PT98785A - Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas com accao reguladora de lipidos contendo lactonas de nucleo decagonal - Google Patents

Description

Processo para a preparação de composições farmacêuticas com acção reguladora de lí-pidos contendo lactonas de núcleo decagonal

DESCRIÇÃO

As elevadas concentrações de colesterol no soro sozinho ou com as simultâneas elevadas concentrações de triglicéridos no soro representam um factor de risco para pacientes que sofrem de arteriosclerose, que pode manifestar-se não sõ sob a forma de esclerose das coronárias, enfarte cardíaco e obturação dos vasos sanguíneos periféricos, mas também sob a forma de aploplexia na zona do cérebro. Por outro lado, a partir de numerosos estudos, sabe-se que se pode diminuir de maneira concludente esse risco por normalização ou por diminuição do elevado teor de colesterol no soro. Isso pode realizar-se de maneira limitada por medidas dietéticas e em maior grau por terapia medicamentosa. É igualmente possível provocar a recuperação (regressão) de alterações vasculares arteriosclerõticas já existentes, desde que elas não se encontrem já num estado irreparável (calcificação directa) por diminuição maciça do teor de colesterol total no soro muito elevado.

Nos países ocidentais, com o seu comportamento dieteti-camente errado que se prolonga por dezenas de anos, os casos de morte na população directa ou indirectamente são atribuídos à esclerose em cerca de 50% ou mais dos casos de morte. Ê, por conseguinte, extraordinariamente pretendido que se desenvolvam medicamentos muito activos para a diminuição do teor de colesterol no soro, que sejam 2

simultaneamente bem assimiláveis. No passado, encontravam-se ã disposição para este efeito medicamentos do tipo do fibrato, do ácido nicotínico, dos sequestrantes de ácido biliar não reabsorsí-veis, Probucol e sobretudo nos últimos anos os inibidores competitivos de HMG-CoA-redutase, por exemplo, do tipo da Lovastatina Z*A. J. Endo. "J. Med. Chem." 28, 401 (1985) J. A requerente descobriu agora surpreendentemente que as lactonas com um núcleo decagonal podem diminuir o teor de colesterol do soro.

Por consequência, a invenção refere-se â utilização de compostos de fõrmula geral I

(I) na qual, independentemente unos dos outros, os símbolos R^ e R^ representam átomos de hidrogénio e grupos hidroxilo; os símbolos R2 e R- representam grupos hidroxilo; o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio, um grupo hidroxilo ou um grupo oxo; e R2 e R^, assim como R^ e R^, podem formar em conjunto, respectiva-mente, uma ligação dupla; para a fabricação de um medicamento para a diminuição do teor de colesterol do soro.

Em seguida, descreve-se pormenorizadamente a presente invenção, em especial relativamente âs suas formas de realização

preferidas. Além disso, concretiza-se a invenção por meio do conteúdo das reivindicações. A obtenção dos compostos de fórmulas gerais I é descrita na patente de invenção europeia EP 333 024.

Estirpes de peinicillium, de preferência as estirpes DSM 4209 e 4210, sintetizam este composto em soluções de fermentação tradicionais. Por extracção do micêlio e do caldo de cultura com dissolventes orgânicos e subsequente purificação cromatográfi-ca, ele pode ser isolado.

Os compostos de fórmula geral I possuem propriedades hipolipémicas. As liproteínas que originam a arterioesclerose, VLDL t LDL são fortemente diminuídas no soro por acção destes compostos, enquanto a actividade sobre o HDL protector dos vasos é apenas muito pequena. Desta maneira, aumenta-se fortemente o índice de protecção dos vasos colesterol HDL : colesterol LDL. A acção hipolipêmica dos compostos de fórmula geral I pode ser demonstrada por meio do seguinte ensaio.

Ratazanas do sexo masculino com um peso de corpo superior a 180 gramas obtiveram uma vez por (de manhã) a composição de ensaio contendo compostos de fórmula geral I em polietileno-glicol 400 por meio de uma sonda através da garganta (0,5 ml/100 gramas de peso do corpo); o respectivo grupo de controlo obteve apenas a mesma quantidade de dissolvente. A última administração (a sétima) realizou-se vinte e quatro horas antes da recolha, de amostras de sangue e da morte dos animais. Durante o ensaio, os animais tiveram livre acesso à alimentação e à água. Vinte e quatro horas antes da recolha da amos tra de sangue que se realizou retro-orbitalmente com uma ligeira narcose com éter antes e depois do período de tratamento (ou seja, 4

no primeiro e oitavo dias), retirou-se-lhes a alimentação. No soro de cada animal individual, foi determinada a glutamato-oxalato -transaminase do soro (SGOT), a glutamato-piruvato-transaminase do soro (SGPT), a fosfatase alcalina (aP) e bilirrubina e a creatininc No conjunto do soro reunido de todos os animais de um grupo, deter-minou-se o teor de glicerina total como medida dos triglicéridos £M. Eggstein e F. H. Kreutz, Klin. Wschr. 44, 262 e 267 (1966); A. W. Wahlefeld em H. 0. Bergmeier: Methoden der enzymatischen Analyse, 2- edição, volume II, Veriag Chemie 1974, página 1878_7. Imediatamente a seguir ã recolha do sangue, sacrificaram-se os animais por distorção da coluna vertebral. Retiraram-se os fígados e determinou-se o peso relativo do fígado. Além disso, determinou-se o desenvolvimento do peso do corpo e o consumo de alimentos. Realizou-se a avaliação estatística de acordo com o ensaio t de Student.

Para a análise das lipoproteínas do soro, reuniu-se o soro de todas as ratazanas de um grupo depois de um período de tratamento. Separaram-se as lipoproteínas do soro por meio de uma ultracentrífuga preparativa (Kontron TGA, rotor Beckmann 50.4 Ti).

Realizou-se a flutuação das lipoproteínas do soro /”s.

Koga, D. L. Horwith e A. M. Scanu: "Journal of Lipid Research." 10, 577 (1969); R. J. Havei, Η. A . Eder e Η. H. Bragdon: "J. Clin. Invest." 34, 1345 (1955) J de acordo com as seguintes densidades: 1. VLDL densidade < 1,006 2. LDL densidade 1,006 a 1,04 3 . KDL densidade 1,04 a 1,21

Para a determinação enzimática do colesterol de acordo 5 / com o método de elevado rendimento de CHODPAP £j. Siedel, H. Schlumberger, S. Klose, J. Ziegenhorn e A.· W. Wahlefeld: "J.

Clin. Chem. Clin. Biochem." 19, 838 (1981)^, bem como dos trigli-céridos de acordo com a determinação completamente enzimática ClA. Eggstein e F. H. Kreutz: "Klin. Wschr." 44, 262 e 267 (1966); A. W. Wahlefeld em H. 0. Bergmeier: Methoden der enzymatischen Analyse, 2- Edição, volume II, Verlag Chemie, 1974, página 1878)J. Utilizaram-se as combinações de ensaios de Boehringer/Mannheim nas fracções das lipoprotelnas separadas; a determinação da proteína realizou-se de acordo com o método de Lowry e col. £θ. H. Lowry, N. J. Roseborough e A. L. Farr, "J. Biol, Chem." 193, 265 (1951) J7.

Os resultados relativamente ao composto de fórmula geral I preferido, na qual , R^ e R^ representam hidroxilo e R^ e R^, em conjunto, formam uma ligação dupla, estão indicados nos Quadros 1 a 3 dos Exemplos.

Os compostos de fórmula geral I podem ser utilizados na profilaxia e no tratamento de doenças que são provocadas por um elevado teor de colesterol, em especial doenças cardíacas coronárias, arteriosclerose e doenças semelhantes. A utilização refere-se também a composições farmacêuticas que contêm os compostos de fórmula geral I.

Para a preparação de medicamentos, podem utilizar-se juntamente com a substância activa também aditivos farmaceuticamente aceitáveis como agentes diluentes e/ou agentes veiculares. Neste caso, entenedem-se como substâncias fisiologicamente inofensivas os compostos que, depois de misturados com a substância activa, permitem que esta assuma uma forma apropriada para a administração.

As formas de apresentação galénica sólidas ou líquidas apropriadas são, por exemplo, comprimidos, drageias, pós, cápsulas, supositórios, xaropes, emulsões, suspensões, gotas ou soluções injectãveis, bem como composições com libertação de substância activa prolongada. Como substâncias veiculares e agentes diluen-tes frequentemente utilizados podem mencionar-se, por exemplo, açúcar ou vários tipos de amido, derivados de celulose, carbonato de magnésio, gelatina, óleos de origem animal ou vegetal, poli-etileno-glicóis, água ou outros dissolventes apropriados, bem como agentes tampão que contêm ãgua que se podem tornar isotõnicos por adição de glucose ou de sais.

Além disso, i ainda possível utilizar eventualmente agentes tensio-activos, agentes corantes e edulcorantes, agentes estabilizadores, assim como agentes conservantes como outros aditivos das composições contendo a substância activa de acordo com a presente invenção. Também podem utilizar-se substâncias veiculares polimêricas farmacologicamente aceitáveis, como, por exemplo, poli-fenil-pirrolidona ou outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis, como, por exemplo, ciclodextrina e polissacáridos. Os compostos podem também combinar-se com aditivos que se ligam a ácido biliar, em especial permutadores de aniões básicos não tóxicos que não são reabsorvidos no tracto gastrintestinal.

As composições farmacêuticas podem ser administradas por via oral, rectal ou parentérica. De preferência, as composições têm a forma de unidades de dosagem; em especial, os comprimidos, cápsulas e supositórios constituem exemplos de unidades de dosagem apropriadas. Cada unidade de dosagem, especialmente para administração por via oral, pode conter até 1000 miligramas, de preferência, no entanto, entre 10 e 100 mg de componente activo. No entanto, podem também utilizar-se unidades de dosagem com teores superiores 7

ou inferiores aos indicados que eventualmente são fracturadas antes da administração ou se destinam a dministrações múltiplas.

Eventualmente, as unidades de dosagem para a administração por via oral são micro-encapsuladas para prolongar a duração da administração ou para se obter um intervalo de tempo de efeito mais longo, como, por exemplo, por recobrimento ou incorporação da substância activa sob a forma de partículas em polímeros apropriados, ceras ou semelhantes. A administração por via parentérica pode realizar-se com utilização de formas de dosagem líquidas, como soluções e suspensões esterilizadas, que se destinam à injecção intramuscular ou subcutânea. As formas de dosagem deste tipo são preparadas com um agente diluenta apropriado fisiologicamente inofensivo, como, por exemplo, um meio aquoso ou oleoso e esterilização da solução ou da suspensão eventualmente com co-utilização de agentes estabili-zantes apropriados, agentes emulsionantes e/ou agentes conservantes e/ou agentes anti-oxidantes. A forma de administração por via oral é a preferida, especialmente no caso de se prever uma longa duração da terapia, e representa uma simplificação essencial da prevenção e da terapia das doenças referidas antes.

As composições farmacêuticas preparam-se de acordo com os processos gerais correntes. O esquema de dosagem pode depender do tipo, idade, peso, sexo e estado médico do paciente ou condições de risco.

Em seguida esclarece-se a invenção por meio de Exemplos. 8 - o O '—I '3 O o P 3 P rH C CU o P υ N3 cr» cr» 00 o (N oo T— co o o ε 0 ·* * *. < 0) 03 *“ o r*· o T <· CN cr» ro co LO p PI r- CO CN ro o Γ- Q Q V <. V K P *r CO co ^r ro da Estirpe HOE WISKf (SPF 71)

o 13o 03 CP 3 4H •H P P 3 CU υ 03 P P rH D (0 O Ό •H p o «cu rH u o *P P r—1 -P CP c •H 0 P u E-t o ε 0 o 3 0 3 (03 vp CJ» cu 03 -P P 0 3 P CU cu ε O υ ε cu 1—1 3 0 -P 13 O θ' -P 3 P r—1 <D O -P P r—1 cu 3 -P Ul CU (U 03 r—( o u P Q CN LD 00 CN PI CN ,— ro ro > 1 1 1 \ P O VD σ» LD CN Q CN Τ Τ PI 1 Ι Ι + + PI Q CN CN ο Γ- LO PI T- CN γΟ > 1 1 1 1 + P CO H1 m <T» Q τ— Τ ^— CN K 1 Ι 1 1 1 P CN vo ro Q ro CN ro P 1 1 1 + 1 P Q O CN CN <T» 'sO P CO LD > 1 I 1 1 1

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Γ" LO ΚΩ m Ον] r- κω ΚΩ γ- SO <Ν <ί* 8 09 64 65 CM so SD V ν •t. ο Ο ο Ο Ι_Γ) °\ CN CN Ον] CN ΓΟ CN ί£5 ΚΩ ** *- ** Ο Ο Ο Ο 00 OS 0- σ» ·* *· ro Ον] Ον] CM 00 Ον] Γ^- ι— LO *“ CM Ο SO Ο (Ν ΚΩ <7\ γο ΓΟ ΓΟ CN [— ΓΟ m ,— LD Ον] 0- ο\ ιη *vD Ο lη 00 00 ΓΟ ΓΟ ΓΟ σ\ νο 00 SO *“ LD «5Γ <Τ\ (Ν Ν’ Ον] ο- lη U0 CN ΓΟ ΓΟ ΓΟ ΓΟ os ( Ον] ο LO LO σ\ os σ\ LO 00 ο κο τ- ΓΟ SO <“ <Ν 00 σ\ LíO rr ΓΟ m LD ο ο ο τ- m ο η 3 Η 2 0 -Ρ ι—1 3 Ο tη 3 1—1 X 0 54 a 3 3 3 <ϋ a CU ρΟ k. d 3 3 3 O 3 ε Cn 0 43 r4 •H •H O 13 ο d) ι—1 4-) -P 4-> 0 •H 54 0 t_> 3 •Η η o 3 3 3 r-H 43 43 τ) 3 ι—1 X Dá 13 4-1 4-> -M o Ό) 3 -Η (/) d rv* ο υ< to ω tn 3 ε a · ω 3 ο ε Μη 54 (D 3 3 3 3 4-1 (Ν 3 ε & 54 w 43 tn > > > 3 54 3 ω Η φ Ό t— •3 CM H 0 0 0 O 0 0 ο 3 Ο 3 Ό a tf W Dá 31 31 31 31 U a 54 54 Ν 54 3 U1 3 54 43 3 α) Ο) LO m LH 13 σν > w 3 4-> ε 10 +J <— d 3 «d 0 3 \ \ \ \ II II σ (X 2 43 3 LD ir> LD 13 o CM IX 3

QUADRO 3

Ratazanas do Sexo Masculino da Estirpe HOE WISKf (SPF 71) % de alteração em relação ao controlo

Numero dos animais antes/depois

Dose em Peso Peso do fígado Consumo de alimen mg/kg final do relativo final relativo final /Dia corpo 5/5 Fórmula geral I; 15 -3 -1 R^r ^4 6 t hidroxilo; R£ e R^, ligação dupla 5/5 Lovastatina 10 +4 +8 5/5 Lovastatina 50 0 +4 5/5 lovastatina 300 +1 +1 10/10 Clofibrato 100 -2 +19 -2 20/19 Controlo 0 Como se vê no Quadro 1, 0 composto de fórmula geral I na qual, os símbolos R1 , R^ e R^ representam um grupo hidroxilo e os símbolos R2 e R^ representam uma ligação dupla, usado em uma dose que ê igual a um sétimo da dose utilizada do Clofibrato, origina uma diminuição igualmente intensa das lipoproteínas LDL do soro que originam arterioesclerose e VLDL (medido com base na sua proporção do colesterol) e uma diminuição apenas igual a metade da fracção de HDL. Por este motivo, obtém-se como resultado uma diminuição significativa do índice de vasoprotecção do colesterol HDL: colesterol LDL que ê igualmente relativamente maior do que no caso do 11 (

Clofibrato. Também os triglicéridos que são principalmente transportados nas VLDL são reduzidos nitidamente com utilização do composto mencionado. A Lovastatina inibidora competitiva da HMG-CoA-redutase tem uma acção nitidamente menor relativamente à influência do colesterol de LDL em relação ao composto de acordo com a presente invenção, sendo a actividade sobre VLDL e HDL apro-ximadamente igual.

Os parâmetros de compatibilidade, nomeadamente com as enzimas do soro SGOT, SGPT e aP; bem como da bilirrubina do soro e da creatinina do soro não são patologicamente alteradas pela acção do composto de acordo com a presente invenção, enquanto que a Lovastatina, dependendo da dose, origina uma alteração nitidamente patológica da trans-aminase SGOT. 0 desenvolvimento do peso do corpo e o consumo de alimentos não são relevantemente alterados pelos compostos ensaiados; o peso relativo do fígado é aumentado pelo Clofibrato, como é do conhecimento geral. 2. Ensaios Biológicos como Inibidor da Síntese do Colesterol nas Culturas de Células de Fígado_

Pré-incuba-se uma monocamada de células HEP-G2 em meio nutritivo isento de lipoproteínas com correspondentes concentrações das substâncias a ensaiar de fórmula geral I durante 1 hora.

Depois de se adicionar um composto prévio da biossíntese marcado 14 14 - com C, ( C)-acetato de sodio, prossegue-se a incubaçao durante três horas. Em seguida, saponifica-sé alcalinamente uma parte das - ~ _ 3 células com adiçao previa de um padrao interno de H-colesterol. 12

Extraem-se os llpidos das células saponifiçadas com uma mistura de clorofórmio-metanol. Separa-se esta mistura de llpidos depois da adição de colesterol veicular por cromatografia preparativa em camada fina, que isola as bandas de colesterol depois da 1 4 coloraçao e determina-se por cintilografia a quantidade de C- 1 4 -colesterol formado a partir do precursor contendo C. Numa parte alíquota das células, determinou-se a proteína das células de modo que na unidade de células pudesse ser calculada a quanti- 14 14 dade de C-colesterol formado a partir do precursor C por miligrama de proteína de células. Para comparação com a acção de inibição de uma composição de ensaio adicionada, serviu o controlo de modo que se possa determinar directamente a redução da biossíntese de colesterol a uma concentração molar determinada do preparado de ensaio. Em partes alíquotas da cultura de células, avalia-se morfologicamente (microscopia luminosa) o número de células de cultura intactas e o número das células que apresentam defeitos por acção da composição farmacêutica e mede-se bioquimi-camente por determinação da libertação do lactato-desidrogenase para o meio de incubação. _ _8

Como composiçoes padrao, servem Lovastatina (CIç-q*. 2/3. 10 molar) e 25-hidroxi-colesterol (CIj-q: 2,3. 10~^ molar). 0 composto de fórmula geral I na qual os símbolos e R,. representam grupos hidroxilo e os símbolos Rj e R^ em conjunto formam uma li- _7 gação dupla, inibe, para a concentração de 1 . 10 molar, a biossíntese em 50%; a cultura de células não é prejudicada. 3. Preparação de Comprimidos

Preparam-se comprimidos que são apropriados para a 13 t-r. administração por via oral e contêm os componentes mencionados seguidamente procedendo de acordo com uma maneira de proceder já conhecida, de acordo com a qual se granulam as substâncias activas e auxiliares e, em seguida, se comprimem para a obtenção de comprimidos. Estes comprimidos são apropriados para o tratamento de doenças provocadas por um elevado teor de colesterol com uma dose de um comprimido administrado duas a quatro vezes ao dia.

Componentes (por comprimido) peso (mg) Fórmula geral I: , R^ e R,- , hidroxilo; R2 e , ligação dupla 50 mg Lactose 100 mg Amido de milho 30 mg Talco 3 mg Diêxido de silício coloidal 3 mg Estearato de magnésio 2 mg 4 . Preparação de Cápsulas

Preparam-se cápsulas apropriadas para a administração por via oral e que contêm os seguintes componentes de acordo com uma maneira de proceder jã conhecida, segundo a qual se misturam as substâncias activas e auxiliares e se embala a mistura em cápsulas de gelatina. Estas cápsulas servem para o tratamento de doenças que são provocadas por um elevado teor de colesterol, utilizando-se uma dose de uma cápsula admisnistrada duas a quatro vezes por dia. - 14 -

Peso (mg)

Componentes (por cápsula) Fórmula geral I: , R^ e R,- hidroxilo; R2 e R2/ ligação dupla 50 mg Lactose 100 mg Amido de milho 30 mg Talco 3 mg Diõxido de silício coloidal 3 mg Estearato de magnésio 2 mg

Claims (2)

1. V 1 REIVINDICAÇÕES 1.- Processo para a preparação de composições farmacêuticas apropriadas para diminuir o teor de colesterol do soro, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade eficaz de até 1000 mg de um composto de fórmula geral

   independentemente uns dos outros; os símbolos e R^ representam átomos de hidrogénio ou grupos hidroxilo; 2

   os smbclcs R„ e R„ recresenram cruccs hidrcxi-c j lo; o símbolo R_ reprasar.ra um ãconc de hidrogénio ou um grupo hidroxilc ou cxc; e os símbolos R_ a R_ assim. coroo R e R, aro cor.-junto pedem formar uma ligação dupla; coro agenoes auxiliaras ds formulação apropriados.
2. 2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, carac terizado pelo facto de se utilizar um composto de fórmula geral I, na qual os símbolos R^, e representam grupos hidroxilo e os símbolos e em conjunto formam uma ligação dupla. « Agente Oficiai u* Propriedade industrial

   L BAD ORIGINAL Μ C "PP.CCZSSC PARA A PREPARAÇÃO de ÇrtO REGULADORA DE LlPIDCS CCNT LMPOSIÇCES farmacêuticas COM ÀC- OC LACTONAS DE NÚCLEO DECAGONAL" Descreve—se um processo para a preoaração de ccrtiposi ções farmacêuticas apropriadas para diminuir o teor de colesterol no sangue, que consiste em misturar uma quantidade eficaz de um composto de fórmula geral

   que possui propriedades hipolipémicas, com agentes auxiliares de formulação apropriados. incíusi·»' I BAD ORIGINAL