PT99285B - Processo para a preparacao de antibioticos carbapenemicos ditioacetal-substituidos no atomo de carbono 3 e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE ANTIBIÓTICOS CARBAPENÉMICOS DITIOACETAL-SUBSTITUÍDOS NO ÁTOMO DE CARBONO 3 E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM”

Resumo: (máx. 150 palavras)

Descreve-se um processo para a preparação de compostos de fórmula geral

(I) ou dos seus sais não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista far macêutico ou dos seus ésteres hidrolisáveis sob o ponto de vista

DSP-4 _ MOORE FWFffSVr

CAMPO DAS CEBOLAS, 1100 LISBOA TEL·: 88851 51 Z2/3TELEX: 18358 MPI TELEFAX :87 53 08

INSTITUTO NACIONAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

DIRECÇÃO DE SERVIÇOS DE PATENTES

FOLHA DO RESUMO (Continuação)

Modalidade e n.° θ

Data do pedido (22)

Resumo (continuação) (57) fisiológico ou dos seus produtos de solvatação que consiste, por exemplo, em alquilar um composto de fórmula geral

COOR.

(IV) com um composto de fórmula geral nAo preencher as (V) para se obter um composto de fórmula geral

OH R,

/ ' R

COOI^ R3 (VI) e em converter o grupo funcional representado pelo símbolo R_o no

O radical pretendido e em remover simultaneamente o grupo protector para se obter um composto de fórmula geral

OH R,

CIORg *3 (I ’ )

DSM-5 _________

DSM-5 — MOORE?SSKj.e j-í.

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE ANTIBIÓTICOS CARBAPENÊMICOS DITIOACETAL-SUBSTITUÍDOS NO ÃTOMO DE CARBONO 3 E DE COMPO SIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

1. CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção diz respeito a novos antibióticos carbapenémicos eficazes sob c ponto de vista biológico quando administrados por via oral, comportando um radical ditioacetal na posição 3 e aos seus sais não toxicos aceitáveis seb o ponto de vista farmacêutico. Observou-se que os compostos carbapenémicos de acordo ccm a presente invenção exibem acção antimicrcbiana. Ccnsequentemente, estes antibióticos carbapenémicos e as composições farmacêuticas que os contêm são úteis nc tratamento de infecções antibacterianas no homem e em outros animais, quer administrados individualmente quer em associação com outros antibióticos.

Na presente invenção descrevem-se também processes para a preparação dos citados antibióticos carbapenémicos e de alguns novos compostos intermédios.

2. NOMENCLATURA

A terminologia utilizada em compostos desta classe pede basear-se quer na raíz carbapenem que utiliza um sistema trivial de nomenclatura quer no nome sistemático de acordo com o Chemical Abstracts. No presente pedido de invenção, as po

siçoes estão numeradas de acordo com o sistema do Chemical Abstract, por exemplo ãcido 3-R^-4-R2-6-R^-7-cxo-l-azabiciclo /3.2.0 yhept-2-enc-2-carboxilico, como se mestra na fórmula geral

Quando na presente invenção se utiliza o termo carbapenem como uma classe de compostos, tem-se em mente a utili zação alternada deste termo e da designação ãcido 7-oxc-l-azabiciclc/^-3.2.0 yhept-2-eno-carboxilico. Contudo, em todas as circunstâncias, o sistema de numeração utilizado será o sistema de numeração de acordo com o Chemical Abstracts como se representou antes.

3. DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

São conhecidos muitos antibióticos carbapanémicos pe los especialistas da matéria. Esta classe de antibióticos ê simbolizada pela tienamicina (patente de invenção norte-americana N9 3 950 357 concedida em 13 de Abril de 1976 a Kalan et al.) que foi isolado pela primeira vez a partir de um caldo de fermentação e que exibe um amplo espectro de actividade antibiótica. Desenvolveu—se depois o imipenem (patente de invenção norte—americana N9 4 194 047 concedida em 18 de Março de 1980 a Christensen et al,), um derivado da tienamicina quimicamente mais estável.

Desenvclvimentcs mais recentes incluem 3-(tic substituídos) -4-metil-carbapenémiccs de fórmula II descritos em Shih et al., Heterccycles, 21,(1984) p.29-40.

II

A patente de invenção norte-americana NÇ 4 683 301 concedida em 28 de Julho de 1987 a Choung, diz respeite, inter alia, a compostos carbapenémicos de fórmula geral

^R + / 10

III na qual e R.^ representam, cada um, um grupo alquilo, cicloalquilo ou fenilo eventualmente substituído ou formam, considerados conjuntamente, um gru-4-

po alquilideno C^_g.

A patente de invenção norte-americana N9 4 880 922 concedida em 14 de Novembro de 1989 a Dextraze, descreve compos tos carbapenémiccs de fórmula geral

na qual F representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo, R, representa um grupo alquile C_n n representa um número inteire de 1 a 3 e representa um núcleo heterocíclico aromático pentaou hexagonal comportando um átomo de azoto no núcleo contendo mais 0 a 3 heteroátomos escolhidos entre átomos de oxigénio, enxofre ou azctc, comportando o citado núcleo aromático, eventualmente, substituintes nos átomos de carbono ou de azoto disponíveis nesse núcleo, e apresentando-se o citado núcleo ligado ao átomo de enxofre através de átomos de carbono no núcleo e ccm um átomo de azoto nc núcleo qua ternizado pelo grupo representado pelo símbolo Rg.

— os

Os pedidos de patentes de invenção europeias N 169 410 e 168 707, publicadas ambas em 2 de Julho de 1984 des-5crevem uma ampla classe de compostos carbapenêmiccs entre quais se encontram cs compostos de formula geral os

na qual R representa um ãtomo de hidrogénio cu um gru pc metilo.

Outro caso relevante da presente invenção pode encontrar-se em Satc et al., The Journal of Antibiotics, 40(4)(1987) 483-495 onde se descrevem compostos carbapenêmiccs com as seguin tes estruturas

Apesar de melhoramentos gerais na estahilidade e no

espectro da actividade antibiótica dos compostos carbapenêmicos desde o aparecimento do imipenem e da tienamicina, nãc existem ainda referências a compostos carbapenémiccs com biodis^ ponibilidade oral e acção oral significativas. Para grande sur presa, dos requerentes certos compostos ditioacetal e ditiocetal carbapenémiccs de acorde ccm a presente invenção tem mostra do biodisponibilidade oral e acção antibiótica oral significativas. Assim, constitui o objecto do presente pedido de invenção fornecer uma nova classe de compostos carbapenêmicos que se descobriu exibirem propriedades inesperadas adicicnalmente ã potente actividade antimicrobiana in vitro. Assim, cs compostos de acordo com a presente invenção são muito úteis no tratamento de doenças infeccicsas no homem e em outros animais.

RESUMO DA INVENÇÃO

A presente invenção diz respeito a novos antibióticos carbapenêmicos 3-ditioacetal-substituídos de fórmula geral

OH

(I)

COOH na qual

R_x representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo alquilo n representa zero ou o número inteiro 1 ou 2;

-Ίrepresenta um ãtomc de hidrogénio cu um grupo alauile

R2 representa um grupo alquilo ^^enllc comportando, eventualmente, como substituinte um grupe ciano,

-CONH₂, -CK₂OH, -CH₂NH₂, -CONHNH_₂ ou até 5 átomos de halogéneo, alquilo C]_,g ou alquilexi fenilmetilo comportando, eventualmente, como substituinte(s) até átomos de halogéneo cu um grupo alquilo ou alqui loxi C-J.-6 ^{ηο η}ΰο1θο fenílico; ou um grupo de fórmula ge ral -(CH») -X na qual p representa zero ou o número inz p teirc 1 e X representa um heterociclo aromático pentagonal com atê 1 átomo de enxofre, 1 átomo de oxigénio cu 4 átomos de azctc e comportando, eventualmente, como substituinte, um grupo alquilo ou ^um núcleo hetercciclo aromático hexagonal comportando até 4 átomos de azoto e, eventualmente, como substituinte um grupo alquilo

Em um outro aspecto, a presente invenção diz respeito a compostos de fórmula geral I e aos seus sais não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico e aos estéres hidrclisãveis sob o ponto de vista fisiológico ou produtos de solvatação.

Os compostos carbapenémicos representativos da presen te invenção foram seleccionados para ensaio tendo-se demonstrado que exibem acção antimicrobiana potente e biodisponibilidade oral inesperada. Outros aspectos de acordo com a presente invén ção são composições farmacêuticas que contêm os citados compostos antibióticos carbapenémicos e os métodos de tratamento que consistem em administrar os mesmos antibióticos carbapenémicos

-8ou as composiçoes farmacêuticas que os contêm.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção fornece novos antibióticos carba penémiccs 3-ditioacetal-substituídos de fórmula geral

R (O) r

^^SR2 (I) na qual ^R1' ^R2 ^{e R}3 ^{e n cs} içados definidos antes.

Os compostos de fórmula geral I de maior preferência, sãc aqueles em que c símbolo R^ representa um átomo de hidroge nic cu um grupo metilo; n representa zero ou o número inteiro 1; representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo ^Cl-6^{; R}2 ^reP^{resenta um} grupo alquile C^, fenilo comportando eventualmente como substituinte um grupo ciano, -CO2NH2, -CH2OH, -CH2NH2, -CONHNH₂ cu atê 5 átomos de halogéneo ou grupos alquilo C^_g, fenilmetilo comportando eventualmente no núcleo fenílico, como substituintes, até 5 átomos de halogéneo ou grupos alquilo C. , ou um radical de fórmula geral na qual p representa zero cu o número inteiro 1; X re presenta um grupo piridilo, furilo ou um radical de fórmula

em que Y representa um átomo de enxofre ou de oxigénio .

presente pedido de invenção fornece também compostos intermédios úteis e processos para a preparação de compostos de fõrmula geral I e dos seus compostos intermédios.

Na definição citada antes respeitante aos compostos representados pela fõrmula geral I, o termo alquil c ^Cl-6 ^refe re-se a grupos alquile de cadeia linear cu ramificada ccmc, per exemplo, grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, n-pentilo, n-hexilo, 3-metil-pentilc ou outros grupos alquílicos similares; fenilo comportando como substituintes até 5 átomos de halogéneo ou grupos alquile 0₁_θ refere-se a grupos

2,3,4,5,6-hexafluorofenilo, 2-fluoro-3-metilfenilo, 2-etil-3-metilfenilc, 4-metilfenilo, 4-bromo-3-cloro-5-metilfenilo, 4-t-butilfenilo, 3,5-diclorofenilo ou outros grupos similares, núcleos heterocíclicos aromáticos pentagonais comportando atê um ãtomo de enxofre, um ãtomo de oxigénio ou quatro átomos de azoto, refere-se a grupos tienilo, furilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, triazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, tetrazolilo, tiatrazolilo, oxatriazolilo ou outros núcleos similares; núcleos heterocíclicos aromáticos hexagonais comportando atê quatro áto mos de azoto, refere-se a núcleos aromáticos tais como grupos piridilo, pirimidilo, pirazinilo, piridazinilo, triazinilo, te-ιοί*

trazinilc ou outros núcleos similares; o termo halogéneo diz ‘ respeite a átomos de iodo, cloro, flucro ou bromo.

A expressão sais não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêubico quando utilizada na presente memória descritiva e nas reivindicações pretende incluir sais não tóxicos derivados de ácidos e de bases e sais de zwitter-iões. Sais derivados de uma base incluem sais derivados de metais inorgânicos como, per exemple, sódio, potássio, cálcio ou magnésio, sais de amónio e sais derivados de aminas não tóxicas como, por exemplo, triaalquilaminas, piridina, picolina, dibenzilamina, etanclamina, N-metilmorfolina e outras aminas que têm sido utilizadas para formar sais derivados de ácidos carboxílicos. Sais derivados de ácidos incluem sais derivados de ácidos inorgânicos como, por exemplo, cloridratos, bremidratos, iedidratos, sulfatos, fosfatos ou outros similares e sais derivados de ácidos orgânicos como, por exemplo, formatos, acetatos, maleatos, citratos, succinatos, ascorbatos, lactatos, fumaratos cu tartra tos que têm sido utilizados para formar sais derivados de aminas alcalinas.

Os esteres hidrolisãveis sob o ponto de vista fisioló gicos servem como pro-fármacos mediante hidrólise no corpo para fornecerem o antibiótico per se. Administram-se, de preferência, por via oral, uma vez que a hidrólise em inúmeras circunstâncias ocorre principalmente sob a influência de enzimas digestivos. A administração parentérica pode ser utilizada quando o éster per se ê activo ou quando a hidrólise ocorre no sangue. Exemplos de estêres hidrolisãveis sob o ponto vista fisiológico, de compostos de fórmula geral I, incluem grupos alquilo benzilo,

4-metoxibenzilo, indanilo, ftalidilo, metoximetilo, alcanoil

-11/

I ) cxi-alquilc como por exemple, grupos acetcximetilo, / pivalcilcximetilo cu propicnilcximetilo, alcoxi(C^ , )carbcnilcl-o xi-alquilo como, por exemplo, grupos metoxicarboniloximetilc cu etoxicarboniloximetilc, glicilcximetilc, fenilgliciloximetilo, (5-metil-2-cxo-l,3-dioxolen-4-il)-metilo ou outros es teres hidrelisáveis seb o ponto de vista fisiológico conhecidos e utilizáveis na química da penicilinas e das cefalosporinas. Es tes esteres preparam-se mediante técnicas convencionais conhecidas pelos especialistas.

Os compostos de acordo com a presente invenção contém inúmeros átomos de carbono assimétricos podendo assim existir sob inúmeras formas esteroequímicas. Na presente invenção inclui -se a mistura de isómeros e os esterecisómeros individuais. Os compostos de maior preferência entre todos os compostos de fórmula geral I exibem a configuração 4R, 5S ou 6S na estrutura do núcleo 1-azabiciclo/* 3.2.0 /heptano. Adicionalmente, cs substituintes na posição 3 podem comportar um átomo de carbono assimé trico e/ou um grupo sulfinilo que existe quer na configuração R quer na configuração S. Pretende-se que ambos os isómeros R e S dos substituintes existentes na posição 3 se incluam na presente invenção, por exemplo, cs isómeros R e S dos substituintes 3-/ ff (p-clorofenil)-sulf inil /-metil /-tic /, 3-f f f f (piridin-3-il)-metil /-sulfinil /-metil /-tio /, 3-f f (metilsulfi nil)-metil /-tio / e 3-f f (metiltio)-etil /-tio /.

Os novos derivados carbapenémicos, de fórmula geral I, ou os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, são antibióticos potentes contra várias bactérias gram-negativas e gram-positivas e podem, por isso, ser utilizados, por exemplo, como aditivos para rações para animais como promotores do cres-12cimentc, conservantes dos alimentos, bactericidas em aplicações industriais, por exemple em tintas de água e em ãgua branca de pasta de papel para inibir o crescimento de bactérias indesejáveis e como desinfectantes para destruir ou inibir o crescimento de bactérias indesejáveis no equipamento médico e dentário. São, contudo, especialmente úteis no tratamento de doenças infecciosas no homem e em outros animais, doenças essas causadas por bactérias gram-pesitivas ou gram-negativas.

Os compostos da presente invenção, activos sob o ponto de vista farmacêutico, podem ser utilizados isoladamente ou pedem ser formulados sob a forma de composições farmacêuticas que incluem, para além do componente activo carbapenémicc, um veiculo cu um diluente aceitável seb c ponto de vista farmacêutico. Os compostos podem ser administrados de muitas maneiras. As de maior interesse incluem as vias oral, tópica e parentêrica (injecção intravenosa ou intramuscular). As composições far macêuticas pedem ter uma forma sólida como cápsulas, comprimidos, pós, etc., ou uma forma liquida como suspensões, soluções cu emulsões. As composições para injecção, via de administração preferida, podem preparar-se sob a forma de uma dose unitária em ampolas cu em envõlucros multidose e podem conter agentes de formulação tais como agentes de suspensão, estabilizantes ou dispersantes. As composições podem encontrar-se numa forma pron ta a ser utilizada ou sob a forma de um pó para reconstituição na ocasião da administração, com um veiculo apropriado tal como ãgua esterilizada,

A dose a administrar depende, em larga medida, do com posto específico a utilizar, da via de administração, da natureza e condições do hospedeiro e do local particular e do orga-

nismo a ser tratado. Assim, deixa-se ao critério dc medico a selecção da dose preferencial e da via de aplicação. Contudo, em geral, podem administrar-se os compostos a hospedeiros mamí feres, per via oral cu parentérica, em quantidades que variam entre 5 e 200 mg/kg/dia. A administração realiza-se, normalmen te, em doses múltiplas, isto ê, três a quatro vezes por dia.

Os novos compostos carbapenémicos de formula geral I podem preparar-se mediante alquilação de um composto intermédio representado pela formula geral IV com um agente de alquilaçãc de fórmula geral V, como se pode observar no esquema A.

Esquema A

(O)

T ⁿ

SR·,

Neste esquema, os símbolos Rp' ^R2' ^3 ^{e n os} signi^ ficados definidos antes. O símbolo M⁺ representa um catião de um metal ou um átomo de hidrogénio, sendo o catião metálico preferido o catião de prata. Quando M⁺ representa um átomo de hidrogénio, a fase 1 pode realizar-se na presença uma base amínica;

a base amínica preferida ê uma tri-alquil(C. ,)-amina, sendo l-o a mais preferida a di-iscpropiletilamina. Na fórmula geral V, c símbolo Q representa grupes elimináveis como, por exemple, átomos de iodo, bromo cu cloro.

Nas fórmulas IV e VI, o símbolo P? representa um gru pc protector convencional do radical carboxilo. Os entendidos na matéria conhecem bem grupos protectores convencionais do ra dical carboxilo, que se podem utilizar na presente invenção pa ra bloquear ou proteger a função ácido carboxílico,podendo, de preferência eventualmente, eliminar-se tais grupos mediante mé todos que não originam qualquer destruição apreciável da porção restante da molécula, por exemplo, mediante hidrólise química ou enzimática, tratamento com agentes químicos de redução em condições suaves, irradiação ccm luz ultravioleta cu hidrogenação catalítica. Exemplos de tais grupos protectores do radical carboxi facilmente elimináveis incluem grupes como, por exemplo, alquilo C^_^, 2-naftilmetilc, 4-piridilmetilo, fenac_i lc, acetonilo, 2,2,2-tricloroetilo, sililo como, por exemplo, grupos trimetilsililo em t-butildimetilsililo, fenilo eventual mente substituído como, por exemplo, grupos 4-clorofenilo, tolilo cu t-butilfenilo, fenilalquilo C^_g comportando eventualmente como substituinte no núcleo, por exemplo, grupos benzilo 4-metoxibenzilo, 4-nitrobenzil-(p-nitrobenzilo), 2-nitrobenzilo, benzidrilo ou tritilo, metoximetilo, 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo, benziloximetilo, alcanoil(C^_^)-oxi-alquilo C^_g co mo, por exemplo, um grupo acetoximetilo, propioniloximetilo, alcenilo tal como um grupo vinilo ou alilo. Grupos protectores do radical carboxílico particularmente vantajosos são os grupos benzilo, 4—nitrobenzilo, 2'rnitrobenzilo, 2,4-dimeto-15-

xibenzilo, 4-metoxibenzilo cu alilo eventualmente substituído.

Outros grupos protectores do radical carboxilo apropriados encontram-se descritos em Prctective Groups in Organic Synthesis, Thecdcra W. Greene (John Wiley & Sons, 1981), Capítulo 5.

Nas fórmulas gerais V e VI, o símbolo Rg representa um grupe alquile C^ fenilmetile comportando, eventualmente, nc núcleo fenílicc, como substituintes, até 5 átomos de halcgéneo cu grupes ãlquiIÍC^_g) -oxi ou alquilo C^_g,· fenilo ccmpcrtan dc eventualmente como substituinte um grupo ciano, -CONH₂ cu até 5 átomos de halogéneo, alquilo ou alquil(C^_g)-oxi; um radical de fórmula geral

B na qual B representa um grupo funcional que se pode converter nos radicais -CH₂OH₂, -CH₂NH₂ cu -CONHNH₂? ou um radical de fórmula geral

-(CH_) -X ² P na qual p e X têm os significados definidos antes.

A conversão de um grupo representado pelo símbolo B nos radicais pretendidos realiza-se de preferência simultaneamente ccm a eliminação de um grupo protector do radical carboxilo representado pelo símbolo R_? na fase 2. Por exemplo, quando o símbolo R^ representa um radical p-nitrobenzilo, esta eliminação pode conseguir-se por hidrogenôlise catalítica. Relativamente aos grupos -CH₂OH, -CH₂NH₂ e -CONHNH₂ que se podem con-16-

( verter durante a hidrcgenclise sãc especialmente convenientes os percusores -CI^OCC^PNB, -CK₂ ^N3 ou -CONKNHCC^PNB, respectivamente.

Nas formulas gerais I e II , o símbolo R_Q representam um átomo de hidrogénio ou um catião de um sal derivado de uma base. Por exemplo, quando a eliminação de um grupo protector representado pelo símbolo R^ se realiza na presença de um catião de só dic cu de potássio, c símbolo R_n representa também um catião de sódio ou de potássio, respectivamente. Eventualmente, pode oxidar -se um átomo de enxofre atê â obtenção de um grupo sulfinilo ou sulfonilo na fase 3 utilizando uma técnica corrente na química da especialidade.

Os compostos intermédios comuns, representados pela fór mula geral IV no esquema A na qual M⁺ representa c catião prata ou um átomo de hidrogénio, podem preparar-se mediante as sequências reaccionais representadas nos esquemas B e C, respectivamente .

.·*/...

IV’

Nus esquemas B e C cs símbolos R₁ e R_g têm os significa des definidos antes. A conversão de um composto de fórmula geral VII em um composto de fórmula geral VIII pode realizar-se facilmente cem ClPO(OPh)₂ e N,N-di-iscpropiletilamina (DIPEA). 0 radi cal -OPO(OPh)₂, que ê um grupo eliminãvel, desloca-se com tetra-hidropiran-2-il-mercaptano ou TrSH na presença de uma base como, por exemplo, a di-isopropiletilamina (DIPEA). Alternativamente, desloca-se o radical -OPO(OPh)₂ com LiSH. As ligações enxofre-car bono nos compostos de fórmula geral X e IX são cindidas com nitra to de prata.

Os exemplos específicos que se seguem ilustram as fases de síntese apresentadas nos esquemas A, B e C mas não limitam o seu âmbito. Os métodos descritos podem adoptar-se com outras variantes de modo a preparar compostos incluídos na presente invenção mas não especificamente descritos. Além do mais, variações dos métodos para preparar os mesmos compostos de um modo algo diferente serão também evidentes para os entendidos na matéria.

ís abreviaturas utilizadas na presente memória descriti va são convencionais e bem conhecidas dos entendidos na matéria. Algumas destas abreviaturas são apresentadas seguidamente.

-19Abreviaturas

min h

DIPEA

THF

Ph cu

THP

PNB

Pd/C éter

DMF tritilo cu Tr

DMAP psi eq.

Ar

T.A. cu ta minute(s1 hera(s)

N,N-diiscpropiletilamina (cu mais frequentemente diisopropiletilamina) tetra-hidrofurano fenilo tetra-hidropirano p-nitrobenzile paládio sobre carvãc éter etílico dimetil-formamida trifeni1-metilo

4-dimetilamincpiridina libras por polegada quadrada equivalente(s) arilo temperatura ambiente

Descrição de alguns aspectos específicos

A menos que esteja especificado, todas as temperaturas são em graus centígrados (C). As características do espectro de ressonância magnética nuclear (RMN) referem-se a intervalos químicos (&) expressos em partes por milhão (ppm) versus o tetrametilsilano (TMS) que é tomado como padrão. As áreas relativas referidas para os vários desvios no espectro de RMN do protão correspondem ao numero de átomos de hidrogénio de um tipo funcional particular na molécula. A natureza dos des-vios sob formas múlti-20__s pias, refere-se ccmc singlete largo (sl), doblete largo (dl), tri. f . plete largo (tl) , quartete largo (qt), singlete (s), multiplete (m), doblete (d), quartete (q), triplete (t), doblete de doblete (dd), doblete de triplete (dt) e doblete de quartete (dq). Os dissolventes utilizados para a realização do espectro de RMN são perdeutercdimetilsulfoxido (DMSO-dg), ãgua deuterizada (D2O), deu teroclcrcfõrmio (CDCl^) e outros dissolventes deutériccs convencionais. A descrição do espectro infra-vermelho (IV) inclui apenas números de onda de absorção (cm ^) com um valor de identificação de grupo funcional. Celite é uma marca registada da JohnsManville Products Corporation para terra de diatomãceas.

EXEMPLO 1 ( 4R, 5S, 6S)-6-/* 1' (R)-hidroxietil J⁷-4-metil-3-prata-mercaptc-7-oxc-l-azabiciclo/‘ 3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilato de p-nitroben-

Método I

Fase A.

(4R,5S,6S)-6-/*1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ (tetra-hidropiran-2-il)-tio 7-7-oxo-l-azabicilc-/ 3.2,0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo ·»·./«· Ί

Gota a gota, tratcu-se uma solução gelada (banho de me tanol gelado) de 41,33g (114,2 mmole) de (2R, 4R, 5S, 6S)-6-/ l' (R)-hidrcxietil y~4-metil-3,7-dioxo-l-azabiciclc/ 3.2.0 yheptan-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 300 ml de acetonitrilo anidro, ccm 27,4 ml (131 mmole) de ClPO(OPh)₂ θ 24,0 ml (137 mmole) de di -isoprcpiletilamina. Agitcu-se a mistura durante 30 minutos para permitir a formação dc fosfato de enol que se tratou depois, gota a gota, com 15 ml (137 mmole) de tetra-hidrcpiran-2-il-mercaptano e ccm 25 ml (143 mmole) de di-isopropiletilamina. Agitou-se depois a mistura durante 90 minutes a uma temperatura compreendida entre -5 e 0°C, tratcu-se novamente com mais 3,7 ml(34 mmole) de tiol e 6 ml(34 mmole) de di-isopropiletilamina e deixou-se em repouso du rante 18 heras â temperatura de -20°C. Diluiu-se com 600 ml de ãgua gelada e extraíu-se com 3 x 400 ml de acetato de etilo. Reuniram-se os extractos de acetato de etilo, lavaram-se ccm 400 ml de ãcj^ do clorídrico IN gelado, 400 ml de ãgua gelada, 400 ml de uma solu ção aquosa 1M gelada de carbonato de hidrogénio e sódio e 400 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio e trataram-se com carvão activado neutro. Diluiu-se c resíduo resultante após a evaporação do dissolvente com 70 ml de acetato de etilo e com 750 ml de éter de petróleo de modo a observar-se a precipitação do composto do título. Repetiu-se este processo duas vezes para se obter 54,3g (rendimento de 100%) do

-22compcsto puro pretendido,

IVÍCH.CIJV¹ : 3600-340Q (OH), 1770 e 1715 cm¹ (C=0) ?

Λ TTlclX

RMN¹H(CDC1₃, 200 ΜΗΖ)^; 8,22, 8,15 (2H, m, PNB-H), 7,67-7,6 (2H, m, PNB-H), 5,5, 5,45, 5,25, 5,17 (2H, ABq, J = 14 Hz, ΟΗ₂~ΡΝΒ), 4,3-4,2 (1H, m, H-l'), 4,2 (1H, dd, J = 2,7 Hz, J = 6,2 Hz, K-5), 4,15-3,9 (1H, m, H-2 THP), 3,75-3,4 (3H, m, H-4 e CH₂O), 3,05 (1H, dd, J = 2,7 Hz, H-6), 2,0-1,5 (7H, m, OH, (CH^), 1,37 (3H, d, J = 6,3 Hz, CH₃), 1,29 ppm (3H, d, J = 7,3 Hz, CH₃).

Fase B.

(4R, 5S,6S)-6-/* 1'(R)-hidrcxietil y-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo-/ 3.2.0 J⁷hept-2-eno-2-carbcxilatc de p-nitrcbenzilo

Tratou-se uma solução gelada (banho de gelo) de 52,7g (114 mmole) de (4R,5S, 6S)-6-/* 1 (R)-hidroxietil y-4-metil-3-/ (te tra-hidropiran-2-il)-tio ./-7-oxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 250 ml de acetonitrilo anidro, com uma solução gelada de 29,3g (171 mmole) de nitrato de prata em 250 ml de metanol e 13,8g (171 mmole) de piridina. Agitou-se a mistura resultante durante 30 minutos e verteu-se depois sobre 500 ml de ãgua gelada e energicamente agitada. Separou-se o sólido resultante por filtração e triturou-se no seio de 500 ml de c

-23ãgua gelada. Separcu-se ncvamente este sclidc por filtração, lavou-se com 500 ml de ãgua gelada e 2 x 500 ml de éter e secou-se obtendo-se 55g (rendimento de 99,5%) do composto do título sob a forma de um sclidc,

IV(Nujcl)s) : 3700-3200 (OH), 1775, 1670 (C=O) e 1520 cm TUciX (NO

Método II rase A.

(4R, 5S, 6S)-6-/ 1' (R)-hidrcxietil y-4-metil-3-/ (trifenilmetil)-tio _/-7-cxo-l-azabiciclc-/’ 3.2.0 ,/hept-2-enc-2-carboxilatc de p-nitrobenzilo

Tratcu-se uma solução gelada (banho de gelo) de 4,8g (9,6 mmole) de (4R,5£,6S)-3-difenoxofcsfcroscxi-6-/’ 1' (R)-hidroxietil y-4-metil-7-oxc-l-azabiciclc/’ 3.2.0 _/hept-2-enc-2-carboxilatc de p-nitrcbenzilo em 50 ml de dimetilformamida ccm 7,96g (28,8 mmole) de TrSH e 5,1 ml (29,0 mmole) de di-iscpropiletilamina que se adicionou gota a gota, agitando-se, durante 30 minu tos. Retirou-rse o banho de gelo e agitou-se a mistura durante 48 horas depois do que se diluiu com 50 ml de ãgua gelada. Extraíu-se a mistura aquosa com 4 x 20 ml de uma mistura de acetato de etilc/éter (1:1). Reuniram-se as fases orgânicas, lavaram-se com 3 x 50 ml de ãgua gelada e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Fez-se passar o resíduo através de uma almofada de 125g de gel

-24de sílica utilizando como agente de eluição, inicialmente, clore to de metileno e depois, sucessivamente, acetato de etilo a 5,10 e 15%/clcreto de metileno. Obtiveram-se l,15g (rendimento de 19%) de composto dc título.

IV(CH„C1„)V : 3600, 3300 (OH), 1775, 1730 (C=O) z z mdx e 1520 cm^-1 (NC₂) ;

ΚΜΝ¹?; (CDC1₃, 200 MHz) á : 8,27-8,02 (2H, m, PNB-H),

7,60-7,4 (2H, m, PNB-H), 7,4-7,1 (15H, m, tritilo Η), 5,52,

5,35, 5,18, 5,00 (2H, ABç, J = 13,8 Hz, CH₂), 4,25-3,9 (1H, m,

H-l'), 3,57 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 8,9 Hz, E-5), 3,07 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 7,2 Hz, H-6), 2,7-2,25 (1H, m, H-4),

1,70 (1H, bs, OH), 1,26 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH₃), 0,98 ppm (3H, d, J = 7,1 Hz, CE ).

/

Fase B.

(4R,5S,6S)-6-3 1'(R)-hidrcxietil y-4-metil-3-prata-mercapto-7-exc-l-azabiciclo-/ 3.2.0 _/hept-2-eno-2-carboxilatc de p-nitrobenzilo

Gota a gota, tratou-se uma solução gelada (banho de gele de 842 mg (1,36 mmole) de (4R,5£,6S)-6~3 1'(R)-hidroxietil 3~ -4-metil^3-/‘ (trifenilmetil)-til ./-7-oxc-l-azabiciclo/' 3.2,0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 5 ml de acetonitrilo anidro, com 345 mg (2,03 mmole) de nitrato de prata em 5 ml

-25de metanol e 0,16 ml (2,03 mmole) de piridina. Após a adição, agi_ tcu-se a mistura durante 90 minutos ã temperatura de 5'C e dilui-se depois com 10 ml de água gelada e agitou-se durante mais 5 mi. nutos. Separou—se c sólido per filtração, laveu-se com 2 x 20 ml de êter e seccu-se num vácuo elevado. Obtiveram-se 604 mg (rendimento de 92%) de um sólido castanho claro.

IV(NujcW : 3650-3200 (OH), 1760, 1670 (c=O) e 1520 cm^_1(NO_n).

rnax z

EXEMPLO 2 ( 4r, 5S,6S)-6-/* 1¹(R)-hidroxietil /-4-metil-3-prata-mercaptc-7-oxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilatc de alilo

Fase A.

(4R, 5S, 6S)-6-/ 1¹ (R)-hidroxietil _/-4-metil-3-/ (tetra-hidropiran-2-il)-tio _/-7-oxo-l-azabiciclo-/ 3.2.0 _/hept-2-eno-2-carbcxilato de alilo

-26c

Gota a gota, tratou^se uma solução gelada (banho de metanol gelado) de 13,6g (50,8 mmole) de (2R, 4F., 5S , 6S)-6-/ 1¹ (R) -hidroxietil J^r-4-metil-3,7-dioxo-l-azabiciclo/* 3.2,0 ./heptanc-2-carboxilato de alilo em 200 ml de acetonitrilo, com 11,8 ml (57,1 mmole) de ClPOÍOPh)^, 10,3 ml (58,7 mmole) de di-isopropiletilamina e 15 mg de 4-dimetilaminopiridina e agitou-se a mistura durante uma hora a uma temperatura compreendida entre -10° e 0°C.

Na solução resultante de fosfato de enol fez-se borbulhar durante 15 minutos árgon gasoso e tratou-se essa solução depois, gota a gota, sucessivamente, ccm 6,6g (56 mmole) de tetra-hidropiran-2-il-mercaptano em 25 ml de acetonitrilo e 10,7 ml (61,0 mmole) de di-iscpropiletilamina. Agitou-se a mistura durante uma hora â tem peratura de 5^C e durante 20 horas a uma temperatura próxima de

O

C. Arrefeceu-se a mistura com um banho de gelo, tratou-se com mais 1,5 g (12,7 mmole) de tiol em 5 ml de acetonitrilo e 2,28 ml (13,0 mmole) de di-isopropiletilamina e agitou-se durante 8 horas * O a temperatura de 22 C depois durante 18 horas a temperatura de

C. Diluiu-se a mistura com 250 ml de agua gelada e extraíu-se com 3x200 ml de acetato de etilo. Reuniram-se os extractos de ace tato de etilo, lavaram-se com 1 x 200 ml de uma solução aquosa 0,5N gelada de ácido clorídrico, 1 x 200 ml de ãgua, 1 x 200 ml de uma solução aquosa 0,5M de carbonato de hidrogénio e sódio, x 200 ml de água e 200 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Fez-se passar o resíduo através de uma almofada de 200 g de gel de sílica utilizando como agente de eluição, inicialmente, cloreto de metileno e depois, sucessivamente, acetato de etilo a 2%, 5%, 10¾ e 25%/cloreto de metileno. Obtiveram-se 13,9 g (rendimento de 75%) do composto do título contaminado com algum fosfato de enol sob a forma

de diasterecisómercs. /

IV(purc)^ : 3600-3200 (OH), 1770 e 1720 cm ^{v ;} ' ^r ’ max '

RMN¹H(CDCl₃,200 MHz) ξ : 6,1-5,7 (lH, m, H vinílico), 5,5-5,1

(2H,	m,	H vinílico)	1, 4,9-4,5	(2H, m, CH-vinilo), 4,3-3,9
(4H,	m,	H-l ’ , H-5,	THP-H2,6),	3,7-3,4 (2H, m, THP-H6, H-4), 3,3
-3,2	(1H	:, m, H-6) ,	2-1,5 (7H,	1 m, (CH3)3 e HO), 1,3-1,1 ppm
(6H,	m,	ch3).
Fase	B.

(4R, 5S,6S)-6-/* 1’ (R)-hidroxietil y-4-metil-3-prata-mercapto-7-cxe-l-azabiciclc-/ 3.2.0 yhept-2-enc-2-carboxilatc de alilo

Durante dez minutes fez-se borbulhar azoto através de uma solução de 442 mg (2,6 mmole) de nitrato de prata em 9 ml de ãgua, depois do que se adicionou 0,08 ml (1,0 mmole) de piridina em 4 ml de êter. A esta mistura, agora energicamente agitada, adicionaram-se 190 mg (0,52 mmole) de uma solução de (4R,5S,6S)-6-/ 1’(R)-hidroxietil y-4-metil-3-/’ (tetra-hidropiran-2-il)-tio y~7-oxo-l-azabiciclc/' 3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilatc de alilo em 3 ml de éter e continuou-se a agitação durante 30 minutos no escuro. Separou-se o precipitado resultante por filtração,lavou-se com 10 ml de ãgua e 2 x 10 ml de êter e secou-se, obtendo -se 186 mg (rendimento de 92%) do composto do título sob a forma

3700-3200 (OH), 1760 e 1670 cm (C=O)

-28de um sólido castanho

IV(Nujol)V max

EXEMPLO 3 (5R, 6S)-6^-/ 1' (R)-hidroxietil y-3-prata-mercapto-7-oxc- 1-azabiciclo£ 3.2.0 _j/hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrcbenzilc

Fase A.

(5R, 6S)-6-/” 1' (R)-hidroxietil 3~3-£ (trifenilmetil)-tic ^7-7-oxo-1-azabiciclo-/* 3.2.0 /hept-2-eno-2-carbcxilato de p-nitrebenzilc

Uma solução gelada (banho de gelo) de 3,48 g (10 mmole) de (2P., 5R, 6S)-6-/^- 1' (R)-hidroxietil /-3,7-dicxo-l-azabiciclc/3.2.0 /heptanc-2-carboxilato de p-nitrobenzilc em 40 ml de acetonitrilo tratcu-se, inicialmente, com 2,33 ml (11,0 mmole) de ClPOÍOPh^ ® depois com 1,96 ml (11 mmole) de di-isopropiletilamina e agitou-se

-29durante uma hora. À solução resultante de fosfato de encl adicio naram-se, gota a gota, 8,3 g (30 mmole) de TrSH e 5,3 ml (30 mmo le) de di-isopropiletilamina. Agitcu-se a mistura resultante durante 21 horas a uma temperatura próxima de 22^C, diluiu-se ccm 300 ml de acetato de etilo, lavou-se com 4 x 200 ml de ãgua, uma solução saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. Fez-se passar o resíduo através de uma almofada de 125 g de gel de sílica utilizando como agente de eluição cloreto de me tilo e acetato de etilo. Obtiveram-se 4,87 g (rendimento de 80%) do composto do título.

IV(CH.C1.)V : 3600 (OH), 1770, 1720 (C=O) e 1520

2 'max cm ¹ (N0₂);

RMN¹H(CDC1₃, 80MHz)<$: 8,28-8,02 (2H, m, PNB-H) ,

7,77-7,51 (2K, m, PNB-H), 7,46-7,23 (15H, m, H aromático), 5,63, 5,45, 5,29, 5,11 (2H, ABq, J - 14 Hz, CH₂PNB), 4-3,5 (2H, m, H-l’ e H-5), 2,84 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J - 7,0 Hz, H-6), 2,71, 2,59, 2,48, 2,36, 2,19, 2,07, 1,96, 1,84 (2H, m, CH₂), 1,5 (1H, bs, OH), 1,25 ppm (3H, d, J = 6,3 Hz, CH₃).

Fase B.

(5R,6S)-6-/' 1' (R)-hidroxietil y-3-prata-mercaptc-7-oxc-l-azabiciclc/* 3.2.0 yhept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrobenzilc

-30Tratcu-se uma solução gelada (banho de gelo) de 225 mg (0,37 mmole) de (5R,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil J-2-f (trifenilmetil)-tic y-7-oxc-l-azabiciclc/^- 3.2.0 yhept-2-enc-2-carbcxilato de p-nitrobenzilo em 1 ml de acetonitrilo, com uma solução 0,15 M de nitrato de prata em 2,7 ml (0,41 mmole) de metanol e 34 jil (0,41 mmole) de piridina depois do gue se agitou durante 25 minutos. Diluiu-se a mistura com 5 ml de água gelada e separou-se o precipitado por filtração. Lavou-se o sólido resultante com 1x5 ml de água, 4 x 10 ml de éter e secou-se em vácuo intenso durante 18 horas, obtendo-se 155 mg (rendimento de 89%) do composto do título sob a forma de um sólido amarelo.

IV(Nujol)V = 3600-3200 (OH), 1775, 1670 (C=O) e 1520 cm msx (NO-).

EXEMPLO 4 (5R,6S)-6-/~ 1' (R)-hidroxietil J-3-f /* (metiltio)-metil y-tio J-Ί-oxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 J^yhept-2-enc-2-carbcxilatc de sódio ou de potássio (Ia)

SCH

Fase A.

(5R, 6S)-6-/ 1' (R)-hidrcxietil f (metiltio)-tio ^/-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2 . 0 yhept-2-eno-2-carbcxilatc de p-nitrobenzilo

Tratou-se uma solução de 422 mg (0,900 mmole) de (5R,6S)-6-f 1' (R)-hidroxiet il J^?-3-prata-mercaptc-7-cxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 hept-2-enc-2-carbcxilatc de p-nitrcbenzilo em 10 ml de acetonitrilo, com 87 yal (0,99 mmole) de CICH^SCH^ e agitcu-se durante três horas. Concentrou-se depois a mistura no vácuo e fez-se passar através de uma coluna de cromatografia rápida contende 20 g de gel de sílica utilizande-se ccmo agente de eluição acetonitrilo. Obtiveram-se 140 mg (rendimento de 37%) do composto do título.

IV(CH_Cl_n)^ ; 3680, 3600-3400 (OH), 1780, 1700

2 max (C=O) e 1525 cm’¹ (NO₂>;

RMN¹H(CDC1₃,200MHz) << : 8,22-8,18 (2H, bd, J=8,7 Hz, PNB-H) ,

7,65, 7,61 (2H, bd, J=8,7 Hz, PNB-H), 5,53, 5,46, 5,26, 5,19 (2H, ABq, J=13,9 Hz, CH₂PNB), 4,3-4,1 (2H, m, H-l’ e H-5) ,

3,93, 3,855, 3,846, 3,776 (2H, ABq, J=14,0 HZ, £CH₂S), 3,52,

3,47, 3,43, 3,38, 3,28, 3,24, 3,20, 3,15 (2K, m, CH₂~4), 3,21 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,7 Hz, H-6), 2,22 (3H, s, SCH₃), 1,67 (1H, bd, J=4,8 Hz, OH), 1,35 ppm (3H, d, J=6,2 Hz, CH^).

£ £ (metiltic)-metil^/-tic £-eno-2-carboxilato de sódio ou

-32Fase Β.

(5R, 6S) -β-*·£ 1 ’ (R) -hidrcxietil £-3 -7-cxc-l-azabiciclc/* 3.2.0 y*heptde potássio (Ia)

t

Durante uma hora, submeteu-se a hidrogenólise, ã pres2 sao de 3,164 kg/cm (45 psi) e a uma temperatura compreendida en tre 15 e 20^0, utilizando como catalisador paladio a 10% sobre carvão, uma solução de 300 mg (0,700 mmole) de (5R,6S)-6-£ 1'(R)-hidroxietil £-3-£ £ (metiltio)-metil^/-tio y-7-oxc-l-azabiciclo £ 3.2.0 yhept-2-enc-2-carbcxilatc de p-nitrcbenzile em 25 ml de tetra-hidrofurano, 25 ml de éter e 25 ml de uma solução 0,05M de um tampão de fosfato de sódio monobásico/hidrõxido de sedio ou fosfato de potássio monobásico/hidrõxido de potássio. Separcu-se o catalisador por filtração e lavou-se com 5 ml de ãgua. Extraiu-se a fase orgânica com 2 x 5 ml de um tampão a pH 7,0. Reuniram-se as fracções aquosas, lavaram-se com 2 x 20 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna jiBcndapak (Ζ^θ de fase inversa utilizando 30 g do material da coluna juBondapak (Ζ^θ de fase inver sa e como agente de eluição, inicialmente, ãgua e depois acetonitrilo a 2%/ãgua. Obtiveram-se 180 mg (rendimento de 78%) do composto do titulo sob a forma de um sólido esbranquiçado.

UV1 302 (8,900) .

^Anax

1^/2=20 horas (pH 7,4).

IV(Nujol)V 3600-3200 (OH), 1750 e 1590 cm'¹ (C=O);

^J max

RMN¹H(D₂O, 200 MHz) ¢^:4,3-4,17 (2H, m, H-l’ e H-5), 4,05, 3,98, 3,94, 3,87 (2H, ABq, J=13,7 Hz, SCH₂S), 3,46, 3,40, 3,37, 3,33, 3,27, 3,23, 3,19, 3,14 (2H, m, CH₂~4), 3,42 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=5,9 Hz, H-6), 2,23 (3H, s, SCH_?), 1,29 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH^).

EXEMPLO 5 (4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil 7-4-metil-3-/*/ (metiltio)-metil 7-tlo J -7-oxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 hept-2-enc-2~carbcxilato de sódio cu de potássio (Ib)

sch₃

Fase A.

(4R, 5S, 6S)-6-/*1' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/’ £ (metiltio)-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/* 3,2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo

Uma solução gelada (banho de gelo) de 4,85 g (10,0 nunole) de (4R,5S,6S)-6-/*1'(R)-hidrcxietil /-4-metil-3-prata-mercapto -7-cxc-l-azabiciclo/*3.2.0 /hept-2-enc-2-carbcxilato de p-nitrobenzilo em 40 ml de dimetilformamida, tratou-se, lentamente, com uma solução de 1,04 ml (12,5 mmole) de sulfureto de icdcmetil-metilo em 5 ml de dimetil-fcrmamida e 2,0 g (15 mmole) de iodeto de lítio. Agitou-se a mistura durante uma hora à temperatura de 5°C, diluiu-se com 100 ml de ãgua gelada e 100 ml de acetato de etilo gelado e filtrcu-se através de uma almofada de Celite. Lavou-se esta almofada com 4x100 ml de acetato de etilo separaram-se as duas fases da solução. Extraíu-se depois a fase aquosa com 2x50 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as fases orgânicas, lavaram-se sucessivamente com 2 x 150 ml de ãgua gelada, 150 ml de uma solução aquosa gelada 0,IN de ãcido clorídrico, 150 ml de ãgua,

150 ml de uma solução aquosa 0,IM de carbonato de hidrogénio e sódio, 150 ml de ãgua e uma solução saturada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Carregou-se o resíduo numa almofada de 35 g de gel de sílica e eluiu-se, sucessivamente, com os seguintes dissolventes arrefecidos à temperatura de 0°C: inicialmente cloreto de metileno e depois acetato de etilo a 5, e 20%/cloreto de metileno. Após esta fase de purificação, obti. veram—se 2,4 g (rendimento de 55%) do composto do título.

-35IV (CH_nCl_n)V : 3680-3600 (OH), 1775, 1710 (C=O) e

2 'max

1520 cm ¹ (NO₂);

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz) (5: 8,23-8,18 (2H, m, PNB-H), 7,67, 7,62 (2H, bd, J=7,7 Hz, PNB-H), 5,54, 5,47, 5,23, 5,18 (2H, ABq, J=12,8 Hz, CH ), 4,26 (IH, dd, J=2,6 Hz, J=9,2 Hz, H-5)

4,32-4,19 (IH, m, H-l'), 4,02, 3,95, 3,78, 3,71 (2H, ABq, J=13,7 Hz, CH₂), 3,63-3,47 (IH, m, H-4), 3,26 (IH, dd, J=2,6 Hz, J=7,8 Hz, H-6), 2,21 (3H, s, CH₃), 1,357 (3H, d, J=6,3 Hz, CH₃),

1,26 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CH₃).

Fase B.

(4R, 5S, 6S)-6-/* l'(R)-hidrc xietil /-4-metil-3-/ /* ( metiltic)-metil 7-tic 7-7-oxc-l-azabiciclo/' 3.2.0 _/hept-2-ene-2-carbcxilatc de sódio (Ib')

Durante 3,5 horas e a uma temperatura próxima de 22°C, submeteu-se a hidrogenólise sobre 6 g de paládio a 10% sobre carvão, como catalisador, e a uma pressão compreendida entre 3,164

2 kg/cm e 3,516 kg/cm (45-50 psi) uma solução de 6,00 g (13,7 mmo le) de (4R, 5S, 6S) -6-/* 1¹ (R) -hidroxietil J^?-4-metil-3-/ £ (metiltic)-metil 7-tic ^7-7-cxo-l-azabiciclc/* 3.2,0 _/hept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 70 ml de tetra-hidrofurano, 70 ml de éter e 255 ml (25,5 mmole) de uma solução tampão 0,lM de fosfato monobásicc de sôdio/hidróxido de sódio a pH 7,0. Eliminou-se o ca-36talisador per filtração e lavcu-se ccm 2 x 15 ml de uma solução tampão de fosfato 0,1M a pH 7,0. Separaram-se as duas fases da solução e extraíu-se a fase orgânica ccm 2 x 15 ml de uma solução tampão a pH 7,0. Reuniram-se as fases aquosas, lavaram-se com 3 x 100 ml de éter e fizeram-se passar através de 275 g de um ma terial de cromatografia de fase inversa partisil utilizando uma coluna apropriada e como agente de eluição, inicialmente, ãgua e depois acetonitrilo a 10%/ãgua. Obtiveram-se 3,37 g (rendimento de 76%) dc composto dc título sob a forma de um sólido branco.

υνλ ^Η2θ 304 (10208). ' max

IV (Kujcl)\l max

1740 e 1580 cm (C=0)

RMí/h (D₂C, 200 MHz)<£: 4,32-4,19 (1K, m, H-l'), 4,22 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 4,11 4,04, 3,87, 3,81 (2H, AEq,

J=13,7 Hz, SCH₂S), 3,6-3,48 (1K, m, H-4), 3,44 (1H, dd, J=2,6 Hz,

J=6,2 Hz, H-6), 2,22 (3H, s, CH₃), 1,30 (3H, d, J=6,4 Hz, 0Η_β) e 1,21 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CH^).

Fase A.

(4R, 5S , 6S)-6-/” 1' (R)-hidroxietil /-^zl-metil-3-//’ (metiltio)-metil ./-tio /-7-cxc-l-azabiciclo/' 3.2.0 _/hept-2-enc-2-carboxilatc de alilo

N

CE //

CO

SAg

-37ç

Gota a gota, tratcu-se uma solução gelada (banho de me tancl gelado) de 104 mg (0,280 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1' (R)-hi drcxietil /-4-metil-3-/ (tetra-hidrcpiran-2-il)tio J-Ί-cxc-l-aza biciclo/* 3.2.0 /hept-2-enc-2-carbcxilato de alilo em 1 ml de metanol, ccm uma solução de 145 mg (0,85 mmole) de nitrato de prata em 3 ml de metanol e 0,045 ml 90,560 mmole) de piridina e agi tou-se durante cinco minutos â temperatura de -15 C. Para se observar a precipitação do sal de prata formado adicionaram-se 15 ml de éter. Decantou-se c dissolvente e triturcu-se o sólido no seio de 2 x 10 ml de éter. Seccu-se depois o sal de prata em vãcuc intenso e tratou-se com 2 ml de acetonitrilo. Arrefeceu-se a solução de acetonitrilo até à temperatura de -20 C (banhe de metanol gelado) e tratou-se ccm 0,10 ml (1,2 mmole) de ClCI^SCH^. Agitou-se a mistura resultante durante uma hora a uma temperatura compreendida entre -15° e 0°C, fez-se passar através de uma almofada de 2,5 g de gel de sílica utilizando como agente de elui ção acetato de etilo e ccncentrou-se para se obter um resíduo que se colocou em pratos de cromatografia em camada fina preparativa utilizando como agente de eluição cloreto de metileno/acetato de etilo (1:1). Isolou-se c composto do título com um baixe rendimen to, sob a forma de um óleo.

IV (purc)i/ : 3600-3300 (CH) , 1770 e 1710 cm^-1 (C=O);

ΡΜΝ^ΣΗ (CDC1₃, 200 MHz) £ : 6,02-5,84 (1H, m, H vinílico), 5,47-5,20 (2H, m, H vinílico), 487-4,61 (2H, m, CH₂-Vinilo), 4,3-4,15 (1H, m, H-l'), 4,21 (IH, dd, J=2,4 Hz, J=8,8 Hz, H-5), 3,99, 3,92,

3,76, 3,69 (2H, ABq, J=13,7 Hz, SCH₂S), 3,6-3,4 (IH, m, H-4),

3,225 (IH, dd, J=2,4 Hz, J=6,9 Hz, H-6), 2,21 (3H, s, SCH₃),

1,335 (3H, d, J=6,2 Hz, CH₃), 1,24 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, 0Η_β).

-38Fase Β.

(4R, 5S , 6S) -6-f 1' (R)-hidroxietil J⁷-4-metil-3-/’ f (metiltio)-metil _/-tic y’-7-cxc-l-azabiciclc/ 3.2.0 _/hept-2-eno-2-carbcxilatc de potássio (Ib¹')

2,0 q (5,45

Tratou-se o sal de prata obtido a partir de mmole) de (4R,5S,6S)-6-/*1' (R)-hidroxietil/-4-metil-3-/' (tetra-hi dropiran-2-il)-tio J^r-7-oxo-l-azabiciclc/’ 3.2.0 yhept-2-enc-2-carboxilatc de alilo, de acordo com a técnica descrita antes, com ClCF^SCHg, para se obter o (4R, 5S, 6S)-6-f 1¹ (R) -hidroxietil £-4-metil-3-/' £ (metiltio)-metil J7-tio £-Ί-oxo-l-azabiciclc/* 3.2.0^7hept-2-eno-2-carboxilato de alilo que, sem se isolar, se arrefeceu até à temperatura de 5°C (banho de gelo) e se tratou ccm 381 mg (0,33 mmole) de Pd(PPhg)^, 372 mg (1,42 mmole) de PPh^ e uma solução de 3,6 g (19 mmole) de etil-hexanoato de potássio em 20 ml de acetato de etilo. Dissolveu-se novamente o precipitado resultante adicionando 20 ml de acetonitrilo e continuou-se a agitação da solução durante duas horas a uma temperatura próxima de 22°C. Dissolveu-se a mistura com 50 ml de éter e extralu-se com 3 x 10 ml de uma solução tampão 0,05M de um fosfato a pH 7,4. Lavaram-se os extractos aquosos alcalinos com 2 x 25 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna C^g de fase inversa con-39-

tendc 80 g de material apropriado e utilizando como agente de eluição, inicialmente, água e depois acetonitrilo a 2Z, 5£ e 10^/água. Obteve-se c composto dc título impuro. Licfilizou-se esse composto e purificou-se novamente o pó resultante utilizando uma coluna C^g de fase inversa contendo 50 g de material apropriado e utilizando como agente de eluição, inicialmente, água e depois, sucessivamente, acetonitrilo a 2% e 5%/água. Obtiveram-se 135 mg (rendimento de 7%) do composto dc título puro cujos dados físicos se apresentaram similares acs dc sal de sódio descrito antes. Pureza: 99,94% determinada por CLEP. T^/2 75 horas (pH 7,4). T^/2

18,8 minutos (pH2).

EXEMPLO 6 (5R, 6S) , 6 ,/1 ¹ (R)-hidroxietil /-3-/* / £ (piridin-4-il)-tic /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/'3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio cu de potássio (Ic)

Fase A.

(5R,6S) -6-/· 1’ (R) -hidroxietil J-2-£ £ £ (piridin-4-il)-tio /metil /-tio /-7-cxo-l-azabiciclo/*3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrcbenzilo

Gcta a gota, tratou-se uma solução gelada (banho de gelo) de 2,5 g (5,3 mmole) de (5R,6S)-6-/ 1' (R)-hidroxietil £-3-prata-mercapto-7-oxc-l-azabiciclo/’ 3.2.0 J’hept-2-eno-2-carbcxilatc de p-nitrcbenzilo em 20 ml de dimetil-formamida, com 1,00 g (6,36 mmole) de 4-/* (clorometil)-tic ./-piridina em 5 ml de dimetil-fcrmamida depois do que se adicionaram 1,42 g (10,6 mmole) de iodeto de lítio e 1,1 ml (6,36 mmole) de di-isopropiletilamida. Agitou-se a mistura durante 24 horas a uma temperatura próxima de 22 c, depois do que se diluiu ccm 25 ml de agua e acetato de etilo e filtrou. Separaram-se duas fases da solução e extraiu-se a camada aquosa ccm 2 x 40 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as fases orgânicas, lavaram-se com 5 x 50 ml de ãgua gelada e 50 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Triturou-se c resíduo sólido obtido após evaporação do dissolvente, no seio de 25 ml de uma mistura gelada, â temperatura de 5°C, de cloreto de metileno/êter (1:1). Obteve-se c composto do título sob a forma de um sólido que se lavou com 2 x 10 ml da mesma mistura de dissolventes e se secou obtendo-se 1,47 g. Colocou-se o resíduo oleoso obtido após evaporação dc soluto mãe sobre placas de CCF preparativa utilizando como agente de eluição acetato de etilo/acetonitrilo (9:1). Obtiveram-se também 1,56 g (rendimento de 60%) do composto do título.

IV (CH_C1_O)V : 3600-3100 (OH), 1800, 1690 (C=O), e 1520 cm¹ ζ z max (NO₂);

RMN¹K (DMSO, 200 MHz) 8 : 8,43-8,39 (2H, m,

8,22-8,14 (2H, m, PNB-H), 7,67-7,63 (2H, d, 7,38-7,34 (2H, m, piridina-H3 e H-5), 5,44, (2H, ABq, J = 14,1 Hz, CH -PNB), 5,085 (1H, 4,72 (2H, SCH₂S), 4,18 (1H, dt, J = 2,7 Hz, 3,99-3,85 (1H, m, H-l'), 3,48-3,3 (2H, m, CH J = 2,8 Hz, J = 6,1 Hz, H-6), 1,12 ppm (3H,

piridina-H2 e H-6),

J = 8,8 Hz, PNB-H) ,

5,37, 5,28, 5,21 d, J = 5,0 Hz, OH),

J - 9,8 Hz, H-5), ₂-4), 3,35 (1H, dd, d, J = 6,3 Hz, CH₃) .

Fase B.

(5R,6S)-6-/* 1' (R)-hidroxietil £-3-£ £ £ (piridin-4-il)-tio _/-metil/'-tio J⁷-7-oxo-l-azabiciclo/‘ 3.2.0 _/hept-2-eno-2-carbcxilato de potássio ou de sedio (Ic)

Durante uma hora, submeteu-se a hidrogenclise ã pressão 2 de 2,812 kg/cm (40 psi) de hidrogénio, utilizando como catalisador 50 mg de paládio a 10% sobre carvão, uma solução de 750 mg (1,54 mmole) de (5R, 6S)-6-/” 1' (R)-hidroxietil J-3-£ £ £ (piridin-4-il)-tio ./-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/*’ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 40 ml de tetra-hidrofurano, ml de éter e 40 ml (2,0 mmole) de uma solução tampão 0,05M de fosfato monobãsico de sõdio/hidrõxido de sódio ou fosfato monobã sico de potãssio/hidrõxido de potássio a pH 7,0. Separou-se o ca talisador e lavou-se com 5 ml de ãgua. Diluiu-se o filtrado com 50 ml de éter e extraíu-se a fase orgânica com 2 x 5 ml de água.

-42Reuniram-se as fases aquosas, lavaram-se com 2 x 50 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna yaBondapak C^g de fase inversa contendo 40 g de material apropriado e utilizanco como agente de eluição, inicialmente, ãgua e depois acetonitrilo/ãgua sucessivamente a 5, 10 e 15%. Obtiveram-se 217 mg (rendimento de 37%) do composto do titule. Pureza: 97,9% determinada per CLEP. T¹/2 15 horas (pH 7,4).

UV^

H20 max

300 (13250) , 270 (12000) .

IV (Nujol)V : 3600-3200 (OH), 1750 e 1690 cm (C=O);

ΗΜΝ^Η (D₂O, 200 MHz) 6 : 8,37-8,33 (2H, m, piridina H-2 e

H-6), 7,41-7,38 (2H, m, piridina H-3 e H-5), 4,55, 4,481, 4,477, 4,41 (2H, ABq, J = 14,1 Hz, SCH₂S), 4,29-4,16 (1H, m, H-l’),

4,20 (1H, dt, J = 2,5 Hz, J = 6,7 Hz, H-5), 3,40 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 3,0 Hz, H-6), 3,46, 3,38, 3,33, 3,29, 3,25, 3,21, 3,17 (2H, m, CH₂~4), 1,28 ppm (3H, d, J - 6,4 Hz, CH^).

EXEMPLO 7 (4R,5S,6S)-6-/*1¹ (R)-hidroxietil /-4-metil-/* f (feniltio)-metil £-tio ^7-7-oxo-l-azabiciclo/*3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilato de sõdio ou de potássio (Id)

-43Fase A.

(4R, 5S, 6S) —6-/^ 1' (R)-hidroxietil _/-4-metil-3-/ f (fenil-tio)metn /t io J⁷-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 y’hept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrobenzilo

Tratou-se uma solução gelada (banho de gelo) de 760 mg (1,57 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/* 1'(R)-hidroxietil y~4-metil-3-prata-mercapto-7-cxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 yhept-2-eno-2-carbcxilato de p-nitrobenzilo em 25 ml de acetonitrilo, com 0,255 ml (1,9 mmo le) de sulfuretc de clorcmetilfenilo e agitou-se a mistura durante 30 minutos. Repetiu-se duas vezes seguidas a adição de 0,5 ml (3,8 mmole) de sulfureto de clorometilfenilc, per períodos de agi. tação de 30 e 45 minutos, respectivamente. Fez-se passar a mistura gelada através de uma almofada de 5 g de gel de sílica e lavou -se essa almofada de gel de silica ccm 20 ml de acetato de etilo gelado. Diluiu-se c filtrado ccm 50 ml de acetato de etilo, lavou -se com 2 x 50 ml de uma solução tampão aquosa gelada 0,05M de fosfato a pH 7,4, 1 x 50 ml de água e 50 ml de uma solução satura da de cloreto de sódio. Secou-se sobre sulfato de magnésio e concentrou-se. Fez-se passar o resíduo através de uma coluna contendo 25 g de gel de sílica mediante uma eluição sucessiva com hexano, cloreto de metileno/hexano (1:1), cloreto de metileno, acetato de etilo a 10%/cloreto de metileno e acetato de etilo a 25%/clo reto de metileno. Obtiveram-se 300 mg (rendimento de 38%) do com-44pcstc do título. ··.___y'

IV (CH„C1„)'} : 3600 (OH), 1775, 1710 (C=O) e 1525 cm'¹ z 2 max (NO₂);

RMN¹H (CDC1 , 200 MHz) & ; 8,15-8,11 (2H, m, PNB-H), 7,57, 7,53 (2H, bd, J=8,7 Hz, PNB-H), 7,39-7,18 (5H, m, H aromático), 5,46,

5,39, 5,18, 5,11 (2H, ABq, J=14,8 Hz, CH₂), 4,24, 4,17, 4,11,

4,05 (2H, ABq, J=13,4 Hz, SCH₂S), 4,24-4,11 (2H, H-l' oculto e H-5), 4,00-3,32 (1H, m, H-4), 3,195 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,8 Hz,

H-6), 1,64-1,62 (1H, bd, J=4,5 Hz, OH), 1,297 (3H, d, J=6,2 Hz,

CH ), 1,17 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CHg).

Fase B.

(4R, 5S, 6S)-6-/ 1' (R)-hidroxietil J’-4-metil-3-/’ £ (feniltic)-metil ^Z-tio J⁷-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 ,/hept-2-eno-2-carboxilato de potássio cu de sódio (Id)

Durante uma hora submeteu-se a hidrogenólise sobre 230 mg de paládio a 10% sobre carvão, como catalisador e a uma pres2 - ~ sao de 2,812 kg/cm (40 psi) de hidrogénio uma solução de 230 mg (0,46 mmole) de (4R,5S,6£)-6-/*1'(R)-hidroxietil y-4-metil-3-£ £ (fenil-tio)metil ytio y-7-oxo-l-azabiciclo/* 3,2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 10 ml de tetra-hidrofurano, 10 ml de éter e 10 ml de uma solução tampão 0,05M de fosfato

-45a pK 7,0. Separcu-se o catalisador por filtração. Separcu-se a fase orgânica e submeteu-se a uma hidrogenõlise posterior duran 2 te uma hora a pressão de 2,18 kg/cm (40 psi) utilizando 10 ml de uma solução tampão a pH 7,0 e 230 mg de paládio a 10% sobre carvão como catalisador. Repetiu-se c mesmo processo e no final da hidrogenõlise reuniram-se as três fases aquosas, lavaram-se ccm 2 x 10 ml de êter e fizeram-se passar através de uma coluna ^aBondapak Ο^θ de fase inversa contendo 23 g de material de enchimento apropriado e utilizando como agente de eluição, inicialmente, ãgua e depois acetcnitrilo/ãgua sucessivamente a 5,10 e 20%. Obtiveram-se 120 mg (rendimento de 66%) do composto do título. T^/2 - 100 horas (pH 7,4). T^/2=18,8 min. (pH 2). Pureza: 99,9% determinada por CLEP.

U'

H20

306 (10,050) , 254 (6440) max

IV (Nujol)V_max: 3600-3200 (OH), 1775 e 1600 cm’¹ (C=0)

RMN¹H (D₂O, 200 MHz) £ : 7,63, 7,36 (5H, m, H aromático),

4,45, 4,38, 4,22, 4,15 (2H, ABq, J=14,0 Hz, SCH₂S), 4,27-4,15 (1H, m, H-l’), 3,915 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 3,360 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,l Hz, H-6), 3,34-3,17 (1H, m, H-4), 1,27 (3H, d> J=6,4 Hz, CHg), 1,108 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CHg).

EXEMPLO 8 (5R,6S)-6-/ 1¹(R)-hidroxietil y-3-/ / / (piridin-2-il)-tio y~metil /-tio 7-7-oxo-l-azabicjclo/' 3.2.0 7hept-2-eno-2-carboxilato de sõdio (Ie)

-46/

(5R, 6S)-6-/ 1' (F.)-hidroxietil /-3-/ £ £ (piridin-2-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrcbenzilo

Tratcu-se uma solução gelada (banho de gelo) de 235 mg (0,500 mmole) de (5R,6S)-6-/l'(R)-hidrcxietil/-3-prata-mercapto-7-cxc-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 2 ml de dimetilformamida, com uma solução de 96 mg (0,60 mmole) de 2-/ (clorometil)-tio /-piridina em 0,5 ml de dimetilformamida seguindo-se a adição de 134 mg (1,00 mmole) de iode tc de lítio e 0,10 ml (0,60 mmole) de di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura durante 25 horas à temperatura ambiente, aproximadamente 22°C, diluiu-se com 2,5 ml de água gelada e 2,5 ml de acetato de etilo e filtrou-se. Diluiu-se o filtrado com 5 ml de água e 5 ml de acetato de etilo e extraíu-se a fase aquosa com 4 x 10 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as fases orgânicas (extractos), lavaram-se com 5 x 10 ml de água gelada e 1 x 10 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Triturou-se o resíduo no seio de tetracloreto de carbono, obtendo—se um sólido de cor bege escuro que se purificou sobre placas de CCF preparativa utilizando como agente de eluição acetato de etilo/acetonitrilo (1:1). Obtiveram-se 160 mg (rendimento de 66%) do composto do título.

-47IV (CH_C1_)V ^: 3600 (OH), 1780, 1700 (C=O) e 1525 cm'¹ (NOJ ;

2 max 2

RMN¹H (CDC1 , 200 MHz) 8 :8,47-8,44 (1H, m, piridina-H), 8,21-8,17 (2H, d, J=9,8 Hz, PNB-H), 7,64-7,60 (2H, d, J-9,8 Hz, PNB-H), 7,58-7,49 (ÍH, m, piridina H), 7,20-7,16 (ÍH, bd, J=8,l Hz, piridina-H), 7,09-7,03 (ÍH, m, piridina-H), 5,51, 5,45, 5,25, 5,18 (2H, ABq, J=13,8 Hz, CH^PNB) , 4,69, 4,62, 4,55 (2H, ABq, J=14 Hz, SCH₂S), 4,4-4,15 (2H, m, H-l' e H-5), 3,59, 3,54, 3,50, 3,45, 3,37, 3,32, 3,28, 3,23 (2H, m, ΟΗ_?), 3,24 (ÍH, dd, J=2,7 Hz, J=6,8 Hz, H-6), 1,74 (ÍH, d, J=4,8 Hz, OH) 1,375 ppm (3H, d,

J=6,3 Hz, CH₃).

Fase B.

(5R,6£)-6-/* 1' (R)-hidrcxietil ^7-3-/* /* /* (piridin-2-il)-tic _/-metil ./-tic }-7-cxc-l-azabiciclo/ 3.2.0 J^?hept-2-eno-2-carboxilato de sedie (Ie)

Durante uma hora e à temperatura de 15°C submeteu-se a . 2 hidregenolise, a pressão de 3,164 kg/cm (45 psi) de hidrogénio, utilizando como catalisador 880 mg de paládio a 10% sobre carvão, uma solução de 880 mg (1,82 mmole) de (5R,6S)-6-/ 1' (R)-hidrcxietil ./-3-/ £ £ (piridin-2-il)-tio/-metil ./-tio/-7-oxo-l-azabiciclc/*3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 50 ml de tetra-hidrofurano, 50 ml de êter e 80 ml (4 mmole) de uma solu ção tampão 0,05M de fosfato monobásico de sódio/hidróxido de só-48dio a pH 7,0. Separcu-se c catalisador per filtração e laveu-se ccm 25 ml de ãgua. Extraíu-se a fase orgânica ccm 2 x 20 ml de ãgua. Reuniram-se as fases aquosas, lavaram-se ccm 2 x 25 ml de éter e fizeram-se passar através de 75g de material apropriado accndicicnado em uma coluna ^iBcndapak C^g de fase inversa utili zando comc agente de eluição, inicialmente, ãgua e depois, suces sivamente, acetonitrilo e ãgua a 2,5 e 8%. Obtiveram-se 320 mg (rendimento de 47%) do composto dc título. Pureza: 99,9% determi nada por CLEP. T-*-/2 = 19 horas (pH 7,4) .

H20

UV;

max

298 (16100) , 246 (9_;950) .

IV (Nujol)J : 3600-3400 (OH); 1760 e 1595 cm (C=O);

RldX

ΗΜΝ-’ή (D O, 200 MHz)<f: 8,46-8,42 (1H, m, piridina-H) , 7,81-7,73 (1H, m, piridina-H), 7,50, 7,46 (1H, d, J = 8,1 Hz, piridina Η),

7,32-7,25 (1H, m, piridina Η), 4,59, 4,52, 4,50, 4,43 (2H, ABq,

J = 13,9 Hz, SCH₂S), 4,25-4,12 (2H, m, H-l' e H-5), 3,39 (1K, dd, J = 2,6 Hz, J = 5,9 Hz, H-6), 3,43, 3,38, 3,34, 3,29, 3,25, 3,21, 3,16, 3,12 (2H, m, CH₂~4), 1,285 ppm (3H, d, J = 6,4 Hz, ch₃) .

EXEMPLO 9 (4R, 5S, 6S)-6-/~ 1' (R)-hidroxietil y-4-metil-3-/~ £ £ (piridin-2-il)-tio y-metil J^-tio y-7-oxo-l-azabiciclo-/' 3.2.0 _>7hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (If)

Fase A.

(4R, 5S, 6S)-6-f 1' (R) -hidroxietil f-4 -meti 1-3-/* f f (piridin-2-il)-tio ^7-metil J^-tio _>7-7-roxo-l-azabiciclo-/’ 3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrcbenzilo

Tratou-se uma solução de 788 mg (1,62 mmole) de (4R,5S, 6S)-6-/*l'(R)-hidroxietil J^r-4-metil-3-prata-mercaptc-7-cxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 _/hept-2-enc-2-carboxilatc de p-nitrobenzilo em 7 ml de dimetil-fcrmamida, ã temperatura de 5°C (banho de gelo), com 311 mg (1,95 mmole) de 2-f (clorometil)-tio ^/-piridina em 1 ml de dimetil-fcrmamida, seguindo-se a adição de 434 mg (3,24 mmo le) de iodeto de lítio e de 0,32 ml (1,95 mmole) de di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura durante 24 horas a uma temperatura próxima de 22°C, diluiu-se ccm 25 ml de água gelada e 25 ml de acetato de etilo. Eliminaram-se os sais por filtração e lavaram-se com 10 ml de acetato de etilo. Separaram-se as duas fases da solução e extraíu-se a fase aquosa com 3 x 10 ml de acetato de etilo. Reuniram-se os extractos orgânicos, lavaram-se ccm 5 x 20 ml de ãgua gelada e 1 x 20 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Fez-se passar o resíduo através de uma coluna de 15g de gel de sílica, utilizando como agente de eluição, inicialmente, cloreto de metileno e depois, sucessivamente, acetato de etilo e cloreto de metileno a 5, 10, 15 e 25%. Obteve-se o composto do título que se purificou

-50ncvamente sobre placas CCF preparativa utilizando ccmo agente de eluição cloreto de metileno/acetato de etilo (1;1) „ Obtiveram-se 440 mg (rendimento de 54%) do composto do título puro.

IV (CH₀C1₀)J : 3600 (OH), 1775, 1710 cm'¹ (C=O) e 1525 cm^-1 z z vmsx (NO₂);

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz)<<: 8,45-8,42 (1H, m, piridina H-6), 8,19-8,13 (2H, m, PNB-H), 7,63, 7,58 (1H, d, J = 8,7 Hz, PNB-H), 7,57-7,48 (1H, m, piridina Η), 7,19-7,15 (1H, d, J = 8,1 Hz, piridina Η), 7,08-7,01 (1H, m, piridina Η), 5,51, 5,44, 5,72, 5,15 (2H, ABq, J = 13,8 Hz, CH₂~PNB), 4,74, 4,68, 4,60, 4,54 (2H, ABq J = 13,2 Hz, SCH₂S), 4,25 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J - 9,1 Hz, H-5), 4,3-4,2 (1H, m oculto, H-l'), 3,68-3,53 (1H, m, H-4), 3,28 (1H, dd, J = 2,5 Hz, J = 6,8 Hz, H-6), 1,37 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH₃), 1,34 ppm (3H, d, J = 7,3 Hz, CH-j) .

Fase B.

(4R, 5S , 6S)-6-/* 1' (F.)-hidrcxietil /-4-metil-3-/' 3 3 (piridin-2-il)-tio /-metil ./-tio /'-7-oxc-l-azabiciclo/' 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (If)

Durante uma hora, submeteu-se a hidrogenõlise à pressão 2 de 3,164 kg/cm (45 psi) de hidrogénio e a uma temperatura compreendida entre 15 e 22°C, utilizando 435 mg de paládio a 10% so-51bre carvão como catalisador, uma solução de 435 mg (0,368 mmole) de (4R. 5S , 6S )-6-/* 1' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ £ £ (piridin-2-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxc-l-azabiciclc/*3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 35 ml de tetra-hidrofuranc, ml de éter e 35 ml de um tampão de fosfato 0,05M a pH 7,0. Di luiu-se a mistura com 20 ml de êter e separcu-se o catalisador por filtração e lavou-se com 10 ml de água. Separaram-se as duas fases da solução e extraíu-se a fase etérea com 2 x 5 ml de água. Reuniram-se as camadas aquosas, lavaram-se com 3 x 20 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna jiBcndapak C^g de fase inversa contendo 30 g de material apropriado e utilizando como agente de eluição, inicialmente, água e depois, sucessivamente, acetonitrilo e água a 2,5,8 e 10%. Obteve-se o composto do título contaminado com carvão. Liofilizou-se c produto e tratou-se o pó resultante ccm água e fez passar outra vez através de uma pequena almofada (5 g) do material apropriado para realizar uma croma tografia de fase inversa ^Bondapak Ο^θ utilizando inicialmente como agente de eluição água e depois, sucessivamente, acetonitri lc e água a 2,5 e 10%. Obtiveram-se 85 mg (rendimento de 25%) do composto do título puro. T^/2: 79 horas (pH 7,4). T^/2: 36 min. (pH 2). Pureza: 99,2% determinada por CLEP a 298 nm.

UV·

H20

298 (13500), 246 (8990).

max

IV (Nujol)J max

3600-3200 (OH), 1750 e 1600 cm (C=0);

RMN¹H (D₂O, 200 MHz ) S ' 8,4 8-8,39 (1H, m, piridina H-6), 7,82-7,73 (1H, m, piridina-H), 7,53, 7,49 (1H, d, J=8,0 Kz, piridina H), 7,34-7,27 (1H, m, piridina-H), 4,60, 4,53, 4,47, 4,40 (2H, ABq, J=13,9 Hz, SCH₂S), 4,30, 4,27, 4,24, 4,21, 4,17 (1H, 5 linhas, H-l'), 4,10 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 3,51-3,36 (1H, m,

Η-4), 3,42 (1Κ, dd, J=2,6 Hz, J=6,4 Hz, E-6), 1,29 (3H, d, J=6,4

Hz, CH₃) e 1,19 ppm (3H, d, J=7,l Hz, CH₃).

EXEMPLO 10 (4R, 5S, 6S)-6-/* 1' (R)-hidrcxietil ^-4-metil-/' £ £ (piridin-4-il)-tio /-metil /-tio ^?-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 y^>hept-2-enc-2-carboxilatc de sódio ou de potássio (Ig)

Fase A.

4-£ (clorcmetil)-tio ./-piridina

Durante três horas, aqueceu-se, até uma temperatura compreendida entre 50 e 60 C uma solução de 2,28 g (18,2 mmole) de 4-metiltiopiridina, 3,0 g (23 mmole) de N-clorossuccinimida 2 2,9 ml (3,0 mmole) de piridina em 40 ml de benzeno. Deixcu-se arrefecer a mistura até à temperatura ambiente. Decantou-se o dis^ solvente e lavou-se o resíduo com 2 x 10 ml de benzeno. Reuniram-se as fases orgânicas e evapcraram-se. Fez-se passar o resíduo através de uma almofada de 40g de gel de sílica, cbtendc-se l,35g do composto dc título contaminado com o composto inicial. Purificou-se novamente o produto impuro sobre placas de cromatografia preparativa de gel de sílica utilizando como agente de eluição cloreto de ir.etileno/acetcnitrilc (1:1). Obtiveram-se 926 mg (rendimento de 32%) do composto do título puro scb a forma de um óleo amarelo.

IV (puro)J : 1570, 1540 cm ¹ (aromático); max

RMN^H (CDCl·^, 80 MHz)<f: 8,55-8,47 (2H, m, H aromático), 7,33-7,25 (2H, m, H aromático), 5,04 ppm (2H, s, CH₂).

Fase B.

(4r, 5S, 6S)-6—/* 1' (R)-hidroxietil J-4-metil-3-/* £ f (piridin-4-il)-tio y-metil /-tio ./-7-cxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 . _/hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo

Durante 20 horas agitou-se, a uma temperatura próxima de 22°C uma solução de 794 mg (1,00 mmole) de (4R, 5S, βεί-β-/'!* (R) — -hidroxietil y-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/“ 3.2.0. Jhept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo, 314 mg (1,97 mmole) de 4-/* (clorometil)-tio ./-piridina, 440 mg (3,28 mmole) de iodeto de litio e 0,345 ml (2,0 mmole) de di-isopropiletilamina em 8 ml de dimetil-formamida. Diluiu-se a mistura com 10 ml de acetato de eti

-54lo e 5 ml de ãgua e filtrou-se. Extraíu-se a fase aquosa com 2 x 5 ml de acetato de etilo. Reuniram-se os extractos orgânicos, lavaram-se ccm 4 x 10 ml de ãgua gelada e 1 x 10 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio e concentraram-se. A purificação do resíduo sobre uma placa de CCF preparativa utilizando como agente de eluição aceto nitrilo a 10% acetato de etilo forneceu 430 mg (rendimento de 52%) do composto do título,.

IV (CH.Cl/J : 3600 (OH), 1775 e 1615 cm¹ (C=O);

2 ^vmax

ΡΜΝ^Η (CDCl^, 200 MHz)5: 8,48-8,44 (2H, m, H-2, 6-piridina), 8,22 -8,18 (2H, m, PNB-H), 7,64-7,60 (2H, m, PNB-H), 7,19-7,15 (2H, m, H-3, 5-piridina), 5,51, 5,44, 5,24, 5,17 (2H, ABq, J=13,8 Hz, CH₂-PNB), 4,31 (2H, s, SCH₂S), 4,30-4,17 (IH, m, H-l'), 4,27,

4,26 (IH, parte de dd, J=2,7 Hz, parte de H5), 3,6-3,4 (IH, m, H-4), 3,29 (IH, dd, J=2,7 Hz, J=6,8 Hz, H-6), 1,7 (IH, bd, OH), 1,366 (3H, d, J=6,3 Hz, CH-j) , 1,29 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, 0Η_β) .

Fase C.

(4R, 5S, 6S)-6-/* 1 ’ (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/*/* f (piridin-4-il)-tio/-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclc/ 3.2.0. /hept-2-eno-2-carboxilato de potãssic ou de sódio (Ig)

Durante uma hora submeteu-se a hidrogenõlise sobre 663 mg de paládio a 10% sobre carvão como catalisador e a uma de pres^

-552 , sao de 2,812 kg/cm (40 psi) de hidrogénio, uma solução de 663 mg (1,32 mmole) de (4F, 5S, 6S)-6-/ 1' (P.)-hidroxietil /-4-metil-3-/ £ £ (pi ridin-4-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxc-l-azabiciclc/ 3.2.0. /hept-2-eno-2-carbcxilato de p-nitrobenzilo em 30 ml de tetra-hidrofura no, 30 ml de êter e 30 ml de uma solução tampão 0,05M de fosfato de sedio moncbásico/hidrcxido de sódio cu fosfato de potássio mono bãsicc/hidróxido de potássio a pH 7,0. Diluiu-se a mistura ccm 50 ml de êter e filtrou-se. Lavou-se c catalisador com 5 ml de uma so luçãc tampão 0,C5M a pH 7,0 e 5 ml de água. Lavou-se a camada aquo sa com 3 x 20 ml de êter e fez-se passar através de uma coluna de tiveram-se 282 mg (rendimento de 54%) do composto dc título sob a forma de um sólido amarelo. T¹/2 = 34 min. (pH 2). Pureza: 99,9% determinada por CLEP (tempo de retenção. 9,63 min., agente de elui^ ção acetonitrilo a 10%/tampão a pH 7).

max

300 (13100), 270 (11750).

IV (Nujol)/ : 1750 e 1600 cm¹;

^{J v}max '

RMN¹H (D₂O, 200 MHz)á: 8,385-8,35 (2H, m, H-2, 6-piridina), 7,45-7,41 (2H, m, H-3, 5-piridina), 4,55, 4,48, 4,47, 4,40 (2H, ABq, J=13,8 Hz, SCH₂S), 4,3-4,2 (1H, m, H-l'), 4,173 (1H, dd, J=2,6 Hz J=9,2 Hz, H-5), 3,55-3,4 (1H, m, H-4), 3,44 (1H, dd, J=2,6 Hz,

J=6,2 Hz, H-6), 1,29 (3H, d, J=6,3 Hz, CHg) e 1,21 ppm (3H, d J=7,21 Hz, CH₃).

. . . /. . ·

-56EXEMPLO 11

(5R, 65)-6-/* 1' (R)-hidroxietil ./-3-/*/* £ (piridin-3-il)-tio y~metil ./-tio y-7-oxo-l-azabiciclc/^> 3,2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Ih)

Fase A.

(5R,6S)-6-£ 1 (R)-hidroxietil £-3-£ £ £ (piridin-3-il)-tic /-metil ./-tio _/-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2,0 _/hept-2-eno-2-carbcxilatc de p-nitrcbenzilo

A uma suspensão gelada (banho de gele) de 3,0g (6,37 mmole) de (5R,6S)-6-/*1'(R)-hidroxietil ./-3-prata-mercapto-7-oxo -1-azabiciclo/* 3.2.0 _>7hept-2-enc-2-carboxilatc de p-nitrobenzilo em 30 ml de dimetil-formamida, adicionaram-se 1,22 (7,65 mmole) de 3-£ (clorometil)-tio ^-piridina em 10 ml de dimetil-formamida, l,7g (12,64 mmole) de iodeto de lítio e 1,27 ml (7,65 mmole) de

-57di-isopropiletilamina. Agitcu-se a mistura durante 24 horas a uma temperatura próxima de 22^C, depois do que se diluiu ccm 500 ml de água gelada e 250 ml de acetato de etilo e se filtrou atra vés de uma almofada de Celite. Lavou-se esta almofada de Celite ccm 5 x 200 ml de acetato de etilo e separaram-se as fases. Extraíu-se a fase aquosa com 2 x 50 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as camadas orgânicas, lavaram-se com 4 x 250 ml de água gelada e 250 ml de uma solução saturada, arrefecida, de cloreto de sódio, trataram-se com carvão activado (neutro) e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Triturou-se c resíduo sólido obtido após a evaporação do dissolvente no seio de 40 ml de cloreto de metileno/éter (9,5:0,5), separcu-se por filtração e lavou-se com 10 ml de éter, obtendo-se l,17g (rendimento de 55%) dc composto do título.

IV (CH-Cl-)^ : 3600, 3300-3100 (OH), 1790, 1685 (C=0) e 1518 cm

Z Z IRclX (NO₂);

RMN^H (acetona Dg, 200 MHz)<£: 8,64 (IH, d, J=2,2 , piridina

H-2), 8,48 (IH, dd, J=l,5 Hz, J=4,8 Hz, piridina H-6), 8,25-8,20 (2H, m, PNB-H), 7,93-7,87 (IH, m, piridina H-4), 7,79-7,74 (2H, d, J=8,8 Hz, PNB-H), 7,39-7,33 (IH, m, piridina H-5), 5,53, 5,46, 5,30, 5,23 (2H, ABq, J=14,2 Hz, CH₂-PNB), 4,56, 4,55 (2H, parte de ABq, SCH₂S), 4,34-4,23 (IH, m, H-5), 4,2-4,0 (IH, m, H-l'), 3,65, 3,61, 3,56, 3,52, 3,47, 3,43, 3,38 (2H, 7 de 8 linhas, H-4), 3,34 (IH, dd, J=2,8 Hz, J=6,6 Hz, H-6), 2,86 (s, OH), 1,26 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH₃).

» * ♦ J * * <

Fase B.

(5R,6S)-6-/* l' (R)-hidroxietil 7 / (piridin-3-il)-tio _/-metil 7-tio 7-7 -oxo-l-azabiciclo7 3.2.0 7h^ePt-2-eno-2—carboxilato de sódio (Ih)

Em um dispositivo de Parr hidrcgenou-secom agitação 2 durante uma hera a pressão de 3,164 kg/cm (45 psi) de hidrogénio e a uma temperatura compreendida entre 10°C e aproximadamente 22°C, ~ I uma solução de 400 mg (0,82 mmole) de (5R,6S)-6-71 (R)-hidroxietil ,/-3-7 7 7 (piridin-3-il)-tio /-metil J^-7-oxo-l-azabiciclc/ 3.2.0 7hsp^{t-2-eno-2-car}boxilato de p-nitrobenzilo em 30 ml de tetra-hidrofuranc, 30 ml de éter e 30 ml (1,5 mmole) de uma so lução tampão aquosa 0,05M de fosfato de sódio monobãsico/hidrõxido de sódio a pH 7,0, utilizando 400 mg de paládio a 10% sobre carvão como catalisador. Diluiu-se a mistura com 30 ml de éter e separou-se o catalisador por filtração. Lavou-se com 2 x 5 ml de uma solução tampão a pH 7,0. Separou-se a camada orgânica e extraiu -se com 2 x 25 ml de uma solução tampão. Reuniram-se as fases aquosas, lavaram-se com 2 x 25 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna de fase inversa yaBondapak Ο^θ contendo 30g de material apropriado utilizando como agente de eluição, inicialmente água e depois, sucessivamente, acetonitrilo e água a 2%, 5%, 8% e 12%. Obtiveram-se 120 mg (rendimento de 39%) do composto do título sob a for ma de um pó liofilizado. Pureza: 99,3% determinada por CLEP. T^/2 heras (pH 7,4). T¹/2 2 min. (pH 2).

K 9 Ω

UVj/ 302 (10500).

^max

IV (Nujcl)J : 3600-3100 (OH), 1745 e 1690 cm¹ (C=O); ^J ^max

RMN¹H (D₂O, 200 MHz)/: 8,64-8 (1H, m, piridina H-2), 8,06-7 (1H, m, piridina H-5), 4,43, Hz, SCH₂S), 4,27-4,15 (1H, m, J=9,0 Hz, H-5), 3,32 (1H, dd, 3,23, 3,19, 3,15, 3,07, 3,03, 1,27 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CH

62	(1H, m	, piridina	H-2), 8,5-8,46
99	(1H, m	, piridina	H-4), 7,48-7,41
, 36	, 4,30	, 4,21 (2H,	, ABq, J=14,0
H-l	') , 4,	08 (1H, dt,	, J=2,6 Hz,
J=2	,6 Hz,	J=6,0 Hz,	H-6), 3,28,

2,98, 2,94 (2H, 8 linhas, CH -4), ) .

EXEMPLO 12 (4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ £ £ (piridin-3-il)

-tio /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/* 3,2.0 /hept-2-eno-2-carboxilatc de sódio (Ii)

Fase A.

c

-60(4R,5S,6S)-6-^/1' (R)-hidrcxietil _</^L4-metil-3-// £ (piridin-3-il)-tio y-metil /-tio /-7-oxc-l-azabiciclc/’ 3.2.0 _/hept-2-eno-2-carbc xilato de p-nitrobenzilc

A uma solução gelada (banho de gelo) de l,7g (3,5 mmole) de (4R, 5S , 6£)-6-/*1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-prata-mercap tc-7-oxc-l-azabiciclc/” 3.2.0 /hept-2-eno-2-carbcxilato de p-nitrcbenzilo em 15 ml de dimetil-fcrmamida, adicioncu-se uma solução de 670 mg (4,2 mmole) de 3-£ (clorometil)-tio /-piridina e depois 940 mg (7,0 mmole) de iodeto de lítio e 0,69 ml (4,2 mmole) de di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura durante 22 horas a uma temperatura próxima de 22°C depois do que se diluiu com ãgua gelada e acetato de etilo e se filtrou através de uma almofa da de Celite. Lavou-se esta almofada de Celite ccm 4 x 20 ml de acetato de etilo e extraiu-se a camada aquosa com 2 x 40 ml de acetato de etilo. Reuniram-se os extractos orgânicos, lavaram-se com 4 x 25 ml de ãgua gelada e uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio e concentraram-se. Fez-se passar o resíduo através de uma coluna de cromatografia rã pida contendo 30g de gel de sílica utilizando como agente de elui çãc, sucessivamente, cloreto de metileno, cloreto de metileno a 10, 25 e 50%/acetato de etilo, acetato de etilo, acetonitrilo a 10 e 20%/acetato de etilo. Obtiveram—se 804 mg (rendimento de 46%)

do ccmpcstc dc título.

IV (CH_C1„)J : 3600-3200 (OH), 1775, 1710 cm'¹ z 2 max (NO₂);

RMN H (CDCl^, 200 MHz)<£: 8,66-8,63 (1H, m, piridina H-2), 8,55-8,49 (1H, m, piridina H-6), 8,23-8,17 (2H, m, PNB-H), 7,80-7,71 (1H, m, piridina H-4), 7,65-7,61 (2H, d, J=8,8 Hz, PNB-H), 7,28-7,22 (1H, m, piridina H-4), 5,52, 5,45, 5,25, 5,18 (2H, ABq, J=13,8 Hz, CH₂-PNB), 4,30, 4,22, 4,15, 4,08 (2H, ABq, J=13,5 Hz, SCH₂S), 4,3-4,22 (2H, m, H-l' e H-5), 3,54-3,39 (1H, m, H-4), 3,27 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,7 Hz, H-6), 1,84 (1H, 6s, OH), 1,36 (3H, d, J=6,3 Hz, CH₃), 1,24 ppm (3H, d, J=7,4 Hz, CH ).

Fase B.

(4R, 5S , 6S)-6-£ 1 (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ £ £ (piridin-3-il)-tic /-metil /-tio /-7-oxc-l-azabiciclo/* 3.2.0 /hept-2-eno-2-carbo xilatc de sódio (Ii)

Em um dispositivo de Parr hidrogenou-se, durante uma _ 2 hora com agitaçao a pressão de 3,164 kg/cm (45 psi) de hidrogénio e a uma temperatura compreendida entre 15° e 22°C, uma solução de 725 mg (1,44 mmole) de (4R, 5S, 6S)-6-r/1' (R)-hidroxietil /-4-metil’-3-/* £ £ (piridin-3-il)-tio /-metil /-tio /-7-cxc-l-azabiciclo/* 3.2.0 /hept—2-eno—2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 45 ml de tetra-hidrofurano, 45 ml de éter e 50 ml (2,5 mmole) de uma

L

-62solução tampão aquosa 0,05M de fosfato de sedio moncbãsico/hidrõ xido de sódio a pH 7,0, utilizando como catalisador 725 mg de pa lãdio a 10% sobre carvão. Diluiu—se a mistura com 50 ml de éter. Separou-se o catalisador por filtração e lavou—se com 2 x 10 ml de uma solução tampão a pH 7,0. Separaram-se as duas fases da so lução e extraíu-se a camada orgânica com 1 x 10 ml de uma solução aquosa tampão a pH 7,0. Reuniram-se as camadas aquosas, lava ram-se com 2 x 25 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna ^íBcndapak C^g de fase inversa contendo 75g dc material apropriado e utilizando como agente de eluição, inicialmente, ãgua e depois, sucessivamente, acetonitrilo e ãgua a 2%, 5%, 10% e 15%. Obtiveram-se 220 mg (rendimento de 39%) do composto do ti tule. Pureza: 99,6% determinada por CLEP. T^/2 74 horas (pH 7,4). T^/2 35 min. (pH 2).

UVo^H2° 302 (9350) , 258 (6000) .

^Amax

IV (Nujol)J : 3600-3200 (OH), 1740 e 1695 cm ¹ (C=0); ^y max

RMN^H (D₂0, 200 MHz)á: 8,65, 8,64 (1H, d, J=2,0 Hz, piridina H-2), 8,49 (1H, dd, J=l,2 Hz, J=3,9 Hz, piridina H-6), 3,05-8,0 (1H, m, piridina H-5), 7,48-7,41 (1H, m, piridina H-4), 4,46, 4,39, 4,22, 4,15 (2H, ABq, J=14,l Hz, SCH₂S), 4,28-4,15 (1H, m, H-l'), 3,96 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 3,38 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,1 Hz, H-6), 3,36-3,2 (1H, m, H-4), 1,28 (3H, d, J=6,3 Hz, CKg), 1,12 ppm (3H, d, J=7,2 Hz, CHg).

-63,/

EXEMPLO 13 ( (5R,6S)-6-/* 1' (R)-hidroxietil £~3-£ £ (p-clorofenil)-tio J'-metil 7-tic 7-7-cxc-l-azabiciclc/ 3,2.0 ,7hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Ij)

Fase A.

(5R,6S)-6-/' l' (P)-hidroxietil £-3-£ £ £ (p-clcrcfenil)-tio /-metil y-tio y-7-cxc-l-azabiciclo/ 3.2.0 _>7hept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrobenzilc

A uma suspensão gelada (banho de gelo) de 471 mg (1 mmo le) de (5R,6S)-6-f 1'(R)-hidroxietil /-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 ,/hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 6 ml de dimetil-formamida, adicionou-se uma solução de 0,18 ml (1,3 mmole) de sulfureto de clcrometil-4-clorofenilo, 267 mg (2 mmole) de iodeto de Iltio e 0,20 ml (1,2 mmole) de di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura resultante durante 18 horas depois do que se diluiu com 12 ml de água gelada e 12 ml de acetato de etilc e se filtrou através de uma almofada de Celite. Lavou-se esta almofada de Celite com 6 x 15 ml de acetato de etilo e sepa raram-se as duas fases da solução. Extraíu-se a fase açuosa com 3 x 15 ml de acetato de etilo. Reuniram-se os extractos orgânicos, lavaram-se com 2 x 25 ml de água gelada e 25 ml de uma solução sa turada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Triturcu-se o resíduo sólido obtido após a evaporação do dissolvente no seio de 20 ml de éter/cloreto de metileno (9:11). Obtive ram-se 355 mg (rendimento de 68%) dc composto do título sob a for ma de um sólido castanho claro.

IV (CK Cl )J : 3600-3200 (OH), 1780, 1700 (C=O) e 1520 cm

2» ά Πια 2Í.

(NO₂);

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz)<$: 8,23-8,18 (2H, m, PNB-H), 7,64, 7,60 (2H, bd, J=8,8 Hz, PNB-H), 7,39-7,25 (4H, m, aromático Η), 5,52, 5,45, 5,25, 5,18 (2H, ABq, J=13,9 Hz, CH₂~PNB), 4,3-4,16 (2H, m, H-l' e H-5), 4,16, 4,15 (2H, parte de ABq, SCH₂S), 3,47, 3,42, 3,38,

3,33, 3,22, 3,18, 3,13, 3,09 (2H, m, CH₂~4), 3,20 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,8 Hz, H-6), 1,73 (1H, bd, J=4,5 Hz, OH), 1,36 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CH₃).

Fase B.

(5R, 6S)-6-/* 1' (R) -hidroxietil J-2-£ £ £ (p-clorofenil)-tio _/-metil /-tio ./-7-cxo-l-azabiciclo/'3.2.0_/hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Ij)

co₂pnb

Em um dispositivo de Parr hidregenou-se, durante três horas ccm agitação e a uma pressão compreendida entre 3,164 e 3,516 kg/cm (45-50 psi) de hidrogénio, uma solução de 900 mg (1,73 mmole) de (5R,6S)-6—/*1' (R)-hidroxietil J-3-£ £ £ (p-clorofenil)-tio ./-metil _7-tic ^7-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrcbenzilo utilizando como catalisador 2 x 900 mg de paládio a 10% sobre carvão. Removeu-se o catalisador por filtração e lavou-se ccm 2 x 10 ml de uma solução a pH 7,0. Extraíu-se a fase orgânica com 2 x 10 ml de uma solução a pH 7,0. Reuniram-se os extractos aquosos, lavaram-se com 2 x 50 ml de êter e fizeram-se passar através de uma coluna de fase inversa jjBondapak C^g contendo 90g do material apropriado e utilizando como agente de eluição, iniciaimente, água e depois, suces sivamente, acetonitrilo e ãgua a 5%, 10% e 20%. Obteve-se c composto do título que se purificou novamente utilizando o mesmo ti_ po de coluna contendo 20g de material apropriado para cromatcgra fia de fase inversa. Finalmente obtiveram-se 212 mg (rendimento de 30%) do composto do título puro o que constitui um excelente rendimento. Pureza: 99,4% determinada por CLEP. T^/2 26 horas (pH 7,4) .

IV (NujcDyJ max

3600-3200 (OH), 1760 e 1690 cm ¹ (C=O);

RMN^H (D₂0, 200 MHz)<í: 7,57-7,39 (4H, m, H aromático), 4,39, 4,32, 4,27, 4,20 (2H, ABq, J=14,l Hz, SCH₂S), 4,27-4,13 (1H, m, H-l'), 4,04 (1H, dt, J=2,4 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 3,22 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,l Hz, H-4), 3,19, 3,14, 3,10, 3,05, 2,87, 2,83, 2,79, 2,74 (2H, m, CH₂~4) e 1,28 ppm (3H, d, J=6,4 Hz, CHg).

-66EXEMPLO 14

(4R, 5S, 6S)-6-/* 1 (R)-hidroxietil y~4-metil-3-/' £ £ (p-clorofenil)—tio/—metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclc/‘ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de sódio (Ik)

Fase A.

(4R, 5S , 6S)-6-/* 1 (R)-hidrcxietil /-4-metil-3-/’ / / (p-clorofenil)-tio ./-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/’ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carbo xilato de p-nitrobenzilo

Tratou-se uma suspensão gelada (banho de gelo) de l,5g (3,1 mmole) de (4R, 5S, 6S)-6-/* 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrcbenzilo em 15 ml de dimetil-formamida, com 0,56 ml (3,9 mmole) de sulfureto de clorometil-4-clorofenilo, seguindo-se a adição de 422 mg (6,2 mmole) de iodeto de lítio e 0,62 ml (3,72 mmole) de di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura resul tante durante 23 horas a uma temperatura próxima de 22°C depois do que se diluiu com 50 ml de água gelada e 50 ml de acetato de etilo e se filtrou para eliminar o sólido resultante. Lavou-se este sólido com 2 x 20 ml de acetato de etilo. Separou-se a fase aquosa e extraíu-se com 2 x 20 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as fases orgânicas, lavaram-se ccm 2 x 50 ml de água gelada e 1 x 50 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram -se sobre sulfato de magnésio e concentraram-se. Fez-se passar o resíduo através de uma coluna de cromatografia rápida contendo 30g de gel de silica utilizando como agente de eluição, inicialmente, cloreto de metileno e depois, sucessivamente, acetato de etilo e cloreto de metileno a 10%, 20% e 30%. Obtiveram-se 819 mg (rendimento de 49%) do composto do título sob a forma de um sólido amorfo amarelo claro.

IV (CH_oCl_)0 : 3600-3200 (OH), 1775, 1710 (C=O) e 1520 cm í. Ζ ΓΠ3 X (N0₂);

RMN¹H (CDClg, 200 MHz)<£: 8,24-8,17 (2H, m, PNB-H) , 7,66-7,58 (2H, m, PNB-H), 7,38-7,24 (4H, m, H aromático), 5,51, 5,44, 5,24, 5,17 (2H, ABq, J=13,8 Hz, CH^PNB) , 4,23 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,9 Hz, H-5) , 4,35-4,0 (1H, m, H-l') , 4,26, 4,20, 4,13, 4,06 (2H, ABq, J=13,4 Hz, SCH₂S), 3,55-3,35 (1H, m, H-4), 3,267 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,8 Hz, H-6), 1,77 (1H, d, J=4,4 Hz, OH), 1,36 (3H, d,

J=6,3 Hz, CH₃) , 1,24 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CH₃) .

u

-68Fase Β.

(4R,5S,6S)-6-/ 1' (R)-hidrcxietil /-4-meti 1-3-^/ / 3 (p-clorofenil)-tio /-metil /-tio /-7-cxc-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carbo xilato de sódio (Ik)

Em um dispositivo de Parr hidrogenou-se com agitação _ 2 durante tres heras a pressão de 3,164 kg/cm (45 psi) de hidrogénio uma solução de 800 mg (1,49 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ l'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ 3 3 (p-clorofenil)-tio /-metil /-tio/-7-oxo-l-azabiciclo/3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 40 ml de tetra-hidrofurano, 40 ml de éter e 56 ml (2,8 mmole) de uma solução tampão 0,05M de fosfato de sódio monobãsico/hidrôxido de sódio a pH 7,0, utilizando como catalisador 800 mg de paládio a 10% sobre carvão. Removeu-se c catalisador por fil tração através de uma almofada de Celite e lavou-se essa almofada com 2 x 20 ml de uma solução tampão a pH 7,0. Separou-se a fase or gânica e extraíu-se com 2 x 20 ml de uma solução tampão 0,05M de fosfato a pH 7,0. Reuniram-se as camadas aquosas, lavaram-se com 2 x 50 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna de fase inversa jiBondapak contendo 4 0g de material apropriado para este tipo de cromatografia e utilizando como agente de eluição, inicialmente, ãgua e depois, sucessivamente, acetonitrilo e ãgua a 5%, 10% e 20%. Obtiveram-se 315 mg (rendimento de 50%) do composto do titulo puro. Pureza; 99,4% determinada por CLEP. 1^/2 97 horas

-69(ρΗ 7,4).

Ρ9 Π _ϋν,ηζυ _{3θ6 (10100)ζ 262} (8050).

max

IV (Nujol)^: 3600-3200 (OH) , 1750 e 1695 cm¹ (C=O) ;

RDIN^E (D₂O, 200 MHz)ã: 7,56, 7,52 (2H, d, J=8,3 Hz, H arcmãticc), 7,44, 7,39 (2H, d, J=8,3 Hz, H aromático), 4,43, 4,36, 4,19, 4,12 (2H, ABq, J=14,0 Hz, SCH₂S), 4,3-4,15 (ÍH, m, H-l'), 3,89 (ÍH, dd, J=8,9 Hz, H-5), 3,45 (ÍH, dd, J=2,4 Hz, J=6,0 Hz, H-6), 3,30-3,16 (ÍH, m, H-4), 1,28 (3H, d, J=6,3 Hz, CH₃), 1,10 ppm (3H, d, J=7,2

Hz, CH ).

EXEMPLO 15 (4R,5S,6S)-6-/ l' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/~ / (metil-sulfinil)-metil /-tic /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Im)

Gota a gota, tratou-se uma solução gelada (banho de gelo) de 100 mg (0,31 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/*1 * (R)-hidroxietil J-4-metil-3-/“ / (metiltio) -metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0. Jhept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Ib’) em 10 ml de ãgua, com 0,03 ml (0,31 mmole) de uma solução aquosa a 3 0% de ãgua oxigenada e ag_i tou-se durante 8,5 horas à temperatura de 5 C (banho de gelo). Seguidamente fez-se passar a solução resultante através de uma coluna de fase inversa ^íBondapak C₁g contendo lOg de material apropriado

para este tipo de cromatografia e utilizando como agente de elui- f ção a ãgua. Obteve—se o composto do título sob a forma de uma mis tura de sulfõxidos diastereoiscmêricos, 78 mg (rendimento de 74%) do mesmo produto puro (pureza 99,54% determinada por CLEP) e 20 mg (rendimento de 19%) desse mesmo produto impuro (pureza: 97,6% determinada por CLEP). Proporção entre os diastereoiscmeros: 6/4; T¹/2 46 horas (pH 7,4).

UVl^H2° 296 (9600).

max

IV (Nujol)y> : 3600-3100 (OH), 1740 e 1600 cm¹ (C=O) ;

RMN¹H (DO, 200 MHz)<£ 4,56, 4,49, 3,92, 3,99 (ABq, J=14,5 Hz SCH₂S), 4,36, 4,29, 4,17, 4,09 (ABq, J=14,2 Hz, SCH₂S), 4,29-4,16 (2H, m, H-l' e H-5), 3,62-3,44 (2H, m, H-4 e H-6), 2,81 (1,8H, s, CH₃SO), 2,76 (1,2H, s, CH₃SO), 1,24 (3H, d, J=7,3 Hz CH₃) e 1,22-1,19 ppm (3H, m, CH₃).

EXEMPLO 16 (4R, 5S, 6S)-3~y /*/* (p-clorofenil)-sulfinil ./-metil ./-tio .7-6-/* 1 (R)-hidroxietil _7-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 ./hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (In)

OH

Cl

CO₂Na /

-71Gcta a gota, tratou-se uma solução gelada (banho de ge- / lo) de 324 mg (0,77 mmole) de (4R,5S,6S)-3-£ £ £ (p-clorofenil)-tic /-metil /-tio /-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.,0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Ik) em 15 ml de água, com 0,087 ml (0,77 mmole) de uma solução aquosa a 30% de água oxigenada e agitou-se durante dois dias ã temperatura de 5°C. Verteu-se a solução aquosa gelada sobre uma coluna de fase inversa ^iBcndapak C^g contendo 30g do material apropriado para este ti. po de cromatografia, utilizando como agente de eluição, inicialmente, a água e depois, sucessivamente, acetonitrilo e água a 2%,

5% e 10%. Obtiveram-se 158 mg (rendimento de 47%) do composto do título sob a forma de diastereoisómeros (26/74). T¹/2 106 horas (pH 7,4, temperatura 37^0).

UV1^H20 : 304 (8500). max

IV (Nujol)J : 3600-3200 (OH), 1750 e 1595 cm'¹ (C=0); ^zmax

RMN¹H (D₂0, 200 MHz) S’ 7,81-7,75 (2H, m, H aromático), 7,7-7,58 (2H, m, H aromático), 4,50, 4,43, 4,32, 4,26 (0,7H, ABq, J=13,6

Hz,	SCH2S), 4	,41	(0,3H	f S r	SCH2S), 4,18	(1Η, centro de	5	linhas,
J=6 ,	2 Hz, H=1	’) ,	3,57	(1H,	dd, J=2,5 Hz,	J=9,4 Hz, H-5)	r	3,33-3,28
(1H,	m, H-6),	3,	0-2,7	(1H,	m, H-4), 1,25	(3H, d, J=6,3	Hz	, ch3),
1,02	ppm (3H,	d,	J=7,2	Hz,	ch3) .

.../...

X

EXEMPLO 17

(4R, 5S, 6S)-6-/* 1* (R)-hidroxietil y~4-metil-3-/*£ (piridin-3-il)-metil ./-tio ./-metil /-tio y-7-oxo-l-azabiciclo3,2.0 yhept-2-eno-2-carboxilatc de sódio (Io)

Fase A.

(4R,5S,6S)-6-£ 1 (R)-hidroxietil_/-4-metil-3-£ £ £ £ (piridin-3-il)-metil ./-tio ./-metil j7-tio y-7-oxo-l-azabiciclo/‘ 3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo

A uma solução gelada (banho de gelo) de l,0g (2,06 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/*1'(R)-hidroxietil y-4-metil-3-prata-mercaptc-7-cxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 _>7hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitro benzilo em 6 ml de dimetil-formamida, adicionou-se uma outra solu ção recentemente preparada de 3-£ £ (clorometil)-tio y-metil ./-pi ridina a partir de l,24g (10 mmole) de 3-picolil-mercaptano em 4 ml de dimetil-formamida e seguidamente 280 mg (4,12 mmole) de io-73deto de lítio e 0,41 ml (2,47 mmole) de di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura resultante durante 18 horas a uma temperatu ra próxima de 22 C depois do que se diluiu com 25 ml de ãgua ge lada e 25 ml de acetato de etilo e fez-se passar através de uma almofada de Celite. Lavou-se a camada de Celite com 4 x 10 ml de acetato de etilo e separaram-se as duas camadas da solução. Extraíu-se a fase aquosa com 2 x 10 ml de acetato de etilo e reuni ram-se as fases orgânicas. Lavaram-se com 2 x 25 ml de ãgua gela da e 25 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio e secaram -se sobre sulfato de magnésio. Fez-se passar o resíduo obtido, após a evaporação do dissolvente, através de uma coluna contendo 20g de gel de sílica, utilizando como agente de eluição, inicial mente, cloreto de metileno e depois, sucessivamente, acetato de etilo e cloreto de etileno a 10%, 20%, 40% e 60% e finalmente ace tato de etilo. Obtiveram-se 413 mg (rendimento de 41%) do composto do título sob a forma de um sólido de cor amarelo.

IV (CH_C1_)J : 3600-3200 (OH), 1775, 1710 (C=O) e 1520 cm ^x

2 ''max (NO₂);

RMN¹H (CDClg, 200 MHz)£: 8,54-8,48 (2H, m, H aromãtico) , 8,24, 8,19 (2H, d, J=8,7 Hz, PNB-H), 7,68-7,62 (5H, m, H aromãtico e PNB-H), 7,28-7,21 (1H, m, H aromãtico, Η), 5,56, 5,49, 5,27, 5,20 (2H, ABq, J=13,8 Hz, CH₂PNB), 4,27 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 3,85-3,7 (4H, m, H-l', SCH₂S, CH₂ piridina), 3,65, 3,58 (1H, d, parte de ABq, J=13,6 Hz, SCH₂S), 3,5-3,3 (1H, m, H-4), 3,25 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,7 Hz, H-6), 1,68 (1H, bs, OH), 1,35 (3H, d, J=6,2 Hz, CH₃), 1,20 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CH₃).

-74Fase

(4R, 5S, 6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-^-metil-S-/ £ £ £ (piridin-3-il)-metil /-tio /-metil /—tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3,2.0 /hept -2-eno-2-carboxilato de sódio (Io)

Em um dispositivo de Parr hidrogenou-se, com agitação 2 durante tres horas e a pressão de 3,164 kg/cm (45 psi) de hidro génio, a uma temperatura próxima de 22°C, uma solução de 718 mg (1,39 mmole) de (4R,5S,6S)-6-£ 1’(R)-hidroxietil /-4-metil-3-£ £ £ £ (piridin-3-il)-metil /-tio /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 40 ml de tetra-hidrofurano, 40 ml de éter e 50 ml (2,5 mmole) de uma solução tampão 0,05M de fosfato de sódio monobásico/hidrõxido de sódio a pH 7,0, utilizando como catalisador 700 mg de paládio a 10% sobre carvão. Removeu-se o catalisador por filtração e lavou-se com 2 x 10 ml de uma solução tampão de fosfato 0,05M a pH 7,0. Separaram-se as camadas da solução e extraiu-se a camada orgânica com uma solução tampão de fosfato 0,05M a pH 7,0. Reuniram-se as camadas aquosas, lavaram-se com 2 x 50 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna de fase inversa ^Bonóapak conten do 40g do material apropriado para este tipo de cromatografia e utilizando como agente de eluição, inicialmente, água e depois, sucessivamente, acetonitrilo e ãgua a 2%, 5%, 10% e 15%. Obtiveram-se 267 mg (rendimento de 48%) de um sólido cinzento após lio-75filização. Fez-se passar este sólido através de uma coluna pBon- **— dapak Ο^θ contendo 7,5g de material apropriado para crcmatografia de fase inversa e utilizando como agente de eluição, inicia_l mente, ãgua e acetonitrilo a 2%, 5%/ãgua. Obtiveram-se 2,33 mg (rendimento de 42%) dc composto do título puro sob a forma de um sólido liofilizado branco, T¹/2 77 horas (pH 7,4, 37°C). Pureza:

99,9% determinada por CLEP.

uo fl

UV) 266 (6003), 304 (9790).

^Amax

IV (Nujol)/ : 3600-3200 (OH), 1750 e 1600 cm¹ (C=O);

ΚΜΝ^Ή (D₂O, 200 ΜΗζ)<Γ: 8,53 (IH, bs, piridina-H) , 8,45, 8,42 (IH, bd, J=5,0 Hz, piridina-H), 7,93, 7,88 (IH, bd, J=7,9 Hz, piridina-H), 7,48, 7,45, 7,44, 7,41 (IH, dd, J=5,l Hz, J=7,8 Hz, piridina-H), 4,30, 4,27, 4,24, 4,21, 4,18 (IH, 5 linhas, H-l'), 4,11 (IH, dd, J=2,2 Hz, J=9,2 Hz, H-5), 3,95 (2H, s, CH₂-piridina) ,

3,92, 3,85, 3,81, 3,74 (2H, ABq, J=13,8 Hz, SCH₂S), 3,39 (IH, dd, J=2,2 Hz, J=6,0 Hz, H-6), 3,30, 3,26, 3,22, 3,18, 3,14 (IH, 5 linhas, H-4), 1,29 (3H, d, J=6,3 Hz, CH₃), 1,11 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CH₃).

EXEMPLO 18 (4R,5S,6S)-6-/ 1* (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/* £ £ £ (piridin-3-il)-metil /-sulfinil /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Ip)

-76Tratcu-se uma solução gelada (banhe de gelo) de 390 mg (0,97 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3£ £ £ £ (piridin-3-il)-metil /-tio /-metil /-tio /-7-oxc-l-azabi_ ciclo/ 3.2.0 /hept-2 -eno-2-carboxilatc de sódio (Io) em 20 ml de água, com uma solução gelada de 229 mg (1,07 mmole) de periodato de sódio em 5 ml de água. Agitcu-se a mistura durante duas horas *· O a temperatura de 5 C e fez-se passar depois através de uma coluna de fase inversa ^íBondapak Ο^θ contendo 50 g do composto de fa se inversa jjBondapak Ο^θ utilizando como agente de eluição, inicialmente água e depois acetonitrilo e água a 2% e 5%. Após a lio filizaçãc obtiveram-se 210 mg (rendimento de 52%) de um sólido amarele e 90 mg de um composto menos polar. Tratou-se este ultime composto com três equivalentes de carbono de hidrogénio e sódio em 5 ml de água gelada e fez-se passar nevamente através de uma coluna de fase inversa contendo 10 g de material apropriado para este tipo de cromatografia, utilizando como agente de eluição ãgua e depois acetonitrilo e água a 2%. Obtiveram-se 73 mg do composto do título. Reuniram-se as duas fracções resultantes e cromatografaram-se novamente através de uma coluna jiBondapak Ορθ contendo 30 g do material apropriado para este tipo de cromatografia, utilizando como agente de eluição, sucessivamente ãgua e acetonitrilo e ãgua a 2% e 5%. Obtiveram-se 169 mg (rendimento de 32%) do produto puro sob a forma de diastereoisómeros (71:29). Pu reza: 99,2% determinada por CLEP T¹/2 43 horas (pH 7,4, temperatura 37°C) .

ϋνχ^Η2° 266 (7,610), 272 (7,787), 298 (11,876);

max

IV (Nujol) y}___ 3600-3200 (OH), 1745 e 1600 cm (C=0) max

RMN¹H (D.O, 200 MHz) ξ : 8,57-8,52 (2H, m, piridina-H),

-77c

7,91-7,85 (1H, m, piridina-H), 7,56-7,49 (1H, m, piridina-H),

4,56-3,90 (6K, m, H-l', H-5, CH₂-piridina, SCH₂S), 3,45 (1H, dd, J=2,5 Ez, J=6,l Hz, H-6), 3,37, 3,34, 3,30, 3,29, 3,26, 3,2 (1H, m, H-4), 1,28 (3H, d, J=6,3 Hz, CH ), 1,17 (d, J=7,1 Hz, CH₃),

1,16 ppm (d, J=7,2 Hz, CH₃) .

EXEMPLO 19 ( 4R, 5S , 6S)-3-£ £ £ ( 3,4-diclcrofenil)-tic ./-metil _7-tic £-6-£ 1¹ (R) -hidroxietil J^,-4-metil-7-oxo-l-azabiciclc/’ 3.2.0 ^hept-2-enc-2-carbcxilato de sódio (Iq)

Cl

Fase A.

(4R, 5S, 6S) -3-£ £ £ (3,4-diclcrofenil)-tio ^-metil _/-tio £-&-£ 1'(R)-hidroxietil y-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrcbenzilo

-78L ζ

i (

A uma solução gelada (banho de gelo) de 1,0 g (2,06 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-3-prata-mercapto-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 6 ml de dimetil-formamida, adicionou-se uma so luçãc de l-clorometil—tio-3,4-diclorobenzenc recentemente preparada a partir de 1,27 ml (10,0 mmole) de 3,4-diclorofenil-mercaptanc, em 4 ml de dimetil-formamida depois do que se adicionaram 280 mg (4,12 mmole) de iodeto de lítio e 0,41 ml (2,47 mmole) de di-isoprcpiletilamina. Agitou-se a mistura resultante durante 18 heras a uma temperatura próxima de 22°C depois do que se diluiu ccm 20 ml de ãgua gelada e 20 ml de acetato de etilo gelado e fez-se passar através de uma almofada de Celite para eliminar c sólido. Lavou-se esta almofada de Celite com 2 x 20 ml de acetato deetilo e separaram-se as duas camadas da soluçãc. Extraíu-se a fase aquosa com 1 x 20 ml de acetato de etilo e reuniram-se as fracções orgânicas, lavaram-se com 3x25 ml de ãgua e 7 x 25 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio e concentraram-se. Fez-se passar o resíduo através de uma coluna contendo 20 g de gel de sílica, utiliáando como agente de eluição, inicialmente, cloreto de metileno e depois, sucessivamente, acetato de etilo e cloreto de metileno a 5%, 10%, 15% e 20%. Obtiveram-se 462 mg (rendimento de 40%) do composto do título.

IV (CH»C1„)J : 3600-3200 (OH), 1775 e 1710 cm¹ (C=O) ;

2 v max

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz) / : 8,22-8,16 (2H, m, PNB-H), 7,64, 7,59 (2H, bd, J=8,7 Hz, PNB-H), 7,48, 7,478 (1H, d, J=2,l Hz,Haromático ), 7,38, 7,34 (1H, d, J=8,3 Hz ,H aromático ), ⁷,25, 7,24, ' i

7,21, 7,20 (1H, dd, J=2,1 Hz, J-8,3 Hz ,Haromãtico ) , 5,51, 5,44,

-79L

5,25, 1,78 (2H, ABq, J=13,7 Hz, CH^PNB), 4,32-4,14 (1H, m, H-l'), ^f 4,25 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 4,27, 4,20, 4,14, 4,07 (2H, ABq, J=13,4 Hz, SCH^), 3,53-3,38 (1H, m, H-4), 3,27 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=6,7 Hz, H-6), 1,61 (1H, bs, OH), 1,36 (3H, d,

J=7,2 Hz, CHg), 1,24 ppm (3H, d, J=6,3 Hz, CHg).

Fase B.

(4R, 5S , 6S)-3-/ £ £ (3,4-diclorofenil)-tio J^-metil ./-tio £-6-£ 1' (R)-hidroxietil _/-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 J^hept-2-eno-2-carboxilatc de sódio (Iq)

Em um dispositivo de Parr hidrogenou-se, durante duas horas com agitação e a uma pressão compreendida entre 2,812 e „ _

3,164 kg/cm (40-45 psi) de hidrogénio, uma solução de 447 mg (0,786 mmole) de (4R, 5S , 6S)-3-£ £ £ (3,4-diclorofenil)-tic ./-metil /-tio £-6-£ 1’(R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo£ 3.2.0 _/hept-2 -eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 15 ml de tetra-hidrofurano, 15 ml de éter e 14,5 ml (1,45 mmole) de uma solução tampão 0,lM de fosfato de sódio monobãsico/hidrõxido de sódio a pH 7,0, utilizando como catalisador 447 mg de paládio a 10% sobre carvão. Removeu-se depois o catalisador por filtração e lavou-se com 2 x 10 ml da solução tampão. Separaram-se as duas fases da solução e extraiu-se a fase orgânica com 2 x 10 ml de uma solução tampão. Reuniram-se as fases aquosas, lavaram-se com 3 x 20 ml de éter e fizeram-se passar através de uma coluna de ά

contende, inicialmente, 27 g do mate-

rial apropriado para este tipo de cromatografia e utilizando como agente de eluição, inicialmente, água e depois, sucessivamente, acetonitrilo e água a 2%, 5%, 10% e 20%; e em um segundo ensaio 7,5 g do material apropriado para este tipo de cromatografia e utilizando como agente de eluição, sucessivamente, água e acetonitrilo e água a 5%, 10% e 20%. Obtiveram-se 102 mg (rendimento de 29%) do composto dc título puro sob a forma de um pc c

liofilizado. T /2 99 horas (pH 7,4, temperatura 37 C). Pureza: 99,3% determinada per CLEP,

UV

H20

304 (9120), 266 (7800);

max

IV (Nujol)

3600-3200 (OH), 1750 e 1600 cm^-1 (C=O);

RMN¹H (D₂O, 200 MHz) : 7,75, 7,74 (1H, d, J=2,0 Hz ,H aromático ) 7,55, 7,51 (1H, d, J=8,4 Hz ,H aromático ), 7,47, 7,46, 7,43,

7,42 (1H, dd, J=2,0 Hz, J=8,4 Hz ,H aromático ), 4,46, 4,39, 4,21,

4,14 (2H, ABq, J=14,l Hz, SCH₂S), 4,25-4,14 (1H, m, H-l'), 3,88 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=9,l Hz, H-5), 3,36 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,0

Hz, H-6), 3,34-3,1 (1H, m, H-4), 1,28 (3H, d, J=6,3 Hz, CHg) 1,11 ppm (3H, d, J=7,2 Hz, 0Η_β).

« « * J * · ·.

EXEMPLO 20 ( 4R, 5S , 6S) -6-f 1' (R) -hidroxietil y-4-metil-3-/’ ff (2,3,4,5,6-pentafluorofenil)-tio y-metil _/-tio J^T-7-oxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 fhept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Ir)

F

Fase A.

(4r,5S,6S) -6-£ 1' (R) -hidroxietil ./-4-meti 1-3-/^- f f (2,3,4,5,6-pentafluorofenil)-tio _?-metil f-tio ^7-7-cxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 fhept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrobenzilo

Tratou-se uma solução gelada (banho de gelo) de 2,0 g (4,12 mmole) de (4R,5S,6S)-6-f 1'(R)-hidroxietil _/-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/’ 3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrcbenzilo em 12 ml de dimetil-formamida, com uma solução de l-clorometil-tio-2,3,4,5,6-pentafluorobenzeno recentemente pre parada a partir de 1,33 ml (100 mmole) de l-mercapto-2,3,4,5,6-pentafluorobenzeno em 8 ml de dimetil-formamida, 560 mg (8,24

-82mmole) de iodeto de lítio e 0,82 ml (4,94 mmole) de di-isopropil etilamina. Agitcu-se a mistura durante 18 horas a uma temperatura próxima de 22 C, depois do que se diluiu ccm 40 ml de ãgua ge lada e 40 ml de acetato de etilo e se filtrou através de uma almo fada de Celite que se lavou com 3 x 10 ml de acetato de etilo, tendo-se separado as duas fases da solução. Extraíu-se a camada aquosa com 2 x 20 ml de acetato de etilo. Reuniram-se depois as fases orgânicas, lavaram-se com 3 x 50 ml de ãgua gelada e 50 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sul fato de magnésio e concentraram-se. Fez-se passar o resíduo através de uma coluna contendo 40 g de gel de sílica, utilizando como agente de eluição, sucessivamente, cloreto de metileno e acetato de etilo e cloreto de metileno a 2%, 5%, 8% e 10%. Obtiveram-se 820 mg (rendimento de 34%) do composto do título.

IV (CH.C1J d : 3600-3400 (OH), 1780, 1715 (C=O) e 1520 cm¹ z z ▼ inax (NO₂);

RMN¹H (CDC1₃, 200MHz) : 8,25,8,21 (2H, m, PNB-H), 7,68, 7,63 (2H, bd, J=8,7 Hz, PNB-H), 5,58, 5,52, 5,31, 5,24 (2H, ABq,

J=13,6 Hz, CH₂-PNB), 4,88 (2H, s, SCH₂S), 4,26 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 4,29,4,2 (1H, m, H,l'), 3,26 (1H, dd, J=2,7 Hz, J=6,8 Hz, H-6), 3,0-2,8 (1H, m, H-4), 1,65 (1H, d, J=4,6 Hz, OH), 1,33 (3H, d, J=6,2 Hz, CH₃), 1,04 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CH₃).

Fase Β.

(4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidrcxietil£-4-metiA-3-£ £ £ (2,3,4,5,6-pentaflucrofenil)-tio /-metil /-tio/-7-oxo-l-azabiciclc/’ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilatc de sódio (Ir)

Em um dispositivo de Parr hidrogenou-se durante três ~ ~ 2 horas ccm agitaçao e a uma pressão entre 2,812 e 3,164 kg/cm (40-45 psi) de hidrogénio, uma solução de 200 mg (0,34 mmole) de (4R-5S,6S)-6-/ 1’ (R)-hidroxietil /-4-meti1-3-/ £ £ (2,3,4,5,6-pentafluorofenil)-tio /-metil ^7-tio /-7-oxo-l-azabiciclc/ 3.2.0/ hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 10 ml de tetra-hidrcfurano, 10 ml de éter e 6,3 ml (0,63 mmole) de uma solução tampão 0,lM de fosfato de sódio monobãsico/hidrõxido de sódio a pH 7,0, utilizando como catalisador 200 mg de paládio a 10% sobre carvão. Separou-se o catalisador por filtração e lavou-se com 2 x 5 ml de uma solução tampão a pH 7,0 e 1 x 5 ml de éter. Separaram-se as duas camadas da solução e extraíu-se a camada orgânica com 2 x 5 ml de uma solução tampão a pH 7,0. Congelaram-se as fases aquosas até ã próxima utilização. Tratou-se a camada orgânica novamente em dispositivo de Parr durante duas horas e a uma pressão compreendida entre 2,812 e 3,164 kg/cm (40-45 psi) de hidrogénio, utilizando como catalisador 130 mg de paládio a 10% sobre carvão e submeteu-se ao processo de extracção similar ao descrito antes. Finalmente reuniram-se todas as camadas aquosas e

-84fizeram-se passar através de uma ccluna de fase inversa JiBcndapak C^g contendo 30 g de material apropriado para este tipo de cromatografia, utilizando como agente de eluição, iniciaimente, água e depois acetonitrilo e água a 2%, 5% e 10%. Obtiveram-se 45 mg (rendimento de 28%) do composto do título. Pureza 100% determinada por CLEP. T^/2 41 horas (pH 7,4, temperatura 37°C).

H20 υνχ 304 (13,600);

max

IV (Nujol)J : 3600-3200 (OH), 1750 e 1600 cm¹ (C=O);

^{J v} max

RMN¹H (D₂O, 200 MHz) £ : 4,82 (2H, s, SCH₂S), 4,28-4,15 (1H, m, H-l'), 4,18 (1H, dd, J=2,6 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 3,42 (1H, dd,

J=2,6 Hz, J=6,2Kz, H-6), 3,01, 2,98, 2,94, 2,89, 2,86 (1H, linhas, H-4), 1,26 (3H, d, J=6,4 Hz, CH^) e 1,02 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CHg).

EXEMPLO 21 (4R, 5S, 6S)-6-/* 1' (R)-hidroxietil £-3-£ £ (isopropiltio)-metil /-tio y-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 J^rhept-2-eno-2-carboxilato de sõdio (Is)

CH..

I ³

CH \

ch₃ * · * / · · ·

-85Fase A.

(4R,5S,6S)-6-/ 1’(R)-hidrcxietil /-3-/ / (isoprcpiltio)-metil /-tio /-4-metil—7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2—enc-2-carboxilato de p-nitrobenzilo

H₃C \ Lil + CHSCH₂C1 ->

h₃c c₂h₅

o

Trateu-se uma scluçao gelada, a temperatura de 2 C, de 7,279 g (15,0 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carbcxilato de p-nitrebenzilo em 60 ml de dimetil-formamida anidra, com uma solução de 2.805 g (22,5 mmole) de 2-/ (clorometil)-tio /-propano em 15 ml de dimetil-formamida anidra, 6,023 g (45,0 mmole) de iodeto de lítio e 2,908 g (3,92 ml, 22,5 mmole) de N,N-di-isopropiletilamina. Após agitação durante uma hora â temperatura de 5°C e durante 18 horas a temperatura de 20 C, diluiu-se a solução com

150 ml de ãgua gelada e 150 ml de acetato de etilo, à temperatura c ~ de 2 C, e filtrou-se através de uma almofada de Celite. Separou-se a fase orgânica da fase aquosa e extraiu-se a fase aquosa com 3x150 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as camadas orgânicas, lavaram-se com 3 x 100 ml de ãgua e 200 ml de uma solução saturada de cio reto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio, filtraram-se e evaporaram-se. Purificaram-se 4,87 g de material impuro por cro matografia sobre 25Q g de gel de sílica, utilizando como agente de eluição diclorometano/acetato de etilo (3;1). Obtiveram-se 2,483 mg (rendimento de 35%) do composto do título sob a forma de uma espuma amarela.

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz) & : 1,24-2,37 (12H, m, 1' -CH₃, 4-CH₃,

CH₃'s de isopropilo), 3,15 (1H, m, CH de isopropilo), 3,26 (1H, dd, J=2,58 Hz, 6,80 Hz, H-6), 3,56 (1H, m, H-4), 3,91 (2H, ABq, -SCHS-), 4,22-4,29 (2H, m, H-5, H-l’), 5,36 (2H, ABq, CO2CH2), 7,92 ppm (4H, ABq, H aromático s).

t

Fase B.

(4r, 5S , 6S) -6-/ 1' (R) -hidroxietil /-3-/ £ (isopropiltio)-metil /-tio /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Is)

A 60 ml de um tampão 0,1M de fosfato de sódio moncbãsico/hidróxido de sódio a pH 7,0, adicionou-se uma solução de l,399g (3,0 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/1'(R)-hidroxietil /-3-/ £ (isopropiltio) -metil /-tio /-4-metil-7-cxo-l-azabiciclc/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em uma mistura de 30 ml de tetra-hidrofurano e 30 ml de éter. Submeteu-se a mistura resultante a hidrogenólise sobre 1,399 de paládio a 10% sobre carvão, _ 2 como catalisador durante tres horas e a pressão de 2,953 kg/cm (42 psi) de hidrogénio. Separou-se o catalisador por filtração sobre uma almofada de Celite e lavou-se com 30 ml de éter e 30 ml de uma solução tampão a pH 7,0. Separou-se a fase aquosa e cromatografou-se sobre gel de silica de fase inversa, utilizando como agente de eluição acetonitrilo 5% a 15% em ãgua. Reuniram-se as

-87fracçces pertinentes e liofilizaram-se, Crcmatcgrafou-se ncvamen te c sólido obtido sobre gel de sílica de fase inversa, utilizan dc como agente de eluição acetonitrilo/água (12:88). Uma vez mais, reuniram-se as fracçoes pertinentes e liofilizaram-se, obtendo-se 0,357 g (rendimento de 33%) do composto do título sob a forma de um sólido de cor ligeiramente bege.

IV (KBr)J : 1599 v max	(-C02-), 1750	cm 1 (^-	lactama);
UV (água)x : 304 v A max	nm ( £. 11046) ;
RMN1H (D2O, 200 MHz)	ε : 1,20-1,31	(12H, m,	l'-CH3, 4-CH3,
CH3's de isopropilo)	3,42-3,59 (2H,	m, H-4,	H-6), 4,01 (2H, ABq,
-SCH2S-), 4,20-4,32	ppm (2H, m, H-l	’, H-5).

EXEMPLO 22 (4R, 5S, 6S)-6-/ 1' (R)-hidroxietil Cf (fenilmetil)-tio J-metil ^7-tio 7-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (It)

-88Fase A.

(4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidrcxietil /-3-/// (fenilmetil)-tio /-metil _/-tic /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carbcxilato de p-nitrobenzilc

+ oCH₂SCH₂C1

S-CH₂ ^C6^H5

Tratou-se uma solução gelada, à temperatura de 2°C, de 7,279 g (15,0 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-pra ta-mercapt.o-7-oxc-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carbcxilatc de p-nitrobenzilo em 60 ml de dimetil-formamida anidra, com uma solução de 3,885 g (22,5 mmole) de clorometil-tiometil-benzeno em 15 ml de dimetilformamida anidra, 6,023 g (45,0 mmole) de iode tc de lítio e 2,908 g (3,92 ml, 22,5 mmole) de N,N-di-isopropiletilamina. Após agitação durante uma hora à temperatura de 5°C e durante 18 horas à temperatura de 20°C, diluiu-se a solução com 150 ml de ãgua gelada e 150 ml de acetato de etilo, ã temperatura de 2°C e filtrou-se através de uma almofada de Celite. Separou-se a fase orgânica da fase aquosa. Extraíu-se a fase aquosa com 3 x 150 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as fases orgânicas, lavaram-se com 3 x 1Q0 ml de ãgua e 200 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio, filtraram-se e evaporaram-se. Purificaram-se 5,18 g do produto impuro por cromatografia sobre 250 g de gel de sílica, utilizando como agente de eluição diclorometano/acetato de etilo (3;1). Obtiveram-se 2,772 título sob a forma de uma mg (rendimento de 36%) do composto espuma amarela.

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz) £ : 1,17 (3H, d, J=7,33 Hz, 4-CH ),

1,35 (3H, d, J=6,26 Hz, 1'-CH ), 3,24 (IH, dd, J=2,5 Hz,

6,72 Hz, H-6), 3,39 (IH, m, H-4), 3,68 (2H, ABq, -SCH₂S-), 3,83 (2H, ABq, -SCH₂CgH₅), 4,18-4,28 (2H, m, H-5, H-l’), 5,38 (2H, ABq, CO₂CH₂) , 7,24-7,31 (5H, m, -SCH^gH^, 7,93 ppm (4H, ABq, CO₂CH₂C₆H₄NO₂).

Fase B.

(4R, 5S, 6S) -/* 1’ (R)-hidroxietil J-3-£ £ £ (fenilmetil)-tic y-metil y-tio y-4-metil-7-cxc-l-azabiciclo/' 3.2.C yhept-2-enc-2-carboxilatc de sedio (It)

A 60 ml de uma solução tampão 0,lM de fosfato de sádio monobásioo/hi drõxido de sódio a pH 7,0, adicionou-se uma solução de 1,544 g (3,0 mmole) de (4R,5S,6S)-6-£ 1’(R)-hidroxietil J-3-£ £ £ (fenilmetil) -tio ymetil y-tio y-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 jhept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em uma mistura de 30 ml de tetra-hidrofurano e 30 ml de éter. Submeteu-se a mistura resul^ tante a hidrogenólise sobre 1,544 g de paládio a 10% sobre carvão, - 2 como catalisador, durante tres horas, a pressão de 2,953 kg/cm (42 psi) de hidrogénio. Separou-se o catalisador por filtração so

bre uma almofada de Celite e lavou-se ccm 30 ml de éter e 30 ml de uma solução tampão a pH 7,0. Separou-se a fase aquosa da fase orgânica e cromatografou-se sobre gel de sílica de fase inversa, utilizando como agente de eluição acetonitrilo 5-20% em ãgua. Reuniram-se as fracções pertinentes e 1iofilizaram-se. Cromatogra fou-se novamente o sólido resultante sobre gel de sílica de fase inversa, utilizando como agente de eluição acetonitrilo/ãgua (15:85). Reuniram-se novamente as fracções pertinentes e liofilizaram-se, obtendo-se 0,390 g (rendimento de 32%) do composto do título sob a forma de um pó branco.

IV (KBr) J : 1599 (-CCK-) , 1750 cm^-1 (Λ-lactama) ; max 2 I

UV (ãgua)l : 304 nm (£.11019);

^niax

RMN^H (D₂0, 200 MHz) £ : 1,09 (3H, d, J=7,26 Hz, 4-CHj) , 1,29 (3H, d, J=6,35 Hz, l'-CH₃), 3,15 (1K, m, H-4), 3,38 (1H, dd, J=2,47 Hz, 6,03 Hz, H-6), 3,81 (2H, ABq, -£CH₂S-), 3,92 (2H, s, -SCH₂C₆H₅), 4,10 (1H, dd, J=2,36 Hz, 9,13 Hz, H-5), 4,23 (1H, m, H,l’), 7,33-7,43 ppm (5H, m, -SCH^gHg) .

EXEMPLO 23 (4R,5S,6S)-6-/* 1¹ (R)-hidroxietil }-3~£ £ £ £ (furan-2-il)-metil J-tio y-metil ./-tio /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sõdio (Iu) h₃c

O

-91Fase A.

(4R,5S, 6£)-6-/ 1' (R) -hidroxietil (furan-2-il)-metil y~

-tio ./-metil /-tio y-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3„2.0 ^/hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrcbenzilc

c

Tratou-se uma solução gelada, a temperatura de 2 C, de 7,279 g (15,0 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/1¹(R)-hidroxietil y~4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/’ 3.2.0 ^/hept-2-eno-2-car bcxilatc de p-nitrobenzilo em 60 ml de dimetil-formamida anidra, com uma solução de 3,659 g (22,5 mmole) de 2-/* /* (clcrometil)-tio y-metil y~furano em 15 ml de dimetil-formamida anidra, 6,023 g (45,0 mmole) de iodeto de lítio e 2,908 g (3,92 ml, 22,5 mmole) de N,N-di-isopropiletilamina. Após agitação durante uma hora ã o *. o temperatura de 5 C e durante 18 horas a temperatura de 20 C, diluiu-se a solução ccm 150 ml de acetato de etilo e 150 ml de água gelada, à temperatura de 2°C, e filtrou-se sobre uma almofada de Celite. Separou-se a fase orgânica da fase aquosa. Extraíu-se a fase aquosa com 3 x 150 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as fa ses orgânicas, lavaram-se com 3 x 100 ml de água e 200 ml de uma solução saturada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de magnésio. Filtraram-se e evaporaram-se. Purificaram-se 3,80 g do produto impuro por cromatografia sobre 250 g de gel de sílica, utilizando como agente de eluição diclorometano/acetato de etilo (3:1). Obtiveram-se 2,471 mg (rendimento de 33%) do composto do

-92título sob a forma de uma espuma amarela.

RMN¹H (CDC1 , 200 MHz) £ : 1,23 (3H, d, J=7,31 Hz, 4-CH₃),

1,34 (3H, d, J=6,25 Hz, 1' -CH₃), 3,26 (1H, dd, J=2,57 Hz, 6,74 Hz, H-6), 3,47 (1H, m, H-4), 3,79 (2H, ABq, furanilo -SH₂),

3,88 (2H, ABq, -SCH₂S-), 4,21-4,28 (2H, m, H-5, H-l'), 5,36 (2H, ABq, CO₂CH₂), 6,19, 6,29 e 7,35 (1H, 1H, 1H, m, m, m, H do furanilo s), 7,92 ppm (4H, ABq, CO₂CH₂CgH^NO₂).

Fase B.

(4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-3-//// (furan-2-il) -metil }-tio /-metil /-tio /-4-metil-7-cxo-l-azabiciclo/ 3.2.0/hept-2-enc-2-carbcxilato de sódio (Iu)

A 60 ml de uma solução tampão 0,1 M de fosfato de sódio monobásico/hidrõxido de sódio a pH 7,0, adicionou-se uma solução de 1,512 g (3,0 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1¹(R)-hidroxietil /-3-/ /// (furan-2-il) -metil /-tio /-metil /-tio /-4-metil-7-oxo-1-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em uma mistura de 30 ml de éter e 30 ml de tetra-hidrofurano. Sub meteu-se a mistura resultante a hidrogenõlise sobre 1,512 g de pa lãdio a 10% sobre carvão, como catalisador, durante três horas à 2 pressão de 2,953 kg/cm (42 psi) de hidrogénio. Separou-se o cata lisador por filtração sobre uma almofada de Celite e lavou-se com 30 ml de éter e 30 ml de uma solução tampão a pH 7,0. Separou-se

-93L /

a fase aquosa da fase orgânica e crcmatcgrafcu-se sobre gel de * sílica de fase inversa, utilizando como agente de eluição acetonitrilc a 5-20% em ãgua. Reuniram-se as fracções pertinentes e licfilizaram-se. Cromatografou-se novamente c sólido resultante sobre gel de sílica de fase inversa, utilizando como agente de eluição acetcnitrilo/ãgua (12:88). Reuniram-se novamente as frac ções pertinentes e liofilizaram-se, obtendo-se 0,339 g (rendimento de 29%) do composto do título sob a forma de um pó branco.

IV (KBr) d : 1599 (-C0_o-), 1750 cm¹ (β-lactama); ^v max 2 (

UV (ãgua)λ : 304 nm (F10989);

'^v max

RMN¹H (D₂0, 200 MHz) & : 1,17 (3H, d, J=7,24 Hz, 4-CH.p , 1,30 (3H, d, J=6,36 Hz, 1’ -CH₃), 3,32 (1H, m, H-4), 3,42 (1H, dd,

J=2,44 Hz, 5,93 Hz, H-6), 3,89 (2H, ABq, -SCH₂S), 3,95 (2H, ABq, furanilo -SCH₂), 4,15-4,28 (2H, m, H-5, H-l'), 6,37, 6,43 e 6,50 ppm (1H, 1H, 1H, m,m,m, furanilo H's).

EXEMPLO 24 (4R, 5S , 6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil _-/-4-metil-3-/* £ 1 (P. e S)-(metiltio)-metil _/-tio ^/-7-cxc-l-azabiciclc/’ 3.2.0 J^?hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Iv)

···/···

-94Fase A.

(4R, 5S, 6S)-6-/ 1* (R)-hidroxietil/-4-metil-3-/ £ 1-(metiltio)-etil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxila to de p-nitrobenzilo

Gota a gota, tratou-se uma solução gelada (banho de ge lo) de 242 mg (0,5 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-prata-mercaptc-7-oxc-l-azabiciclc/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilatc de p-nitrobenzilo em 2 ml de dimetil-formamida, com uma solução de 69 mg (0,625 mmole) de sulfureto de 1-cloroetil-me tilo em 1 ml de dimetil-fcrmamida, 68 mg (1,0 mmole) de iodeto de lítio e 0,1 ml (0,6 mmole) de di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura resultante durante 30 minutos à temperatura de 5°C depois do que se tratou novamente com 0,5 eq. dos reagentes anteriores (sulfureto de 1-cloroetil-metilo, iodeto de lítio e di-isopropiletilamina) . Agitou-se a mistura durante mais 30 minutos depois do que se diluiu com 20 ml de acetato de etilo gelado e 20 ml de ãgua e filtrou-se através de uma almofada de Celite. Lavou-se essa almo fada com 3 x 10 ml de acetato de etilo e separaram-se as duas cama das da solução. Extraíu-se a fase aquosa com 3 x 10 ml de acetato de etilo. Reuniram-se as fases orgânicas e lavaram-se com 4 x 20 ml de ãgua gelada e 20 ml de uma solução saturada de cloreto de só dio, secaram-se sobre sulfato de magnésio e concentraram-se. Purificou-se o resíduo por CCF preparativa utilizando como agente de eluição cloreto de metileno/acetato de etilo (1;1). Obtiveram-se

-9573 mg (rendimento de 32%) do composto do título sob a forma de uma mistura de diastereoisómeros. Cada um dos diastereoisõmeros foi separado por CCF preparativa utilizando como agente de elui ção éter depois do que se caracterizaram saparadamente.

Isómero A, o isómero menos polar:

IV (CH_OC1_O)J : 3600-3300 (OH), 1770-1710 (C=O) e Z Z IUcl X (NO₂);

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz)<f: 8,25-8,19 (2H, m, PNB-H), m, PNB-H), 5,56, 5,49, 5,27, 5,20 (2H, ABq, J=13,8 4,37, 4,34, 4,30 (IH, parte de q, J=7,0 Hz, SCHS), J=2,4 Hz, J=9,4 Hz, H-5), 4,34-4,23 (IH, m, H-l'),

1520 cm

7,68-7,64 (2H, Hz, CH₂-PNB), 4,28 (IH, dd,

4,8-4,6 (IH, m, H-4), 3,28 (IH, dd, J=2,6 Hz, J=6,8 Hz, H-6), 2,13 (3H, s,

SCH₃), 1,65 (3H, d, J=7,0 Hz, CHCH^, 1,37 (3H, d, J=6,3 Hz, CH₃), 1,28 ppm (3H, d, J=7,4 Hz, 0Η_β).

Isómero Β, o isómero mais polar:

IV (CH-Cl-)J : 3600-3320 (OH), 1770, 1710 (C=O) e 1520 cm’¹ Z Z ’ ITlclX (NO₂);

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz)<í: 8,25-8,19 (2H, m, PNB-H), 7,69-7,64 (2H, d, J=8,9 Hz, PNB-H), 5,56, 5,49, 5,27, 5,20 (2H, ABq, J=13,8 Hz, CH₂PNB), 4,3-4,2 (IH, m, H-l’ escondido), 4,26 (IH, dd, J=2,5 Hz, J=9,3 Hz, H-5), 4,24, 4,21, 4,17 (IH, parte de q, J=6,8 Hz, SCHS), 3,7-3,35 (IH, m, H-4), 3,28 (IH, dd, J=2,6 Hz, J=6,8 Hz, H-6),

2,28 (3H, s, SCH₃), 1,76 (IH, s largo, OH), 1,65 (3H, d, J=6,8 Hz, CHCH₃), 1,38 (3H, d, J=6,3 Hz, CH₃), 1,28 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CH₃).

/...

-96Fase Β,

(4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ f (1-metiltic)-etil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxila to de sódio (Iv)

Em um dispositivo de Parr, hidrogenou-se com agitação, durante 90 minutos e a uma pressão compreendida entre 2,812 e 2

3,164 kg/cm (40-45 psi) de hidrogénio, 120 mg (0,26 mmole) de (4r,5S,6S)-6-/ 1 (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ / 1-(metiltio)-etil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo, o isómero A, em 10 ml de tetra-hidrofurano, ml de éter e 4,7 ml (0,47 mmole) de uma solução tampão 0,1M de fosfato de sódio monobãsico/hidróxido de sódio, utilizando co mo catalisador 120 mg de paládio a 10% sobre carvão. Removeu-se o catalisador por filtração e separou-se a fase orgânica da fase aquosa e tratou-se ncvamente no dispositivo de Parr com hidrogê2 nio a uma pressão compreendida entre 2,812 e 3,164 kg/cm (40-45 psi) com agitação e na presença de 120 mg de paládio a 10% sobre carvão como catalisador e da solução tampão 0,lM de fosfato de sódio monobásico/hidrõxido de sódio a pH 7,0. Agitou-se a mistura durante 90 minutos depois do que se removeu c catalisador por filtração. Reuniram-se as fases aquosas provenientes das duas hi drogenôlises, lavaram—se com 3 x 20 ml de éter e fizeram-se passar depois através de uma coluna uBondapak ^C18 contendo 30g de

-97ί f

material apropriado para este tipo de cromatografia utilizando í, como agente de eluição, inicialmente, água e depois, sucessivamente, acetonitrilo e água a 2%, 5% e 10%. Obteve-se c composto do título sob a forma de um sólido cinzento. Purificcu-se novamente esse sólido utilizando a coluna /iBondapak C^g contendo 7g de material apropriado para este tipo de cromatografia, utilizan do como agente de eluição, sucessivamente, água e acetonitrilo e água a 5% e 10%. Obtiveram-se 35 mg (rendimento de 40%) de um dos isómeros puros de fórmula Iv-A; pureza 96,9% determinada por CLEP;

-v

T /2 20 min. (pH 2, temperatura 37 C).

UV/ 302 (7045);

max

IV (Nujcl)J : 3600-3200 (OH), 1745 e 1600 cm’¹ (C=O);

RMN¹H (D₂0, 200 MHz)/: 4,47, 4,44, 4,40, 4,37 (1H, q, J=7,0 Hz, SCHS), 4,31-4,18 (1H, m, H-l'), 4,23 (1H, dd, J=2,5 Hz, H-5),

3,65, 3,62, 3,58, 3,57, 3,53, 3,50 (1H, 6 linhas, H-4), 3,44 (1H, dd, J=2,5 Hz, J=6,l Hz, H-6), 2,15 (3H, s, CHg), 1,60 (3H, d,

J=7,0 Hz, CH₃), 1,29 (3H, d, J=6,4 Hz, CHg), 1,21 ppm (3H, d,

J=7,3 Hz, CHg).

Fases similares utilizando o isómero B do (4R,5S,6S)-6-/1' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/*y^r 1-(metiltio)-etil /-tio /-7-cxc-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo forneceram 37 mg (rendimento de 42%) de um outro isómero de formula Iv-B; pureza 99,0% determinada por CLEP; T^/2 56 h (pH 7,4, temperatura 37°C), 20 min. (pH 2, temperatura 37°C).

UVn^H2° 302 (9831);

^Amax

IV (Nujol)J : 36Q0-3200 (OH), 1750 e 1600 cm¹ (C=Q);

^Kmax

RMN¹H (DgO, 200 MHz)/; 4,36, 4,33, 4,29, 4,26 (1H, q, J=6,8 Hz, SCHS), 4,21 (parte de dd, J=2,4 Hz, parte de H-5), 4,29-4,21 (1H,

-98m, H-l' oculte); 3,44 (1H, dd, J=2,4 Hz, J=6,1 Hz, H-6), 3,50-

-3,34 (1H, ro, H-4 oculto ), 2,29 (3H, s, CH₃), 1,60 (3H, d,

J=6,8 Hz, CH-CH₃), 1,29 (3H, d, J=6,4 Hz, CH₃), 1,21 ppm (3H, d, J=7,3 Hz, CE₃).

EXEMPLO 25 (4R,5S,6S)-3-f £ £ (p-cianofenil)-tic /-metil /-tio /-6-/ 1'(R)— -hidroxietil /’-4-metil-7-cxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carbcxilatc de sódio (Iw)

Fase A.

4-/ (bromometil)-tio /-benzonitrilo

Durante 26 heras aqueceu-se à temperatura de refluxo uma solução de 0,300 g (2 mmole) de 4-(metiltio)-benzonitrilo e 0,445 g (2,5 mmole) de N-bromossuccinimida em benzeno. Arrefeceu-se depois a mistura e filtrou—se. Evaporou-se o filtrado, tratou

-99-/

Cy

-se com 10 ml de tetracloreto de carbono gelado e filtrou-se novamente. Repetiu-se esta operação mais uma vez. Finalmente a eva poração do dissolvente originou 0,32g (rendimento de 70%) do com posto do título sob a forma de um clec amarele que solidificou.

IV (CH_C1„)J : 2223 cm¹ (-CN);

Z £. ΓΠα.-Χ

RMN¹H (CDCl^, 200 MHz)^: 7,65 (2H, d, H aromático, J=8,59 Hz),

7,51 (2H, d, H aromático, J=8,59 Hz), 4,88 ppm (2H, s, S-CH₂~).

Fase B.

(4R,5S,6S)-3-/ £ £ (p-cianofenil)-tio /-metil /-tio /-6-/ l'(R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilatc de p-nitrobenzile

Gota a gota, adicionou-se a uma solução gelada (temperatura 5^cC) de 0,606g (1,25 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ l'(R)-hidro xietil /-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 /hetjo -2-eno-2-carbcxilato de p-nitrcbenzilo em 5 ml de dimetilformamida, uma solução de 0,328g (1,44 mmole) de 4-/ (bromometil)-tio /-benzonitrilo em 1 ml de dimetilformamida e depois 0,255g (3,75 mmole) de iodeto de lítio e 0,37 ml (2,19 mmole) de N,N-di-isopro piletilamina. Agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas â temperatura ambiente depois dc que se diluiu com 25 ml de acetato de etilo e 25 ml de ãgua e se filtrou. Separaram-se as duas camadas; extraíu-se a fase aquosa com 3 x 10 ml de acetato de etilo.

-100c

Reuniram-se as fases orgânicas e lavaram-se com ãgua gelada e com uma solução saturada de cloreto de sõdio. Seccu-se depois a solução orgânica sobre sulfato de magnésio e evaporou-se, Purificou-se c composto impuro por cromatografia sobre gel de sílica utili zandc como agente de eluição acetato de etilo e cloreto de metile no a 0-20%. Obteve-se 0,298g (rendimento de 45%) do composto do título sob a forma de um sólido amarelo.

IV (C^H2^C12)J_raax ^{: 2223} (-CN), 1775 (^-lactama), 1710 cm¹ (-C0₂~);

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz)£: 8,22 (2H, d, H aromático), 7,64 (2H, d,

H aromático), 7,59 (2H, d, H aromático), 7,42 (2H, d, H aromático), 5,29 (2H, ABc, CH₂~Bz), 4,23-4,30 (4H, m, -CH₂S, H-l', H-5), 3,50 (1H, m, H-4), 3,30 (1H, dd, J-2,56, 6,74 Hz), 1,38 (3Η, d, J-6,25 Hz, l'-CH₃), 1,28 ppm (3H, d, J=7,27, 4-CH₃).

Fase C.

(4R,5S,6S)-3-/ £ £ (p- cianofenil)-tio /-metil /'-tio £-§-£ l'(R)-hidroxietil /-4-metil-7-cxo-l-azabiciclo/’ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sõdio (Iw)

A uma mistura de 12 ml de éter etílico e 6 ml de uma solução tampão 0,lM de fosfato de sõdio monobãsico/hidrõxido de sõdio a pH 7,0, adicicnou-se uma solução de 0,168g (0,32 mmole) de (4R, 5S, 6S)-3-£ £ £ (p-cianofenil)-tic /'-metil /'-tio /-6-£ 1’ (R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 /hept-101-2-enc-2-carboxilatc de p-nitrcbenzilo em 12 ml de tetra-hidrofu ranc. Submeteu-se a mistura a hidrogenclise durante 2,75 horas a uma pressão de 3,164 kg/cm (45 psi) de hidrogénio na presença de 0,168σ de paládio a 10% sobre carvão comc catalisador. Elimincu-se depois o catalisador per filtração e extraíu-se c filtrado ccm éter. Cromatcgrafcu-se a fase aquosa sobre gel de silica de fase inversa utilizando como agente de eluição acetonitrilo e ãgua a 0-10%. Reuniram-se as fracções pertinentes e liefilizaram -se, obtendo-se 0,30g (rendimento de 22,7%) do composto do título.

IV (Nujcl)J : 1750 (A-lactama), 1590 cm ¹ (-CO~ * ΓΠα.Λ | Z

RÍ4N¹H (D₂0, 200 MHz)<$: 7,44 (2H, d, H aromático), H aromático), 4,44 (2H, ABq, -CH.,-) , 4,25 (1H, m, (1H, dd, J=2,36, 9,27 Hz, H-5), 3,28-3,45 (2H, m, 1,30 (3H, d, J=6,29 Hz, l'-CH₃), 1,10 ppm (3H, d, ) ·

7,61 (2H, d, H-l'), 4,10 H-4, H-6),

J=7,21 Hz, 4-ch₃).

EXEMPLO 26 (4R, 5S , 6S)-3-/* £ £ (p-carbamoilfenil)-tio ,7-metil ./-tio J-6-£ 1' (R)-hidroxietil y-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/'3.2.0 7hept-2-eno-2-carboxilato de sodio (Ix)

CO₂Na conh₂ x

-102Fase A.

4-/ (clorometil)-tio /-benzamida

Durante uma hora, aqueceu-se à temperatura de refluxo uma solução de l,68g (10 mmole) de ácido 4-(metiltio)-benzóico em 5 ml de cloreto de tionilo. Evaporou-se depois o dissolvente até ã obtenção de um sólido. Dissolveu-se c cloreto de ácido im puro resultante em 10 ml de cloreto de metileno, arrefeceu-se em um banho de gelo e tratou-se lentamente durante 45 minutos com uma solução de l,48g (11 mmole) de cloreto de tionilo em 5 ml de cloreto de metileno. Após agitação da mistura durante duas horas ã temperatura de 5°C, evaporou-se o dissolvente. Dissolveu-se o composto impuro em 50 ml de benzeno e saturou-se a solução à tem peratura de 20°C com amoníaco. Observou-se a formação imediata de um precipitado gue se agitou durante 15 minutos depois do que se separou o sólido branco e se cromatografou sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição acetonitrilo. Obtiveram-se 1,74 g (rendimento de 86,2%) da amida do título. P.F. 14Q°-142°C.

IV (CH«Cl_n)J : 1680 (-C0^-), 1595 cm¹ (aromático).

2 y max

RMN¹H (CDClg, 200 MHzjá': 7,80 (2H, S, H aromático), 7,54 (2H, ζ ,

H aromático), 5,03 ppm (2H, s, -Cí^)

-103Fase Β.

(4R, 5S , 6S)-3-/// (p-carbamcilfenil)-tio /metil/-tic /-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo

CONH,

Tratcu-se, gota a gota, uma solução gelada ã temperatu ra de 5^C de 500 mg (1,03 mmole) de (4R, 5S , 6S)-6-/ l'(R)-hidroxi etil /-4-metil-3-prata-mercaptc-7-cxc-l-azabiciclc/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilatc de p-nitrobenzilo em 10 ml de dimetilformamida com 0,239g (1,19 mmole) de 4-/ (clorometil)-tio /-benzamida, 0,414g (3,09 mmole) de iodeto de lítio e 0,233g (1,8 mmole) de

N, N-di-isopropiletilamina. Agitcu-se a mistura durante 2 horas â temperatura de 5^UC e durante 16 horas â temperatura de 20°C, diluiu-se com acetato de etilo, agitou-se energicamente com ãcido clorídrico diluído gelado e filtrou-se. Separaram-se as duas fases da solução e extraíu-se a solução aquosa ccm acetato de etilo. Lavaram-se os extractos orgânicos reunidos com uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio e evaporaram-se. Purificou-se o produto impuro por cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição, inicialmente, acetato de etilo e depois acetonitrilo. Obteve-se

O, 322g (rendimento de 57,5%) do composto do título sob a forma de uma espuma acastanhada.

IV (C^h2^c12 ) Vmax ^{5 1772} (^lactama), 1710 (-CO2PNB) , 1675 cm (conh₂).

aromãti(2H, ABq, , H-4),

-104RMN¹H (CDClg, 200 MHz)<$: 8,19 (2H, d, H aromático) H aromático), 7,62 (2H, d, H aromático), 7,43 (2H, co), 5,34 (2H, ABq, CH -Bz), 4,40-4,10 / 4H, H-l', CH₂S, 4,17 (1H, dd, J=2,53, 9,25 Hz, H-5) J, 3,39 3,25 (1H, dd, J=2,54, 6,70 Hz, H-6), 1,35 (3H, d, -CH₃), 1,24 ppm (3H, d, J=7,28 Hz, 4-CH₃).

, 7,73 d, H

4,28 (1H, m

J=6,26 Hz, l'Fase C.

(4R, 5S , 6S) -2>-£ £ £ (p-carbamoilfenil)-tio /-metil /-tio /-6I

-£ 1 (R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0/hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Ix)

A uma mistura de 40 ml de éter etílico e 20 ml de uma solução tampão 0,lM de fosfato de sódio monobásico/hidrõxido de sódio a pH 7,0, adicionou-se uma solução de 0,543g (1 mmole) de ( 4r, 5S, 6S)-3-£ £ £ (p-carbamoilfenil)-tio /-metil/-tio/-6-£ 1'(R) -hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/’ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 40 ml de tetra-hidrofu rano. Submeteu-se a mistura a uma hidrogenólise sobre 0,543 g de paládio a 10% sobre carvão como catalisador durante três horas e a 2 uma pressão de 2,812 kg/cm (40 psi) de hidrogénio. Separou-se depois o catalisador por filtração e extraíu-se o filtrado com éter etílico. Cromatografou-se a fase aquosa sobre gel de sílica de fa se inversa utilizando como agente de eluição acetonitrilo e água a 0-10%. Reuniram-se as fracções pertinentes e liofilizaram-se, obtendo-se 0,130 g (rendimento de 30,2%) do composto do título.

-105IV (Nujol) -J : 1740 ( h - lactama) , 1660 (-CONH„) , 1590 cm ¹ k._ΙΓιΗΧ ( z j (-C0₂-) ;

PMN¹H (D₂0, 200 MHz) 6 : 7,77 (2H, d, H aromático), 7,61 (2H, d,

H aromático), 4,37 (2H, ABq, -CH₂S-), 4,19 (1H, m, H-l'), 3,87 (1H, dd, J=2,35 Hz, 9,19, H-5), 3,36 (1H, dd, J - 2,46, 6,07 Hz,

H-6), 3,56 (1H, m, H-4), 1,26 (3H, d, J = 6,33 Hz, 1' -CH ),

1,12 ppm (3H, d, J - 7,24 Hz, 4-CH^).

EXEMPLO 27 (4R,5S,6S)-3-/ /* / £ (p-aminometil) -fenil ./-tio /-metil /-tio J-6-/ 1' (R)-hidroxietil /-4-metil-7-cxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Iy)

Fase A.

4-(metiltio)-benzilazida

Tratou-se uma solução gelada (temperatura de 5°C) de 3,0 g (19,45 mmole) de álcool 4-metil-tiobenzílico em 60 ml de

-106cloreto de metileno, com 2,17 g (21,4 mmole) de trietilamina e 2,45 g (21,4 mmole) de cloreto de metanossulfonilo. Agitou-se a mistura durante uma hora depois do que se diluiu com éter etíl.i co e se filtrou. Evaporcu-se o filtrado atê ã secagem, dissolveu -se novamente em acetonitrilo e tratou-se ccm 1,52 g (23,34 mmole) de nitritc de sódio e 0,150 g de (Bu)^NCl. Agitcu-se a mistu ra durante 18 horas à temperatura ambiente depois do que se diluiu com acetato deetilo e se lavou sucessivamente com água, uma solução diluída de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução saturada de cloreto de sedio. Seccu-se sobre sulfato de magnésio e finalmente evaporou. Purificou-se o composto impuro por cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de elui^ ção éter de petróleo e cloreto de metileno. Obtiveram-se 2,79 g (rendimento de 80,0%) do composto do título sob a forma de um óleo volátil.

IV (CHC1J d : 2200 cm¹ (-N-);

2 v max 3

Rf-IN^H (CDCl^, 200 MHz) $ : 7,25 (4H, s, H aromático), 4,29 (2H, s, CK₂ - ), 2,49 ppm (3H, s, -CH^).

Fase B.

4-y (clorometil)-tio _/-benzilazida

Arrefeceu-se com gelo de 4-(metiltio)-benzilazida em uma solução de 0,359 g (2 mmole) cloreto de metileno e tratou-se

-107-

e evaporou-se depois até à secagem. Obteve-se um composto impuro sob a forma de um óleo amarelo.

IV (puro)J : 2200 cm ¹ (-N-).

ΓΠ3. X ú

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz) 7,53 (2H, d, H aromático), 7,33 (2H, d, H aromático) 4,98 (2H, s, -SCH₂~) , 4,36 ppm (2H, s, -CH^) .

Fase C.

(4R, 5S, 6S)-3-/ £ £ £ (p-azidcmetil)-fenil y-tio y-metil y-tio J-6-£ 1'(R)-hidroxietily~4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/*3.2.0 yhept-2-enc-2-carbcxilatc de p-nitrobenzilo

Tratou-se uma solução gelada (à temperatura de 5°C) de 849 mg (1,75 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/* 1' (R)-hidroxietil y-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabicicloy 3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilatc de p-nitrcbenzilo em 15 ml de dimetilformamida, com 0,417 g (2 mmole) de 4-/“ (clorometil)-tio y~benzilazida, 0,703 g (5,25 mmo le) de iodeto de litio e 0,396 g (3 mmole) de N,N-di-isopropiletilamina. Após agitação durante 20 horas à temperatura de 5°C, diluiu-se a solução com acetato de etilo e agitou-se energicamente com uma solução aquosa diluída e gelada de ácido clorídrico. Filtrou-se a mistura e separou-se a fase orgânica. Extraíu-se a solução aquosa com acetato de etilo. Reuniram-se as fases orgânicas, lava-108ram-se com uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio e evaporaram-se. Purificou-se o produto impuro por cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição acetonitrilo e cloreto de metileno a 0-10%. Ob teve-se 0,485 g (rendimento de 49,9%) do composto do título.

IV (CH„C1_O)J : 2200 (-N.), 1772 (A-lactama), 1710 cm^-1 z z v max 3 '

(-C0₂-);

RMN¹H (CDC1₃, 2C0 MHz) $ : 8,20 (2H, d, H aromático), 7,63 (2H, d, H aromático), 7,44 (2H, d, H aromático), 7,27 (2H, d,

H aromático), 5,36 (2H, ABq, -CH₂Bz), 4,45-4,12 / (6H, m, -CH₂N₃ (4,34, s), -CH₂S (4,22, ABq), H-5, H-l') J, 3,45 (1H, m, H-4), 3,27 (1H, dd, J = 2,55, 6,77 Hz, H-6), 1,36 (3H, d, J = 6,27 Hz, 1' -CH₃), 1,24 ppm (3H, d, J = 7,31 Hz, 4-CH₃).

Fase D.

(4R, 5S, 6S)-3-/ 3 3 3 (p-arcinometil)-fenil /-tio /-metil /-tio /-6-/1¹ (R) -hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/3.2.0 /hept—2-eno-2-carboxilato de sódio (Iy)

O go₂h

A uma mistura de 32 ml de éter etílico e 16 ml de uma solução tampão 0,lM de fosfato de sódio monobãsico/hidrõxido de sódio a pH 7,0, adicionou-se uma solução de 0,470 g (0,846 mmole) de (4R,5S,6S)-3-/ 33 3 (p-azidometil)-fenil/-tio/-metil/-tio/-6-/l'(R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0/hept-2-enc-2-car boxilato de p-nitrobenzilo em tetra-hidrofurano. Submeteu-se a

-109ç mistura a hidrogenolise sobre 0,420 g de paladio a 10% sobre car- ( · vão como catalisador durante 3,75 horas e a uma pressão de 2,812 2 kg/cm (40 psi) de hidrogénio. Separcu-se depois o catalisador por filtração e extraíu-se c filtrado com êter etílico. Cromatogra fou-se a fase aquosa sobre gel de sílica de fase inversa utilizan dc como agente de eluição acetonitrilo e ãgua a 10-25%. Reuniram-se as fracções pertinentes e liofilizaram-se, obtendo-se 0,065 g (rendimento de 19,5%) do composto do título.

IV (Nujol)J : 1753 (ft- lactama), 1580 cm'¹ (-CO.

^r max 1' 4

RMN¹H (D₂0, 200 MHz) £ : 7,62 (2H, d, H aromático), 7,43 (2H, d,

H aromático), 4,31 (3H, ABq, SCH₂~), 4,20 (2H, s, -CH₂N), 4,25 (1H, m, H-l'), 3,99 (1H, dd, J = 2,51, 9,56 Hz, H-5), 3,41 (1H, dd, J = 5,52, 2,81 Hz, H-6), 3,36 (1H, m, H-4), 1,28 (3H, d, J = 6,38 Hz, 1' -CH₃), 1,12 ppm (3H, d, J = 7,25 Hz, 4-CH₃).

EXEMPLO 28 (4r,5S,6S)-3-/*£ £ £ (p-hidroximetil)-fenil /-tio /-metil /-tio /-6-£ 1' (R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sedio (Iz)

.../...

Fase A,

Carbonato de p (metiltio)benzil-p-nitrcbenzilo

-110Durante 30 minutos agitou-se uma solução de 1,0 g (6,48 mmole) de álcool p-(metiltio)-benzílico, 1,16 g (7,13 mmole) de carbonil-di-imidazol e 0,010 g de imidazol sôdico em 25 ml de ace tonitrilo, seguindo-se a adição de 1,09 g (7,13 mmole) de álcool p-nitrobenzílico. A agitação continuou durante mais 24 horas depois do que se evaporou a mistura reaccional até à secagem. Purificou-se o carbonato impuro por cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição cloreto de metileno. Obtiveram-se 2,13 g (rendimento de 98,6%) do composto do título sob a forma de um sólido branco. P.F. 84°-86°C.

IV (CH_C1_O) J : 1753 cm^-1 (-CO-);

2. 2. V IU3.X

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz)<^: 8,22 (2H, d, nitrobenzilo-H), 7,52 (2H, d, nitrobenzilo-H), 7,27 (4H, ABq, metil-tiobenzilo-H), 5,25 (2H, s, -CH₂), 5,14 (2H, s, -CH₂-), 2,48 (3H, s, -SCH₃).

-111-

Fase Β.

Carbonato de p-/ clorometil)-tic /-benzil-p-nitrobenzilc

Gota a gota, tratcu-se, durante dois minutos, ccm 0,425g (3,15 mmole) de cloreto de tionilo uma solução gelada (ã temperatura de 5'C) de 1,0 g (3 mmole) de carbonato de p- (metiltio) -benzil-p-nitrobenzilo em 50 ml de cloreto de metileno. Após agitação da solução resultante durante 30 minutes ã temperatura de 5^C, evaperou-se c dissolvente obtendo-se 1,10 g (rendimento de 99,7%) do composto do título sob a forma de um clec que solidificou. Este sólido utilizou-se tal e qual na fase seguinte.

IV (CH„C1„) J : 1752 cm¹ (-C0-);

2 v _max

RMN¹!! (CDC1₃, 200 MHz)/: 8,25 (2H d, nitrobenzilo-H) , 7,54 (2H, d, nitrobenzilo-H), 7,27 (4H, ABq, H metil-tio benzilo-H), 5,26 2H, s, -CH₂-), 5,18 (2H, s, -CH₂~), 4,97 ppm (2H, s, -CH₂C1).

-112Fase C

z (4R,5S,6S)-3-/ 7 //4-//// (p-nitrobenzil)-oxi /-carbonil /-oxi /-metil /-fenil /-tic /-metil /-tio /-6-/ 1' (R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilatc de p-nitrobenzilo

Tratcu-se uma solução gelada (ã temperatura de 5°C) de 0,849 g (1,75 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-prata-mercapto-7-cxo-l-azabiciclc/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carbcxilato de p-nitrobenzilo em 15 ml de dimetilformamida, com 0,736 g (2 mmole) de carbonato de p-/ (clcrcmetil)-tic /-benzil-p-nitrobenzilo, 0,703 g (5,25 mmole) de iodeto de lítio e 0,396g (3 mmole) de N,N-di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura reaccicnal durante 18 horas a temperatura de 5 C, depois do que se di^ luiu com acetato de etilo e se agitou energicamente com uma solução diluída e gelada de ácido clorídrico. Filtrou-se a mistura, separou-se a fase orgânica e extraíu-se a fase aquosa com acetato de etilo. Reuniram-se os extractos orgânicos, lavaram-se com uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio e evaporaram-se, Purificou-se c produto impuro por croma tografia sobre gel de silica utilizando como agente de eluição acetonitrilo e cloreto de metileno a 0-10%, Reuniram-se as fracçces pertinentes e evaporaram-se, obtendo-se 0,638 g (rendimento de 51,4%) do composto do título sob a forma de uma espuma.

-113/ /

I

IV (CH₂C1₂) _max ^: 3610 (-OH) , 1775 (β- lactama), 1755 (-OCO.?-), ‘

1710 cm^l (-CC>₂ ^_) .

RMN^H (CDCl^, 200 MHz) £ : 8,23 (2H, d, H nitrobenzilc), 8,20 (2H, d, H nitrobenzilc), 7,63 (2H, d, H nitrobenzilc), 7,53 (2H, d, H nitrobenzilc), 7,38 (4H, ABq, metil-tiobenzilc-H),

5.36 (2H, ABq, nitrobenzilo-CH₂), 5,26 (2H, S, -CH₂~), 5,17 (2H, S, -CH₂-), 4,35-4,05 (4H, m, H-5, H-l', 4,22 (2H, ABq,

S-CH₂-), 3,43 (1H, m, H-4), 3,26 (1H, dd, J = 6,88, 2,60Hz, H-6),

1.36 (3H, d, J = 6,27Hz, 1' -CK^), 1,28 ppm (3H, d, J = 6,34Hz,

4-CH₃).

Fase D.

( 4R, 5S , 6S)-3-/* £ £ £ (p-hidroximetil)-fenil /-tio /metil ^/-tio £-6-£ 1' (R) -hidrcxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/' 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de sõdio (Iz)

H₃C

ch₂oh

Adicionou-se uma solução de 0,635 g (0,895 mmole) de (4R, 5S , 6S)-3-/” £ £ £ 4-£ £ £ £ (p-nitrobenzil) -oxi /-carbonil J-oxi /-metil /-fenil /-tio /-metil /-tio /-6-/* 1' (R)-hidrcxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/' 3,2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 35 ml de tetra-hidrofurano, a uma mistura de 35 ml de éter etílico e 17,8 ml de uma solução tampão 0,lM de fosfato de sõdio monobãsico/hidrõxido de sõdio a pH 7,0. Submeteu-se a mistura a hidrogenólise sobre 0,60 g de paládio a 10% sobre carvão

-114- ~ ~ 2 como catalisador durante tres horas e a pressão de 2,812 kg/cm (40 psi) de hidrogénio. Separou-se depois c catalisador por filtração e extraíu-se c filtrado com éter etílico. Cromatografcu-se a fase aquosa sobre gel de silica de fase inversa (partisil) utilizando como agente de eluição acetonitrilo e água a 0-10%. Liofilizaram-se as fracções pertinentes, obtendo-se 0,08 g (rendi mento de 21,4%) do composto do título sob a forma de uma espuma branca.

IV (Nujol) ^)_max: 1745 lactama), 1590 cm ¹ (-C0₂~).

RMN^H (D₂<0, 200 MHz) 7,58 (2H, d, H aromático), 7,38 (2H, d, H aromático), 4,65 (2H, s, -CH₂~), 4,46-4,12 (3H, m, H-l', ^z’,20 2H, ABq, -CH₂S), 3,81 (1H, dd n/determinado, H-5), 3,34 (1H, dd n/determinado, H-6), 3,19 (1H, m, H-4), 1,26 (3H, d, J = 6,29Hz, 1' -CH₃), 1,08 ppm (3H, d, J = 7,17Hz, 4-Ch.j) .

EXEMPLO 29 (4R, 5S , 6S) -6-/* 1' (R) -hidroxietil _>Z-4-metil-3-/“ £ £ (1-metiltetrazol-5-il)-tio /-metil y-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 7hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Iaa)

-115Fase A.

5-/ (clorometil)-tio /-1-metil-tetrazcl

SNa

N N - CHo \ _ /

N — N

SCH₂C1

N N - CH-, \ _ /

N-N

Arrefeceu-se com gele e tratou-se de uma sc vez ccm 6,47 g (50 mmole) de brcmoclorcmetanc uma solução de 1,38 g (10,0 mmole) de hidrate de 5-mercapto-l-metiltetrazcl de sódio em 50 ml de acetonitrilo. Retirou-se c banho de gelo e agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas à temperatura ambiente. Evaporou-se depois o dissolvente e purificou-se o produto impuro per crcmatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição cloreto de metileno. Obtiveram-se 1,27 g (rendimento de 77%) do composto do título. P.F. 55^-57^0.

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz) S : 5,26 (2H, s, -CH₂), 4,01 ppm (3H, s,

-ch₃) .

Fase B.

(4R, 5S , 6S)-6-/ 1 ’ (P.) -hidroxietil /-4-metil-3-/ / / (1-metiltetrazcl-5-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de p-nitrebenzilo

-116ο /

Tratcu-se uma solução gelada (a temperatura de 5 C) d d/ 970 mg (2 mmole) de (4R, 5S, 6S )-6-/ 1'(R)-hidrcxietil /-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/” 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 20 ml de dimetilformamida, com 362 mg (2,2 mmole) de 5-£ (clorcmetil)-tio /-1-metiltetrazol, 803 mg (6 mmole) de iodeto de lítio e 427 mg (3,3 mmole) de di-isoprcpiletilamina. Agitcu-se a mistura reaccional durante 20 horas â tem peratura de 5 C depois dc que se diluiu com acetato de etilo, agitou energicamente com ácido clorídrico diluído e gelado e se filtrou. Separou-se a fase orgânica e filtrou-se. Separou-se a fa se orgânica e lavcu-se três vezes com uma solução saturada de cloreto de sedio. Após secagem sobre sulfato de magnésio, evapcrou-se o dissolvente e purificcu-se c ditioacetal impuro por cro mategrafia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição

acetonitrilo e	cloreto de	metileno a
(rendimento de	27,1	%) do	composto do
IV (CH^C1„)d	e	3600	(-OH), 1778
z z v max
, _ „ -1
1525 cm (-N0	2} '
RMN1H (CDC13)		£	: 8,23 (2H,
d, J = 8,8Hz,	Ar) ,	5,36 (2H, ABq, H-:
-SCH2-), 4,29	(1H,	dd, J	= 2,66, 9,4
3,60 (1H, dq,	H,l' )	, 3,31	(1H, dd, J

(3H, d, J = 6,28Hz, 1’ -CH₃), 1,30 ppm (3H, d, J = 7,29Hz, 4-CH₃).

-117Fase C

(4R, 5S , 6S)-6-/“ 1' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/* £ £ (1-metiltetrazcl-5-il)-tio /-metil /-tio/-7-cxc-l-azabiciclc/’3.2.0 /⁷hept-2-enc-2-carboxilatc de sódio (Iaa)

A uma mistura de 20 ml de éter etílico e 10 ml de uma solução tampão 0,IM de fosfato de sódio moncbásico/hidróxido de sódio a pH 7,0 adicionou-se uma solução de 270 mg (0,53 mmole) de (4R, 5S, 6S)-6-f 1' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ £ £ (1-metiltetrazcl-5-il)-tio /-metil ./-tio /-7-cxo-l-azabiciclc/*3.2.0/hept-2-enc-2-carboxilato de p-nitrcbenzilo em 20 ml de tetra-hidrofura no. Submeteu-se esta mistura a hidrogenólise sobre 270 mg de paládio a 10% sobre carvão como catalisador, à pressão de 2,812 kg/cm (40 psi) de hidrogénio durante 4 horas. Separou-se depois o catalisador por filtração e extraíu-se o filtrado com éter etílico. Cromatografou-se a fase aquosa sobre gel de sílica de fase inversa utilizando como agente de eluição, inicialmente, a água e depois acetonitrilo em água a 5%. Reuniram-se as fracções pert_i nentes e liofilizaram-se, obtendo-se 52 mg (rendimento de 24,8%) do composto do título.

IV (Nujol) y)_max? 1750 (β- lactama) , 1595 cm (-CO₂ ) ·

RMN^H (D₂0> 4,59 (2H, ABq, SCH₂-) , 4,27 (1H, dq, H-l')

4,17 (1H, dd, J= 2,62, 9,36Hz, H-5), 4,05 (3H, s, -N-CH-j) , 3,45

-118(2Η, m, H-6, H-4), 1,32 (3H, d, J - 6,38Hz, 1' -CE ), 1,20 ppm (3H, d, J = 7,26Hz, 4-CH₃).

EXEMPLO 30 (4R,5S,6S)-3-/ £ £ £ (p-hidrazinocarbonil)-fenil /-tic /-metil /-tic /-6-/ 1'(R)-hidroxietil/-4-metil-7-oxc-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de sódio (Ibb)

C - NHNHn II ² o

Fase A.

Hidrazida do ãcido 4-£ (clorometil)-tio /-benzóico

A uma solução de 0,64 g (20 mmole) de hidrazina em 15 ml de acetonitrilo, adicionou-se, gota a gota e ã temperatura am biente, uma solução de 2,0 g (9,11 mmole) de cloreto de 4-£ (clorometil) -tio /-benzoilo em 10 ml de acetonitrilo. Observou-se a formação de uma reacção exotérmica que originou a formação de um sólido branco. Agitou-se a mistura durante 30 minutos depois do que se evaporou atê â secagem. Purificou-se o produto impuro por

-119cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluiçãc acetato de etilo. Obteve-se 0,758 g (rendimento de 38,4%) da hidrazida do título sob a forma de um solido branco.

IV (CH_OC1_) .) : 1673 (-C0^_) 1600 cm¹ (aromático).

Z ▼ ΓΠ3.Χ

RMN¹H (CDCl^, 200 MHz) £ : 7,63 (4Η, ABq, Η aromático) , 5,02 ppm (2Η, s, -SCH₂~).

Fase B.

2-/*p-/ (clorometil)-tio ./-benzoil _/-hidrazina-carbcxilatc de p-nitrobenzilo

A uma suspensão gelada (à temperatura de 5°C) de 0,433g (2 mmole) de hidrazida do ácido 4-/* (clorometil)-tio y-benzõico e 0,475 g (2,2 mmole) de p-nitrobenzil-cloroformato em 25 ml de ace tonitrilc adicionou-se, gota a gota, 0,285 g (2,2 mmole) de N,N-di-isopropiletilamina. Agitou-se a mistura reaccional durante 15 minutes à temperatura de 5°C e durante mais 15 minutos à tempera0 tura de 20 C. Evapcrou-se depois o dissolvente e purificou-se c produto impuro resultante por cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição acetonitrilo e cloreto de metileno a 0-10%. Reuniram-se as fracções pertinentes e evaporaram-se, obtendo-se 0,34 g (rendimento de 42,9%) do composto do título sob a forma de um sólido amarelo.

-120IV (CH-C1-) J : 3510 (-NH), 1760 2 2 V max '

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz)6 : 8,21 (2H, (2H, d, H aromático), 7,59 (4H, 2d, co), 5,30 (2H, s, -CH₂-), 5,03 (2H,

-CO₂PNB), 1695 cm (-CON).

d, H nitrobenzilo), 7,79 H de nitrobenzilo, H aromãtis, -ch₂-;

-z

Fase C.

(4R, 5S, 6S)-3-/ f f l-ffr-ff (p-nitrcbenzil) -oxi ^/-carbcnil J-hidrazinc _/-fenil ^7-tio J -metil ./—tio f-6-f 1' (R) -hidrcxietil J-4-metil-7-oxc-l-azabiciclo/‘3.2.0 _/hept-2-enc-2-carbcxilatc de p-nitrobenzilo

Tratcu-se uma solução gelada (â temperatura de 5°C) de 0,379 g (0,78 mmole) de (4R,5S,6S) -6-f 1' (R) -hidroxietil _/-4-metil-3-prata-mercapto-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0 yhept-2-eno-2-car boxilato de p-nitrobenzilo em 10 ml de dimetilformamida, com 0,34g (0,86 mmole) de 2-f p-f (clorometil)-tio ^/-benzoil y-hidrazina-carboxilato de p-nitrobenzilo, 0,345 g (2,58 mmole) de iodeto de lítio e 0,166 g (1,29 mmole) de N,N-di-isopropiletilamina. Apos agitação durante 18 horas à temperatura de 5°C, diluiu-se a solução com acetato de etilo, agitcu-se energicamente com uma solução diluída e gelada de ácido clorídrico e filtrcu-se. Separou-se a fase orgânica e extraíu-se a fase aquosa com acetato de etilo. Reuniram—se os extractos, lavaram-se, duas vezes, com uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram—se sobre sulfato de magnésio e evaporaram-se atê â secagem. Purificou-se c produto impuro

L ί

por cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição acetonitrilo e cloreto de metileno a 0-10% e depois acetato de etilo. Obteve-se 0,227 g (rendimento de 39,5%) do ccmpos to dc título sob a forma de uma espuma amarela.

IV (CH Cl„) ϋ : 1775 (A- lactama), 1747 (-NCO„PNB), 1705 d a. md x { a.

(CO₂PNB), 1685 cm’¹ (-CON-).

ΡΜΝ^Η (CDCl^, 200 MHz)d£ : 8,26-7,43 (12H, série de d, H aromático), 5,35 (2H, ABq, -ΟΟ₂ΟΗ₂~), 5,30 (2H, s, -NCO₂CH₂), 4,40-4,10 (4H, m, H-l', H-5; 4,28: 2H, ABq, -SCH₂), 3,40-3,21 (2H, m, H-4;

3,23: 1H, dd, J = 2,58, 6,33 Hz, H-6), 1,33 (3H, d, J = 6,25Hz,

1' -CH₃), 1,22 ppm (3H, d, J = 7,29Hz, 4-CH₃).

Fase D.

(4R,5S,6S)-3-/ £ £ £ (p-hidrazinocarbonil)-fenil /-tio /-metil /-tio /-6-/ 1' (R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de sódio (Ibb)

A uma mistura de 20 ml de éter etílico e 10 ml de uma solução tampão 0,1M de fosfato de sódio monobásico/hidrõxido de sódio a pH 7,0, adicionou-se uma solução de 0,29 g (0,393 mmole) de (4R,5S, 6S)-3-/ / / 4-/2-/ / (p-nitrcbenzil)-cxi /-carbcnil /-hidrazino /-fenil /-tio /-metil /-tio /-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept—2-reno-2-carboxilato de p-nitrobenzilo em 20 ml de tetra-hidrofurano. Submeteu-se a mistura a hidrogenólise sobre 0,29 g de paládio a 10% sobre carvão

-122- / /

I’ como catalisador a uma pressão de 2,812 kg/cm (40 psi) de hidro génio durante 4 horas. Decorrido este tempo, separcu-se o catali sador por filtração e substituiu-se por 0,175g de um lote recente. Mantiveram-se as condições de hidrogenólise durante mais duas horas. Filtrou-se depois a mistura reaccional e extraíu-se o filtrado com éter etílico. Cromatografou-se a fase aquosa sobre gel de sílica de fase inversa (partisil) utilizando como agente de eluição acetonitrilo e ãgua a 0 e 5%. Reuniram-se as fracções per tinentes e liofilizaram-se, obtendo-se 0,048g (rendimento de 27,4%) dc composto do título sob a forma de uma espuma branca.

IV (Nujol)^_max: 1750 (β-lactama), 1595 cm^-1 (-CO₂~)

RMN¹H (DO, 200 MHz)£: 7,67 (4H, ABq, H aromático), 4,38 (2H,

ABq, -SCH₂-), 4,17 (1H, m, H-l'), 3,88 (1H, dd, J: 9,13, 2,37,

H-5), 3,38 (1H, dd, J = 6,06, 2,49 Hz, H-6), 3,27 (1H, m, H-4),

1,27 (3H, d, J = 6,36 Hz, l’-CH₃), 1,13 ppm (3H, d, J = 7,19Hz, 4-CH₃).

EXEMPLO 31 (4R,5S,6S)-6-/*1' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/£ / (5-metil-l,3,4-oxadiazol-2-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/' 3.2.0/hept-2-eno-2-carboxilato de sedio (Icc)

Ν—N

CO₂Na

-123- y !

Fase A,

2-£ (iodometil)-tic /-5-metil-l,3,4-cxadiazcl

N—N

O

N— N

SCH₂C1

Durante 24 horas agitou-se, à temperatura ambiente, na presença de 130g (1 mmole) de BrCH₂Cl, uma suspensão de 33,Og (214 mmole) do sal de potássio de 2-mercapto-5-metil-l,3,4-oxadia zcl em 330 ml de acetonitrilo. Evaporou-se depois o dissolvente e partilhou-se c resíduo entre água e acetato de etilo. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e evaporou-se. O resíduo assim obtido dissolveu-se ncvamente em éter etílico; tratou-se a solução etérea com carvão e filtrou-se através de uma almofada de Celite. A evaporação do filtrado originou 29,4g de um óleo incolor. Dissolveu-se este óleo impuro em 350 ml de acetona e adicionaram-se 134g (894 mmole) de iodeto de sódio. Aqueceu-se a mistura resultante à temperatura de refluxc durante 24 horas, diluiu-se com êter etílico e lavou-se com ãgua. Extraiu -se novamente a fase aquosa com êter etílico. Reuniram-se cs extractos orgânicos, lavaram-se com ãgua e uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfato de magnésio, trataram-se com carvão, filtraram-se e finalmente evaporaram-se, obtendo-se 40,Og (rendimento de 87,3%) do composto do título sob a forma de um õleo amarelado.

RMN¹H (CDC1₃, 200 MHz)/’; 4,66 (2H, S, -CH^) , 2,56 ppm (3H, s,

-ch₃) .

-124Fase Β.

^v--Y f

✓ r

(4R,5S,6S)-6-/ 1'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ / / (5-metil-l,3,4-oxadiazcl-2-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de alilo

Tratcu-se uma solução gelada (ã temperatura de 5°C) de 75,9 g (152 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/ 1 (R)-hidrcxietil /-3-(difenilfosfono)-4-metil-7-cxo-l-azabiciclo/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carbo xilato de alilo em 1500 ml de tetra-hidrofurano, adicionando pouco a pouco 10,3 g (258 mmole) de LiSH / o LiSH utilizado preparou -se saturando uma solução gelada (à temperatura de 5°C) de butil-lítio em volumes iguais de hexano e de tetra-hidrofurano com ác_i do sulfídrico. Separou-se o sal precipitado por filtração e secou -se /. Agitou-se a solução durante 35 minutos e adicionaram-se de pois 58,4 g (228 mmole) de 2-/ (iodometil)-tio /-5-metil-l,3,4-oxadiazol e seguidamente 40 ml (228 mmole) de di-isopropiletilamina. Após agitação da mistura reaccional durante 30 minutos, adicionaram-se 14 ml de ãcido acético e 1000 ml de ãgua gelada. Extraíu-se o produto com acetato de etilo. Lavou-se o extracto or gânico, sucessivamente, com ãgua, com uma solução aquosa de carbo

-125(..

nato de hidrogénio e sedie e ccm uma solução saturada de cloreto ¹ ' de sedio. Secou-se sobre sulfate de magnésio e evaporou-se. Puri ficcu-se c diticacetal impuro por cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição acetonitrilo e cloreto de metileno a 0-25%. Obtiveram-se 15,5 g (rendimento de 24,8%) do composto do título.

IV (CH_OC1„)V : 3600 (-OH), 1777 (A-lactama), 1715 cm'¹ (éster),

Ζ Ζ ΓΠ3 X |

RMN H (CDC1₃)

6,10-4,63 (5H, modelo alílico) 4,58 (2H,

ABq,	-sch2)	, 4,26	(2H,	m, H-5,	H-l ), 3,53	(1H, dq, H-4),	3,28
(1H,	dd, J	= 2,63,	J =	6,89Hz,	H-6), 2,54	(3H, s, Het-CHq)	, 1,36
(3H,	d, J =	6,26Hz	1 , 1	-ch3), 1	,30 ppm (3H,	d, J = 7,32Hz,	4-CH3)
Fase	C.

( 4R, 5S , 6S)-6-/^- 1' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/ £ £ (5-metil-l, 3,4-oxadiazcl-2-il)-tic /-metil /-tio /-7-cxc-l-azabicicle/ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Icc)

N-N s s —A-ch 'Ζ ^Λ0 3 ₂Ά/

N—N

Uma solução de 15,35 g (37,3 mmole) de (4R,5S,6S)-6-/* l' (R)-hidroxietil /-4-metil-3-/* £ £ (5-metil-l,3,4-oxadiazol-2-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/* 3.2.0/hept-2-eno-2-carboxilato de alilo em 130 ml de metileno arrefeceu-se até à temperatura de 5°C e tratou-se, sucessivamente, com 1,0 g (0,87 mmole) de Pd(PPh₃)^, 100 mg (0,38 mmole) de P0₃ e uma solução de 74,6 ml (37,3 mmole) de hexanoato de etilo e sõdio 0,5M em acetato de etilo que se adicionaram gota a gota. Apõs agitação durante

-12690 minutos a temperatura de 5 C, extraíu-se a mistura reaccional com 2 x 150 ml de ãgua gelada. Cromatografou-se a solução aquosa sobre gel de sílica de fase inversa (Bondapak C-18) utilizando como agente de eluição acetonitrilo e ãgua a 0-20%. A licfilização das fracçoes pertinentes originou 13,0 g (rendimento de 88,6%) do produtc pretendido.

i

IV (Nujol) \J : 1750 (A- lactama) , 1595 cm ¹ (-C0--) .

ΓΠ3Χ I £.

RMN¹H (D₂0, 200 MHz) S ' 4,55 (2H, ABq, -SCH₂), 4,23 (1H, dq, H-l'), 4,21 (1H, dd, J = 9,32, 2,58Hz, H-5), 3,50 (1H, dq, H-4), 3,46 (1H, dd, J = 6,09, 2,72Hz, H-6), 2,56 (3H, s, Het-CH₃), 1,30 (3H, d, J = 6,39Hz, 1' -CH-j) , 1,21 ppm (3H, d, J = 7,26Hz,

3-CH₃).

EXEMPLO 32 (4R, 5S , 6S)-6-/” 1' (R)-hidroxietil _>7-4-metil-3-/’ / (5-metil-l,3,4-tiadiazcl 2-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxo-l-azabiciclo/‘ 3.2.0 /hept-2-eno-2-carboxilato de sódio (Idd)

-127-

2-/ (iodometil)-tio /-5-metil-l,3,4-tiadiazol

N-N Ν—Ν Ν—N

A uma solução aquosa gelada (à temperatura de 5°C) de 20,7 g (313 mmole) de hidróxido de potássio a 85% em 160 ml de álcool etílico, adicicnaram-se 41,4 g (313 mmole) de 2-mercapto-5-metil-l,3,4-tiadiazcl. Retircu-se o banho de gelo e agitou-se a mistura atê completa dissolução que ocorreu passados 30 minutos. Evaporou-se depois c dissolvente até ã obtenção de um oleo viscoso que solidificou. Dissolveu-se c sal de potássio resultante em 200 ml de acetonitrilo e arrefeceu-se a solução em um banho de gelo e tratou-se ccm 121 g (939 mmole) de brcmcclcrcmetanc. Deixou-se que o gelo presente no banho fundisse e ccntinuou-se a agitação da mistura durante 25 horas à temperatura ambiente. Partilhou-se a mistura reaccional entre acetato de etilo e água. Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio e evaporou-se. Purificcu-se o resíduo fazendo passar através de uma almofada de gel de sílica utilizando como agente de eluição, inicialmente, cloreto de metileno e depois acetonitrilo a 5%/cloreto de metileno. Obtiveram-se 93,0 g (rendimento de 76,0%) de 2-/ (clorometil)-tic /-5-metil-l,3,4-tiadiazol,

Dissolveu-se o tiadiazol resultante em 450 ml de acetona, arrefeceu-se até à temperatura de 5°C utilizando um banho de gelo e tratou-se, lentamente, com 178 g (1,19 mmole) de iodeto de sódio. Deixou-se que c banhe de gelo fundisse e agitou-se a mistura durante 75 horas à temperatura ambiente. Evaporou-se a maior

-128f parte da acetona e partilhou-se a pasta residual entre éter etílico e água. Lavcu-se a fase etérea ccm uma solução aquosa de bis sulfite de sodio e água, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e evaporou-se. Cromatografcu-se o produto impuro resultante sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição cloreto de metileno e acetonitrilo a 0-10%/cloreto de metileno. Obtiveram-se 50,0 g (rendimento de 77,2%) dc composto do título.

RMN¹H (CDCl ) & : 4,78 (2H, s, ~CH₂), 2,79 ppm (3H, s, ’Ch₃).

Fase B.

(4R, 5S , 6S)-6-/ 1¹ (R)-hidroxietil _/-4-meti 1-3-/^- £ £ (5-metil-l,3, ,-tiadiazol-2-il)-tio y-metil y-tio y-7-cxc-l-azabiciclo/* 3.2.0 £hept-2-eno-2-carboxilato de alilo

Tratou-se uma solução gelada (ã temperatura de -5°C) de 100 g (0,2 mole) de (4R,5S,6S)-6-/^- 1'(R)-hidroxietil £-3-(difenilfosfono)-4-metil-7-cxo-l-azabiciclo/‘ 3.2.0 yhept-2-eno-2-carboxilato de alilo em 2 litros de tetra-hidrofurano com 12,0 g (0,3 mo le) de LiSH que se adicionaram pouco a pouco. Após agitação duran

-129IV te 25 minutes, adicicnaram-se 50 g (0,184 mele) de 2-/ ( iodometil)-tic /-5-metil-l,3,4-tiadiazol em 100 ml de tetra-hidrefura nc e depois 25,9 g (200 mmole) de di-isoprepiletilamina. Agitou -se a mistura reaccional durante 30 minutes a temperatura de 0 C e durante 30 minutos ã temperatura ambiente. Adicicnaram-se 15 ml de ãcido acético ã mistura reaccional e depois 2 litros de ãgua gelada. Extraíu-se a solução aquosa com acetato de etilo. Reuniram-se cs extractos orgânicos, lavaram-se, sucessivamente, ccm ãgua, carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução saturada de cloreto de sódio, secaram-se sobre sulfate de magnésio anidro e evaporaram-se. Purificou-se o produto impuro resultante por cromatografia sobre gel de sílica utilizando como agente de eluição acetonitrilo e cloreto de metileno a 0-60%. Reuniram-se as fracções pertinentes e evaporaram-se obtendo-se um sólido que se triturou nc seio de êter etílico e se separou mediante filtração. Ob tiveram-se 29,93 g (rendimento de 28,0%) dc composto do título.

(CH₂C1₂) vJ_max: 3600 (-OH) , 1775 (^-lactama), 1715 (ester).

cm

RMN¹H (CDCl₃)<f: 6,1-4,6 (5H, modelo alílico), 4,67 (2H, ABq,

-SCH₂~), 4,28-4,22 (2H, m, H-l', H-5), 3,58 (1H, dq, H-4), 3,27 (1H, dd, J = 2,59, 6,85Hz, H-6), 2,76 (3H, s, Het-CH ), 1,36 (3H, d, J = 6,27Hz, l'-CH ), 1,30 ppm (3H, d, J = 7,30Hz, 4-CH.p .

n * * / « <

-130Fase C.

(4R,5S,6S)-6-/ l'(R)-hidroxietil /-4-metil-3-/£ £ (5-metil-l,3,4-tiadiazol-2-il)-tio /-metil /-tio /-7-oxc-l-azabiciclc/ 3.2.0 /hept-2-enc-2-carboxilato de sedio (Idd) . _v j N—N

N-N

00₂Na

Tratou-se uma solução gelada (ã temperatura de 5°C) de 23,93 g (55,97 mmole) de (4R, 5S , 6S)-6-/*l'(R)-hidroxietil /-4-me til-3-/*£ £ (5-metil-l,3,4-tiadiazol-2-il)-tio /-metil /-tio /-7-cxo-l-azabiciclo/3.2.0 /hept-2-eno-2-carbcxilato de alilo em 200 ml de cloreto de metileno, sucessivamente, com 150 mg (0,57 mmole) de PPh^, 1,3 g (1,13 mmole) de PdíPPh^)^ e 112 ml (56 mmo le) de hexanoato de etilo 0,5M em acetato de etilo. Agitcu-se a mistura reaccional durante 2,5 horas à temperatura de 5°C tempo durante o qual se observou a precipitação de um sólido. Após diluição da solução com 300 ml de acetona, separou-se o precipitado por filtração, lavou-se com acetona e seccu-se. Purificaram-se, aproximadamente, 30 g do produto impuro por cromatografia sobre gel de silica de fase inversa (^íBondapak C-18) utilizando como agente de eluição, inicialmente, ãgua e depois acetonitrilo e ãgua a 0-10%. Apôs liofilização, separaram-se 18,9 g (rendimen to de 82,5%) dc composto do título sob a forma de um sólido bran co,

IV (Nujol1750 (^-lactama) , 1600 cm ¹ (éster)

RMN^H (D₂0)£: 4,54 (2H, ABq, -SCH₂) , 4,26 (IH, dq, H-l'), 4,15

-131-

(1H,	dd,	ú = 2,51, 9,31Hz, H-5),	3,55-3,37	(2H,	m,	H-6, H-4),
2,78	(3H,	, s, Het-CH^), 1,32 (3H,	d, J - 6,	38Hz,	1 1	’CH ), 1,20
ppm	(3H,	d, J = 7,25 Hz, 4-CH3).

EXEMPLO 33

Actividade Biológica

Para ilustrar a potente acção antibacteriana e a excelente bicdispcnibilidade por via oral dos compostos carbapenémiccs de acordo com a presente invenção, cs quadres I, II e III mes trara dados de actividade in vitro (CIM) actividade oral in vivo (DP.-_n) - , e concentrações sanguíneas apôs administração oral dos compostos representativos t^/2 e AUC) , respectivamente.

I. Acção In Vitro quadre I mestra Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) de agentes antimicrobiantes representativos. Esta determinação realizou-se utilizando uma diluição de um caldo de cultura micrctitulado a partir de caldo de nutriente e de um inoculado bacteriano final de aproximadamente 500 000 UFC/ml proveniente de culturas nccturnas de bactérias. Incubaram-se depois as placas microtituladas ã temperatura de 35°C durante toda a noite. Determinaram-se as concentrações inibitórias mínimas em jjg/ml co mo a concentração mais baixa do composto que inibe o crescimento visível da bactéria.

II. Acção Oral In Vivo

A eficácia terapêutica in vivo de compostos representa tivos após administração por via oral a ratos infectados, por via

-132intraperitcneal, ccm 0,5 ml de uma suspensão de diversas bactérias pode cbservar-se no quadro II. Os valeres sãc apresentados sob a ferma de df^q (dose em mg/kg capaz de proteger 50% dos ra tos infectados).

III. Farmacocinética

As concentrações sanguíneas e c semi-períede de vida de compostos seleccionados de acorde com a presente invenção, após administração oral em doses de 50 mg/kg administrados a mur ganhes, pede cbservar-se no quadro III.

Quadre I

CIM (yjg/ml) compostos

Organismos	Ik	Icc	Idd
Str. Pneu. A9525		0,004	0,001	0,	001
Staph. aur. PenP.		0,030	0,030	o,	016
E. coli A15119		2,000	0,004	0,	008
Ps. aeur. A9843		63,000	32,00	32,	00
	QUADRO	III
	CONCENTRAÇÕES	SANGUÍNEAS
Composto	c	*1/2 (mm)	AUC < μ g · h/ m 1)
Ik	40	33	34
Iq	33	25	24
lb	27	25	21
Icc	20	14	11
Idd	12	24	10
Ibb	<1	ND	ND

ND = Não determinado

Claims (36)

1. REIVINDICAÇÕES

   1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral η h (I) na qual representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C.

   l-o n representa zero ou o número inteiro 1 ou 2;

   R_n representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo

   R₂ representa um grupo alquilo C^_g; fenilo comportando , eventualmente, como substituinte um grupo ciano, -CONH^, -CH₂OH, ,

   -CONHNH₂ ou até 5 átomos de halogéneo, alquilo

   C. , ou alcuiloxi C. _r ·, fenilmetilo comportando, 1-6 - 1-6 eventualmente, como substituinte(s) até 5 átomos de halogéneo ou um grupo alquilo g ou alquiloxi g no núcleo fenílico; ou um grupo de fórmula geral -(CH^lp-X na qual p representa zero ou o número inteiro; e

   X representa um heterociclo aromático com 5 membros com até 1 átomo de enxofre, 1 átomo de oxigénio ou 4 átomos de azoto e comportando, eventualmente, como substituinte, um grupo alquilo C. , ou heterociclo aromático com 6 membros

   1-6 comportando até 4 átomos de azoto e, eventualmente, como substituinte um grupo alquilo C^_g,· ou dos seus sais não tóxicos aceitáveis sob o ponto de vista far macêutico ou dos seus ésteres hidrolisáveis sob o ponto de vista fisiológico ou dos seus produtos de solvatação, caracterizado pelo facto:

   para a preparação de compostos de fórmula geral

   CH R, na qual

   R^, R₂ e R^ têm os significados definidos antes; e

   Rg representa um átomo de hidrogénio ou um catião de um sal básico;

   de se alquilar um composto de fórmula geral (IV) na qual

   R^ tem os significados definidos antes;

   M^T representa um ãtomo de hidrogénio ou um catião de um metal; e com um composto de fórmula geral

   Q (V) na qual

   Rg tem os significados definidos antes;

   Q representa um átomo eliminável de iodo, bromo ou cloro; e

   Rg representa um grupo alquilo ; fenilmetilo comportando, eventualmente, como substituinte(s), até 5 átomos de halogéneo ou grupos alquiloxi - ou alquilo θ no núcleo fenílico; fenilo, comportando, eventualmente, como substituinte, um grupo ciano, -CONHg ou até 5 átomos de halogéneo, alquilo g ou alquiloxi g,· ou um grupo de fórmula geral ou -(CH₂)_o~X em que B representa um grupo funcio nal convertível em um grupo -Cí^OH, -CHgNHg ou -CONHNH₂ e p e X têm os significados definidos

   Ζ antes;

   para se obter um composto de fórmula geral

   OE R.

   ϊ r (VI)

   R. , R-, e R_o têm os significados definidos ani J o tes; e

   R.? representa um grupo protector convencional do radical hidroxi;

   de se converter o grupo funcional representado pelo símbolo Rg no radical pretendido e de se remover simultaneamente o grupo protector.
2. 2,- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; n representa ze ro ou o número inteiro 1; Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo ; R^ representa um grupo alquilo , fenilo comportando, eventualmente, como substituinte, um grupo ciano, -CONH₂, -CH₂OH, -CH₂NH₂, -CONHNHg ou até 5 átomos de halogéneo ou alouilo C. fenilmetilo comportando, eventualmente, x—o t

   como substituinte até 5 átomos de halogéneo ou um grupo alquilo C]__g no núcleo fenílico, ou um grupo de fórmula geral -(CH_) -X na qual p representa zero ou o número inteiro 1 e X re

   4 — presenta um grupo piridinilo, furilo ou

   N-N ou um grupo de fórmula geral

   N-N /' ' \

   CH na qual Y representa um átomo de oxigénio ou de enxofre, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3. 3.- Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ represen ta um grupo metilo; Rg representa um átomo de hidrogénio e n representa zero, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

   f í

   Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual p represen ta zero e R representa um grupo de fórmula geral

   N—N na qual Y tem os significados definidos antes, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
4. 5.- Processo de acordo com a reivindicação 4, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1'(R)-hidroxietil]-4-metil-3- [ [ [ ( 5-metil-l, 3,4-oxadiazol-2-il) -tio }-metil]-tio]-7-oxo-l^azabi cio[3.2.0]hept-2-eno-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
5. 6,- Processo de acordo com a reivindicação 4, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1'(R)-hidroxietil)-4-metil-3-[[[(5-metil-l,3,4-tiadiazol-2-il)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-1-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

   /
6. 7,- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-3-[[[(p-carbamoilfenil·)-tio]-metil]-tio]-6- [1' (R)-hidroxietil]-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]nept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .

   3.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-3-[[[(p-cianofenil)-tio]-metil] -tio] -5- Cl·' (R) -hidroxietil] -4-metil-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
7. 9.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ãcido (4R, 5S,6S)-3-[[[[(p-aminometil)-fenil]-tio]-metil]-tio]-6-[1' (R)-hidroxietil]-4-metil-7-oxo-l-azabici cio[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
8. 10.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ãcido (4R,5S,6S)-[1'(R)-hidroxietil]-3-[[[(fenilmetil)-tio]-metil]-tio]-4-metil-7-oxo-l-azabici9 cio(3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
9. 11.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,SS)-3-[[[[(p-hidroximetil)-fenil]-tio]—metil]-tio]-6- [1' (R)-hidroxietil]-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
10. 12.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-(1'(R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[[(l-metiltetrazol-5-il)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
11. 13.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-3-[[[[(p-hidrazinocarbonil)-fenil]-tio]-metil]-tio]-6-[1'(R)-hidroxietil]-4-metil-7-oxo-1-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

    ¢.
12. 14.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1'(R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[(metiltio)-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo [3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
13. 15.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4S,5S,6S)-o-[1'(R)-hidroxietil]-4-metil-3-[ [ [ [(piridin-3-il)-metil]-tio]-metil-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
14. 16.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-3-[[[(3,4-diclorofenil)-tio]-metil]-tio-6-[1'(R)-hidroxietil]-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
15. 17.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1'(R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[[(2,3,4,5,6-pentafluorofenil)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-l1 ι

    -azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxíiico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

    13.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-[1'(R)-hidroxietil]-3-[[(isopropiltio)-metil]-tio]-4-metil-7-oxo-l-azabic iclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
16. 19.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-[1'(R)-hidroxietil]-3-[[[[(furan-2-il)-metil]-tio]-metil]-tio]-4-metil-7-oxo-1-azabi ciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxíbico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
17. 20.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[l'(R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[[(piridin-4-il)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
18. 21.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[i'(R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[[{piridin-2-il)-tio]metii-tio]-7-oxo-l-azabicicio[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico , caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
19. 22. - Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-o-[1' (R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[[(piridin-3-il)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico , caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
20. 23. - Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1' (R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[[(p-clorofenil)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo [3 . 2 . 0 ] hept-2-eno-2-carboxílico , caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
21. 24.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1'(R)-hidroxietilJ-4-metil-3-[[(feniltio)-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos Iniciais correspondentemente substituídos.
22. 25. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ representa um grupo metilo, R^ representa um átomo de hidrpgénio e n representa o número inteiro 1, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
23. 26. - Processo de acordo com a reivindicação 25, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-3-[[[(p-clorofenil)-sulfinil]-metil]-tio]-6- [1' (R)-hidroxietil]-4-metil-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
24. 27. - Processo de acordo com a reivindicação 25, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1' (R)-hidroxietil·]-4-metil-3-[[[[(piridin-3-il)-metil]-sulfinil]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo(3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
25. 28. - Processo de acordo com a reivindicação 25, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1' (R)-hidroxietil] -4-me14 til-3-[[(metil-sulfinil)-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
26. 29. - Processo de acordo ccm a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R^ e R^ re presentam, cada um, um átomo de hidrogénio e n representa zero, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais cor respondentemente substituídos.
27. 30. - Processo de acordo com a reivindicação 29_z para a preparação de ácido (5R,6S)-ó-[1'(R)-hidroxietil]-3-[[[(piridin-3-il)tio]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo [3.2.0]hept-2-eno—2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
28. 31. - Processo de acordo com a reivindicação 29, para a preparação de ácido (5R,6S)-6-[1'(R)-hidroxietil]-3-[[(metiltio)-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
29. 32. - Processo de acordo com a reivindicação 29, pa15 /

    '--Ζ ra a preparação de ácido (5R,6S)-6-[1'(R)-hidroxietil]-3-[[[(pi ridin-2-ii)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
30. 33. - Processo de acordo com a reivindicação 29, para a preparação de ácido (5R,6S)-6-[1'(R)-hidroxietil]-3-[[[(piridin-4-il)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo [3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
31. 34. - Processo de acordo com a reivindicação 29, para a preparação de ácido (5R,6S)-β-[1'(R)-hidroxietil]-3-[[[(p-clorofenil)-tio]-metil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
32. 35. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na gual R^ e re presentam, cada um, um grupo metilo e n representa zero, carac terizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
33. 36.- Processo de acordo com a reivindicação 35, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[1'(R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[1(R)-(metiltio)-etil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3.2.0]hept-2-eno-2-carboxílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
34. 37. - Processo de acordo com a reivindicação 35, para a preparação de ácido (4R,5S,6S)-6-[l'(R)-hidroxietil]-4-metil-3-[[1(s)-(metiltio)-etil]-tio]-7-oxo-l-azabiciclo [ 3 . 2 . 0 ] hept ?.· eno-2-carboxílico , caracterizado pelo facto de se utilizarei compostos iniciais correspondentemente substituídos .
35. 38. - Processo para a preparação de composições farma cêuticas apropriadas para o tratamento de infecções bacterianas no homem e em outros animais, caracterizado pelo facto de se mis turar, como ingrediente activo, uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico de um composto de fórmula geral I, quando preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1, e que apresenta acção antibiótica, com um diluente ou veículo acei tável em farmácia.
36. 39.- Método para o tratamento de infecções bactéria nas em um mamífero, caracterizado pelo facto de se administrar, diariamente, ao doente uma quantidade compreendida entre 5 e /

    200 -ισ/Kg, de peso do corpo desse dcenre, de ux çonpcsro de fór ' mula geral I, cuando preparado pelo processe de acordo ccm. a reivindicação L, e cue apresenra acção ancibiécica.