PT98167A

PT98167A - Processo para a preparacao de derivados da pirimidina e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT98167A
Application number: PT98167A
Authority: PT
Inventors: Eugen Uhlmann; Christoph Meichsner; Anuschirwan Peyman; Irvin Winkler; Matthias Helsberg
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1990-07-02
Filing date: 1991-07-01
Publication date: 1993-08-31
Also published as: EP0464642A1; IE912305A1; JPH04230371A; DE4021006A1; TW197447B

Description

Descrição referente à patente de invenção de HOECHST AKTIEEGESEIDSCHAET, alemã, in dustrial e comercial, com sede em D-6230 Erankfurt am Main 80, República Eederal Alemã, (inventores: Dr. Eugen Uhlmann, Dr. Anuschirwan Peyman, Dr. Irvin Winkler,

Dr. Christoph leichsner e Dr. MattMas Helsberg, residentes na República Eederal Alemã) para "PROCESSO PARA PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DA PIRIMIPI-TSÂ E DE COMPOSIÇÕES EARMACÊU-(EIQAS QUE OS COmM".

DESCRIÇÃO A presente invenção refere-se a derivados da pirimidina, sua preparação e utilização, bem como a composições farmacêuticas que os contêm.

Sabe-se já que determinados derivados de timidina, como p.e. o AZT (3,-azido-3,-desoxi-timidina) possuem uma eficácia antiviral. Para além disso, sabe-se que outros derivados da timidina, bem como da uridina e da citidina (ver DE-OS 36 43 091 Al) possuem igualmente uma actividade anti -virai. Surpreendentemente, descobriu-se agora que derivados da • azido-xilofuranosil-pirimidina e da azido-nor-xilofuranosil-pi-. rimidina substituídos de forma determinada, possuem também uma n

eficácia anti-viral.

Assim, são objecto da presente inven ção compostos da fórmula geral I

I

na qual X = H, OH, OR1, NHg, NH-COHEt2, H-C0“R2(C0“R3); Y = alquilo com C1-C4, halogénio; Z = OH, Sy Fj U = 0, S, 0H2; CF2, CHF; Y = 0, S, OHg ou uma ligação directa em que R1 a R^ representam independentemente uns dos outros grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 20 átomos de carbono, grupos ciclo-alquilo com 3 a 8 átomos de carbo no, grupos aril-alquilo com 7 a 20 átomos de carbono, grupos / o "5 arilo com 6 a 14 átomos de carbono, podendo ainda R e R formar em conjunto uma estrutura imidica cíclica. Dá-se preferência aos compostos da fórmula geral I, na qual X = H, OH, OR1, HH2, HH-00-R2 (CO-R3); Y = H, alquilo com Cl-04, halogénio; Z = OH, ir5, F; U = 0, S, 0H2, 0F2, OHF; Y = OHnj c 1 em que R a R representam grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 6 átomos de carbono, grupos ciclo-alquilo • com 3 a 6 átomos de carbono ou grupos aril-alquilo com 7 a 10

/ 2 *5 átomos de carbono, podendo ainda R e ir formar em conjunto uma estrutura imidica ciclica. Dá-se especial preferência aos compostos da fórmula geral I, na qual X = H, OH, HH2$ Y = H, CH2, C2H5, 01; Z = OH, U = 0, CH2; Y = ch2, e muito especial aos compostos da fórmula geral I na qual X = OH, HH2; Y = H, 0H3, 01; Z * OH, N3| U = 0, CH2j 7 = CH2.

Sob a designação de grupo alquilo devem compreender-se por exemplo os seguintes radicais; meti-lo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, sec.-butilo, tert.--butilo, 2,2-dimetil-l-propilo, n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo e n-decilo.

Sob a designação de grupo ciclo-al-quilo devem compreender-se por exemplo ciclo-propilo, ciclo--butilo, ciclo-pentilo ou ciclo-hexilo. Sob a designação de grupo ar-alquilo devem compreender-se por exemplo os seguintes radicais; fenil-metilo, fenil-etilo, fenil-propilo, fenil-buti lo, fenil-pentilo, fenil-hexilo, fenil-beptilo, fenil-octilo, fenil-nonilo ou fenil-decilo.

Compostos da fórmula geral I que possuem especial significado são os seguintes; (A) l-(5-Azido-2,3-ãiãesóxi-f*-D-xilofuranosil)-timina; (B) l-(5-Azido-2,3-didesóxi- f*-D-xilofuranosil)-citosina; (C) 5-Cloro-l-(5-azido-2,3-didesóxi-{5 -D-xilofuranosil)-citosi na; (D) 1-(3,5~Diazido-2,3»5-tridesóxi-J3-D-xilofuranosil)-timina; (E) l-(3,5-Diazido-2,3,5-tridesóxi-p-D-xilofuranosil)-citosi-na; (E) 5-Cloro-l-(3,5-diazido-2,3,5-tridesóxi-P -D-xilofuranosil}· -citosina.

*T

São igualmente objecto da presente invenção as formas tautoméricas dos compostos acima referidos.

Constitui igualmente objecto da presente invenção um processo para a preparação dos compostos da fórmula geral I, caracterizado por, para preparação dos deriva dos 5-azido-5-bidróxi-fv-D-xilofuranosilo, se fazer reagir um composto da fórmula geral II Ή

I ^ (II) 0

V na qual os símbolos têm as definições acima indicadas, com azida,

ou para preparação dos derivados 3,5-diazido-/^-D-xilofurano-silo, se fazer reagir um composto da fórmula geral III X 0

Y (III)

A

U

A /

V na qual os substituintes U-Y têm as definições acima indicadas, e A representa um grupo de eliminação, com azida, ou para preparação dos derivados 5-azido-3-fluor-jB-D-xilofura-

-nosilo, se fazer reagir um composto da fórmula geral IY

X

na qual os símbolos U-Y têm as definições acima indicadas, e A representa um grupo de eliminação, com azida. 0 grupo de eliminação A nos compostos das fórmulas gerais III e IY pode ser de natureza diversa; grupos de eliminação especialmente preferidos são os radicais de ésteres alquil-sulfónicos como p.e. o radical mesilo ou os radicais de ésteres aril-sulfónieos como p.e. o radical tosi-lo.

Para o processo de transformação a que se refere a presente invenção são adequadas diferentes azi das. Detêm uma especial importância as azidas alcalinas, em es pecial a azida de lítio.

Para a realização da reacção, é, recomendável utilizar a azida respectiva num excesso relativamen te aos compostos das fórmulas II, III ou IY; é especialmente indicado um excesso de 10-50 vezes. A reacção de processo a que se refere a presente invenção faz-se de preferência num solvente iner tes anidro, sendo especialmente preferido como solvente a DMF.

As temperaturas de reacção preferidas situam-se entre 20° e 150° C, dando-se especial preferência a uma temperatura entre 75° e 150° C. Em condições de reac ção especiais, pode ser necessário determinar de forma empiri-. ca a temperatura e o tempo de reacção. 1 0 tratamento dos compostos a que se

refere a presente invenção pode ser feito pelos processos usuais, como p.e. através de recristalização ou por meio de métodos cromatográficos.

Os compostos de partida necessários para o processo a que se refere a presente invenção podem ser preparados, p.e., pelos métodos descritos in Biochemical Pharmacology, Yol. 36, 12 17, pág. 2713-2718, 1987; J. Org. Chern. 1987, 30, 2131-2137.

Os compostos a que se refere a presente invenção possuem um bom efeito farmacológico; por essa razão, a sua utilização no campo farmacêutico é igualmente objecto da presente invenção. Os compostos a que se refere a presente invenção têm especial significado para a profilaxia ou tratamento de doenças provocadas por virus DHA ou fflA, em especial de doenças provocadas pelo HIY, FLY, mixo-vírus (p.e. vírus influenza A2), virus Herpes simplex e citomegalo-vírus. principal campo de aplicação dos compostos a que se refere a presente invenção são as doenças das vias respiratórias, da pele, do olho e do sistema nervoso, provocadas por virus, A SIDA e estados relacionados com a SIDA (ARO etc.), a linfo-adenopatia generalizada (PG1), os estados de anticorpos anti-HIV, 0 carcoma de Karposi e as doenças cancerosas provocadas por virus sonstituem outras indicações para a aplicação dos compostos da fórmula geral I. São ainda objecto da presente invenção as composições farmacêuticas com um teor de pelo menos um composto da fórmula geral I, eventualmente em conjunto com os excipientes e/ou adjuvantes adequados.

Os compostos da fórmula geral I podem ser utilizados como composições farmacêuticas por si só misturados com adjuvantes ou excipientes fisiologicamente tole ráveis. Os compostos da fórmula geral I podem ser administrados por via oral em doses de preferência, de 1-50 mg/kg/dia, e especialmente de 2-25 mg/kg/dia. A administração parentérica rectal ou tópica, ou sob a forma de aerosol, faz-se de preferência numa dose de 1-50 mg/kg/dia, em especial de 2-25 mg/kg/ /dia. São administrados de preferência sob a forma de unidades r

posológicas, contendo pelo menos a dose eficaz dos compostos da presente invenção, de preferencia 100-2500 mg, em especial 200-1250 mg. Estes valores referem-se a um adulto com um peso de 75 kg. A dosagem pode também ser aumentada em casos graves. Por outro lado, em muitos casos são suficientes doses inferiores. 0s compostos da presente invenção po d em também ser administrados em combinação com imuno-estimulan tes, como a interferona. A presente invenção abrange ainda a utilização dos compostos a que se refere a presente invenção para a preparação de composições farmacêuticas. Um outro obje£ to da presente invenção são as composições farmacêuticas contendo um ou mais compostos da fórmula geral I, bem como as com posições farmacêuticas contendo para além de um composto da fórmula geral I, um agente imuno-estimulante.

Os compostos da fórmula geral I podem ser utilizados como composições farmacêuticas por si só ou misturados com adjuvantes e/ou excipientes fisiologicamente t£ leráveis, sob a forma de comprimidos, drageias, cápsulas, sup£ sitórios, emulsões, suspensões ou soluções, sendo o teor de in grediente activo de aprox. 95$, de preferência entre 10 e 75$.

Adjuvantes ou excipientes adequados para as formulações galénicas desejadas são por exemplo, para além dos solventes, agentes formadores de geles, excipientes para supositórios, adjuvantes para preparação de comprimidos e outros excipientes, também os anti-oxidantes, agentes disper-santes, emulsionantes, agentes redutores da espuma, agentes correctores do sabor, conservantes, agentes de dissolução ou corantes. 0s compostos da fórmula geral I podem ser aplicados por via oral, parentérica, intravenosa ou rectal, dando-se preferência para além da aplicação oral, à administração inira-nasal sob a forma de aerosol. Para as formas de aplicação oral, os compostos da fórmula geral I são mis turados com os adjuvantes adequados para o feito, como excipientes, agentes estabilizadores ou diluentes inertes, e transformado pelos processos usuais nas formulações galénicas ade-n

quadas, tais como comprimidos, drageias, cápsulas, ou soluções aquosas ou oleosas. Gomo excipientes inertes podem ser utilizados p.e. goma arábica, magnésia, carbonato de magnésio, fosfato de potássio, lactose, glucose, ou amido, em especial amido de milho. 1 preparação pode ser feita sob a forma de granulado seco ou também de granulado húmido. Como excipientes ou solventes oleosos podem considerar-se p.e. óleos vegetais ou animais, tais como óleo de girassol ou óleo de fígado. Para aplicação subcutânea ou intravenosa, os compostos da fórmula geral I são misturados com as substâncias adequadas para o efeito, tais como agentes de dissolução, emulsionantes ou outros adjuvantes. Como solventes podem considerar-se p.e. solução salina fisiológica ou alcoóis, p.e. etanol, propanol, glicerina, e ainda soluções de glucose ou manitol, ou também uma mistura dos diferen tes solventes. A eficácia dos compostos da presente invenção é comprovada através dos seguintes testes; I. Ratinhos RMRI (RMRI = lavai Medicai Research Institute) fêmeas, isentos de patogéneos, com um peso de aprox. 20 g, são infectados por via intravenosa com soro de ratinho contendo vírus da leucemia de Preind (PLV). 48 horas após a infecção dá--se inicio a um tratamento de 10 dias. Os ratinhos são tratados com os compostos indicados na Tabela 1. A aplicação intraperito neal faz-se numa dose, enquanto que a administração oral se faz através da água de beber dos ratinhos. Ro 14e dia de ensaio os animais são sacrificados por meio de deslocação cervical e retiram-se os braços. Como parâmetro da eficácia terapêutica es-tabeleee-se a relação entre o peso do baço dos animais tratados, com o des animais de controlo não tratados. Como composto padrão utilizou-se o AZT. 8

Tabela 1

Composto Forma de Dose Taxa de Peso relativo aplicação mg/kg sobrevivência dos baços (fo) A i.p. 25 100 7,64 AZT i.p. 50 100 5,81 Controle i.p. 0 100 11,22 D i.p. 50 90 6,68 AZT i.p. 50 100 7,54 Controle i.p. 0 100 11,36 D p.o. 14 100 8,08 AZT p.o. 18 100 6,42 Controle p.o. 0 100 11,56 II. Ratinhos MRI, isentos de patogéneos, com um peso de aprox. 16 g, são infectados por via intranasal com influenza A2 e em seguida tratados por via oral com os compostos indicados na Tabela 2. Como comparação utilizou-se amantidina. 0 tra tamento efectuou-se com inicio após a infecção, duas vezes ao dia durante 2,5 dias. 0 êxito terapêutico foi determinado com base na evolução da doença e na taxa de sobrevivência, relativamente aos animais de controle infectados e não tratados. Estes animais receberam em lugar dos compostos a testar, uma metil-hidroxi-etil-celulose hidrossolúvel (viscosidade 300 Pa.S em solução a 2f0 em tilose(R) ΜΗ 300P). Os ensaios foram realizados em grupos com respectivamente 5 ratinhos. 0 efeito quimio-tera-peutico é apresentado na Tabela 2. - 9 -

Tabela 2

Composto Porma de aplicação Dose mg/kg Tempo médio de sobreviv. (dias) Taxa de sobrevivência (de 5) D p.o. 0,25 7,7 2 D p.o. 2,50 7,0 4 Amantidina p.o. 80,00 - 5 Controle p.o. 0 8,0 1 III. Ratinhos RMRI, isentos de patogéneos, com um peso de apraí 15 g, são infectados por via intraperitoneal com Herpes simples; tipo 1, e em seguida tratados por via intraperitoneal com os compostos indicados na Tabela 3. 0 tratamento efectuou-se com inicio após a infecção, duas vezes ao dia durante 2,5 dias. 0 êxito terapêutico foi determinado com base na evolução da doen ça e na taxa de sobrevivência, relativamente aos animais de controle infectados e não tratados. Estes animais receberam em lugar dos compostos a testar, uma metil-hidroxietil-celulose hidrossolúvel (viscosidade 300 Pa,S em solução a 2$ em tilose (R) ΜΗ 300P). Os ensaios foram realizados em grupos com respe£ tivamente 5 ratinhos. 0 efeito quimio-terapêutico é apresentado na Tabela 3.

Tabela 3

Composto Porma de Dose Tempo médio de Taxa de sobreyi

Aplicação mg/kg sobreviv. (dias) vência (de 5) A i.p. 30 10 3 Padrão i.p. 30 - 5 Controle i.p. 0 8,6 0 17. 0 ensaio da preparação contra ο HI7 em cultura celular foi efectuado com o auxilio de linfocitos em meio RPMI de pH . 6.8, contendo adicionalmente ainda 20/ de soro fetal de vitelo ) a 20 Ul/ml de interleucina-2 recombinante. Os linfocitos isola Ί r\ ...

dos de sangue fresco de dadores por meio de centrifugação com gradiente Picol IR são cultivados em meio completo com adição de 2 ug/ml de fito-hemaglutinina (Wellcome), durante 36 horas a 37° C, com 5$ de 002. Após adição de 10$ de DMSO, as células

C são congeladas com uma densidade celular de 5 x 10 e armazena das em azoto líquido. Para o ensaio, as células são descongela das, lavadas com meio RPII e cultivadas em meio completo durante 3 a 4 dias. Dissolver o compostos a testar em meio completo. Vazar respectivamente 0,5 ml de meio completo em caixas Multi-well 24. Após adição de 0,1 ml das preparações dissolvidas, diluir as preparações numa série de diluição geométrica, factor 5, através de transferência de respectivamente 0,1 ml. Juntar a todas as tomas 0,4 ml de uma suspensão com 5 x 10^ de linfo-citos por ml.

Juntar a todas as tomas 0,1 ml do so-hrenadante de linfocitos infectados com ΗΓ7, sendo a multiplicidade da unidade infecciosa de 0,01 a 0,02. Como padrão utilizou-se AZ3?. A avaliação foi efectuada através de observação microscópica das tomas ao quarto dia após a infecção. A inibição da multiplicarão do vírus é determinada com base na formação de sincicios provocada pelo virus. Os resultados do ensaio são apresentados na Tabela 4.

Tabela 4

Preparação Agente infeccioso Estirpe Eficácia MHK (ug/ml) A HIV-1 D34 30 75 AZT HIV-1 D34 50 0,2 Controle HIV-1 D34 10 100 A HIV-1 ARI 30 50 Controle HIV-1 ARI 10 100 Escala de avaliação: 10 = ineficaz ; 50 = altamente eficaz. ARI é uma estirpe resistente ao AZT, que é cultivada na presen· * ça de ΑΖΪ. í Os exemplos de sintese seguintes des- π n

tinam-se a melhor ilustrar a presente invenção. EXEMPLO 1

Sintese de l-(5-azido-2,3-didesóxi-|3-D-xilofuranosil)-timina (A)

Dissolver 0,56 g (2,5 mmol) de 3’,5'--anidro-timidina (oxetano da fórmula II) em 10 ml de DMP absoluto e juntar a esta solução 0,98 g (20 mmol) de azida de lític, Depois de agitar durante 12 horas a 120° C não se deteota qualquer educto através de cromatografia em camada fina. Depois de arrefecer, juntar 10 ml de água à mistura de reacção, evaporar a solução no rotavapor e co-evaporar o resíduo resultante 2 vezes com tolueno. Proceder à purificação do composto bruto sobre uma coluna de silicagel com cloreto de metileno/metanol (95:5)· Depois de evaporar e secar obtém-se 0,25 g de um pó amorfo. lR-mm (dg-DMSO, 270 MHz) tf" 1,8 (s, 3H, CH^); 1,9 (m, 1H, H-21 ); 2.6 (m, 1H, H-2"); 3,6 (m, 2H, H-5’, H-5"); 3,95 (m,lH, H-4')s 5.55 (d, 1H, H-3'); 6.1 (q, 1H, h-1'); 7.8 s, 1H, H-6); 11.25 (s, lH, H-H). UT (MeOH) e=9280 (265 nm). MS m/e 268 (M+H+). EXEMPLO 2

Sintese de l-(3,5-óiazido-2,3,5“'tridesóxi-P -D-xilofuranosil)-timina (D)

Dissolver 1.99 g (5 mmol) de 3',5’--di-O-mesil-timidina em 25 ml de DM1 absoluto e agitar esta solução durante 140 minutos a 80° 0 com 1,96 g (40 mmol) de azida de lítio. Depois de arrefecer, evaporar a mistura de reac_ ção purificar o resíduo sobre uma eoluna de silicagel com ciclx -hexano/acetato de etilo (lsl). As fracções uniformes na cromatografia em camada fina fornecem após evaporação 1.3 g de um óleo incolor.

Vm (CDC15, 270 MHz) $ 1,9 (s, 3H, CH^); 2.2 (m, 1H, H-2'); . 2.8 (m, 1H, H-2·'); 3-7 (m, 2H, H-5', H-5"); 4.1 (m, 1H, H-4’); ; 4.3 (m, 1H, H4‘); 6.2 (q, lH, H-1’); 7-4 (s, lH, H-6); 8.85 12

Claims

(s, 1H, N-H). UV (MeOH) e=9260 (264 nm). MS m/e 293 (M+HH) REIVINDICAÇÕES - 1B - processo para preparação de um com posto da fórmula geral I

(I) na qual X = H, OH, OH1, m2, NH-CO-R2, N-C0-R2(C0-R5); Y = alquilo com C^-C^, Halogénio; Z = OH, Fj TT = 0, S, CH2; V =0, S, CHg ou uma ligação directa 0^-0^; em que R"1" a B? representam independentemente uns dos outros grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 20 átomos de carbono, grupos ciclo-alquilo com 3 a 8 átomos de carbo no, grupos aril-alquilo com 7 a 20 átomos de carbono, grupos , 2 "=5 arilo com 6 a 14 átomos de carbono, podendo ainda R e B formar em conjunto uma estrutura imídica cíclica, caracterizado por, para preparação dos derivados 5-azido-3-b.i-dróxi-P-D-xilofuranosilo, se fazer reagir um composto da fór- n *7 (XI) mula geral II

na qual os símbolos têm as definições acima indicadas, com azi-· da, ou para preparação dos derivados 3,5-diazido--D-xilofura-· nosilo, se fazer reagir um composto da fórmula geral III X

(III) na qual os substituintes U-Y têm as definições acima indicadas, e A representa um grupo de eliminação, com azida, ou para preparação dos derivados 5-azido-3fluor- P-D-xilofura-nosilo, se fazer reagir um composto da fórmula geral IY

14 íwkhtkki:

na qual os símbolos U-Y têm as definições acima indicadas, e A representa um grupo de eliminação, com azida. - 2S - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se obter um composto da fórmula geral I na qual X = H, OH, OR1, IH2, HH-CO-R2, I-C0-R2(CO-R5); Y = H, alquilo com C^-O^, halogénio; Z = OH, H5, P; U = 0, S, CH2, CP2, CHP; V = CH0; 2 1 3 em que R a R representam grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 6 átomos de carbono, grupos ciclo-alquilo com 3 a 6 átomos de carbono ou grupo aril-alquilo com 7 a 10 átomos de carbono, podendo ainda R e R^ formar em conjunto uma estrutura imídica cíclica. - 3a - Processo de acordo com as reivindica-· ções 1 ou 2, caracterizado por se obter um composto da fórmula geral I na qual X = H, OH, Y = H, ch3, z = OH . Ϊ3Ι u = o, CH2; V = 0H 2* BH2; C2H5, 01; Ί K „ - 4§ - Processo para preparação de composições farmacêuticas para profilaxia ou tratamento de doenças provocadas por virus, contendo como ingrediente activo pelo menos um composto da fórmula geral I quando preparado de acordo com as reivindicações anteriores, caracterizado por se incorporar esse composto eventualmente em conjunto com os exci-pientes e/ou adjuvantes adequados, numa formulação galénica adequada. A requerente reivindica a prioridade do pedido de patente alemão apresentado em 2 de Julho de 1990, soh o ]P. P 40 21 006.5. Lisboa, 1 de Julho de 1991

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