje završeno, reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana 2 h. Nakon tog vremena, reakcija je koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom. Dobijena bela čvrsta supstanca je rastvorena u metilen hloridu (80 mL) i rastvor je ohlađen na 0° C. Zatim su dodati trietilamin (5,00 g, 49,5 mmol) i N, O-dimetilhidroksilamin (1,61 g, 16,5 mmol). Nakon završetka dodavanja, kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcijska smesa je mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Nakon tog vremena, ostatak je podeljen između vode (100 ml) i etil-acetata (200 ml). Slojevi su razdvojeni, i vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (100 ml). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (100 mL), zatim slanim rastvorom (100 mL) i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i rastvarač je uparen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom da se dobije 88% prinos od 105a (3,29 gm) kao bela čvrsta supstanca: t.t.36-37° C;<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 7.79 (e, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,34 (s, 3H), 2,78 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 2,62 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,82 (m, 4H); MS (APCI ) m/z 226,3 (M H)
Primer 105b 3-Hloro-1-(4,5,6,7-tetrahidrobenzo[b] tiofen-2-il) propan-1-on 105b
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom prečišćena je azotom i napunjena 105a (2.70 g, 12.0 mmol) i bezvodnim THF (45 mL), a rastvor je ohlađen na-10° C pomoću acetonskog/ledenog kupatila. Kap po kap doda se 1,0 M rastvor vinilmagnezijevog bromida u THF-u (13,2 mL, 13,2 mmol) i dobijena reakciona smeša se 4 h meša na 0° C. Nakon tog vremena, reakciona smeša je podeljena između etil-acetata (100 mL) i 2 M vodenog rastvora hlorovodonične kiseline (40 mL). Slojevi su razdvojeni, i vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (40 ml).
11
Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (100 mL), a zatim slanim rastvorom (100 mL), osušeni preko natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je rastvoren u metilen hloridu (30 mL) i dodat je 2 M rastvor hlorovodonika u dietil etru (15 mL). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1 h, rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem dobijenog ostatka hromatografijom na koloni dobije se 29% prinos (804 mg) 105b kao beličasta čvrsta supstanca: t.t. 57-58° C;<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 7,41 (e, 1H), 3,89 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 3,30 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,81 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,64 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,83 (m, 4H); MS (ECI ) m/z 229,1 (M H)
Primer 105c 5,6,7,8-Tetrahidro-1 H-benzo[b]ciklopenta [d] tiofen-3 (2 H)-on 105c
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 105b (800 mg, 3,51 mmol) i 98-procentnom sumpornom kiselinom (8 mL). Nakon 16 h mešanja na 95° C, reakciona smeša je sipana u led (50 g), a dobijena suspenzija je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 50 mL). Organski ekstrakti su kombinovani iznad natrijum-sulfata, osušeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom da se dobije 105c u 47% prinosu (320 mg) kao beličasta čvrsta supstanca: t.t. 75-76° C;<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 2.89 (m, 2H), 2,87-2,83 (m, 4H), 2,56 (t, 2H, J = 6.5 Hz), 1.84 (m, 4H)
Primer 105d 5,6,7,8-Tetrahidro-1 H-benzo [b] cikl.openta [d] tiofen-3 (2 H)-on oxime 105D
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena mehaničkom mešalicom i ulazom za azot, napunjena je hidroksilamin-hidrohloridom (573 mg, 8,25 mmol) i metanolom (10 ml). Smeša je ohlađena na 0° C koristeći ledeno kupatilo. Dodat je natrijum-acetat (677 mg, 8,25 mmol). Smeša je mešana na 0°C tokom 30 sati. Nakon ovog vremena, dodat je 105c (319 mg, 1.65 mmol) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi 16 h. Nakon tog vremena, smeša se koncentriše i dobijeni ostatak se triturira vodom (10 mL). Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena i osušena u vakuumskoj peći na 45°
12
C da bi se dobio prinos od 84% (287 mg) 105d kao beličasta čvrsta supstanca: t.t. 173-174° C;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) Z 10,38 (s, 1H), 2,97 (m, 2H), 2,77-2,73 (m, 4H), 2,47 (m, 2H), 1,75 (m, 4H); MS (APCI ) m/z 208,3 (M H)
Primer 105e 3,4,5,6,7,8-heksahidrobenzotieno [2,3-c] piridin-1 (2 H)-on 105e
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom, magnetnom mešalicom i ulazom za azot, napunjena je 105 d (285 mg, 1,38 mmol) i polifosfornom kiselinom (15 g). Nakon 16 h mešanja na 80° C, reakciona smeša se ohladi na sobnu temperaturu i doda se voda (30 mL). Dobijena smeša je mešana 30 min i filtrirana. Filterski kolač je ispran vodom (20 mL) i osušen u vakuumskoj peći na 45° C da bi se dobio 75% prinos (215 mg) od 105e kao beličasta čvrsta supstanca: t.t.203° C dec;<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 5,62 (e, 1H), 3,59 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,81 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 2,72 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,48 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,84 (m, 4H). MS (APCI+) m/z 208,3 (M+H)
Primer 105f 3-bromo-5-{6-okso-8-tia-5-azatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7)-dien-5-il} piridin-4-karbaldehid 105f
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 mL), 3,5-dibromoizonikotin-aldehidom (400 mg, 1,5 mmol), 8-tia-5-azatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7)-dien-6-on 105e (146 mg, 0,76 mmol) i cezijum-karbonatom (176 mg, 1,5 mmol). Ksantfos (40 mg, 0.08 mmol) i Pd3(dba)3(70 mg, 0,08 mmol) su dodati, a reakcijska smeša je zagrevana na 100° C u trajanju od 5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa DCM: MeOH (20: 1) da se dobije 105f (200 mg, 70%). MS:
[M+H]<+>377.
Primer 105g 3-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-okso-8-tia-5-azatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7)-dien-5-il} piridin-4-karbaldehid 105g
Zapečaćena epruveta je napunjena 105f (200 mg, 0.53 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101L (240 mg, 0,51 mmol), PdCl2(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4(230 mg, 1 mmol) i NaOAc (80 mg, 1 mmol) u CH3CN (5 mL) i H2O (1,5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 10: 1 DCM/MeOH, dajući 105g u prinosu od 40% (138 mg) kao bledožutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>638.
Primer 105 4-Hidroksimetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-5-(6-okso-8-tia-5-azatriciklo-[7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7)-dien-5-il} piridin 105
Otopini 3-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-okso-8-tia-5-azatriciklo [7.4.0.0<2,7>]-trideka-1 (9), 2 (7)-dien-5-il} piridin-4-karbaldehid 105g (130 mg, 0,20 mmol) u metanolu (5 mL) na 0° C dodat je natrijum-borohidrid (22 mg, 0,6 mmol) i mešano 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (1,0 mL) i koncentrirana. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 105 (90 mg, 65%). LCMS: [M+H]<+>:654.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,58 (d, J = 2.0, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,24-7,22 (m, 1H), 5,14 (t, J = 3,0, 1H), 4,56-4,42 (m, 6H), 4,08-3,90 (m, 2H), 3,60 (s, 3H)., 3,43 (d, J = 3,5, 1H), 3,07 (s, 4H), 2,89-2,79 (m, 4H), 2,55-2,53 (m, 2H), 2,39-2,37 (m, 4H), 1,80-1,81 (m, 4H)
Primer 106a 3,3-dimetilciklopentanon 106a
Laboratorijska boca od 1 L sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, levkom za dodavanje i ulazom za azot, prečišćena je azotom i napunjena eterom (200 mL) i bakar (I) jodidom (54,46 g, 0,286 mol). Smeša je ohlađena na 0° C, u reakcionu smešu je tokom 1,5 h dodat kap po kap metil-litijum (1.6 M u eteru, 357.5 mL, 0,572 mol) i mešano je na 0° C dodatnih 2 h. Nakon tog vremena, ukapavanjem je dodavan rastvor 3-metilciklo-pent-2-enona (25 g, 0,260 mol) u eteru (150 mL) tokom 1,5 h. Reakciona smeša je zatim mešana na 0° C tokom 2 h i sipana u natrijum-sulfat dekahidrat (300 g). Dobijena smeša je mešana 30 min Nakon tog vremena smeša je filtrirana i isprana etrom (1000 mL). Filtrat je koncentrovan i destilovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 70% prinos (20,5 g) 3,3-dimetilciklo-pentanona 106a kao bezbojna tečnost: bp 50-55° C (na 10 mmHg);<1>H NMR (300 MHz, CdCl3)Z 2.31 (t, 2H, J = 7,8 Hz), 2,05 (s, 2H), 1,79 (t, 2H, J = 7,8 Hz); MS (ESI ) m/z 113,3 (M H)
Primer 106b etil 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4 H-ciklopenta[b] tiofen-2-karboksilata 106b
Laboratorijska boca od 500 mL sa tri vrata i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, refluksnim kondenzatorom, levkom za dodavanje i dovodom azota prečišćena je azotom i napunjena DMF (9,49 g, 0,100 mol) i metilen-hloridom (100 mL). Reakciona smeša je ohlađena na 0° C i dodat je kap po kap fosfor oksihlorida (14,1 g, 0,920 mol) u reakciju tokom 30 min. Kada je ovo dodavanje završeno, reakcija je zagrejana do sobne temperature i mešana 1 h. Nakon tog vremena, ukapavanjem je dodavan rastvor 106a (11,2 g, 0,100 mol) u metilen hloridu (100 mL) tokom 1 h. Reakciona smeša je zatim mešana na refluksu 18 sati . Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i sipana u smešu drobljenog leda (400 mL) i natrijum-acetata (100 g, 1,22 mol). Dobijena smeša je mešana 45 min. Nakon tog vremena vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa metilen hloridom (2 × 500 mL). Kombinovani organski slojevi su zatim isprani vodom (2 x 200 mL), zatim slanim rastvorom (200 mL) i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je zatim uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrisan da bi se dobio sirovi proizvod 2-hlor-4,4-dimetilciklopent-1-enkarbaldehid koji je stavljen u laboratorijsku bocu od 500 ml s tri vrata i okruglim dnom opremljenom mehaničkom mešalicom, refluksnim kondenzatorom i dovodom azota. Zatim su dodati metilen-hlorid (200 mL), etil 2-merkaptoacetat (11,0 g, 0,092 mol) i trietilamin (30 g, 0,207 mol). Reakciona smeša je zatim mešana na refluksu 6 sati. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana do gustog orandžastog ostatka.
12
Dodati su etanol (200 mL) i trietilamin (30,0 g, 0,207 mol) i reakcija je zagrevana na refluksu tokom 12 h. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom, a rezultirajući ostatak je razblažen etrom (600 mL). Dobijena smeša je isprana sa 1 M hlorovodoničnom kiselinom (150 mL), slanom vodom (100 mL), osušena preko natrijumsulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom da bi se dobio 106b u prinosu od 34% (7,70 g) kao bezbojna tečnost:<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 7,48 (s, 1H), 4,33 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 2,72 (s, 2H), 2,56 (s, 2H), 1,38 (t, 3H, J = 1,8 Hz), 1,17 (s, 6H); MS (ESI ) m/z 225,1
Primer 106c 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4 H-cikl.openta [b] tiofen-2-karboksilne kiseline 106c
U laboratorijskoj boci od 250 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, 106b (4,00 g, 17,8 mmol) rastvoren je u etanolu (50 ml). Dodati su THF (50 mL), voda (50 mL) i litijum hidroksid (854 mg, 35,6 mmol) i smeša je mešana na 60° C tokom 4 h. Nakon ovog vremena reakcija se ohladi do sobne temperature i zakiseli sa 2M hlorovodoničnom kiselinom do pH 1.5, a zatim ekstrahuje sa etil-acetatom (2 x 200 mL). Organski slojevi su spojeni, isprani vodom (2 x 100 mL), zatim slanim rastvorom (100 ml) i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je zatim odvojeno filtracijom. Nakon isparavanja dobiveni filtrat, 106c je dobiven sa 91% prinosom (3,2 g) kao bela čvrsta supstanca: t.t. 170-172° C;<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 12,77 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 2,71 (s, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,20 (s, 6H); MS (ESI-) m/z 195,0 Primer 106d 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4 H-cikl.openta [b] kiselina 106d tiofen-2-karboksilne
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, refluksnim kondenzatorom i isparivačem, stavljenim na kondenzator, napunjena je 106c (2,30 g, 11,6 mmol), toluenom (25 mL), tionil-hloridom (4,09 g, 34,9 mmol) i DMF (1 kap). Smesa je zagrevana na refluksu 1 sat i zatim uparena pod sniženim pritiskom na rotacijskom isparivaču na 45° C. Dobijeni hlorid kiseline je razblažen metilen hloridom (20 mL). U odvojenoj laboratorijskoj boci od 250-mL sa tri vrata i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom rastvoren je N, O-dimetilhidroksilamin-hidrohlorid (2,26 g, 23,2 mmol) i N, N-diizopropiletilamin (2,97 g, 23,0 mmol) u bezvodnom metilenhloridu. (20 mL) pod azotom, i rastvor je ohlađen na 0° C u ledenom/vodenom kupatilu. Doda se rastvor kiselinskog hlorida i reakciona smeša se 18 h meša na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je ekstrahovana vodom (100 mL), 10% vodenom limunskom kiselinom (50 mL) i 1: 1 smešom zasićenog vodenog rastvora natrijum-bikarbonata i vode (100 mL). Organski sloj se osuši iznad natrijum-sulfata i upari pod sniženim pritiskom na rotacionom isparivaču da se dobije prinos od 93% (2,60 g) od 106d kao svetlo žuta čvrsta supstanca:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,66 (s, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,35 (s, 3H), 2,74 (s, 2H), 2,58 (s, 2H), 1,23 (s, 6H)
Primer 106e 3-hlor-1-(5,5-dimetil-5,6-dihidro-4 H-cikl.openta [b] tiofen-2-il) propan-1-on 106e
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, prečišćena je azotom i napunjena 106d (2,41 g, 10,0 mmol) i bezvodnim THF (20 mL). Rastvor je ohlađen na-70° C, i dodat je 1 M vinilmagnezijumbromid u THF (11 mL, 11,0 mmol) uz temperaturu reakcije koja je održavana ispod-60° C. Reakciona smeša je mešana na-13 do-7° C tokom 2 h i zatim zagrejana do sobne temperature tokom 30 min. Reakcija je ponovo ohlađena na-70° C i dodat je 2 M rastvor hlorovodonika u etru (22.5 ml, 45 mmol). Reakcija se zatim čuva u zamrzivaču na -10° C preko noći. Nakon tog vremena, smeša je uparena pod sniženim pritiskom na rotacionom isparivaču, a rezultirajući ostatak je podeljen između vode (100 mL) i etra (100 mL). Eterski ekstrakt je osušen iznad natrijum-sulfata i uparen pod sniženim pritiskom na rotacionom isparivaču da bi se dobio sirovi 106e (2.86 g, 118%) kao smeđe ulje sa čistoćom od oko 75% (NMR):<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7,45 (s, 1H), 3,89 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 3,30 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 2,75 (s, 2H), 2,59 (s, 2H), 1,24 (s, 6H)
Primer 106f 6,6-dimetil-1,2,6,7-tetrahidrodicikl.openta [b, d] tiopen-3 (5 H)-on 106f
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena
12
magnetnom mešalicom napunjena je sirovim 106e (2,86 g, 10,0 mmol pretpostavljenog kvantitativnog prinosa) i 98-procentnom sumpornom kiselinom. Reakciona smeša je zatim zagrejana u uljanom kupatilu na 90°C i mešana preko noći. Reakciona smeša je stavljena u kupatilo led/aceton, i dodat je hladni (5° C) rastvor dikalijum-hidrogen fosfata (105 g, 0,603 mol) u vodi (300 mL) u jednoj porciji. Dobijena smeša se mućka sa etil-acetatom (300 ml) i filtrira. Filtrirani kolač je ispran etil-acetatom (100 ml). Etil-acetatni sloj filtrata je odvojen, osušen iznad natrijum-sulfata i uparen pod sniženim pritiskom na rotacionom isparivaču, rezultirajući ostatak je prečišćen brzom hromatografijom na molekularnim sitima (silika, 80:20 heksani/etil-acetat) da bi se dobio 106f u 37% prinos u dva koraka (683 mg) kao amorfna smeđa čvrsta supstanca: t.t. 60-62° C;<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 2,92-2,87 (m, 4H), 2,79 (s, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,26 (s, 6H); LCMS (ESI ) m/z 207,0 (M H)
Primer 106g 6,6-dimetil-1,2,6,7-tetrahidrodicikl.openta [b, d] tiofen-3 (5 H)-on 106g
Laboratorijska boca od 250 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot napunjena je hidroksilamin-hidrohloridom (688 mg, 9,90 mmol), natrijum-acetatom (812 mg, 9,90 mmol) i metanolom (10 mL) na sobnoj temperaturi 30 min. Nakon tog vremena, kap po kap je dodat rastvor 106f (680 mg, 3,30 mmol) na sobnoj temperaturi, i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 14 h u atmosferi azota. Pošto reakcija nije bila potpuna, dodati su hidroksilamin hidrohlorid (1,15 g, 16,5 mmol) i natrijum-acetat (1,35 g, 16,5 mmol) i mešanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi tokom 58 h. Nakon tog vremena, smeša je razblažena metilen hloridom (150 mL) i vodom (100 mL), i slojevi su odvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (50 ml) i osušen natrijum-sulfatom. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i filtrat je koncentriran da bi se dobio sirovi 106g u kvantitativnom prinosu (730 mg) kao žuta polučvrsta materija koja je korištena u sljedećem koraku bez prečišćavanja: t.t. 122-124° C;<1>H NMR za glavni izomer (500 MHz, CdCl3) δ 3,13-3,11 (m, 2H), 2,85-2,83 (m, 2H), 2.77 (s, 2H), 2,49 (s, 2H), 1,24 (e, 6H); MS (ESI ) m/z 222,0 (M H)
Primer 106h 6,6-dimetil-3,4,6,7-tetrahidro-5 H-ciklopenta [4,5] tieno [2,3-c] piridin-1 (2 H)-on 106h
12
Laboratorijska boca od 100 ml sa tri vrata i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom, mehaničkom mešalicom i ulazom za azot, napunjena je 106g (700 mg, 3,16 mmol) i polifosfornom kiselinom (25 g). Reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 13 sati pod azotom. Nakon tog vremena, smeša se ohladi na 0° C i dodaje se voda (50 mL) kap po kap pažljivo održavajući unutrašnju temperaturu između 10-45° C. Smeša je razblažena sa 90:10 metilen hlorid/metanol (100 mL) i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 90:10 metilen hlorid/metanol (50 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum-bikarbonatom (50 mL), slanim rastvorom (150 mL) i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom. Filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom, a rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografije na fleš koloni (silika, 95: 5 metilen hlorid/metanol) dajući 6,6-dimetil-3,4,6,7-tetrahidro-5 H-cikl.openta [4,5] tieno [2,3-c] piridin-1 (2 H)-on 106h u 90% prinosa (630 mg) kao amorfna beličasta čvrsta supstanca: mP 205-207° C;<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 5.51 (e, 1H), 3,60-3,56 (m, 2H), 2,76-2,73 (m, 4H), 2.49 (s, 2H), 1.26 (s, 6H); MS (ESI ) m/z 222,0 (M H) Primer 106i 3-Bromo-5-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-4-karbaldehid 106i
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 ml), 3,5-dibromoizonikotin-aldehidom (400 mg, 1,5 mmol), 4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-9-on (106h) (170 mg, 0,76 mmol) i cezijum-karbonatom (176 mg, 1,5 mmol). Ksantfos (40 mg, 0.08 mmol) i Pd2(dba)3(70 mg, 0,08 mmol) su dodati, a reakcijska smeša je zagrejana na 100° C u trajanju od 5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa DCM: MeOH (20:1) da se dobije 106i (200 mg, 65%). MS: [M+H]<+>405.
Primer 106j 3-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-
12
okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-5-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il } piridin-4-karbaldehid 106j
Zapečaćena epruveta je napunjena 106i (200 mg, 0.50 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (240 mg, 0,51 mmol), PdCl2(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4(230 mg, 1 mmol) i NaOAc (80 mg, 1 mmol) u CH3CN (5 mL) i H2O (1,5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 10:1 DCM/MeOH, dajući 106j (130 mg, 40%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>666.
Primer 106 4-Hidroksimetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-5-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-4-karbaldehid 106
U rastvor jedinjenja 106j (130 mg, 0,20 mmol) u metanolu (5 mL) na 0°C dodat je natrijum hidroksid (22 mg, 0,6 mmol) u vodi (30 mL) i mešan 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (1,0 mL) i koncentrirana. Ostatak je prečišćen reverznom faznom prep-HPLC tehnikom radi dobijanja 106 (60 mg, 45 %) u obliku bele čvrste materije. LCMS:
[M+H]<+>: 668.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) Z 8,58 (d, J = 2.0, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,87 (d, J = 2.5, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 7,24-7,22 (m, 1H), 5,15 (t, J = 5,0, 1H), 4,56-4,42 (m, 6H), 4,08-4,04 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,43-3,42 (m, 1H), 3,07-2,94 (m, 6H), 2,55-2,53 (m, 4H), 2,39-2,38 (m, 4H), 1,23 (s, 6H)
Primer 107a (E)-Etil 3-(2-hloro-4,4-dimetilciklopent-1-enil) akrilat 107a
12
Sledeća dva postupka su prilagođena iz Organic Preparations and Procedures Int., 29 (4): 471-498. Laboratorijska boca od 500 mL s jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot napunjena je 2-hloro-4,4-dimetilciklopent-1-enkarbaldehidom (38 g, 240 mmol) u benzenu (240 mL). U rastvor je dodat etoksikarbonilmetilen trifenilfosforan (84 g, 240 mmol). Smeša je mešana 14 h. Nakon tog vremena, rastvarač je uparen i ostatak je trituriran sa heksanom (2 L) da bi se proizvod izdvojio iz PPh3nusprodukata. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni koristeći 100% heksan-1: 1 heksan/etil-acetat gradijent da se dobije 37% prinos (20 g) (E)-etil 3-(2-hloro-4,4-dimetilciklopent-1-enil) akrilat 107a.
Primer 107b Etil 5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociklopenta [b] pirol-2-karboksilat 107b
Laboratorijska boca od 250 mL s jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot, napunjena je 107a (17 g, 74 mmol) u DMSO (100 mL). U rastvor je dodat natrijum-azid (9,6 g, 150 mmol). Smeša je zagrejana na 75°C i mešana 8 h. Nakon hlađenja do rt (sobna temperatura), H2O (100 ml) i CH2Cl2(200 ml) su dodati i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa CH2Cl2(50 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko natrijum-sulfata i koncentrovani u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni koristeći gradijent 100% heksan-1: 1 heksan/etil-acetat da se dobije 37% prinos (5,7 g) od 107b.
Primer 107c Etil 1-(cijanometil)-5,5-dimetil-1, 4,5,6-tetrahidrociklo-penta [b] pirol-2-karboksilat 107c
Laboratorijska boca od 250 mL s jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot, napunjena je 107b (6,2 g, 30 mmol) u DMF (57 mL). U rastvor je dodat NaH (80% disperzija u mineralnom ulju, 1,26 g, 42,1 mmol).
12
Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 6 sati tokom 90 min. Nakon tog vremena, dodat je bromoacetonitril (2,94 mL, 42 mmol). Smeša je mešana tokom 14 h. Nakon tog vremena, voda (100 mL) i etil-acetat (200 mL) su dodati i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 X 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni preko natrijum-sulfata i koncentrovani u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije 95% prinos (7 g) od 107c.
Primer 107d Etil 1-(2-aminoetil)-5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociklo-penta [b] pirol-2-karboksilat hidrohlorid 107d
500-ml Parr-ova reaktorska boca je prečišćena sa azotom i napunjena 10% paladijuma na uglju (50% vlažna, 2,0 g suve mase), 107c (4,5 g, 18 mmol), 12% hlorovodonična kiselina (9,2 mL, 37 mmol). etilacetat (80 mL) i etanol (52 mL). Boca je pričvršćena na Parrov hidrogenator, evakuisana, napunjena gasom vodonika do pritiska od 50 psi i mućkana 6 h. Posle tog vremena, vodonik je ispražnjen i u bocu je napunjen azot. Dodat je CELITE<®>521 (10,0 g) i smeša je filtrirana kroz podlogu CELITE<®>521. Filterski kolač je ispran etanolom (2 x 50 mL), a kombinovani filtrati su koncentrovani do suva pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak etil 1-(2-aminoetil)-5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociklopenta [b] pirol-2-karboksilat hidrohlorid 107d je prenesen u slijedeći korak bez daljeg prečišćavanja.
Primer 107e 4,4-dimetil-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 107e
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot, prečišćena je azotom i napunjena sirovim 1-(2-aminoetil)-5,5-dimetil-1,4,5,6-tetrahidrociklopentom [b] pirol-2-karboksilat hidrohloridom 107d (~ 18 mmol), natrijum-etoksidom (6,2 g, 92 mmol) i etanolom (120 mL). Smeša je mešana na 55°C preko noći. Nakon tog vremena, reakciona smeša je koncentrovana pod
1
sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između etil-acetata (200 mL) i vode (100 mL). Rastvor je filtriran. Čvrsta supstanca je isprana etil-acetatom (15 mL) da se dobije 850 mg željenog proizvoda 107e. Organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 × 100 mL). Spojeni organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata i koncentrovani pod smanjenim pritiskom skoro do suva. Rastvor je filtriran i čvrsta supstanca (1,44 g) je isprana etil-acetatom (15 mL). Kombinovane čvrste supstance su sušene pod vakuumom, dajući prinos od 61% (2,3 g) od 107e.
Primer 107f 3-Bromo-5-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-karbaldehid 107f
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 ml), 3,5-dibromoisikotinaldehidom (400 mg, 1,5 mmol), 107e (155 mg, 0,76 mmol) i cezijumkarbonatom (176 mg, 1,5 mmol). Ksantfos (40 mg, 0,08 mmol) i Pd2(dba)3(70 mg, 0,08 mmol) su dodatti, a reakcijska smeša je zagrejana na 100° C u trajanju od 5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa DCM: MeOH (20:1) da bi se dobio 107f (200 mg, 70%). MS: [M+H]<+>388.
Primer 107g 5-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-3-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>]-dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-karbaldehid 107g
Zapečaćena epruveta je napunjena 107f (200 mg, 0,51 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (240 mg, 0,51 mmol), PdCl2(dppf) (42 mg, 0,05 mmol), K3PO4(230 mg, 1 mmol) i NaOAc (80 mg, 1 mmol) u CH3CN (5 mL) i H2O (1.5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na fleš koloni eluirajući sa 10: 1 DCM/MeOH dajući 107g u 35% prinosa (120 mg) kao smeđa čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>649.
Primer 10710-[4-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-4-(hidroksimetil) piridin-3-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 107
U rastvor 107g (120 mg, 0.,18 mmol) u metanolu (5 mL) na 0° C dodat je natrijumborohidrid (22 mg, 0,6 mmol) i smeša je mešana 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (1,0 mL) i koncentrirana. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne
1 1
faze, čime se dobije 107 (72 mg, 60%). LCMS: [M+H]<+>:651.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,65 (s,1H), 8,59 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,86 (d, J=1,5, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,22 (d, J=2.4, 2H), 6,52 (s, 1H), 5,16 (t, J=3,0, 1H), 4,56-4,44 (m, 6H), 4,21-4,12 (m, 3H), 3,92 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,43-3,42 (m, 1H), 3,06 (s, 4H), 2,57-2,38 (m, 8H), 1,21 (s, 6H)
Primer 108a 4-hlor-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6]>dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 2-bromo-4-hloronikotinaldehidom 103a (3,0 g, 13,6 mmol), 4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 107e (1,84 g, 9,0 mmol), tris (dibenzilidenaceton) dipaladijumom (0) (826 mg, 0,9 mmol), Ksantfos (1,04) mg, 1,8 mmol), Cs2CO3(5,8 g, 18,0 mmol) i 1,4-dioksanom (40 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 90° C tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je rekristalizovan iz etil-acetata da bi se dobio 108a kao žuta čvrsta supstanca (730 mg, čistoća: 99%; prinos: 31,7 %). MS: [M+H]<+>344,0.
Primer 108b 4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>]-dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} nikotinaldehid 108b
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diaza-triciklo [6.4. 0,0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehidom 108a (350 mg, 1,02 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (476 mg, 1,02 mmol), Pd(dppf)Cl2(83 mg, 0,10 mmol), K3PO4(526 mg, 3,06 mmol) i tetrahidrofuranom (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 4 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40: 1), dajući 108b kao belu čvrstu supstancu (400 mg, 61%). MS: [M+H]<+>649,4.
Primer 108 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 108
U rastvor 4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo-[6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-
1 2
dien-10-il} nicotinaldehyde 108b (400 mg, 0,62 mmol) u metanolu (30 ml) na 0° C dodat je natrijum-borohidrid (70 mg, 1,86 mmol) i mešano 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (1.0 mL) i koncentrirana. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 108 (170 mg, 42%). LCMS: [M+H]<+>651,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,63 (d, J = 2,0, 1H), 8,48 (d, J = 5,0, 1H), 7,92 (d, J = 2,5, 1H), 7,82 (d, J = 2,5, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5.0, 1H), 7,27-7,25 (m, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,5, 1H), 5,05 (t, J = 6,5, 1H), 4,72-4,64 (m, 5H), 4,51-4,48 (m, 1H), 4,34-4,32 (m, 1H), 4,15 (d, J = 4,5, 2H), 3,87 3,84 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,59-3,54 (m, 1H), 3,16-3,14 (m, 4H), 2,58-2,50 (m, 8H), 1,27 (s, 6H)
Primer 109a 4-Hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 2-bromo-4-hlornikotinaldehidom 103a (660 mg, 3,0 mmol), 4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-9-on 106h (665 mg, 3,0 mmol), tris (dibenzilidenaceton) dipaladijumom (0) (270 mg, 0.3 mmol) XantPhos (340 mg, 0,6 mmol), Cs2CO3(2,0 g, 6,0 mmol) i 1,4-dioksanom (20 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 90° C tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom, dajući 109a kao žutu čvrstu supstancu (105 mg, 14%). MS: [M+H]<+>361.
Primer 109b 4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>]-dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} nikotinaldehid 109b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom, napunjena je 109a (75 mg, 0,2 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il). piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (94) mg, 0,2 mmol), Pd(dppf)Cl2(17 mg, 0,02 mmol), K3PO4.3H2O (140 mg, 0,6 mmol) i tetrahidrofuranom (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 4 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40:1) do 109b kao žuta čvrsta materija (60 mg, 47%). MS: [M+H]<+>666.
Primer 109 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il)
1
piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-9-on 109
U rastvor 109b (60 mg, 0,1 mmol) u metanolu (5 mL) na 0° C dodat je natrijumborhidrid (11 mg, 0,3 mmol) i smeša je mešana 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (0,3 mL) i koncentrirana. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 109 (14 mg, 24%) u obliku smeđe čvrste materije. LCMS: [M+H]<+>668.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,60 (d, J = 2.5, 1H), 8,48 (d, J = 5,0, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,85 (d, J = 3,0, 1H), 7,44 (d, J = 2,0, 1H), 7,34-7,38 (m, 2H), 7,23 (d, J = 9,0, 1H), 4,94 (t, J = 5,0, 1H), 4,55 (t, J = 7,0, 2H), 4,39-4,46 (m, 4H), 4,14-4,19 (m, 1H), 3,79-3,83 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,42-3,44 (m, 1H), 3,00-3,07 (m, 5H), 2,85-2,90 (m, 1H), 2,76 (s, 2H), 2,52-2,59 (m, 2H), 2,36-2,39 (m, 4H), 1,21 (d, J = 6,5, 6H)
Primer 110a 1-Metil-3-(6-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 110a
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i kondenzatorom napunjena je 5-bromo-1-metil-3-(6-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H),-on (0,45 g, 1,08 mmol), (PinB)2(1,37 g, 5,4 mmol), Pd2(dba)3(49 mg, 0,054 mmol), X-Phos (52 mg 0,11 mmol)), KOAc (318 mg, 3,24 mmol), 1,4-dioksan 20 ml. Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 60° C 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 110a, koji je direktno upotrebljen u sledećoj reakciji. MS: [M+H]<+>426.
Primer 110b 4-(1-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 110b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino-[1, 2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehidom 103b (377 mg, 1,15 mmol), 110a (320 mg, 0,78 mmol), Pd(dppf)Cl2(130 mg, 0,16 mmol), K3PO4.3H2O (52,9 mg, 0,23 mmol) i tetrahidrofuranom (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na refluksu preko noći, ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40:1), dajući 110b kao žutu čvrstu supstancu (351 mg, 76%). MS: [M+H]<+>593.
Primer 110 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(6-(4-metilpiperazin-1-il) piridin-2-
1 4
ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 110
U rastvor 110b (60 mg, 0,1 mmol) u metanolu (50 mL) dodat je natrijum-borohidrid (11,5 mg, 0,3 mmol) na 0° C i smeša je mešana još 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (3 mL) i koncentrirana. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 110 (26,2 mg, 49%). LCMS: [M+H]<+>595.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.69 (d, J = 1,5, 1H), 8,46 (d, J = 5,0, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,41-7,37 (m, 1H), 7,34 (d, J = 1,5, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,22 (d, J = 8,0, 1H), 6,15 (d, J = 8,5, 1H), 5,10 (t, J = 6,5, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,51-4,30 (m, 2H), 4,15-4,12 (m, 2H), 3,93-3,89 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,58-3,48 (m, 4H), 2,61-2,56 (m, 7H), 2,47-2,39 (m, 3H), 1,91-1,87 (m, 2H), 1,79-1,78 (d, J = 5,0, 3H)
Primer 111a (6-Aminopiridin-3-il) (morfolino) metanon 111a
U rastvor morfolina (9,00 g, 103 mmol) u EtOH (400 mL) dodat je EDCI (10,0 g, 52,2 mmol), HOBt (7,00 g 518 mmol) i 6-aminonikotinska kiselina (600 g, 43,4 mmol). Nakon 18 sati mešanja, dobijena suspenzija je filtrirana. Čvrsta supstanca je triturirana sa smešom MeOH (100 mL) i metilen hlorida (100 mL) da se dobije 111a kao bela čvrsta supstanca (2,7 g, 30%). LCMS: (M H)<+>208 sa smešom MeOH (100 mL) i metilen-hlorida (100 mL) da se dobije 111a kao bela čvrsta supstanca (2,7 g, 30%). LCMS: (M+H)<+>208 Primer 111b 5-Bromo-1-metil-3-(5-(morfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 111b
Sljedeći postupak opisan za sintezu 101i, intermedijer 111a i 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on su reagirali da bi se dobio 111b u prinosu od 21%. LCMS: (M+H)<+>394.<'>H NMR (500 MHz, MeOD) 88,84 (d, J = 2,5, 1H), 8,42 (d, J = 2, 1H), 7,72 (m, 1H), 7,42 (d, J = 2, 1H), 7,11 (d, J = 8,5, 1H), 3,72 (m, 8H), 3,63 (s, 3H).
Primer 111c 1-metil-3-(5-(morfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-
1
tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 111c
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i kondenzatorom napunjena je 111b (1,0 g, 0,25 mmol), X-phos (120 mg, 0,025 mmol), Pd2(dba)3(110 g, 0,0125 mmol), KOAc (750 mg, 0,75 mmol), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolan) (3,2 g, 1,25 mmol) i 1,4-dioksan (50 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 100° C 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje 5:1 petrol etrom/etil-acetatom, dajući 111c kao žutu čvrstu supstancu (700 mg, 63%). MS: [M+H]<+>441.
Primer 111d 4-(1-metil-5-(5-(morfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 111d
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i kondenzatorom napunjena je 111c (450 mg, 1,26 mmol), 4-hlor-2-(1-okso-3,4,6,7, 8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 103b (413 mg, 1,26 mmol), Pd(dppf)Cl2(102 mg, 0,126 mmol), K3PO4.3H2O (85 mg, 0,352 mmol) i THF (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 100° C 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 7:1 petrol etrom/etil-acetatom, dajući 111d kao žutu čvrstu supstancu (700 mg, 63%). MS:
[M+H]<+>608.
Primer 111 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(morfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 111
Smeša 111d (60 mg, 0,05 mmol.), NaBH4(6,4 mg, 0,1 mmol) i MeOH (5 mL) mešana je na 0°C tokom 30 min. Smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je ekstrahovan pomoću EtOAc i(10 mL X 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 111 (27 mg, 44%). LCMS: [M+H]<+>610.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9,00 (s, 1H), 8,78 (d, J=2.0, 1H), 8,49 (d, J=5, 1H), 8,26 (d, J=2.0, 1H), 7,65-7,67 (m, 2H), 7,60 (d, J=2,5, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,96 (t, J=5, 1H), 4,40-4,46 (m, 2H), 4,11-4,24 (m, 3H), 3,86-3,88 (m, 1H), 3,56-3,62 (m, 8H), 3,50 (s, 4H), 2,62-2,63 (m, 2H), 2,46-2,47 (m, 2H), 1,67-1,80 (m, 4H)
Primer 112a Metil 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat 112a
1
Laboratorijska boca od 500 mL sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot je prečišćena sa azotom i napunjena 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilnom kiselinom (30,4 g, 184 mmol), DMF (1,00 g, 13,6 mmol) i metilen-hloridom (300 mL). Rastvor je ohlađen na 0° C koristeći ledeno kupatilo. Dodat je kap po kap oksalil hlorid (28,0 g, 221 mmol), a reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature tokom 30 min i mešana 5 h. Nakon tog vremena, dobijeni rastvor je koncentrovan da bi se dobila smeđa čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca je rastvorena u bezvodnom metanolu (400 mL), i rastvor je ohlađen na 0° C. dodat je trietilamin (57 g, 552 mmol) u reakcionu smešu i mešan još 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon tog vremena, reakciona smeša je koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa metilen hloridom (300 mL) i ispran vodom (200 mL) i zasićenim natrijum-bikarbonatom (200 mL). Organska faza je osušena iznad natrijum-sulfata, filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je titriran sa heksanom (200 mL) da se dobije 112a u prinosu od 58% (19,1 g) kao bela čvrsta supstanca: tt 72-74° C;<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,13 (e, 1H), 6,23 (s, 1H), 3,93 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 3,77 (s, 3H), 2,75 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 1,93 (m, 2H), 1,80 (m, 2H); (APCI ) m/z 180,1 (M H)
Primer 112b Metil 3-(cijanometil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat 112b
Laboratorijska boca od 500-mL sa tri vrata i okruglim dnom opremljena levkom za dodavanje, termometrom i napunjena 112a (6,70 g, 37,4 mmol), jodoacetonitrilom (12,5 g, 74,9 mmol), gvožđe (II) sulfat-heptahidratom (5,20 g, 18,7) mmol) i dimetil-sulfoksidom (250 mL). Vodonik peroksid (35%, 18,2 g, 187 mmol) je ukapavan u smesu kroz 1 sat kroz pumpu sa špricom na sobnoj temperaturi pomoću vodenog kupatila. Željezo (II) sulfat heptahidrat (2 do 3 ekvivalenta) je dodat u reakcijsku smesu u obrocima da bi se temperatura održavala između 25° C i 35° C, dok boja reakcijske smese nije postala tamnocrvena. Ako TLC pokaže da reakcija nije završena, dodaje se više vodonikovog peroksida (2-3
1
ekvivalenta) i više željeznog (II) sulfat heptahidrata (1-2 ekvivalenta) dok se reakcija ne završi. Nakon tog vremena, reakciona smeša je podeljena između zasićenog rastvora natrijum-bikarbonata (200 mL) i etil-acetata (400 mL). Organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim rastvorom natrijum-tiosulfata (50 mL), osušeni preko natrijum-sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio 78% prinos (6,40 g) 112b kao žuto ulje:<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 6,23 (s, 1H), 4,23 (s, 2H), 3.94 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 3,81 (s, 3H), 2,74 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 2,00 (m, 2H), 1,83 (m, 2H); (APCI ) m/z 219,3 (M H)
Primer 112c Metil 3-(2-Aminoetil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat Hlorovodonična sol 112c
Metil 3-(cijanometil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat 112b je hidrogeniziran sa katalizatorom oksida platine na 50 psi vodonika u etanolu i etil-acetatu u prisustvu hlorovodonika preko noći na sobnoj temperaturi da bi se dobio 112c (380 mg, 1,74 mmol) koji je upotrebljen direktno u sledećem koraku.
Primer 112d 3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2 H)-on 112d
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot, prečišćena je azotom i napunjena metil 3-(2-aminoetil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat hlorovodonikovom soli 112c (pripremljena gore, procenjena 1,74 mmol, pretpostavljajući kvantitativni prinos), natrijumetoksidom (354 mg, 5,22 mmol) i etanolom (20 ml). Smeša je mešana na 55°C tokom 5 h. Nakon tog vremena, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između etil-acetata (200 mL) i vode (100 mL). Organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 × 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni natrijum-sulfatom i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni da se dobije prinos od 67% (220 mg) 112d kao bela čvrsta supstanca: tt 195-197° C;<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 6,76 (e, 1H), 5,89 (s,
1
1H), 3,78 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 3,35 (m, 2H), 2,66 (m, 4H), 1,87 (m, 2H), 1,72 (m, 2H); (APCI ) m/z 191,3 (M H)
Primer 112e 3-Bromo-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 112e
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 mL), 3,5-dibromoizonikotinaldehidom (400 mg, 1,5 mmol), 112d (142 mg, 0,76 mmol) i cezijumkarbonatom (176 mg, 1,5 mmol). Ksantfos (40 mg, 0,08 mmol) i Pd2(dba)3(70 mg, 0,08 mmol) su dodati, a reakcijska smeša je zagrejana na 100° C u trajanju od 5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa DCM: MeOH (20: 1) da bi se dobio 112e (200 mg, 70%). MS: [M+H]
Primer 112f 3-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) isonicotinaldehyde 112F
Zapečaćena epruveta je napunjena 112e (200 mg, 0.53 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (240 mg, 0,51 mmol), PdCl2(dppf) (42 mg, 0,05 mmol)), K3PO4(230 mg, 1 mmol) i NaOAc (80 mg, 1 mmol) u CH3CN (5 mL) i H2O (1,5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana do 100°C tokom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na fleš kolonie eluiranjem sa 10: 1 DCM/MeOH dajući prinos 112F (138 mg, 40%) kao blijedo žute čvrste materije. MS:
[M+H]<+>635.
Primer 112 2-(4-(hidroksimetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-on 112
Smeša 112f (130 mg, 0,20 mmol.) i NaBH4(20 mg, 0,5 mmol) u MeOH (5 mL) mešana je na 0°C tokom 0,5 h. Smeša je ugašena vodom, i ekstrahovana pomoću EtOAc (5mL X 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 112 (48 mg, 34%). LCMS: [M+H]<+>:637.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,58 (e, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,86 (d, J = 2,4, 1H), 7,377,36 (m, 2H), 7,23-7,21 (m, 1H), 6,02 (s, 1H), 5,02 (s, 1H), 4,54 (t, J = 6,5, 2H), 4,45 (t, J = 5,5, 2H), 4,36-4,35 (m, 2H), 4,00-3,79 (m, 4H), 3,59 (s, 3H), 3,43-3,41
1
(m, 1H), 3,07-2,96 (m, 6H), 2,70 (t, J = 6,0, 2H), 2,39-2,38 (m, 4H), 1,92-1,90 (m, 2H), 1,75-1,73 (m, 2H).
Primer 113a (3-Nitro-1 H-pirazol-5-il) metanol 113a
Laboratorijska boca od 3 L sa tri vrata i okruglim dnom opremljena mehaničkom mešalicom, levkom za dodavanje i dovodom azota prečišćena je azotom i napunjena 3-nitropirazol-5-karboksilnom kiselinom (28,0 g, 178 mmol) i THF (420 ml) i ohlađena na-5° C pomoću ledenog/acetonskog kupatila. Dodat je rastvor kompleksa boran-THF (1,0 M, 535 mL, 535 mmol) brzinom koja je održavala unutrašnju temperaturu reakcije ispod 5° C. Nakon što je dodavanje završeno, kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Nakon ovog vremena reakcija se ohladi na-5° C koristeći ledeno/acetonsko kupatilo , doda se voda (70 mL) i 4N hlorovodonična kiselina (70 mL) i reakcija se meša na refluksu 1 h da bi se uništio boran kompleks sa pirazolom. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom do zapremine od približno 30 mL. Dodat je etil-acetat (175 ml) i smeša je mešana 15 min. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (4 × 200 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum-bikarbonatom (2 x 50 mL), slanom vodom (50 mL) i osušeni preko natrijum-sulfata, sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio (3-nitro)-1 H-pirazol-5-il) metanola 113a u prinos 94% (24,0 g) kao svijetlo žuta čvrsta materija:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,90 (br s, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,58 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 4,53 (d, 2H, J = 5,1 Hz); MS (ESI ) m/z 144,0 (M H)
Primer 113b (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1 H-pirazol-5-il) metanol 113b
Laboratorijska boca od 1 L sa tri vrata i okruglim dnom opremljena mehaničkom mešalicom i termoregulatorom, prečišćena je azotom i napunjena 113a (25,0 g, 175 mmol), DMF (250 mL) i cezijum-karbonatom (70, g, 215 mmol) zagrevana je na 104° C 5 min. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0° C koristeći ledeno/acetonsko kupatilo i dodat je dibromoetan (329 g, 1,75 mol) u porcijama (bez egzotermije). Reakciona smeša je mešana na
14
0 °C 1 h, a zatim 4h na sobnoj temperaturi. Nakon tog vremena rastvor KH2PO4(40 g) u vodi (400 ml) je dodat polako. Reakciona smeša je mešana 30 min na sobnoj temperaturi. Dodat je etil-acetat (450 mL) i vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (200 mL), slanim rastvorom (200 mL), osušeni preko natrijum-sulfata, i sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 86% prinos (37,5 g) sirovog 113b kao narandžastog ulja:<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 6,85 (e, 1H), 4,82 (d, 2H, J = 5.4 Hz), 4,66 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 3,83 (t, 2H, J = 6,3 Hz); MS (ESI ) m/z 249,9 (M H).
Primer 113c 1-(2-Bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1 H-pirazol 113c
Laboratorijska boca od 500 mL sa tri vrata i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, dovodom azota i refluksnim kondenzatorom prečišćena je azotom i napunjena 113b (37,0 g, 148 mmol) i hloroformom (160 mL). Reakcija je ohlađena na-5° C koristeći ledeno/acetonsko kupatilo i u porcijama je dodat fosforni tribromid (40,0 g, 148 mmol). Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcija je mešana na refluksu tokom 2 h. Nakon tog vremena, reakcija je ohlađena na-5° C i dodaje se zasićeni vodeni natrijum-bikarbonat (250 mL) dok se ne dostigne pH 8,5. Smeša je ekstrahovana sa etil-acetatom (3 x 150 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim natrijum-karbonatom (2 x 50 mL), slanom vodom (75 mL), osušeni preko natrijum-sulfata i sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio žuti ostatak koji je rastvoren blagim zagrejavanjem u metilen hloridu (60 mL). Dodaju se heksani (približno 20 mL) i rastvor postaje zamućen. Smeša se zagreva dok se ne formira čvrsti talog, doda se metilen hlorid (9 mL) i rastvor postane bistar. Rastvor je ostavljen da se ohladi na sobnu temperaturu i nakon 4 h dobijeni kristali su sakupljeni vakuumskom filtracijom. Filterski kolač je ispran sa ledeno hladnom 1: 2 mešavinom metilen hlorida: heksana (2 × 20 ml) dajući prinos 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1 H-pirazol (19,7 g). Kombinovani filtrati su upareni i postupak je ponovljen da bi se dobilo dodatnih 9,70 g 1-(2-bromoetil)-5-(bromo-metil)-3-nitro-1H-pirazola. Čvrste materije su u kombinaciji i osušene pod visokim vakuum za 18 h dajući prinos 57% (26,0 g) 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1 H-pirazol 113C kao bele kristale: tt 95-97° C;<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 6.93 (e, 1H), 4.63 (t, 2H, J = 6.0 Hz), 4.54 (s, 2H), 3.86 (t, 2H, J = 6,0 Hz).
Primer 113d 5-metil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 113d
Laboratorijska boca od 1 L sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot napunjena je THF (350 mL), 113c (10,0 g, 32,2 mmol), 2M rastvora metilamina u THF (113 mL, 225 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi 72 h. Nakon ovog vremena reakcija je koncentrovana do suva pod sniženim pritiskom, i rezultirajuća čvrsta supstanca je mešana sa smešom etil-acetata (75 mL) i 10% vodenog kalijum karbonata (75 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (2 × 75 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa 10% vodenim rastvorom kalijum karbonata (75 mL), zatim sa slanim rastvorom (50 mL) i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 113d u 97% prinosu (5,70 g) kao žuta čvrsta supstanca:<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 6,62 (e, 1H), 4,28 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 3.67 (s, 2H), 2,95 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 2,52 (s, 3H); MS (ESI ) m/z 183,0 (M H)
Primer 113e 5-Metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 113e
500-ml Parr-ova reaktorska boca je prečišćena sa azotom i napunjena 10% paladijuma na uglju (50% vlažne, 800 mg suve mase) i rastvorom 113d (4,00 g, 2,20 mmol) u etanolu (160 mL). Boca je pričvršćena na Parr hidrogenator, evakuisana, napunjena gasom vodonika do pritiska od 45 psi i mućkana 2 h. Posle tog vremena, vodonik je ispražnjen i u bocu je napunjen azot. Dodat je CELITE<®>521 (1,0 g) i smeša je filtrirana kroz podlogu CELITE<®>521. Filterski kolač je ispran etanolom (2 x 75 mL), a kombinirani filtrati su koncentrirani do suva pod sniženim pritiskom kako bi se dobio 99% prinos 113e (3,31 g) kao narančasta čvrsta supstanca:<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 5.34 (e, 1H), 3.98 (t, 2H, J = 5.4 Hz), 3.52 (s, 3H), 2.84 (t, 2H, J = 5.7 Hz), 2.45 (s, 3H); MS (ESI ) m/z 153,1 (M H)
Primer 113f 5-Bromo-1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1 H)-on 113f
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 113e (1.02 g, 6.7 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1 H)-ona (2.15 g, 8.1 mmol), Pd2(dba)3(610 mg, 0,67 mmol), 2,2-bis (difenilfosfino)-1,1-binaftil (775 mg, 1,34 mmol), cezijev karbonat (4,37 g, 13,6 mmol) i 1,4-dioksan (30 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 110° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću hromatografije eluirajjući dihlormetanom/etanolom (15:1 V/V) dajući 113f (380 mg, 14%) u obliku bele čvrste materije. LCMS: [M+H]<+>338
Primer 113g 2-(4-hloro-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 113g
U rastvor 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehida 103b (1,0 g, 3,0 mmol) u metanolu (50 mL) je dodat natrijum-borohidrid (380 mg, 9,0 mmol) na 10° C i smeša je mešana još 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (1 mL) i koncentrirana. Ostatak je rastvoren u dihlormetanu (50 ml) i opran vodom (10 ml). Organska faza je osušena preko bezvodnog Na2SO4,filtrirana, i uparena pod smanjenim pritiskom dajući prinos od 113g kao žutu čvrstu supstancu (900 mg, 90%). MS:
[M+H]<+>332.
Primer 113h (4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 113h
U smešu 113g (900 mg, 2,7 mol) i trietilamina (900 mg, 9,0 mol) u dihlormetanu (5
14
ml) dodaje se kap po kap acetil hlorid (600 mg, 6,0 mol) uz mešanje na sobnoj temperaturi i meša se još 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom da bi se dobilo 113h kao bela čvrsta supstanca (950 mg, 94%). MS: [M+H]<+>374.
Primer 113i (2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(4,4,5,5)-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 113i
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 113h (950 mg, 2,5 mmol), Pin2B2(1,6 g, 2,0 ekv., 5 mmol), Pd2(dba)3(230 mg, 0,1 ekv., 0,25 mmol), X-phos (232 mg, 0.2 ekv., 0.5 mmol), AcOK (735 mg, 3 ekv., 7,5 mmol) i dioksanom (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 65° C 14 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran sa PE/EA = 3/1 (10 mL) da bi se dobio 113i kao žuta čvrsta supstanca (950 mg, 87%). MS: [M+H]<+>383.
Primer 113j (4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1 H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 113j
Zapečaćena epruveta opremljena magnetskom mešalicom je napunjena 113f (190 mg, 0,56 mmol), 113i (215 mg, 0,056 mmol), Pd(dppf)Cl2(47 mg, 0.056 mmol), 1.0 M NaOAc (93 mg, 1,12 mmol, 2,0 ekvivalent), 1,0 M K3PO4(240 mg, 1,12 mmol, 2,0 ekvivalent) i acetonitrilom (3 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 110° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (10: 1, V/V) da se dobije 113j (300 mg, 94%) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>597 Primer 1132-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 113
Smeša 113j (300 mg, 0,50 mmol) i LiOH.H2O (120 mg, 2,50 mmol) u<i>PrOH/THF (1:1, 3 mL) i H2O (1 ml) je mešana na 30° C 2 h. Smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je ekstrahovan sa EtOAc i H2O (10 ml x 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 113 (91 mg, 32%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: [M+H]<+>555.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,47 (d, J = 5,0, 1H), 7,95 (d, J = 5,0, 1H), 7,72 (d, J = 2,0, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,0, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,69 (s, 1H), 5,01-5,02 (m, 1H), 4,61-4,62 (m, 1H), 4,48-4,49 (m, 1H), 4,32-4,33 (m, 1H), 4,15-4,07 (m, 4H), 3,86-3,87 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,60-3,59 (m, 2H), 2,88 (t, J = 6,0, 2H), 2,61-2,56 (m, 4H), 2,47 (s, 3H), 1,89-1.90 (m, 2H), 1,78-1,79 (m, 2H) Primer 114a (R)-5-bromo-3-(4-(1,4-dimetil-3-oksopiperazin-2-il) fenilamino)-1-metilpirazin-2 (1 H)-on 114a
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je s (R)-3-(4-aminofenil)-1,4-dimetilpiperazin-2-onom (1,08 g, 5 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1 H)-on (1,47 g, 5,5 mmol), diizopropiletilamin (1,94 g, 15 mmol) i<i>PrOH (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 110° C preko noći. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, dodata je voda (20 mL) i smeša je ekstrahovana etil-acetatom (50 mL X 2). Organski slojevi su spojeni, kombinirani, osušeni iznad anhidrovanog natrijumsulfata i koncentrovani. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (10:1, V/V) da se dobije 114a (1,8 g, 90%) kao crvena čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>406
Primer 114b (R)-(4-(6-(4-(1,4-dimetil-3-oksopiperazin-2-il) fenilamino)-4-metil-5-okso-4,5-dihidropirazin-2-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1 H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 114b
14
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 114a (228 mg, 0,56 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2]-a] indol-2 (1 H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (215 mg, 0,56 mmol), Pd(dppf)Cl2(47 mg, 0,056 mmol), 1,0 M NaOAc (93 mg, 1,12 mmol, 2,0 ekvivalent), 1,0 M K3PO4(240 mg, 1,12 mmol, 2,0 ekvivalent) i acetonitrilom (3 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 110° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (10:1, V/V) do 114b (360 mg, 96%) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>665.
Primer 114 (R)-2-(4-(6-(4-(1, 4-dimetil-3-oksopiperazin-2-il) fenilamino)-4-metil-5-okso-4,5-dihidropirazin-2-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2 H)-on 114
Smeša 114b (360 mg, 0,54 mmol) i LiOH.H2O (138 mg, 2,76 mmol) u<i>PROH/THF (1:1, 3 mL) i H2O (1 ml) je mešana na 30° C 2 h. Rastvor je uparen pod vakuumom i ostatak je ekstrahovan sa EtOAc (10 ml x 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 114 (72 mg, 21%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: [M+H]<+>623.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,53 (d, J=4,5, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,83-7,78 (m, 3H), 7,36 (d, J=8.0, 2H), 6,89 (s, 1H), 5,12-5,14 (m, 1H), 4,68-4,70 (m, 1H), 4,49-4,53 (m, 1H), 4,38-4,43 (m, 1H), 4,15-4,06 (m, 2H), 3,89-3,90 (m, 1H), 3,72-3,73 (m, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,21-3,22 (m, 1H), 3,01-3,03 (m, 4H), 2,71-2,56 (m, 5H), 2,20 (s, 3H), 1,90-1,92 (m, 2H), 1,79-1,80 (m, 2H) Primer 115a 5-Bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 115a
14
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena je magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 mL), 5-metil-1H-pirazol-3-aminom (1 g, 10 mmol). (1), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (4 g, 15 mmol) (2) i cezijum-karbonatom (6,4 g, 20 mmol). Ksantfos (400 mg, 0,8 mmol) i Pd2(dba)3(700 mg, 0,8 mmol) su dodati, a reakcijska smeša je zagrejana na 100° C u trajanju od 5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa DCM: MeOH (20:1) da bi se dobilo 115a (1,0 g, 35%). MS: [M+H]<+>283.
Primer 115b 4-(1-metil-5-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4), 6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 115b
Zapečaćena epruveta je napunjena 115a (280 mg, 1 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (420 mg, 1,1 mmol), PdCl2(dppf) (41 mg, 0,056 mmol), K3PO4(100 mg), i NaOAc (50 mg) u CH3CN (10 ml) i H2O (3 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 10:1 DCM/MeOH, dajući 115b u prinosu od 35% (190 mg) kao bledo žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>542.
Primer 115 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 115
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom napunjena je 115b
14
(190 mg, 0,35 mol) u THF/IPA/H2O (5 ml/5 ml/2 ml) i LiOH (85 mg, 3,5 mmol) tokom mešanja. Smeša je mešana na 50°C tokom 0,5 h. Dodato je 20 ml H2O i smeša je ekstrahovana EA (30 mL X 3). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentriran dajući žutu čvrstu supstancu, što je dodatno prečišćena reverzno-faznom preparativnom HPLC za dobijanje 115 kao bele čvrste supstance (48 mg, 30% prinos). LCMS: [M+H]<+>500.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,44 (d, J=6,0, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,30 (d, J=6,0, 2H), 6,87 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 4,59-3,86 (m, 7H), 3,69 (s, 3H), 2,57-2,56 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 1,88-1,77 (m, 4H)
Primer 116a 3-Bromo-5-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-4-karbaldehid 116a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksan (15 mL), 3,5-dibromoizonikotinaldehid (200 mg, 0,76 mmol), 8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-6-on 191d (160 mg, 0,76 mmol) i cezijum karbonat (176 mg, 1,5 mmol). Dodati su bakrov jodid CuI (100 mg, 0,76 mmol) i 4,7-dimetoksi-1,10-fenantrolin (127 mg, 0,52 mmol), a reakciona smeša je zagrevana na 100° C tokom 5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa EtOAC/PE (1:2) da se dobije 116a (80 mg, 30%). MS: [M+H]<+>390.
Primer 116b 3-[1-Metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-4-karbaldehid 116b
Zapečaćena epruveta je napunjena 116a (80 mg, 0,20 mmol), 1-metil-3-(5-(4-
14
(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101L (96 mg, 0,20 mmol), PdCl2(dppf) (18 mg, 0,02 mmol), K3PO4(30 mg), i NaOAc (20 mg) u CH3CN (5 mL) i H2O (1 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na fleš koloni eluiranjem sa 10:1 DCM/MeOH dajući 35% prinosa 116b (46 mg). MS: [M+H]<+>651.
Primer 116 4-Hidroksimetil-3-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-5-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin 116
U rastvor 116b (46 mg, 0,07 mmol) na 0° C u metanolu (4 mL) dodat je natrijumborohidrid (20 mg, 0,7 mmol) i mešano 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (1,0 mL) i koncentrirana. Ostatak je prečišćen reverzno- faznom prep. HPLC tehnikom radi dobijanja 116 (12 mg, 28 %) u obliku žute čvrste materije. LCMS: [M+H]<+>653.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,60 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,56 (d, J=2,0, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,87 (d, J=3,0, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 7,24-7,22 (m, 1H), 4,90 (m, 1H), 4,56-4,53 (m, 2H), 4,46-4,44 (m, 4H), 3,59 (s, 3H), 3,44-3,42 (m, 1H), 3,06 (t, J=4.5, 4H), 2,94-2,93 (m 2H), 2,85-2,84 (m, 2H), 2,38 (t, J=4.0, 4H), 1,89-1,84 (m, 4H)
Primer 117a 5-(Metiltio)-2-nitropiridin 117a
U smešu 5-hloro-2-nitropiridina (3 g, 18 mmol) u MeOH (20 mL), dodat je natrijummetantiolat (1,4 g, 20 mmol) na 0° C i smeša je mešana na 20° C tokom 2 sata. Dobijena suspenzija je filtrirana i isprana vodom i osušena u vakuumu da se dobije sirovi 117a kao žuta čvrsta supstanca (2 g, 66%) bez prečišćavanja za sledeći korak. MS: [M+H]<+>171.
Primer 117b 5-(Metilsulfonil)-2-nitropiridin 117b
Na mešavinu 117a (260 mg, 0,5 mmol) u ocetnoj kiselini (15 ml) je dodata H2O2(aq.
30%) (7,5 mL) i reakciona smeša je mešana preko noći na 25° C. Reakcioni rastvor je sipan u
14
vodu i ekstrahovan sa EtOAC i koncentrovan do bledo žute tečnosti, prečišćen silika gelom sa (EtOAC/PE: 1:3) da bi se dobilo 117b (2 g, 86%). MS: [M+H]<+>203.
Primer 117c 5-(Metilsulfonil) piridin-2-amin 117c
Smeša 117b (2 g, 10 mmol), MeOH (10 ml), Pd/C (120 mg) u metanolu (8 ml) je mešana na 25° C pod H2(50 psi) preko noći. Pd/C je uklonjen filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 117c (1,7 g, 98%). MS: [M+H]<+>173.
Primer 117d 5-Bromo-1-metil-3-(5-(metilsulfonil) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 117d
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 mL), 117c (1,7 g, 10 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (5,2 g, 20 mmol) i cezijum karbonat (6,4 g, 20 mmol). Ksantfos (300 mg, 0,8 mmol) i Pd2(dba)3(500 mg, 0,8 mmol) su dodati, a reakcona smeša je zagrejana na 100° C u trajanju od 5 h (sati). Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Smeša je odstranjena filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa DCM: MeOH (20:1) pri čemu se dobija 117d (1 g, 30%). MS: [M+H]<+>358.
Primer 117c (4-(1-metil-5-(5-(metilsulfonil) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4), 6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 117e
1
Zapečaćena epruveta je napunjena 117d (100 mg, 0,28 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (115 mg, 0,3 mmol), PdCl2(dppf) (25 mg, 0.03 mmol), K3PO4(126 mg, 0,6 mmol) i NaOAc (60 mg, 0,6 mmol) u MeCN (8 ml) i H2O (1 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti eluiranjem fleš kolonom silika gela sa DCM: MeOH (20: 1), dajući 117e (100 mg, 40%). MS:
[M+H]<+>617.
Primer 117 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(metilsulfonil) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidro-pirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 117
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom napunjena je jedinjenjem 117e (100 mg, 0,2 mol) u THF/IPA/H2O (5 ml/5 ml/2 ml) i LiOH (50 mg, 2 mmol) tokom mešanja. Smeša je mešana na 50°C tokom 0,5 h. Dodato je 20 mL H2O, i smeša je ekstrahovana pomoću EA (30 mL X 3). Kombinovani organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentriran dajući žutu čvrstu supstancu, što je dodatno prečišćena reverznofaznom preparativnom HPLC za dobijanje 117 kao bele čvrste supstance (72 mg, 90% prinos). MS: [M+H]<+>575.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 9,39 (e, 1H), 8,84 (d, J = 2,0,1H), 8,60 (d, J = 2,5, 1H), 8,50 (d, J = 2,5, 1H), 7,98 (dd, J = 2,5, 4,0, 1H), 7,69 (d, J = 2,4, 1H), 7,49-7,47 (d, J = 9,0, 1H), 7,38-7,37 (m, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,99 (t, J = 4,5, 1H), 4,47-4,39 (m, 2H), 4,26-4,11 (m, 3H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,19 (s, 3H), 2,66-2,54 (m, 2H), 2,48-2,46 (m, 2H), 1,79-1,66 (m, 4H)
Primer 118a terc-butil 5-amino-3-ciklopropil-1H-pirazol-1-karboksilat 118a
1 1
U smešu 3-ciklopropil-1H-pirazol-5-amin (0,25 g, 2 mmol) i K2CO3(0,828 g, 6 mmol) u THF (5 mL) je dodat (Boc)2O (0,436 g, 2 mmol) u THF (5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 15 sati. Zatim se filtrira i koncentriše. Ostatak je prečišćen fleš kolonom eluiranjem sa 6:1 petroleum drugim/etil-acetatom da bi se dobilo 118a kao bela čvrsta supstanca (240 mg, 54%). LCMS: (M-Boc)<+>124.
Primer 118b 5-Bromo-3-(3-ciklopropil-1H-pirazol-5-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 118b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 mL), 118a (455 mg, 1,95 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridinom-2 (1H)-on (0,40 g, 1,5 mmol) i cezijum karbonat (1,22 g, 3,75 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, dodaju se XantPhos (87 mg, 0,15 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (70 mg, 0,075 mmol) i reakciona smeša se zagreva na refluksu tokom 15 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature, podeljena između etil-acetata (30 mL) i vode (30 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (50 mL × 2). Organski slojevi su spojeni, isprani sa slanom vodom (50 mL) i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa 50: 1 DCM/MeOH da bi se dobilo 118b kao žuta čvrsta supstanca (320 mg, 50%). LCMS: (M+H)<+>309.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11,85 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,02 (d, J = 2,5, 1H), 7,35 (d, J = 2,5, 1H), 5,77 (d, J = 2, 1H), 3,46 (s, 3H), 1,83 (m, 1H), 0,90 (m, 2H), 0,64 (m, 2H)
Primer 118c (4-(5-(5-ciklopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3, 4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 118c
1 2
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 118b (310 mg, 1 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2]-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (385 mg, 1 mmol), Pd(dppf)Cl2(80 mg, 0,1 mmol), K3PO4(424 mg, 2 mmol), NaOAc (165 mg, 2 mmol), CH3CN (15 ml), i vode (1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 110° C 3 h. Uparena je pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije dihlormetanom/metanolom (50:1, V/V) dajući 118c (400 mg, 68%) u obliku žute čvrste materije. LCMS: [M+H]<+>569
Primer 118 2-(4-(5-(5-Ciklopropil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 118
Smeša 118c (350 mg, 0,62 mmol) i LiOH.H2O (260 mg, 6,2 mmol) u<i>PROH/THF (1: 1, 3 mL) i H2O (1 ml) je mešana na 30° C 1 h. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je ekstrahovan između EtOAc i H2O (10 ml x 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 118 (200 mg, 54%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: [M+H]<+>526.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11,83 (s, 1H), 8,48 (d, J=5, 1H), 8,05 (d, J=2, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,38 (d, J=2, 1H), 7,31 (d, J=5, 1H), 6,58 (s, 1H), 5,81 (d, J=2, 1H), 4,95 (t, J=5, 1H), 4,49-4,51 (m, 1H), 4,38-4,40 (m, 1H), 4,19-4,21 (m, 3H), 3,85-3,87 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,61-2,62 (m, 1H), 2,56-2,57 (m, 1H), 2,48-2,49 (m, 2H), 1,81-1,82 (m, 3H), 1,70-1,71 (m, 2H), 0,88-0,89 (m, 2H), 0,63-0,64 (m, 2H)
Primer 119a (S)-(4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso 1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 119a
1
Prateći procedure opisane za 118c, (2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(4) 4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 113i (250 mg) i (S)-5-brom-1-metil-3-3-metil-5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 130e (233 mg) reaguju dajući 119a kao žutu čvrstu supstancu (230 mg, 62%). LCMS: [M+H]<+>693
Primer 119 (S)-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H))-on 119
Nakon procedura kao što je opisano za 118, acetat hidrolizom 119a sa LiOH<·>H2O u<i>PrOH/THF (1: 1) i H2O, dobijeno je 119 kao bela čvrsta supstanca (184 mg, 85%). LCMS:
[M+H]<+>651.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,65 (d, J = 2,5, 1H), 8,50 (d, J = 5,0, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,84 (d J = 2,0, 1H), 7,35 (d, J = 5.0, 1H), 7,33 (d, J = 7,0, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,83 (d, J = 9.0, 1H), 5,04-5,06 (m, 1H), 4,62-4,73 (m, 5H), 4,51 (s, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,16 (s, 1H), 4,11 (s, 1H), 3,89 (s, 1H).3.72 (s, 3H), 3,57 (t, J = 6.0, 1H), 3,48 (s, 1H), 3,07-3,12 (m, 2H), 2,53-2,63 (m, 7H), 2,24 (m, 1H).1,88-1,93 (m, 2H), 1,80 (s, 2H), 0,99 (d, J = 6,5, 3H).
Primer 120a 5-Bromo-3-(5-(4-(2-hidroksi-2-metilpropil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 120a
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je s 5-bromo-1-
1 4
metil-3-(5-(piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 101j (500 mg, 1,37 mmol), 2,2-dimetiloksirane (990 mg, 13,7 mmol), Cs2CO3(1,3 g, 4,11 mmol), i CH3CN (15 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 110° C tokom 15 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Tako dobijeni sirovi materijal 120a je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja (460 mg, 77%). LCMS: [M+H]<+>437.
Primer 120b (4-(5-(5-(4-(2-Hidroksi-2-metilpropil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 120b
Prateći procedure opisane za pripremu 118c, reakcija 120a (435 mg, 1,0 mmol) i 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1, 2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (383 mg, 1 mmol) je dala 120b (437 mg, 63%). LCMS: [M+H]<+>696.
Primer 1202-(4-(5-(5-(4-(2-Hidroksi-2-metilpropil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 120
Nakon procedure kao što je opisano za pripremu 118, acetat hidrolizom 120b (70 mg, 0,1 mmol) sa LiOH. H2O u<i>PROH/THF (1:1) i H2O, dobilo se 120 (27 mg, 42 %) kao siva čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>653.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) Z 8,61 (d, J = 3, 1H), 8,50 (d, J = 5, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,83 (d, J = 3, 1H 7,46 (d, J = 2, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,24 (d, J = 9, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,95 (m, 1H), 4,44 (m, 2H) 4,24 (m, 2H), 4,13 (m, 2H), 3,87-3,88 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,03-3,05 (m, 4H), 2,64-2,66 (m, 5H), 2,61-2,63 (m, 1H), 2,49-2,51 (m, 2H), 2,24 (s, 2H), 1,70-1,71 (m, 4H), 1,10 (s, 6H).
Primer 121a 4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 121a
Boca je napunjena 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehidom 103b (88 mg, 0,27 mmol) 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il)
1
piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1, 3, 2,-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101L (125 mg, 0.27 mmol), PdCl2(dppf) (18 mg, 0,02 mmol), K3PO4(30 mg), u THF (5 mL) i H2O (1 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je refluksovana 4 sata na 110°C i ohlađena na sobnu temperaturu. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 10:1 DCM/MeOH da bi se dobio 121a (90 mg, 56%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>633.
Primer 121 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso 1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 121
Na 0° C, u suspenziju 121a (76 mg, 0,12 mmol) u metanolu (4 mL) dodat je natrijumborohidrid (20 mg, 0,7 mmol) i mešano 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (1,0 mL) i koncentrirana. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 121 (56 mg, 74%). LCMS: [M+H]<+>635.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,66 (d, J=2,0, 1H), 8,57 (d, J=5,0, 1H), 7,93 (d, J=3.0, 1H), 7,85 (d, J=2,5, 1H), 7,80 (s, 1H), 7.50 (d, J=5,0, 1H), 7,24-7,27 (m, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,97 (d, J=6.0, 1H), 6,81 (d, J=8,0, 1H), 6,67 (d, J=6,0, 1H), 5,08 (d, J=11,5, 1H), 4,67-4,72 (m, 4H), 4.51 (d, J=12,0, 1H), 4,35 (t, J=12,0, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,57-3,59 (m, 1H), 3,16-3,17 (m, 4H), 2,70-2,74 (m, 4H), 2,52-2,53 (m, 4H), 1,94-1,95 (m, 2H), 1,84-1,86 (m, 2H).
Primer 122a (2R, 5S)-tert-butil 2,5-dimetil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 122a
Prateći procedure opisane za jedinjenje 101g, (2R, 5S)-tert-butil-2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilat (1,5 g, 6,0 mmol) i 5-brom-2-nitropiridin (1212 mg, 6,0 mmol)) reaguje dajući 122a kao žutu čvrstu supstancu (1500 mg, 75%). LCMS: [M+H]<+>337
Primer 122b (2R, 5S)-tert-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilat 122b
Prateći procedure opisane za jedinjenje 101h, reakcija 122a (1,5 g, 4.46 mmol) je dala
1
122b kao žutu čvrstu supstancu (1130 mg, 83%). LCMS: [M+H]<+>307
Primer 122c (2R, 5S)-teril butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilat 122c
Prateći procedure opisane za jedinjenje 101i, reakcija 122b (766 mg, 2,50 mmol) i 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (668 mg, 2,50 mmol) je dala 122c kao žutu čvrstu supstancu (978 mg, 79%). LCMS: [M+H]<+>492
Primer 122d (2R, 5S)-tert-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilat 122d
Prateći procedure opisane za jedinjenje 101j, reakcija 122c (978 mg, 1.99 mmol) daje 122d kao žutu čvrstu supstancu (700 mg, 90%). LCMS: [M+H]<+>392
Primer 122e 5-Bromo-3-(5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 122e
Prateći procedure opisane za jedinjenje 101k, reakcija 122d (700 mg, 1.79 mmol) daje 122e kao žutu čvrstu supstancu (723 mg, 91%). LCMS: [M+H]<+>448
Primer 122f (4-(5-(5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1, 2-a] indol-2 (1H)-il piridin-3-il) metil-acetat 122f
1
Prateći procedure opisane za jedinjenje 113j, reakcija 122e (723 mg, 1,62 mmol) i 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2]-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (613 mg, 1,62 mmol) je dala 122f kao žutu čvrstu supstancu (464 mg, 41%). LCMS: [M+H]<+>707
Primer 122 2-(4-(5-(5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 122
Prateći procedure opisane za jedinjenje 113, hidroliza 122f (464 mg, 0,66 mmol) sa litijum hidroksidom dala je 122 kao belu čvrstu supstancu (83 mg, 20%). LCMS: [M+H]<+>665.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) Z 8,69 (d, J = 2,5, 1H), 8,51 (d, J = 5,0,1H), 8,03 (d, J = 2,5, 1H), 7,88 (s, 1H) 7,86 (d, J = 2,5, 1H), 7,38 (d, J = 5,0, 2H), 6,90 (s, 1H), 6,82 (d, J = 9,0, 1H), 5,07 (s, 1H), 4,77-4,72 (m, 2H), 4,68-4,61 (m, 3H), 4,52 (s, 1H), 4,33 (s, 1H), 4,17-4,11 (m, 2H), 3,88 (s, 1H), 3,76 (s, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,19 (s, 1H), 2,93-2,90 (m, 1H), 2,73 (s, 2H), 2,63-2,57 (m, 4H), 2,48 (s, 1H), 1,99-1,90 (m, 3H), 1,80 (s, 2H), 0,91 (t, J = 5,5, 6H) Primer 123a (2-Bromoetoksi) (terc-butil) dimetilsilan 123a
U rastvor 2-bromoetanola (5,0 g, 40,3 mmol) u DCM (20 mL) dodat je tercbutildimetilsilil hlorid (9.1 g, 60,5 mmol) praćen dodavanjem trietilamina (8,14 g, 80,6 mmol) i 4-dimetilaminopiridina. (49,2 mg, 0,4 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 sati, a zatim koncentrovana u vakuumu. Ostatak je podeljen između 1N HCl i etil-acetata. Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom. Kombinovani organski deo je ispran slanom vodom, osušen iznad natrijum-sulfata, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo žuto ulje, koje je prečišćeno hromatografijom na koloni eluiranjem sa PE: EA (50:1) da bi se dobio 123a kao bezbojno ulje (6,0 g 62,4%). LCMS: (M+H)<+>241.
Primer 123b 5-Bromo-3-(5-(4-(2-(terc-butildimetilsililoksi)etil) piperazin-1-il)
1
piridin-2-ilamino)-1-metilpi
U suspenziju 123a (231 mg, 0,96 mmol) u MeCN (40 mL) na 70° C dodat je 5-bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 101j (350 mg, 0,96 mmol). Reakciona smeša je mešana 3 dana. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (30:1) dajući 123b kao žutu čvrstu supstancu (452 mg, 90%). MS: [M+H]<+>524,7.
Primer 123c 5-bromo-3-(5-(4-(2-hidroksietil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 123c
U suspenziju 123b (300 mg, 0,57 mmol) na sobnoj temperaturi u MeOH (20 mL) dodata je L (-)-kamforsulfonska kiselina (199 mg, 0,86 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći. Dodata je voda (20 ml), i smeša je ekstrahovana etil-acetatom (50mL X 2). Kombinovani organski sloj se suši preko anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentruje da se dobije 123c (325 mg, 95%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>408,7.
Primer 123d (4-(5-(5-(4-(2-hidroksietil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 123d
1
Zapečaćena epruveta je napunjena 123c (200 mg, 0,49 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina (113i) (188 mg, 0,49 mmol), Pd(dppf)Cl2(40 mg, 0,049 mmol), K3PO4(208 mg, 0,98 mmol), NaOAc (133 mg, 0,98 mmol), H2O (3 mL) i MeCN (50 ml). Reakciona smeša je zagrevana 3 h na 110°C. Rastvarač se upari u vakuumu i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 30:1 DCM/MeOH do 123d (187 mg, 57%). MS: [M+H]<+>667,7.
Primer 123 2-(4-(5-(5-(4-(2-hidroksietil) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidro-pirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 123
Smeša 123d (187 mg, 0,28 mmol) i LiOH (235 mg, 5,6 mmol) u iPrOH/THF (1:1, 3,5 mL) i H2O (0,5 mL) je mešana na 35° C za 0,5 h. Zatim se upari u vakuumu i ostatak se ekstrahuje sa EtOAc (5 mL X 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 123 (40 mg, 31%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>625,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,63 (d, J = 2,5, 1H), 8,49 (d, J = 5,0, 1H), 7,92 (d, J = 2,5, 1H), 7,82 (d, J = 2.0, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5.5, 1H), 7,27-7,25 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,5, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,62 (d, J = 10, 1H), 4,50-4,47 (m, 1H), 4,34-4,29 (m, 1H), 4,12-4.09 (m, 2H), 3.89-3.85 (m, 1H), 3,71-3,67 (m, 5H), 3,15-3,12 (m, 4H), 2,74-2,54 (m, 10H), 1,92-1,87 (m, 2H), 1,79-1,78 (m, 3H)
Primer 124a 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a
U suspenziju 2-bromo-4-hloronikotinaldehida 103a (641 mg, 2,9 mmol) i 8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-6-on 191d (400 mg, 1,94 mmol) u dioksanu (20 ml) je dodat K2CO3(536 mg, 3,88 mmol), CuI (369 mg, 1,94 mmol) i 4,7-dimetoksi-1,10-fenantrolin (471 mg, 1,96 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijeni rastvor tokom 30 min, smeša je mešana na 80° C tokom 16 h. Ostavljena je da se ohladi do
1
sobne temperature i dodaje se u H2O (100 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etilacetatom (2 × 200 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (100 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa PE:EA (5:1) da se dobije 124a (230 mg, 34%). LCMS: [M+H]<+>346
Primer 124b 4-[1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom napunjena je 124a, 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5, 5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101L (271 mg, 0,58 mmol), PdCl2(dppf) (50 mg, 0.06 mmol), K3PO4.3H2O (323 mg, 1,16 mmol), THF (15 ml), i H2O (5 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 70° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa petroleum/ etil acetatom 1: 3 da bi se dobilo 124b kao žuta čvrsta supstanca (200 mg, 53%). LCMS: [M+H]<+>651
Primer 1243-Hidroksimetil-4-[1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin 3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin 124
Smesa 4-[1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124b (200 mg, 0,31 mmol), NaBH4(35 mg, 0,92 mmol) i CH3OH (10 ml) je mešana na 25° C za 1 h. Smeša je zatim ekstrahovana pomoću CH2Cl2(10 mL × 2). Kombinovani CH2Cl2ekstrakt je koncentriran pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno_faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 124 (100 mg, 50%) u obliku žute čvrste materije. LCMS: [M+H]<+>653.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,64 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 8,57 (d, J=5,0 Hz, 1 H), 8,46-8,48 (m, 2 H), 7,88 (d, J=3,0 Hz, 1 H), 7,54 (d, J=5,0 Hz, 1 H), 7,48 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 7,37-7.39 (m, 1 H), 7,24 (d, J=9,0 Hz, 1 H), 4,85-4,87 (m, 1H), 4,55-4,57 (m, 2 H), 4,45-4,47 (m, 2 H), 3,67-4,39 (m, 2 H), 3,60 (s, 3 H), 3,42-3,45 (m, 1 H), 3,06-3,08 (m, 4 H), 2,95 (s, 2 H), 2,87 (s, 2 H), 2,38-2,40 (m, 4 H), 1,87-1,89 (m, 4 H).
Primer 125a (3-Nitro-1 H-pirazol-5-il) metanol 125a
1 1
Laboratorijska boca od 3 L sa tri vrata i okruglim dnom opremljena mehaničkom mešalicom, levkom za dodavanje i dovodom azota prečišćena je azotom i napunjena 3-nitropirazol-5-karboksilnom kiselinom (28,0 g, 178 mmol) i THF (420 ml) i ohlađena na -5° C pomoću ledenog/acetonskog kupatila. Dodat je rastvor kompleksa boran-THF (1,0 M, 535 mL, 535 mmol) brzinom koja je održavala unutrašnju temperaturu reakcije ispod 5° C. Nakon što je dodavanje završeno, kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena na-5° C koristeći ledeno/acetonsko kupatilo, doda se voda (70 mL) i 4N hlorovodonična kiselina (70 mL) i reakcija se meša na refluksu 1 h da bi se uništio boran kompleks sa pirazolom. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom do zapremine od približno 30 mL. Dodat je etil-acetat (175 mL) i smeša je mešana 15 min. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (4 × 200 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani sa zasićenim vodenim natrijum-bikarbonatom (2 x 50 mL), slanom vodom (50 mL) i osušeni iznad natrijum-sulfata, sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 125a sa 94% prinosa (24,0 g) kao svetlo žuta čvrsta supstanca:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13.90 (br s, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,58 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 4,53 (d, 2H, J = 5,1 Hz); MS (ESI ) m/z 144,0 (M H)
Primer 125b (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1 H-pirazol-5-il) metanol 125b
Laboratorijska boca od 1 L sa tri vrata i okruglim dnom opremljena mehaničkom mešalicom i termoregulatorom, prečišćena je azotom i napunjena 125a (25,0 g, 175 mmol), DMF (250 mL) i cezijum-karbonatom (70,0 g, 215 mmol) zagreva se na 104° C 5 min. Reakciona smeša je zatim ohlađena na 0° C koristeći ledeno/acetonsko kupatilo i dodat je dibromoetan (329 g, 1,75 mol) u porcijama (bez egzotermije). Reakciona smeša je mešana na 0 °C 1 h , a zatim 4h na sobnoj temperaturi. Nakon tog vremena rastvor KH2PO4(40 g) u vodi (400 ml) je dodat polako. Reakciona smeša je mešana 30 min na sobnoj temperaturi. Dodat je etil-acetat (450 mL) i vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (200 mL), slanim rastvorom (200 mL),
1 2
osušeni preko natrijum-sulfata, i sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 86% prinos (37,5 g) sirovog 125b kao narandžastog ulja:<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 6,85 (e, 1H), 4,82 (d, 2H, J = 5,4 Hz), 4,66 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 3,83 (t, 2H, J = 6,3 Hz); MS (ESI ) m/z 249,9 (M H).
Primer 125c 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1 H-pirazol 125C
Laboratorijska boca od 500 mL sa tri vrata i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, dovodom azota i refluksnim kondenzatorom prečišćena je azotom i napunjena 125b (37,0 g, 148 mmol) i hloroformom (160 mL). Reakcija je ohlađena na-5° C koristeći ledeno/acetonsko kupatilo i u porcijama je dodat fosforni tribromid (40,0 g, 148 mmol). Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcija je mešana na refluksu tokom 2 h. Nakon tog vremena, reakcija se ohladi na-5° C i dodaje se zasićeni vodeni natrijum-bikarbonat (250 ml) dok se ne dostigne pH 8,5. Smeša je ekstrahovana sa etil-acetatom (3 x 150 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim natrijum-karbonatom (2 x 50 mL), slanom vodom (75 mL), osušeni preko natrijum-sulfata i sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio žuti ostatak koji je rastvoren blagim zagrejavanjem u metilen hloridu (60 mL). Dodaju se heksani (približno 20 mL) i rastvor postaje zamućen. Smeša se zagreva dok se ne formira čvrsti talog, doda se metilen hlorid (9 mL) i rastvor postane bistar. Rastvor je ostavljen da se ohladi na sobnu temperaturu i nakon 4 h dobijeni kristali su sakupljeni vakuumskom filtracijom. Filterski kolač je ispran sa ledeno hladnom smešom u odnosu 1: 2 metilen hlorida: heksana (2 × 20 ml) dajući 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1 H-pirazol (19,7 g). Kombinovani filtrati su upareni i postupak je ponovljen da bi se dobilo dodatnih 9,70 g 1-(2-bromoetil)-5-(bromo-metil)-3-nitro-1H-pirazola. Čvrste materije su spojene i osušene pod visokim vakuumom tokom 18 h da bi se dobio prinos od 57% (26,0 g) od 125c kao beli kristali: mp 95-97° C;<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 6,93 (e, 1H), 4,63 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 4,54 (s, 2H), 3,86 (t, 2H, J = 6,0 Hz).
Primer 125d 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5−a]pirazin 125d
1
Zapečaćena epruveta sa magnetnom mešalicom je napunjena 125c (4 g, 12,9 mmol) 0,5M rastvor amonijaka u dioksanu (200 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 50° C preko noći. Nakon tog vremena, reakcijska smeša je koncentrirana pod sniženim pritiskom, i ostatak je dodat H2O (50 ml) i EtOAc (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom (100 mL), i osušeni iznad natrijum-sulfata. Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 100% prinos (2,1 g) sirovog 125d.
Primer 125e 1-(2-nitro-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-il) etanon 125e
Laboratorijska boca od 200 mL sa okruglim dnom napunjena je 125d (2.1 g, 12.9 mmol), trietilaminom (5,5 mL, 38,7 mmol), acetil-hloridom (1,1 mL, 15,5 mmol) i CH2Cl2(100 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Nakon tog vremena, reakcijska smeša je koncentrirana pod sniženim pritiskom, i ostatku je dodat H2O (50 ml) i EtOAc (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (2 × 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom (100 mL). Kombinovani vodeni ekstrakti su unazad ekstrahovani sa 9:1 CH2Cl2:MeOH (2 × 50 ml). Spojeni organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata. Rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa gradijentom CH2Cl2- 9:1 CH2Cl2:MeOH dajući prinos 84% (2,3 g) 125e.
Primer 125f 1-(2-amino-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-il) etanon 125f
500-ml Parr-ova boca za hidrogenaciju napunjena je 125e (2,3 g, 10,9 mmol), 10% paladijuma na uglju (50% vlažne, 570 mg suve mase) i etanola (100 mL). Boca je evakuisana, napunjena gasom vodonika do pritiska od 50 psi i mućkana 2 h na aparatu hidrogenacije Parr. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>521 pranjem sa
1 4
1:1 CH2Cl2:MeOH (500 ml). Dobijeni rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio prinos od 95% (1,9 g) sirovog 125f.
Primer 125g 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on 125g
Zapečaćena epruveta je opremljena magnetnom mešalicom i napunjena 125f (860 mg, 4,8 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (1,8 g, 6,7 mmol) i cezijevog karbonata (3,4) g, 10,5 mmol) u 1,4-dioksanu (67 mL). Nakon propuštanja azota kroz rastvor tokom 30 minuta, dodati su ksantfos (330 mg, 0,6 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (300 mg, 0,3 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na 100° C tokom 16 h. Nakon tog vremena, H2O (50 ml) i EtOAc (50 ml) su dodati. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa EtOAc (2 X50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom n, i osušeni iznad natrijum-sulfata. Rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni eluiranjem sa gradijentom CH2Cl2- 60:35:5 CH2Cl2:Et2O:MeOH dajući prinos od 125g (720 mg), 41%.
Eksperiment 125h 5-bromo-1-metil-3-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 125h
Laboratorijska boca od 50 mL sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 125 g (250 mg, 0,7 mmol), vodenim NaOH (5N, 6 mL), etanolom (6 mL). Smeša je mešana pri refluksu 30 min. Nakon tog vremena, dodaju se etil-acetat (5 mL) i voda (5 mL). Odvojeni vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 x 5 ml). Spojeni organski slojevi su isprani sa slanom vodom (10 mL), osušeni preko natrijumsulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da se dobije 91% prinos (200 mg) sirovog 125h.
Primer 125i 5-Bromo-1-metil-3-(5-(oksetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 125i
1
Jedinjenje 125i je sintetizovano koristeći istu proceduru kao 101k, gde su mešani 5-bromo-1-metil-3-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H))-on (125h) (250 mg, 0,78 mmol) i oksetan-3-on (600 mg, 8,3 mmol) u metanolu (8 mL). Doda se natrijum-cijanoborohidrid (148 mg, 3 mmol) i cink hlorid (165 mg, 1,5 mmol) u metanolu (8 ml) i reakcija se zagreva na 48° C tokom 12 sati. Obrada i fleš hromatografija na koloni (silika, 60: 35: 5 metilen hlorid/dietil etar/metanol) daju prinos od 34% (100 mg) 5-brom-1-metil-3-(5-(oksetan-3)-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino) piridin-2(1H)-on (125i) kao svetlo zelena čvrsta supstanca: MS (ESI, m/z): 382,1 (M+H).
Primer 125j (4-(1-metil-5-(5-(oksetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2(1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 125j
Slijedeći postupke opisane za jedinjenje 113j, 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (200 mg, 0,52 mmol) i 125i (198 mg, 0,52 mmol) reaguje dajući 125j kao žutu čvrstu supstancu (200 mg, 60%). LCMS: [M+H]<+>639
Primer 125 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(oksetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H))-on 125
Prateći procedure opisane u Primeru 123, 125j (200 mg 0,31 mmol) je hidroliziran
1
litijum hidroksidom dajući 125 kao belu čvrstu supstancu (116 mg, 62%). LCMS: [M+H]<+>597.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,48 (d, J = 5.0, 1H), 7,95 (d, J = 2,0, 1H), 7,69 (d, J = 2,0, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,34 (d, J = 5,5, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,73 (s, 1H), 5,02 (t, J = 6,5, 1H), 4,75 (t, J = 6,5, 2H), 4,67 (t, J = 6,5, 2H), 4,61-4,63 (m, 1H), 4,50 (s, 1H), 4,31-4,35 (m, 1H), 4,10-4,16 (m, 4H), 3,86-3,88 (m, 1H 3,74-3,79 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,56 (d, J = 4,5, 2H), 2,82 (t, J = 4,5, 2H), 2,50-2,62 (m, 4H), 1,88-1,92 (m, 2H), 1,78-1,82 (m, 2H)
Primer 126a 3-Bromo-5-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1, 2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 126a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 mL), 3,5-dibromoizonikotinaldehidom (604 mg, 2,28 mmol), 6,7,8 9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on (142 mg, 0,76 mmol) i cezijum karbonat (485 mg, 1,5 mmol). Dodati su CuI (143 mg, 0,76 mmol) i 4,7-dimetoksi-1,10-fenantrolin (127 mg, 0,52 mmol), a reakciona smeša je zagrevana na 100° C tokom 5 h. Nakon tog vremena, reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije EtOAC/PE (1:2) dajući naslovno jedinjenje 126a (100 mg, 35%) u obliku žute čvrste materije. MS: [M+H]<+>372.
Primer 126b 3-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 126b
Zapečaćena epruveta je napunjena 126a (100 mg, 0.27 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101L (125 mg, 0.27 mmol), PdCl2(dppf) (18 mg, 0,02 mmol), K3PO4(30 mg), i NaOAc (20 mg) u CH3CN (5 mL) i H2O (1 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N
1
2.Reakciona smeša je zagrejana na 100°C, mešana 2 h, a zatim je ohlađena na sobnu temperaturu. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 10: 1 DCM/MeOH pri čemu se dobija 126b (80 mg, 48%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>633.
Primer 126 2-(4-(hidroksimetil)-5-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il)-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 126
Suspenziji 126b (76 mg, 0,12 mmol) na 0° C u metanolu (4 mL) dodat je natrijumborohidrid (20 mg, 0,7 mmol) i smeša je mešana 30 minuta. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (1,0 mL) i koncentrirana. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 126 (28 mg, 37%). LCMS: [M+H]<+>635.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,61 (d, J = 2,5, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,86 (d, J = 3,0, 1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 7,27-7,22 (m, 2H), 6,82-6,78 (m, 2H), 5,18-5,11 (m, 1H), 4,55 (t, J = 6,0, 2H), 4,45 (t, J = 6,0, 2H), 4,41-4,29 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,44-3,42 (m, 1H), 3,06 (t, J = 4,5, 4H), 2,75-2,73 (m, 2H), 2,62-2,60 (m, 2H), 2,38 (t, J = 4,5, 4H), 1,86-1,75 (m, 4H).
Primer 127a (4-(1-metil-6-okso-5-(5-(piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 127a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 101j (200 mg, 0,55 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2) (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (210 mg, 0,55 mmol), Pd(dppf)Cl2(45 mg, 0,055 mmol), K3PO4(284 mg, 1,65 mmol), i tetrahidrofurana (20 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (33: 1), dajući 127a kao smeđu čvrstu supstancu (200 mg, 58,3%). MS: [M+H]<+>623,7.
1
Primer 127 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-6-okso-5-(5-(piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 127
Smeša 127a (190 mg, 0,31 mmol) i LiOH (571 mg, 13,6 mmol) u<i>PROH/THF (1: 1, 3,5 mL) i H2O (0,5 mL) je mešana na 35° C za 0,5 h. Zatim se upari u vakuumu i ostatak se ekstrahuje sa EtOAc (5 mL X 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze dajući 127 (50 mg, 26,9%). MS: [M+H]<+>581,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,63 (d, J = 2,0, 1H), 8,49 (d, J = 5,0, 1H), 7,91 (d, J = 3,5, 1H), 7,82 (d, J = 2,0, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,37 (d, J = 5,0, 1 H), 7,20-7,25 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,0, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,64-4,61 (m, 1H), 4,50 (d, J = 5,0, 1H), 4,34-4,31 (m, 1H), 4,18-4,08 (m, 2H), 3,89-3,86 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,05-3,06 (m, 8H), 2,62-2,56 (m, 4H), 1,92-1,88 (m, 2H), 1,81-1,78 (m, 3H)
Primer 128a 5-Ciklopropil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 128a
Smeša 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazola 113c (4 g, 12,9 mmol) i ciklopropanamina (7,35 g, 129 mmol) u THF (40 mL) je mešana na 30° C preko noći. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana s THF (100 mL). Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom da se dobije 128a (2,68 g, 99%). MS: [M+H]<+>209.
Primer 128b 5-Ciklopropil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 128b
Smeša 128a (2,68 g, 12,9 mmol), Fe (3,6 g, 64,4 mmol) i NH4Cl (4,1 g, 77,4 mmol) u etanolu (30 ml) i vode (5 mL) je zagrejana na refluks za 2 h. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana etanolom (150 mL). Filtrat je uparen u vakuumu i ostatak je ekstrahovan sa metanol/metilen hloridom (1/7). Spojene organske faze su osušene iznad Na2SO4i uparene. Ostatak je prečišćen reverznom fazom pomoću Combiflash da bi se dobio 128b (1,8 g, 75%). MS: [M+H]<+>179.
Primer 128c 5-Bromo-3-(5-ciklopropil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 128c
1
Smeša od 128b (1,39 g, 7,8 mmol), Ksantfos (450 mg, 0,78 mmol), Pd2dba3(476 mg, 0,52 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (1,72 g, 6,5 mmol) i Cs2CO3(6,3 mg.19,5 mmol) u 1,4-dioksanu (30 ml) je zagrevana na refluksu za 1 h. Nakon završetka reakcije smesa je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana metanolom (60 mL). Filtrat je uparen u vakuumu i ostatak je prečišćen reverznom fazom pomoću Combiflash da bi se dobio 128c (0,84 g, 30%). MS: [M+H]<+>364.
Primer 128d (4-(5-(5-Ciklopropil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidro-pirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 128d
Prateći procedure opisane u Primeru 113j, reakcija 128c (230 mg, 0,6 mmol) i 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2]-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (218 mg, 0,6 mmol) daje 128d kao žutu čvrstu supstancu (331 mg, 89%). LCMS: [M+H]<+>623
Primer 128 2-(4-(5-(5-Ciklopropil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 128
Prateći procedure kao što je opisano u Primeru 113, 128d (331 mg, 0,53 mmol) se hidrolizuje sa litijum hidroksidom i daje 128 kao bela čvrsta supstanca (54 mg, 20%). LCMS:
[M+H]<+>581.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,48 (d, J = 5,0, 1H), 7,93 (d, J = 2,0, 1H), 7,72 (d, J = 2,0, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,34 (d, J = 5,0, 1H), 6,90 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,03-5,02 (m, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,52 (s, 1H).4,32 (s, 1H), 4,16-4,03 (m, 4H), 3,89-3,87 (m, 1H), 3,80 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,12-3,10 (m, 2H), 2,61-2,57 (m, 4H), 1,90 (d, J = 5.5, 3H), 1,79 (s, 2H), 0,56 (d, J = 6,0, 2H), 0,53 (s, 2H)
1
Primer 129a 2-nitro-6,7-dihidro-4 H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin 129a
Laboratorijska boca od 250 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazolom 113c (3,00 g, 9,59 mmol) i 4M vodene bromovodonične kiseline (120 mL), a rezultirajuća smeša je zagrevana na refluksu 24 h. Nakon tog vremena, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do zapremine od približno 6 mL, a ostatak je mešan u 2M vodenom natrijum-hidroksidu (40 mL) tokom 2 h. Nakon tog vremena doda se metilen hlorid (40 mL) i smeša se meša 15 min. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa metilen hloridom (2 x 50 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom i osušeni iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, da bi se dobio prinos od 62% (1,01 g) od 129a kao bela čvrsta supstanca: tt 110-112° C;<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 6,68 (e, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,28 (t, 2H, J = 5,4 Hz), 4.20 (t, 2H, J = 5,1 Hz); MS (ESI ) m/z 170,0 (M H).
Primer 129b 6,7-Dihidro-4 H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-amin 129b
500-ml Parr-ova boca za hidrogenizaciju je prečišćena sa azotom i napunjena 129a (1,01 g, 5,92 mmol), 10% paladijuma na ugljenu (50% vlažne, 125 mg suve mase) i etanol (50 mL). Boca je evakuisana, napunjena gasom vodonika do pritiska od 25 psi i mućkana 2 h na aparatu za hidrogenaciji Parr. Vodonik je zatim evakuiran i azot napunjen u bocu. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz podlogu CELITE<®>521 i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni koristeći 400 cm3 silika gela i eluira sa 3% metanola u metilen hloridu. Frakcija koje sadrže 129b su prikupljeni da bi dali nakon koncentracije pod smanjenim pritiskom, prinos od 73% (601 mg) 129b kao žute čvrste supstance: MP 74-76° C<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) δ 5,37 (e, 1H), 4,72 (s, 2H), 4,07 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 3,98 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 3,57 (br s, 2H); MS (ESI ) m/z 140,4 (M H).
Primer 129c 5-Bromo-3-(6,7-dihidro-4 H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1 H)-on 129c
1 1
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, refluksnim kondenzatorom i ulazom za azot, napunjena je 1,4-dioksan (20 mL), 129b (600 mg, 4,31 mmol), 3,5-dibromo 1-metil piridin-2 (1H)-on (1,44 g, 5,40 mmol) i cezijum-karbonatom (3,08 g, 9,48 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijeni rastvor u trajanju od 30 min, dodati su Ksantfos (300 mg, 0,52 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum(0) (320 mg, 0,35 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na refluksu tokom 2 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature, podeljena između etil-acetata (75 mL) i vode (75 mL) i filtrirana. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (2 × 25 mL). Organski slojevi su spojeni i isprani sa slanom vodom (50 mL) i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni koristeći 500 cm3 silika gela i eluiranjem sa 1% metanola u metilen hloridu. Frakcije koje sadrže 129c su sakupljene da bi se, posle koncentrovanja pod sniženim pritiskom, dobilo 31% prinosa (433 mg) od 129c kao zelena čvrsta supstanca: t.t. 195-197° C;<1>H NMR (300 MHz, CdCl3) Z 7.92 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.44 (s, 1H), 6.90 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 5.65 (s, 1H), 4.80 (s, 2H), 4,13 (s, 2H), 3,61 (s, 5H); MS (ESI ) m/z 324,9 (M H).
Primer 129d (4-(5-(6,7-Dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1, 4] oksazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 129d
Prateći procedure opisane u Primeru 113j, reakcija 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (200 mg, 0,52 mmol) i 129c (170 mg, 0,52 mmol) daju 129d kao žutu čvrstu supstancu (185 mg, 61%). LCMS: [M+H]<+>584
Primer 1292-(4-(5-(6,7-Dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1, 4] oksazin-2-ilamino)-1-metil-
1 2
6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 129
Nakon postupaka opisanih u primeru 113, 129d (180 mg 0,31 mmol) je hidroliziran litijevim hidroksidom da bi se dobilo 129 kao bela čvrsta supstanca (100 mg, 62%). LCMS:
[M+H]<+>542.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,48 (d, J = 5,0, 1H), 7,98 (d, J = 2,0, 1H), 7,71 (d, J = 2,0, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,0, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,72 (s, 1H), 5,03 (d, J = 6,5, 1H), 4,79 (s, 2H), 4,61-4,64 (m, 1H), 4,50 (s, 1 H), 4,31-4,35 (m, 1H), 4,06-4,16 (m, 6H), 3,86 (s, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,56-2,62 (m, 4H), 1,88-1,92 (m, 2H), 1,80 (m, 2H)
Primer 130a (3S)-terc-butil 3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 130a
Prateći procedure opisane za jedinjenje 101g, reakciju 5-brom-2-nitropiridina (10,5 g, 50 mmol) i (3S)-tert-butil-3-metilpiperazin-1-karboksilata (10,0 g, 50 mmol). 130a kao žuta čvrsta supstanca (8,05 g, 50%). LCMS: [M+H]<+>323
Primer 130b (3S)-tert-butil-4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 130b
Prateći procedure opisane za jedinjenje 101h, hidrogenacija 130a (5,8 g) je dala 130b kao smeđu čvrstu supstancu (4,9 g, 96%). LCMS: [M+H]<+>293
Primer 130c (3S)-tert-butil-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 130c
Nakon procedure kao što je opisano za jedinjenje 101i, reakcija 130b (4,0 g) i 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (5.5 g) pruža 130c kao žutu čvrstu supstancu (5,4 g, 83%). LCMS: [M+H]<+>478
1
Primer 130d (3S)-5-bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 130d
Prateći procedure opisane za jedinjenje 101j, kisela hidroliza Boc grupe od 130c (3,1 g) daje 130d kao žutu čvrstu supstancu (2,3 g, 95%). LCMS: [M+H]<+>380.
Primer 130e (3S)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-
Nakon procedure kao što je opisano za jedinjenje 101k, reduktivna aminacija 130d (2,35 g) sa oksetan-3-onom (0,4 mL) daje 130e kao žutu čvrstu supstancu (2,6 g, 98%). LCMS: [M+H]<+>434.
Primer 130f (3S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5), 5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 130f
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 130e (1,0 g, 1,0 ekv.,2,3 mmol), Pin2B2(1,46 g, 2,50 ekv., 5,75 mmol), Pd2(dba)3(105 mg, 0,05 ekv., 0,125 mmol), X-fos (93 mg, 0,1 ekv., 0,23 mmol), AcOK (676 mg, 3,0 ekv., 6,9 mmol) i dioksanom (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana 4 sata na 90° C,
1 4
zatim ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran sa 3:1 PE/EA (80 mL) da se dobije 130f kao žuta čvrsta supstanca (1,0 g, 90%). MS: [M+H]<+>482.
Primer 130g (3S)-4-[1-metil-5-({5-[2-metil 4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 130g
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 130f (420 mg, 1,0 ekv., 0,44 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6]>dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehidom 108a (200 mg, 2 eq, 0,88 mmol.):
PdCl2(dppf) (36 mg, 0,1 ekv., 0.044 mmol), K3PO4(279 mg, 3 eq., 1.32 mmol), i THF (20 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran sa 3: 1 PE/EA (80 mL) da se dobije 130 g (90 mg, 31%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>663.
Primer 130 (3S)-10-[4-[1-metil-5-({5-[2-metil 4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-3-(hidroksimetil) piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 130
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i napunjena 130 g (90 mg, 1 ekv., 0,11 mmol), LiOH (7,9 mg, 3 ekv., 0,33 mmol), i-PrOH (3) mL), THF (3 mL) i H2O (2 mL). Smeša je mešana na 30°C tokom 2 h. Zatim se filtrira i koncentriše. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 130 (40 mg, 44%) u obliku žute čvrste materije. LCMS: [M+H]<+>665,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,65 (d, J = 2,0, 1H), 8,48 (d, J = 5,0, 1H), 7,96 (d, J =
1
2,0, 1H), 7,84-7,83 (m, 2H), 7,36 (d, J = 5,0, 1H), 7,31 (dd, J = 3,0, 9,0, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,0, 1H), 5,08-5,05 (m)., 1H), 4,71-4,61 (m, 5H), 4,51-4,29 (m, 2H), 4,16-4,15 (m, 2H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,55-3,45 (m, 2H), 3,06-3,08 (m, 2H), 2,59-2,47 (m, 7H), 2,22-2,17 (m, 1H), 1,27 (s, 6H), 0,98 (d, J = 6,5, 3H).
Primer 131a (S)-(4-(5-(5-(2-etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 131a
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je (S)-5-brom-3-(5-(2-etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilaminom)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 161e (269 mg, 0,60 mmol):
113i (230 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2(25 mg, 0,03 mmol), NaOAc (98 mg, 1,2 mmol), K3PO4(254 mg, 1,2 mmol) i acetonitril (4 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 1 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (25: 1, V/V) da se dobije 131a (150 mg, 40%) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>707
Primer 131 (S)-2-(4-(5-(5-(2-etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H))-on 131
Smeša 131a (150 mg, 0,21 mmol) i LiOH (50 mg, 2,1 mmol) u<i>PROH/THF (1:1, 4 mL) i H2O (1 ml) je mešana na 30° C za 1 h. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i
1
ostatak je ekstrahovan sa EtOAc i H2O (10 ml x 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 131 (26 mg, 25%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: [M+H]<+>665.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,64 (d, J = 2,0, 1H), 8,50 (d, J = 5,0, 1H), 7,93 (d, J = 2,5, 1H), 7,83 (d, J = 1,5, 2H), 7,38 (d, J = 5,0, 1H), 7,27 (d, J = 5,0,1H), 6,90 (s, 1H), 6,83 (d, J = 8,5, 1H), 4,73-4,64 (m, 5H), 4,50 (s, 1H), 4,33-4,31 (m, 1H), 4,20-4,16 (m, 2H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,53-3.51 (m, 1H), 3,33 (s, 1H), 3,13 (t, J = 5,0, 2H), 2,61-2,56 (m, 4H), 2,45 (d, J = 4,0, 2H), 2,37 (s, 1H), 1,91-1,79 (m, 7H), 1,39-1,40 (m, 1H), 0,83 (t, J = 7,0, 3H).
Primer 132a 6-hlor-4-(6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-2-metilpiridazin-3 (2H)-on 132a
Smeša 6,7-dihidro-4H-pirazol[5,1-c] [1,4] oksazin-2-amina 129b (0,8 g, 5,76 mmol), ksantofos (360 mg, 0,623 mmol), Pd2dba3(384 mg, 0,42 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (1,28 g, 5,76 mmol) i Cs2CO3(5,05 g, 17,3 mmol) u 1,4-dioksanu (40 mL) je zagrevana na refluksu 2 h. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana i isprana s MeOH (60 mL). Filtrat je evaporisan u vakuumu. Ostatak je prečišćen reverznom fazom pomoću Combiflash dajući 132a (1,3 g, 81%). MS: [M+H]<+>282.
Primer 132b (4-(5-(6,7-Dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 132b
Prateći procedure opisane za jedinjenje 131a, reakcija 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (200 mg, 0,52 mmol) i 132a (146 mg, 0,52 mmol) je dala 132b kao žutu čvrstu supstancu (100 mg, 53%). LCMS: [M+H]<+>585
Primer 1322-(4-(5-(6,7-Dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1, 4] oksazin-2-ilamino)-1-metil-
1
6-okso-1, 6-okso-1, 6-okso-1, 6-okso-1, 6-okso-1, 6-okso-1, 6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 132 Prateći procedure opisane za jedinjenje 131, hidroliza 132b (100 mg 0,171 mmol) sa litijum hidroksidom dala je 132 kao belu čvrstu supstancu (60 mg, 65%). LCMS: [M+H]<+>543.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,55 (d, J=5,0, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,43 (d, J=5,5, 1H), 6,87 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,80 (s, 2H), 4,58 (s, 3H), 4,47 (s, 1H), 4,15-1,14 (m, 2H), 4,11 (s, 4H), 3,90 (s, 4H), 2,61-2,60 (m, 2H), 2,57 (t, J=6,5, 2H), 1,89-1,91 (m, 2H), 1,79-1,80 (m, 2H)
Primer 133a 6-hlor-2-metil-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino) piridazin-3 (2H)-on 133a
Laboratorijska boca od 250 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom, magnetnom mešalicom i ulazom za azot, napunjena je 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (1,90 g, 8,53 mmol):
113e (1,18 g, 7,75 mmol) i 1,4-dioksan (40 ml). Boca je prečišćena azotom i ohlađena na 0° C. Doda se 1 M rastvor litijum heksametildisilazida u THF-u (39 ml, 39,0 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu suspenziju tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (381 mg, 0,659 mmol) i tris (dibenziliden-aceton) dipaladijum (0) (355 mg, 0,388 mmol), i reakciona smeša je zagrejana na refluksu tokom 2 h. Nakon tog vremena, smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena vodom (10 mL). pH vrednost rastvora je podešena na pH 7,6 sa 2 N hlorovodoničnom kiselinom. Organski sloj je odvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (3 × 40 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni sa silicijum dioksidom, dajući 76% prinos (1,74 g) od 133a kao beličastu čvrstu supstancu: t.t.
184-186° C;<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) Z 9,62 (e, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,00 (s, 1H), 4,04 (t, 2H, J = 5.1 Hz), 3,65 (s, 3H 3,53 (s, 2H), 2,82 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 2,37 (s, 3H); MS (ESI ) m/z 295,1 (M H).
Primer 133b (4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-
1
ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 133b
Prateći procedure opisane za jedinjenje 131a i počevši sa 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (200 mg, 0,52 mmol) i 132a (153 mg, 0,52 mmol) je dala 132b kao žutu čvrstu supstancu (170 mg, 55%). LCMS: [M+H]<+>598
Primer 1332-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 133
Hidroliza 133b (160 mg 0,267 mmol) sa litijum hidroksidom daje 133 kao belu čvrstu supstancu (94 mg, 63%). LCMS: [M+H]<+>556.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,55 (d, J = 5,0, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,43 (d, J = 5.0, 1H), 6,87 (e, 1H), 5,94 (s, 1 H), 4,57 (s, 3H), 4,47 (s, 1H), 4,11-4,15 (m, 4H), 3,89 (s, 3H), 3,87 (s, 1H), 3,61 (d, J = 4,0,2H), 2,90 (s, 2H), 2,61 (d, J = 4,0, 2H), 2,57 (t, J = 6,0, 2H), 2,49 (s, 3H), 1,89-1,91 (m., 2H), 1,79-80 (m, 2H)
Primer 134a 10-Bromo-1H, 2H, 3H, 4H, 6H, 7H, 8H, 9H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 134a
U laboratorijsku bocu od 250 mL sa jednim vratom i okruglim dnom stavljen je rastvor 1H, 2H, 3H, 4H, 6H, 7H, 8H, 9H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 101e (9,5 g), 49,94 mmol, 1.00 ekviv.) U N, N-dimetilformamidu (100 mL), a zatim je dodato N-bromosukcinimid (9,8 g, 55,06 mmol, 1,10 ekviv.) U nekoliko serija na 0° C. Dobijeni rastvor se 2 h meša na sobnoj temperaturi i razblaži sa 500 ml vode. Precipitat je filtriran i osušen u vakuumskoj peći da bi se dobilo 9,5 g (71%) 119a kao svetlo smeđa čvrsta supstanca.
Primer 134b 10-Fluoro-1H, 2H, 3H, 4H, 6H, 7H, 8H, 9H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 134b
U laboratorijsku bocu od 2 L sa četiri vrata i okruglim dnom, koja je prečišćena i
1
održavana u inertnoj atmosferi azota, stavljen je rastvor 134a (40 g, 148,62 mmol, 1,00 equiv) u tetrahidrofuranu (200mL), praćeno dodavanjem n-BuLi (2.4 M) (218 mL, 3.50 ekviv), kap po kap, uz mešanje na -78° C. Dobijena smeša je mešana na -40° C tokom 3 h. U ovu smešu je dodat rastvor N-fluorobenzensulfonimid (98,7 g, 313,33 mmol, 2,10 ekviv.) u tetrahidrofuranu (200 mL) kap po kap, uz mešanje na-78°C. Nastali rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 h, reakcija je prekinuta dodatkom 200 ml vode, i rastvor je ekstrahovan sa 3x500 mL etil-acetata. Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani u vakuumu. Sirovi proizvod (30 g) je prečišćen preparativnom HPLC tehnikom u sledećim uslovima (Mobilna faza, A: 0,05% trifluorosirćetna kiselina/voda; B: CH3CN; gradijent: 10% B-25% B) da bi se dobilo 5,05 g (16%) 134b u vidu bele čvrste supstance. MS: [M+H]<+>209.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 6,16 (br, 1H), 3,90 (s, 1H),-3,86-7,55 (m, 2H), 3,65 (s, 1H),-3,62 (s, 1H), 2,53 (s, 2H), 1,88-1,80 (m, 2H), 1,77-1,72 (m, 2H)
Primer 134c 4-Hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1, 2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (60 mL), 134b (500 mg, 2,4 mmol)
2-bromo-4-hlornikotinaldehid 103a (1,60 g, 7,2 mmol) i kalijum acetat (471 mg, 4,8 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (140 mg, 0,24 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (220 mg, 0,24 mmol) i reakciona smeša je zagrejana na 80° C tokom 10 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature, podeljena između etil-acetata (40 mL) i vode (40 mL), i filtrirana. Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (50 mL × 3). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (30 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa 3:1 PE/EA da se dobije 134c (678 mg, 81%) kao žuta
1
čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>348.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,87 (s, 1H), 8,60 (d, J=5,5, 1H), 7,56 (d, J=5,5, 1H), 4,23-4,25 (m, 2H), 4,13-4,15 (m, 2H), 2,59 (t, J=6.0, 2H), 2,41 (t, J=6,0, 2H), 1,75-1,80 (m, 2H), 1,66-1,70 (m, 2H)
Primer 134d 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 134d
Smeša 134c (300 mg, 0,86 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4), 5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101L (403 mg, 0,86 mmol), CH3COONa (142 mg, 1,72 mmol), K3PO4(460 mg, 1,72 mmol), PdCl2(dppf) (71 mg, 0,086 mmol) u CH3CN (25 ml) i H2O (1 ml) je zagrejana na 100° C u trajanju od 3 sata. Nakon isparivanja reakcije, ostatak je prečišćen na silika-gel koloni eluiranjem sa metilen hloridom/metanolom (30:1)da bi se dobilo 134d (312 mg, prinos 55%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS: (M+H)<+>653.
Primer 134 10-Fluoro-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1(2H)-on 134
U rastvor jedinjenja 134d (200 mg, 0,30 mmol) u MeOH (20 mL) dodat je NaBH4(40 mg, 0,9 mmol). Smeša je mešana na 20°C tokom 2 h. Nakon reakcije upari se i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 134 (108 mg, prinos 54%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: (M+H)<+>655.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,61 (d, J = 2,0, 1H), 8,49 (d, J = 5,0, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,85 (d, J = 2,5, 1H 7,45 (d, J = 1,5, 1H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,35 (d, J = 5,0, 1H), 7,24 (d, J = 9,0, 1H), 4,99 (s, 1H).4,56 (t, J = 6,5, 2H), 4,40-4,47 (m, 4H), 4,18-4,22 (m, 2H), 4,05-4,09 (m, 1H), 3,84-3,96 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3.41-3.46 (m, 1H), 3.07 (s, 4H), 2,54-2,61 (m, 2H), 2,39-2,42 (m, 6H), 1,78 (s, 2H), 1,69 (s, 2H).
2H)
Primer 135a 1-Metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1) 3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a
1 1
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i kondenzatorom napunjena je jedinjenjem 113h (1,0 g, 3 mmol), Pin2B2(3,8 g, 15 mmol), Pd(dppf)Cl2(137 mg, 0,15 mmol), X-fos (143 mg, 0,3 mmol), KOAc (88 mg, 9 mmol) i 1,4-dioksan (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 60° C 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se ispere petroleum etrom da se dobije 135a kao žuta čvrsta supstanca (0,87 g, 75%). MS:
[M+H]<+>386
Primer 135b 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 135b
Suspenzija 135a (385 mg, 1 mmol), 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2) (1H)-il) nicotinaldehyde 134c (347 mg, 1 mmol), K3PO4(424 mg, 2 mmol), NaOAc (164 g, 2 mmol) i 1,1'-bis (difenilfosfino) ferrocenedichloropalladium (II) (41 mg, 0,05 mmol) u CH3CN (50 ml) je zagrejana na 100° C pod balonom N2za 4h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je završenu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa DCM (50 ml) i vodom (80 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 50 mL). Spojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa DCM/MeOH (od 80/1 do 30/1) da se dobije 135b (285 g, 50%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>571
1 2
Primer 135 10-Fluoro-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino))-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1(2H)-jedan 135
U rastvor jedinjenja 135b (280 g, 0,49 mmol) u MeOH (50 mL) dodat je NaBH4(56 g, 1,47 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što je reakcija mešana 3h, LCMS je pokazala da je reakcija završena. Smeša je sipana u H2O (50 mL) i ekstrahovana pomoću DCM (50 mL x 3). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (50 mL), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 135 (187 mg, 67%) u obliku bele čvrste materije. MS: [M+H]<+>572.
<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,47 (d, J=5,5, 1H), 7,95 (d, J=2,0, 1H), 7,70 (d, J=2,0, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,35 (d, J=5,5, 1H), 5,70 (s, 1H), 4,96 (t, J=7,0, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,45 (s, 1H), 4,33 (s, 1H), 4,07-4,12 (m, 4H), 3,84 (s, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,60 (s, 2H), 2,88 (t, J=5,5, 2H), 2,61 (s, 2H), 2,57 (s, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,86-1,90 (m, 2H), 1,77 (s, 2H)
Primer 136a (S)-2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 136a
Laboratorijska boca od 50ml sa jednim vratom sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazinom-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 130f (225 mg, 1.5 ekv., 0.47 mmol), 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c (150 mg, 1 ekv., 0,43 mmol):
PdCl2(dppf) (35 mg, 0,1 ekv., 0.043 mmol), K3PO4(273 mg, 3 eq., 1.29 mmol), i THF (20 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na refluksu tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod
1
sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni sa DCM/EtOH (40: 1), dajući 136a kao žutu čvrstu supstancu (100 mg, 34%). MS: [M+H]<+>667,3.
Primer 136 (S)-10-Fluoro-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il)piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino[1,2-a]indol-1(2H)-on 136
Laboratorijska boca od 25 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljen magnetnom mešalicom je napunjena 136a (100 mg, 1,0 ekv., 0,15 mmol), NaBH4(17 mg, 3,0 ekv., 0,45 mmol) i MeOH (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 136 (64 mg, 64%). LCMS: [M+H]<+>669,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,64 (d, J=2,0, 1H), 8,48 (d, J=5,0, 1H), 7,96 (d, J=2,5, 1H), 7,83-7.82 (m, 2H), 7,36 (d, J=5,0, 1H), 7,30 (dd, J=2,5, 9,0, 1H), 6,81 (d, J=8,5, 1H), 4,99-4,96 (m, 1H), 4,71-4,61 (m, 5H), 4,45-3,83 (m, 5H), 3,71 (s, 3H), 3,54-3,45 (m, 2H), 3,08-3,06 (m, 2H), 2,56-2,47 (m, 7H), 2,21-2,17 (m, 1H), 1,89-1,76 (m, 4H), 0,98 (d, J=6,5, 3H)
Primer 137a (R)-(4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso 1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 137a
Smesa (R)-5-brom-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 151f, enantiomer 130f (283 mg, 0,65 mmol):
3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (250 mg, 0,65 mmol), PdCl2(dppf) (53 mg, 0,065 mmol), NaOAc (107 mg, 1,3 mmol), K3PO4(347 mg, 1,3 mmol) u acetonitrilu (30 ml) je zagrevana na 100° C 3h. Rastvarač je uparen u vakuumu i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 30:1 DCM/MeOH pri čemu se dobija 137a (216 mg, 48%) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>693,4
1 4
Primer 137 (R)-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksa-hidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 137
U rastvor 137a (200 mg, 0,29 mmol) u propan-2-olu (8 mL), tetrahidrofuran (8 mL), i vodi (2,0 mL) dodat je LiOH (690 mg, 29 mmol). Smeša je mešana na 30°C tokom 2 h. Zatim se ispari i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 137 (143 mg, 76%) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: (M+H)<+>651,4.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,63 (d, J=2,0, 1H), 8,49 (d, J=5,0, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,84 (d, J=2,5, 1H), 7,47 (d, J=2,0, 1H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,35 (d, J=5,5, 1H), 7,25 (d, J=9,5, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,95 (t, J=4,0, 1H), 4,54-4,58 (m, 2H), 4,40-4,49 (m, 4H), 4,11-4,26 (m, 3H), 3,86-3,88 (m, 1H), 3,68 (s, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,37-3,42 (m, 1H), 3,08-3,11 (m, 1H), 2,95 (t, J=9,0, 1H), 2,62-2,67 (m, 1H), 2,54-2,59 (m, 2H), 2,48 (t, J=6,0, 2H), 2,30-2,36 (m, 2H), 2,19 (t, J=8,0, 1H), 1,81 (s, 2H), 1,68-1,72 (m, 2H), 0,93 (d, J=6,0, 3H)
Primer 138a 3-(1-Metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 138a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom napunjena je 3-bromo-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) izonikotinaldehid 101f (298 mg, 0.7 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (325 mg, 0.84 mmol), PdCl2(dppf) (30 mg), 0,035 mmol), K3PO4(300 mg, 1,4 mmol), i NaOAc · 3H2O (200 mg, 1,4 mmol) u CH3CN (70 ml). Sistem je evakuisan i napunjen argonom. Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 25:1 DCM/MeOH, dajući 138a (220 mg, 55%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>553,3.
Primer 1382-(4-(hidroksimetil)-5-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il)-3,4,6,7,8,9-
1
heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 138
Smeša 138a (200 mg, 0,36 mmol) i NaBH4(50 mg, 1,2 mmol) u MeOH (60 ml) je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Reakcija u smeši je prekinuta vodom, i smeša je ekstrahovana pomoću EtOAc (10 mL X 3). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 138 (162 mg, 85%). LCMS: [M+H]<+>:555.3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,64 (s,1H), 8,49 (s, 1H), 7,97 (d, J=2,5, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,33 (d, J=2, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,68 (s, 1H), 4,65-4,63 (m, 1H), 4,57-4,55 (m, 1H), 4,37 (t, J=11, 1H), 4,20-4,16 (m, 3H), 4,07-3,98 (m, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,59 (s, 2H), 2,87 (t, J=5,5, 2H), 2,61-2,56 (m, 4H), 2,48 (s, 3H), 1,92-1,90 (m, 2H), 1,80-1,79 (m, 2H)
Primer 139a 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 139a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 250 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (50 mL), 2-bromo-4-hlornikotinaldehidom 103a (1,4 g, 6,4 mmol) 3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-on 112d (0,6 g, 3,2 mmol), Pd2(dba)3(293 mg, 0,32 mmol) Ksantfos (370 mg, 0,64 mmol) i kalijum karbonat (627 mg, 6,4 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 80° C preko noći. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa DCM/CH3OH (20:1, V/V) dajući 139a (528 mg, 50%) kao žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>330.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10,09 (s, 1H), 8,37 (d, J=5,5, 1H), 7,16 (d, J=5,5, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,29-4,32 (m, 2H), 3,83-3,86 (m, 2H), 2,96-2,99 (m, 2H), 2,75-2,78 (m, 2H), 2,00-2,07 (m, 2H), 1,82-1,85 (m, 2H) Primer 139b 4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 139b
1
Laboratorijska boca sa okruglim dnom napunjena je sa 139a (100 mg, 0,30 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (140 mg, 0,30 mmol), PdCl2(dppf) (25 mg, 0,03 mmol), K3PO4.3H2O (160 mg, 0,60 mmol), NaOAc (59 mg, 0,60 mmol), acetonitrila (10 ml), i H2O (5 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 1: 3 petroleum/etil-acetatom da bi se dobio 139b kao žuta čvrsta supstanca (95 mg, 50%). LCMS: [M+H]<+>635
Primer 139 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-on 139
Smeša 139b (95 mg, 0,15 mmol), NaBH4(17 mg, 0,45), i CH3OH (10 ml) je mešana na 25° C za 1 h. Smeša je ekstrahovana pomoću CH2Cl2(10 mL × 2). Kombinovani CH2Cl2ekstrakt je koncentriran pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze kako bi se dobilo 139 (60 mg, 63%). LCMS: [M+H]<+>637.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,63 (d, J=2,0, 1H), 8,47 (d, J=5,5, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,85 (d, J=2,5, 1H), 7,49 (d, J=2,0, 1H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,30 (d, J=5,0, 1H), 7,24 (d, J=9,0, 1H), 6,05 (s, 1H), 4,47-4,57 (m, 2H), 4,41-4,47 (m, 2H), 4,39-4,41 (m, 1H), 4,33-4,35 (m, 1H), 4,11-4,16 (m, 1H), 3,93-3,96 (m, 1H), 3,76-3,82 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,41-3,45 (m, 2H), 3,06-3,08 (m, 4H), 2,98-3,01 (m, 1H), 2,92-2,95 (m, 1H), 2,71-2,72 (m, 2H), 2,36-2,39 (m, 4H), 1,91-1,93 (m, 2H), 1,72-1,78 (m, 2H)
Primer 140a (S)-2-(7,7-difluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 140a
1
Prateći procedure opisane u Primeru 130g, reakcija (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 130f i 4-hlor-2-(7,7-difluoro-1)-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotin-aldehid (170 mg):
dobijeno je 140a kao žuta čvrsta supstanca (200 mg, 60%). LCMS: [M+H]<+>684,3.4-hloro-2-(7,7-difluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid je pripremljen iz 7,7-difluoro-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-ona prema reakcionoj šemi na Slici 25.
Primer 140 (S)-7,7-difluor-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 140
Slijedeći postupke opisane u primeru 130, redukcija natrijum-borohidrida 140a (200 mg) dala je 140 kao žutu čvrstu supstancu (104 mg, 51%). LCMS: [M+H]<+>686,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,62 (d, J = 2.0, 1H), 8,46-8,49 (m, 2H), 7,83 (d, J = 3.0, 1H), 7,45 (d, J = 2,5, 1H 7,35-7,38 (m, 2H), 7,25 (d, J = 9,5, 1H), 6,64 (s, 1H), 4,95-4,97 (m, 1H), 4,54-4,57 (m, 2H), 4,38-4,48 (m, 4H), 4,15-4,27 (m, 3H), 3,87-3,90 (m, 1H), 3,67 (s, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,26-3,39 (m, 3H), 3,08-3,10 (m, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 2,63-2,67 (m, 2H), 2,52-2,55 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 2H), 2,18-2,24 (m, 3H), 0,93 (d, J = 6,0, 3H)
Primer 141a 4-hlor-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 141a
1
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 2-bromo-4-hloronikotinaldehidom 103a (3,0 g, 13,6 mmol), 4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 107e (1.84 g, 9.0 mmol), tris (dibenzilidenaceton) dipaladij (0) (826 mg, 0,9 mmol), Ksantfos (1.04) mg, 1,8 mmol), Cs2CO3(5,8 g, 18,0 mmol) i 1,4-dioksan (40 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 90° C tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je rekristalizovan iz etil-acetata da bi se dobio 141a kao žuta čvrsta supstanca (730 mg, 31,7%). MS: [M+H]<+>344,0.
Primer 141b 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karbaldehid 141b
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 141a (130 mg, 0,38 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7)-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (146 mg, 0,38 mmol), Pd(dppf)Cl2(31 mg, 0.038 mmol), K3CO3(105 mg, 0.76 mmol) i DMF (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 110° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (30:1), dajući 141b kao smeđu čvrstu supstancu (160 mg, 74,6%). MS: [M+H]<+>567,3.
Primer 141 2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazol [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1, 2-a] pirazin-1-on 141
U rastvor 141b (150 mg, 0.26 mmol) na sobnoj temperaturi u metanolu (10 mL) dodat je natrijum-borohidrid (29 mg, 0.78 mmol) i dobijena smeša je mešana 30 minuta. Ugašena je vodom (1.0 mL) i koncentrovana. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 141 (35 mg, 23,2%). LCMS: [M+H]<+>569,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.46 (d, J = 5,0, 1H), 7,94 (d, J = 2,5, 1H), 7,72 (d, J = 2,0, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,5, 1H),
1
6,83 (s, 1H), 5,68 (s, 1H), 5,03-5,00 (m, 1H), 4,64-4,61 (m, 1H), 4,51-4,48 (m, 1H), 4,32-4,27 (m, 1H), 4,21-4,09 (m, 4H), 3,91-3,82 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62-3,58 (m, 2H), 2,87 (t, J = 2,5, 2H), 2.57 (d, J = 4,0, 2H), 2,54 (s, 2H), 2,51 (s, 3H), 1,27 (s, 6H)
Primer 142a 5-Bromo-1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino) piridin-2 (1 H)-on 142a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i ulazom za azot, napunjena je 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-onom (2,00 g, 21,0 mmol), 2-aminopirimidinom (5,61 g, 21,0 mmol), cezijum karbonat (13,7 g, 42,1 mmol), DMF (5 mL) i 1,4-dioksan (70 mL). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu suspenziju tokom 30 minuta, dodati su ksantfos (1,10 g, 1,89 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (963 mg, 1.05 mmol). Na bocu je pričvršćen refluksni kondenzator i reakciona smesa je zagrevana na 100° C tokom 4 h. Nakon tog vremena, smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa 90:10 metilen hlorid/metanol (150 mL) i vodom (100 mL), i slojevi su odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa 90:10 metilen hlorid/metanol (50 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom i osušeni preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a rezultirajući ostatak je prečišćen fleš kolonskom hromatografijom (silika, 90:10 metilen hlorid/metanol) da se dobije 142a u prinosu od 58% (3,42 g) kao amorfna svetlo zelena čvrsta supstanca: t.t.219° C;<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 9.29 (e, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.72 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 5,5, 1,0 Hz, 1H), 3,53 (s, 3H); LCMS (ESI ) m/z 281,0 (M H).
Primer 142b (4-(1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7, 8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 142b
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 142a (154,5 mg, 0,55 mmol), (2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 113i (252.5 mg, 0,55
1
mmol), Pd(dppf)Cl2(25,9 mg, 0,03135 mmol), NaOAc (108 mg, 1,1 mmol), K3PO4· 3H2O (293 mg, 1,1 mmol), acetonitrila (6 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 110° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (15:1, V/V) da se dobije 142b (117 mg, 30%) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS: [M+H]<+>540,2
Primer 142 2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-3, 4,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 142
Smeša 142b (121,6 mg, 0,225 mmol) i LiOH (100 mg, 4,2 mmol) u<i>PROH/THF (1: 1, 4 mL) i H2O (1 ml) je mešana na 35° C za 0,5 h. Smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je ekstrahovan sa EtOAc (20 ml x 3). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 142 (54 mg, 48,2%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. LCMS: [M+H]<+>498,1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,23 (s, 1H), 8,76 (d, J=2,5, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,50 (d, J=5,0, 1H), 8,31 (d, J=6,0, 1H), 7,69 (d, J=2,5, 1H), 7,37 (d, J=5,0, 1H), 7,31-7,33 (m, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,97 (t, J=4,5, 1H), 4,39-4,43 (m, 2H), 4,10-4,24 (m, 3H), 3,87 (d, J=12,0, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,57-2,64 (m, 2H), 2,47 (d, J=6, 2H), 1,79 (d, J=4,0, 2H), 1,69 (d, J=6,0, 2H)
Primer 143a 1-Metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 143a
U laboratorijsku bocu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom napunjen je 5-bromo-1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino) piridin-2 (1H)-on 142a (4,0 g, 14 mmol), X-phos (400 mg, 0,7 mmol), Pd2(dba)3(635 mg, 0,7 mmol), KOAc (7,3 mg, 28 mmol), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolan) (10,6 g, 42 mmol) i 1,4-dioksan (100 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa se zagreva na 60° C tijekom 8 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje 5:1 petrol etrom/etil-acetatom, dajućidajući 143a kao bledo žutu čvrstu supstancu (3,8 mg, 82%). MS: [M+H]<+>329,5.
Primer 143b 4-(1-metil-5-(pirimidin-4-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-
1 1
{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} nikotinaldehid 143b
Posuda od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i kondenzatorom napunjena je 143a (150 mg, 0,46 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a (164 mg, 0,46 mmol):
Pd(dppf)Cl2(16 mg, 0,02 mmol), K3PO4.3H2O (223 mg, 0,92 mmol) u CH3CN (5 mL) i H2O (1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 20:1 DCM/MeOH, dajući 143b kao žutu čvrstu supstancu (110 mg, 48%). MS: [M+H]<+>527.
Primer 143 6-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-2, 2-dimetil-2,3,5,6-tetrahidro-1H, 4H-8-tia-6-aza-cikl.openta [a] inden-7-on 143
Smeša 143b (110 mg, 0,2 mmol, 4 ekv.) u HCl/MeOH (3M, 5 mL) mešana je na 25°C tokom 30 h. Smeša je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je ekstrahovan sa EtOAc (10 mL X 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 143 (48 mg, 44%). LCMS: [M+H]<+>529.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9,23 (s, 1H), 8,76 (d, J=2,5, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,51-8,49 (m, 1H), 8,31 (m, 1H), 7,67 (d, J=3,0, 1H), 7,38-7,37 (m, 1H), 7,33-7,31 (m, 1H), 5,02-5,01 (m, 1H), 4,43 (d, J=2,5, 2H), 4,18-4,15 (m, 1H), 3,83-3,81 (m, 1H), 3,61-3,59 (m, 3H), 3,03-2,99 (m, 1H), 2,91-2,89 (m, 1H), 2,76 (s, 2H), 2,60-2,53 (m, 2H), 1,23-1,22 (m, 6H)
Primer 144a 4-(1-metil-5-(pirimidin-4-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}
1 2
nikotinaldehid 144a
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom napunjen je 1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1), 3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 143a (150 mg, 0.46 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (157 mg, 0,46 mmol):
Pd(dppf)Cl2(16 mg, 0,02 mmol), K3PO4.3H2O (223 mg, 0,92 mmol) u CH3CN (5 mL) i H2O (1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen fleš koloni hromatografije otpušta sa 20: 1 DCM/MeOH dajući 144a kao žutu čvrstu supstancu (98 mg, 48%). MS: [M+H]<+>510.
Primer 144 2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7, 7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta-[4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 144
Smeša 144a (98 mg, 0,19 mmol), NaBH4(30 mg, 0,8 mmol) i MeOH (5 mL) mešana je na 25°C 30 minuta. Smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je ekstrahovan sa EtOAc (10 mL X 2). Kombinovani EtOAc ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 144 (25 mg, 42%). LCMS:
[M+H]<+>512.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9,18 (s, 1H), 8,76-8.74 (m, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,50-8,47 (m, 1H), 8,31-8,30 (m, 1H), 7,68-7,69 (m, 1H), 7,37-7,36 (m, 1H), 7,33-7,31 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,07-5,04 (m, 1H), 4,44-4,41 (m, 2H), 4,23-4,18 (m, 3H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,61-2,56 (m, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,21-1,20 (m, 6H)
Primer 145a (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-
1
ilamino)-6-okso-1 6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} nikotinaldehid 145a
Laboratorijska boca od 50ml sa jednim vratom sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazinom-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 130f (160 mg, 1 ekv., 0,33 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6))-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a (120 mg, 1 ekv., 0,33 mmol):
PdCl2(dppf) (27 mg, 0,1 ekv., 0,033 mmol), K3PO4(140 mg, 2 ekv., 0.66 mmol), NaOAc (54 mg, 2 ekv., 0.66 mmol), i CH3CN (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na koloni eluiranjem sa DCM/EtOH (40/1), dajući 145a kao žutu čvrstu supstancu (97 mg, 43%). MS: [M+H]<+>680,3.
Primer 145 6-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((S)-2-metil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-2,2-dimetil-2,3,5,6-tetrahidro-1H, 4H-8-tia-6-aza-ciklopenta [a] inden-7-on 145
Boca od 25 mL sa jednim vratom i okruglim dnom je napunjena sa 145a (97 mg, 1,0 ekv., 0,14 mmol), NaBH4(16 mg, 3,0 ekv., 0,42 mmol) i MeOH (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 145 (61 mg, 63%). LCMS: [M+H]<+>682,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,65 (d, J = 2,5, 1H), 8,50 (d, J = 5,0, 1H), 7,97 (d, J = 2,5, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,80 (d, J = 2,5, 1H), 7,37 (d, J = 5,0, 1H), 7,30 (dd, J = 3,0, 9,0, 1H), 6,81 (d, J = 9,0, 1H), 4,82-4,79 (m,
1 4
1H), 4,71-4,61 (m, 5H), 4,45-4,31 (m, 2H), 3,85-3,80 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,54-3,46 (m, 2H), 3,07 (d, J = 5.0, 2H), 2.98-2.93 (m, 2H), 2,79 (s, 2H), 2,60-2,46 (m, 5H), 2,21-2,18 (m, 1H), 1,28 (s, 6H), 0,98 (d, J = 6,0, 3H)
Primer 146a 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1, 2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 146a
U rastvor 2-bromo-4-hlornikotinaldehida 103a (1600 mg, 7,27 mmol), 10-fluor-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on (500 mg, 2,40 mmol):
u dioksanu (50 mL) je dodat KOAc (471 mg, 4.82 mmol), Pd2(dba)3(220 mg, 0.24 mmol) i 4,5-bis (difenilfosfino)-9,9-dimetil-ksanten (140). mg, 0,24 mmol). Posle 30 minuta puštanja argona kroz dobijeni rastvor, smeša je mešana na 80° C tokom 10 h. Ostavljena je da se ohladi do sobne temperature i dodat je H2O (100 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (2 × 200 mL). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (100 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa PE/EA (3:1) pri čemu se dobija 146a kao žuta čvrsta supstanca (420 mg, 49%). LCMS:
[M+H]<+>348
Primer 146b 2-(10-Fuoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 146b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom napunjena je sa 146a (200 mg, 0,58 mmol), 1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 143a (227 mg, 0,69 mmol), PdCl2(dppf) (47 mg, 0,06 mmol), K3PO4(244 mg, 1,15
1
mmol), NaOAc (94 mg, 1,15 mmol), acetonitrilu (30 ml), i H2O (3 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihloro-metan dajući 146b kao crvenu čvrstu supstancu (79 mg, 27%). LCMS:
[M+H]<+>514
Primer 14610-Fluoro-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 146
Smeša 146b (79 mg, 0,15 mmol), NaBH4(22 mg, 0,60), i CH3OH (10 ml) je mešana na 25° C za 1 h. Smeša je ekstrahovana pomoću CH2Cl2(10 mL × 2). Kombinovani CH2Cl2ekstrakt je koncentriran pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 146 (39 mg, 49%). LCMS: [M+H]<+>516.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,83 (d, J=2,0, 1 H), 8,78 (s, 1 H), 8,52 (d, J=5,0, 1 H), 8,35 (d, J=5,5, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 8,03 (d, J=2,0, 1 H), 7,36 (d, J=5,0, 1 H), 6,76-6,77 (m, 1 H), 5,07 (s, 1 H), 4,65 (d, J=9,5, 1 H), 4,48 (d, J=9,5, 1 H), 4,29 (d, J=1,5, 1 H), 4,02-4,13 (m, 2 H), 3,79 (d, J=6,5, 1 H), 3,73 (s, 3 H), 2,52-2,58 (m, 4 H), 1,85-1,90 (m, 2 H), 1,77 (d, J=5,0, 2 H)
Primer 147a 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 147a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 250 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksan (50 mL), 2-bromo-4-hlornikotin-aldehid 103a (1,4 g, 6.4 mmol) 3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-on 112d (0,6 g, 3,2 mmol), Pd2(dba)3(293 mg, 0,32 mmol) Ksantfos (370 mg, 0,64 mmol) i kalijum acetat (627 mg, 6,4 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 80° C preko noći. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa CH2Cl2/CH3OH (20:1, V/V) dajući 147a (528 mg, 50%) kao žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>330.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10,09 (s, 1H), 8,37 (d, J=5,5, 1H), 7,16 (d, J=5,5, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,29-4,32 (m, 2H), 3,83-3,86 (m, 2H), 2,96-2,99 (m, 2H), 2.77-2.78 (m, 2H), 2,00-2.07 (m, 2H), 1,83-1,85 (m, 2H)
1
Primer 147b 2-(3-Formil-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-on 147b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom napunjena je 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 147a (100 mg, 0,30 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5) 5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (116 mg, 0,30 mmol), PdCl2(dppf) (25 mg, 0,03 mmol), K3PO4.3H2O (160 mg, 0,60 mmol), NaOAc (59 mg, 0,60 mmol), acetonitril (10 ml), i H2O (5 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni eluiranjem sa petroleumom/ etil-acetatom 1: 3 dajući 147b kao žutu čvrstu supstancu (100 mg, 60%). LCMS: [M+H]<+>553
Primer 147 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-on 147
Smeša 147b (100 mg, 0.18 mmol), NaBH4(21 mg, 0,54), i CH3OH (10 ml) je mešana na 25° C za 1 h. Smeša je ekstrahovana pomoću CH2Cl2(10 mL × 2). Kombinovani CH2Cl2ekstrakt je koncentriran pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze da bi se dobio 147 (60 mg, 60%). LCMS: [M+H]<+>555.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,45 (d, J=5,0, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,06 (d, J=5.0, 1H), 7,41 (d, J=2,0, 1H), 7,29 (d, J=5,0, 1H), 6,04 (s, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,92 (s, 1H), 4,33-4,42 (m, 2H), 4,11-4,16 (m, 1H), 3,91-3,96 (m, 3H), 3,77-3,82 (m, 2H), 3,57 (s, 3H), 3,45-3,48 (m, 2H), 2,91-3,01 (m, 2H), 2,71-2,79 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 1,90-1,92 (m, 2H), 1,71-1,79 (m, 2H)
Primer 148a 3-(2-Bromo-4-hloropiridin-3-il) oksetan-3-ol 148a
1
U rastvor 2-brom-4-hloropiridina (14 g, 70 mmol) u suvom THF-u (200 mL) doda se kap po kap LDA (42,0 mL, 84,0 mmol, 2,0 M) na-70° C. Nakon mešanja od 0.5 h na ovoj temperaturi, polako je dodat rastvor oksetan-3-ona (6,6 g, 90 mmol) u suvom THF (40 mL) i reakciona smeša je mešana na 0° C još 1 h. Dodati su zasićenim vodeni NH4Cl (50 mL) i EA (200 ml). Smeša je odvojena vodom i etil-acetatom. Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom. Kombinovani organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom. Nakon sušenja preko anhidrovanog magnezijum sulfata, rastvarač je uparen i sirovi materijal je prečišćen SGC eluiranjem sa DCM) dajući 148a kao žutu čvrstu supstancu (8,8 g, 45%). MS: [M+H]<+>266,0.
Primer 148b 2-(4-hloro-3-(3-hidroksioksetan-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 148b
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 101e (190 mg), 1,0 mmol), 148a (795 mg, 3,0 mmol), CuI (95 mg, 0,5 mmol), DMEDA (88 mg, 1,0 mmol), KOAc (294 mg, 3,0 mmol) i 1,4-dioksan (50 ml).). Sistem je evakuisan, a zatim napunjen N2. Na bocu je pričvršćen refluksni kondenzator i reakcijska smesa je zagrevana na 85° C 15 h. Zatim, smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 2:1 petrol etrom/etil-acetatom dajući 148b kao žutu čvrstu supstancu (156 mg, 42%). MS: [M+H]<+>374,2.
Primer 148 (S)-2-(3-(3-Hidroksioksetan-3-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 148
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom napunjena je 148b (100 mg, 0,3 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 130f (173 mg), 0,36 mmol), Pd(dppf)Cl2(15 mg, 0,015 mmol), K3PO4(130 mg, 0,6 mmol), i NaOAc·3H2O (90 mg, 0,6 mmol) u CH3CN (30 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti fleš hromatografijom na
1
koloni eluiranjem sa 25: 1 DCM/MeOH, dajući 148 (30 mg, 20%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>693,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.69 (d, J = 2, 1H), 8.50 (d, J = 5, 1H), 8.01 (d, J = 2.5, 1H), 7.85 (s, 1H) 7,67 (s, 1H), 7,38-7,32 (m, 2H), 6,89 (s, 1H), 6,83 (d, J = 8,5, 1H), 6,67 (s, 1H), 4,93 (d, J = 6, 1H), 4,71-4,63 (m, 6H), 4,46 (d, J = 7,5, 1H), 4,24-4,18 (m, 2H), 4,10-4,05 (m, 1H), 3,90 (d, J = 12,5, 1H 3.70 (s, 3H), 3.55-3.46 (m, 2H), 3.10 (t, J = 4.5, 2H), 2.63-2.48 (m, 7H), 2.22 (t, J = 7.5, 1H), 1.92-1.88 (m, 2H), 1.82-1.77 (m, 2H), 1.02-1.00 (m, 3H)
Primer 149a (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 149a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 139a (100 mg, 0.30 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il)-piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 191j (146 mg, 0.30 mmol), PdCl2(dppf) (25 mg, 0.030 mmol), K3PO4.trihidrat (160 mg, 0.60 mmol), natrijev acetat (49 mg, 0.60 mmol), acetonitrilu (20 ml), i voda (3 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petroleumom/ etil-acetatom 1: 3 dajući 149a kao žutu čvrstu supstancu (97 mg, 50%). MS-ESI: [M+H]<+>649
Primer 149 2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((S)-2-metil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-2,3,5,6,7,8-heksahidro-4H-2,4b-diaza-fluoren-1-on 149
Smeša 149a (97 mg, 0.15 mmol), NaBH4(17 mg, 0,45), i metanol (10 mL) je mešana na 25° C za 1 h. Reakciona smeša je zatim ugašena vodom (10 ml) i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti
1
preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 149 (62 mg, 63%). MS-ESI: [M+H]<+>651,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,63 (s, 1H), 8,46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,83 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,31 (J = 5,0 Hz, 1H), 7,25-7,23 (m, 1H), 6,04 (s, 1H), 4,57-4,55 (m, 2H), 4,48-4,46 (m, 1H), 4,42-4,38 (m, 2H), 4,35-4.33 (m, 1H), 4,15-4.12 (m, 1H), 3,96-3,94 (m, 1H), 3,82-3,78 (m, 2H), 3,69-3,67 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,41-3,38 (m, 2H), 3,18-3,15 (m, 2H), 3,00-2,95 (m, 3H), 2,73-2,71 (m, 2H), 2,30-2,28 (m, 2H), 2,20-2,16 (m, 1H), 1,93-1,89 (m, 3H), 1.77-1,75 (m, 1H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 150a 3-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-5-[1-metil-5-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-4-karbaldehid 150a
U posudu od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 3-bromo-5-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2 6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-karbaldehid 107f (233 mg, 0.60 mmol), 1-metil-3-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin \ t-2-on 135a (231 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(49 mg, 0.060 mmol), kalijum-acetat (118 mg, 1,2 mmol), K3PO4.trihidrat (320 mg, 1,2 mmol), acetonitril (12 mL) i voda (5 kapi). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 110° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 150a (168 mg, 49%) kao čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>567
Primer 150 2-[4-Hidroksimetil-1'-metil-5 '-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazol [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6'-okso-1 ', 6'-dihidro-[3,3'] bipiridinil-5-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 150
U rastvor 150a (170 mg, 0.30 mmol) u metanolu (10 mL) dodat je natrijumborohidrid (68 mg, 1.8 mmol) na 0° C. Smesa je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta.
2
Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (2 mL) i koncentrirana. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobilo 150 (42 mg, 25%) kao blijedo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>569.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,63 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,95 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,32 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,67 (s, 1H), 4,63-4,55 (m, 2H), 4,37-4,35 (m 1H), 4,22-4,18 (m, 3H), 4,05-3,97 (m, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,59-3,57 (m, 2H), 2,86 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,56 (s, 2H), 2,50 (s, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,26 (s, 6H).
Primer 151a (R)-terc-butil 3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 151a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 250 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksan (60 mL), 5-bromo-2-nitropiridin (2.0 g, 10.0 mmol), (R))-terc-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilat (2,0 g, 10,0 mmol) i cezijev karbonat (6,5 g, 20 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu 10 minuta, dodati su tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (915 mg, 1.0 mmol) i Ksantfos (579 mg, 1.0 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na 100° C 15 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je podeljen između etil-acetata (100 mL) i vode (100 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (3 X 50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (100 ml), osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30:1 dihlorometanom/metanolom, dajući 151a (1,6 g, 44%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>323.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,21 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,45-7,43 (m, 1H), 4,34-4,33 (m, 1H), 3,92-3,99 (m, 1H), 3,80 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 3,06-3,23 (m, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,09 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 151b (R)-terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 151b
Laboratorijska boca od 250 mL je prečišćena sa azotom i napunjena 151a (1,5 g, 4,6 mmol), 10% paladijuma na uglju (50% vlažan, 200 mg) i metanol (70 mL). Isprazni se, napuni gasom vodonika i meša na sobnoj temperaturi 10 h. Vodonik je zatim evakuiran i u
2 1
laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da se dobije 151b (1,1 g, 81%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>293
Primer 151c (R)-terc-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 151c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (40 mL), 151b (1.0 g, 3,4 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (2,7 g, 10,2 mmol) i cezijum karbonat (2,2 g, 6,8 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 10 minuta, dodaju se Ksantfos (198 mg, 0,34 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (313 mg, 0,34 mmol). Reakciona smeša je podvrgnuta ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrejana na 100° C tokom 5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Ostatak je raspodeljen između etil-acetata i vode. Vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 30 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (50 ml), osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30:1 dihlorometan/metanol, dajući 151c kao žutu čvrstu supstancu (1.1 g, 63%). MS-ESI: [M+H]<+>478.
Primer 151d (R)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 151d
U smešu 151c (600 mg, 1.26 mmol) u metanolu (20 mL) doda se HCl/dioksan (4 M, 4 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak je bazifikovan sa vodenim 1M NaOH i ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 30 mL). Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom i koncentrovan pod sniženim pritiskom da se dobije 151d (450 mg, 95%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>378.
Primer 151e (R)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 151f
Smeša 151d (40,0 g, 106 mmol), oksetan-3-on (11,4 g, 159 mmol), NaBH3CN (10,0 g, 159 mmol) i cink hlorida (21,3 g, 159 mmol) u metanolu (700 mL) je mešana na 50° C tokom 5 sati, voda (50 mL) je dodata u smesu i koncentrirana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 X 200 mL) i kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 40: 1 dihlorometan/metanol, dajući 151e (35 g, 73%). MS: [M+H]<+>
2 2
Primer 151f (R)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5), 5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 151f
U rastvor 151e (2,0 g, 4,60 mmol), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolan) (3.50 g, 13.80 mmol) u dioksan (50 ml) je dodat PdCl2(dppf) (377,10 mg, 0,46 mmol) i kalijum-acetat (2,70 g, 27,80 mmol). Smeša je mešana na 10°C tokom 12 h pod atmosferom argona. Nakon reakcije, smeša je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 15:1 metilen hloridom/metanolom dajući 151f (1,10 g, 49%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>482,3
Primer 151g (R)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 151g
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nicotinaldehyde 103b (150 mg, 0,45 mmol), 151f (331 mg, 0,69 mmol), PdCl2(dppf) (37 mg, 0.045 mmol), K3PO4(190 mg, 0,90 mmol), natrijev acetat (74 mg, 0,90 mmol), acetonitrilom (15 ml) i vodom (1,5 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan, dajući 151 g kao crvenu čvrstu supstancu (89 mg, 30%). MS-ESI:
[M+H]<+>647
Primer 151 2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 151
Smeša 151g (89 mg, 0.14 mmol), NaBH4(22 mg, 0.60), i metanol (10 mL) je mešana na 25° C za 1 h. Smeša je ugašena vodom (8 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom.
2
Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze dajući 151 (35 mg, 39%). MS-ESI: [M+H]<+>649.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,65 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,83 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,50-7,48 (m, 2H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,26-7,24 (m, 2H), 6,83-6,80 (m, 2H), 4,98 (bs, 1H), 4,5-4,54 (m, 2H), 4,48-4,33 (m, 4H), 3,67-3,66 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.39-3.38 (m, 2H), 3.09-3.08 (m, 1H), 2.96-2.94 (m, 1H), 2.76-2.74 (m, 2H), 2,64-2,62 (m, 2H), 2,36-2,31 (m, 2H), 2,20-2,17 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 1,88-1,86 (m, 2H), 1,75-1,74 (m, 2H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 152a terc-butil 8-(6-Nitropiridin-3-il)-3,8-diazabiciklo [3.2.1] oktan-3-karboksilat 152a
U posudu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjen je 1,4-dioksan (100 mL), 5-bromo-2-
2 4
nitropiridin (2,5 g, 12,4 mmol), terc butil 3,8-Diazabicikl.o [3.2.1] oktan-3-karboksilat (869 g, 4,1 mmol), Pd2(dba)3(193 mg, 0,21 mmol), Ksantfos (237 mg, 0,41 mmol) i cezij karbonat (2,7 g, 8,2 mmol). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša je mešana na 110° C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 3:1 petrol etrom/etil-acetatom, dajući 152a (2,63 g, 66,8%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>335,2.
Primer 152b terc-butil 8-(6-aminopiridin-3-il)-3,8-diazabiciklo [3.2.1] oktan-3-karboksilat 152b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml je isprana azotom i napunjena 152a (2,5 g, 7,5 mmol), 10% paladijuma na ugljenu (50% vlažan, 250 mg) i metanolom (40 ml). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika, i mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz podlogu od CELITE<®>a filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom dajući 152b (1,51 g, 66%) kao bezbojno ulje. MS-ESI: [M+H]<+>305,3
Primer 152c terc-butil 8-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3,8-diazabiciklo [3.2.1] oktan-3-karboksilat 152c
Zapečaćena epruveta sa magnetnom mešalicom napunjena je 152b (1,3 g, 4,3 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (1,2 g, 4,3 mmol), tris (dibenzilidenaceton) dipaladij (0) (394 mg, 0,43 mmol), Ksantfos (497 mg, 0,86 mmol), Cs2CO3(2,8 g, 8.6 mmol) i 1,4-dioksan (15 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša je mešana na 120° C tokom 2 h. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50:1 dihlorometana/metanoladajući 152c kao žutu čvrstu supstancu (900 mg, 43%). MS-ESI: [M+H]<+>490,3.
Primer 152d 3-(5-(3,8-Diazabiciklo [3.2.1] oktan-8-il) piridin-2-ilamino)-5-brom-1-metil-piridin-2 (1H)-on 152d
Smeša 152c (900 mg, 1,84 mmol) i 4.0M HCl/dioksan (60 mL) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovo 152d kao žutu čvrstu supstancu (700 mg, 98%) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>390,3.
Primer 152e 5-Bromo-1-metil-3-(5-(3-(oksetan-3-il)-3,8-diazabiciklo [3.2.1] oktan-8-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 152e
Smeša 152d (676 mg, 1,7 mmol), oksetan-3-on (251 mg, 3,5 mmol), NaBH3CN (274 mg, 4,4 mmol) i cink hlorid (592 mg, 4,4 mmol) u metanolu (30 mL) je mešan na 50° C
2
tokom 5 sati, dodata je voda i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovo 152e kao žutu čvrstu supstancu (650 mg, 84%) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>446,2.
Primer 152f (4-(1-metil-5-(5-(3-(oksetan-3-il)-3,8-diazabiciklo [3.2.1] oktan-8-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 152f
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena 152e (300 mg, 0,67 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronskom kiselinom 113h (257 mg, 0.67 mmol), Pd(dppf)Cl2(55 mg, 0.067 mmol), K3PO4(284 mg, 1,34 mmol), natrijum-acetatom (110 mg, 1,34 mmol), vodom (6 kapi) i acetonitrilom (20 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se 3 h meša na refluksu. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 152f kao smeđu čvrstu supstancu (200 mg, 42%). MS-ESI: [M+H]<+>705,4.
Primer 152 2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((1S, 5R)-3-oksetan-3-il-3,8-diazabiciklo [3.2.1] okt-8-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-3,4,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 152
Smeša od 152f (180 mg, 0.26 mmol) i litijum hidroksida (215 mg, 5.1 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 35° C tokom 1 h. Smesa je uparena u vakuumu i ostatak je razrijeđen vodom i etil-acetatom. Vodena faza je ekstrahovana etilacetatom (2 x 30 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 152 (12 mg, 71%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>663,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,80 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,25-7,23 (m, 1H), 7,20 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,96-4,94 (m, 1H), 4,48-4,43 (m, 3H), 4,39-4,37 (m, 3H), 4,25-4,19 (m, 5H), 3,85 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,66-2,54 (m, 4H), 2,40-2,36 (m, 3H), 2,17 (d, J = 10,5 Hz, 2H), 1,94-1,65 (m, 8H)).
Primer 153a 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2 R)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karbaldehid 153a
2
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (105 mg, 0.30 mmol), 1-metil-3-({5-[(2 R)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-5-(tetra-metil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-on 151g (216 mg, 0,45 mmol), PdCl2(dppf) (25 mg, 0,030 mmol), K3PO4(126 mg, 0.60 mmol), natrijev acetat (49 mg, 0.60 mmol), acetonitrilu (15 ml), i voda (1.5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 80° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 1:20 metanol/dihlorometan, dajući 153a kao crvenu čvrstu supstancu (82 mg, 41%). MS-ESI: [M+H]<+>663
Primer 153 2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 153
Smeša 153a (82 mg, 0,12 mmol), NaBH4(22 mg, 0,60), i metanol (10 mL) je mešana na 25° C tokom 1 h. Zatim je ugašena sa vodom (5 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 153 (22 mg, 28%). MS-ESI: [M+H]<+>665.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.65 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,32-7,26 (m, 1H), 6,84-6,80 (m, 2H), 5,30 (s, 1H), 4,71-4,32 (m, 7H).), 4,15 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,85 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,57-3,43 (m, 2H), 3,08-3,06 (m, 2H), 2,57-2,48 (m, 7H), 2,22-2,20 (m, 1H), 1,27 (s, 6H), 0,98 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 154a 4-[1-metil-5-({5-[(2 R)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 154a
2
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9) 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (84 mg, 0,24 mmol), (R)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan)-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-jedan 151g (173 mg, 0,36 mmol), PdCl2(dppf) (20 mg, 0,024 mmol), K3PO4(100 mg, 0,48 mmol), natrijev acetat (40 mg, 0,48 mmol), acetonitrilom (20 ml) i vodom (2 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 1:20 metanol/dihlorometan, dajući 154a kao crvenu čvrstu supstancu (112 mg, 70%). MS-ESI: [M+H]<+>665
Primer 154 3-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo [4,5] tieno [2,3-d] piridazin-4-on 154
Smeša 154a (150 mg, 0,23 mmol), NaBH4(35 mg, 0,92), i metanol (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Smesa je zatim ugašena vodom (8 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 10 ml). Spojeni dihlormetanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 154 (29 mg, 19%). MS-ESI: [M+H]<+>667.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,64 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,49-8,47 (m, 2H), 7,85 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,24 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,85 (t, J = 9,5 Hz, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,43-4,36 (m, 4H), 3,69-3,68 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,40-3,36 (m, 1H), 3,11-3,07 (m, 1H), 2,97-2,86 (m, 6H), 2,33-2,31 (m, 2H), 2,16 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 1,89-1,86 (m, 4H), 0,92 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 155a 3-(5-((2 S, 5 R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 155a Boca od 100 mLsa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom
2
mešalicom i refluksnim kondenzatorom je napunjena sa 5-bromo-3-(5-((2 S, 5 R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 122e (3,0 g, 6,70 mmol), Pin2B2(8442 mg, 33,5 mmol), Pd2(dba)3(311 mg, 0,34 mmol), X-phos (319 mg, 0,67 mmol), kalijum-acetat (1970 mg, 20,1 mmol) i dioksan (50 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 60° C 16 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ispran sa 8:1 petroleum etrom/etil-acetatom (80 mL) da se dobije 155a kao žuta čvrsta supstanca (3 g, 90%). MS: [M+H]<+>496,4.
Primer 155b 4-(5-(5-(2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 155b
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3, 4-b] indolizin-2 (1H)-il) nicotinaldehyde 139a (133 mg, 0,40 mmol), 155a (198 mg, 0,40 mmol), Pd(dppf)Cl2(17 mg, 0,020 mmol), K3PO4(254 mg, 1.2 mmol), natrijum-acetat (98 mg, 1,2 mmol), voda (5 kapi) i acetonitril (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 155b kao belu čvrstu supstancu (80 mg, 30%). MS-ESI: [M+H]<+>663,3.
Primer 155 2-{5-[5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-2,3,5,6,7,8-heksahidro-4H-2,4b-diaza-fluoren-1-on 155
U rastvor 155b (80 mg, 0.12 mmol) na 0° C u metanolu (5 mL) dodat je natrijumborohidrid (12 mg, 0,36 mmol). Reakciona smeša je mešana 30 minuta. Zatim je ugašena vodom (1 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 155 (32 mg, 40%). MS-ESI: [M+H]<+>665,3.<1>H NMR
2
(500 MHz, CDCl3) δ 8,68 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37-7,33 (m, 2H), 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,32 (s, 1H), 5,02 (d, J = 13,0 Hz, 1H), 4,78-4,71 (m, 2H), 4,67-4,61 (m, 3H), 4,44-4,39 (m, 1H), 4,31-4,29 (m, 1H), 3,96-3,91 (m, 1H), 3,86-3,80 (m, 2H), 3,78-3.75 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,21-3,19 (m, 1H), 3,01-2,93 (m, 3H), 2,85-2,83 (m, 2H), 2,72 (d, J = 10,0 Hz, 2H), 2,49-2,47 (m, 1H), 2,05-2,03 (m, 2H), 1,98-1,97
Primer 156a 4-(5-(5-((2 S, 5 R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2) (1H)-il) nikotinaldehid 156a
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 3-(5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 155a (171 mg, 0.35 mmol), 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nicotinaldehyde 134c (120 mg, 0.35 mmol), K3PO4(146 mg, 0,69 mmol), PdCl2(dppf) (28 mg, 0.035 mmol), natrijev acetat (56 mg, 0,69 mmol), voda (5 kapi) i acetonitril (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 40/1 dihlorometan/metanol, dajući 156a kao žutu čvrstu supstancu (60 mg, 25%). MS-ESI: [M+H]<+>681,3
Primer 156 2-{5-[5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-10-fluoro-3,4,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 156
Laboratorijska boca od 50-mL sa okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 156a (60 mg, 0,088 mmol), NaBH4(17 mg, 0,44 mmol) i metanol (10 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim je ugašena vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne
21
faze da bi se dobilo 156 (15 mg, 25%). MS-ESI: [M+H]<+>683,5.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,67 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,84 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37-7,35 (m, 2H), 6,81 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,99-4,59 (m, 6H), 4,45-4,32 (m, 2H), 4,12-4,03 (m, 2H), 3,85-3,73 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,19-3,16 (m, 1H), 2,91-2,89 (m, 1H), 2,75-2,69 (m, 2H), 2,57-2,47 (m, 5H), 1,97-1,76 (m, 5H), 0,89-0,87 (m, preklapanje, 6H).
Primer 157 2-{5 '-[5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-4-hidroksimetil-1'-metil-6'-okso-1 ', 6'-dihidro-[3,3'] bipiridinil-5-il}-3,4,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazino [1], 2-a] indol-1-on 157
U posudu od 25 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 3-bromo-5-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1, 2a] indol-2 (1H)-il) isonicotinaldehyde 101f (200 mg, 0.54 mmol), 3-(5-((2 S, 5 R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 155a (267 mg, 0.54 mmol), Pd(dppf)Cl2(44 mg, 0.054 mmol), K3PO4(229 mg, 1.08 mmol), natrijev acetat (89 mg, 1.08 mmol), voda (0,2 mL) i acetonitril (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 157 (35,5 mg, 11%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M+H]<+>665,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,65-8,63 (m, 2H), 8,50 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,48-7,47 (m, 1H), 7,36 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,81 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,75-4,54 (m, preklapanje, 6H), 4,37-4,13 (m, preklapanje, 4H), 4,00-3,95 (m, 1H), 3,74-3,73 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,19-3,15 (m, 1H), 2,91-2,90 (m, 1H), 2,74-2,44 (m, preklapanje, 7H), 1,92-1,88 (m, 2H), 1,81-1,79 (m, 2H), 0,90-0,89 (m, 6H).
Primer 158a 4-[5-({5-[(2 S, 5 R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatri-ciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 158a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je (4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid) 108a (280 mg, 0.80 mmol), 3-(5-((2 S, 5 R)-2,5-dimethyl-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)) piridin-2 (1H)-on 155a (480 mg, 0.96 mmol), Pd(dppf)Cl2(33 mg, 0.040 mmol), K3PO4(339 mg, 1,6 mmol), natrijev acetat hidrat (218 mg, 1.6 mmol) i acetonitrila (100 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25: 1 dihlorometan/metanol, dajući 158a (300 mg, 54%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>677,3.
Primer 158 2-{5-[5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 158
Smeša 158a (200 mg, 0,30 mmol) i NaBH4(36 mg, 0,90 mmol) u metanolu (30 mL) mešana je na 30°C 1 h. Smeša je ugašena vodom (5 ml), i ekstrahovana etil acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 158 (110 mg, 55%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>679,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,68 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,88 (e, 1H), 7,87 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37-7,36 (m, 2H), 6,85 (s, 1H), 6,81 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,07 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,77-4,71 (m, 2H), 4,67-4,61 (m, 3H), 4,53-4,51 (m, 1H), 4,34-4,32 (m, 1H), 4,16 (d, J = 5,5 Hz), 2H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,76 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,20-3,17 (m, 1H), 2,92 (dd, J = 3,0, 11,5). Hz, 1H), 2,76-2,70 (m, 2H), 2,58 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 2,52 (s, 2H), 2,49-2,46 (m, 1H), 1,97-1,93 (m, 1H), 1,28 (s, 6H), 0,92-0,89 (m, 6H).
Primer 159a 4-[5-({5-[2,5-Dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 159a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (200 mg, 0,58 mmol), 3-({5-[(2 S, 5 R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-on 155a (1,0 g, 2,0 mmol), PdCl2(dppf) (47 mg, 0,060 mmol), K3PO4(280 mg, 1,2 mmol), natrijum-acetat (95 mg, 1,2 mmol), acetonitril (15 mL) i voda (1,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlormetan da se dobije 159a kao crvena čvrsta supstanca (150 mg, 38%). MS-ESI:
[M+H]<+>679
Primer 159 3-{5-[5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo [4,5] tieno [2, 3-d] piridazin-4-on 159
Smeša 159a (130 mg, 0.19 mmol), NaBH4(22 mg, 0.60), i metanol (10 mL) je mešana na 25° C za 1 h. Smesa je zatim ugašena vodom (8 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 159 (28 mg, 22%). MS-ESI: [M+H]<+>681.
<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,71 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,65 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,70 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,67-4,61 (m, 2H), 4,71-4,64 (m, 2H), 4,44-4,42 (m, 2H), 4,34-4,33 (m, 1H), 3,83-3,76 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,20-3,16 (m, 1H), 2,99-2,84 (m, 6H), 2,79-2,71 (m, 2H), 2,50-2,48 (m, 1H), 2,02-1,98 (m, 4H), 0,91 (d, J = 6,0 Hz, 6H).
Primer 160a 4-(5-(5-((2 S, 5 R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 160a
21
Laboratorijska boca sa jednim vratom i okruglim dnom od 50 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nicotinaldehid 103b (150 mg, 1,0 eq, 0,46 mmol), 3-(5-. ((2 S, 5 R)-2,5-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-onom 155a (228 mg, 0,46 mmol), K3PO4(195 mg, 0,92 mmol), PdCl2(dppf) (37 mg, 0,046 mmol), natrijum-acetatom (75 mg, 0,92 mmol), vodom (8 kapi) i acetonitrilom (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 80° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 40:1 dihlorometan/etanol, dajući 160a kao žutu čvrstu supstancu (80 mg, 26%). MS-ESI: [M+H]<+>661,4.
Primer 160 2-{5-[5-((2S, 5R)-2,5-dimetil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 160
Laboratorijska boca sa jednim vratom i okruglim dnom od 50 50-mL opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 160a (80 mg, 0.12 mmol), NaBH4(23 mg, 0,60 mmol) i metanolom (10 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Ugašena je vodom (1 mL) i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod smanjenim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 160 (44 mg, 55%). MS-ESI: [M+H]<+>663,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,72-8,70 (m, 1H), 8,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7,89-7,87 (m, 2H), 7,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,37-7,35 (m, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,97 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 9,0). Hz, 1H), 6,68 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,10-5,08 (m, 1H), 4,76-4,32 (m, 6H), 3,76-3,72 (m, 4H), 3,20-3,17 (m, 1H), 2.93-2.90 (m, 1 H), 2,76-2,69 (m, 6H), 2,49-2,46 (m, 1H), 1,97-1,94 (m, 3H), 1,87-1,84 (m, 2H), 0,89 (t, J = 6,5 Hz, 6H).
Primer 161a (S)-terc-butil 3-etil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 161a
U laboratorijsku bocu sa okruglim dnom od 250 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 1,4-dioksan (50 mL), 5-bromo-2-nitropiridin (2,02 g, 10 mmol), (S))-tert-butyl 3 ethylpiperazine-1-karboksilat (2,14 g, 10,0 mmol), Pd2(dba)3(458 mg, 0,50 mmol), Ksantfos (576 mg, 1,0 mmol) i cezij karbonata (6,52 g, 20 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C preko noći. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 3: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 161a (700 mg, 22%) kao žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>336
Primer 161b (S)-terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-3-etilpiperazin-1-karboksilat 161b Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml je isprana azotom i napunjena 161a (0,7 g, 2,08 mmol), 10% paladijuma na ugljenu (50% vlažan, 208 mg) i metanol (40 mL). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika, i mešana na sobnoj temperaturi 6 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da se dobije 161b (568 mg, 89%). MS: [M+H]<+>306
Primer 161c (S)-tert-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3-etilpiperazin-1-karboksilat 161c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (50 mL), 161b (568 mg, 1.86 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (498 mg, 1.86 mmol), Pd2(dba)3(85 mg, 0.093 mmol), Ksantfos (107 mg, 0.186 mmol) i cezij karbonat (1.198 g, 3.72 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 6 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 100: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobio 161c (502 mg, 55%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>492.
Primer 161d (S)-5-Bromo-3-(5-(2-etilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 161d
Smeša 161c (502 mg, 1.02 mmol), dihlorometan (2 mL) i 4.0 M HCl/dioksan (4 mL)
21
je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 h. Zatim je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovo 161d kao žutu čvrstu supstancu (263 mg, 66%) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS: [M+H]<+>392.
Primer 161e (S)-5-Bromo-3-(5-(2-etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 161e
Smeša jedinjenja 161d (263 mg, 0,67 mmol), HATU (96 mg, 1 mmol), NH3Cl (104 mg, 1,68 mmol) i DIPEA (227 mg, 1,68 mmol) u THF-u (10 mL) mešana je 5 sata na 50°C. Voda (10 mL) je zatim dodata reakciji. Dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol, dajući 161e (203 mg, 68%). MS: [M+H]<+>448.
Primer 161f (S)-3-(5-(2-Etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5), 5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 161f Laboratorijska boca od 100-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom je napunjena sa 161e (3219 mg, 7,20 mmol), Pin2B2(9072 mg, 36,0 mmol), Pd2(dba)3(329 mg, 0,36 mmol), X-fos (302 mg, 0,72 mmol), kalijum acetat (2117 mg, 21,6 mmol) i dioksan (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 60° C 16 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se ispere sa 8:1 petrol eter/etil-acetatom (80 mL) da se dobije 161f kao žuta čvrsta supstanca (3,0 g, 84%). MS: [M+H]<+>496,4.
Primer 161g 4-(5-(5-(2-Etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nicotinaldehyde 161g
21
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjena je 161f (200 mg, 0,40 mmol), 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 139a (132 mg, 0,40 mmol), K3PO43 voda (213 mg, 0,80 mmol), natrijum-acetat (66 mg, 0,80 mmol), 1, 1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (16 mg, 0.020 mmol) i acetonitril (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 100° C pod N2zaštita za 2 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (50 ml) i vodom (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 161 g (150 mg, 57%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>663
Primer 161 2-{5-[5-((S)-2-Etil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il)-2,3,5,6,7,8-heksahidro-4H-2,4b-diaza-fluoren-1-on 161
U rastvor 161g (120 mg, 0,18 mmol) u metanolu (20 mL) dodat je NaBH4(21 mg, 0,54 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 1 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Zatim se smeša sipa u vodu (20 mL) i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 40 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (20 ml), osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja primera 161 (97 mg, 81%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>665.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,63 (e, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,84-7,82 (m, 2H), 7.35 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,32 (s, 1H), 5,01-4,99 (m, 1H), 4,73-4,64 (m, 5H).), 4,45-4,40 (m, 1H), 4,30 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 3,94-3,91 (m, 1H), 3,85-3,83 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,55-3.53 (m, 1H), 3.34-3.32 (m, 1 H), 3,14-3,12 (m, 2H), 3,04-2,92 (m, 2H), 2,84-2,82 (m, 2H), 2,59-2,57
21
(m, 1H 2,46-2.44 (m, 2H), 2,38-2,36 (m, 1H), 2,06-2,01 (m, 2H), 1,90-1,86 (m, 2H), 1,68-1,66 (m, 1H), 1,43-1,39 (m, 1H), 0,82 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Primer 162a 5-Bromo-1-metil-3-(pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 162a Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je pirazin-2-aminom (500 mg, 5.3 mmol), 3,5-dibromo-1-metil piridin-2 (1H (1335 mg, 5.3 mmol), Pd2(dba)3(229 mg, 0.25 mmol), Ksantfos (289 mg, 0.50 mmol), cezijum karbonat (3.26 g, 10 mmol) i 1,4-dioksan (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se meša na 100° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 50: 1 dihlorometan/metanol, dajući 162a (420 mg, 30%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>281,0.
Primer 162b (4-(1-metil-6-okso-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7, 8,9-heksahidropirazino [1, 2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 162b
Boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 162a (170 mg, 0,61 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8)., 9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (280 mg, 0,72 mmol), Pd(dppf)Cl2(30 mg, 0.037 mmol), K3PO4.Trihidrat (270 mg, 1.2 mmol), natrijum-acetat (180 mg, 1,2 mmol), acetonitril (20 mL) i voda (0.5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25: 1 dihlorometan/metanol, dajući 162b (130 mg, 40%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>540,3
Primer 162 2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-3, 4,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 162
Smeša od 162b (110 mg, 0.20 mmol) i litijum hidroksida (84 mg, 2.0 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smesa je uparena u vakuumu i ostatak je razrijeđen vodom i etil-acetatom. Vodena faza je ekstrahovana etil-
21
acetatom (2 x 30 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 162 (85 mg, 85%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>498,3.<1>H NMR (500 MHz, CHCl3) δ 8,73 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 5 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,15-8,14 (m, 2H), 8,01 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 4,66-4,65 (m, 1H), 4,52-4,51 (m, 1H), 4,32-4,31 (m, 1H), 4,18-4,17 (m, 1H), 4,14-4,12 (m, 1H), 3,90-3,88 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,62-2,57 (m, 4H), 1,92-1,88 (m, 3H), 1,80-1,79 (m, 2H).
Primer 163a 1-Metil-5-(5-(oksetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-ilboronska kiselina 163a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena magnetnom mešalicom napunjena je s 5-bromo-1-metil-3-(5-(oksetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 125i (1,0 g, 2,64 mmol), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2-bi (1,3,2-dioksaborolan) (2,0 g, 7,92 mmol), PdCl2(dppf) (190 mg, 0,26 mmol), kalijum acetat (776 mg, 7,92 mmol) i dioksan (40 ml). Nakon upuhivanja argona u smesu 30 minuta, kondenzator refluksa je pričvršćen na laboratorijsku bocu i smesa je mešana na 100° C tokom 6 sati u atmosferi argona. Dobijena smeša je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen obrnuto-faznom elucijom pomoću Combiflash sa 0,3% NH4HCO3voda/CH3CN za dobijanje 163a kao bele čvrste supstance (300 mg, 33%). MS:
[M+H]<+>346.
Primer 163b 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(1-metil-5-{[5-(oksetan-3-il)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-karbaldehid 163b
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je (4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid) 108a (280 mg, 0,81 mmol), 163a (440 mg, 0.96 mmol), Pd(dppf)Cl2(40 mg, 0.049 mmol), K3PO4(360 mg, 1.6 mmol), natrijum-acetat trihidrat (240 mg, 1.6 mmol), voda (6 kapi) i acetonitril (20 mL). Sistem je
21
evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25:1 dihlorometan/metanol, dajući 163b (150 mg, 31%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>609,3
Primer 163 2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-5-(5-oksetan-3-il-4,5,6,7-tetrahidro-pirazol [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 163
Smeša 163b (80 mg, 0,12 mmol) i NaBH4(15 mg, 0,36 mmol) u metanolul (5 mL) mešana je na 30°C 2 h. Smesa je ugašena vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani ekstrakt etil-acetata se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 163 (30 mg, 50%) kao tamno crvenu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>611,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,48 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 2, 1H), 7,43 (e, 1H), 7,34 (d, J = 5 Hz, 1H), 6,8 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,03 (t, J = 6, 1H), 4,77-4,73 (m, 3H), 4,68 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4,51-4,50 (m, 1H), 4,34-4,33 (m, 1H), 4.23-4.16 (m, 2H), 4,09 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3,86-3,85 (m, 1H), 3.79-3.74 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,56 (d, J = 4, 2H), 2,83 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,58 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,52 (s, 2H), 1,28 (s, 6H).
Primer 164a 2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[5-({5-[(2 S)-2-etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karbaldehid 164a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je (4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid) 108a (280 mg, 0.8 mmol), (S)-3-(5-(2-etil-4-(oksetan-3)-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 161f (500 mg, 0.96 mmol), Pd(dppf)Cl2(33 mg, 0.040 mmol), K3PO4(360 mg, 1,6 mmol), natrijev acetat hidrat (240 mg, 1,6 mmol) i acetonitrilom (100 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2
22
h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25: 1 dihlorometan/metanol, dajući 164a (320 mg, 60%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>677,3.
Primer 164 2-{5-[5-((S)-2-Etil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 164
Smeša 164a (200 mg, 0,30 mmol) i NaBH4(36 mg, 0,90 mmol) u metanolu (30 mL) mešana je na 30°C 2 h. Smesa je ugašena vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 164 (140 mg, 72%) kao svetlo zelena čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>679,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,63 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7.83 (e, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,06 (s, 1H), 4,71-4,61 (m, 5H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,34-4,32 (m, 1H), 4,16 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,55-3,50 (m, 1H), 3,33-3,30 (m, 1H), 3,12 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,58-2,55 (m, 3H), 2,52 (s, 2H), 2,44 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 2,35 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 1,68-1,64 (m, 1H), 1,42-1,37 (m, 1H), 1,28 (s, 6H), 0,82 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Primer 165a (S)-4-(5-(5-(2-Etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 165a
Laboratorijska boca od 50 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1 H)-il) nikotinaldehid 103b (164 mg, 0.50 mmol), (S)-3-(5-(2-etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 161f (347 mg, 0.70 mmol), kalijev acetat (137 mg, 1.4 mmol)), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (29 mg, 0,035 mmol), voda (5 kapi) i acetonitril (20 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C u atmosferi argona 3 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (50 ml) i vodom (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlormetan/metanolom (80/1 do 25/1) dajući 165a (151 mg, 46%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>661
Primer 165 2-{5-[5-((S)-2-Etil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-2H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 165
U rastvor 165a (100 mg, 0,15 mmol) u metanolu (10 mL) dodat je NaBH4(34 mg, 0,90 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 1 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Zatim je smeša ugašena vodom (8 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 165 (35 mg, 35%) u obliku svetlo žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>663.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,64 (s, 1H), 8,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,82 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,51-7,48 (m, 2H), 7,35 (dd, J = 2,0 Hz, 9,0 Hz, 1H), 7,27-7,23 (m, 2H), 6,83-6,81 (m, 2H), 4,97 (bs, 1H), 4,59-4,55 (m, 2H), 4,49-4,32 (m, 4H), 3,61 (s, 3H), 3,51-3,47 (m, 1H), 3,42-3,37 (m, 1H), 3,17-3,16 (m, 1H), 3,01-2,98 (m, 1H), 2,76-2,74 (m, 2H), 2,63-2,61 (m, 3H), 2,55-2,54 (m, 1H), 2,19-2,16 (m, 1H), 2,12-2,07 (m, 1H), 1,90-1,85 (m, 2H), 1,77-1,66 (m, 3H), 1,27-1,25 (m, 1H), 0,79 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Primer 166a 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(oksetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 166a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1-metil-3-(5-(oksetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 163a (354 mg, 0,83 mmol), 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c (289 mg, 0,83 mmol), PdCl2(dppf) (68 mg, 0,08 mmol), K3PO4(352 mg, 1,66 mmol), natrijev acetat (136 mg, 1,66 mmol), acetonitrilom (50 ml), i vodom (3 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 166a (305 mg, 60%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>613,6.
Primer 16610-Fluoro-2-[3'-hidroksimetil-1-metil-5-(5-oksetan-3-il-4,5,6,7-tetrahidropirazol [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-3,4,6,7,8,9-heksahidro-2H-pirazino [1,2-a] indol-1-on 166
U suspenziju 166a (250 mg, 0.41 mmol) u metanolu (20 mL) dodat je natrijumborohidrid (47 mg, 1.23 mmol) na 0° C. Smeša je mešana 30 minuta. Zatim je ugašena vodom (2 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobilo 166 (20 mg, 6,6%). MS-ESI: [M+H]<+>615,6.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,46 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,95 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,76-4,74 (m, 2H), 4,69-4,65-4,67 (m, 3H), 4,46-4,44 (m, 1H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,10-4,08 (m, 4H), 3,38-3,35 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,58-3,56 (m, 2H), 2,842.82 (m, 2H), 2,58-2,53 (m, 4H), 1,89-1,84 (m, 2H), 1,77-1,76 (m, 2H).
Primer 167a 3-Hlorobiciklo [2.2.1] hept-2-en-2-karbaldehid 167a
22
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 250 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom prečišćena je azotom i napunjena bezvodnim 1,2-dihloroetanom (24 mL) i bezvodnim DMF (9,12 g, 125 mmol). Reakciona smeša je ohlađena na 0° C i dodavan je fosfor oksihlorid (15,3 g, 100 mmol) tokom perioda od 5 minuta uz održavanje temperature reakcije između 0 i 10° C. Kupelj za hlađenje je uklonjena i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Doda se rastvor biciklo [2.2.1] heptan-2-ona (5,50 g, 50,0 mmol) u 1,2-dihloroetanu (10 ml) i dobijena smeša se zagreva na 80° C preko noći. Nakon tog vremena, reakcija je sipana u rastvor kalijum monohidrogen fosfata (43,5 g, 250 mmol) u vodi (200 mL) i mešana 15 minuta. Organski sloj je odvojen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u metilen hloridu (300 ml) i opran vodom (2 x 50 ml). Sloj metilen hlorida je osušen iznad natrijum-sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:100 etilacetatom/petrolej etrom da se dobije 167a kao žuto ulje (2,2 g, 28%). MS: [M+H]<+>157.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9,80 (s, 1H), 3,42-3,41 (m, 1H), 3,08-3,07 (m, 1H), 1,95-1,77 (m, 2H), 1,68-1,66 (m, 1H), 1,41-1,17 (m, 3H).
Primer 167b (E)-Etil 3-(3-hlorobiciklo [2.2.1] hept-2-en-2-il) akrilat 167b
U rastvor 167a (9,0 g, 57,7 mmol) u metilen hlorida (250 ml) je dodat etil 2-(trifenil-λ<5>-fosfaniliden) acetat (20 g, 57,7 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim je uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 1: 100 etil-acetat/ompetroleum etrom, dajući 167b kao žuto ulje (6,0 g, 46%). MS: [M+H]<+>227.
Primer 167c Etil 3-azatriciklo [5.2.1.0<2,6>] deka-2 (6), 4-dien-4-karboksilat 167c
U rastvor 167b (5,0 g, 22 mmol) u DMSO (30 mL) dodat je NaN3(2,2 g, 33 mmol). Smeša je zagrevana na 105°C tokom 6 sati. Voda (13 mL) je dodata u reakcijsku smesu nakon hlađenja do sobne temperature i rezultirajuća smesa je ekstrahirana s metilen hloridom (3 X 50 mL). Kombinovana organska faza je osušena iznad Na2SO4i uparena pod sniženim pritiskom do suva. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 20: 1 metilen hlorid/metanol, dajući 167c kao smeđu čvrstu supstancu (2,7 g, 60%). MS:
[M+H]<+>206.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 11,51 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 4,16 (q, J = 6,5 Hz, 2H), 3,26-3,24 (m, 2H), 1,82-1,79 (m, 2H), 1,74-1,72 (m, 2H), 1,24 (t, J = 6,5 Hz, 3H), 0,91-0,89 (m, 2H).
Primer 167d etil 3-(Cyanomethyl)-3-azatricikl.o [5.2.1.0<2,6>] deca-2 (6), 4-dien-4-karboksilat 167d
U rastvor 167c (3,0 g, 14,6 mmol) u anhidrovanom DMF (30 mL) dodat je NaH (880 mg, 22 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Doda se 2-bromacetonitril (3,5 g, 29,3 mmol) i dobijena smeša se zagreva na 65° C tokom 1 sata. Zatim je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Dodata je voda (50 ml), i smeša je ekstrahovana etil-acetatom (200 mL x 3). Spojena organska faza je uparena pod sniženim pritiskom do suhoće. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 20:1 metilen hlorid/metanol, dajući 167d kao smeđu čvrstu supstancu (2,6 g, 72%). MS: [M+H]<+>245.
Primer 167e etil 3-(2-aminoetil)-3-azatricikl.o [5.2.1.0<2,6]>deca-2 (6), 4-dien-4-karboksilat 167e
Suspenzija 167d (4,0 g, 16 mmol) i Raney Ni (400 mg) u metanolu (60 mL) je hidrogenirana u Parrovom aparatu na 50 psi preko noći. Smeša je filtrirana kroz podlogu CELITE<®>, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 20:1 metilen hlorid/metanol, dajući 167e kao žutu čvrstu supstancu (2,0 g, 50%). MS: [M+H]<+>249.
Primer 167f 3,6-Diazatetraciklo [9.2.1.0<2,10>.0<3,8>] tetradeka-2 (10), 8-dien-7-on 167f
22
U rastvor 167e (1.8 g, 7.2 mmol) u etanolu (40 mL) dodat je natrijum-metoksid (2,5 g, 36 mmol). Smeša je zagrevana na 65°C tokom 12 sati. Zatim se ohladi na sobnu temperaturu. Rastvarač je uparen do suva pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 metilen hlorid/metanolom da se dobije racemat kao braon čvrsta supstanca (800 mg, 53%), čija hiralna rezolucija daje 167f i 170a. MS: [M+H]<+>203.
Primer 167 g 4-hlor-2-[(1S, 11R)-7-okso-3,6-diazatetracikl.o [9.2.1.0<2,10>0,0<3,8]>tetradeca-2 (10), 8-dien-6-il] piridin-3-karbaldehid 167g
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (30 mL), 167f (400 mg, 2.0 mmol), 2-bromo-4-hloronikotinaldehidom (1.30 g, 6.0 mmol) i kalijumacetata (390 mg, 4.0 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (110 mg, 0.20 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (180 mg, 0.20 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na 80° C tokom 10 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je raspodeljen između etil-acetata (50 mL) i vode (30 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (3 x 30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (20 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 2: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 167 g (391 mg, 57%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>342,2
Primer 167h 4-[1-metil-5-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il] amino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-2-[(1 S, 11 R)-7-okso-3,6-diazatetracikl.o [9.2.1.0<2,10>0,0<3,8]>tetradeca-2 (10), 8-dien-6-il] piridin-3-karbaldehid 167h
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena refluksnim
22
kondenzatorom napunjena je 167 g (150 mg, 0,44 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (169 mg, 0.44) mmol), natrijev acetat (72 mg, 0,88 mmol), K3PO4(234 mg, 0,88 mmol), PdCl2(dppf) (36 mg, 0.044 mmol), acetonitrilu (20 ml), i vode (1 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C pod N2za 3 sata. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25: 1 dihlorometan/metanol, dajući 167h (132 mg, 53%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>565,3
Primer 1672-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidro-6,9-metanopirazino [1,2-a] indol-1 (2H))-one 167
U rastvor 167h (120 mg, 0,21 mmol) u metanolu (20 mL) je dodat NaBH4(24 mg, 0,63 mmol). Smeša je mešana na 20°C tokom 2 h. Reakcija je ugašena vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 167 (98 mg, 83%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI:
[M+H]<+>567,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,98 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,48-4,30 (m, 3H), 4,27-4,22 (m, 2H), 3,92-3,91 (m, 2H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,52-3,33 (m, 3H), 3,29 (ps, 1H), 2,79-2,77 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,87-1,76 (m, 3H), 1,60-1,59 (m, 1H), 1,09-0,91 (m, 2H).
Primer 168a 3-(6,7-Dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 168a
Posuda sa okruglim dnom od 250 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je smesom 5-bromo-3-(6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 129c (1,3 g, 4,0 mmol), bis (pinakolato) diboron (2,03 g, 8,0 mmol), PdCl2(dppf) (439 mg, 0,60 mmol)), kalijum acetat (784 mg, 8,0 mmol) i 1,4-dioksan (60 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagreva se na refluksu tokom 15 h. Smeša je nakon završetka reakcije ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Smeša je ekstrahovana etil-acetatom (100 mL). Kombinovani filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa 30:1 dihlorometan/metanol dajući 168a (446 mg, 30%). MS: [M+H]<+>373.
Primer 168b 4-(1-Metil-5-(6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2
22
(6), 7-dien-10-il) nikotinaldehid 168b
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2 6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (200 mg, 0.58 mmol), 168a (433 mg, 1.16 mmol), PdCl2(dppf) (48 mg, 0,052 mmol), K3PO4(246 mg, 1.16 mmol), natrijev acetat (96 mg, 1.16 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 168b (250 mg, 78%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>554,6.
Primer 168 2-[5-(6,7-Dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1, 6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2] −a] pirazin-1-on 168
Suspenziji 168b (200 mg, 0,36 mmol) na 0° C u metanolu (10 mL) dodat je natrijumborohidrid (42 mg, 1,1 mmol). Reakciona smeša je mešana 30minuta, a zatim je prekinuta vodom (2 mL). Zatim se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 168 (53 mg, 21%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>556,6.<1>H NMR (400 MHz, CdCl3) δ 8,46 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,45 (e, 1H), 7,33 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,04-5,01 (m, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,64-4,62 m, 1H), 4,49 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 4,32-4,28 (m, 1H), 4,14 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 4,09-4,08 (m, 4H), 3,87-3,83 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,56 (d, J = 2,8 Hz, 2H), 2,50 (s, 2H), 1,26 (s, 6H).
Primer 169a 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-5-azatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7)-dien-5-il} piridin-3-karbaldehid 169a
22
Boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 2-bromo-4-hlornikotinaldehidom 103a (1276 mg, 5.80 mmol), 8-tia-5-azatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideca-1 (9), 2 (7)-dien-6-on 105e (600 mg, 2.90 mmol), CuI (551 mg, 2.90 mmol), K2CO3(800 mg, 5,80 mmol), 4, 7-dimetoksi-1,10-fenantrolin (696 mg, 2,90 mmol) i dioksan (20 ml). Nakon propuštanja azota kroz dobijeni rastvor tokom 10 minuta, smeša je mešana na 95° C tokom 16 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Ostatku je dodata voda (20 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (3 × 20 mL). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (50 ml), i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10:1 petrol etra/etil-acetata, dajući 169a (171 mg, 17%). LCMS-ESI: [M+H]<+>347 Primer 169b 4-[1-metil-5-({5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-5-azatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7)-dien-5-il} piridin-3-karbaldehid 169b
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 169a (150 mg, 0.43 mmol), 3-(5-(2-etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101l (200) mg, 0,43 mmol), Pd2(dba)3(37 mg, 0,040 mmol), tricikloheksilfospin (120 mg, 0,43 mmol), Cs2CO3(281 mg, 0,86 mmol), dioksan (10 ml) i voda (0.1 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 110° C 4 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol etilacetatom 1: 3 dajući 169b kao žutu čvrstu supstancu (45 mg, 16%). LCMS-ESI: [M+H]<+>652
Primer 169 2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-(4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-3,4,5,6,7,8-heksahidro-2H-benzo [4,5] tieno [2,3-c] piridin-1-on 169
Smeša 169b (45 mg, 0,070 mmol), NaBH4(8 mg, 0,21) i metanol (5 mL) je mešana
22
na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je ugašena vodom (5 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 169 (14 mg, 30%). LCMS-ESI: [M+H]<+>654.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,62 (s, 1H), 8,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,86 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,39-7,34 (m, 2H), 7,25-7,22 (m, 1H), 4,95-4,93 (m, 1H), 4,57-4,55 (m, 2H), 4,47-4,41 (m, 4H), 4,19-4,17 (m, 1H), 3,82-3,80 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,45-3,43 (m, 1H), 3,32-3,30 (m, 1H), 3,09-3,07 (m, 4H), 3,01-2,90 (m, 1H), 2,89-2,88 (m, 1H), 2,80-2,79 (m, 2H), 2,51-2,50 (m, 1H), 2,40-2,38 (m, 4H), 1,83-1,80 (m, 4H).
Primer 170B 4-hlor-2-[(1 R, 11 S)-7-okso-3,6-diazatetracikl.o [9.2.1.0<2,10>0,0<3,8>] tetradeca-2 (10), 8-dien-6-il] piridin-3-karbaldehid 170b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (30 mL), (1 S, 11 R)-3,6-diazatetraciklo [9.2.1.0]<2,10>0,0<3,8]>tetradeca-2 (10), 8-dien-7-on 170a (400 mg, 2.0 mmol), 2-bromo-4-chloronicotinaldehyde 103a (1,30 g, 6,0 mmol), i kalijum-acetat (390 mg, 4,0 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (110 mg, 0.20 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (180 mg, 0.20 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na 80° C tokom 10 minuta. h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je raspodeljen između etilacetata (50 mL) i vode (30 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (3 x 30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (20 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 2: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 170b (405 mg, 59%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>342,2
Primer 170c 4-[1-metil-5-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il] amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-[(1 R, 11 S)-7-okso-3,6-diazatetracikl.o [9.2.1.0<2,10>0,0<3,8]>tetradeca-2 (10), 8-dien-6-il] piridin-3-karbaldehid 170c
2
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 170b (150 mg, 0.44 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (169 mg, 0.44) mmol), natrijev acetat (72 mg, 0,88 mmol), K3PO4(234 mg, 0,88 mmol), Pd(dppf)Cl2(36 mg, 0.044 mmol), acetonitrilu (20 ml), i vode (1 mL). Nakon propuštanja azota kroz reakcionu smešu tokom 30 minuta, zagreva se na 100° C tokom 3 sata. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25:1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 170c (146 mg, 52%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>565,3
Primer 170 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidro-6,9-metanopirazino [1,2-a] indol-1 (2H))-on 170
U rastvor 170c (122 mg, 0,22 mmol) u metanolu (20 mL)dodat je NaBH4(24 mg, 0,64 mmol). Smeša je mešana na 20°C tokom 2 h. Reakcija je isparena pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobilo jedinjenje iz naslova (98 mg, 75%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>567,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,53 (s, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,98 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,48-4.30 (m, 3H), 4,27-4,22 (m, 2H), 3,92-3,91 (m, 2H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,49-3,47 (m, 3H), 3,30-3,28 (m, 1H), 2,79-2,77 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,87-1,76 (m, 3H), 1,61-1,59 (m, 1H), 1,09-0,88 (m, 2H).
Primer 171a 4-[1-metil-5-({5-[(2 S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-OXO-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-[(1 S, 11 R)-7-okso-3,6-diazatetracikl.o [9.2.1.0<2,10>0,0<3,8]>tetradeca-2 (10), 8-dien-6-il] piridin-3-karbaldehid 171a
2 1
Laboratorijska boca od 50-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom je napunjena sa acetonitrilom (30 ml), 4-hlor-2-[(1 S, 11 R)-7-okso-3, 6-diazatetracikl.o [9.2.1.0<2,10>0,0<3,8]>tetradeca-2 (10), 8-dien-6-il] piridin-3-karbaldehid 167 g (170 mg, 0,50 mmol) (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3, 2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1 H)-on 130f (336 mg, 0,70 mmol), voda (3 mL), i kalijum-acetat (147 mg, 1,5 mmol). Nakon upuhivanja argona kroz suspenziju tokom 30 minuta, dodat je 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladijum (II) (408 mg, 0,05 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagren na 80° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta materija je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 100 ml). Kombinovani filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 30: 1) da se dobije 171a (95 mg, 29%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>661,3 Primer 171 (S)-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidro-6,9-metanopirazino [1,2-a indol-1 (2H)-on 171
U rastvor 171a (90 mg, 0,136 mmol) u metanolu (10 mL) dodat je NaBH4(26 mg, 0,7 mmol) na sobnu temperaturu. Nakon što se reakcija 1 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Ugašena je vodom (30 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 30 ml). Kombinovani organski sloji je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznadNa2SO4, filtriran i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak čvrste supstance se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 171 (35 mg, 31,5%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>663,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,62 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,83 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,38 (dd, J = 2,5, 9,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,51 (s, 1H), 4,97 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,58-4,54 (m, 2H), 4,50-4,37 (m, 4H), 4,30-4,24 (m, 2H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,69-3,67 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,47 (s, 1H), 3,42-3,37 (m, 1H),
2 2
3,30 (s, 2H), 3,10-3,07 (m, 1H), 2,95-2,92 (m, 1H), 2,36-2,29 (m, 3H), 2,21-2,16 (m, 1H), 1,88-1,754 (m, 3H), 1,60-1,58 (m, 1H), 1,08-1,05 (m, 1H), 0,98-0,96 (m, 1H), 0,93 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Primer 172a 3-(1,2,4-Triazin-3-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on 172a
Laboratorijska boca od 500 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (100 ml), 1,2,4-triazin-3-aminom (1,5 g, 15,6 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (4,2 g, 15,6 mmol), Pd2(dba)3(458 mg, 1,56 mmol), ksantfos (1,8 g, 3,12 mmol), i cezijum-karbonatom (10 g, 31,2 mmol). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša je mešana na 90° C tokom 2,5 h. Nakon ovog vremena reakcija je filtrirana i filtrat je uparen u vakuumu. Dobijeni ostatak je rekristalizovan iz etil-acetata dajući 172a kao žutu čvrstu supstancu (1,76 g, 40%). MS-ESI: [M+H]<+>282.
Primer 172b (4-(5-(1,2,4-triazin-3-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3, 4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 172b Laboratoriska boca, od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 172a (200 mg, 071 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6)., 7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (272 mg, 0,71 mmol), Pd(dppf)Cl2(58 mg, 0,071 mmol), natrijev acetat (193 mg, 1,42 mmol), K3PO4(321 mg, 1,42 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrila (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je mešana na 100° C 3 h. Nakon ovog vremena reakcija je filtrirana i filtrat je uparen u vakuumu. Dobijeni ostatak je rekristalizovan iz etil-acetata da bi se dobio 172b kao žuta čvrsta supstanca (380 mg, 99%). MS-ESI: [M+H]<+>541,2
Primer 172 2-(4-(5-(1, 2,4-triazin-3-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 172 Smeša 172b (350 mg, 0.65 mmol) i litijum hidroksida (273 mg, 6.5 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 5 mL) i voda (0.5 mL) je mešana na 36° C tokom 0.5 h. Zatim je
2
ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran pomoću HPLC reverzne faze da bi se dobio 172 (90 mg, 28%). MS-ESI: [M+H]<+>499,2.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,77 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,72 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,34 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,10 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,65-4,51 (m, 2H), 4,31-4,27 (m, 1H), 4,16-4,08 (m, 2H), 3,90-3,87 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,62-2,56 (m, 4H), 1,92-1,87 (m, 2H), 1,79-1,78 (m, 2H).
Primer 173a 5-Bromo-3-(2,6-dimetilpirimidin-4-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 173a
U laboratorijsku bocu sa okruglim dnom od 250 ml, opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, dodat je 1,4-dioksan (150 ml), 2,6-dimetilpirimidin-4-amin (2,5 g, 20,3 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (5,4 g, 20,3 mmol), Pd2(dba)3(1,86 mg, 2,03 mmol), Ksantfos (2,3 g, 4,06 mmol) i cezijum karbonat (13.2 g, 40.6 mmol). Nakon ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa, smesa je zagrevana na 90° C tijekom 2,5 h. Nakon ovog vremena reakcija je filtrirana i filtrat je uparen u vakuumu. Dobijeni ostatak je rekristalizovan iz etil-acetata da bi se dobio 173a kao žuta čvrsta supstanca (4.4 g, 40%). MS-ESI: [M+H]<+>309,0.
Primer 173b 3-(2,6-Dimetilpirimidin-4-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H))-on 173b
Laboratoriska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 173a (1,5 g, 4,9 mmol), Pin2B2(6.2 g, 24,5 mmol), Pd2(dba)3(449 mg, 0,49 mmol), X-fos (467 mg, 0,98 mmol), kalijum acetat (1,4 g, 14,7 mmol) i dioksan (60 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 65° C tokom 16 h. Reakcija je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Dobiveni ostatak je rekristalizovan iz etil-acetata da bi se dobio 173b kao svetlo siva čvrsta supstanca (1,2 g, 72%). MS-ESI: [M+H]<+>357,2.
Primer 173c 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{5-[(2,6-dimetilpirimidin-4-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il}
2 4
piridin-3-karbaldehid 173c
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 173b (250 mg, 0,70 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (240 mg, 0.70 mmol), Pd(dppf)Cl2(57 mg, 0.071 mmol), natrijev acetat (19 mg, 1,4 mmol), K3PO4(316 mg, 1,4 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (15 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Nakon ovog vremena reakcija je filtrirana i filtrat je uparen u vakuumu. Dobijeni ostatak je rekristalizovan iz etil-acetata da bi se dobio 173c kao smeđa čvrsta supstanca (300 mg, 80%). MS-ESI: [M+H]<+>538,3.
Primer 173 2-[5-(2,6-dimetil-pirimidin-4-ilamino)-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 173
Na 0° C, u rastvor 173c (290 mg, 0.54 mmol) u metanolu (5 mL) je dodat natrijumborohidrid (62 mg, 1,62 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta, a zatim je reakcija ugašena vodom (1 ml). Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 173 kao belu čvrstu supstancu (50 mg, 17%). MS-ESI: [M+H]<+>540,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,90 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,00 (e, 1H), 7,35 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,45 (s, 1H), 5,16-5,13 (m, 1H), 4,67-4,52 (m, 2H), 4,33-4,29 (m, 1H), 4,16 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,90-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, preklapanje, 5H), 2,51 (s, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,02 (s, 6H).
Primer 174a 4-[1-metil-5-({5-[(2 S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-OXO-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-[(1 R, 11 S)-7-okso-3,6-diazatetraciklo [9.2.1.0<2,10>0,0<3,8]>tetradeca-2 (10), 8-dien-6-il] piridin-3-karbaldehid 174a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom je napunjena sa 4-hlor-2-[(1 R, 11 S)-7-okso-3,6-diazatetracikl.o [9.2.1.0<2,10>0,0<3,8>] tetradeca-2 (10), 8-dien-6-il] piridin-3-karbaldehid
2
170b (200 mg, 0.59 mmol), 1-metil-3-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2 Jedan 191J (400 mg, 0,88 mmol), PdCl2(dppf) (50 mg, 0.06 mmol), K3PO43water (300 mg, 1.20 mmol), natrijev acetat (100 mg, 1.20 mmol), acetonitrilu (15 mL), i vode (1.5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan da se dobije 174a kao crvena čvrsta supstanca (170 mg, 44%). MS-ESI: [M+H]<+>661,3
Primer 174 (1 R, 11 S)-6-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-({5-[(2 S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-2-il]-3,6-diazatetraciklo [9.2.1.0<2,10>.<3,8>] tetradeka-2 (10), 8-dien-7-on 174
Smeša 174a (150 mg, 0,23 mmol), NaBH4(34 mg, 0.90), i metanol (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Smeša je ugašena vodom (30 ml) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 174 (42 mg, 28%). MS-ESI: [M+H]<+>663,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,65 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,85-7,84 (m, 2H), 7,36 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 3,5, 11,0 Hz, 1H), 6,82-6,80 (m, 2H), 5,16-5,06 (m, 1H), 4,72-4,61 (m, 5H), 4,08-4,05 (m, 1H), 4,32-4,21 (m, 3H), 3,88-3,85 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,54-3,50 (m, 2H), 3,38-3,37 (m, 2H), 3,08-3,06 (m, 2H), 2,57-2,54 (m, 1H), 2,48-2,45 (m, 2H), 2,21-2,17 (m, 1H), 1,93-1,91 (m, 3H), 1,66-1,64 (m, 1H), 1,14-1,08 (m, 2H), 0,98 (d, J = 8,0 Hz, 3H).
Primer 175a 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 175a
U posudu sa okruglim dnom od 250 ml opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjen je 4-hlor-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7]>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (150 mg, 0.43 mmol), 3-(5-(2-
2
etil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 161f (215 mg, 0.43 mmol), PdCl2(dppf) (33 mg, 0.040 mmol), K3PO4hidrat (202 mg, 0.86 mmol), natrijev acetat (71 mg, 0.86 mmol), acetonitrilu (10 mL), i vode (2 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol etilacetatom 1: 3 dajući 175a kao žutu čvrstu supstancu (108 mg, 37%). MS-ESI: [M+H]<+>679
Primer 175 3-{5-[5-((S)-2-Etil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo [4,5] tieno [2,3-d] piridazin-4-on 175
Smeša 175a (200 mg, 0,16 mmol), NaBH4(18 mg, 0.48), i metanol (8 ml) je mešana na 25° C za 1 h. Zatim je reakcijska smesa ugašena vodom (10 mL) i isparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 175 (55 mg, 50%). MS-ESI: [M+H]<+>681.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 8.61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,57-8,56 (m, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.83 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.54-7.53 (m, 1H), 7.47 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.35-7.32 (m, 1H), 7.24-7.22 (m, 1H) 4,83 (m, 1H), 4,59-4,55 (m, 2H); 3,30-3,38 (m, 1H), 3,17-3,14 (m, 1H), 3.00-2.95 (m, 3H), 2.87-2.85 (m, 2H), 2.66-2.60 (m, 1H), 2.55-2.53 (m, 1H), 2.18-2.15 (m, 1H), 2.102.06 (m, 1H), 1.89-1.86 (m, 4H), 1.68-1.64 (m, 1H), 1.28-1.25 (m, 2H), 0.79 (t, J = 9.5 Hz, 3H).
Primer 176a (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 176a
U laboratorijsku bocu s okruglim dnom napunjen je 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 121a (180 mg, 0,55 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4) 5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 191j (397 mg, 0.82 mmol), PdCl2(dppf) (45 mg,
2
0.06 mmol), K3PO4trihidrat (286 mg, 1.10 mmol), natrijum-acetat (90 mg, 1.10 mmol), acetonitril (15 mL) i voda (1,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlormetan da se dobije 176a kao crvena čvrsta supstanca (228 mg, 64%). MS-ESI:
[M+H]<+>647,3
Primer 176 (S)-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 176
Smeša 176a (200 mg, 0.31 mmol), NaBH4(47 mg, 1.20), i metanol (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Reakciona smeša je zatim ugašena vodom (10 ml) i koncentrovana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 176 (42 mg, 28%). MS-ESI:
[M+H]<+>649,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.84 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,50-7,48 (m, 2H), 7,39-7,36 (m, 1H), 7,26-7,24 (m, 2H), 6,83-6,80 (m, 2H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4.48-4.40 (m, 3H), 4.35-4.33 (m, 1H), 3.69-3.67 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.41-3.38 (m, 2H), 3.11-3.08 (m, 1H), 2.97-2.93 (m, 1H), 2.76-2.74 (m, 2H), 2.62-2.60 (m, 2H), 2.52-2.51 (m, 1H), 2.35-2.32 (m, 2H), 2.19-2.17 (m, 1H), 1.90-1.87 (m, 2H), 1.77-1.75 (m, 2H), 0.94 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 177a (4-(5-(5-Etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 177a
Laboratorijska boca sa jednim vratom i okruglim dnom od 50 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-brom-3-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a]) pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 208c (300 mg, 0.85 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)
2
piridin-4-ilboronska kiselina 113i (1.21 g, 3.16 mmol), PdCl2(dppf) (35 mg, 0.043 mmol), K3PO4(361 mg, 1,70 mmol), natrijum-acetat (140 mg, 1,70 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0,5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 177a (365 mg, 60%) kao smeđe ulje. MS-ESI: [M+H]<+>611
Primer 177 2-(4-(5-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 177
U rastvor 177a (300 mg, 0.49 mmol) u propan-2-olu (4 mL), tetrahidrofuranu (4 mL) i vodi (1 mL) dodat je litijum hidroksid (35 mg, 1.47 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0,5 sat. Upari se i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 177 (79 mg, 28%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>569.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.46 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.39 (e, 1H), 7,33 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 5,69 (s, 1H), 4,99-4,97 (m, 1H), 4,61-4,60 (m, 1H), 4,48-4,46 (m, 1H), 4,33-4,31 (m, 1H), 4,14-4,06 (m, 4H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,62 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2.91 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 2.63-2.55 (m, 6H), 1.91-1.87 (m, 2H), 1.79-1.78 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
Primer 178a 5-Bromo-1-metil-3-(piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 178a
U posudu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjen je 1,4-dioksan (60 mL), 5-bromo-2-nitropiridin (8.0 g, 31.8 mmol), piridin 2-amin (1.0 g, 10.6 mmol) i cezijum karbonat (7.0 g, 21.2 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu 30 minuta, dodati su Ksantfos (616 mg, 1.0 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (973 mg, 1.0 mmol). Reakciona smeša je podvrgnuta ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevana na 100° C tokom 12 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je podeljen između etil-acetata (100 mL) i vode (100 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 150 ml). Odvojeni organski sloj je ispran
2
slanim rastvorom (50 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silikagela eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 178a (1.5 g, 51%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>280
Primer 178b 1-Metil-3-(piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 178b
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetskom mikserom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 178a (1,06 g, 3,8 mmol), Pin2B2(4,8 g, 19,0 mmol), Pd2(dba)3(348 mg, 0.38 mmol), X-Phos (350 mg, 0.76 mmol), kalijum-acetatom (1.12 g, 11.40 mmol) i dioksanom (30 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana 6 sati na 60° C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 3: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 178b kao žutu čvrstu supstancu (1.2 g, 96%). MS-ESI: [M+H]<+>328,2
Primer 178c 4-{1-metil-6-okso-5-[(piridin-2-il) amino] piridin-3-il}-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 178c Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena 178b (131 mg, 0,40 mmol), 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5.-diazatricikl.o [7.4.0.0<2,7>] trideca-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (138 mg, 0.40 mmol), Pd(dppf)Cl2(33 mg, 0.040 mmol), K3PO4(170 mg, 0.80 mmol), natrijev acetat (66 mg, 0.80 mmol), voda (6 kapi) i acetonitrilu (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30:1 dihlorometan/metanolom da se dobije 178c kao žuta čvrsta supstanca (180 mg, 88%). MS-ESI: [M+H]<+>511,2
Primer 178 3-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(piridin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-6, 7,8,9-tetrahidro-3H-benzo [4,5] tieno [2,3-d] piridazin-4-on 178 U rastvor 178c (179 mg, 0.35 mmol) u metanolu (6 mL) dodat je natrijum-borohidrid (39 mg, 1.05 mmol) na 0° C. Reakciona smeša je mešana 30 minuta i ugašena vodom (1.0 mL). Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 178 (100 mg, 56%). MS-ESI: [M+H]<+>513,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,81 (s, 1H), 8,68 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,27 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,94 (bs, 1H), 7,76 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,58-7,56 (m, 2H), 6,85-6,80 (m, 2H), 4,47-4,45 (m,
24
2H), 4,38-4,36 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,01-2,99 (m, 2H), 2,89-2,87 (m, 2H), 2,02-1,99 (m, 4H).
Primer 179a 4-(1-metil-5-(2-metilpirimidin-4-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4,4-dimetil-9-okso-1), 10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il) nikotinaldehid 179a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 1-metil-3-(2-metilpirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 213b (510 mg, 1.5 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (343 mg, 1,0 mmol), K3PO4(424 mg, 2,0 mmol), natrijev acetat (272 mg, 2.0 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (40 mg, 0.044 mmol), acetonitril (20 mL) i voda (0.5 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 2 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (30 ml) i vodom (30 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 179a (300 mg, 57%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>524
Primer 179 2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-5-(2-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 179
U rastvor 179a (262 mg, 0,50 mmol) u metanolu/dihlormetanu (10/10 mL) dodat je NaBH4(57 mg, 1,5 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 1 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa vodom (5 mL) i dihlorometanom (20 mL). Vodena faza je odvojena i ekstrahovana dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ćvrsti ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 179 (180 mg, 69%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>526.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,07 (s, 1H), 8,03 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,36 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,60 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,18-5,16 (m, 1H), 4,70-4,67 (m, 1H), 4,55-4,53 (m, 1H), 4,33-4,31 (m, 1H), 4,18-4,16 (m, 2H), 3,91-3,90 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,60 (s, 3H), 2,58 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,52 (s, 2H), 1,28 (s, 6H).
Primer 180a 5-Bromo-1-metil-3-(6-metilpirimidin-4-ilamino) piridin-2 (1H)-on 180a
U posudu od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 6-metilpirimidin-4-amin (800 mg, 2,6 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (694 mg, 2.6 mmol), tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (238 mg, 0.26 mmol), Ksantfos (300 mg, 0.52 mmol), Cs2CO3(1.7 g, 5.2 mmol), i 1,4-dioksan (30 ml). Nakon ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa, smesa je zagrevana na 90° C tijekom 2,5 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 180a kao žuta čvrsta supstanca (800 mg, 36%). MS-ESI: [M+H]<+>295,1
Primer 180b 1-Metil-3-(6-metilpirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-jedan 180b
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 180a (1,0 g, 3,4 mmol), Pin2B2(4,3 g, 17 mmol), Pd2(dba)3(312 mg, 0.34 mmol), X-fos (324 mg, 0.68 mmol), kalijum acetat (666 mg, 6.8 mmol) i dioksan (40 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 65° C tokom 14 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se ispere sa 3: 1 petrol eter/etil-acetatom (80 ml), dajući 180b kao žutu čvrstu supstancu (600 mg, 50%). MS-ESI: [M+H]<+>343,2.
Primer 180c 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7dien-10-il}-4-{1-metil 5-[(6-metilpirimidin-4-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-karbaldehid 180c
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 180b (239 mg, 0,70 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (239 mg 0.70 mmol), Pd(dppf)Cl2(57 mg, 0.070 mmol), natrijev acetat (115 mg, 1,4 mmol), K3PO4(320 mg, 1,4 mmol), voda (5 ml), i acetonitrilu (15 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Nakon tog vremena reakcija je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 180c kao žuta čvrsta supstanca (170 mg, 47%). MS-ESI: [M+H]<+>524,2.
Primer 180 2-[3'-hidroksimetil-1-metil-5-(6-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 180
Pri 0° C, do rastvora 180c sa vodom (1 mL). Zatim se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 180 (47 mg, 32%). MS-ESI: [M+H]<+>526,2.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.82 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8,02-8,00 (m, 2H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,13 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,67-4,52 (m, 2H), 4,29-4,15 (m, 3H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 2,57 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,51 (s, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,28 (s, 6H).
Primer 181a 4-[1-metil-5-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il } piridin-3-karbaldehid 181a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>]
24
trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (210 mg, 0.60 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (346 mg, 0.90 mmol), Pd(dppf)Cl2(30 mg, 0.030 mmol), K3PO4(270 mg, 1,2 mmol), natrijev acetat hidrat (180 mg, 1,2 mmol), voda (6 kapi), i acetonitril (40 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25: 1 dihlorometan/metanol, dajući 181a (300 mg, 88%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>569,3.
Primer 181 3-[3'-Hidroksimetil-1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazol [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso 1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-6,7,8,9-tetrahidro-3H-benzo [4,5] tieno [2,3-d] piridazin-4-on 181
Smeša 181a (300 mg, 0,50 mmol, 1,0 ekv.) i NaBH4(60 mg, 1,5 mmol, 2,0 ekv.) u metanolu (20 mL) mešana je na 30°C tokom 1 h. Smesa je ugašena vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 181 (100 mg, 35%). MS-ESI: [M+H]<+>571,2.<1>H NMR (500 MHz, CHCl3) δ 8,64 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,00 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 5,70 (s, 1H), 4,45-4,43 (m, 2H), 4,32 (bs, 1H), 4,11-4,09 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,63 (s, 2H), 2,99-2,97 (m, 2H), 2,93-2,91 (m, 2H), 2,88-2,86 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,00-1,98 (m, 4H).
Primer 182a 4-{1-metil-6-okso-5-[(pirimidin-4-il) amino]-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{6-okso-8-tia-4, 5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 182a
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 4-hlor-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7]>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (345 mg, 1.0 mmol), 1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 143a (328 mg, 1.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(82 mg, 0.10 mmol), natrijev acetat (162 mg, 2,0 mmol), K3PO4(424 mg, 2.0 mmol), i acetonitrilu/voda (20/1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 182a kao žuta čvrsta supstanca (156 mg, 30%). MS-ESI: [M+H]<+>512,1.
Primer 182 3-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-6, 7,8,9-tetrahidro-3H-benzo [4,5] tieno [2,3-d] piridazin-4-on 182 Na sobnoj temperaturi, do rastvora 182a (140 mg, 0.27 mmol) u metanolu (5 mL) dodat je natrijum borohidrid (31 mg, 0.82 mmol). Reakciona smeša je mešana 20 h na 100°C, a zatim je reakcija prekinuta vodom (1ml). Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 60: 1 dihlorometan/metanol, dajući 182 kao belu čvrstu supstancu (60 mg, 43%). MS-ESI: [M+H]<+>514,2.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.89 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.70 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,89 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 9,5 Hz), 1H), 4,44-4,42 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 2,99-2,98 (m, 2H), 2,88-2,87 (m, 2H), 2,03-1,98 (m, 4H).
Primer 183a 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-6-okso-5-(piridin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 183a
Boca od 100 mL opremljena refluksnim kondenzorom napunjena je 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazinom [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c (297 mg, 0,57 mmol), 1-metil-3-(piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 178b (186 mg, 0,57 mmol), natrijev acetat (90 mg, 1,1 mmol), K3PO4(234 mg, 1,1 mmol), PdCl2(dppf) (50 mg, 0.057 mmol), acetonitril (25 mL) i voda (1 mL). Nakon propuštanja azota kroz mešavinu tokom 30 minuta, zagreva se na 100° C u atmosferi azota 3 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni
24
uz eluiranje sa 20: 1 metilen hlorid/metanol, dajući 183a (178 mg, 61%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>513,3.
Primer 183 10-fluor-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-6-okso-5-(piridin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 183 Smeša 183a (160 mg, 0,31 mmol, 1,0 ekv.) i KCN (59 mg, 1,55 mmol, 2,0 ekv.) u DMSO-u (20 mL) mešana je na 20°C tokom 2 h. Reakcija je zatim ugašena vodom i uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativno HPLC tehnikom radi dobijanja183 (42 mg, 26%) u obliku beličaste čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>515,3.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,74 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,18-8,17 (m, 1H), 7,61-7,58 (m, 1H), 7,53 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,81-6,79 (m, 1H), 4,95 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,49-4,40 (m, 2H), 4,22-4,14 (m, 2H), 4,10-4,05 (m, 1H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,64-2,60 (m, 1H), 2,57-2,53 (m, 1H), 2,43-2,41 (m, 2H), 1,81-1,75 (m, 2H), 1,71-1,67 (m, 2H).
Primer 184a 1-Metil-3-(pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 184a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-bromo-1-metil-3-(pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-ona 162a (600 mg, 2.1 mmol), Pin2B2(2540 mg, 10 mmol), Pd2(dba)3(100 mg, 0.11 mmol), X-phos (100 mg, 0.25 mmol), kalijum acetat (600 mg, 6.1 mmol) i dioksana (30 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 65° C 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se ispere petrolej etrom da se dobije 184a kao žuta čvrsta supstanca (700 mg, 90%). MS-ESI: [M+H]<+>329,4
Primer 184b 2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-1 (8), 2 (6)-dien-10-il}-4-{1-metil-6-okso-5-[(pirazin-2-il) amino]-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-karbaldehid 184b
Posuda od 25 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim
24
kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a (100 mg, 0,30 mmol), 184a (170 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(12 mg, 0.015 mmol), K3PO4(130 mg, 0.60 mmol), natrijev acetat hidrat (85 mg, 0.60 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vode (6 kapi). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25:1 dihlorometan/metanol, dajući 184b (80 mg, 54%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>527,2.
Primer 184 6-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-2, 2-dimetil-2,3,5,6-tetrahidro-1H, 4H-8-tia-6-aza-ciklopenta [a] inden-7-on 184
Smeša 184b 80 mg, 0,15 mmol) i NaBH4(18 mg, 0,45 mmol) u metanolu (5 mL) mešana je na 30°C tokom 2 h. Smesa je ugašena vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 184 (24 mg, 35%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>529,3.<1>H NMR (500 MHz, CHCl3) δ 8.73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.02 (s, 1H), 7.96 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 50,5 Hz, 1H), 4,86-4,83 (m, 1H), 4,71-4,68 (m, 1H), 4,46-4,41 (m, 1H), 4,32 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 3,85-3,81 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,99-2,94 (m, 2H) 2.81 (s, 2H), 2.61-2.51 (m, 2H), 1.30 (s, 6H).
Primer 185a 5-Bromo-3-(imidazo [1,2-a] piridin-7-ilamino)-1-metilpirazin-2 (1 H)-on 185a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je imidazom [1,2-a] piridin-7-aminom (665 mg, 5,0 mmol), Cs2CO3(3,26 g, 10 mmol), 5-dibromo-1-metilpirazin-2 (1 H)-on (1.86 g, 7.0 mmol), Ksantfos (289 mg, 0.50 mmol), Pd2(dba)3(458 mg, 0.50 mmol) i 1, 4-dioksan (30 mL). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagreva se na 100° C u atmosferi
24
azota tokom 16 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je da je ostao mali početni materijal. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je razblažen dihlormetanom (60 ml) i vodom (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (60/1 do 30/1) da se dobije 185a (700 mg, 44%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>320
Primer 185b 6-(imidazo [1,2-a] piridin-7-ilamino)-4-metil-5-okso-4,5-dihidropirazin-2-ilboronska kiselina 185b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 185a (638 mg, 1,99 mmol), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2.-bi (1,3,2-dioksaborolan) (Pin2B2, 2,54 mg, 10 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (163 mg, 0,18 mmol), Cs2CO3(1,3 g, 3,98 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagreva se na 80° C u atmosferi azota 3 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je razblažen petroleum etrom (150 mL) i etil-acetatom (15 mL). Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi 30 h. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i dalje prečišćena hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (60/1 do 15/1) da se dobije 185b (400 mg, 70%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>286 Primer 185C 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(6-{ imidazo [1,2-a] piridin-7-ilamino}-4-metil-5-oksopirazin-2-il) piridin-3-karbaldehid 185c
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 185b (400 mg, 1,40 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (192 mg, 0.56 mmol), kalijum acetat (220 mg, 2.24 mmol), acetonitril (20 mL) i vode (0,5 mL). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 30 minuta, dodat je 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladijum (II) (49 mg, 0,054 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrejan na 80° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana dihlormetanom (2 x 20 mL). Kombinovani filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40: 1 do 10: 1) da se dobije 185c (90 mg, 29%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>549
24
Primer 185 2-(3-hidroksimetil-4-[6-(imidazo [1,2-a] piridin-7-ilamino)-4-metil-5-okso-4,5-dihidro-pirazin-2-il]-piridin-2-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 185
U rastvor 185c (80 mg, 0,146 mmol) u metanolu (5 mL) dodat je NaBH4(34 mg, 0,90 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 1 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Reakciona smeša je ugašena vodom (3 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovaa dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 185 (49 mg, 61%) u obliku svetlo žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>551.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,67 (s, 1H), 8,57 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,41 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,46 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,67-4,64 (m, 1H), 4,519-4,481 (m, 1H), 4,31-4,20 (m, 3H), 3,88 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,63-2,55 (m, 2H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,23 (s, 6H).
Primer 186a 5-Bromo-1-metil-3-(piridin-3-ilamino) pirazin-2 (1H)-on 186a
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je piridin-3-aminom (940 mg, 10 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpirazinom-2 (1H)-on (5,4 g, 20 mmol), i-propanol (50 ml) i di-ipropiletilamin (10 ml). Smeša je zagrevana na refluksu 5 h. Nakon završetka reakcije, ohlađena je na sobnu temperaturu. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 186a (1.4 g, 50%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>281,6.
Primer 186b 4-Metil-5-okso-6-(piridin-3-ilamino)-4,5-dihidropirazin-2-ilboronska kiselina 186b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 250 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 186a (800 mg, 2.86 mmol), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2.'-bi (1,3,2-dioksaborolana) (2,18 g, 8,57 mmol), Pd(dppf)Cl2(204 mg, 0,28 mmol), kalijumacetat (560 mg, 5,71 mmol) i dioksan (60 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30
24
minuta, mešana je na 100° C tokom 3 h pod azotom. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Čvrsti ostatak je ispran petroleum etrom (2 x 30 mL) da se dobije 186b (406 mg, 58%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>247,3.
Primer 186c 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(4-metil-5-okso-6-(piridin-3-ilamino)-4,5-dihidropirazin-2-il) nikotinaldehid 186c U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 186b (127 mg, 0,52 mmol), 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8, 9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nicotinaldehyde 134c (180 mg, 0,52 mmol), Na2CO3(110 mg, 1.04 mmol), PdCl2(dppf) (38 mg, 0.052 mmol), DMF (12 mL) i voda (1 mL). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagreva se na 50° C tokom 8 sati pod azotom. Reakcija je zatim ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 metilen hlorid/metanolom da se dobije 186c (132 mg, 49%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>514,3.
Primer 186 10-fluor-2-(3-(hidroksimetil)-4-(4-metil-5-okso-6-(piridin-3-ilamino)-4,5-dihidropirazin-2-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 186 U rastvor jedinjenja 186c (118 mg, 0,23 mmol) u metanolu (15 mL) dodat je NaBH4 (27 mg, 0,70 mmol). Smeša je mešana na 20°C tokom 2 h. Reakcija je ugašena vodom i isparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 186 (33 mg, 28%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>516,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,78 (s, 1H), 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,39-8,37 (m, 2H), 8,06-8,04 (m, 2H), 7,76 (s, 1H), 7,59 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,97 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,68-4,65 (m, 1H), 4,51-4,47 (m, 1H), 4,25-4,19 (m, 2H), 4,10-4,05 (m, 1H), 3,91-3,88 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,66-2,60 (m, 1H), 2,57-2,53 (m, 1H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,82-1,75 (m, 2H), 1,71-1,67 (m, 2H).
Primer 187a (4-(5-(5-(2,2-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 187a
2
Laboratorijska boca sa jednim vratom i okruglim dnom od 50 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-brom-3-(5-(2,2-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 190e (200 mg, 1.0 ekv., 0.45 mmol), (2-(1-okso-3,4,6,7, 8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 113i (345 mg, 2 ekv., 0,90 mmol), PdCl2(dppf) (36 mg, 0,1 ekv., 0,045 mmol), K3PO4(191 mg, 2 ekv., 0,90 mmol) natrijum-acetat (74 mg, 2,0 ekv., 0,90 mmol), acetonitril (15 mL) i voda (0,1 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se 2 h meša na 90° C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 50: 1 dihlorometan/etanol, dajući 187a (100 mg, 31%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>707,4.
Primer 187 2-(4-(5-(5-(2,2-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-jedan 187
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom napunjena je 187a (100 mg, 1 ekv., 0.14 mmol), litijum hidroksidom (54 mg, 10 ekv., 1.4 mmol), i-propanol 3 mL), THF (3 mL) i vode (2 mL). Smeša je mešana na 30°C tokom 1 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC, dajući 187 kao belu čvrstu supstancu (43 mg, 46%). MS-ESI: [M+H]<+>665,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,69 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,42-7,40 (m, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,98 (brs, 1H), 4,54 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,46-4,38 (m, 4H), 4,25-3,85 (m, 4H), 3,60 (s, 3H), 3,38-3,35 (m, 1H), 3,03-2,54 (m, 4H), 2,47 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,32-2,12 (m, 4H), 1,79-1,67 (m, 4H), 0,97 (s, 6H).
Primer 188a (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-6-okso-5-[(pirazin-2-il) amino]-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il)
2 1
metil-acetat 188a
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-bromo-1-metil-3-(pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-ona 162a (210 mg, 0.70 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (560 mg, 1,4 mmol), Pd(dppf)Cl2(70 mg, 0.035 mmol), K3PO4(320 mg, 1,4 mmol), natrijev acetat trihidrat (210 mg, 1,4 mmol), acetonitril (10 ml) i voda (6 kapi). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25: 1 dihlorometan/metanol, dajući 188a (150 mg, 40%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>554,2.
Primer 188 2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7, 7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H, 6H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 188
Smeša 188a (150 mg, 0.27 mmol) i litijum hidroksida (103 mg, 2.7 mmol) u ipropanol/THF (5: 3, 8 mL) i voda (2 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Reakciona smeša je podešena na pH = 3, i smeša je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 188 (40 mg, 35%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M+H]<+>512,3.<1>H NMR (500 MHz, CHCl3) δ 8,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,15-8,13 (m, preklapanje, 2H), 8,02-8,00 (m, 2H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 4,68-4,51 (m, 2H), 4,33-4,29 (m, 1H), 4,18 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,91-3,86 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,60-2,58 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 1,28 (s, 6H).
Primer 189a terc-butil 4-(pirazin-2-il) piperazin-1-karboksilat 189a Laboratorijska boca od 500 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je sa DMSO (250 mL), tercbutil piperazin-1-karboksilatom (15.8 g, 85.0 mmol), 2-hloropirazinom (9,7) g, 85,0 mmol), i Cs2CO3(55,3 g, 170 mmol). Smeša je zagrevana 3 dana na 60°C. Nakon ovog vremena
2 2
reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 5: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 189a (13.3 g, 60%) kao žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>265,3 Primer 189b terc-butil 4-(5-bromopirazin-2-il) piperazin-1-karboksilat 189b Laboratorijska boca od 500 ml sa jednim grlom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjena je acetonitrilom (150 mL), 189a (3.0 g, 8,8 mmol) i N-bromosukcinimidom (1,56 g, 8,8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10: 1 petrol eter/etilacetatom, dajući 189b kao žutu čvrstu supstancu (2.85 g, 73.4%). MS: [M+H]<+>343,3.<1>H NMR (500 MHz, (CD3)2CO) δ 8,03 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 3,48-3,46 (m, 4H), 3,42-3,40 (m, 4H), 1,33 (s, 9H).
Primer 189c terc-butil 4-(5-(difenilmetilenamino) pirazin-2-il) piperazin-1-karboksilat 189c
Laboratoriska posuda od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 189b (3,3 g, 9,6 mmol), difenilmetaniminom (1,74 g, 9,6 mmol), paladijum diacetatom (440 mg, 0,48 mmol), (R)-(+)-2,2'-bis (difenilfosfino)-1,1'-binaftil (598 mg, 0,96 mmol), Cs2CO3(6,2 g, 19,2 mmol) i 1,4-dioksan (80 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 115° C tokom 64 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje 5: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 189c kao žutu čvrstu supstancu (3.2 g, 75%). MS: [M+H]<+>444,2.
Primer 189d terc-butil 4-(5-aminopirazin-2-il) piperazin-1-karboksilat 189d
U rastvor jedinjenja 189c (2,5 g, 5,6 mmol) u metanolu (25 mL) dodat je natrijumacetat (0,56 g, 6,8 mmol) ii hidroksilamin hidrohlorid (0,7 g, 10 mmol). Reakciona smeša je mešana 0,5 h. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na koloni eluiranjem sa 15: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 189d (1,3 g, 71%). MS: [M+H]<+>280,3.
Primer 189e terc-butil 4-(5-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) pirazin-2-il) piperazin-1-karboksilat 189e
Smeša od 189d (1.1 g, 3.94 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (1.1 g, 3.94 mmol), paladijum diacetata (45 mg, 0.20 mmol), (R)-(+)-2,2'-bis (difenilfosfino)-1,1'-binaphthyl (245 mg, 0.39 mmol), a Cs2CO3(2,6 g, 7,9 mmol) u 1,4-dioksan (150 ml) se
2
zagreva na 120° C tokom 2 sata. Zatim se ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 189e (900 mg, 54%). MS: [M+H]<+>465,1.
Primer 189f 5-Bromo-1-metil-3-(5-(piperazin-1-il) pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 189f
Smeša 189e (1,0 g, 2,2 mmol, 1,0 ekv.) u HCl/MeOH (3M, 60 mL) mešana je na 80°C tokom 5 h. Zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovo j189f kao žutu čvrstu supstancu (760 mg, 98%) koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS: [M+H]<+>395,1.
Primer 189g 5-bromo-1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) pirazin-2-ilamino) piridin-
Smeša jedinjenja 189f (740 mg, 2,0 mmol), oksetanu-3-one (288 mg, 4,0 mmol), NaBH3CN (315 mg, 5,0 mmol), i cink hlorid (680 mg, 5,0 mmol) u metanolu (60 mL) mešana je 5 sata na 50°C. Zatim je ugašena vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući sirovo 189g kao žutu čvrstu supstancu (660 mg, 78%) koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS: [M+H]<+>423,1.
Primer 189h (4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) pirazin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 189h
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml, opremljenom refluksnim kondenzatorom, napunjeno je 189 g (180 mg, 0,43 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (165 mg, 0.43 mmol), Pd(dppf)Cl2(35 mg, 0.043 mmol), natrijum-acetat (71) mg, 0.86 mmol), K3PO4(194 mg, 0.86 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Nakon ovog vremena, reakcija je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti
2 4
hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 189h kao žutu čvrstu supstancu (100 mg, 34%). MS-ESI: [M+H]<+>680,3.
Primer 189 2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 189
Na sobnoj temperaturi, u rastvor 189h (90 mg, 0.13 mmol) u i-propanol/THF (1: 1, 5 mL) i vodi (0.5 mL) dodat je litijum hidroksid (126 mg, 2.9 mmol). Reakciona smeša je mešana na 35°C tokom 0,5 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 189 (60 mg, 71%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>638,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,43 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,82 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 5,04-5,01 (m, 1H), 4,72-4,50 (m, 6H), 4,32-4,30 (m, 1H), 4,15-4,09 (m, 2H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,57-3,49 (m, 5H), 2,61-2,43 (m, 8H), 1,92-1,78 (m, 4H).
Primer 190a terc-butil 3,3-dimetil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 190a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-bromo-2-nitropiridinom (5.6 g, 28.0 mmol), terc-butil 3,3-dimetil-4-piperazin-1-karboksilat (3,0 g, 14,0 mmol), cezijum karbonat (9,1 g, 28 mmol) i 1,4-dioksan (50 ml). Nakon propuštanja azota kroz dobijeni rastvor tokom 30 min, dodati su Binap (870 mg, 1.4 mmol) i tris (dibenzilidenaceton)-dipaladijum (0) (1.2 g, 1.4 mmol). Reakciona smeša je podvrgnuta ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i mešana na 120° C tokom 24 h. Nakon ovog vremena reakcija se ohladi do sobne temperature, filtrira i filtrat se raspodeli između etil-acetata (200 mL) i vode (50 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (3 × 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (50 mL), i osušeni iznad natrijumsulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje 5:1 petrol etrom/etil-acetatom, dajući 190a (1.27 g, 27%). LCMS: [M+H]<+>337,2.
Primer 190b terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-3,3-dimetilpiperazin-1-karboksilat 190b
2
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 mL je prečišćena azotom i napunjena tert-butil 3,3-dimetil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilatom 190a (1100 mg, 3.2 mmol), 10 % paladij na ugljenu (10% vlažan, 110 mg) i metanol (20 mL). Zatim se evakuiše, napuni gasom vodonika i meša 5 sati na sobnoj temperaturi. Vodonik je ispražnjen i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz filter od dijatomejske zemlje (CELITE<®>, Imerys Minerals California, Inc.) i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 190b (950 mg, 94%). LCMS: [M+H]<+>307,3 Primer 190c terc-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3,3-dimetilpiperazin-1-karboksilat 190c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-3,3-dimetilpiperazin-1-karboksilatom 190b (950). mg, 3,1 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (1240 mg, 4,6 mmol), 1,4-dioksan (30 ml) i cezijum karbonat (2015 mg, 6,2 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijeni rastvor tokom 5 minuta, dodati su ksantfos (179 mg, 0.31 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (283 mg, 0.31 mmol). Reakciona smeša je podvrgnuta ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevana na refluksu 10 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Ostatak je raspodeljen između etil-acetata i vode. Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (3 × 20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (30 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje 4: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 190c (1.21 g, 79%). LCMS: [M+H]<+>492,1.
Primer 190d 5-Bromo-3-(5-(2,2-dimetilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 190d
Otopini terc-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3,3-dimetilpiperazin-1-karboksilat 190c (1.19 g, 1.9 mmol) u dihlorometanu (20 mL) je dodat 3 M HCl u dietil etru (15 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom da se dobije 190d (900 mg, 95%). LCMS:
[M+H]<+>392,1.
Primer 190e 5-Bromo-3-(5-(2,2-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 190e
Smesa 5-brom-3-(5-(2,2-dimetilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-piridin-2 (1H)-ona 190d (900 mg, 2.3 mmol), oksetan-3-on (497 mg, 6,9 mmol), NaBH3CN (435 mg,
2
6,9 mmol) i cink hlorid (311 mg, 2,3 mmol) u metanolu (30 ml) je mešana na 50° C za 4 sata. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata voda (10 ml), i smeša je ekstrahovana hloroformom (3 x 50 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silikagelu eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobio 190e (800 mg, 78%). LCMS:
[M+H]<+>448,1.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,65 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,11 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,37-7,34 (m, 1H), 6,96 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,69-4,61 (m, 4H), 3,60 (s, 3H), 3,50-3,14 (m, 3H), 2,43-2,17 (m, 4H), 1,06 (s, 6H).
Primer 190f 2-(4-hloro-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 190f
U otopinu 4-hlor-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-nikotinaldehida 103b (1,0 g), 3.0 mmol) u metanolu (30 mL) je dodat natrijum-borohidrid (380 mg, 9.0 mmol) na 10° C. Reakciona smeša je mešana 30 minuta i ugašena vodom (10 mL). Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se rastvori u dihlorometanu (50 ml). Smeša je oprati vodom (10 ml), sušene preko bezvodnog Na2SO4,filtrira, i ispari pod smanjenim pritiskomdajući 190f kao žutu čvrstu supstancu (900 mg, 90%). MS-ESI:. [M+H]<+>332.
Primer 190g (4-hlor-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 190g
U smesu 2-(4-hlor-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-jedan 190f (900 mg, 2.7 mol) i trietilamin (900 mg, 9.0 mol) u dihlorometanu (25 mL) je dodavan u kapima acetil hlorid (600 mg, 6.0 mol) uz mešanje na sobnoj temperaturi. Reakcijska smeša je mešana 1 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom,
2
dajući 190 g kao belu čvrstu supstancu (950 mg, 94%). MS-ESI: [M+H]<+>374.
Primer 190h (4-hlor-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 190h
U posudu od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjen je (4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidro-pirazino) [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 190g (950 mg, 2.5 mmol), Pin2B2(4,4,4', 4', 5, 5,5', 5'-octamethyl-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolana) (1,6 g, 2.0 ekv., 5 mmol), Pd2(dba)3(230 mg, 0,1 eq. 0,25 mmol), X-fos (232 mg, 0,2 ekv., 0,50 mmol), kalijum acetat (735 mg, 3 ekv., 7,5 mmol) i dioksan (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 65° C 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se ispere sa 3: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 190h kao žutu čvrstu supstancu (950 mg, 87%). MS-ESI: [M+H]<+>383.
Primer 190i (4-(5-(5-(2,2-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 190i
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dn opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom napunjena je 5-brom-3-(5-(2,2-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin 1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 190e (200 mg, 1.0 ekv., 0.45 mmol), (2-(1-okso-3,4,6,7, 8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 190h (345 mg, 2 ekv., 0,90 mmol), PdCl2(dppf) (36 mg, 0,1 ekv., 0,045 mmol), K3PO4(191 mg, 2 ekv., 0,90 mmol) natrijum-acetat (74 mg, 2,0 ekv., 0,90 mmol), acetonitril (15 mL) i voda (0,1 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se 2 h meša na 90° C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 50: 1 dihlorometan/etanol, dajući 190i (100 mg, 31%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>707,4.
2
Primer 190 2-[4-[5-[[5-[2,2-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 190
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom napunjen je (4-(5-(5-(2,2-dimetil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2]-a] indol-02 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 190i (100 mg, 1 ekv., 0.14 mmol), litijum hidroksid (54 mg, 10 ekv., 1.4 mmol), i-propanol (3 mL), THF (3 mL) i vode (2 mL). Smeša je mešana na 30°C tokom 1 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću reverzno-fazne preparativne HPLC, dajući 190 kao belu čvrstu supstancu (43 mg, 46%). MS-ESI: [M+H]<+>665,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,69 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,42-7,40 (m, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,98 (brs, 1H), 4,54 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,46-4,38 (m, 4H), 4,25-3,85 (m, 4H), 3,60 (s, 3H), 3,38-3,35 (m, 1H), 3,03-2,54 (m, 4H), 2,47 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,32-2,12 (m, 4H), 1,79-1,67 (m, 4H), 0,97 (s, 6H)
Primer 191a N-terc-butil-4,5,6,7-tetrahidrobenzo [b] tiofen-2-karboksamid 191a Smeša 4,5,6,7-tetrahidrobenzo [b] tiofen-2-karboksilne kiseline (500 g, 2,75 mol, 1,0 ekv.) I tionil hlorida (655 g, 5,5 mol, 2,0 ekviv.) zagrevana je pod refluksom tokom 3 sata. h. Višak tionil hlorida je uklonjen destilacijom pod sniženim pritiskom. Ostatak se preuzme u dihlorometan (1,0 L) i doda se rastvor terc-butilamina (402 g, 5,5 mol, 2,0 ekv.) U dihlorometanu (500 ml) uz mešanje dok se temperatura smeše drži ispod 10° C. Dobijeni rastvor je mešan na 25° C tokom 16 h. Najveći deo rastvarača je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je ohlađen u ledenoj kupki i 2 M KOH rastvor je polako uveden da se prilagodi pH 11 sa mešanje. Suspenzija je filtrirana i čvrsta tvar je sakupljena, isprana tri puta vodom i osušena u vakuumu da bi se dobio 191a kao bela čvrsta supstanca (580 g, 80%, u dva koraka). MS: [M+H]<+>238.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 7.02 (e, 1H), 5.77 (s, 1H), 2.65 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 2.47 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 1.74-1,70 (m, 4H), 1,35 (s, 9H).
Primer 191c N-terc-butil-3-(diazenilmetil)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo-[b] tiofen-2-karboksamid 191c
Rastvor 191a (100 g, 0,42 mol, 1,0 ekv.) U THF (500 ml) polako je dodata u n-butil litij (672 ml, 2,5 M u THF, 1,68 mol, 4,0 ekv) na-78° C pod argonom zaštite. Smeša je mešana na 90°C tokom 2 h. U smesu je dodat N, N-dimetilformamid (306 g, 4,2 mol, 10,0 ekv.) Dok je temperatura održavana na -78° C. Nakon još 2,0 h, reakciona smeša je ugašena
2
dodavanjem metanola (500 mL) na-78° C. Mešano je 0,50 h na sobnoj temperaturi da bi se dobio 191b in situ. Zatim je dodat 80% vodeni hidrazin hidrat (131 g, 2,1 mol) i smeša je refluksovana na 65° C preko noći. Organski rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je filtriran i nastala žuta čvrsta supstanca je isprana vodom. Čvrsta supstanca je osušena u vakuumu da se dobije 191c, koji je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS: [M+H]<+>280.
Primer 191d 8-Tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-(9), 2 (7), 3-trien-6-on 191d
Smeša N-tert-butyl-3-(diazenylmethyl)-4,5,6,7-tetrahidrobenzo [b] tiofen-2-karboksamid 191c (40 g, 144 mmol) u H2SO4(30% vodeni, 3 L) je refluksovan na 105° C tokom 24 h. Zatim se filtrira i filtrat se ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 1 L). Kombinovani ekstrakt je osušen iznad Na2SO4, i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 100: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 191d kao bela čvrsta supstanca (9.0 g, 31%). MS: [M+H]<+>207. M+H<+>= 459,0; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,15 (s, 1H), 2,96 (s, 1H),-2,94 (s, 2H), 2,86-2,84 (m, 2H), 1,96-1,94 (m, 4H).
Primer 191e (3S)-terc-butil 3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 191e
Prateći proceduru opisanu za jedinjenje 101g i počevši od (3S)-terc-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (10,0 g, 50 mmol) i 5-bromo-2-nitropiridina (10,5 g, 50 mmol) dali su 191e kao žuta čvrsta supstanca (8.05 g, 50%). MS-ESI: [M+H]<+>323
Primer 191f (3S)-terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 191f
Prateći proceduru opisanu za jedinjenje 101h i počevši sa (3S)-terc-butil 3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilatom 191e (5,8 g, 18 mmol) je dobio 191f kao braon
2
čvrsta supstanca (4,9 g, 93%). MS-ESI: [M+H]<+>293
Primer 191g (3S)-terc-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 191g
Prateći proceduru opisanu za jedinjenje 101i i počevši sa (3S)-terc-butil-3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilatom 191f (4.0 g, 13.7 mmol) i 3.5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (5,5 g, 20,6 mmol) daje 191 g kao žutu čvrstu supstancu (5,4 g, 83%). MS-ESI: [M+H]<+>478
Primer 191h (3S)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 191h
Prateći proceduru opisanu za jedinjenje 101j i počevši od (3S)-terc-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3-metil-piperazin-1-karboksilat 191g (3.1 g, 6.5 mmol) daje 191 h kao žutu čvrstu supstancu (2.3 g, 94%). MS-ESI: [M+H]<+>378.
Primer 191i (S)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-one 191i
Smesa (S)-5-brom-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-ona 191h (40.0 g, 106 mmol)), oksetan-3-on (11,4 g, 159 mmol), NaBH3CN (10,0 g, 159 mmol) i cink hlorida (21,3 g, 159 mmol) u metanolu (700 ml) je mešana na 50° C u trajanju od 5 hours. Smesa je dodata u vodu (100 mL) i koncentrirana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan pomoćudihlormetana (200 mL × 3). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 40: 1 dihlorometan/metanol, dajući 191i (35 g, 73%). MS: [M+H]<+>434.
Primer 191j(3S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il)piperazin-1-il)-piridin-2-
2 1
ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 191j
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je (S)-terc-butil-4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1) 2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 191i (1,0 g, 1,0 ekv., 2,3 mmol), Pin2B2(1,46 g, 2,50 ekv., 5,75 mmol)), Pd2(dba)3(105 mg, 0,05 ekv., 0,125 mmol), X-Phos (93 mg, 0,1 ekv., 0,23 mmol), kalijum acetat (676 mg, 3,0 ekv., 6,9 mmol), i dioksan (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana 4 sata na 90° C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran sa 3: 1 petrol eter/etil-acetatom (80 mL) da bi se dobio 191j kao žuta čvrsta supstanca (1.0 g, 90%). MS: [M+H]<+>482.
Primer 191k 4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diaza-triciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 191k
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 191j (168 mg, 0.35 mmol), 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (121 mg, 0.35 mmol), K3PO4(148 mg, 0.70 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino)
2 2
ferocenedihloropaladij (II) (13 mg, 0.0175 mmol), natrijum-acetat trihidrat (95 mg, 0.70 mmol), voda (6 kapi) i acetonitril (10 mL). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je završenu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (30 ml) i vodom (30 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 191k (118 mg, 51%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>665
Primer 191 5-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) pipera-zin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-2-il]-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-6-on 191
Otopini 4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo-[7.4.0.0<2,7>]-trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 191k (118 mg, 0.18 mmol) u metanolu/dihlormetan (10/10 ml) je dodat NaBH4(21 mg, 0.54 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 1 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Zatim se smeša sipa u vodu (20 mL) i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan pomoću dihlormetanom (20 mL × 3). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Čvrsti ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 191 (71 mg, 60%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>667.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,48-8,46 (m, 2H), 7.86 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 3,0, 9,0 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,86-4,85 (m, 1H), 4,58-4,55 (m, 2H), 4,48-4,46 (m, 2H), 4,42-4,40 (m, 2H), 3,65-3,64 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.41-3.99 (m, 1H), 3.05-3.04 (m, 1H), 2.97-2.95 (m, 3H), 2.87-2.86 (m, 2H), 2.52-2.51 (m, 1H), 2.34-2.32 (m, 2H), 2.21-2.20 (m, 1H), 1.89-1.87 (m, 4H), 0.94 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Primer 192a Metil 1-Formil-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat 192a Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena magnetnom mešalicom prečišćena je azotom i napunjena bezvodnim dihloroetanom (10 mL) i bezvodnim DMF (0.7 mL, 9.0 mmol). Reakciona smeša je ohlađena na 0° C i dodavan je fosfor oksihlorid (0.7 mL, 7.3 mmol) u periodu od 2 min, uz održavanje temperature reakcije između 0° C i 10° C.
2
Kupelj za hlađenje je uklonjena i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Doda se rastvor metil 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilata 112a (1,0 g, 5,6 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i smeša se meša na sobnoj temperaturi još 3 sata. Nakon tog vremena, otapalo je koncentrirana pod sniženim pritiskom i masnu ostatak je preuzeo sa zasićenim vodenim NaHCO3(20 ml). Vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 30 ml). Kombinovani organski sloji je ispran vodom (20 ml), osušen iznad Na2SO4i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 1 etilacetat/petrolej etrom da se dobije 192a kao bela čvrsta supstanca (406 mg, 33%). MS: (M+H)<+>208,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10.29 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 3.99 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.95 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.90-1.85 (m, 2H), 1.78-1.74 (m, 2H).
Primer 192b 7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-4 (3H)-on 192b
Laboratorijska boca od 100ml sa jednim vratom sa okruglim dnom napunjena je hidrazinijum hidroksidom (20 mL), metil 1-formil-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilatom 192a (2.5 g, 12.0 mmol). Reakciona smeša je zagrevana 4 sati na 100°C. Nakon ovog vremena reakcija se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira da se dobije 192b kao žuta čvrsta supstanca (1.9 g, 83%). MS: (M+H)<+>190,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 11.44 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 4.18 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,96 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.98-1.93 (m, 2H), 1.87-1.82 (m, 2H).
Primer 192c 4-hloro2-(4-okso-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-3 (4H)-il) nikotinaldehid 192c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom, napunjena je 1,4-dioksanom (50 ml), kalijum karbonatom (1,5 g, 10,6 mmol), 7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-4 (3H)-on 192b (1,0 g, 5,3 mmol) i 2-bromo-4-hlornikotinaldehid (3,5 g, 15,9 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, dodaju se bakar (I) bromid (75.0 mg, 0.53 mmol) i sarkozin (47.0 mg, 0.53 mmol) i reakciona smeša se zagreva na 95° C tokom 12 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je podeljen između metilen hlorida (60 mL) i vode (40 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan sa metilen hloridom (3 x 70 mL). Kombinovani organski sloj je ispran slanim
2 4
rastvorom (30 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10: 1 etil-acetat/petrolej etrom da se dobije 192c kao smeđa čvrsta supstanca (521 mg, 30%). MS-ESI: [M+H]<+>329,2.
Primer 192d (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(4-okso-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-3 (4H)-il) nikotinaldehid 192d
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(4-okso-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-3 (4H)-il) nikotinaldehid 192c (196 mg, 0.60 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il)-piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 191j (290 mg, 0.60 mmol), natrijev acetat (100 mg) 1,2 mmol), K3PO4(320 mg, 1,2 mmol), PdCl2(dppf) (50 mg, 0.060 mmol), acetonitrilu (25 ml), i vode (1 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 3 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20:1 metilen hlorid/metanolom da se dobije 192d 173 mg, 44%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>648,4.
Primer 192 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2;-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-4-on 192
U rastvor jedinjenja 192d (160 mg, 0,25 mmol) u MeOH (20 mL) dodat je NaBH4(28 mg, 0,75 mmol). Smeša je mešana na 20°C tokom 2 sata, a zatim uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 192 (97 mg, 60%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>650,4.<1>H NMR
2
(500 MHz, DMSO-d6) δ 8,65 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,54 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,51 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,25 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,66 (s, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,48-4,46 (m, 1H), 4,43-4,41 (m, 1H), 4,33 (s, 2H), 4,25-4,21 (m, 2H), 3,69-3,66 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,42-3,37 (m, 1H), 3,11-3,07 (m, 1H), 3,06-3,04 (m, 2H), 2,97-2,92 (m, 1H), 2,55-2,53 (m, 1H), 2,35-2,29 (m, 2H), 2,19-2,17 (m, 1H), 2,04-1,96 (m, 2H), 1,93-1,85 (m, 2H), 0,93 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 193a Metil 2-(hidroksi (piridin-2-il) metil) akrilat 193a
Laboratorijska boca sa jednim vratom i okruglim dnom od 250 ml napunjena je hloroformom (100 mL), pikolinaldehidom (10.7 g, 0.10 mol), metil-akrilatom (8.60 g, 0.10 mol) i 1,4-diazabiciklo [2.2.2] oktanom (0,560 g, 5,00 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 48 h. Nakon ovog vremena reakcija se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 3:1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 193a kao tamno žuto ulje (11,6 g, 60%). MS-ESI: (M+H)<+>194,2.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,69-7,66 (m, 1H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22-7,20 (m, 1H), 6,36 (s, 1H), 5,97 (s, 1H), 5,62 (s, 1H), 4,85 (s, 1H), 3,74 (s, 3H).
Primer 193b Metil indolizin-2-karboksilat 193b
Posuda od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je anhidridom sirćetne kiseline (80 mL) i 193a (6,68 g, 34,6 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na refluksu pod azotom 4 h. Nakon ovog vremena reakcija se ohladi na sobnu temperaturu, izlije na smešu leda (100 g) i zasićenog vodenog rastvora natrijum-bikarbonata (200 ml) i meša 1 h. Dobijeni rastvor je neutraliziran zasićenim vodenim natrijum-bikarbonatom i ekstrahovan sa metilen hloridom (3
2
x 200 mL). Kombinovani organski ekstrakt je osušen iznad natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10:1 petrol eter/etil-acetatom (10:1), dajući 193b kao belu čvrstu supstancu (2,1 g, 35%). MS-ESI: (M+H)<+>176,2.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7,86-7,84 (m, 1H), 7,79 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 7,36-7,34 (m, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,70-6,66 (m, 1H), 6,55-6,51 (m, 1H), 3,88 (s, 3H).
Primer 193c Metil 5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat 193c
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 250 mL je prečišćena sa azotom i napunjena 193b (2.0 g, 11.4 mmol), 10% paladijuma na ugljeniku (50% vlažan, 200 mg) i metanol (50 mL). Evakuisana je, napunjena gasom vodonika i mešana pod vodonikom od 5 atoma na sobnoj temperaturi tokom 8 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj CELITE<®>i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 193c kao bela čvrsta supstanca (1.1 g, 81%). MS-ESI:
[M+H]<+>180,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.25 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6.09 (s, 1H), 3.93 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3.66 (s, 3H) 2.67 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.87-1.83 (m, 2H), 1.75-1.70 (m, 2H).
Primer 193d Metil 3-formil-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat 193d Kolona sa okruglim dnom od 100 ml opremljena magnetnom mešalicom je prečišćena azotom i napunjena bezvodnim dihloroetanom (20 mL) i bezvodnim DMF (0.70 mL, 9.0 mmol). U smešu na 0° C dodat je fosforni oksihlorid (0,70 ml, 7,3 mmol) tokom perioda od 2 min, uz održavanje temperature reakcije između 0° C i 10° C. Kupelj za hlađenje je uklonjena i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Dodat je rastvor 193c (1,0 g, 5,6 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Nakon tog vremena, koncentrirana je pod sniženim pritiskom. Masnu ostatak je preuzeo sa zasićenim vodenim NaHCO3(20 ml) i vadi sa etil-acetata (3 x 50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (50 ml), osušen iznad Na2SO4i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 5 etil-acetat/petrol etar, dajući 193d kao belu čvrstu supstancu (703 mg, 58%). MS-ESI: (M+H)<+>208,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.14 (s, 1H), 6.40-4.27 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 3.78-7.88 (m, 3H), 2.78-7.51 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.94--1.85 (m, 2H), 1.78--1.69 (m, 1H), 3.58-3.55 (m, 1H), 2.21-2.14 (m, 2H).
Primer 193e 6,7,8,9-tetrahidropiridazino [4,5-b] indolizin-1 (2H)-on 193e
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 193d (600 mg, 2,9 mmol) i hidrazin-hidratom (20 ml). Reakciona smeša je zagrevana 4 sati na 100°C. Nakon ovog vremena reakcija se ohladi do
2
sobne temperature i filtrira da se dobije 193e kao žuta čvrsta supstanca (413 mg, 75%). MS-ESI: (M+H)<+>190,1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.17 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 4.16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,00-1,96 (m, 2H), 1,84-1,79 (m, 2H).
Primer 193f 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropiridazino [4,5-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 193f
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (40 mL), 193e (800 mg, 3.6 mmol), 2-bromo-4-hloronikotinaldehidom (2.8 g, 12.6) mmol), i kalijum karbonata (1.2 g, 8.4 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, dodati su bakar (I) jodid (800 mg, 4,2 mmol) i 4,7-dimetoksi-1,10-fenantrolin (1,0 g, 4,2 mmol), a reakciona smeša je zagrevan na 90° C tokom 12 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je podeljen između metilen hlorida (60 mL) i vode (40 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 40 mL). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 1: 1 etil-acetat/petrolej etrom da bi se dobio 193f kao smeđa čvrsta supstanca (513 mg, prinos 37%). MS-ESI: [M+H]<+>329,1.
Primer 193g (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino)-6-okso- 1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidro-piridazino [4,5-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 193g
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena refluksnim
2
kondenzatorom napunjena je 193f (200 mg, 0.61 mmol), 191j (293 mg, 0.60 mmol), natrijum-acetat (98 mg, 1.2 mmol), K3PO4(254 mg, 1.2 mmol), PdCl2(dppf) (50 mg, 0.060 mmol), acetonitril (25 mL) i voda (1 mL). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagreva se na 100° C tokom 3 sata. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 metilen hlorid/metanolom da se dobije 193g (206 mg, 53%) kao braon čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>648,3.
Primer 193 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2;-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidropiridazino [4,5-b] indolizin-1-on 193
U rastvor 193g (180 mg, 0,28 mmol) u metanolu (20 mL) dodat je NaBH4(32 mg, 0,84 mmol). Smeša je mešana na 20°C 2 h i ugašena vodom Zatim se ispari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 193 (140 mg, 78%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>650,4.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,67 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 7,85 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,52-7,50 (m, 2H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,25 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,49 (s, 1H), 4,72 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,47 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,41 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,33-4,29 (m, 2H), 4,28-4,25 (m, 2H), 3,71-3,65 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,41-3,77 (m, 1H), 3,10-3,08 (m, 1H), 2,98-2,90 (m, 3H), 2,57-2,52 (m, 1H), 2,35-2,30 (m, 2H), 2,18-2,16 (m, 1H), 2,06-2,0 (m, 2H), 1,89-1,82 (m, 2H), 0,93 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Primer 194a 1-Metil-3-(pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 194a
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-bromo-1-metil-3-(pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 142a 600 mg, 2.0 mmol), Pin2B2(2.54 g, 10 mmol), Pd2(dba)3(100 mg, 0.10 mmol), X-phos (100 mg, 0.20 mmol), kalijum acetat (600 mg, 6.0 mmol) i dioksanom (80 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 65° C tokom 16 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobio 194a kao žuta čvrsta supstanca (sirovi proizvod) (1,0 g, LCMS čistoća: 70%). MS-ESI: [M+H]<+>329,4.
Primer 194b 4-{1-Metil-6-okso-5-[(pirazin-2-il) amino]-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{6-okso-8-tia-4, 5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 194b
2
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (345 mg, 1,0 mmol), 194a (659 mg, 2.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(50 mg, 0.050 mmol), K3PO4(450 mg, 2,0 mmol), natrijev acetat hidrat (300 mg, 2,0 mmol), voda (6 kapi) i acetonitrilu (40 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 194b (250 mg, 49%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>512,3.
Primer 194 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-(pirazin-2-ilamino)-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno [2,3-d] piridazin-4-on 194
Smeša 194b (200 mg, 0,4 mmol) i NaBH4(48 mg, 1,2 mmol) u metanolu (20 mL) mešana je na 30°C tokom 2 h. Smeša je ugašena vodom (5 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 194 (60 mg, 30%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>514,2.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,78 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,69 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,04 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 5 Hz, 1H), 4,44-4.37 (m, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.01-2.99 (m, 2H), 2.88-2.86 (m, 2H), 2.01-1.96 (m, 4H).
2
Primer 195a Etil 4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-karboksilat 195a
U smešu etil 3-(2-hlorocikloheks-1-enil) akrilata (21.4 g, 100 mmol) u DMSO (100 mL) dodat je natrijum-azid (9.75 g, 150 mmol). Reakciona smeša je zagrevana 4 h na 105°C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je sipana u ledenu vodu. Nastali talog je sakupljen filtracijom da bi se dobio 195a (18.0 g, 93.3%). MS-ESI: [M+H]<+>194.
Primer 195b Etil 1-(2,2-Dietoksietil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-karboksilat 195b U suspenziju NaH (1.44 g, 60.2 mmol) u N, N-dimetilformamidu (DMF) (30 mL) polako je dodat 195a (5.80 g, 30.1 mmol) na 0° C. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h, a zatim je dodat 2-bromo-1, 1-dietoksietan (11.9 g, 60.2 mmol). Reakcija je zagrevana na 70° C tokom 30 h i ugašena vodom (100 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 100 ml). Kombinovana organska faza se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 petrol eter/etil-acetatom do 195b (4,7 g, 51%). MS-ESI: [M-EtOH+H]<+>264.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 6,65 (s, 1H), 4,59 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,17-4,16 (m, 4H), 3,59-3,57 (m, 2H), 3,27-3,26 (m, 2H), 2,61 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,51 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,73-1,71 (m, 2H), 1,63-1,61 (m, 2H), 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,02 (t, J = 7,0 Hz, 6H).
Primer 195c 1-(2,2-dietoksietil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-karboksilna kiselina 195c
U smešu 195b (4.7 g, 15.2 mmol) u mešanom rastvaraču etanola (20 mL), tetrahidrofurana (20 mL) i vode (30 mL) dodat je natrijum-hidroksid (3.0 g, 75.0 mmol). Reakcija je zagrevana na 75°C tokomdva dana, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je suspendovan u vodi i neutraliziran sa razblaženim vodenim rastvorom limunske kiseline. Smeša je ekstrahovana sa etil-acetatom (3 X 100 mL) i kombinovane organske faze su koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio 195c (3.32 g, 78%). MS-ESI: [M-EtOH+H]<+>236.
2 1
Primer 195d 1-(2,2-Dietoksietil)-4,5,6,7-tetrahidro-1H-indol-2-karboksamid 195d Na mešavinu 195C (2,8 g, 10,0 mmol) u N, N-dimetilformamid (30 ml) je dodat O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N, N, N', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HATU) (5,7 g, 15,0 mmol), i3N (1,5 g, 15,0 mmol) i DMAP (128 mg, 1,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Doda se zasićeni amonijum hidroksid (30 mL) i dobijena smeša se dalje meša 2 h. Ostatak je izliven u vodu (100 ml) i ekstrahovan etilacetatom (3 x 100 ml). Kombinovana organska faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etilacetatom (6: 1 do 3: 1) da bi se dobio 195d (2.7 g, 96%). MS-ESI: [M-EtOH+H]<+>235.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.35 (bs, 1H), 6.70 (bs, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.60 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.57-3.56 (m, 2H), 3.25 (m, 2H), 2.57 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 1.71 (t, J) = 5.0 Hz, 2H), 1.64 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 1.01 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
Primer 195e 6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 195e
Smeša 195d (2,7 g, 9,6 mmol) i sirćetna kiselina (10 mL) je zagrevana na 110°C 2 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature i neutralizovana vodenim rastvorom natrijumkarbonata i ekstrahovana etil-acetatom (3 x 30 mL). Kombinovana organska faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 195e kao žuta čvrsta supstanca (1.6 g, 88%). MS-ESI: [M+H]<+>189,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,28 (s, 1H), 7,02 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,52 (pt, J = 5,5 Hz, 1H), 2,66 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,57 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,83-1,82 (m, 2H), 1,73-1,72 (m, 2H).
Primer 195f 4-Hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1, 2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 195f
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 mL), 2-bromo-4-hloronikotinaldehidom 103a (503 mg, 2.28 mmol), 195% (142 mg, 0.76 mmol),
2 2
cezijum karbonat (490 mg, 1.5 mmol), CuI (143 mg, 0.76 mmol) i 4,7-dimetoksi-1,10-fenantrolin (127 mg, 0.52 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 80° C 10 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je ispran sa slanim rastvorom i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 1: 4 etil-acetat/petroleum etrom da bi se dobio 195f (160 mg, 65%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>328.
Primer 195g 2-(3-(formil)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidro-pirazino [1,2-a] indol-1 (2H)-on 195g
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 195f (130 mg, 0,40 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1], 5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetra-metil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (154) mg, 0.40 mmol), Pd(dppf)Cl2(29 mg, 0.040 mmol), K3PO4(170 mg, 0.80 mmol), natrijev acetat (66 mg, 0.80 mmol), voda (6 kapi) i acetonitrilu (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 195 g kao žutu čvrstu supstancu (120 mg, 54%). MS-ESI: [M+H]<+>551,2
Primer 1952-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 195
U rastvor 195g (120 mg, 0,22 mmol) u metanolu (5 mL) na 0°C je dodat natrijumborohidrid (25 mg, 0,66 mmol). Reakciona smeša je mešana 30 minuta. Zatim je ugašena sa vodom (1.0 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 195 (70 mg, 58%). MS-ESI: [M+H]<+>553,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.49 (d J = 4,5 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,97 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,70 (s)., 1H), 5.08-5.06 (m, 1 H), 4.51-4.49 (m, 1H), 4.36-4.34 (m, 1H), 4.14-4.05 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.62-3.60 (m, 2H), 2.91-2.89 (m, 2H), 2.75-2.70 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 1.97-1.95 (m, 2H), 1.86-1.84 (m, 2H).
Primer 196a 2-ciklopropilpirimidin-4-amin 196a
2
Ciklopropilkarbamidin hidrohlorid (1.0 g, 8.3 mmol) je rastvoren u etanolu (25 mL) i trietilaminu (1.26 g, 12.5 mmol), a zatim je dodat 2-hloroakril-nitril (870 mg, 10 mmol). Dobijeni narandžasto-žuti rastvor je refluksiran 1 sat. Smeša je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i ostatak je prečišćen reverznomfazom pomoću Combiflash da se dobije 196a (300 mg, 27%) kao svetlosmeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>136
Primer 196b 5-Bromo-3-(2-ciklopropilpirimidin-4-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 196b
Laboratoriska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je s 196a (300 mg, 2,22 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona mg, 2,22 mmol) i cezijum karbonata (1,45 g, 4,44 mmol). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (127 mg, 0.22 mmol) i tris (dibenzil-ideneaceton) dipaladijum (0) (100 mg, 0.11 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 50 ml). Kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je ispran acetonitrilom (5 mL) da bi se dobio 196b (420 mg, 59%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>321
Primer 196c 3-(2-Ciklopropilpirimidin-4-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-jedan 196c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena
2 4
magnetnom mešalicom i kondenzatorom napunjena je 196b (380 mg, 1,2 mmol), Pin2B2(1,5 g, 5,9 mmol), Pd2(dba)3(55 mg, 0.060 mmol), X-fos (57 mg, 0.060 mmol), kalijum acetat (350 mg, 3.6 mmol) i 1,4-dioksan (20 mL). Reakciona smeša je podvrgnuta ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevana je na 60° C 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobio 196c (410 mg, 94%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je direktno korišćena za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI:
[M+H]<+>369
Primer 196d 4-{5-[(2-Ciklopropilpiridin-4-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 196d
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml, opremljenom refluksnim kondenzatorom, napunjeno je 196c (258 mg, 0,70 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4. 0,0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (240 mg, 0.70 mmol), K3PO4(297 mg, 1,4 mmol), natrijev acetat (190 mg, 1.4 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (29 mg, 0.035 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.5 mL). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcije sa LCMS pokazala je završenu konverziju u željeni proizvod. Smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa dihlorometanom (20 mL) i vodom (20 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 196d (220 mg, 57%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>549
Primer 196 3-[4-[5-[(2-ciklopropilpirimidin-4-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 196
U rastvor 196d (200 mg, 0,36 mmol) u metanolu/dihlorometanu (5/5 mL) dodat je NaBH4(42 mg, 1,1 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 1 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Smesa je koncentrirana pod sniženim pritiskom i voda (10 mL) je dodata ostatku. Zatim se ekstrahuje sa dihlorometanom (20 ml x 3). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznadi (Na2SO4) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 196 (135 mg, 68%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>551.<1>H NMR (500 MHz,
2
CdCl3) δ 8.84 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8.13 (d J = 1,5 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,52 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,22-5,19 (m, 1H), 4,72-4,69 (m, 1H), 4,56-4,54 (m, 1H), 4,31 (t, J = 11,0 Hz, 1H), 4,17 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,94-3.91 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.58 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.53 (s, 2H), 2.18-2.13 (m, 1H), 1.29 (s, 6H), 1.16-1,13 (m, 1H), 1,06-0,95 (m, 3H).
Primer 197a terc-butil 4-(5-nitropiridin-2-il) piperazin-1-karboksilat 197a
Smeša 2-bromo-5-nitropiridina (5.0 g, 24.6 mmol), terc-butil piperazin-1-karboksilata (13.8 g, 74.2 mmol), acetonitril (150 mL) je mešana na refluksu tokom 2.5 h. Po završetku reakcije, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 197a kao žuta čvrsta supstanca (4.1 g, 54%). MS-ESI: [M+H]<+>309.
Primer 197b terc-butil 4-(5-aminopiridin-2-il) piperazin-1-karboksilat 197b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 250 mL je prečišćena sa azotom i napunjena 197a (4.0 g, 13.0 mmol), 10% paladijuma na uglju (10% vlažan, 500 mg) i metanol (130 mL). Boca je evakuisana, napunjena gasom vodonika i mešana na sobnoj temperaturi 15 h. Vodonik je zatim evakuisan i azot je napunjen u laboratorijsku bocu. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da bi se dobio 197b (3.3 g, 91%). MS-ESI: [M+H]<+>279
Primer 197c terc-butil 4-(5-(6-brom-4-metil-3-okso-3,4-dihidropirazin-2-ilamino) piridin-2-il) piperazin-1-karboksilat 197c
Smesa 197b (500 mg, 1.8 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2 (1H)-ona (530 mg, 2.0 mmol), N-etil-N-izopropilpropan-2-amina (1.5 mL), 0.90 mmol), i propan-2-ol (20 mL) je mešan na 100° C tokom 15 h. Po završetku reakcije, rastvarač je uklonjen pod sniženim
2
pritiskom da bi se dobio 197c kao smeđa čvrsta supstanca (375 mg, 45%). MS-ESI: [M+H]<+>465.
Primer 197d 5-Bromo-1-metil-3-(6-(piperazin-1-il) piridin-3-ilamino)-pirazin-2 (1H)-on 197d
U rastvor 197c (500 mg, 1,08 mmol) u dihlorometanu (10 ml) doda se 4,0 M HCl/dioksan (10 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 h. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom da se dobije 197d (358 mg, 91%). MS-ESI: [M+H]<+>365.
Primer 197e 5-Bromo-1-metil-3-(6-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-3-ilamino) pirazin-2 (1H)-on 197e
Smeša 197d (0,75 g, 2,1 mmol), oksetan-3-on (0.24 mL, 4.2 mmol), NaBH3CN (0.32 g, 5.1 mmol) i cink hlorid/dietil etera (5.1 mL, 5.1 mmol) u metanol (30 mL) je mešan na 50° C tokom 5 sati. Čvrsta materija je uklonjena filtracijom, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10:1 dihlorometanom/metanolom da se dobije 197e (550 mg, 64%). MS-ESI: [M+H]<+>421.
Primer 197f (4-(4-metil-6-(6-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-3-ilamino)-5-okso-4,5-dihidropirazin-2-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 197f
Laboratorijska boca sa okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 197e (200 mg, 0,48 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1], 2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (364 mg, 0,95 mmol), PdCl2(dppf) (40 mg, 0.049 mmol), K3PO43H2O (250 mg, 0.95 mmol), natrijumacetat (80 mg, 0,95 mmol), acetonitrilom (10 mL) i vodom (0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 80° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlormetan da se dobije 197f kao crvena čvrsta supstanca (230 mg, 70%). MS-ESI: [M+H]<+>680
Primer 197 2-[3-(hidroksimetil)-4-[4-metil-6-[[6-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-3-
2
piridil] amino]-5-okso-pirazin-2-il]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 197
Smeša 197f (200 mg, 0.30 mmol) i litijum hidroksida (70 mg, 3.0 mmol) u THF (9 mL), i-propanol (6 mL) i voda (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Smesa je koncentrirana pod sniženim pritiskom i razrijeđena vodom (4 mL). Zatim se ekstrahuje sa dihlorometanom (2 x 10 ml) i kombinovani dihlorometanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 197 (59 mg, 30%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>638.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.30 (s, 1 H), 8.70 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 8.49 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 8,14-8,11 (m, 1 H), 7,59 (s, 1 H), 7,55 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 6,82 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 4,93 (t, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,60-4,54 (m, 3H), 4,48-4,42 (m, 3H), 4,26-4,08 (m, 3H), 3,86 (d, J = 12,0 Hz), 1 H), 3.54 (s, 3 H), 3.44-3.40 (m, preklapanje, 5 H), 2.66-2.53 (m, 2 H), 2.46-2.47 (m, 2 H), 2.35-2.33 (m, 4 H), 1.80-1.68 (m, 4 H).
Primer 198a 4-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4-okso-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-3 (4H)-il) nikotinaldehid 198a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(4-okso-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-3 (4H)-il.) nikotinaldehid 192c (118 mg, 0,36 mmol), 1-metil-3-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-il-amino)-5-(4, 4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 101L (171 mg, 0,36 mmol), Na2CO3(78 mg, 0,72 mmol), Pd(dppf)Cl2(30 mg, 0.036 mmol), DMF (10 ml), i vode (1 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 50° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 10 h. Zatim se ohladi na sobnu temperaturu i ispari pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika
2
gel koloni eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 198a (93 mg, 40%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>634,3.
Primer 198 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-4-on 198
U rastvor cikloheksanona 198a (80 mg, 0,13 mmol) u dimetil sulfoksidu (30 ml) dodat je N-bromsukcinimid (14 mg, 0,39 mmol). Smeša je mešana na 20°C tokom 2 h. Zatim se ispari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 198 (38 mg, 43%) kao beličasta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>636,4.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7,88 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,39-7,36 (m, 1H), 7,25-7,23 (m, 1H), 4,67 (bs, 1H), 4,55 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 4,46 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 4,33-4,31 (m, 2H)), 4,26-4,20 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,46-3,41 (m, 1H), 3,09-3,03 (m, 6H), 2,39-2,37 (m, 4H), 2,04-1,96 (m, 2H), 1,93-1,86 (m, 2H).
Primer 199a Imidazo [1,2-a] pirimidin-7-amin 199a
Rješavanju pirimidina-2,4-diamin (3,0 g, 0.027 mol) u etanolu (90 ml) i vodeni NaHCO3(2 M, 20 ml) je dodat 2-Furfuril-alkohol (4,3 g, 0,055 mol). Smeša je mešana na 70°C preko noći. TLC je pokazao da je početni materijal nestao. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen etil-acetatom (3 × 30 ml). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje 1: 5 petrol eter/etil-acetatom, dajući 199a kao belu čvrstu supstancu (2,2 g, 60%). MS: [M+H]<+>135,1.
Primer 199b 5-Bromo-3-(imidazo [1,2-a] pirimidin-7-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 199b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 250 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 199a (2.2 g, 16.4 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (8.77 g, 32.8 mmol), Pd2dba3(1,5 g, 1,64 mmol), Ksantfos (1,88 g, 3,28 mmol), Cs2CO3(10,7 g, 32,8 mmol) i 1,4-dioksan (150 ml). Sistem je evakuisan, a zatim napunjen N 2. Zatim se zagreva na refluksu 3 h. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana
2
i čvrsta supstanca je isprana metanolom (60 mL). Kombinovani filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 199b kao svetlo zelena čvrsta supstanca (1.63 g, 31%). MS: [M+H]<+>320,1
Primer 199c 10-[4-hloro-3-(hidroksimetil) piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 199c
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena je sa 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (9,0 g, 26.1 mmol, 1.0 eq.), metanol (50 ml), dihlormetan (30 ml), i NaBH4(5,95 g, 156.6 mmol, 5,0 ekv.) Na 0° C. Reakciona smeša je mešana 1 h. Nakon završetka reakcije, reakcija je ugašena vodom i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom. Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 4 etil-acetat/petrolej etrom dajući 199c kao belu čvrstu supstancu (7.0 g, 77%). MS-ESI: [M+H]<+>345,9.
Primer 199d (4-hlor-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo-[6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il) metil-acetat 199d
Jedna laboratorijska boca od 250 ml sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena su 199c (7,0 g, 20,2 mmol, 1,0 ekv.), Trietilamin (4,08 g, 40,4 mmol, 2,0 ekv.) I THF (50 mL)). U smešu je dodat rastvor acetil hlorida (2,36 g, 30,3 mmol, 1,5 ekv.) U THF (20 mL) kap po kap. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Nakon završetka reakcije, reakcija je prekinuta ledenom vodom i isparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom. Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je ispran sa 1: 8 etil-
2
acetatom/petroleumom da bi se dobio 199d kao bela čvrsta supstanca (5.9 g, 76%). MS-ESI:
[M+H]<+>388,3.
Primer 199e {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e
Posuda od 250 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjena je 199d (4,5 g, 1,0 ekv., 11,6 mmol), Pin2B2(7,38 g, 2,5 ekv., 29,0 mmol).), PdCl2(dppf) (473 mg, 0,05 ekv., 0,58 mmol), x-fos (470 mg, 0,1 ekv., 1,16 mmol), kalijum acetat (3,41 g, 3,0 ekv., 34,8 mmol) i dioksan (100 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 65° C tokom 4 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobila sirova 199e kao smeđe-crvena tečnost (4.0 g, čistoća: 65%). MS-ESI: [M+H]<+>398,3.
Primer 199f (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[5-({imidazo [1,2-a] pirimidin-7-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 199f
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 199b (500 mg, 1,5 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatri-ciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (1200 mg, 3.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(65 mg, 0.075 mmol), K3PO4(650 mg, 3.0 mmol), natrijev acetat hidrat (420 mg, 3.0 mmol), voda (6 kapi) i acetonitrilu (20 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25: 1 dihlorometan/metanol, dajući 199f (240 mg, 40%) kao žuto-braon čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>593,4.
Primer 1993-[3-(hidroksimetil)-4-[5-(imidazo [1,2-a] pirimidin-7-ilamino)-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 199
Smeša 199f (180 mg, 0.30 mmol) i litijum hidroksida (130 mg, 3.0 mmol) u ipropanol/THF (5: 3, 8 mL) i voda (2 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena pod vakuumom, i ostatak je razblažen vodom (3 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 10 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC dajući 199 (40 mg, 30%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>551,3.<1>H NMR (500 MHz, CHCl3) δ 9.09 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 5,0 Hz,
2 1
1H), 8.23 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,47 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,10 (s, 1H), 4,67-4,50 (m, 2H), 4,32-4,18 (m, 3H), 3,93-3,88 (m, 1H), 3,74 (s, 3H).2.60-2.58 (m, 2H), 2.52 (s, 2H), 1.28 (s, 6H).
Primer 200a terc-butil 4-(6-Nitropiridin-3-il)-5,6-dihidropiridin-1 (2H)-karboksilat 200a
Smeša 5-brom-2-nitropiridina (2,0 g, 9,7 mmol), terc-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidropiridine-1 (2H)-carboxylate (3,0 g, 9,7 mmol), Pd(dppf)Cl2(792 mg, 0.97 mmol), K3PO4.3H2O (5.2 g, 19.4 mmol) i natrij acetat (1.59 g, 19.4 mmol) u acetonitrilu (100 ml) i vode (5 ml) je evakuirano, a zatim napuniti sa N2.Reakciona smeša je zagrevana 6 h na 80°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 5 etil-acetat/petrolej etrom da se dobije 200a kao žuta čvrsta
2 2
supstanca (2.2 g, 74%).
Primer 200b terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il) piperidin-1-karboksilat 200b Kolona sa okruglim dnom od 500 mL je prečišćena sa azotom i napunjena 200a (2.5 g, 8.2 mmol), 10% paladijuma na uglju (50% vlažan, 300 mg) i metanol (80 mL). Boca je evakuisana, napunjena gasom vodonika i mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika tokom 12 h. Vodonik je zatim evakuisan i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 200b (1.8 g, 78%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>278,1 Primer 200c terc-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-5,6-dihidropiridin-1 (2H)-karboksilat 200c
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 200b (2.0 g, 7.2 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (1.9 g 7,2 mmol), cezijum karbonat (4,7 g, 14,4 mmol) i 1,4-dioksan (50 ml). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 min, dodati su kantofos (418 mg, 0.72 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (661 mg, 0.72 mmol). Reakciona smeša je podvrgnuta ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrejana na 100° C tokom 6 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Ostatak je raspodeljen između etil-acetata i vode. Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (3 x 80 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml) i osušen iznad anhidrovanog natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 4 etil-acetat/petrolej etrom da se dobije 200c (2.0 g, 61%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>463,2
Primer 200d 5-bromo-1-metil-3-(5-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 200d
Smeša 200c (1,0 g, 2,3 mmol, 1,0 ekv.) u HCl/MeOH (3M, 10 mL) mešana je na 80°C tokom 4 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je zalužen vodenim natrijum-hidroksidom i ekstrahovan sa dihlorometanom. Kombinovani organski sloj je ispran vodom i slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4,i koncentrovan pod smanjenim pritiskom dajući 200d (650 mg, 84%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>363,0
Primer 200e 5-Bromo-1-metil-3-(5-(1-(oksetan-3-il)-1, 2,3,6-tetrahidropiridin-4-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 200e
Smeša 200d (500 mg, 1,4 mmol), oksetan-3-on (298 mg, 4,2 mmol), NaBH3CN (261 mg, 4,2 mmol) i 1 mol/L cink hlorida u ethoxyethane (4 mL, 4.2 mmol) u metanolu (20 mL)
2
je mešano na 50° C tokom 5 sati. Dodata je voda (20 ml) reakciji, i dobijena smeša je ekstrahovana pomoću dihlorometana (3 x 50 ml). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10: 1 metilen hlorid/metanolom da se dobije 200e (450 mg, 78%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>419,1
Primer 200f (4-(1-metil-5-(5-(1-(oksetan-3-il)-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 200f
Laboratorijska boca sa okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 200e (300 mg, 0.72 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1], 2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (414 mg, 1,08 mmol), PdCl2(dppf) (57 mg, 0,070 mmol), K3PO43H2O (560 mg, 2.16 mmol), natrijumacetat (177 mg, 2.16 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 80° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan da se dobije 200f kao crvena čvrsta supstanca (324 mg, 68%). MS-ESI: [M+H]<+>676,2
Primer 200 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[1-(oksetan-3-il)-3,6-dihidro-2H-piridin-4-il]-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 200
Smeša 200f (260 mg, 0.39 mmol) i litijum hidroksida (92.4 mg, 3.85 mmol) u THF (9 mL), izopropanol (6 mL) i voda (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Smeša je ekstrahovana koncentrovana pod sniženim pritiskom i razblažena vodom (4 mL). Zatim se ekstrahuje sa dihlorometanom (2 x 10 mL) i kombinovani C dihlorometanski ekstrakt se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 200 (53.1 mg, 20%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>634,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.76 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8.74 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 8.24 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,73-7,71 (m, 1 H), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 7,30 (d, J) = 8.5 Hz, 1 H), 6.58 (s, 1 H), 6.11 (s, 1 H), 4.97 (s, 1 H), 4.57 (t, J = 6.5 Hz, 2 H), 4.38-4.49 (m, 4 H), 4.08-4.26 (m, 3H), 3.86 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 3.61 (s, 3 H), 3.54-3.45 (m, 1 H), 2.95 (s, 2H), 2.68-2.54 (m, 2H), 2.48-2.46 (m, preklapanje, 6H), 1.83-1.75 (m, 2H), 1.73-1.65 (m, 2H).
Primer 201a 5-Bromo-3-(imidazo [1,2-a] piridin-7-ilamino)-1-metilpirazin-2 (1 H)-on 201a
2 4
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je imidazom [1,2-a] piridin-7-aminom (665 mg, 5,0 mmol), Cs2CO3(3,26 g, 10 mmol), 5-dibromo-1-metilpirazin-2 (1 H)-on (1.86 g, 7.0 mmol), Ksantfos (289 mg, 0.50 mmol), Pd2(dba)3(458 mg, 0.50 mmol) i 1, 4-dioksan (30 mL). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagreva se na 100° C u atmosferi azota tokom 16 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je da je ostao mali početni materijal. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je razblažen dihlormetanom (60 ml) i vodom (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (60/1 do 30/1) da se dobije 201a (700 mg, 44%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>320
Primer 201b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[6-({imidazo [1,2-a] piridin-6-il} amino)-4-metil-5-okso-4,5-dihidropirazin-2-il] piridin-3-il) metil-acetat 201b
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 201a (64 mg, 0.20 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (160 mg, 0,40 mmol), Pd(dppf)Cl2(10 mg, 0.012 mmol), K3PO4(100 mg, 0,39 mmol), NaOAc · 3H2O (60 mg, 0.44 mmol), voda (6 kapi) i acetonitrilu (5 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 2 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 20:1 dihlorometan/metanol, dajući 201b (40 mg, 34%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>593,2.
Primer 201 3-[3-(hidroksimetil)-4-[6-(imidazo [1,2-a] piridin-6-ilamino)-4-metil-5-okso-pirazin-2-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b]
2
pirazin-4-on 201
Smeša 201b (40 mg, 0.067 mmol) i litijum hidroksida (25 mg, 0.60 mmol) u ipropanol/THF (3: 2, 5 mL) i voda (1 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Reakciona smeša je uparena pod vakuumom, i smeša je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 10 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 201 (10 mg, 30%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M+H]<+>551,3.<1>H NMR (500 MHz, CHCl3) δ 9.58 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.73 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.63-7.61 (m, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.13-7.11 (m, 1H), 6.87 (s, 1H), 5.19-5.17 (m, 1H), 4.77-4.75 (m, 1H), 4.57-4.42 (m, 2H), 4.20-4.17 (m, 2H), 3.92-3.90 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 2.60-2.53 (m, 4H), 1.29 (s, 6H).
Primer 202a 4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(4-okso-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-3 (4H)-il) nikotinaldehid 202a
U posudu od 100 ml sa okruglim botomom, opremljenom refluksnim kondenzatorom, napunjen je 4-hloro-2-(4-okso-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-3 (4H)-il) nikotinaldehid 192c (200 mg, 0.60 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (230 mg, 0.60 mmol), natrijum-acetat (100 mg, 1.2 mmol), K3PO4(320 mg, 1.2 mmol), PdCl2(dppf) (50 mg, 0.060 mmol), acetonitril (25 mL) i voda (1 mL). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 3 h. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i isparena pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 metilen hlorid/metanolom da se dobije 202a (205 mg, 62%) kao braon čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>552,3.
Primer 2023-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,8,9,10-tetrahidropiridazino [4,5-a] indolizin-4-on 202
2
U rastvor 202a (180 mg, 0,33 mmol) u metanolu (25 ml) dodat je NaBH4(37 mg, 0,99 mmol). Smeša je mešana na 20°C 2 h. Reakcija je prekinuta dodatkom vode. Zatim se ispari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 202 (120 mg, 66%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>554,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-a6)δ 8,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.07 (d, J = 2,0 Hz, 1H) 7,61 (s, 1H), 7,45 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 4,65 (t, J = 5,0 Hz, 1H)., 4.34-4.32 (m, 2H), 4.26-4.20 (m, 2H), 3.93-3.91 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.49 (s, 2H), 3.06-3.04 (m, 2H) 2.79-2.77 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.04-1.96 (m, 2H), 1.93-1.86 (m, 2H).
Primer 203a 5-Metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo [5,4-c] piridin-2-amin 203a
Rastvor 1-metil-4-piperidona (11.3 g, 100 mmol) u 2-propanolu (80 mL) zagrevan je do 50° C. U rastvor je sekvencijalno dodavan rastvor cijanamida (4,2 g, 100 mmol) u 2-propanolu (25 mL) i sumpornom prahu (3,2 g, 100 mmol). Nakon dodavanja katalitičke količine pirolidina (1.3 mL), rezultirajuća smesa je mešana na 50° C tokom 2 sata. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu, i mešana je preko noći. Zatim se ohladi na ili ispod 10° C u ledeno-vodenom kupatilu i meša 1 sat na istoj temperaturi. Istaloženi kristali su sakupljeni filtracijom i isprani sa 2-propanolom (20 mL). Vlažni kristali su sušeni u vakuumu da se dobije 203a (10 g, 59%). MS: [M+H]<+>170.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 6.70 (e, 2H), 3.31 (s, 2H), 2.61 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2.45 (m, 2H), 2.33 (e, 3H).
Primer 203b 5-Bromo-1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo [5,4-c] piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 203b
Prateći procedure opisane za 191g i počevši sa 203a (4,0 g, 23,5 mmol) i 3,5-
2
dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (3,0 g, 17,8 mmol) dobijemo 203b kao žutu čvrstu supstancu (2,8 g, 44%). MS: [M+H]<+>357.
Primer 203c 10-[3-(acetoksimetil)-4-[1-metil-5-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-[1,3] tiazolo [5,4-c] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 203c
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjena je 203b (178 mg, 0.50 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (200 mg, 0.50 mmol), K3PO4(212 mg), 1.0 mmol), natrijum-acetat (82 mg, 1.0 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocen-dihloropaladijum (II) (21 mg, 0.025 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.5 mL). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen dihlorometanom (20 mL) ivodom (10 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (2 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriranii koncentrovanipod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 203c (135 mg, 43%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>584
Primer 203 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-tiazolo [5,4-c] piridin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 203
U rastvor 203c (140 g, 0,22 mmol) u THF-u/propanolu/vodi (5/2/2 mL) dodat je LiOH (54 mg, 2,2 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 1 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Zatim je smeša koncentrisana pod sniženim pritiskom i razblažena vodom (3 mL). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojje ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja primera 203 (85 mg, 66%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>586.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.50 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.95 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,11-5,09 (m, 1H), 4,67-4,64 (m, 1H), 4,52 (bs, 1H), 4,30-4,28 (m, 1H), 4,16 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,89-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,60 (s, 2H), 2,84-2,81 (m, 4H) 2.58 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.52 (s, 2H), 1.28 (s, 6H).
2
Primer 204a 4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropiridazino [4,5-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 204a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropiridazino [4,5-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 193f (200 mg, 0.60 mmol), 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo-[1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 135a (230 mg, 0.60 mmol), natrijum-acetat (100 mg, 1.2 mmol), K3PO4(320 mg, 1.2 mmol), PdCl2(dppf) (50 mg, 0.060 mmol), acetonitril (25 mL) i voda (1 mL). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, smeša je zagrevana na 100° C tokom 3 sata. Reakciona smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 metilen hlorid/metanolom da se dobije 204a (185 mg, 55%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>552,3.
Primer 2042-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidropiridazino [4,5-b] indolizin-1-on 204
U rastvor 204a (160 mg, 0,29 mmol) u metanolu (20 ml) dodat je NaBH4(33,0 mg, 0,87 mmol). Smeša je mešana na RT 2 h. Reakcija je prekinuta dodatkom vode. Zatim je uparena pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 204 (120 mg, 75%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>554,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.55 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.09 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 4.73 (bs, 1H), 4.30 (s, 2H), 4.27-4.25 (m, 2H), 3.93-3.91 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.49 (s, 2H), 2.95-2.93 (m, 2H), 2.78-2.76 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.04-1.99 (m, 2H), 1.88-1.83 (m, 2H).
Primer 205a 2-Nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 205a
2
Laboratorijska boca sa jednim vratom i okruglim dnom od 250 ml opremljenom magnetnom mešalicom napunjena je 1-(2-bromoetil)-5-(bromometil)-3-nitro-1H-pirazolom 125c (3,0 g, 9,64 mmol) u THF (35 mL) i vodenom amonijaku (135 mL, 25-28%). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 72 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je podeljen između etil-acetata (100 mL) i vode (100 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 x 50 ml). Organski sloj je ispran 10% natrijum-bisulfitom (150 ml x 2), zasićenim vodenim rastvorom natrijumhlorida (150 ml) i osušen iznad anhidrovanog natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 205a kao žuta čvrsta supstanca (1.23 g, 76%). MS: [M+H]<+>169
Primer 205b terc-butil 2-nitro-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-karboksilat 205b
U rastvor 205a (504 mg, 3,0 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) dodat je (Boc)2O (785 mg, 3,60 mmol) i DMAP (74 mg, 0,60 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa 100:1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 205b kao bela čvrsta supstanca (750 mg, 80%). MS-ESI: [M+H]<+>269,3
Primer 205c terc-butil 2-amino-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-karboksilat 205c
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml je isprana azotom i napunjena 205b (0.75 g, 2.80 mmol), 10% paladijuma na ugljenu (50% vlažan, 280 mg) i metanol (30 mL). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika i mešana na sobnoj temperaturi 2 h.
2
Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da bi se dobio 205c (524 mg, 79%). MS-ESI: [M+H]<+>239,1
Primer 205d terc-butil 2-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-karboksilat 205d
Laboratorijska boca od 50-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom je napunjena sa 205c (524 mg, 2,2 mmol), Pd2(dba)3(201 mg, 0,22 mmol), Ksantfos (254 mg 0,44 mmol), cezijum karbonat (1434 mg, 4,4 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana 4 sata na 100° C. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 205d (600 mg, 70%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>424,2
Primer 205e terc-butil 2-(5-(3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-il)-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-karboksilat 205e
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 205d (213 mg, 0,50 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2]-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (192 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2(41 mg, 0.050 mmol), natrijev acetat (82 mg, 1.0 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 205e (280 mg, 82%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>683,3
Primer 205f (4-(1-metil-6-okso-5-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 205f
Smeša od 205e (280 mg, 0.41 mmol), 4.0 M HCl/dioksana (4 ml) i dihlorometana (4 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom da se dobije 205f kao žuta čvrsta supstanca (165 mg, 66%), koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>583,3.
Primer 205 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-(4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 205
2 1
Smeša 205f (165 mg, 0.28 mmol) i litijum hidroksida (67 mg, 2.80 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je uparena u vakuumu i razblažena vodom (4 mL). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (10 ml x 2). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 205 (70 mg, 46%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>541,2.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.48 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.35 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.64-4.61 (m, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 4.16-3.99 (m, 6H), 3.89-3.87 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.30 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.63-2.57 (m, 4H), 1.92-1.89 (m, 2H), 1.80-1.78 (m, 3H).
Primer 206a terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilat 206a
Rastvor terc-butil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilata (3.5 g, 0.020 mol) u toluenu (200 mL) tretiran je imidazolom (4.08 g, 0.060 mol), trifenilfosfinom (0.60 g, 0.040 mol) i jodom (7,62 g, 0,030 mol). Smeša je zagrevana na 100°C tokom 1 h. Tada je ohlađena do sobne temperature i sipana u zasićeni NaHCO3rastvor (30 ml). Višak trifenilfosfina je uništen dodavanjem joda sve dok se boja joda nije zadržala u organskom sloju. Smeša je ispran sa 5% Na2SO3rastvor, sušeni preko Na2SO4i ispari u vakuumu. Ostatak je prečišćen
2 2
hromatografijom na koloni silika gela kako bi se dobilo 206a (prinos 5,31 g, 93%). MS-ESI:
[M+H]<+>284.
Primer 206b terc-Butil 3-(6-Nitropiridin-3-iloksi) azetidin-1-karboksilat 206b Smeša 206a (2.24 g, 7,9 mmol), 6-nitropiridin-3-ol (1,0 g, 7,2 mmol) i Cs2CO3(2,6 g, 7,9 mmol) u DMF (8 ml) zagrejana je na 125° C u zapečaćenoj epruveti preko noći. Vodena faza je isprana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani filtrat je uparen u vakuumu i ostatak je prečišćen reverznom fazom pomoću Combiflash da bi se dobio 206b (1,25 g, 59%). MS-ESI:
[M+H]<+>296.
Primer 206c terc-butil 3-(6-aminopiridin-3-iloksi) azetidin-1-karboksilat 206c 100-ml Parr-ova boca za hidrogenizaciju je prečišćena sa azotom i napunjena 206b (1.07 g, 3.6 mmol), 10% paladijuma na uglju (50% vlažan, 0.30 g) i metanol (60 mL). Boca je ispražnjena, napunjena vodonikom do pritiska od 25 psi i mućkana 2 h na aparatu Parr hidrogenacije. Vodonik je zatim evakuiran i azot napunjen u bocu. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da bi se dobio 206c (0.95 g, 99%). MS-ESI: [M+H]<+>266.
Primer 206d terc-butil 3-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-iloksi) azetidin-1-karboksilat 206d
U posudu sa okruglim dnom od 100 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjeni su 206c (950 mg, 3,6 mmol), Ksantfos (125 mg, 0,29 mmol), Pd2dba3(260 mg, 0,29 mmol), 3,5 dibrom-1-metilpiridin-2 (1H)-on (1,03 g, 3,9 mmol), Cs2CO3(1,8 g, 7,2 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Zatim se zagreva 2 h pod refluksom. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana i isprana metanolom (100 mL). Kombinovani filtrat je uparen u vakuumu, a ostatak je prečišćen reverznom fazom pomoću Combiflash radi dobijanja 206D (1,46 g, 90%). MS-ESI: [M+H]<+>451.
Primer 206e 3-(5-(azetidin-3-iloksi) piridin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on hidrohlorid 206e
Smeša 206d (1.46 g, 3.2 mmol) i HCl/1,4-dioksana (3.2 mL, 4M, 12.8 mmol) u metanolu (20 mL) je zagrevana na 80° C tokom 1 h. Smesa je zatim koncentrirana pod smanjenim pritiskom kako bi se dobilo 206e (1.24 g, 99%). MS-ESI: [M+H]<+>351.
Primer 206f 5-Bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-iloksi) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 206f
Smeša 206e (1.24 g, 3.2 mmol), 37% vodeni rastvor formaldehida (15 mL), sirćetna kiselina (1 mL) i NaBH (OAc)3(1.36 g, 6.4 mmol) u metanolu (10 mL) je mešana. na sobnoj temperaturi 4 h. Rastvarač je uparen u vakuumu i ostatak je ekstrahovan sa etil-acetatom (3 X
2
20 mL). Kombinovani ekstrakt je osušen iznad natrijum-sulfata i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom fazom pomoću Combiflash da bi se dobio 206f (940 mg, 80%). MS-ESI: [M+H]<+>365.
Primer 206g (4-(1-metil-5-(5-(1-metilazetidin-3-iloksi) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1)-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 206g
Boca od 100 mL sa okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 206f (108 mg, 0.30 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (115 mg, 0.30 mmol), Pd(dppf)Cl2(15 mg, 0.015 mmol), K3PO4(135 mg, 0.60 mmol), natrijum-acetat trihidrat (90 mg, 0.60 mmol) u acetonitrilu (10 mL) i vodi (0.5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 25: 1 dihlorometan/metanol, dajući 206 g (90 mg, 52%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>624,2.
Primer 206 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il) oksi-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 206 Smeša od 206g (93.6 mg, 0.15 mmol) i litijum hidroksida (65 mg, 1.5 mmol) u THF/ipropanolu (5: 3, 8 mL) i vodi (2 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena u vakuumu i razblažena vodom (3 mL). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 206 (35 mg, 42%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>582,3.<1>H NMR (500 MHz, CHCl3) δ 8.62 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.84 (e, 1H), 7,76 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,12-7,10 (m, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,81-6,80 (m, 1H), 5,07-5,04 (m, 1H), 4,77 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,33-4,30 (m, 1H). 4,16-4,10 (m, 2H), 3,97-3,88 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,25-3,24 (m, 2H), 2,63-2,57 (m, 4H), 2,51 (s, 3H).1.93-1.91 (m, 2H), 1.80-1.79 (m, 2H).
Primer 207a (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(1-metilazetidin-3-il) oksi] piridin-2-il} amino)-6-oksopiridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 207a
2 4
Jedna laboratorijska boca od 50 ml sa okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-iloksi) piridin-2-ilamino)-piridin-2 (1H)-on 206f (108 mg, 0.40 mmol), {3-[(acetyloxy) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diaza-tricikl.o [6.4.0.0<2 6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (240 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(20 mg, 0,02 mmol), K3PO4(180 mg, 0.80 mmol), natrijum-acetat trihidrat (120 mg, 0.80 mmol), voda (0.5 mL) i acetonitril (10 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 207a (100 mg, 45%) kao žuto smeđu čvrstu supstancu. LCMS-ESI: [M+H]<+>638,4.
Primer 207 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il) oksi-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 207
Smeša od 207a (90 mg, 0.15 mmol) i litijum hidroksida (65 mg, 1.5 mmol) u THF/ipropanolu (5: 3, 8 mL) i vodi (2 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena pod sniženim pritiskom i razblažena vodom (4 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 207 (30 mg, 38%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS: [M+H]<+>596,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,86-7,83 (m, 2H), 7.77 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,12-7,10 (m, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,81 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 5,07-5,04 m, 1H), 4,74-4,64 (m, 2H), 4,52-4,51 (m, 1H), 4,34-4,32 (m, 1H), 4,17-4,16 (m, 2H), 3,88-3,87 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,17-3,16 (m, 2H), 2,58 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,52 (s, 2H), 2,45 (s, 3H), 1,28 (s, 6H).
Primer 208a 5-Etil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 208a
2
Boca od 150 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom napunjena je metanolom (60 mL), 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazinom 205a (1,5 g 8,9 mmol), ZnCl2(2,43 g, 17,8 mmol), acetaldehida (784 mg, 17,8 mmol) i NaBH3CN (1.12 g, 17.8 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sati, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje 40: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 208a (1.4 g, 81%) kao žuto ulje. MS-ESI: [M+H]<+>197
Primer 208b 5-Etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 208b Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml je isprana azotom i napunjena 208a (1,4 g, 7,1 mmol), 10% paladijum na ugljenu (50% vlažan, 208 mg), metanol (30 ml) i vodonik. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u atmosferi vodonika tokom 2 h. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da se dobije 208b (1,0 g, 84%) kao žuto ulje. MS-ESI: [M+H]<+>167
Primer 208c 5-Bromo-3-(5-etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 208c
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 208b (1,0 g, 6,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (1,6) g, 6,0 mmol), Pd2(dba)3(274 mg, 0.30 mmol), Ksantfos (347 mg, 0.60 mmol), cezij karbonat (3,9 g, 12,0 mmol) i 1,4-dioksan (50 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je mešana na 100° C 3 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1
2
dihlorometan/metanolom da se dobije 208c (630 mg, 29%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>352
Primer 208d 3-(5-Etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1) 3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 208d
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (20 mL), 208c (350 mg, 0.99 mmol), bis (pinakolato) diborom (1.31 g) 4,99 mmol), Pd2(dba)3(45 mg, 0,050 mmol), X-fos (58 mg, 0,10 mmol) i kalijum acetat (291 mg, 2,97 mmol). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagreva se na 90° C tokom 3 h. Zatim je filtrirana i filtrat je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobio 208d (120 mg, 30%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>400,2
Primer 208e 4-(5-(5-Etil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidro-pirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 208e
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 208d (120 mg, 0,30 mmol), 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7) 8,9-heksahidropirido-[3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 139a (99 mg, 0,30 mmol), PdCl2(dppf) (13 mg, 0,015 mmol), K3PO4(127 mg, 0.60 mmol), natrijum-acetat (49 mg, 0.60 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 208e (95 mg, 56%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>567,2.
Primer 208 2-[4-[5-[(5-etil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 208
U smešu 208e (95 mg, 0.16 mmol) na 0° C u metanolu (10 mL) dodat je natrijumborohidrid (19 mg, 0.50 mmol). Reakciona smeša je mešana 30 h na 100°C, a zatim je reakcija prekinuta vodom (2 ml). Zatim se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 208 (8 mg, 9%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>569,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 2,0 Hz, 1H, 7.70 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.40 (e, 1H), 7,30 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,30 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 4,93-4,96 (m, 1H), 4,63-4,61 (m, 1H), 4,42-4,26 (m, 2H), 4.09 (s, 2H), 3.94-3.81 (m, 3H), 3.69-3.68 (m, preklapanje, 5H), 3.06-2.90 (m, 4H), 2.81 (d, J = 3.0 Hz),
2
2H), 2.66 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 2.04-2.00 (m, 2H), 1.88-1.85 (m, 2H), 1.20 (t, J = 7.5 Hz, 3H). Primer 209a 1-(2-Nitro-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-il) etanon 209a
U rastvor 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 205a, 672 mg, 4,0 mmol) u dihlorometanu (20 ml) dodat je acetil hlorid (936 mg, 12,0 mmol) i K2CO3(1104 mg, 8,0 mmol). Smeša je mešana preko noći. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa 100: 1 dihlormetan/metanol da bi se dobilo 209a kao bela čvrsta supstanca (500 mg, 60%). MS: [M+H]<+>211,2
Primer 209b 1-(2-Amino-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-il) etanon 209b Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml je prečišćena sa azotom i napunjena 209a (492 mg, 2,34 mmol), 10% paladijum na ugljenu (50% vlažan, 234 mg) i metanol (20 mL). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika i mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da bi se dobio 209b (380 mg, 80%). MS: [M+H]<+>181,1
Primer 209c 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-brom-1-metilpiridin-2 (1H)-on 209c
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (481 mg, 1,8 mmol), 209b (270 mg, 1,5 mmol), 1,4-dioksan (20 ml), Pd2(dba)3(137 mg, 0.15 mmol), Ksantfos (173 mg, 0.30 mmol) i cezij karbonata (978 mg, 3.0 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 6 h. Nakon ovog
2
vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 209c (540 mg, 89%) kao žuta čvrsta supstanca. MS:
[M+H]<+>368,0
Primer 209d 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1) 3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 209d
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 209c (365 mg, 1.0 mmol), Pin2B2(1.26 g, 5.0 mmol), Pd2(dba)3(91 mg, 0.10 mmol), X-fos (92 mg, 0.20 mmol), AcOK (294 mg, 3.0 mmol) i dioksan (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 60° C 16 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 metilen hlorid/metanolom da se dobije 209d kao smeđa čvrsta supstanca (330 mg, 80%). MS: [M+H]<+>414,2
Primer 209e (4-(5-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 209e
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 209d (185 mg, 0,50 mmol), (4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino-[1,2]-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 113h (192 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2(41 mg, 0.050 mmol), natrijev acetat (82 mg, 1.0 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), voda (0.5 mL) i acetonitril (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 209e (150 mg, 48%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>625,4
Primer 209 2-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 209
Smeša 209e (150 mg, 0.24 mmol) i litijum hidroksida (58 mg, 2.4 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša je uparena u vakuumu i razblažena vodom (4 mL). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 209 (75 mg, 53%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>583,3.<1>H NMR (500 MHz, T = 80° C, DMSO-d6) δ 8.44 (d, J =
2
8,5 Hz, 1H), 7,93-7,90 (m, 2H), 7.34 (d, J = 4,5 Hz, 1H 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 4,72-4,63 (m, 3H), 4,45-4,43 (m, 2H), 4,16-4,10 (m, 3H), 3.99-3.86 (m, preklapanje, 5H), 3.58 (s, 3H), 2.62-2.57 (m, 2H), 2.49-2.47 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.83-1.77 (m, 2H), 1.72-1.68 (m, 2H).
Primer 210A 4-hlor-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o-[6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridine-3-karboksilna kiselina 210a
U mešavinu 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeke-2 (6), 7-dien-10-il} piridina-3-karbaldehid 108a (500 mg, 1.46 mmol), terc-butil alkohol (20 mL) i dihlorometan (5 mL) je dodat 2-metil-2-buten (3066 mg, 43.8 mmol). Vodeni rastvor (8 ml) NaClO2(263 mg, 2.92 mmol) i NaH2PO4· 2water (683 mg, 4.38 mmol) je dodat u kapima na-10° C, a reakcijska smeša je mešana na-10° C za preko noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen etil-acetatom (4 × 20 ml). Kombinovani organski ekstrakt je osušen iznad MgSO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 210a (315 mg, 60%) kao blijedo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>360,1
Primer 210b 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karboksilna kiselina 210b Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 25 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 210a (400 mg, 1,1 mmol), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin2 (1H)-on 191j (536 mg, 1,1 mmol), PdCl2(dppf) (81 mg, 0.11 mmol), K3PO4(466 mg, 2,2 mmol), natrijev acetat (216 mg, 2,2 mmol), acetonitrilu (10 ml), i voda (0.2 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petroleumom/ etilacetatom 1:3 daju'i 210b kao žutu čvrstu supstancu (306 mg, 41%). MS-ESI: [M+H]<+>679,3
Primer 210 2-(7,7-dimetil-4-okso-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-3-il)-4-[1-metil 5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil] piridin-3-karboksamid 210
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 25 mL je napunjena 210b (300 mg, 0.44 mmol), trietilaminom (1 mL), DMAP (5 mg, 0.040 mmol), HATU (250 mg, 0.66 mmol) i DMF (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0,5 sat. Zatim se polako doda 37% vodeni amonijak (15 mL) i reakcija se meša na sobnoj temperaturi još 2,5 h. Smeša je tretirana sa 20 mL vode i ekstrahovana sa dihlorometanom (3 X 20 mL). Kombinovani organski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen preparativnom HPLC rezerve faze da bi se dobio 210 (98 mg, 33%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>678,3.<'>H NMR (500 MHz, DMSO) 88,71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,84 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,45-7,42 (m, 2H), 7,38-7,36 (m, 1H), 7,24-7,22 (m, 1H), 6,49 (s, 1H), 4.57-4.54 (m, 2H), 4.48-4.47 (m, 1 H), 4.43-4.40 (m, 1H), 4.12-4.11 (m, 2H), 4.04-4.00 (m, 2H), 3.67-3.66 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,42-3,37 (m, 1H), 3,10-3,08 (m, 1H), 2,97-2,92 (m, 1H), 2,55-2,53 (m, 3H), 2,41 (s, 2H), 2.36-2.29 (m, 2H), 2.21-2.18 (m, 1H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.0 Hz, 3H)
Primer 211 2-(7,7-dimetil-4-okso-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-3-il)-N-metil-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil; piridin-3-karboksamid 211
U laboratorijsku bocu sa okruglim dnom napunjen je 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karboksilna kiselina 210b (300 mg, 0.44 mmol), trietilamin (1 mL), DMAP (5 mg, 0.040 mmol), HATU (250 mg, 0.66 mmol), i DMF (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0,5 sat. Onda CH3NH2(27 mg, 0.88 mmol) je dodat polako i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi još 2,5 h. Smeša je tretirana vodom (20 mL) i ekstrahovana pomoću EA (20 mL x 3). Kombinovani organski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom i
1
ostatak je prečišćen preparativnom HPLC rezerve faze da bi se dobio 211 (106 mg, 35%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>692,5.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.71 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8,11-8,08 (m, 1H), 7,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,44-7,41 (m, 2H), 7,38-7,35 (m, 1H), 7,24-7,22 (m, 1H), 6,48 (s, 1H), 4,58-4.56 (m, 2H), 4.48-4.46 (m, 1H), 4.43-4.41 (m, 1H), 4.08-4.07 (m, 2H), 3.97-3.94 (m, 2H), 3.66-3.65 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.41-3.39 (m, 1H), 3.10-3.08 (m, 1H), 2.97-2.93 (m, 1H), 2.56 (s, 2H), 2.53-2.48 (m, preklapanje, 4H), 2.37-2.36 (m, 2H), 2.35-2.31 (m, 2H), 2.29-2.19 (m, 1H), 1.21 (s, 6H), 0.93 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Primer 212a {4-[5-({5-acetil-4H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-1-metil-6-oksopiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>]-dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il} metil-acetat 212a
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom stavljen je 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-brom-1-metilpiridin-2 (1H)-on 209c (185 mg, 0.50 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4. 0,0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (200 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2(41 mg, 0.050 mmol), natrij acetat (82 mg, 1,0 mmol), K3PO4(212 mg, 1,0 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 212a (180 mg, 56%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>639,3
Primer 212 3-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 212
Smeša 212a (180 mg, 0.28 mmol) i litijum hidroksida (67 mg, 2.8 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena u vakuumu i razblažena vodom (4 mL). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani ekstrakt etil-acetata se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti
2
preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 212 (70 mg, 42%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>597,3.<1>H NMR (500 MHz, T = 80° C, DMSO-d6) δ 8.47 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7,37 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,00 (s, 1H), 4,66 (bs, 2H), 4,47 (s, 2H)), 4.20-4.18 (m, 3H), 4.00-3.99 (m, 3H), 3.92-3.88 (m, 3H), 3.61 (s, 3H), 2.59 (s, 2H), 2.46 (s, 2H), 2,11 (s, 3H), 1,25 (s, 6H).
Primer 213a 5-Bromo-1-metil-3-(2-metilpirimidin-4-ilamino) piridin-2 (1H)-on 213a
Prateći procedure opisane u Primeru 196, reakcija 2-metilpirimidin-4-amina (2.0 g, 18.3 mmol) i 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (9.6 g, 36 mmol) dala je 213a kao žuta čvrsta supstanca (2.3 g, 43.4%). MS: [M+H]<+>295.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.20 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.26 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.18 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 2.52 (s, 3H).
Primer 213b 1-Metil-3-(2-metilpirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-jedan 213b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je bis (pinakolato) diborom (689 mg, 2,61 mmol), 1,4-dioksanom (30 ml), 213a (307 mg) 1.04 mmol), Pd2(dba)3(47 mg, 0.050 mmol), X-phos (48 mg, 0.10 mmol) i kalijum acetat (305 mg, 3.12 mmol). Smeša je zagrevana na 65°C tokom 6 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari pod vakuumom, dajući 213b (300 mg, 84%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>342,2
Primer 213c 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(2-metilpirimidin-4-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 213c
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nicotinaldehyde 134c (150 mg, 0.43 mmol), 213b (147 mg 0.43 mmol), Pd(dppf)Cl2(35 mg, 0.043 mmol), natrij acetat (71 mg, 0.86 mmol), K3PO4(182 mg, 0.86 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (15 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 2,5 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40:1 dihlorometanom/metanolom ddajući 213c kao žutu čvrstu supstancu (130 mg, 57%). MS-ESI: [M+H]+ 528,2.
Primer 213 10-fluoro-2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 213 U rastvor 213c (120 mg, 0.23 mmol) na 0° C u metanolu (10 mL) dodat je natrijumborohidrid (26 mg, 0.69 mmol). Reakciona smeša je mešana 20 h na 100°C, a zatim je reakcija prekinuta vodom (10 ml). Zatim se ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 20 ml) i kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 213 (62 mg, 44 %) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>530,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,11 (e, 1H), 8,93 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,96 (t, J = 5,5 Hz), 1H), 4,57-4,45 (m, 2H), 4,23-4,18 (m, 2H), 4,08-4,05 (m, 1H), 3,90-3,87 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,64-2,56 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,43-2,42 (m, 2H), 1,78-1,76 (m, 2H), 1,72-1,66 (m, 2H).
Primer 214a 3-bromo-5-jodopiridin-2-ol 214a
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom napunjena je acetonitrilom (50 mL), trifluorosirćetnom kiselinom (10 mL), 3-bromopiridin-2-olom (4.0 g, 11.56 mmol) i N-jodosukcinimidom (5.2 g, 11.56 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 15 sat. Smeša je razblažena vodom (100 mL) i rezultujuća bela čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da bi se dobilo 214a (6.6 g, 96%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>300
4
Primer 214b 3-bromo-5-jodo-1-metilpiridin-2 (1H)-on 214b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom, napunjena je DMF (50 mL), 214a (6,0 g, 20.0 mmol), jodometanom (4,26 g, 30.0 mmol) i K2CO3(5,52) g, 40,0 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, a zatim je reakcija razblažena vodom (200 ml). Dobijena bela čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom da bi se dobilo 214b (5,97 g, 95%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>314
Primer 214c [4-(5-Bromo-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4. 0,0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 214c
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 214b (1.57 g, 5.0 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>-dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (1,98 g, 5,0 mmol), PdCl2(dppf) (205 mg, 0.25 mmol), K3PO4(2.12 g, 10.0 mmol), natrijev acetat (820 mg, 10,0 mmol), acetonitrilu (45 ml), i vode (1 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 3 sati. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 214c (580 mg, 22%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>539,2.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.09 (d J = 5.0 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.55-4.51 (m, 1H), 4.27-4.25 (m, 1H), 4.15-4.13 (m, 1H), 4.06-4.04 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.58-2.56 (m, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.28 (s, 6H).
Primer 214d (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-6-okso-5-({4H, 6H, 7H-pirano [4,3-d] [1,3] tiazol-2-il} amino)-1,6-dihidro-piridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 214d
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (10 mL), 214c (150 mg, 0.28 mmol), Pd2(dba)3mg, 0.030 mmol), Ksantfos (35 mg, 0.060 mmol) i cezijum karbonat (183 mg, 0.56 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 10 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 214d (89 mg, 52%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>615,2
Primer 2143-[4-[5-(6,7-dihidro-4H-pirano [4,3-d] tiazol-2-ilamino)-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 214
Smeša 214d (89 mg, 0.14 mmol), litijum hidroksid (35 mg, 1.45 mmol) i voda/THF/ipropanol (3 mL/5 mL/5 mL) je mešana na 30° C tokom 2 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (2 X 10 mL). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 214 (45 mg, 50%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>573,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.01 (s, 1H), 8.67 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.96-4.94 (m, 1H), 4.61 (s, 2H), 4.46-4.43 (m, 2H), 4.22-4.17 (m, 3H), 3.89-3.87 (m, 3H), 3.61 (s, 3H), 2.62-2.57 (m, 4H), 2.43 (s, 2H), 1.22 (s, 6H).
Primer 215a 3-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-5-{1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-4-karbaldehid 215a
Zapečaćena epruveta je napunjena 3-bromo-5-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo-[6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-karbaldehid 107f (210 mg, 0,54 mmol), 1-metil-3-(pirimidin-4-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2-on 213b (177 mg, 0.54 mmol), PdCl2(dppf) (42 mg, 0.050 mmol), K3PO4(210 mg, 1,0 mmol) i natrijev acetat (85 mg, 1.0 mmol), acetonitril (8 mL) i voda (0.5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana 4 sata na 100° C. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 20: 1 dihlorometan/metanol, dajući 215a (150 mg, 53%). MS-ESI: [M+H]<+>524,2.
Primer 215 3-[4-(hidroksimetil)-5-[1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il) amino]-6-okso-3-piridil]-3-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 215
Smeša 215a (150 mg, 0,28 mmol, 1,0 ekv.) i NaBH4(20 mg, 0,50 mmol, 2,0 ekv.) u metanolu (5 mL) mešana je na 25°C tokom 0,2 h. Smeša je ugašena vodom (5 ml) i uparena pod vakuumom. Ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 215 (80 mg, 53%). MS-ESI: [M+H]<+>526,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,09 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,20 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,13 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,52 (s, 1H), 5,19-5,18 (m, 1H), 4,47-4,46 (m, 2H), 4,23-4,20 (m, 3H), 3,95-3,93 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,57 (s, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,41 (s, 2H), 1,21 (s, 6H).
Primer 216a 1-Metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo [5,4-c] piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1) 3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 216a
5-Bromo-1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo [5,4-c] piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 203b (997 mg, 2,8 mmol) je otopljen u dioksanu (50 ml), zatim dodavanjem bis (pinacolato) diboron (3,0 g, 12,0 mmol), Pd2(dba)3(128 mg, 0.14 mmol), X-phos (134 mg, 0.28 mmol) i kalijum acetata (823 mg, 8.4 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 65° C 2 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat se koncentriše pod pritiskom i ostatak se ispere petroleum etrom (2 x 10 ml) da se dobije 216a kao žuta čvrsta supstanca (968 mg, 86%), koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>403,2 Primer 216b 4-[1-metil-5-({5-metil-4H, 6H, 7H-[1, 3] tiazolo [5,4-c] piridin-2-il} amino)-6-oksopiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 216b
Laboratorijska boca okruglog dna opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9)), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (138 mg, 0.40 mmol), 216a (240 mg, 0.60 mmol), PdCl2(dppf) (20 mg, 0.020 mmol), K3PO4(180 mg, 0.80 mmol), natrijum-acetat trihidrat (120 mg, 0.80 mmol), voda (6 kapi) i acetonitril (15 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se upari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25:1 dihlorometanom/metanolom, dajući 216b kao žutu čvrstu supstancu (100 mg, 45%). MS-ESI: [M+H]<+>586,2.
Primer 216 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-tiazolo [5,4-c] piridin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno [2,3-d] piridazin-4-on 216
U rastvor jedinjenja 216b (100 mg, 0,15 mmol) u metanolu (6 mL) dodat je NaBH4(18 mg, 0,45 mmol). Reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 1 sata, a zatim je reakcija ugašena slanim rastvorom (10 ml). Zatim je uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (2 x 20 mL) i kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobiveni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 216 kao bela čvrsta supstanca (40 mg, 40%). MS-ESI: [M+H]<+>588,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.68 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.79 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.43-4.39 (m, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.57-3.55 (m, 2H), 3.00-2.98 (m, 2H), 2.88-2.86 (m, 2H), 2.82-2.80 (m, 4H), 2.50 (s, 3H), 2.03-1.95 (m, 4H).
Primer 217a (4-(5-Bromo-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 217a
Skalirana epruveta sa magnetnom mešalicom napunjena je 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (766 mg, 2.0 mmol), 3-bromo-5-jodo-1-metilpiridin-2 (1H)-on 214b (626 mg, 2.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(164 mg, 0.20 mmol), natrijum-acetat (328 mg, 4,0 mmol), K3PO4(848 mg, 4,0 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je mešana na sobnoj temperaturi 5 sati. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50:1 dihlorometan/metanolom da se dobije 217a (700 mg, 67%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>525,2
Primer 217b (4-(5-(1H-imidazo [4,5-b] piridin-5-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 217b
Posuda od 25 mL sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjena je 217a (158 mg, 0,30 mmol), 1H-imidazo [4,5-b] piridin-5-aminom (80 mg, 0.60 mmol), Pd2(dba)3(27 mg, 0.030 mmol), Ksantfos (35 mg, 0,061 mmol), cezij karbonata (200 mg, 0.60 mmol) i 1,4-dioksan (5 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša je mešana na 100° C tokom 6 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 217b (40 mg, 23%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>579,4
Primer 217 2-[3-(hidroksimetil)-4-[5-(1H-imidazo [4,5-b] piridin-5-ilamino)-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 217
Smeša 217b (40 mg, 0.070 mmol) i litijum hidroksida (26 mg, 0.70 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smesa je uparena u vakuumu i ostatak je razrijeđen vodom i etil-acetatom. Vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 30 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 217 (15 mg, 40%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>537,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,62 (s, 1H), 8,91-8,64 (m, 2H), 8,52 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,19-8,06 (m, 1H), 7,89-7,79 (m, 1H), 7,57-7,53 (m, 1H), 7,43-7,40 (m, 1H), 7,22 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,06-4,96 (m, 1H), 4,5-4,40 (m, 2H), 4,26-4,11 (m, 3H), 3,88-3,85 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,62-2,54 (m, 2H), 2,50-2,48 (m, 2H), 1,81-1,79 (m, 2H), 1,71-1,67 (m, 2H).
Primer 218a 5-bromo-3-(1, 5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 218a
Obrađen je rastvor 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-ona (2.8 g, 9.9 mmol) u bezvodnom DMF (10 mL). sa 60% disperzijom NaH u mineralnom ulju (0.51 g, 13 mmol) uz mešanje pod azotom. Nakon upuhivanja reakcija se meša dodatnih 30 minuta. U to vreme reakcija je tretirana jodometanom (0.98 g, 7.0 mmol) uz nastavljeno mešanje pod azotom tokom 2 sata. Polako je dodata voda (50 mL) i smeša je filtrirana. Rastvor je ekstrahovan etil-acetatom (3 x 30 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na koloni uz eluiranje sa 3: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 218a (0,70 g, 24%). MS: [M+H]<+>297.
Primer 218b (4-{5-[(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il) metil-acetat 218b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 218a (130 mg, 0,44 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7). 8-tetrahidro-1H-ciklo-penta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) boronska kiselina 199e (175 mg, 0.44 mmol), PdCl2(dppf) (36 mg, 0.044 mmol), K3PO4(343 mg, 1.32 mmol), natrijev acetat (108 mg, 1.32 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan da se dobije 218b kao crvena čvrsta supstanca (103 mg, 42%). MS-ESI: [M+H]<+>570,2
Primer 218 3-[4-[5-[(1, 5-dimetilpirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7, 7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 218
Smeša 218b (103 mg, 0.17 mmol), litijum hidroksida (42 mg, 1.75 mmol), THF (3 mL), i-propanola (2 mL) i vode (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i razblažena vodom (4 mL). Zatim je ekstrahovana sa dihlorometanom (10 mL X 2) i kombinovani ekstrakt dihlorometana je
1
koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 218 (29 mg, 48%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI:
[M+H]<+>528,4.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 8.02 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 7.38 (d J = 2.0 Hz, 1 H), 7.32 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 6.55 (s, 1 H), 5.89 (s, 1 H), 4.97 (s, 1 H), 4.48-4.39 (m, 2H), 4,24-4,16 (m, 3H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 2,62-2,56 (m, 2) H), 2,42 (s, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Primer 219a 3-(3-aminofenilamino)-5-brom-1-metilpirazin-2 (1H)-on 219a
U rastvor 3,5-dibrom-1-metilpirazin-2 (1H)-ona (536 mg, 2,0 mmol) i benzen-1, 3-diamina (324 mg, 3,0 mmol) u izopropanolu (18 ml) je dodat trietilamin (2.8 mL). Reakciona smeša je mešana na 80°C preko noći. Zatim je smeša isparena pod sniženim pritiskom da se dobije 219a (480 mg, 81%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>295,0
Primer 219b (4-{6-[(3-aminofenil) amino]-4-metil-5-okso-4,5-dihidropirazin-2-il}-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il) metil-acetat 219b
U posudu sa jednim vratom sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 219a (480 mg, 1.62 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) boronska kiselina 199e (1,61 g, 4.05 mmol), Pd(dppf)Cl2(134 mg, 0.162 mmol), kalijum-acetat (318 mg, 3.24 mmol), K3PO4(706 mg, 3.24 mmol), acetonitrilu (20 ml), i vode (8 kapi). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 100° C 2h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 etil-acetat/metanol da bi se dobilo 219b (354 mg, 38%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>568,3
Primer 219 3-[4-[6-(3-aminoanilino)-4-metil-5-okso-pirazin-2-il]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1, 2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 219
Smeša 219b (283.5 mg, 0.50 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (630 mg, 15.0
11
mmol) u i-propanol/THF (1: 1, 8 mL) i voda (2 mL) je mešana na 35° C tokom 0.5 h. Smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je razblažen vodom (3 mL). Zatim je ekstrahovana dihlorometanom (3 X 20 mL). Kombinovani dihlorometanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 219 (170 mg, 79%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>526,4.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.85 (s, 1H), 8.47 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.92-6.91 (m, 2H), 6.57 (s, 1H), 6.24-6.22 (m, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.84-4.75 (m, 2H), 4.49-4.46 (m, 1H), 4.30-4.26 (m, 1H), 4.20-4.19 (m, 2H), 3.95-3.92 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 2.62-2.54 (m, 2H), 2.43 (s, 2H), 1.23 (s, 6H).
Primer 220a (S)-2-hloro-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 220a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 191j (1,5 g), 1.0 eq., 3.11 mmol), 4-bromo-2-chloronicotinaldehyde 104A (1,02 g, 1,5 ekv., 4.67 mmol), PdCl2(dppf) (130 mg, 0,05 ekv., 0.16 mmol), K3PO4(1.32 g, 2 ekv., 6.22 mmol), natrijum-acetat (510 mg, 2.0 ekv., 6.22 mmol), acetonitril (35 mL), i voda (1.0 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod
12
sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/etanol, dajući 220a (1.1 g, 71%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>495,3.
Primer 220b (S)-2-(3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5)-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 220b
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 220a (300 mg, 1,0 ekv., 0,61 mmol), 1,2,3,4,6,7,8, 9-oktahidropirazino [1,2-a] indol (128 mg, 1,2 ekv., 0,73 mmol), Pd2(dba)3(55 mg, 0,1 ekv., 0,060 mmol), X-Phos (30 mg, 0,1 ekv.), 0.060 mmol), Cs2CO3(390 mg, 2.0 ekv., 1.22 mmol) i dioksana (15.0 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 16 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometan/EtOH, dajući 220b (100 mg, 26%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>635,3.
Primer 220 5-[2-(3,4,6,7,8,9-heksahidro-1H-pirazino [1, 2-a] indol-2-il)-3-(hidroksimetil)-4-piridil]-1-metil-3-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino] piridin-2-on 220
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom napunjena je 220b (100 mg, 1,0 ekv., 0,15 mmol), NaBH4(30 mg, 5,0 ekv., 0,75 mmol), metanol (5 ml), i dihlormetana (5 mL). Smeša je mešana na 0° C tokom 10 min i ugašena sa vodom (5 mL). Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (10 mg, 10%). MS-ESI: [M+H]<+>637,5.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-a6) Z 8.61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.24 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,39-7,36 (m, 1H), 7,24 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,55 (s, 1H), 5,36-5,35 (m, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,48-4,40 (m, 6H), 3,92-3,90 (m, 2H), 3,79-3,67 (m, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.40-3.37 (m, 2H), 3.09-3.07 (m, 1H), 2.95-2.92 (m, 1H), 2.55-2.51 (m, 2H), 2.38-2.30 (m, 4H), 2.17-2.16 (m, 1H), 1.75-1.74 (m, 2H), 1.68-1.65 (m, 2H), 0.92 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 221a 3-[(6-aminopiridin-2-il) amino]-5-bromo-1-metil-1, 2-dihidropiridin-2-on 221a
1
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (20 mL), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-onom (1,06 g, 4,0 mmol), piridin-2,6-diamin (872 mg, 8,0 mmol), Pd2(dba)3(732 mg, 0,80 mmol), Ksantfos (462,4 mg, 0,80 mmol) i cezij karbonat (2,6 g, 8,0 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 110° C 1 sat. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 etil-acetat/metanol da bi se dobilo 221a (570 mg, 48%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>295,0
Primer 221b (4-{5-[(6-Aminopiridin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-OXO-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il) metil-acetat 221B
Posuda od 25 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 221a (354 mg, 1,2 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) boronska kiselina 199e (1,20 g, 3.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(99 mg, 0.12 mmol), kalijum-acetat (235 mg, 2,4 mmol), K3PO4(532 mg, 2,4 mmol), acetonitrilu (12 ml), i vode (10 kapi). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 etil-acetat/metanol da bi se dobilo 221b (210 mg, 31%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>568,3
Primer 221 3-[4-[5-[(6-amino-2-piridil) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 221
Smeša 221b (181 mg, 0.32 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (148 mg, 3.2 mmol) u i-propanol/THF (1: 1, 6 mL) i voda (1.5 mL) je mešana na 35° C tokom 0.5 h. Smesa je koncentrirana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze kako bi se dobilo 221 (82 mg, 49%) kao blijedožuta čvrsta supstanca. MS-ESI:
14
[M+H]<+>526,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.84 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.54 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,36 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,91 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,79 (bs, 2H), 5,07 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,58-4,47 (m, 2H), 4,27-4,20 (m, 3H), 3,90 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,62-2,57 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Primer 222a N-(5-hloro-2-metoksipiridin-3-il)-2-metilpirimidin-4-amin 222a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (30 mL), 3-bromo-5-hloro-2-metoksipiridinom (865 mg, 3.9 mmol), 2-methylpirimidin-4-amina (327 mg, 3.0 mmol), Pd2(dba)3(275 mg, 0.30 mmol), Ksantfos (173.4 mg, 0.30 mmol) i cezij karbonat (1,96 g, 6,0 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 5: 1 etil-acetat/petrolej etrom da se dobije 222a (555 mg, 74%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>251,0
Primer 222b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{6-metoksi-5-[(2-metilpirimidin-4-il) amino] piridin-3-il} piridin-3-il) metilacetat 222b
Zapečaćena epruveta sa magnetnom mešalicom napunjena je 222a (550 mg, 2,2 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) borna kiselina 199e (2,18 g, 5,5 mmol), Pd2(dba)3(201
1
mg, 0,22 mmol), tricikl.ohexylphospine (84 mg, 0.30 mmol), Cs2CO3(1,43 g, 4,4 mmol), dioksan (12 ml), i vode (1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 110° C 4 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 etil-acetat/metanol, dajući 222b (310 mg, 25%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>568,6
Primer 222c 10-[3-(hidroksimetil)-4-{6-metoksi-5-[(2-metilpirimidin-4-il) amino] piridin-3-il} piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 222c
Smeša 222b (283.5 mg, 0.50 mmol) i litijum hidroksid monohidrat (630 mg, 15.0 mmol) u i-propanol/THF (1: 1, 10 mL) i voda (2.5 mL) je mešana na 35° C tokom 0.5 h. Smeša je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (3 ml). Zatim je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 20 ml). Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani pod sniženim pritiskom dajući 222c (240 mg, 92%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>526,2
Primer 222 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[(2-metilpirimidin-4-il) amino]-6-okso-1H-piridin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 222
U rastvor jedinjenja 222c (226 mg, 0,43 mmol) u dioksanu (8 mL) dodata je HCl (1,1 mL). Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 1 sata. Onda je smeša prilagođena pH 7,0 uvođenjem zasićenog vodenog NaHCO3.Ekstrahuje se sa dihlorometanom (3 x 20 ml) i kombinovani ekstrakt se upari pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 222 (30 mg, 14%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>512,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.24 (s, 1H), 9.10 (s, 1H), 8.96 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 5.08-5.06 (m, 1H), 4.50-4.42 (m, 2H), 4.25-4.19 (m, 3H), 3.87-3.85 (m, 1H), 2.62-2.53 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.43 (s, 2H), 1.23 (s, 3H), 1.22 (s, 3H)
Primer 223a 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo [5,4-c] piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 223a
1
Ispiranje okrugle dnom od 50 ml opremljeno refluksnim kondenzatorom napunjeno je sa 1-metil-3-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidrotiazolo [5,4-c] piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 216a (200 mg, 0.50 mmol), 4-hloro-2-(10-fluor-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nicotinaldehyde 134c (174 mg, 0,50 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), natrijum-acetat (82 mg, 1.0 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (21 mg, 0.025 mmol) i acetonitril/voda (15/1 mL)). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (50 ml) i vodom (50 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (70/1 do 30/1) da se dobije 223a (167 mg, 57%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>588,1
Primer 223 10-fluoro-2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-tiazolo [5,4-c] piridin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 223
Spoj 223a (160 mg, 0.27 mmol) je otopljen u metanolu (30 ml), zatim dodavanjem NaBH4(31 mg, 082 mmol) na 0° C. Reakciona smeša je mešana 30 min i zatim je ugašena vodom (10 mL). Koncentruje se pod sniženim pritiskom i ostatak se ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 30 ml). Kombinovana organska faza se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 223 (56 mg, 35%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>590,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 9.92 (s, 1H), 8.64 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.93 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.46-4.41 (m, 2H), 4.19-4.17 (m, 2H), 4.08-4.03 (m, 1H), 3.88-3.85 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.42 (s, 2H), 2.63-2.58 (m, 6H), 2.41 (s, 3H), 2.34 (s, 2H), 1.78-1.76 (m, 2H), 1.68-1.66 (m, 2H).
1
Primer 224a (S)-terc-butil 4-(6-(6-hloro-2-metil-3-okso-2,3-dihidropiridazin-4-ilamino) piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 224a
U posudu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je (S)-terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 191f (2,5 g, 8,5 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (2,2 g, 10,0 mmol), Ksantfos (240 mg, 0,40 mmol), tris (dibenzilidenaceton) dipaladij (0) (360 mg, 0,40 mmol), Cs2CO3(5,5 g, 17 mmol) i 1,4-dioksan (100 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 2,5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40: 1 do 30: 1), dajući 224a kao bledo žutu čvrstu supstancu (3,2 g, 86%). MS-ESI: [M+H]<+>435,1.
Primer 224b (S)-6-hloro-2-metil-4-(5-(2-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridazin-3 (2H)-on 224b
Smeša 90-C-7 (3,0 g, 6,9 mmol, 1,0 ekv.) u HCl/MeOH (3M, 20 mL) mešana je na 80°C tokom 2 h. Smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući sirovinu 224b kao žutu čvrstu supstancu (2,5 g, 98%) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>335,1.
Primer 224c (S)-6-hloro-2-metil-4-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridazin-3 (2H))-on 224c
Smeša jedinjenja 224b (2,3 g, 1 mmol), HATU (1,4 g, 1 mmol), NH3Cl (620 mg, 10
1
mmol) i DIPEA (1,36 g, 10 mmol) u THF-u (20 mL) mešana je 3 sata na 50°C. Smeša je dodata u vodu (40 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj je osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50:1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 224c (2,0 g, 75%). MS-ESI: [M+H]<+>391,2.
Primer 224D (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2 S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 224d
Zapečaćena epruveta sa magnetnom mešalicom napunjena je 224c (200 mg, 0.50 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (240 mg, 0,60 mmol), Pd(dppf)Cl2(18 mg, 0,025 mmol), natrijev acetat (74 mg, 0,90 mmol), K3PO4(191 mg, 0,90 mmol), i acetonitrilom/vodom (6: 1, 3.5 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 1 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se upari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 224d (180 mg, 51%) kao braon čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>708,3.
Primer 224 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2;-piridil] amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 224
Smeša 224d (180 mg, 0,25 mmol) i litijum hidroksida (72 mg, 3,0 mmol) u ipropanol/THF (5/3 mL) i voda (2 mL) je mešana na 35° C tokom 0,2 h. Smeša je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je rekstrahovan etil-acetatom (10 mL X 2l). Kombinovani Ekstrakt etil-acetata je koncentrirana pod sniženim pritiskom, a ostatak je prečišćen reverznofaznim eluiranjem pomoću Combiflash sa 0,3% NH4HCO3u vodi/acetonitrilu za dobijanje 224 (54 mg, 33%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>666,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.29 (e, 1H), 8.52 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7,43-7,42 (m, 2H), 7,40-7,39 (m, 1H), 6,55 (s, 1H), 4,77-4,75 (m, 1H), 4,57-4,55 (m, 3H), 4,48-4,47 (m, 1H), 4,43-4,41 (m, 2H), 4,28-4,26 (m, 1H), 4,19-4,18 (m, 2H), 3,88-3,86 (m, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,38-3,37 (m, 1H), 3,21-3,19 (m, 1H), 2,98-2,96 (m, 1H), 2,64-2,62 (m, 1H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,42-2,41 (m, 3H), 2,26-2,25 (m, 1H), 2.11-2.09 (m, 1H), 1.21 (s, 6H), 0.98 (d, J = 5.5 Hz, 3H).
Primer 225a 6-hloro-2-metil-4-(2-metilpirimidin-4-ilamino) piridazin-3 (2H)-on 225a
1
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 2-metilpirimidin-4-amin (330 mg, 3,03 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H).-on (675 mg, 3.03 mmol), Pd2(dba)3(274 mg, 0.30 mmol), Ksantfos (143 mg, 0.30 mmol), Cs2CO3(2960 mg, 9.09 mmol) i dioksan (40 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana preko noći na 100° C. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan da se dobije 225a kao žuta čvrsta supstanca (560 mg, 73%). MS-ESI: [M+H]<+>252,1
Primer 225b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 225b
Laboratorijska boca okruglog dna opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 225a (200 mg, 0,80 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) borna kiselina 199e (318 mg, 0.80 mmol), PdCl2(dppf) (65.3 mg, 0.080 mmol), K3PO4(624 mg, 2,4 mmol), natrijev acetat (200 mg, 2,4 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan da se dobije 225b kao crvena čvrsta supstanca (150 mg, 47%). MS-ESI: [M+H]<+>569,3
Primer 225 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(2-metilpirimidin-4-il) amino]-6-oksopiridazin-3-il]-2-piridil]-7;, 7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 225
Smeša 225b (120 mg, 0.21 mmol), litijum hidroksida (59 mg, 2.11 mmol), THF (6 mL), i-propanola (4 mL) i vode (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Smesa je koncentrirana pod sniženim pritiskom i razrijeđena vodom (3 mL). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 225 kao
2
bela čvrsta supstanca (29 mg, 48%). MS-ESI: [M+H]<+>527,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,82 (s, 1 H), 8.88 (s, 1 H), 8.54 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 8.37 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 7,44 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 7,34 (d, J = 3,5 Hz, 1 H), 6,56 (d, J = 4,0 Hz, 1 H), 4,87 (t, J = 1.5 Hz, 1 H), 4.67 (d, J = 11.5 Hz, 1 H), 4.42 (d, J = 12.5 Hz, 1 H), 4.29-4.25 (m, 1 H), 4.20 (bs, 2 H), 3,93 (d, J = 9,5 Hz, 1 H), 3,81 (s, 3 H), 2,62-2,58 (m, 2 H), 2,50-2,49 (m, ispod vrha rastvarača, 2H), 2,40 (s, 3) H), 1.22 (s, 6 H).
Primer 226a 6-hloro-2-metil-4-({5-[(morfolin-4-il) karbonil] piridin-2-il} amino)-2,3-dihidropiridazin-3-on 226a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je s 1,4-dioksanom (40 ml), (6-aminopiridin-3-il) (morfolino) metanonom 111a (2,07 g), 10.0 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (3.35 g, 15.0 mmol), Pd2(dba)3(915 mg, 1.0 mmol), Ksantfos (578 mg, 1.0 mmol) i cezijum karbonata (6.52 g, 20 mmol). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 8 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana dihlormetanom (2 x 20 mL). Kombinovani Filtrat je osušen preko bezvodnog Na2SO4i koncentrirana pod smanjenim pritiskom dajući 226a (2.45 g, 51%) kao žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>350,1 Primer 226b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(morfolin-4-il) karbonil] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidro-piridazin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 226b
Zapečaćena epruveta sa magnetnom mešalicom napunjena je 226a (279 mg, 0,80 mmol), (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 199e (1.53 g, 3.2 mmol), Pd2(dba)3(73,2 mg, 0,080 mmol), tricikloheksil-fosfin (44,6 mg, 0,16 mmol), cezijumkarbonat (521,6 mg, 1,6 mmol), 1,4-dioksan (10 ml) i voda (8 kapi). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša je mešana na 110° C tokom 4 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 etil-acetat/metanol da se dobije 226b kao žuta čvrsta supstanca (120 mg, 23%). MS-ESI: [M+H]<+>667,3
21
Primer 226 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-karbonil)-2-piridil] amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 226
Smeša 226b (120 mg, 0.18 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (227 mg, 5.4 mmol) u i-propanol/THF/vodi (3 mL/3 mL/2 mL) je mešana na 35° C tokom 0.5 h. Smeša je uparena u vakuumu i ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 10 mL). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 226 kao bela čvrsta supstanca (53 mg, 47%). MS-ESI: [M+H]<+>625,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.75 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.54 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.79-7.77 (m, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.60-4.57 (m, 1H), 4.40-4.37 (m, 1H), 4.27-4.25 (m, 1H), 4.20-4.17 (m, 2H), 3.91-3.88 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.60-3.45 (m, overlap, 8H), 2.62-2.56 (m, 2H), 2.42 (s, 2H), 1.22 (s, 6H).
Primer 227a {4-[1-Metil-5-({5-[(morfolin-4-il) karbonil] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il]-2-{1-okso-1H, 2H, 3H, 4H, 6H, 7H, 8H, 9H-pirazino [1,2-a] indol-2-il} piridin-3-il} metil-acetat 227a
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 6-hloro-2-metil-4-({5-[(morfolin-4-il) karbonil] piridin-2-il} amino)-2,3-dihidropiridazin-3-on 226a (244 mg, 0.70 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H))-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (558 mg, 1.5 mmol), Pd2(dba)3(64 mg, 0.070 mmol), tricikloheksilfospin (39 mg, 0.14 mmol), cezijum karbonat (456 mg, 1.4 mmol)), 1,4-dioksan (7 ml) i voda (6 kapi). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša je mešana na 110° C tokom 4 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 etil-acetat/metanol da se dobije 227a kao žuta čvrsta supstanca (290 mg, 63%). MS-ESI: [M+H]<+>653,3
Primer 227 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-karbonil)-2-piridil] amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 227 Smeša 227a (131 mg, 0.20 mmol) i voda litijum hidroksida 1 (120 mg, 2.0 mmol) u i-
22
propanol/THF/vodi (4 mL/4 mL/2 mL) je mešana na 35° C u toku 0.5 h. Smeša je uparena u vakuumu i ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 10 mL). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 227 kao bela čvrsta supstanca (75 mg, 62%). MS-ESI:
[M+H]<+>611,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.75 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.54 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79-7.77 (m, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.60-4.57 (m, 1H), 4.38-4.36 (m, 1H), 4.29-4.19 (m, 2H), 4.10-4.05 (m, 1H), 3.93-3.90 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.60-3.50 (m, overlap, 8H), 2.66-2.54 (m, 2H), 2.48-2.46 (m, 2H), 1.81-1.66 (m, 4H).
Primer 228a (S)-(4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 228a
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je (S)-5-brom-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on (90 mg, 0.21 mmol) 191i, 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4, 6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (80,4 mg, 0,21 mmol), Pd(dppf)Cl2(17,2 mg, 0.021 mmol), K3PO4(89 mg, 0.42 mmol), natrijev acetat (57,1 mg, 0,42 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (30 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 30: 1) da se dobije 228a kao braon čvrsta supstanca (60 mg, 42%). MS-ESI: [M+H]<+>694,3.
Primer 228 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] pirazin-2-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 228
Smeša 228a (50 mg, 0.070 mmol) i litijum hidroksida (43 mg, 1.8 mmol) u i-
2
propanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 35° C tokom 30 min. Reakciona smeša se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 228 (10 mg, 21%). MS-ESI: [M+H]<+>652,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (e, 1H), 8.48 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.84 (e, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.94 (bs, 1H), 4.56-4.55 (m, 2H), 4.49-4.47 (m), 1H), 4.42-4.36 (m, preklapanje, 4H), 4.25-4.17 (m, 2H), 4.13-4.10 (m, 1H), 3.86-3.76 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.39-3.37 (m, 1H), 3.01-2.96 (m, 1H), 2.78-2.76 (m, 1H), 2.62-2.57 (m, preklapanje, 3H), 2.50-2.47 (m, 2H), 2.10-2.07 (m, 1H), 1.94-1.90 (m, 1H), 1.80-1.78 (m, 2H), 1.70-1.69 (m, 2H), 1.12 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 229a 2-Etilpirimidin-4-amin 229a
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom, napunjena je 2-hloropirimidin-4-aminom (2,60 g, 20,0 mmol), trietilboranom (20,0 ml, 1,0 M u THF, 20,0 mmol), Pd(dppf)Cl2(816 mg, 1,0 mmol), K3PO4(13,0 g, 40,0 mmol), voda (2 mL), i tetrahidrofurana (50 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na refluksu 14 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 40: 1 dihlorometan/metanol, dajući 229a kao žutu čvrstu supstancu (600 mg, 24%). MS-ESI: [M+H]<+>124,3
Primer 229b 5-Bromo-3-(2-etilpirimidin-4-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 229b Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 229a (246 mg, 2,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (534) mg, 2,0 mmol), Pd2(dba)3(182 mg, 0,20 mmol), Ksantfos (231 mg, 0,40 mmol), Cs2CO3(1,30 g, 4,0 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana 4 sata na 100° C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometan/metanol, dajući 229b kao beličastu čvrstu supstancu (308 mg, 50%). MS-ESI:
[M+H]<+>309,1
Primer 229c (2 '-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta-[4,5] pirolo
24
[1,2-a] pirazin-2 (6H)-il)-5-((2-etilpirimidin-4-il) amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-3'-il) metil-acetat 229c
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 229b (277 mg, 0,90 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7). 8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) borna kiselina 199e (358 mg, 0.90 mmol), Pd(dppf)Cl2(74 mg, 0.090 mmol), K3PO4(381 mg, 1.80 mmol), voda (2 mL), i tetrahidrofurana (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 60: 1 dihlorometan/metanol, dajući 229c kao belu čvrstu supstancu (291 mg, 50%). MS-ESI: [M+H]<+>582,4
Primer 229 3-[4-[5-[(2-etilpirimidin-4-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 229
U rastvor jedinjenja 229c (291 mg, 0,45 mmol) u THF-u (10 mL) i vodi (2 mL) dodat je litium hidroksid (48 mg, 2,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 1 sati i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 229 (165 mg, 61%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>540,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.12 (e, 1H), 8.96 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,00 (t J = 5,5 Hz, 1H), 4,55-4,44 (m, 2H), 4,26-4,19 (m, preklapanje, 3H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,74 (q, J) = 7.5 Hz, 2H), 2.59-2.54 (m, 2H), 2.43 (s, 2H), 1.22-1.20 (m, preklapanje, 9H).
Primer 230a (S)-terc-butil 4-(5-bromopirazin-2-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 230a
2
Smeša (S)-terc-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (6,0 g, 30 mmol) i 2,5-dibromopirazina (14,1 g, 60 mmol) je mešana na 80° C tokom 15 h. Zatim je ohlađena do sobne temperature i prečišćena hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (10: 1 do 2: 1) da bi se dobilo 230a kao žuta čvrsta supstanca (1.14 g, 19%). MS: [M+H]<+>359,1.
Primer 230b (S)-terc-butil 4-(5-(difenilmetilenamino) pirazin-2-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 230b
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom, napunjena je 230a (2.6 g, 7.3 mmol), difenilmetaniminom (1.3 g, 7.3 mmol), Pd2(dba)3(669 mg, 0.73 mmol), (R)-(+)-2,2'-bis (difenilfosfino)-1,1'-binaftil (968 mg, 1,46 mmol), Cs2CO3(4,7 g, 14,6 mmol), i 1,4-dioksan (40 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 96° C 3 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (10: 1 do 3: 1), dajući 230b kao crveno ulje (3.3 g, 75%). MS:
[M+H]<+>458,3.
Primer 230c (S)-terc-butil 4-(5-aminopirazin-2-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 230c
U rastvor 230b (3,3 g, 7,2 mmol) u DCM-u (25 mL) dodat je TEA (708 mg, 8,6 mmol) i etil (trifenilfosforaniliden)acetat (907 mg, 8,6 mmol). Reakciona smeša je mešana 0,5 h. Zatim se koncentriše u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 30: 1) da se dobije 230c kao žuto ulje (1.35 g, 64%). MS: [M+H]<+>294,3.
2
Primer 230d (S)-terc-butil 4-(5-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) pirazin-2-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 230d
Posuda od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 230c (1,25 g, 4,3 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (3,4) g, 12.9 mmol), Pd2(dba)3(394 mg, 0.43 mmol), Ksantfos (497 mg, 0.86 mmol), Cs2CO3(4.7 g, 14.6 mmol) i 1,4-dioksan (80 mL).). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 2 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 30: 1) da se dobije 230d (1,9 g, 72%). MS: [M+H]<+>481,2.
Primer 230e (S)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(2-metilpiperazin-1-il) pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 230e
Smeša jedinjenja 230d (1,9 g, 3,97 mmol) i trifluorosirćetna kiselina (4 mL) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobila sirova 230e (1.45 g, 97%), koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS: [M+H]<+>381,2.
Primer 230f (S)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 230f
Smeša 230e (2,0 g, 5,3 mmol), oksetan-3-on (763 mg, 10.6 mmol), NaBH3CN (835 mg, 13,3 mmol) i cink hlorida (1,8 g, 13,3 mmol) u metanolu (60 mL) je mešan na 50° C 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata voda i rezultirajuća smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj se zatim koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 20: 1) da se dobije 230f kao žuto ulje (1,6 g, 70%). MS: [M+H]<+>437,2.
Primer 230 g 5-[4-hlor-3-(hidroksimetil) piridin-2-il]-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-6-on 230g
2
Smeša 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trine-5-il) piridin-3-karbaldehid 124a (797 mg, 2,31 mmol), NaBH4(263 mg, 6.92 mmol), i CH3OH (50 ml) je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je reakciona smeša ugašena vodom (30 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (2 x 30 mL) i kombinovani dihlorometanski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela pomoću elucije dihlormetanom/metanolom (5:1) dajući naslovno jedinjenje 230g (649 mg, 81%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>348,1
Primer 230h (4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il } piridin-3-il) metil-acetat 230h
Laboratorijska boca sa okruglim dnom napunjena je 230g (597 mg, 1.72 mmol), dihlorometanom (50 mL) i trietilaminom (5 mL). Rastvor je mešan na 0° C u toku 0.5 h i polako je dodat acetil hlorid (135 mg, 1.72 mmol). Smeša je mešana na 0°C dopunska 2,5 h. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 9: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 230h (602 mg, 90%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>390,1
Primer 230i 4-(dihidroksiboranil)-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo-[7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-il] metil-acetat 230i
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom, napunjena je 230 h (595 mg, 1,53 mmol), Pin2B2(1,94 g, 7,65 mmol), PdCl2(dppf) (65 mg, 0.080 mmol), X-Phos (73 mg, 0.15 mmol), kalijum acetat (304 mg, 3.1 mmol) i dioksan (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u
2
vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 65° C tokom 5 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobilo 230i (409 mg, 67%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>400,1
Primer 230j {4-[1-Metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] pirazin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-(6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-il} metil-acetat 230j
Boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom napunjena je 230f (100 mg, 0.23 mmol), 230i (140 mg, 0.35 mmol), Pd(dppf)Cl2(19 mg, 0.023 mmol), natrijev acetat (63 mg, 0.46 mmol), K3PO4(98 mg, 0.46 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 3 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakcija je filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 30: 1) da se dobije 230j kao žuta čvrsta supstanca (90 mg, 55%). MS-ESI: [M+H]<+>710,2.
Primer 230 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] pirazin-2-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno [2,3-d] piridazin-4-on 230
Smeša 230j (80 mg, 0.11 mmol) i litijum hidroksida (27 mg, 1.1 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 10 mL) i voda (2 mL) je mešana na 35° C tokom 0.5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a rezultirajući ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze, da bi se dobio 230 (34 mg, 45%). MS-ESI: [M+H]<+>668,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6))δ 8.64 (e, 1H), 8.56 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.40 (d, J = 2.5 Hz, 1H) 8,34 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,53 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 4,84 (bs, 1H)., 4.58-4.54 (m, 2H), 4.50-4.47 (m, 1H), 4.43-4.36 (m, preklapanje, 4H), 3.78-3.75 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.39-3.35 (m, 1H), 3,02-3,0 (m, 1H), 2,98-2,95 (m, 2H), 2,90-2,82 (m, 2H), 2,78-2,76 (m, 1H), 2,60-2,56 (m, 1H), 2.10-2.09 (m, 1H), 1.95-1.88 (m, preklapanje, 5H), 1.10 (d, J = 8.0 Hz, 3H).
Primer 231a 2-(4-hloro-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-10-fluoro-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1 (2H))-on 231a
2
Smeša 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehida 134c (800 mg, 2,31 mmol), NaBH4(263 mg, 6.92 mmol) i metanol (50 mL) je mešana na 0° C za 1 h. Zatim je reakciona smeša ugašena vodom (30 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (2 x 30 mL) i kombinovani dihlorometanski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silikagelu, uz eluiranje 5: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 231a (650 mg, 81%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>340,1
Primer 231b (4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 231b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom napunjena je 231a (600 mg, 1.72 mmol), dihlorometanom (50 mL) i trietilaminom (5 mL). Rastvor je mešan na 0° C u toku 0.5 h i polako je dodat acetil-hlorid (135 mg, 1.72 mmol). Smeša je mešana na 0° C dodatna 2,5 h. Zatim je isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 9: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 231b (605 mg, 90%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>392,1
Primer 231c 3-(acetoksimetil)-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 231c
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 231b (600 mg, 1.53 mmol), Pin2B2(1.94 g, 7.65 mmol), PdCl2(dppf) 65 mg, 0.080 mmol), X-Phos (73 mg, 0.15 mmol), kalijum acetat (304 mg, 3.1 mmol) i dioksan (30 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 65° C tokom 5 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobilo 231c (412 mg, 67%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>402,1
Primer 231d (S)-(2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il piridin-3-il) metil-acetat 231d
Laboratorijska boca sa okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 231c (200 mg, 0.50 mmol), (S)-6-hloro-2-metil-4-(5-(2-metil-4-(oksetan-3).-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridazin-3 (2H)-on 224c (195 mg, 0,50 mmol), PdCl2(dppf) (24 mg, 0.030 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), natrijum-acetat (98 mg, 1.0 mmol), acetonitril (30 mL) i voda (3 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol etilacetatom, dajući 231d kao žutu čvrstu supstancu (213 mg, 60%). MS-ESI:
[M+H]<+>712,3
Primer 231 10-fluoro-2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 231
Smeša 231d (150 mg, 0.21 mmol) i litijum hidroksida (51 mg, 2.1 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 10 mL) i voda (3 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen etil-acetatom (2 X 10 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 231 (83 mg, 59%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>670,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-a6)Z 9.29 (e, 1H), 8.53 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7,43-7,40 (m, 3H); 4.03 (m, 1H), 3.89-3.83 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.41-3.37 (m, 1H), 3.22-3.19 (m, 1H), 3.00-2.93 (m, 1H), 2.65-2.60 (m, 2H), 2.55-2.54 (m, 1H), 2.43-2.39 (m, 3H), 2.27-2.24 (m, 1H), 2.12-2.07 (m, 1H), 1.76-1.66 (m, 4H), 0.97 (d, J = 9.0 Hz, 3H).
Primer 232a 2-Nitro-5-(1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il) piridin 232a
1
Smeša terc-butil 4-(6-metilpirazol-3-il)-5,6-dihidro-4H-pirazol[-1-a]pirazin-5-karboksilata (jedinjenje 200a, 2,0 g, 6,6 mmol) u HCl/EA (1N, 5,0 ml) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Zatim je isparavan pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran etilacetatom (3 X 7 mL) da se dobije 232a kao žuta čvrsta supstanca (1,0 g, 74%). MS-ESI:
[M+H]<+>206.
Primer 232b 5-(1-Metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-2-nitksopiridin 232b
U rastvor 232A (1,2 g, 5,8 mmol) u CH3OH (25 ml) je dodat HCHO (1 mL, 35 mmol) i octene kiseline (1 ml), zatim dodavanjem NaBHCN3(1,0 g, 12 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata. Tada je uparena pod smanjenim pritiskom, a ostatak je prečišćen reverzno-faznim eluiranjem pomoću Combiflash sa 0,3% NH4HCO3u vodi/acetonitrilu radi dobijanja 232B kao žute čvrste supstance (1,0 g, 78%). MS-ESI:
[M+H]<+>220.
Primer 232c 5-(1-metilpiperidin-4-il) piridin-2-amin 232c
Laboratorijska boca od 250 ml sa okruglim dnom sa jednim vratom je prečišćena sa azotom i napunjena 232b (2.0 g, 9.0 mmol), 10% paladijuma na uglju (50% vlažan, 200 mg) i metanol (40 mL). Boca je evakuisana, napunjena gasom vodonika, i mešana pod vodonikom na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Vodonik je zatim evakuisan i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da se dobije 232c (1.6 g, 92.5%), koji je korišten direktno u sljedećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>192
Primer 232d 5-Bromo-1-metil-3-(5-(1-metilpiperidin-4-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 232d
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjena je 232c (1,5 g, 7,9 mmol), 3,5-dibromo-1-
2
metilpiridin-2 (1H)-ona (2,0 g, 7,9 mmol), cezijum karbonata (5,0 g, 16 mmol) i 1,4-dioksana (50 ml). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu suspenziju tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (455 mg, 0.79 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (718 mg, 0.79 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na 100° C 2 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je podeljen između etil-acetata (100 mL) i vode (100 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (3 X 50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (3 X 20 mL)i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 3 etil-acetat/petrolej etrom da se dobije 232d kao smeđa čvrsta supstanca (1,5 g, 50%). MS-ESI: [M+H]<+>377.
Primer 232e (4-(1-Etil-5-(5-(1-metilpiperidin-4-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1)-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 232e
Laboratorijska boca okruglog dna opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 232d (160 mg, 0,40 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1], 2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (191 mg, 0,50 mmol), Pd(dppf)Cl2(20 mg, 0,024 mmol), K3PO4(180 mg, 0.80 mmol), natrijum-acetat trihidrata (120 mg, 0.80 mmol), vode (0.5 mL) i acetonitrila (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sa 25:1 dihlormetan/CH3OH radi dobijanja 232e kao žute čvrste supstance (180 mg, 55%). MS-ESI:
[M+H]<+>636,3
Primer 232 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metil-4-piperidil)-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 232 Smeša 232e (180 mg, 0.30 mmol) i litijum hidroksida (130 mg, 3.0 mmol) u THF/ipropanolu (6: 3, 9 mL) i vodi (3 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (2 X 20 ml). Kombinovani etilacetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze dajući 232 (55 mg, 35%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>594,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.72 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7.88 (d J = 2,0 Hz, 1H), 7,44-7,36 (m, 2H), 6,90 (s, 1H), 6,80-6,78 (m, 1H), 5,08-5,04 (m, 1H), 4,64-4,50 (m, 2H). 4,34-4,29 (m, 1H), 4,16-4,10 (m, 2H), 3,91-3,87 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,03-3,00 (m, 2H), 2,62-2,56 (m, 4H), 2.46-2.42 (m, 1H), 2.36 (s, 1H), 2.13-2.07 (m, 2H), 1.92-1.82 (m, preklapanje, 8H).
Primer 233a terc-butil 2-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-6,7-dihidrotiazolo [5,4-c] piridin-5 (4H)-karboksilat 233a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je terc-butil 2-amino-6,7-dihidrotiazolo [5,4-c] piridin-5 (4H)-karboksilatom (600 mg, 2,35 mmol) 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (942 mg, 3,53 mmol), Pd2(dba)3(214 mg, 0,235 mmol), Ksantfos (270,5 mg, 0,47 mmol), Cs2CO3(1,53 g, 4,7 mmol) i dioksan (30 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 110° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 12 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je ispran acetonitrilom da bi se dobilo 233a (600 mg, 54%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>441,1
Primer 233b terc-butil 2-[(5-{3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) amino]-4H, 5H, 6H, 7H-[1], 3] tiazolo [5,4-c] piridin-5-karboksilat 233b U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjena je 233a (300 mg, 0,68 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7 8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo-[1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) boronska kiselina 199e (1,8 g, 2,72 mmol), Pd(dppf)Cl2(27,7 mg, 0.034 mmol), K3PO4(288.3 mg, 1.36 mmol),
4
natrijev acetat (111.5 mg, 1.36 mmol), voda (10 kapi) i acetonitrilu (10 ml). Nakon propuštanja azota kroz smešu tokom 30 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smesa je filtrirana i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 100: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 233b (220 mg, 45%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>714,3
Primer 233c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-6-okso-5-({4H, 5H, 6H, 7H-[1, 3] tiazolo [5,4-c] piridin-2-il} amino)-1,6-dihi-kapiridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 233c
U rastvor 233b (220 mg, 0.308 mmol) u etil-acetatu (5 mL) dodat je rastvor HCl u etil-acetatu (0.123 mL, 2.5 M, 0.308 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 233c (180 mg, sirovo), koje je upotrebljeno direktno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI:
[M+H]<+>614,3
Primer 233 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-(4,5,6,7-tetrahidrotiazolo [5,4-c] piridin-2-ilamino)-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 233
U rastvor 233c (180 mg, 0.29 mmol) u THF (3 mL) i propan-2-olu (3 mL) doda se voda (1 mL) i litijum hidroksid (14.0 mg, 0.58 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim se koncentruje pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 233 (28,6 mg, 17%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>572,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.85 (e, 1H), 8.63 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.95-4.92 (m, 1H), 4.47-4.37 (m, 2H), 4.25-4.18 (m, 3H) 3.86-3.84 (m, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.59 (s, 3H), 2.92-2.90 (m, 2H), 2.62-2.56 (m, 2H), 2.50-2.39 (m, 5H)), 1,21 (s, 6H).
Primer 235a (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] pirazin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 235a
U laboratorijsku bocu s okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjen je (S)-5-brom-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-) 3-il) piperazin-1-il) pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 230f (200 mg, 0.46 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>-dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (366 mg, 0,92 mmol), Pd(dppf)Cl2(38 mg, 0.046 mmol), natrijev acetat (126 mg, 0,92 mmol), K3PO4(196 mg, 0,92 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 65° C 3 sata. Nakon hlađenja do sobne temperature, reakcija je filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 30: 1) da se dobije 235a kao braon čvrsta supstanca (100 mg, 31%). MS-ESI: [M+H]<+>708,5.
Primer 235 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] pirazin-2-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 235
Smeša 235a (90.0 mg, 0.13 mmol) i litijum hidroksida (36.4 mg, 3.25 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 5 mL) i voda (1 mL) je mešana na 35° C u trajanju od 0.5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 235 (18,2 mg, 22%). MS-ESI: [M+H]<+>666,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (e, 1H), 8.48 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8.39 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H) 7,83 (s, 1H), 7,47 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,96 (bs, 1H), 4,57-4,55 (m, 2H), 4,49-4,47 (m, 1H), 4,42-4,37 (m, preklapanje, 4H), 4,22-4,18 (m, preklapanje, 3H), 3,84-3,76 (m, 2H), 3,60 (s, 3H) 3.39-3.37 (m, 1H), 3.02-2.81 (m, 1H), 2.78-2.76 (m, 1H), 2.62-2.56 (m, 3H), 2.43-2.41 (m, 2H), 2.10-2.07 (m, 1H), 1,92-1,90 (m, 1H), 1,22 (s, 6H), 1,12 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Primer 236a (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-1-metil-5-{[5-(1-metilpiperidin-4-il) piridin-2-il] amino}-6-oksopiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 236a
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 5-brom-1-metil-3-(5-(1-metilpiperidin-4-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 232d (160 mg, 0.40 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (240 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(20 mg, 0.020 mmol), K3PO4(180 mg, 0.80 mmol), natrijum-acetat trihidrata (120 mg, 0.80 mmol), vode (0.5 mL) i acetonitrila (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 236a kao žuta čvrsta supstanca (150 mg, 38%). MS-ESI: [M+H]<+>650,3
Primer 236 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metil-4-piperidil)-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 236
Smeša 236a (150 mg, 0.25 mmol) i litijum hidroksida (105 mg, 2.5 mmol) u THF/ipropanolu (6: 3, 9 mL) i vodi (3 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 236 (40 mg, 30%) kao svetlo zelena čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M+H]<+>608,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.73 (s, 1H), 8.52 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.90-7.88 (m, 2H), 7.45-7.37 (m, 2H), 6.86-6.80 (m, 2H), 5.11 (bs, 1H), 4.67-4.65 (m, 1H), 4.53-4.51 (m, 1H), 4.35-4.33 (m, 1H), 4.18 (bs, 2H), 3.90-3.89 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.24-3.22 (m, 2H), 2.59-2.50 (m,, overlap, 8H), 2.36-2.32 (m, 2H), 2.01-1.87 (m, 4H), 1.29 (s, 6H).
Primer 237a 2-{10-Fluoro-1-okso-1H, 2H, 3H, 4H, 6H, 7H, 8H, 9H-pirido [3,4-b] indolizin-2-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karbaldehid 237a
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c (70 mg, 0.20 mmol), 1-metil-3-({5-[(2A)-2-metil-4-(oksetan)-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-5-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-on 191j (192) mg, 0.40 mmol), Pd(dppf)Cl2(33 mg, 0.040 mmol), kalijum-acetat (39 mg, 0.40 mmol), K3PO4(87 mg, 0.40 mmol), acetonitrilu (7 ml), i vodom (6 kapi). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 95° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 etil-acetat/metanol da bi se dobilo 237a (286 mg, čistoća: 46%, prinos: 98%) u obliku čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>667,3
Primer 237 10-fluoro-2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 237
U rastvor 237a (131 mg, 0.197 mmol) u metanolu (7 mL) je dodat natrijumborohidrid (59.8 mg, 1.57 mmol) na 0° C. Reakcija je mešana na 0-25° C tokom 1.5 h. Zatim je ugašena vodom (1.5 mL). Smeša je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je ekstrahovan dihlormetanom (3 X 30 mL). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 237 (36 mg, 28%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>669,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.66 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.83 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.36-7.32 (m, 2H), 6.84 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.90-4.86 (m, 1H), 4.73-4.65 (m, 5H), 4,39-4,30 (m, 2H), 3,90-3,77 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,56-3,48 (m, 2H), 3,10-3,09 (m, 2H), 2,98-2,92 (m, 2H) 2.79-2.75 (m, 2H), 2.59-2.57 (m, 1H), 2.50-2.49 (m, 2H), 2.22-2.21 (s, 1H), 2.04-1.99 (m, 2H), 1.88-1.84 (m, 2H), 1,01 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Primer 238a (E)-Metil 3-((terc-butilsulfinilimino) metil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2karboksilat 238a
Jedna laboratorijska boca od 500 ml sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena su metil 3-formil-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilatom (10,0 g, 48,3 mmol, 1,0 ekv.),-methylpropane-2-sulfinamide (11,7 g, 96,6 mmol, 2.0 eq.), KHSO4(32,8 g, 241,5 mmol, 5 ekv.), i dihlormetan (250 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 sat. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 3 etilacetat/petrolej etrom da se dobije 238a (12.4 g, 83%) kao žuta čvrsta supstanca. MS: [M+H]<+>311,3.
Primer 238b Metil 3-((1,1-dimetiletilsulfinamido) metil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat 238b
Laboratorijska boca od 250-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 238a (4,0 g, 12,8 mmol, 1,0 eq.), NaBH4(2,9 g, 76,9 mmol, 6,0 ekv.), I metanolom (100 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Nakon ovog vremena u reakcijsku smesu se doda voda (50 mL) i nastala smesa se koncentrira pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 50 ml).
Kombinovani organski sloj je uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 238b (3.9 g, 96%), koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS: [MC4H10NOS]<+>192,3.
Primer 238c Metil 3-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidroindolizin-2-karboksilat 238c Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom napunjena je 238b (3.5 g, 11.2 mmol), zasićenim rastvorom HCl/dietil etra (15 mL) i dihlorometanom (15 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 h. Nakon što je reakcija završena, zasićeni vodeni NaHCO3rastvor (50 ml) je dodat u reakcionu smešu i smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 X 50 mL). Kombinovani organski sloj je uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 238c (2.2 g, 94%), koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS: [M-NH2]<+>192.1.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 6.28 (e, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.03 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 2.78 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2,06-2,02 (m, 2H), 1,87-1,82 (m, 2H).
Primer 238d 2,3,5,6,7,8-heksahidropirolo [3,4-b] indolizin-1-on 238d
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom napunjena je 238c (1.3 g, 6.25 mmol, 1.0 ekv.) I THF (20 mL). Na-78° C, u rastvor je dodat litijum heksametildisilazan/THF (18.7 mL, 18.7 mmol, 3.0 ekv.). Zatim se 2 h meša na sobnoj temperaturi. Nakon što je reakcija završena, zasićeni vodeni NH4Cl rastvor (30 ml) je dodat i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 X 50 mL) i kombinovani organski sloj je uparen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 60: 1 dihlorometan/metanolom da bi se dobilo 238d (585 mg, 53%) kao žuta čvrsta supstanca. MS:
[M+H]<+>177,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.38 (e, 1H), 5.82 (s, 1H), 4.13 (s, 2H), 3.86 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.73 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 191-1,88 (m, 2H), 1,75-1,73 (m, 2H).
Primer 238e 4-hloro-2-(1-okso-5,6,7,8-tetrahidro-1H-pirolo [3,4-b] indolizin-2 (3H)-il) nikotinaldehid 238e
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom, napunjena je 238d (400 mg, 2,27 mmol), 2-bromo-4-hloronikotinaldehidom (1,50 g, 6,90 mmol, 3,0 ekv.), Pd2(dba)3(208 mg, 0,227 mmol, 0,1 ekv.), Ksantfos (131 mg, 0,227 mmol, 0,1 ekv.), Cs2CO3(1,50 g, 4,54 mmol, 2,0 ekv.) I dioksan (30 mL). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, reakciona smeša je mešana na 90° C tokom 16 h. Nakon završetka reakcije, smesa je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 3 etil-acetat/petroleum etrom da se
4
dobije 238e (300 mg, 42%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>316,1.
Primer 238f (S)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-5,6,7,8-tetrahidro-1H-pirolo [3,4-b] indolizin-2 (3H)-il) nikotinaldehid 238f
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 238e (150 mg, 0,48 mmol, 1,0 ekv.), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)) piridin-2 (1H)-on 191J (459 mg, 0.95 mmol, 2.0 eq.), Pd(dppf)Cl2(39 mg, 0,048 mmol, 0,1 ekv.), natrij acetat (78 mg, 0.95 mmol, 2.0 ekv.), K3PO4(202 mg, 0.95 mmol, 2.0 eq.), acetonitrilu (10 ml), i vode (1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 85° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometan/etanol, dajući 238f (90 mg, 30%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>635,3.
Primer 238 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2;-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-5,6,7,8-tetrahidro-1H-pirolo [3,4-b] indolizin-3-on 238
Laboratorijska boca od 20-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 238f (90 mg, 1,0 ekv., 0,14 mmol), NaBH4(23 mg, 5 eq., 0,60 mmol) i metanolom (5 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta, a zatim je prekinuta vodom. Zatim se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 238 (60 mg, 66%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>637,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8,69 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,93 (d J = 2,0 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,36-7,31 (m, 2H), 6,83 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,15 (s, 1H), 5,71 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,96 (s, 2H), 4,72-4,63 (m, 4H), 4,52-4,51 (m, 2H), 3,97-3,95 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,55-3,53 (m, 1H), 3,48-3,46 (m, 1H), 3,10-3,08 (m, 2H), 2,91-2,89 (m, 2H), 2,58-2,56 (m, 1H), 2,49-2,48 (m, 2H), 2,23-2,19 (m, 1H), 2,08-2,02 (m, 2H), 1,93-1,89 (m, 2H), 1,00 (d, J = 6,0 Hz, 3H).
Primer 239a terc-butil 3-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il) azetidin-1-karboksilat 239a
41
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (50 ml), terc-butil 3-(6-aminopiridin-3-il) azetidin-1 karboksilat (1,8 g, 7,2 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (1,9 g, 7,2 mmol) i cezijum karbonat (4,7 g, 14,4 mmol). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu suspenziju tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (418 mg, 0.72 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (661 mg, 0.72 mmol). Reakciona smeša je podvrgnuta ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrejana na 105° C tokom 0.5 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Ostatak je raspodeljen između etil-acetata i vode. Vodena faza je ekstrahovana etilacetatom (3 x 30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom(30 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 4 etil-acetat/petroleum etrom da se dobije 239a kao žuta čvrsta supstanca (3,06 g, 98%). MS-ESI: [M+H]<+>435.
Primer 239b 3-(5-(azetidin-3-il) piridin-2-ilamino)-5-brom-1-metilpiridin-2 (1H)-on 239b
Jedinjenje 239a (1.0 g, 2.3 mmol) je suspendovano u 4 M HCl/dioksanu (10 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 h. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak je zalužen vodenim NaOH i rezultirajuća smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom. Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom i koncentrovan pod sniženim pritiskom da se dobije 239b kao žuta čvrsta supstanca (650 mg, 84%). MS-
42
ESI: [M+H]<+>335.
Primer 239c 5-Bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 239c
Smeša 239B (469 mg, 1,4 mmol), 37% vodenog formaldehida (4,0 g, 50 mmol), NaBH3CN (261 mg, 4,2 mmol) i 1 M cink hlorid u ethoxyethane (4 mL, 4.2 mmol) u metanol (40 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 2 sata. Smeša je dodata u vodu (20 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 50 ml). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10: 1 metilen hlorid/metanolom da se dobije 239c kao žuta čvrsta supstanca (300 mg, 83%). MS-ESI: [M+H]<+>349.
Primer 239d (4-(1-metil-5-(4-(1-metilazetidin-3-il) fenilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 239d
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 239c (106 mg, 0,30 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7, 8,9-hexa-hidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (115 mg, 0.30 mmol), Pd(dppf)Cl2(25 mg, 0.030 mmol), K3PO4(127 mg, 0.60 mmol), natrijum-acetat (49 mg, 0.60 mmol), voda (1 mL) i acetonitril (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 15: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 239d kao belu čvrstu supstancu (100 mg, 49%). MS-ESI: [M+H]<+>607,3
Primer 239 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il)-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 239 U rastvor239d (100 mg, 0,16 mmol) u ropan-2-ol (2 mL), tetrahidrofuranu (2 mL), i vodi (1 mL) dodat je litijum hidroksid (38 mg, 1,60 mmol). Smeša je mešana na 30°C tokom 2 h. Zatim se ispari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 239 (22,5 mg, 26%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M+H]<+>566,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.75 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,91-7,89 (m, 2H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,84 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,09-5,06 (m, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4,54-4,50 (m, 1H), 4,36-4,33 (m, 1H), 4,18-4,11 (m, 2H), 3,92-3,88 (m, 1H), 3.75-3.72 (m, preklapanje, 5H), 3.63-3.58 (m, 1H), 3.16-3.14 (m, 2H), 2.64-2.58 (m, 4H), 2.40 (s, 3H),
4
1.93-1.90 (m, 2H), 1.84-1.79 (m, 2H).
Primer 240A (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(1-metil-5-{[5-(1-metilazetidin-3-il) piridin-2-il] amino)-6-oksopiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 240
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom napunjen je 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-il) piridin-2-ilamino)-piridin-2 (1H)-on 239c (106 mg, 0.30 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il) piridin-4-il) boronska kiselina 199e (119 mg, 0.30 mmol), Pd(dppf)Cl2(25 mg, 0.031 mmol), K3PO4(127 mg, 0.60 mmol), natrijum-acetat (49 mg, 0.60 mmol), voda (0.5 mL) i acetonitril (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 15: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 240a kao belu čvrstu supstancu (80 mg, 48%). MS-ESI:
[M+H]<+>622,7
Primer 240 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il)-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 240
U rastvor 240a (80 mg, 0.130 mmol) u propan-2-ol (2 mL), tetrahidrofuranu (2 mL) i vodi (1 mL) dodat je litijum hidroksid (38 mg, 1.60 mmol). Smeša je mešana na 30°C tokom 1 h. Reakcija je isparena pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobilo 24024,3 mg, 33%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>580,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.76 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,92-7,90 (m, 2H), 7,59 (dd, J = 1,5, 8,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,84 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5.09-5.06 (m, 1H), 4.68-4.66 (m, 1H), 4.56-4.54 (m, 1H), 4.37-4.35 (m, 1H), 4.19-4.17 (m, 2H), 3.90-3.88 (m, 1H), 3,75-3,72 (m, preklapanje, 5H), 3,64-3,62 (m, 1H), 3,19-3,16 (m, 2H), 2,60 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 2,54 (s, 2H), 2.42 (s,
44
3H), 1.30 (s, 6H).
Primer 241a 2-{10-Fluoro-1-okso-1H, 2H, 3H, 4H, 6H, 7H, 8H, 9H-pirido [3,4-b] indolizin-2-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karbaldehid 241a
U posudu od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjen je 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c (59,6 mg, 0,17 mmol), 1-metil-3-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1], 5-a] pirazin-2-il} amino)-5-(tetrametil-1,3,2-dioksa-borolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-on 135a (261,8 mg, 0,68 mmol)), Pd(dppf)Cl2(25.0 mg, 0.030 mmol), Na2CO3(54,1 mg, 0,51 mmol), DMF (6 ml), i vode (0,75 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 70° C tokom 1 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 241a (100 mg, čistoća: 54%, prinos: 56%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>571,3
Primer 241 10-fluoro-2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 241
U rastvor 241a (54.0 mg, 0.095 mmol) u metanolu (5 mL) dodat je natrijumborohidrid (28.9 mg, 0.76 mmol) na 0° C. Reakcija je mešana na 0-25° C tokom 1.5 h. Zatim je ugašena vodom (5 mL). Smeša je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 X 30 mL). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 241 (8,0 mg, 15%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>573,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.06 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,88 (s, 1H), 4,87-4,85 (m, 1H), 4,44-4,35 (m, 2H), 4,13-4,08 (m, 1H 3.92-3.89 (m, 3H), 3.79-3.76 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.49 (s, 2H), 2.99-2.94 (m, 2H), 2.79-2.77 (m, 2H) 2.66-2.64 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.90-1.78 (m, 2H), 1.75-1.73 (m, 2H).
4
Primer 242a 3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 242a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-brom-3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 218a (800 mg, 2,69 mmol, 1,0 ekv.), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2'-bi (1,3, 2-dioksaborolana) (1.70 g, 6.73 mmol, 2.5 eq.), Pd2(dba)3(123 mg, 0,13 mmol, 0,05 ekv.), X-Phos (128 mg, 0,27 mmol, 0,1 ekv.), kalijum acetat (528 mg, 5,38 mmol, 2,0 ekv.) i dioksan (50 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 70° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika-gela eluiranjem sa 1:70 metanol/adihlormetana radi dobijanja 242a (740 mg, 79%) kao zelene čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>345,3
Primer 242b 4-(5-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3), 4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 242b
Laboratorijska boca od 100 ml sa okruglim dnom sa jednim vratom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 242a (282 mg, 0.82 mmol, 1.5 ekv.), 4-hloro-2-(1-okso-3,4 6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 139a (180 mg, 0,55 mmol, 1,0 ekv.), Pd(dppf)Cl2(45 mg, 0.055 mmol, 0,1 ekv.), natrij acetat (90 mg, 1.25 mmol, 2.0 eq.), K3PO4(232 mg, 1.25 mmol, 2.0 eq.), acetonitrilu (20 ml), i vode (1 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 90° C tokom 1 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 242b (150 mg, 48%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>512,3.
Primer 242 2-[4-[5-[(1, 5-dimetilpirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-3;, 4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 242
Laboratorijska boca od 50-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa
4
magnetnom mešalicom je napunjena sa 242b (150 mg, 0,29 mmol, 1,0 eq.), NaBH4(55 mg, 1.46 mmol, 5.0 eq.), I metanol (10 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 min. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 242 (100 mg, 66%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>514,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,04-8,03 (m, 2H), 7.42 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.90 (s, 1H), 4.87-4.85 (m, 1H), 4.43-4.35 (m, 2H), 4.18-4.12 (m, 1H), 3.98-3.93 (m, 1H), 3.84-3.78 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.06-2.92 (m, 2H), 2.75-2.68 (m, 2H), 2.18 (s, 3H), 1.94-1.92 (m, 2H), 1.79-1.73 (m, 2H).
Primer 243a terc-butil 4-(metilsulfoniloksi) piperidin-1-karboksilat 243a
U rastvor terc-butil 4-hidroksipiperidin-1-karboksilata (14.0 g, 70.0 mmol) na 0° C u trietilaminu (9.9 g, 98 mmol) i dihlorometanu (100 mL) dodat je kap po kap metansulfonil
4
hlorid (11.2 g, 98.0) mmol). Reakcija je dovedena na sobnu temperaturu i mešana 1 h. Zatim je reakciona smeša ugašena vodom (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etilacetatom (2 X 50 ml). Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom (50 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 243a, koji je korišten u sljedećem koraku bez daljeg prečišćavanja (19,5 g, 100%). MS-ESI: [Mt-Bu]<+>224,1
Primer 243b terc-butil 4-(4-nitro-1H-imidazol-1-il) piperidin-1-karboksilat 243b U laboratorijsku bocu sa okruglim dnom od 250 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 243a (7,0 g, 25,1 mmol), DMF (120 ml), 4-nitro-1H-imidazol (2,80 g, 25,1). mmol), i K2CO3(6,9 g, 50,2 mmol). Smeša je zagrevana na 120°C tokom 2 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je evaporisan u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 2: 2: 1 etil-acetat/petrol etar/dihlorometan, dajući 243b (2.4 g, 32.4%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>297,3
Primer 243c terc-butil 4-(4-amino-1H-imidazol-1-il) piperidin-1-karboksilat 243c Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml je isprana azotom i napunjena 243b (2,3 g, 7,8 mmol), 10% paladijuma na ugljenu (10% vlažan, 230 mg) i etanol (40 ml). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika, i mešana na sobnoj temperaturi 3 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da se dobije 243c (2.0 g, 95%). MS-ESI: [M+H]<+>267,2.
Primer 243d terc-butil 4-(4-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-1H-imidazol-1-il) piperidin-1-karboksilat 243d
Laboratorijska boca od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 243c (2,3 g, 8,6 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (2,3 g, 8,6 mmol), tris-(dibenzilidenaceton) dipaladij (0) (789 mg, 0,86 mmol), Ksantfos (994 mg, 1,72 mmol), Cs2CO3(5,6 g, 17,2 mmol) i 1,4-dioksanom (80 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 95° C 4 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 20: 1) da se dobije 243d kao žuta čvrsta supstanca (2,3 g, 59%). MS-ESI: [M+H]<+>452,3.
Primer 243c 5-Bromo-1-metil-3-(1-(piperidin-4-il)-1H-imidazol-4-ilamino) piridin-2 (1H)-on 243e
4
Smeša jedinjenja 243d (2,2 g, 4,88 mmol) i trifluorosirćetna kiselina (20 mL) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 243e (1.5 g, 88%), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>352,2
Primer 243f 5-Bromo-1-metil-3-(1-(1-(oksetan-3-il) piperidin-4-il)-1H-imidazol-4-ilamino) piridin-2 (1H)-on 243f
U posudu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjena je 243e (2,2 g, 6,3 mmol), NaBH3CN (995 mg, 15,8 mmol), oksetan-3-on mg, 12.6 mmol), cink hlorid (2.1 g, 15.8 mmol) i metanol (60 mL). Reakciona smeša je mešana na 50°C tokom 5 sati i zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata voda i rezultirajuća smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj se zatim koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1% trietilaminom u metanolu. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom. U ostatak je dodat dihlorometan i dobijena suspenzija je filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući 243f kao žutu čvrstu supstancu (800 mg, 62%). MS-ESI: [M+H]<+>408,2
Primer 243g (4-(1-metil-5-(1-(1-(oksetan-3-il) piperidin-4-il)-1H-imidazol-4-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 243g
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 243f (300 mg, 0,74 mmol), 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6), 7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 113i (567 mg, 1.48 mmol), Pd(dppf)Cl2(60,5 mg, 0,074 mmol), K3PO4(314 mg, 1,48 mmol), natrijum-acetat (201 mg, 1,48 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitril (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 1 dihlorometan/metanolom koji sadrži 0.5% trietilamina, dajući 243 g žute čvrste supstance (100 mg, 20%). MS-ESI: [M+H]<+>667,4.
Primer 243 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[1-[1-(oksetan-3-il)-4-piperidil] imidazol-4-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 243
Smeša 243g (80 mg, 0.12 mmol) i litijum hidroksida (100 mg, 2.4 mmol) u i-
4
propanol/THF/vodi (2: 2: 1, 8 mL) je mešana na 35° C tokom 30 min. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata voda i rezultirajuća smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 243 (28,0 mg, 30%). MS-ESI: [M+H]<+>625,4.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.45 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,35-7,34 (m, 2H), 7,11 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 5,14 (bs, 1H), 4,54 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 4.43-4.40 (m, 4H), 4.23-4.11 (m, 3H), 3.99-3.96 (m, 1H), 3.91-3.84 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.43-3.39 (m, 1H), 2.77-2.76 (m, 2H), 2.62-2.57 (m, 2H), 2.47-2.46 (m, 2H), 1.94-1.89 (m, 6H), 1.79-1.78 (m, 2H), 1.69-1.66 (m, 2H).
Primer 244a 2-(4-hloro-3-(hidroksimetil) piridin-2-il)-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-on 244a
Otopini 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 139a (1,0 g, 3.0 mmol) u metanolu (30 mL) je dodat natrijum-borohidrid (380 mg, 9.0 mmol) na 30° C. Reakciona smeša je mešana još 1 h i ugašena vodom (10 mL). Zatim se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 20 ml). Kombinovani organski ekstrakt je osušen preko bezvodnog Na2SO4,filtrira, i ispari pod smanjenim pritiskom dajući 244a kao žutu čvrstu supstancu (920 mg, 92%). MS-ESI:
[M+H]<+>332,3
Primer 244b (4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 244b
U smešu 244a (900 mg, 2,7 mmol) i trietilamina (810 mg, 8,1 mmol) u dihlorometanu (30 ml) dodat je kap po kap acetil hlorid (630 mg, 8,1 mmol). Reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 1 sati. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom, dajući 244b kao belu čvrstu supstancu (900 mg, 90%). MS-ESI: [M+H]<+>374,2
Primer 244c 3-(acetoksimetil)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) piridin-4-ilboronska kiselina 244c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom napunjena je 244b (900 mg, 2,4 mmol), Pin2B2(3,05 g, 12 mmol), Pd(dppf)Cl2(98 mg, 0.12 mmol), X-phos (114 mg, 0.24 mmol), kalijum acetat (720 mg, 7.2 mmol) i dioksan (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 65° C tokom 4 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se ispere sa 5: 1 petrol eter/etil-acetatom (10 ml) da se dobije 244c kao žuta čvrsta supstanca (1,0 g, čistoća: 60%). MS-ESI: [M+H]<+>384,1.
Primer 244d (4-(1-metil-5-(5-(1-metilazetidin-3-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1)-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 244d
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-bromo-1-metil-3-(5-(1-metilazetidin-3-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H) Jedan 239c (140 mg, 0.40 mmol), 244d (230 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(20 mg, 0.020 mmol), K3PO4(180 mg, 0.80 mmol), natrijev acetat-3water (120 mg, 0.80 mmol), voda (0.5 mL) i acetonitril (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 244d kao žuta čvrsta supstanca (90 mg, 43%). MS-ESI: [M+H]<+>608,3
Primer 244 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(1-metilazetidin-3-il)-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 244 Smeša 244d (90 mg, 0.15 mmol) i litijum hidroksida (60 mg, 1.5 mmol) u THF/ipropanolu (5: 3, 8 mL) i vodi (2 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena pod vakuumom i ostatak je razblažen vodom (3 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (20 x 2). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 244 (25 mg, 30%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>566,4.<'>H NMR (500 MHz, CDCl3)88,44 (d, J = 2,5 Hz, 1H),
1
8,51 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,16 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,91 (s), 1H), 7,87 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,59-7,57 (m, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85-6,83 (m, 1H), 6,33 (s, 1H), 5.04-5.01 (m, 1H), 4.67-4.65 (m, 1H), 4.44-4.39 (m, 1H), 4.33-4.29 (m, 1H), 3.95-3.91 (m, 1H), 3.86-3.83 (m, 2H), 3.76-3.74 (m, 1 H), 3.73 (s, 3H), 3.62-3.59 (m, 1H), 3.16-3.13 (m, 2H), 3.02-2.95 (m, 2H), 2,84-2,83 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,05-2,02 (m, 2H), 1,90-1,87 (m, 2H).
Primer 245a 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 245a
Jedna laboratorijska boca od 100 ml sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena su sa 6,7,8,9-tetrahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-on 112d (1,48) g, 7,9 mmol, 1,0 ekv.), 2-brom-4-hlornikotinaldehid (3,48 g, 15,8 mmol, 2,0 ekv.), CuI (1,50 g, 7,9 mmol, 1,0 ekv.), 4,7-dimetoksi-1, 10-fenantrolin (2,13 g, 7,9 mmol, 1.0 eq.), K2CO3(2.18 g, 15.8 mmol, 2.0 ekv.) i dioksan (50 ml). Reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 24 sati. Nakon završetka reakcije, smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 2 etil-acetat/petrolej etrom da se dobije 245a (550 mg, 21%) kao blago žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>328,1.
Primer 245b 4-Fluoro-2-(1-metil-5-(5-(4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-6-(1-okso-5,6,7,8-tetrahidro-1H-pirolo [3,4-b] indolizin-2 (3H)-il) benzaldehid 245b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 245a (140 mg, 0,42 mmol, 1,0 ekv.), (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-) 4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 191l (308 mg, 0.63 mmol, 1.5 eq.), Pd(dppf)Cl2(35 mg, 0.042 mmol, 0,1 ekv.), natrij acetat (70 mg, 0.84 mmol, 2.0 eq.), K3PO4(175 mg, 0.84 mmol, 2.0 ekv.), Acetonitril (20 mL) i voda (1 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika
2
gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometan/metanol, dajući 245b (100 mg, 36%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>647,4.
Primer 245 (S)-2-(3-(hidroksimetil)-4-(1-metil-5-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-2-il)-6,7,8,9-tetrahidropirido [3,4-b] indolizin-1 (2H)-onat 245
Laboratorijska boca od 50-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 245b (100 mg, 0,15 mmol, 1,0 eq.), NaBH4(29 mg, 0,77 mmol, 5,0 eq.), I metanol (10 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 min. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 245 (80 mg, 79%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>649,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,69-8,68 (m, 1H), 8,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,85 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,39-7,36 (m, 1H), 7,26-7,24 (m, 2H), 6,69 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,31 (s, 1H), 4,97 (bs, 1H), 4,58-4,54 (m, 2H), 4,49-4,41 (m, 2H), 4,34-4,27 (m, 2H), 4,09-4,06 (m, 2H), 3,69-3,68 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,41-3,39 (m, 1H), 3,12-3,19 (m, 1H), 2,97-2,93 (m, 1H), 2,87 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,56-2,54 (m, 1H), 2,37-2,30 (m, 2H), 2,21-2,16 (m, 1H), 2,03-1,98 (m, 2H), 1,85-1,82 (m, 2H), 0,94 (d, J = 5,5 Hz, 3H).
Primer 246a 4-(5-(1, 5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-6), 7,8,9-tetrahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 246a
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-(1-okso-6,7,8,9-tetrahidropirido [3,4-b]) indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 245a (130 mg, 0,39 mmol, 1,0 ekv.), 3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-5-(4, 4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 218a (600 mg, 1,75 mmol, 4,0 ekv.), Pd(dppf)Cl2(32 mg), 0.040 mmol, 0,1 ekv.), natrij acetat (64 mg, 0,78 mmol, 2,0 eq.), K3PO4(165 mg, 0,78 mmol, 2,0 eq.), acetonitrilom (15 ml), i vodom (1 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/etanol, dajući 246a (38 mg, 19%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>510,3.
Primer 246 2-[4-[5-[(1, 5-dimetilpirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-6., 7,8,9-tetrahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 246
Laboratorijska boca od 25-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 246a (38 mg, 0,074 mmol, 1,0 eq.), NaBH4(29 mg, 0.37 mmol, 5.0 eq.), i metanolom (5 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi 20 min. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja naslovnog jedinjenja (18 mg, 48%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>512,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.52 (d J = 5,0 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,17 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,58-6,57 (m, 2H), 5,74 (s, 1H), 5,41-5,39 (m, 1H), 4.42-4.32 (m, 2H), 4.08 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 2.98 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.13-2.09 (m, 2H), 1.97-1.92 (m, 2H).
Primer 247a {4-[5-({5-acetil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-il} metil-acetat 247a
U posudu od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on 209c (183 mg, 0.50 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{6-okso-8-tia-4,5;-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-4-il} borna kiselina 230i (200 mg, 0.50 mmol), Pd(dppf)Cl2(37 mg, 0.05 mmol), K3PO4(212 mg, 1,0 mmol), natrijev acetat (82 mg, 1,0 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (5 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 90° C tokom 1 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim
4
pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 20: 1) da se dobije 247a kao žuta čvrsta supstanca (100 mg, 31%). MS-ESI: [M+H]<+>641,2.
Primer 247 3-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobenzotiofeno [2,3-d] piridazin-4-on 247
Smeša {4-[5-({5-acetil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-il} metil-acetat 247a (100 mg, 0.16 mmol) i litij hidroksid (96 mg, 4.0 mmol) u i-propanol/THF/vodi (2: 2: 1, 10 mL) je mešan na 35° C 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata voda (5 mL) i rezultirajuća smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj se zatim koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 247 (51 mg, 53%). MS-ESI: [M+H]<+>599,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, T=80°C) δ 8.54-8.51 (m, 1H), 8.38 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.93-7.91 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 6.00 (s, 1H), 4.64-4.62 (m, 2H), 4.39 (s, 2H), 3.98-3.95 (m, 2H), 3.89-3.86 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 2.95-2.93 (m, 2H), 2.87-2.84 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.89-1.87 (m, 4H).
Primer 248a (R)-(6-aminopiridin-3-il) (3-metilmorfolino) metanon 248a
U rastvor (R)-3-metilmorfolina (2.02 g, 20 mmol) u etanolu (25 mL) dodat je 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid (EDCI) (3.33 g, 17.4 mmol), hidroksibenzotriazol (HOBt) (2,35 g, 17,4 mmol) i 6-aminonikotinska kiselina (2,0 g, 14,5 mmol). Nakon 18 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona suspenzija je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 3: 1 etil-acetat/petrol etar, dajući 248a kao belu čvrstu supstancu (1.6 g, 36%). MS-ESI:
[M+H]<+>222,3.
Primer 248b 6-hloro-2-metil-4-[(5-{[(3R)-3-metilmorfolin-4-il] karbonil} piridin-2-il) amino]-2,3-dihidropiridazin-3-on 248b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (50 mL), 248a (330 mg, 1.5 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (446 mg, 2.0 mmol), cezijev karbonat (978 mg, 3.0 mmol), Ksantfos (88 mg, 0.15 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (68 mg, 0.075 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu 4 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana sa dihlorometanom (3 X 30 mL) i kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (2: 1 do 1: 2), dajući 248b (430 mg, 79%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>364,3
Primer 248c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-{[(3R)-3-metilmorfolin-4-il] karbonil} piridin-2-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 248c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 248b (364 mg, 1,0 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (596 mg, 1.5 mmol), K3PO4(424 mg, 2.0 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (73 mg, 0.10 mmol), natrijum-acetat (164 mg, 2.0 mmol), acetonitril (10 mL), i vode (0.5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 100° C tijekom 2,5 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (50 ml) i vodom (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Spojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4, i filtriran. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i tamni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80: 1 do 50: 1) dajući 248c (250 mg, 37%) kao žuto ulje. MS-ESI: [M+H]<+>681,3
Primer 2483-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(3R)-3-metilmorfolin-4-karbonil]-2-piridil] amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 248
U rastvor 248c (250 mg, 0.37 mmol) u THF/i-propanol/vodi (2.5/2/0.5 mL) dodat je litijum hidroksid (86 mg, 3.6 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 3 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Zatim je smeša sipana u vodu (20 ml), i smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 248 (110 mg, 48%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>639,3.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8,85 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 2.5, 8.5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,85-4,83 (m, 1H), 4,66-4,64 (m)., 1H), 4.42-4.27 (m, 4H), 4.02-3.88 (m, preklapanje, 6H), 3.74-3.67 (m, 2H), 3.56-3.46 (m, 2H), 2.67-2.59 (m, 2H) 2,31 (s, 2H), 1,39 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,28 (s, 6H).
Primer 249a (R)-5-bromo-1-metil-3-(5-(3-metilmorfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 249a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (15 mL), (R)-(6-aminopiridin-3-il) (3-metilmorfolino)) metanon 248a (332 mg, 1,5 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (480 mg, 1,8 mmol) i cezijev karbonat (978 mg, 3,0 mmol). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 3 minuta, dodati su Ksantfos (87 mg, 0.15 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (69 mg, 0.075 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu 2.5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana sa dihlorometanom (2 X 50 mL) i kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etilacetatom (2: 1 do 1: 2) da se dobije 249a (430 mg, 70%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M+H]<+>407,3
Primer 249b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-{[(3R)-3-metilmorfolin-4-il] karbonil} piridin-2-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 249b
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 249a (407 mg, 1,0 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (800 mg, 2.0 mmol), K3PO4(424 mg, 2.0 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (73 mg, 0.1 mmol), natrijum-acetat (164 mg, 2.0 mmol), acetonitril (8 mL), i vode (0,2 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 1.5 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (20 ml) i vodom (20 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlorometanom (20 mL × 3). Spojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4, i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 60: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 249b (200 mg, 29%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>680,1
Primer 2493-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(3R)-3-metilmorfolin-4-karbonil]-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 249
U rastvor 249b (204 mg, 0,30 mmol) u THF/i-propanol/vodi (3/3/0,5 mL) dodat je litijum hidroksid (72 mg, 3 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 3 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (10 ml). Zatim je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 10 ml).
Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (A: 1% NH4HCO3u vodi, B: acetonitril) radi dobijanja 249 (85 mg, 44%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>638,3.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 2,0, 6,5 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,70 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,40-4,27 (m, 4H), 3,99-3,89 (m, 3H), 3,74 (S, 3H), 3,55-3,46 (m, preklapanje, 4H), 2,67-2,59 (m, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,39 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,28 (s, 6H).
Primer 250A 1-(5-(hidroksimetil)-3-nitro-1 H-pirazol-1-il) propan-2-ol 250A
Laboratorijska boca od 100-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa (3-nitro-1 H-pirazol-5-il) metanola (0,57 g, 4,0 mmol), Cs2CO3(261 mg, 0,8 mmol), i 2-metiloksiran (20 mL). Smeša je mešana na 30°C 2 dana. Smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena sa dihlorometanom (100 mL). Dobijena smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30:1 dihlorometan/metanolom da se dobije 250a (0.40 g, 50%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>202,3
Primer 250b 1-(5-(Bromometil)-3-nitro-1H-pirazol-1-il) propan-2-ol 250b
Na mešavinu 250a (4,0 g, 20,0 mmol) u hloroform (100 ml) ohlađen na 0° C je dodat rastvor POBR3(22,9 g, 80 mmol) u hloroform (20 ml) više od 30 minuta uz održavanje interne temperatura ispod 5° C. Reakciona smeša je zagrejana do 50° C i mešana na ovoj temperaturi 3 h. Zatim se ohladi na 0° C i ugasi vodom. Organski sloj je odvojen i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 250b (3.3 g, 62%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>264,1
Primer 250C 1-(5-((Methylamino) metil)-3-nitro-1 H-pirazol-1-il) propan-2-ol 250c U rastvor 250b (3,0 g, 11,4 mmol) u dihlormetan (30 ml) je dodat rastvor CH3NH2(3,0 g, 34,2 mmol, 35% u vodi). Ova reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim je organska faza odvojena, osušena iznad Na2SO4i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući 250c (1,9 g, 78%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>215,3
Primer 250d 5,6-Dimetil-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 250d
U smešu 250c (1.129 g, 5.27 mmol) i trifenilfosfina (4.14 g, 15.8 mmol) u bezvodnom THF (40 mL) ohlađenoj na 0° C dodat je rastvor di-izopropil azodikarboksilata (DIAD) (3.19 g, 15.8 mmol) u THF (15 mL) tokom perioda od 30 minuta uz održavanje unutrašnje temperature ispod 5° C. Reakciona smeša je zagrejana do 30° C i mešana na ovoj temperaturi 5 h. Smesa je zatim ugašena vodom (50 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 80 ml). Spojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4, i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80: 1 do 30: 1), dajući 250d (0,83 g, 80%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>197,2 Primer 250e 5,6-Dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 250e Rastvor 250d (550 mg, 2.8 mmol) u metanolu (20 mL) je dodat Raney Ni (oko 600 mg). Reakcija je napunjena gasom vodonika (preko balona) i mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Zatim se filtrira kroz čep CELITE<®>i filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 250e kao žuta čvrsta supstanca (400 mg, 86%), koja je korištena direktno u sljedećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>167,3
Primer 250f (4-(5-(5,6-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 250f
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 mL opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je s 4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-di-hidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 217a (525 mg, 1.0 mmol)), 250e (166 mg, 1.0 mmol), cezijum karbonat (652 mg, 2.0 mmol) i 1,4-dioksan (10 mL). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 30 minuta, dodati su ksantfos (116 mg, 0.20 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (92 mg, 0.10 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana sa dihlorometanom (2 x 30 mL) i kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80:1 do 30:1) da se dobije 250f (80 mg, 13%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>611,4.
Primer 250 2-[4-[5-[(5,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 250
U rastvor 250f (75 mg, 0,123 mmol) u THF-u/propanolu/vodi (4/2/2 mL) dodat je litijum hidroksid(15 mg, 0,62 mmol). Smeša je mešana na 30°C tokom 1 h. Po završetku reakcije, smeša se upari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 250 kao bela čvrsta supstanca (40 mg, 57%). MS-ESI: [M+H]<+>569,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.96 (bs, 1H), 7.73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.36 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.03 (t, J = 3.5 Hz, 1H), 4.65-4.62 (m, 1H), 4.52-4.50 (m, 1H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,17-4,05 (m, 3H), 3,91-3,88 (m, 2H), 3,73-3,71 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,55-3.52 (m, 1H), 2.90-2.87 (m, 1H), 2.64-2.58 (m, 4H), 2.43 (s, 3H), 1.93-1.90 (m, 2H), 1.81-1.80 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 252a 5-Bromo-3-(1-etil-5-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 252a
U laboratorijsku bocu sa okruglim dnom od 100 ml napunjen je 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 115a (800 mg, 2.83 mmol)., bromoethane (216 mg, 1.98 mmol), K2CO3(780 mg, 5.66 mmol) i DMF (20 ml). Smeša je zagrevana na 85°C preko noći. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan da se dobije 252a kao crvena čvrsta supstanca (298 mg, 37%). MS-ESI: [M+H]<+>311,0.<1>Η ΝΜR (500 ΜΗZ DMSO-d6) δ 8.28 (s, 1Η), 7.99 (d, J = 2.5 Ηz, 1Η), 7.35 (d, J = 2.5 Ηz, 1Η), 5.85 (s, 1Η), 3.98-3.94 (m, 2Η), 3.48 (s, 3Η), 2.19 (s, 3Η), 1.27 (t, J = 7.0 Ηz, 3Η).
Primer 252b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-
1
dien-10-il}-4-{5-[(1-etil-5-metil-1H-pirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 252b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 252a (200 mg, 0,64 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) borna kiselina 199e (309 mg, 0,64 mmol), PdCl2(dppf) (52.5 mg, 0.060 mmol), K3PO4(333 mg, 1.29 mmol), natrijev acetat (105 mg, 1.29 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan da se dobije 252b kao žuta čvrsta supstanca (120 mg, 27.6%). MS-ESI: [M+H]<+>584,3
Primer 252 3-[4-[5-[(1-etil-5-metil-pirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 252
Smeša 252b (120 mg, 0.21 mmol) i litijum hidroksida (23 mg, 0.82 mmol) u THF (6 mL), i-propanol (4 mL), i voda (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Zatim je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (5 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 10 ml). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 252 (52 mg, 47%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [Η Η]<+>542,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.06 (d, J = 5,5 Ηz, 1Η), 8.09 (e, 1Η), 8.07 (s, 1 Η), 7.41 (e, 1Η), 7.33 (d, J = 5.0 µz, 1Η), 6.56 (s, 1Η), 5.88 (s, 1Η), 4.97 (t, J = 4.5,z, 1,), 4.50-4.41 (s, 2Η), 4.24-4.19 (s, 3Η), 3.93-3.85 (m, 3Η), 3.59 (s, 3 Η), 2.62-2.57 (m, 2Η), 2.43 (s, 2Η), 2.19 (s, 3 Η), 1.27-1.23 (m, preklapanje, 9 Η).
Primer 253a 4-bromo-6-hloro-2-((2-(trimetilsilil) etoksi) metil) piridazin-3 (2H)-on 253a
2
Jedna laboratorijska boca od 500 ml sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom, očišćena je azotom i napunjena bezvodnim DMF-om (150 mL) i 4-brom-6-hloropiridazin-3 (2H)-onom (10.0 g 47.8 mmol). Reakciona smeša je ohlađena na 0° C i dodat je natrijum-hidrid. Reakciona smeša je mešana na 0°C 20 minuta. Nakon ovog vremena, dodat je 2-(trimetilsilil) etoksimetil hlorid (11.9 g, 71.6 mmol) i kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcija je pažljivo prekinuta zasićenim rastvorom natrijum-bikarbonata. Smeša je ekstrahovana etil-acetatom (2 mL, 300 puta). Ekstrakti su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom dajući 253a u prinosu od 56% (9,00 g) kao žuto ulje:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 5.42 (s, 2H), 3.79 (t, 2H, J = 5.4 Hz), 0.96 (t, 2H, J = 5.4 Hz), 0.01 (s, 9H).
Primer 253b (S)-terc-butil 4-(6-(6-hloro-3-okso-2-((2-(trimetilsilil) etoksi)-metil)-2,3-dihidropiridazin-4-ilamino) piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 253b
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je (S)-terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 191f (580 mg, 2.0 mmol), 253a (1.36 g, 4.0 mmol), Pd2(dba)3(180 mg, 0.20 mmol), Ksantfos (230 mg, 0.40 mmol), Cs2CO3(1,3 g, 4,0 mmol) i dioksan (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobiveni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 4: 1 petrol eter/etil-acetatom da bi se dobilo 253b (1,0 g, 91%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>551,2 Primer 253c (S)-6-Hloro-4-(5-(2-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridazin-3 (2H)-on 253c
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml napunjen je 253b (551 mg, 1,0 mmol), koncentrovana HCl (2 ml) i metanol (10 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 253c, koji je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>321,1
Primer 253d (S)-6-Hloro-4-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridazin-3 (2H)-on 253d
Laboratorijska boca od 50-mL sa okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 253c (321 mg, 1,0 mmol), 3-oxetanone (142 mg, 2,0 mmol), NaBH3CN (125 mg, 2,0 mmol), ZnCl2(272 mg, 2,0 mmol) i metanolom (10 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dodata je voda (20 ml) ostatku i dobijena smeša je ekstrahovana pomoću dihlormetana (3 x 20 ml). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa etil-acetatom, dajući 253d (210 mg, 56%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>377,3.
Primer 253e (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 253e
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 253d (172 mg, 0.46 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) boronska kiselina 199e (0,91 g, 2.29 mmol), Pd(dppf)Cl2(36 mg, 0.050 mmol), K3PO4(195 mg, 0,92 mmol), natrijev acetat (75 mg, 0.050 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i dobiveni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 20: 1 etil-acetat/metanol da bi se dobilo 253e (100 mg, 31%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>694,3.
Primer 253 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]]-6-okso-1H-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 253
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 253e (92 mg, 0.13 mmol), litijum-hidroksidom (16 mg, 0.65 mmol), THF (2 mL), i-propanolom (2 mL).), i vodu (0,5 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj
4
temperaturi 1 sat. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom. Dodata je voda (10 ml) ostatku, i dobijena smeša je ekstrahovana pomoću dihlorometana (3 x 20 ml). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 253 (22 mg, 26%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>652,2.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 10.83 (e, 1Η), 8.61 (e, 1Η), 8.58 (d, J = 5,0 Ηz, 1Η), 8.12 (e, 1Η), 8.05 (d, J = 2.5,z, 1Η), 7.45 (d, J = 5.0 µz, 1Η), 7.32 (dd, J = 3.0Hz, 5.5,z, 17), 7.00 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H 4.74-4.68 (m, 3H), 4.65-4.58 (m, 3H), 4.26-4.14 (m, 2H), 3.99-3.96 (m, 1H), 3.71-3.69 (m, 1H), 3.55-3.53 (m, 1H), 3,18-3,14 (m, 2H), 2,64-2,59 (m, 3H), 2,53-2,47 (m, 4H), 2,40-2,33 (m, 2H), 1,29 (s, 6H), 1,09 (d, J = 7,0 Hz, 3H).
Primer 254a 4-[5-({5-acetil-4Η, 5Η, 6Η, 7Η-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 254a
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-il-amino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 209d (344 mg, 0.83 mmol) 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il } piridin-3-karbaldehid 109a (202 mg, 0,56 mmol), Pd(dppf)Cl2(20 mg, 0.028 mmol), K3PO4(235 mg, 1.11 mmol), natrijev acetat (91 mg, 1.11 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitril (10 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 254a (400 mg, sirovo), koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>612,3
Primer 254 3-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-c] piridin-4-on 254
U rastvor 254a (98 mg, 0.16 mmol) u metanolu i dihlormetan je dodat NaBH4(13 mg, 0.33 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smeša je gašena sa vodenim NH4Clrastvor (5 mL) i koncentrirana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 254 (53 mg, 54%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>613,9.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, T=80°C) δ 8.45 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.93-7.92 (m, 2H), 7.33 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.97 (s, 1H), 4.67-4.63 (m, 3H), 4.46-4.45 (m, 2H), 3.97-3.93 (m, 2H), 3.89-3.86 (m, 3H), 3.56 (s, 3H), 2.97-2.91 (m, 2H), 2.53-2.55 (m, 2H), 2.49-2.46 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.21 (s, 6H).
Primer 255a 4-(5-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 255a
Slijedeći postupak opisan u primeru 246, i počevši s 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c (200 mg, 0.575 mmol) i 3-(5-acetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 209d (356 mg, 0.863 mmol), 255a je dobiven kao crveno ulje (320) mg, 93%). MS-ESI: [M+H]<+>599,3
Primer 255 2-[4-[5-[(5-acetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-10-fluoro-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 255
Prateći proceduru opisanu u Primeru 254, i počevši sa 255a (200 mg, 0.334 mmol), dobijeno je 255 kao bela čvrsta supstanca (55.5 mg, 28%). MS-ESI: [M+H]<+>601,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6, T=80°C) δ 8.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.97 (s, 1H), 4.70-4.63 (m, 3H), 4.46 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.10-3.86 (m, overlap, 8H), 3.58 (s, 3H), 2.57-2.55 (m, 2H), 2.43-2.39 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.79-1.67 (m, 4H).
Primer 256a (S)-(6-Aminopiridin-3-il) (3-metilmorfolino) metanon 256a
U rastvor (S)-3-metilmorfolina (1.5 g, 15.0 mmol) u etanolu (20 mL) dodat je EDCI (3.33 g, 17.4 mmol), HOBt (2.35 g, 17.4 mmol) i 6-aminonikotinska kiselina (2,07 g, 15,0 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon 18 sati mešanja, dobijena suspenzija je filtrirana. Čvrsta supstanca je prečišćena hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 2: 1 petrol eter/etil-acetatom do ravnog etil-acetata da bi se dobilo 256a (1.0 g, 30%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: 222,3 (M+H)<+>.
Primer 256b (S)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(3-metilmorfolin-4-karbonilpiridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 256b
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (10 ml), 256a (111 mg, 0.50 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (134 mg, 0.60 mmol), cezijum karbonat (326 mg, 1.0 mmol), Ksantfos (29 mg, 0.05 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijumom (0) (23 mg, 0.025 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagren na 100° C 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana sa dihlorometanom (3 X 30 mL) i kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela eluiranjem sapetroleum etrom/etil-acetatom (2:1 do 1: 2) radi dobijanja 256b (140 mg, 77%) kao žute čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>364,3 Primer 256c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-{[(3 S)-3-methylmorpholin-4-il] karbonil} piridin-2-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 256c
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 256b (140 mg, 0,38 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (159 mg, 0.40 mmol), K3PO4(85 mg, 0,40 mmol), natrijum-acetat (33 mg, 0,40 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladijum (II) (15 mg, 0,020 mmol), acetonitril (10 ml), i vode (0.5 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na 100° C 2.5 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi i razblažena dihlormetanom (30 ml) i vodom (30 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Spojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4, i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 60: 1 dihlorometan:/metanolom da se dobije 256c (90 mg, 35%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>681,3
Primer 2563-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(3S)-3-metilmorfolin-4-karbonil]-2-piridil] amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 256
U rastvor 256c (90 mg, 0.13 mmol) u THF/i-propanol/vodi (2.0/1/0.5 ml) dodat je litijum hidroksid (31 mg, 1.3 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 3 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Zatim je smeša sipana u vodu (15 ml), i ekstrahovana pomoću dihlorometana (3 x 10 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani ledom/zasićenim vodenim rastvorom natrijum-hlorida (50 ml), osušeni iznad Na2SO4i filtrirani. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 256 (40 mg, 48%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M+H]<+>639,3.<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 8.86 (e, 1H), 8.58 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 2.0, 6.5 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,85-4,82 (m, 1H), 4,66-4,64 (m)., 1H), 4.42-4.27 (m, 4H), 4.02-3.88 (m, preklapanje, 6H), 3.74-3.67 (m, 2H), 3.56-3.46 (m, 2H), 2.67-2.59 (m, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.39 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.28 (s, 6H).
Primer 257a (S)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(3-metilmorfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 257a
U laboratorijsku bocu s okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je (S)-(6-aminopiridin-3-il) (3-metilmorfolino) metanon (222 mg, 1,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (320 mg, 1.2 mmol), cezijum karbonat (652 mg, 2 mmol) i 1,4-dioksan (10 mL). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 10 minuta, dodati su Ksantfos (58 mg, 0.10 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (46 mg, 0.050 mmol). Sistem je bio podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu tokom 2.5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana sa dihlorometanom (2 x 30 mL) i kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etilacetatom (2: 1 do 1: 2), dajući 257a (280 mg, 69%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>407,3
Primer 257B (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-{[(3S)-3-metilmorfolin-4-il] karbonil} piridin-2-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 257b
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 257a (203 mg, 0.50 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronske kiseline 199e (640 mg, 1.6 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (18 mg, 0.025 mmol), natrijum-acetat (82 mg, 1.0 mmol), acetonitril (10 mL), i vode (0,2 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 2,5 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (20 ml) i vodom (20 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Spojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4, i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 60: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 257b (160 mg, 47%) kao crna čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>680,1
Primer 2573-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(3S)-3-metilrnorfolin-4-karbonil]-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 257
U rastvor 257b (157 mg, 0.23 mmol) u THF/i-propanol/vodi (2/2/0.5 mL) dodat je litijum hidroksid (55 mg, 2.3 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 3 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Smeša je sipana u vodu (15 ml), i ekstrahovana pomoću dihlorometana (3 x 15 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 ml), osušeni iznad Na2SO4i filtrirani. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak čvrste supstance je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (A: 1‰ NH4HCO3u vodi; B: acetonitril) da se dobije 257 (52 mg, 35%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>668,3.<'>H NMR (500 MHz, MeOD) 88,94 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,69 (dd, J = 2,0, 6,5 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,70 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,58 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,41-4,27 (m, 4H), 3,99-3,89 (m, 3H), 3,74-3,66 (m)., preklapanje, 5H), 3.55-3.46 (m, 2H), 2.67-2.59 (m, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.39 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.28 (s, 6H).
Primer 258a 6-hloro-2-metil-4-({5-[(morfolin-4-il) karbonil] piridin-2-il} amino)-2,3-dihidropiridazin-3-on 258a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (40 mL), (6-aminopiridin-3-il) (morfolino)-metanonom (2,07 g), 10.0 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on 111a (3.35 g, 15.0 mmol), Pd2(dba)3(915 mg, 1.0 mmol), Ksantfos (578 mg) 1,0 mmol) i cezijum karbonata (6,52 g, 20 mmol). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 100° C tokom 8 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana dihlormetanom (2 x 20 mL). Kombinovani Filtrat je osušen preko bezvodnog Na2SO4i koncentrirana pod smanjenim pritiskom dajući 258A (2.45 g, 51%) kao žutu čvrstu supstancu. MS: [M+H]<+>350,1 Primer 258b 1-Metil-5-(5-(morfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-ilboronska kiselina 258b
U posudu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjen je 258a (2,0 g, 5,73 mmol, 1,0 ekv.), 4,4,4', 4', 5,5, 5', 5'-octamethyl-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolana) (7.56 g, 28.6 mmol, 5.0 CQ), Pd(dppf)Cl2(465 mg, 0,57 mmol, 0,1 eq) X-Phos (461 mg, 1,14 mmol, 0,2 ekv.), Kalijum acetat (1,11 g, 11,4 mmol, 2,0 ekv.) I dioksan (50 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 50° C 6 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran sa 1: 3 etil-acetat/petrolej etrom da bi se dobilo 258b (1.70 g, 83%) kao žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS: [M+H]<+>360,1 Primer 258c 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 258c
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9) 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-karbaldehid 124a (100 mg, 0.29 mmol), 258b (128 mg, 0.36 mmol), PdCl2(dppf) (24 mg, 0.031 mmol), K3PO4(123 mg, 0.58 mmol), natrijum-acetat (57 mg, 0.58 mmol), acetonitril (30 mL) i voda (3 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je mešana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol etilacetatom 1: 3, dajući 258c kao žutu čvrstu supstancu (45 mg, 25%). MS-ESI: [M+H]<+>625,2
Primer 258 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-karbonil)-2-piridil] amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-6,7,8,9-tetrahidrobcnzotiofeno [2,3-d] piridazin-4-on 258
Smeša 258c (45 mg, 0.071 mmol), NaBH4(8 mg, 0.21 mmol) i metanol (7 ml) je mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Zatim je reakciona smeša ugašena vodom (5 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (2 X 10 mL) i kombinovani dihlorometanski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 258 (24 mg, 53%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>627,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.80 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.65 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.39 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.80-7.78 (m, 1H), 7.67 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.85 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.52-4.35 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.60-3.49 (m, 8H), 2.95-2.93 (m, 2H), 2.89-2.84 (m, 2H), 1.94-1.83 (m, 4H).
Primer 259A 2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatricikl.o [6.4.0.0<2, 6]>dodeca-1 (8), 2 (6)-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(morfolin-4-il) karbonil] piridin-2-il} amino)-6-oksopiridazin-3-il] piridin-3-karbaldehid 259a
1
Laboratorijska boca okruglog dna opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a (144 mg, 0.40 mmol), 1-metil-5-(5-(morfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-ilboronska kiselina 258a (215 mg, 0.60 mmol), PdCl2(dppf) (16 mg, 0.020 mmol), K3PO4hidrat (207 mg, 0.80 mmol), natrij acetat (66 mg, 0,80 mmol), acetonitril (15 ml) i voda (1,5 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se meša na 100° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 259a kao žuta čvrsta materija (80 mg, 30%). MS-ESI:
[M+H]<+>640,3.
Primer 259 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-karbonil)-2-piridil] amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-c] piridin-4-on 259
Smeša 259A (80 mg, 0.12 mmol), NaBH4(14 mg, 0,36 mmol) i metanol (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 h. Zatim je ugašena sa slanom vodom (5 mL) i isparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (2x10 mL) i kombinovani dihlorometanski ekstrakt je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobilo 259 kao bela čvrsta supstanca (38 mg, 49%). MS-ESI: [M+H]<+>642,8.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.78 (s, 1H), 8.61 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 2.5 Hz, 2H), 7.80-7.77 (m, 1H), 7.45 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.06-7.04 (m, 1H), 4.65-4.59 (m, 2H), 4.42 (s, 1H), 4.30-4.27 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.90-3.87 (m, 1H), 3.76-3.68 (m, 8H), 3.04-2.92 (m, 2H), 2.82-2.80 (m, 2H), 2.59-2.54 (m, 2H), 1.30 (s, 6H).
Primer 260a (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1 H-pirazol-3-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 260a
2
Laboratorijska boca opremljena refluks kondenzatorom je napunjena sa za 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1 H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1 H)-on 218a (201 mg, 0.71 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (282 mg, 0,71 mmol), Pd(dppf)Cl2(51 mg, 0,07 mmol), K3PO4(301 mg, 1,42 mmol), natrij acetat (116 mg, 1,42 mmol), acetonitrilom (10 mL) i vodom (0,2 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1:20 metanol/dihlorometan da se dobije 260a kao crvena čvrsta supstanca (150 mg, 38%). MS-ESI: [M+H]<+>556,3 Primer 260 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-1H-pirazol-3-il) ammo]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 260
Smeša 260a (150 mg, 0.27 mmol) i litijum hidroksida (13 mg, 0.54 mmol) u THF (6 mL), i-propanol (4 mL) i voda (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (5 ml). Zatim se ekstrahuje sa dihlorometanom (2 x 10 ml) i kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 260 (28 mg, 20%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>514,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.76 (s, 1 H), 8.47 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 8,07-8,05 (m, 2 H), 7,38-7,31 (m, 2H), 6,55 (s, 1 H), 5,88 (s, 1 H), 4,95-4,93 (m, 1 H), 4,48-4,39 (m, 2H), 4,22-4,18 (m, 3H), 3,83 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 3,58 (s, 3 H), 2,64-2,56 (m, 2 H), 2,36-2,34 (m, 2 H), 2,16 (s, 3 H), 1,22 (s, 6 H).
Primer 261a 4-{5-[(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il}-2-{10-fluoro-1-okso-1H, 2H, 3H, 4H, 6H, 7H, 8H, 9H-pirido [3,4-b] indolizin-2-il} piridin-3-karbaldehid 261a
U posudu od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjen je 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c (97 mg, 0.28 mmol), 3-[(1, 5-dimetil-1H-pirazol-3-il) amino]-1-metil-5-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-2-on 218a (192,6 mg, 0,56 mmol), Pd2(dba)3(54,9 mg, 0,060 mmol)), tri (cikloheksil) phsphine (50.2 mg, 0.18 mmol), Cs2CO3(182,6 mg, 0,56 mmol), dioksan (8 ml), i vode (0,25 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se 2 h meša na 110° C. Zatim se filtrira i filtrat se upari u vakuumu. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 35: 1 etil-acetat/metanol da se dobije 261a (90 mg, 61%) kao crna čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>530,2
Primer 261 2-[4-[5-[(1, 5-dimetilpirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-10;-fluoro-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 261 U rastvor 261a (90,0 mg, 0,17 mmol) u metanolu (5 mL) dodat je natrijum borohodrid (64,6 mg, 1,7 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakcija je mešana 0,5 h. Zatim je ugašena vodom (2 mL) i uparena u vakuumu. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani dihlorometanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 261 (47,0 mg, 52%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>532,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.03 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.89 (s, 1H), 4.87-4.85 (m, 1H), 4.45-4.36 (m, 2H), 4.11-4.09 (m, 1H) 3.93-3.91 (m, 1H), 3.79-3.76 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.00-2.94 (m, 2H), 2.66-2.63 (m, 2H)), 2.18 (s, 3H), 1.90-1.88 (m, 2H), 1.78-1.73 (m, 2H)
Primer 262a 5-Bromo-1-metil-3-(5-metiloksazol-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 262a
4
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-metiloksazol-2-aminom (276 mg, 2,82 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (753 mg, 2.82 mmol), tris-(dibenzilidenaceton) dipaladij (0) (256 mg, 0.28 mmol), Ksantfos (324 mg, 0.56 mmol), Cs2CO3(1.8 g, 5.64 mmol), i 1,4-dioksan (30 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 92° C 3 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 100: 1 dihlorometan/metanol, dajući 262a kao belu čvrstu supstancu (702 mg, 88%). MS-ESI: [M+H]<+>284,1.
Primer 262B (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,3-oksazol-2-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 262b
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 262a (150 mg, 0,53 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (421 mg, 1.06 mmol), Pd(dppf)Cl2(37 mg, 0.050 mmol), K3PO4(225 mg, 1.06 mmol), natrijev acetat (87 mg, 1.06 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (10 ml). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 90° C tokom 1 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 30: 1) da se dobije 262b kao žuta čvrsta supstanca (100 mg, 34%). MS-ESI: [M+H]<+>556,9.
Primer 262 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metiloksazol-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 262
Smeša 262b (100 mg, 0.18 mmol) i litijum hidroksida (108 mg, 4.5 mmol) u ipropanol/THF/vodi (4/4/2 mL) je mešana na 35° C tokom 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata voda (5 mL) i rezultirajuća smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 262 kao bela čvrsta supstanca (21,0 mg, 23%). MS-ESI: [M+H]<+>515,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.19 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.60 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.96-4.94 (m, 1H), 4.45-4.36 (m, 2H), 4.24-4.14 (m, 3H), 3.84 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 2.62-2.56 (m, 2H), 2.44-2.42 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.22 (s, 6H).
Primer 263a 6-hloro-2-metil-4-(pirimidin-4-ilamino) piridazin-3 (2H)-on 263a
U posudu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 1,4-dioksan (150 mL), pirimidin-4-amin (1.7 g, 18.0 mmol), 4-brom-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (4,0 g, 18,0 mmol) i cezijum karbonat (11,74 g, 36,0 mmol). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 30 minuta, dodati su ksantfos (1.04 g, 1.8 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (823 mg, 0.9 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 50 ml). Kombinovani filtrat je koncentrovan i ostatak je ispran acetonitrilom (5 mL) da se dobije 263a (2.99 g, 70%) kao žuta čvrsta supstanca. MS:
[M+H]<+>238
Primer 263b 1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridazin-3-ilboronska kiselina 263b
Boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 263a (500 mg, 2,11 mmol), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-octamethyl-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolana) (2.68 g, 10.6 mmol), Pd(dppf)Cl2(170 mg, 0.20 mmol), X-phos (170 mg, 0.40 mmol), kalijum acetat (410 mg, 4,21 mmol) i dioksan (30 ml). Sistem je podvrgnut 3 ciklusa vakuum/argon ispiranja i mešan na 50° C 6 h. LCMS je pokazao da je 263a potpuno pretvoren u 263b.
Primer 263c 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidropiridazin-3-il) nikotinaldehid 263c U smesu 263b na sobnoj temperaturi dodat je 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H))-il) nicotinaldehyde 134c (300 mg, 0.90 mmol), Pd(dppf)Cl2(170 mg, 0.20 mmol), K3PO4(103 mg, 0.40 mmol), i vode (2 mL). Sistem je ponovo podvrgnut ispiranju u 3 ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom i 4 h mešan na 80° C. Reakciona smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, razblažena vodom (30 mL) i filtrirana. Filtrat je ekstrahovan dihlorometanom (2 x 30 ml). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (40: 1 do 20: 1) dajući 263c kao žutu čvrstu supstancu (210 mg, 45%). MS-ESI: [M+H]<+>515,3
Primer 263 10-fluor-2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino) piridazin-3-il]-2-piridil]-3,4, 6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 263
Boca od100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 263c (100 mg, 0,19 mmol), NaBH4(30 mg, 0,78 mmol) i metanol (20 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0,5 sat. Zatim je razblažena vodom (30 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (2 x 30 mL) i kombinovani dihlorometanski ekstrakt je osušen i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 263 kao bela čvrsta supstanca (67 mg, 68%). MS-ESI: [M+H]<+>517,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,93 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,55 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 1,0, 6,0 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 5.,0 Hz, 1H), 4,83 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,62-4,58 (m, 1H), 4,39-4,36 (m, 1H), 4,25-4,19 (m, 2H), 4,06-4,04 (m, 1H), 3,92-3,90 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 2,64-2,54 (m, 2H), 2,43-2,41 (m, 2H), 1,781.76 (m, 2H), 1,69-1,67 (m, 2H).
Primer 264a 2-(4-aminopirimidin-2-il) propan-2-ol 264a
U rastvor etil 4-aminopirimidin-2-karboksilata (840 mg, 5.0 mmol) u bezvodnom tetrahidrofuranu (50 mL), ohlađen na-20° C, dodat je rastvor metilmagnezijum bromida u THF (8.5 mL, 25.0 mmol, 3.0 M) u periodu od 5 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0°C dopunska 2 sata. Tada je ugašena sa zasićenom NH4Cl (20 mL) i koncentrirana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (5 x 15 ml). Kombinovani organski sloj je osušeni iznad anhidrovanog Mg2SO4, filtriran i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom fazom pomoću Combiflash radi dobijanja 264a kao žute čvrste supstance (240 mg, 32%) MS-ESI: [M+H]<+>154,1
Primer 264b 5-Bromo-3-(2-(2-hidroksipropan-2-il) pirimidin-4-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 264b
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 264a (300 mg, 2,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (800 mg, 3,0 mmol), Pd2(dba)3(182 mg, 0,20 mmol), Ksantfos (231 mg, 0,40 mmol), Cs2CO3(1,30 g, 4,0 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml).). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 15 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 40: 1 dihlorometan/metanolom (40: 1) i dalje prečišćen Combifleš reverznom fazom da bi se dobio 264b kao bela čvrsta supstanca (200 mg, 30%). MS-ESI: [M+H]<+>339,0
Primer 264c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(5-{[2-(2-hidroksipropan-2-il) pirimidin-4-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-piridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 264c
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 264b (170 mg, 0,50 mmol), (3-(acetoksimetil)-2-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7). 8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il) piridin-4-il) boronska kiselina 199e (200 mg, 0.50 mmol), Pd(dppf)Cl2(40 mg, 0.050 mmol), K3PO4(212 mg, 1,0 mmol), voda (0,5 mL), i tetrahidrofurana (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na refluksu 6 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 40: 1 dihlorometan/metanol, dajući 264c kao braon čvrstu supstancu (200 mg, 54%). MS-ESI: [M+H]<+>612,3
Primer 264 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[2-(1-hidroksi-1-metil-etil) pirimidin-4-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 264
U rastvor 264c (170 mg, 0,27 mmol) u THF-u (10 mL) i vodi (2 mL) dodat je LiOH (64 mg, 3,0 mmol). Reakciona smeša je mešana na 35°C tokom 2 sati. Zatim se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 264 (86 mg, 46%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>570,1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.27 (e, 1H), 8.94 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,14 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,89 (s, 1H), 4,48-4,42 (m, 2H), 4,23-4,19 (m, preklapanje, 3H), 3,85-3,84 (m, 1H), 3,62 (s), 3H), 2.67-2.56 (m, 2H), 2.42 (s, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.21 (s, preklapanje, 6H).
Primer 265a 1-(2-Nitro-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-il) propan-1-on 265a
U rastvor 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 209a, 200 mg, 1,19 mmol) u DCM-u (8 ml) dodat je Et3N (240 mg, 2,38 mmol). Nakon 5 minuta mešanja, doda se rastvor propionil hlorida (121 mg, 1,31 mmol) u dihlorometanu (2 ml) i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smeša je isprana vodom, slanim rastvorom, osušena iznad Na2SO4, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja 265a (260 mg, 98%) kao bela čvrsta supstanca koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>225,0
Primer 265b 1-(2-Amino-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-il) propan-1-on 265b
U rastvor 265a (260 mg, 1,16 mmol) u metanolu (10 mL) dodat je 10% Pd/C (26 mg). Sistem je evakuiran, a zatim napunjen sa H2.Nakon 2 h mešanja, analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smesa je filtrirana i filtrat je koncentriran pod smanjenim pritiskom da bi se dobio 265b kao žuta čvrsta supstanca (225 mg, 99%). MS-ESI: [M+H]<+>195,1
Primer 265c 5-Bromo-1-metil-3-(5-propionil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 265c
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 265b (200 mg, 1,03 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-onom (414) mg, 1.55 mmol), Pd2(dba)3(47 mg, 0,052 mmol), Ksantfos (60 mg, 0.103 mmol), Cs2CO3(671,6 mg, 2.06 mmol) i dioksan (20 ml).
Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 80: 1 dihlorometan/metanol, dajući 265c (280 mg, 72%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>380,2
Primer 265d (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-6-okso-5-({5-propanoil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 265d
U posudu sa jednim vratom sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjeno je 265c (200 mg, 0,53 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (834 mg, 2.10 mmol), Pd(dppf)Cl2(19 mg, 0.0263 mmol), K3PO4(223 mg, 1.052 mmol), natrijev acetat (86 mg, 1.052 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vode (5 kapi). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 60: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 265d (100 mg, 29%) kao žuto ulje. MS-ESI: [M+H]<+>653,3
Primer 265 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-[(5-propanoil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 265
U rastvor j265d (100 mg, 0,153 mmol) u THF-u (3 mL), i-propanolu (3 mL) i vodi (5 mL) dodat je LiOH (37 mg, 1,53 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smesa je koncentrirana pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze i dobiven je 265 (50 mg, 54%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>611,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6,T = 80° C) δ 8.45 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,93-7,90 (m, 2H), 7.35 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,98 (s, 1H), 4,74-4,71 (m, 1H), 4,65 (s, 2H), 4,46-4,44 (m, 2H), 4.18-4.16 (m, 2H), 3.97-3.87 (m, preklapanje, 5H), 3.58 (s, 3H), 2.57-2.56 (m, 2H), 2.49-2.37 (m, 4H), 1.22 (s, 6H), 1,03 (t, J = 12,0 Hz, 3H).
Primer 266a 5-bromo-1-metil-3-((5-(oksetan-3-il)-1H-pirazol-3-il) amino) piridin-2
1
(1H)-on 266a
Nakon reakcione šeme sa slike 26, 266a je pripremljena.
Primer 266b (2 '-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il)-1-metil-5-((5-(oksetan-3-il)-1H-pirazol-3-il) amino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-3'-il) metil-acetat 266b
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 266a (33 mg, 0.10 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (60 mg, 0,15 mmol), Pd(dppf)Cl2(7 mg, 0.010 mmol), K3PO4(42 mg, 0.20 mmol), natrijev acetat (16 mg, 0.20 mmol), acetonitrilu (6 ml), vode (0,1 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 266b kao belu čvrstu supstancu (17 mg, 28%). MS-ESI: [M+H]<+>598,4
Primer 266 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(oksetan-3-il)-1H-pirazol-3-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 266
Smeša 266b (15 mg, 0.025 mmol) i litijum hidroksida (6 mg, 0.25 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (5 ml). Zatim je ekstrahovana etilacetatom (2 x 10 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 266 (4,5 mg, 33%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>556,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 6,09 (s, 1H), 5,07-5,04 (m, 2H), 4,79-4,76 (m, 2H), 4,68-4,66 (m, 1H), 4,54-4,51 (m, 1H), 4,37-4,34 (m, 1H), 4,28-4,25 (m, 1H), 4,18 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,89-3,87 (m, 1H), 3,73 (s, 3H)), 2.59-2.57 (m, 2H), 2.54-2.52 (m, 3H), 1.29 (s, 6H).
2
Primer 267a 5-Bromo-1-metil-3-(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-ilamino) piridin-2 (1 H)-on 267a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-aminom (1,15 g, 10,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1 H)-on (4.00 g, 15.0 mmol), Pd2(dba)3(916 mg, 1.0 mmol), Ksantfos (1.16 g, 2.0 mmol), Cs2CO3(6.52) g, 20.0 mmol) i dioksana (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 267a (2.2 g, 73%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>301,2
Primer 267b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 267b
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 267a (150 mg, 0.50 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (640 mg, 1.5 mmol), PdCl2(dppf) (37) mg, 0.050 mmol), K3PO4(212 mg, 1,0 mmol), natrijev acetat (82 mg, 1,0 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vode (0,2 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 267b (80 mg, 28%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>574,2
Primer 2673-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-1, 3,4-tiadiazol-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 267
U posudu sa okruglim dnom od 25 ml opremljenom magnetnom mešalicom, napunjen je 267b (80 mg, 0.14 mmol), litijum hidroksid (17 mg, 0.70 mmol), THF (2 mL), i-propanol (2 mL) i voda (0.5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom (5 mL), ekstrahovan sa dihlorometanom (10 mL x 3) i kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 267 (32 mg, 43%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>532,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.19 (s, 1H), 8.57 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.92 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.45-4.37 (m, 2H), 4.22-4.17 (m, 3H), 3.85-3.80 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.58-2.56 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.42 (s, 2H), 1.17 (s, 6H).
Primer 268a 1-metil-4-nitro-1H-imidazol 268a
Na mešavinu od 4-nitro-1H-imidazola (2,0 g, 17,7 mmol) i K2CO3(3,67 g, 26,5 mmol) u acetonitrilu (20 ml) je dodat Iodomethane (1,3 mL, 3,0 g, 21.2 mmol) u kapima uz mešanje na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana na 60°C preko noći. Zatim je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (20 ml). Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 20 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 100: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 268a kao žutu čvrstu supstancu (1.8 g, 82%). MS-ESI: [M+H]<+>128,1.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 3.76 (s, 3H).
Primer 268b 1-metil-1H-imidazol-4-amin 268b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml napunjena je 268a (1,6 g, 12,6 mmol), 10% paladijem na uglju (50% vlažnim, 160 mg) i etanolom (15 ml). Boca je evakuisana, napunjena gasom vodonika i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod
4
sniženim pritiskom dajući 268b (1,2 g, 98%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>98,2
Primer 268c 5-Bromo-1-metil-3-(1-metil-1H-imidazol-4-ilamino) piridin-2 (1H)-on 268c
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (50 mL), 268b (1.1 g, 11.3 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (3,0 g, 11,3 mmol), Pd2(dba)3(1,0 g, 1.13 mmol), Ksantfos (1,3 g, 2,26 mmol) i cezij karbonat (7.3 g, 22.6 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 92° C 4,5 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (100: 1 do 50: 1) da se dobije 268c (2,4 g, 76%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>283,1
Primer 268d (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-1H-imidazol-4-il) amino]-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 268d
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom, napunjeno je 268c (150 mg, 0,53 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (80.4 mg, 0.21 mmol), Pd(dppf)Cl2(17.2 mg, 0.021 mmol), K3PO4(89 mg, 0.42 mmol), natrijev acetat (57,1 mg, 0,42 mmol), voda (0,2 mL) i acetonitrilu (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 90° C tijekom 2,5 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (30: 1 do 20: 1), dajući 268d (110 mg, 37,2%) kao braon čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]+ 556,4.
Primer 268 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(1-metilimidazol-4-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 268
Smeša 268d (100 mg, 0.18 mmol) i litijum hidroksida (189 mg, 4.5 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4.0 mL) i voda (1.0 mL) je mešana na 35° C tokom 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata voda (5 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom (3 X 10 mL). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 268 (19,8 mg, 22%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>514,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,47 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,44 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,36 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,12-5,10 (m, 1H), 4,44-4,41 (m, 2H), 4,22-4,18 (m, 3H), 3,84-3,82 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 2,59-2,56 (m, 2H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,22 (s, 6H)
Primer 269a 2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(morfolin-4-il) karbonil] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karbaldehid 269a
Boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom je napunjena sa 4-hlor-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2 6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 108a (100 mg, 0.29 mmol), 1-metil-3-(5-(morfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-di-oksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 111c (192 mg, 0.44 mmol), Pd(dppf)Cl2(12 mg, 0.015 mmol), K3PO4(123 mg, 0,58 mmol), natrijev acetat (47 mg, 0,58 mmol), acetonitrilom (10 ml), i vodom (5 kapi). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 100° C za 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni (dihlorometan/metanol 40: 1) da se dobije 269a (150 mg, 83%) kao braon čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>621,8 Primer 269 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(morfolin-4-karbonil)-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 269
U rastvor 269a (150 mg, 024 mmol) u dihlorometanu (5 mL) i metanolu (5 mL) dodat je NaBH4(18,2 mg, 0,482 mmol). Nakon mešanje na sobnoj temperaturi 1 h, smeša je gasio sa vodenim NH4Cl (10 mL) i koncentrirana pod smanjenim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 20 ml). Kombinovani ekstrakt je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4,koncentriran pod sniženim pritiskom, i prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC radi dobijanja 269 (114 mg, 76%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>624,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (e, 1H), 8,79 (d, J = 2,,0 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,26 (d, J = 1,5 Hz,1H), 7,67 (dd, J = 2,0, 9,0 Hz, I1H), 7,61 (d, J = 1,5 Hz, I1H), 7,38-7,36 (m, 2H), 6,56 (s, 1H), 5,00 (s, 1H), 4,47-4,40 (m, 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,62-3,60 (preklapanje, m, 4H), 3,51 (s, 3H), 3,52-3,50 (m, 4H), 2,59-2,57 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1.,22 (s, 6H).
Primer 270a Etil N-[(pirazin-2-il) karbamotioil] karbamat 270a
Laboratorijska boca sa jednim vratom i okruglim dnom od 250 ml opremljena magnetnom mešalicom napunjena je pirazin-2-aminom (7,6 g, 80,0 mmol, 1,0 ekv.), O-etil karbonizotiocijanatidatom (12,5 g, 95,4 mmol, 1,2 ekv.) i dioksanom (150 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 24 h. Po završetku reakcije, koncentrisana je do zapremine od oko 20 mL pod sniženim pritiskom i dobijena suspenzija je filtrirana. Čvrsta supstanca je sakupljena i isprana etil-acetatom (3 x 20 mL) da bi se dobilo 270a (14.0 g, 77%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>227,3
Primer 270b [1,2,4] Triazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 270b
U posudu sa okruglim dnom od 250 ml opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjen je 270a (6,00 g, 26,43 mmol, 1,0 ekv.), Hidroksilamin hidrohlorid (3,32 g, 47,52 mmol, 1,8 ekv.) DIPEA (12 mL), etanol (40 mL) i metanol (40 mL). Reakciona smeša je mešana na 65°C tokom 16 sata. Po završetku reakcije, ohlađena je na sobnu temperaturu i koncentrovana do zapremine od oko 20 ml pod sniženim pritiskom. Dobijena suspenzija je sakupljena filtracijom i čvrsta supstanca je isprana sa 60: 1 dihlorometan/etanol (50 mL) da bi se dobilo 270b (3.3 g, 92%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>136,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.84 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.70 (dd, J = 1.0, 4.0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.47 (s, 2H).
Primer 270c terc-butil [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirazin-2-ilkarbamat 270c Laboratorijska boca od 250-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 270b (2,00 g, 14,8 mmol, 1,0 eq.), Boc2O (3,87 g, 17,77 mmol, 1,2 ekv.), i bezvodni THF (60 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je ohlađena na-78° C, praćeno dodavanjem LHMDS (37,0 mL, 37,0 mmol, 2,5 ekv., 1,0M u THF). Nakon što je reakcij mešana na-78° C u trajanju od 2 sata, ugašena je sa zasićenim vodenim NH4Cl rastvorom (30 ml). Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 X 50 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 4 etilacetat/petrolej etrom da se dobije 270c (1.87 g, 53%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M-t-Bu]<+>180.0.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.31 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.72 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 1.25 (s, 9H).
Primer 270d terc-butil 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4] triazolo [1,5-a] pirazin-2-ilkarbamat 270d
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL je prečišćena sa azotom i napunjena 270c (1.0 g, 4.25 mmol), 20% paladijuma na ugljenu (10% vlažan, 200 mg) i etanol (40 mL). Zatim je evakuisan, napunjen gasom vodonika (25 atm) i mešan na 60° C tokom 24 h. Vodonik je ispražnjen i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da se dobije 270d (700 mg, 68%). MS-ESI: [M-t-Bu]<+>184.0
Primer 270e terc-butil 7-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4] triazolo [1,5-a] pirazin-2-ilkarbamat 270e
Nakon postupka u Primeru 191i, a počinju sa 270d (500 mg, 2,1 mmol, 1.0 eq.), Paraformaldehid (630 mg, 21.0 mmol, 10.0 eq.), ZnCl2/dietil etera (2.1 mL, 2.1 mmol, 1.0 M), NaBH3CN (390 mg, 6,3 mmol, 3.0 ekv.), i metanol (20 ml) pruža 270e kao žutu čvrstu supstancu (500 mg, 94%). MS-ESI: [M-t Bu]<+>198.0.
Primer 270f 7-Metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4] triazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 270f Prateći proceduru u Primeru 131e i počevši sa 270e (500 mg, 1.97 mmol) Boc deprotekcijom sa kiselinom dobije se 270f kao žuta čvrsta supstanca (200 mg, 66%). MS-ESI: [M+H]<+>154,1.
Primer 270g (4-(1-metil-5-(7-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4] triazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 270g
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 270f (100 mg, 0.65 mmol, 1.7 ekv.), (4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 217a (200 mg, 0.38 mmol, 1.0 ekv.), DMF (10 mL) i cezijum karbonat (499 mg, 1.52 mmol, 4.0 ekv.). Nakon propuštanja azota kroz dobijeni rastvor tokom 10 minuta, dodati su Ksantfos (44 mg, 0.076 mmol, 0.20 ekv.) I tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (35 mg, 0.038 mmol, 0.10 ekv.). Reakciona smeša je podvrgnuta ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevana na 100° C tokom 16 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Ostatak je raspodeljen između etil-acetata (50 mL) i vode (10 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan etil-acetatom (3 × 20 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50:1 dihlorometan/metanolom da se dobije 270 g (90 mg, 41%). MS-ESI: [M+H]<+>598,3.
Primer 270 2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(7-metil-6,8-dihidro-5H-[1, 2,4] triazolo [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 270
Prateći proceduru za primer 241, i počevši sa 270 g (90 mg, 0.15 mmol), dobije se 270 kao bela čvrsta supstanca (47 mg, 56%). MS-ESI: [M+H]<+>556,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.50 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,93 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,44-4,38 (m, 2H), 4,24-4,02 (m, 5H), 3.88-3.85 (m, 1H), 3.61-3.59 (m, preklapanje, 5H), 2.87 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.64-2.58 (m, 2H), 2.49-2.46 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 1,80-1,69 (m, 4H).
Primer 271a (S)-terc-butil 4-(6-(5-hloro-2-metoksipiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 271a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (40 mL), (S)-terc-butil 4-(6-amino piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 101h (2,04 g, 7,0 mmol), 3-bromo-5-hloro-2-metoksipiridin (2,8 g, 12,6 mmol), Pd2(dba)3(640 mg, 0,70 mmol) Ksantfos (404,6 mg, 0,70 mmol) i cezijum-karbonat (4,56 g, 14,0 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana 4 sata na 100° C. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 3 etil-acetat/petrolej etrom da bi se dobilo 271a (1.7 g, 57%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>434,2
Primer 271b terc-butil (3S)-4-(6-{[5-(2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6)), 7-dien-10-il}-3-(hidroksimetil) piridin-4-il)-2-metoksipiridin-3-il] amino} piridin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat 271b
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 271a (650 mg, 1,50 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (1.79 g, 4.5 mmol), Pd2(dba)3(137.2 mg, 0.15 mmol), P(CY)3(167,4 mg, 0,60 mmol), Cs2CO3(978 mg, 3.0 mmol), dioksan (20 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 110° C 16 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. dodati su litijum hidroksid monohidrat (1.89 g, 45 mmol) i voda (2.0 mL). Dobijenaa smeša je mešana na 45°C tokom 4 sati. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 3: 1 etil-acetat/petrol etar, dajući 271b (290 mg, 27%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>709,3
Primer 271c 10-[3-(hidroksimetil)-4-[5-({5-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 271c
Smeša 271b (286,6 mg, 0,40 mmol) u HCl/MeOH (30 mL) mešana je na 50°C tokom 2 h. Uparena je pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 271c (450 mg, sirovo) kao crna čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>595,3
Primer 271 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]]-6-okso-1H-piridin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 271
U rastvor 271C (450 mg, 0.75 mmol) u metanolu (10 ml) je dodat oksetan-3-on (162 mg, 2.25 mmol), NaBH3CN (141.8 mg, 2.25 mmol), i ZnCl2(306 mg, 2.25 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Smeša je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (5 ml). Zatim se ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 10 ml), a kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 271 (23,0 mg, 8,8%, u dva koraka) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>651,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 9.76 (e, 1H), 8.74 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,41 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 2,5 Hz, 8,5 Hz, 1H), 6,87 (s, 1H)), 6,85 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,16-5,13 (m, 1H), 4,72-4,69 (m, 5H), 4,54-4,53 (m, 1H), 4,36-4,35 (m, 1H), 4,19-4,17 (m, 2H), 3,89-3,87 (m, 1H), 3,56-3,49 (m, 2H), 3,11-3,09 (m, 2H), 2,60-2,48 (m, preklapanje, 7H), 2,24-2,21 (m, 1H), 1,29 (s, 6H), 1,02 (d, J = 6,0 Hz, 3H) Primer 272a 5-Bromo-1-metil-3-(5-(1-(oksetan-3-il) azetidin-3-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 272a
1
Smeša 3-(5-(azetidin-3-il) piridin-2-ilamino)-5-bromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona 239b (140 mg, 0.42 mmol), oksetan-3-on (91 mg, 1.26 mmol), NaBH3CN (78 mg, 1.26 mmol) i cink hlorid (171 mg, 1.26 mmol) u metanolu (10 ml) je mešana na 50° C u trajanju od 2 sata. Smesa je koncentrirana pod sniženim pritiskom i voda (5 mL) je dodata ostatku. Zatim je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 272a (145 mg, 85%). MS-ESI: [M+H]<+>390,8 Primer 272b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[1-(oksetan-3-il) azetidin-3-il] piridin-2-il} amino)-6-oksopiridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 272b
Posuda od 25 ml sa okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 272a (140 mg, 0,35 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diaza-triciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (140 mg, 0.35 mmol), Pd(dppf)Cl2(28 mg, 0.035 mmol), natrijev acetat (58 mg, 0.70 mmol), K3PO4(148 mg, 0.70 mmol), voda (6 kapi) i acetonitrilu (6 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Smeša je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 272b (114 mg, 46%) kao braon čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>664,4
Primer 272 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[1-(oksetan-3-il) azetidin-3-il]-2-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 272
Smeša 272b (114 mg, 0.17 mmol) i litijum hidroksida (41 mg, 1.7 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smeša je uparena pod vakuumom, i ostatak je razblažen vodom (5 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 10 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 272 (52 mg, 50%) kao bela čvrsta
2
supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>622,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.77 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7.94 (e, 1H), 7,90 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 2,0, 8,5 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86-6,84 (m, 2H), 5.12-5.09 (m, 1H), 4.77-4.74 (m, 2H), 4.69-4.66 (m, 1H), 4.61-4.59 (m, 2H), 4.54 (bs, 1H), 4.36-4.32 (m, 1H), 4.19-4.17 (m, 2H), 3.90-3.83 (m, 2H), 3.80-3.77 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.71-3.68 (m, 1H), 3.30-3.27 (m, 2H), 2.60-2.59 (m, 2H), 2.54 (s, 2H), 1.30 (s, 6H).
Primer 273a [4-(5-Bromo-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4. 0,0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 273a
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom napunjena je 3-bromo-5-jodo-1-metilpiridin-2 (1H)-on 214b (1.57 g, 5.0 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (1,98 g, 5,0 mmol), PdCl2(dppf) (205 mg, 0.25 mmol), K3PO4(2.12 g, 10.0 mmol), natrijev acetat (820 mg, 10,0 mmol), acetonitrilu (45 mL), i vode (1 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je mešana na 30°C tokom 3 sati. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 273a (580 mg, 22%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>539,2.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.09 (d J = 5.0 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.55-4.51 (m, 1H), 4.27-4.25 (m, 1H), 4.15-4.13 (m, 1H), 4.06-4.04 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.58-2.56 (m, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.28 (s, 6H).
Primer 273b (2 '-(7,7-dimetil-1-okso-3,4,7,8-tetrahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-2 (6H)-il)-1-metil-6-okso-5-(piridin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-3'-il) metil-acetat 273b
U bočicu od 1 drama dodato je 273a (40 mg, 0.074 mmol), 2-aminopiridin, (1.2 ekv), cezijum karbonat (1.5 ekviv), Ksantfos (10 mol%) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladij (0) mol%) u suvom 1,4-dioksanu (0,2 M). Reakciona smeša je zatim mešana 3 sati na 80°C. Nakon što je ohlađena do sobne temperature, reakciona smeša je razređena sa dihlorometanom (3 ml) i isprana vodom (2 x 3 ml). Organski sloj je osušen iznad magnezijum-sulfata, filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod 273b je zatim prenesen u naredni korak bez prečišćavanja.
Primer 273 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-(2-piridilamino)-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2, 6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 273
U bočicu od 1 drama dodato je 273b (1 ekviv.) U 4: 1 smeši THF i vode (1 mL). Zatim je u smesu dodat litijum hidroksid (1.5 ekv.) I reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Reakciona smeša je zatim razblažena dihlorometanom (3 ml) i ekstrahovana vodom (2 x 3 ml). Organski sloj je sakupljen,, osušen iznad magnezijum sulfata. filtriran i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom reverzne faze da bi se dobilo 273.<'>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 88,73 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,17 (dd, J = 5,1)., 1.9 Hz, 1H), 7.62-7.56 (m, 1H), 7.54 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 7,0, 5,1 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,96-4,93 (m, 1H), 4,48-4,39 (m, 2H), 4,24-4,17 (m, 2H), 3,89-3,84 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,58 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,22 (s, 6H).
Primer 274 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilpirazin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 274
Slijedeći procedure iz primera 273, i zamenjujući 2-amino-5-metilpirazin za 2-aminopiridin, pripremljeno je 274.<'>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 88,98 (s, 1H), 8,68-8,58 (m, 2H), 8,49 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,58 (d) J = 2.4 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 4.93 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.47-4.37 (m, 2H), 4,25-4,16 (m, 2H), 3,88-3,82 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 2,57 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.22 (s, 6H).
4
Primer 275 3-[4-[5-[(5-fluoro-2-piridil) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 275
Slijedeći procedure iz primera 273, i zamenjujući 2-amino-5-fluoropiridin za 2-aminopiridin, pripremljeno je 275.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.79 (s, 1H), 8.65 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.58 (td, J = 8.7, 3.1 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 9.2, 3.9 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.98 - 4.91 (m, 1H), 4.46 - 4.38 (m, 2H), 4.23 - 4.16 (m, 2H), 3.88 - 3.82 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.61 - 2.51 (m, 2H), 2.43 (s, 2H), 1.22 (s, 6H).
Primer 2766-[[5-[2-(7,7-dimetil-4-okso-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-3-il)-3-(hidroksimetil)-4-piridil]-1-metil-2-okso-3-piridil] amino] piridin-3-karbonitril 276
Slijedeći procedure iz primera 273, i zamenjujući 2-amino-5-cijanopiridin za 2-aminopiridin, pripremljeno je 276.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.38 (e, 1H), 8.73 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7,94 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 5,2). Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,97 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,46-4,38 (m, 2H), 4,21 (s, 3H), 3,84 (s)., 1H), 3,62 (s, 3H), 2,58 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 2,45 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Primer 277 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[(5-metoksi-2-piridil) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 277
Slijedeći procedure iz Primera 273, i zamenjujući 2-amino-5-metoksipiridin za 2-aminopiridin, 277 je pripremljeno.<'>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 88,61 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,51-8,47 (m, 2H), 7,91 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,48 (d, J) = 2.4 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.33-7.29 (m, 2H), 6.56 (s, 1H), 4.94 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.47-4.38 (m, 2H), 4,24-4,16 (m, 2H), 3,87-3,83 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,60 (s, 3H), 2,58 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Primer 278 3-[4-[5-[(5-ciklopropil-2-piridil)amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta[3,4]pirolo[3,5-b]pirazin-4-on 278
Prateći procedure iz Primera 273, i zamenom 2-amino-5-ciklopropilpiridina za 2-aminopiridin, pripremljeno je 278.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) Z 8.67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,53-8,45 (m, 2H), 8.01 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H)), 4.96-4.92 (m, 1H), 4.47-4.41 (m, 2H), 4.24-4.16 (m, 2H), 3.89-3.85 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.58 (d, J) = 7.9 Hz, 2H), 2.44 (s, 2H), 1.86-1.77 (m, 1H), 1.22 (s, 6H), 0.93 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 0.90-0.85 (m, 1H), 0,67-0,58 (m, 2H).
Primer 279 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-[[5-(trifluorometil)-2-piridil]amino]-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 279
Slijedeći procedure iz primera 273, i zamenjujući 2-amino-5-trifluorometilpiridin za 2-aminopiridin, pripremljeno je 279.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.23 (s, 1H), 8.80 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.54 - 8.46 (m, 2H), 7.88 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.97 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.50 -4.40 (m, 2H), 4.26 - 4.16 (m, 2H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.62 (s, 3H), 2.58 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 2.43 (s, 2H), 1.22 (s, 6H).
Primer 280 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[1-metil-5-(morfolin-4-karbonil) pirazol-3-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 280
Primenom procedura iz Primera 273, i supstitucijom (3-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il) (morfolino) metanona za 2-aminopiridin, pripremljeno je 280.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.05 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,30 (s, 2H), 4,99-4,91 (m, 1H), 4,48-4,39 (m, 2H), 4,23-4.15 (m, 7H), 3.89-3.82 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.27 (s, 2H), 2.58 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H).
Primer 281 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-2-piridil) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 281
Slijedeći procedure iz primera 273, i zamenjujući 2-amino-5-metilpiridin za 2-aminopiridin, pripremljeno je 281.<'>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 58,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 8,5, 2,4 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,93 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,46-4,36 (m, 2H), 4,26-4,16 (m, 2H), 3,86-3,80 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.58 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 2.43 (s, 2H), 2.17 (s, 3H), 1.22 (s, 6H).
Primer 282a 3,3-dimetilciklopentanon 282a
Suspenziji CuI (81.0 g, 420 mmol) u bezvodnom etil etru (500 mL), ohlađenoj na 0° C, dodat je rastvor metil-litija u etil etru (430 mL, 860 mmol, 2.0 M) u periodu od 30 minuta. Smeša je mešana na 0°C tokom 2 h. U gornju smešu je dodat kap po kap 3-metilciklopent-2-enon (33,6 g, 350 mmol) tokom perioda od 1 h na 0° C. Dobijena smeša je mešana na 0° C još 2 h. Tada je gasio sa zasićenom NH4Cl (300 ml) i filtrira. Filtrat je ekstrahovan etil-etrom (2 x 200 ml). Spojeni organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Mg2SO4, i filtriran. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 282a kao bezbojno ulje (28 g, 71%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2.31 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.05 (s, 2H), 1.79 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.12 (s, 6H).
Primer 282b 2-hloro-4,4-dimetilciklopent-1-enkarbaldehid 282b
U rastvor DMF (18,3 g, 250 mmol) u dihlormetan (300 ml) ohlađena do 0° C je dodat Pocl3(40,5 g, 250 mmol) u periodu od 10 minuta. Smeša je mešana na 20°C tokom 1 h. U gore navedenu smešu je ukapano 282a (28,0 g, 250 mmol) tokom perioda od 20 minuta. Reakciona smeša je zagrevana na refluksu 20 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i sipana u rastvor natrijum-acetata (60 g) u ledenoj vodi (400 g). Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 300 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2 X 200 mL), osušen iznad anhidrovanog Mg2SO4, i filtriran. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 282b kao bezbojno ulje (33.0 g, sirovo).<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.99 (e, 1H), 2.62 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 2.38 (d, J = 2,0 Hz, 2H), 1.15 (s, 6H).
Primer 282c Etil 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciklopenta [b] tiofen-2-karboksilat 282c U rastvor 282b (33.0 g, sirovi) u dihlorometanu (400 mL) i trietilaminu (60 g, 600 mmol) dodat je etil 2-merkaptoacetat (19.2 g, 160 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na refluksu 6 h. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u etanolu (400 mL) i trietilaminu (60 g, 600 mmol). Smeša je zagrevana na refluksu 12 h. Koncentrisana je ponovo pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 40:1 petrol etrom/etil-acetatom da bi se dobilo 282c kao žuta čvrsta supstanca (18,0 g, 32%, u dva koraka). MS-ESI: [M+H]<+>225,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,49 (s, 1H), 4,32 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,72 (s, 2H), 2,56 (s, 2H), 1,35 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,22 (s, 6H).
Primer 282d 5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciklopenta [b] tiofen-2-karboksilna kiselina 282d
U rastvor 282c (16.0 g, 71,0 mmol) u propan-2-olu (200 mL), tetrahidrofuranu (200 mL) i vodi (200 mL) dodat je litijum hidroksid (6,82 g, 284 mmol). Reakciona smeša je zagrevana 5 h na 65°C. Organski rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom. pH rastvora je podešen na 1,0 hlorovodoničnom kiselinom (2 mol/1). Talog je sakupljen filtriranjem i osušen u vakuumu radi dobijanja 282d (12,0 g, 86%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI:
[M+H]<+>196,9
Primer 282e N-terc-butil-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciklopenta [b] tiofen-2-karboksamid 282e
Suspenzija 282d (12,0 g, 61,0 mmol) u SOCl2(80 mL) zagrevana je na 65°C tokom 2 h. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa dihlorometanom (20 mL), koji je dodat u rastvor 2-metilpropan-2-amina (4.45 g, 61.0 mmol) i trietilamina (18.0 g, 180 mmol) u dihlorometanu (180 mL). Dobijena smeša je mešana 16 h i razblažena dihlorometanom (200 mL). To je isprana vodom (3 X 50 ml), sušene preko bezvodnog Mg2SO4,filtrira, i ispari pod smanjenim pritiskom dajući 282e (15,0 g, 97%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>252,0
Primer 282f N-terc-butil-3-formil-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciklopenta [b] tiofen-2-karboksamid 282f
U rastvor 282e (1.5 g, 6.0 mmol) u bezvodnom THF (60 mL), ohlađen na-70° C, dodat je rastvor n-butil litija (10.0 mL, 25 mmol, 2.5 M u heksanu) tokom perioda od 5 minuta. Smeša je mešana na-70°C tokom 6 h. DMF (1.3 g, 18.0 mmol) je dodavan tokom perioda od 5 minuta i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Tada je gasio sa zasićenom NH4Cl (40 mL) i koncentrirana pod smanjenim pritiskom. Rastvor je ekstrahovan etil-acetatom (2 x 30 ml). Spojeni organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Mg2SO4, i filtriran. Filtrat je isparen pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 282f kao žuta čvrsta supstanca (1.34 g, 80%). MS-ESI: [M+H]<+>280,3
Primer 282g N-terc-butil-3-(hidrazonometil)-5,5-dimetil-5,6-dihidro-4H-ciklopenta [b] tiofen-2-karboksamid 282g
U rastvor 85% vodenog hidrazina (10 mL) u THF (180 mL) je dodat 282f (5.6 g, 20.0 mmol) u bezvodnom THF (20 mL) tokom perioda od 5 minuta. Zatim je mešan na 20° C tokom 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 282g kao crna čvrsta supstanca (6.0 g, prinos: 95%, čistoća: 95%). MS-ESI: [M+H]<+>294,0 Primer 282h 4,4-dimetil-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6), 11-trien-9-on 282h
Rastvor 282g (3.8 g, 13.0 mmol) u 30-procentnom H2SO4(100 ml) zagrevan je pri refluksu tokom 16 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i ekstrahovana sa dihlorometanom (3 x 200 mL). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 100: 1 dihlorometan/metanol, dajući 282h kao žutu čvrstu supstancu (1.72 g, 60%). MS-ESI:
[M+H]<+>221,0
Primer 282i 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il} piridin-3-karbaldehid 282i
Prateći procedure opisane u Primeru 108a, i počevši od 282h (330 mg, 1.5 mmol) i 2-bromo-4-hloronikotinaldehida (950 mg, 4.5 mmol), dobijeno je 282i kao žuta čvrsta supstanca (260 mg, 48%). MS-ESI: [M+H]<+>359,9
Primer 282j 2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-6;-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karbaldehid 282j
Prateći proceduru za pripremu u Primeru 191k, i počevši od 282i (216 mg, 0.60 mmol) i (S)-1-metil-3-(5-(2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 191j (482 mg, 0.90 mmol), 282j dobije se kao žuta čvrsta supstanca (407 mg, 48%). MS-ESI: [M+H]<+>678,8
Primer 282 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-[(2S)-2-metil-4-(oksetan-3-il) piperazin-1-il]-2;-piridil] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-d] piridazin-4-on 282
Prateći procedure iz Primera 191, i počevši sa 282j (370 mg, 0.55 mmol), dobijeno je 282 kao žuta čvrsta supstanca (64 mg, 17%). MS-ESI: [M+H]<+>681,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,46-8,45 (m, 2H), 7.85 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 3,0, 9,0 Hz, 1H), 7,24 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,85 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,57-4,54 (m, 2H), 4,47 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,4-4,37 (m, 3H), 3.68-3.67 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.40-3.38 (m, 1H), 3.11-3.08 (m, 1H), 2.96-2.90 (m, 3H), 2.81-2.79 (m, 2H) 2.56-2.53 (m, 1H), 2.33-2.32 (m, 2H), 2.19-2.16 (m, 1H), 1.28 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 0.93 (d, J = 6.0) Hz, 3H).
Primer 283a 5-Bromo-1-metil-3-(5-metilizoksazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 283a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-metilizoksazol-3-aminom (1,0 g, 10,2 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (4.09 g, 15.3 mmol), Pd2(dba)3(467 mg, 0,51 mmol), Ksantfos (598 mg, 1.02 mmol), Cs2CO3(6.65 g, 20.4 mmol) i dioksan (50 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, reakcijska smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Filtrirana je kada je smesa još vruća. Filtrat se ohladi na sobnu temperaturu, a nastali talog se sakupi filtriranjem da se dobije 283a (1,6 g, 55%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>284,1
Primer 283b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,2-oksazol-3-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 283b
4
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom napunjena je 283a (150 mg, 0,53 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (834 mg, 2,1 mmol), Pd(dppf)Cl2(21 mg, 0.026 mmol), K3PO4(224 mg, 0,053 mmol), natrijev acetat (87 mg, 1,1 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vode (5 kapi). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 100° C za 1 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se ispere acetonitrilom, dajući 283b (100 mg, 34%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>557,3
Primer 283 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilizoksazol-3-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 283
U rastvor jedinjenja 283b (90 mg, 0,162 mmol) u THF-u (5 mL), i-propanolu (5 mL), i vodi (5 mL) dodat je litium hidroksid (3,8 mg, 1,62 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan pomoću DCM (20 mL × 3). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 283 (65 mg, 78%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>514,9.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.98 (s, 1H), 8.49 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 4.93 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 4.48-4.38 (m, 2H), 4.25-4.19 (m, 3H), 3.87-3.85 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.62-2.54 (m, 2H), 2.43 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.22 (s, 6H).
Primer 284a 2-(10-Fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il)-4-(1-metil-5-(5-(oksetan-3-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) nikotinaldehid 284a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1-metil-3-(5-(oksetan-3-il)-
4 1
4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 163a (354 mg, 0,83 mmol), 4-hloro-2-(10-fluoro-1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) nikotinaldehid 134c (289 mg, 0.83 mmol), PdCl2(dppf) (68 mg, 0.08 mmol), K3PO4(352 mg, 1.66 mmol), natrijev acetat (136 mg, 1.66 mmol), acetonitrilu (50 ml), i vode (3 ml). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 284a (305 mg, 60%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>: 613,6.
Primer 284 10-fluor-2-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-(oksetan-3-il)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-] a] pirazin-2-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 284
U suspenziju 284a (250 mg, 0.41 mmol) u metanolu (20 mL) dodat je natrijumborohidrid (47 mg, 1.23 mmol) na 0° C. Smeša je mešana 30 minuta. Zatim je ugašena vodom (2 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 284 (20 mg, 6,6%). MS-ESI: [M+H]<+>615,6.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.46 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.43 (e, 1H), 7,34 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 4,95 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,76-4,74 (m, 2H), 4,69-4,65-4,67 (m, 3H), 4,46-4,44 (m, 1H), 4,35-4,33 (m, 1H), 4,10-4,08 (m, 4H), 3,38-3,35 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,58-3.56 (m, 2H), 2.842.82 (m, 2H), 2.58-2.53 (m, 4H), 1.89-1.84 (m, 2H), 1.77-1.76 (m, 2H).
Primer 285a 4-Nitro-1-(oksetan-3-il)-1H-imidazol 285a
Zapečaćena epruveta je napunjena 4-nitro-1H-imidazolom (500 mg, 4,42 mmol), 3-iodooxetane (920 mg, 5,0 mmol), Cs2CO3(2,90 g, 8,84 mmol) i dioksan (12 ml). Zapečaćena epruveta je zagrevana 16 h na 120° C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 285a kao belu čvrstu supstancu (250 mg, 33%). MS-ESI: [M+H]<+>170,2.
4 2
Primer 285b 1-(oksetan-3-il)-1H-imidazol-4-amin 285b
Laboratorijska boca od 25 ml sa okruglim dnom i jednim vratom je prečišćena sa azotom i napunjena 285a (100 mg, 0.6 mmol), 10% paladijuma na ugljenu (10% vlažan, 10 mg) i metanol (10 mL). Boca je evakuisana, napunjena gasom vodonika (preko balona) i mešana 1 sat na sobnoj temperaturi. Vodonik je zatim evakuisan i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da se dobije 285b (70 mg, 85%). MS-ESI: [M+H]<+>140,3.
Primer 285c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(1-metil-5-{[1-(oksetan-3-il)-1H-imidazol-4-il] amino}-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 285c
U posudu sa okruglim dnom od 25 mL opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 285b (40 mg, 0.28 mmol), [4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatri-ciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 273a (150 mg, 0,28 mmol), Pd2(dba)3(15 mg, 0.015 mmol), Ksantfos (18 mg, 0.03 mmol), cezij karbonata (200 mg, 0,6 mmol), i 1,4-dioksan (6 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 285c kao žuta čvrsta supstanca (80 mg, 47%). MS-ESI:
[M+H]<+>598,3.
Primer 2853-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[1-(oksetan-3-il) imidazol-4-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2;-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 285
Smeša 285c (80 mg, 0.13 mmol) i vode litij hidroksida (55 mg, 1.3 mmol) u ipropanol/THF (3: 2, 5 mL) i voda (2 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Smesa je uparena pod sniženim pritiskom i voda (5 mL) je dodata ostatku. Zatim je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani dihlorometanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 285 (36 mg, 50%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>556,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.48 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.47-7.45 (m, 2H), 7.35-7.34 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.27-5.19 (m, 2H), 5.10-5.07 (m, 2H), 4.94-4.91 (m, 2H), 4.69-4.65 (m, 1H), 4.52-4.44 (m, 2H), 4.17-4.16 (m, 2H), 3.87-3.84 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.59-2.58 (m, 2H), 2.53 (s, 2H), 1.29 (s, 6H).
4
Primer 286a (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1,2-oksazol-3-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 286a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 25 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je [4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricy-clo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metilacetat 273a (161 g, 0,30) mmol), izoksazol-3-amin (25 mg, 0.30 mmol), cezijum-karbonat (196 mg, 0.60 mmol) i 1,4-dioksan (10 mL). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 10 minuta, dodati su tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (14.0 mg, 0.015 mmol) i ksantfos (17 mg, 0.030 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana dihlormetanom (2 x 10 mL). Kombinovani organski filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1), dajući 286a (96 mg, 59%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>542,8.
Primer 286 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-(izoksazol-3-ilamino)-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1, 2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 286
U rastvor 286a (96 mg, 0.18 mmol) u THF/i-propanol/vodi (5/3/2mL) je dodat litijum hidroksid (21 mg, 0.88 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Po završetku reakcije, smeša je isparena pod pritiskom i ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobilo 286 kao bela čvrsta supstanca (75 mg, 85%). MS-ESI:
[M+H]<+>501,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.49 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.37 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.18 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 5.12-5.11 (m, 1H), 4.66-4.64 (m, 1H), 4.52-4.51 (m, 1H), 4.29-4.27 (m, 1H), 4.18-4.16 (m, 2H), 3.87-3.86 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.59-2.57 (m, 2H), 2.53-2.51 (m, 2H), 1.28 (s, 6H).
Primer 287a N-Metoksi-N-metil-3-nitro-1H-pirazol-5-karboksamid 287a
4 4
Jedna laboratorijska boca od 500 ml sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena su 3-nitro-1H-pirazol-5-karboksilnom kiselinom (15,7 g, 1,0 ekv., 100 mmol), N, O-dimeti1Hidroksilamin hidrohlorid 19,5 g, 2,0 ekv., 200 mmol), HATU (76,0 g, 2,0 ekv., 200 mmol), trietilamin (40,4 g, 4,0 ekv., 400 mmol) i dihlorometan (300 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 100: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 287a (16.0 g, 80%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>201,1
Primer 287b 3-Amino-N-metoksi-N-metil-1H-pirazol-5-karboksamid 287b Laboratorijska boca od 250 ml sa okruglim dnom sa jednim vratom je prečišćena sa azotom i napunjena 287a (16,0 g, 1,0 ekv., 80,0 mmol), 10% paladijuma na ugljenu (50%
4
vlažnost, 800 mg) i metanol (100 mL). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika i mešana u atmosferi vodonika na sobnoj temperaturi preko noći. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz podlogu CELITE<®>. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 287b (11.0 g, 81%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>171,1
Primer 287c 3-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-N-metoksi-N-metil-1H-pirazol-5-karboksamid 287c
U posudu sa okruglim dnom od 250 ml opremljenom magnetnom mešalicom i Dean-Starkovom zamkom napunjen je 287b (11,0 g, 1,0 ekv., 64,7 mmol), heksan-2,5-dion (11,1 g, 1,5 ekv., 97.2 mmol), monohidrat p-toluensulfonske kiseline (558 mg, 0.05 ekv., 3.24 mmol) i toluen (100 mL). Reakciona smeša je refluksovana preko noći. Dobijena smeša je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom 1: 2 da bi se dobilo 287c (10.4 g, 65%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>249,0
Primer 287D tert-Butyl 2-(3-(2,5-dimetil-1H-pirrol-1-il)-5-(metoksi (metil) karbamoil)-1H-pirazol-1-il) ethylcarbamate 287D
Laboratorijska boca od 250-mL sa okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 287c (10,4 g, 1,0 ekv., 41,9 mmol), tert-butil 2-hloroetilkarbamat (37,7 g, 5.0 ekv., 210.0 mmol), Na2CO3(22.3 g, 5.0 ekv., 210.0 mmol) i DMF (100 mL). Reakciona smeša je mešana na 110°C preko noći. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je izlivena u vodu (200 ml) i ekstrahovana etil-acetatom (3 X 100 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa etil-acetatom, dajući 287d (10.8 g, 66%) kao žuto ulje. MS-ESI: [M+H]<+>392,0
Primer 287e terc-butil 2-(5-acetil-3-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-1H-pirazol-1-il) etilkarbamat 287e
Laboratorijska boca od 250-mL sa okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 287d (7,82 g, 1,0 eq., 20,0 mmol) i THF (100 ml) pod zaštitom N
2. Dodat je rastvor MeMgBr (3.0 M u etru) (17 mL, 2,5 ekv., 50.0 mmol) na -78° C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 h i ugašena sa zasićenim rastvorom NH4Cl . Zatim je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je ekstrahovan etil-acetatom (3 X 50 ml). Kombinovani organski sloj je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje 4: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 287e kao bezbojno ulje (5,40 g, 78%). MS-ESI: [M+H]<+>347,0.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6,57
4
(s, 1H), 5,91 (s, 2H), 4,93 (bs, 1H), 4,71 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,62 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,57 (s, 3H), 2,16 (s, 6H), 1,28 (s, 9H).
Primer 287f 2-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-4-metil-6,7-dihidropirazolo [1, 5-a] pirazin 287f
Laboratorijska boca od 100-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 287e (5,40 g, 1,0 ekv., 15,6 mmol), CF3COOH (10 ml), i dihlorometanom (50 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 287f, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>229,1
Primer 287g 2-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-4-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin 287g
Laboratorijska boca od 100-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa 287f (3,56 g, 1,0 ekv., 15,6 mmol), NaBH4(2,96 g, 5,0 ekv., 78,0 mmol) i metanol (50 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između vode (50 mL) i dihlorometana (50 mL). Vodena faza je ekstrahovana dihlormetanom (3 x 50 mL). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 287g kao bezbojno ulje (1.54 g, 43% u dva koraka). MS-ESI: [M+H]<+>231,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 5.91 (e, 1H), 5.86 (s, 2H), 4,17-4,11 (m, 3H), 3,51-3,48 (m, 1H), 3,36-3,31 (m, 1H 2,13 (s, 6H), 1,50 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 287h 2-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 287h
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom napunjena je 287 g (1.54 g, 1.0 ekv., 6.70 mmol), formaldehid (37% u vodi) (1.09 g, 2.0 ekv., 13.4 mmol), NaBH3CN (2.11 g, 5.0 ekv., 33,5 mmol), Hoac (3 mL), i metanol (30 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između vode (50 mL) i dihlorometana (50 mL). Vodena faza je ekstrahovana dihlormetanom (3 x 50 mL). Kombinovana organska faza je koncentrovana pod sniženim pritiskom dajući sirovi proizvod 287h koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>245,0
Primer 287i 4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 287i ALaboratorijska boca od 100-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa refluksnim kondenzatorom je napunjena sa 287h (1.63 g, 1,0 ekv., 6,70 mmol), NH2OH ·
4
HCl (2,33 g, 5,0 ekv., 33,5 mmol), i etanolom (50 mL). Smeša je refluksovana 2 dana. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobio 287i kao žuta čvrsta supstanca (211 mg, 19%). MS-ESI: [M+H]<+>167,1.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 5.36 (e, 1H), 4,04-4,00 (m, 1H), 3,94-3,92 (m, 1H), 3.61 (bs, 2H), 3.30 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 3.10-3.08 (m, 1H), 2.81-2.75 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 1.38 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
Primer 287j (4-(5-(4,5-Dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 287j
U posudu sa okruglim dnom od 25 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 287i (20 mg, 1,0 ekv., 0,12 mmol), (4-(5-brom-1-metil-6-okso-1) 6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 273a (127 mg, 2.0 ekv., 0.24 mmol), Pd2(dba)3(9,0 mg, 0,1 ekv., 0.010 mmol), Ksantfos (11 mg, 0,2 ekv., 0.020 mmol), Cs2CO3(78 mg, 2,0 ekv., 0,24 mmol) i dioksan (5 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je mešana na 100° C za 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 287j kao smeđa čvrsta supstanca (60 mg, 82%). MS-ESI: [M+H]<+>610,9
Primer 287 2-[4-[5-[(4,5-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 287
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 287j (60 mg, 1,0 ekv., 0,098 mmol), litijum hidroksidom (12 mg, 5,0 ekv., 0,49 mmol), i-propanol/THF (4/4 mL) i voda (1 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobilo 287 kao žuta čvrsta supstanca (24 mg, 43%). MS-ESI: [M+H]<+>568,9.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.72 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,04-5,02 (m, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,56-4,54 (m, 1H)), 4.39-4.37 (m, 1H), 4.17-3.92 (m, 4H), 3.86-3.84 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.45-3.37 (m, 1H), 3.17-3.14 (m, 1H), 2.89-2.81 (m, 1 H), 2.64-2.58 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 1.93-1.89 (m, 2H), 1.81-1.80 (m, 2H), 1.46 (d) J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 288a 1-Metil-3-(5-metilizoksazol-3-ilamino)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-
4
dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-jedan 288a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je s 5-bromo-1-metil-3-(5-metilizoksazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-onom 283a (330 mg 1.16 mmol), Pin2B2(442 mg, 1.74 mmol), Pd2(dba)3(53 mg, 0.058 mmol), X-Phos (55 mg, 0.116 mmol), kalijum acetat (227 mg, 2.32 mmol)), i dioksan (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 70° C u trajanju od 2 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobilo 288a (300 mg, 78%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>332,3
Primer 288b 2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,2-oksazol-3-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-karbaldehid 288b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena magnetnom mešalicom napunjena je s 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il} piridin-3-karbaldehid 282i (72 mg, 0.20 mmol), 288a (102 mg, 0.30 mmol), PdCl2(dppf) (16) mg, 0.020 mmol), K3PO4(85 mg, 0.40 mmol), natrijev acetat (33 mg, 0.40 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon upuhivanja azota u smesu 10 minuta, kondenzator refluksa je pričvršćen na laboratorijsku bocu i smesa je zagrevana na 100° C 1 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uklonjen dajući 288b, koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>529,3.
Primer 288 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilizoksazol-3-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-d] piridazin-4-on 288 Smeša 288a (82 mg, 0,16 mmol) i NaBH4(18.1 mg, 0.48 mmol) u metanolu (10 ml) je mešana na sobnoj temperaturi 30 min. Smesa je ugašena vodom (5 mL) i isparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 288 (54 mg, dva koraka: 34%) kao bela čvrsta supstanca. MS-
4
ESI: [M+H]<+>531,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.0 (s, 1H), 8.57 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.00 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 4.86 (bs, 1H), 4.39 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.60 (s, 3H), 2.91 (s, 2H), 2.81 (s, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.28 (s, 6H).
Primer 289a terc-butil 3-amino-1H-pirazol-1-karboksilat 289a
U smešu 3-ciklopropil-1H-pirazol-5-amin (3,0 g, 36 mmol) i trietilamina (7,6 g, 75 mmol) u 1,4-dioksan (35 ml) je dodat (Boc)2O (7.8 g, 36 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 2 sati. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen kolonom silikagela eluiranjem sa 3: 1 petrol eter/etil-acetatom da bi se dobilo 289a kao bela čvrsta supstanca (3.4 g, 52%). MS-ESI: [M+H]<+>184,1.
Primer 289b 3-(1H-pirazol-3-ilamino)-5-brom-1-metilpiridin-2 (1H)-on 289b
U posudu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjeni su 289a (2,2 g, 12 mmol), Ksantfos (0,69 g, 1,2 mmol), Pd2(dba)3(1,1 g)., 1.2 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (6.4 g, 24 mmol), Cs2CO3(15.6 g, 48 mmol) i 1,4-dioksan (50 mL)). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu 10 minuta, zagreva se na 105° C tokom 15 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se ispere sa metanolom (8 ml), dajući 289b kao bledo žutu čvrstu supstancu (1,2 g, 37%). MS-ESI: [M+H]<+>269,1.
Primer 289c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-6-okso-5-[(1H-pirazol-3-il) amino]-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 289c
41
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 289b (200 mg, 0,74 mmol), (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-{3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6) 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (360 mg, 0.90 mmol), PdCl2(dppf) (41 mg, 0.050 mmol), K3PO4(320 mg, 1,5 mmol), natrijumacetat (123 mg, 1.5 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.2 mL). Sistem je evakuisan, a zatim napunjen N2. Zatim je mešana na 90°C tokom 4 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 289c kao svetlo žuta čvrsta supstanca (150 mg, 38%). MS-ESI: [M+H]<+>542,3.
Primer 289 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-(1H-pirazol-3-ilamino)-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 289
Smeša 289c (150 mg, 0.28 mmol) i litij hidroksid hidrata (236 mg, 5.6 mmol) u THF (4 mL), i-propanol (4 mL) i voda (2 mL) je mešana na 40° C tokom 0.5 h. Smeša je uparena pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen hladnom vodom (50 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 20 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 289 kao bledo žuta čvrsta supstanca (25 mg, 18%). MS-ESI: [M+H]<+>499,9.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.07 (s, 1H), 8.47 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.55-7.54 (m, 1H), 7.40-7.39 (m, 1H), 7.32 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 4.94-4.92 (m, 1H), 4.48-4.47 (m, 1H), 4.41-4.39 (m, 1H), 4.23-4.17 (m, 3H), 3.84-3.82 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 2.58-2.56 (m, 2H), 2.50-2.42 (m, 2H), 1.22 (s, 6H).
Primer 290a 5-Bromo-1-metil-3-(1-metil-1H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 290a
Posuda od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (100 mL), 1-metil-1H-pirazol-3-aminom (970 mg, 10.0 mmol)), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2-(1H)-on (2,9 g, 11 mmol) i cezijum karbonat (6,5 g, 20,0 mmol). Posle 10 minuta puštanja azota kroz suspenziju, dodati su tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (457 mg, 0.50 mmol) i Ksantfos (587 mg, 1.0 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagren na refluksu 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana sa dihlorometanom (2 X 50 mL) i kombinovani organski filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 290a kao žuta čvrsta supstanca (900 mg, 32%). MS-ESI: [M+H]<+>283,1
Primer 290B (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-1H-pirazol-3-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 290b
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatri-ciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (595 mg, 1.5 mmol), 290a (282 mg, 1.0 mmol)), K3PO4(424 mg, 2.0 mmol), natrijum-acetat (164 mg, 2,0 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (82 mg, 0.1 mmol) i acetonitrilom/vodom (15/1 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 100° C za 1,5 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između dihlorometana (30 mL) i vode (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 50/1) do 290b (300 mg, 54%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>556,1
Primer 290 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(1-metilpirazol-3-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 290
U rastvor jedinjenja 290b (139 mg, 0,25 mmol) u THF-u (5 mL), propan-2-olu (5 mL) i vodi (2 mL) dodat je LiOH (60 mg, 2,5 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2,5 sata. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen na dihlormetano(20 ml) i vodu (10 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani ekstrakt je opran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 290 (30 mg, 23%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>514,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.03 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,07 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 4,97 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,47-4,40 (m, 2H), 4,24-4,18 (m, 3H), 3,85-3,83 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,58 (s, 3H) 2.58-2.56 (m, 2H), 2.42 (s, 2H), 1.22 (s, 6H).
Primer 291a (4-{1-metil-5-[(5-metil-1,2-oksazol-3-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il} piridin-3-il) metil-acetat 291a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je (2-{6-okso-8-tia-4,5-diazatriciklo [7.4.0.0<2,7>] trideka-1 (9), 2 (7), 3-trien-5-il}-4-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 230i (150 mg, 0.31 mmol), 5-brom-1-metil-3-(5-methylisoxazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 283a (88 mg, 0.31 mmol), PdCl2(dppf) (24 mg, 0.031 mmol), K3PO4(131 mg, 0.62 mmol), natrijumacetat (61 mg, 0.62 mmol), voda (0.2 mL) i acetonitril (10 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i mešan na 100° C 3 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen na dihlormetan (20 ml) i vodu (10 ml). Organski sloji je razdvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (2 × 20 mL). Kombinovani organsk sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 291a (104 mg, 60%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>559,1
Primer 291 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilizoksazol-3-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-6,7, 8,9-tetrahidrobenzotiofeno [2,3-d] piridazin-4-on 291
U rastvor 291a (100 mg, 0.18 mmol) u THF/i-propanol/vodi (10/5/5 mL) je dodat litijum hidroksid (43 mg, 1.8 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon 1 h mešanja, MS je pokazao da je reakcija završena. Zatim je smeša koncentrisana pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između vode (10 mL) i dihlorometana (15 mL). Vodena faza je ekstrahovana dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski sloj je isprani slanim
41
rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4filtriran i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 291 (56 mg, 60%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>517,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 4.87-4.85 (m, 1H), 4.42-4.36 (m, 2H), 3.61 (s, 3H), 2.98-2.85 (m, 4H), 2.32 (s, 3H), 1.92-1.86 (m, 4H).
Primer 292a 4-{5-[(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il}-2-{ 4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-1 (8), (6), 11-trien-10-il} piridin-3-karbaldehid 292a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 3-(1,5-dimetil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-5-(4, 4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 242a (344 mg, 1.0 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il} piridin-3-karbaldehid 282i (538,5 mg) 1,5 mmol), Pd2(dba)3(91,5 mg, 0,10 mmol), tricikloheksilfospin (112 mg, 0,40 mmol), cezijum karbonat (652 mg, 2,0 mmol), 1,4-dioksan (20 ml) i voda (0.5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 75° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobilo 292a (300 mg, sirovo) kao crna čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>542,2
Primer 292 3-[4-[5-[(1, 5-dimetilpirazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7, 7-dimetil-6,8-dihidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-d] piridazin-4-on 292
U rastvor 292a (162.6 mg, 0.30 mmol) u metanolu (6 mL) je dodat natrijumborohidrid (114 mg, 3.0 mmol) na 0° C. Reakcija je mešana na 25° C tokom 0.5 h. Zatim je ugašena vodom (10 mL). Dobijena smeša je isparena pod sniženim pritiskom i ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 20 mL). Kombinovani dihlorometanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 292 (35 mg, 22%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>543,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 8.02 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.90 (s, 1H), 4.88 (s, 1H), 4.40 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 2.92 (d, J = 4.5 Hz, 2H), 2.81 (s, 2H), 2.18 (s, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.28 (s, 6H).
Primer 293a 1-Metil-4-nitro-1H-1,2,3-triazol 293a
U 100-mL jedno-vratni okrugli dno koji sadrži 4-nitro-2H-1,2,3-triazol (2.0 g, 17.5 mmol) i THF (10 mL) na 0° C dodat je NaH (1.7 g, 35.0). mmol, 2,0 ekv.). Smeša je mešana na 0°C tokom 15 minuta. Doda se rastvor jodometana (3.68 g, 26.3 mmol, 1.5 ekv.) U acetonu (40 mL) i dobijena reakciona smeša se 2 h meša na sobnoj temperaturi. Nakon tog vremena, reakcija je ugašena vodom (20 mL) na 0° C i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa dihlorometanom (100 mL). Zatim je isprana slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 6: 1 petrol eter/etilacetatom da se dobije 293a (800 mg, 35%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca i regioizomer 1-metil-5-nitro-1H-1, 2,3-triazol (1,34 g, 60%) kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.34 (s, 1H), 4.26 (s, 3H).
Primer 293b 1-metil-1H-1, 2,3-triazol-4-amin 293b
Prateći proceduru u Primeru 130b, i počevši od 293a (800 mg, 6.25 mmol) i 10% paladijuma na ugljeniku (50% vlažan, 160 mg) dobije se 293b kao žuta čvrsta supstanca (600 mg, 98%).<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.91 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.65 (brs, 2H).
Primer 293c 5-Bromo-1-metil-3-(1-metil-1H-1, 2,3-triazol-4-ilamino) piridin-2 (1H)-
41
on 293c
Slijedeći postupak iz primera 130c, počevši s 293b (500 mg, 5.10 mmol, 10 ekv.) I 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-onom (2.04 g, 7.65 mmol, 1.5 ekv.) daje 293c kao žutu čvrstu supstancu (760 mg, 52%). MS-ESI: [M+H]<+>283,9.
Primer 293d (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 293d
Prateći proceduru iz Primera 283b, počevši sa 293c (150 mg, 0.53 mmol, 1.0 ekv.) I {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (629 mg, 1.59 mmol, 3.0 ekv.) dala je 293d kao žutu čvrstu supstancu. (110 mg, 37%). MS-ESI: [M+H]<+>557,4.
Primer 293 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(1-metiltriazol-4-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 293
Prateći proceduru u Primeru 283, i počevši sa 293d (110 mg, 0.20 mmol) dobija se 293 kao bledo žuta čvrsta supstanca (78 mg, 75%). MS-ESI: [M+H]<+>514,9.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.49 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.33 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 5.25 (brs, 1H), 4.65-4.38 (m, 3H), 4.21-4.20 (m, 2H), 4.08 (s, 3H), 3.89-3.85 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.59 (s, 2H), 2.54 (s, 2H), 1.29 (s, 6H).
Primer 294 3-[4-[5-[(5-terc-butilizoksazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7, 7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 294
Prateći procedure u Primeru 273, i zamenom 5-(terc-butil) izoksazol-3-amina za 2-aminopiridin, pripremljeno je 294 (5.1 mg, 16% prinosa).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.93 (e, 1H), 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,22 (s, 1H), 4,90 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,51-4,36 (m, 2H) 4,26-4,16 (m, 3H), 3,85 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,58 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,27 (s, 9H), 1.22 (s, 6H). ES-MS m/z 557.4 [M+1].
Primer 295a 5-Etilizoksazol-3-amin 295a
41
U rastvor 3-oksopentannitrila (1,0 g, 10,3 mmol) u vodi (20 ml) dodat je NaOH (535,6 mg, 13,4 mmol). Nakon mešanja tokom 5 minuta, doda se hidroksilamin hidrohlorid (787,4 mg, 11,33 mmol) i smeša se zagreva na 40° C tokom 12 h. U ovom trenutku, konc. Doda se HCl (3 ml) i reakciona smeša se 2 h zagreva na 50° C. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Zatim se ohladi na sobnu temperaturu i pH podesi na 10 sa vodenim NaOH (30%). Smeša je ekstrahovana etilacetatom (3 x 50 ml). Kombinovani organski sloji je isprani slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 2: 1 petrol eter/etil-acetatom, dajući 295a kao žutu čvrstu supstancu (300 mg, 25%). MS-ESI: [M+H]<+>113,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 5.55 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 2,56-2,52 (m, 2H), 1.13 (t, J = 7,5 Hz, 3H).
Primer 295b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{5-[(5-etil-1,2-oksazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 295b
Posuda od 25 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 295a (24.8 mg, 0.222 mmol), [4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatri-ciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 273a (100 mg, 0.185 mmol), Pd2(dba)3(8,5 mg, 0.0093 mmol), Ksantfos (10,7 mg, 0.019 mmol), Cs2CO3(120.6 mg, 0.37 mmol) i dioksana (10 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 3 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran acetonitrilom (0.5 mL) da se dobije 295b kao bela čvrsta supstanca (52 mg, 49.5%), koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>570,8
Primer 295 3-[4-[5-[(5-etilizoksazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-
41
(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 295
U rastvor jedinjenja 295b (42 mg, 0,0736 mmol) u THF-u (4 mL), i-propanolu (4 mL) i vodi (4 mL) dodat je LiOH (17,7 mg, 0,736 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u vodi (5 ml) i ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 20 ml). Kombinovani ekstrakt je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 295 (22 mg, 57%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>528,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.99 (e, 1H), 8.49 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,94-4,92 (m, 1H), 4,48-4,38 (m, 2H), 4,26-4,19 (m, 3H), 3,87-3,85 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 2,68-2,66 (m, 2H), 2,62-2,59 (m, 2H), 2,43 (s, 2H), 1.22 (s, 6H), 1.19 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
Primer 296a (3-nitro-1H-pirazol-5-il) metanol 296a
41
Laboratorijska boca od 100 ml sa tri vrata i okruglim dnom opremljena je dovodom za azot i isprana je azotom i napunjena 3-nitropirazol-5-karboksilnom kiselinom (0,56 g, 3,56 mmol) i THF (8 ml). Sistem je ohlađen na-5° C pomoću kupke led/aceton. dodat je rastvor kompleksa boran-THF (1.0M, 11 mL, 11.0 mmol) brzinom koja je održavala unutrašnju temperaturu reakcije ispod 5° C. Nakon što je dodavanje završeno, kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcija je mešana na 60° C tokom 3 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena na-5° C koristeći kupatilo led/aceton, dodata je voda (2 mL) i 4N hlorovodonična kiselina (2 mL). Reakciona smeša je mešana na 70° C tokom 1 h kako bi se uništio boran-pirazolski kompleks. Ohlađena je na sobnu temperaturu i koncentrovana pod sniženim pritiskom do zapremine od oko 1 mL. dodati su etil-acetat (20 mL) i voda (10 mL) i smeša je mešana 15 min. Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (4 x 10 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim vodenim natrijum-bikarbonatom (2 x 10 mL), slanom vodom (10 mL) i osušen preko natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 296a (345 mg, 68%) kao svijetlo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>144
Primer 296b (1-(2-bromoetil)-3-nitro-1H-pirazol-5-il) metanol 296b
Smeša 296a (345 mg, 2,41 mmol) i cezijum karbonata (965 mg, 2,96 mmol) u DMF (5 ml) ohlađena je na 0° C koristeći kupatilo led/aceton i dibromoetan (4,48 g, 24,1 mmol) dodat u dijelovima (bez egzotera). Reakciona smeša je mešana na 0 °C 1 h i na sobnoj temperatur 4h. Nakon toga se dodaju etil-acetat (20 mL) i voda (15 mL). Vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (10 ml), slanim rastvorom (10 ml) i osušen iznad natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod, koji je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 6: 1 petrol eter/etilacetatom da bi se dobilo 296b (300 mg, 50%). MS-ESI: [M+H]<+>250
Primer 296c 1-(2-bromoetil)-5-(hlorometil)-3-nitro-1H-pirazol 296c Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena dovodom za azot i refluksnim kondenzatorom je prečišćena azotom i napunjena 296b (438 mg, 1,76 mmol) i hloroformom (10 ml). Reakcija je rashlađena na -5 °C koristeći ledenu/acetonsku kupku, a zatim je postepeno dodavan SOCl2(628 mg, 5,28 mmol). Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i reakcija je mešana na 70° C tokom 3 h. Nakon tog vremena, rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, u ostatak je dodat etil-acetat i rezultujući rastvor je ohlađen na-5° C. Doda se zasićeni vodeni natrijum-bikarbonat (3 ml) dok se ne dostigne pH 8,5. Smeša je raspodeljena između etil-acetata i vode. Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim
41
vodenim natrijum-karbonatom (2x5 mL), slanom vodom (10 mL) i osušen preko natrijumsulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 296c (284 mg, 60%).
Primer 296D 5-(2-Methoxyethyl)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 296D
Mikrovalna bočica opremljena magnetnom mešalicom napunjena je s 296c (2,67 g, 10,0 mmol), 2-metoksietanaminom (2,25 g, 30,0 mmol) i DMSO (14 ml). Reakciona smeša je zagrevana na 120°C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 1,0 sata. Ohlađena je do sobne temperature i razblažena etil-acetatom (40 mL). Smeša je isprana vodom (3 x 15 ml). Organski sloj je osušen i filtriran. Filtrat se koncentriše pod pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 296d (1,7 g, 75%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>227,0
Primer 296e 5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 296e U rastvor 296d (1,7 g, 7,5 mmol) u etanolu (50 mL) dodat je Pd/C (10%, 800 mg). Reakcija je napunjena gasom vodonika (preko balona) i mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana kroz čep CELITE<®>. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom, dajući 296e kao žutu čvrstu supstancu (1,2 g, 82%), koja je upotrebljena direktno bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>197,3
Primer 296f 5-Bromo-3-(5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 296f
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (40 mL), 296e (588 mg, 3.0 mmol), 3,5-dibrom-1-metilpiridin-2 (1H)-on (800 mg, 3.0 mmol) i cezijum karbonat (1.96 g, 6.0 mmol). Nakon upuhavanja azota kroz suspenziju tokom 20 minuta, dodati su ksantfos (173 mg, 0.30 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (137 mg, 0.15 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana dihlormetanom (2 x 15 mL). Kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak čvrste supstance se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 296f (745 mg, 65%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>382,9
Primer 296g (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoksietil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 296g
42
U posudu sa okruglim dnom od 25 mL, opremljenom refluksnim kondenzatorom, napunjen je {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (198 mg, 0,50 mmol), 296f (190 mg, 0,50 mmol), K3PO4(212 mg, 1.0 mmol), natrijev acetat (82 mg, 1.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(21 mg, 0.025 mmol), acetonitrilu (8 ml), i vodom (0,5 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je raspodeljen između dihlormetana (20 ml) i vode (10 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (2 x 20 mL). Kombinovani organski ekstrakt je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 296g (163 mg, 50%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>654,9
Primer 296 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(2-metoksietil)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 296
U rastvor 296g (160 mg, 0.245 mmol) u THF/i-propanol/vodi (8/5/3mL) dodat je litijum hidroksid (29 mg, 1.22 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, a zatim uparena pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC reverzne faze, dajući 296 kao belu čvrstu supstancu (117 mg, 78%). MS-ESI: [M+H]<+>613,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.41 (e, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,05 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 4,66-4,65 (m, 1H). 4,52-4,50 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,17-4,05 (m, 2H), 4,10-4,08 (m, 2H), 3,88-3,87 (m, 1H), 3,75-3,73 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,61-3,59 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), 3,04-3,03 (m, 2H), 2,80 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,59-2.57 (m, 2H), 2.54-2.53 (m, 2H), 1.29 (s, 6H).
Primer 297a 6-hloro-2-metil-4-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino) piridazin-3 (2H)-on 297a
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (30 mL), 5-metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolom [1,5]-a] pirazin-2-amin 113e (1.70 g, 11.2 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (2.68 g, 12.0 mmol) i cezijum karbonat (7.30 g, 22.4 mmol). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (0.59 g, 1.02 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (467 mg, 0.51 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na 90° C tokom 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod vakuumom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 297a (1.9 g, 60%) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS:
[M+H]<+>295,1
Primer 297b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il) amino)-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 297b
U posudu sa okruglim dnom od 25 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 297a (195 mg, 0,66 mmol), (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 199e (315) mg, 0.66 mmol), PdCl2(dppf) (40 mg, 0.050 mmol), K3PO4(250 mg, 1,2 mmol), natrijev acetat (100 mg, 1.20 mmol), acetonitrilu (8 ml) i voda (1 mL). Sistem je evakuisan, a zatim napunjen N 2. Zatim je zagrevan 1 h na 100°C. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol, dajući 297b kao žutu čvrstu supstancu (150 mg, 38%). MS-ESI:
[M+H]<+>612,3.
Primer 2973-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6,7-dihidro-4H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 297
Smeša 297b (150 mg, 0.24 mmol) i hidrata litijum hidroksida (96 mg, 2.4 mmol) u THF (8 mL), i-propanol (8 mL) i voda (2 mL) je mešana na 40° C za 0.5 h. Smeša je isparena pod sniženim pritiskom i ostatak je podeljen između dihlorometana (15 mL) i vode (10 mL). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 297 kao bledo žutu čvrstu supstancu (98 mg, 70%). MS-ESI: [M+H]<+>570,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.30 (s, 1H), 8.52 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.38 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.99 (s, 1H), 4.74-4.73 (m, 1H), 4.60-4.58 (m, 1H), 4.40-4.37 (m, 1H), 4.26-4.24 (m, 1H), 4.19-4.18 (m, 2H), 3.96-3.95 (m, 2H), 3.89-3.87 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.53-3.52 (m, 2H), 2.80-2.78 (m, 2H), 2.57-2.55 (m, 2H), 2.52-2.50 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.22 (s, 6H).
Primer 298a (4-{5-[(5-cijanopirazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-OXO-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il) metil a/acetat 298a
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je [4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricy-cl [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 273a (269 mg, 0.50) mmol), 5-aminopirazin-2-karbonitril (60 mg, 0.50 mmol), Ksantfos (29 mg, 0.050 mmol), Pd2(dba)3(45 mg, 0.050 mmol), Cs2CO3(326 mg, 1.0 mmol), i 1,4-dioksan (10 mL). Reakciona smeša se zagreva na 100° C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 1 h nakon tri puta ispiranja atmosferom/argonom. Smeša je filtrirana, a čvrsta supstanca isprana metanolom (50 ml). Kombinovani filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 298a (200 mg, 69%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>579,3.
Primer 2985-[[5-[2-(7,7-dimetil-4-okso-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-3-il)-3-(hidroksimetil)-4-piridil]-1-metil-2-okso-3-piridil] amino] pirazin-2-karbonitril 298
Smeša 298a (200 mg, 0.35 mmol) i litijum hidroksida (84 mg, 3.5 mmol) u ipropanol/THF (5 mL/5 mL) i voda (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h.
42
Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen etil-acetatom (20 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 298 (40 mg, 21%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>537,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.96 (e, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.701 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,00 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,42-4,39 (m, 2H), 4,24-4,19 (m, 3H), 3,84 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 2,57 (m, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,23 (s, 3H)., 6H) Primer 299a 5-Fenilizoksazol-3-amin 299a
U mešani rastvor 3-okso-3-fenilpropanonitrila (1,5 g, 10,3 mmol) i NaOH (452 mg, 11.3 mmol) u vodi (10 mL)/EtOH (10 mL) dodat je hidroksilamin hidrohlorid (785 mg, 11.3 mmol).). Smeša je mešana na RT preko noći. U ovom trenutku, konc. Doda se HCl (1,3 mL, 15,5 mmol) i dobijena smeša se 2 h zagreva na 80° C. Zatim je zalužena do pH 10 i ekstrahovana etil-acetatom. Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa etil-acetat/petroleum etrom (1:50 do 1:10), dajući 299a kao žutu čvrstu supstancu (1.1 g, 68%). MS-ESI: [M+H]<+>161,3.
Primer 299b 5-Bromo-1-metil-3-(5-fenilizoksazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 299b Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (40 mL), 299a (640 mg, 4.0 mmol), 3,5-dibrom-1-metilpiridin-2 (1H)-on (1,1 g, 4,0 mmol), Pd2(dba)3(366.8 mg, 0.40 mmol), Ksantfos (462.4 mg, 0.80 mmol) i cezij karbonat (2,6 g, 8,0 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 92° C 3 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je ispran acetonitrilom da bi se dobio 299b (1.7 g, 87%). MS-ESI:
[M+H]<+>346,0.
Primer 299C (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-6-okso-5-[(5-fenil-1,2-oksazol-3-il) amino]-1,6-dihidropiridin-piridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 299c
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 299b (138 mg, 0,40 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diaza-tricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (158.8 mg, 0.40 mmol), Pd(dppf)Cl2(32.7 mg, 0.040 mmol), K3PO4(169.6 mg, 0.80 mmol), natrijev acetat (108,8 mg, 0,80 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 100° C 3 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 50: 1 dihlorometan/metanol, dajući 299c kao smeđu čvrstu supstancu (120 mg, 49%). MS-ESI: [M+H]<+>618,8.
Primer 299 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-[(5-fenilizoksazol-3-il) amino]-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 299
Smeša 299c (100 mg, 0.16 mmol) i litijum hidroksida (96 mg, 4.0 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 40° C tokom 30 min. Reakciona smeša je koncentrovana, a ostatak razblažen pomoću EtOAc (5 mL). Dobijena smeša se tri puta ekstrahuje sa dihlorometanom. Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 299 kao belu čvrstu supstancu (35 mg, 31%). MS-ESI: [M+H]<+>576,8.<1>H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,17 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,78 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,11−8,56 (m, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,60 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,55−7,92 (m, 2H), 7,35 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 6,91−5,17 (m, 1H), 4,96−4,57 (m, 1H), 4,50−4,46 (m, 1H), 4,26−4,03 (m, 1H), 3,88−3,85 (m, 1H), 3,63−3,52 (m, 1H), 2,62−3,22 (m, 1H), 2,44−2,33 (m, 1H), 1,23−1,90 (m, 6H).
Primer 300a 5-(1-metoksipropan-2-il)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 300a
42
Mikrovalna bočica opremljena magnetnom mešalicom napunjena je s 1-(2-bromoetil)-5-(hlorometil)-3-nitro-1H-pirazolom 296c (1.0 g, 3.7 mmol), 1-metoksipropan-2-amin (1.0 g, 11.2 mmol) i DMSO (6 mL). Reakciona smeša je mešana na 120°C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 1,0 minuta. Ohlađena je na sobnu temperaturu i razblažena vodom (30 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (60/1 do 1/1) da se dobije 300a (600 mg, 68%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>241,0 Primer 300b Priprema 5-(1-fluorpirimidin-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirazina 300b
U rastvor jedinjenja 300a (600 mg, 2,5 mmol) u EtOH (40 mL) dodat je Pd/C (10%, 60 mg). Reakciona smeša je napunjena gasom vodonika (preko balona) i mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana kroz čep CELITE<®>. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom da se dobije 300b kao žuta čvrsta supstanca (467 mg, 89%), koja se koristi bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>211,1
Primer 300c 5-Bromo-3-(5-(1-metoksipropan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a]-pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 300c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (40 mL),
42
300b (400 mg, 1.9 mmol), 3,5-dibrom-1-metilpiridin-2 (1H)-on (H-001) (508 mg, 1,9 mmol) i cezijum karbonat (1,24 g, 3,8 mmol). Nakon ključa azota kroz suspenziju za 20 minuta, dodati su Ksantfos (109 mg, 0.19 mmol) i Pd2(dba)3(87 mg, 0.095 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana dihlormetanom (2 x 30 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1), dajući 300c (436 mg, 58%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>396,0 Primer 300d (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(1-metoksipropan-2-il)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 300d Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je s {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronske kiseline 199e (238 mg, 0.60 mmol), 300c (240 mg, 0.80 mmol), K3PO4(254 mg, 1.2 mmol), natrijev acetat (98 mg, 1,6 mmol), Pd(dppf)Cl2(22 mg, 0.030 mmol) i acetonitrilu/voda (12/0,5 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između dihlorometana (30 mL) i vode (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (2 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 300d (200 mg, 50%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>669,4
Primer 300 (R)-2-(3 '-(hidroksimetil)-5-((5-(1-metoksipropan-2-il)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-il) amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-2'-il)-7,7-dimetil-2,3,4,6, 7,8-heksahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 300 U rastvor jedinjenja 300d (200 mg, 0,30 mmol) u THF-u (6 mL) dodat je litijum hidroksid monohidrat (36 mg, 1,5 mmol) u vodi (1 mL). Smeša je mešana na 30°C tokom 1 sata, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je raspodeljen između etilacetata i vode. Vodena faza je isprana etil-acetatom (3 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Prep-HPLC i hiralna rezolucija omogućili su dva enantiomera: 300 (35 mg, 18,6%) u obliku bele
42
čvrste supstance; i 303 (28 mg, 15%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>627,4.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 2.,5 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,72 (s, 1H), 5.,05-5,03 (m, 1H), 4,67-4,45 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4.35-4.31 (m, 1H), 4.18-4.16 (m, 2H), 4.09-4.07 (m, 2H), 3.87-3.85 (m, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.56-3.52 (m, 1H), 3.45-3.43 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.11-3.08 (m, 3H), 2.60-2.58 (m, 2H), 2.53 (s, 2H), 1.29 (s, 6H), 1.17 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Primer 301a 6-(Trifluorometil) piridazin-3-amin 301a
Smeša 3-hloro-6-trifluorometilpiridazina (1.6 g, 8.80 mmol) i amonijum hidroksida (9 mL) u THF (3 mL) je zagrejana na 100° C u mikrotalasnom reaktoru tokom 1 h. Nakon tog perioda, reakciona smeša je uparena i ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom. Kombinovani ekstrakt je osušeniznad MgSO4,filtriran, i uparen pod smanjenom pritisku radi dobijanja 301a (1,3 g, 93%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>164,1
Primer 301b 5-bromo-1-metil-3-(6-(trifluorometil) piridazin-3-ilamino) piridin-2 (1H)-onat 301b
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjena je 301a (750 mg, 4.6 mmol), Ksantfos (532 mg, 0.92 mmol), Pd2dba3(421 mg, 0.46). mmol), 2-bromo-4-hloronikotinaldehid (H-001) (1.84 g, 6.9 mmol), Cs2CO3(3.0 g, 9.2 mmol) i 1,4-dioksan (50 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagren na 90° C preko noći. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana i čvrsta supstanca je isprana metanolom (30 mL). Kombinovani filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 301b (1.38 g, 89%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>350,8
Primer 301C (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(1-metil-6-okso-5-{[6-(trifluorometil) piridazin-3-il] amino}-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 301c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 301b (300 mg, 0.86 mmol), (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-
42
(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 199e (824 mg, 1.72 mmol), CH
3COONa (140 mg, 1.72 mmol), PdCl2(dppf) (70 mg, 0.086 mmol), K3PO4(360 mg, 1.72 mmol), acetonitrilu (20 ml) i vode (0,5 ml). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 20 minuta, zagreva se na 100° C u atmosferi azota tokom 2 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat se upari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 301c kao belu čvrstu supstancu (125 mg, 23%). MS-ESI: [M+H]<+>622,3
Primer 301 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-6-okso-5-[[6-(trifluorometil) piridazin-3-il] amino]-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 301
Smeša 301c (90 mg, 0.14 mmol) i litijum hidroksida (24 mg, 0.56 mmol) u ipropanol/THF/vodi (6 mL/4 mL/2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Smesa je uparena pod sniženim pritiskom i ostatak je podijeljen između dihlorometana (20 mL) i vode (10 mL). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 301c kao bela čvrsta supstanca (39 mg, 48%). MS-ESI: [M+H]<+>580,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,57 (s, 1H), 8,87 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,58 (s, 1H), 4,98-4,97 (m, 1H), 4,48-4,40 (m, 2H), 4,27-4,20 (m, 3H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 2,62-2,53 (m, 2H), 2,42-2,41 (m, 2H), 1,2 (s, 6H).
Primer 302a N-metil (1-metil-3-nitro-1H-pirazol-5-il) metanamin 302a
U mešani rastvor MeNH2(30% tež. u vodi) (2,5 g, 20 mmol) u acetonu (10 ml) na 0° C (led kupatilo) je dodat K2CO3(415 mg, 3 mmol), nakon čega je dodat kap po kap rastvor 5-(bromometil)-1-metil-3-nitro-1H-pirazola (220 mg, 1 mmol) u acetonu (5 ml). Reakciona smeša je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana 3 h. Rastvarač je uklonjen, a ostatak je ekstrahovan pomoću metilen hlorida (3 X 15 ml), osušen iznad Na2SO4i koncentrirani radi dobijanja 302a u obliku žutog ulja (170 mg, 99%), koje je korišten u sljedećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. LCMS: (M+H)<+>171
Primer 302b N-metil-N-((1-metil-3-nitro-1H-pirazol-5-il) metil) oksetan-3-amin 302b U smesu 302a (170 mg, 1 mmol) u metanolu (4 ml), ZnCl2(1 mmol/L u dietil eteru) (2 ml, 2 mmol) i oksetan-3-on (150 mg, 2 mmol). su dodati na sobnoj temperaturi pod zaštitom azota, a zatim dodavanjem NaBH3CN (130 mg, 2 mmol). Reakciona smeša je zagrejana na 50°C i mešana 3 h. Smesa je zatim ohlađena do sobne temperature i otapalo je
42
uklonjeno. Ostatak je prečišćen na ispranoj koloni eluiranjem sa 50: 1 metilen hlorid/metanol da bi se dobilo 302b kao žuta čvrsta supstanca (180 mg, 80%, dva koraka). LCMS: (M+H)<+>227.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 6,99 (s, 1H), 4,52 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 4,42 (t, J = 6, 2H), 6 (s, 1H), 3,98 (s, 2H), 3,63 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,50 (s, 3H), 2,03 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
Primer 302c 1-Metil-5-((metil (oksetan-3-il) amino) metil)-1H-pirazol-3-amin 302c U rastvor 302b (1,8 g, 7,96 mmol) u etanolu (20 ml) i vode (20 ml), NH4Cl (3,3 g, 63,6 mmol) i željeza u prahu (1,80 g, 31,8 mmol) dodao je. Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 70°C. Nakon toga, smesa je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je isparila, a ostatak je izvađen s metilen hlorida (3 X 30 ml), sušene Na2SO4,i koncentriranim dajući sirovi proizvod, koji je prečišćen na fleš koloni eluiranjem sa 50:1 metilen hlorid/metanol koji sadrži 0,5 % trietilamina da bi se dobilo 302c kao žuto ulje (1,3 g, 83%). LCMS: (M+H)<+>197
Primer 302d 5-Bromo-1-metil-3-(1-metil-5-((metil (oksetan-3-il) amino) metil)-1H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 302d
Prateći proceduru iz Primera 292c, počevši od 302c i 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona dobijen je 302d u prinosu od 63%. LCMS: (M+H)<+>383.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,35 (e, 1H), 7,99 (d, J = 2,5, 1H), 7,36 (d, J = 2,5, 1H), 5,99 (s, 1H), 4,50 (t, J = 7, 2H), 4,40 (t, J = 6,5, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,57 (m, 1H), 3,49 (s, 3H), 3,35 (s, 2H), 2,01 (s, 3H).
Primer 302E (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-5-{[metil (oksetan-3-il) amino] metil}-1H-pirazol-3-il) amino]-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 302e
U posudu sa okruglim dnom od 25 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 302d (200 mg, 0,52 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (210 mg, 0.53 mmol), PdCl2(dppf) (37 mg, 0.050 mmol), K3PO4(250 mg, 1,2 mmol), natrijev acetat (100 mg, 1.20 mmol), acetonitril (8 ml), i vodom (0,5 mL).
4
Sistem je evakuisan, a zatim napunjen N 2. Smeša je mešana na 100°C tokom 1 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol, dajući 302e kao žutu čvrstu supstancu (150 mg, 44%). MS-ESI:
[M+H]<+>655,3.
Primer 3023-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[1-metil-5-[[metil (oksetan-3-il) amino] metil] pirazol-3-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 302
Smeša 302e (150 mg, 0.23 mmol) i litijum hidroksid hidrata (90 mg, 2.3 mmol) u THF (8 mL), i-propanol (8 mL) i voda (2 mL) je mešana na 40° C za 0.5 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je raspodeljen između vode (10 ml) i dihlorometana (3 x 15 ml). Kombinovani organski ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 302 kao bledo žutu čvrstu supstancu (105 mg, 75%). MS-ESI: [M+H]<+>612,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.05 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,01 (s, 1H), 4,99-4,97 (m, 1H), 4,50-4,46 (m, 3H), 4.40-4.38 (m, 3H), 4.25-4.18 (m, 3H), 3.85-3.84 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.58-3.54 (m, 1H), 2.58-2.56 (m, 2H), 2.52-2.50 (m, 2H), 2.43-2.42 (m, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.22 (s, 6H).
Primer 303 (S)-10-[3-(hidroksimetil)-4-[5-({5-[(2 R)-1-methoxypropan-2-il]-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-2-il]-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 303
Slijedeći Primer 300, dobiven je pojedinačni enantiomer 303 (28 mg, 15%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>627,4.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.41 (e, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,72 (s, 1H), 5,05-5,03 (m, 1H), 4,67-4,45 (m, 1H), 4,52-4.50 (m, 1H), 4.35-4.31 (m, 1H), 4.18-4.16 (m, 2H), 4.09-4.07 (m, 2H), 3.87-3.85 (m, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.56-3.52 (m, 1H), 3.45-3.43 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.11-3.08 (m, 3H), 2.60-2.58 (m, 2H), 2.53 (s, 2H), 1.29 (s, 6H), 1.17 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Primer 304a 5-(2-metoksietil)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 304a
4 1
U rastvor 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin (190 mg, 1.13 mmol) 125i u acetonitrilu (10 ml) je dodat K2CO3(311.9 mg, 2.26 mmol) i 1-bromo-2-metoksietan (188,3 mg, 1,36 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 80°C tokom 17 h pod mikrotalasnim zračenjem. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 327a kao belu čvrstu supstancu (230 mg, 90%) koje je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>227,0 Primer 304b 5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 304b U rastvor 304a (286 mg, 1,26 mmol) u metanolu (10 mL) dodat je Pd/C (28,6 mg). Sistem je evakuirano, a zatim napuniti sa H2.Posle 2 h mešanja na sobnoj temperaturi, smeša se filtrira. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 304b kao žutu čvrstu supstancu (240 mg, 97%) koje je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>197,0
Primer 304c 5-Bromo-3-(5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 304c
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 304b (230 mg, 1,17 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-onom (468,4 mg, 1,76) mmol), Pd2(dba)3(53.5 mg, 0.0585 mmol), Ksantfos (67.6 mg, 0.117 mmol), Cs2CO3(762.8 mg, 2.34 mmol) i dioksan (20 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 100° C u trajanju od 3 h. Analiza
4 2
reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40:1 dihlorometan/metanolom da se dobije 304c kao tamna čvrsta supstanca (380 mg, 85%). MS-ESI: [M+H]<+>382,2
Primer 304d 3-(5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5)-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 304d Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 304c (330 mg, 0.86 mmol), Pin2B2(329 mg, 1.30 mmol), Pd2(dba)3(40 mg, 0.043 mmol), X-fos (41 mg, 0.086 mmol), kalijum acetat (169 mg, 1.726 mmol) i dioksan (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 70° C u trajanju od 2 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobio 304d kao tamno ulje (240 mg, 80%), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>348,3
Primer 304e 2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoksietil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-karbaldehid 304e Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeca-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il} piridin-3-karbaldehid 282i (60 mg, 0.167 mmol), 304d (143.4 mg, 0.334 mmol), Pd(dppf)Cl2(6.8 mg, 0.0084 mol), K3PO4(70.8 mg, 0.334 mmol), natrijev acetat (27,4 mg, 0.334 mmol), acetonitrilu (10 ml), i voda (3 kapi). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 304e (80 mg, 77%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>626,8
Primer 304 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(2-metoksietil)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-d] piridazin-4-on 304
U rastvor jedinjenja 304e (80 mg, 0,128 mmol) u dihlorometanu (4 mL) i metanolu (4
4
mL) dodat je NaBH4 (9,7 mg, 0,256 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. To je gasio sa vodenim NH4Cl (10 mL) i koncentrirana pod smanjenim pritiskom, a ostatak je izvađen sa dihlorometanom (3 X 20 mL). Organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 304 (23,5 mg, 29%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>628,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,57 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,05 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,89 (s,1H), 4,87 (s, 1H), 4,39 (s, 2H), 3,92-3,90 (m, 2H), 3,61 (s, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,50 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,26 (s, 3H), 2,92-2,89 (m, 4H), 2,81 (s, 2H), 2,68-2,66 (m, 2H), 1,29 (s, 3H), 1,28 (s, 3H).
Primer 305a 6-hloro-4-(5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-2
U posudu sa okruglim dnom od 100 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 304b (392 mg, 2,0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (446 mg, 2,0 mmol), cezijum karbonat (1,30 g, 4,0 mmol) i 1,4-dioksan (40 ml). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 10 minuta, dodati su ksantfos (115 mg, 0.20 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (92 mg, 0.10 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagren na 100° C 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 15 ml). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije dihlormetanom/metanolom (80:1-30:1) dajući naslovno jedinjenje 305a (412 mg, 61%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI:
[M+H]<+>338,9
Primer 305b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoksietil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 305b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 25 mL opremljena refluksnim
4 4
kondenzatorom napunjena je 305a (200 mg, 0.60 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (238 mg, 0.60 mmol), K3PO4(254 mg) 1,2 mmol), natrijev acetat (98 mg, 1,2 mmol) i Pd(dppf)Cl2(22 mg, 0.030 mmol) i acetonitrilu/voda (8/0,5 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između dihlorometana (30 mL) i vode (20 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (2 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80/1 do 30/1) da se dobije 305b (169 mg, 43%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>655,9
Primer 305 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(2-metoksietil)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino]-1-metil-6-okso-piridazin-3-il]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 305
U rastvor j305b (160 mg, 0,24 mmol) u THF-u/propanolu/vodi (6/4/3mL) dodat je litijum hidroksid (29 mg, 1,2 mmo). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. NOstatak je podeljen između vode (15 ml) i etil-acetata (20 ml). Vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 20 ml). Kombinovani organski sloj je osušen i koncentrovan pod pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću reverznofazne preparativne HPLC, dajući 305 kao belu čvrstu supstancu (88 mg, 60%). MS-ESI:
[M+H]<+>614,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.44 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.96 (s, 1H), 4.59-4.57 (m, 3H), 4.49-4.47 (m, 1H), 4.17-4.12 (m, 4H), 3.92-3.90 (m, 4H, preklapanje), 3.77-3.75 (m, 2H), 3.61-3.60 (m, 2H), 3.41 (s, 3H), 3.05-3.03 (m, 2H), 2.81-2.79 (m, 2H), 2.60-2.58 (m, 2H), 2.52-2.50 (m, 2H), 1.28 (s, 6H).
Primer 306a (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{5-[(6-metoksipiridazin-3-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 306a
4
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom, napunjena je 6-metoksipiridazin-3-aminom (65 mg, 0,52 mmol), Ksantfos (29 mg, 0,050 mmol), Pd2dba3(45 mg, 0.050 mmol), [4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10,10;-diazatricy-clo [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 273a (281 mg, 0,52 mmol), Cs2CO3(326 mg, 1,0 mmol) i 1,4-dioksan (10 ml). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 20 minuta, zagreva se 2 h pod refluksom. Nakon završetka reakcije, smesa je uparena pod sniženim pritiskom i ostatak je podijeljen između etil-acetata (20 mL) i vode (10 mL). etil-acetat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 20: 1 dihlorometan/metanol, dajući 306a (180 mg, 60%). MS-ESI: [M+H]<+>584,3.
Primer 306 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[(6-metoksipiridazin-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 306
Smeša 306a (180 mg, 0.32 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (84 mg, 2.0 mmol) u THF (5 mL), i-propanol (5 mL) i voda (1.5 mL) je mešana na 40° C za 0.5 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen etil-acetatom (20 ml). etil-acetat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 306 (80 mg, 49%). MS-ESI: [M+H]<+>542,3.<1>H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,86 (s, 2H), 8,76 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,51−7,91 (m, 3H), 7,73 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,56 (t, J = 2,5 Hz, 3H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,11−4,81 (m, 1H), 6,56−4,52 (m, 1H), 4,48 (t, J = 9 Hz, 1H), 4,25−3,63 (m, 2H), 3,91−2,52 (m, 1H), 3,62−2,17 (m, 2H), 2,50−1,05 (m, 6H).
Primer 307a 1,3-dimetil-5-nitro-1 H-indazole 307a
4
U rastvor 1-(2-hloro-5-nitrofenil) etanona (500 mg, 2.5 mmol) u bezvodnom etanolu (15 mL) doda se 1,1-dimetilhidrazin hidrohlorid (3.38 g, 35.0 mmol) pod zaštitom azota. Smesa je zagrevana na refluksu 10 h i isparena pod sniženim pritiskom da bi se dobila sirova 307a (3,0 g), koja je korištena u sljedećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>192,2
Primer 307b 1,3-dimetil-1 H-indazol-5-amin 307b
U rastvor 307a (sirove, 2,5 mmol) u etanolu (95%, 30 ml) je dodat NH2NH2vode (1.25 g, 25.0 mmol), Pd/C (100 mg) pod zaštitom azota. Smeša je mešana na 50°C tokom 1,5 h. Zatim se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira kroz podlogu CELITE<®>. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je rekristalizovan iz bezvodnog etanola (5 mL) da bi se dobio 307b kao bela čvrsta supstanca (340 mg, 84% u dva koraka). MS-ESI:
[M+H]<+>162,3
Primer 307c 5-Bromo-3-(1,3-dimetil-1 H-indazol-5-ilamino-1-metilpirazin-2 (1 H)-on 307C
U rastvor 307b (280 mg, 1.74 mmol) u i-propanol (7 mL) dodat je trietilamin (352 mg, 3.48 mmol) i 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2 (1 H)-on (H)-005) (700 mg, 2,61 mmol). Nakon 6 h mešanja na refluksu, smeša je ohlađena do sobne temperature. Precipitat je filtriran, ispran i-propanolom (2 x 2 mL) i osušen na 60° C pod sniženim pritiskom da bi se dobio 307c kao smeđa čvrsta supstanca (560 mg, 92%). MS-ESI: [M+H]<+>347,8.
Primer 307d (4-{6-[(1,3-dimetil-1 H-indazol-5-il) amino]-4-metil-5-okso-4,5-dihidro-
4
pirazin-2-il}-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il) metil-acetat 307d
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjena je 307c (300 mg, 0,86 mmol), 1,4-dioksan (20 ml), voda (1 ml), [4]-(dihidroksiboranil)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 199e (512 mg, 1.28 mmol) i cezijum karbonat (560 mg, 1.72 mmol). Nakon ključa azota kroz suspenziju za 10 minuta, dodati su Cy3P (96 mg, 0.34 mmol) i Pd2(dba)3(79 mg, 0.086 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagren na refluksu 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 40 ml). Kombinovani filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 100: 1 dihlorometan/metanol, dajući 307d (230 mg, 43%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>620,9
Primer 307 3-[4-[6-[(1, 3-dimetilindazol-5-il) amino]-4-metil-5-okso-pirazin-2-il]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 307
Smeša 307d (230 mg, 0.37 mmol), litijum hidroksida (89 mg, 3.7 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 10 mL) i vode (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznofaznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 307 (41 mg, 19%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>578,4.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8,56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,88 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,51 (dd, J = 2,0, 9,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,17-5,14 (m, 1H), 4,75-4,73 (m, 1H), 4,55-4,52 (m, 1H), 4,48-4,43 (m, 1H), 4,20-4,16 (m, 2H), 4,02 (s, 3H), 3,92-3,70 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 2,60 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 2,57 (s, 3H), 2,54 (s, 2H), 1,30 (s, 6H).
Primer 308a 2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-1 (8), 2 (6)-dien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoksietil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6;-dihidropiridin-3-il) piridin-3-karbaldehid 308a
4
Prateći proceduru u Primeru 304, i počevši sa 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a (250 mg, 0,693 mmol) i 3-(5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a]] pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 304d (595 mg, 0.1.386 mmol), 308a dobije se kao žuta čvrsta supstanca (250 mg, 57%). MS-ESI: [M+H]<+>628,3 Primer 308 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(2-metoksietil)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-c] piridin-4-on 308
Nakon procedure u Primeru 304, a od 308a (230 mg, 0.366 mmol) i NaBH4(27,7 mg, 0,732 mmol), 308 je dobijeno kao bela čvrsta supstanca (53,2 mg, 23%). MS-ESI: [M+H]<+>629,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.04 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.89 (s, 1H), 4.95-4.93 (m, 1H), 4.47-4.39 (m, 2H), 4.20-4.14 (m, 1H 3.92-3.91 (m, 2H), 3.84-3.80 (m, 1H), 3.61 (s, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.51-3.49 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.06-3.00 (m, 1H), 2.91-2.87 (m, 3H), 2.77 (s, 2H), 2.68-2.53 (m, 4H), 1.19 (s, 3H), 1.18 (s, 3H).
Primer 309a 5-(3-metoksipropil)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 309a
4
Mikrovalna bočica opremljena magnetnom mešalicom napunjena je s 1-(2-brometil)-5-(hlorometil)-3-nitro-1H-pirazolom 296c (600 mg, 2.2 mmol), 3-metoksipropan-1-aminom (595). mg, 6,6 mmol) i DMSO (6 ml). zagrevana je na 120° C u mikrotalasnom zračenju u trajanju od 0,5 h. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature i razblažena etil-acetatom (30 mL). Reakciona smeša je isprana vodom. Organski sloj je osušen i koncentrovan. Filtrat se koncentriše pod pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 309a (350 mg, 66%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>241,1
Primer 309b 5-(3-metoksipropil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 309b
U rastvor 309a (300 mg, 1,25 mmol) u etanolu (20 mL) dodat je Pd/C (10%, 30 mg). Reakcija je napunjena gasom vodonika (preko balona) i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana kroz čep CELITE<®>. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući 309b kao žutu čvrstu supstancu (250 mg, 92%), koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja u sledećem koraku. MS-ESI: [M+H]<+>211,3
Primer 309c 5-bromo-3-(5-(3-metoksipropil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-il-amino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 309c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je s 3,5-dibromo-1-
44
metilpiridin-2 (1H)-onom (320 mg, 1,2 mmol), 309b (250) mg, 1,2 mmol), tris (dibenzilidenaceton) dipaladij (0) (55 mg, 0,060 mmol), ksantfos (70 mg, 0,12 mmol), cezijum karbonat (782 mg, 2,4 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml).). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagren na 100° C 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 40 ml). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80: 1 do 30: 1) pri čemu se dobija 309c (200 mg, 42%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>396,2
Primer 309d (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(3-metoksipropil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 309d
U posudu sa okruglim dnom od 25 mL, opremljenom refluksnim kondenzatorom, napunjeno je 309c (120 mg, 0,30 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (240 mg, 0.60 mmol), K3PO4(127 mg), 0.60 mmol), natrijev acetat monohidrat (82 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(12 mg, 0.015 mmol) i acetonitrilu/voda (8/0,5 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 2 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen na dihlormetan (20 ml) i vodu (10 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (2 x 10 mL). Kombinovani organski ekstrakt je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80: 1 do 30: 1) pri čemu se dobija 309d (150 mg, 74%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>668,9
Primer 309 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(3-metoksipropil)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 309
U rastvor jedinjenja 309d (120 mg, 0,18 mmol) u THF-u (5 mL) dodat je litijum hidroksid monohidrat (76 mg, 1,8 mmol) . Smeša je mešana na 30°C tokom 1 h. Nakon završetka reakcije, smesa je filtrirana i otapalo je ispareno pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC, dajući primer 309 kao belu čvrstu supstancu (85 mg, 76%). MS-ESI: [M+H]<+>627,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.42 (e, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,05 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H), 4.52-4.50 (m, 1H), 4.36-4.32 (m, 1H), 4.17-4.16 (m, 2H), 4.08-4.06 (m, 2H), 3.88-3.85 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3,65-3,64 (m, 2H), 3.48 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3.36 (s, 3H), 2.93 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,65-2,62 (m, 2H 2.59-2.58 (m, 2H), 2.53 (s, 2H), 1.87-1.83 (m, 2H), 1.29 (s, 6H).
Primer 310A (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(5-metil-1,2-tiazol-3-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 310a
Zapečaćena epruveta od 25 mL napunjena je [4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 273a (150 mg, 0.28 mmol), 5-metilizotiazol-3-amin hidrohlorid (55 mg, 0,33 mmol), Cs2CO3(183 mg, 0,56 mmol), Pd2(dba)3(27 mg, 0.030 mmol), Ksantfos (35 mg, 0.060 mmol) i dioksan (10 mL). Posle tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smeša se zagreva na 110° C u mikrotalasnom zračenju tokom 0,5 sata. Ohladi se na sobnu temperaturu i upari pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen kolonom silikagela eluiranjem sa 20: 1 metilen hlorid/metanol da bi se dobilo 310a kao žuta čvrsta supstanca (50 mg, 31%). MS-ESI: [M+H]<+>573,2.
Primer 3103-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metilizotiazol-3-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 310
U rastvor 310a (50 mg, 0.090 mmol) u THF/i-propanol/vodi (4 mL/4 mL/1 mL) dodat je litijum hidroksid (21 mg, 0.90 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 0,5 sati, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je izliven u vodu (20 ml) i ekstrahovan etil-acetatom (3 x 20 ml). Kombinovani organski sloj je osušen sa Na2SO4i koncentriran pod smanjenim pritiskom radi dobijanja žute čvrste supstance, koja je prečišćena reverzno-faznom preparativnom HPLC radi dobijanja 310 kao žute čvrste supstance (20 mg, 43%). MS-ESI: [M+H]<+>530,8.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,93 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 5,09-5,06 (m, 1H), 4,66-4,47 (m, 2H), 4,28-4,27 (m, 1H), 4,17-4,12 (m, 2H), 3,89-3,82 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,57 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 2,52-2,50 (m, preklapanje, 5H), 1,27 (s, 6H).
Primer 311a (4-{5-[(5-Ciklopropil-1,2-oksazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-piridin-3-il}-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il) metil-acetat 311a
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-ciklopropilizoksazol-3-aminom (80 mg, 0,65 mmol), Ksantfos (29 mg, 0,050 mmol), Pd2dba3(45 mg, 0,050 mmol), [4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1 10-diazatricy-clo [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 273a (350 mg, 0.65 mmol), Cs2CO3(390 mg, 1,2 mmol) i 1,4-dioksan (10 ml). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu 10 minuta, zagreva se 2 h pod refluksom. Smesa je zatim uparena pod sniženim pritiskom i ostatak je podijeljen između etil-acetata (20 mL) i vode (10 mL). Organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol, dajući 311a (120 mg, 32%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>583,2.
Primer 311 3-[4-[5-[(5-ciklopropilizoksazol-3-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 311
Smeša 311a (120 mg, 0.20 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (80 mg, 2.0 mmol) u THF (5 mL), i-propanol (5 mL) i voda (1.5 mL) je mešana na 40° C tokom 0.5 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen hladnom vodom (50 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 311 (65 mg, 58%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>541,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.92 (e, 1H), 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 2,0 Hz, 1H),
44
7,31 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,19 (s, 1H), 4,92-4,90 (m, 1H), 4,45-4,44 (m, 1H), 4,40-4,39 (m, 1H), 4,24-4,18 (m, 3H), 3,86-3,83 (m, 1H), 3,59 (s, 3H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,44-243 (m, 2H)), 2.07-2.04 (m, 1H), 1.22 (s, 6H), 1.03-0.99 (m, 2H), 0.84-0.81 (m, 2H).
Primer 312a 5-Bromo-1-metil-3-(5-metil-1-(oksetan-3-il)-1H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-on 312a
Smeša 5-bromo-1-metil-3-(5-metil-1H-pirazol-3-ilamino) piridin-2 (1H)-ona 115a (200 mg, 0.71 mmol), 3-jodoksetan (647 mg, 3.53 mmol), Cs2CO3(1150 mg, 3.53 mmol) i acetonitrilu (5 mL) zagrejana je na 80° C u zapečaćenoj epruveti preko noći. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim koncentrovana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol, dajući 312a kao žutu čvrstu supstancu (120 mg, 50%). MS-ESI:
[M+H]<+>339,1
Primer 312B (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(1-metil-5-{[5-metil-1-(oksetan-3-il)-1H-pirazol-3-il] amino}-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il;) metil-acetat 312b
Laboratorijska boca od 50 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 312a (170 mg, 0.50 mmol), (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (200 mg, 0,50 mmol), CH3COONa (82 mg, 1,00 mmol), PdCl2(dppf) (41 mg, 0.050 mmol), K3PO4(212 mg, 1,00 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.5 mL). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 20 minuta, zagreva se na 100° C u atmosferi azota tokom 2 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat se upari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 50: 1 dihlorometan/metanol, dajući 312b kao belu čvrstu supstancu (172 mg, 56%). MS-ESI:
[M+H]<+>612,4
Primer 312 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[5-metil-1-(oksetan-3-il) pirazol-3-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5b] pirazin-4-on 312
Smeša 312b (90 mg, 0.15 mmol) i litijum hidroksida (14 mg, 0.60 mmol) u ipropanol/THF/vodi (6/4/2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u vodi (10 ml) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 25 ml). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 312 kao bela čvrsta supstanca (54 mg, 64%). MS-ESI: [M+H]<+>569,9.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.48 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,46-5,42 (m, 1H), 4,99-4,91 (m, 3H), 4.81-4.78 (m, 2H), 4.52-4.41 (m, 2H), 4.24-4.18 (m, 3H), 3.87-3.84 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.61-2.56 (m, 2H) 2.43 (s, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 1.19 (s, 3H).
Primer 313a Etil 2-(5-(hidroksimetil)-3-nitro-1H-pirazol-1-il) acetat 313a
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom, napunjena je acetonitrilom (30 mL), (3-nitro-1H-pirazol-5-il) metanolom (1.43 g, 10.0 mmol), Cs2CO3(490 mg, 1.5 mmol) i etil 2-bromoacetat (2.00 g, 12 mmol). Smeša je mešana na 40°C tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 313a (1.65 g, 72%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>229,9
Primer 313b Etil 2-(5-(hlorometil)-3-nitro-1H-pirazol-1-il) acetat 313b
Na mešavinu 313a (1,50 g, 6.55 mmol) u CHCl3(60 ml) ohlađen na 0° C je polako dodao Socl2(2.34 g, 19.6 mmol) uz održavanje unutrašnje temperature ispod 5° C. Ova reakciona smeša je zagrejana do 50° C i mešana na ovoj temperaturi tokom 3 h. Zatim se
44
ohladi na 0° C i ugasi vodom. Organski sloj je odvojen i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 313b (1.1 g, 68%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI:
[M+H]<+>247,9
Primer 313c 5-Metil-2-nitro-4,5-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-6 (7H)-on 313c
U rastvor 313b (1,0 g, 4,0 mmol) u dihlormetan (30 ml) je dodat rastvor od CH3NH2(1.07 g, 12.0 mmol, 35% u metanolu). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sati, a zatim je reakcija prekinuta vodom (30 ml). Organski sloj je odvojen iznad Na2SO4, i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 313c (450 mg, 57%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>196,9
Primer 313d 2-Amino-5-metil-4,5-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-6 (7H)-on 313d
U rastvor 313c (450 mg, 2,3 mmol) u etanolu (30 mL) dodat je Pd/C (10%,400 mg). Reakcija je napunjena gasom vodonika (preko balona) i mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Nakon reakcija je bila potpuna, smeša je filtrirana kroz utikač CELITE<®>a filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom dajući 313d kao žuti čvrstu supstancu (320 mg, 84%), koji je korišten bez daljnjeg prečišćavanja u sljedećem koraku. MS-ESI: [M+H]<+>167,1 Primer 313e 2-(5-Bromo-1-metil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-ilamino)-5-metil-4,5-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-6 (7H)-on 313e
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 313d (300 mg, 1,8 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (482 mg, 1,8 mmol), cezijum karbonat (1,17 g, 3,6 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 10 minuta, dodati su ksantfos (104 mg, 0.18 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (82 mg, 0.090 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na refluksu 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je
44
isprana dihlorometanom (2 x 30 m). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije dihlormetanom/metanolom (80:1-30:1) dajući naslovno jedinjenje 313e (390 mg, 61%) u obliku žute čvrste materije.
Primer 313F (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-6-okso-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 313f
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom napunjena je 313e (150 mg, 0,43 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (170 mg, 0.43 mmol), K3PO4(183 mg, 0.86 mmol), natrijev acetat (71 mg, 0.86 mmol), Pd(dppf)Cl2(35 mg, 0.043 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na 100° C tokom 3 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 313f (131 mg, 49%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>625,3.
Primer 313 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6-okso-4,7-dihidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 313
Smeša 313f (130 mg, 0.21 mmol) i litijum hidroksida (10 mg, 0.42 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 7 mL) i voda (2 mL) je mešana na 0° C u trajanju od 0.5 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je izliven u vodu (20 ml) i ekstrahovan etilacetatom (3 x 20 ml). Kombinovani ekstrakt etil-acetata se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 313 (60 mg, 49%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>582,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.10 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,07 (s, 1H), 4,95 (bs, 1H), 4,62-4,54 (m, 4H), 4,46-4,42 (m,
44
2H), 4,24-4,19 (m, 3H), 3,89-3,82 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 2,99 (s, 3H), 2,60-2,57 (m, 2H), 2,45-2.44 (m, 2H), 1.23 (s, 6H).
Primer 314a 1-(6-Nitropiridin-3-il) azetidin-3-ol 314a
Posuda od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je acetonitrilom (50 mL), 5-fluoro-2-nitropiridinom (1.2 g, 7.9 mmol), K2CO3(2.1) g, 15.8 mmol), i azetidin-3-ol hidrohlorida (1.3 g, 11.9 mmol). Smeša je mešana na 60°C tokom 1 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije dihlormetanom/metanolom (50:1) dajući naslovno jedinjenje 314a (1,1 g, 73%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>196,0.
Primer 314b 1-(6-Aminopiridin-3-il) azetidin-3-ol 314b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom je prečišćena sa azotom i napunjena 314a (1.0 g, 5.1 mmol), 10% paladijuma na uglju (10% vlažan, 100 mg) i etanol (40 mL). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika, i mešana na sobnoj temperaturi 5 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da se dobije 314b kao žuta čvrsta supstanca (792 mg, 85%). MS-ESI: [M+H]+ 166,1
Primer 314c 5-Bromo-3-(5-(3-hidroksiazetidin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 314c
Boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 314b (792 mg, 4.8 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (1.9) g, 7,2 mmol), tris-(dibenzylidencacetone) dipalladium (0) (440 mg, 0.48 mmol), Ksantfos (555 mg, 0.96 mmol), Cs2CO3(3,1 g, 9,6 mmol) i 1,4-dioksan (40 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 90° C tijekom 3,0 sati. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 20: 1), dajući 314c kao žutu čvrstu supstancu (1,5 g, 89%). MS-ESI: [M+H]<+>351,1
Primer 314d (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(3-hidroksiazetidin-1-il) piridin-2-il] arinino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 314d
44
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 314c (176 mg, 0.50 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatri-ciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (198 mg, 0.50 mmol), Pd(dppf)Cl2(41 mg, 0.050 mmol), K3PO4(212.0 mg, 1.0 mmol), natrijev acetat (82,0 mg, 1,0 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva na 95° C 1 sat. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući sirovi 314d kao smeđu čvrstu supstancu, koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>623,8.
Primer 314 3-[4-[5-[[5-(3-hidroksiazetidin-1-il)-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 314
Smeša 314d (sirovi proizvod 311.5 mg, 0.50 mmol) i litij hidroksid hidrat (300 mg, 12.5 mmol) u i-propanol/THF/vodi (2: 2: 1, 10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 30 min. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u vodi (10 ml) i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 25 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 314 (46 mg, dva koraka: 16%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>581,9.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.54 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7,54 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,83-6,81 (m, 2H), 6,75 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5.04-5.02 (m, 1H), 4.77-4.75 (m, 1H), 4.64-4.62 (m, 1H), 4.50-4.48 (m, 1H), 4.34-4.32 (m, 1H), 4.17-4.14 (m, 4H), 3.86-3.83 (m, 1 H), 3.70 (s, 3H), 3.64-3.62 (m, 2H), 2.57-2.56 (m, 2H), 2.51 (s, 2H), 2.31-2.30 (m, 1H), 1,27 (s, 6H).
Primer 315 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[[1-metil-5-(pirolidin-1-karbonil) pirazol-3-il] amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 315
Slijedeći procedure iz primera 273, i zamijenivši (3-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)
44
(pirolidin-1-il) metanon za 2-aminopiridin, 315 je pripremljen. (27,3 mg, prinos 60%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.05 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,46 (s, 1H), 4,95 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,42-4,47 (m, 1H)), 4,17-4,21 (m, 3H), 3,79 (s, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,48 (dt, J = 11,1, 6,6 Hz, 3H), 3,27 (s, 2H), 2,57 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,90-1,84 (m, 3H), 1,22 (s, 6H). MS m/z 611,4 [M+1].
Primer 316 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(metoksimetil)-1-metil-pirazol-3-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 316
Slijedeći procedure iz primera 273, i zamenjujući 5-(metoksimetil)-1-metil-1H-pirazol-3-amin za 2-aminopiridin, pripremljen je 316. (43,2 mg, prinos 84%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.47 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.04 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,55 (s, 1H), 6,11 (s, 1H), 4,96-4,90 (m, 1H), 4,38-4,46 (m, 1H), 4,38 (s, 2H), 4,19 (d, J = 9,8 Hz, 2H), 3,82-3,96 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,27 (s, 2H), 2,57 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,43 (s, 2H), 1,22 (s, 6H). MS m/z 558,3 [M+1].
Primer 317a 5-Metil-2-(1-metil-2-okso-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-4,5-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-6 (7H)-on 317a
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 2-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino)-5-metil-4,5-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-6 (7H)-on 313e (270 mg, 1,0 ekv., 0,68 mmol), Pin2B2(863,6 mg, 5,0 ekv., 3,4 mmol)), Pd2(dba)3(62,4 mg, 0,1 ekv., 0.068 mmol), X-Phos (64,8 mg, 0,2 ekv., 0.14 mmol), kalijum-acetat (200 mg, 3.0 ekv., 2.04 mmol), i dioksan (15 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 65° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom radi dobijanja sirovog 317a koje je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>399,9.
Primer 317b 2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il}-4-[1-metil-5-({5-metil-6-okso-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1, 5-a] pirazin-2-il]
4
amino)-6-okso-1,6;-dihidropiridin-3-il] piridin-3-karbaldehid 317b
U posudu sa jednim vratom sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 317a (100 mg, 0.28 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a (112 mg, 0.28 mmol), Pd(dppf)Cl2(22,9 mg, 0.028 mmol), K3PO4(118,7 mg, 0,56 mmol), natrijev acetat (45,9 mg, 0,56 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa se zagreva pod refluksom 1 sat. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (50: 1 do 30: 1) da se dobije 317b kao žuta čvrsta supstanca (60 mg, 36%). MS-ESI: [M+H]<+>597,8.
Primer 317 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(5-metil-6-okso-4,7-dihidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-c] piridin-4-on 317
Amixture od 317b (60 mg, 0.10 mmol) i NaBH4(11.3 mg, 0.30 mmol) u metanolu (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 30 min. Smesa je ugašena vodom (15 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 40 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 317 (15 mg, 25%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]+ 599,8<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.50 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,0 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.50 (e, 1H), 7.34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.82-4.66 (m, 4H), 4.56 (s, 2H), 4.42-4.33 (m, 2H), 3.83-3,81 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,15 (s, 3H), 2,98-2,94 (m, 2H), 2,80 (s, 2H), 2,57-2,52 (m, 2H), 1,28 (s, 3H).6H).
Primer 318a {4-[5-({4,5-dimetil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il } piridin-3-il} metil-acetat 318a
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 287i (123 mg, 1,0
4 1
ekv, 0.74 mmol), [4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 273a (400 mg, 1.0 ekv., 0.74 mmol), Pd2(dba)3(68 mg, 0,1 ekv., 0.074 mmol), Ksantfos (86 mg, 0,2 ekv., 0.148 mmol), Cs2CO3(487 mg, 2.0 ekv., 1.48 mmol) i dioksan (15 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je mešana na 100° C u trajanju od 2 sata. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim koncentrovana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 20: 1 etil-acetat/metanol da bi se dobilo 318a kao smeđa čvrsta supstanca (221 mg, 48%). MS-ESI: [M+H]<+>624,9
Primer 318b 10-{4-[5-({4,5-dimetil-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-3-(hidroksimetil) piridin-2-il}-4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 318b
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 318a (200 mg, 1,0 ekv., 0,32 mmol), litijum hidroksidom (38 mg, 5,0 ekv., 1,60 mmol), i-propanol/THF (8/8 mL) i voda (2 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sati, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se dodaje između vode i dihlorometana. Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze da bi se dobila racemična smeša 318b kao žuta čvrsta supstanca (91 mg, 43%).
Primer 318 (R)-2-(5-((4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-il) amino)-3 '-(hidroksimetil)-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-2'-il)-7,7-dimetil-2,3,4,6,7,8-heksahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 318
Hiralna HPLC (kolona: OZ-H, 100% metanol (0,1% etil-acetat)) rezolucija 318b odvojenih enantiomera 318 i 319.318: MS-ESI: [M+H]<+>582,8.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.72 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.36 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.04 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.66-4.64 (m, 1H), 4.52-4.48 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,18-4,05 (m, preklapanje, 4H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,43-3,41 (m, 1H), 3,17-3,15 (m, 1H), 2,87-2,85 (m, 1H), 2,60-2,59 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,46 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1.29 (s, 6H).
Primer 319 (S)-2-(5-((4,5-dimetil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-il) amino)-3 '-(hidroksimetil)-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'-bipiridin]-2-il)-7,7-dimetil-2,3,4,6,7,8-heksahidro-1H-ciklopenta [4,5] pirolo [1,2-a] pirazin-1-on 319
Hiralna HPLC (kolona: OZ-H, 100% metanol (0,1% etil-acetat)) rastavljanje racemskih 318b odvojenih enantiomera 318 i 319. 319: MS-ESI: [M+H]<+>582,8.<1>H NMR
4 2
(500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.72 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.36 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.04 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.67-4.65 (m, 1H), 4.52-4.48 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,18-4,05 (m, preklapanje, 4H), 3,88-3,86 (m, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,43-3,41 (m, 1H), 3,17-3,15 (m, 1H), 2,87-2,85 (m, 1H), 2,60-2,59 (m, 2H), 2,53 (s, 2H), 2,48 (s, 3H), 1,46 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1.30 (s, 6H).
Primer 320A (6-Aminopiridin-3-il) ((3 R, 5 S)-3,5-dimethylmorpholino) methanone 320a
U rastvor (3 S, 5 R)-3,5-dimethylmorpholine (1,15 g, 10 mmol) u DMF (15 ml) je dodat HATU (3,8 g, 10 mmol), DIPEA (2,6 g, 20 mmol), i 6-aminonikotinska kiselina (1.38 g, 10 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana 18 h. Zatim je filtriran i filtrat je prečišćen pomoću Combiflash (A: 1 ‰ NH4HCO3/voda, B: acetonitril) radi dobijanja 320a (650 mg, 27%) kao žute čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>236,1.
Primer 320B 5-Bromo-3-(5-((3 R, 5 S)-3,5-dimethylmorpholine-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 320b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 320a (160 mg, 1,0 ekv., 0,68 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (273 mg, 1.5 ekv., 1.02 mmol), Pd2(dba)3(64 mg, 0,1 ekv., 0.070 mmol), Ksantfos (79 mg, 0,2 ekv., 0.14 mmol), Cs2CO3(444 mg, 2.0 eq., 1.36 mmol) i dioksana (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, smesa se zagreva na 100° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem
4
sa etil-acetatom da bi se dobilo 320b (190 mg, 66%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI:
[M+H]<+>420,8.
Primer 320c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{5-[(5-{[(3 R, 5 S)-3,5-dimethylmorpholin-4-il] karbonil} piridin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 320c
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 320b (150 mg, 1,0 ekv., 0,36 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4 4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (286 mg, 2.0 ekv., 0.72 mmol), PdCl2(dppf) (29 mg, 0,10 ekv., 0.040 mmol), K3PO4(153 mg, 2.0 ekv., 0.72 mmol), natrijev acetat (59 mg, 2.0 eq., 0.72 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.2 mL). Nakon tri ciklusa vakuuma/ispiranja azota, smesa je zagrevana na 90° C 2 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uparen pod sniženim pritiskom i rezultirajući ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 320c (161 mg, 64%) kao braon čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>693,8 Primer 320 3-[4-[5-[[5-[(3S, 5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-karbonil]-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 320
Posuda od 25 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom, napunjena je 320b (145 mg, 1.0 ekv., 0.21 mmol), litijum hidroksidom (26 mg, 5.0 ekv., 1.05 mmol), THF (4.0 mL)), i-propanol (4,0 mL) i voda (1,0 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 h, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Reakciona smeša je zatim razblažena vodom (10 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 15 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC tehnikom radi dobijanja 320 (35 mg, 26%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>651,9
Primer 321a 6-hlor-4-(5-((3 R, 5 S)-3,5-dimethylmorpholine-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-2-methylpiridazin-3 (2H)-on 321a
4 4
Laboratorijska boca od 25-mL sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom je napunjena sa (6-aminopiridin-3-il) ((3 R, 5 S)-3,5-dimethylmorpholino) methanone 320a (235 mg, 1,0 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (232 mg, 1,05 mmol), cezijum karbonat (652 mg, 2,0 mmol) i 1,4-dioksanom (6,0 mL). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 10 minuta, dodati su Ksantfos (116 mg, 0,20 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (70 mg, 0,10 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan pri refluksu tokom 2,5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (2: 1 do 1:10) dajući 321a (140 mg, 37%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>378,3
Primer 321b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{5-[(5-{[(3 R, 5 S)-3,5-dimethylmorpholin-4-il] karbonil} piridin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 321b
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 321a (140 mg, 0,37 mmol), (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2, 6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil; acetat 199e (355 mg, 0.74 mmol), K3PO4(157 mg, 0.74 mmol), natrijev acetat (61 mg, 0.74 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferrocenedichloropalladium (II) (36 mg, 0.040 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (0.2 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1,5 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je podeljen između dihlorometana (30 mL) i vode (30 mL). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni
4
silika gela, eluiranjem sa 60:1 dihlorometan/metanol, da bi se dobilo 320b (105 mg, 41%) kao crna čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>695,3
Primer 321 3-[4-[5-[[5-[(3S, 5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-karbonil]-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-piridazin-3-il]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 321
U rastvor 321b (105 mg, 0.15 mmol) u THF/i-propanol/vodi (2/1/0.5 mL) dodat je litijum hidroksid (36 mg, 1.5 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što je reakcija mešana 3h, LCMS je pokazala da je reakcija završena. Zatim je smeša sipana u vodu (25 ml), i smeša je ekstrahovana pomoću dihlormetanac (3 x 20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad (a2SO4, ifiltriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (A: 1 ‰ NH4HCO3/voda, B: acetonitril) radi dobijanja 321 (100 mg, 95%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>652,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9.69 (e, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.53 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,77-7,75 (m, 1H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,78 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,60-4,57 (m, 1H), 4,41-4,37 (m, 1H), 4,30-4,25 (m, 1H), 4,19 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 4,01-4,00 (m, 2H) 3.92-3.88 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.56-3.53 (m, 2H), 2.61-2.58 (m, 2H), 2.42 (s, 2H)., 1.25 (d, J = 6.0 Hz, 6H), 1.21 (s, 6H)
Primer 322A (4-(5-(5-((3 R, 5 S)-3,5-Dimethylmorpholine-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 322a
Laboratorijska boca od 25-mL sa okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom je napunjena sa (6-aminopiridin-3-il) ((3 R, 5 S)-3,5-dimethylmorpholino) methanone 320a (120 mg, 0,50 mmol), (4-(5-bromo-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-2 (1H)-il) piridin-3-il) metil-acetat 217a (262 mg, 0.50 mmol), cezijum karbonatom (326 mg, 1.0 mmol) i 1,4-dioksanom (6 mL). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 10 minuta, dodati su Ksantfos (58 mg, 0,10 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (45 mg,
4
0,050 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan pri refluksu tokom 2,5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela pomoću elucije dihlormetanom/metanolom (80:1-50:1) dajući 322a (200 mg, 59%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>680,3
Primer 322 2-[4-[5-[[5-[(3S, 5R)-3,5-dimetilmorfolin-4-karbonil]-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirazino [1,2-a] indol-1-on 322
U rastvor 322a (136 mg, 0,20 mmol) u THF/i-propanol/vodi (4/2/1 mL) dodat je litijum hidroksid (48 mg, 2.0 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što je reakcija mešana 2 h, LCMS je pokazala da je reakcija završena. Zatim je smeša sipana u vodi (15 ml), i ekstrahovana pomoću dihlormetana (3 x 15 ml). Kombinovani organsk slojje ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4,filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (A: 1 ‰ NH4HCO3/voda, B: acetonitril) radi dobijanja 322 (50 mg, 40%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]+ 638,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,.94 (s, 1H), 8,77 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,20 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,64-7,62 (m, 1H), 7,59 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37-7,35 (m, 2H), 6,57 (s, 1H), 4,95 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,47-4,38 (m, 2H), 4,23-3,99 (m, 5H), 3,88-3,87 (m, 1H), 3,65-3,61 (m, preklapanje, 5H), 3,56-3,53 (m, 2H), 2,66-2,56 (m, 2H), 2,47-2,44 (m, 2H), 1,.80-1,79 (m, 2H), 1,70-1,66 (m, 2H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 6H)
Primer 323a 5-(3-metoksiazetidin-1-il)-2-nitropiridin 323a
4
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena je refluksnim kondenzatorom, napunjena je 3-metoksiazetidin hidrohloridom (1,0 g, 8,09 mmol), 5-bromo-2-nitropiridinom (1,97 g, 9,71 mmol), Pd2(dba)3370.1 mg, 0.404 mmol), Ksantfos (467,6 mg, 0.809 mmol), Cs2CO3(7,9 g, 24,3 mmol) i dioksan (50 ml). Nakon propuštanja azota kroz reakcionu smešu tokom 20 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 3 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol, dajući 323a kao žutu čvrstu supstancu (1.63 g, 96%). MS-ESI:
[M+H]<+>210,2
Primer 323b 5-(3-metoksiazetidin-1-il) piridin-2-amin 323b
U rastvor 323a (1,5 g, 7,17 mmol) u Metanolu (150 mL) dodat je 10 % Pd/C (150 mg). Sistem je evakuiran, a zatim napunjen H2.Nakon 2 sati mešanja na sobnoj temperaturi, smeša je filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 323b kao žuto ulje (1,2 g, 93%) koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>180,1
Primer 323c 5-Bromo-3-(5-(3-metoksiazetidin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 323c
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena je refluksnim kondenzatorom, napunjena 323b (1.2 g, 6.7 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona
4
(2.14 g, 8.04 mmol), Pd2(dba)3(306.5 mg, 0.335 mmol), Ksantfos (387,3 mg, 0,67 mmol), Cs2CO3(4,37 g, 13,4 mmol) i dioksan (50 ml). Nakon ključanja azota kroz reakcisku smešu u roku od 20 minuta, ona je zagrejana na 100° C pod zaštitom N2tokom 3 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobilo 323c kao smeđa čvrsta supstanca (1.16 g, 47%), koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>364,8.
Primer 323d (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(3-metoksiazetidin-1-il) piridin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 323d
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena je refluksnim kondenzatorom, napunjena 323c (150 mg, 0.411 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (326,5 mg, 0,822 mmol), Pd(dppf)Cl2(16.8 mg, 0.0205 mmol), K3PO4(174.3 mg, 0.822 mmol), natrijev acetat (67,5 mg, 0.822 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vode (5 kapi). Nakon propuštanja azota kroz reakcionu smešu tokom 20 minuta, zagrejana je na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 323d kao žuto ulje (180 mg, 68.7%). MS-ESI: [M+H]<+>637,8
Primer 323 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(3-metoksiazetidin-1-il)-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 323
U rastvor jedinjenja 323d (160 mg, 0,251 mmol) u THF-u (5 mL), i-propanolu (5 mL) i vodi (5 mL) dodat je LiOH (95 mg, 2,51 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Zatim je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen vodom (10 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 15 ml). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen reverznom faznom HPLC tehnikom radi dobijanja 323 (33,8 mg, 23%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>595,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,55 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 7,48 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,91 (dd, J = 2,5, 8,5 Hz,
4
1H), 6,56 (s, 1H), 4,96-4,94 (m, 1H), 4,47-4,39 (m, 2H), 4,31-4,19 (m, 4H), 4,03-4,00 (m, 2H), 3,85-3,83 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,55-3,53 (m, 2H), 3,23 (s, 3H), 2,62-2,54 (m, 2H), 2,44-2,42 (m, 2H), 1,22 (s, 6H).
Primer 324a (6-Aminopiridin-3-il) ((3 S, 5 S)-3,5-dimethylmorpholino) methanone 324a
U rastvor (3 S, 5 S)-3,5-dimethylmorpholine (115 mg, 1,0 mmol) u DMF (2 mL) je dodat HATU (380 mg, 1,0 mmol), DIPEA (260 mg, 2,0 mmol), i 6-aminonikotinska kiselina (138 mg, 1,0 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon 18 h mešanja, reakcijska smesa je filtrirana i prečišćena pomoću Combiflash (A: 1 ‰ NH4HCO3/voda, B: acetonitril) da bi se dobio 324a (80 mg, 34%) kao žuta čvrsta supstanca. LC/MS (ESI+): m/z 236.1 (M+H).
Primer 324B 6-hlor-4-(5-((3 S, 5 S)-3,5-dimetilmorfolin-4-karbonil) piridin-2-ilamino)-2-metilpiridazin-3 (2H)-on 324B
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (8 mL), cezijum karbonatom (221 mg, 0.68 mmol), 324a (80 mg, 0.34 mmol).), i 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-on (80 mg, 0,36 mmol). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 5 minuta, dodati su Ksantfos (40 mg, 0.068 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (24 mg, 0.034 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan pri refluksu tokom 2,5 h. Zatim je ohlađena na sobnu
4
temperaturu i filtrirana. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 40 ml). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (2/1 do 100% etil-acetata) da se dobije 324b (40 mg, 31%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>378,3
Primer 324c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{5-[(5-{[(3 S, 5 S)-3,5-dimethylmorpholin-4-il] karbonil} piridin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 324c
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 324b (40 mg, 0,11 mmol), (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2, 6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil; acetat 199e (105 mg, 0,22 mmol), K3PO4(47 mg, 0,22 mmol), natrijev acetat (18 mg, 0,22 mmol), 1,1-bis (difenilfosfino) ferrocenedichloropalladium (II) (20 mg, 0.022 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (6 kapi). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1,5 h. LCMS analiza je pokazala potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (50 ml) i vodom (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani ekstrakt je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 60:1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 324c (40 mg, 52%) kao crna čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>695,3
Primer 324 3-[4-[5-[[5-[(3S, 5S)-3,5-dimetilmorfolin-4-karbonil]-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-piridazin-3-il]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 324
U rastvor 324c (40 mg, 0.057 mmol) u THF/i-propanol/vodi (1/1/0.5 ml) dodat je litijum hidroksid (14 mg, 0.57 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što se reakcija 3 h meša, LCMS pokazuje da je reakcija završena. Zatim je smeša sipana u vodi (20 ml), i ekstrahovana pomoćudihlorometana (3 x 15 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Čvrsti ostatak je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (A: 1 ‰ NH4HCO3/voda, B: acetonitril) radi dobijanja 324 (10 mg, 27,7%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>653,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,.69 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,53 (d, J = 5,0, 1H), 8,31 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,77-7,75 (m, 1H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 5,.0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,78 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,60-4,57 (m, 1H), 4,41-4,37 (m, 1H), 4,30-4,25 (m, 1H), 4,19 (d, J = 3,5
4 1
Hz, 2H), 4,01 (s, 2H), 3,92-3,88 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,65-3.,61 (m, 2H), 3,56-3,53 (m, 2H), 2,57 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 2,42 (s, 2H), 1,25 (d, J = 6,0 Hz, 6H), 1,21 (s, 6H)
Primer 325a 3-Amino-5-bromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on 325a
U rastvor 5-brom-3-(difenilmetilenamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (3,82 g, 10,4 mmol) u etil-acetatu (10 ml) dodano je 4 M HCl/dioksan (7,8 mL, 31,3). mmol). Reakcijska smeša je mešana 0,5 h i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran terc-butil metil etrom i filtriran. Ostatak je rastvoren u etil-acetatu (10 mL) i vodi (10 mL). PH dobijene smeše je podešen na između 7 i 8 dodavanjem K2CO3postepeno. Vodena faza je odvojena i tri puta ekstrahovana sa dihlorometanom. Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom, dajući 325a kao žutu čvrstu supstancu (1.1 g, 52%). MS-ESI: [M+H]<+>202,9.
Primer 325b 1-(2-bromo-5-fluoropiridin-4-il) etanol 325b
U laboratorijsku bocu od 250 ml sa 3 vrata doda se THF rastvor (20 mL) 2-brom-5-fluoropiridina (8,80 g, 50 mmol). Na-78° C, u rastvor je kap po kap dodat LDA (25.0 mL, 50 mmol, 2.5 M u THF). Nakon 5 min mešanja, diizopropilamin (7.0 mL, 50 mmol) je dodat kap
4 2
po kap preko šprica i smeša je mešana na-78° C tokom 4 h. THF rastvor acetaldehida (11 mL, 55 mmol, 5 M u THF) je dodavan kap po kap preko šprica. Sadržaj je uklonjen iz hladnog kupatila i mešan uz zagrevanje do sobne temperature preko noći. Smeša je razblažena vodom (150 mL) i snažno mešana 5 min. Sadržaj je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ostatak je ekstrahovan sa etil etrom (3 x 150 mL). Kombinovani organski sloj je osušen preko MgSO4,filtrirane, i koncentriran pod smanjenim pritiskom dajući žuto ulje, koji je prečišćeno hromatografijom na koloni silika-gela eluiranjem sa petroleum etrom/etil-acetatom (10:1 do 5:1) dajući 325b (8.0 g, 72.7%) kao žutu čvrsta supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>220,1.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.15 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 5.17 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 2,18-2,16 (m, 1H), 1,52 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 325c 1-(2-bromo-5-fluoropiridin-4-il) etanon 325c
Smeša 325b (7,5 g, 34,2 mmol) i 2-jodoksibenzojeve kiseline (38,4 g, 137 mmol) u etil-acetatu (200 ml) je mešana na 85° C tokom 20 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (20: 1 do 10: 1) da bi se dobio 325c (6,8 g, 92%) kao žuto ulje. MS-ESI: [M+H]+ 217,9.
Primer 325d 5-Bromo-3-metil-1H-pirazol [3,4-c] piridin 325d
U laboratorijsku bocu sa okruglim dnom od 250 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom dodat je suhi etilen glikol (30 mL) i 325c (4.3 g, 20 mmol). Zatim hidrazin hidrat (5.0 mL, 4.8 g, 81.6 mmol) je dodat ukapavanjem preko šprice. Smeša je mešana na 165°C tokom 3,5 h. Dobijena narandžasto-smeđa smeša se ohladi na sobnu temperaturu i sadržaj se sipa u mešavinu od 100 ml led/vode (1: 1), nakon čega dolazi do taloženja. Posle 10 min mešanja, sakupljen je beličasti talog, koji je sušen in vacuo da bi se dobio 325d kao beličasta čvrsta supstanca (3.1 g, 74%). MS-ESI: [M+H]+ 211,9
Primer 325e 5-Bromo-1, 3-dimetil-1H-pirazol [3,4-c] piridin 325e i 5-bromo-2,3-dimetil-2H-pirazol [3,4-c] piridin 326a
Smeša 325d (3,0 g, 14,2 mmol, 3 ekv.) i CH3I (2,40 g, 17,.0 mmol), i K2CO3(2.9 g, 21.3 mmol) u acetonitrilu mešana je na 30°C tokom 1 h. Reakciona smeša je filtrirana, i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 8: 1 petroleum eter/etil-acetatom da bi se dobilo 325e (920 mg, 29.0%) kao bela čvrsta supstanca, i eluirala sa 2: 1 petroleum eter/etilacetatom da se dobije 326a (390 mg, 12,0%) kao siva čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>226,1.
Primer 325f 5-Bromo-3-(1, 3-dimetil-1H-pirazol [3,4-c] piridin-5-ilamino)-1-
4
metilpiridin-2 (1H)-on 325f
Zapečaćena epruveta je napunjena 325e (202 mg, 1,0 mmol), 325a (337.5 mg, 1,5 mmol), Pd2(dba)3(91,7 mg, 0,10 mmol), BINAP (124.6 mg, 0.20 mmol), cezij karbonata (650 mg, 2.0 mmol) i 1,4-dioksan (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, zapečaćena epruveta je zagrevana na 100° C 2 sata. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (5: 1 do 2: 1) da se dobije 325f (140 mg, 40%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>348,2.
Primer 325g {4-[5-({1,3-Dimetil-1H-pirazol [3,4-c] piridin-5-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il } metil-acetat 325g
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 325f (120 mg, 0,35 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (417 mg, 1.05 mmol), Pd(dppf)Cl2(29 mg, 0.035 mmol), K3PO4(148.0 mg, 0.70 mmol), natrijev acetat (57,4 mg, 0,70 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (15 ml). Nakon tri ciklusa vakuuma/ispiranja azota, smesa je zagrevana na refluksu 1 sat. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 325 g kao žutu čvrstu supstancu (70 mg, 33%). MS-ESI:
[M+H]<+>620,8.
Primer 325 3-[4-[5-[(1, 3-dimetilpirazolo [3,4-c] piridin-5-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 325
Smeša od 325g (60 mg, 0.10 mmol) i litijum hidroksida (60 mg, 2.5 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 35° C 30 min. U reakcionu smešu je dodata voda (10 mL) i dobijena smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je ekstrahovan sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 325 kao žuta čvrsta supstanca (20 mg, 31%). MS-ESI: [M+H]<+>578,8.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.80 (e, 1H), 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7,49 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,06-5,05 (m, 1H), 4,51-4,43 (m)., 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 4,00 (s, 3H), 3,86-3,84 (m, 1H), 3,63 (s, 3H), 2,62-2,59 (m, 2H), 2,44-2,43 (m, 2H)., preklapanje, 5H), 1.22 (s, 6H).
4 4
Primer 326b 5-Bromo-3-(2,3-dimetil-2H-pirazol [3,4-c] piridin-5-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 326b
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-bromo-2,3-dimetil-2H-pirazol [3,4-c] piridinom 326a iz primera 325 (452 mg, 2,0 mmol), 3-amino-5-bromo-1-metilpir n 325a (400 mg, 2.0 mmol), cezijum karbonat (1.3 g, 4.0 mmol) i 1,4-dioksan (10 mL). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 5 minuta, dodati su BINAP (124 mg, 0.2 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (140 mg, 0.2 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan pri refluksu tokom 2,5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana dihlorometanom (3 x 10 ml). Kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa petrol eter/etil-acetatom (2/1 do 100% etil-acetata) da se dobije 326b (160 mg, 23%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>348,3
Primer 326c {4-[5-((2,3-dimetil-2H-pirazol [3,4-c] piridin-5-il) amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il } metil-acetat 326c
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 326b (160 mg, 0,46 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e
4
(300 mg, 0.69 mmol), K3PO4(195 mg), 0.92 mmol), natrijum-acetata (75 mg, 0.92 mmol), 1,1'-bis (difenilfosfino) ferocenedihloropaladij (II) (42 mg, 0.046 mmol), acetonitril (10 mL) i voda (6 kapi). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1,5 h. LCMS analiza je pokazala potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen dihlormetanom (50 ml) i vodom (50 ml). Vodeni sloj je odvojen i ekstrahovan dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani ekstrakt je osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak je prečišćen gel-silika kolonskom hromatografijom eluiranjem sa 60: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 326c (130 mg, 45%) kao crna čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>621,3
Primer 326 3-[4-[5-[(2,3-dimetilpirazolo [3,4-c] piridin-5-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 326
U rastvor jedinjenja 326c (130 mg, 0,21 mmol) u THF-ui-propanolu/vodi (4/2/1 mL) dodat je rastvor litijum hidroksid monohidrata (50 mg, 2,0 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon što je reakcija mešana 3h, LCMS je pokazala da je reakcija završena. Zatim je smeša sipana u vodu (30 ml), i ekstrahovana pomoću dihlormetana (3 x 30 ml). Kombinovani organski sloji je isprani slanim rastvorom (30 ml), osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak čvrste supstance je prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (A: 1 ‰ NH4HCO3/voda, B: acetonitril) radi dobijanja 326 (60 mg, 50%) kao bele čvrste supstance. MS-ESI: [M+H]<+>579,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.86 (e, 1H), 8.48 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7,47 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,38 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 5,13 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4.50-4.46 (m, 2H), 4.24-4.19 (m, 3H), 4.09 (s, 3H), 3.86-3.85 (m, 1H), 3.62 (s, 3H), 2.62-2.53 (m, preklapanje, 5H), 2.43 (s, 2H), 1.22 (s, 6H)
Primer 327a 5-(2-metoksietil)-2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin 327a
U rastvor 2-nitro-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin (190 mg, 1.13 mmol) 209a
4
u acetonitrilu (10 ml) je dodat K2CO3(311.9 mg, 2.26 mmol) i 1-bromo-2-metoksietan (188,3 mg, 1,36 mmol). Reakciona smeša je mešana na 80°C tokom 17 h pod mikrotalasnim zračenjem. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 327a kao belu čvrstu supstancu (230 mg, 90%) koje je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>227,0 Primer 327b 5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-amin 327b
U rastvor 327a (286 mg, 1,26 mmol) u MeOH (10 mL) dodat je Pd/C (28,6 mg). Sistem je evakuisan, a zatim napunjen sa H2. Nakon 2 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana. Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući 327b kao žutu čvrstu supstancu (240 mg, 97%) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>197,0
Primer 327c 3,5-dibromo-6-metilpiridin-2 (1H)-on 327c
6-Metil-piridin-2-ol (10.9 g, 0.10 mol) je suspendovan u bezvodnom dihlorometanu (300 mL) i mešan na temperaturi okoline. Uz hlađenje u ledenom/vodenom kupatilu za hlađenje, N-bromosukcinimid (NBS) (11.4 g, 0.20 mol) je polako dodavan u vremenskom intervalu od 5 minuta. Reakciona suspenzija je mešana na 60°C 2 sata. Nakon toga, suspenzija je filtrirana. Filterski kolač se temeljno ispere metanolom i osuši pod vakuumom, dajući 327c kao belu čvrstu supstancu (22,7 g, 85%). MS-ESI: [M+H]<+>266.
Primer 327d 3,5-dibromo-1, 6-dimetilpiridin-2 (1H)-on 327d
Laboratorijska boca od 100-mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena sa magnetnom mešalicom je napunjena sa DMF (50 ml), 327c (10,0 g, 37,5 mmol), CH3I (5,3 g, 37,5 mmol), i K2CO33(7,8 g, 56,2 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 sat. Doda se voda (100 mL) i dobijena bela čvrsta supstanca se sakupi kako bi se dobilo 327d (8.2 g, 78%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>280.
Primer 327e 5-Bromo-3-(5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1,6-dimetilpiridin-2 (1H)-on 327e
4
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 mL opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 327b (392 mg, 2.0 mmol), 327d (562 mg, 2.0 mmol), cezijum karbonatom (1.30 g, 4.0 mmol) i 1,4-dioksanom (20 mL). Nakon propuštanja azota kroz suspenziju tokom 10 minuta, dodati su ksantfos (115 mg, 0.20 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (92 mg, 0.10 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan pri refluksu tokom 5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana dihlormetanom (2 x 15 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije dihlormetanom/metanolom (80:1-30:1) dajući naslovno jedinjenje 327e (490 mg, 62%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>396,2
Primer 327f (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(5-{[5-(2-metoksietil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1,2-dimetil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 327f
Posuda od 25 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 327e (158 mg, 0,40 mmol), {3-[(acetiloksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il) boronska kiselina 199e (159 mg, 0.40 mmol), K3PO4(170 mg, 0.80 mmol), natrijev acetat (66 mg, 0.80 mmol), Pd(dppf)Cl2(15 mg, 0.020 mmol) i acetonitrilu/voda (7/0,5 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 95° C za 1 h. LCMS analiza je pokazala potpunu konverziju u željeni proizvod. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i razblažena dihlormetanom (50 ml) i vodom (30 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan dihlormetanom (2 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Tamni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (80: 1 do 30: 1) da se dobije 327f (120 mg, 45%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>668,8
Primer 327 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(2-metoksietil)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino]-1,2-dimetil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 327
U rastvor jedinjenja 327f (120 mg, 0,18 mmol) u THF-u (6 mL) dodat je litijum hidroksid monohidrat (22 mg, 0,90 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen hladnom vodom (50 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata i koncentrovani. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC,
4
dajući primer 327 kao belu čvrstu supstancu (55 mg, 49%). MS-ESI: [M+H]<+>626,9.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.15 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 5,61 (bs, 1H), 4,53-4,45 (m, 3H), 4,26-4,16 (m, 3H), 4,03-3,97 (m, 3H), 3,71-3,69 (m, 5H, preklapanje), 3.58 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.98 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.60-2.57 (m, 2H), 2.53 (s, 2H), 2.17 (s, 3H), 1.29 (s, 6H).
Primer 328a 3-(5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1,5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5)-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 328a
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom napunjen je 5-brom-3-(5-(2-metoksietil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo [1, 5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 296f (330 mg, 0.86 mmol), Pin2B2(329 mg, 1.30 mmol), Pd2(dba)3(40) mg, 0,043 mmol), X-fos (41 mg, 0,086 mmol), kalijum acetat (169 mg, 1,726 mmol) i dioksan (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/N2, smeša je zagrejana na 70° C u trajanju od 2 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je ispran petroleum etrom da bi se dobilo 328a kao tamno ulje (240 mg, 80%), koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>348,3
Primer 328b 3-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-5-(5-[5-(2-metoksietil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-4-karbaldehid 328b
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je 3-bromo-5-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piri-Dine-4-karbaldehid 107f (100 mg, 0,26 mmol), 328A (110 mg, 0,26 mmol), Pd(dppf)Cl2(10 mg, 0.026 mmol), natrijev acetat (50 mg, 0,50 mmol), K3PO4(100 mg, 0,50 mmol), i acetonitrilu/voda (5 ml/1 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, smesa se zagreva na 100° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak
4
se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 10: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 328b (50 mg, 32%) kao smeđa čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>611,3.
Primer 328 3-[4-(hidroksimetil)-5-[5-[[5-(2-metoksietil)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 328
Smeša 328b (50 mg, 0,08 mmol, 1,0 ekv.) i KCN (8,0 mg, 0,20 mmol, 2,0 ekv.) u DMSO-u (4 mL) mešana je na 25°C tokom 0,5 h. Reakciona smeša je ugašena vodom (10 mL) i isparena pod sniženim pritiskom. Ostatak koji je dodan je ekstrahovan dihlormetanom (2 x 10 mL). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 328 (13 mg, 25%) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>613,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.62 (e, 1H), 8.48 (s, 1H), 7.92 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.31 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 5,67 (s, 1H), 4,64-4,62 (m, 1H), 4,57-4,55 (m, 1H), 4,38-4,34 (m, 1H), 4,22-4,17 (m, 3H), 4.05-4.02 (m, 2H), 3.99-3.96 (m, 1H), 3.71-3.70 (m, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.57 (t, J = 5.0 Hz, 2H) 3.37 (s, 3H), 2.99 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.56 (s, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.27 (s, 2H)., 6H).
Primer 329a 2-hloro-4-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 329a
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml opremljena kondenzatorom refluksa napunjena je 4,4-dimetil-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-9-on 107e (612 mg, 3.0 mmol), 4-bromo-2-chloronicotinaldehyde (2,0 g, 9,0 mmol), Pd2(dba)3(275 mg, 0.30 mmol), Ksantfos (347 mg, 0.60 mmol), cezij karbonata (1.95 g, 6.0 mmol) i 1,4-dioksana (30 mL). Nakon tri ciklusa vakuuma/ispiranja azotom, smesa je zagrevana na 97° C preko noći. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 2 etil-acetat/petrol etrom, dajući 329a kao žutu čvrstu supstancu (660 mg, 65%). MS-ESI:
4
[M+H]<+>344,1.
Primer 329b 4-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-2-(5-[5-(2-metoksietil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-karbaldehid 329b
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 329a (100 mg, 0,30 mmol), 3-(5-(2-metoksietil)-4.5.6.7-tetrahidropirazolo, 5-a] pirazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksagorolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 328a (257 mg, 0.60 mmol), Pd(dppf)Cl2(25 mg, 0.030 mmol), K3PO4(127 mg, 0.60 mmol), natrijev acetat (49 mg, 0.60 mmol), voda (0,50 ml) i THF (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, smesa je zagrevana na refluksu 1 sat. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 329b kao smeđu čvrstu supstancu (60 mg, 34%). MS-ESI: [M+H]<+>611,3.
Primer 329 3-[3-(hidroksimetil)-2-[5-[[5-(2-metoksietil)-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-4-piridil]-7,7-dimetil-1.2.6.8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 329
Smeša 329b (50 mg, 0.080 mmol) i NaBH4(9,1 mg, 0.24 mmol) u metanolu (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 10 min. Smesa je ugašena vodom (10 mL) i isparena pod sniženim pritiskom. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 40 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 329 (15 mg, 30%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>613,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.66 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.12 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 5,71 (s, 1H), 4,67-4,63 (m, 1H), 4,49-4,43 (m, 1H), 4,24-4,23 (m, 2H), 4,19-4,17 (m, 1H), 4.06-4.04 (m, 2H), 4.01-3.97 (m, 1H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.59-3.55 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 3,00 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,56 (s, 2H), 2,51 (s, 2H), 1,27 (s, 6H).
Primer 330a 10-[4-hloro-3-(hidroksimetil) piridin-2-il]-4,4-dimetil-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-9-on 330a
4 1
Smeša 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-karbaldehid 109a (1,2 g, 3,3 mmol), NaBH4(228 mg, 6,0 mmol) i metanol (10 mL) je mešana na 0° C 0,5 h. Zatim je reakciona smeša ugašena vodom (10 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 40 ml). Kombinovani ekstrakt dihlorometana je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 330a kao bledo žuta čvrsta supstanca (1.0 g, 84%). MS-ESI: [M+H]<+>362,9
Primer 330b (4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-il) metil-acetat 330b
Smeša 330a (1.0 g, 2.76 mmol), trietilamina (610 mg, 6.0 mmol) i acetanhidrida (5 mL) je mešana na 25° C tokom 2 h. Onda je reakcijska smeša je ugašena s vodom (10 ml) i pH je prilagođena na oko 8 sa NaHCO3(aq.). Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 40 ml). Kombinovani dihlormetanski ekstrakt se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 1: 1 etil-acetat/petrol etrom, dajući 330b kao bledo žutu čvrstu supstancu (1,0 g, 90%). MS-ESI: [M+H]<+>405,2 Primer 330c (2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-1 (8), 2 (6)-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 330c Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom napunjena je 330b (1,0 g, 2,47 mmol), 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolana) (1.87 g, 7.40 mmol), Pd(dppf)Cl2(100 mg, 0,13 mmol), X-phos (125 mg, 0,25 mmol), kalijum-acetat (500 mg, 5,0 mmol) i 1,4-dioksan (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, smesa je zagrevana na 65° C tokom 4 h. Zatim je filtrirana i filtrat je isparen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 330c (1,0 g, 98%) kao
4 2
smeđe ulje bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>415,2.
Primer 330d (3-nitro-1H-pirazol-5-il) metanol 330d
Smeša 3-nitro-1H-pirazol-5-karboksilne kiseline (4,71 g, 30 mmol), BiH3/THF (75 mL, 1 mol/L, 75 mmol) je mešana na 60° C za 2 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature i dodata je 4 M HCl (19 mL, 75 mmol). Smeša je mešana na 70°C tokom 2 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je raspodeljen između etil-acetata (50 ml) i vode/slanog rastvora (100:100). Vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (4 x 30 ml). Kombinovani organski slojevi su osušeni (Na2SO4) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije petroleum-etrom/etil-acetatom (5:1) dajući naslovno jedinjenje 330d (3,5 g, 79%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>144,2
Primer 330e 1-(5-(hidroksimetil)-3-nitro-1H-pirazol-1-il)-2-metilpropan-2-ol 330e Zapečaćena epruveta je napunjena 330d (2,145 g, 15 mmol), Cs2CO3(978 mg, 3,0 mmol) i 2,2-dimetiloksirane (15 ml). Smeša je mešana na 70°C tokom 3 h. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, reakciona smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije petroleum-etrom/etil-acetatom (5:1) dajući naslovno jedinjenje 330e (1,2 g, 38%) u obliku bele čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>216,2 Primer 330f 6,6-Dimetil-2-nitro-6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin 330f U rastvor 330e (1.1 g, 5.1 mmol) u DMF (10 mL), dodat je NaH (60% disperzija u mineralnom ulju, 246 mg, 6.14 mmol) na 0° C. Dobijena suspenzija je mešana 30 min, a zatim je dodat p-toluensulfonil hlorid (1169 mg, 6.14 mmol). Smeša je mešana na 60°C preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, doda se zasićeni rastvor amonijum-hlorida i smeša se ekstrahuje sa dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom, osušeni (Na2SO4) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa gradijentom petroleum etar/etil-acetat (9: 1 do 2: 1) da se dobije 330f (228 mg, 22%). MS-ESI: [M+H]<+>198,3
Primer 330g 6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-amin 330g Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom je prečišćena sa azotom i napunjena 330f (0.21 g, 1.25 mmol), 10% paladijuma na uglju (50% vlažan, 125 mg) i metanol (10 mL). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika i mešana na sobnoj temperaturi 2 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz jastučić CELITE<®>i filtrat je koncentriran pod sniženim pritiskom da bi se dobilo 330 g (167 mg, 93%). MS-ESI: [M+H]<+>168,1 Primer 330h 6-hloro-4-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-
4
ilamino)-2-metilpiridazin-3 (2H))-on 330h
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 330 g (250 mg, 1,5 mmol), 4-bromo-6-hloro-2-metilpiridazin-3 (2H)-ona (669 mg, 3.0 mmol), Pd2(dba)3(137 mg, 0.15 mmol), Ksantfos (173 mg, 0.30 mmol), Cs2CO3(978 mg, 3.0 mmol) i 1,4-dioksan (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ispran etil-acetatom da bi se dobio 330h kao žuta čvrsta supstanca (209 mg, 45%). MS-ESI:
[M+H]<+>310,1.
Primer 330i {4-[5-((6,6-dimetil-4H, 6H, 7H-pirazol [3,2-c] [1,4] oksazin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il} piridin-3-il} metil-acetat 330i
Boca od 100 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom, opremljena magnetnom mešalicom i refluks kondenzatorom, napunjena je 330h (133 mg, 0.43 mmol), 330c (178 mg, 0.43 mmol), natrijum-acetat (71 mg, 0.86 mmol) K3PO4(182 mg, 0.86 mmol), Pd(dppf)Cl2(35 mg, 0.043 mmol), acetonitrilu (15 ml), i vodom (0,5 mL). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 20 minuta, reakciona smeša je zagrevana na 95° C tokom 3 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 30: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 330i kao žuta čvrsta supstanca (69 mg, 25%). MS-ESI: [M+H]<+>644,3.
4 4
Primer 330 3-[4-[5-[(6,6-dimetil-4,7-dihidropirazolo [5,1-c] [1, 4] oksazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-piridazin-3-il]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-c] piridin-4-on 330
Smeša 330i (69 mg, 0.11 mmol) i litijum hidroksida (10 mg, 0.42 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 3.5 mL) i voda (1 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen hladnom vodom (50 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 330 (30 mg, 47%). MS-ESI: [M+H]<+>602,5.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.56 (s, 2H), 8.00 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.43-7.88 (m, 2H), 5.94-4.82 (m, 1H), 4.60--4.58 (m, 2H), 4.38 (d, J = 51.2 Hz, 1H), 3.89-4.83 (m, 2H), 3.89--3.87 (m, 2H), 3.02--2.93 (m, 1H), 2.79--2.75 (m, 1H), 2.59--2.54 (m, 1H), 1.37 (s, 6H), 1.28-2.00 (m, 1H).
Primer 331a 5-Bromo-1-metil-3-(3-metilizotiazol-5-ilamino) pirazin-2 (1H)-on 331a
Zapečaćena epruveta opremljena magnetnom mešalicom napunjena je s 3-metilizotiazol-5-aminom (170 mg, 1,5 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpirazin-2 (1H)-onom (400 mg, 1,5 mmol), Pd(OAC)2(84 mg, 0.375 mmol), BINAP (116 mg, 0.188 mmol), K2CO3(450 mg, 4,5 mmol) i 1,4-dioksan (4 mL). Nakon tri ciklusa vakuuma/ispiranja azota, smesa je zagrevana na 120° C u zapečaćenoj epruveti 18 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela pomoću elucije dihlormetanom/metanolom (100:1-25:1) dajući naslovno jedinjenje 331a (220 mg, 50%) u obliku žute čvrste materije. MS-ESI: [M+H]<+>301,0.
Primer 331b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{4-metil-6-[(3-metil-1,2-tiazol-5-il) amino]-5-okso-4,5-dihidropirazin-2-il} piridin-3-il) metil-acetat 331b
U posudu sa okruglim dnom od 50 ml opremljenom refluksnim kondenzatorom napunjen je 331a (150 mg, 0,50 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (400
4
mg, 1.0 mmol), Pd(dppf)Cl2(25 mg, 0.025 mmol), K3PO4(220 mg, 1,0 mmol), natrijev acetat hidrat (136 mg, 1,0 mmol), acetonitrilu (10 ml), i vodom (0,5 mL). Sistem je evakuisan i napunjen N2.Reakciona smeša je zagrevana 1 h na 100°C. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (100/1 do 25/1), dajući 331b (200 mg, 70%) kao žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>574,2.
Primer 331 3-[3-(hidroksimetil)-4-[4-metil-6-[(3-metilizotiazol-5-il) amino]-5-oksopirazin-2-il]-2-piridil]-7;, 7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 331
Smeša 331b (120 mg, 0.21 mmol) i litijum hidroksid monohidrata (88 mg, 2.1 mmol) u THF/i-propanolu (4: 2, 6 mL) i vodi (2 mL) je mešana na 30° C tokom 1 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen hladnom vodom (50 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 331 (50 mg, 45%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>532,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d3) δ 9.13 (s, 1H), 8.61 (d, J = 5 Hz, 1H), 8.37-7.91 (m, 3H), 7.99 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.74-7.23 (m, 1H), 5.32 (d, J = 52.2 Hz, 1H), 4.58--4.56 (m, 1H), 4.32--4.37 (m, 1H), 4.21--4.18 (m, 1H), 3.96--3.94 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 2.61-2.54 (m, 1H), 2.48-1.30 (m, 1H).
Primer 332a 5-Bromo-3-(5-etil-1, 3,4-tiadiazol-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 332a
Laboratorijska boca od 100 mL sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-aminom (500 mg, 3,88 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (1,55 g, 5,81 mmol), Pd2(dba)3(357 mg, 0,39 mmol), Ksantfos (451 mg, 0,78 mmol), Cs2CO3(2,5 g) 7,67 mmol) i 1,4-dioksan (40 ml). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na 100° C tokom 2 h. Smeša je ohlađena na RT i filtrirana kroz celit.
4
Filtrat se ohladi u ledeno-vodenom kupatilu i zatim ponovo filtrira da se dobije 332a (574 mg, 47%) kao bela čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>315,1
Primer 332b (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-{5-[(5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-il) amino]-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 332b
Laboratorijska boca od 100 ml s okruglim dnom (balon), opremljenU refluksnim kondenzatorom, napunjena je 332a (200 mg, 0.63 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronskom kiselinom 199e (754 mg, 1,89 mmol), PdCl2(dppf) (51) mg, 0.063 mmol), K3PO4(267 mg, 1.26 mmol), CH3COONa (103 mg, 1.26 mmol), acetonitrilom (15 ml) i vodom (0,5 mL). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 20 minuta, zagreva se na 100° C u atmosferi azota 2 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim koncentrovana. Filtrat se upari pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol, dajući 332b kao smeđu čvrstu supstancu (178 mg, 48%). MS-ESI: [M+H]<+>588,2
Primer 332 3-[4-[5-[(5-etil-1, 3,4-tiadiazol-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 332
Smeša 332b (158 mg, 0.27 mmol) i litijum hidroksida (19 mg, 0.81 mmol) u ipropanol/THF/vodi (9 mL/6 mL/6 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 0.5 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen hladnom vodom (3 X 20 ml). Kombinovani ekstrakt dihlorometana se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 332 kao bela čvrsta supstanca (80 mg, 54%). MS-ESI: [M+H]<+>546,2.<1>H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10,20 (s, 2H), 8,60 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,49−7,91 (m, 3H), 7,63 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,33 (t, J = 5,0 Hz, 3H), 4,92 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,49−4,81 (m, 1H), 4,25−4,52 (m, 1H), 3,87 (t, J = 9 Hz, 1H), 2,92−3,63 (m, 2H), 2,58−2,52 (m, 1H), 2,43−2,17 (m, 2H), 1,27−1,05 (m, 9H).
Primer 333a (2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>dodeca-1 (8), 2 (6)-dien-10-il}-4-{1-metil-5-[(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il) amino]-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il} piridin-3-il) metil-acetat 333a
4
Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 50 ml opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je (2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10-azatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6)-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil; acetat 330c (180 mg, 0.37 mmol), 5-bromo-1-metil-3-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-ilamino) piridin-2 (1H)-on 292c (125) mg, 0.43 mmol), Pd(dppf)Cl2(20 mg, 0.025 mmol), kalijum-acetat (80 mg, 0.80 mmol), K3PO4(165 mg, 0.80 mmol), i acetonitrilu/voda (10 ml/1 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, smesa je zagrevana na 100° C 1 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 dihlorometan/metanol, dajući 333a (150 mg, 71%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>574,1
Primer 333 3-[3-(hidroksimetil)-4-[1-metil-5-[(1-metiltriazol-4-il) amino]-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-c] piridin-4-on 333 Smeša 333a (150 mg, 0.26 mmol) i litijum hidroksid hidrata (84 mg, 2.0 mmol) u THF (5 mL), i-propanol (5 mL) i voda (1.5 mL) je mešana na 40° C tokom 0.5 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen hladnom vodom (50 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 10 ml). Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 333 (52 mg, 38%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>532,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm-8,47 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,78-7,77 (m, 2H), 7,42 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,34-4,79 (m, 1H), 4,97 (d, J=5,0 Hz, 1H), 4,43-4,16 (m, 1H), 3,99-4,08 (m, 1H), 3,59-3,93 (m, 1H), 2,90 (s, 3H), 2,77 (s, 2H), 2,56 (s, 1H), 1,23 (d, J=6,8 Hz, 3H).
Primer 334 3-[4-[5-[(5-ciklopropil-1, 3,4-tiadiazol-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 334
Slijedeći procedure iz primera 273, i zamenjujući 5-ciklopropil-1, 3,4-tiadiazol-2-amin za 2-amino piridin dala je 334 (8,7 mg, 22% prinos).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.48 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.10 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,44
4
(d, J = 5,1 Hz, 1H), 6,53 (s, 1H), 4,95 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,55-4,49 (m, 1H), 4,27-4,23 (m)., 3H), 3.78 (s, 2H), 3.51 (s, 3H), 3.48 (dt, J = 12.3, 5.2 Hz, 3H), 3.24 (s, 2H), 2.50 (d, J = 7.2 Hz, 2H) 2.33 (s, 2H), 1.85-1.82 (m, 3H), 1.23 (s, 6H). MS m/z 531,3 [M+1].
Primer 335a 5-Bromo-3-(6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-jedno 335a
Boca od 100 mL sa okruglim dnom opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 1,4-dioksanom (10 mL), 6,6-dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c], 4] oksazin-2-amin 330g (167 mg, 1.0 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (320 mg, 1.2 mmol), Pd2(dba)3(91 mg), 0.10 mmol), Ksantfos (116 mg, 0.20 mmol) i cezijum karbonat (652 mg, 2.0 mmol). Nakon tri ciklusa ispiranja u vakuumu/argonom, smesa je zagrevana na 100° C 3 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 100: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 335a (210 mg, 60%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>352,9
Primer 335b 3-(6,6-Dimetil-6,7-dihidro-4H-pirazol [5,1-c] [1,4] oksazin-2-ilamino)-1-metil-5-(4,4, 5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-2 (1H)-on 335b
U smesu 335a (160 mg, 0,45 mmol) i 4,4,4', 4', 5,5,5', 5'-oktametil-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolan) (572 g, 2.25 mmol) u dioksan (20 ml) je dodat PdCl2(dppf) (36,8 mg, 0.045 mmol) i kalijum-acetat (88,2 mg, 0,90 mmol). Posle tri ciklusa vakuuma/ispiranja azota, smeša je mešana na 90° C tokom 4 h u atmosferi azota. Zatim je filtriran i filtrat je isparen pod sniženim pritiskom da bi se dobio 335b, koji je korišten u sljedećem koraku bez daljeg
4
prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>401,3.
Primer 335c 4-[5-({6,6-dimetil-4H, 6H, 7H-pirazol [3,2-c] [1, 4] oksazin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il]-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-tia-10,11-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il} piridin-3-karbaldehid 335c Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je s 335b (240 mg, 0.60 mmol), 4-hloro-2-{4,4-dimetil-9-okso-7-thia-10,11-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6>] dodeca-1 (8), 2 (6), 11-trien-10-il} piridin-3-karbaldehid 282i (107,7 mg, 0,30 mmol), Pd(dppf)Cl2(24,5 mg, 0.030 mmol), K3PO4(127.2 mg, 0.60 mmol), natrijev acetat (49,2 mg, 0,60 mmol), voda (0,5 mL) i acetonitrilu (10 ml). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, smesa je zagrevana na 95° C 1 sat. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 30: 1 dihlorometan/metanol, dajući 335c kao smeđu čvrstu supstancu (60 mg, 22%, dva koraka). MS-ESI: [M+H]<+>598,2.
Primer 335 3-[4-[5-[(6,6-dimetil-4,7-dihidropirazolo [5,1-c] [1,4] oksazin-2-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7,7-dimetil-6,8-dihidrociklopenta [3,4] tieno [1,3-d] piridazin-4-on 335
Smeša 335c (50 mg, 0.080 mmol) i NaBH4(9,1 mg, 0.24 mmol) u metanolu (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 10 min. Smesa je ugašena vodom (10 mL) i isparena pod sniženim pritiskom. Smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 40 ml). Kombinovani ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 335 (15 mg, 30%) kao žuta čvrsta supstanca. MS-ESI: [M+H]<+>600,2.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.56 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.07 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 5,94 (s, 1H), 4,85-4,83 (m, 1H), 4,72 (s, 2H), 4,38-4,37 (m, 2H), 3,79-3,78 (m, 2H), 3,3 (s, 3H), 2,92-2,91 (m, 2H), 2,81 (s, 2H), 1,28 (s, 6H), 1,25 (s, 2H).6H).
Primer 336a 5-(metoksimetil)-1-metil-3-nitro-1H-pirazol 336a
U posudu od 250 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjen je 5-(bromometil)-1-metil-3-nitro-1H-pirazol (8,8 g, 40 mmol), natrijum-metoksid (4.3 g, 80 mmol) i metanola (50 mL). Reakciona smeša je zagrevana 2 h na 80°C. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je raspodeljen između etilacetata i vode. Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 X 50 ml). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (30 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum-sulfata.
4
Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom kako bi se dobilo 336a kao žuto ulje (6.1 g, 90%). MS-ESI: [M+H]<+>172.
Primer 336b 5-(metoksimetil)-1-metil-1H-pirazol-3-amin 336b
Posuda od 250 ml sa jednim vratom sa okruglim dnom i magnetnom mešalicom napunjena je 336a (4,0 g, 23 mmol), Pd/C (1,0 g) i etanolom (100 ml). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 15 sat. Zatim je filtrirana i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 336b kao žuto ulje (3.3 g, 99%), koje je korišteno u sljedećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>142.
Primer 336c 5-Bromo-3-(5-(metoksimetil)-1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 336c
Prateći proceduru u Primeru 335a, i počevši od 335b (1,7 g, 12 mmol) i 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (3,2 g, 12 mmol) dobija se 336c kao žuta čvrsta supstanca (2.8 g, 71%). MS-ESI: [M+H]<+>327.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d3) δ 7,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,38 (s, 1H), 6,88-7,52 (m, 3H), 5,86 (s, 1H), 4,41 (s, 2H), 3,82 (d, J = 4,6 Hz, 3H), 3,36 (s, 3H).
Primer 336d 3-(5-(metoksimetil)-1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1, 2,3-dioksaborolan-2)-il) piridin-2 (1H)-on 336d
Boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 336c (600 mg, 1.83 mmol), 4,4,4',4', 5,5,5',5'-okametil-2,2'-bi (1,3,2-dioksaborolan) (1,39 g, 5,49 mmol), Pd2(dba)3(183 mg, 0,20 mmol), X-fos (190 mg, 0,40 mmol)), kalijum acetat (392 mg, 4,0 mmol) i 1,4-dioksan (30 ml). Nakon tri ciklusa vakuuma/ispiranja azota, smesa je zagrevana na 85° C 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je uklonjen pod sniženim pritiskom, dajući 336d u obliku crnog ulja (400 mg, 75%) koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>293,1
Primer 336e 4-(5-(5-(metoksimetil)-1-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-(1)-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 336e
4 1
Laboratorijska boca s okruglim dnom od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 336d (368 mg, 0,98 mmol), 4-hloro-2-(1-okso-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-2 (1H)-il) nikotinaldehid 139a (270 mg, 0.82 mmol), PdCl2(dppf) (60 mg, 0.082 mmol), K3PO4(348 mg, 1.64 mmol)), natrijum-acetat (135 mg, 1.65 mmol), acetonitril (15 mL) i voda (0.5 mL). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan na 95° C tokom 3 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 20: 1 etil-acetat/metanol da bi se dobilo 336e (100 mg, 22%). MS-ESI: [M+H]<+>542,2
Primer 336 2-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-(metoksimetil)-1-metil-pirazol-3-il] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-3,4,6,7,8,9-heksahidropirido [3,4-b] indolizin-1-on 336 U rastvor 336e (100 mg, 0,18 mmol) u metanolu (10 mL) dodat je NaBH4 (41 mg, 1,08 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h i LCMS je pokazala da je početni materijal nestao. Reakcija je ugašena sa 1,0 M rastvorom HCl (10 mL) i isparena pod sniženim pritiskom sve dok se destiluje većina metanola. Ostatak je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 15 ml). Kombinovani organski sloj je osušen iznad Na2SO4i uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC, dajući 336 kao belu čvrstu supstancu (41 mg, 41%). MS-ESI: [M+H]<+>544,2.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.41 (e, 1H), 7,33 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,33 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 4,99-4,96 (m, 1H), 4,67-4,64 (m, 1H), 4,42-4,41 (m, 3H), 4,36-4,26 (m, 1H), 3,98-3,91 (m, 1H), 3,88-3,82 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,37 (s, 3H), 3.06-2.91 (m, 2H), 2.87-2.79 (m, 2H), 2.08-2.01 (m, 2H), 1.91-1.86 (m, 2H).
Primer 337a 1,2-dimetil-4-nitro-1H-imidazol 337a
4 2
Na mešavinu od 2-metil-4-nitro-1H-imidazol (10,0 g, 78,7 mmol) i K2CO3(21,7 g, 160 mmol) u DMF (80 mL) je dodat CH3I (13.4 g, 94 mmol) kap po kap uz mešanje na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na 90°C tokom 2 h. 200) dodat u reakciju. Dobijena suspenzija je filtrirana, isprana vodom i osušena in vacuo da bi se dobilo 337a kao bela čvrsta supstanca (5.0 g, 45%). MS-ESI: [M+H]<+>142,1.
Primer 337b terc-butil 1,2-dimetil-1H-imidazol-4-ilkarbamat 337b Laboratorijska boca sa okruglim dnom od 100 ml je prečišćena azotom i napunjena 337a (2,0 g, 14,1 mmol), 10% paladijuma na ugljenu (50% vlažan, 400 mg), (Boc)2O (9,22 g 43.3 mmol), trietilamin (2.85 g, 28.2 mmol) i etanol (20 mL). Smeša je evakuisana, napunjena gasom vodonika, i mešana na sobnoj temperaturi 5 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj CELITE<®>i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 40: 1 dihlorometanom/metanolom, dajući 337b (1.2 g, 40%) kao smeđu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>212,1
Primer 337c 1,2-dimetil-1H-imidazol-4-amin hidrohlorid 337c
U rastvor 337b (1.2 g, 5.68 mmol) u dihlorometanu (5.0 mL) doda se 3M HCl u dioksanu (5.0 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sati, a zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je ispran etil-acetatom da bi se dobio 337c (450 mg, 55%) kao bledo žuta čvrsta supstanca, koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>112,2
4
Primer 337d 5-Bromo-3-(1, 2-dimetil-1H-imidazol-4-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-on 337d
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 337c (400 mg, 3.60 mmol), 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-on (960) mg, 3.60 mmol), Ksantfos (240 mg, 0.40 mmol), tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (0) (360 mg, 0.40 mmol), Cs2CO3(4,69 g, 14,4 mmol) i 1,4-dioksan (20 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, smesa je zagrevana na 90° C tijekom 2,5 h. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa dihlorometanom/metanolom (30: 1 do 20: 1) da se dobije 337d kao bledo žuta čvrsta supstanca (350 mg, 33%). MS-ESI: [M+H]<+>297,1.
Primer 337e (4-{5-[(1,2-dimetil-1H-imidazol-4-il) amino]-1-metil-6-okso-1, 6-dihidropiridin-3-il}-2-{4, 4-dimetil-9-okso-1,10-diazatricikl.o [6.4.0.0<2,6]>-dodeca-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il) metil-acetat 337E
Laboratorijska boca od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 337d (20 mg, 0,67 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (270 mg, 0.67 mmol), Pd(dppf)Cl2(42 mg, 0.050 mmol), natrijev acetat (82 mg, 1,0 mmol), K3PO4hidrat (266 mg, 1,0 mmol), voda (6 kapi) i acetonitrilu (6 ml). Nakon tri ciklusa vakuuma/ispiranja azota, smesa se zagreva na 95° C 2 h. Zatim je filtrirana, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni eluiranjem sa 25: 1 dihlorometan/metanolom da se dobije 337e (200 mg, 50%) kao smeđa čvrsta supstanca. LCMS(ESI): [M+H]<+>570,3 Primer 337 3-[4-[5-[(1,2-dimetilimidazol-4-il) amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-3-(hidroksimetil)-2-piridil]-7, 7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 337
Smeša od 337e (100 mg, 0.19 mmol) i litijum hidroksida (34 mg, 1.4 mmol) u ipropanol/THF (1: 1, 4 mL) i voda (1 mL) je mešana na 40° C tokom 0.5 h. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen hladnom vodom (50 ml). Zatim je ekstrahovana etil-acetatom (2 x 20 ml). Kombinovani etil-acetatni ekstrakt se koncentriše pod sniženim pritiskom i ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, dajući 337 (35 mg, 40%) kao belu čvrstu supstancu. LCMS(ESI): [M+H]<+>528,3.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.45 (s, 1H), 8.07-7.36 (m, 2H), 7.28--7.27 (m, 2H), 7.25-7.67 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6.84-6.79 (m, 3H), 4.62--4.40 (m, 1H), 4.15--4.14 (m, 2H), 3.84--3.81 (m, 1H), 3.67-3.52 (m,
4 4
1H), 2.57--2.56 (m, 1H), 2.51-2.32 (m, 1H), 1.27 (s, 3H).
Primer 338a 3-(2-Nitro-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-il) propanonitril 338a
Nakon postupka Primer 296D, a od 1-(2-bromoetil)-5-(chloromethyl)-3-nitro-1H-pirazol 296D (268 mg, 1,00 mmol) i 3-aminopropanenitrile (210 mg, 3.00 mmol) daje 338a kao belu čvrstu supstancu (180 mg, 81%). MS-ESI: [M+H]<+>222,1
Primer 338b 3-(2-Amino-6,7-dihidropirazolo [1,5-a] pirazin-5 (4H)-il) propanonitril 338b
Prateći proceduru iz Primera 296e, počevši od 338a (180 mg, 0.81 mmol), dobija se 338b kao žuta čvrsta supstanca (120 mg, 77%). MS-ESI: [M+H]<+>192,2
Primer 338c 3-(2-(5-Bromo-1-metil-2-okso-1, 2-dihidropiridin-3-ilamino)-6,7-dihidropirazolo [1, 5-a] pirazin-5 (4H)-il) propanenitril 338c
Prateći proceduru iz Primera 309c, i počevši od 338b (120 mg, 0.63 mmol) i 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (169 mg, 0.63 mmol) dobija se 338c kao žuta čvrsta supstanca (150). mg, 63%). MS-ESI: [M+H]<+>377,2
Primer 338d [4-(5-{[5-(2-cijanoetil)-4H, 5H, 6H, 7H-pirazol [1,5-a] pirazin-2-il]
4
amino}-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il)-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-3-il] metil-acetat 338d
Prateći proceduru iz Primera 309d i počevši sa 338c (150 mg, 0.45 mmol) i {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4. 0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} boronska kiselina 199e (358 mg, 0.90 mmol) daje 338d kao žutu čvrstu supstancu (150 mg, 52%). MS-ESI: [M+H]<+>650,3
Primer 338 3-[2-[[5-[2-(7,7-dimetil-4-okso-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-3-il)-3-(hidroksimetil)-4-piridil]-1-metil-2-okso-3-piridil] amino]-6,7-dihidro-4H-pirazol [1,5-a] pirazin-5 il] propanenitril 338
Prateći proceduru iz Primera 309, i počevši od 338e (150 mg, 0.23 mmol), dobije se 338 kao bela čvrsta supstanca (55 mg, 40%). MS-ESI: [M+H]<+>608,3.<1>H NMR (500 MHz, CdCl3) δ 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7.42 (e, 1H), 7,35 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 5,74 (s, 1H), 5,05 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,66-4,64 (m, 1H). 4,52-4,50 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 4,17-4,16 (m, 2H), 4,09-4,07 (m, 2H), 3,88-3,84 (m, 1H), 3,75 (s, 2H).2H), 3,71 (s, 3H), 3,05-3,03 (m, 2H), 2,93-2,90 (m, 2H), 2,63-2,58 (m, 4H), 2,53 (s, 2H), 1,29 (s, 6H).
Primer 339a terc-Butil 4-(6-Nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 339a
U rastvor 5-bromo-2-nitropiridin (30.0 g, 148 mmol) u DMSO (1 L) su dodati K2CO3(40,0 g, 296 mmol) i tert-butyl piperazin-1-karboksilat (28.0 g, 148 mmol). Smeša je mešana na 65°C preko noći. Posle hlađenja, smeša je sipana u ledenu vodu (2). Dobijeni precipitat se sakuplja filtracijom i suši pod vakuumom. Zatim je dalje prečišćena hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 20: 1 petroleum eter/etil-acetatom i zatim sa dihlorometanom da bi se dobilo 339a kao žuta čvrsta supstanca (17.0 g, 37%). MS-ESI: [M+H]<+>309.
Primer 339b terc-butil 4-(6-aminopiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 339b Kolona sa okruglim dnom od 500 mL je prečišćena sa azotom i napunjena 339a (3.1 g, 10 mmol), 10% paladijuma na uglju (50% vlažan, 1.0 g) i etanol (100 mL). Evakuisana je, napunjena vodonikom preko balona i mešana na sobnoj temperaturi 16 h. Vodonik je zatim evakuiran i u laboratorijsku bocu je napunjen azot. Katalizator je uklonjen filtracijom kroz sloj CELITE<®>i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 339b (2.7 g, 97%). MS-ESI: [M+H]<+>279
Primer 339c terc-butil 4-(6-(5-bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 339c
Laboratorijska boca od 100 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljena magnetnom mešalicom i refluksnim kondenzatorom napunjena je 339b (1,3 g, 4,7 mmol),
4
3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (1,24 g, 4,7 mmol), cezijum karbonata (3,8 g, 12 mmol) i 1,4-dioksana (50 ml). Nakon propuštanja azota kroz dobijenu smešu tokom 30 minuta, dodati su Ksantfos (272 mg, 0.47 mmol) i tris (dibenzilidenaceton) dipaladijum (0) (430 mg, 0.47 mmol). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/argonom u trajanju od tri ciklusa i zagrevan pri refluksu tokom 3 h. Nakon ovog vremena reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je podeljen između etil-acetata (100 mL) i vode (100 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan etil-acetatom (2 X 50 ml). Odvojeni organski sloj je ispran zasićenim rastvorom soli (30 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum-sulfata. Sredstvo za sušenje je uklonjeno filtracijom, a filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela eluiranjem sa 50: 1 dihlorometan/metanol da bi se dobilo 339c (1,3 g, 59%). MS-ESI: [M+H]<+>464.
Primer 339d terc-butil 4-{6-[(5-{3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il}-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-il) amino] piridin-3-il} piperazin-1-karboksilat 339d
U posudu od 50 ml sa jednim vratom i okruglim dnom opremljenom magnetnom mešalicom i kondenzatorom za refluks napunjen je (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) piridin-3-il) metil-acetat 199e (287.4 mg, 0.60 mmol), 339c (145 mg, 0.30 mmol), Pd(dppf)Cl2(24,5 mg, 0.030 mmol), K3PO4(127.2 mg, 0.60 mmol), natrijev acetat (49,2 mg,
4
0.60 mmol), voda (0.50 mL) i acetonitril (10 mL). Nakon tri ciklusa ispiranja vakuumom/azotom, smesa je zagrevana na 95° C 1 sat. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, a dobiveni ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silikagelu eluiranjem sa etil-acetatom da bi se dobio 339d kao žuta čvrsta supstanca (140 mg, 61%). MS-ESI: [M+H]<+>737,3.
Primer 339c (2-{4,4-dimetil-9-okso-1, 10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-(1-metil-6-okso-5-{[5-(piperazin-1-il) piridin-2-il] amino}-1,6-dihidropiridin-3-il) piridin-3-il) metil-acetat 339e
Smeša jedinjenja 339d (130 mg, 0,18 mmol) i TFA /DCM = 2/1 (4,0 mL) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 4 minuta. Zatim se koncentriše pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi 339e (100 mg, 87%), koji je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>637,3.
Primer 339 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-[4-(2-metoksietil) piperazin-1-il]-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 339
Smeša 339e (100 mg, 0,18 mmol), 1-bromo-2-methoxyethane (24.8 mg, 0.18 mmol), i K2CO3(49,7 mg, 0,36 mmol) u acetonitrilu (5.0 ml) u zatvorenoj je mešana na 85° C preko noći. Smeša je ohlađena do sobne temperature, a zatim koncentrovana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodata voda i rezultirajuća smeša je ekstrahovana sa dihlorometanom tri puta. Kombinovani organski sloj se koncentriše pod sniženim pritiskom i dobijeni ostatak se prečisti preparativnom HPLC reverzne faze, čime se dobije 339 kao žuta čvrsta supstanca (31,1 mg, 30%). MS-ESI: [M+H]<+>653,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO) 8 8,61 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,84 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,38-7,34 (m, 2H), 7,23 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 4,97-4,95 (m, 1H), 4,45-4,40 (m, 2H), 4,23-4,19 (m, 3H), 3,85-3,83 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,47-3,44 (m, 2H), 3,24 (s, 3H), 3.04-3.02 (m, 4H), 2.59-2.53 (m, preklapanje, 8H), 2.43 (s, 2H), 1.23 (s, 6H).
Primer 340a (3 S)-tert-Butyl 3-metil-4-(6-nitropiridin-3-il) piperazin-1-karboksilat 340a
Nakon postupka Primer 323a, i počinju sa (3 S)-tert-butyl 3-metilpiperazina-1-karboksilat (10,0 g, 50 mmol) i 5-bromo-2-nitropiridine (10,5 g, 50 mmol) pruža 340a kao žuta čvrsta supstanca (8,05 g, 50%). MS-ESI: [M+H]<+>323
Primer 340b (3 S)-tert-Butyl 4-(6-Aminopiridin-3-il)-3-metilpiperazina-1-karboksilat 340b
4
Prateći proceduru iz Primera 323b, i počevši od 340a (5.8 g, 18 mmol) dobijen je 340b kao smeđa čvrsta supstanca (4.9 g, 93%). MS-ESI: [M+H]<+>293
Primer 340c (3 S)-tert-Butyl 4-(6-(5-Bromo-1-metil-2-okso-1,2-dihidropiridin-3-ilamino) piridin-3-il)-3-metilpiperazina-1-karboksilat 340c
Prateći procedure iz Primera 323c, i počevši od 340b (4.0 g, 13.7 mmol) i 3,5-dibromo-1-metilpiridin-2 (1H)-ona (5.5 g, 20.6 mmol) dobijen je 340c kao žuta čvrsta supstanca (5.4 g, 83%). MS-ESI: [M+H]<+>478
Primer 340D (3 S)-5-Bromo-1-metil-3-(5-(2-methylpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino) piridin-2 (1H)-on 340D
Prateći proceduru iz Primera 271c i počevši sa 340c (3.1 g, 6.5 mmol) dobije se 340d kao žuta čvrsta supstanca (2.3 g, 94%). MS-ESI: [M+H]<+>378.
Primer 340e (S)-5-Bromo-3-(5-(4-(2-metoksietil)-2-metilpiperazin-1-il) piridin-2-ilamino)-1-metilpiridin-2 (1H)-ona 340e
Smeša 340d (500 mg, 1.32 mmol), 1-bromo-2-metoksietana (239.1 mg, 1.72 mmol), K2CO3(364 mg, 2.64 mmol) i acetonitrilu (6 ml) u zapečaćenoj epruveti je zagrevana na 80° C tokom 12 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Ohlađena je do sobne temperature i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u vodi i ekstrahovan etil-acetatom (30 ml). Vodena faza je ekstrahovana etil-acetatom (3 x 30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani
4
slanim rastvorom, osušeni (Na2SO4) i koncentrovani pod sniženim pritiskom, dajući sirovo naslovno jedinjenje 336d (600mg) kao svetložuto ulje koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS-ESI: [M+H]<+>436,1
Primer 340f (2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il}-4-[5-({5-[(2 S)-4-(2-methoxyethyl)-2-methylpiperazin-1-il] piridin-2-il} amino)-1-metil-6-okso-1,6-dihidropiridin-3-il] piridin-3-il) metil-acetat 340f
Laboratorijska boca od 50 ml opremljena refluksnim kondenzatorom napunjena je 340e (180 mg, 0.412 mmol), {3-[(acetoksi) metil]-2-{4,4-dimetil-9-okso-1,10-diazatriciklo [6.4.0.0,<2,6>] dodeka-2 (6), 7-dien-10-il} piridin-4-il} borna kiselina 199e (327,3 mg, 0,824 mmol), Pd(dppf)Cl2(16,8) mg, 0.0206 mmol), K3PO4(174,7 mg, 0.824 mmol), natrijev acetat (67,6 mg, 0.824 mmol), acetonitrilu (10 ml), i voda (3 kapi). Sistem je podvrgnut ispiranju u vakuumu/azotom u tri ciklusa i zagrevan na 100° C u zaštitnoj atmosferi N2tokom 1 h. Analiza reakcijske smese pomoću LCMS pokazala je potpunu konverziju u željeni proizvod. Zatim je ohlađena na sobnu temperaturu i filtrirana. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti hromatografijom na silika gel koloni uz eluiranje sa 20: 1 dihlorometan/metanol, dajući 340f kao žuto ulje (190 mg, 65%). MS-ESI: [M+H]<+>709,4
Primer 340 3-[3-(hidroksimetil)-4-[5-[[5-[(2S)-4-(2-metoksietil)-2-metil-piperazin-1-il]-2-piridil] amino]-1-metil-6-okso-3-piridil]-2-piridil]-7,7-dimetil-1,2,6,8-tetrahidrociklopenta [3,4] pirolo [3,5-b] pirazin-4-on 340
U rastvor 340f (170 mg, 0,24 mmol) u THF-u (6 mL), i-propanolu (6 mL) i vodi (6 mL) dodat je LiOH (57,6 mg, 2,4 mmol). Nakon 1 h mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu (20 mL), i vodi (10 mL). Vodena faza je ekstrahovana dihlormetanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4,koncentriran pod sniženim pritiskom, i prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC dajući 340 (48,5 mg, 30%) kao belu čvrstu supstancu. MS-ESI: [M+H]<+>667,3.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.62 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.49 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.82 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,37-7,34 (m, 2H), 7,24 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,97-4,95 (m, 1H), 4,47-4,41 (m, 2H), 4,25-4,19 (m, 3H), 3,85-3,83 (m, 1H), 3,63-3,62 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,47-3.45 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.06-3.04 (m, 1H), 2.93-2.89 (m, 1H), 2.70-2.68 (m, 1H), 2.62-2.32 (m, preklapanje, 9H) 1,22 (s, 6H), 0,91 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Primer 901 Biohemijski Btk test
4
Opšta procedura za standardnu biohemijsku analizu Btk kinaze koja se može koristiti za testiranje jedinjenja formule I jeste sledeća. Pripremljen je Master Mix bez Btk enzima koji sadrži 1X pufera za ćelijsku signalizaciju kinaze (25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 5 mM betaglicerofosfat, 2 mM ditiotreitol, 0.1 m Na3VO4, 10 mM MgCl2), 0.5 µM Promega PTK biotiniliranog peptidnog supstrata 2 i 0,01% BSA. Pripremljen je Master Mix s Btk enzimom koji sadrži 1X pufera za ćelijsku signalizaciju kinaze, 0,5 µM PTK biotiniliranog peptidnog supstrata 2, 0,01% BSA i 100 ng/bunarčiću (0,06 mU/bunarčiću) Btk enzima. Btk enzim se priprema na sledeći način: humani divlji tip Btk pune dužine (pristupni broj NM-000061) sa C-terminalnim V5 i 6x His tag supkloniran je u pFastBac vektoru za izradu bakulovirusa koji nosi ovaj epitop označen enzimom Btk. Generisanje bakulovirusa se vrši na osnovu instrukcija kompanije Invitrogen koje su detaljno opisane u objavljenom protokolu „Bac-to-Bac Baculovirus Expression Systems” (kat. br. 10359-016 i 10608-016). Virus Passage 3 se koristi za inficiranje Sf9-ćelija da se prekomerno eksprimira rekombinantni Btk protein. Btk protein se zatim pročišćava do homogenosti koristeći Ni-NTA kolonu. Čistoća finalnog preparata proteina veća je od 95%, na osnovu osetljivog Sypro-Ruby kontrastiranja. Rastvor od 200 µM ATP priprema se u vodi i podešavai na pH 7,4 pomoću 1N NaOH. Količina od 1,25 µL jedinjenja u 5% DMSO prenosi se na polovinu Costar polistirenske ploče za uzorkovanje s 96 bunarčića. Jedinjenja se testiraju pojedinačno i pomoću krivulje odgovora na dozu sa 11 tačaka (početna koncentracija je 10 µM; rastvor 1:2). Količina od 18,75 µL Master Mix bez enzima (kao negativna kontrola) i Master Mix sa enzimom prebacuje se u odgovarajuće bunarčiće na polovini Costar polistirenske ploče za uzorkovanje s 96 bunarčića.
5 µL od 200 µM ATP dodaje se toj smeši na polovini Costar polistirenske ploče s 96 bunarčića za dobijanje konačne koncentracije ATP od 40 µM. Reakciona smeša je ostavljena da se inkubira 1 sat na sobnoj temperaturi. Reakcija se zaustavlja pomoću Perkin Elmer 1X puferom za detekciju koji sadrži 30 mM EDTA, 20 nM SA-APC i 1 nM PT66 Ab. Ploča se očitava putem vremenski razložene fluorescencije sa Perkin Elmer Envision pomoću ekscitacionog filtera 330 nm, emisionog filtera 665 nm i drugog emisionog filtera 615 nm. IC50vrijednosti su naknadno izračunate. Alternativno, LanthaScreen test se može koristiti za procenu Btk aktivnosti putem kvantifikacije fosforilovanog peptidnog proizvoda. FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) koji se pojavljuje između fluoresceina na peptidnom proizvodu i terbijuma na detektujućem antitelu smanjuje se dodavanjem inhibitora Btk koji smanjuju fosforilaciju peptida. U konačnoj reakciji, količina od 25 uL, Btk (h) (0,1 ng/25 ul reakcija) inkubira se sa 50 mM Hepes pH 7,5, 10 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 2 mM DTT, 0,2 mM NaVO4, 0,01% BSA, i 0,4 uM fluorescein poli-GAT. Reakcija se inicira
4 1
dodavanjem ATP do 25 uM (Km ATP). Nakon inkubacije od 60 minuta na sobnoj temperaturi, reakcija se zaustavlja dodavanjem konačne koncentracije 2 nM Tb-PY20 antitela za detekciju u 60 mM EDTA tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Detekcija je određena na Perkin Elmer Envision pomoću 340 nM ekscitacije i emisije na 495 nm i 520 nm. Primeri Btk inhibicije IC50 vrijednosti su u Tabelama 1, 2 i 3.
Primer 902 Btk analiza Ramosovih ćelija
Druga opšta procedura za standardnu ćelijsku analizu Btk kinaze koja se može koristiti za testiranje jedinjenja formule I jeste sledeća. Ramosove ćelije se inkubiraju na gustini od 0.5 x 10<7>ćelija/ml u prisustvu ispitnog jedinjenja tokom 1 h na 37° C. Ćelije se zatim stimulišu inkubiranjem pomoću 10 µg/ml anti-humanog IgM F(ab)2tokom 5 minuta na 37° C. Ćelije su peletirane, lizirane, a proteinski test je izveden na prečišćenom lizatu. Jednake količine proteina za svaki uzorak podležu SDS-PAGE i testu Western blotingu sa anti-fosfoBtk (Tyr223) antitelom (Cell Signaling Technology # 3531; Epitomies, cat. # 2207-1) ili fosfoBtk (Tyr551) antitelom (BD Transduction Labs # 558034) za procenu Btk autofosforilacije ili anti-Btk antitela (BD Transduction Labs # 611116) za kontrolu ukupnih količina Btk u svakom lizatu.
Primer 903 Analiza B-ćelijske proliferacije
Opšta procedura za standardnu analizu ćelijske proliferacije B-ćelija koja se može koristiti za testiranje jedinjenja formule I jeste sledeća. B-ćelije su pročišćene iz slezine miševa Balb/c starih 8–16 nedelja, koristeći komplet za izolaciju B-ćelija (Miltenyi Biotech, Cat # 130-090-862). Ispitivana jedinjenja su razblažena u 0,25% DMSO i inkubirana sa 2,5 x 10<5>pročišćenih mišjih slezinskih B-ćelija 30 minuta pre dodavanja 10 µg/ml anti-mišjeg IgM antitela (Southern Biotechnology Associates Cat # 1022-01) u konačnu zapreminu 100 µl. Nakon 24 h inkubacije, 1 μCi<3>H-timidina se dodaje i ploče se inkubiraju dodatnih 36 h pre žetve, po protokolu proizvođača za SPA<[3>H] ispitni sistem unosa timidina (Amersham Biosciences # RPNQ 0130). Fluorescencija bazirana na SPA-zrnu broji se u beta brojaču Microbeta (Wallace Triplex 1450, Perkin Elmer).
Primer 904 Analiza T-ćelijske proliferacije
Opšta procedura za standardnu analizu ćelijske proliferacije T-ćelija koja se može koristiti za testiranje jedinjenja formule I jeste sledeća. T-ćelije su prečišćene iz slezine miševa Balb/c starih od 8 do 16 nedelja, koristeći komplet za izolaciju Pan T-ćelija (Miltenyi Biotech, Cat # 130-090-861). Ispitivana jedinjenja su razblažena u 0,25% DMSO i inkubirana sa 2,5 x 10<5>prečišćenih mišjih T-ćelija slezine u konačnoj zapremini od 100 µl u ravnim pločama sa bistrim dnom, prethodno obloženim 90 minuta na 37° C 10 µg/ml svakim od anti-
4 2
CD3 (BD # 553057) i anti-CD28 (BD # 553294) antitela. Nakon 24 h inkubacije, 1 μCi<3>H-timidina se dodaje i ploče se inkubiraju dodatnih 36 h pre žetve, po protokolu proizvođača za SPA[3H] ispitni sistem unosa timidina (Amersham Biosciences # RPNQ 0130). Fluorescencija bazirana na SPA-zrnu broji se u beta brojaču Microbeta (Wallace Triplex 1450, Perkin Elmer).
Primer 905 Test inhibicije CD86
Opšta procedura za standardnu analizu za inhibiciju aktivnosti B-ćelija koja se može koristiti za testiranje jedinjenja formule I jeste sledeća. Svi mišji splenociti prečišćeni su od slezine miševa Balb/c starih 8–16 nedelja lizom crvenih krvnih ćelija (BD Pharmingen # 555899). Ispitna jedinjenja razređena su na 0,5% DMSO i inkubirana sa 1,25 x 10<6>splenocita u završnoj količini od 200 μl u ravnim pločama s prozirnim dnom (Falcon 353072) za 60 min na 37° C. Ćelije su zatim stimulirane dodatkom 15 g/ml IgM (Jackson ImmunoResearch 115-006-020) i inkubirane tokom 24 h na 37° C, 5% CO2.Nakon 24-časovne inkubacije, ćelije se prebacuju na ploče sa 96 konusnih udubljenja s prozirnim dnom i peletiraju se centrifugiranjem na 1200 x g x 5 min. Ćelije su prethodno blokirane pomoću CD16/CD32 (BD Pharmingen # 553142), nakon čega je sledilo trostruko kontrastiranje pomoću CD19-FITC (BD Pharmingen # 553785), CD86-PE (BD Pharmingen # 553692) i 7AAD (BD Pharmingen # 51-68981E). Ćelije se sortiraju na BD FACSCalibur i otvaraju se na CD19<+>/7AAD<−>populaciji. Nivoi površinske ekspresije CD86 na ograničenoj populaciji mere se u odnosu na koncentraciju ispitnog jedinjenja.
Primer 906 Analiza preživljavanja B-ALL ćelija
Sledi postupak za standardnu studiju preživljavanja ćelija B-ALL (akutna limfoblastična leukemija) pomoću XTT očitavanja za merenje broja živih ćelija. Ovaj test se može koristiti za testiranje jedinjenja formule I za njihovu sposobnost da inhibiraju preživljavanje B-ALL ćelija u kulturi. Jedna linija humane B-ćelije akutne limfoblastične leukemije koja se može koristiti jeste SUP-B15, humana linija pre-B-ćelija ALL koja je dostupna iz ATCC.
SUP-B15 pre-B-ALL ćelije su postavljene u više mikrotitarskih ploča sa 96 ležišta u 100 µl Iscove medija 20% FBS u koncentraciji od 5 x<105>ćelija/ml. Zatim se dodaju ispitivana jedinjenja sa konačnom koncentracijom od 0,4% DMSO. Ćelije se inkubiraju na 37° C sa 5% CO2do 3 dana. Nakon 3 dana, ćelije se podele u odnosu 1:3 na sveže ploče sa 96 bunarčića koje sadrže ispitivano jedinjenje i dozvoljavaju rast do dodatna 3 dana. Nakon svakog 24-časovnog perioda, 50 ul XTT rastvora se dodaje u jednu od replikatnih ploča sa 96 bunarčića, a očitanja apsorbancije uzimaju se 2, 4 i 20. sata, u skladu s uputstvima
4
proizvođača. Zatim se uzima očitavanje uzeto pomoću OD samo za ćelije tretirane DMSOunutar linearnog opsega testa (0,5–1,5) i procenjuje se procenat vitalnih ćelija u bunarčićima koje su tretirane jedinjenjem u odnosu na one tretirane samo DMSO.
Primer 907 Analiza pune krvi CD69
Ljudska krv se dobija od zdravih dobrovoljaca, sa sledećim ograničenjima: 1 nedelja bez droge, nepušači. Krv (približno 20 ml za testiranje 8 jedinjenja) sakupljena je venepunkcijom u Vacutainer<®>(Becton, Dickinson i Co.) epruvete sa natrijum-heparinom.
Rastvori jedinjenja formule I na 10 mM u DMSO razblaženi su 1:10 u 100% DMSO, zatim su razblaženi trostrukim serijskim rastvorima u 100% DMSO za krivulju odgovora na dozu od deset tačaka. Jedinjenja su dalje razblažena 1:10 u PBS, a zatim je alikvot od 5,5 µl svakog jedinjenja dodatt u duplikat na ploču sa 96 bunarčića od 2 ml; 5.5 µl 10% DMSO u PBS se dodaje kao kontrola i bez stimulusa. U svaki bunarčić se dodaje ljudska puna krv-HWB (100 µl). Posle mešanja, ploče se inkubiraju na 37° C, 5% CO2, 100% vlažnosti tokom 30 minuta. Kozji F (ab') 2 anti-humani IgM (10 µl 500 µg/ml rastvor, 50 µg/ml konačni) dodaje se u svaki bunarčić (osim u bunarčiće bez stimulusa) uz mešanje i ploče se inkubiraju dodatnih 20 sati. Na kraju 20-časovne inkubacije, uzorci se inkubiraju s fluorescentno obeleženim antitelima 30 minuta, na 37° C, 5% CO2, 100% vlage. Uključite indukovanu kontrolu, nekontrastirane i pojedinačne kontrastne mrlje za podešavanje kompenzacije i početne postavke napona. Uzorci se zatim liziraju sa PharM Lyse ™ (BD Biosciences Pharmingen), prema uputstvima proizvođača. Uzorci se zatim prenose na ploču sa 96 bunarčića koja je pogodna za rad na sistemu BD Biosciences HTS sa 96 bunarčića na mašini LSRII. Dobijeni podaci i srednje vrednosti intenziteta fluorescencije dobijene su pomoću BD Biosciences DIVA softvera. Rezultati se inicijalno analiziraju pomoću FACS softvera za analizu (Flow Jo). Koncentracije inhibitora (IC50, IC70, IC90, itd.) Za ispitna jedinjenja su definisane kao koncentracija koja se smanjuje, na primer za 50%, procenat pozitivnih CD69 ćelija koje su takođe CD20 pozitivno stimulisane anti-IgM (prosečno 8 kontrolnih bunarčića, nakon oduzimanja proseka od 8 bunarčića za pozadinu bez stimulusa). Vrednosti IC70 se izračunavaju pomoću Prism verzije 5, korišćenjem nelinearne regresione krive i prikazane su u tabelama 1 i 2.
Primer 908 in vitro analiza ćelijske proliferacije
Efikasnost jedinjenja formule I meri se analizom ćelijske proliferacije koristeći sledeći protokol (Mendoza et al (2002) Cancer Res. 62: 5485-5488). Test CellTiter-Glo<®>luminiscentne ćelijske vijabilnosti, uključujući reagense i protokol, komercijalno su dostupni (Promega Corp., Madison, WI, Technical Bulletin TB288). Analiza procenjuje sposobnost
4 4
jedinjenja da ulaze u ćelije i inhibiraju proliferaciju ćelija. Princip analize se zasniva na određivanju broja živih ćelija prisutnih kvantitativnim određivanjem ATP prisutnog u homogenom testu, gde dodavanje reagensa Cell-Titer Glo dovodi do lize ćelija i stvaranja luminiscentnog signala kroz reakciju luciferaze. Luminiscentni signal je proporcionalan količini prisutnog ATP.
Panel ćelijskih linija limfoma B-ćelija (BJAB, SUDHL-4, TMD8, OCI-Ly10, OCI-Ly3, WSU-DLCL2) stavlja se u ploču sa 384 bunarčića u mediju za normalan rast, a serijski razređeni BTK inhibitori, ili samo DMSO, dodati su u svaki bunarčić. Ćelijska vijabilnost se pocenjuje nakon 96 sata inkubacije CellTiter-Glo<®>(Promega). Podaci se mogu predstaviti kao relativna vijabilnost ćelija u ćelijama tretiranim BTK inhibitorom u odnosu na kontrolne ćelije tretirane DMSO. Tačke podataka predstavljaju srednje vrednosti od 4 ponavljanja na svakom nivou doze. Stupci s grešakama predstavljaju SD iz srednje vrednosti.
Procedura: Dan 1-Ploče sa semenskim ćelijama (384 crna bunarčića, bistro dno, mikroelekularne, TC ploče s poklopcem iz Falcon # 353962), žetvene ćelije, semenske ćelije žna 1000 ćelija po 54 µl po bunarčiću u 384 bunarčića ćelijske ploče za 3 dana ispitivanja. Medijum za ćelijske kulture: RPMI ili DMEM s visokim nivoom glukoze, 10% seruma goveđeg fetusa, 2mM L-glutamin, P/S. Inkubirajte O/N na 37° C, 5% CO2.
Dan 2-Dodati lek ćelijama, razblaživanje jedinjenja, DMSO ploče (serijski 1:2 za 9 tačaka), dodati 20 ul jedinjenja na 10 mM u 2. koloni ploče sa 96 bunarčića. Izvršite serijski 1:2 preko ploče (10 µl 20 µl 100% DMSO) za ukupno 9 tačaka koristeći preciznost. žPloče sa 96 konusnih udubljenja zaod polipropilena iz Nune (kat. # 249946) (1:50 rastvor) Dodajte 147 µl medija u sve bunare. Prenesite 3 µl DMSO jedinjenja iz svakog bunarčića u DMSO ploču u svaki odgovarajući bunarčić na ploči medija, koristeći Rapidplate.
Dodavanje lekova ćelijama, ćelijska ploča (1:10 razblaživanje), dodajte 6 µl medija jedinjenje direktno u ćelije (54 µl medija već na ćelijama). Inkubirajte 3 dana na 37° C, 5% CO2 u inkubatoru koji se ne otvara često.
Dan 5-Razvijte ploče, odmrznite ćelijski pufer Titer Glo na sobnoj temperaturi. Uklonite ćelijske ploče od 37° C i uravnotežite na sobnu temperaturu, oko 30 minuta. Dodaj pufer Cell Titer Glo u supstrate Cell Titer Glo (boca do boce). Dodajte 30 µL Cell Titer Glo reagensa (Promega cat. # G7572) u svaki bunarčić s ćelijama. Stavite na tresilicu za ploče oko 30 minuta. Očitajte luminescenciju na čitaču ploče Analyst HT (pola sekunde po bunaru).
Testovi vijabilnosti ćelija i kombinovani testovi: Ćelije su zasejane 1000–2000 ćelija/bunarčiću na pločama sa 384 bunarčića tokom 16 h. Drugog dana, napravljeno je devet
4
serijskih rastvora jedinjenja u odnosu 1:2 u DMSO na ploči sa 96 bunarčića. Ova jedinjenja su dalje razblažena u rastućem mediju upotrebom Rapidplate robota (Zymark Corp., Hopkinton, MA). Razređena jedinjenja se zatim dodaju u kvadruplikatne bunarčića na ploče ćelija od 384bunarčića i inkubiraju na 37° C i 5% CO2. Nakon 4 dana, relativni broj živih ćelija se meri luminescencijom korišćenjem Cell-Titer Glo (Promega) prema uputstvima proizvođača i čita na Wallac Multilabel Readeru (PerkinElmer, Foster City). EC50 vrednosti se izračunavaju pomoću softvera Prism<®>4.0 (GraphPad, San Diego). Jedinjenja formule I i hemoterapeutska sredstva se dodaju istovremeno ili razdvajaju na 4 sata (jedan pre drugog) u svim testovima.
Dodatni ogledni uzorak in vitro proliferacije ćelija obuhvata sledeće korake:
1. Alikvot od 100 µl ćelijske kulture koji sadrži oko 10<4>ćelija u mediju deponuje se u svakom bunarčiću ploče od 384 bunarčića sa neprozirnim zidovima.
2. Kontrolni bunarčići se pripremaju sa medijem i bez ćelija.
3. Jedinjenje se dodaje u eksperimentalne bunare i inkubira 3–5 dana.
4. Ploče su uravnotežene na sobnoj temperaturi oko 30 minuta.
5. Dodaje se zapremina CellTiter-Glo reagensa jednaka zapremini medijuma kulture ćelija prisutnog u svakom bunarčiću.
6. Sadržaj se meša 2 minuta na orbitalnom šejkeru da bi se indukovala liza ćelija.
7. Ploča se inkubira na sobnoj temperaturi 10 minuta da bi se stabilizovao signal luminiscencije.
8. Luminiscencija je zabeležena i prikazana u grafikonima kao RLU = relativna jedinica luminiscencije.
Iako je predmetni pronalazak opisan prilično detaljno putem ilustracije i pomoću primera koji bi olakšali razumevanje, opisi i primeri ne treba da se tumače kao ograničavajući za obim primene pronalaska.
4

Claims (7)

  1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje izabrano iz grupe koju čine: 2-{4-Hidroksimetil-1'-metil-5'-[5-(4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6'-okso-1',6'-dihidro-[3,3']bipiridinil-5-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5] pirolo[1,2-a] pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-(4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5] pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((S)-2-metil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta [4,5]pirolo[1,2-a] pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5] pirolo[1,2-a] pirazin-1-on koji ima strukturu 4
    2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirimidin-4-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta-[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-[4-Hidroksimetil-1'-metil-5'-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6'-okso-1',6'-dihidro-[3,3']-bipiridinil-5-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1, 2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((R)-2-metil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta-[4,5]pirolo[1,2-a] pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-{5-[5-((2S,5R)-2,5-Dimetil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a] pirazin-1-on koji ima strukturu 4
    2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-5-(5-oksetan-3-il-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a] pirazin-2-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a] pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-{5-[5-((S)-2-Etil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu ; 2-[5-(6,7-Dihidro-4H-pirazolo[5,1-c][1,4]oksazin-2-ilamino)-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6;-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    4 2-[5-(2,6-Dimetil-pirimidin-4-ilamino)-3'-hidroksimetil-1-metil-6-okso-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il;]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-5-(2-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on;
    2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-5-(6-metil-pirimidin-4-ilamino)-6-okso-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    2-{3-Hidroksimetil-4-[6-(imidazo[1,2-a]piridin-7-ilamino)-4-metil-5-okso-4,5-dihidro-pirazin-2-il]piridin-2-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    ; i 2-[3'-Hidroksimetil-1-metil-6-okso-5-(pirazin-2-ilamino)-1,6-dihidro-[3,4'] bipiridinil-2'-il]-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    ili njihovi stereoizomeri, tautomeri ili farmaceutski prihvatljive soli za upotrebu kao medikamenti.
  2. 2. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu to jedinjenje je 2-{3'-Hidroksimetil-1-metil-5-[5-((S)-2-metil-4-oksetan-3-il-piperazin-1-il)-piridin-2-ilamino]-6-okso-1,6-dihidro-[3,4']bipiridinil-2'-il}-7,7-dimetil-3,4,7,8-tetrahidro-2H,6H-ciklopenta[4,5]pirolo[1,2-a]pirazin-1-on koji ima strukturu
    ili njihovi stereoizomeri, tautomeri ili farmaceutski prihvatljive soli.
  3. 3. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2 za upotrebu u lečenju reumatoidnog artritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, urtikarije i multiple skleroze.
  4. 4. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1 za upotrebu u lečenju reumatoidnog artritisa.
  5. 5. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1 za upotrebu u lečenju sistemskog eritematoznog lupusa.
  6. 6. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1 za upotrebu u lečenju urtikarije.
  7. 7. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1 za upotrebu u lečenju multiple skleroze. 1
RS20190888A 2011-11-03 2012-11-02 Heteroaril-piridon i aza-piridonska jedinjenja kao inhibitori aktivnosti btk RS59016B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161555393P 2011-11-03 2011-11-03
EP15188086.1A EP3002284B1 (en) 2011-11-03 2012-11-02 Heteroaryl pyridone and aza-pyridone compounds as inhibitors of btk activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59016B1 true RS59016B1 (sr) 2019-08-30

Family

ID=47146779

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160001A RS54505B1 (sr) 2011-11-03 2012-11-02 Heteroaril piridonska i aza-piridonska jedinjenja kao inhibitori btk aktivnosti
RS20190888A RS59016B1 (sr) 2011-11-03 2012-11-02 Heteroaril-piridon i aza-piridonska jedinjenja kao inhibitori aktivnosti btk

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160001A RS54505B1 (sr) 2011-11-03 2012-11-02 Heteroaril piridonska i aza-piridonska jedinjenja kao inhibitori btk aktivnosti

Country Status (34)

Country Link
US (11) US8716274B2 (sr)
EP (5) EP2773638B1 (sr)
JP (5) JP5976827B2 (sr)
KR (2) KR101659193B1 (sr)
CN (2) CN104125959B (sr)
AR (2) AR088641A1 (sr)
AU (5) AU2012332365B2 (sr)
CA (1) CA2853975C (sr)
CL (1) CL2014001103A1 (sr)
CO (1) CO6950472A2 (sr)
CR (1) CR20140194A (sr)
CY (1) CY1117097T1 (sr)
DK (2) DK3002284T3 (sr)
EA (1) EA023263B1 (sr)
ES (3) ES2738329T3 (sr)
HR (2) HRP20151442T1 (sr)
HU (2) HUE028019T2 (sr)
IL (1) IL232060A (sr)
IN (1) IN2014CN03250A (sr)
LT (1) LT3002284T (sr)
MA (1) MA35819B1 (sr)
MX (2) MX2014005331A (sr)
PE (1) PE20141586A1 (sr)
PH (1) PH12014500936A1 (sr)
PL (3) PL2773638T3 (sr)
PT (2) PT3002284T (sr)
RS (2) RS54505B1 (sr)
SG (1) SG11201401992YA (sr)
SI (2) SI2773638T1 (sr)
TR (1) TR201909849T4 (sr)
TW (4) TWI609868B (sr)
UA (1) UA111756C2 (sr)
WO (1) WO2013067274A1 (sr)
ZA (1) ZA201804727B (sr)

Families Citing this family (75)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112014010439A2 (pt) * 2011-11-03 2017-04-18 F Hoffmann - La Roche Ag compostos, composição farmacêutica, processo de produção, método de tratamento de uma doença ou distúrbio, métodos, kit e uso de uma composição farmacêutica
UA111756C2 (uk) * 2011-11-03 2016-06-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Сполуки гетероарилпіридону та азапіридону як інгібітори тирозинкінази брутона
WO2015000949A1 (en) 2013-07-03 2015-01-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Heteroaryl pyridone and aza-pyridone amide compounds
WO2015050703A1 (en) * 2013-10-04 2015-04-09 Yi Chen Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
EP3077384B1 (en) * 2013-12-05 2017-09-06 F. Hoffmann-La Roche AG Heteroaryl pyridone and aza-pyridone compounds with electrophilic functionality
CN106922146B (zh) 2014-10-02 2020-05-26 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗由布鲁顿酪氨酸激酶(btk)介导的疾病的吡唑甲酰胺化合物
WO2016066490A1 (en) * 2014-10-27 2016-05-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for making tricyclic lactam compounds
CN106188063A (zh) * 2015-05-08 2016-12-07 中国科学院上海药物研究所 用作Lp-PLA2抑制剂的双环类化合物、其制备方法及医药用途
HK1249504A1 (zh) 2015-09-02 2018-11-02 Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited 用作溴结构域抑制剂的吡啶酮二甲酰胺
EP3365335B1 (en) 2015-10-23 2024-02-14 Array Biopharma, Inc. 2-aryl- and 2-heteroaryl-substituted 2-pyridazin-3(2h)-one compounds as inhibitors of fgfr tyrosine kinases
AU2017219216B2 (en) * 2016-02-19 2019-12-19 Novartis Ag Tetracyclic pyridone compounds as antivirals
BR112018069530B1 (pt) * 2016-02-29 2021-02-17 F. Hoffmann-La Roche Ag composições de forma de dosagem que compreendem um inibidor da tirosina quinase de bruton
CN108473510B (zh) * 2016-04-28 2021-10-29 豪夫迈·罗氏有限公司 制备2-吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮的方法
CN108101905A (zh) * 2016-11-24 2018-06-01 中国科学院上海药物研究所 嘧啶并[5,4-b]吲嗪或嘧啶并[5,4-b]吡呤化合物、其制备方法及用途
EP3548046A2 (en) 2016-12-03 2019-10-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods and compositions for use of therapeutic t cells in combination with kinase inhibitors
JP2020510624A (ja) 2016-12-12 2020-04-09 マルチビア インコーポレイテッド がんおよび感染性疾患の治療および予防のための、ウイルス遺伝子治療および免疫チェックポイント阻害剤を含む方法および組成物
AU2017376580B2 (en) 2016-12-15 2020-08-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for preparing BTK inhibitors
KR102543603B1 (ko) 2016-12-22 2023-06-14 베타 파머수티컬 컴퍼니 리미티드 벤조이미다졸 유도체, 제조 방법 및 그것의 용도
WO2018175863A1 (en) 2017-03-24 2018-09-27 Genentech, Inc. Methods of treating autoimmune and inflammatory diseases
CN107445981B (zh) * 2017-08-25 2018-06-22 牡丹江医学院 一种用于防治宫颈炎的活性化合物
KR102613433B1 (ko) 2017-10-11 2023-12-13 주식회사 대웅제약 신규한 페닐피리딘 유도체 및 이를 포함하는 약학 조성물
CN111386272B (zh) 2017-10-27 2023-01-06 费森尤斯卡比肿瘤学有限公司 一种改进的瑞博西尼及其盐的制备方法
MX2020008627A (es) 2018-02-19 2020-09-21 Guangzhou Lupeng Pharmaceutical Company Ltd Inhibidores de btk y mutantes de los mismos.
TWI801517B (zh) 2018-03-12 2023-05-11 加拿大商愛彼特生物製藥公司 經取代的2-吡啶酮三環化合物、其類似物及其使用方法
WO2019208805A1 (ja) 2018-04-27 2019-10-31 小野薬品工業株式会社 Ｂｔｋ阻害活性を有する化合物を有効成分として含む自己免疫疾患の予防および／または治療剤
WO2019236884A1 (en) 2018-06-07 2019-12-12 Disarm Therapeutics, Inc. Inhibitors of sarm1
CN112424207B (zh) 2018-07-25 2024-03-19 诺华股份有限公司 Nlrp3炎性小体抑制剂
KR102328682B1 (ko) * 2018-08-27 2021-11-18 주식회사 대웅제약 신규한 헤테로사이클릭아민 유도체 및 이를 포함하는 약학 조성물
WO2020043321A1 (en) 2018-08-31 2020-03-05 Stichting Katholieke Universiteit Synergistic combinations of amino acid depletion agent sensitizers (aadas) and amino acid depletion agents (aada), and therapeutic methods of use thereof
BR112021007115A2 (pt) 2018-10-15 2021-07-20 Nurix Therapeutics, Inc. compostos bifuncionais para dedradação de btk por meio da via de proteossoma de ubiquitina
CN113474337A (zh) 2018-12-19 2021-10-01 奥瑞生物药品公司 作为fgfr抑制剂用于治疗癌症的7-((3，5-二甲氧基苯基)氨基)喹喔啉衍生物
JP2022515198A (ja) 2018-12-19 2022-02-17 アレイ バイオファーマ インコーポレイテッド ＦＧＦＲチロシンキナーゼの阻害剤としての置換ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジン化合物
CA3123215C (en) 2018-12-19 2024-04-02 Disarm Therapeutics, Inc. Inhibitors of sarm1 in combination with neuroprotective agents
TW202033523A (zh) * 2019-01-17 2020-09-16 美商愛彼特生物製藥股份有限公司 經取代的多環羧酸、其類似物及使用其之方法
AU2020213265B2 (en) 2019-01-22 2025-01-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating rheumatoid arthritis, chronic spontaneous urticaria, and systemic lupus erythematosis using an inhibitor of Bruton's tyrosine kinase
EP3930717A1 (en) * 2019-02-25 2022-01-05 Guangzhou Lupeng Pharmaceutical Company Ltd. Inhibitor of btk and mutants thereof
BR112021018168B1 (pt) 2019-03-21 2023-11-28 Onxeo Composição farmacêutica, combinação e kit compreendendo uma molécula dbait e um inibidor de quinase para o tratamento de câncer
MX2021012285A (es) 2019-04-09 2021-12-15 Nurix Therapeutics Inc Compuestos de piperidina 3-sustituidos para inhibicion del protooncogen-b de linfoma de linea b de casitas (cbl-b) y uso de un inhibidor de cbl-b en combinacion con una vacuna contra el cancer y/o con un virus oncolitico.
AU2020278592B2 (en) 2019-05-17 2024-10-10 Nurix Therapeutics, Inc. Cyano cyclobutyl compounds for Cbl-b inhibition and uses thereof
UY38687A (es) 2019-05-17 2023-05-15 Novartis Ag Inhibidores del inflamasoma nlrp3, composiciones, combinaciones de los mismos y métodos para su uso
MX2021015675A (es) 2019-06-26 2022-02-03 Nurix Therapeutics Inc Compuestos de bencil-triazol sustituidos para la inhibicion de cbl-b y otros usos de los mismos.
WO2021066958A1 (en) 2019-10-05 2021-04-08 Newave Pharmaceutical Inc. Inhibitor of btk and mutants thereof
CA3159348A1 (en) 2019-11-08 2021-05-14 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods for the treatment of cancers that have acquired resistance to kinase inhibitors
US20230024442A1 (en) * 2019-11-08 2023-01-26 Nurix Therapeutics, Inc. Bifunctional compounds for grading btk via ubiquitin proteosome pathway
CA3160713A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Nurix Therapeutics, Inc. Bifunctional compounds for degrading btk via ubiquitin proteosome pathway
WO2021148581A1 (en) 2020-01-22 2021-07-29 Onxeo Novel dbait molecule and its use
WO2021164735A1 (en) * 2020-02-20 2021-08-26 Hutchison Medipharma Limited Heteroaryl heterocyclic compounds and uses thereof
TWI899163B (zh) 2020-02-28 2025-10-01 美商建南德克公司 使用布魯頓氏酪胺酸激酶之抑制劑來治療首發漸進型多發性硬化症之方法
TWI907406B (zh) 2020-04-03 2025-12-11 美商建南德克公司 使用布魯頓氏酪胺酸激酶抑制劑來治療復發型多發性硬化症之方法
US20230348471A1 (en) * 2020-06-18 2023-11-02 Shanghai Synergy Pharmaceutical Sciences Co., Ltd. Bruton's tyrosine kinase inhibitor and preparation method therefor
WO2022029068A1 (en) * 2020-08-04 2022-02-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Pyridinone compounds for the treatment of autoimmune disease
MX2023001865A (es) * 2020-08-14 2023-05-09 Guangzhou Lupeng Pharmaceutical Company Ltd Composiciones de forma de dosificación que comprenden un inhibidor de btk y mutantes de este.
EP4196478A1 (en) 2020-08-14 2023-06-21 Novartis AG Heteroaryl substituted spiropiperidinyl derivatives and pharmaceutical uses thereof
EP4214206A4 (en) 2020-09-21 2024-10-09 Hutchison Medipharma Limited HETEROCYCLIC HETEROARYL COMPOUNDS AND USES THEREOF
WO2022094172A2 (en) 2020-10-30 2022-05-05 Newave Pharmaceutical Inc. Inhibitors of btk
US20240058457A1 (en) 2020-12-20 2024-02-22 Newave Pharmaceutical Inc. Btk degrader
US20240216330A1 (en) * 2021-04-02 2024-07-04 Biogen Ma Inc. Combination treatment methods of multiple sclerosis
AU2022254104A1 (en) 2021-04-08 2023-10-26 Nurix Therapeutics, Inc. Combination therapies with cbl-b inhibitor compounds
IL307819A (en) 2021-05-05 2023-12-01 Hoffmann La Roche Process for preparing btk inhibitors
CN113603685A (zh) * 2021-07-23 2021-11-05 都创(上海)医药开发有限公司 Fenebrutinib化合物的晶型及其制备方法和用途
KR20240090898A (ko) 2021-10-26 2024-06-21 누릭스 테라퓨틱스 인코포레이티드 암을 치료 및 예방하고 btk를 분해하기 위한 피페리디닐피라진-카복스아미드 화합물
US20250074911A1 (en) 2021-12-14 2025-03-06 Crossfire Oncology Holding B.V. Macrocyclic btk inhibitors
US20250136620A1 (en) * 2022-01-17 2025-05-01 Newave Pharmaceutical Inc. Btk degrader
TW202346276A (zh) 2022-01-27 2023-12-01 日商田邊三菱製藥股份有限公司 新穎之ｂ０ａｔ１抑制劑
US20250154155A1 (en) * 2022-01-28 2025-05-15 Hutchmed Limited Synthetic method of 7,8-dihydro-2h-cyclopenta[4,5]pyrrolo[1,2-a]pyrazin-1(6h)-one compounds
UY40374A (es) 2022-08-03 2024-02-15 Novartis Ag Inhibidores de inflamasoma nlrp3
CN121100112A (zh) 2023-04-06 2025-12-09 田边三菱制药株式会社 新的b0at1抑制剂
IL324509A (en) 2023-05-16 2026-01-01 Genentech Inc Methods for treating multiple sclerosis relapse using a Bruton's tyrosine kinase inhibitor
WO2024246287A1 (en) 2023-06-02 2024-12-05 Crossfire Oncology Holding B.V. Medical use of a macrocyclic reversible btk inhibitor
WO2024245578A1 (en) 2023-06-02 2024-12-05 Netherlands Translational Research Center Holding B.V. Therapeutic combinations of an irreversible btk inhibitor and a macrocyclic reversible btk inhibitor
WO2024245577A1 (en) 2023-06-02 2024-12-05 Netherlands Translational Research Center Holding B.V. Therapeutic combinations of an irreversible btk inhibitor and a reversible btk inhibitor
WO2024256574A1 (en) 2023-06-13 2024-12-19 Crossfire Oncology Holding B.V. Process for preparing macrocyclic btk inhibitors
WO2024256568A1 (en) 2023-06-13 2024-12-19 Crossfire Oncology Holding B.V. Salt and crystal forms of a macrocyclic btk inhibitor
AU2024320769A1 (en) * 2023-08-07 2026-03-05 Guangzhou Lupeng Pharmaceutical Co., Ltd. Crystal form vi of acrylamide compound, and preparation method therefor and use thereof
WO2026017823A1 (en) 2024-07-18 2026-01-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for preparing btk inhibitor intermediates

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
US5543523A (en) 1994-11-15 1996-08-06 Regents Of The University Of Minnesota Method and intermediates for the synthesis of korupensamines
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
CN100528329C (zh) 2001-07-12 2009-08-19 里艾克沙有限公司 微囊包封的催化剂,它们的制备方法和使用方法
US7405295B2 (en) 2003-06-04 2008-07-29 Cgi Pharmaceuticals, Inc. Certain imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines and method of inhibition of Bruton's tyrosine kinase by such compounds
WO2005005429A1 (en) 2003-06-30 2005-01-20 Cellular Genomics, Inc. Certain heterocyclic substituted imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines and methods of inhibition of bruton’s tyrosine kinase by such compounds
EP2457895A1 (en) 2004-07-12 2012-05-30 Idun Pharmaceuticals, Inc. Tetrapeptide analogs
EP1812442A2 (en) 2004-11-10 2007-08-01 CGI Pharmaceuticals, Inc. Imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines useful as modulators of kinase activity
MX2007011041A (es) 2005-03-10 2008-02-22 Cgi Pharmaceuticals Inc Ciertas amidas sustituidas, metodo de elaboracion y metodo de uso de las mismas.
DE602006021205D1 (de) 2005-10-07 2011-05-19 Exelixis Inc Azetidine als mek-inhibitoren bei der behandlung proliferativer erkrankungen
US7838523B2 (en) 2006-09-11 2010-11-23 Cgi Pharmaceuticals, Inc. Certain substituted amides, method of making, and method of use thereof
AR063706A1 (es) 2006-09-11 2009-02-11 Cgi Pharmaceuticals Inc Determinadas amidas sustituidas, el uso de las mismas para el tratamiento de enfermedades mediadas por la inhibicion de la actividad de btk y composiciones farmaceuticas que las comprenden.
AR063946A1 (es) 2006-09-11 2009-03-04 Cgi Pharmaceuticals Inc Determinadas pirimidinas sustituidas, el uso de las mismas para el tratamiento de enfermedades mediadas por la inhibicion de la actividad de btk y composiciones farmaceuticas que las comprenden.
EA018573B1 (ru) * 2006-09-22 2013-09-30 Фармасайкликс, Инк. Ингибиторы тирозинкиназы брутона
CL2008002793A1 (es) 2007-09-20 2009-09-04 Cgi Pharmaceuticals Inc Compuestos derivados de amidas sustituidas, inhibidores de la actividad de btk; composicion farmaceutica que los comprende; utiles en el tratamiento del cancer, trastornos oseos, enfermedades autoinmunes, entre otras
EP2205564B1 (en) * 2007-10-23 2014-07-30 F. Hoffmann-La Roche AG Novel kinase inhibitors
US8426441B2 (en) 2007-12-14 2013-04-23 Roche Palo Alto Llc Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
WO2009098144A1 (en) * 2008-02-05 2009-08-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel pyridinones and pyridazinones
US7683064B2 (en) 2008-02-05 2010-03-23 Roche Palo Alto Llc Inhibitors of Bruton's tyrosine kinase
US8426424B2 (en) 2008-05-06 2013-04-23 Cgi Pharmaceuticals, Inc. Certain substituted amides, method of making, and method of use thereof
WO2009156284A1 (en) 2008-06-24 2009-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel substituted pyridin-2-ones and pyridazin-3-ones
AU2009265813B2 (en) 2008-07-02 2014-04-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel phenylpyrazinones as kinase inhibitors
CA2636807A1 (en) 2008-07-04 2010-01-04 Steven Splinter Methods for obtaining cyclopamine
EP2307413B1 (en) 2008-07-15 2015-09-09 F. Hoffmann-La Roche AG Novel phenyl-imidazopyridines and pyridazines
US8598174B2 (en) 2008-11-12 2013-12-03 Genetech, Inc. Pyridazinones, method of making, and method of use thereof
US8299077B2 (en) 2009-03-02 2012-10-30 Roche Palo Alto Llc Inhibitors of Bruton's tyrosine kinase
CA2748414A1 (en) * 2009-04-24 2010-10-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
JP5656976B2 (ja) * 2009-04-29 2015-01-21 ローカス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ピロロトリアジン化合物
CA2771822C (en) * 2009-09-04 2020-08-11 Daniel A. Erlanson Bruton's tyrosine kinase inhibitors
CN110818724B (zh) * 2010-05-07 2020-11-13 吉利德康涅狄格有限公司 吡啶酮和氮杂吡啶酮化合物及使用方法
AR082590A1 (es) 2010-08-12 2012-12-19 Hoffmann La Roche Inhibidores de la tirosina-quinasa de bruton
JP5842004B2 (ja) 2010-09-01 2016-01-13 ジーアイリード コネチカット インコーポレーテッドＧｉｌｅａｄ Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ，Ｉｎｃ． ピリダジノン、その製造方法及びその使用方法
US9249123B2 (en) 2010-09-01 2016-02-02 Genentech, Inc. Pyridinones/pyrazinones, method of making, and method of use thereof
CA2834077A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
BR112014003582A2 (pt) 2011-08-17 2017-03-14 Hoffmann La Roche inibidores da tirosina quinase de bruton
RU2622391C2 (ru) * 2011-11-03 2017-06-15 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Соединения 8-фторфталазин-1(2н)-она в качестве ингибиторов тирозинкиназы брутона
UA111756C2 (uk) * 2011-11-03 2016-06-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Сполуки гетероарилпіридону та азапіридону як інгібітори тирозинкінази брутона
BR112014010439A2 (pt) 2011-11-03 2017-04-18 F Hoffmann - La Roche Ag compostos, composição farmacêutica, processo de produção, método de tratamento de uma doença ou distúrbio, métodos, kit e uso de uma composição farmacêutica
WO2015000949A1 (en) * 2013-07-03 2015-01-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Heteroaryl pyridone and aza-pyridone amide compounds
EP3077384B1 (en) * 2013-12-05 2017-09-06 F. Hoffmann-La Roche AG Heteroaryl pyridone and aza-pyridone compounds with electrophilic functionality
BR112018069530B1 (pt) * 2016-02-29 2021-02-17 F. Hoffmann-La Roche Ag composições de forma de dosagem que compreendem um inibidor da tirosina quinase de bruton

Also Published As

Publication number Publication date
PL2773638T3 (pl) 2016-03-31
EA201490858A1 (ru) 2014-08-29
HK1201265A1 (en) 2015-08-28
SG11201401992YA (en) 2014-05-29
CO6950472A2 (es) 2014-05-20
US20140194408A1 (en) 2014-07-10
ES2738329T3 (es) 2020-01-22
CR20140194A (es) 2014-06-03
US8716274B2 (en) 2014-05-06
AU2020202707A1 (en) 2020-05-14
IL232060A (en) 2016-02-29
DK2773638T3 (en) 2015-10-19
US8921353B2 (en) 2014-12-30
US20160228432A1 (en) 2016-08-11
KR20140096097A (ko) 2014-08-04
JP2018080193A (ja) 2018-05-24
US9238655B2 (en) 2016-01-19
JP2019108342A (ja) 2019-07-04
US20240270747A1 (en) 2024-08-15
AU2018201557A1 (en) 2018-03-22
AU2016273930A1 (en) 2017-01-12
BR112014010459A2 (pt) 2017-04-18
DK3002284T3 (da) 2019-07-29
EP4050012A1 (en) 2022-08-31
HUE028019T2 (en) 2016-11-28
JP2016028046A (ja) 2016-02-25
ZA201804727B (en) 2023-03-29
JP2020183397A (ja) 2020-11-12
TW201326175A (zh) 2013-07-01
KR20160003328A (ko) 2016-01-08
US10045983B2 (en) 2018-08-14
TW202124384A (zh) 2021-07-01
IL232060A0 (en) 2014-05-28
MX361807B (es) 2018-12-17
AR088641A1 (es) 2014-06-25
AU2012332365B2 (en) 2016-09-15
US20140378432A1 (en) 2014-12-25
AU2016273930B2 (en) 2018-03-08
MA35819B1 (fr) 2014-12-01
US20230279012A1 (en) 2023-09-07
PT3002284T (pt) 2019-07-17
AU2020202707B2 (en) 2021-09-02
PH12014500936A1 (en) 2014-06-09
WO2013067274A1 (en) 2013-05-10
EP3521288A1 (en) 2019-08-07
EP3521288B1 (en) 2021-09-08
US9782405B2 (en) 2017-10-10
TR201909849T4 (tr) 2019-07-22
PE20141586A1 (es) 2014-10-25
CY1117097T1 (el) 2017-04-05
PT2773638E (pt) 2016-01-12
US20190194203A1 (en) 2019-06-27
CN104125959B (zh) 2017-05-03
AU2019216728A1 (en) 2019-09-05
ES2898938T3 (es) 2022-03-09
CA2853975A1 (en) 2013-05-10
ES2555168T3 (es) 2015-12-29
TWI652270B (zh) 2019-03-01
EP4019508A1 (en) 2022-06-29
RS54505B1 (sr) 2016-06-30
AU2012332365A1 (en) 2014-05-01
EP2773638B1 (en) 2015-10-07
TWI609868B (zh) 2018-01-01
SI2773638T1 (sl) 2015-12-31
AU2019216728B2 (en) 2020-04-09
US20200062769A1 (en) 2020-02-27
US20130116235A1 (en) 2013-05-09
US20180071286A1 (en) 2018-03-15
HRP20191307T1 (hr) 2019-10-18
LT3002284T (lt) 2019-08-12
JP6571215B2 (ja) 2019-09-04
TW201741315A (zh) 2017-12-01
CA2853975C (en) 2020-02-25
AU2018201557B2 (en) 2019-09-19
IN2014CN03250A (sr) 2015-07-03
TW201906845A (zh) 2019-02-16
JP5976827B2 (ja) 2016-08-24
NZ624021A (en) 2016-09-30
PL3521288T3 (pl) 2021-12-27
US20210079002A1 (en) 2021-03-18
EA023263B1 (ru) 2016-05-31
SI3002284T1 (sl) 2019-08-30
CL2014001103A1 (es) 2014-10-03
USRE48239E1 (en) 2020-10-06
TWI701250B (zh) 2020-08-11
KR101659193B1 (ko) 2016-09-22
EP3002284A1 (en) 2016-04-06
AR117501A2 (es) 2021-08-11
CN107011348B (zh) 2020-01-10
HRP20151442T1 (hr) 2016-01-29
UA111756C2 (uk) 2016-06-10
PL3002284T3 (pl) 2019-11-29
JP2014532762A (ja) 2014-12-08
CN104125959A (zh) 2014-10-29
CN107011348A (zh) 2017-08-04
EP3002284B1 (en) 2019-05-22
HUE044959T2 (hu) 2019-12-30
MX2014005331A (es) 2014-05-28
EP2773638A1 (en) 2014-09-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240270747A1 (en) Heteroaryl pyridone and aza-pyridone compounds
HK40077672A (en) Pyridone boronates for the preparation of inhibitors of btk activity
BR122020017743B1 (pt) Processo para fabricação de uma composição farmacêutica e uso de uma composição farmacêutica
BR112014010459B1 (pt) Compostos e composição farmacêutica