RO132632A2 - Procedeu de obţinere a unor biocapsule cu aplicabilitate în protecţia antifungică la pacienţii cu terapie antibacteriană per os - Google Patents

Abstract

Invenţia se referă la un procedeu de obţinere a unor capsule cu aplicabilitate în protecţia antifungică, la pacienţii cu terapie antibacteriană per os. Procedeul conform invenţiei constă în sinteza nanoparticulelor de argint stabilizate cu acid mercaptosuccinic, după care se prepară extractul deconcentrat sub vid, cele două componete sunt înglobate într-o soluţie de 2,5% alginat de sodiu, într-o baie de CaClde concentraţie 1,5...3,5%, timp de 60...300 s, rezultând biocapsule de alginat având două principii active cu efect antifungic optimizat.

Description

Procedeu de obținere a unor biocapsule cu aplicabilitate in protecția antifungica la pacienții cu terapie antibacteriana per os

Invenția se refera la un procedeu de obținere a unui produs cu aplicabilitate in protecția antifungica la pacienții cu antiobioterapie orala.

Este cunoscut faptul ca infecțiile fungice, in special cele cu speciile Candida, avand ca reprezentant majoritar Candida albicans prezintă o incidența in creștere. Incidența estimata in anumite tari este de aproximativ 2000 cazuri/an, reprezentând 3.6/100000 persoane (2). Statusul imunosupresiv reprezintă unul dintre factorii promotori ai infecțiilor cu Candida (infecții HIV(3), tratament cu steroizi (4), prezenta neoplaziilor asociate(5), diabetul zaharat (6), etc). S-a demonstrat, de asemenea, ca antibioterapia reprezintă un important promotor al infecțiilor cu Candida(7). Tratamentele orale cu Cefaclor (8), Ceftibuten (8,9), Cefpodoxim proxetil(lO), Amoxicilina (8) effectuate pentru diverse patologii au demonstrate un efect de colonzare cu Candida albicans si alte specii Candida. Au fost propuse multiple mecanisme prin care antibioticele pot induce stimularea creșterii speciilor fungice, din care amintim: eliminarea competitorilor bacterieni asupra sursei de nutritive(6) sau eliminarea unor specii bacteriene cu rol inhibitor direct asupra dezvoltării fungice.(7).

Se cunoaște, de asemenea efectul fungistatic si fungicid al nanoparticulelor de argint (11), (12), (13).Intensitatea efectului antifungic este dependenta de metoda de stabilizare a particulelor(l 1). Nanoparticulele de argint actioneaza prin atac membranar direct, destabilizare membranara si inversarea potențialului de membrana(I3).

In egala măsură este cunoscut faptul ca anumite extrase naturale pot exercita un efect antifungic. Numeroase studii au demonstrat efecte fungicide si fungistatice ale extractelor de Allium ursinum realizate din flora apartinand unor areale geografice diferite.(14)(15).Caracterizarea unor astfel de extracte realizate din bulbi, rădăcini sau frunze a relevant un continui bogat in componente sulfurice, fenoli, lectine polizaharide, acizi grași. Dintre acestea, elemente sulfurice precum metilinul sau allicinul sunt considerate reponsabile de efectul antifungic. (15,16)

Este cunoscut faptul ca procedeul de încapsulare de substanțe active, molecule sau probiotice reprezintă o modalitate eficienta de optimizare a tranzitului intestinal al elementelor active.

a 2016 00951

05/12/2016 fi>

Astfel, realizarea unor capsule biocompatibile din alginat poate proteja conținutul de pH-ul acid intragastric si favoriza eliberarea substanțelor active la nivel intestinal. (17), (18).

Soluțiile cunoscute prezintă următoarele dezavantaje: prezintă o rata ridicata de dezvoltare a rezistentei la tratament antifungic, in special in cazul utilizării unor doze reduse sau timp insuficient de aplicare a tratamentului 19)(20).

Problema pe care o rezolva invenția.

Problema 1. Produsul elimina problema rezistentei la tratament antifungic prin unirea a doua principii de tratament: nanoparticule ce actioneaza fizic pe membrana celulara si un extract natural cu efect chimic antifungic.

Problema 2. Invenția se adreseaza nevoii de inhibiție a creșterii fungice la pacienții care necesita tratament antibiotic cu administrare orala, in special terapie ambulatorie. Produsul, al cărui procedeu de obținere este detaliat, poate fi utilizat ca si tratament cu administrare per os inclusiv in mediul extraspitalicesc, rezolvând problema dificultății de monitorizare continua a apariției complicațiilor fungice in afara resurselor spitalicești.

Invenția prezintă următoarele avantaje:

1. Elimina problema rezistentei la tratament antifungic prin sinergismul a doua componente ce actioneaza pe doua principii diferite: nanoaparticulele de argint ce actioneaza prin atac direct membranar, respectiv extrasul natural de Allium ursinum cu efect antifungic chimic multiplu.

2. Structurează un preparat încapsulat, administrabil pe cale orala si care sa ofere condiții optime de tranzit gastric si eliberarea elementelor active la nivel intestinal.

Scopul inveptiei este acela de a genera un produs cu efect antifungic optimizat, administrabil pe cale orala pacientilor cu tratament antibiotic administrat per os. Produsul se realizează prin încapsularea in alginat a doua elemente cu efect antifungic: nanoparticule de argint si extract de Allium ursinum.

Procedura conform invenției consta din aceea ca nanoparticulele de argint sunt inițial sintetizate prin reducerea Ag⁺ la Ag° in prezenta mercaptosuccinic. Concomitent, se obține extractul de Allium ursinum prin maruntirea matricei vegetale, in prezenta de alcool etilic si cu

a 2016 00951

05/12/2016 ajutorul unui omogenizator. Extractul obtinut este apoi concentrat sub vid, cu ajutoul unui rotaevaporator. Cele doua soluții, cea de nanoparticule de argint stabilizate cu MSA cat si extractul de Allium ursinum obtinut, sunt înglobate intr-o soluție de alginate de sodium din care se obțin biocapsulele de alginate prin reacția de ‘cross-linking’ in prezenta ionilor de Ca²⁺.

Menționam ca nu am identificat in literatura cercetări dedicate sintezei sau efectelor biocapsulelor propuse.

Se da in continuare un exemplu de realizare conform invenției:

Sinteza nanoparticulelor de argint (AgNP) se realizează in mediu apos: 50mL AgNCL 0.6mM se aduc la 100°C sub agitare continua, la care se adauga 6 mL soluție acid mercaptosuccinic 2,8mM (neutralizată in prealabil) si reacția este lasata la perfectare 30 de minute, in aceleași condiții de temperature si sub agitare. Soluția de nanoparticule de Ag stabilizate cu acid mercaptosuccinic (AgNP-MSA) este apoi sunt supusa unor etape de centrifugare (12 000 RPM/12 min.) si redispersare prin ultrasonare in H2O bidist. in vederea înlăturării produsilor de reacție secundari. Pentru obținerea extractului de Allium ursinum se pornește de la 5g matrice vegetala de Allium ursinum care este maruntita cu ajutorul unui omogenizator (de tip ‘ultraturax’) in prezenta a 50mL alcool etilic absolut si se lașa apoi sub agitare magnetica timp de 15minute. Extractul este mai departe filtrate printr-o membrane cu pori de 0.45 pm si concentrate, sub vid si la temperatura camerei cu ajutorul unui ‘rotaevaporator’ pana la un volum de 5mL. In vederea încapsulării in alginat, cele doua soluții: 10 mL AgNP-MSA si 1 mL extract de Allium ursinum, obținute in etapele anterioare, sunt adaugate unei soluții de 2,5% alginate de sodiu ce este adaugata in picaturi, cu ajutorul unei seringi, intr-o baie de CaCh cu o concentrație intre 1,5 -3,5%. Timpul de formare a biocapsulelor in baia de întărire este cuprins intre 60 si 300 de secunde. Biocapsulele astfel obținute sunt înlăturate din baia de CaCb si sunt spalate cu H2O bidist. Biocapsulele astfel obținute sunt supuse caracterizării prin metode de microscopie de forța atomica (ALM) si difracție dinamica a luminii.

Aplicații pe subiecți umani sau animale. Produsul se afla in faza de testare in vitro a citotoxicitatii si eficientei componentelor individuale, urmând ca intr-o etapa ulterioara sa se experimenteze efectele in vivo ale produsului combinat detaliat anterior. Produsul descris anterior nu a fost testat pe animale sau subiecți umani la momentul depunerii prezentei solicitări.

Claims (1)

1. Revendicările invenției

   Prin prezenta invenție se revendica procedeul de obținere a biocapsulelor de alginate cu conținut dublu: nanoparticule de argint stabilizate cu acid mercaptosuccinic, respectiv extract de Allium ursinum cu aplicabilitate in protecția antifungica la pacienții cu terapie antibacteriana per os, caracterizat prin aceea ca, in scopul elimininarii rezistentei la tratamentul antifungic, biocapsulele au un conținut dublu: nanoparticule de argint, respectiv extract de Allium ursinum.

   Sinteza nanoparticulelor de argint (AgNP) se realizează in mediu apos: 50mL AgNCh 0.6mM se aduc la 100°C sub agitare continua, la care se adauga 6 mL soluție acid mercaptosuccinic 2,8mM (neutralizată in prealabil) si reacția este lasata la perfectare 30 de minute, in aceleași condiții de temperature si sub agitare. Soluția de nanoparticule de Ag stabilizate cu acid mercaptosuccinic (AgNP-MSA) este apoi sunt supusa unor etape de centrifugare (12 000 RPM/12 min.) si redispersare prin ultrasonare in H₂O bidist. in vederea înlăturării produșilor de reacție secundari. Pentru obținerea extractului de Allium ursinum se pornește de la 5g matrice vegetala de Allium ursinum care este maruntita cu ajutorul unui omogenizator (de tip ‘ultraturax’) in prezenta a 50mL alcool etilic absolut si se lașa apoi sub agitare magnetica timp de 15minute. Extractul este mai departe filtrate printr-o membrane cu pori de 0.45pm si concentrate, sub vid si la temperatura camerei cu ajutorul unui ‘rota-evaporator’ pana la un volum de 5mL. In vederea încapsulării in alginat, cele doua soluții: 10 mL AgNP-MSA si 1 mL extract de Allium ursinum, obținute in etapele anterioare, sunt adaugate unei soluții de 2,5% alginate de sodiu ce este adaugata in picaturi, cu ajutorul unei seringi, intr-o baie de CaCl₂ cu o concentrație intre 1,5 3,5%. Timpul de formare a biocapsulelor in baia de întărire este cuprins intre 60 si 300 de secunde. Biocapsulele astfel obținute sunt înlăturate din baia de CaCl₂ si sunt spalate cu H₂O bidist.