PT97642B

PT97642B - Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas contendo como ingrediente activo derivados de oxalil-aminoacidos

Info

Publication number: PT97642B
Application number: PT97642A
Authority: PT
Inventors: Ekkehard Baader; Volkmar Gunzler-Pukall; Harald Burghard
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1990-05-12
Filing date: 1991-05-10
Publication date: 1998-08-31
Also published as: CN1056683A; CZ279939B6; IE65298B1; ES2057655T3; JPH04226913A; RU2025123C1; HU217974B; JP2504874B2; IE911608A1; HRP940695B1; LV10387B; CA2042282A1; CN1032253C; NZ238112A; EP0457163B1; DE4015255A1; LTIP1460A; IL98109A; KR910019612A; MA22152A1

Description

Descrição referente à patente de invenção de HOECHST AKTIEN GESELLSCHAFT, alemã, industrial e comercial, com sede em D-6230 Frankfurt am Main 80, República Federal Alemã, (inventores: Dr. Ekkehard Baader, Dr. Harald Burghard e Dr. Vol kmar Gunzler-Pukall, residentes na República Federal Alemã) para PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS CONTENDO COMO INGREDIENTE ACTIVO DERIVADOS DE OXALIL-AMINOÃCIDOS.

DESCRIÇÃO

Os derivados de axalil-aminoácidos são conheci dos e descritos, por exemplo, nas Especificações FR-A 20 10 601 e JP 43/10614 ou em Biochemistry, 27 (8), 2934-2943 (1988). Uma utilização destes compostos como medicamento, porém, ainda não foi descrita no estado da técnica.

RO - C

N - CH

C

II o

OR' (I) na qual

R e R* são iguais ou diferentes e representam C^-Cg-alquilo ou hidrogénio,

- .

R representa hidrogénio ou C^-C^-alquilo,

R representa hidrogénio, C^-Cg-alquilo, C^-C^-alcoxi, car boxilo, C^-Cg-alcoxicarbonilo, arilo, SH, NH₂ ou halogé neo, estando os radicais alquilo não substituídos ou es tando substituídos por arilo, OH, SH ou NH„, ou ²

R e R formam em conjunto uma cadeia de C₂-C₄-alquileno assim como os compostos nas suas formas D e L preponderantemente puras, assim como os seus sais fisiologicamente aceitáveis, são excelentes inibidores da prolino- e lisino-hidroxilase.

A invenção refere-se, portanto, ã utilização dos compostos acima citados como medicamentos, especialmente co mo medicamentos para influenciar o metabolismo de colagéneo e de substâncias semelhantes ao colagéneo ou a biossíntese de Clq.

É também, portanto, um objecto da presente invenção um medicamento contendo os compostos acima citados com excipientes farmacêuticos acitáveis.

A invenção refere-se, especialmente, à utilização de compostos da fórmula I, nos quais

R e R' são iguais ou diferentes e representam C^-C^-alquilo,

Na ou K, . - . .

R representa hidrogénio, metilo ou etilo,

R representa hidrogénio ou C^-C^-alquilo, onde o radical alquilo não está substituído ou está substituído por fenilo ou SH, ou . - .

R e R formam em conjunto uma cadeia C₂~ ou C^-alquilenica.

Excepcionalmente preferida é a utilização de compostos da fórmula I, nos quais

R e R* são iguais e representam metilo, etilo, Na ou K

R¹ representa hidrogénio ou metilo,

- . ...

R representa hidrogénio, C^-C^-alquilo, benzilo ou tiometilo, ou

R e R formam em congunto uma cadeia etilenica.

As cadeias alquílicas com 3 e mais átomos de carbono tanto podem ter a cadeia linear como também ramificada. Por arilo são entendidos hidrocarbonetos aromáticos, especialmente fenilo e naftilo. Por halogéneo são entendidos flúor, cio ro, bromo e iodo, especialmente cloro e bromo.

A obtenção dos compostos da fórmula I é conhecida e descrita, por exemplo, em FR-A 20 10 601. Ela é consegui da, da maneira mais simples, reunindo 1-3 equivalentes de halogenidrato de éster de aminoácido, de preferência cloridrato, e

1-5 equivalentes de uma base como, por exemplo, carbonatos ou hidrocarbonatos, como carbonato de sódio ou de potássio ou hidrogenocarbonato de sódio ou de potássio, ou aminas terciárias, tal como trietilamina, tributilamina, etildiisopropilamina ou aminas heterocíclicas, tal como N-alquilmorfolina, piridina, quinolina ou dialquilanilinas.

Eventualmente também podem ser usadas várias bases simultaneamente. As temperaturas da reacçao correspondem a -30°C até 150°C, de preferência a 20 até 100°C. Eventualmente também se pode trabalhar num dissolvente como éter dietílico ou dimetoxietano ou tetrahidrofurano, hidrocloretos clorados como cloreto de metileno, clorofórmio, tri- ou tetracloroetileno, benzeno, tolueno e também dissolventes polares como dimetilformamida, acetona, álcoois como metanol ou etanol ou sulfóxido de dimetilo. Em seguida adicionam-se, a temperaturas entre -78°C e 100°C, de preferência entre -20°C e +20°C, lentamente, 1-3 equivalentes de cloreto de éster de ácido oxálico. Eventualmente aqui também se pode trabalhar com um dissolvente como acima citado. O termo da reacção pode ser determinado,por exemplo, por meio de cromatografia de camada fina.

Eventualmente o processamento dos produtos pode ser realizado, por exemplo, por extracção ou por cromatografia, por exemplo através de gel de sílica. O produto isolado po de ser recristalizado.

Os compostos da fórmula I com R e/ou R'=metal

alcalino como, por exemplo, Na ou K, podem ser saponifiçados a partir dos compostos da fórmula I correspondentes com R e/ou R'=C^-C₄-alcoxi, em meio alcalino, aos sais correspondentes,por exemplo, com NaOH ou KOH em um álcool de baixo peso molecular, como metanol ou etanoi, ou em éteres como dimetoxietano ou tetrahidrofurano, eventualmente na presença de água. Nos sais obtidos o catião de metal alcalino pode ser substituído, da manei ra usual, em permutadores de iões, por quaisquer catiões. Para esta finalidade passam-se os ácidos, por exemplo, através de uma coluna contendo um permutador de catiões como, por exemplo, ba(R) seado em poliestirol/divinilbenzeno (' 'Amberlite CG150 ou (R) ~ 'Dowex-CCR-2). 0 permutador de catiões estã carregado com o catião desejado, por exemplo, com iões de amónio, que derivam de uma amina primária, secundária ou terciária. Obtém-se o sal desejado para evaporação do eluído.

Os sais de amónio dos ácidos que derivam de uma amina primária, secundária ou terciária, também podem ser obtidos adicionando aos ácidos livres em uma solução alcoólica uma quantidade equimolar de amina correspondente e evaporando o dis solvente.

A obtenção dos compostos D ou L, preponderante mente isentos de enantiómeros, a partir dos racematos é realiza da, igualmente, por processos conhecidos na literatura, por exem pio pela cristalização fraccionada ou por processamento enzimático. Outra possibilidade consiste na síntese directa do compos to, isento de enantiómeros, a partir de precursores D ou L correspondentes (compostos de partida).

As substâncias de acordo com a invenção são eficazes como substâncias inibidoras reversíveis da prolilhidro xilase. Dessa forma, elas provocam uma inibição selectiva da re acção de hidroxilação, específica do colagénio, durante cujo de curso a prolina, ligada à proteína, é hidroxilada pelo enzima prolilhidroxilase. No impedimento desta reacção por meio de um inibidor forma-se uma molécula de colagénio subhidroxilada, in4

Sffi&íâSÊSíS®!;’ capaz de função, que somente pode ser fornecida pela célula em reduzida quantidade ao espaço extracelular. 0 colagénio subhidroxilado, além disso, não pode ser incorporado na matriz de colagénio e é facilmente decomposto proteoliticamente. Como con sequência destes efeitos diminui ao todo a quantidade do colagé nio depositado de forma extracelular. Os inibidores da prolilhi droxilase, portanto, são agentes auxiliares adequados na terapia de doenças nas quais o depósito de colagénio contribui decisivamente para o quadro clínico. Pertencem ao mesmo, entre ou tros, fibroses do pulmão, fígado e pele (escleroderma), assim como a aterosclerose.

Além disso, é conhecido que a inibição da prolilhidroxilase por meio de inibidores conhecidos, como alfa, al fa-dipiridilo, conduz a uma inibição da biossíntese de Clq de macrofagos (W. Muller et al., FEBS Lett. 90, 218 e seguintes (1978)). Desta forma, não ocorre a via clássica da activação complementar; os inibidores da prolilhidroxilase, portanto, tam bém agem como imunossupressivos, por exemplo, em caso de doenças imunológicas complexas.

As substâncias, de acordo com a invenção, podem ser, portanto, usadas como fibrossupressivos, imunossupressivos e antiateroscleróticos.

O efeito antifibrótico pode ser determinado no exemplo da fibrose do fígado induzida por tetracloreto de carbo no. Para esta finalidade tratam-se ratos duas vezes por semana com CCl^ (1 ml/kg) - dissolvido em azeite. A substância a ser examinada é administrada diariamente, eventualmente até duas ve zes por dia, por via oral ou intraperitoneal - dissolvida num dissolvente aceitável adequado. A extensão da fibrose do fígado é determinada histologicamente e a fracção ee colagénio no fíga do ê analisada por meio da determinação de hidroxiprolina - como é descrito por Kivirikko et al. (Anal. Biochem. 19, 249 e se guintes (1967)). A actividade da fibrogénese pode ser determina da por meio de determinação radioimunológica de fragmentos de co

lagénio e de péptidos de procolagénio no soro. Os compostos de acordo com a invenção são eficazes, neste exemplo, numa concentração de 1-100 mg/kg. Um outro exemplo para a avaliação do efei to antibiótico é a fibrose do pulmão induzida por bleomicina, como é descrito por Kelley et al. (J. Lab. Clin. Med. 96, 954 (1980)). Para a avaliação do efeito dos compostos de acordo com a invenção pode ser usado o exemplo do granuloma de chumaço de algodão, como é descrito por Meier et al, Experimentia 6, 469 (1950) . A seguir a invenção é descrita mais pormenorizadamente por meio de exemplos.

Exemplos

Processo geral para a obtenção dos compostos dos exemplos 1-6.

Colocam-se previamente num recipiente um equivalente do cloridrato do éster de aminoácido, dois equivalentes de trietilamina e dois equivalentes de Ν,Ν-dimetilaminopiridina, ã temperatura ambiente, sob atmosfera de azoto, em cloreto de metileno. Em seguida adiciona-se, a 0°C - 10°C, lentamente, gota a gota, um equivalente de cloreto de metileno. Agita-se durante 12 horas ã temperatura ambiente, adiciona-se solução satu rada de hidrogenocarbonato de sódio e extrai-se. Separa-se a fa se orgânica, lava-se com solução de cloreto de sódio, seca-se com sulfato de magnésio e evapora-se. O produto bruto é cromato grafado.

Exemplo 1

Éster dimetílico de (N-oxalil)-L-alanina

R = R' = CH₃; R¹ = H; R² = CHg g do cloridrato de éster metílico de L-alanina e 3,3 ml de cloreto de éster metílico de ácido oxálico fornecem 6 g do exem pio 1 como óleo (Crom.: EE/CHgOH 5/1).

Exemplo 2

Éster dimetílico de (N-oxalil)-L-fenilalanina

R = R' = CH_; R¹ = H? R² = CH_nC_cH_c□ Zoo g do cloridrato de éster metílico de L-fenilalanina e 2,2 ml de cloreto de éster metílico de ácido oxálico fornecem 6,5 g do exemplo 2 como óleo (Crom.: EE/CHgOH 5/1).

Exemplo 3

Éster dimetílico de (N-oxalil)-L-glicina

R = R' - CH₃; R¹ = H; R² = H g de cloridrato de éster metílico de L-glicina e 11 ml de cloreto de éster monometílico de áxido oxálico fornecem 23 g do exemplo 3; ponto de fusão 49°C;

(Crom.: EE).

Exemplo 4

Éster dimetílico de (N-oxalil)-L-prolina

R = R' = CH₃; R¹ = CH₂-CH₂ = R² g do cloridrato de éster metílico de L-prolina e 2,9 g de cloreto de éster monometílico de áxido oxálico fornecem 1,5 g como óleo (Crom.: EE).

Exemplo 5

Éster metílico de (N-oxalil)-L-valina

R = R' = CH₃; R¹ = H; R² = CH(CH₃)₂ g do cloridrato de éster metílico de L-valina e 2,8 g de cio reto de éster monometílico de ãcido oxãlico fornecem 2 g como óleo (Crom.: CH/EE 1/1).

Exemplo 6

Éster dimetílico de (N-oxalil)-L-cisteína

R = R' = CH₃; R¹ = H; R² = CH₂SH g do cloridrato de éster metílico de L-cisteína e 3,9 g de

cloreto de éster monometílico de ácido oxálico fornecem 1,5 g como óleo (Crom.: CH/EE 1/1).

Exemplo 7

Éster dietílico de (N-oxalil)-sarcosina

R = R' = C₂H₅; R¹ = CH₃; R² = H

Colocam-se previamente 2 g de cloridrato de éster etílico de sarcosina em 50 ml de etanol e adiciona-se, ã temperatura ambiente, gota a gota, uma solução de 3,5 ml (2 equivalentes) de éster dietílico de ácido oxálico e 1,8 ml de trietilamina em 25 ml de etanol. Agita-se durante 5 horas a 50°C, depois aquece-se durante 2 horas ao refluxo. Arrefece-se a solução eevapora-se até à secura. Retoma-se o resíduo em cloreto de metileno, lava-se uma vez com água, seca-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio e evapora-se.

O produto bruto é cromatografado (EE/CH 1/1) Rendimento: 0,35 g.

Processo geral para a obtenção dos compostos

8-14.

Dissolve-se um equivalente dos compostos dos exmeplos 1-7 ã temperatura ambiente, em 2 equivalentes de um hi drõxido alcalino em solução alcoólica 0,1 N. Agita-se durante 12 horas à temperatura ambiente e evapora-se até â secura. O re síduo é submetido duas vezes a vapores de tolueno, lavado várias vezes com pentano e seco sob vácuo.

Exemplo 8

Sal dipotássio de (N-oxalil)-1-alanina

R = R’ = K; R¹ = H; R² = CH₃

Fazem-se reagir 300 mg do composto do exemplo com 32,5 ml de hidróxido de potássio etanólico 0,1 N.

Rendimento: 370 mg de cristais brancos, ponto de fusão >300 C.

Exemplo 9

Sal dissódico de (N-oxalil)-L-fenilalanina

R = R² = Na; R¹ = H; R² = CH₂C₆H₅

Fazem-se reagir 420 mg do composto do exemplo 2 com 32,5 ml de hidróxido de sódio metanólico 0,1 N. Rendimento: 440 mg de cristais brancos, ponto de fusão: >300°C.

Exemplo 10

Sal dipotãssico de (N-oxalil)-L-glicina

R = R² = K; R¹ = H; R² = H

Fazem-se reagir 5,5 g do composto do exemplo 3 com 314 ml de hidróxido de potássio metanólico 0,1 N. Rendimento: 5,4 g de cristais brancos, ponto de fusão: >300° C.

Exemplo 11

Sal dissódico de (N-oxalil)-L-prolina

R = R' = Na; R¹ = CH₂-CH₂ = R²

Fazem-se reagir 300 mg do composto do exemplo com 1,5 ml de hidróxido de sódio etanólico 0,1 N.

Rendimento: 290 g de cristais brancos, ponto de fusão: >300°C.

Exemplo 12

Sal dissódico de (N-oxalil)-L-valina

R = R' = Na; R¹ = H; R² = CH(CH₃)₂

Fazem-se reagir 300 mg do composto do exemplo com 14 ml de hidróxido de sódio etanólico 0,1 N.

Rendimento: 235 mg de cristais brancos, ponto de fusão: >300°C.

Exemplo 13

Sal dissódico de (N-oxalil)-L-cisteína R = R¹ = Na; R¹ = H; R² = CH₂SH

Fazem-se reagir 300 mg do composto do exemplo 6 com 13,7 ml de hidróxido de sódio metanólico 0,1 N. Rendimento: 300 g de cristais brancos, ponto de fusão: >300°C.
Exmeplo	14
Sal dipotássico	de (N-	oxalil)-sarcosina
R = R' =	^; K;	R¹	= CH₃;	R² = H
			Fazem	t-se reagir	120 mg do	composto do exemplo
7 com 11	,4 ml de	; hidróxido de potássio etanólico 0,1 N.
Rendimento:	130	mg de	cristais brancos, ponto	de fusão: >300°C
			A seguir os compostos dos	exemplos 1-14 estão
reunidos	, em	forma de tabela (Tabela 1).
	RO -	C - C	- N - CH -	C - OR'		(I)
			II II	Il l₂	II
			0 0	R R	0
				Tabela 1
Exem							Ponto de
pio	R		R'	R¹	R²		fusão/Gleo
1	CH₃		ch₃	H	CH₃		óleo
2	ch₃		ch₃	H	^CH2^C6^H5		óleo
3	ch₃		ch₃	H	H		49°C
4	CH		CH	ch₂—-	ch₂		óleo
5	CH₃		CH₃	Η	CH(CH_?)_?		óleo
6	ch₃		ch₃	H	ch₂sh		óleo
7	c₂H	5	^C2^H5	ch₃	H		óleo
8	K		K	Η	ch₃		>300°C
9	Na		Na	H	CH₂ ^C6^H5		>300°C

Tabela 1 (continuação)

Exem pio	R	R’	R¹	R²
10	K	K	H	H
11	Na	Na	ch₂—	—ch₂
12	Na	Na	H	CH(CH₃)
13	Na	Na	H	ch₂sh
14	K	K	CH_n	H

Ponto de Fusão/óleo > 300°C > 300°C >300°C >300°C >300°C efeito da inibição dos compostos de acordo com a invenção foi determinado num teste de enzima analogamente ao método de B. Peterkofsky e R. DiBlasio, Anal. Biochem. 66, 279-286 (1975). Neste teste o colagénio subhidroxilado é hidroxilado enzimaticamente com propilhidroxilase na presença de iões de ferro (II), alfa-cetoglutarato e ascorbato e é determinada a concentração do composto de acordo com a invenção adicio nado, a qual conduz a uma inibição de 80% da actividade do enzi ma (o valor ê referido como Ki) .

Na tabela 2 constam os resultados com os compostos dos exemplos 8 a 10.

Tabela 2 (Sais);

Composto Ki[mM]

Exemplo 8 0,04

Exemplo 10 0,01

O efeito inibidor também pode ser determinado em culturas de células ou tecidos. Para esta finalidade podem ser usados fibroblastos ou outras células ou calvaria que pro duzem colagénio, ou outros órgãos que produzem colagénio. Na tabela 3 encontra-se o efeito inibidor de substâncias de acordo com a invenção na cultura de calvaria. É citada a concentração que conduz a uma diminuição de 50% do quociente de hidroxi14 prolina/prolina na marcaçao metabólica com C-prolina (ΙΟ^θ).

^IC50

0,35

0,002

Composto Exemplo 1 Exemplo 3

Claims

REIVINDICAÇÕES

- lã Processo para a preparação de composições farmacêuticas para influenciar o metabolismo de colagénio e de sub stâncias semelhantes ao colagénio, ou da biossíntese de Clq, ca racterizado por se incorporar como ingrediente activo um compos to da fórmula I

RO - C - C - N - CH - C - OR'

O O R- R“ O na qual

R e R' são iguais ou diferentes e representam C^-Cg-alquilo ou hidrogénio

R representa hidrogénio ou C^-Cg-alquilo,

R^ representa hidrogénio, C^-Cg-alquilo, C^-Cg-alcoxi, carboxilo, C^-Cg-alcoxicarbonilo, arilo, SH, NH₂ ou halogéneo, estando os radicais alquilo não substituídos ou estando substituídos com arilo, OH, SH ou NH₂· ou

1 2

R e R representam em conjunto uma cadeia de C₂-C₄-alquileno assim como os compostos nas suas formas D e L, preponderantemen te puras, assim como os seus sais fisiologicamente aceitáveis.

- 2â Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R e R’ serem iguais ou diferentes e representarem C^-Cg-alquilo, Na ou K,

R¹ representar hidrogénio, metilo ou etilo,

R representar hidrogénio ou C^-C^-alquilo, estando o radical alquilo não substituído ou estando substituindo com fenilo ou SH ou

1 2

R e R formam juntos uma cadeia de C₂~ ou Cg-alquileno.

- 3ã Processo de acordo com as reivindicações 1 ou
2, caracterizado por R e R' serem iguais e representarem metilc^ etilo, Na ou K,

1 - . .

R representar hidrogénio ou metilo,

2 - .

R representar hidrogénio, C^-Cg-alquilo, benzilo ou tiometilo, ou

12 . . - .

R e R formarem juntos uma cadeia etilenica.

- 4a Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 3, caracterizado por se obterem composições eficazes para a inibição dos enzimas prolinohidroxilase ou lisinohidroxilase.

- 5ã 13

- 5â Processo de acordo com uma ou mais das reivindicações 1 a 3, caracterizado por se obterem composições eficazes para a aplicação como fibrossupressivos e imunossupressivos

- 6§ Processo para a preparação de uma composição farmacêutica contendo um composto tal como é definido em uma ou mais das reivindicações 1 a 5, caracterizado por se incorporarem ainda excipientes farmacêuticos aceitáveis.

A requerente reivindica a prioridade do pedido de patente alemão apresentado em 12 de Maio de 1990, sob o nõ. P 40 15 255.3.

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS CONTENDO COMO INGREDIENTE ACTIVO DERIVADOS DE OXALIL-AMINOACIDOS

A invenção refere-se a um processo para a preparação de composições farmacêuticas para influenciar o metabolismo de colagénio e de substâncias semelhantes ao colagénio, ou da biossíntese de Clq, o qual compreende a adição de um composto da fórmula I

RO

C

II c

II o

N - CH

C

II

OR'