JPH06510280A - タンパクキナーゼｃ阻害および新規化合物バラノール - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 タンパクキナーゼＣ阻害及び新規化合物バラノール発明の分野 本発明は、炎症、心臓血管及び腫瘍性疾患の診断法及び治療法に関する。より詳 しくは、本発明は、酵素タンパクキナーゼＣの活性を阻害するのに有用なノ＜− ティシリウム属の菌類、特にバーテインリウム・ノくラノイデス（Ｙｅｒｔｉｃ ｆｌｌｉｕｍ　ｂａｌａｎｏｉｄｅｓ）菌（ドレシュラー（叶ｅｓｃｈｌｅｒ） 　ダウセ’ｙト（Ｄｏｖｓｅｔｔ）ら）由来の新規な化合物に関する。好ましい 組成物はノルマルノくラノール（ｎｏｒｍａｌ　Ｂａ１．ａｎｏｌ）である。

発明の背景 タンパクキナーゼＣはカルシウム刺激剤のファミリーであって、細胞成長制御、 調節、及び分化に重要な役割を果たすリン脂質依存性セリン／スレオニン特異的 タンパクキナーゼである。タンパクキナーゼＣは、幾つかの種類の腫瘍促進因子 並びに内因性細胞ジアシルグリセロールの主要な高親和性レセプターであるので 、発癌性に関連するプロセスにも重要である。これら腫瘍促進因子もタンパクキ ナーゼＣ触媒作用を刺激する。腫瘍促進性フォルボールエステルによるタンパク キナーゼＣの直接活性化が報告されている。カスタブナ（Ｃａｓｔａｇｎａ）ら 、　Ｊ、　ＢｉｏｌＣｈｅｍ、、　２５７＋７８４７　（１９８２）を参照のこ と。タンパクキナーゼＣ作用のメカニズムが、１９８９年３月２８日にベル（Ｂ ｅｌｌ）らに発行された米国特許第４，８１６゜４５０号に記載されている。な お、その開示内容は十分記載されている如く本明細書中に明確に組入れられる。

タンパクキナーゼＣは、ジアシルグリセロール（ＤＡＣ）、中性脂肪により活性 化され、活性化されると基質タンパク質上のセリン又はスレオニン残基にＭｇＡ ＴＰのγ−リン酸を移動させる。

タンパクキナーゼＣの活性化は、癌腫病、炎症、及び再潅流（ｒｅｐｅｒｆｕｓ ｉｏｎ）傷害を含む多くのヒト疾患プロセスに関与しているので、タンパクキナ ーゼＣの阻害は、これら障害の治療に大きな治療的価値を有する。一定のタンパ クキナーゼＣ阻害因子がｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｉｖｏの両方でンスプラ チンの抗腫瘍活性を増強すると報告されている。グルニケ（Ｇｒｕｎｉｃｈｅ） ら、　Ａｄｖ、　Ｅｎｚｙａ＋ｅ、　Ｒｅｇｕｌ、　２８：　２０１　（１９８ ９）　＋及びドイツ公開公報ＤＥ３８２７９７４号。加えて、タンパクキナーゼ Ｃは、細胞成長におけるその中心的役割から、治療デザインの潜在的標的である ことが示唆されてきた。トリプトン（Ｔｒｉｔｔｏｎ、　Ｔ、　Ｒ，）及びヒッ クマン（■ｉｃｋｍａｎ。

Ｊ、＾、　）、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅ１ｌｓ　２＋　９５−１０２　（１９９０ ）を参照のこと。

一定のタンパクキナーゼＣ阻害因子が血小板凝集及び血小板活性化因子つまりＰ ＡＦの如き好中球活性化物質の放出を遮断することが証明されている。シャクテ ーレ（Ｓｃｈａｃｈｔｅｌｅ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙ、　Ｒｅｓ、 　Ｃｏｍｍｕｎ、１５１：５４２　（１９８８）　：ハンヌン（Ｈｕｎｎｅｎ） ら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　ＣｈｅＩｌｌ、、　２６２：１３６２０　（１９８７ ）　；及びヤマダら、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　３７＋１１ ６１　（１９８ｇ）を参照のこと。タンパクキナーゼＣ阻害因子が好中球活性化 及び走化性移動を阻害することも示されている。マクインタイヤ（ＭｃＩｎｔｙ ｒｅ）ら、　Ｊ、ＢｉｏＬ、　Ｃｈｅｗ、、　２６２：１５７３０　（１９８７ ）　：ランプレス（Ｌａｍｂｒｅｔｈ）ら。

Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｔ、２６３：３８１８　（１９８８）　；ピテット（ Ｐｉｔｔｅｔ）ら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、、　２６２：１００７２　 （１９８７）　；及びガウドリイ（Ｇａｕｄｒｙ）ら、　Ｉ＋ｕｕｎｏｌｏｇｙ 　６３ニア１５　（１９８８）を参照のこと。好中球脱顆粒及びタンパク質分解 酵素の放出及び活性酸素中間体も示されている。ウィルソン（Ｗｉｌｓｏｎ）ら 、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｗ、、　２６１＋１２６１６　（１９８６）　： フジタら、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　３５：４５５５　（１ ９８６）　；ベルコツ（Ｂｅｒｋｏｖ）ら、Ｊ。

Ｌｅｕｋｏｃ、、　Ｂｉｏｌ、　４１：４４１　（１９８７）　：サルザー（Ｓ ａｌｚｅｒ）ら、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙ、　Ｒ■ ｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１４８ニア４７　（１９８７）　：クラ７−　（Ｋｒａ ａ＋ｅｒ）ら、　Ｊ、　ＢＬｏｌ、　Ｃｈｅ＋１１．、２６Q：５８７ ６　（１９８８）　；及びデワルド（Ｄｅｖａｌｄ）ら、Ｂｉｏｃｈｅｗ、、２ ６４：８７９　（１９８９）を参照のこと。

タンパクキナーゼＣの阻害因子が心筋再潅流傷害に関係する病因の最も重要なメ カニズムの３つ全てを遮断する能力を有しており、従って決定的な治療効果を有 するに違いないことは明らかである。更に、タンパクキナーゼＣ阻害因子のケラ チノサイト及び好中球内での酸化的破裂（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｂｕｒｓｔ）へ の阻害作用は抗炎症作用をもたらすであろう。特に心臓傷害に関係する炎症及び 再潅流傷害は、広汎な研究にも拘らずその決定的な治療法が存在しない共通の障 害であり、これら障害のための適切な治療法が必要とされている。

ドイツ公開公報ＤＥ３８２７９７４Ａ１は、癌治療に有用な脂質、脂質類似物、 細胞増殖抑制剤又はホスホリパーゼ阻害剤と組み合わせるなどしたタンパクキナ −ゼＣ阻害因子を含む製剤を開示している。

タンパクキナーゼＣを阻害する天然物が報告されている。タマネギら、　Ｂｉｏ ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　８ニア３２　（１９８８）を参照のこと。例えば、ス トレプトミセス・スタウロスポレウスから単離したサチ、ｏスポリン（Ｓａｔｕ ｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）、ナカノら、　Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　４０ニア０ ６−７０８　（１９８７）、アルカロイド代謝産物、及びその７−ヒドロキシ同 族体、タカハシら、　Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　４２：５７１−５７６　 （１９８９）は、ナノモル濃度でタンパクキナーゼＣ阻害活性を示す。いずれも 植物のオトギリソウから得られるハイペリシン（取ｐｅｒｉｃｉｎ）及びプソイ ドハイペリシンも、タンパクキナーゼＣ阻害因子として報告されている。ラビー （Ｌａｖｉｅ）ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　 ８６：５９６３−５９７６　（１９８９）を参照のこと。これら２つの化合物も 強い抗レトロウイルス活性を有する。カルトスポリウム・クラトスポリデス（Ｃ ａｌｄｏｓｐｏｒｉｕ厘ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｄｅｓ）から単離した二次代謝産 物であるカルホスチン（Ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ）　Ａ＝　１はタンパクキナーゼ Ｃ阻害因子の別のグループに該当し、カルホスチンＣがこのシリーズで最も活性 な化合物である。コバヤシら、　Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　４２：１４７ ０−１４７４　（１９８９）を参照のこと。

このように、タンパクキナーゼＣは、癌腫瘍、炎症及び再潅流傷害を含む多くの ヒト疾患プロセスに関係している。しかしながら、治療用途のためにタンパクキ ナーゼＣの有効な阻害因子が長い間痛切に望まれている。

発明の要旨 本発明は、パーティシリウム属の菌類、好ましくはパーティシリウム・パラノイ デス菌から単離した新規なタンパクキナーゼＣ阻害因子を提供する。本発明の好 ましい新規化合物はバラノールと称される。本発明の新規化合物は、ナノモル濃 度でタンパクキナーゼＣ活性を阻害する強力なタンパクキナーゼＣ阻害因子であ る。

実質的に純粋な場合には、本発明の好ましい化合物、つまりバラノールは、ジメ チルスルホキシド、水、及びメタノールに溶解性で：酢酸エチル及びクロロホル ムに不溶性であって、ポリモリブデン酸、ニンヒドリン試薬及び塩化第二鉄で陽 性の発色反応を示し；ドラーゲンドルフ試薬及びヨウ化白金酸塩噴霧で陰性であ り；比率が４：１：１のｎ−ブタノール／酢酸／水でのシリカゲル薄層クロマト グラフィーで約０．５８のＲ１値を有しそして約５５０の分子量を有する。

バラノールは以下の構造式を有すると考えられる。

本発明の化合物は、更に、タンパクキナーゼＣ活性の阻害に関連する障害又はタ ンパクキナーゼＣ活性の阻害により発生する障害、特に癌、炎症性疾患、心筋再 潅流傷害、及び再潅流傷害に関連する心臓機能障害の如き過増殖性疾患を治療す るのに有用である。タンパクキナーゼＣ活性の阻害は腫瘍細胞の成長の阻害へと 導き、それによって抗腫瘍作用をもたらすことができる。更に、タンパクキナー ゼＣ活性の阻害は、好中球内での酸化的破裂、血小板凝集、及びケラチンサイト 増殖の阻害へと導き、抗炎症作用をもたらす。血小板凝集、好中球活性化、及び 好中球放出に対する本発明の化合物の阻害活性は、再潅流傷害、特に心筋再潅流 傷害の治療におけるその有用性を示すものである。

添付の請求の範囲において本発明をより特定し、以下の説明でその好ましい態様 に従って説明する。

発明の詳細な説明 本発明は、パーティシリウム属の菌類、好ましくはパーティシリウム・パラノイ デス菌から単離した新規なタンパクキナーゼＣ阻害因子、特にバラノールを提供 する。パーティシリウム・パラノイデスは、ダウセットらにより（１９８２）　 Ｍｙｃ。

１ｏｇｉａ　７４：６８７−６９０に記載されている。本発明の化合物の単離に 用いた菌は、ノースカロライナ州ホフマン近郊の合衆国フォーリスト・サービス のグイオウマッ森林にあるダイオウマツ針状葉すター中の黄色菌糸束から回収し た。本発明の化合物は、他のパーティシリウム種、又はパーティシリウム・パラ ノイデスの変異菌若しくは突然変異菌若しくは組換え菌、又は他の生物にも存在 し得るが、現時点における本発明の化合物の好ましい供給源はパーティシリウム ・パラノイデスである。パーティシリウム・パラノイデスは、１９９１年７月１ ９日にメリーランド州ロックビルのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ タンに寄託し、受託番号７４０８２を有する。バラノールは、本明細書の実施例 に記載した方法を用いて前述の菌から単離することができる。

バラノールの特性は明らかになっており、以下の物理化学的特性を有すると考え られる。該化合物は一般にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）　、水、及びメタ ノールに溶解性であるが、酢酸エチル及びクロロホルムに不溶性の淡黄色非晶質 固体からなる。該化合物は、リンモリブデン酸（ＰＭＡ）試薬（２０重量％エタ ノール溶液）、ニンヒドリン試薬、及び塩化第二鉄で陽性の発色反応性を示すが 、ドラーゲンドルフ試薬及びヨウ化白金酸塩噴霧試薬で陰性である。該化合物の Ｒ，１１［は、０．２５ｍｍＥメルクシリカゲル６０Ｆ２５４薄層りｏｖトゲラ フイー　（ＴＬＣ）プレートを用い、４：１・１の比率のｎ−ブタノール／酢酸 ／水で展開して約０．５８である。該化合物の分子量は杓５５０である。バラノ ールの他の物性は実施例３に記載されている。

本発明は、上記の特性を有する化合物並びにかかる化合物の薬学的に許容できる 塩に関する。本発明は、上記の特性を有する化合物又はかかる化合物の薬学的に 許容できる塩のいずれかと組み合わせて薬学的に許容できる製剤上の担体を含む 医薬製剤に関する。更に、バラノール骨格を修飾した化合物もタンパクキナーゼ Ｃ阻害因子として治療における有用性が見出されそうである。

本出願人らは、バラノールのサンプルについてプロトン核磁気共鳴スペクトル分 析及びカーボン核磁気共鳴スペクトル分析を行った。そのデータを表４及び表５ に示している。このデータは本発明者らに、バラノールを以下の構造式で表し得 ることを示唆する。

前記の構造は未だ確実なものではな（バラノールはこの構造とは別の構造で同定 されるかも知れないがその物性は上記の通りであることを理解すべきである。

当業者であれば、この構造の光学異性体が存在し得ること及び幾つかの光学異性 体は池のものよりも多い活性を有し得ることが理解できる。更に、上の式は本発 明の化合物の構造を正確に表していると考えられるが、他の異性体である可能性 もある。

バラノールは、タンパクキナーゼＣ活性の阻害に関連する障害又はタンパクキナ ーゼＣ活性の阻害により発生する障害、特に癌腫瘍、炎症性疾患、再潅流傷害、 及び再潅流傷害に関連する心臓機能障害を治療するのに有用である。従って、本 発明は、タンパクキナーゼＣ活性を阻害する方法及び医薬組成物を提供する。好 ましい方法は、哺乳動物組織及び／又は体液を阻害量の本発明の化合物と接触さ せることを含む。本発明の医薬組成物は、好ましくは薬学的に許容できる製剤上 の担体又は希釈剤中にタンパクキナーゼＣ阻害量の本発明の化合物を含む。

本発明は、好中球をタンパクキナーゼＣ阻害量の本発明の化合物と接触させるこ と、又は好中球をかかる酸化的破裂を抑制するのに有効な量の本発明の化合物と 接触させることを含む、好中球内での酸化的破裂を抑制する方法も提供する。

本発明は、更に、炎症で苦しむ哺乳動物にタンパクキナーゼＣ阻害量の本発明の 化合物を投与すること、又は該哺乳動物に炎症を抑制するのに有効な量の本発明 の化合物を投与することを含む、炎症を治療する方法を提供する。

加えて、本発明は、哺乳動物の腫瘍をタンパクキナーゼＣ阻害量の本発明の化合 物と接触させること、又は該腫瘍細胞を腫瘍の成長を阻害するのに有効な量の本 発明の化合物と接触させることを含む、哺乳動物の腫瘍細胞の成長を阻害する方 法を提供する。

本発明の別の態様は、哺乳動物のケラチンサイトにタンパクキナーゼＣ阻害量の 本発明の化合物を投与すること、又は該ケラチンサイトにケラ千ノサイトの増殖 を阻害するのに有効な量の該化合物を投与することを含む、哺乳動物のケラチン サイト細胞増殖を阻害する方法を提供する。

癌は、抑制されない細胞成長により部分的に特徴付けられる疾患である。タンパ クキナーゼＣは、細胞成長制御に直接関与し、腫瘍形成に関与すると考えられる 。タンパクキナーゼＣは、非常に強力な腫瘍促進因子であるフォルボールエステ ルの排他的ではないとしても主要な細胞内レセプターである。フォルボールエス テル及び他の腫瘍促進因子は、タンパクキナーゼＣに結合してそれを活性化する 。ジアシルグリセロール（ＤＡＣ）及びフォルボールエステルは同一部位で相互 作用するので、高親和性レセプターの保存が内因性類似体の存在を暗示している オビ二一トレセブターから類推して、ＤＡＣは“内因性フォルボールエステル“ であると考えられてきた。ＤＡＣがＣａ”２及びリン脂質に対するタンパクキナ ーゼＣの親和性を増加させ、かくしてこれら重要な補助因子の細胞レベルにおい てタンパクキナーゼＣを活性化することが示されている。

ホルモン、成長因子、及び神経伝達物質を含む細胞外シグナルがホスファチジル イノシトール代謝回転を刺激してＩＦ５及びＤＡＣが生成することは既知である 。ウィルス及び細胞起源の４０の異なるオンコ遺伝子の構造は、オンコ遺伝子が 変化した形態の正常細胞タンパク質をコードすることを明らかにしている。該遺 伝子産物の幾つかは、膜貫通シグナリングに関与する成長因子又は他の要素に関 連しているようである。これらオンコ遺伝子産物は、重大な第二メツセンジャー のレベルを変化させることによって機能しているようである。オンコ遺伝子ｒａ ｓＳｓｉｓＳｅｒｂＢＳａｂｌ、及びｓｒｃで形質転換した細胞は、タンパクキ ナーゼＣを活性化すると考えられる高いレベルのＤＡＣを含有することが示され ている。実際、ｒａｓ形質転換細胞での研究により、タンパクキナーゼＣの活性 化がＤＡＣの上昇に付随していることが示されている。

フォルボールのミリスチン酸酢酸エステル（ＰＭＡ）の如きフォルボールエステ ルは、膜機能、有糸分裂誘発、分化、及び遺伝子発現への作用を含む細胞への複 合作用を有している。合成ジアシルグリセロールは、ＰＭＡの多くの作用をｉｎ 　ｖｉｔｒｏで模倣し、タンパクキナーゼＣの阻害因子がＰＭＡに誘発された細 胞への作用を遮断することが示されている。かくして、タンパクキナーゼＣは、 ＤＡＧを細胞内で増加させてタンパクキナーゼＣを付随的に増加させるｒａｓの 如き一定のオンコ遺伝子の作用を媒介しているといえる。加えて、タンパクキナ ーゼＣの活性化は、細胞形質転換に重要な核プロトオンコ遺伝子であるＣ−ｍｙ ｃ。

ｃ−ｆｏｓＳｃ−ｃｉｓＳｃ−ｆｍｓの発現をもたらす。ＮＩＨ３Ｔ３細胞内で のタンパクキナーゼＣの過剰発現は、成長調節を変化させて催腫瘍性を高め、う ・ソト線維芽細胞において軟寒天中で足場非依存性成長に導（。これら実験にお いて、これら細胞内でのタンパクキナーゼＣの過剰発現は、細胞を移植された動 物に腫瘍形成をもたらした。

幾つかの研究により、乳癌腫及び肺癌腫の如き一定の腫瘍型内でタンパクキナー ゼＣの発現が増加したことが示されている。遺伝子レベルで発現の増加は見られ なかったが、活性化したタンパクキナーゼＣがヒト結腸癌腫内でも検出されてい る。トポイソメラーゼは該酵素の基質としてのタンパクキナーゼＣにより直接調 節され、タンパクキナーゼＣ阻害因子はシスプラチンの如き化学療法剤の働きを 増強することが示されている。タンパクキナーゼＣの阻害因子として具体的に同 定した他の化合物は、動物モデル中で腫瘍成長を阻害する治療剤として早くから 見込みがあった。

動物を使った研究では、虚血関連心筋損傷のおそらく５０％又はそれ以上が、閉 塞部位に蓄積する多形核白血球（好中球）を原因とすることが示されている。

蓄積した好中球からの損傷は、活性化した好中球からのタンパク質分解酵素の放 出又は活性酸素中間体（ＲＯＩ）の放出によるものであろう。心筋虚血を伴う“ 再び流れることがない”現象の多くは、心筋毛細血管閉塞によるものである。毛 細血管の閉塞は、凝集血小板及び凝集好中球の両方によるものである。両細胞型 は虚血現象の間に凝集するが、毛細血管閉塞に対するそれぞれの相対的貢献度は 未だ分かっていない。好中球による心筋組織への損傷は複数の現象が段階的に起 こることにより進行し、最も初期に起こるものの１つは、損傷した血管内皮への 活性化した好中球の結合である。しかしながら、好中球の結合はそれらの活性化 によって有意に高められ、これは初期の段階でさえサイトキン（ｃｙｔｏｋｉｎ ｅ）及び走化因子の如き活性化刺激として機能できる分子を生成する。これら分 子は、損傷及び凝集した血小板から、損傷した血管内皮から、又は内皮由来の酸 化剤による血漿タンパク質若しくは脂質の酸化から生じる。

活性酸素中間体の有害な作用を克服する戦略は、該分子の捕捉剤の開発に集中し てきた。スーパーオキシド・ジスムターゼ（ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）　（Ｓ　ＯＤ 　）は、スーパーオキシドの特に効果的な捕捉剤であることが示されたが、血液 中で非常に短い半減期しか持たない。幾つかの会社は、リポソーム被包又はポリ エチレングリコール抱合の如き技術により増加した半減期を有するこの異なった 型の酵素を作り出すことによりこの問題に取り組んだ。これら新たな型の有効性 に関する報告は混乱している。カタラーゼ、つまり過酸化水素の捕捉剤、及びヒ ドロキシル基捕捉剤も試験され、さまざまな程度で効果があることが分かった。

しかしながら、活性酸素中間体を捕捉するようにデザインしたいずれの戦略も、 血小板の凝集、走化性分子の放出、好中球の活性化及び血管内皮への付着、又は 活性化した好中球からのタンパク質分解酵素の放出を阻止しないであろう。

再潅流傷害の治療剤としてのタンパクキナーゼＣ阻害因子の利点は、１）血小板 凝集及びＰ　Ａ　Ｆの如き好中球活性化物質の放出を遮断する、２）好中球活性 化、走化性移動、及び活性化又は損傷した内皮への付着を遮断する、及び３）タ ンパク質分解酵素及び活性酸素中間体の好中球放出を遮断することが征明されて いる点である。かくして、これら物質は、再潅流傷害に関係する病因の最も重要 なメカニズム３つ全てを遮断する能力を有しているので、決定的な治療的効果を 有している筈である。

本発明の化合物は、活性成分が哺乳動物の身体又は体液又は組織における該物質 の作用部位に接触するあらゆる方法により投与することができ、経口、局所、皮 下、静脈内、筋肉内及び非経口内を含むがそれらに限定されない。該化合物は、 単独で投与しても、化学療法化合物の如き他の化合物、他の医薬化合物と組み合 わせて投与しても、又は放射線治療の如き治療法と共に投与してもよい。本発明 の化合物は、好ましくは、本発明の化合物及び選択した投与経路及び標準的な医 薬分野の慣用手段に基づいて選択した薬学的に許容できる製剤上の担体又は希釈 剤を含む組成物として投与する。

本発明の新規な化合物は、タンパクキナーゼＣの阻害、又は腫瘍細胞成長の阻害 、組織の炎症の抑制、ケラチンサイト細胞増殖の阻害、好中球からの酸化的破裂 の抑制又は血小板凝集の抑制に有効な治療的に有効な量で哺乳動物、好ましくは ヒトに投与する。あらゆる個々の場合において投与する量は、本発明の化合物の 薬力学的特性、その様式及び投与経路；受容者の年齢、健康状態及び体重；症状 の性質及び程度；並行して行う治療の種類、治療の頻度、及び目的とする効果の 如き要因に依存するだろう。該化合物の１日の投与量は、約１μｇ〜約１００ｍ ｇ／ｋｇ体重、好ましくは約１μｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約１ ０μｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは１回で又は複数回に分割して投 与されると考えられる。当業者は、本発明の考察に基づいて定型的な実験作業だ けで投与形態及び投与量を決定できるであろう。本発明の化合物の薬学的に許容 できる塩も本発明の範囲内である。

本発明の化合物は、カプセル剤、錠剤、及び散剤の如き固体投与形態で、又はエ リキシル剤、ンロソプ剤、及び懸濁剤の如き液体投与形態で経口投与してもよい 。該化合物は、また、無菌液体投与形態で非経口投与しても製剤上の担体中に含 めて局所投与してもよい。本発明の化合物は、医薬製剤の分野における標準的慣 用手段に従って種々の投与形態に配合することができる。ＲｅＩＩｌｉｎｇｔｏ ｎ’　ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、ベンンルバニア 州イーストンのＡ、オソル（Ｏｓｏｌ）、マ・ソり（Ｍａｃｈ）出版社、を参照 のこと。

例えば、本発明の化合物をラクトース、スクロース、マンニトール、澱粉、セル ロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、及びゼラチンカプセルに挿入用のス テアリン酸の如き粉末化した製剤上の担体と混合して、例えば、錠剤にしてもよ い。錠剤及びカプセルのいずれも、薬物を数時間かけて継続的に放出するために 徐放性製剤として製造してもよい。圧縮した錠剤を砂糖又は薄膜で被覆してあら ゆる不快な味を隠すと共に大気から該錠剤を保護してもよ（、又消化器官で選択 的に崩壊するように腸溶性コーティングを行ってもよい。

経口投与用液体投与形態は、水、緩衝液又は食塩水の如き薬学的に許容できる希 釈剤に加えて、患者が飲み易いように着色剤及び矯味剤を含有してもよい。

非経口投与用には、本発明の化合物を水、油、食塩水、水性デキストロース（グ ルコース）、及び関連する糖溶液、及びプロピレングリコール又はポリエチレン グリコールの如きグリコールのような適当な製剤上の担体又は希釈剤と混合して もよい。非経口投与用の溶液剤は、好ましくは本発明の水溶性塩を含有する。安 定剤、酸化防止剤及び保存剤を添加してもよい。適する酸化防止剤には、亜硫酸 水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、及びアスコルビン酸、クエン酸及びその塩 、及びナトリウムＥＤＴＡが含まれる。適する保存剤には、塩化ベンザルコニウ ム、メチル又はプロピルパラベン、及びクロルブタノールが含まれる。

以下の実施例は本発明を説明するものであって、本発明の範囲を限定することを 意図したものではない。

既知化合物であるオフィオコルジン（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｉｎ）はバラノールの ように弐〇ｚ＋ＨｕＮｘＯａを有する抗菌性の抗生物質であることに留意すべき である。しかしながら、オフィオコルジンは、以下の構造を有することが既知の コージセブス・オフィオグロー／フイデス（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ　Ｏｐｈｉｏｇ ｌｏｓｓｏｉｄｅｓ）から単離された天然物で明らかなように、オフィオコルジ ンはバラノールと同じ構造単位を有するが、その配置は完全に相違する。異なる 構造のために、バラノールとオフィオコルジンから得られるＮＭＲデータは異な っている。

実施例 実施例１　パーティシリウム・パラノイデス菌の成育パーティシリウム・パラノ イデス菌（ＭＹＣＯサーチ、ノースカロライナ州ダラム、受託番号２５９０１） を酵母エキスペプトンデキストロース（ＹｅＰＤ）、モルト、コーンミール、ポ テトデキストロース（ＰＤＡ）　、及びツザペク寒天培地上で７日間２１℃及び ３７℃で成育させた。直径約２．５ｍｍの菌コロニーがモルト上２１℃で成育し 、ワシントンＤＣ，リッジウェイのカラー・スタンダード及びカラー・ノーメン クレイチャーに準じて白色〜ドレスデン褐色を呈した。該コロニーの背面の色は ドレスデン褐色〜シナモンであった。これらコロニーは密着状〜ビロード状の形 態を有した。コーンミール上では、コロニーは直径が約３゜４ｍｍと測定され白 色であり、背面に色はな（フェルト状の形態を有した。ＹｅＰＤ上で成育したコ ロニーは、直径が約５．０ｍｍであり、白色であって背面に色はなく微細なビロ ード状で僅かに溝状の形態を有した。ＰＤＡ上で成育した場合は、直径が約３． ４ｍｍであり、白色〜黄褐色で背面も白色〜黄褐色であり、僅かに溝状の形態を 有するコロニーが得られた。ツザペク培地上で成育した場合は、直径が約１．４ ｍｍであり、白色〜ブリムリン黄色で背面はプリムリン黄色であり、微細なビロ ード状の形態を有するコロニーが得られた。菌は、３７℃ではいずれの培地でも 実質的に成育しなかった。菌コロニーは実質的に無臭であった。菌糸体は、直径 が約７μｍまでの膨らみを随所に有する直径約１〜５μｍの真っ直ぐで、有隔の 、枝分かれした菌糸からなっていた。

分生子発生細胞（Ｃｏｎｉｄｉｏｇｅｎｏｕｓ　ｃｅｌｌ）は林状で短糸があり ニアライアル（ａｒｉａｌ）な菌糸体から実質的に直接に発生し；孤立しており 、側生又は項生であり；そして約１０〜３０μｍ×直径０．８〜２゜５　（５， ０）μｍの大きさを有していた。これら細胞は更に、長さが約７〜１５μｍの該 林状体の太（なった基底からなり、それは直径約０．８μｍに先細りした。分生 子は、長さが約２．５〜３．５μｍで頂上の幅が１．８〜２．２μｍのくさび状 で、ガラス質で、壁面が滑らかで、無隔板状であり二更に、基底の幅が１．０〜 １．３μｍであった。

菌は、ＭＹＣＯサーチ社のバリー・カップ（Ｂａｒｒｙ　Ｋａｔｚ）が、ノース カロライナ州ホフマン近郊の合衆国フォーリスト・サービスのグイオウマツ森林 にあるダイオウマツ針状葉すター中の黄色菌糸束から回収した。パーティシリウ ム・パラライデスは、ＭＹＣＯサーチ受託番号２５９０１を有する。

実施例２　パーティシリウム・パラノイデス菌の醗酵実施例１に記載したパーテ ィシリウム・パラノイデス菌（１９９１年７月１９日にメリーランド州ロックビ ルのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託し、受託番号は７４ ０８２を有する）を、１％モルトエキス及び１．８％寒天を含むモルトエキス寒 天上に維持した。１．０％Ｄｉｒｃｏ酵母エキス、２゜０％シグマペプトン、及 び２．０％デキストロースからなるＹｅＰＤグロス６ｍｌ　（６ｍｌ培養液）を 含有するコーニング５９ｍ１コニカル遠心分離管に該微生物を移した。次いで、 該６ｍｌ培養液を２００ｒｐｍで農産しながら２１℃で７日間インキュベートし た。

次いで、該６ｍｌ培養液を７５ｍ１コーンミールブロスを含有する２５０ｍ１エ ルレンマイヤーフラスコに加えた。用いたコーンミールブロスは、２．０％有機 質成育コーンミール、２．０％トマトペースト及び１．０％酵母エキスからなる ものであった。該培養液を２００ｒｐｍの農産条件下で２１℃で１２日間インキ ュベートした。次いで、フラスコ内容物を濾過して濾液と菌糸を分離した。

１０１サイズの醗酵液を調製するために、多くの２５０ｍ１エルレンマイヤーフ ラスインキユベートした。かかる種培養液１０ｍ１を用いて７５ｍ１コーンミー ルブロスに播種した。培養後、培養液合わせて濾過し菌糸と濾液を分離した。

実施例３　単離 菌糸及び凍結乾燥濾液両方の粗メタノール抽出物は、実施例５で詳しく説明する タンパクキナーゼＣ阻害分析法において約５μｇ／ｍ１未満のタンパクキナーゼ Ｃ阻害活性（ＩＣｓ。）を示した。本発明のタンパクキナーゼＣ阻害因子を単離 するための分画をかかる酵素分析法を用いて行った。全ての画分をそれぞれの精 製工程において評価し、向上したタンパクキナーゼＣ阻害活性を有するものだけ を更に分画した。

１０１培養液からの菌糸又は凍結乾燥濾液を１．５１のメタノール中で室温で攪 拌し減圧下で濾過した。かかる抽出操作を４〜５回繰り返した。その濾液を合わ せて減圧濃縮して暗褐色残渣を得、次いで、２００ｍ１水に溶解して２００ｍＩ ｎ−ブタノール（ｎ−ＢｕＯＨ）で３回抽出した。菌糸の場合には、ｎ−ＢｕＯ Ｈで抽出する前に酢酸エチルで該水及び粗抽出混合液を洗浄する必要があった。

ｎ−ＢｕＯＨでの抽出は、水層のタンパクキナーゼＣ活性が約３０μｇ／ｍ１未 満のＩＣ３゜に落ちるまで切り返した。合わせたｎ−ＢｕＯＨ抽出液を室温で減 圧濃縮してＩＣ５゜が５μｇ／ｍｌのタンパクキナーゼＣ阻害活性を有する暗褐 色残渣を得た。

次いで、該粗ｎ−ＢｕＯＨ抽出物を３＝１の比率のクロロホルム／メタノール（ ＣＨＣＩ！ｓ／ＭｅＯＨ）で平衡化したゲル透過カラム（架橋デキストラン、セ ファデックスＬＨ−２０、ニューシャーシー州のファルマシア社）で分画した。

カラムを組成に勾配を設けたＣＨＣｌ５／ＭｅＯＨ（３：　１から２：１．１． １へと変化させ最後は１００％メタノール（ＭｅＯＨ））で溶出した。約４＝ｌ ：１の比率のｎ−ＢｕＯＨ／ＡｃＯＨ／Ｈ２０でシリカゲル（Ｅメルク）薄層ク ロマトグラフィー（ＴＬＣ）を展開し、ＵＶランプ及びニンヒドリン噴霧試薬で 目視可能にしたパターンに従って画分をプールした。目的とするタンパクキナー ゼＣ阻害因子は、１００％メタノールでカラムから溶出させた最後の両分中に存 在していた。

上記のクロマトグラフィーからの最も活性のある画分を、ＣＩ８カラム（オクタ デシルジメチルシリル結合相シリカゲル、ウォーターズマイクロボンダパック（ ＷａｔｅｒｓｍｉｃｒｏＢｏｎｄａｐａｋ）を用いた逆相ＨＰＬＣにより、濃度 勾配をつけたアセトニトリル（ＣＨｉ　ＣＮ　）及びＭｅＯＨで更に分画した。

活性成分の溶出は、２５４ｎｍのＵＶによりモニターした。ＨＰＬＣ画分を凍結 乾燥して純粋な淡黄色固体物質が得られた。

実施例４　物理化学的特性 実施例３の化合物の物理化学的特性は以下の通りである。該化合物はジメチルス ルホキッド（ＤＭＳＯ）　、Ｈ！Ｏ１及びメタノール（ＭｅＯＨ）に溶解性であ り、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）に不溶性の淡黄色非晶質固体として存在する。該 化合物は、リンモリブデン酸試薬（ＰＭＡ）（２０重量％エタノール溶液）、ニ ンヒドリン、及び塩化第二鉄（Ｆ　ｅ　Ｃ１３）で陽性の発色反応性を示すが、 ドラーゲンドルフ試薬及びヨウ化白金酸塩噴霧試薬で陰性である。該化合物のＲ ｃ値は、Ｅメルクシリカゲル６０Ｆ２５４Ｍ層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プ レートを用いて、４：１：１の比率のｎ−ブタノール／酢酸／水（ｎ−ＢｕＯＨ ／ＡｃＯＨ／ＨｚＯ）での薄層クロマトグラフィー分析法において約１５８であ る。

更に、該化合物の分子量は約５５０である。ＦＡＢＳＶＧ−アナリティカルＺＡ Ｂ２−５Ｆハイフィールド・マススペクトロメーターを用いたマススペクトル分 析は（Ｍ＋Ｈ）、イオン５５１を示した。中性（Ｈ２Ｏ）及び酸性（０，１規定 Ｈ（１）の場合の該化合物の紫外線吸収スペクトル（島津製）は、約２５６ｎｍ における極大値と約２２．８０７の吸光係数を有し、塩基性（０，１規定Ｎａ０ Ｈ）の場合は約２８９ｎｍのにおける極大値と約３７．３６８の吸光係数を有し た。

３００ＭＨｚパリアン・ジエミニ（Ｖａｒｉａｎ　Ｇｅａ＋１ｎｉ）二元プロト ン−炭素プローブ５ｍｍを用いた’　ＨＮＭＲ（Ｍ　ｅ　ＯＨｄ　４）は、次の およそのδ値においてピークを示した：６７．４　（ｌｔｌ、　ｄ、　８．７　 Ｈｚ）、　７．０６　（１１１１，ｄ、　８．１　Ｈｚ）、　６．７　（ｉｌｌ B ｔ、　７．９　Ｈｚ）、　６．７０　（１［１，ｓ）、　６．５　（２ｔＴ、　 ｄｄ、　７．９　Ｈｚ、　８．０　Ｈｚ）、　５．０８　（hＨ，ｄｔ、　３゜ ４、５．０　Ｈｚ）、　４．３８　（１［１，ｍ）、　４．１３　（１■、　ｍ ）、　２．７−３．０５　（４Ｈ，ｍ）及び１．５５−１．X５ （４Ｈ，ｍ）。

プロトンＮＭＲ分析における５ｍｍの３　Ｑ　ＱＭＨｚパリアン・ジエミニニ元 プロトンー炭素プローブのための計器設定の一例を表１に示した。この分析では 、パルスシーケンス５２Ｐｕｌ、及び溶媒としてＣＯ３００を用いた。５ｍｍの ３００ＭＨｚパリアン・ジエミニニ元プロトンー炭素プローブを用いた本発明の 化合物の’ＨＮＭＲスペクトルを図１に示した。

表１ 捕捉（ＡＣＱＵＩＳＩＴＩＯＮ）　ＤＥＣ＆　ＶＴＴＮ　１．０００　ＤＮ　１ ．０００ ＳＷ　４５００．５　Ｄｏ　−４５０，０ＡＴ　Ｌ、７７８　０Ｍ　ＮＮＮ ＮＰ　１６０００　ＤＨＰ　１．０ Ｐｗ　ａ、ｏ　ＤＬＰ　２０ ＰＩ　Ｑ、　ＨＯＭＯＮ Ｉ　Ｏ Ｄ２　０　プロセシング Ｔｏ　ＯＭＡＴＨＩ ＮＴ　１２８ ＣＴ　１２８　ディスプレイ ＰＷ９０　２１．２　ＳＰ　−３８，５ＦＢ　２２５０　ＷＰ　２４７０．３ Ｂ５　６４　ＶＳ　３２１２ ＳＳ　ＯＳＣ２ ＩＬ　Ｎ　ＷＣ３９６ ＩＮＹＩＳ３８０９ ＤＰ　Ｙ　ＲＦＬ　５５７．６ ＡＬＯＣＫ　Ａ　ＲＰＰ　０ ＩＮＳ　１．０００ Ｃ−１３ＮＭＲ分析における５ｍｍの３００ＭＨｚパリアン・ジエミニニ元プロ トンー炭素プローブのための計器設定の一例を表２に示した。この分析では、溶 媒としてＣ０３００を用いた。５ｍｍの３００ＭＨｚパリアン・ジエミニニ元プ ロトンー炭素プローブを用いた本発明の化合物のＣ−Ｃ−１３Ｎスペクトルを図 ２に示した。

表２ 捕捉（ＡＣＱＩＪｒＳＩＴＩＯＮ）　ＤＥＣ＆　ＶＴＴＮ　１３．０００　ＤＮ 　１．０００ＳＷ　１８７６１．７　Ｄｏ　−４５０，ＯＡＴ　Ｏ，８００ＤＭ 　ＹＹＹ ＮＰ　３００１６　ＤＭＭ　Ｓ ＰＷ　８．０　ＤＭＦ　８５００ Ｐｉ　ＯＤＨＰ　１．０ Ｄｉ　ＯＨＯＭＯＮ Ｔ○　０　プロセシング ＮＴ　１．０ＯＥ９　ＳＥ　Ｏ，３１８ＣＴ　３６３５２　ＬＢ　１．０００ ＰＷ９０　２３．６　ＦＮ　３２７６８ＰＰ　２１．２　ＳＮ　３５ ＦＢ　１１２５０　ＭＡＴＨ！ ＢＳ　６４ ＳＳ　Ｏディスプレイ ＩＬ　Ｎ　ＳＰ　−１１１９，９ ＩＮ　Ｙ　ＷＰ　１８７６１．７ ＤＰ　Ｙ　ＶＳ　２７３２ ＡＬＯＣＫ　Ａ　ＳＣ２ ＷＣ３９６ Ｉｓ　１００ ＡＦＬ　１１１９．９ ＩＮＳ　１．０００ 実施例５　タンパクキナーゼＣ阻害 このタンパクキナーゼＣ阻害分析は、タンパクキナーゼＣ機能に要求される１ｎ ｖｉｖｏ条件を再現するようにデザインする。従って、ｐＨ１塩及び補助因子の 濃度は、生理学的レベルと同様である。ヒストンＨ１（リジン豊富）は入手容易 でありタンパクキナーゼＣの良好な基質として役立つので、それをリン酸化アク セプタータンパク質としてこの分析に用いる。該酵素はラットの脳から単離し、 ナトリウムドデシルサルフェート（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミド上で銀染色し た際に単一のバンドが現れることを確認して均質であると考えられるまで精製す る。

スクリーニング分析において、ホスファチジルセリン（ＰＳ）とＤＡＣを同時超 音波処理して単層及び多層の小胞を形成した。この分析における脂質の濃度を最 適以下にして阻害因子についてのこの分析の検出能力を最大にする。潜在的な阻 害因子化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の分析物へ３種の濃度で添 加して、それぞれ４，３．４３及び２１８μＭの最終阻害因子濃度にする。酵素 の添加で分析を開始し、２５％トリクロロ酢酸（Ｔ　ＣＡ）及び１．０ｍｇ／ｍ ｌウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加することによって１０分後に止める。放 射性ヒストン生成物を残し、グラスファイバーフィルター上で洗浄して未反応３ ２ｐ−ＡＴＰを通過させる。リン酸化の量は、放射能をシンチレーションカウン ターで計ることによって測定する。各分析吻合てにコントロールを含めて、酵素 不存在下でのバックグランド活性、脂質不存在下での活性及び飽和レベルの活性 化剤脂質での最大酵素活性を測定する。このタンパクキナーゼＣ分析において用 いる成分及びそれらの濃度を表３に示す。

表３ 分析物成分　濃度 ＨＥＰＥＳ　ｐＨ７，５２０μＭ Ｍ　ｇ　Ｃ１！　２０μＭ ＣａＣ１ｚ　１００μＭ ＥＧＴＡ　９５μＭ ヒストンＨ１２００μｇ／ｍｌ ホスファチジルセリン　４０μｇ／ｍｌジアシルグリセロール　１．８μｇ／ｍ ＋タンパクキナーゼＣＯ０６μｇ／ｍｌ γ−”Ｐ−ＡＴＰ　２０μＭ ＨＥＰＥＳはＮ−〔２−ヒドロキシエチルコピペラジン−Ｎ’−Ｃ２−エタンス ルホン酸〕であり、ＥＧＴＡはエチレンビス（オキシエチレンニトリロ）テトラ 酢酸である。

タンパクキナーゼＣ分析結果はＩＣ５ｏ値として評価する。これは、コントロー ルにおけるタンパクキナーゼＣ活性のレベルと比較してタンパクキナーゼＣ活性 の５０％を阻害するのに必要な試験化合物の濃度である。本発明の化合物は、タ ンパクキナーゼ活性を効果的に阻害することができた。

本発明の化合物は５μｇ／ｍｌ　（９μＭ）のＩＣ５ａを有し、強いタンパクキ ナーゼＣ阻害活性を示した。

表４ バラノールのプロトン核磁気共鳴スペクトル分析データプロトン　化学シフト（ ｐｐｍ）　多重度　カップリング定数（Ｈ２）　積分値２　２．９０　ｄｄ　１ ４．６．３．７９　１２、７８　ｄｄ　１４．６．７．０４　１３　４．１７　 ｄｄｄｄ　８．６６．７．５８．７．０４．３．７９　１４　５．１１　ｄｄｄ 　８．１２．７．５８．３．７９　１７　２．８１　ｄｄｄ　１２．９９、−１ −　１２．７３　ｄｄｄ　１２．９９．８．１２．５．４１　１８　ｇ、　０８ 　ｄ　８．６６　１ ３’、７’　７．６２　ｄ　８．６６　２４’、６’　６．７４　ｄ　８．６６ 　２３”、７”　６．６６　ｓ　２ １ド　６．６４　ｄ　７．５８　１ １２”　７．０７　ｔ　７．５８　１ １３“　６．９６　ｄ　７．５８　１ フエノール性、酸性　９．５〜１２　ブロード表５ バラノールの炭素核磁気共鳴スペクトル分析データ炭素　化学シフト（ｐｐｍ） 　多重度　積分値２　５０、１４　ＣＨＩ　１ ３　５５、３６　ＣＨ１ ４７８、００ＣＨ１ ５２９，０５ＣＨ２１ ６２４、７７ＣＩＴ、　１ ７　４８．２２　ＣＨ２１ １’　１６５．８７　Ｃ１ ２’　１２５．６６Ｃ１ ３’　、７’　１２９．４４　ＣＥＩ　２４’　、６’　１１５．０９　ＣＨ２ ５’　１６０．４３　Ｃ１ １”　１６５．４０　ＣＩ ２”　１３４．７７　Ｃ１ ３”、７”　１０７．９９　ＣＨ２ ４”、６°　１５９．８３　Ｃ２ ５”　１２０．１２　Ｃ１ ８“　２０１．４４　Ｃ１ ９”　１２９．９０　Ｃ１ １０”　１５３．４３　Ｃ１ １１”　Ｉ１６．５９　Ｃ１ １２“　１２９．０３　ＣＨ１ １３“　１１８．７０　ＣＨ１ １４”　１４１．４１　Ｃ１ １５”　１７］、、７８　Ｃ１ 図面の簡単な説明 図１は、５ｍｍの３００ＭＨｚ二元プロトンー炭素プローブを用いたバラノール の’ＨＮＭＲスペクトルである。

図２は、５ｍｍの３００ＭＨｚ二元プロトンー炭素プローブを用いたバラノール のＣ−Ｃ−１３Ｎスペクトルである。

手続補正書 平成　６年　４月７２〃酊

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．バーティシリウム・バラノイデスから単離可能なタンパクキナーゼＣ阻害活 性を有する化合物であって、ジメチルスルホキシド、水、及びメタノールに溶解 性であり；酢酸エチル及びクロロホルムに不溶性であり；ポリモリブデン酸、ニ ンヒドリン試薬、及び塩化第二鉄で陽性の発色反応を示し；ドラーゲンドルフ試 薬及びヨウ化白金酸塩噴霧で陰性であり；比率が４：１：１のｎ−ブタノール／ 酢酸／水でのシリカゲル薄層クロマトグラフィーで約０．５８のＲ１値を有し； 約５５０の分子量を有し；中性（水）及び酸性（０．１規定ＨＣｌ）の場合の前 記化合物の紫外線吸収スペクトルが約２５６ｎｍにおける極大値と約２２，８０ ７の吸光係数を有し；塩基性（０．１規定ＮａＯＨ）の場合は約２８９ｎｍにお ける極大値と約３７，３６８の吸光係数を有する化合物、又は薬学的に許容でき るその塩。
2. ２．薬学的に許容できる製剤上の担体又は希釈剤及び、治療的に有効量の請求項 １の化合物又は薬学的に許容できるその塩を含む組成物。
3. ３．タンパクキナーゼＣを阻害量の請求項１の化合物と接触させることを含むタ ンパクキナーゼＣを阻害する方法。
4. ４．タンパクキナーゼＣを阻害量の請求項２の化合物と接触させることを含むタ ンパクキナーゼＣを阻害する方法。
5. ５．タンパクキナーゼＣを阻害するための薬剤の製造における請求項１の組成物 の使用。
6. ６．哺乳動物の腫瘍細胞の成長を阻害するための薬剤の製造における請求項１の 組成物の使用。
7. ７．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ を用いる化合物又は薬学的に許容できるその塩。
8. ８．薬学的に許容できる製剤上の担体又は希釈剤及び、治療的に有効量の請求項 ６の化合物又は薬学的に許容できるその塩を含む組成物。
9. ９．タンパクキナーゼＣを阻害量の請求項８の化合物と接触させることを含むタ ンパクキナーゼＣを阻害する方法。
10. １０．タンパクキナーゼＣを阻害量の請求項８の化合物と接触させることを含む タンパクキナーゼＣを阻害する方法。
11. １１．タンパクキナーゼＣを阻害するための薬剤の製造における請求項６の組成 物の使用。
12. １２．哺乳動物の腫瘍細胞の成長を阻害するための薬剤の製造における請求項６ の組成物の使用。