PT98006B

PT98006B - Processo para a preparacao de novos derivados peptidicos

Info

Publication number: PT98006B
Application number: PT98006A
Authority: PT
Inventors: Jean Lepagnol; Michel Vincent; Georges Remond; Bernard Portevin; Yolande Herve
Original assignee: Adir
Priority date: 1990-06-18
Filing date: 1991-06-17
Publication date: 1998-11-30
Also published as: DK0462884T3; EP0462884A1; CA2044736A1; EP0462884B1; ES2059079T3; AU631068B2; ZA914662B; ATE90688T1; US5190923A; NZ238574A; DE69100128D1; JPH04253995A; FR2663336A1; PT98006A; OA09368A; FR2663336B1; AU7844791A; IE65543B1; DE69100128T2; IE912052A1

Description

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS PEPTÍDICOS

A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de novos derivados peptídicos.

Ê doravante largamente reconhecido que o sistema coli nérgico exerce uma influência benéfica maior perante fenómenos mnésicos, quer de memorização quer de rememoração.

Sabe-se bem, do mesmo modo, que o sistema noradrenérgico está estreitamente implicado nas faculdades de concentração e de atenção. Estes dois sistemas estão deficientes quando do envelhecimento cerebral e são muito vulneráveis quando de doenças degenerativas agudas ou progressivas tais como a demência de Alzheimer e o acidente vascular cerebral.

Por outro lado, entre os péptidos naturais, a TRH [Thyrotropin-Releasing-Hormone (Hormona de libertação de tirotropina)] é capaz de facilitar a neurotransmissão colinérgica, favorecendo especialmente a síntese do neuromediador quando este se torna deficitário ou exacerbando o efeito central de um agonista colinérgico.

Contudo a TRH trazida de modo exógeno fica pouco acti^ va devido ã sua degradação rápida no organismo.

Por este motivo, foram descritos análogos tripeptídicos com o fim de aumentar de modo importante os efeitos colinérgicos do péptido natural.

É o caso por exemplo dos tripêptidos descritos nas pa-

tentes de invenção francesas 2.187.155, 2.287.916, 2.266.515 e 2.345.448 em que o resto piroglutamilo está substituído por um outro resto de ácido heterocíclico carboxílico que possui propriedades anti-convulsionantes e anti-depressivas. Finalmente, a patente de invenção francesa 2.585.709 descreve péptidos em que o resto prolinamida está substituído por uma estru tura bicíclica saturada e que são capazes de estimular a síntese do AMP cíclico ao nível do tecido cerebral. Contudo, estes derivados nao tem praticamente nenhuma actividade quando administrados por via oral.

Os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção demonstraram-se particularmente interessantes pela intensidade das suas propriedades para facilitar a neurotransmissão colinérgica visto que estas propriedades exer cem-se até doses 50 vezes mais fracas do que as da TRH administrada em referência e de modo muito mais prolongado. Esta intensidade de efeito facilitador é encontrada do mesmo modo perante a neurotransmissão noradrenérgica.

Assim, os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção podem melhorar os desempenhos mnésicos e cognitivos graças â facilitação simultânea colinérgica e nor adrenérgica. São por conseguinte úteis para o tratamento dos distúrbios comportamentais e constitutivos associados ao envelhecimento e às doenças degenerativas neuronais, agudas ou cr<5 nicas, como por exemplo a doença de Alzheimer, o acidente vas_ cular cerebral, o traumatismo espinal ou a esclerose amiotrófi ca lateral.

A presente invenção diz mais particularmente respeito a

a. um processo para a preparação de novos derivados de estrutura cicloamídica respondendo s formula geral,

HM — CH — CO — MH — CH — CO — M — CH -— CO

MH?

(D na qual:

A representa em conjunto com os átomos de azoto e de carbono a aue está ligado:

- um grupo 2-oxoperhidro-7-^pz®Pinilo,

- um grupo 2-oxoperhidro-ò-szocinilo,

- um grupo 2-oxoperhidro-9-azoninilo,

- um grupo 2-oxopêrh4dro-10-atecinilo,

- um grupo 2-oxo-2,3,6-,7-tetrshidrobenzo/e /-7-azepinilo,

- um grupo 2-oxo-2,3,ó,7-totrahidrobenzo/d /-7-are pinilo,

- um grupo 2-oxo-2,H,ó,7-tetrahidrobenzo/c .7-7-sze pinilo,

B representa em conjunto com os átomos de azoto e de car bono a que está ligado, uma estrutura policíclica escolhida entre as estruturas seguintes:

- 2-azabiciclo /2,2.1 J⁷ heptano,

- 2-azabiciclo /2.2.2 J octsno eventualmente substituído na posição 1 e 4 por um ou dois grupos alquilo (Cq-C^) de cadeia linear ou ramificada,

- perhidroindol,

- perhidroisoindol,

- indolina,

- isoindollna,

- perhidroquinoleína,

- perhidroisoquinoleína,

- 1,2,3,4-tetrahidroquinoleína,

- 1,2,3,^-tetrahidrolsrquinclefna,

- ciclopenta /* b / pirrolidina

- pirrolidina eventualmente substituída por um ou dois grupos alquilo (C1-G4) de cadeia linear ou ramificada,

- piperidina,

- tiazolídina,

R representa:

- um átomo de hidrogénio,

- um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada event.ualmente substituído por um grupo amino ou guanidino,

- um grupo (M--imidazo li 1)-metilo, eventualmente subs tituído sobre um dos átomos de azoto por um radical alquilo (G^-G^) de cadeia linear ou ramificada,

- um grupo (3-pirazolil)-metilo,

- um grupo (2-piridinil)-metilo eventualmente substituído por um grupo amino, dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se proteger a função amina de um aminoácido de formula geral II, de que eventualmente, se sepa

raram os isómeros mediante uma técnica clássica de separação r

HN - CH — CC_OH (II) u

na qual B tem os significados definidos antes, com um radical protector (F) tal como o butoxi-terc.-carbonilo (tBOG) eu o benziloxicarbonilo (2) sob a acção de um reagente apropriado para se obter um derivado de fórmula geral p - N — CH - C0„H

na qual B e P têm os significados definidos antes, que se faz reagir, a uma temperatura compreendida entre -l6 e ' C^rC, na presença de trietilamina, com cloroformato de etilo e depois com amoníaco, para se obter um derivado de fórmula geral

P - R _ CH - CO - NH₂

L_bJ ' ^<rz) na qual B e P têm os significados definidos antes, que se desprotege mediante um processo atropriado como por exemplo a acção do ácido clorídrico gasoso no seio de um dissolvente anidro tal como o dioxano ou o acetato de etilo no caso em que o símbolo P representa um grupo tBCC ou median te hidrogenação catalítica no caso em que o símbolo F representa um grupo Z para se obter um derivado de fórmula geral

(V)

na qual B tem significados definidos antes, de que eventualmente se separam os isón.ems mediante uma técnica clássica de separação, que se liga a um segundo aminoácido protegido de fórmula geral VI de acordo com a técnica de ligação peptídica descrita per tf. KCNIG e R. GEIGBR (Ber.” 103, 788, 1970.

tBOC - NH - CH — C0_oH (VI)

I <Z

R’ na qual R’ representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo (C^C^) de cadeia linear ou ramificada eventualmente substituído por um grupo amino protegido por exemplo por um radical benziloxicarbonilo (Z) ou um grupo guanidino por sua vez protegido por exemplo por um radical nitro, um grupo (M-imidazolil)-metilo eventualmente substituído sobre um dos átomos de azoto pnr um radical al quilo (C^-C^) de cadeia linear ou ramificada, um grupo (3-pirazolil)-metilo, (2-piridinil)-metilo eventualmente substituído por um grupo amino protegido por exemplo por um radical benziloxicarbonilo, para se obter um derivado de fórmula geral,

na qual R’ e B têm os significados definidos antes_,

ds que eventualmente se separam os diastereoisómeros ou enantiómeros mediante uma técnica clássica de separação, que se desprotege, em seguida, por acção do ácido clorídrico gasoso no seio de um dissolvente anidro como por exemplo o di oxano ru o acetato de etilo para se obter um derivado de fórmula geral,

Η N - CH

I

R’

(VIII) na qual R’ e B têm os significados definidos antes, que se liga a um terceiro aminoácido de fórmula geral (IX), de acordo com a técnica de ligação peptídica descrita por G. àNDSRSON. e J. ZIMMERMAN (’’ J.A.C.S.*, 3039, 1963) s

HN - CH - CO - 0R” (IX) na qual R” representa um radical succinimida, para se obter:

quer:

um derivado de fórmula geral I no caso em que o símbolo R’ não representa um grupo alquilo (C^-C^) de cadeia linear ou ramificada substituído por um grupo amino protegido, ou gua nidino protegido ou diferente de um grupo (2-piridinil)-metilo substituído por um grupo amino protegido, de que eventualmente se separam os isómeros de acordo com uma técnica clássica de separação e que depois, eventualmen te, se transforma em sal de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, quer um derivado de fórmula geral

HM

CH

CO — MH

CH

I

R'

CO — N — CH u

CO

MH2 (X) no caso em que os símbolos A e B têm os significados definidos antes e R' representa um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada substituída por um grupo amino protegido ou guanidino protegido ou R' representa um grupo (2-piridinil)-metilo substituído por um grupo amino protegido, de que eventualmente se separam os isómeros de acordo com uma técnica clássica de separação e que se desprotege mediante hidrogenação catalítica, por exemplo, para se obter um derivado de fórmula geral (I), de que eventualmente se- separam os isóme ros de acordo com uma técnica clássica de separação e depois, eventualmente se transforma em sal de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista.farmacêutico.

Entre os ácidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, pode-se citar a título não limitativo, os ácidos clorídrico, sulfúrico, tartárico, maleico, fumãrico, oxãlico, metano -sulfónico , canfórico, etc.

Os compostos de fórmula geral I possuem propriedades farmacológicas interessantes que se manifestam com uma intensidade muito superior e em doses bem inferiores às dos derivados da técnica anterior.

Assim, a partir de doses compreendidas entre 0,1 e 0,3 mg/kg, os derivados preparados pelo processo de acordo com a presente invenção facilitam a. neurotransmissão colínórgica cen trai, por um lado, restaurando a captura de colina com alta afi nidade, parâmetro limitativo de síntese de acetilcolina, quando esta última se torna, deficiente experimentalmente, e por outro lado, exacerbando os efeitos colinórgicos centrais de um agonista muscarínico.

Mesmo em doses fracas, estes derivados facilitam a neu rotransmissao noradrenórgica central opondo-se à perda dos reflexos de devolução e das capacidades de vigilância induzida por um agonista ^a

3sta dupla facilitação permite aos derivados preparados pelo processo de acordo com a presente invenção favorecer em doses fracas as capacidades mnósicas e as faculdades de aten ção e motivação.

A presente invenção tem igualmente por objectivo um pro cesso para a preparação de composições farmacêuticas comportando como ingrediente activ^: pelo menos um composto de fórmula geral I ou um dos seus sais de adição com um acido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, só ou em combinação com um ou vários exeipientes ou veículos inertes, não tóxicos.

Sntre as composições farmacêuticas preparadas pelo processo de acordo com a presente invenção, pode-se'citar mais particularmente as que convêm para a administração oral, paren teral, nasal, os comprimidos simples ou drageificados, os comprimidos sub-linguais, os saquinhos, os papelinhos, as gólulas, os trociscos, as pastilhas, os supositórios, os cremes, pomadas, geles dermicos, etc.

10/

A posologia útil varia de acordo com a idade e o peso do paciente, a natureza e a severidade da afecção assim como a via de administração.

Ssta pode ser oral, nasal, rectal,ou parenteral. De uma maneira geral a posologia, unitária está compreendida entre 0,05 θ 300 mg para um tratamento em 1 ou 3 tomas por 2h- horas.

Os exemplos seguintes ilustram o processo de acordo com a presente invenção sem contudo 0 limitarem de modo algum.

As abreviaturas utilizadas nos exemplos são as seguintes :

- AZSP em vez de 2-oxoperhidroazepin-7-carbonilo,

- AZOC em vez de 2-oxoperhidroazocin-$-carbonilo,

- AZON em vez de 2-oxoperhidroazonin-9“Carbonilo,

- AZ3C em vez de 2-oxoperhidroazecin-10-ca.rbonilo, — 3-oxoBzAZEP em vez de 3-oxo-2,3,^,5-tetrahidro-lH-2-benzazepin-l-carbonilo cuja fórmula desenvolvida e a seguinte ;

- 1-oxoBzAZSP em vez de l-oxo-2,3,U,5-tetrahidro-lH-2-benzazepin-3-csrbonilo cuja fórmula desenvolvida é a seguinte;

2-oxoBzAZEF em vez de 2-oxo-2,3,¹f ,5-tetrahidro-lH-3fcenzazepin-^-csrbonilo cuja formula desenvolvida e a seguinte:

I— W

CQ (Ν^τ -Me)His em vez de 1-metil-histidilo cuja fdrmuls desenvolvida é a seguinte:

CO ^>»xxCH₂

-CH

WH

N

H3C ^τ (N®· -Ke)His em vez de 3-metil-histidilo cuja formula desenvolvida é a seguinte:

ΜΗ co

- His em vez de histidilo,

- Leu em vez de leucilo

- Lys em vez de lisilo,

- Arg em vez de arginilo,

- Gly em vez de glicilo,

- Pyra em vez (3-pÍraznl)-alaniio,

- Ampyri em vez de (4-aminopÍridin-2~il)-alanilo,

- ABH em vez de 2-azabiciclo /2.2.1. } heptanc-3-carbrnilo,

- Pro em vez de prolilo,

- BCG em vez de butcxicarbmilo,

- Z em vez de benziloxicarbonilo,

- ABC em vez de 2-azabiciclo / 2,2,2 7 octano-3-carbonilo,

- PHI em vez de perhidroindol-2-carbonilo,

- THXQ em vez de l,2,3,4--tetrahÍdrrisoquinrlefna-3-carb£ nilo,

- ThiaPro em vez de 4- tiaprolilo,

- Lys/z em vez de £-N-benziloxicarbonil-lisilo,

- Arg/NCg em vez de I-nitro-arginilo.

Fixem-

Exemplo 1

AZBP-C S)-(ií^-Me)His-( IS, 3S, *+R)ABH-NH₂ isómero A”

Estádio Ai Ester activado da N-hidroxi-succininlda de (R,S)AZEP-0H

Sm um balão de três tubuladuras de 500 ml equipado cem um termómetro e uma protecção com cloreto de cálcio e contende l5C ml de tetrahidrofurano anidro, introduzem-se 20 mmoles fie AZSP-CH obtido mediante saponificação de acordo com o método descrito por S. PBRRCTI e Cclab. /Ann. Chim.’*, Roma, $6 (11), 13^8, 19667 do éster etílico correspondente, por sua vez obti do de acordo com o método descrito por C. «^T. LU e F, F, BLICKS (C. A.” 12 11086 f).

Arrefece-se o conjunto com água gelada, Adicionam-se então 2C mmoles de N-hidroxi-suecinimida dissolvidas em 100 ml de tetrahidrofurano anidro, sob agitação e depois 20 mmoles de diciclohexilcarbodiimida. Mantém-se a agitação durante 18 horas e deixa-se o composto voltar à temperatura ambiente. Após filtração da diciclohexilureia formada, obtém-se o composto pretendido mediante evaporação do filtrado.

Rendimento: 99%·

Estádio B: (R,S)á2EP-(SX^-MeíSis-C 1S,3S,4R)àBMH

Utilizando o método de ligação peptídica descrito por G. 3, ANDBRS0N e J. B. ZIMMBRMaN (^MJ. A. C. S., &>, 3039, 1963) , faz-se reagir 20 mmcles de dicloridrato de (S)(N -Me)His-( 1S,3S, 4R)a3K-NH₂ descrito no pedido de patente de invenção francesa

1b89.08672 cem 20 mmoles do composto obtido no estádio A.

Após tratamento usual e purificação mediante cromatografia sobre gel de sílica utilizando como eluente uma mistura de diclorometano/metanol/amoníaco nas proporções 90/10/1, obtém- se o composto pretendido

Rendimento: 78 %

Estádio G: AZ2P-( S)(N^T-Me)His-( IS ,3S ,M-R)A3MH₂isómeno A”

Sopara-se a mistura ds isómeros obtida no estádio anterior mediante HPLC preparativa em coluna Licbroprep RP-18 utilizando Como eluente uma mistura de água/acetonitrilo/ácido acético nas proporções 97,5/2,5/0,1. 0s isómeros, designa dos ”A” e B’¹ Ppv ord?em de saída da coluna, obtêm-se sob a for ma de acetatos que se transformam nas suas bases mediante passa gem em resina Amberlite IRA 93, depois evaporação e liofilização.

A pureza isomérica do composto pretendido é verificada mediante HPLC .

Poder rotatório: /		26,8° (c =	TI .-íi 1 / >
Microanálise elementar:
	c %		a %
Calculada :	58,59	7,02	19,52
Encontrada:	53,31	7Λ3	19 ,*+9

SxemExemplo 2 t

aZEF-(S) (x^-Me.)Els-ClS,3S,!+R)AaH-O₂ isómero 3

Cs estádios A, B e C são iguais aos descritoe no exemplo 1. 0 isómero ”B obtém-se no estádio C , após eluição do isómero ”a” do exemplo 1

Ressonância Magnética Huclear do Protão (D^C)

h₃c f

a á = 7?5 ppm (lH,s) b 6 - 7,0 ppm (lH,s) c á - 5,0 ppm (lH,m) d & - PPm (lH,m) e á - 4,2 ppm (2H,m) f 6 = 3)6 ppm (3H,s) £ ó = 3,0 ppm (2H,d) h b = 2,8 ppm (lH,m) á = 2,4 ppm (2H,m) j <S = 1,7 ppm (12H,m)

Exemplo 3

AZCC-(S)-(/-Me)His-(lS,3S,^)ABH-NH₂ isámero A»

Estádio À : Ester activado âa N-hidroxi-succinimida de (R,S)ãZCC-GH

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 1, mas substituindo o áster etílico do AZEP-OH pelo éster etílico do AZCC-GH , obtido de acordo com r> processo descri to por C. J. LU e F. F. BLICKE («C. A,”, ^2, HC86f obtém-se o composto pretendido

Rendimento: 99 %

Estádio 3 : (R,S)àZ0C-(S)-(N^le)His-( IS^S^RUBa-NI^

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio B do exemplo 1, mas substituindo o áster activado de (R,S)AZEP-0H pelo áster activado de (R,S)AZCC-OH obtido no estádio anterior, obtám-se o composto pretendido.

Rendimento: 63 $

Estádio C: AZCC-(S)-CN^T-Me)His-(1S,3S,UR)ABH-NH₂isámero A”

C método utilizado para a separação e a purificação d^s isómeros é o descrito xio estádio C do exemplo 1, entendendo-se que os isómeros ”Aⁿ ->e. B” são assim nomeados por ordem de saída da coluna.

Kicroanálise elementars

	C % H %	N %
Calculada ;	59,4*+ 7,26	18,91
Encontrada;	59,38 7,39	18,72
	Exemplo 4

ãZOC-(S) (N^T-Ke)His-(lS,3S,^)ABH-NH₂ isómero B”

Cs estádios à, B e C são iguais aos descritos no exem pio 3. C método de purificação do isómero ”3”, obtido após eluição do isómero ”á, é o descrito para o isómero ”A” do exemplo 3.

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (CDC1-):

Έ-------

H3C e

H2NC0 a <*> = 7,27 ppm (lK,s) b é = 6,65 ppm (lK,s) ç 6 = '4,90 ppm (lH,m) d ò entre 4,6 e 4,0 ppm (3H,m) s <£ = 3,63 PPm (3H,s) f <6 entre 3,22 e 2,85 ppm(3^n) .g A entre 2,45 e 2,20 ppm (2H,m) h ê> entre 2,0 e 1,2 ppm (l4H,m).

Exem13

Exemplo 5 (S)A2EP-(S)His-(S)pro-RíL·

Estádio A; (B,S) AZSP-(S)His-(8)Pro-NK₂

Procedendo de acordo com o propcesso descrito no está dio B do exemplo 1, mas substituindo o dicloridrato de (S)-(M^4;e)His-(lS,3S ,Ml)ABH-NH₂ pelo dicloridrato de (S)His-(S)Pro-NH₂, obtem-se o composto pretendido.

Rendimento: 63 %

Estádio B: (&)AZEP-(S)His(S)Pro-NH_oc.

método utilizado para s preparação e a purificação dos isdmeros é o descrito no esta'dio C do exemplo 1. 0 dissolvente de eluição utilizado é uma mistura de água/ácido acéti co nas proporções de 99,6/0,2.

composto do exemplo 5 θ o primeiro a sair da coluna.

Poder rotatorio: = - 36,¼° (° = 1 Λ etanol)

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (GPGl^) h

	£ /
1 - CO — WH -	- CH — CO —W	í-
H	\| \	j
	d>
	ch₂ g -/
	/ H2MCO
M
/	b
H
a<5- 7,5 ppm (lH,s)	e è - %05 ppm (lH,m)
b ó = 6,9 ppm (lH,s)	f b entre 3,6 e 3,2 ppm (2H,m)
ç ô - *+,6 ppm (lEE,m)	& b entre 3,1 e í	,4 ppm (2H,m)
d = M-,25 ppm (ΙΗ,πι)	h b entre 2 ,*+ e 1,2 ppm (2H,m)

Exemple 5>a (S)AZEP-(S)His-(S)PRC-NH₂

Estádio A: (S)AZEP-OH

Obtém-se e composto pretendido após derivatização do (R,S)aZEP-0H pela (S)(-)-o(-metil-benzilamina e recristaliz> ções do derivado em uma mistura de acetato de etilo/metanol (90/10) seguida de hidrólise.

poder rotatório do ácido 2-aminopimálico obtido após 5 horas de refluxo em meio clorídrico concentrado do composto

2C • de derivatização é comparado ao do ácido 2-aminopimélico de configurarão conhecida descrito por R. »UDE e Colab. (J. A» C. S., 22, 648-6^2, 1957).

Poder rotatório do ácido 2-( S)-amÍnopimólico:

zV7_D ^2C = + 21,5° (c = 1 HC1 5N).

Permite deduzir que o isómero obtido do AZEP-CH á de configuração S .

Poder rotatório: /eC/p²*·’ - + 9,2*+° (c = 1 fé, etanol) Estádio B: (S)aZEP-&)Hís-<S)Pro-NH₂

Cbtém-se o composto pretendido de acordo com o proces so descrito no estádio A do exemplo 5 mas substituindo « ' , (R,S)AZEP-CH pelo (S)AZEP-CH obtido no estádio anterior.

As características fisicoquímicas são as do composto do exemplo 5?.

Exemplo 6 (R)AZEP-(S)His-CS)Pro-NH₂

Cs estádios A e B são iguais aos descritos no exem pio 5. Cbtém-se o composto do exemplo 6 após eluição do com posto do exemplo 5.

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (CDC1J:

h

H

H2WC0

a h = ppm (lH,s) b è> - 6,9 ppm <lH,s) c ò = *+,6 ppm ( lH,m) d b = M-,2^ ppm (lH,m) e c$ = M-,c5 ppm ClE,m) f & entre 3»6 9 3,2 ppm (2H,m) £ é entre 3,1 e 2,*+ ppm (2H,m) h b entre 2,Μ· e 1,2 ppm (l2H,m)

Exemplo 7

ÁZEP-C S)Eis-( 1S,3S,Wà3H-NH₂ ’’isémero,A”

Estádio A: (R. ,3)âZEP-C 5)His-( IS ,3S ,^R)à3H-NH₂

Procedendo de acordo com o processo deécrito no estádio B do exemplo 1, mas substituindo o dicloridrato de (S)(N®-Me)His-(1S,3S,MR)ABH-NH₂ pelo dicloridrato descrito no pedido de patente de invenção francesa 89.08672, obtém-se o composto pretendido.

C dissolvente de eluição utilizada para a separação dos isómeros é uma mistura de água/ácido acético nas proporções de 99,8/C,2.

Rendimento: 64 %

Ressonância Magnética Nuclear do Pr-tão (CDCl^):

H a é = 7,55 ppm (lH,s) b é - 6,85 ppm (lH,s) c <5 = *t,8 ppm (lH,m) d ò = 4,55 ppm (lH,m) e b entre 4,1 e 3,9 ppm (2K,m)

f. <5 entre 3,1 e 2,6 ppm (3H,m) jg J entre 2,4 e 2,1 ppm (2H,m) h b entre 1,9 e 1,2 ppm (12H,m)

Exemplo 8 àZEP-(S)Hís-(1S,3S,4r)aBH-NH₂ isómero B”

Os estádios A e B são iguais aos descritos no exem23 ple 7.

Obtém-se e isófoero ”B” após eluição d^

exemplo 7·

Microanálise elementar:

	u Λ	Η λ	[·; X
Calculada :	57,68	6,78	20,18
Encontrada:	57,99	6,57	20,^0

Bxemplo 9

AZCC-(S)His-(S)Pro-KH₂ isõmero À

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio *¥·

B do exemplo 3, mas substituindo o dicloridrato de (S)(N-Me)His-ClS^SjWàBMHg, pelo dicloridrato de <S)His-(S)Pro-NHg, obtém-se o composto pretendido* dissolvente de eluição utilizado para a sêparação dos isómeros é uma mistura de água/ácido acético nas proporções de 99,8/0,2.

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSC dg) :

h

H a á = 7,55 ppm (lH,s) b b = §,9· ppm ( Hjt,s) ç b = 4,6 ppm (lK,m) d 6 entre 4,4 g 4,1 ppm (2H,m) e £ entre 3,5 e 3,2 ppm (2H,m) f 6 = 2,9 ppm( 2H,m) é> = 2,05 ppm (2H,m) h b entre 1,9 e 1,1 ppm Cl2H,ra)

Exemple 10

AZ0C-(S)His-(S)Pre-NH₂ isómero B”

Obtém-se e isómero B após eluição do isómpro A” do exemple 9·

Ressonância Magnética Muclear do Protão (DMSC d^) h

H a b - 7,55 PP® (lH,s) b b ~ 6,9 ppm (lH,s) c b =4,6 ppm (lH,m) d b entre 4,4 e 4,1 ppm (2H,m) e b entre 3,5 e 3,2 ppm (3í,m) £ b = 2,9 ppm (2H,m) & b = 2,05 ppm (2H,m) h b entre 1,9 e 1,1 ppm (12H.m)

Exemèl

Zxemplo 11

AZ0C-(S)Hls-(lS,3S,4R)ABH-NH₂ isómero A rrocedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 35 mes substituindo no estsdio B o dicloridreto de f

(S)(H -Me)His-(lS,3$,MOABK-NH2 pelo dlcloridrato de (S)His— (IS,3S,ΜΌΑΒΗ-ΚΕ^ , obtém-se o composto pretendido, 0 dissol vente de eluição utilizado para a separação dos isémeros é ume misture de água/ácido acético nas proporções de 99,3/0,2,

Ressonância Eagnétics Nuclear do protão (DMSO d^)í

H

a 6 = 7,5 PPffi (11,s)	f <5 - 1,05 ppm (lE,m)
b ó = 6,9	ppm (lH,s)	& b	entre	3,1 e 2,8 ppm (2H,m)
C Ó = δ	ppm (lh,m)	h S	= 2,7	ppm (lH,m)
d b = 1,5	ppm (lH,m)	i 6	entre	2,15 e 2,1 ppm (2L,m)
e b = 1,3	ppm (lh,m)	1 á	entre	1,9 e 1,1 ppm (llH,m).

0x em26

Exemplo 12

ÂZCC-(S)His-(lS,3S,4H)ÂfíH-NH₂ isémero B»

Obtém-se o isómero ”B” após eluição do isómero A” do exemplo 11.

Ressonância Magnética Nuclear do Protão

6)

H i

a <? = 7,*+? ppm (IH.s) b 8 = 6,8 o 8 = M d b = *+,/ θ 8 - *+,3 ppm (lH,s) ppm (1H,m) ppm (lH,m) ppm (lH,m) f 4 = 4,00 ppm ClH,m) entre 3,1 e 2,7 ppm (2H,m) h8 = 2,65 ppm (lH,m) i entre 2,M5 e 2,1 ppm <2H,m) 4 £ entre 1,8 e 1,1 ppm (ΙΜΉ,ϊϊι)

Exemplo 13

AZEP-( S)(iN^f-Me)His-(S)Fro-NH₂ isómero Â

Procedendo de acordo com o processo descrito no exem pio 1, mas substituindo no estádio B o dicloridrato de êZ

(S)(N^í-xMe)His-(lS,3S,4R)ÁBH-NH₂ Pél««dicloridrato de (S)Ae)IIis-(S) ,Pro-NH_2> obtém-se o composto pretendido. (Dissolvente de eluição água/ácido acético 99,8/0,2)

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSC dg)

a 6 = 7,5 ppm (líl,s) b ó = 6,9 ppm (IB,s) c è entre 4,7 e 4,5 ppm ClH,m) d b entre 4,25 e 4,1 ppm (lK,m) e 3 entre 4,1 e 3,9 ppm ClH,m) £ b = 3,6 ppm (3H,s) g b entre 3,5 e 3,2 ppm (2E,m) h b entre 3,0 e 2,7 ppm (2H,m) I <$ entre 2,45 e 2,1 ppm (2H,m) j £ entre 2,1 e 1,3 ppm (lOH,ra)

Exem2β

Exemple 14

AZEP-(S)(/-Me)His-(S)Pra-NH₂ IsXmer^ B

Cbtém-se e isXmem ”Bdepris da eluiçãe do t

isémerr ”A” dr exempln 13.

Ressr-nância Magnética Nuclear do Pr^tã^ (DMSO d^)

/

H3C f

a 6 = 7 >5 ppm (lH,s) b 8 = 6,9 ppm ClH,s) c 6 entre 4,8 e 4,5 ppm ClH,m) d b entre 4,30 e 4,15 ppm (lH,m) jé b entre 4,0 e 3 »9 ppm (lH,m) f b = 3,6 ppm (3H,m) b entre 3,4 e 3,2 ppm (2H,m) h 6 entre 3,0 e 2,6 ppm (2H,m) i b entre 2,40 e 2,2 ppm (2H,m) J, b entre 2,1 e 1,3 ppm (10H,m).

Exemple 15

AZEP-(S)(i/-Me)His-(S)Pro-NH₂ (isámero A»

Procedendo de acordo c^m o pr^cess* descrita n<- exem pio 1, mas substituindo no estádio B o dicloridrato de

-Me)His-(lS,3S,4R)ABH-ííH₂, pelo dicloridrato de (S)(N^-Me)His-CS)Prft-NHg, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 8*+ %

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (PMSC d&) i

a <5 - 7,5 ppm (lH,s)

Jj è> = 6,5 ppm (lH,s) £ è - 4,85ppm (lR,m) d 6 = 4,25 ppm (lH,m) e ó = 3,95 ppm (lH,m)

f. á = 3,6 ppm. (5H,m) £ ó entre 3,0 e 2,6 ppm (2H,m) h <5 = 2,3 Ppm (2H,m) i á entre 1,9 θ 1,2 ppm (10H,m).

1Q

Exemplo 16

AW-(S) (N^-KejHis-CSjPro-MHg isómero B

Obtám-se o isómero ”B” após eluição do isómero A do exemplo 15.

Bessonância Nagnática Nuclear do Protão (DNSO dg):

i

= 7,5 ppm (lE,s)	f á	~ 3,6 ppm (5H,m)
= 6,5 ppm (ΙΗ,ε)	â &	entre 3,0 e 2,6 ppm (2H,m)
= !+,S5 ppm (lfí,ffi)	h á	= 2,3 ppm (2B,m)
= h-,25 ppm (lH,m)	i &	entre 1,9 e 1,2 ppm (10H,m)
- 3,95 Ppm (lE,m)

Exemplo 1?

AZ3P-(S)Leu-(l£,3S,l+R)ABH-NH_? isómero A

Procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 1, mas substituindo no estádio b o dicloridrato de (S) Of* -Me)His-(lS,3S,4R)ABH-5H₂ pelo dicloridrato de (S)leu-(1S,3S,4R)ABH-KH₂, descrito no pedido de patente de invenção francesa 89.08672, obtém-se o composto pretendido.

dissolvente de eluição utilizado para a separação dos isómeros é uma mistura de diclorometano/metanol/amoníaco nas proporções de 90/10/0,5·

Rendimento: 87 /

Kicroanélise elementar:

C ;·· ' H /
Calculada ; ól,20	8,22	14,27
Encontrada: 61,66	7,99	14,14.

Exemplo 18

A23F-(S)Leu-(l£,3&,4R)A;:H-Nfí₂ isómero B

Obtém-se o isómero B apés eluição do isómero A exemplo 17.

Kicroanélise elementar:

do

	c /	H £	N %
Calculada :	61,20	3,2c:	14,27
Encontrada;	61,39	8,01	14,30

Exemplo 19

A2SF-(S)Leu-(S)Pro-NH₂ isómero A

Procedendo de acordo com o processo descrito no exem, pio 1 mas substituindo o dicloridrato de (S) (N -be)His-(S,3S,4R)ABH-í!H~ pelo dicloridrato de (S)Leu-(S)Pro-NH~, ofctém-se o composto pretendido.

dissolvente de eluição utilizado para a separação dos isómeros é uma mistura de diclorometano/metanol/smoníaco nas proporções de 90/10/0,$.

Rendimento; 9I /

Microanálise elementar:

(' 4	H yt* 8,25	κ X 15,29
Calculada :	59,00
Encontrada:	59,1¹*	3,50	15,11

Exemplo 20

AZSP-(S)Leu-(S)Pro-NH2 isémero B”

Obtsm-se o isómsro b” após eluição do isémero A do exemplo 19.

Kicroanálise elementar:

Calculada :	C % 59,00	H % Ô,25	15,29
Encontrada:	59,33	3,35	14,79
	Ex emplo	21

AZÊP-(S-Lys-(S)?ro-NH₂ isómero A Estádio A : AZSP-(S)Lys/_z-(£)Pro-NH2 isómero A”

Procedendo de acordo com o processo descrito no estádio B do exemplo 1, mas substituindo o dicloridrato de (S)(N^t-Me)His-(lS,3S,4R)ABH-NH₉ pelo trifluoroacetato de (S)Lys/ (S)Pro-NH2, obtêm-se o composto pretendido.

dissolvente de eluição utilizado para a separação dos isómeros é uma mistura de diclorometano/metanol/amoniaco nas proporções de 90/10/0,5.

Rendimento; 77%

Estádio B AZEP-(S)Pro-NH2 isómero A

A desprotecção do composto obtido no estádio A reali za-se mediante hidrogenólise em etanol na presença de carvão paladiado. Após filtração do catalisador e evaporação do etanol, obtêm-se o composto pretendido mediante dissolução em água seguida de liofilização.

Microanálise elementar;

	C %	H %	N l
Calculada :	56,67	8,19	18,36
Encontrada:	56,26	7,89	17,95

Exemplo 22

AZEP-(S)Lys-(S)Pro-NH₂ isómero B

Obtêm-se o isómero B após eluição do isómero A do exemplo 21.

Microanálise elementar;

C X	H /	N /
Calculada ; 56,67	8,19	18,36
Encontrada;; 56,12	8,27	17,90
Sxemplo	23

AZEf-(S)Lys-(lS,3S,4R)ABH-NH~	isómero ,	A

Estádio A : B0C(S)Lys/_z-(lS,3S,4R)ABH-NE₂ isómero A

Otilirando a técnica de ligação peptidica descrita por V. MIG e R. G2IGSR (Ber., 103, 738, 1970) e a dimetilformamida como dissolvente, obtém-se a partir de BOC(S)Lys/_z e de (1S,3S,4r)ABH-NH₂, ⁰ composto pretendido apds purificação sobre gel de sílica (dissolvente de eluição; diclorometano/me tanol a 97/3)·

Rendimento: 64 /

Ostácio B ; (S)Lys/ -(1S,3S,4R)ABH-NH₂, cloridrato.

Desprotege-se 0 composto obtido no estádio A , em acetato de etilo clorídrico 4K durante 1 hora a 0°C e depois durante 18 horas à temperatura ambiente.

Obtém-se o composto pretendido mediante filtração do precipitado, lavagem com éter e secagem.

Rendimento; 90 X • · ·

Estádio C: AZEP-(S)Lys/_z«(lS,3S,4R)ABH-RH₂ isémero A» procedendo de acordo com o processo descrito no está dio A do exemplo 21, mas substituindo o trifluoroacetato de (S)Lys/_z-(S)Fro~NH₂ pelo cloridrato de (S)Lys/_z-(lS,3S,4R)AbH-NE₂ obtido no estádio anterior, obtém-se o composto pretendido.

Estádio B : AZBP-(S)Lys-(lS,3S,4R)ABH-NH₂ iséaero A” método de /desprotecção utilirado é o descrito no estádio B do exemplo 21.

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSO d^):

H2MC0

H2N-CH2 a & entre 4,5 e 4,4 ppm (2H,m) b & entre 4,2 e 4,1 ppm (2H,m) c <5 entre 3>θ e 2,5 ppm,(2H,m) d ò =2,6 ppm (lH,m) e ζ entre 2,4 e 2,2 ppm (2Qm) f £ entre 2,0 e 1,2 ppm (l8H,m)

Exemplo 24

AZEP-(S)Lys-(lS,3S,4R)ABH-NH₂ isémero B

4:

Obtém-se o isómero B apés desprotecção do isómero 3 eluído a partir do isómero A” no estádio ' C do exemplo 23.

Ressonância Eagnética Nuclear do Protão (DKSO d^):

f

H2M-CH2 e

a	é>	entre 4,6 e	ppm (2H,m)	d ò - 2,6 ppm (lH,m)
b	&	entre ^,2 e	4,1 ppm (2H,m)	e entre 2,4 e 2,2 ppm (2I^m)
c	S	entre 3,0 θ	2,5 Ppm (2H,m)	f & entre 2,0 e 1,2 ppm(18H,m)

Exemplo 2*5

A23P-(S)Arg-(lS,3S,^)ABH-NH₂ isómero A

Procedendo de acordo com 0 processo descrito no exemplo 23, mas substituindo no esta'dio A o BOC(S)Lys/_z pelo B0C(S)Arg/N0₂ e efectuando a desprotecção do grupo arginilo antes da separação dos isómeros A. e b, obtém-se o composto pretendido. 0 dissolvente utilizado para a separação dós isómeros é uma mistura de écido acéti^íí/agua. a 2/1000.

• · ·

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSO d₆)i

WH f

a 8 entre 4,6 e 4,4 ppm (2H,m) b b entre 4,15 e 4,00 ppm (2H,m) c £ = 2:,65 ppm (lH,m) d S - 3>0* PP® (2H,m) e £ entre 2,5 e 2,1 ppm (2H,m) f <5 entre 2,0 e 1,3 ppm (l6lí,m)

Exemplo 26

AZ3P-(S)Arg•(1S,3S,4r)ABH-NIL· isémero B

Obtém-se o isomero B” apos eluição do isémero A” do exemplo 25.

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSO dg):

f

a & entre 4,6 e 4,4 ppm (2R,m) b 6 entre 4,15 ® 4,00 ppm (2H,m) ç 6 = 2,65 ppm (lH,m) d ô = 3,05 ppm (2H,m) e & entre 2,5 e 2,1 ppm (2H,m) f é> entre 2,0 e 1,3 ppm (l6H,m)

Exemplo 27

AZ2P-uly-(l£,3£,4R)A3E-MH₂ isémero A” procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 23 (estádios A, b, C), mas substituindo no estádio A o B0C(S)Lys/ pelo bOC-Oly, obtém-se o composto pretendido. 0 dissolvente utilizado para a separação dos isomeros é uma mistura de água/acetonitrilo/dietilamina a 97/3/0,05.

Bessonência Magnética Nuclear do Protão (USO d&) f

H2NCO £ 6 - 4,35 ppm (lH,m) d 6 entre 2,8 e 2,6 ppm b á entre 4,2 e 4,1 ppm (2H,m) (lH,m) c ó entre 4,2 e 3,9 ppm (2E,Syst.Ab) e é entre 2,5 e 2,2 ppm (2H,m) f b entre 2,0 e 1,0 ppm (12K,m).

Exemplo 28

AZEP-Gly-(lÊ,3S,4R)ABH-KH₂ isómero B”

Obtém-se 0 isómero p após eluição do isómero ”A” do exemplo 27.

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSO dz):

............................................................................................................................................................... o f

H₂WC0 a b - 4,35 PPm b b entre 4-,2 e 4,1 ppm c b entre 4,2 e 3?9 ppm d. b entre 2,3 9 2,6 ppm e b entre 2,5 e 2,2 ppm f b entre 2,0 e 1,0 ppm (2H,m) (2H, Syst.AB) (lH,m) (2H,m) (12H,m).

Exemplo 29

3-oxoBzA2EP-(S)

-Me)His-(lS,3S,4-B)ABH-NHzj isómero A”

Procedendo de acordo com 0 processo descrito no exemplo 1, mas substituindo no estádio A o éster etílico de (R,S)AZ3P-0E pelo éster metílico de (B,b)~3-oxoBzA£SP-0h obtido de acordo com 0 processo descrito no estádio A a partir de me toxi-l-carbonil--tetralona descrito por M. Plieninger e Colab. (”Chem. Ber.” 10Ò, 3286, 1975)> obtém-se o composto pretendido.

4l

ch₃ &

£ é> = 7,4 ppm (lB,s) d 8 - 7,2 ppm (4H,m) c 6 = 6,85 ppm (lH,s) ó 8 = 5,05 PP® (lH,d) e 8 = 4,8 ppm (lH,m) f 8 entre 4,55 e 3,95 Ppm (2H,m) £ 8 = 3,55 ppm (3H,s) h 8 entre 3,0 e 2,5 ppm (7K,m) i 8 entre 1,6 e 1,4 ppm (6H,m).

Exemplo 30

3-oxoBzAZ'SF-(S)-(N^t -he)His-(lS,3S,4R)ABH-NH₂ isdmero B «

Obtém-se 0 isdaiero ”B” spds eluição do isdmero A do (7 exemplo 29.

Ressonância Kegnétics Nuclear do Protão (CDC1J:

-fCH₃

Ύ a & entre 7,4e7»2 ppm (5H,m) b & - 6,5 ppm(lE,s) c J = 5,0 ppm (lK,d) d ê entre 4,3ΰ e 4,55 PPffi (2H,m) e ó = 3,95 PP® (lH,d)

X & ~ 3Λ⁵Ρ?ιε (3H»s) £ h entre 3,1 e 2,4 ppm (7H,m) h entre l,ó e 1,4 ppm

Exemplo 31

A2EP-Pyra-(lS,3£,4R)AbK-NH₂, «isrfmero A Estádio A: N* N ^^Γ-βίΒ00(Η,Β)?γΓθ-0Η «t

Adicionam-se 43 mmoles de (R,S)Pyra-0H descrita por R. J. Jones (J. Á. C. S., £1, 3994-4000, 1949) a 100 ml de dioxano e 36 ml de hidróxido de sódio IN. Após arrefecimento até uma temperatura compreendida entre 0 e 5°^c> adicionam-se 13,8 g de dibutilterc.-dicarbonato em 50 ml de dioxano em 30 minutos. Mantém-se a agitação durante 20 horas à temperatura ambiente. Neutraliza-se o conjunto mediante adição de 86 ml de ácido clorídrico IN e leva-se até ã secura. Retoma-se o resíduo com etanol. Após filtração do cloreto de sódio e evaporação do etanol, retorna-se finalmente o resíduo com 150 ml de óxido de isopropilo. Após filtra-Çao e evaporação, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 98 /

Estádio B : N* N^nr DiBOC Pyra-(1S,3S,4R)ABH-NH₂, ^(,isómeroo< ”

Procedendo de acordo com a técnica de ligação peptídi ca descrita por W. KOI 16 e R. OEIGER (”Chem. Ber.·”, 103, 2034, 1970), faz-se reagir o composto obtido no estádio anterior com a (IS,3S,4R)ABR-NB₂ .

Os isómeros oá e {5 são separados mediante cromatografia sobre gel de sílica.

Estádio C : Pyra-(1S,3S,4R)ABR-RH,., dicloridrato, isómeroO^

Dissolve-se o composto obtido no estádio B em dioxa no, no qual se faz passar uma corrente de ácido clorídrico . durante 30 minutos . Mantém-se 0 conjunto sob agitação duran te 20 horas. Obtém-se 0 composto pretendido mediante filtra4 ção e lava-se depois com dioxano e seca-se.

Rendimento: - 100 %

Estádio D ; (R,S)AZEP-Pyra-(1S ,3S ,4R)AbH-NH₂ “isómero o<”

Procedendo de acordo com 0 processo descrito no estádio b do exemplo 1, mas substituindo 0 dicloridrato de (S)(N^í-Me)His-(lS,3S,4R)AbH-KH₂ pelo composto obtido no estádio anterior, obtém-se o composto pretendido.

Rendimento: 68 /

Estádio S : AZEP-Pyra-(1S,3S,4R)ABH-NH₂, isómero A”

Separs-se a mistura de isómeros obtida no estádio D mediante cromatografia líquida preparativa sobre sílica Cj,g utilizando como eluente uma mistura de água/acetonitrilo/ácido acético a 95/5/0,1. Os isómeros denominados “A e B” por ordem de saída da coluna são obtidos sob a forma de acetatos que se transformam em bases mediante passagem sobre resina Amberlite IRA93, ® depois evaporados e liofilizados.

!ώ

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSO D^):

h

s b - 7t5 ppm (lH,d) b é ~ 6,1 ppm (lH,d) c £ = 4,8 ppm (lH,m) d b = 4,6 ppm (lH,m) e é> entre 4,1 e 3,9 ppm (2H,m) £ b entre 3,2 e 2,7 ppm (2H,m) & b *.-2,6$ ppm (lB,m) h S entre 2,¼ e 1,3 PP® (l4H,m).

Exemplo 32

AZBP-Pyra-(1S,3S,4R)ABH-NH₂, isómero B

Os estádios A, B, C, D e E são iguais aos descritos no exemplo 31. Obtém-se o isémero B no estádio S, apés eluição do isómero A do exemplo 31.

Microanálise elementar:

C l	Η l	N 1
Calculada: 57,68	6,78	20,18
Encontrada: 57,54	6,61	19,91
Exemplo 33
AZEP-Pyra-(1S,3S,4R)ABH-NH₂,	isómero C
Os estádios A, B, C, D e E	são iguais	aos descritos

no exemplo 31, mas no estádio C utiliza-se o isómero J* do N**N^Pyr DiBOC-Pyra-(lS,3S,4R)ABH-NH₂ em vez do isómero 'X.

Microanálise elementar:
	C l	Η l	N Z
Calculada:	57,68	6,78	20,18
Encontrada:	58,05	6,68	19,93

Exemplo 34

AZEP-Pyra-(1S,3S,4R)ABH-NH₂, isómero D

Os estádios A, B, C, D e E são iguais aos descritos no exemplo 33. 0 isómero D obtém-se no estádio E, após eluição do isómero C do exemplo 33.

Microanálise elementar!

	C 7 HZ	N Z
Calculada:	57,68 6,78	20,18
Encontrada	: 58,00 6,58	20,23
	Exemplos 35 a 38

AZEP-AmPyri-(IS,3S,4R)ABH-NH₂, isómeros

A, B, C e D itZ

Sxemplo 39

1-0χοΒζΑ23Ρ-(£)(Λ^τΐ-Μβ)Είδ-(13,3εΛΒ)ΑΒΗ-ΝΗ₂, isómero A

Procedendo de acordo com o processo descrito no éxemplo 1, mas substituindo no estádio A o éster etílico de (Ρ,δ)ΑΖΕΡ-ΟΗ pelo éster etílico de (R,S) 1-oxoèzAZSR-OH obtido a partir da 2-c&rbetoxi-06-tetralona descrita por I. UGI e Colab. j”Ann”, 6^1, 63-70, 1961), obtém-se o composto pretendido após separação dos isómeros mediante cromatografia lí quida (coluna de sílica C-^θ, dissolvente de eluição agua/acetonitrilo/dietilamina a 90/10/0,5)·

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSO D^):

g. ^H3C a 8 entre 7,5 e 7,2 ppm (5H,m) b 6 =6,3 ppm (lH,s) c è> entre 4,75 e 4,6 ppm (lH,m) â 8 = 4,5 ppm (lH,m)

= 3,9	ppm	(ΙΚ,ά)
entre	3,8	e 3,6	ppm	(lH,m)
= 3,55 ppn* (34, £	ϋ
entre	3,0	e 2,4	ppm	(5H,m)
entre	2,3	e 1,3	ppm	(2H ,n.)
entre	1,7	e 1,3	ppm	(6H,m)
			Exemplo 40

l-oxoBzAZSP-CSXN* -Ee)His-<l£,3£,4R)ABfí-NE₂, isómero B

Obtém-se o isómero b após eluição do isómero A do exemplo 39·

Ressonância. Ka₆nética Nuclear do rrotão (DkSO Dg):

a <5 sntre 7,5 θ 7,2 ppm (5H,m) b 6 = 6,3 ppm (lH,s) c entre 4,75 θ 4,6 ppm (lH,m) d J = 4,5 ppm (lH,m)

e ó * 3,9 PPm (lH,d) f ó entre 3,3 e 3,6 ppm (lH,m) è. 6 =3,55 ppm (3K,s) h entre 3,0 e 2,4 ppm (5H,m) í ó entre 2,3 e 1,8 ppm (2R,m) <$ entre 1,7 e 1,3 ppm (óH,m).

Exemplos 4l e 42:

2-οχοΒ2ΑΖΒΡ-(ε)(/-Ρθ)Εΐε-(1δ,38,4Β.)ΑΒΗ~ΝΗ₂ isómeros n e t'

Sxemplos 43 e 44:

AZOS-(S) (K -ne)His- (IS,3S,4R)ABH-SÍL isómeros A eh

Exemplos 45 e 46:

AZ3C- (S) (í/-ke )Eis- (1£, 32,4b ) ABH-SB₂isómeros A. e 2

Exemplo 4/:

AW-(S)(S -Ke)Ris-(S) ABO-NBR-, isómero A

Obtem-se o composto pretendido procedendo de acordo com o processo descrito no exemplo 1, mos substituindo o (1S,3S,4b)abb-kh₂ p®i° (£)abo-kh₂.

Os isómeros A e B são separados mediante cromatografia líquida (coluna de sílica dissolvente de eluição

água/metanol/dietilamina a 30/20/0,1).

Ressonância kagnética Nuclear do Protão (DNSO ):

a á = 7,5 ppm (lE,s) b 6 = 6,9 ppm (ΙΠ,ε) <$ - 1,85 ppm (lE,m) d è =1,05 ppm (2H,m) & - 3,8 ppm (lE,m) £ -^ = 3,6 ppm (3H,s) g <£ entre 3,0 θ 2,6 ppm (2H,m) h £ entre 2,1 e 2,1 ppm (3H,m) i entre 2,0 e 1,3 ppm (lH,m)

Exemplo 13 r r/ -o + .

Az! -li

Me)fíis-(S)AE0-NH₂, isómero L·

Obtém-se o.isómero ?B” após eluição do isómero A do &

exemplo 47.

Ressonância Magnética Nuclear do Protão (DMSO D&):

i

<5 = 7,5 ppm (1H,S) t> k - 6,9 ppm (1K,e) ó b “ 4,05 PPm (lfí,m) d b =4,05 ppm (2H,m)

e	b	= 3,3	ppm	(lH,m)
f	b	= 3,6	ppm	(3H,s)
£	b	entre	3,0	<· f e c:,o	ppm	(2H,m)
h	b	entre	2,4	e 2,1	PPm	(3H,m)
i	b	ent re	2 ,0	e 1,3	ppm	(lH,m).
					Exemplo 49

AZEP- (S) (/-Me)His- (2S ,3aS ,?aS)?HI-NH₂, isómero A

Obtém-se o composto pretendido de acordo com o proces so descrito no exemplo 1, mas substituindo a (lS,3S,4R)AbH-KH₂

pela (2S,3aS,7aS)?HI-NH₂.

Separam-se os isómeros A” e B mediante cromatogrtf fia líquida (coluna de sílica Cjg, dissolvente de eluição égua/acetonitrilo/acido ncético ε 97,5A ,5/0,1).

kicroanólise elementar:

	C /	H $	N 7
Calculada :	00,24	7Λ7	13,33
Encontrada:	60,66	7,33	18,06

Sxemplo 5θ

AZEP-UHN^MeJHis -(2S,3aS,7aS)PHI-KH₂, isómero B

Obtém-se o isómero B após eluição do isómero A do exemplo 49.

Kicroanálise elementar:

	C %	H /	R /
Calculada :	60,24	7Λ7	18,33
Encontrada:	60,3½	7,17	17,91

Sxemplo 51;

A.ZSP- (B) (K^t-í'ie)His-THIQ-NH₂

Sxemplo $2i

AZ SP-(S) (íA -P e)Hi s-Thia Pro-KK₂ ή»

ESTUDO FARRACOLOGICO DOS DERIVADOS PREPARADOS PELO PROCESSO DS ACORDO COE A RRSSEN TE INVENÇÃO Exemplo 53

Défice colinérgico por narcose barbitúrica no murganho

No murganho, a narcose do pentobarbital (60 mgAg IR leva no hipocampo a. um défice muito marcado (-70 ,) e reprodutível da captura de colina sodio-dependente (KACU). A diminui ção deste factor limitativo da síntese de acetilcolina testemu nha a inibição da neurotransmissão colinérgica, sistema estrei tamente implicado nas funções mnésicas.

Quando administrada simultaneamente com o pentobarbital, a TRH opoe-se à diminuição de HACU (10 mgAg IR: -35 X), o que jé não acontece se ela for administrada 30 minutos antes do pentobarbital (10 mgAg IR: -1,9 X; 30 mgAg IR: +4,8 %). Relo contrario, os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção opõem-se muito significativamente à baixa de HACU mesmo se administrados por via intraperitoneal 30 minutos antes do aparecimento da narcose.

Composto do exemplo 1 : (3; mgAg) : -6l,l X (1 mgAg) : -25,5 X

Composto do exemplo 5 : (0,3 mgAg) : -31,1 X

Composto do exemplo 10 : (1 mgAg) : -5°,8 X

Sxem· ;4

Exemplo

Tremores da oxotremurina no Murganho

Administrada na dose de 0,5 mgAg por via Xntraperitoneal, a oxotremurina, agonista muscarínico não selec tivo leva ao aparecimento de sintomas colinárgicos de origem central, tais como os tremores. Nos animais testemunhas, observa-se o máximo do efeito tremorígeno depois de 15 minutos e este efeito desaparece totalmente entre 45 e 60 minutos .

A administração de TRH (10 mgAg IP, 30 minutos antes da da oxotremurina, potência os tremores (+50 /) no seu auge de intensidade (15 minutos) mas apenas os prolonga muito pouco (15 minutos +20 /). A dose mínima activa e de 5 mgAg.

Nas mesmas condições, os compostos preparados pelo pro cesso de acordo com 0 presente invenção, exercem igualmente o mesmo efeito potenciador mas em doses mínimas activas muito mais fracas e este efeito persiste ainda durante 60 minutos depois da injecção de oxotremurina. Assim, as doses mínimas activas são por exemplo as seguintes:

Composto do exemplo 1: 0,3 mg Ag

Composto do exemplo 5: 0,1 mgAg

Quando 0 tempo de espera entre as administrações do composto estudado e da oxotremurina á aumentado, a TRH deixa de potenciar os tremores medidos no auge, se ela for administrada 60 minutos antes do agonista muscarínico, enquanto os derivados preparados pelo processo de acordo com a presente in cr

ZZ

venção continuam sctivos mesmo se forem administrados 150 minutos antes.

Sxemplo 55

Inibição do reflexo de reconhecimento da xilazina no rato

A administração de um o( % agonista central, a xilazina,· no rato leva a ama perda do reflexo de reconhecimento dos animais. Este efeito ê antagonizado pela ioimbina (p<₂ antagonista) e pelos agentes que facilitam a libertação da noradrena lina.

A TRH antagoniza o efeito da xilazina e a dose eficaz 50 é cerca de 10 mg/kg IP. Nas mesmas condições, as D3^₀ dos compostos de acordo com a presente invenção dos exemplos 1 e 5 são respectivamente iguais a 0,1 e 0,3 mg/kg.

Os derivados de acordo com a presente invenção facilitam, por conseguinte, a neurotransmissão noradrenérgica quando esta é inibida previamente.

SÉ

Composição farmacêutica

Exemplo $6

Fórmula para a preparação de 1000 comprimidos doseados com 10 mg do composto do exemplo 1.

Composto do exemplo 1 10 g Hidroxi-propil-celulose 2 g Amido de trigo 10 g Lactose 100 g Estearato de magnésio 3 g Talco 3 g

Claims

REIVINDICAÇÕES

1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral z^a\

HN - CH - CO - NH - CH - CO — N — CH - CO - NHi vy

R (I) na qual

A representa, juntamente com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado:

um grupo 2-oxoper-hidro-7-azepinilo;

- um grupo 2-oxoper-hidro-8~azocinilo;

- um grupo. 2-oxoper-hidro-9-azonilo;

- um grupo 2-oxoper-hidro-10-azecinilo;

- um grupo 2-oxo-2,3,4-, 7-tetra-hidrobenzo [e].aze pin-7-ilo;

- um grupo 2-oxo-2,3,6,7-tetra-hidrobenzo[e]aze pin-7-ilo;

- um grupo 2-oxo-2,5,6,7-tetra-hidrobenzo[e]aze pin-7-ilo;

B representa, conjuntamente com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado, uma estrutura policíclica escolhida de entre as seguintes estru turas:

- 2-azabiciclo[2.2.1]heptano;

- 2-azabiciclo[2.2.2]octano eventualmente substi tuído na posição 1 e 4 por um ou dois grupos alquilo C^-C^ de cadeia linear ou ramificada;

- per-hidroindol;

- per-hidroisoindol;

- indolina;

- isoindolina;

- per-hidroquinoleína;

- per-hidroisoquinoleína;

- 1,2,3,4-tetra-hidroquinoleína;

- 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinoleína;

- ciclopentaíb]pirrolidina;

- pirrolidina eventualmente substituída por um ou dois grupos alquilo C-^-C^ de cadeia linear ou ramificada;

- piperina;

- tiazolidina;

R representa:

- um átomo de hidrogénio;

- um grupo alquilo C^-Cg de cadeia linear ou ramificada eventualmente substituído por um grupo amino ou um grupo guanidino;

- um grupo (4-imidazolil).-metilo eventualmente substituído sobre um dos átomos de azoto por um radical alquilo ^C2.“^C4 óe ^ca-âeia linear ou . ramificada;

- um grupo (3-pirazolil)-metilo;

- um grupo (2-piridinil)-metilo eventualmente substituído por um grupo amino, dos seus enantiõmeros, diastereoisómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vis ta farmacêutico, caracterizado pelo facto de se.proteger a função amina de um aminoácido de fórmula gerai II, de que eventualmente se separam os isómeros de acordo com uma técnica clássica de separação:

HN - CH - CO-H (II) na qual

B tem o significado definido antes, com um radical protector (P) tal como o butoxiterc.-carbonilo (tBOC) ou o benziloxicarbonilo (Z) mediante reacção.com um reagente apropriado para se obter um derivado de fórmula geral

P - N - CH - CO₂H (III) na qual

B e P têm os significados definidos antes, que se faz reagir, a uma temperatura compreendida entre -15° e 0°C, na presença de trietilamina, com cloroformato de etilo e depois com o amoníaco, para se obter um derivado de .fórmula geral

P - N - CH - CO - NH- (IV).

na qual

B e P têm os significados definidos antes, que se desprotege mediante. um processo apropriado como por exemplo a acção do acido clorídrico gasoso no seio..de um dissolvente anidro tal como o dioxano ou o acetato de etilo no caso em que o símbolo P representa um grupo tBOC ou mediante hidrogenação no caso em que o símbolo P representa um grupo Z, para se obter um derivado de fórmula geral

HN - CH - CO - NH- (V) \ / na qual

B tem o significado definido antes, do qual se separam eventualmente os.isomeros de acordo com uma técnica clássica de separação, que se liga com um segundo aminoácido protegido de. fórmula geral tBOC - NH - CH - CO_nH (VI)

I ²

R' na qual

R' representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo C^-Cg de cadeia linear ou ramificada eventualmente substituído por um grupo amino pro tegido por exemplo por um radical benziloxícarbonilo (Z) ou um grupo guanidino por sua vez pro tegido por um radical nitro, (4-imidazolil)-meti lo eventualmente substituído sobre um dos átomos de azoto por um radical alquilo C^-c^ de cadeia linear ou ramificada, um grupo (3-pirazolil)-metilo, (2-piridinil)-metilo eventualmente substituído por um grupo amino protegido por exemplo um radical benziloxicarbonilo, para se obter um derivado de fórmula geral tBOC - NH - CH - CO - N - CH - CO - NH~ (VII) na qual

R' e B têm os significados definidos antes, do qual se separam eventualmente os diastereoisómeros ou enantiómeros mediante uma técnica clássica de separação, que se desprotege em seguida mediante acção do ácido clorídrico gasoso no seio de um dissolvente anidro como por exemplo, o dioxano ou o acetato de etilo para se obter um derivado de fórmula geral

H~N - CH - CO - N - CH - CO - ΝΗ_Π (VIII) ι \y

R' B^ na qual

R’ e B têm os significados definidos antes, que se liga oom um terceiro.aminoãcido, protegido de·fórmula ge ral /A

HN - CH - CO - OR (IX) na qual

R representa um radical succinimida, para se obter:

- quer:

um derivado de fórmula geral I no caso, em.que o símbolo R' não representa um grupo alquilo C^-Cg de cadeia linear ou ramificada substituído por um grupo amino protegido, ou guanidino protegido ou.não representa um grupo (2-piridinil)-me tilo substituído por um grupo amino protegido, do qual se separam eventualmente os isómeros. de acordo com uma técnica clássica de separação e se transforma depois, eventualmente, em sal de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico,

- quer:

um derivado de fórmula geral

HN - CH - CO - NH - CH - CO

N - CH - CO - NH (X) no caso em que A e B têm os - significados definidos antes; e R' representa um grupo alquilo C-^-Cg de cadeia linear ou ramificada.substituído por um grupo amino protegido ou guanidino protegido ou

R'í representa um grupo (2-piridinil)-metil substituído por um grupo amino protegido, do qual se separam eventualmente os isómeros de acordo com uma técnica clássica de separação e que se desprotege mediante hidrogenação catalítica, por exemplo, para se obter um derivado dé fór mula geral I, de que se separam eventualmente os isómeros de acor do com uma técnica clássica de separação e. de se transformar depois, eventualmente, em sal de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o símbolo A considerado conjuntamente com os átomos de azoto e de carbono a que está ligado forma um ciclo 2-oxoper~hidroazepina, dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3. - Processo de acordo com a reivindicação.1, para a preparação de compostos de.fórmula.geral I na qual o símbolo B forma com os átomos de azoto e de carbono a que estã ligado- um ciclo 2-azabiciclo.[2.2 . ljheptano, dos seus enantiómeros, diastereo isómeros e epímeros, assim como dos seus sais de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemen te substituídos.
4. — Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação, da AZEP- (NT-Me)His-ABH-NE^dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros, assim como dos seus sais, de adição com um ácido aceitável sob o ponto de vista .farmacêutico, em que AZEP representa um radical 7-carbonil-per-hidroazepin-2-ona, (ΝΪ-Me)his representa um.radical1-metil-histidilo e ABH representa um radical 2-aza-3-carbonilbiciclo[2.2.1]heptano, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais cor respondentemente substituídos.
5. - Processo de acordo.com a reivindicação 1, para' a preparação do composto de fórmula AZEP-(S)-His-(S)Pro-NH₂, dos seus enantiómeros, diastereoisómeros e epímeros assim como dos seus sais de adição com.um acido aceitável.sob α ponto de vista farmacêutico, em que AZEP representa.um radical 7-carbonil-per-hidroazpin-2-ona, His representa um radical histidilo e Pro representa um radical prolilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos, iniciais correspondentemente substituídos .

O Agente Oficial da Propnsaaae in'-um;ial