PT97152A - Processo para a preparacao de derivados carbapenemicos 2-(pirrolidiniltio substituidos) e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

BANYU^PHARHACEUTIC AL_CO^i_L.TD^_ "PROCESSO PARA A PREPARAÇÍO DE DERIVADOS CARBAPENÉMICOS 2-CPIRROLIDIHILTIO SUBSTITUÍDOS) E DE COMPOSIÇOES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM" A presente invenção diz respeito a novos compostos carbapenémicos (ácido 7-oxo-l-azabiciclo-[3.2.0]-hept -2-en-2-carboxílico), a agentes antibacterianos que contêm estes compostos como ingredientes activos e a um processo de preparação dos mesmos compostos.

Nos últimos anos descobriram-se na natureza.novos antibióticos β> -lactâmicos com núcleos j3-lactâ-micos iguais aos de derivados da penicilina e da cefalospo-rinas, mas com estruturas básicas diferentes.

Por exemplo, podem citar-se compostos carbapenémicos naturais tais como a tienamicina isolada a partir da frementação Streptomyces cattleya (J. Am Chem. Soc. Vol. 100, p. 6^91 (1978)). A tienamicina apresenta um excelente espectro antibacteriano e uma intensa acção antibac-teriana sobre um grande número de bactérias gram-positivas e gram-negativas. Consequentemente, aguarda-se o seu desenvolvimento como um agente y3-lactâmico muito útil. Contudo, a 2 tienamicina é quimicamente instável, tendo sido descrita a sua provável decomposição, in vivo, por determinados enzimas tais como a desidropeptidase I renal (referida na presente invenção, para simplificar, como DHP-I), pelo que a acção antibacteriana tende a diminuir e a quantidade recolhida na urina é baixa (Antimicrob. Agents Chemother., Vol. 22, pag. 62 (1982); idem, Vol. 23 pag. 300 (1983))· A Merck 4 Co., Inc. sintetizou muitos análogos de tienamicina com o objectivo de manter a excelente acção antibacteriana da tienamicina e assegurar estabilidade química. Como resultado desenvolveu experimentalmente como um produto farmacêutico o imipenem, o mono-hidrato do ácido (SR, 6S, 8R)-3-[[2-(forminidóilamino)etil]tio]-6-(l-hidroxi-etil)-7-oxo-l-azabiciclo[3·2.0]hept-2-en-2-carboxílico obtido por formimidação do grupo amino de tienamicina (J. Med. Chem., Vol.22, pg. 1435 (1979)). 0 imipenem apresenta acção antibacteriana igual ou superior à da tienamicina contra diversos tipos de bactérias e resistência à ^3-lactamase. Especialmente contra Pseudomonas aeroginosa, a sua acção antibacteriana é dupla ou quádrupla da tienomicina. A estabilidade do imipenem na forma sólida ou em solução aquosa é ainda acentuadamente superior à da tienamicina.

Contudo, tal como a tienamicina, o imipenem é provavelmente decomposto pela desidropeptidase I (DHP-I) nos rins humanos. Consequentemente não pode utilizar-se no tratamento de infecções do trato-urinário. Por outro lado, 5 apresenta toxicidade renal devido aos produtos de decomposição. Consequentemente, o imipenem não se pode administrar isoladamente sendo necessário associá-lo com um inibidor da desidropeptidase I (DHP-I) tal como a cilastatina (Antimi-crob. Agents Chemother., Vol. 12 (Supl. D), pg. 1 (1983)). Nos últimos anos, o imipenem foi frequentemente utilizado no tratamento e prevenção de doenças infecciosas. Consequentemente, aumenta no campo clínico a resistência do Staphylo-coccus aureus, muito resistente à meticilina, ao imipenem e a resistência de Pseudomonas aeruginosa ao imipenem. 0 imipenem não apresenta os efeitos pretendidos no tratamento de infecções provocadas por aquelas bactérias resistentes.

Como antecedentes semelhantes da presente invenção pode mencionar-se a patente de invenção norte-americana N2 4.933-333- Esta publicação descreve compostos car-bapenémicos com um grupo 2-(aminocarbonil ou N-mono- ou N,N--di-alquil(inferior)aminocarbonil)pirrolidin-4-il-tio na posição 2 da estrutura carbapenémica, representados pelo mero-penem, SM-7338: ácido (4R, 5S, 6S, 8R, 2’S, 4*S)-6-(l-hidro-xietil)-4-metil-3-[2-(N,N-dimetilaminocarbonil)-pirrolidin--4-il-tio]-7-oxo-l-azabiciclo[3·2.0]hept-2-en-2-carboxílico, como o composto característico.

Os antibióticos

xicidade selectiva contra bactérias e mostram ausência de efeitos importantes contra as células animais. Consequente-mente, estes compostos são largamente utilizados no trata- _ a _ mento de doenças infecciosas provocadas por bactérias como os poucos antibióticos que não apresentam efeitos secunda -rios e constituem assim agentes terapêuticos muito úteis.

Nos últimos anos, contudo, têm sido isolados, frequentemente, Pseudomonas aeruginosa e Staohvlo-coccus aureus muito resistentes à meticilina de doenças com imunidade diminuída, como bactérias que provocam doenças infecciosas dificilmente curáveis. Isto constitui um problema clinicamente grave. Consequentemente, é altamente desejável obter um agente antibacteriano com acçâo antibacteriana melhorada contra as bactérias resistentes citadas antes. Especialmente no que diz respeito aos compostos carbapenémicos é desejável melhorar a acçâo antibacteriana, melhorar a estabilidade contra a desidropeptidase I, reduzir a toxicidade renal e reduzir os efeitos secundários que afectam o sistema nervoso central.

Os compostos descritos na patente de invenção norte-americana Νδ ^.933·333, especialmente, o mero-penem, apresentam estabilidade face à desidropeptidase-I bastante melhorada. Contudo, a actividade antibacteriana contra as estirpes de Staphylococcus aureus muito resistentes à meticilina nâo é adequada pelo que se pretende obter um composto carbapenémico com maior acçâo antibacteriana.

Os autores da presente invenção dedicaram--se a pesquisas exaustivas com a finalidde de obter novos compostos carbapenémicos com excelente acçâo antibacteriana - D - e resistentes à desidropeptidase I. Como resultado, descobriram os compostos carbapenémicos de acordo com a presente invenção com, na posição 2 da estrutura carbapenémica, um grupo de fórmula geral - D - (CH2)p-CH' (CH2)q^~^(CH2>r

R 3 na qual cada um dos símbolos 1*2 e R^, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, forminidoílo ou acetoimidoílo ou um grupo de fórmula geral -COORj^, CON(R^)-Rg, - N(R5)R6, -CH2COOR1í, -CH2N(R5)Rg ou -CHgCON(R^)Rg em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior e R^ e R^, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou Rg e Rg formam, considerados conjuntamente o átomo de azoto adjacente, um grupo heterocíelico escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, pirrolidinilo ou piperidilo; A representa um grupo de fórmula geral =NRj , =N+(Ry)Rg , -C0N(R?)- , -C0N(R7)C0, -CON(R?)CON(R8)- , -N(R?)CO(CH2)gN( Rg)- , -N(R7)CO(CH2)sCON(Rg)- , -CON(R? )N(Rg)- ou -N(R?)- 6 ^CH2^sN^R8^~ em 3ue ^7 e R8 isuais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, formimidoílo ou acetoi-midoílo ou um grupo de fórmula geral -COORj. , -CON (R- ) , n(R )r -CH2COOR1| , -CH2N(R5)R6 ou -CH2CON(R5)R6 em que R^ , R,_ e Rg têm os significados definidos antes e s representa um número inteiro de 1 a 3; p representa zero; um número inteiro de 1 a 3; e cada um dos símbolos q e r, iguais ou diferentes, representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 5, com a condição de q e r não representarem simultaneamente zero e q + r ser igual ou inferior a 6, são compostos novos não descritos anteriormente e que tais compostos exibem intensa acção antibacteriana contra bactérias gram-positivas tais como Staphylococcus aureus e contra bactérias gram-nega tivas incluindo Pseudomonas aeruginosa e exibem ainda a esta bilidade relativamente à desidropeptidase I. A presente invenção é um resultado desta descoberta. A presente invenção diz respeito a compostos de fórmula geral

(D n l na qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo,

R 1 representa um átomo de hidrogénio ou uma carga negativa, R2 e R^ > iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-al-quilo inferior, formimidoílo ou acetoi-midoílo ou um grupo de fórmula geral -coor4 , -con(r5)r6 , -n(r5)r6 , --ch2coor4 , -ch2n(r5)r6 ou -ch2con(r5)r6 em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior e R^ e Rg , iguais ou diferentes, rerpesen-tam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou R^ e Rg formam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto adjacente, um grupo he terocíclico escolhido entre grupos azi-ridinilo, azetidinilo, pirrolidinilo ou piperidilo, A representa um grupo de fórmula geral =NR? , = N+(R?)Rg , -CON(R?)-, -CON(R7)CO- , -CON(Ry)CON(Rg)- , -N(R„)CO(CH_) N(Rr)- , 7 2 s o 8 -N(R7)C0(CH2)sC0N(Rg)- ,

-con(r?)n(r8) ou -n(r?) (ch2)sn(r8)-em que Ry e Rg , iguais ou diferentes representam, cada um, um átomo de hidro génio, um grupo alquilo inferior, hi-droxi-alquilo inferior, formimidoílo ou acetoinidoílo ou um grupo de fórmula geral -COOR4 , -CON(R5)R6 , -N(Rg)Rg , -CH2P.O0R4 , -CH2N(R5)R6 OU -CH2C0N(Rg)Rg e s representa um número inteiro de 1 a 3- p representa zero ou um número inteiro de 1 a 3, e q e r, iguais ou diferentes, representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 5, com a condição de q e r não representarem simultaneamente zero e q + r ser igual ou inferior a 6, ou aos seus sais ou ésteres aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico. A presente invenção diz também respeito a um processo para a preparação de compostos de fórmula geral I ou dos seus sais ou ésteres aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmula geral 9 r13o r

na qual R tem os significados definidos antes, R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical hidroxi,e R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical carboxilo ou um seu derivado reactivo com um composto de fórmula geral HS- N'

(CH,)-CH B

R 20 (III) ► 30

R 15 na qual ^15 rePresenta um átomo de hidrogénio ou 10 um grupo protector do radical imino, ^20 e R30 ’ iSuais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hi-droxi-alquilo inferior eventualmente protegido, formimidoílo eventualmente protegido ou acetoimidoílo eventualmen te protegido ou um grupo de fórmula geral -COOR,^ , CON(R50)R60 , -N(R50)R60 . -CHgCOOR^, -CH2N(R50)R60 ou -CH2C0N(R^q)R£q em que R^q representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior ou um grupo protector do radical carboxilo e R^Q e R^q , iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior ou um grupo pro tector do radical amino ou um grupo protector do radical imino ou R^-ge R^g formam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto adjacente, um grupo heterocíclico escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, pirrolidi-nilo ou piperidilo, B representa um grupo de fórmula geral =NR70 , =N+(R?0)R8o , -CON(R?q)- , -con(r70)co- , -con(r70)con(r80)- , 11 -N(R70)C0(CH2)sN(R80)- , -N(R70)CO(CH2)sCON(Rg0)- , -CON(R70)N(Rq0)- ou -N(R70)(CH2)SN(R80) em que R7q e Rg^ , iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidro génio, um grupo alquilo inferior, hidro xi-alquilo inferior eventualmente protegido formimidoílo eventualmente protegido ou acetoimidoílo eventualmente protegido, um grupo protector do radical imino ou um grupo de fórmula geral C00R1|0 . -“N(H50)R60 , -N(B50)R60 , -CHjCOORjjg , -CH2N(RÇ0)R60 ou -CH2CON(R^q)RgQ e s representa um número inteiro de 1 a 3, e p, q e r têm os significados definidos antes, para se obter um composto de fórmula geral

(xv) 12 na qual ^ ^ > ^14’ ^15» ^20 ’ R30 ’ Q ® têm os significados definidos antes, e de se remover, eventualmente, qualquer grupo protector desse composto. A presente invenção fornece ainda um agente antibacteriano constituído por uma quantidade eficaz sob o ponto de vista antibacteriano de um composto de fórmula geral I ou de um seu éster ou sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico e de um veículo ou diluente aceitáveis em farmácia.

Seguidamente descreveremos a presente invenção detalhadamente relativamente aos aspectos preferidos. Em primeiro lugar, serão explicados os símbolos e termos uti^ lizados na presente memória descritiva.

Os compostos de acordo com a presente invenção apresentam a estrutura básica da fórmula k

sistemáticamente descrita como ácido 7-oxo-l-azabiciclo[3.2. 0. ]hept-2-en-2-carboxílico. Por conveniência esta estrutura básica será referida na presente memória descritiva, como o 13 acido l-carbapen-2-em-3-carboxílico procedendo à numeração com base em um carbapenem vulgarmente e largamente utilizado de fórmula 1

A presente invenção inclui isómeros ópticos com base em átomos de carbono assimétricos na posição 1, 5, 6 e 8 da estrutura carbapenémica, e estereoisómeros. Entre estes isómeros prefere-se um composto com a configuração (SR, 6s, 8R) isto é, um composto com uma configuração esté-rica de (SR, 6S) (5,6-trans) como a tienamicina e em que o átomo de carbono na posição 8 apresenta a configuração R, ou um composto com a configuração (1R, 5S, 6S, 8R), caso em que o grupo metilo se encontra presente na posição 1.

Também relativamente ao grupo 2-(heteronúcleo alicíclico substituído ou o heteronúcleo alicíclico-alquilo inferior)pirrolidin-4-il-tio, a presente invenção inclui isó meros com base em átomos de carbono assimétrico nas posiçGes 2 e 4 da estrutura pirrolidínica e na cadeia lateral na posi^ ção 2. Estre estes isómeros preferem-se os compostos com a configuração (2’S, 4'S) e (2’R, 4'R) quando p representa zero, e compostos com a configuração (2’R, 4’S) e (2’S, 4fR) quando p representa um número inteiro de 1 a 3.

Com base em carbonos assimétricos existem, ainda, isómeros relativamente ao grupo heterocíclico alicí-clico na posição 2 da estrutura pirrolidinica, isómeros estes que a presente invenção também inclui. A expressão, grupo alquilo inferior, significa um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada com 1 a 6 átomos de carbono como, por exemplo, um grupo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, s-butilo, t-butilo, pen-tilo ou hexilo, de preferência um grupo metilo, etilo ou t--butilo. A expressão grupo hidroxi-alquilo inferior significa um grupo hidroxi-alquilo comportando um grupo alquilo inferior como os citados antes comportando como subs-tituinte um grupo hidroxilo como, por exemplo, um grupo hi-droximetilo, hidroxi-etilo, hidroxipropilo, hidroxibutilo, de preferência um grupo hidroximetilo ou hidroxietilo. A expressão grupo alquil(inferior)carba-moílo significa um grupo carbamoílo comportando como substi-tuinte um grupo alquilo inferior como os citados antes como, por exemplo, um grupo N-metilcarbamoílo, N-etilcarbamoílo ou N-propilcarbamoílo, de preferência um grupo N-metilcarba-moílo. A expressão grupo di-alquil(inferior)car-bamoílo significa um grupo carbamoílo comportando dois subs- 15 tituintes escolhidos entre os grupos alquilo inferior citados antes tais como um grupo N,N-dimetil-carbamoílo, N,N--dietil-carbamoílo ou N-etil-N-metil-carbamoílo, de preferência um grupo N,N-dimetil-carbamoílo. 0 grupo protector do radical carboxilo pode ser, por exemplo, um grupo alquilo inferior, como, por exemplo, um grupo metilo, etilo, propilo, isopropilo ou t--butilo; um grupo alquilo inferior halogenado tal como um grupo 2,2,2-tricloroetilo ou 2,2,2-trifluoroetilo; um grupo alcanoiloxi (inferior) alquilo tal como um grupo acetoxime-tilo, propioniloximetilo, pivaloiloximetilo, 1-acetoxietilo ou 1-propioniloxietiloj um grupo alcoxi(inferior) carbonilo-xialquilo tal como um grupo 1-(metoxicarboniloxi)etilo, 1--(etoxicarboniloxi)etilo ou 1-(isopropoxicarboniloxi)etilo; um grupo alcenilo inferior tal como um grupo 2-propenilo, 2--cloro-2-propenilo, 3-metoxicarbonil-2-propenilo, 2-metil-2--propenilo, 2-butenilo ou cinamilo; um grupo aralquilo tal como um grupo benzilo, p-metoxibenzilo, 3,4-dimetoxibenzilo, o-nitrobenzilo, p-nitrobenzilo, benzidrilo ou bis(p-metoxi-fenil)metilo; um grupo (2-oxo-1,3-dioxol-4-il 5 substituído)· metilo tal como um grupo (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)me-tilo; um grupo alquil(inferior)sililo tal como um grupo tri-metilsililo ou t-butil-dimetilsililo; um grupo indanilo, fta lidilo ou metoximetilo. Particulrmente preferidos sâo os grupos 2-propenilo, p-nitrobenzilo, p-metoxibenzilo, benzidrilo e t-butil-dimetilsililo. 16 0 grupo protector do radical hidroxi pode ser, por exemplo, um grupo alquil(inferior)sililo tal como um grupo trimetilsililo ou t-butil-dimetilsililo; um grupo al-coxi(inferior)metilo tal como um grupo metoximetilo ou 2-me-toxietoximetilo; um grupo tetra-hidropiranilo; um grupo arai quilo tal como um grupo benzilo, p-metoxibenzilo, 2,4-dime-toxibenzilo, o-nitrobenzilo, p-nitrobenzilo ou tritilo; um grupo acilo tal como um grupo formilo ou acetilo; um grupo alcoxi(inferior)carbonilo tal como um grupo t-butoxicarbo-nilo, 2-iodoetoxicarbonilo ou 2,2,2-tricloroetoxicarbonilo; um grupo alceniloxicarbonilo tal como um grupo 2-propeniloxi^ carbonilo, 2-cloro-2-propeniloxicarbonilo, 3-metoxicarbonil--2-propeniloxicarbonilo, 2-metil-2-propeniloxicarbonilo, 2--buteniloxicarbonilo ou cinamiloxicarbonilo; ou um grupo aralquioxicarbonilo tal como um grupo benziloxicarbonilo, p--metoxibenziloxicarbonilo, o-nitrobenziloxicarbonilo ou p--nitrobenziloxicarbonilo. Particularmente preferidos sâo os grupos 2-propeniloxicarbonilo, p-nitrobenziloxicarbonilo ou t-butil-dimetilsililo. 0 grupo protector do radical amino ou imino pode ser, por exemplo, um grupo aralquilideno tal como um grupo benzilideno, p-clorobenzilideno, p-nitrobenzilideno, salicilideno, o^-naftilideno ou y5-naftilideno; um grupo aralquilo tal como um grupo benzilo, p-metoxibenzilo, 3,1*--dimetoxibenzilo, o-nitrobenzilo, p-nitrobenzilo, benzidrilo, bis(p-metoxifenil)metilo ou tritilo; um grupo alcanoílo in- 17 ferior como, por exemplo, um grupo formilo, acetilo, propio-nilo, butirilo, oxalilo, succinilo, ou pivaloílo; um grupo alcanoílo inferior halogenado tal como um grupo cloroacetilo, dicloroacetilo, tricloroacetilo ou trifluoroacetilo; um grupo arilalcanoílo tal como um grupo fenilacetilo ou feno-xiacetilo; um grupo alcoxi(inferior)carbonilo tal como um grupo metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo ou t-butoxicarbonilo; um grupo alcoxi(inferior)carbonilo halogenado tal como um grupo 2-iodoetoxicarbonilo ou 2,2,2-tri-cloroetoxicarbonilo; um grupo alceniloxicarbonilo tal como um grupo 2-propeniloxicarbonilo, 2-cloro-2-propeniloxicar-bonilo, 3-metoxicarbonil-2-propeniloxicarbonilo, 2-metil-2--propeniloxicarbonilo, 2-buteniloxicarbonilo ou cinamiloxi-carbonilo; um grupo aralquiloxicarbonilo tal como um grupo benziloxicarbonilo, o-nitrobenziloxicarbonilo, p-nitroben-ziloxicarbonilo ou fenetiloxicarbonilo; ou um grupo alquil--sililo tal como um grupo trimetilsililo ou t-butildimetil-sililo. Especialmente preferidos são os grupos 2-propeniloxicarbonilo, t-butoxicarbonilo e p-nitrobenziloxicarbonilo. 0 grupo heterociclo alicíclico colocado no grupo pirrolidin-4-il-tio como uma cadeia lateral na posição 2 da estrutura carbapenémica comporta um substituinte na posição 2 do núcleo pirrolidinico e apresenta a estrutura da fórmula geral

(CH?) -CH 2 P

A

(A) 18 na qual e R^, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi--alquilo inferior, formimidoílo ou acetoimidoílo ou um grupo -coor4, -con(r5)r6, -n(r5)r6, -ch2coor1í , -ch2n(r5)r6 ou -CH2CON(R^)R^ em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior e Rg e Rg , iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou Rg e Rg formam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto adjacente, um grupo heterociclíco escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, pirrolidinilo ou piperidilo; A representa um grupo de fórmula geral =NR^, =n(R?)R8, -CON(R?)- , - C0N(R7)C0- , -CON(R7)CON(Rg)- , -N(R7)CO(CH2)sN(Rg)- , -N(R7)CO(CH2)sCON(Rg)- , -CON(R?)N(Rg)- ou —N(R_)(CH0) N(Rp)- D B ^. 7 2 s 8 em que R7 e Rg, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, formimidoílo ou acetoimidoílo ou um grupo de fórmula geral - COOR^ , -CON(R5)Rg , -N(R5)Rg, - CH2CCOR4 , -Cí^lUR^Rg ou -CH2CON(R^)Rg em que R^ , Rg e Rg têm os significados definidos antes e s representa um número inteiro de 1 a 3; p representa zero ou um número inteiro de 1 a 3; e qer, iguais ou diferentes, representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 5, com a condição de q e r nSo representarem simultaneamente zero e q + r ser igual ou inferior a 6. R2 (ou R2q) e ^3 ^ou ^30^ P°dem ser iguais ou diferentes e podem comportar substituintes em uma qualquer das posições even- 19 • .iais sobre átomos de carbono constituindo os heteronúcleos aliciclicos citados antes. Cada um dos símbolos R2 e re presenta, de preferência, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior ou hidroxi-alquilo inferior ou um grupo de fórmula geral -C0N(Rg)Rg ou -N(R,-)Rg em que Rg e Rg têm os significados definidos antes. Particularmente preferidos entre estes grupos são os átomos de hidrogénio ou os grupos carbamoílo, alquil(inferior)carbamoílo, di-alquil(inferior)-carbamoílo ou amino. A representa uma estrutura parcial dos grupos heterocíclicos aliciclicos citados antes. A represnta de preferência um grupo de + fórmula geral =NR? , =N(R7)Rg , -CON(R?)- , -CON(R7)CO- , -CON(R7)CON(Rq)- , -N(R7)COCH2N(Rg)- , -CON(R?)N(Rg ) - ou -N(R7) (CH2)2N(Rg)- em que R7 e Rg têm os significados definidos antes. Entre os grupos de fórmula geral citados antes + prefere-se o grupo =NR7 , =N(R7)Rg ou -CON(R7)- em que R7 e Rg têm os significados definidos antes. Especialmente prefe-ridos entre os mesmos grupos são os grupos =NH, =NMe, =NMe2 ou -CONH-. p representa zero ou um número inteiro de 1 a 3, de preferência zero ou o número inteiro 1, de preferência zero.

Quando p representa zero os grupos hetero-ciclicos aliciclicos citados antes podem comportar um subs-tituinte escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, 2- 20 -carbamoílazetidinilo, 2-oxoazetídinilo, N-metil-2-oxoazetí-dinilo, pirrolidinilo, N-metilpirrolidinilo, N, N-dimetil-pirrolidino, 2-oxopirrolidinilo, 2,5-dioxopirrolidínilo, N--(2-hidroxietil) pirrolidinilo, 2,5-dioxo-N-metilpirrolidí-nilo, 2-carbamoílpirrolidinilo, 2-(N-metilcarbamoil) pirroli dinilo, 2-(N, N-dimetilcarbamoil) pirrolidinilo, 3-amino-2--oxopirrolidinilo, pirazolidinilo, 3-oxopirazolidinilo, imi-dazolidinilo, 2,4-dioxoimidazolidinilo, piperazinilo, 2-oxo-piperazinilo, piperidilo, N-metilpiperidilo, N, N-dimetilpi-peridinio, 2-oxopiperidilo, 2,6-dioxopiperidilo, 2-carbamoil^ -piperidilo, hexa-hidroazepinilo, N-metil-hexa-hidroazepini-lo, N, N-dimetil-hexa-hidroazepinio, hexa-hidro-2-oxoazepi-nilo, 2,7-dioxo-hexa-hidroazepinilo, 2-carbamoil-hexa-hidro-azepinilo, hexa-hidro-1H-1,4-diazepinilo, hexa-hidro-2-oxo-1H-1,U-diazepinilo, octa-hidroazocinilo, N-metilocta-hidro-azocinilo ou N, N-dimetilocta-hidroazocinio. Particularmente preferido entre estes compostos é o substituinte escolhido entre o grupo constituído pelos grupos 2-oxoazetídinilo, piP-rolidinilo, N, N-dimetilpirrolidinio, 2-carbamoípirrolidiní lo, 3-amino-2-oxopirrolidinilo, 2-oxopirrolidinilo, piperidilo ou 2-oxopiperidilo.

Quando p representa o número inteiro 1, pode comportar eventualmente um substituinte escolhido entre o grupo constituído pelos grupos aziridinilmetilo, azetidi-nilmetilo, 2-carbamoilazetídinilmetilo, 2-oxoazetidinilmeti-lo, N-metil-2-oxoazetidinilmetilo, pirrolidinilmetilo, N-me-tilpirrolidinilmetilo, N, N-dimetilpirrolidiniometilo, 2- 21 -oxopirrolidinilmetilo, 2,5-dioxopirrolidinilmetilo, N—(2— -hidroxietil) pirrolidinilmetilo, 2,5-dioxD-N-metilpirrolidi-nilmetilo, 2-carbamoílpirrolidinilmetilo, 2-(N-metilcarbamo-íl) pirrolidinilmetilo, 2-(N, N-dimetilcarbamoíl) pirrolidinilmetilo, 3-amino-2-oxopirrolidinilmetilo, pirazolidinilme-tilo, 3-oxopirazolidinilmetilo, imidazolidinilmetilo, 2,4--dioxoimidazolidinilmetilo, piperazínilmetilo, 2-oxopipera-zinilmetilo, piperidilmetilo, N-metilpiperidilmetilo, N, N--dimetilpiperidiniometilo, 2-oxopiperidilmetilo , 2,6-dioxo-piperidilmetilo, 2-carbamoílpiperidilmetilo, hexa-hidroaze-pinilmetilo, N-metil-hexa-hidroazepinilmetilo, N, N-dimetil--hexa-hidroazepiniometilo, hexa-hidro-2-oxoazepinilmetilo, 2,7-dioxo-hexa-hidroazepinilmetilo, 2-carbamoíl-hexa-hidro-azepinilmetilo, hexa-hidro-1H-1,4-diazepinilmetilo, hexa-hi-dro-2-oxo-1H-1,4-diazepinilmetilo, octa-hidroazocinilmetilo, N-metilocta-hidroazocinilmetilo ou N, N-dimetil-octa-hidro-azociniometilo. Particularmente preferido entre estes grupos é o substituinte escolhido entre um grupo constituído por grupos 2-oxoazetidinilmetilo, pirrolidinilmetilo, N, N-dime-tilpirrolidiniometilo, 2-carbamoílpirrolidinilmetilo, 3--amino-2-oxopirrolidinilmetilo, 2-oxopirrolidinilmetilo, piperidilmetilo ou 2-oxopiperidilmetilo. representa um átomo de hidrogénio ou uma carga negativa. Quando o grupo heterociclícoalicíclico substituído na posiçSo 2 do núcleo pirrolidínico comporta uma estrutura de amónio quaternário, R^ representa uma carga negativa capaz de formar um par com o iâo amónio, pelo que o composto 22 de fórmula geral I forma um sal intramolecular.

Os sais dos compostos de fórmula geral I que são sais comuns aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico podem formar-se, por exemplo no grupo carboxílico em posição 3 da estrutura carbapenémica ou na base pirrolidí-nica ou na base do grupo heterociclico aliciclico na cadeia lateral na posição 2 da estrutura carbapenémica.

Os sais de adição de ácido alcalinos formados no grupo carboxílico citado antes, incluem, por exemplo, sais de um metal alcalino tal como um sal de sódio ou um sal de potássio; sais de metais alcalino-terrosos tais como um sal de cálcio ou de magnésio; sais de amónio; sais derivados de uma amina alifática como, por exemplo, um sal de trimetilamina, de trietilamina, de diciclo-hexilamina, de etanolamina, de dietanolamina, de trietanolamina ou de pro-caína; sais derivados de aralquilamina como, por exemplo, um sal de N,N’-dibenziletilenodiamina; sais derivados de aminas heterocíclicas aromáticas tais como um sal de piridina, pi-colina, quinolina ou isoquinolina; sais derivados de amónio quaternário como, por exemplo, um sal de tetrametilamónio, tetraetilamónio, benziltrimetilamónio, benziltrietilamónio , benziltributilamónio, metiltrioctilamónio ou tetrabutilamó-nio; sais derivados de um aminoácido alcalino como, por exem pio, um sal de arginina ou de lisina.

Os sais de adição de ácido formados na base pirrolidina ou na base do grupo heterociclico aliei- 23 clico incluem, por exemplo, um sal inorgânico como, por exemplo, um cloridrato, um sulfato, um nitrato, um fosfato, um carbonato, um carbonato de hidrogénio ou um perclorato; um sal orgânico como, por exemplo, um acetato, um propionato um lactato, um maleato, um fumarato, um tartarato, um malato um succinato ou um ascorbato; um sulfonato como, por exemplo, um metanossulfonato, um isetionato, um benzenossulfonato ou um p-toluenossulfonato; um sal e um sal derivado de um ami-noácido como, por exemplo, um aspartato ou um glutamato. A expressão éster não tóxico dos compostos de formula geral I significa um éster comum aceitável sob o ponto de vista farmacêutico formado no grupo carbaxílico na posição 3 da estrutura carbapemmica. Incluem, por exemplo, um éster como um grupo alcanoiloximetilo como, por exemplo, um grupo acetoximetilo ou pivaloiloximetilo, um éster com um grupo alcoxicarboniloxialquilo como, por exemplo, um gru po l-(etoxicarboniloxi)etilo, um éster com um grupo ftalidilo e um éster com um grupo (2-oxo-1 ,3-dioxol-4-il 5-substituído)-metilo como, por exemplo, um grupo (5-metil-2-oxo-1,3-dio-xol-4-il)metilo.

Os compostos de fórmula geral I de acordo com a presente invenção incluem compostos de fórmula geral - 2U -

(Ι-a) na qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo me-tilo; representa um grupo de fórmula geral =NRg, -CONCR^q)- ou -CON(R10)CO- em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, formimidoílo ou ac£ toimidoílo e R^q representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior; e m e n iguais ou diferentes, representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 3, com a condição de m e n não representarem simultaneamente zero; um composto de fórmula geral

(1-b) 25 na qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo me-tilo; A^ representa um grupo de fórmula geral =NR^ , -CON(R^q)- ou -CON(R1q)CO- em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, formimidoílo ou acetoimidoílo e R^q representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior; e m, n e p iguais ou diferentes representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 3, com a condição de m e n não representarem simultâneamente zero; e um composto de fórmula geral

(1-c) na qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo me-tilo; R^ representa um átomo de hidrogénio ou uma carga negativa; representa um grupo de fórmula geral =NR2 , =N(R.j i )R.j2 » -CON(R^q)- ou -CON(R^q)CO- em que R^ representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, for mimidoílo ou acetoimidoílo, R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior; e R^ e R12 » iguais ou diferentes, representam, cada um, um grupo alquilo inferior; e m, n e p iguais ou diferentes, representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 3, com a condição de m e n 26 não representarem simultaneamente zero.

Entre os compostos de fórmulas gerais (I-a) e(I-b), preferem-se aqueles em que representa um grupo de fórmula geral -CON(R^q)- ou = NR^ .

Entre os compostos de fórmula geral (I-c) preferem-se aqueles em que A2 representa um grupo de fórmula + geral =NRg , =N(Rn)R12 ou -CON(R1Q)-.

Exemplos específicos dos compostos de fórmula geral I incluem, por exemplo, os compostos seguintes. 27

(ch2j0-^r2 (CH2),^r3

Quadro I

:acro 2

No. R1 R 2 —CH A No. R1 /(ch2)çV-r2 -CH A ^(CH2)r-^R3 25 H '^X^NCH = NH 39 H 25 H 40 H Ύ 27 H MefQ,0 41 H 0 'v^SjMe 28 H 42 H YY0 k_-NH 29 H Υί X—NMe 0 43 H Y"r° k^NMe 30 H — NH XX 44 H \ o^A> 31 H >-NMe U* 45 H 0¾¾ 32 H v-f° l^NH 46 H XI ο^ίΡ° 33 H y-f° k^NMe 47 H XX 34 H H 0 48 H ΥΎ0 SrNH 0 35 H LnJ>a Me 0 49 H ΥΎ0 X^NMe 0 36 H H ''s^N^.O 50 H Yt° X<NEt 0 37 H Me 51 H _^conh2 —NH 38 H XÃ. 52 H N._xonh2 1_NMe 29

Quadro 3

30

Quadro Μ

No. R1 —Ch a ^<CH2)r^R3 No. R1 /(Ch2)0^r2 —Ch a '-(CH2)r^<SR3 79 H \ sNH2 90 H H ^NN ^Ν·Χθ H 80 H 91 H xr Me 81 H 's^vy<^NH2 XlXn H 92 H H γΝγθ Υ)Χθ H 82 H nh2 xX H 93 H v^Nv^0NH2 H 83 H NH, Vy° 94 H H yx ^N'X0NH2 84 H υύ° h2nA^h 95 H <b H 85 H H Ό H 96 H -Cf H 86 H Me Ό H 97 H j—N^° \—N-Xn H 87 H H Y) Me 98 H H -χΝχ XONH2 88 H Me Ό Me 99 H Y— ΗΝγΝΗ 0 89 H xy H 100 H HNk^Xo H 31 '".iadro 5

1 r-j 0. R1 /^CH2^o'X/R No. R1 R 2 /(CH2)q></R —Cm a \(CH2)r-Y.R3 “CM A ^<CH2)r^R3 101 H 1 1 Ο^Ν'ΝΗ 112 H Ό H ch2ch2oh 102 H "p 1—nch2conh2 113 H >'T^nch2ch2oh 103 H —NCHjCONMe 114 carga nega tiva 104 H 115 H -O» ch2conh2 105 H Ό 116 H CH2CONMe2 H 106 H Ό 117 H (^NMe <Íh2conh2 107 H Ό \ 118 H -O CH2CONMe2 Me 108 H >NC^nch2conh2 119 carga nega tiva -Ci'm ^ ''-Me 109 H ^T^NCHjCONMe 120 carga nega- "Q tiva Me Me 110 H Yi 1—nch2ch2oh 121 H Ό- 1 1 1 H 'P 122 H Ό ch2ch2oh H 32

Quadro 6

No. R1 —CH A NCH2)Ar3 No. R1 ^(Ch2)c>/r2 123 H Ό H 127 Carga nega tiva Χ?<μ! 124 H "Ό l NMe 128 Carga nega tiva "O '—N Me” ^Me 125 H Ό Me 129 Carga nega tiva Ό Ué ^Me 126 H Ό Me

>-CH A χ(οη2)γΛη3 M/-s R1 /CCHj)^2 Mn R1 /(CH2)qx-r2 —ΓΗ A NO. Π —CH A ^cch^-x^s 1 \u. "-(CH2V^r3 130 H 142 H X? H 131 H "τη MeN-1 143 H "O Me 132 H "τη HN = CHN-1 144 H "u CH = NH 133 H Τγί Me (HN = )CN-1 145 H Xo C(= NH) Me 134 H O, 146 H X) 135 H "p 1—NMe 147 H MeN^) 136 H "p 1—NCH = NH 148 H HN = HCfC^ 137 H T i 1-NC(= NH) Me 149 H Xj 138 H HNs___J 150 H Vp^NMe u 139 H MeN-^J 151 H ^^NCH = NH 140 H Vi HN = HCN-^χ 152 H Oh 141 H —1 Me (HN = )CN-^P 153 H ''X^NMe adro 8

No. R1 —CH (CH2),-Xs.r3 No. R1 /CCH2)q>/r2 -CH A ^(CH2)r-^R3 1 54 H "^X^NCH = NH 168 H "V^NMe Cio 155 H HN — ^0 169 H "ÒH 1 56 H — 170 H 0 157 H 0 -NH 171 H Y"f° Ι^,ΝΗ 158 H 0 —NMe 172 H ΥΎ0 l^NMe 159 H T-NH Cio 173 H 160 H N-NMe Ub 174 H 0 Me 0 161 H "C f° NH 175 H TI O^iTD 162 H T; f° NMe 176 H 0¾¾ 163 H H ° 177 H ΥΎ° C^NH 0 164 H Me 0 178 H yt° k^NMe 0 165 H H 179 H Y'?0 VNEt 0 166 H Me 180 H V._xonh2 I—NH 167 H 'V^'NH U0 181 H ^_xonh2 I—NMe 35

Quadro 9

36

Quadro 10

No. _ 1 /(ch2)5^r2 No. R1 m:h a R —CH A ^CCH2)^<s,r3 ^(CH2)r-*vR3 208 H "N_-NH2 H ^ 219 H XX H 209 H \_rNH2 0? 220 H XX Me 210 H 'n^Y'NH2 H 221 H H γΝγθ Η 211 H nh2 xX H 222 H v£L^:onh2 kNY H 212 H NH, Vy° 223 H H XX YXX:onh2 213 H yY η,Λ*" 224 H -o H 214 H Ό H 225 H -σ' H 215 H Me Ό H 226 H y— '—N^sq H 216 H H X) Me 227 H H -O V”ÍJ^nC0NH2 217 H Me Ό Me 228 H yy HNv^NH T 0 218 H XX Nvr H 229 H HIN^o H 37

Quadro 11

No. R1 /(ch2)0^r2 —CH A No. R1 /«η2)οΥ —CH A ^(CH2)r->YR3 230 H Yn οΑν'ΝΗ H 241 H Ό ch2ch2oh 231 H Υί 1—nch2conh2 242 H ''X^nch2ch2oh 232 H Υί 1—NCH2CONMe 243 Carga nega tiva 233 H ch2conh2 244 H -O» 234 H Ίρ CH2C0NMe2 245 H H 235 H Ό ch2conh2 246 H 236 H Ό CH2CONMe2 247 H “O Me 237 H '>X3nch2conh2 248 Carga nega tiva -0^Me ^ ''Me 238 H '^C^CH2C0NMe 249 Carga nega tiva “Q Me Me 239 H Υί 1—nch2ch2oh 250 H Ό- 240 H Ίρ ch2ch2oh 251 H Ό H 38

Quadro 12

No. R1 /(ch2)0^/r2 —CH A ^(CH2)r->^R3 No. R1 ^cch2)q>^r2 -CH A 252 H Ό H 256 Carga nega tiva X>- 253 H 257 Carga nega tiva Me Me 254 H X) Me 258 Carga nega tiva Ό MÍ ""Me 255 H X) Me 39

Η

CH2—CH (ch2)„->^r2 (CH2),->^r3 Η No. R1 /(ch2)q^r2 No. R1 /CCH2)oV"r2 _ru δ —Uri A ^(CH2)r->\R3 \(CH2)r-XXR3 259 H 271 H H 260 H "π MeN-1 272 H Ύο Me 261 H X 2 II o tf 273 H 'CJ CH = NH 262 H Me(HN =) CN-1 274 H C(= NH) Me 263 H PH 275 H X) 264 H Ύί 1—NMe 276 H MeN^3 265 H X 2 II X o P 277 H 9 II 2 X 266 H Υί 1—NC(=NH)Me 278 H ONH 267 H 279 H 268 H MeN^P 280 H = NH 269 H p r II 2 I 281 H 270 H Me ( HN =)CN-vP 282 H ^X^NMe ko

Quadro 14

Ul

Quadro 15 R1 /(CH2)5>/R2 R1 /(CH2)q^R No. —CH A No. —CH A '-(CH2)f-XVR3 \(CH2)r^R3 31 1 H x /:onh2 I-NCH = NH 324 Carga nega tiva V; 1 S^C^CONMe 2 Me NMe 2 312 H 325 Carga nega tiva \ .conh2 Me NMe 313 H 326 Carga nega- 'XTj tiva \ 314 H ^}"^<:0ΝΜβ2 327 H LnJn^om^ CH = NH 315 H ^onh2 328 H \ ^conh2 CH = NH 316 H Vn Sf^ONU., 329 H \ H2NOC I4 * CH = NH 317 H H 330 H 318 H ΧΓ"2 331 H '^Ck^conh, Me Me 2 319 H 332 Carga nega- "Q h2noc h tiva Me"” ^Me 320 H H2N0C Me 333 Carga nega tiva Me sMe 2 321 Carga nega tiva Me Me 334 H \^^conh2 k^NH 322 Carga nega tiva 'tOL XN:onh_ Me ^Me 2 335 H ^^xonh2 l^NMe 323 Carga negativa_ 'tri ^OcONHMe Me xMe 336 Nega- tive charge \^^conh2 I +tMe ^ NMe - k2

Quadro 16

No. R1 /(ch2)qV-r2 —CH A No. R1 /(Ch2)q^r2 Ch a ^(CH2)r^.R3 337 H \ ^NH2 Χν-Ύ, H ^ 348 H YX H 338 H \ ^NH2 cAr 349 H YY Me 339 H H 350 H H γΝγθ XAq 340 H nh2 XX H 351 H \Χ^ΟΝΗ2 kfY H 341 H NH, vr k^NH 352 H H XX XYN»nh2 342 H r/ h2nO* 353 H cb H 343 H H Y) H 354 H -Ô* H 344 H Me Y) H 355 H /-N^O ^—nAq H 345 H H Y) Me 356 H H -Cl ' H VXONH2 346 H Me Y) Me 357 H Y—f° ΗΝγΝΗ 0 347 H YY H 358 H H

Quadro 17

Quadro 18

No. R1 R2 —CH A \(CH2)r^,R3 No. R1 /(Ch2)c^r2 —CH A ^<CH2>f->^R3 381 H Ό H 385 Carga nega tiva X^<Me >—' ^Me 382 H ''X^NMe 386 Carga nega tiva Ό Mr ^Me 383 H Ό Me 387 Carga nega tiva v Me Nde 384 H Ό Me - J*5

Η -CH2—CH ích2;,-x/R (CH2),-^r3 'Ν' Η

- k6 -

Quadro 20

No. R1 /(ch2)qV"r2 —CH A ^CCH2)f->^R3 No. R1 „ /<ch2Wr2 —CH A \(CH2)r->^R3 412 H = NH 426 H ''V^NMe U 413 H HN—-v 427 H 0 "N^nh 414 H Meli-- 0 428 H 0 Vv^%Me 415 H Vi __NH cr 429 H Y>° Ι^,ΝΗ 416 H ^—NMe cr 430 H ΥΎ° Ι^,ΝΜβ 417 H N-NH O0 431 H 418 H N-^-NMe u0 432 H Υι 419 H V-f° I^NH 433 H Ή ο^ίΓο 420 H "Ί—f° l^NMe 434 H 421 H H 0 435 H γγ° 0 422 H "Y"ln Me u 436 H ΥΎ° k^NMe 0 423 H H Y^-Nn^O Me 437 H γγ° VNEt 0 \ ΧΟΝΗ, 424 H 438 H —ΝΗ 425 H ^y^-NH 0Λ 439 H _^conh2 —NMe

Quadro 21

No. R1 —CH A 3 No. R1 /CCH2)q^r2 -CH A ^(CH2)r->^R3 440 H \_^conh2 ^-NCH = NH 453 Carga nega tiva ^""CONMe-, Me Nvle * 441 H ^onh2 454 Carga nega tiva \ xonh2 Me ^Me 442 H ^ÍX^CONHMe 455 Carga nega tiva Xj "“Λ. 443 H ^£j'^s'CONMe2 456 H CH = NH 444 H \_ M-PC0NH2 457 H v. ^C0NH2 ψ CH = NH 445 H ^CONM*, 458 H u HjNOC i CH = NH 446 H \_^CONH- Xf H 459 H TX ^N^^CONHj 447 H xr* Me 460 H '^Cv^CONH, Me * 448 H η2Λ 461 Carga nega tiva X) Me' '"Me 449 H H2N0C^Me^ 462 Carga nega tiva ^^^CONH-Me xMe * 450 Carga nega tiva Xõ? Me ^Me 463 H L^nh 451 Carga nega tiva ONqScONH, Me ^Me 2 464 H \^\4:onh2 X^NMe 452 Carga nega- tiva_ Xi j^OCONHMe Me xMe 465 Carga nega tiva I *XMe ^ "Me 48

Quadro 22

No. R1 /(Ch2)qV^r2 —Cr· A ^(CH2)r->^R3 No. R1 /(CH2)q^r2 —CH A \(CH2)r-X^R3 466 H \ ^NH2 477 H H tx H 467 H \_X*H2 Ar 478 H H γ^γΟ Me 468 H 'S^'^S^NH2 H 479 H H γΝγ° H 469 H nh2 u, H 480 H γ,Ν^0ΝΗ2 kN^ H 470 H NH, γΥ° 481 H H Υχ ^N'XONH2 471 H Y/ h2nA^h 482 H x:b H 472 H H Y) H 483 H -σ' H 473 H Me Y) H 484 H /—N \—Ν'Χπ H 474 H H Y) Me 485 H H -cx 475 H Me Y) Me 486 H "ί—r° ΗΝγΝΗ 0 476 H XY H 487 H hinA> H 49

Quadro 23

No. R1 /(ch2)çV^r2 —CH A ^(0Η2)γ-^β3 No. R1 /(CH2)c^r2 —CH A YCH2)r->^R3 488 H I I o^SrNH 499 H Ό ch2ch2oh 489 H I—nch2conh2 500 H VV(3nCH2CH20H 490 H Υί —NCH2CONMe 501 Carga nega tiva OO ^Me 491 H ch2conh2 502 H 492 H CH2C0NMe2 503 H ~0 H 493 H Ό 6h2conh2 504 H 494 H Ό CH2C0NMe2 505 H ~0 Me 495 H VX3nch2conh2 506 Carga nega tiva -0<: 496 H ^X3NCH2CONMe 507 Carga nega tiva ~Q) Me Me 497 H Υί L—nch2ch2oh 508 H X> 498 H V ch2ch2oh 509 H Ό H 50

Quadro 2M

No. R1 —-CH a ^CCH2)r^R3 No. R1 ^(ch2)q^r2 —CH A \(CH2)r-^R3 510 H Ό H 514 Carga nega tiva 511 H 515 Carga nega tiva "O '—N Me ^Me 512 H Ό Me 516 Carga nega tiva V Me ^Me 513 H Ό Me 51

Η (CH2)2- (ch2)0-x/r2 (CH2)r->\R3

Quadro 25 'Ν' Η No. p1 No. R1 _ru a π —CH A ^(CH2)r-^sR3 ^(CH2)r^R3 517 H 529 H H 518 H Yn MeN-1 530 H 'tJ Me 519 H R o II 2 X 531 H Ύο CH = NH 520 H Υί Me(HN =)CN-1 532 H 'tJ C(= NH)Me 521 H 'Dh 533 H 522 H Υί I—NMe 534 H MeN^) 523 H Υί I-NCH = NH 535 H HN = HCN^) 524 H Υί I—NC( = NH) Me 536 H Ό" 525 H 537 H 526 H MeN>^ 538 H \^JCH = NH 527 H HN = 539 H O- 528 H Me(HN =)CN^J 540 H ^l^^NMe 52

Quadro 26

No. R1 „ /Kh2W"r2 —CH A N(CH2)Ar3 No. R1 /(CH2)q^r2 -CH A ^(CH2)r-^R3 541 H r MCH = NH 555 H V^NMe Ia 542 H HN — 'o 556 H 'ir 543 H MeIS — 557 H 0 '^^SjíMe 544 H cr —N IH 558 H γγ° 545 H Vi λ—NMe 0 559 H A° Í^NMe 546 H T-NH Oe 560 H Vn 547 H A-NMe Oo 561 H 0 Me u 548 H T; f° MH 562 H Tl 549 H "O f0 MMe 563 H TI °Aít° 550 H "U0 H 0 564 H AA S<NH 0 551 H "u Me 0 565 H VA A^NMe 0 552 H H \^N^-0 566 H Yt° S<NHt 0 553 H Me \^Nvj>0 567 H Vj_a:onh2 1_NH 554 H "V^nh IA 568 H \ AONH, —NMe

Quadro 27

Quadro 28

No. R1 /(ch2)q>/r2 No. R1 /(ch2)q^/r2 —CH A L/Γ: A '-(CH2)r^SR3 595 H \_^NH2 NnXo H ^ 606 H xx H 595 H \ ^NH2 o*V 607 H X/ τ'τ Me 597 H \^>γ/ΝΗ2 ΧκΧ) H 608 H H γΝγθ XXo H 598 H nh2 XX H 609 H ^n^oonh2 H 599 H NH, vx k^NH 610 H H XX ^'XONHj, 600 H YY h2nA^h 611 H H -O H 601 H Ό H 612 H -σ' H 602 H Me Ό H 613 H /—N'^0 “Y-A H 603 H H Y) Me 614 H H CN1 [JXonHj 604 H Me Ό ' Me 615 H X—Y° ΗΝγΝΗ 0 605 H XY H 616 H Χλο Η 55

Quadro 29

No. R1 —CH^ '^ch2)c^r2 KCH2)Xr3 No. R1 ^(ch2)q^r2 —CH A ^(CH2)r^R3 617 H οΑν'ΝΗ H 628 H Ό ch2ch2oh 618 H —nch2conh2 629 H Vt3^CH2CH2OH 619 H -NCHjCONMe 630 Carga nega tiva Oo* Me 620 H \ φ ch2conh2 631 H “O» 621 H CH2C0NMe2 632 H O) H 622 H Ό ch2conh2 633 H (3^Me 623 H Ό én2C0NMe2 634 H “0 Me 624 H 'ΝΧ^ΝΟΗ2ΟΟΝΗ2 635 Carga negativa -0“· 625 H ^X^NCHjCONMe 636 Carga nega tiva Q Me Me 626 H Ύί I—nch2ch2oh 637 H Ό- 627 H V ch2ch2oh 638 H Ό H 56

Quadro 30

No. R1 —CH A ^(CH2)r->^R3 No. R1 /(ch2)0^r2 —CH A ^CCH2)r-^R3 639 H Ό H 643 Carga nega tiva ''CXi5 640 H ^X^NMe 644 Carga nega tiva X? N— N Me” '''Me 641 H Ό Me 645 Carga nega tiva V Me ^Me 642 H Ό Me 57 57

Η -(CH2)2—CH (ch2)q-x/R2 (CH2)r->\R3

Quadro 31 'Ν' Η

Quadro 32

No. R1 /(Ch2)qV-r2 —CH A No. R1 ^cch2)q^r2 —“CH A \(CH2lr-^R3 670 H = NH 684 H X^YMMe Χ.Λ 671 H hnHL0 685 H QÍNH 672 H Χί MeN-L 0 686 H 0 ^^SvlMe 673 H 687 H ΥΎ0 l^-NH 674 H Υί λ—NMe 0 688 H YY° l^NMe 675 H X-NH ο0 689 H cAftA) 676 H X-NMe u, 690 H Yi 0 Me 0 677 H 'ΧΧ 691 H XI oYPo 678 H xc 692 H XI o M. 0 679 H Vi Η 0 693 H YT° Xf-NH 0 680 H 'ΧνΛ-, Me 0 694 H Yt0 N^NMe 0 681 H Η 695 H Yt0 VNEt 0 682 H Me 696 H ^CONH, 1—NH 683 H <X 697 H N._xonh2 1—NMe 59

Quadro 33

Quadro

No. R1 /(Ch2)q^r2 —CH A ^(CH2)r-^R3 No. R1 —ΓΗ Δ Π wl l f~\ 724 H \ ^nh2 XX H ^ 735 H XX H 725 H \ ,^NH2 Zr h 736 H XX Me 726 H XkW) H 737 H H γΝγθ Xj-Xo H 727 H nh2 XX H 738 H v^X^x;onh2 H 728 H NH, xX* l^NH 739 H H XX ΧχΧΟΝΗ2 729 H γν° h2nA^nh 740 H H -O H 730 H H Ό H 741 H -& H 731 H Me "ô H 742 H '—N^o H 732 H H X) Me 743 H “CjXcNH, 733 H Me X) Me 744 H x— ΗΝγΝΗ 0 734 H H vNyO U H 745 H ην^νΛο Η

Quadro 35

No. R1 —CH A ^),^3 No. R1 /(CH2)q^/r2 —CH A '-(CH2)r-XVR3 746 H Γ Ί O^N'nh ^ H 757 H Ό ch2ch2oh 747 H Yi 1—nch2conh2 758 H ^C^NCHjCHjOH 748 H NCH2C0NMe 759 Carga nega tiva Oc 749 H ch2conh2 760 H KDh 750 H CH2C0NMe2 761 H “0 H 751 H Ό ch2conh2 762 H 752 H Ό CH2C0NMe2 763 H Ό Me 753 H ""X^NC^CONHj 764 Carga nega tiva Y7vm· 754 H VNC^NCH2C0NMe 765 Carga nega tiva ~Q Me Me 755 H Vi 1—nch2ch2oh 766 H Ό- 756 H "φ ch2ch2oh 767 H Ό H

Quadro 36

No. R1 —OH A No. R1 /(ch2)q^r2 —CH A ^(CH2)f->\R3 'v'(CH2)r->\R3 Carga 768 H Ό 772 nega tiva 769 H H 773 Carga nega tiva 'O '—N Me" ^Me Carga 770 H Ό Me 774 nega tiva 'Q Me xMe 771 H Ό Me 63

Η

•(CH2)3—CH

Quadro 37 (CH2)q -χ^ (CH2),-^r3 'Ν' Η No. R1 /(ch2Wr2 No. R1 a vl * A \(CH2),-X;r3 ^(CH2)r-^R3 775 H 787 H H 776 H MeN-1 788 H "σ Me 777 H Υί HN = CHN-1 789 H CH = NH 778 H Υί Me(HN=)CN-1 790 H C(=NH)Me 779 H Ό. 791 H X) 780 H Yj 792 H MeNU^ 781 H Υί I—NCH = NH 793 H hn=hoC^D 782 H Yn I—NC{= NH) Me 794 H Ό" 783 H 795 H *^^NMe 784 H Μβί'Κ___J 796 H v^>vlCH * NH 785 H Vi HN = HCNs^ 797 H x> 786 H Me (HN =) CN«___J 798 H ''T^NMe

Quadro 38

No. R1 ^(ch2)^r2 —CH A \(CH2)r-^R3 No. R1 /Cch2)q^r2 —CH A ^(CH2)r-^R3 799 H ^X^NCH = NH \ 813 H \^NMe Xa 0 800 H 1 ΠΝ—i0 814 H x> 801 H MeJ- *0 815 H 0 '''l^SjlMe 802 H 816 H Y>° 803 H ^—NMe 0 817 H Yt° I^^Me 804 H T-NH τ 818 H V-i 0AnA0 805 H A-NMe Xa 819 H ,ΧνΧ. 0 Me 0 806 H Y_f° l^NH 820 H TI οΑΛο 807 H "t— l^NMe 821 H Ti 808 H LnA0 H 0 822 H Y^° S<nh 0 809 H "O ^NAn Me 0 823 H ΥΎ0 k^NMe 0 810 H H ''n^N^^-0 824 H VA ^NEt 0 811 H Me \^N^0 825 H v. ^CONH, 1—NH 812 H AVAJH XA 826 H ^_^conh2 —NMe 65

Quadro 39

66

Quadro UO

No. R1 /(ch2)q>/r2 —Ch a No. R1 /(ch2)c^r2 A X(CH2)f-\R3 853 H \_^NH2 YnXo H ^ 864 H X\ H 854 H 865 H H ^l\r Me 855 H H 866 H H -γΝγΟ H 856 H nh2 "Q, H 867 H \^n^conh2 Xr H 857 H NH, VX 868 H H Yx ^N^C0NH2 858 H γγο h2n^nh 869 H -ô H 859 H Ό H 870 H -Õ" H 860 H Me T) H 871 H y— '—N^o H 861 H H X) Me 872 H -<?u 862 H Me Ό Me 873 H yy ΗΝγΝΗ 0 863 H Xf H 874 H hn-n-^o H 67

Quadro 41

68

Quadro 42

No. R1 /(ch2)q>/r2 —CH A ^-(CH2)r-^R3 No. R1 /(CH2)qV-r2 —CH A ^ΚΗ2)γ-*^3 897 H Ό H 901 Carga nega tiva N—' ^Me 898 H 902 Carga nega tiva Ό Me" '"'Me 899 H Ό Me 903 Carga nega tiva Ό Me' xMe 900 H Ό Me 69 69

2 Η

-(CH2)3—CH (ch2)q-></'r

A

(CH2)r->L

R 'Ν' Η 3

Quadro 44

No. R1 ^(ch2)q^r2 —CH A '^(CH2)r-XSR3 No. R1 /(ch2)0^r2 —CH A ^(C.w^-x^a 928 H '^X^NCH = NH 942 H la, 929 H hIZL0 943 H x5h 930 H MeN-Zv 0 944 H 0 s^SjlMe 931 H ^—NH 0 945 H ΥΎ0 l^NH 932 H ^—NMe 946 H Y"?0 L^,NMe 933 H Ύ-NH O0 947 H 934 H Ύ-NMe u0 948 H πΧν-Χ0 ° Me ° 935 H V-f° k_.NH 949 H yi cAíPo 936 H \-f0 l^NMe 950 H XI °Aíf° 937 H H 0 951 H ΥΎ0 S<NH 0 938 H Me 0 952 H YT° L^-NMe 0 939 H H v^Nv^O Me 953 H γΥ S<NEt 0 \ AOnh, 940 H v^Nvj.0 954 H —NH 941 H Y^nh LA 955 H V._xonh2 I-NMe 71

Quadro

72

Quadro 46

I Λ Ρ ^ ^(Ch2)q>/R R1 /(CH2)fl>/R2 NO. π —Ln A ^CCH2)r-X^R3 |\JO. Π 982 Η \ fNH2 ΧνΑ/-, 993 H XX H 983 Η 994 H ty Me 984 Η H 995 H H AjAsq H 985 Η nh2 ΊΟ. H 996 H ^N^/C0NH2 k-N·^ H 986 Η NH, 'yA k^NH 997 H A-, 987 Η yY h2nA^nh 998 H XX '- H 988 Η H Ό H 999 H -cr H 989 Η Me Ό H 1000 H /— \—nA H 990 Η H X) Me 1001 H H -Cl U[jX0NH2 991 Η Me Ό Me 1002 H W° ΗΝγΝΗ 0 992 Η H γγ Xk H 1003 H XXo H 73

Quadro 47

Quadro 48

No. R1 /(ch2)q^r2 —CH A ^(CH2)r^R3 No. R1 /(ch2)q^r2 ~CH A ""(0Η2)γ-Χ^3 1026 H Ό H 1030 Carga nega- tiva ''GcmI 1027 H Y"t L NMe 1031 Carga nega tiva 'Ό N—N Me" '''Me 1028 H Ό Me 1032 Carga nega tiva Ό Me" '''Me 1029 H Ό Me 75

Entre os compostos citados antes, prefe- rem- se os identificados pelos núme ros 5 , 7, 9, 13, 14, 20, 23, 24, 26, 27 , 28, 32, 34,44, 45, 54, 63, 79, 85, 89, 90, 95, 96, 99, 100, 11 4, 11 5, 117 r, 11 9,121 , 122 , 124, 125 , 127 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142 , 143, 144 , 149, 152, 153, 155, 156, 157, 159, 161 , 163, 167, 171 , 173, 174, 180, 183, 192, 201, 205, 208, 214, 218, 224 , 225, 227, 228 , 229, 233, 237 , 239, 240, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251 , 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 263, 265, 267, 271, 273, 278, 281, 282, 284, 286, 290, 292, 302, 312, 313, 314, 343, 353, 354, 357, 372, 373, 375, 377, 379, 380, 382, 383, 385, 386, 388, 389 , 390, 392, 393, 394, 396, 398, 400, 401 , 402, 407 , 410, 411, 413, 415, 417,419 , 421 , 431 , 438, 441 , 450, 459, 463, 466, 472, 476, 482, 483, 485, 486, 495, 497, 498, 500, 501 , 502, 503, 504, 505, 506, 507, 508, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515 e 516.

Entre estes compostos preferem-se especial mente os seguintes: 34 ácido (5R, 6S)-6-[ (R)-1-hidroxietil ]-2--[(2S,4S)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-U-il-tio]-1-car-bapen-2-em-3-carboxílico, 134 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(azeti-din-3-il)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-l-hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 136 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N-for- 76 mimidoilazetidin-3-il)pirrolidin-M-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 138 ácido (1R, 5S, 6S)-6-[(R)-l-hidroxietil ] -1-metil-2-[(2S, MS)-2-(pirrolidin-2-il)pirrolidin-M-il-tio]--1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 1M2 ácido (IR, 5S, 6S)-6-[(R)-l-hidroxietil] -1-metil-2-[(2S, MS)-2-(pirrolidin-3-ilJpirrolidin-M-il-tio]--1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 143 ácido (1R , 5S , 6S)-6-[(R)-1 -hidroxietil ]--1-metil-2-[{2S,MS)-2-(N-metilpirrolidin-3-il)pirrolidin-M-il--tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, UM ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,MS)-2-(N-formi-midoilpirrolidin-3-il)pirrolidin-M-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil ]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 1M9 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-metil-2-[(2S,MS)-2-(piperidin-3-il)pirrolidin-M-il-tio]--1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 152 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-metil-2-[(2S,MS)-2-(piperidin-M-il)pirrolidin-M-il-tio ]--1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 153 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-metil-2-[(2S,MS)-2-(N-metilpiperidin-M-il)pirrolidin-M-il--tio ]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 155 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,MS)-2-(2-azeti-dinon-M-il)pirrolidin-M-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1- 77 -metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 157 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-azeti-dinon-3-il)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1--metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 159 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]-- 1-metil-2-[ (2S,4S)-2-(2-pirrolidon-5-il)pirrolidin-4-il--tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 161 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]--1-metil-2-[(25,43)-2-(2-pirrolidon-3-il)pirrolidin-4-il--tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 163 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]--1-metil-2-[(2S, 4S)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-4-il--tio ]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 183 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-carba-moilpirrolidin-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxie-til ]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 192 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N, N-di-metil-3-pirrolidinio)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxie-til ]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 208 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-amino--2pirrolidon-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 214 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil ]--1-metil-2-[(2S,4S)-2-(2-piperazinil)pirrolidin-4-il-tio]-1--carbapen-2-em-3-carboxílico, 78 218 ácido (1R,5S6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-meti1-2-[(2S,4S)-2-(3-oxopiperazin-5-il)pirrolidin-4-il--tio]-1-carbapen-2-em-3-carbaxílico, 224 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(hexa--hidro-1H-1,4-diazepin-6-il)pirrolidin-4-il-tio ]-6-[(R)-1--hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 225 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(hexa--hidro-2-oxo-1H-1,4-diazepin-6-il)pirrolidin-4-il-tio]-6- -[ (R) -1 -hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxí1ico, 240 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil] -2-[(2S,4S)-2-[N-(2-hidroxietil)pirrolidin-3-il]pirrolidin--4-il-tio]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 243 (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N,N-dimetil--4-piperidinio)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-car-boxilato, 244 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(hexa--hidroazepin-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil] -1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 246 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil ]-1 -metil-2-[(2S,4S)-2-(N-metil-hexa-hidroazepin-4-il)pir rolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico 248 (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N,N-dimetil--hexa-hidro-4-azepinio)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil ]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato, 250 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil] -1 -meti1-2-[(2S,4S)-2-(octa-hidroazocin-5-il)pirrolidin-4-il -tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 79 251 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(octa-hidroazocin-4-il)pirroli-din-4-ii-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 253 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(N-metilocta-hidroazocin-5-il)pir rolidin-4-il-tio ]-1-carbapan-2-em-3-carboxílico, 25^ ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-2-[(2S ,4S)-2-(N-metilocta-hidroazocin-4-il)pir rolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 256 (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N,N-dimetil-octa-hidro-5-azocinio)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-l-hidroxi-etil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato, 257 (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(NfN-dimetil-octa-hidro-4-azocinio)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato, 290 ácido (5R,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]-2--[(2R, 4S)-2-(2-pirrolidon-3-ilmetil)pirrolidin-4-il-tio]-1--carbapen-2-em-3-carboxílico, 392 ácido (1R,5S,6S)-2-[.(2R,4S)-2-(azetidin--3-ilmetil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1--metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 39^ ácido (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(N-formi midoilazetidin-3-ilmetil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidro xietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 400 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietilJ -1-metil-2-[(2R,4S)-2-(pirrolidin-3-ilmetil)pirrolidin-4-il--tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 80 ^01 ácido (IR,5S ,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-meti1-2-[(2R,4S)-2-(N-metilpirrolidin-3-ilmetil)pirroli-din-4-il-tio> 1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 402 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(N-for-raimidoilpirrolidin-3-ilmetil)pirrolidin-4-il-tioJ-6-[(R)-1--hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 413 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-azeti dinon-4-ilmetil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil ]--1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 415 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-azeti dinon-3-ilmetil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 417 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]--1-metil-2-[(2R,4S)-2-(2-pirrolidon-5-ilmetil)pirrolidin-4--il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 419 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-— 1—meti1 — 2—[(2R,4S)-2-(2-pirrolidon-3-il-metil)pirrolidin-4--il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 421 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]--1-metil-2-[(2R,4S)-2-(2-pirrolidon-4-ilmetil)pirrolidin-4--il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 441 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-car-bamoil-pirrolidin-4-il-metil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1--hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 450 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(N,N-di-metil-3-pirrolidiniometil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hi-droxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 81 466 ácido (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(3-amino-2-pirrolidon-4--ilmetil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carboxílico, 476 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil2 -1-metil-2-[(2R,4S)-2-(3-oxopiperazin-5-il-metil)pirrolidin--4-il-tio>1-carbapen-2-em-3-carboxílico , e 498 ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxi -etil]-2-[(2R,4S)-2-[N-(2-hidroxietil)pirrolidin-3-ilmetil]-pirrolidin-4-ii-tio]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico.

Especialmente preferidos são os compostos N2S. 142, isto é, o ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-metil-2-[(2S,4S)-2-(pirrolidin-3-il)pirrolidin-4-il-tio ]--1-carbapen-2-em-3-carboxílico e N2 152, isto é, o ácido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(pipe-ridin-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxí-lico.

Descreve-se seguidamente o processo para a preparaçSo de compostos de acordo com a presente invenção.

Faz-se reagir um reagente activante até à obtenção de um composto de fórmula geral 82

R

Ό Ο COOR (II) lk na qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo me- tilo; representa um átomo de hidrogénio ou um grupo pro- tector do radical hidroxi; e R^ representa um átomo de hi drogénio ou um grupo protector do radical carboxilo, no seio de um dissolvente orgânico inerte e na presença de uma base para se obter um derivado reactivo de fórmula geral

COOR na qual R, R^ e R1J+ têm os significados definidos antes e Y representa um grupo eliminável.

Como dissolvente orgânico inerte pode uti- - 83 - lizar-se nesta reacção, por exemplo, o éter etílico, o tetra -hidrofurano, o dioxano, o benzeno, o tolueno, o cloroben-zeno, o cloreto de metileno, o clorofórmio, o tetracloreto de carbono, o dicloroetano, o tricloroetjierD, a acetona, o acetato de etilo, o acetonitrilo a N,N-dimetilformamida, a triamida hexametilfosfórica ou uma mistura destes dissolventes. Prefere-se especialmente o acetonitrilo e o benzeno. A base utilizada na reacção pode ser, por exemplo, uma amina alifática terciária tal como a trimetil-amina, a trietilamina, a N,N-diisopropiletilamina, a N-metil-morfolina, a N-metilpirrolidina, a N-metilpiperidina, a N,N--dimetilanilina, o 1,8diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) ou o 1,S-diazabiciclot*!. 3.0]non-5-eno (DBN); ou uma amina aromática tal como a piridina, a 4-dimetilaminopiridina, a picolina, a lutidina, a quinolina ou a isoquinolina. Prefere -se especialmente a N,N-diisopropiletilamina e a trietilamina . 0 reagente activante utilizado nesta reacção pode ser, por exemplo, um anidrido de ácido tal como o anidrido trifluoroacético, o anidrido metanossulfónico, o anidrido trifluorometanossulfónico ou o anidrido p-toluenos-sulfónico; ou um cloreto de um ácido tal como o cloreto de metanossulfonilo, o cloreto de p-toluenossulfonilo ou o clo-rofosfato de defenilo.

Nos compostos de fórmula geral (II’), Y representa um grupo eliminável como, por exemplo, um grupo trifluoroacetoxi, metanossulfoniloxi, trifluorometanossul-foniloxi, p-toluenossulf oniloxi ou difenoxifosfcriloxi. Pre-fere-se especialmente o grupo difenoxifosfcriloxi.

Na reacção utilizam-se de 1 a 3 moles, de preferência 1 a 1,5 moles da base e de 1 a 1,2 moles do reagente activante por mole do composto de fórmula geral II. A reacção realiza-se, na generalidade, a uma temperatura compreendida entre -40 e 50°C, de preferência entre -20 e 20°C e apresenta-se concluída quantitativamente num período compreendido entre 30 minutos a 3 horas.

Após conclusSo da reacção, trata-se o produto reaccional de acordo com um método convencional para se obter quantitativamente um derivado reactivo de fórmula geral (II*) a partir de um composto de fórmula geral II. A reacção do derivado reactivo de fórmula geral (II') com um composto de fórmula geral

HS

R 20 (III)

na qual representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical imino; ^20 e ^30 ^-Sua^s ou diferentes, - 85 representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior eventualmente protegido, formimidoílo eventualmente protegido, acetoimidoílo eventualmente protegido ou um grupo de fórmula geral -COOR^0, -con(r50)r6o , -n(r5Q)r60 , -ch2coor40 , -ch2n(r50)r60 ou -CH2C0N(Rçjq)Rg0 em que R^q representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior ou um grupo protector do radical carboxilo e R^q e R^q , iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio um grupo alquilo inferior ou um grupo protector do radical amino ou um grupo protector do radical imino ou R^q e formam, considerados conjuntamente um átomo de azoto adjacente, um grupo heterocíclico escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, pirrolidinilo ou piperidilo; B representa um grupo de fórmula geral =NR^Q, =n(r70)r80 , -con(r70)- , -con(r70)co- , -con(r70)con(r80)-, -n(r70)co(ch2)sn(r8o)- , -n(r70)co(ch2)scon(r8o)- , -CON(R70)N(R8q)- ou -N(R7Q)(CH2)sN(R8q)- em quê R7Q e R8q , iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior eventualmente protegido, formimidoílo eventualmente protegido ou acetoimidoílo eventualmente protegido, um grupo protector do radical imino ou um grupo de fórmula geral -C00B„0, -C0NCR50)B60 , -N(R50)R60 , -CHjCOOR^, -CHjNtR^JRg,, ou -CH2CON(R^q)R8q em que R^q , R^q e R^q têm os significados definidos antes; e s representa um número inteiro de 1 a 3; e p, q e r têm os significados definidos antes, realiza-se 86 utilizando uma base e um dissolvente orgânico inerte citados antes para se obter um composto de fórmula geral

significados definidos antes.

Esta reacção realiza-se utilizando de 1 a 2 moles, de preferência 1 a 1,5 moles de base, e entre 1 a 1,2 moles do composto de fórmula geral III, por mole, do derivado reactivo de fórmula geral (II’). A reacção realiza-se, na generalidade, a uma temperatura compreendida entre -40 e 50°C, de preferência entre -20 e 20°C, e está concluída, geralmente após 30 minutos a 3 horas. 0 composto resultante de fórmula geral IV) pode preparar-se ainda utilizando uma reacçao com uma única fase a partir de um composto de fórmula geral II. Isto é, sem isolar o derivado reactivo de fórmula geral (II*) pre parado a partir do composto de fórmula geral II, faz-se reagir um composto de fórmula geral III no mesmo sistema re-accional para se obter eficientemente, um composto de fórmula geral IV. Para realizar esta reacção de preparação cons tituída por uma única fase, utiliza-se de 2 a 4 moles, de preferência 2,5 a 3,5 moles da base por mole do composto de - 87 fórmula geral II.

Concluída a reacção realiza-se o tratamento convencional para se obter um produto bruto de fórmula geral IV, o qual se submete a uma reacção para remover o grupo protector sem purificação. É, no entanto, preferível purificar o produto bruto de fórmula geral IV por cristalização ou por cromatografia em coluna utilizando, por exemplo gel de sílica. A partir do composto de fórmula geral IV resultante pode obter-se, eventualmente, um composto de fórmula geral I, realizando a reacção que permite remover o grupo protector do radical hidroxi, amino ou imino ou do grupo carboxilo. 0 método utilizado para remover os grupos protectores depende do tipo desses mesmos grupos. Contudo, a remoção pode realizar-se de acordo com métodos convencionais como, por exemplo, por solvólise, redução química ou hidrogenaçâo.

Por exemplo, quando na fórmula geral IV, definida antes, o grupo protector dos radicais hidroxi e/ou amino ou imino é um grupo aralquiloxicarbonilo como, por exemplo um grupo benziloxicarbonilo ou p-nitrobenziloxicar-bonilo, e o grupo protector do radical carboxilo é um grupo aralquilo como, por exemplo um grupo benzilo, p-nitrobenzilo ou benzidrilo, estes grupos protectores podem remover-se por hidrogenaçâo catalítica utilizando platina como catalisador 88 tal como o óxido de platina, o fio de platina ou o negro de platina ou o paládio também como catalisador, tal como, o negro de paládio, o óxido de paládio, o paládio sobre carvão ou hidróxido de paládio sobre carvão.

Como dissolvente para utilizar em uma tal reacção de hidrogenação catalítica, pode utilizar-se o metanol, o etanol, o tetra-hidrofurano, o dioxano, o ácido acético ou uma mistura destes dissolventes orgânicos com água ou com uma solução tampão, como por exemplo um fosfato. A reacção pode ficar concluída entre 30 minutos a 4 horas a uma temperatura compreendida entre 0o e 50°C sob atmosfera de hidrogénio a uma pressão de 1 a 4 atmosferas.

Quando nos compostos de fórmula geral IV definida antes o grupo protector do radical hidroxi e/ou amino ou imino é um grupo aliloxicarbonilo e o grupo protector do radical carboxilo é um grupo alilo, estes grupos protectores podem remover-se fazendo reagir um complexo de um composto orgânico-paládio solúvel como, catalisador, no seio de um dissolvente orgânico inerte contendo um agente capaz de capturar o grupo alilo (método descrito por W. McCombie et al., J. Org. Chem., Vol. 47, p. 58? - 590 (1982) e método descrito por F. Guibé, na mesma revista, Vol. 52, p. 4.984 - 4.993 (1987)).

Um dissolvente útil para utilizar nesta reacção pode ser, por exemplo, a água, a acetona, o éter 89 etílico, o tetra-hidrofurano, o dioxano, ο acetato de etilo, o acetonitrilo, o cloreto de metileno, o clorofórmio ou uma mistura destes dissolventes. 0 complexo de paládio capaz de se utilizar nesta reacção inclui, por exemplo, paládio sobre carvão, hidróxido de paládio sobre carvão, cloreto de paládio (II), acetato de paládio (II), tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0), tetraquis(trifenoxifosfina)paládio (0), tetraquis(trietoxifosfina)paládio (0), bis[etileno-bis(difenilfosfina)Ipaládio (0), tetraquis[tri(2-furil)fosfina]paládio (0), cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) e acetato de bis(trifenilfosfina)paládio (II). 0 agente capaz de capturar o grupo alilo pode ser, por exemplo, a dimedona, o ácido fórmico, o ácido acético, o formato de amónio, o formato de sódio, o 2-etil--hexanoato de sódio, o 2-etil-hexanoato de potássio, a pir-rolidina, a piperidina, e o hidreto de tributilestanho. A reacção realiza-se, na generalidade, a uma temperatura compreendida entre -10° e 50°C, de preferência entre 0 e 30°C utilizando 0,01 a 0,5 mole do catalisador e entre 1 a 6 moles do agente nucleofílico relativamente a 1 mole do composto de fórmula geral IV considerando--se que a mesma reacção se encontra concluída, na generalidade, entre 30 minutos a 3 horas. 90

Além disso, quando na fórmula geral IV definida antes, o grupo protector do radical hidroxi e/ou do grupo amino ou imino é um grupo o-nitrobenziloxicarbonilo e o grupo protector do radical carboxilo é um grupo o-nitro-benzilo, estes grupos protectores podem remover-se utilizando uma foto-reacçâo (método descrito por Amit et al., J. Org. Chem., Vol. 39, p. 192 - 196 (197*0).

Concluídas as reacçOes que permitem remover os grupos protectores, o composto de fórmula geral I pode ser isolado por tratamento convencional como, por exemplo, cromatografia em coluna utilizando gel de sílica ou resina de absorção, liofilizaçâo ou cristalização.

Além do mais, quando o grupo protector do radical carboxilo na posição 3 do composto de fórmula geral IV é um grupo alcanoíloxi (inferior) alquilo, como, por exemplo, um grupo acetoximetilo ou um grupo pivaloiloxime-tilo, um grupo metoximetilo, indalino ou ftalidilo tal como um éster será hidrolisado fisiologicamente in vivo. Consequentemente, um composto desta natureza pode administrar-se directamente ao homem ou a outro animal sem remoção prévia do grupo protector.

Os compostos de fórmula geral I podem con-verter-se em sais ou ésteres aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico utilizando métodos covencionais.

Os compostos iniciais de formula geral II 91 podem preparar-se, por exemplo, utilizando um método descrito por Salzmann et al. quando representa um átomo de hidrogénio (J. Am. Chem. Soc., Vol. 102, p. 6161 - 6163 (1981)) ou seguindo o método descrito por Shih et al. quando Rrepresenta um grupo metilo (Heterocycles, Vol. 21, p. 29-- 40 ( 1984)) .

Os compostos iniciais de fórmula geral III podem sintetizar-se utilizando o método seguinte.

Activa-se o grupo hidroxi de um composto de fórmula geral 1 utilizando um método convencional e faz--se reagir simultaneamente um tioacetato como, por exemplo o tioacetato de potássio para convertê-lo em um derivado acetiltio de fórmula geral 3 seguindo-se uma hidrólise alcalina ou ácida para se obter um derivado do tiol de fórmula geral III. 92

(III) 93

Nas fórmulas definidas antes representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical hidroxi; X representa um grupo eliminável escolhido entre átomos de cloro, bromo ou iodo ou grupos trifluoro-acetoxi, metanossulfoniloxi, trifluorometanossulfoniloxi ou p-toluenossulfoniloxi; Ac representa um grupo acetilo; e R1 ^, R20 , R30 , B, p, q e r têm os significados definidos antes.

Um grupo de compostos de fórmula geral 1 pode preparar-se de acordo com os métodos descritos nos exemplos de referência.

Os compostos de acordo com a presente invenção exibem forte acção antibacteriana contra diversas bactérias gram positivas e gram negativas.

Para demonstrar a utilidade dos compostos de acordo com a presente invenção determinou-se a sua capacidade antibacteriana in vitro contra bactérias utilizando o método da diluição em placas de agar (método padrão da Japan Chemotherapy Society, Chemotherapy, Vol. 29, p. 76 -- 79 (1981)). Uma ansa de platina de cada um dos microorga-nismos em ensaio incubada durante toda a noite em caldo de Mueller Hinton, inoculou-se em agar de Mueller Hinton [dimensão do inoculo: 10^CFU/ml (CFU = unidades formadoras de colónias)]. Os meios de cultura utilizados continham agentes antibacterianos em concentraçOes diversas. Após incubação 94 durante 16 horas à temperatura de 37°C, determinaram-se as concentrações inibitórias mínimas (CIM: ^pg/ml).

Os resultados da acção antibacteriana dos compostos de acordo com a presente invenção podem observar--se no Quadro 1.

95 QUADRO m rr o rH m lT\ o. r« ε Ο o Φ X ω Ό| pH 05 CQ vO B I •Η 00 LTi 1 \ η ο •Η 1 60 cd 0) Ο ο a, m •Η £-> Ε. *— ο Φ Φ ·· jJ ε £ O M r—1 O o. Όΐ H C0 < Φ 1 •Η co v£> Cd X η 0 οο 0- ITi B ω (0 φ ο ·*> •H •Η ί. ί- ο o c α φ φ »·Η B -Ρ ε ce Ό| •H o C0 < í. rH | •rH vO vT5 '0 α 05 ο 1 in IT> +» ε co C0 φ ο 1 ·* (D <- •Η S- ε. X ο φ φ •H ω 4-> ε H ΌΙ 0 οο 0Q VD VO w | •Η 00 in LH O 05 ο ·* ·» ·« cd <0 φ Ο ο T— t— t— •Η ί. Ε. +> t— Q φ φ c (D •Ρ ε O rH < c α o ε ο 00 OO υ φ 1 I Ε- τ— c— X 05 ο Φ ·* ω cd φ ε ο o o •Η ί- Ό Q φ 05 Ρ •Η Ο cd cd cd ε 05 05 05 05 ο Ο o •Η ο C C c C •Η •Η •Η •H Cti cd bO Μ bO Μ 05 3 ο 3 oo 3 ί-, C L· ο Ε- o £- * Ο φ Φ ο 05 o Φ 0- ί. cd m cd ITi cd Γ— ο ε oo •Η φ • CQ • CQ • X ε CU Σ 0u ς cu microrganismo produtor de yS-lactamase 96 QUADRO 1 (Cont o w o> tac. P c 0) o c o o B N bO <fl B •H c Ή B (0 •H L Ό •P •H £> •H e

microrganismo produtor de β-lactamase * 97

As actividades antibacterianas dos compostos de acordo com a presente invenção descritas nos exem pios, considerados exemplos representativos dos compostos da mesma invenção, determinaram-se mediante um ensaio de difusão com um disco pelo método descrito por Bauer et al. (Amer. J. Clin. Pathol., Vol. 45, p. 493 (1966)). Como pa-drOes internos utilizaram-se a tienamicina ou o imipenem. A concentração inibitória mínima de cada um dos compostos em ensaio calculou-se a partir do diâmetro do anel de inibição formado pelo disco contendo um composto em ensaio utilizando a fórmula de cálculo descrita por Humphrey e Lightbown (J. Gen. Microbiol., Vol. 7 p. 129 (1952)). Para cada microrganismo, obteve-se a média geométrica da concentração inibitória mínima e calculou-se a taxa de actividade relativamente à tienamicina.

As actividades antibacterianas estão repre sentadas pela taxa relativamente à tienamicina (= 1,0) na qual quanto maior for o valor numérico maiores as actividades . A susceptibilidade à desidropeptidase-I foi analisada quantitativamente pelo método de Kropp et al., Antimicrob. Agents Chemother., Vol. 22, p. 62 - 70 (1982) observando-se que quanto mais pequeno era o valor numérico representativo da taxa relativamente ao imipenem (= 1,0) maior a estabilidade. Comparou-se a actividade antibacte- 98 riana e a susceptibilidade à desidropeptidase-I dos compos tos de acordo com a presente invenção com o imipenem e o meropenem. Os resultados estão apresentados no Quadro 2.

99 CM

QUADRO I α.x Ω Ά Φ Ό Α Ό •Η Ω •Η Ωα 0) ο η 3η ν (0 C •Η Ο •Η Β (0 C 0) (0 Ό (0 > •Η Ω (0 ιΗ 0) U (0 C (0 •Η U φ ω ϋ Α Ω •Η Ω C Α Α Η Ο C <α> Ω Ο 0« ο. Ε 0) X cd σ' =τ Ο.ε 0) X Cd ro ·=τ Ω.ε φ X Cd C\J οο αε 0) X Cd οο α.ε φ χ Cd Ό| η m Ω m οο οο Ο Ο I η Α ο φ L. Φ Ω Ο ί> Φε ΌΙ m < I η Α ο φ ít φ Ω Ο ι* φε

os Ω Ω Φ X

CM OJ

Ω CM ίο

οο CVI OJιη m 3 Φ £-, 3 Α 00 0S I S χ Η ΙΓι σ> ιηο

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CM Λ ηο C Ω bC 3 Li Φ Α I •Η Ω α φ ο η 3 C0

ιηοοV ΙΓιο

ΙΓ>οοV

Cu X Ω Ά Φ Ό Α Ό 100 i eux Ω 'CC (Vo CC Ό QUADRO 2 (Cont ca Ό ca > •H 4J ca rH a>t. cac ca *H u V 4-3 03 ca £> •H 4->c ca ca •H Oc <03 4-3 4J α 03 o n 3 n 03 (T) c B ca c a)

Oa. 101

Os compostos de acordo com a presente in-vanção exibem excelente actividade antibacteriana contra diversas bactérias gram positivas e gram negativas e são úteis como agentes antibacterianos no tratamento e prevenção de doenças infecciosas humanas provocadas por essas bactérias. Agentes patogénicos característicos sensíveis aos agentes antibacterianos e de acordo com a presente invenção incluem, por exemplo, espécies do género Staphylococcus, Enterococcus Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Proteus e Pseudomonas. Os compostos de acordo com a presente invenção exibem excelente actividade antibacteriana especialmente contra Staphylococcus aureus resistentes à meticilina e contra Pseudomonas aeruginosa resistentes à tienamicina.

Os compostos de acordo com a presente invenção são muito estáveis relativamente à desidropeptidase -- I embora a estabilidade varie de acordo com cada um dos compostos e são também excelentes sob o ponto de vista de estabilidade fisico-química e relativamente à solubilidade na água.

Os compostos de acordo com a presente invenção podem utilizar-se sob a forma de composiçOes farmacêuticas apropriadas para administração não oral, administração oral ou administração externa, misturando os compostos de acordo com a presente invenção com veículos constituídos por excipientes sólidos ou líquidos convencionais. A principal via de administração é uma via não oral (intravenosa 102 ou intramuscular) utilizando-se a injecçSo ou a administração local. As composições farmacêuticas incluem formulações líquidas como, por exemplo, soluções para injectá-veis, xaropes ou emulsões, formulações sólidas tais como, comprimidos, cápsulas ou grânulos e formulações para aplicação externa tais como, pomadas ou supositórios. Estas for mulações podem conter aditivos tais como uma base, um agente auxiliar, um agente estabilizante, um agente molhante, um agente emulsionante, um agente capaz de promover a absorção, um agente densioactivo, etc. que sSo utilizados na generalidade quando necessário.

Os aditivos incluem, por exemplo, água destilada para injectáveis, solução de Ringer, glucose, xarope de sacarose, gelatina, óleos comestíveis, manteiga de cacau, etileno glicol, sacarose, amido de milho, estearato de magnésio e talco.

As doses variam de acordo com a situação do doente, o peso, a idade, o sexo, o tipo de composição farmacêutica, o número de administrações, etc. Contudo, na generalidade, prefere-se a administração de uma dose diária do ingrediente activo para um adulto compreendida entre aproximadamente 5 e 50 mg/kg preferindo-se uma dose diária compreendida entre 5 e 25 mg/kg quando o doente a tratar é uma criança, administrando-se esta dose de preferência uma vez por dia ou algumas vezes durante o dia. 103

Os compostos de acordo com a presente invenção podem administrar-se em associação com um agente in_i bidor da desidropeptidase-I como, por exemplo, o cilastatin [(Z)-7-(L-amino-2-carboxietiltio)-2-(2,2-dimetilciclopropa-nocarboxamida)-2-heptenoato de sódio] pedido de patente de invenção (Não Examinada Japonesa Ns 81518/1981; patente de invenção europeia NS 28.778; J. Med. Chem., Vol. 30, p. 1074 (1987)).

Seguidamente descrever-se-ão detalhada-mente na presente invenção Exemplos e Exemplos de Referência. Deve no entanto, ter-se em atenção que a presente invenção não fica restringida por esses Exemplos específicos.

Na cromatografia em camada fina descrita nos Exemplos e Exemplos de Referência utilizou-se gel de sílica éOFgijçj (Merck) como placa e como dispositivo de de-tecção utilizou-se um detector ultravioleta. Como sílica gel para utilizar em cromatografia de coluna utilizou-se a Wakogel C-300 (Wako Junyaku) e como gel de sílica para cromatografia em coluna de fase inversa utilizou-se a LC --SORB™ SP-B-ODS (Chemco) ou YMC.GEL™ ODS-AQ 120 - 550 (Yamamura Chemical Laboratories). Como cromatografia líquida de alta resolução utilizou-se a série JASC0 800 (Nippon Bunko). Quando se determinou o espectro de RMN utilizando uma solução de dimetilssulfóxido-dg ou clorofórmio--d, utilizou-se como padrão interno tetrametilsilano (TMS), e quando se determinou utilizando uma solução de óxido de 104 deutério utilizou-se como padrão interno o 2,2-dimetil-2--silapentano-5-sulfonato, tendo-se realizado as determinações através de um espectómetro modelo XL - 200 (200 MHz ; Varian). Todos os valores de £ se apresentam em ppm.

Os significados das abreviaturas utilizadas nas determinações de RMN são os seguintes: s: singuleto d: dubleto t: tripleto q: quarteto ABq: quarteto do tipo AB dd: dubleto duplo m: multipleto br: largo J: constante de acoplamento Hz: hertz DMSO-dg: dimetilssulfóxido-dg CDCl^: clorofórmio-d CD^OD: metanol-djj DgO: óxido de deutério

Os significado das abreviaturas utilizadas nas fórmulas reaccionais são as seguintes:

Ac: grupo acetilo All: grupo alilo 105

Alloc: grupo aliloxicarbonilo

Boc: grupo t-butoxicarbonilo

Bzl: grupo benzilo

Et: grupo etilo

Me: grupo metilo

Ms: grupo metanossulfonilo PNB: grupo p-nitrobenzilo PNZ: grupo p-nitrobenziloxicarbonilo TBDMS: grupo t-butildimetilsililo

Tr: grupo tritilo. EXEMPLO 1 (5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2S,4S)-2-(2-pirrolidon-M--il)pirrlidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de sódio. 1)

HO

H PNZ 106 A uma solução de 300 mg (0,55 mmole) de (5R,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-l-hidroxietil]-1-car-bapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo em 15 ml de ace-tonitrilo adicionaram-se utilizando uma corrente de azoto e mediante arrefecimento com gelo uma solução de 205 mg (0,56 mmole) de (2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonilo)--2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina (Composto do Exemplo de Referência 1-9) em 6 ml de acetonitrilo e depois 0,10 ml (0,57 mmole) de N,N-diisopropiletilamina. Agitou-se a mistura durante 7 horas à temperatura de 0°C. Adicionaram-se depois à mistura reaccional 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sul fato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utili-

TM zando gel de sílica (Wakogel C-300 e como agente de elui-ção acetato de etilo). Obtiveram-se 313 mg (rendimento 86,2 %) de (5R,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]-2-[(2S,4S)-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-4--il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V. (KBr)cnT1 : 1780, 1700, 1520, 1350 RMN (CDC13) $ : 1,37(3H,d,j=6Hz),5,24(3H,m),5,52(1H,d,J=14Hz) ,7,33 (2H,d,J=9Hz),7,46(2H,d,J=9Hz),8,24(2H,d,J=9Hz),8,26 (2H,d,J=9Hz) 107

A uma solução de 300 mg (0,45 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior em uma mistura de 10 ml de tetra-hidrofurano e cte 10 ml de uma solução tampão 0,1 M de 3-morfolinopropanossulfonato de sódio adicionaram-se 150 mg de paládio a 10 % sobre carvão, como catalisador previa-mente agitados e activados com uma solução tampão 0,1 M de 3-morfolinopropanossulfonato de sódio em corrente de hidrogénio durante 1 hora. Agitou-se a mistura resultante du -rante 2 horas à temperatura ambiente e sob atmosfera de hidrogénio. Separou-se o catalisador por filtração e lavou-se o filtrado com 20 ml de acetato de etilo, tendo-se separado os materiais insolúveis presentes na camada aquosa por filtração. Concentrou-se o filtrado resultante até a um Volume próximo de 15 ml. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna de fase inversa utilizando LC-SORB™ SP-B-0DS e como agente de eluição uma solução aquosa de metanol a 10 %. 108

Concentrou-se a fracção pretendida e liofilizou-se até à obtenção do 70 mg (rendimento 38,4 %) do composto identificado antes. I.V. (KBr)cm”1 : 1760, 1680, 1590, 1390 HMN (D20) £ : 1,26(3H , d , J = 7Hz), 1,54(1H,m),2,28(1H,m),3,86(1H,m), 4,21(2H,m) HPLC:

TM

Coluna:YMC -Pack ODS-AQ, 5μ, 4,6 de diâmetro x 150 mm Agente de eluiçâo: tampão de fosfato 0,01M (pH 6,5)- -metanol (80:20)

Velocidade de eluição: 1,0 ml/minuto

Temperatura: 40°C

Detecção: 290 nm

Tempo de retenção: 2,23 minutos EXEMPLO 2 (5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2R,4S)-2-(2-pirrolidon-4--il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de sódio 109

Realizou-se a mesma técnica descrita no Exemplo 1-1. Utilizaram-se 300 mg (0,55 mmole) de (5R ,6S)-2-difenoxifosfoniloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-car-bapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 200 mg (0,55 mmole) de (2R,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina (Composto do Exemplo de Referência 2) obtendo-se 127 mg (rendimento 35 %) de (5R, 6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]—2— C(2R,MS)-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-car-bapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V. (KBr)cm-1 : 1790, 1710, 1520, 1350 RMN (CDC13) ζ : 1 ,36 , (3H,d , J=6Hz)5,25(3H,m),5,52(1H,d, J= 14Hz) ,7,5** (2H,d,J=9Hz),7,66(2H,d,J=9Hz),8,23(2H,d, J=9Hz), 8,26(2H,d,J=9Hz)

HO Λ Η Ο

COONa Η 1 10 Η Ο A uma solução de 127 mg (0,19 mmole) do composto obtido na reacção anterior em uma mistura de 10 ml de tetra-hidrofurano e de 10 ml de uma solução tampão 0,1 M do 3-morfolinopropanossulfonato de sódio adicionaram-se 60mg do catalisador paládio a 10 % sobre carvão. A temperatura ambiente agitou-se esta mistura durante 90 minutos sob corrente de hidrogénio à pressão de 2,9 atmosferas. Separou-se o catalisador por filtração e lavou-se o filtrado com 20 ml de acetato de etilo depois do que se separaram as matérias insolúveis presentes na camada aquosa por filtração. Submeteu-se o filtrado resultante a uma cromatografia em coluna

TM de fase inversa utilizando LC-S0RB -SP-B-ODS e como agente de eluição uma solução aquosa de metanol a 10 % depois do que se concentrou e liofilizou obtendo-se 5,5 mg (rendimento 7,1 %) do composto identificado antes. I.V. (KBr)cm-1 : 1780, 1600, 1270 -111- RMN(D20) d : 1,28(3H,d,J=8Hz),2,54(3H,m) HPLC (as condições são as descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 5,54 minutos. EXEMPLO 3 (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil3-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(2--pirrolidon-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-car-boxilato de sódio i)

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1. Utilizaram-se 230 mg (0,41 mmole) de (1R5S,6S)-2-dife-noxifosforiloxi-6-[(R)—1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2--em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 140 mg (0,38 mmole) de (2S , 4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirro-lidon-4-il)pirrolidina (composto do Exemplo de Referência -112- 1-9), obtendo-se 223 mg (rendimento 80,6 %) de (1R,5S,6S)--6-[(R)- 1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S , 4S)-N-(p-nitrobenzil-oxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-^-il-tio]-1--carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V. (KBr)cm-1 : 1770, 1700, 1520, 13^0 RMN (CDC13) £ : 1,28(3H,d,J=8Hz),1,33(3H,d,J=7Hz),5,24(2H,m),5,31 e 5,52(2H,ABq, J=14Hz),7,53(2H,d,J=8Hz), 7,66 (2H ,d ,J =8Hz), 8,20( 2H,d, J=8Hz) ,8,22(2H,d, J=8Hz) 2) H0

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizando 223 mg (0,33 mmole) do composto obtido na re-acçâo anterior. Obtiveram-se 73 mg (rendimento 53,2 %) do composto identificado antes [diastereoisómeros A e B (4M : : 56)]. I.V. (KBr)cm'1 : 1760, 1680, 1590, 1390 RMN (D20) J : 1,23(3H, d, J=8Hz), 1,30(3H, d, J=7Hz), 1,77 113- HPLC :

Coluna: INERTSIL

TM ODS-2 , 5 /J 4, 6 de diâmetro x x 250 mm.

Agente de eluição: tampão de fosfato 0,01M (pH 7,0)- -metanol (90:10)

Velocidade de eluição: 1,0 ml/min.

Temperatura: 40°C Detecção a 254 nm

Tempo de retenção: 13,2 minutos, 14,6 minutos (44:56) EXEMPLO 4 (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2R,4S)-2-(2--pirro&don-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-car-boxilato de sódio 1)

HO

PNZ

H

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 230 mg (0,41 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxi-fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzilo e 140 mg (0,38 mmole) de ( 2R , 4S)-4-mercapto-N-( p-nitrobenziloxicarbonil )-2- (2-pirroli_ don-4-il)pirrolidina (composto do Exemplo de Referência 2) para se obterem 174 mg (rendimento 62,9 %) de (1R,5S,6S)-6--[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2R,4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )-2-(2-pirrolidon-4-il)-pirrolidin-4-il-tio]-1-carba-pen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V. (KBr)cnf1 : 1780, 1700, 1520, 1340

RMN (CDC13) & : 1,27(3H, d, J=8Hz), 5,53(1H, d, J=14Hz), d, J=9Hz), 8,24(2H, 2> HO 1,36(3H, d, J=6Hz), 5,25(3H, m), 7,54(2H, d, J=9Hz), 7,67(2H, d, J=9Hz), 8,26(2H, d, J=9Hz)

COONa

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2. Utilizaram-se 174 mg (0,26 mmole) do composto obtido 115 na reacção anterior para se obterem 22 mg (rendimento 20,6 %) do composto identificado antes. I.V. (KBr)cm-1: 1780, 1600, 1380, 1300 RMN (D20) ^ : 1,24(3H, d, J = 8Hz), 1,3K3H, d, J=7Hz), 1,98-2,98 (3H, m), 3,44(3H, m), 3,7M3H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 7,46 minutos EXEMPLO 5 (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-azetidmon-4-il)-pirrolidin-4-il-tio)--6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbopen-2-em-3-carboxilato de sódio (diastereoisómero B)

A uma solução de 110 mg (0,195 mmole) de (1R ,5S , 6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil ]-1--metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo em -116 5 ml de acetonitrilo adicionaram-se, sob atmosfera de azoto e à temperatura de -10°C, uma solução de 67 mg (0,191 mmole) de (23,43)-2-(2-azetidinon-i—il)-4-nercaOtc~N-(p-nitrobenzilo- xicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero B, (composto do Exem pio de Referência 3) em 5 ml de acetonitrilo depois do que se adicionaram, gota a gota, 34 ul (0,21 mmole) de N,N-diisopro- pilamina. Agitou-se a mistura resultante durante toda anoite à temperatura de 4°C. Adicionaram-se depois à solução reac- cional 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a mistura com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, Secou- -se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e con centrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma

TM cromatografia em coluna utilizando gel de sílica (Wakogel C-300) e como agente de eluição metanol a 3 %/clorofórmio para se obterem 88,5 mg (rendimento 68,2 %) de (1R,5S,6S)--2-[(2S ,4S)-2-(2-azetidinon-4-il )-N-(p-nitrobenziloxicarbo-nil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-car-bapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo, diastereoisómero B. I.V. (KBr)cnf1: 1760, 1700, 1520, 1340 RMN (CDClg) $ : 1,28(3H, d, J = 7Hz), 1,53(3H, d, J=6Hz), 1 ,67(1H, m), 2,50-2,74(3H, m), 3,08(1H, dd, J=15,5Hz), 3,43- -3,^5(3H, m), 3,70(2H, m), 3,96-4,33<4H, m), 5,23(3H,m), 5,52(1H, d, J=13Hz), 7,52(2H, d, J=8Hz), 7,65(2H, d, J=8Hz), 8,22(2H, d, J=(8Hz), 8,24 (2H, d, J=8Hz) -117-

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizando 88 mg (0,13 mmole) do composto obtido na reac-çSo anterior para se obterem 18 mg (rendimento 33,7 %) do composto identificado antes. I.v. (KBr)cm"1: 1750, 1590, 1390 RMN(D20) J": 1,26(3H, d, J=7Hz), 1,31(3H, d, J=6Hz), 1,65(1H, m), 2,69(1H, dd, J=16,8Hz), 2,73(1H , largo, d, J=16Hz), 3,20-3,53(, m), 3,61(1H, dd, J=12,6Hz), 3,75(1H, q, J=8Hz) , 3,85-4,40(4H, m) HPLC (utilizaram-se as condiçOes descritas no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 3,8 minutos. EXEMPLO 6

(1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-azetidinon-4-il)pirrolidin-4-il--tio)-6-[(R)-l-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-car-boxilato de sódio, diastereoisómero A υ

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 153 mg (0,27 mmole) de (1R,5S,6S)-2-'difenoxifosforiloxi-6-[ (R) -1 -hidroxietil ]-1-metil - 1-carba-pen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 90 mg (0,26 mmole) de (2S,4S)-2-(2-azetidinon-4-il)-4-mercapto-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero A (Com posto do Exemplo de Referência 4) para se obterem 128 mg (ren dimento 70,9 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-azetidinon-4--il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)--1-hidroxietil3-1-metil-1-carbopen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo, diastereoisómero A. I.V. (KBr)cnf1: 1760, 1700, 1520, 1340 RMN(CDC13) £ : 1,28( 3H „ d, J=7Hz) , 1.3M3H, d, J=6Hz), 1,9K2H, m) 2,44-3,10(3H, ra), 3,1 7-3,46(2H, m), 3,66(1H, m), 4,00-4,36(5H, m), 5,24(3H, m), 5,50(1H, d, J=14Hz), 7,52(2H, d, J=8Hz), 7,65(2H, d, J=8Hz), 8,21(2H, d, J=8Hz), 8,23(2H, d, J=8Hz)

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizando 128 mg (0,19 mraole) do composto obtido na reac çao anterior para se obterem 28,5 mg (rendimento 36,7 %) do composto identificado antes. I.V.(KBr)cm”1: 1750, 1590, 1390 RMN(D20) cí* : 1,25(3H, d, J=7Hz), 1,32(3H, d, J=6Hz), 1,83(1H, m), 2,75(1H, dd, J=15,8Hz), 2,88(1H, dd, J=15,2Hz), 3,18-3,55(4H, m), 3,68(1H, dd, J=12,6Hz), 3,68- -4,U0(5H, m) 120 HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 3,^6 minutos. EXEMPLO 7 Ácido (5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2R,4S)-2-(Z-pirro-lidon-3-il-metil)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3--carboxílico

D

HO

Mediante arrefecimento com gelo adicionou -se, gota a gota, 0,13 ml (0,76 mmole) de N ,N-diisopropil-etilamina a uma solução de 369 mg (0,76 mmole) de (5R,6S)-2--difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-carbapen-2-em--3-carboxilato de alilo e de 216 mg (0,76 mmole) de (2R,HS)- -N-aliloxicarbonil-M-mercapto-2-(2-pirrolidon-3-il-metil )- pirrolidina em 5,6 ml de acetonitrilo. Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora à mesma temperatura e depois durante 16 horas à temperatura de 5°C. A solução reaccional 121 adicionaram-se 60 ml de acetato de etilo. Lavou-se a mistura, sequencialmente, com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução aquosa sátiradã de dcreto.ds sódio depois do que se lavou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Purificou-se o resíduo por cromatografia em colu

Tm na rápida utilizando gel de sílida (Wakogel C-300) e como agente de eluição 40 ml de acetona/acetato de etilo (2:3).Con centrou-se a fracçâo contendo o produto pretendido para se obterem 303 mg (rendimento 76,7 % de (5R,6S)-2-[(2R,4S)-N--aliloxicarbonil-2-(2-pirrolidon-3-il-metil)pirrolidin-4-il--tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo sob a forma de uma espuma. RMN (CDC13> J ·· 1,35(3H, d, J=6Hz), 1,7-2,2(4H, m), 2,34(2H, m), 2,61(1H, m), 3,1-3 > 4(6H, m), 3,55(1H, m), 4,0-4,3 (4H, m), 4,6-4,9(4H, m), 5,2-5,5(4H, m), 5,78(1H, largo, s), 6,0(2H, m)

122 A uma solução de 300 mg (0,58 mmole) do composto obtido na reacção anterior em 6 ml de cloreto de metileno, adicionaram-se 52/il de água. Eliminou-se o ar contido na mistura. Mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se à mistura resultante 8 mg (0,011 mmole) de cloreto de Bis(trifenilfosfina)paládio (II) e 0,466 ml (1,73 mmoles) de hidreto de tributil-estanho. Agitou-se a mistura durante 5 minutos à mesma temperatura e durante mais 30 minutos à temperatura ambiente. Adicionaram-se 40 ml de água à solução reaccional. Lavou-se a camada aquosa, duas vezes com 20 ml de clorofórmio depois do que se eliminou o restante dissolvente orgânico sob pressão reduzida. Adicio naram-se 50 mg de carvão activado. Agitou-se a mistura durante 30 minutos depois do que se filtrou. Concentrou-se o filtrado até 700 mg e, à temperatura ambiente, adicionaram--se 1,4 ml de etanol. Conservou-se a mistura resultante em descanso à mesma temperatura durante 30 minutos para se formar um precipitado. À suspensão resultante adicionaram-se, gota a gota e durante mais de 1 hora com agitação, 1,4 ml de etanol. Agitou-se depois a suspensão durante 30 minutos à temperatura ambiente e durante mais 16 horas à temperatura de 5°C. Separou-se o precipitado por filtração e lavou-se, duas vezes sequencialmente, com 1,3 ml de uma misutra de água/ /etanol (1:4) e 2 ml de acetona depois do que se secou sob pressão reduzida durante 2 horas para se obterem 159 mg (ren dimento 69,6 %) do composto identificado antes. 123 I.V.(KBr)cnf1 : 1740, 1690, 1600, 1380 RMN(d20) çf ; 1,26(3H, d, J = 8Hz), 1,7-2,0(3H, m) , 1,18(1H , m) , 1,38(1H, m), 2,6-2,8(2H, m), 3,2(2H, d, J = 9Hz) , 3,3-3,4(4H, m), 3,7-3,9(2H, m) , 4,0(1H, m) , 4,1- — 4,3(2 H, m) EXEMPLO 8

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1- hidroxietil]-1-metil-2-[(2R,4S)--2- (2-pirrolidon-3-il-metil )-pirrolidin-4-il-t-jo ] -1 -car-bapen-2-em-3-carboxílico 1)

HO

À temperatura de 40°C adicionou-se, gota a gota, 0,26 ml (1,52 mmoles) de N,N-diisopropiletil-amina a uma solução de 759 mg (1,52 mmoles) de (1R,5S,6S)--2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-car-bapen-2-em-3-carboxilato de alilo e 432 mg (1,52 mmoles) de (2R,4S)-N-aliloxicarbonil-4-mercapto-2-(2-pirrolidon-3-il- 124 -metil)-pirrolidina em 11 ml de acetonitrilo. Agitou-se a mistura reaccional durante 3 horas à mesma temperatura e depois durante 16 horas à temperatura de 5°C. À solução resu_l tante adicionaram-se 60 ml de acetato de etilo. Lavou-se a mistura, sequencialmente, com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução aquosa satu rada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sodio anidro e concentrou. Purificou-se o resíduo

por cromatografia em coluna rápida utilizando gel de sílica TM (Wakogel C-300) e como agente de eluição 40 ml de acetona/ /acetato de etilo (2:3) e concentrou-se a fracção contendo o produto pretendido para se obterem 420 mg (rendimento 51,8$) de (1R ,5S ,6S)-2-[(2R,4S)-N-aliloxicarbonil-2-(2-pirrolidon--3-il-metil)pirrolidin-4-il-tio] — 6—[(R)-1-hidroxietil]-1--metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo sob a forma de uma espuma. RMN (CDCl^) S : 1,26(3H, d, J=8Hz), 1,35(3H, d, J=6Hz), 1,7(1H, m), 1,9-2,4(5H, m), 2,60(1H, m), 3,2-3 14(5H, m), 3,58 (1H, m), 3,9-4,3(4H, m), 4,5-4,9(4H, m) , 5,2- -5,5(4H, m), 5,8-6,1(3H, m) 2) 125

A uma soluçSo de 420 mg (0,79 mmole) do composto obtido na reacção anterior em 8,4 ml de cloreto de metileno, adicionaram-se 71 pL de água. Eliminou-se o ar da solução resultante. Mediante arrefecimento com gelo adicio naram-se à solução obtida 11 mg (0,016 mmole) de cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) e 0,635 ml (2,36 mmoles) de hidreto de tributilestanho. Agitou-se a solução resultante durante 3 minutos à mesma temperatura e depois durante mais 30 minutos à temperatura ambiente. À solução obtida antes adicionaram-se 40 ml de água e lavou-se a camada aquosa, duas vezes, com 20 ml de clorofórmio. Eliminou-se depois o restante dissolvente orgânico sob pressão reduzida. Adicionaram-se 50 mg de carvão activado. Agitou-se a mistura resultante durante 30 minutos depois do que se filtrou. Concentrou-se o filtrado até 500 mg e adicionou-se 1 ml de etanol à temperatura ambiente. Deixou-se a solução em repouso durante 1 hora à mesma temperatura para se obter um 126- precipitado. À suspensão resultante adicionaram-se, gota a gota e sob agitação durante mais de 1 hora, 3,5 ml de eta-nol. Agitou-se a suspensão durante 30 minutos à temperatura ambiente e depois durante 16 horas à temperatura de 5°C. Separou-se o precipitado por filtração depois do que se lavou, sequencialmente, com 3 x 1 ml de uma mistura água/eta nol (1:9) e 3 ml de acetona e secou-se durante 2 horas sob pressão reduzida para se obterem 232 mg (rendimento 72,0?) do composto identificado antes. I.V. (KBr)cm 1760, 1700, 1640, 1590, 1390 RMN (D20) / : 1,21(3H, d, J=8Hz), 1,28(3H, d, J=6Hz), 1,7-2,0(3H,m), 2,20(1H, m), 2,40(1H, m), 2,6-2,9(2H, m) , 3,3-3,5 (5H, m), 3,70(1H, m), 3,86(1H, m), 4,0(1H, m), 4,24(2H, m) EXEMPLO 9

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2R ,4S)-2-(2-azetidinon-3-il-metil)--pirrolidin-4-il-tio]-6-Γ(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carba--pen-2-em-3-carboxílico

127

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-1 utilizando 331 mg (0,66 mmole) de (1R , 5S ,6S)-2--difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carba-pen-2-em-3-carboxilato de alilo, 180 mg (0,66 mmole) de (2R ^4 S) -N-aliloxicarbonil-2- (2-azeti dinon-3-il-meti 1) -4-merca-ptopirrolidina e 0,12 ml de (0,66 mmole) de N, N-diisopropil-etilamina para se obterem 125 mg (rendimento 36,3 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2R,MS)-N-aliloxicarbonil-2-(2-azetidinon-3-il -metil)-pirrolidin-M-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo sob a forma de uma espuma. RMN (CDC13) á: 1,29(3H, d, J=7Hz), 1,36(3H, d, J=6Hz), 1,8(1H, m), 2,0(1H, m), 2,65(2H,m), 3,1(1H, m), 3,3(3H, m), 3,U8(1H, t, J=6Hz), 3,6(1H, m), M,0(2H, m), M,25 (2H, m), 4,62(2H, largo d, J=6Hz), M,8(2H, m), 5,2-5,5(MH, m), 5,66(1H, largo s), 5,98(2H, m) 2)

Realizaram-se a mesma reacção de remoção do grupo protector e o tratamento posterior descritos no 128

Exemplo 8-2, utilizando 125 mg (0,24 mmole) do composto obtido na reacção anterior, 3,4 mg (0,0048 mmole) de cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II), 0,194 ml (0,722 mmole) de hidreto de tributilestanho e 22 jil de água. Puri ficou-se a camada aquosa resultante por cromatografia de íT* w coluna de fase inversa utilizando YMC-GEL ODS-AQ 120-S50, e como agente de eluição 50 ml de metanol/água (15:85) e concentrou-se e liofilizou-se a fracçSo contendo o produto pretendido até à obtenção de 20 mg (rendimento 21,0$) do composto identificado antes. I.V.(KBr)cm"1 : 1740, 1600, 1390 RMN(D20) é : 1,18(3H, d, J=7Hz), 1,26(3H, d, J=6Hz), 1,3(1H, m), 2,2(3H, m), 2,7(1H, m), 3,1-3,7(7H, m), 3,92 (1H, m), 4,1-4,3(2H, m) EXEMPLO 10

(1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2--(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em -3-carboxilato de potássio, diastereoisémeros A e B

129

Submeteram-se 100 mg do composto do Exemplo 3 a uma cromatografia em coluna Waters 600E utilizando Tm YMC - Pack SH-365-5 S-5 120A ODS e como agente de eluiçâo

uma mistura de tampão 0,01M de fosfato de potássio (pH 7,0)/ /metanol (85:15): velocidade de eluiçâo 14 ml/minuto; detec-ção a 290nm;e temperatura 26°C, para se obterem fracções de diastereoisómero A (tempo de retenção 25,5 minutos) e do diastereoisómero B (tempo de retenção 30,2 minutos), respecti vamente. Concentrou-se a fracção contendo o diasteroisómero A até aproximadamente 15 ml e submeteu-se a solução concentrada a uma cromatografia em coluna de fase inversa utilizan-TM do YMC .GEL ODS-AQ 120-S50, agua destilada isenta de sais e como agente de eluiçâo uma solução aquosa a 20 % de metanol. Concentrou-se a fracção pretendida e liofilizou-se até à obtenção de 16 mg do diastereoisómero A do composto identificado antes. Utilizando uma técnica similar obtiveram-se 14,8 mg do diastereoisómero B.

Diastereoisómero A I.V. (KBr)cnf1: 1760, 1680, 1590, 1390 RMN (D20) d : 1,22(3H, d, J=8Hz), 1,30(3H, d, J=7Hz), 1,67(1H, m), 2,35(1H, dd, J=8,17Hz), 4,02(1H, m), 4,25(2H,m) 1760,1680, 1590, 1390

Diastereoisómero B I.V. (KBr)cm”1: RMN(D20) J* : 130 1,22(3H, d, J = 8Hz), 1,30(3H, d, J=7Hz), 1,72( TH , m), 2,28( 1H, dd, J = 8,17Hz) , 4,02(1H, m) , 4,26(2H, m) EXEMPLO 11

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)--2-(pirrolidin-3-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3--carboxílico, diastereoisómeros A e B

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 1,39 g (2,3*1 mmoles) de (1R,5S,6S)-2-difenoxi-fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-meti1-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzoílo e 1,24 g (2,34 mmoles) de (2S, 4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil ) pirrolidin-3-il Ipirrolidina (composto do Exemplo de Referência 5-6) para se obterem 1,59 g (rendimento 77,7 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R) -1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S, 4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[(N-(p-nitrobenziloxicar-bonil)pirrolidin-3-il]pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzilo. 131 I.v.(KBr)cnf1: 1 770, 1700, 1610, 1520, 1400, 1350 RMN(CDC13) ó : 1,28(3H, d, J=7Hz), 1,34(3H, d, J=6Hz), 5,14- -5,58(6H, m), 7,52(4H, largo d, J=8Hz), 7,65 (2H, d, J=8Hz), 8,20(6H, largo, d, J=8Hz)

Dissolveram-se 1,52 g (1,74 mmoles) do composto obtido na reacçao anterior em uma mistura de 40 ml de tetra-hidrofurano, 2 ml de etanol e 18 ml de uma solução tampao o,25M de 3-morfolinopropanossulfonato de sódio (pH 7,0). Adicionaram-sedepois 750 mg de paládio a 10 % sobre carvão como catalisador. Agitou-se a mistura sob atmosfera de hidrogénio à pressão de 3 atmosferas e á temperatura ambiente durante 2 horas. Separou-se o catalisador por filtração e lavou-se o filtrado com 50 ml de acetato de etilo. Separaram-se depois os produtos insolúveis contidos na solução aquosa por filtração. Submeteu-se a camada aquosa 132 resultante a uma cromatografia em coluna de fase inversa tm utilizando LC-SORB SP-B-ODS e como agente de eluiçâo uma solução aquosa a 15 í de metanol -► solução aquosa de metanol a 20 % , depois do que se concentrou e liofilizou para se obterem 97 mg (rendimento 14,6 %) do diastereoisó-mero A e 110 mg (rendimento T6,6%) do diastereoisómero B do composto identificado antes, respectivamente-

Diastereoisómero A I. V. (KBr)cnf1 : 1760, 1580, 15*10, 1380 RMN(D20) J : 1.16C3H, d, J=8Hz), 1,24(3H, d, J=7Hz) , 1,74(1H,m), 2,20( 1H, m), 2,44(2H, m), 3,73(1H, m), 4,17(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 2,6 minutos

Diastereoisómero B I.V.(KBr)cnf1: 1750, 1590, 1390 RMN(D20) £ : 1,23(3H, d, J=8Hz), 1,30(3H, d, J=7Hz), 1,74(1H, m), 2,23(1H, m), 2,50(2H, m), 3,78(1H, m) , 4,24(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 3,6 minutos 133 EXEMPLO 12

Ácido (1R , 5S, 6S )-6-[ (R )-1-hidroxietil ] -1 -metil-2-[(2S,4S)--2-(N-metilpirrolidin-3-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen--2-em-3-carboxílico, diastereoisómeros A e B 1)

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 680 mg (1,14 mmoles) de (1R,5S,6S)-2-difenoxi-fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzilo e 650 mg (1,26 mmoles) de trifluorometanossulfonato de (2S,4S)-4-mercapto-2-(N-metil-pirrolidin-3-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina (composto dos Exemplos de Referência 6-9) para se obterem 603 mg (rendimento 74,3 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-2-[(2S,4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(N-metilpirrolidin-3-il)-pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen--2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V.(KBr)cnf1: 1770, 1700, 1610,1520 134 RMN (CDC13) é : 1,37(3H, d, J=6Hz), 1 ,42(3H, d, J=7Hz),5,24(4H,m), 7,54 (2H, d, J=8Hz), 7,68(2H, d, J=8Hz), 8,25 (2H, d, J=8Hz), 8,27 (2H, d, J=8Hz) 2)

HO

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizando 290 mg (0,41 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior para se obterem 27 mg (rendimento 16,7 %) do diastereoisómero A e 27 mg (rendimento 16,7 %) do diastereo isómero B do composto identificado antes, respectivamente.

Diastereoisómero A I.V. (KBr)cnf1: 1760, 1590, 1380 RMN (D20) $ : 1,21(3H, d, J=8Hz), 1,30(3H, d, J = 7Hz), 1,53(1H, m), 1,92(1H, m), 2,94(3H, s), 3,91(1H, m), 4,23(2H, m) 135

HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 3,5 minutos Diastereoisómero B I.V. (KBr)cm-1 1750, 1590, 1380 RMN(D20) J : 1,18(3H, d, J=8Hz), 1,27(3H, d, J=7Hz), 1,80(1H, m), 2,24(1H, m), 2,88(3H, s), 3,74(1H, m), 4,20(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 4,3 minutos. EXEMPLO 13

(1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(N,N--dimetil-3-pirrolidínio)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen--2-em-3-carboxilato, diastereoisómeros A e B

HO

A uma solução de 300 mg (0,42 mmole) do composto obtido no Exemplo 12-1 em 5 ml de acetona, adicionou- 136 -se 0,13 ml (2,09 mmoles) de iodeto de metilo e agitou-se a mistura durante toda a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se a solução reaccional sob pressão reduzida e tratou-se o resíduo resultante utilizando a técnica descrita no Exemplo 1-2 para se obterem 17 mg (rendimento 9,8 %) do dias tereoisómero A e 29 mg (rendimento 16,7 %) do diastereoisó- . mero B do composto identificado antes, respectivamente.

Diastereoisómero A I.V.(KBr)cm“1: 1750, 1590, 1380 RMN(D20) çj : 1,20(3H, d, J = 8Hz), 1,29(3H, d, J=7Hz) , 2,12(1H, m) 2,44 (2H, m), 3,17(3H, s), 3,24(3H, s), 3,77 (2H, m), 4,22(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 2,7 minutos

Diastereoisómero B I.V.(KBr)cnf1 : 1750, 1590, 1380 RMN(D20) à : 1,22(3H, d, J=8Hz), 1,30(3H, d, J=7Hz), 2,02(1H,-m), 2,52 (2H, m), 3,17(3H, s), 3,25(3H, s), 3,78(2H, m 4,22(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 3,5 minutos. 137 EXEMPLO 14 (5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2S,4S)-2-(N-metil-2-azeti-dinon-4-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxi-lato de sódio 1)

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 235 mg (0,40 mmole) de (5R,6S)-2-difenoxifosfo riloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 149 mg (0,41 mmole) de (2S,4S)-4-mercapto--2-(N-metil-2-azetidinon-4-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pir rolidina (composto do Exemplo de Referência 7) para se obterem 265 mg (rendimento 94,5 %) de (5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil ]--2-[(2S,4S)-2-(N-metil-2-azetidinon-4-il)-N-(p-nitrobenziloxi carbonil)-pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V.(KBr)cm-1: 1780, 1740, 1700, 1520, 1340 RMN (CDClg) J : 1,36(3H, d, J=6Hz), 2,78(3H, s), 5,26(3H, m) , 1 38 - 5,52 (1Η, d, J=14Hz), 7,54 (2H, d, J=8Hz), 7,66(2H, d, J = =8Hz), 8,22(2H, d, J=8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz) 2)

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizando 265 mg (0,37 mmole) do composto obtido na reac-çâo anterior para se obterem 4 mg (rendimento 2,7 %) do dias-tereoisómero A, 25 mg (rendimento 16,7 %) do diastereoisó-mero B e 25 mg (rendimento 16,7 % ) de uma mistura dos diaste-reoisómeros A eB do composto identificado antes.

Diastereoisémero A I.V. (KBr)cm”1: 1750, 1590, 1390 RMN(D20) ξι 1,27(3H, d, J=6Hz), 1,66(1H, m), 2,74(2H, m) , 2,90(3H, s), 3,10-3,47(5H, m) , 3,67(2H, m) , 4 ,22(2H, m) 139 HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 2,68 minutos

Diastereoisómero B I.v. (KBr)cnf1: 1750, 1590, 1390 RMN (D20) 4 : 1 ,2 8(3 H, d, J=6Hz), 1,89(1H, m) , 2,88(3H, s), 2,92(2H, m), 3 ,16-3,48(5H, m) , 3,75(1H , dd, J = =12,6Hz), 4,24(2H,m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 2,85 minutos. EXEMPLO 15 (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,HS)-2-(N--metil-2-azetidinon-H-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen--2-em-3-carboxilato de sódio

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 240 mg (0,40 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxi-fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzilo e 149 mg (0,41 mmole) de (2S, 4S)-4-mercapto-2-(N-metil-2-azetidinon-4-il)-N-(p-nitrobenzilo xicarbonil)pirrolidina para se obterem 236 mg (rendimento 82.,7 %) de (1R,5S,6S)-6-[ (R) - 1-hidroxietil]-1 -metil-2-[ (2S, 4S)--2-(N-metil-2-azetidinon-4-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )--pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitro benzilo. I.V. (KBr)cm"1: 1750, 1700, 1520, 1350 RMN (CDC13) £ : 1,28(3H, d, J=7Hz), 1,36(3H, d, J=6Hz), 2,78 (3H, s), 5,26(3H, m), 5,50(1H, d, J=14Hz), 7,54 (2H, d, J=8Hz), 7,67(2H, d, J=8Hz), 8,22(2H, d, J=8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz) 2)

Realizou-se a técnica descrita no Exem- pio 1-2 utilizando 236 mg (0,33 mmole) do composto obtido na reacção anterior para se obterem 25 mg (rendimento 18,1 %) do diastereoisómero A e 39 mg (rendimento 28,2 %) do diastereo isómero B do composto identificado antes.

Diastereoisómero A I.V.(KBr)cm"1: 1750, 1600, 1390 RMN(D20) £ : 1,22(3H, d, J=7Hz), 1,30(3H, d, J=6Hz) , 1,78 (1H, m), 2,81 (2H , m) , 2,94(3H, s), 3,20-3,55 (5H, m) , 3,7M1H, dd, J=12,6Hz), 4,26(2H, m) , HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 4,86 minutos

Diastereoisómero B I.v. (KBr)cm-1: 1750, 1600, 1390 RMN(D20) á : 1,24(3H, d, J=7Hz), 1,30(3H, d, J=6Hz), 1,88 (1H, m), 2,90(3H, s), 2,95(2H, m), 3,18-3,34 (5H, m), 3,70 (1H, dd, J=12,6Hz), 4,26(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 5,43 minutos. 142 EXEMPLO 16 (1R , 5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietilj-1-meti 1-2-[(2S,43)-2-(N- -metil-2,5dioxopirrolidin-3-il)-pirrolidin-4-il-tio]-1-

-carbapen-2-em-3-carboxilato de sódio, diastereoisómero A

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 500 mg (0,84 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxi-fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxieti1]-1-meti1-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzilo e 330 mg (0,84 mmole) de (2S , 4S)-4-mercapto-2-(N-metil-2,5-dioxopirrolidin-3-il)-N--(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero A (composto do Exemplo de Referência 8) para se obterem 311 mg (rendimento 50,1 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1--metil-2-[(2S, 4S)-2-(N-metil-2,5-dioxopirrolidin-3-il)-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2--em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo, diastereoisómero A. - 143 - I.V. (KBr)cm*1: 1770, 1700, 1520, 1350 RMN(CDC13) S : 1,28(3H, d, J = 8Hz) , 1f34(3H, d, J=7Hz) , 2,95(3H, largo, s), 3,68(1H, m), 4,57(1H, m) , 5,20(3H, m), 5,52(1H, d, J=14Hz), 7,48(2H, d, J= = 8Hz), 7,66(2H, d, J = 8Hz), 8,22(4H, d, J = 8Hz) 2)

HO

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizaram-se 311 mg (0,42 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior para se obterem 76,8 mg (rendimento 40,9 %) do composto identificado antes. I.V.(KBr)cm“1: 1750, 1700, 1610 , 1590 RMN (D20) £ : 1,20(3H, d, J=7Hz), 1,26(3H, d, J=6Hz), 1,95(1H, m), 4,20 2,96(3H, s), 3,25-3,74(5H, m) , 4,00(2H, m) , (2H, m) 144 HPLC (utilizaram-se as condiçOes descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 4,60 minutos EXEMPLO 17

(1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(N--metil-2,5-dioxipirrolidin-3-il)-pirrolidin-4-il-tio ]-1--carbapen-2-em-3-carboxilato de sódio, diastereoisómero B 1)

HO

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 220 mg (0,37 mmole) de (1R , 5S,6S)-2-difenoxi- fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3- -carboxilato de p-nitrobenzilo e 140 mg (0,36 mmole) de (2S,4S)--4-mercapto-2-(N-metil-2,5- -dioxopirrolidin-3-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero B para se obterem 244 mg (rendimento 89 ,4$) de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(N--meti1-2,5-dioxopirrolidin-3-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo, diastereoisómero B. I. V. (K Br)cm”1: 1780, 1700, 1520, 1350 RMN (CDClg) à : 1»28(3H, d, J=7Hz), 1,3M3H, d, J=6Hz) , 1,62 (1H, m) , 2,96(3H, s), 5,26(3H, m) , 5,50(1H, d, J = -14Hz), 7,5^(2H, d, J=8Hz), 7,67(2H, d, J=8Hz) , 8,22(4H, d, J= 8Hz)

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo utilizando mg (0,322 mmole)do composto obtido na reacçSo anterior para se obter 35 mg (rendimento 23,7 %) do composto identificado antes. I.V. (KBr)cnf1: 1750, 1700, 1610, 1590 RMN(D20) J : 1,22(3H, d, J=7Hz), 1,30(3H, d, J=6Hz), 1,84(1H, m), 2,66(1H , dd, J=18,6Hz), 2,84(1H, m) , 2,98 (3H, s), 3,12(1H, dd, J=18Hz, 9Hz) , 3,30-3,58 - 146 - (4Η , m), 3,72(1Η, dd, J=12,6Hz), 3,97(2H, m), 4,25(2H, m) HPLG (Utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 6,99 minutos EXEMPLO 18

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il)--pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1--earbapen-2-em-3-carboxílico

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-1 utilizando 230 mg (0,46 mmole) de (1R,5S,6S)-2--difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen -2-em-3-carboxilato de alilo e 130 mg (0,46 mmole) de (2S,4S) -N-aliloxicarbonil-2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il)-4-mercaptopir rolidina (composto do Exemplo de Referência 9) para se obterem 125 mg (rendimento 50,9 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N- 147 -aliloxicarbonil-2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il)pirrolidin-4-il--tio]-6-[ (R)-l-hidroxietil]-1 - metil -1 -carbapen-2-em-3-carbo— xilato de alilo. I.v.(KBr)cnf1: 1780, 1720, 1410, 1330 RMN (CDC13) S : 1.24C3H, d, J=7Hz), 1,33(3H, d, J = 6Hz) , 1,63(1H , m) , 5,13-5,54(4H, m), 5,78-6,o8(2H, m)

H

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-2 utilizando 120 mg (0,23 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior para se obterem 28,5 mg (rendimento 30,9 %) do composto identificado antes. I.V.(KBr)crn-1: 1760, 1720, 1600, 1380 RMN(D20) «í: 1,18(3H, d, J=7Hz), 1,25(3H, d, J=6Hz), 1,70 (1H, m), 2,53-2,80(2H, m), 3,03(1H, m), 3,25- -3,50(4H, m), 3,60(1H, m), 3,80-4,00(2H, m) , 4,20(2H, m ) 148 HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção 2,46 minutos. EXEMPLO 19

Acido(5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2St4S)-2-(3-pirazo-lidinon-5-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3--carboxílico 1)

HO

lloc

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-1 utilizando 195 mg (0,40 mmole) de (5R , 6S)-2-(difeno-xifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-carbapen-2-em-3-carbo-xilato de alilo e 162 mg (0,40 mmole) de (2S,4S)-N-aliloxicar-boni1-2-(1-aliloxicarbonil-3-pirazolidinon-5-il)-4-mercapto-pirrolidina para se obterem 155 mg (rendimento 65,4 %) de (5R,6S)-2-[(2S,4S)-N-aliloxicarbonil-2-(1-aliloxicarbonil-3--pirazolidinon-5-il)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo. - 1 i» 9 - I.v. (KBr)cnf1: 1780, 1700, 1550, 1410, 1330 RMN(CDC13) S : 1,32(3H, d, J = 6Hz), 4,52>4,90(6H, m) , 5,18-5,56 (6H, m), 5,78-6,10(3H, m) 2)

HO

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-2 utilizando 155 mg (0,26 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior para se obterem 39 mg (rendimento 38,8 %) do composto identificado antes. I.V.(KBr)cnf1 : 1760, 1680, 1590, 1390 RMN (CDClg) S : 1,26(3H, d, J=6Hz), 1,88(1H, m), 2,35(1H, m), 2,70(1H, m), 3,06-3,27(2H, m) , 3,42(2H, m) , 3,70-3,90(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 1,53 minutos 150 EXEMPLO 20

Acido (1R,5S,6S)—6— Ç(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S )-2--(3-pirazolidinon-5-il)pirrolidin-4-il-tio3-1-carbapen-2-em--3-carboxílico 1)

^Alloc F nh

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-1 utilizando 330 mg (0,66 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxi-fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de alilo e 234 mg (0,66 mmole) de (2S,4S)-N-ali-loxicarbonil-2-(l-aliloxicarbonil-S-pirazolidinon-S-il)-4--mercaptopirrolidina para se obterem 172 mg (rendimento 43,1 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2S, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-(1-ali-loxicarbonil-3-pirazolidinon-5-il)pirrolidin-4-il-tio]-6--[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo. 1770, 1700, 1410, 1320 I.V. (KBr)cm ^: RMN(CDC13) é Ϊ 151 1,24(3H, d, J = 7Hz), 1 ,35(3H , d,J=6Hz), 4,50-4,90 (6Η, m), 5,20-5,56(6 Η, m), 5,80-6,10(3Η, m) 2)

Realizou-se a técnica descrita no Exem pio 8-2 utilizando 172 mg (0,285 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior para se obterem 42 mg (rendimento 37,2$) do composto identificado antes. I.V.(KBr)crn"1: 1760, 1680, 1590, 1390 RMN(D20) cf: 1,20(3H, d, J=7Hz), 1,26(3H, d, J=6Hz), 1,85(1H, m), 2,35(1H, largo d, J=18Hz), 2,70(1H, m) 3,10(1Η, dd, j=l8,9Hz), 3,15-3,52(3H, m), 3,62-3,90(2H, m), 3,93-4,32(4H, m) HPLC (utilizaram-se as condiçOes descritas no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 2,23 minutos. 152 EXEMPLO 21 (5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2S.4S)-2-(2-pirrolidon-3-il)--pirrolidin-M-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de sódio

1)

Realizou-se a técnica descrita no Exem pio 1-1 utilizando 180 mg (0,31 mmole) de (5R,6S)-2-difenoxi-fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-carbapen-2-em-3-carboxi-lato de p-nitrobenzilo e 110 mg (0,30 mmole) de (2S,4S)-4--mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-3-il )--pirrolidina (composto do Exemplo de Referência 11) para se obterem 151 mg (rendimento 70 %) de (5R,6S)-6-[(R)-l-hidroxi-etil]-2-[(2S,4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon--3-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxila.to de p--nitrobenzilo. 1780, 1700, 1520, 1350 I.V.(KBr)cm"1: RMN (CDClg) é * 1,38(3Η, d, J=6Hz), =14Hz), 7,57(2H, d, 8,25(2H, d, J=8Hz), 153 5,30(3H, m) , 5,56(1H, d, J = J = 8Hz) , 7,70(2H, d, J = 8Hz), 8,28(2H, d, J=8Hz) 2)

I H

H

O H

Realizou-se a técnica descrita no Exem pio 1-2 utilizando 150 mg (0,22 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior para se obterem 35 mg (rendimento 38,1 %) do composto identificado antes. I.V.(KBr)cm~1: 1760, 1690, 1590, 1380 RMN(D20) <£ : 1,29(3H, d, J=6Hz), 1,72-2,07(3H, m), 2,39(1H, m) , 2,80(1H, m), 3,00(1H, m), 3,20(2H, m) , 3,44(3H, m) , 3,78(2H, m), 3,99(1H, m), 4,24(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condiçOes descritas no Exemplo 1)

Tempo de retençSo: 1,93 minutos EXEMPLO 22 (1R ,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietilj-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(2--pirrolidon-3-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de sódio

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 180 mg (0,30 mmole) de (1R ,5S,6S)-2-dife-noxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2--em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 110 mg (0,30 mmole) de (2S,4S )-4-mercapto-N-( p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pir-rolidon-3-il)pirrolidina para se obterem 161 mg (rendimento 74,9 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-[(2S,4S)--N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-3-il)-pirro-lidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitroben-zilo. 1780, 1700, 1520, 1350 I.V.(KBr)cm-1 RMN (CDClg) S: 1 ,32(3H, d, J=7Hz), 1 ,40(3H, d, J=6Hz), 5,32 (3H, m), 5,56(1H, d, J=14Hz) , 7,58(2H, d, J = 8Hz) , 7,70(2H, d, J=8Hz), 8,27(2H, d, J=8Hz), 8,29 (2Η, d, J=8Hz) 2)

HO

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizando 160 mg (0,23 mmole) do composto obtido na reacção anterior, para se obterem 37 mg (rendimento 37,5 %) do composto identificado antes. I.V.(KBr)cm“1: 1760, 1690, 1600, 1380 RMN(D20) é : 1,18(3H, d, J=7Hz), 1,25(3H, d, J=6Hz), 1,63-2,07 (3H, m), 2,36(1H, m), 2,74(1H, m), 2,98(1H, m) , 3,30-3,50(4H, m), 3,72(2H, m), 3,95(1H, m) , 4,22(2H, m) 156 HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 3>23 minutos EXEMPLO 23

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-carbamoilpirrolidin-4-il)-

pirrolidin-^-il-tio]-6 - [(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carba-pen-2-em-3-carboxílico, diastereoisómero I

HO

PNZ 1)

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1, utilizando 174 mg (0,29 mmole) de (1R, 5S,6S)-2--difenoxifosforiloxi-6-[C R) — 1— hidroxietil]-1-carbapen-2-em- 3--carboxilato de p-nitrobenzilo e 160 mg (0,28 mmole) de (2S, i4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidin-M-_il]_H_mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina, diastereoisómero I (composto do Exemplo de Referência 13) para se obterem 223 mg (rendimento 82,9 %) de (1R,5S,6S)-2- -C(2S,4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirro-lidin-4-il3 — N—(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidin- -^-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2- 157 *em-3-earboxilato de p-nitrobenzilo, diastereoisómero I. I.V.(KBr)cm-1: 1770, 1700, 1520, 1400, 1350 RMN(CDC13) h : 1,28(3H, d, J=7Hz) , 1,37(3H, d, J=6Hz), 5,25(5H, m), 5,52(1H , d, J=14Hz), 7,53(4H, d, J=8Hz), 7,67 (2H , d, J = 8Hz) , 8,23(6H, d, J=8Hz)

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizando 223 mg (0,24 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior para se obterem 50,7 mg (rendimento 49,8 %) do composto identificado antes. I.V. (KBr)cm“1: 1750, 1700, 1390 RMN (D20) £ : 1,19(3H, d, J = 7Hz), 1,27(3H, d, J=6Hz), 1,5Ô(2H, m) , 2,00-2,32(2H, m), 2,42-2,74(2H, m), 2,82(1H, dd , J = 12,8Hz) , 3,22(1H, dd, J=12,4Hz), 3,30-3,54 158 - UH, m), 3,92( 1H, m-) , 4,10( 1H, dd, J=9,4Hz), 4 ,20(2H, m) EXEMPLO 24

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-( 2-carbamoilpirrolidin-4-il )--pirrolidin-4-il-tio j-6-[(R)-1 -hidroxietil ]-1-metil-1-carba-pen-2-em-3-carboxílico, diastereoisómero II

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 290 mg (0,49 mmole) de (1R,5S ,6S)-2-dife-noxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2--em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 280 mg (0,49 mmole) de (2S, 4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirro lidin-4-il >4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirroli-dina, diastereoisómero II (composto Exemplo de Referência) para se obterem 419 mg (rendimento 93,4 %) de (1R,5S,6S)- 2-- [ (2S ,451)-2- [2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )-pirro- 159 lidin-4-il]-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il-tio]--6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.v.(KBr)cnf1: 1770, 1700, 1520, 1350 RMN(CDC13) cf: 1,28(3H,d, J=7Hz), 1,37(3H, d, J=6Hz), 5,26 (5H, m), 5,52(1H, d, J=14Hz), 7,53(4H,d, J= =8Hz), 7,68(2H, d, J=8Hz), 8,24(6H, d, J= = 8Hz) 2)

HO

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2, utilizando 419 mg (0,46 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior para se obterem 93 mg (rendimento 48 %) do composto identificado antes. I.V.(KBr)cnf1 : 1760, 1700, 1390 160 RMN(D20) 4 : 1,20(3H , d , J = 7Hz) , 1,28(3H, d, J=6Hz), 1,62 (2H, m), 2,44-2,75(3H, m) , 2,83(1H, dd, J = = 10,8Hz), 3,16-3,57(6H, m), 3,94(1H, m), 4,08 (1H, m), 4,23(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condições descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 2,84 minutos EXEMPLO 25

Acido (5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2S,4S)-2-(pirrolidin--4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico, diastereoisómero A 1)

HO

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1, utilizando 255 mg (0,45 mmole) de (5S,6S)-2-difenoxifosfo riloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de 161 p-nitrobenzilo e 240 mg (0,45 mmole) de (2S,4S)-4-mercapto--N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-( p-nitrobenziloxicarbo-nil)pirrolidin-3-il]-pirrolidina (composto do Exemplo de Referência 5) para se obterem 297 mg (rendimento 78,6 %) de (5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2- [(2S,4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin--3-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V. (KBr)cnf1: 1780, 1700, 1520, 1350 RMN (CDC13) i' : 1 ,25(3H, d, J = 6Hz), 4,00-4,40(4H, m) , 5,16- 5,35(5H, m), 5,52(1H, d, J=14Hz), 7,52(4H, d, J=8Hz), 7,65(2H, d, J=8Hz), 8,21(6H, m)

H

Realizou-se a técnica descrita no Exem pio 1-2 utilizando 297 mg (0,345 mmole) do composto obtido - 16 2 na reacção anterior* para se obterem 13,6 mg (rendimento 10,7 %) do diastereoisómero A do composto identificado antes. I · V. (KBr)crrf1: 1 760, 1690, 1390 RMN (D20) £ : 1 ,27(3H,d,J = 6Hz), 1 , 46(1H, m), 1,68-2,10(2H, m) 2,14-2,80(3H, m), 3,80(2H, m), 4,22(2H, m) HPLC (utilizaram-se as condiçCes descritas no Exemplo 1) Tempo de retençSo: 2,03 minutos. EXEMPLO 26

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(pirrolidin-3-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-car-bapm-2-em-3-carboxílico, diastereoisómero A

PNZ 163 .

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 utilizando 1,75g(2,94 mmoles) de (1R,5S,6S)-2--difenoxifosforiloxi-6-[(R) -1-hidroxietil]-1-metil-1-carba-pen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 1,56 g (2,94 mmoles) de (2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2--[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-3-il]-pirrolidina , diastereoisómero A (composto do Exemplo de Referência 15-7) para se obterem 2,37 g (rendimento 92 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R) -1-hidroxietil]-1-meti1-2-[(2S,4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )-2-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-3-il]-pirroli-din-4-il~tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo diastereoisómero A. I.V.(KBr)cnf1 : 1780, 1700, 1520, 1350 RMN(CDC13) J : 1,28(3H, t, J=7Hz), 1,37(3H,d, J=6Hz) , 1,60- -2,15(4H , m), 2,55(1H, m) , 2,78(1H, m) , 4,04--4,35(3H, m), 5,24(5H, m); 5,53(1H, largo d, J=14Hz), 7,54(4H, largo d, J=8Hz), 7,67(2H, d, J=8Hz), 8,24(6H, largo, d, J=8Hz) 2)

HO

H 16 4-

Realizou-se a técnica descrita no Exem pio 11-2, utilizando 2,37 g (2,71 mmoles) do composto obtido na reacção anterior para se obterem 298 mg (rendimento 28,8¾) do composto identificado antes. Diversos dados espectrais referentes a este composto estSo de acordo com os dados referentes ao diastereoisómero A obtido no Exemplo 11-2. EXEMPLO 27

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil3-1-metil-2-[(2S,4S)--2-(pirrolidin-3-il)-pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3--carboxílico, diastereoisómero B

pnz \

N

I

PNZ

Realizou-se a técnica descrita no Exem pio 1-1 utilizando 1,27 g (2,14 mmoles) de (1R,5S,6S)-2-difeno-xifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]- 1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e de 1,14 g (2,15 mmoles) de (2S , 4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitro-benziloxicarbonil)-pirrolidin-3-il]pirrolidina, diastereoisó 16 5-mero B (composto do Exemplo de Referência 16) para se obterem 1 ,65 g( rendimento 88,3 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]--1-metil-2-[(2S,4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitro benzi loxicarbonil )pirrolidin-3-il ]pirrolidin-4-il-tio Jl-carba-pen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo, diastereoisómero B. I.V. (KBr)cm-1: 1780, 1700, 1520, 1350 RMN (CDClg) S : 1,28(3H, t, J=7Hz), 1 ,37(3H, t, J=6Hz), 1,50-2,08 (UH, m), 2,42-2,70(2H, m) , 3,*+8-3,70(3H, m), H ,01-4,76(¾ m), 5,24 ( 5H, m), 5,54 (1H, d, J=14Hz), 7,5^(^, largo, d, J=8Hz), 7,67(2H, d, J=8Hz), 8,2M6H, largo d, J=8Hz) 2)

Utilizando 1,65 g (1,89 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior realizou-se a técnica des- 16 6 _ crita no Exemplo 1-2 para se obterem 220 mg (rendimento 30,6 %) do composto identificado antes. Vários dados espectrais deste composto estavam de acordo com os do diastereo-isómero B obtido no Exemplo 11-2. EXEMPLO 28

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)--2-(2-pirrolidon- . -4-il)-pirrolidin-4-il-tio]-H-1-carba-pen-2-em-3-oarboxílico, diastereoisómero A

Utilizando 6,67 g (11,2 mmoles) de (IR, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1--carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 3,9 E (10,7 mmoles) de (2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2--(2-pirrolidon-4-il)-pirrolidina, diastereoisómero A (compos to do Exemplo de Referência 18-4) realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 para se obterem 6,01 g (rendimento 77,1%) 167 -

do (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-meti 1-2-[(2S,4S)-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-4--il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo , diastereoisómero A I.v.(KBr)cm-1: 1770, 1700, 1520, 1 340, 1250 RMN (CDC13) S ’ 1,28(3H, d, J=8Hz), 1,33(3H, d, J = 7Hz) , 1,72 (2H , m), 2,06-2,6 8(3H, m) , 2,96-3,7(5H, m), 4,04-4,36(2H, m), 5,24(2H, m), 5,31 e 5,52(2H, ABq, J=14Hz), 5,8(1H, largo), 7,53(2H, d, J = = 8Hz), 7, 6'4(2H, d, J = 8Hz) , 8,20(2H, d, J=8Hz), 8,22 (2H , d, J = 8Hz) 2)

HO

Realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 utilizando 6 g (8,62 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior para se obterem 1,68e(rendimento 49,4 í)do 168 composto identificado antes. I.V. (KBr)cnf1: 1755, 1680, 1595, 1385, 1280 RMN (D20) J : 1,15(3H, d, J=8Hz), 1,23(3H, d, J=7Hz), 1>7 (1H, m), 2,3(1H, o), 2,54-3,1(3H, m) , (3,U3>5^ (3H, m), 3,55-3,94(3H, m), 4,0(1H, m), 4,19 ^ m) HPLC:

Coluna: YMC AQ-304

Agente de eluição: tampão de fosfato 0,01 m (pH 7,0)-acetonitrilo (95.^

Velocidade de eluição: 1,0 ml min.

Temperatura: 40°C

Detecçao a 254 nm

Tempo de retenção: 14,83 minutos. EXEMPLO 29

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1 -hidroxietil 1- 1-metil-2-[ (2S -(2-pirrolidon-4-il)-pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2^eiSr·

-3-carboxílico, diastereoisómero B 1) 1) 169

HO

Utilizando 10,61 g (17 mmoles) de (1R, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-carbapen--2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e de 5,92 g (16,2 mmoles) de (2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirro-lidon-4-il)pirrolidina, diastereoisómero B (composto do Exemplo de Referência 19-¾) realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 obtendo-se 9,9 g (rendimento 83,7) de (1R,5S, 6S) —6—[(R) — 1-hidroxietil]-1-meti1-2-[(2S,4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2- ( 2-pirrolidon-^-il)-pirrolidon-H-il-tio]-1--carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo, diastereoisómero B. I.V. (KBr)cnf1 : 1770, 1705, 1695, 1605, 13*15, 1205 RMN <D20) ê : 1 ,27(3H, d, J = 8Hz), 1,36(3H, d, J = 7Hz), 1,72- 1 7 0_ -2,06(2Η, m) 2,1-2,68(3Η, m), 3,02-3,7(5Η, m) , 4,06-4,16(2Η, m), 5,31 e 5,52(2Η, ABq, J=14Hz), 6,04 (1 Η , largo), 7,53(2Η, d, J=8Hz), 7,66(2Η, d, J = 8Hz), 8,20(2Η, d, J = = 8Ηζ), 8,22(2Η, d, J = 8Hz) 2)

Utilizando 9,8 g (14,1 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2, obtendo-se 1,42 g (rendimento 25,5 %) do composto anteriormente identificado. I.V. ( KBr)cm~1: 1755, 1680, 1590, 1390, 1280 RMN (D20) £ : 1,19(3H, d, J=8Hz), 1,26(3H, d, J=7Hz), 1,72 (1Η, rn), 2,28(1Η, m), 2,52-3,10(3H, m) , 3,26- -3,50(3H, m), 3,60-3,90(3H, m), 4,02(1H, m), 171 4,22(2H, m) HPLC:

Coluna: YMC AQ-304

Agente de eluição: tampSo de fosfato 0,01 M (pH 7,0)-acetonitrilo (96:4).

Velocidade de eluição: 1,0 ml/minuto

Temperatura: 40°C

DetecçSo a 254 nm

Tempo de retenção: 15,18 minutos EXEMPLO 30 Ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-amino-2-pirrolidon-4-il) pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carba-pen-2-em-3-carboxílico 1 )

HO

H

NHPNZ

PNZ

Η O

Utilizando 155,4 mg (0,26 mmole) de (1R , 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6- [ ( R)-1-hidroxietil]-1--metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 110 mg (0,197 mmole) de (2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenzilo xicarbonil)-2-[3-[(p-nitrobenziloxicarbonil)amino-]-2--pirrolidon-4-il]pirrolidina (composto do Exemplo de Referên cia 20-6) realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1, obtendo-se 87 mg (rendimento 48,9 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R)--1-hidroxietil]-1-meti1-2-[(2S,4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbo-nil)-2-13-[(p-nitrobenziloxicarbonil)amino]-2-pirrolidon-4--il]pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p--nitrobenzilo. I.V. (KBr)cm”1: 1775, 1710, 1605, 1525, 1350, 735 RMN (CDCl^) cí: 1,27(3H, d, J=8Hz), 1,35(3H,d, J=8Hz), 1,6-1,8 (2H, m), 2,78(1H, m), 3,1-3,5(6H- m) , 3,65 (1H , m), 4,0-4,4(5H, m), 5,2(4H, s), 5,28 (1H, d, J=16Hz), 5,5(1H, d, J=16Hz), 6,32(1H, largo), 7,52(4H, d, J=9Hz), 7,65(2H, d, J=8Hz), 8,2 (6H, m)

HO

2) -17 3

Utilizando 87 mg (0,096 mmole) do composto obtido na reacção anterior realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2. Submeteu-se a solução reaccional resultante a uma cromatografia em coluna (HP-20 SS) utilizando octiD ageite de eluiçâo uma solução aquosa de etanol a 5-10 % e concentrou-se a fracção pretendida e liofilizou-se, obtendo--se 25,72 mg (rendimento 65,1Í) do composto identificado anteriormente. I.V. (KBr)cm’1: 1755, 1700, 1605, 1595, 1385 RMN (D20) é : 1 ,17(3H, d, J=8Hz), 1,24 (3H, d, J=8Hz), 2,5-2,8 (2H, m), 2,6-2,8(2H, m), 3,1-3,6(5H, m), 3,9- -4,4(5H, m) EXEMPLO 31

Acido (1R, 5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2R,4S)--2-(pirrolidin-3-il-metil)-pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen--2-em-3-carboxílico 1)

HO

Utilizando 790 mg (1,6 mmoles) de (1R, 5S,6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]-1-metil-2-difenoxifosforiloxi--1 -carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo, 560ng (1,6 nncles)de ( 2R , MS)-N-aliloxicarbonil-2-(N-aliloxicarbonilpirrolidin-3-il-- metil)-4-mercapto-pirrolidina e 0,28 ml (1,6 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-1 para se obterem 480 mg (rendimento 50 %) de (1R, 5S,6S)-2-[(2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-(N-aliloxicarbonil-pirrolidin-3-il-metil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo. RMN (CDC13) é : 1,28(3H, d, J=6Hz), 1,36(3H, d, J=6Hz), 1,5-1,8 (3H, m), 1 ,9-2,2(4H, m), 2,62(1H, m), 3,02(1H, M), 3,2-3,4(4H, m), 3,5-3,7(3H, m), 4,0-4,3(3H, m) , 4,6-4,9(6H, m), 5,2-5,56(6H, m), 5,9-6,1(3H, m)

Utilizando 480 mg (0,8 mmole) do composto 175 obtido na reacção anterior, 11 mg (0,016 mmole) de cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II), 1,28 ml (4,77 mmoles) de hidreto de tributilestanho e 107 ,ul (5,96 mmoles) de água, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-2 . Purificou- -se a camada aquosa resultante por cromatografia em coluna

TM de fase inversa (YMC.GEL ODS-AQ 120-S50, 50 ml) utilizando como agente de eluição uma mistura de metanol/água (1:4) e liofilizou-se obtendo-se 128 mg (rendimento 41 %) do composto anteriormente identificado. I.V.(KBr)cnf1: 1760, 1600, 1390 RMN(D20) ^ : 1,2(3H, d, J=6Hz), 1,28(3H, d, J=7Hz), 1,6-1,9 (3H, m), 2,2-2,7(3H, m), 2,9-3,6(10H, m), 3,8(1H, m), 4,2-4,4(2H, m) EXEMPLO 32

Acido (1R,5S,6S)-2-Ç(2R,4S)-2-[(2S)-2-carbamoilpirrolidin-4--il-metil]-pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil --1 -carbapen-2-em-3-oarboxílico

Utilizando 264 mg (0,49 mmole) de (1R, 5S ,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-difenoxifosforiloxi--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo, 210 mg (0,49 mmole) de (2R,4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbo-nil-2-carbamoilpirrolidin-4-il-metil]-4-mercapto-pirrolidina e 92 ^1 (0,49 mmole) de N,N-diisopropiletilamina,realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-1 obtendo-se 250 mg (rendimento 73 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-N-aliloxicarbonil-2--[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-carbamoilpirrolidin-4-il-metil]--pirrolidin-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen--2-em-3-carboxilato de alilo. RMN (CDClg) J : 1,25(3H, d, J=6Hz), 1,34(3H, d, J=7Hz), 1,5-1,8 (3H, m), 1,8-2,7(4H, m), 3,0-3,4(4H, m), 3,5- -4,4(7H, m), 4,5-4,9(6H, m), 5,2-5,5(7H, m), 5,8-6,1(3H, m), 6,9 (0,5H, largo s), 7,3 (0,5H, largo s)

177

Utilizando 250 g (0,387 mmole) do composto obtido na reacção anterior, 5,4 mg (0,008 mmole) de cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II), o,62 ml (2,3 mmoles) de hidreto tributilestanho e 52 /il (2,9 mmoles) de água, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-2. Purificou-se a camada aquosa resultante por cromatografia em co

TM luna de fase inversa (LC-SORB SP-B-ODS, 14 ml) utilizando como agente de eluição uma mistura de metanol/água (3:7) e liofilizou-se obtendo-se 107 mg (rendimento 63 %) do composto anteriormente identificado. I.V. (KBr)cm-1: 1750, 1680, 1590, 1390 RMN(D50) $ : 1,22(3H, d, J=7Hz), 1,28(3H, d, J=6Hz), 1,58 (1H, m), 1,8-2,4(5H, m), 2,6-2,84(2H, m), 3,2-3,7(6H, m), 3,95(1H, m), 4,1(1H, dd, J= =10,4Hz), 4,2-4,3(2H, m) 178 EXEMPLO 33

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2R,4S)--2-[(2S)-2-(metilcarbamoil)pirrolidin-4-il-metil]pirroli-din-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico

coo^·^

Utilizando 204 mg (0,41 mmole) de (1R, 5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-difenoxifosforiloxi-1 -carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo, 168 mg (0,41 mmole) de (2R ,4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2--(metilcarbamoil)pirrolidin-4-il-metil-4-mercaptopirrolidina e 71 μΐ (0,41 mmole) de Ν,Ν-diisopropiletilamina, realizou--se a técnica descrita no Exemplo 8-1, obtendo-se 180 mg (rendimento 67 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-N-aliloxicarbonil -2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-(metilcarbamoil)pirrolidin-4--il-metil]pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil -1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo. RMN ( CDCI3) £ : 1,5-J=4Hz) 3,9- m) , d, J=6Hz), 2,8(3H, d> 3,8(2H, m), 5,1-5»5(6H, 1,26(3H, d, J=6Hz), 1,36(3H, -1,8(3H, m), 1 ,8-2,6(4H, m), 3,ΟΠΗ, m) , 3Π-3.Μ3Η, m) , -4,4(5H, m), 4,5-4,9(6H, m), 5,8-6,0(3H, m), 6,9(Ο,5H, largo, s)> 7,3 (0,5H, largo, s) 2)

HO

Utilizando 180 mg (0,27 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior, 4 mg (0,005 mmole) de cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II), 0,44 ml (1,6 mmole) de hidreto de tributilestanho e 37 pl (2 mmoles) de água, rea lizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-2. Purificou-se a camada aquosa resultante por cromatografia em coluna de fase

Tm inversa (LC-S0RB SP-B-0DS) 14 ml, utilizando como agente 1 80 - de eluiçSo uma mistura de metanol/água (3:7) e liofilizou-se obtendo-se 60 mg (rendimento 49 %) do composto anteriormente identificado. I.V. (KBr)cm 1; 1750, 1600, 1390 RMN(D20) £: 1,2(3H, d, J=6Hz), 1,28(3H, d,J=7Hz), 1,56(1H, m) , 1,8-2,3(5H, m), 2,6-2,8(2H, m) , 2,76(3H, s), 3.2- 3,7(6H, m), 3,95(1H, m), 4,04(1H, dd, J=10,4Hz), 4.2- 4,3(2H, m) EXEMPLO 34 Ácido ( 1R ,5S ,6S)-6-[ (R)-1-hidroxietil]-i,Inet-^1_2-[(2R.4S)-2--[(2S)-2-(dimetilcarbamoil)-pirrolidin-4-ii.metii1pirrolidin- -4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico 1)

COO·^^ 181 -

Utilizando 129 mg (0,26 mmole) de (1R,5S, 6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-difenoxifosforiloxi-1-car-bapen-2-em-3-carboxilato de alilo, 110 mg (0,26 mmole) de (2R , 4S)-N-aliloxicarbonil)-2-[(2S)-N-aliloxicarboni1-2-(dime-tilcarbamoil)-pirrolidin-4-il-metil]-4-mercaptopirrolidina e 45 μΐ (0,26 mmole) de N ,N-diisopropile ti lamina , realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-1, obtendo-se 78 mg (rendimento 45 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2R, 4S)-N-aliloxicarboni1-2--[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-(dimetilcarbamoil)-pirrolidin-4-il--metil]pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1--carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo. RMN (CDC13) S : 1,26(3H, d, J = 6Hz), 1 ,37(3H, d, J=6Hz), 1,4-2,6 (7H, m), 2,9-3,3(4H, m) , 2,98(3H, s), 3,12(3H, s), 3,5-4,3(7H, m), 4,5-4,9(6H, m), 5,1-5,5(6H, m), 5,9 (3H, m) 2)

18 2-

Utilizando 78 mg (0,12 mmole) do composto obtido na reacção anterior, 2 mg (0,002 mmole) do cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II), 0,186 ml (0,69 mmole) de hidreto de tributilestanho e 16 μΐ (0,87 mmole) de água, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-2. Purificou-se a camada aquosa resultante por cromatografia em coluna de fase

Tm inversa (LC-SORB SP-B-ODS, 14 ml) utilizando como agente de eluiçâo metanol/água (2:3) e liofilizou-se obtendo-se 11 mg (rendimento 20 %) do composto anteriormente identificado . I.v. (KBr)cnf1: 1750, 1640, 1600, 1390 KMN (D20) £ : 1,2(3H, d, J=6Hz), 1,28(3H, d, J=7Hz), 1,5(1H,m), 1,8-2,4(5H, m), 2,6-2,9(2H, m), 2,96(3H, a;) , 3,06(3H, s), 3,1-3,6(6H , m), 3,8-4,0 (2H, m), 4,1-4,3(2H, m) EXEMPLO 35

Acido (IR , 5S , 6S )-2-[(2S, 4S)-2-(2 ,4dioxoimidazolidin-5-il)--pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-l-carba-pen-2-em-3-carboxílico 1)

IIO

0

Em 5 ml de ácido trifluoroacético dissolveram-se 250 mg (0,499 mmole) de (2S,4S)-2-(2,4-dioxoimidazo-lidin-5-il)-4-(p-metoxibenzil-tio)-N-(p-nitrobenziloxicarbo-nil)-pirrolidina (composto do Exemplo de Referência 28) e 0,27 ml (2,48 mmoles) de anisol e arrefeceu-se a soluçSo com gelo sob atmosfera de azoto. Adicionou-se depois, gota a gota, 0,07 ml (0,791 mmole) de ácido trifluorometanossulfónico e agitou-se a mistura durante 50 minutos mediante arrefecimento com gelo. Eliminou-se o dissolvente por destilação e lavou-se o resíduo com éter etílico obtendo-se um tiol bruto.

Utilizando 300 mg (0,505 mmole) de (1R, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)_i_hidroxietil]-1-metil-1--carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e o tiol obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 obtendo-se 100 mg (rendimento 28 %) de (IR, 5S, 6S)-2-[ (2S,JJS)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5-il)-N-(p-nitroben-ziloxicarbonil)pirrolidin-Yil-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1--metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo.

RMN(CDC13) íÍ ;

2)

HO

HN

O

Y

KH

O com

Utilizando 100 mg (0,138 mmole) do posto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica des crita no Exemplo 1-2, obtendo-se 23 mg (rendimento 41 %) do composto acima identificado. I.V. (KBr)cm""1 V 3440, 1760, 1730, 1600, 1400

RMN (D20) S 1,20(3H, d, J=7Hz), 1,27(3H, d, J=7Hz), 1,75 (1H, m), 2,6(1H, m), 3,0-3,6(4H, m), 3»7~ -4,0(2H, m), 4,1-4,3 (2H, m), 4,57(1H, d, J=8Hz) UV X (tampao de ácido 3-morfolinopropanossulfó- max nico 0,1 M pH 7,0) : 300 nm ( £ = 9400) 1 86 - EXEMPLO 36

Acido (5R , 6S)-2-[(2S , 4S)-2-(2 ,4-dioxoimidazolidin-5-il)- pirrolidin-4-il-tio]-6-[ (R)-i-hidroxietil]-1-carba-pen-2-em-3-carboxílico 1)

HO

Utilizando 150 mg (0,258 mmole) de (5R, 6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-carbapen-2--em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 120 mg (0,240 mmole) de (2S,4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5-il)-4-(p-metoxibenzil--tio)>N-( p-nitrobenziloxicarbonil )-pirrolidina (composto do Exemplo de Referência 28), realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1, obtendo-se 30 mg (rendimento 18 %) de (5R, 6S)-2-[(2S,4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5-il)-N-(p-nitroben-ziloxicarbonil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1--carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V. (KBr)cm"1: 3400, 1780, 1730, 1610, 1520, 1350 187 - RMN (CDC13 + CD3OD) J: 1,32 (3H, d, J=6Hz), 1,78(1H, m), 2,40(1H, m), 3,0-3,5(4H, m), 4,0-4,5(4H, m) , 4,73 e 5,04 (1H, s), 5,28(2H, s), 5,28 e 5,49(2H, ABq, J=13Hz), 7,57(2H, d, J=9Hz), 7,67(2H, d, J=9Hz), 8,1-8,3(MH, m) 2)

0

Utilizando 30 mg (0,042 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 obtendo-se 11 mg (rendimento 66%) do com· posto acima identificado. I.V. (KBr)cnf1: 3430, 1760, 1720, 1600, 1400 RMN (DgO) £ : 1,26(3H, d, J=7Hz), 1,55(1H, m), 2,5(1H, m), 3,1-3,6(4H, m), 4,1-4,3(2H, m), 4,38(1H, d, J= - 18-8 _ = 5Ηζ) UV \ (tampão de ácido 3-morfolinopropanossulfónico max 0,1M, pH 7,0):301 nm ( £=4600) EXEMPLO 37

Acido (1R , 5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5-il--metil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hi droxietil]-1-metil-1--carbapen-2-em-3-carboxilico, diastereoisómero A 1)

f

Utilizando 220 mg (0,440 mmole) de (1R, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[ (R)-1-hidroxietil]-1-metil-1--carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo e 270 mg (0,498 mmole) de (2R,4S)-N-aliloxicarbonil-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5-il--metil )-4-tritil-tiopirrolidina , diastereoisómero A (composto do Exemplo de Referência 29) realizou-se a técnica descrita 189 no Exemplo 8-1 obtendo-se 70 mg (rendimento 26 %) de (1R,5S, 6S)-2-[ (2R ,4S)-N-aliloxicarbonil-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5--il-metil)-pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-i-hidroxietil]-1-metil -1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo, diastereoisómero A. I.V.(KBr)cm 1 : 3550, 3480, 3420, 3200, 1780, 1730 1550, 1420 RMN (CDC13) é : 1 ,26(3H, d, J = 7Hz), 1,36(3H, d, J=7Hz) , 1>5_ -2,5(4H, m), 2,7(2H, m), 3,1-3,6(3H, m), 3,7(1H, m) , 3,8-4,4(4H, m), i|,,9( , m) , 5,0-5,5(4H, m), 5,6-6,05(2H, m), 6,89(1H, s) 8,78(1H, s) 2)

com-

Utilizando 70 mg (0,128 mmole) do -190- posto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-2 obtendo-se 19 mg (rendimento 35 %) do composto acima identificado. I. V. (KBr)cnf1 : 3*100, 3250, 1760, 1 720, 1590, 1390 RMN(D20) Á : 1,15(3H, d, J=6Hz), 1,22(3H, d, J=7Hz), 1,7(1H, m), 2,3(2H, m), 2,75(1H, m), 3,2- -3,5(3H, m), 3 »5-3,9(2H, m), 3,95(1H, m) , ií, 2 ( 2H , m) , 4,34(1H, t, J = 6Hz) UV A _ (tampão de ácido 3-morfolinopropanossulfónico

IQâ X 0,1M, pH 7,0): 298 nm (€.=9300) EXEMPLO 38

Acido (1R,5S,6S)-2-[gR,4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5-il--metil)pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-meti1--1-carbapen-2-em-3-carboxílico, diastereoisómero B

C 191

Utilizando 220 mg (0,440 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1--metil-l-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo e 220 mg (0,406 mmole) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-(2,4-dioxoimida zolidin-5-il-metil)-4-tritil-tiopirrolidina, diastereoisó-roero B (composto do Exemplo de Referência 29), realizou--se a técnica descrita no Exemplo 8-1, obtendo-se 70 mg (ren dimento 31 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-N-aliloxi-carbonil-2--(2,4-dioxoimidazolidin-5-il-metil)-pirrolidin-4-il-tio]-6--[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo, diastereoisómero B. I.V.(KBr)cm"1: 3^20, 3270, 1775, 1730, 1550, 1415 RMN (CDC13) ^ : 1,27(3H, d, J=7Hz), 1,36(3H, d, J=7Hz), 1,5-2,1 (4H, m), 2,3(1H, ra), 2,7<1H, m) , 3,1-3,45 (3H, m), 3,65(1H, m), 3,9-^,¾(, m), 4,4-4,9 (4H, m), 5,1-5,6(4H, m), 5,7-6,1 (2H, m) , 6,73 (1H, s), 8,3M1H, s) 2) 192 -

Utilizando 70 mg (0,128 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior realizou-se a técnica descrita no Exemplo 8-2 obtendo-se 18 mg (rendimento 33 Ϊ) do composto acima identificado. I.V.(KBr)cm”1: 3420, 3230, 1760, 1720, 1590, 1395 RMN(D20) £ : 1,12(3H, d, J = 7Hz), 1,19(3H, d, J = 7Hz), 1,65 (1H, m), 2,3(2H, m), 2,73(1H, m) , 3,2-3,5 (3H, m), 3,61 (1H, m), 3,8( 1H, m) , 3,94(1H, m) , 4,15(2H, m) , 4,34(1H, t, J=6Hz) UV ^ (tampSo de ácido 3-morfolinopropanossulfónico 0,1M, pH 7,0):298 mn (£.=9400) EXEMPLO 39 (1R,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il-metil)pir-rolidin-iuil-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen--2-em-3-carboxilato de sódio 1)

Mediante arrefecimento adicionou-se 0,3*+ ml (0,68 mmole) de uma soluçSo aquosa 2N de hidróxido de sódio a uma solução de 250 mg (0,57 mmole) de (2R,US)--M-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2,5-dioxopirro lidin-3-il-metil)-pirrolidina (composto do Exemplo de Referência 30) em 5,0 ml de metanol e agitou-se a mistura durante 30 minutos.

Adicionou-se depois 0,Hng(0,66 mmole) de ácido clorídrico 6N e extraiu-se a mistura com cloreto de metileno. Secou-se o extracto sobre sulfato de magnésio anidro -oncentrou-se, obtendo-se (2R,4S)-4-mercapto-N-(p-nitroben-ziloxicarbonil)-2-(2,5-dioxopirrolidin-3-ii»metil)pirroli-iina.

Utilizando o tiol obtido na reacçSo anterior e 273 mg (0,46 mmole) de (1R,5S ,6S)-2-difenoxifo -foriloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-car boxilato de p-nitrobenzilo, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 obtendo-se 229 mg (rendimento 67 %) de (1R,5S, 5S)-2-[(2R,4S)-2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il-metil)-N-(P-nitr°-benziloxicarbonil)pirrolidin-4-il-tio]-6-C(R)-1-hidroxietil ]--1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. RMN(CDC13) £ : 1,28(3H, d, J = 8Hz) , 1,38(3«, d’ J = 8Hz)’ 5,24 (4H, largo, s), 7,54(4H, d d, J=8Hz) Π1Η. larirn «V 7 H. J = 8Hz), 8,25(4H,

HO

^—- N O H 195-

Utilizando 210 mg (0,28 mmole) do composto obtido na reacção anterior realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2, obtendo-se 26 mg (rendimento 21 %) do composto acima identificado. I.v. (KBr)cm-1: 3*100, 2950, 1760, 1720, 1600, 1380, 1 1 80 RMN(D2Q )á : 1,10(3H, d, J=6Hz), 1,16(3H, d, J = 6Hz) , 1,58 (1H , m) , 2,00(1H, m), 2,46(1H, m) , 2,66(1H, m), 2,94(2H, m), 3,28(2H, m), 3,54(1H, m), 3,74 (1H, m), 4,12(2H, m) HPLC:

Agente de eluiçSo: tampão de fosfato 0,01M (pH 6,5- -metanol) (85:15)

Velocidade de eluição: 0,8 ml/minuto

As outras condições são as descritas no Exemplo 1.

Tempo de retenção: 4,28 minutos. 196 -

EXEMPLO HO

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(5-oxopiperazin-2-il)pirroli-din-4-il-tio]-6-[( R)- 1-hidroxietil ]-1 -metH.-l-carbapen-2-ero--3-carboxílico, diastereoisómero A 1)

Utilizando 250 mg (0,60 mmole) de (2S, 4S)-N-aliloxicarbonil-4-acetil-tio-2-(1-aliloxicarbonil-5--oxopiperazin-2-il)pirrolidina, diastereoisómero A (composto do Exemplo de Referência 31) realizou-se a técnica descrita no Exemplo 39-1, obtendo-se a (2S,4S)-N-aliloxicarbo nil-2-(1-aliloxicarbonil-5-oxopiperazin-2-il)-4-mercaptopir-rolidina, diastereoisómero A.

Utilizando o tiol obtido na reacçâo anterior e 242 mg (0,48 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxifosfo-riloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carbo-xilato de alilo, realizou-se a técnica descrita no Exemplo- -197- 1-1, obtendo-se 222 mg (rendimento 7^4 í) de (1R,5S,6S)-2--[(2S,US)-N-aliloxicarbonil-2-(1-aliloxicarbonil-5-oxopipe-razin-2-il)pirrolidin-ií-il-tio]-6- [ (R)-l-hidroxietil]-l--metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo, diastereo-isómero A. RMN (CDClg) o( : 1,26(3H, d, J=6Hz), 1,38(3H, d, J=6Hz), 1,80 (1H, m), 2,50(1H, m), 3,0-5,0(19H, m), 5,20- -5,60(6H, m), 5,96(3H, m)

HO

Utilizando 220mg (0,35 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior (diastereoisómero A) realizou-se a técnica descrita no Exemplo 9-2, obtendo-se 88 mg (rendimento 60Í) do composto acima identificado (diastereoisómero A). -198- I.V. (KBr)cnf1 : 3400, 2950, 1760, 1660, 1600, 1380 RMN(D20) d, J=6Hz), 1,26(3H, d, J=6Hz), 1,78 2,64(1H, m), 3,10-3,80(10H, m), m), 4,22(2H , m) 1 ,20(3H, (1H, m), 4,00(1H, HPLC:

Velocidade de eluiçSo: 0,8 ml/minuto

As outras condições s3o as descritas no Exemplo 1.

Tempo de retenção: 3,02 minutos

EXEMPLO

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(5-oxopiperazin-2-il)pirrolidin--4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxílico, diastereoisómero B 1)

HO

199

Utilizando 200 mg (0,48 mmole) de (2S,4S)-4-acetil-tio-N-aliloxicarbonil-2-(1-aliloxicarbonil--5-oxopiperazin-2-il)pirrolidina, diastereoisómero B (composto do Exemplo de Referência 31), realizou-se a técnica descrita no Exemplo 39-1, obtendo-se a (2S,4S)-N-aliloxicar bonil-2-(1-aliloxicarbonil-5-oxopiperazin-2-il)-4-mercapto-pirrolidina, diastereoisómero B.

Utilizando o tiol obtido na reacçao anterior e 243 mg (0,48 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxifos-foriloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de alilo, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1, obtendo-se 246 mg (rendimento 65 %) de (1R,5S, 6S )-2-[(2S , 4S)-N-aliloxicarbonil-2-(1-aliloxicarbonil-5--oxopiperazin-2-il)-pirrolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-car,t>oxilato de alilo, diastereoisómero B. RMN (CDC13) S í 1,24(3H, d, J=6Hz), 1,38(3H, d, J=6Hz), 1,80 (1H, m), 2,60(1H, m), 3,10-3,80(10H , m) , 4,0- -5,0(9H, m)5,20-5,60(6H, m), 5,96(3H, m),

2) 200 UL

Η

Utilizando 240 mg (0,39 mmole) do composto obtido na reacção anterior (diastereoisómero B) realizou--se a técnica descrita no Exemplo 9-2, obtendo-se 53 mg (ren dimento 33 % do composto acima identificado (diastereoisómero B) . I.V. (KBr)cm"1: 3400, 1760, 1660, 1600, 1380 RMN(D20 ) cP. 1,18(3H, d, J=6Hz), 1,20(3H, d, J = 6Hz) , 1,76 (1H, m), 2,64(1H, m), 3,10-3,80(10H, m) , 3,94(1H, m), 4,18(2H, m) HPLC:

AgeBte de eluição: TampSo de fosfato 0,1M, pH 6,5- -metanol (85:15)

Velocidade de eluição: 0,8 ml/minuto

As outras condições são as descritas no Exemplo 1.

Tempo de retenção: 3,92 minutos. EXEMPLO 42

Acido (5R ,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2S,4S)-2-(piperidin--4-il)pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-carboxílico

HO

PNZ 1)

Utilizando 270mg(0,46 mmole) de (5R,6S) -2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-carbapen-2-em--3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 216 mg (0,40 mmole) de (2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p- nitrobenziloxicarbonil)piperidin-4-iljpirrolidina (composto do Exemplo de Referência 32) realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1, . obtendo-se 267 mg (rendimento 65,6%) de (5R ,6S)-6-[(R)-1 -hidroxietil]-2-[(2S,4S)-JÍ^p^trobenzilaxicart)cnil--?r[ W p^troberzilaxicartoh i 1..) p i p e r i d i n - 4 - i 1 ] - p i r r o 1 i d i n - 4 - i 1 -1 i o ]--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. 202 - 202 - I. V.(KBr)cm 1780, 1700, 1520, 13^0 RMN(CDC13) j : 1,35(3H, d, J=6Hz) , 2,76(2H, m) , 3,54(1H, m) , ^ , 00(1H, m), 5,2M5H, m) , 5,52(1H, d, J=l4hz), 7,52(MH, d, J=8Hz), 7,66(2H, d, J=8Hz), 8,22 (6H, m) 2) uo

Utilizando 265 mg (0,30 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2, obtendo-se 33 mg (rendimento 28,5 %) do composto acima identificado. I.v.(KBr)cnf1: 1760, 1590, 1390 RMN(D20) £ : 1,26(3H, d, J=6Hz), 1,31-1,56(3H, m) , 1,69 203 (1 Η, m), 1,85-2,l4(2H, m), 2,50(1 Η , m) , 2,81-3,06 (4Η , m), 3 ,10(3Η, m), 3,40(3Η, m), 3,74(1Η, m) , 4,20(2Η, m) HPLC (as condições sSb as descritas no Exemplo 1) Tempo de retenção: 3)06 minutos. EXEMPLO 43 Ácido (1R,5S,6S)-6-[( R )-1-hidroxietil~|-.iumetil-2-[ (2S,4S)--2-(piperidin-4-il )-pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-ero--3-carboxílico

HO

D

Utilizando 245 mg (0,41 mmole) de (1R, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[ ( R)- 1 -hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 216 mg (0,40 mmole) de (2S , 4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbo- 204 nil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)piperidin-4-il]-pirroli-dina (composto do Exemplo de Referência 32), realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1 obtendo-se 279 mg (rendimento 76,2 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S, 4S)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil )piperidin-4-il]pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V. (KBr)cm-1: 1770, 1700, 1520, 1340 RMN(CDC13) : 1,28(3H, t, J=7Hz), 1,36(3H, t, J=6Hz), 1,44-1,84 (3H, m), 5,15(5H, m), 5,53(1H, d, J=14Hz), 7,56 (4 H, d, J = 8Hz), 7,68(2H, d, J=8Hz), 8,24(6H, m)

Utilizando 275 mg (0,31 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica des- 205 crita no Exemplo 1-2, obtendo-se 57 mg (rendimento 46,6 %) do composto acima identificado. I.v.(KBr)cm-1: 1750, 1590, 1390 RMN (D20) é : 1,15(3H, d, J=7Hz), 1,27(3H, d, J=6Hz), 1,28- -1,58(3H, m), 1,70(1H, m), 1,85-2,15(2H , m) , 2,46(1H, m), 2,78-3,18(5H, m), 3,40(4H, m) , 3,76(1H, m), 4,22(2H, m) HPLC (as condições são as. descritas no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 3,28 minutos EXEMPLO 44

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-carbamoilpirrolidin-4-il)-- [pirrolidin-4-il-tio]-6-[ (R)-l-hidroxietil ]-1-metil-1-earba-pen-2-em-3-carboxílico, diastereoisómero III

ΓΝΖ - 206

Utilizando 185 mg (0,31 mmole) de (1R ,5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[ (R)-1-hidroxietil]-1--metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 175 mg (0,31 mmole) de (2S,4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitroben ziloxicarbonil)pirrolidin-4-il]-4-mercapto-N-(p-nitroben-ziloxicarbonil)pirrolidina, diastereoisóraero III (composto do Exemplo de Referência 33) realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-1, obtendo-se 218 mg (rendimento 76,3 %) de (1R,5S,6S)-2-[ (2S,4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)pirrolidin-4-il]-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pir-rolidin-4-il-tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen--2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. I.V.(KBr)cnf1: 1770, 1700, 1600, 1520, 1340 RMN (CDClg) d : 1,27(3H, d, J=7Hz), 1,36(3H, d, J=6Hz), 4,02- -4,40(5H, m), 5,22(5H, m), 5,52(1H, d, J=14Hz), 7,50(4H, d, J=8Hz), 7,66(2H, d, J=8Hz), 8,22(6H, m) 207-

Utilizando 218 mg (0,24 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo 1-2 obtendo-se 46 mg (rendimento 45,6 %) do composto identificado antes. I.V. (KBr)cm-1: 1760, 1680, 1600, 1390 RMN (D20) £ : 1 ,40-2,82 3,98 1,19(3H, d, J=7Hz), 1,27(3H, d, J=6Hz), -1,68(2H, m), 2,45(2H, m), 2,60(1H, m) , (1H, m), 3,04-3,47(6H, m), 3,85(1H, m) , (1H, t, J = 8Hz), 4,21(2H, m) HPLC (utilizando as condiçOes descritas no Exemplo 1) 2,15 minutos

Tempo de retenção: 208 - EXEMPLO DE REFERÊNCIA 1 (2S,MS)-M-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2~(2-pir-rolidon-4-il)pirrolidina

HO

COOMe

Boc A MO ml de uma solução aquosa de 8,2g (45,2 mmoles) do cloridrato do éster metílico 1-hidroxi-prolina adicionaram-se, à temperatura ambiente, 7,54 ml (54,2 mmoles) de trietilamina e depois 10,8 g (45 mmoles) de 2-t-butoxicarbonil-tio)-4-6-dimetilpirimidina em 80 ml de dioxano. Agitou-se a mistura reaccional durante 90 minutos à temperatura ambiente e separou-se depois o dioxano por destilação sob pressSo reduzida. Extraiu-se o resíduo com 250 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com uma solução aquosa 0,1 N de hidróxido de sódio, ácido clorídrico diluído, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secou-se depois sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão 209 reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em colu-

, TM na contendo gel de sílica (Wakogel C-300) utilizando como agente de eluiçSo uma mistura de metanol a 5 %/cloreto de metileno. Obtiveram-se 9,3 g (rendimento 84 %) do éster metílico da N-t-butoxicarbonil-L-hidroxiprclina. RMN (CDClg) £' 1,38-1,48(9H, m), 1,98-2,38(2H, m), 3,40-3,72 (2H, m), 3,86(3H, s), 4,35-4,58(2H, m) 2) TBDMSO,

COOMe

Boc  temperatura ambiente e sob atmosfera de azoto, adicionaram-se 4,95 g (72,7 mmoles) de imidazol e 10,7 g (71,0 mmoles) de . cloreto de t-butil-dimetilsililo a uma soluçSo de 14,0 g (57,1 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior em 150 ml de Ν,Ν-dimetilformamida. Agitou-se esta solução durante toda a noite à temperatura ambiente. Adicionaram- - £ 10 - -se 500 ml de acetato de etilo à mistura reaccional e lavou--se a camada orgânica, duas vezes, com água e uma vez com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida, obtendo-se 19 g (rendimento 92,6 %) de éster metílico da (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butil--dimetilsililoxi-L-propina. 3)

TBDMSO

OH N

Boc

Sob atmosfera de azoto adicionaram-se 4,49 g (106 mmoles) de cloreto de lítio e depois 4,o g (106 mmoles) de hidreto de boro e sódio a uma solução de 19,0 g (52,9 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 180 ml de tetra-hidrofurano. A esta mistura, adicionaram-se, gota a gota, 180 ml de etanol e agitou-se a mistura reaccional durante toda a noite à temperatura ambiente. A mistura reaccional resultante adicionaram-se 100 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio para decompor o excesso de 21 1 agente redutor. Concentrou-se depois a mistura resultante sob pressão reduzida. Extraiu-se o resíduo com 500 ml de aoetato de etilo e lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Wako-tm gel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de eti_ lo (5:1) obtendo-se 14,88 g (rendimento 84,9 í) de (2S,4R)--N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsiloxi-2-hidroximetil-pirrolidina. 4)

TBDMSO

N

COOEt

Boc

Sob atmosfera de azoto e â temperatura de -78°C adicionou-se, gota a gota, uma solução de 3,6 ml (50,7 mmoles) de sulfóxido de dimetilo em 15 ml de cloreto de metileno a uma solução de 2,89 ml (33,9 mmoles) de cloreto de oxalilo em 100 ml de cloreto de metileno. Agitou--se a mistura reaccional durante 30 minutos à mesma tempe- 212 ratura. À mistura reaccional resultante adicionou-se, gota a gota, e à temperatura de -78°C, uma solução de 8,0 g (2^,2 mmoles) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetil sililoxi-2-hidroximetil-pirrolidina em 50 ml de cloreto de metileno. A mistura resultante agitou-se durante 30 minutos à mesma temperatura e adicionaram-se depois 11,1 ml (79,8 mmoles) de trietilamina. Agitou-se a mistura durante mais 30 minutos. Verteu-se a mistura reaccional sobre 200 ml de cloreto de metileno e lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com ácido clorídrico diluído, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sob sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida obtendo-se um resíduo oleoso de (2S,4R)-N--t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-formil-pirroli-dina.

Sob atmosfera de azoto e mediante arre fecimento com gelo adicionaram-se 6,0 g (26,8 mmoles) de dietoxifosforilanetatocte etilo a uma suspensão de 1,0 g (25,0 mmoles) de hidreto de sódio a 60 $ em 100 ml de tetra-hidro-furano. Agitou-se a solução resultante durante 30 minutos à mesma temperatura. À mistura reaccional resultante adicionaram-se, gota a gota, 20 ml de uma solução de (2S, 4R)-N--t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-formil-pirroli-dina obtida na reacçâo anterior em tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 30 minutos à mesma temperatura. Extraiu-se a mistura reaccional com 150 ml de acetato de 213 etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e con centrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma

, TM cromatografia era coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (10:1). Obtiveram-se 9,4 g (rendimento 97,5 %) de éster etí lico do ácido 1-3-C(2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildi-metilsililoxipirrolidin-2-il]-acrílico. RMN (CDClg) S : 0,06(6H, s), 0,88(9H, s), 1,30(3H, d, J = 7Hz), 1,44 (9H, largo, s), 1,84(1H , m), 2,10(1H, m), 3,48(2H, m), 4,12(2H,.q, J=7Hz), 4,35(1H, m) 5,88(1H, largo, d, J=16Hz), 6,86(1H, m) 5)

Doc

xo - 21¾

À temperatura ambiente e sob atmosfera de azoto adicionaram-se, gota a gota, 5,8 ml (46,2 mmoles) de 1,1,3,3-tetrametil-guanidina a uma solução de 9,0 g (22,6 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 33 ml de nitrometano. Agitou-se durante toda a noite a mistura resultante á mesma temperatura. Adicionaram-se 200 ml de acetato de etilo à mistura reaccional e lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com ácido clorídrico diluído, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de síli^ TM ca Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo hexano/acetato de etilo (10:1). Obtiveram-se 10,1 g (rendimento 97,3 í)do éster etílico do ácido 3-[(2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4--t-butildimetilsililoxipirrolidin-2-il]-4-nitrobutírico. RMN (CDClg)/; 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1,27(3H, d, J=7Hz), 1,48(9H, largo, s), 1,73(1H, m) , 2,00(1H, m) 2,44(2H, m), 3,16 (1H, m), 4,16(4H, m) , 4,33(1H, m), 4,53(1H, m) 6)

TBDMSO

A uma solução de 3»6 g (7,8 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior em 50 ml de etanol adicionaram-se 3,0 ml de níquel de Raney do tipo W-2. Agitou--se a mistura durante toda a noite à temperatura ambiente sob atmosfera de hidrogénio. Separou-se o catalisador da mistura reaccional por filtração. Concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em 50 ml de benzeno e aqueceu-se a mistura à temperatura de refluxo durante toda a noite. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e submeteu-se o resíduo a uma croma-tografia em coluna contendo gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçao metanol/clorofórmio a 1 %. Obtiveram-se 1,87 g (rendimento 62,2 %) de (2S,4R)-N-t-buto-xicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-(2-pirrolidon-4-il)--pirrolidina. RMN (CDC13) J : 0,06 (6H, s), 0,86(9H, s), 1,47(9H, s), 1,72 218 (1Η, m), 1 ,88-2,48(3Η, m), 2,95-3,75(5Η, m) , 4,13(1Η, m), 4,30(1Η, m) 7) ΙΙΟ

Dissolveram-se 1,87 g (4,87 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 20 ml de uma solução aquosa a 80 % de ácido trifluoroacético e agitou-se a solução durante toda a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e dissolveu-se o resíduo em uma mistura constituída por 10 ml de dioxano e 10 ml de água. Ajustou-se o pH até 8 com uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1N. Adicionaram-se depois 1,55 g (4,86 mmoles) de 4,6-dimetil-2-(p-nitrobenzi-loxicarbonil-tio)pirimidina. Agitou-se a solução resultante durante 3 horas à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se o resí duo com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio 217 anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Tm

Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol a 3 %/clo-rofórmio. Obtiveram-se 769 mg (rendimento 45,2 %) de (2S,4R) -4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il) -pirrolidina. RMN (CDClg) á: 1,72-2,52(5H, m), 2,98-3,58(3H, m), 3,78(1H, m) , 4,24(1H , m), 4,48(1H, m), 5,25(2H, largo, s), 7,54(2H, d, J=9Hz), 8,24(2H, d, J=9Hz) 8)

AcS

ACS

Sob atmosfera de azoto adicionaram-se 567 mg (2,16 mmoles) de trifenilfosfina a uma solução de 302 mg (0,87 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior em 10 ml de tetra-hidrofurano e adicionaram-se depois, gota a gota, e mediante arrefecimento com gelo, 0,341 ml (2,17 - 21 8 -mmoles) de azodicarboxilato de dietilo. Agitou-se a solução reaccional durante 30 minutos mediante arrefecimento com gelo. Adicionou-se depois, gota a gota, 0,150 ml (2,17 m-moles) de ácido tioacético. Agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. Extraiu-se depois a solução reaccional com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se depois sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu -se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 para se obterem 166 mg (rendimento 47,1 %) de (2S,4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina mediante eluição com hexano/acetato de etilo (1:1) e 166 mg (rendimento 47,1 %) de (2R, 4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbo-nil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina mediante eluição com metanol a 3%/clorofórmio.

Isómero (2S,4S) I.V.(KBr)cm“1 : 1700, 1520, 1340, 1110 RMN (CDC13) à : 1 ,70(1H, m), 1,98-2,62(4H, m), 2,37(3H, s), 3,17(2H, m), 3,42(1H, m), 3,87(1H, m), 4,05- -4,35(2H, m), 5,24(2H, largo, s), 7,55(2H, 219 d, J = 9Hz) , 8,26(2H, d, J = 9Hz)

Isómero (2R,4S) I.V. (KBr)cnf1: 1700, 1520, 1350, 1120 RMNÍCDCl^) è : 1 ,68(1H, m), 2,30-2,95(4H, m), 2,38(3H, s), 3,20 (1H , m), 3,55(1H, m), 3,88(2H, m), 4,06-4,30 (2H , m) , 5 ,26(2H, largo, s), 7,56(2H, d, J = = 9Hz) , 8,26(2H, d, J = 9Hz) 9)

HS

Sob atmosfera de azoto e mediante arrefecimento com gelo, adicionou-se, gota a gota, 0,42 ml de uma solução aquosa de hidróxido de sódio 1N a uma solução de 166 mg (0,41 mmole) do isómero (2S,4S) obtido na reacção anterior em 10 ml de metanol. Agitou-se a solução resul- 22 0 _ tante durante 15 minutos à mesma temperatura. À mistura reaccional obtida adicionou-se, gota a gota, 0,45 ml (de ácido clorídrico 1N). Concentrou-se depois a mistura reaccional sob pressão reduzida. Extraiu-se o resíduo com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida,obtendo-se 140 mg (rendimento 9^ %) de (2S , 4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirroli-don-4-il)pirrolidina. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 2 (2R,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirro-lidon-4-il)pirrolidina

HS

Utilizando 166 mg (0,41 mmole) de (2R,4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirro-lidon-4-il)pirrolidina, composto do Exemplo de Referência 1-8, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 221 1-9 obtendo-se 140 mg (rendimento 94 %) do composto identificado antes. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 3

(2S,4S)-2-(2-azetidinon-4-il)-4-mercapto-N-(p-nitrobenzilo-xicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero B 1)

TBDMSO /

A 2,18 g (5,46 mmoles) de éster etílico do ácido [(2S ,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetil-sililoxipirrolidin-2-il]acrílico, composto do Exemplo de Referência 1-4, adicionaram-se 1,2 ml (11 mmoles) de ben-zilamina. Agitou-se a mistura durante 5 dias à temperatura ambiente. Submeteu-se depois a mesma mistura a uma croma-

, TM tografia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo hexano/acetato de etilo (3ϊ1). Obtiveram-se 1,95 g (rendimento 70,5 %) de éster etílico do ácido 3-benzilamino-3-[(2S,4R)-N-t-butoxicarbo- 222 nil-4-t-butildimetilsililoxipirrolidin-2-iljpropiónico. RMN(CDC13) 6 : 0,05(6H, s) , 0,86(9H, s), 1 ,24(3H, t, J=8Hz), 1.4M9H, s), 1 ,9 0 (1H, ra) , 2,35(2H, m) , 3,26 (1H, m), 3,89 e 3,96 (2H, ABq, J=8Hz), H,14(2H, q, J = 8Hz) , 4,39( 1H, m) , 7,3K5H, m) 2)

TBDMSO

À temperatura ambiente adicionaram--se, gota a gota, M,3 ml de uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio a uma solução de 1,98 g (3,9 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior em 30 ml de etanol. Agitou-se a solução durante toda a noite à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se 4,3 ml de ácido clorídrico 1N. Concentrou-se a solução resultante sob pressão reduzida. Ao resíduo resultante adicionaram-se 50 ml de tetra-hidrofurano e separaram-se por filtração os produtos - 22 3 - insolúveis. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Dissolveram-se 1,83 g da substância oleosa resultante em 38o ml de acetonitrilo. Sob atmosfera de azoto adicionaram-se 1,2 g (**,58 mmoles) de trifenilfosfina e 1,01 g (**,58 mmoles) de dissulfureto de 2,2'-dipiridilo. Agitou-se a solução resul tante durante *1,5 horas à temperatura de 80°C. Concentrou--se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se com 150 ml de acetato de etilo. Lavou-se, sequencialmente, a camada orgânica com uma solução aquosa 0,1N de hidróxido de sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a

uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica TM

Wakogel C-300 e como agente de eluição/acetato de etilo (10 : 1 -► 3 : 1). Obtiveram-e 1,07 g (rendimento 60,7% ) de (2S , *4R )-2- ( N-benzil-2-azetidinon-**-il )-N- t-butoxicarbo-nil-4-t-butildimetilsililoxipirrolidina, diastereoisómero B (composto muito polar) e 0,**7 g (rendimento 26,8 %) do diastereoisómero A.

Diastereoisómero B I.v. (KBr)cnf1: 1730, 1690, 1390,1170 RMN (CDC13) á: 0,06(6H, s), 0,88(9H, s), 1,50(9H, largo, s), 224 2.54(1H, largo, d, J=14Hz), 2,93 (1 H, dd , J=14,4Hz), 3,16(1H, dd, J=12,4Hz), 7,35(5H, m)

Diastereoisómero A I.v. (KBr)cm”1: 1760, 1700, 1400, 1260 RMN(CDC13) Á : 0,04(6H, s), 0,85(9H, s), 1,45(9H, largo, s), 1,84(2H, m), 2,58(1H, largo, d, J=16Hz), 2,92 (2H, m), 3,44(1H, m), 3,95-4,30(4H, m) , 4,60 (1H, m), 7,30(5H, m) 3)

À temperatura de -78°C adicionaram--se 30 ml de uma solução de amoníaco a uma outra de 470 mg (0,98 mmole) do diastereoisómero B obtido na reacção anterior em 10 ml de tetra-hidrofurano e 1 ml de álcool t-butí_ lico. À mesma temperatura adicionaram-se à mistura reaccio- - 22¾ - i.al 100 mg (4,35 mmoles) de sódio metálico. Agitou-se a mistura durante 15 minutos e adicionaram-se 465 mg (8,69 mmoles) de cloreto de amónio. Fez-se regressar a temperatura da mistura reaccional até aos valores da temperatura ambiente e eliminou-se por destilação a solução de amoníaco. Extraiu-se o resíduo com 100 ml de acetato de etilo. Lavou -se a camada orgânica, sequencialmente, com água e uma solu ção saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em co-

TM luna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (1:1). Obtiveram-se 3^0 mg (rendimento 89,1 ?) de (2S,4R)-2-(2-azetidi-non-4-il)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxipirro-lidina, diastereoisómero B. s), 0,87(9H, s), m) , 2,62(1H, largo, J=16 ,6Hz), 3,33(1H, m), m), 4,30(1H, m) I.V.(KBr)cm"1: 1750, 1700 RMN(CDC13) é : 0,06(6H, 2,02(1H, (1H, dd, 4,05(1H, 1380, 1260 1,47(9H, s), 1,61(1H, m), d, J=16Hz), 3,02 3,50(2H, m),

4) - 226 - HO

I V

PXZ

Sob atmosfera de azoto e mediante arre fecimento com gelo, adicionaram-se, gota a gota, uma gota de anisol e 3 ml de ácido trifluoroacético a uma soluçSo de 340 mg (0,88 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior em 3 ml de cloreto de metileno. Agitou-se a mistura reaccio-nal durante 1 hora mediante arrefecimento com gelo e concentrou -se-sob pressão, reduz ida. Dissolveu-se o resíduo em 5 ml de tetra-hidrofurano. Mediante arrefecimento com gelo, adicionaram-se 1,2 ml (8,6 mmoles) de trietilamina e 280 mg (0,88 mmole) de 4,5-dimetil-2-(p-nitrobenziloxicarbonil-tio)-piri-midina e agitou-se a mistura durante 90 minutos à temperatura ambiente. Extraiu-se a mistura reaccional com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com uma solução aquosa 0,1 N de hidróxido de sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se seguidamente sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em 5 ml de acetonitrilo e adicionou-se, gota a gota, 0,5 ml 227 de acido fluorídrico à temperatura ambiente. Agitou-se a mistura durante 90 minutos à temperatura ambiente. Extraiu--se depois a mistura reaccional com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com uma solução a 5 % de carbonato de hidrogénio e sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cro-

TM matografia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol a 3 í/clorofórmio. Obtiveram-se 177 mg (rendimento 60,3 %) de (,2S,4R)-2-(2-aze-tidinon-4-il)-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirroli-dina, diastereoisómero B. I.V.(KBr)cm-1: 1750, 1700, 1520, 13^0 RMN(CDC13> £ : 1,72(1H, m), 2,14(1H, m), 2,64(1H, d, J=14Hz), 3,06(2H, m), 3,57(1H, m), 3,74(1H, m), 4,12(1H, m), 4,44(1H, m), 5,22(2H, largo, s), 7,52 (2H, d, J=8Hz), 8,22(2H,d, J=8Hz) 5) 225

Sob atmosfera de azoto e mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se 3^7 mg (1,32 mmoles) de trifenilfosfina a uma solução de 177 mg (0-53 mmole) do composto obtido na reacção anterior em . 10 ml de tetra-hi- drofurano e seguidamente, gota a gota, 0,208 ml (0,132 mmole) de azodicarboxilàto de dietilo. Agitou-se a mistura reac- cional durante 30 minutos mediante arrefecimento com gelo e adicionaram-se depois, gota a gota, 95 yl (0,132 mmole) de ácido tioacético. Agitou-se a mistura reaccional resultante durante 3 horas à mesma temperatura. Extraiu-se depois a mistura reaccional com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão redu zida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna

Tm utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçSo acetato de etilo. Obtiveram-se 77 mg (rendimento 229 37,1 f) de (2S,4S)-4-acetil-tio-2-(2-azetidinon-4-il)-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero B. RMN (CDC1 ) b : 1,65(1H , m), 2,38(3H,s), 3,08(1H, dd, J=16,4Hz), 3,30(1H, t, J=9Hz), 3-64-4,28(4H, m), 5,25 (2H, largo, s), 7,55(2H, d, J = 8Hz) , 8,26 (2H, d, J=8Hz)

HS

Sob atmosfera de azoto e mediante arrefecimento adicionou-se, gota a gota, 0,196 ml de uma solu çâo aquosa 0,1N de hidróxido de sódio a uma outra de 77 mg (0,22 mmole) do composto obtido na reacçfio anterior em 10 ml de metanol. Agitou-se a mistura reaccional durante 15 minutos mediante arrefecimento com gelo e adicionou-se depois 0,21 ml de ácido clorídrico 1N. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida. Extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato 230 de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão obtida, obtendo-se 67 mg (rendimento 97 %) de (2S,4S)-2-(2--azetidinon-4-il)-4-mercapto-N-(P-nitrobenziloxicarbonil)pir-rolidina, diastereoisómero B. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 4 (2S,4S)-2-(2-azetidinon-4-il)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)pirrolidina, diastereoisómero A. 1)

TBDMSO

Boc

O

Utilizando 500 mg (1,05 mmoles) de (2S,4R)—2-(N-benzil-2-azetidinon-4-il)-N-t-butoxicarbonil-4--t-butildimetilsililoxipirrolidina, diastereoisómero A e 75 mg (3,26 mmoles) de sódio metálico, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 3-3 obtendo-se 360 mg (rendimento 88,4 %) de (2S,4R)-2-(2-azetidinon-4-il)-N-t-butoxicar- - 231 bonil-4-t-butildimetilsililoxipirrolidina^ diastereoisómero A. I.V.(KBr)cm 1: 1760, 1740, 1690, 1390, 1260 RMN (CDC13) : 0,06(6H, s), 0,86( 9H, s), 1,il7(9H, s), 1,93 (2H, m), 2,66 (1H, d, J=l6Hz), 2,97(1H, ddd, J=16,5, 2Hz), 3,26(1H, dd, J=12,5Hz), 3,55 (1H, m), 4,00-4,44(3H, m) 2)

HO

Utilizando 350 mg (0,90 mmole) do composto obtido na reacçflo anterior, realizou-se a técnica des crita no Exemplo de Referência 3-4, obtendo-se 185 mg (rendimento 61 %) de (2S,4R)-2-(2-azetidinon-4-il)-4-hidroxi-N--(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero A. 232 I.V.(KBr)cnT1: 1740, 1670, 1520, 1440, 1340 RMN(CDC13) S : 2,06(2H, m), 2,70(1H, d, J=16Hz), 3,02(1H, largo, d, J=16Hz), 3,47(1H, m), 3,76(1H, m) , 4,16(1H , m) , 4,34(1H, m), 4,50(1H, m), 5,26(2H, largo, s), 7,54(2H, d, J=8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz) 3)

Utilizando 185 mg (0,55 mmole) do com posto obtido na reacçSo anterior, 0,218 ml(0,138 mmole) de azodicarboxilato de etilo, 365 mg (0,138 mmole) de trifenil-fosfina e 99 pl (0,138 mmole) de ácido tioacético, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 3-5, obtendo-se 107 mg (rendimento 49,3 %) de (2S,4S)-4-acetil-tio-2-(2-aze-tidinon-4-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina, dias-tereoisomero A. RMN (CDClg) <S : 1,87 (1H, m), 2,36(3H, s), 2£2(1H, m), 2,78 (1H, m), 3,04(1H, largo, d, J=12Hz), 3,18(1H, t, J=10Hz), 3,80—4,32(4H, m), 5,24(2H, largo, s), 7,54(2H, d, J=8Hz), 8,23(2H, d, J=8Hz)

HS

Utilizando 107 mg (0,27 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior e 0,27 ml de uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio realizou-se a técnica descrita no Exemplo 3-6, obtendo-se 90,8 mg (rendimento 95 %) de (2S ,4S )-2-( 2-azetidinon-J|-il )-4-mercapto-N- (p-nitrobenziloxi-carbonil)pirrolidina, diastereoisómero A. 2 34 - EXEMPLO DE REFERÊNCIA 5 (2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitro-benziloxicarbonil)pirrolidin-3-il]pirrolidina 1)

TBDMSO

À temperatura ambiente e sob atmosfera de azoto, adicionaram-se 0,53 ml (3,81 mmoles) de trietilamina, 465 mg (3,81 mmoles) de 4-dimetilaminopiridina e 1,66 g (760 mmoles) de dicarbonato de di-t-butilo a uma solução de 1,46 g (3,80 mmoles) do composto obtido no Exemplo de Referência 1-6 em 15 ml de cloreto de metileno. Agitou-se a mistura durante 4,5 horas à mesma temperatura. Concentrou-se a mistura reac-cional sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica cora ácido clorídrico diluído, água e uma soluçSo aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de ma£ nésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se 235 o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçSo hexano/ace-tato de etilo (5:1). Obtiveram-se 1,76 g (rendimento 96 f) de (2S,J4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2--(N-t-butoxicarbonil-2-pirrolidon-4-il)pirrolidina. RMN(CDC13) cf: 0,06(6H, s), 1,68(1H, m), 4,34(1H, m) 0,86(9H, s), 1,48(9H, s), 1,5*K9H, s), 2,00(1H, m), 3,25(1H, m), M,10(1H, m), 2)

TBDMSO

Boc À temperatura ambiente e sob atmosfera de azoto, adicionaram-se, gota a gota, 1,09 ml (10,9 mmoles) do complexo borano-sulfureto de dimetilo a uma solução de 1,76 g (3,6M mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior em 18 ml de tetra-hidrofurano e aqueceu-se seguidamente a mis- 236 tura à temperatura de refluxo durante 90 minutos. Mediante arrefecimento com gelo, adicionaram-se 5 ml de metanol à mis tura reaccional e concentrou-se a mesma sob pressão reduzida.

Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utili-, TM zando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (10:1). Obtiveram-se 1,62 g (rendimento 94,8 %) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildime-tilsililoxi-2-(N-t-butoxicarbonil-pirrolidin-3-il)pirroli-dina. RMN(CDC13) á : 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,46(18H, s), 1,60- -2,04(4H, m), 4,07(1H, m), 4,34(1H, m) 3)

HO

P\'Z 237 A 1,60 g (3,HO mmoles) do composto obtido na reacção anterior, adicionaram-se 15 ml de uma solução 1,6N de ácido clorídrico em metanol e agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. Concentrou--se a mistura reaccional sob pressão reduzida. Dissolveu--se o resíduo em 20 ml de uma mistura de dioxano e 10 ml de agua e ajustou-se o pH da solução até 8,5 com trietilamina. Adicionaram-se depois 2,17 g (6,80 mmoles) de 4,6-dimetil--2-(p-nitrobenziloxicarbonil-tio)pirimidina. Agitou-se a mistura reaccional durante 90 minutos à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu

-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel , TM de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol a 2 $ /clorofórmio. Obtiveram-se 1,55 g (rendimento 88,6 %) de (2S, 4R)-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p- -nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-3-il]pirrolidina. RMN(CDC13) J : 1,52-2,20(4H, m), 3,76(1H, m), 4,23(1H, m) , 4,48(1H, m), 5,22(4H, s), 7,52(4H, d, J=8Hz), 8,20(4H, d, J=8Hz) 4) - 238· _

MsO / Η

PXZ

Sob atmosfera de azoto e mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se 0,52 ml (3,74 mmoles) de trietilamina e 0,28 ml (3,62 mmoles) de cloreto de meta-nossulfonilo a uma solução de 1,55 g (3,02 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior em 15 ml de tetra-hidrofu-rano, e agitou-se a mistura durante 30 minutos à mesma tem peratura. Extraiu-se a mistura reaccional com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma soluçSo aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pre£ sSo reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em

, TM coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo acetato de etilo. Obtiveram-se 1,76 g (rendimento 98,6 %) de (2S,4R)-4-metanossulfoniloxi-N-(p-nitro-benziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin--3-il]pirrolidina. RMN(CDC13) éi 3,04(3H, s), 4,18(2H, m), 5,24(4H, largo, s), 7,53(4H, d, J = 8Hz) , 8,24(4H, d, J = 8Hz) 5)

AcS

PNZ À temperatura de 0°C e sob atmosfera de azoto adicionou-se, gota a gota, 0,31 ml (4,50 mmoles) de ácido tioacético a uma solução de 616 mg (4,46 mmoles) de carbonato de potássio anidro em 30 ml de N,N-dimetilforma-mida e agitou-se a mistura durante 20 minutos à mesma temperatura. A esta mistura, adicionaram-se, à temperatura dé 0°C, uma solução de 1,76 g (2,97 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 5 ml de N,N-dimetilformamida e 450 mg (30 mmoles) de iodeto de sódio. Agitou-se a mistura reaccional durante toda a noite a uma temperatura compreendida entre 60 e 70°C. Extraiu-se a mistura reaccional 240 com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a

uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Wako-TM gel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (1:1). Obtiveram-se 1,34 g (rendimento 78,8 %) de (2S, 4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitro-benziloxicarbonil)pirrolidin-3-il]-pirrolidina. RMN (CDClg) <5 : 1,54-2,10(4H, ra), 2,36(3H, s), 3,90(1H, m), 4,12 (1H, m), 4,26(1H, m), 5,24(4H, s), 7,52(4H, d, J=8Hz), 8,24(4H, d, J=8Hz) 6)

HS

Em uma mistura de 25 ml de metanol - 241 e 10 ml de tetra-hidrofurano dissolveram-se 1,34g (2,34 mmoles) do composto obtido na reacção anterior. Sob atmosfera de azoto e mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se, gota a gota, 2,46 ml de uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio e agitou-se a mistura durante 15 minutos à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se 2,53 ml de ácido clorídrico 1N e concentrou-se a mistura sob pressão reduzida. Extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida, obtendo--se 1,24 g (rendimento 100 %) do composto identificado antes. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 6

Trifluorometanossulfonato de (2S,4S)-4-mercapto-2-(N-metil-pirrolidin-3-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina 1)

TBDMSO

242

Sob atmosfera de azoto e á temperatura ambiente adicionaram-se 1,04 ml (8,93 mmoles) de 2,6-lutidina e 1,34 ml (6,70 mmoles) de trifluorometanossulfonato de tri-metilsililo a uma solução de 1,72 g (4,48 mmoles) do composto obtido no Exemplo de referência 1-6 em 17 ml de cloreto de metilenoe agitou-se a mistura durante 30 minutos à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se, gota a gota, 5 ml de metanol e concentrou-se depois a solução. Adicionaram-se ao resíduo 15 ml de dioxano. À mistura reaccional adicionaram-se 0,94 ml (6,72 mmoles) de trietilamina e 1,43 g (4,48 mmoles) de 4,6-dimetil-2-(p-nitrobenziloxicarbonil--tio)-pirimidina e agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com ácido clorídrico diluído, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a

uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Wako-TM gel C-300 e como agente de eluição acetato de etilo, obtendo-se 813 mg (rendimento 39,2 %) de (2S,4R)-4-t-butil-dimetilsililoxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon--4-il)pirrolidina. RMN (CDClj) S : 0,03(3H, s), 0,06(3H, s), 0,84(9H, s), 1,78 - 2 43 - (1Η , m), 1 ,92-2,50(3Η, m), 2,93-3,54(4Η , m) , 3,66 (1 Η , m), 4,10(1Η, m), 4,38(1Η, m) , 5,23(2Η, ABQ, J=14Ηζ), 7,52 (2Η, d, J=8Hz), 8,23(2Η, d, J=8Hz) 2)

TEDMSO

Utilizando 813 mg (1,76 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior.e 766 mg (3,51 mmoles) de dicarbonato de di-t-butilo realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-1 obtendo-se 944 mg (rendimento 95,5 %) de (2S,4R)-4-t-butildimetilsililoxi-2-(N-t-butoxi- carbonil-2-pirrolidon-ií-il )-N-( p-nitrobenziloxicarbonil) pir- rolidina. RMN (CDCl-3)<f: 0,04(3H, s), 0,06(3H, s), 0,84(9H, s), 1,52 (9H, s), 1,74(1Η, m), 2,00(1H, m), 2,20-2,96 (3H, m), 4,19(1Η, m), 4,39(1H, largo, s), 5,24 (2H, ABq, J=14Hz), 7,53(2H, d, J=8Hz) , 8,24 244 (2Η, d, J = 8Hz)

Doc

Utilizando 944 mg (1,68 mmoles) e 0,50 ml (5,0 mmoles) do complexo borano-sulfureto de dimetilo, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-2 obtendo-se 730 mg (rendimento 79,3 %) de (2S,4R)-4-t-butil-dimetilsililoxi-2-(N-t-butoxicarbonilpirrolidin-3-il)-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina. RMNÍCDCl^) S ' 0,05(3H, s), 0,07(3H, s), 0,85(9H, s), 1,45(9H, s), 1 ,52-2,08(4H, m), 2,82(1H, m) , 2,90-3,80(6H, m), 4,15(1H, m), 4,40(1H, largo, s), 5,24(2H, m), 7,54(2H, d, J=8Hz), 8,23 (2H, d, J=8Hz) - 245

Boc

Sob atmosfera de azoto e mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se 13,7 ml de uma solução 1M de fluoreto de tetrabutilamónio em tetra-hidrofurano a uma outra de 6,98g(12,7 mmoles) do composto obtido na reac çâo anterior em 100 ml de tetra-hidrofurano, e agitou-se a mistura reaccional durante 40 minutos à temperatura ambiente. Â mistura reaccional resultante adicionaram-se 20 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio e extraiu-se a mistura com 150 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em 100 ml de tetra-hidrofurano. Adicionaram-se depois 1,77 ml (12,7 mmoles) de trietilamina e 0,99 ml (12,8 mmoles) de cloreto de metanossulfonilo mediante arrefecimento com gelo, e agitou-se a mistura durante 1 hora à mesma temperatura. Extraiu-se a mistura reaccional com 150 ml de acetato 24 6 - de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna

rp W utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (1 .* 1). Obtiveram-se 6,64 g (rendimento 100 %) de (2S,4R)-2-(N-t-butoxicarbonilpirroli-din-3-il)-4-metanossulfoniloxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--pirrolidina. RMN (CDC13) S ‘ 1,36(9H, s), 2,96(3H, s), 3,98-4,24(2H, m),5,18 (2H, m) ,7,^6(2H, d, J=8Hz) , 8,16(2H, d, J=8Hz) 5)

AcS

Utilizando 6,6 g (12,9 mmoles) do composto obtido na reacção anterior e 1,33 ml (19,3 mmoles) - 247 de ácido tioacético, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-5 obtendo-se 4,57 g (rendimento 72,1 %) de (2S,4S)-4-acetil-tio-2-(N-t-butoxicarbonilpirro-lidin-3-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina. RMN (CDCl^) é ’ 1,44(9H, s), 2,35(3H, s), 3,86(1H, m) , 4,08 (1H, m), 4,24(1H, m), 5,23(2H, largo, s), 7,53 ( 2H , d, J=8Hz) , 8,24(2H, d·, J = 8Hz) 6)

PMBS

Sob atmosfera de azoto e mediante arrefecimento com gelo, adicionaram-se 9,7 ml de uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio a uma outra de 4,56 g (9,25 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 100 ml de metanol. Agitou-se a mistura durante 15 minutos à mesma temperatura. A mistura reaccional adicionaram-se 2,0 ml - 24 8 -(14,4 mmoles) de trietilamina e 1,82mlí13,4 mmoles) de cloreto de p-metoxibenzilo, e agitou-se a mistura reaccional durante 2 horas à mesma temperatura. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com 300 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromato-grafia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (3:1). Obtiveram-se 4,97 g (rendimento 94,1 %) de (2S,4S)-2-(N-t--butoxicarbonil-pirrolidin-3-il )-4 - (p-raetoxibenzil-tio)-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina. RMN (CDC13) £ : 1,44(9H, s), 1 ,50-1,98(3H, ia), 2,33(1H, m), 2,70(1H, m), 3,74(2H, s), 3,80(3H, s), 3,96 (1H, m), 5,20(2H, largo, s), 6,86(2H, d, J=8Hz), 7,24(2H, d, J=8Hz), 7,50(2H, d, J= =8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz)

V 7) - 249 -

Mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se 6,7 ml (10,0 mmoles) de ácido trifluoroacético a uma solução de 4,97 g (8,70 mmoles) do composto obtido na reac-ção anterior em 50 ml de cloreto de metileno e agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. Concentrou--se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com 150 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida, obtendo-se 4,0g (rendimento 97,6 %) de (2S,4S)-4-(p-metoxibenzil-tio)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(3-pirrolidinil)pirrolidina. RMN (CDCI3) S : 1,62(1H, m), 1,75~2,18(2H, m), 2,42(1H, m) , 250 - 2,82(1 Η, m), 3,75(2Η, s), 3,82(3Η, s), Κ,09 (1 Η , m) , 5,20(2Η, largo, s), 6,86(2Η, d, J= =8Ηζ), 7,24(2Η, d, J = 8Hz) , 7,50(2Η, d, J = =8Ηζ), 8,27(2Η, d, J=8Hz) 8)

À temperatura ambiente adicionaram-se 0,6 ml (7,5 mmoles) de uma solução aquosa a 37 % de formal-deído e 300 mg (**,77 mmoles)de hidreto de cianoboro e sódio a uma solução de 1 ,1* g (2,97 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior em 15 ml de acetonitrilo e agitou-se a mistura resultante durante 15 minutos à mesma temperatura. Neutralizou-se a mistura reaccional com ácido acético e agi-tou-se depois durante mais 60 minutos à temperatura ambiente. Extraiu-se a mistura reaccional com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sul- 251 fato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida.

Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utili-, TM zando gel de sílica Wakogei C-300 e como agente de elui-ção uma mistura de acetato de etilo/metanol (1:1). Obtive ram-se 617 mg (rendimento 42,8 %) de (2S,4S)-4-(p-metoxi-benzil-tio)-2-(N-metil-pirrolidin-3-il)-N-(p-nitrobenziloxi carbonil)-pirrolidina. RMN (CDClg) S : 1,42-2,04(3H, m), 3,74(2H, s), 3,82(3H, s), 3,98(1H, m), 5,20(2H, largo, s), 6,86(2H, d, J=8Hz), 7,24(2H, d, J=8Hz), 7,47(2H, largo,d, J=8Hz), 8,25(2H, d, J=8Hz) 9)

IIS

À temperatura de 0 C adicionaram-se 0,34 ml (3,13 mmoles) de anisol e 0,27 ml (3,05 mmoles) de ácido trifluorometanossulfónico a uma solução de 617 mg (1,27 mmoles) do composto obtido na reaeção anterior em 2,26 ml de ácido trifluoroacético e agitou-se a mistura durante 1 hora à mesma temperatura. Concentrou-se a mistu ra reaccional sob pressão reduzida e submeteu-se o resíduo repetidamente a uma decantação com éter etílico, obten do-se 650 mg (rendimento 99%) do composto identificado antes. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 7 (2S, MS)-^-mercapto-2-(N-metil-2-azetidinon-4-il)-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina 1)

TBDMSO

NHMe

PNZ COOEt  temperatura ambiente adicionaram-se 5 ml (26,6 mmoles) de uma solução 5,3M de metilamina/etanol a 2,9*1 g (6,15 mmoles) de éster etílico do ácido 3-[(2S,*JR)--4-t-butildimetilsililoxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pir- 253 rolidin-2-il]acrílico, composto do Exemplo de Referência 1-6 do pedido de patente de invenção Japonesa N2 342.948/ /1989 e conservou-se a mistura em repouso durante 2 dias à mesma temperatura. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e submeteu-se o resíduo a uma croma-

, TM tografia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição acetato de etilo. Obtiveram -se 1,67 g(rendimento 53,3 %) de éster etílico do ácido 3-metilamino-3-[(2S, 4R)-4-t-butildimetilsililoxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-2-il]propiónico. RMN(CDC13) (5 : 0,04(3H, s), 0,06(3H, s), 0,84(9H, s), 1,26 (3H, t, J=7Hz), 1,80-2,l6(2H, m), 2,24-2,50 (6H, m), 3,40(2H, m), 3,65(1H, m), 4,16 (2H, m), 4,40(1H, m), 5,30(2H, m), 7,56 (2H, m), 8,24(2H, d, J=8Hz) 2)

TBDMSO

254

Utilizando 1,67 g (3,28 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 3-2, obtendo-se 700 mg (rendimento 46,1 %) de (2S,4R)-4-t-butildimetilsililoxi-2--M-metil-2-azetidinon-4-il)-N- ( p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina. RMN (CDCl^) £ : 0,04(3Hs), 0,06(3H, s), 0,84(9H, s), 1 ,72-2,00(2H, m), 2,55(1H, m) , 2,80(3H, s), 2,94(1H, m), 3,36(1H, m) , 3,70(1H, m) , 4,10 (1H, m), 4,40(2H, m), 5,16-5,22(2H, m), 7,67(2H, d, J=8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz) 3)

À temperatura ambiente adicionou-se 1 ml de ácido fluorídrico a 46 % a uma solução de 700 mg (1,51 mmoles) do composto obtido na reacçao anterior em 1Oml 255 de acetonitrilo e agitou-se a mistura durante 1 hora à mesma temperatura. Extraiu-se depois a mistura reaccional com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com uma solução aquosa a 5 $ de carbonato de hidrogénio e sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-

-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel , TM de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol a 2 J/clorofórmio. Obtiveram-se 316 mg (rendimento 59,9 %) de (2S , 4R )-4-hidroxi-2-( N-metil-2-azetidincn.-4-il )-N- (p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina. RMN (CDClg) Si 1,70-2,l8(2H, m), 2,52(1H, m) , 2,74(3H, s), 2,88(1H, m), 3,60-3,88(2H, m), 4,08(1H, m), 4,40(2H, m), 5,22(2H, largo, s), 7,50(2H, d, J=8Hz), 8,16(2H, d, J = 8Hz) 4)

AcS

256

Utilizando 315 mg (0,90 mmole) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 3-5, obtendo-se 348 mg (rendimento 94,7 %) de (2S,4S)-4-acetil-tio-2-(N-metil-2--azetidinon-4-il)-N-( p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina. _ -| I.V. (KBr)cm : 1760, 1700, 1520, 1340 RMN (CDC13) á: 1,75(1H, m), 2,37(3H, s), 2,79(3H, s), 3,88(1H, m), 3,98-4,20(3H, m), 5,28(2H, largo, s), 7,55(2H, d, J=8Hz), 8,25(2H, d, J=8Hz) 5)

Utilizando 348 mg (0,86 mmole) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-9, obtendo-se 298 mg (rendimento 95,5 %) do composto identificado antes. - 257 EXEMPLO DE REFERÊNCIA 8 (2S,4S)-M-mercapto-2-(N-metil-2,5-dioxopirrolidin-3-il) --N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina, diastereoisómeros A e B 1)

TBDMSO /

COOEt PNZ CO 2

Utilizando 3>8 g (7,95 mmoles) do éster etílico do ácido 3-[(2S,4R)-4-t-butildimetilsililoxi-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidin-2-il]acrílico, o composto do Exemplo de Referência 1-6 do pedido de patente de invenção Japonesa Ns 342.948/1989, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-5, obtendo-se 4,0 g (rendimento 93,3 %) do éster etílico do ácido 3-[(2S, 4R)-4-t-butildimetilsililoxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--pirrolidin-2-il]-4-nitrobutírico. - 258 - RMN (CDC13)/: 0,04(3Hs), 0,06 (3H, s), 0,82(9H, s), 1,26 (3H, m), 1,80(1H, m), 2,03(1H, m) , 2,22- -2,54(3H, m), 3,27(2H, m) , 4,15(3H, m) , 4,32-4,70(2H, m), 5,24(2H, largo, s), 7,54(2H, m), 8,25(2H, d, J=8Hz) 2)

TEDMSO

COOEt à temperatura ambiente e sob atmosfera de azoto, adicionaram-se 2,56 g (37,1 mmoles) de nitrito de sódio a uma solução de 4,0 g (7,42 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior em 40 ml de sulfóxido de dimetilo. Adicionaram-se depois, gota a gota, 1,74 ml (14, 9 mmoles) de nitrito de butilo e agitou-se a mistura durante toda a noite à mesma temperatura. Extraiu-se a mistura reaccional com 150 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, três vezes, com água e uma vez com uma solução aquosa satu- - 259 rada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em 50 ml de tetra-hidrofurano. Gota a gota adicionaram-se, sob atmosfera de azoto e á temperatura de -20°C, 0,97 ml (6,95 mmoles) de trietilamina e 0,90 ml (6,9*1 mmoles) de cloroformato de isobutilo e agitou-se a mistura durante 30 minutos à temperatura ambiente. Adicionou--se depois 1 ml de metilamina a 40 í. Agitou-se a mistura reaccional durante 30 minutos mediante arrefecimento com gelo e extraiu-se depois com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna

Tm utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo acetato de etilo. Obtiveram-se 1,8 g (rendimento 45,6 %) de (2S, UR )-4-t-butildimetilsililoxi-2-(2-etoxicar- bonil-1-metilcarbamoiletil)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pir-rolidina. RMN (CDC13> c$ *· 0,04(3H, s) , 0,05(3H, s), 0,83(9H, s), 1 ,24(3H, t, J: =7Hz), 3.3M1H, m), 3,56(1H,m), 1+, 12 (2H , m) , 4,32(1H, m), 5,28(2H, m), 7,52(2H, m), 8,25(2H, m) 2 60 3) tjju: :so

H 'Is

PXZ

Me A temperatura ambiente adicionaram-se, gota a gota 3*7 ml de uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio a uma outra de 1,8 g (3>35 mmoles) do composto obtido na reacçâtí^ anterior em 30 ml de etanol e agitou-se a mistura durante toda a noite à mesma temperatura. A mistura reac-cional adicionaram-se 3,7 ml de ácido clorídrico 1N e concentrou-se a mistura resultante sob pressão reduzida. Extraiu--se o resíduo com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Dissolveu--se o resíduo em 15 ml de anidrido acético e adicionaram--se 1,38 g (16,8 mmoles) de acetato de sódio. Agitou-se a mistura durante 90 minutos à temperatura de 100°C. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu--se depois com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto 261 de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio ani dro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resídio

a uma cromatografia em coluna utilizando como gel de sílica TM

Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (3:1 )> obtendo-se 1,28 g (rendimento 77,8 %) de (2S, 4R)-4-t-butildimetilsililoxi-2-(N-metil-2,5-dioxopirrolidin--3-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina. RMN (CDC13 )cf: o,oM3H, s) , 0,06(3H, s), 0,8M(9H, s), 1,71 (1H, m) , 2, 96(3H, s) ,3,TJ6-3,87(3H, m) , 4,37(1H, m), U,54(1H, m), 5,22(2H, m), 7,50(2H, m) , 8,20(2H, m)

AcS

Utilizando 1,28 g (2,61 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, realizaram-se as técnicas 262 descritas nos Exemplos de Referência 7-3 e 7-4, obtendo-se 406 mg (rendimento 35,8 %) de (2S,4S)-4-acetil-tio-2-(N--metil-2,5-dioxopirrolidin-3-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina, diastereoisómero A e 170 mg (rendimento 15 %) do diastereoisómero B, respectivamente.

Diastereoisómero A RMN(CDC13) S: 1,60(1H, m), 2,34(3H, s), 2,97(3H, s), 3,60-3,98(2H, m), 4,22(1H, m), 4,47(1H, m), 5,24(2H, largo, s), 7,56(2H, d, J=8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz)

Diastereoisómero B I.V. (KBr) cm"1: 1700, 1520, 1440, 1350 TRMN (CDClg) 6 : 1.72Í1H, .), 2,36(3H, s>, 2f97(3Hf largo, s), 3,25( 2H, m), 3,88(1H, m), 4,18(1H, m), 4,42(1H, m), 5,07-5,30(2H, m) , 7,51(2H, d, J=8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz) 5) 263

H S

Utilizando 406 mg (0,93 mmole) do diastereoisómero A obtido na reacção anterior realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-9, obtendo-se 330 mg (rendimento 90 %) do diastereoisómero A do composto identificado antes. 6)

Utilizando 170 mg (0,39 mmole) do dias 264 tereoisómero B obtido no Exemplo de Referência 8-4 realizou--se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-9 obtendo--se 145 mg (rendimento 94,6 %) do diastereoisómero B do com posto identificado antes.

Exemplo de Referência 9 (2S,4S)-N-aliloxicarbonil-2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il)-4--mercaptopirrolidina 1)

TrS

OOEt

Utilizando 5,23 g (9,9 mmoles) de éster etílico do ácido 3-C(2S,4S)-N-aliloxicarbonil-4-tritil-tio-pirrolidin-2-il]acrílico que se obteve realizando uma técnica similar à descrita no Exemplo de Referência 1-4 realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-5, obtendo-se 4,74 g (rendimento 81,2 %) do éster etílico do ácido 3[(2S, 4S)-N-aliloxicarbonil-4-tritil-tiopirrolidin-2-il]-4-nitrobu-tírico. 265 RMN (CDC13 ) £ : 1,24(3H, t, J = 8Hz), 3,92(1H, m) , 4,12 (2H, q, J = 8Hz), 4,47(3H, m), 5,26(2H, m), 5,86(1H , m), 7,16-7,74(15H , m) 2)

TrS

OOEt À temperatura ambiente e sob atmosfera de azoto, adicionaram-se 2,76 g (40 mmoles) de nitrito de sódio a uma solução de 4,7 g (8,0 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 35 ml de sulfóxido de dimetilo. Adicionaram-se depois, gota a gota, 1,87 ml (16 mmoles) de nitrito de butilo e agitou-se a mistura durante toda a noite à mesma temperatura. Extraiu-se a mistura reaccional com 150 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, três vezes, com água e uma vez com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando - 266 gel de sílica Wakogel™ C-300 e como agente de eluição metanol a 1 % /clorofórmio. Obtiveram-se 1,9 g (rendimento 41,5 %) de (2S,4S)-N-aliloxicarbonil-2-(1-carboxi-2-etoxi-carboniletil )-4-tritil-tiopirrolidina. RMN (CDC13> é : 1,23(3H, m), 3,90-4,24(3H, m) , 4,48(2H, m) , 5,18-5,32(2H, m), 5,86(1H, m), 7,16- -7,6θ(15H, m). 3)

TrS

Alloc

V A temperatura de -20°C e sob atmosfera de azoto adicionaram-se, gota a gota, 0,56 (4,0 mmoles) de trietilamina e 0,52 ml (4,0 mmoles) de cloroformato de isobutilo a uma solução de 1,9 g (3,3 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior em 30 ml de tetrahidrofurano e 267 -^ícou-se a mistura durante 30 minutos à mesma temperatura.

Adicionou-se depois 0,7 ml (10,5 mmoles) de uma solução aquo sa concentrada de amoníaco e agitou-se a mistura durante mais 30 minutos mediante arrefecimento com gelo. Extraiu- -se a mistura reaccional com 100 ml de acetato de etilo.

Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pre£ são reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em

Tm coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (5:1). Obtiveram-se 744 mg (rendimento 39,2 %) de um composto polar e 711 mg (rendimento 37,5 %) de um composto menos polar de (2S,4S)--N-aliloxicarboni1-2-(1-carbamoil-2-etoxicarboniletil)-4-tritil--tiopirrolidina.

Composto polar RMN(CDC13) S : 1,23(3H, t, J=7Hz), 1,98(2H, m), 3,85 (1H, m), 4,15(2H, q, J=7Hz), 4,50(2H, m) , 5,24(2H, m), 5,85(1H, m), 7,15-7,60(15H, m) 268

Composto menos polar RMN (CDClg) á : 1,23(3H, t, J = 7Hz), 1,95(2H , m) , 2,26 (1H, m) , 3,76(1H, m), 4,12(2H , q , J = = 7Hz) , 4,50(2H, m), 5,24(2H, m) , 5,84 (1H, m), 7,14-7,57(15H, m) 4)

TrS

Mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se 57 mg (1,43 mmoles) de hidreto de sódio a uma soluçSo de 744 mg (1,3 mmoles) do composto polar obtido na reacção anterior em 37 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 15 minutos à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se 1 ml de água e depois 1,43 ml de ácido clorídrico IN e extraiu-se essa mesma mistura com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com 269 água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou -se depois sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatogra

Tm fia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (3:1). Obtiveram-se 630 mg (rendimento 92,1? ) de (2S,4S)-N-aliloxi-carbonil-2-(2,5-dioxo-pirrolidin-3-il)-4-tritil-tiopirroli-dina. RMN (CDClg) <S : 1, 4 0 (1H, m), 2,14(1H, m) , 2,15-2,95(4H, m) , 3,88(1H, m), 4,10(1H, m), 4,47(2H, m) , 5,13-5,36(2H, m), 5,84(1H, m), 7,10-7,60 (15H, m) 5)

HS

Utilizando 630 mg (1,2 mmoles) do com 270 posto obtido na reacção anterior realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 22-2, obtendo-se 219 mg (rendimento 64,4 %) do composto identificado antes. RMN (CDC13-CD30D) J : 2,38-2,78(4H, m), 2,95-3,26(2H , m), 3,80- -4,22(1H, m), 4,34(1H, m) , 4,56(2H, m) , 5,16-5,38(2H, m), 5,90(1H, m) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 10 (2S,4S)-N-aliloxicarbonil-4-mercapto-2-(1-aliloxicarbonil--3-pira7oiidin-5-il )pirrolidina 1)

Λ11 o c

NH

Mediante arrefecimento com gelo adicio nou-se, gota a gota, 0,61 ml (12,6 mmoles) de monohidrato de hidrazina a uma solução de 1,53 (2,9 mmoles) de éster etí- 271 lico do ácido 3-[(2S,4S)-N-aliloxicarbonil-4-tritil-tiopir-rolidin-2-il]acrílico em 7,5 ml de etanol e agitou-se a mistura durante 90 minutos à mesma temperatura. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida. Submeteu-se o

resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sí_ TM lica Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol a 2 %/clorofórmio. Obtiveram-se 830 mg (rendimento 51,1 %) de (2S , 4S)-N-aliloxicarbonil-2-(3-pirazolidinon-5-il)-4-tritil--tiopirrolidina. Dissolveu-se este composto imediatamente em 10mLde cloreto de metileno. Mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se depois, gota a gota, 0,24 ml (1,7 mmo-les) de trietilamina e 0,18 ml (1,7 mmoles) de cloroformato de alilo e agitou-se a mistura durante 1 hora à mesma temperatura. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em

, TM coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol a 1 % /clorofórmio. Obtiveram-se 592 mg (rendimento 62 %) de (2S,4S)-N-aliloxicarbonil-2-(1-aliloxicarbonil-3-pirazolidinon-5-il)-4-tritil-tiopir-rolidina. RMN (CDC13) ò : 1,46-1,88(2H, m), 1,94-2,24(2H, m), 2,56-3,00 272- (4Η, m), 3,70(1Η, m), 4,34.4,50(4H, m) , 5;12 -5 ,^0( i*H, m), 5,75-6,00(2H, m) , 7,15-8,60(15H, m). 2)

Utilizando 529 mg (0,92 mmole) do composto obtido na reacçâo anteior realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 22-2 obtendo-se 324 mg (rendimento 87,8 %) de (2S,4S)-N-aliloxicarbonil-4-merca-pt o-2-( 1-aliloxicarbonil-3-pirazolidimn-5-il )pirrolidina. RMN(CDC13) S : 1,60-1,95(2H, m), 2,30(1H, dd, j=17,3Hz), 2,56(1H, m), 2,88-3,30(3H, m), 3,88-4,24 (2H, m), 4,52-4,98(4H, m), 5,00-5,45(4H, m) , 5,82-6,08(2H, m) - 27 3 - ^EMPLO DE REFERfiNCIA 11 '' '' ' — — »- r?S , ^S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-_(2-pirrolidon-3-il)pirrolidina 1)

Utilizando 5,9 g (12,8 mmoles) do éster etílico do ácido 3-C(2S,llR)-N-t-butoxi-carbonil-4-t-butildi-metilsililoxipirrolidin-2-il]-4-nitrobutírico, obtido no Exem pio de Referência 1-5, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 9-2, obtendo-se 3,57 g (rendimento 62,5 %) de (2S, MR)-2-(2-etoxicarbonil-1-carboxietil)-4-t--butildimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-pirrolidina. rmn(cdci3) S'· 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,26(3H, t, J=8Hz), 1,48(9H, s), 2,01 (1H, m) , 2.3M1H, m) , 2,38 27 4 - (1Η , m), 3,25(1Η, dd, J = 12,4Ηζ), 3,38-3,90 (3Η, m), 4,16(2Η, q, J=8Hz), 4 , 25-4,55 ( 2Η , m) 2) tiíj.;.so // Η \

Foc

Utilizando 3,57 g (8,0 mmoles) do composto na reacção anterior e 1,55 ml (14,2 mmoles) de benzil-amina, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 9-3, obtendo-se 3,7 g (rendimento 86,3 %) de (2S, 4R )-2-(1-benzil-carbamoil-2-etoxicarboniletil)-4-t-butildime tilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-pirrolidina. RMN(CDC13) <S : 0,04(6H, s), 0,85(9H, s), 1,24(3H, t, J= 8Hz), 1 ,33-1 ,55(9H, m), 1,90(1H, m), 2,30 (1 Η, m), 2-82(1Η, m), 3,22(1H, m), 3,35- -3,82(2H, m), 4,00-4,65<5H, m) , 7,30(5H, m) 275 3) 1

À temperatura ambiente adicionaram- -se 3,9 ml de uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio a uma outra de 1,89 g (3,5 mmoles) do composto obtido na rea£ çSo anterior em 30 ml de etanol e agitou-se a mistura durante toda a noite à temperatura ambiente. Adicionaram-se à mistura reacção 3,9 ml de ácido clorídrico 1N e concentrou-se a mesma mistura sob pressão reduzida, obtendo-se 1 ,79 g (rendimento 100 %) de (2S, 4R)-2-(1-benzil-carbamoil-2-carboxietil)-N- -t-butoxicarbonil-M-t-butildimetilsililoxipirrolidina. À tem peratura ambiente e sob atmosfera de azoto adicionou-se, gota a gota, 0,72 ml (7,2 mmoles) do complexo borano-sulfo- reto de dimetilo a uma solução deste composto em 35 ml de te- tra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 1 hora à mesma temperatura. Ã mistura reaccional adicionaram-se 5 ml de metanol e concentrou-se a mesma mistura sob pressão reduzida.

Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando , TM gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (1:1). Obtiveram-se 1,27 g (rendi- 276 mento 72,9 %) de 3-benzil-carbamoil-3-[(2S,4R)-N-t-(butoxi-carbonil-4-t-butildimetilsililoxipirrolidin-2-il]-1-propanol. RMN (CDClg) 0,04(6H, s), 0,86(9H, s), 1,24-1,60( 1 1H, m), 1,73-2,32(2H, m), 3,32-3,73(3H, m), 4,12-4,34 (2H, m), 4,40(1H, m), 7,30(5H, m) 4)

À temperatura de 0°C e sob atmosfera de azoto adicionou-se, gota a gota, uma solução de 1,27 g (2,6 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior em 17 rn.i de tri-amida hexametilfosfórica a uma outra solução de 640 mg (5,7 mmoles) de t-butóxido de potássio em 17 ml de tetra--hidrofurano e agitou-se a mistura durante 1 hora à mesma tem peratura. À mistura reaccional adicionou-se, gota a gota, - 277 - uma solução de 520 mg (2,7 mmoles) de cloreto de p-tolueno£ sulfonilo em 3 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura de 0°C e durante 2 horas à temperatura de 50°C. Arrefeceu-se a mistura reaccional com gelo e adicionaram-se 5 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio.Extraiu-se a mistura com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, três vezes, com água e uma vez com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a

uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Wako-TM gel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (10:1). Obtiveram-se 3^3 mg (rendimento 39,8 %) de (2S,ÍIR)--2-(N-benzil-2-pirrolidon-3-il)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butil-dimetilsililoxipirrolidina. RMN (CDClg) é : 0,06(6H, s), 0,87(9H, s), 1,46(9H, s), 1,90-2,30(3H, m), 3,00-3,60(5H, m), M,18- -4,64(5H, m), 7,18-7,M2(5H, m) 5) 278 - ϋ Η

Ν

Boc

Ν Η

Utilizando 760 mg (1,6 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 3-3 obtendo-se 476 mg (rendimento 77,2 %) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-t-butildimetil-sililoxi-2-(2-pirrolidon-3-il)pirrolidina. RMN( CDCI3) e$: 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,46(9H, s), 1,82 (1H, m), 2,04(2H, m), 3,20-3,70(5H, m), 4,32(1H, m), 4,42(1H, m)

IIO Λ

H

H 6)

Utilizando 476 mg (1,24 mmoles) do composto utilizado na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 3-4, obtendo-se 342 mg (rendimento 79,1 %) de (2S,4R)-4-hidroxi-N-(p-nitro-benziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-3-il)pirrolidina. I.V. (KBr)crrf1: 1700, 1520, 1350 RMN (CDClg) $s 1,70-2,28(4H, m), 3,18-3,50(3H, m), 3,52- 3,88(2H, m), 4,28-4,68(2H , m), 5,22(2H, m), 7,53(2H, d, J=8Hz), 8,20(2H, d, J=8Hz) 7)

AcS

Utilizando 342 mg (0,98 mmole) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 3-5, obtendo-se 271 mg 280 (rendimento 68,2¾) de (2S ,4S)-4-acetil-tio-N-(P-nitrobenzi-loxicarboni1)-2-(2-pirrolidon-3-il)pirrolidina. I.V. (KBr)cnf1: 1700, 1530, 1520 RMN (CDC1 ) S : 1 ,62-2,18(3H, m), 2,35(3H, s), 3,02-3,70 (5H, m), 3,83(1H, m), J»,25(1H, m), (1H, m), 5,28(2H, largo, s), 7,56(2H, d, J=8Hz), 8,25(2H, d, J=8Hz) 8)

Utilizando 271 mg (0,67 mmole) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-9, obtendo-se 220 mg (rendimento 90,5 %) do composto identificado antes. 281 EXEMPLO DE REFERÊNCIA 12

(2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-(2--pirrolidon-4-il)pirrolidina, diastereoisómeros A e B

TDBMSO

A 10,82 g (22,32 mmoles) do composto do Exemplo de Referência 1-6, adicionaram-se 75 ml de n-hexano e aqueceu-se a mistura até à temepratura de 40°C, para permitir a dissolução depois do que se filtrou. Conservou-se o filtrado em repouso durante toda a noite à temepratura ambiente. Separou-se o precipitado por filtração e secou-se obtendo-se 3»74 g (rendimento 34,6 %) de um composto polar (diastereoisómero A) do composto identificado antes. Concen trou-se depois o filtrado e adicionaram-se ao resíduo 70 ml de n-hexano. Repetiu-se depois a operação anterior, obtendo--se 1,87 g (rendimento 17,3 %) de um composto menos polar (diastereoisómero B) do composto identificado antes. - 282

Diastereoisómero A (composto polar)

P.F.: 92°-95°C

[ χ]ρ° : 50,8° (C= 1,031, metanol) I.v. (KBr)cnf1: 1685, 1395, 1250, 1175 RMN (CDC13) </ : 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1,46(9H, s), 1,72-1,97(2H, m), 2,2(1H, dd, J=18,8Hz), 2,41(1H, dd, J=18,8Hz), 2,9-3,8(5H, m), 4,15(1H, largo), 4,32(1H, largo), 6,06 (1H, largo)

Diastereoisómero B (composto menos polar

P.F.: 97°-100°C O f\ [^]D : -53,9° (C = 0,978, metanol) I.V. (KBr)cnf1: 1685, 1665, 1385, 1255, 1160 RMN(CDC13) J : 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1,46(9H, s), 1,7-1,95(2H, m), 2,04(1H, dd, J=16,8Hz), 2,32(1H, dd, J=16,8Hz), 2,9-3,6(5H, m) - 283 4,1 (1 Η, largo), 4,32(1 Η, largo), 6,0(1 Η largo) HPLC :

Coluna: Daicel CHIRALCEL OD

Agente de eluiçâo: Hexano/isopropanol (9:1)

Velocidade de eluiçâo: 0,5 ml/minuto

Temperatura: 38°C

Detecção a 210 nm

Tempo de retenção: Diastereoisómero A: 19,8 min.

Diastereoisómero B : 16,3 min. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 13

(2S , 4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--pirrolidin-^-il]-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )-pirrolidina, diastereoisómero I 1)

TDDMSO

X

Boc 284

Utilizando 8,0 g (20,8 ramoles) de (2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-(2-pirro-lidon-4-il)pirrolidina, diastereoisómero A (composto polar) obtido no Exemplo de Referência 12, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 6-2, obtendo-se 9,5 g (ren dimento 94,2 %) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildi-metilsililoxi-2-(N-t-butoxicarbonil-2-pirrolidon-4-il)pirro-lidina, diastereoisómero A. RMN (CDC13) / : 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,46(9H, s), 1,53 (9H, s), 1,70(1H, m), 1,97(1H, m), 2,16-2,90 (3H, m), 3,24 (1H, dd, J=12,4Hz), 3,36- -3,70(2H, m), 3,76(1H, dd, J=10,8(Hz), 4,12(1Η, M), 4,33(1H, m) 2)

TBDMSO H Λ

Boc A temperatura de -40°C. e sob atmosfera 285 - de azoto, adicionaram-se, gota a gota, 23 ml de uma solução 1M de brometo de vinilo e magnésio em tetra-hidrofurano a uma outra de 9,3 g (19,2 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 120 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 2 horas à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se, gota a gota, 10 ml de uma solução de ácido acético a 50 % /metanol e extraiu-se a mistura resultante com 200 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia

TM em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de- eluiçãoiiexanoyacetat©?àe etilo (10:1). Obtiveram-se 4,1 g (rendimento 41,7 %) de 5-[(2S,4R)-N-t-butoxicarbonil--4-t-butildimetilsililoxipirrolidin-2-il]-6-t-butoxicarbonil^ amino-1-hexan-3-ona, diastereoisómero A. RMN(CDC13) é : 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,42(9H, s), 1,46(9H, s), 4,04(1H, m), 4,24(1H, m) , 5,80 (1H, largo, d, J=10Hz), 6,22(1H, d, J=17Hz), 6,38(1H, dd, J = 17,10Hz) 3) 2 8 6-

TEL.MSO Η

OH

Boc iCHBoc A M , 1 g (8,0 mmoles) do composto obtido na reacçáo anterior, adicionou-se uma solução de 2,8-4 g (8,0 mmoles) de cloreto de cério hexa-hidratado em 30 ml de metanol. À temperatura de -15°C adicionaram-se depois 310 mg (8,2 mmoles) de hidreto de boro e sódio e agitou-se a mistura durante 15 minutos à mesma temperatura. Adicionaram-se 10 ml de água à mistura reaccional e concentrou-se a mistura resultante sob pressSo reduzida. Extraiu-se o resíduo com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu

-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel , TM de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo hexano/ /acetato de etilo (8:1). Obtiveram-se 3*53 g (rendimento 85,8 %) de 5-[(2S,MR)-N-t-butoxicarbonil-M-t-butildimetil-sililoxipirrolidin-2-il]-6-t-butoxicarbonilamino-1-hexen--3-ol. - 287 - RMN (CDClg) £ : , O,86(9H , 4,30(2H 5,28(1H, , s) , 1 ,43( , m) , 5,12( largo, d, J 9H, s), 1H, largo, =16Hz), 0,04(6H, s) 1,46(9H , s) d, J = 1OHz) , 5,90(1H, m) 4)

TBDMSO /

À temperatura de —10°c @ sob atmosfera de azoto, adicionou-se, gota a gota, uma solução de 3,53 g (6,9 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior em 15 ml de tetra-hidrofurano a uma solução de 1,7 g (15,1 mmoles) de t-butóxido de potássio em 50 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura à mesma temperatura. Adicionou-se depois, gota a gota, uma solução de 1,44 g (7,5 mmoles) de cloreto de p-toluenossulfonilo em 10 ml de tetra-hidrofurano. Agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora à mesma temperatura. Adicionaram-se depois 10 ml de uma soluçSo 288 aquosa saturada de cloreto de amónio e extraiu-se a mistura resultante com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o

resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sí-TM lica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano-ace-tato de acetato de etilo (10:1). Obtiveram-se 2,09 g (rendimento 61,5 %) de (2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-t-butil-dimetilsililoxi-2-(N-t-butoxicarbonil-2-vinil-pirrolidin-U- -il)-pirolidina. RMN(CDC13) : 0,04(6H, s), 0,86(9H, s), 1,42(9H, s), 1,45(9H, s), 2,98(1H, m), 3,14(1H, dd, J=12,4Hz), 3,32-3,72(2H, m) , 3,92-4,20(2H, m), 4,34(1H, m), 4,96-5,20(2H, m), 5,74(1H, m) - 28 9 _

Boc A uma solução de 2,09 g (4,2 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em uma mistura de 10 ml de tetracloreto de carbono e 10 ml de acetonitrilo, adicionaram-se 13 ml de água e 3,70 g (17,3 mmoles) de periodato de sódio e agitou-se a mistura energicamente. Adicionaram-se depois à mistura reaccional 20 mg (0,096 mmole) de hidrato de cloreto de ruténio e agitou-se a mistura energicamente durante 2 horas à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente , com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob reduzida. Submeteu-se o

resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sí-TM lica Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol a 1 % /clorofórmio, obtendo-se 1,07 g (rendimento 50,7 %) de (2S , 4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-(N- -t-butoxicarbonil-2-carboxipirrolidin-4-il)-pirrolidina. RMN(CDC13) S : 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,46(18H, largo, s), 3,10(1H, m), 3.2M1H, m) , 3,40-3,7^ (2H, m), 3,96-4,40(3H, m) 6)

Utilizando 1,07 g (2,1 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica de£ crita no Exemplo de Referência 9-3> obtendo-se 867 mg (ren dimento 81,2 %) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildime-tilsililoxi-2-(N-t-butoxicarbonil-2-carbamoil-pirrolidin-4--il)pirrolidina. RMN (CDC13) £ : 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,46(18H, s). 291 3,06(1Η, largo, t, J = 12Hz), 3,23(1H, dd , J=12 , 4Hz), 3,36-3,82(2H, m) , 3,98-4,40 (3H, m) 7)

Utilizando 861 mg (1,68 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-3, obtendo-se 621 mg (ren dimento 66,4 %) de (2S,4R)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenzilo-xicarbonil)pirrolidin-4-il]-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicar-bonil)pirrolidina, diastereoisómero I e 216 mg (rendimento 23,1 %) do diastereoisómero II (composto menos polar).

Composto polar RMN (CDClg) é : 3,78(2H, m), 4,26(2H, m) , 4,50(1H, m) , 292 5,26(ΜΗ, largo, s), 7,5M(MH, d, J=8Hz), 8,25(MH, d, J=8Hz)

Composto menos polar RMN(CDC13) cT : 3,70(2H, m), M ,00-M,53(3H, m) , 5,2M(MH, largo, s), 7,51(MH, d, J = 8Hz), 8,20(MH, d, J=8Hz) 8)

Utilizando 621 mg (1,1 mmoles) do composto polar obtido na reacçao anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-M, obtendo-se 670 mg (ren dimento 9M,6 %) de (2S,MR)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenzi-loxicarbonil)pirrolidin-M-il]-M-metanossulfoniloxi-N-(p-nitro benziloxicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero I. -29 3 - RMN (DMSO-dg) o : 3,25(3H, s), 3,^8-3,70(2H, m), 3,92-4,22 (3H, m), 5,04-5,34(5H, m), 7,64(4H, d, J=8Hz), 8,24(4H, m) 9)

CONH2

Sob atmosfera de azoto adicionaram-se 174 mg (1,16 mmoles) de iodeto de sódio e 240 mg (2,1 mmo-les) de tioacetato de potássio a uma solução de 670 mg (1,06 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior em 10 ml de N,N-dimetilformamida e agitou-se a mistura resultante durante toda a noite a uma temperatura compreendida entre 60 e 70°C. Extraiu-se a mistura reaccional com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, três vezes com água e uma vez com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-

-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel , TM de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol a 1 % /clorofórmio, obtendo-se 479 mg (rendimento 73,8 %) de (2S, 4S)-4-acetil-tio-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)-pirrolidin-4-il]-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )--pirrolidina, diastereoisómero I. RMN (CDClg) 1,74(1H, m), 2,00(1H, m), 2,35(3H, s), 2,40-2,90(3H, m), 5,24(4H, largo, s), 7,54(4H, largo, d, J=8Hz), 8,22(4H, largo, d, J=8Hz). 10)

HS

CONH,

Utilizando 479 mg (0,78 mmole) do composto obtido na reacçao anterior, realizou-se a técnica des- 295 crita no Exemplo de Referência 1-9, obtendo-se 280 mg (ren dimento 62,7 %) de (2S ,4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenzi-loxicarbonil)pirrolidin-4-il]-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)pirrolidina, diastereoisómero I. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 14 (2S , 4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirro-lidin-4-il]-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--pirrolidina, diastereoisómero II 1)

MsO

C0NH2

Utilizando 216 mg (0,39 mmole) de (2S, 4R)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin--4-il]-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin, (o composto menos polar) obtida no Exemplo de Referência 13-7, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-4, obtendo-se 221 mg (rendimento 89,7 %) de (2S,4R)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirroli- - 29 6 -din-4-il]-4-metanossulfoniloxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )--pirrolidina, diastereoisómero II. RMN (CDClg) J: 3,04(3H, s) , 3,58(2H, m), 4,08-4,32(2H, m), 4,42(1H, m) , 5,10-5,38(5H, m), 5,50-5,68 (1 H, m) 2)

Utilizando 221 mg (0,35 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 13-9, obtendo-se 180 mg (rendimento 84,0 %) de (2S,4S)-4-acetil-tio-2-[2-carbamoil--N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il]-N-(p-nitroben-ziloxicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero II. RMN (CDClg) i : 1 ,66(1H, m), 1,88-2,28(2H, m), 2,36(3H, s), 297 2,54(1H, m), 2,82(1Η, m) , 3,06-3,35(2Η, m), 3,63(1Η, m), 3,86(1Η, m), 4,08(1Η, m) , 4,27 (1 Η, m), 4,47(1 Η, m), 5,62(4Η, m) , 7,54 (4Η, d, J = 8Hz), 8,24(4Η, d, J = 8Hz) 3)

Utilizando 180 mg (0,29 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-9, obtendo-se 160 mg (rendimento 95 %) de (2S,4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenzi-loxicarbonil)pirrolidin-4-il]-4-mercapto-N-(p-nitrobenzilo-xicarbonil)pirrolidina, diastereoisómero II. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 15 (2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N--(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il]pirrolidina, 2 9 8 -diastereoisómero A 1) tbd:-;so

Boc

Utilizando 4,8 g (12,0 mmoles) de (2S, 4R)-4-t-butildimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-2-(2-pirro-lidon-4-il)pirrolidina, diastereoisómero A obtido no Exemplo de Referência 12, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-1, obtendo-se 6,8 g de (2S, 4R)-4-t-butil-dimetilsililoxicarbonil-2-(N-t-butoxicarbonil)-2-pirrolidon--4-il)pirrolidina,bruta, diastereoisómero A. RMN (CDCI3) & ’ 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1,48(9H, s), 1,52(9H, s), 1,60(1H, m), 1,90(1H, m), 2,10- -2.58C2H, m), (3,22(1H, M), 3,42-3,88 2) X 3 Η , m), 4,08(1Η , m), 4,30(1 Η, m)

TBI/.MSO /

Utilizando 6,8 g do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-2, obtendo-se 5,7 g de (2S, 4R)-4-t-butil-dimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-2-(N-t-butoxicarbonilpir-rolidin-4-il)pirrolidina, diastereoisómero A sob a forma de uma substância oleosa de cor amarelo que se utilizou tal e qual na reacçSo seguinte. RMN (CDC13) £ : 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,44(18H, s), 1,56-2,04(411, m), 3,02-3,70 (6H, m) , 4,00 3) - 300 (1 Η, m), 4,34(1Η, m)

A uma solução aproximadamente 3N de áci_ do clorídrico em metanol, adicionaram-se 5,7 g do composto obtido na reacção anterior e agitou-se a mistura durante toda a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reac-cional sob pressão reduzida, obtendo-se 2,4 g de dicloridra to de (2S , 4R)-4-hidroxi-2-(3-pirrolidinil)pirrolidina, diastereoisómero A sob a forma de cristais. I.V. (KBr)cnf1: 3300, 2900, 2700, 1430, 1410, 1060 RMN (D20) S : 1,92(2H, m), 2,16-2,46(2H, m) , 2,68(1H, m), 3,06(1H, dd, J=12,10Hz), 3,34(2H, largo, d, J=12Hz), 3,42-3,66(3H, m), 3,82(1H, m), - 301, 4,67 (1 Η, m) 4)

HO Η ΓΝΖ ΓΝΖ

Utilizando 1,1 g do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-3> obtendo-se 2,2 g (rendimento 88 %) de (2S , 4R)-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitro-benziloxicarbonil)pirrolidin-4-il]-pirrolidina, diastereo-isómero A, sob a forma de uma substância oleosa. 5)

>lsO

ΓΝΖ 302 -

Utilizando 2,2 g do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-4, obtendo-se 2,6 g de (2S, UR)_4-metanos-sulfoniloxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil-2-[N-(p-nitrobenzilo-xicarbonil)pirrolidin-4-il]pirrolidina, diastereoisómero A, sob a forma de uma substância espumosa. RMN (CDClg) cí : 2.02(2H, m), 2,50(2H, m), 3,04(3H, s), 3,1M-3,82(6H, m), 4,20(2H, m), 5,24 (4H, largo, s), 7,53(^H, d, J=8Hz), 8,24(4H, d, J=8Hz) 6)

AcS

PNZ

Utilizando 2,6 g do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-5, obtendo-se 1,7 g (rendimento obtido na - 3 Ο 3 - primeira fase 73 %) de (2S, 4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenzi-loxicarbonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il[--pirrolidina. RMN (CDClg) St 1 ,54-2,10(4H, m), 2,36(3H, s), 2,40-2,82 (2H, m) , 3,02-3,70(6H, m) , 3f88(1H, m) , 4,00-4,32(2H, m), 5,24(4H, largo, s), 7,52(4H, d, J=(Hz) , 8,24(4H, d, J = 8Hz) 7)

HS

Utilizando 1,7 g do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exem pio de Referência 1-9, obtendo-se 1,59 g do composto identificado antes. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 16 _(2S,4S)-*J-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil )-2-[N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il]pirrolidina , diastereoisómero B 1)

Utilizando 5,1 g (13,3 mmoles) de (2S, 4R)-4-t-butildimetilsililoxi-N-t-butoxicarboni1-2-(2-pirroli-don-JJ-il )pirrolidina , diastereoisómero B obtida no Exemplo de Referência 12, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-1, obtendo-se 7,5 g de (2S,4R)-4-t-butil-dimetilsililoxicarbonil-2-(N-t-butoxicarbonil-2-pirrolidon--4-il)pirrolidina bruta, diastereoisómero B. 2) 305

Utilizando 7,5 g do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-2, obtendo-se 6,9 g de (2S,*lR)-4-t-butil-dimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-2-(N-t-butiloxicarbonil--pirrolidin-4-il)pirrolidina, diastereoisómero B, sob a forma de uma substância oleosa de cor amarela que se utilizou tal e qual na reacçâo seguinte. 3)

2HC1 - 30.6 - A 6,9 g do composto obtido na reacçSo anterior adicionou-se uma solução aproximadamente 3N de ácido clorídrico em metanol e agitou-se a mistura durante toda a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida até à obtenção de 3 * 0 g de dicloridrato de (2S, MR)-4-hidroxi-2-(3-pirrolidinil)pirro-lidina, diastereoisómero B, sob a forma de cristais. *0

HO

Utilizando 3,0 g do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-3, obtendo-se 6,8 g (rendimento 99 í) de (2S, 4R)-^-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il]pirrolidina, diastereoisómero B, sob a forma de uma substância oleosa. 3) 307-

Utilizando 6,8 g do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-4, obtendo-se 7,8 g de (2S,4R)-4-meta-nossulfoniloxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitroben-ziloxicarbonil)pirrolidin-4-ilJpirrolidina, diastereoisó-mero B, sob a forma de uma espuma. 6)

Utilizando 3,6 g (5,8 mmoles) do com- 308 posto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-5, obtendo-se 1,3 g (rendimento 39 %) de (2S , 4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il]--pirrolidina, diastereoisómero B. RMN (CDClg) 6 : 1,54-2,10(4H, m), 2,36(3H, s), 2,40-2,82 (2H, m), 3,02-3,70(6H, m), 3,88(1H, m), 4,00-4,32(2H, m), 5,24(4H, largo, s), 7,52(4H, d, J=8Hz), 8,24(4H, d, J=8Hz) 7)

Utilizando 1,7 g do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-9, obtendo-se 1,6 do composto identificado antes. 309

SaEMPLO DE REFERfiNCIA 17

Dicloridrato de (2S,4R)-4-hidroxi-2-M-pirmi i di nil)pirroli-dina

H 2HC1

Utilizando 308 g (0,654 mole) de (2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-(N-t-butoxi-carbonilpirrolidin-3-il)-pirrolidina (composto do Exemplo de Referência 5-2) realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 15-3, obtendo-se 133 g (rendimento 88 %) do com posto identificado antes. 3000-2400, 1600, 1420, 1065, 980 I.V. (KBr)cnf1 : 3390, 1270, RMN (D20) £ : 1,76-2,l8(2H, m), 2,20-2,48(2H, m), 2,58-2,98 (2H, m), 3,10-3,28(1H, m), 3,30-3,50(2H, m), 3 10 - 3,50-3,82(3Η , m), 3,82-«,04(1 Η, m), 4,70(1Η, m) EXEMPLO DE REFERfiWCIA 18

(2S,4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirroli-dina, diastereoisómero A

Utilizando 61,38 g (160 mmoles) de (2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-(2-pirroli-don-4-il)pirrolidina, diastereoisómero A (composto do Exemplo de Referência 12) realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-7, obtendo-se 41,68 g (rendimento 74,6 %) de (2S, 4R)-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--2-(2-pirrolidon-4-il)-pirrolidina, diastereoisómero A. I.V. (KBr)cm-1 : 1695, 1605, 1520, 1430, 1345, 1110 - 311 - RMN (CDClg) á : 1 ,6-2,0(2H, m), 2,0-2,54(2H, m), 3,0-3,56 (4H, m), 3,8(1H, m), 4,26(1H, m), 4,5(1H, m), 5,25 (2H, s), 5,83 (1H, largo), 7,54(2H, d, J = 9Hz), 8,22(2H, d, J = 9Hz) 2)

y.sO

Utilizando 41,6 g (120 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica no Exemplo de Referência 5-4 obtendo-se 47,28 g (rendimento 92,3 %) de (2S, 4R)-4-metanossulfoniloxi-N-(p-nitrobenzi-loxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina, diastereo-isómero A. I.V. (KBr)cnf1 : 1710, 1695, 1605, 1525, 1345, 1170 - 312 - RMN(CDC13) Á : 1 , 5-2, 1 (4H, m), 3,1-3,6í*(3H, m), 6,32(1H, largo), (2H, d, J=9Hz) 2,4-2,8(2H, m), 3,04(3H, s) , 4,0-4,5(2H, m), 5,2(2H, s), 7,52(2H, d, J = 9Hz) , 8,22 3)

Utilizando 13 g (30 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-5, obtendo-se 4,61 g (rendimento 37,7 % ) de (2S,4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina, diastereoisómero A. I.V. (KBr)cm"1: 1705, 1695, 1515, 1405, 1345, 1110 31 "5 RMN (CDClg) £ : 1 ,68( 2H, m), 2,04-2,64(4H, m) , 2,35(3H, s), 3 ,18(2H, m), 3,42(1H, m), 3,84(1H, m), 1* ,04-4,34(2H, m), 5,23(2H,s), 5,97(1H, largo), 7,53(2H, d, J=9Hz), 8,25(2H, d, J=9Hz) 4)

Utilizando 4,61 g (11 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-6, obtendo-se 3,92 g (rendimento 97,5 %) do composto identificado antes. I.V.(KBr)crn-1 : 1695, 1525, 1400, 1345, 1110 RMN(CDC13) 6 : 1,42-1,8(2H, m), 1 ,73(1H, d, J = 8Hz), 2,04--2,6(3H, m), 2,98-3,48(5H, m) , 4,10(2H, m) ,

3U 5,24(2H, s), 6,0(1H, largo), 7,52(2H, d, J = 9Hz), 8,24(2H, d, J = 9Hz) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 19

(2S, 4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina, diastereoisómero B

D

Em 600 ml de metanol dissolveram-se 62,48 g (163 mmoles) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t--butildimetilsililoxi-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina , diastereoisómero B (composto do Exemplo de Referência 12) e arrefeceu-se a solução até á temperatura de 0°C. Adicionaram-se depois 230 ml (570 mmoles) de uma soluçSo de ácido clorídrico 2,5 N em metanol e agitou-se a mistura durante 3 horas à temperatura ambiente. Separou-se o precipitado por filtração e secou-se, obtendo-se 30,01 g 315 (rendimento 89,1 %) de cloridrato de (2S, 4R)-4-hidroxi-2--(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina sob a forma de um pó branco. Dissolveram-se 10,53 g (50 mmoles) do pó branco resultante em uma mistura de dissolventes de 50 ml de dioxano e 50 ml de água e ajustou-se o pH até 8 com trietilamina. Adicionaram-se depois 17,55 (55 mmoles) de 4,6-dimetil-2-(p--nitrobenziloxicarbonil-tio)pirimidina e fez-se reagir a mistura durante 6 horas mantendo o pH a 8. Concentrou-se a mistura reaccional e adicionaram-se 100 ml de tetra-hidro-furano. Separaram-se os compostos insolúveis por filtração e concentrou-se o filtrado. Submeteu-se o resíduo a uma cro-

TM matografia em coluna utilizando Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo clorofórmio/metanol (40:1). Obtiveram-se 17,48 (rendimento 98,2 %) de (2S, 4R)-4-hidroxi-N-(p-nitro-benziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina, dias-tereoisómero B. I.V. (KBr)cm-1 : 1690, 1680, 1525, 1345, 1110, 1095 RMN (CDC13)St 1,5-1,96(2H, m), 1,98-2,46(2H, m) 3,0-3,56 (4H, m), 3,7-3,9(1H, m), 4,25(1H, m) , 4,5 (1H, largo), 5,26(2H, s), 6,02(1H, largo), 7,54(2H, d, J=9Hz), 8,25(2H, d, J=9Hz) 316

Utilizando 17,46 g (50 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-4, obtendo-se 17,46 g (rendimento 81,8 %) de (2S, 4R)-4-metanossulfoniloxi-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)-2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina , diastereoisómero B. I.V.(KBr)cm~1 : 1705, 1690, 1520, 1345, 1170, 905 RMNÍCDCl^) S : 1,74(2H, largo), 1,9-2,6(4H, m) , 3,04(3H, s), 3,2-3,64(3H, m), 4,1-4,36(2H, m), 5,28(2H, s), 5,92(1H, largo), 7,54(2H, d, J = 9Hz), 8,24 (2H, d, J=9Hz) 3) 31?

Utilizando 17,4 g (41 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-5, obtendo-se 14,29 g (rendimento 85,6 %) de (2S,4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--2-(2-pirrolidon-4-il)pirrolidina, diastereoisómero B. I.V. (KBr)cm~1 : 1705, 1695, 1520, 1400, 1345, 1110 RMN (CDClg) S : 1,74(2H, m), 2,0-2,6θ(4H, m), 2,34(3H, s), 3,0-3,5(3H, m), 3,84(1H, m), 4,0-4,3(2H, m) , 5,22(2H, s), 6,02(1H, largo), 7,52(2H, d, J= = 9Hz) 4) 318

Utilizando 7 g (17 mmoles) do composto obtido na reacçao anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-6 (obtendo-se 5,9*1 g (rendimento 95,6 %) do composto identificado antes. I.V. (KBr)cm-1 : 1695, 1520, 1*100, 13*15, 1105 RMN (CDC13) 6 : 1 ,5-1 ,88(2H, m), 1,75(1H, d, J=8Hz), 2,12(1H, dd, J=18,8Hz), 2,37(1H, dd, J=18,8Hz), 2,4*1 (1Η, M), 3,0-3,56(5H, m) , 4,0-4,22 (2H, m), 5,22(2H, s), 6,14(1H, largo), 7,52 (2H, d, J=9Hz), 8,23(2H, d, J=9Hz) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 20 (2S , 4S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)—2—[3—[(P— -nitrobenziloxicarbonil)amino]-2-pirrolidon-4-il]--pirrolidina 1)

H Λ

N

0

Boc

Boc à temperatura de -78°c e sob atmosfera de azoto, adicionaram-se, gota a gota, 2,5 ml (4 mmoles) de uma solução 1,6 M de n-butil-lítio a uma outra de 0,64ml (4,6 mmoles) de diisopropilamina em 40 ml de tetra-hidrofu-rano e agitou-se a mistura reaccional durante 45 minutos. A solução resultante adicionou-se, gota a gota, uma outra de 986 mg (2 mmoles) de (2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butil-dimetilsililoxi-2-(N-t-butoxicarbonil-2-pirrolidon-4-il)pirrolidina, composto do Exemplo de Referência 5-1, em 10 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 2 horas à mesma temperatura. Adicionaram-se depois 945 mg (4,8 mmoles) de azida de p-toluenossulfonilo e agitou-se a mistura durante mais 1 hora. À mistura reaccional resultante 320 adicionaram-se depois 1,29 ml (10 mmoles) de cloreto de tri-metilsililo e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida. Ao resíduo adicionou-se uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e extraiu-se depois a mistura com 50 ml de cloreto de metileno. Lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o re

síduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sílica TM

Wakogel C-300 e como agente de eluição cloroformio. Obtiveram-se 720 mg (rendimento 68,5 %) de (2S, 4R)-2-(3-azido--N-t-butoxicarbonil-2-pirrolidon-4-il)-N-t-butoxicarbonil--4-(t-butildimetilsililoxi)pirrolidina. I.V.(KBr)cnf1 : 2110, 1790, 1760, 1695, 1315, 1155 RMN(CDC13) J: 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1,48(9H, s), 1,6-2,2(2H, m), 3,1-3,85(5H, m), 4,10 (1H, largo), 4,26(1H, largo), 4,5(1H, largo) 2) 321 T'jd:.5o

ΝΗΙ'ΝΖ Ο

Boc

Em 50 ml de metanol dissolveram-se 720 mg (1,37 mmoles) do composto obtido na reacção anterior e adicionaram-se 200 mg de paládio a 10 $ sobre carvão como catalisador. Agitou-se a mistura energicamente sob atmsofera de hidrogénio durante 2 horas. Filtrou-se a mistura e concen trou-se o filtrado obtido. Obtiveram-se 730 mg de um óleo bruto que se dissolveu em uma mistura de 20 ml de dioxano e 20 ml de água. Ajustou-se o pH até 8 com trietilamina e adicionaram-se depois 504 mg (1,6 mmoles) de 4,6-dimetil--2-(p-nitrobenziloxicarbonil-tio)-pirimidina. Agitou-se esta solução durante 6 horas mantendo o pH no valor de 8. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida. Extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se o extracto, sequencialmente, com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em colu

, TM na utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo clorofórmio/metanol (100:1). Obtiveram-se 840 mg (rendimento 90,6 %) de (2S ,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butil-dimetilsililoxi-2-[N-t-butoxicarbonil-3-[(p-nitrobenziloxicar bonil)amino]-2-pirrolidon-4-iljpirrolidina. I.V. (KBr)cm-1: 1795, 1695, 1525, 1350, 1255, 1155 RMN(CDC13) £ : 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1,48(9H, s), 1,54(9H, s), 1,72-2,1(2H, m), 3,08-3,78 (5H, m), 4,1-4,3(3H, m), 5,2(2H, largo), 7,5(2H, d, J=9Hz), 8,24(2H, d, J=9Hz) 3)

HO

XHPNZ

Em 20 ml de cloreto de metileno anidro dissolveram-se 840 mg (1,2 mmoles) do composto obtido na reac çao anterior e arrefeceu-se a solução até à temperatura de 3 - 0°C. Adicionaram-se depois 1 ml (13 mmoles) de ácido tri-fluoroacético e agitou-se a mistura durante 16 horas à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional e eli^ minou-se o ácido trifluoroacético. Dissolveu-se depois o re síduo em 30 ml de metanol e adicionou-se 0,63 ml (1,6 mmoles) de uma solução 2,5 N de ácido clorídrico em metanol e agitou-se a mistura durante 16 horas à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional. Dissolveu-se depois o resíduo obtido em uma mistura de 20 ml de dioxano e 20 ml de água. Ajustou-se o pH até 8 com trietilamina, adicionaram-se 850 mg (2,6 mmoles) de M,6-dimetil-2-(p-nitrobenzi-loxicarbonil-tio)pirimidina e agitou-se a mistura durante 16 horas à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional e extraiu-se o resíduo com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna

Tm utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição clorofórmio/metanol (50:1). Obtiveram-se ^50 mg (rendimento 69 %) de (2S,4R)-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxi carbonil)-2-[3-[(p-nitrobenziloxicarbonil)amino]-2-pirroli-don-4-il]pirrolidina. I.V.(KBr)cnf1: 1700, 1520, 13^5 RMN(CDC13 + CD30D) S : 1 ,96-2,2M2H, m), 3,06-3,84 (5H, m), H,08 324 -η , 5(3Η, m), 5,22(2Η , s), 5,24(2Η, s), 7,54(4Η, d, J = 9Hz), 8,22(4Η, d, J = 9Hz) 4)

:! sO

Η

Utilizando 450 mg (0,83 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5,4, obtendo-se 620 mg de (2S, 4R)-4-metanossulfoniloxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--2-[3-[(p-nitrobenziloxicarbonil)amino]-2-pirrolidon-4-il]pir-rolidina I.V. (KBr)cm 1710, 1610, 1525, 1350, 1175 -1 5) - 32

\cS

Η

Utilizando 620 mg do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-5, obtendo-se 130 mg (rendimento 26%) de (2S,4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2--[3-[(p-nitrobenziloxicarbonil)amino]-2-pirrolidon-4-il ]--pirrolidina. I.V. (KBr)cm-1: 1710, 1700, 1610, 1525, 1350, 1110 RMN(CDC13) í : 1 ,86-1 ,96(2H, m), 2,34(3**, s), 2,68(1H, largo), 3,0-3,4(4H, m), 4,84(1H, m), 4,1- -4,4(2H, m), 5,2(4H, largo), 5,92 (1H, largo), 6,84(1H, largo), 7,54(4H, d, J=9Hz), 8,22(4H, d, J=9Hz) 6) 3 25 -

ΝΗΡΧΖ

Utilizando 130 mg (0,21 mmole) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-6, obtendo-se 110 mg (rendimento 91 % de (2S,i*S)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicar-bonil)-2-[3-[(p-nitrobenziloxicarbonil)amino]-2-pirrolidon-M--il ]pirrolidina, isto é, o composto identificado antes. I .V. (KBr(cm~1) : 1710, 1610, 1515, 1350 RMN(CDC13) £ : 1 ,6-1,9(2H, largo), 1,77(1H, d, J=8Hz), 2,77 (1H, largo), 3,95-4,42(HH, m), 4,05-4,2(3H, largo), 5,19(2H, s), 5,21(2H, s), 5,9(1H, largo), 6,92(1H, largo), 7,54(4H, d, J = =9Hz), 8,2(4H, d, J=9Hz) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 21 í2S^,,^S)-_N^liloxicarbonil-2::iodometil_4.tritil_ -tiopirrolidina

D

0>is

Mediante arrefecimento com gelo adicio nou-se, gota gota, uma solução de 20,5 ml (265 mmoles) de cloreto de metanossulfonilo em 20 ml de cloreto de metileno a uma outra solução de 119 g (259 mmoles) de (2S, 4S)-N-ali-loxicarbonil-2-hidroximetil-4-tritil-tiopirrolidina, composto do Exemplo de Referência 3-1 do pedido de patente de invenção Japonesa NS 192.093/1990, e 40,3 ml (289 mmoles) de trietilamina em 1 1 de cloreto de metileno, e agitou-se a mistura durante 30 minutos à mesma temperatura. Lavou-se a mistura reaccional, sequencialmente, com 500 ml de água, 250 ml de uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e 250 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato 328 de sódio anidro e concentrou. Ao resíduo adicionaram-se 30ml de acetato de etilo e 270 ml de éter diisopropílico e separaram-se por filtração os cristais precipitados obtendo-se 130,8 g (rendimento 94 %) de (2S, 4S)-N-aliloxicarbonil-2--metanossulfoniloximetil-4-tritil-tiopirrolidina. RMN(CDC13) S : 1,8(1H, m), 2,1(1H, m), 1,7-2,4(3H, m) , 3,0(3H, s), 3,9(1H, m), 4,1-4,6(4H, m) , 5,2-5,4(2H, m), 5,9(1H, m), 7,2-7,6(15H, m) 2)

TrS

V

H

I

COO

Durante 3 horas agitou-se e aqueceu-se uma solução constituída por 130,8 g (243 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, 180 g (1,2 mmoles) de iodeto de sódio e 1,3 litros de 2-butanona. lavou-se a mistura reac-cional sequencialmente com 300 ml de água, 200 ml de uma solução aquosa a 10 % de tiossulfato de sódio e 500 ml de - 329 _ uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Ao resíduo adicionaram-se 120 ml de éter isopropílico e 300 ml de n-hexano e separaram-se os cristais precipitados por filtração, obtendo-se 123,7 g (rendimento 89 %) do composto identificado antes. RMN(CEC13) é : 1 ,6 (1 H , m), 2,1 (1 H , m), 2,7-3, Κ3Η, m) , 3,3-3,6(3H, m), 4,5(2H, largo, s), 5,25 (2H, m), 5,9(1H, m), 7,2-7,6(15H, m) EXEMPLO DE REFERfiNCIA 22 (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-4-mercapto-2-(2-oxopirrolidin--3-il-metil)pirrolidina 1)

TrS

COO À temperatura de -78°C adicionaram-se, 3 30 -gota a gota, 6,45 ml (13,5 mmoles) de uma solução 2,1 M de lítio-diisopropilamida em tetra-hidrofurano a uma outra solução de 1,80 g (9,03 mmoles) de N-t-butildimetilsilil-2--oxopirrolidina em 150 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 15 minutos à mesma temperatura. Adicionou-se depois, gota a gota, uma solução de 2,57 g (4,5 mmoles) de (2S, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-iodometil-4-tritil-tiopirrolidina a 18 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura ambiente. Verteu-se a mistura reaccional sobre uma outra mistura de 150 ml de acetato de etilo e 50 ml de uma solução aquosa a 10 % de cloreto de amónio observando-se a separação dos líquidos. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com 100 ml de uma solução aquosa a 10 % de fosfato de di-hidrogénio e sódio e 100 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e con centrou. Dissolveu-se o resíduo em 12 ml de tetra-hidrofurano e 3 ml de metanol e adicionaram-se 3 ml de ácido clorídrico mediante arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura durante 1 hora. A mistura reaccional adicionaram-se 50 ml de acetato de etilo e lavou-se, sequencialmente, a camada orgânica com 30 ml de uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e 30 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Submeteu-se

o resíduo a uma cromatografia em coluna rápida utilizando TM gel de Wakogel C-300 e como agente de eluição 40 ml de uma mistura acetato de etilo/n-hexano (3:1)· Obtiveram--se 880 mg (rendimento 37 %) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbo-nil-2-(2-oxopirrolidin-3-il-metil)-4-tritil-tio-pirrolidina. RMN(CDC13) £ : 1,5(1H, m), 3,66(1H, m), 5,9(2H, m), 1,7-2,3(6H, m) , 3,34(2H, m) , 4,5(2H, largo, s) , 5,3(2H, m) , 7,2-7,6(15H, m) 2)

COO

Mediante arrefecimetno com gelo adicio naram-se 1,3 ml de ácido trifluoroacético e 0,42 ml (2,63 mmoles) de trietilsilano a uma solução de 1,32 g (2,51 mmo-les) do composto obtido na reacçSo anterior em 1,3 ml de cloreto de metileno e agitou-se a mistura reaccional durante 30 minutos à temperatura ambiente. Eliminou-se o dissolvente orgânico sob pressão reduzida, e adicionaram-se ao resíduo 332 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a mistura, sequencialmente, com 2 x 30 ml de uma solução tampão de fosfato 1M pH 5,5 e 30 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Purificou-se o resíduo por cromatogra-fia em coluna rápida utiliznado gel de sílica Wakogelx C-300 e como agente de eluição 40 ml de acetona/acetato de etilo (3ϊT). Obtiveram-se 650 mg (rendimento 91 %) do com posto identificado antes.

RMN (cdci3) S 1 ,5-1,7(2H, m), 1,9-2,4(5H, m), 2,65(1H, m), 3,1-3,WH, m), 3,92(1H, m), 4,1(1H, m), 4,6(2H, largo, d, J=6Hz), 5,2-5,4(2H, m) , 5,95(2H, m) EXEMPLO DE REFERfiNCIA 23 (2R ,4S)-N-aliloxicarbonil-4-mercapto-2-(2-oxoazetidin-3-il· -metil)pirrolidina υ

Utilizando 650 mg (3,5 mmoles) de N-t--butildimetilsilil-2-oxoazetidina, 3,314 ml (7,0 mmoles) de uma solução 2,1 M de lítio-diisopropilamida em tetra-hidro-furano e 1 g (1,75 mmoles) de (2S,4S)-N-aliloxicarbonil--2iodometil-4-tritil-tiopirrolidina realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referencia 22-1 , obtendo-se 220 mg (rendimento 24 %) de (2R,4S)-N-aliloxicarbonil-2-(2-oxo-azetidin-3-il-metil)-4-tritil-tiopirrolidina. RMN(CDC13) ò : 1,5(1H , m), 1,9-2,3(2H, m) , 2,7-3,1(4H, m) , 3,2(1H, m), 3,4(1H, t, J = 5Hz) , 3,7(1H, m), 4,5(2H, largo, s), 5,3(2H, m), 5,62(1H, largo, s), 5,9(1H, m), 7,2-7,6(15H, m) 2)

Utilizando 510 mg (0,99 mmole) do composto obtido na reacção anterior e 0,17 ml (1,05 mmoles) de trietilsilano, realizou-se a técnica descrita no Exem- 33u pio de Referência 22-2, obtendo-se o composto identificado antes que se utilizou tal e qual na reacção subsequente.

EXEMPLO DE REFERENCIA 2M (2R ,4S)-N-aliloxiearbonil-2-(N-aliloxicarbonil-pirrolidin--3-il-metil)-4-mercaptopirrolidina 1)

Bo c

A uma solução constituída por 3 g (5,7 mmoles) de (2S,HS)-N-aliloxicarbonil-2-[(Z)-2-oxopir-rolidin-3-ilidenometil ]-2j-tritil-tiopirrolidina, composto do Exemplo de Referência 7-1 do pedido de patente de inven-çSo Japonesa NS 192.093/1990, 0,8 ml (5,7 mmoles) de trietll amina, 699 mg (5,7 mmoles) de M_(dimetilamino)piridina e 30 ml de tetra-hidrofurano, adicionaram-se 1,97 ml (8,6 mmoles) de dicarbonato de di-t-butilo. Agitou-se a mistura durante 5 horas à temperatura ambiente e eliminou-se depois o dissolvente sob pressão reduzida. Adicionaram-se ao resí_ duo 50 ml de acetato de etilo e lavou-se a mistura, sequencialmente, com 20 ml de uma solução aquosa a 10 % de fosfato de di-hidrogénio e sódio e 20 ml de uma solução aquosa satu rada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Purificou-se o resíduo

por cromatografia em coluna rápida utilizando gel de sílica TM

Wakogel C-300 e como agente de eluição 40 ml de acetato de etilo/n-hexano (1:2). Obtiveram-se 3,24 g (rendimento (91 %) de (2S,4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(Z)-N-t-butoxicar-bonil-2-oxopirrolidin-3-ilidenometil]-4-tritil-tiopirroli-dina. RMN (CDClg) $ : 1,5(1H, m), 1,56(9H, s), 2,4-3,2(6H, m), 3,7(2H, m), 4,3-4,6(2H, m), 5,1-5,5 (3H, m), 5,7-6,0(2H, m), 7,2-7,6(15H, m) 2)

OH co - 336 A uma solução constituída por 500 mg (0,8 mmole) do composto obtido na reacção anteriro e 2,5ml de tetra-hidrofurano adicionaram-se, sequencialmente, 68 mg(1,6 mmoles) de cloreto de lítio, 61 mg (1,6 mmoles) de hidreto de boro e sódio e 5 ml de etanol e agitou-se à mistura reaccional durante 16 horas à temperatura ambiente. À mistura reaccional adicionaram-se 30 ml de acetato de etilo e lavou-se a mistura, sequencialmente, com 2 x 15 ml de água e 15 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de sódio ani dro e concentrou. Purificou-se o resíduo por cromatografia tm em coluna rápida utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição HO ml de acetato de etilo/ /n-hexano (1:1). Obtiveram-se 270 mg (rendimento 54 %) de (2R,4S)-N-aliloxicarbonil-2-[4-t-butoxicarbonilamino- -2-(hidroximetil)-butil]-4-tritil-tiopirrolidina. rmn(cdci3) s : 1,2-1,5(4H, m), 1,44(9H, s), 1,7-2,1 (2H, m), 2,22(1H, m), 2,6-3,0(3H, m) , 3,16(2H, M), 3,H-3,8(3H, m), 4,5(2H, largo, s), 4,7(0,5H, largo, s), 4,9 (0,5H, largo, s), 5,2-5,^(2H, m), 5,9 (1H, m), 7,2-7,6(15H, m) OKs coo·'"^

Mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se, gota a gota, 35 μΐ (0,45 mmole) de cloreto de metanossulfonilo a uma soluçSo constituída por 270 mg (0,43 mmole) do composto obtido na reacção anterior, 66 μΐ (0,47 mmole) de trietilamina e 3 ml de cloreto de metileno e agitou-se a mistura durante 30 minutos à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se 30 ml de cloreto de metileno e lavou-se a mesma mistura, sequencialmente, com 15 ml de água, 15 ml de uma solução aquosa saturada de car bonato de hidrogénio e sódio e 15 ml de uma soluçSo aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna rápida utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçSo 40 ml de uma mistura de acetato de etilo/n-hexano (1:1). Obtiveram--se 270 mg (rendimetno 89 %) de (2R,4S)-N-aliloxicarbonil--2-[4-t-butoxicarbonilamino-2-(metanossulfoniloximetil)butil] -4-tritil-tiopirrolidina. - 338 - RMN(CDC13) & · 1 ,3-2,0( 6H, m), 1 ,4Í*( 9H, s), 2,2(1H, m) , 2,6-3,3(5H, M), 3,0(1,5H, s), 3,2(1,5H, s), 3,8(1H, m), 4,14(2H, m) , 4,4-4,7(2,5H, m) , 5,2(0,5H, largo, s), 5,2-5,4(2H, m), 5,9(1H, m), 7,2-7,6(15H, m) 4)

TrS

COO

Em 0,7 ml de uma solução 1,55 N de ácido clorídrico em metanol dissolveram-se 260 mg (0,367 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior e agitou-se a mistura durante 4 horas à temperatura ambiente. Eliminou-se o dissolvente sob pressão reduzida e adicionaram-se depois 5 ml de tetrahidrofurano e 0,11 ml (0,81 mmole) de trietilamina e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura ambiente. À mistura reaccional adicionou-se 0,11 ml (0,81 mmole) de trietilamina e adicionaram-se depois, gota a gota, 43 μΐ (0,4 mmole) de cloroformato de alilo mediante arrefecimento 339 com gelo. Agitou-se a mistura durante 30 minutos à mesma temperatura. Adicionaram-se á mistura reaccional 30 ml de acetato de etilo e lavou-se a mistura, sequencialmente com 15 ml de água, 15 ml de uma solução aquosa saturada de car bonato de hidrogénio e sódio e 15 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna rápida utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição 40 ml de uma mistura de acetato de etilo/n-hexano (1:1). Obtiveram-se I80mg (rendimento 82 %) de (2R,4S)-N-aliloxiearbo-nil-2- (N-aliloxicarbonil-pirrolidin-3-il-nietil )-4-tritil--tiopirrolidina. rmn(cdci3) £ : 1,3-1*5(3H, m), 1,8-2,2(4H, m), 2,6-3,0 (4H, m), 3,3(1H, m), 3,4-3,7(3H, m) , 4,5 (2H, largo, s), 4,6(2H, largo, d, J=5Hz), 5,2-5,4(4H, M), 5,8-6,1(2H, m), 7,2- -7,6(15H, m) 5)

HS V_

H

Utilizando 1,03 (1,73 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior e 0,29 ml (1,81 mmoles) de trietilsilano, realizou-se a técncia descrita no Exemplo de Referência 22-2, obtendo-se 560 mg (rendimento 92 %) do composto identificado antes. RMN(CDCl^) & · 1 ,9-2,3(4H, m), 2,62(1H, m), 4,6(4H, m), 5,2-5,4(4H, m), 1,5-1,8(4H, m), 2.9- 4,2(7H, m), 5.9- 6,1(2H, m) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 25 (2R ,4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-carbamoilpirrolidin -M-il-metil ]-4-mercaptopirrolidina 1)

Utilizando 10,67 g (31,6 mmoles) de 341 N-t-butildimetilsilil-5-t-butildimetilsililoximetil-2-oxopir-rolidina, 15,1 ml (31,6 mmoles) de uma solução 2,1 M de lítio-diisopropilamida em tetra-hidrofurano e 10 g (17,6 mmoles) de (2S ,4S)-N-aliloxicarbonil-2-iodometil-4-tritil--tiopirrolidina realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 22-1, obtendo-se 2 g (rendiemtno 21 %) de (2R , 4S)-N-aliloxicarbonil-2-[( 5S )-5-hidroxijjEtil-2-oxopirroli_ din-3-il-metil]-4-tritil-tiopirrolidina. RMN(CDC13) & : 1 ,3-2,4(8H, m), 3,6-3,8(3H, m), m), 5,9(1H, m), (15H, m) 2,7-3,0(2H, m), 3,5(1H, m), 4,5(2H, largo, s), 5,2-5,4(2H, 6,3(1H, largo, s), 7,2-7,6 2)

TrS

Mediante arrefecimento com gelo adicio-narao-se, sequeneialmente, 88 mg (0,72 mmole) de H-<dimetll- 342 amino)piridina e 1,2 ml (8,6 mmoles) de trietilamina a uma solução constituída por 4 g (7,18 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, 1,19 g (7,9 mmoles) de cloreto de t--butildimetilsililo e 20 ml de Ν,Ν-dimetilformamida e agitou-se a mistura durante 3 horas à temperatura ambiente. À mistura reaccional adicionaram-se 80 ml de acetato de etilo e lavou-se a mistura, sequencialmente, com 2 x 40 ml de água, 40 ml de uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e 40 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Purificou-se o resíduo por cro_

matografia em coluna rápida utilizando gel de sílica Víako*rL TM gel C-300 e como agente de eluiçao 40 ml de acetato de etilo/n-hexano (2:1). Obtiveram-se 4,1 g (rendimento 85 %) de (2R ,4R)-N-aliloxicarbonil—2[(5S)-5-t-butildimetilsili-loximetil-2-oxopirrolidin-3-il-metil]-4-tritil-tiopirrolidina. RMN(CDC13) 6 : 0,05(6H, m), 0,9(9H, s), 1,3-2,4(8H, m), 2,8-3,0(2H, m), 3,3-3,7(4H, m), 4,5(2H, largo, s), 5,2-5,4(2H, m), 5,9(2H, m), 7,2-7,6 (15H, m) 3) i t - 31*3 -

TrS

C00'^<? Boc

V

Utilizando l*, 1 g (6,1 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior, 2,53 ml (11 mmoles) de di-carbonato de di-t-butilo, 71*6 mg (6,1 mmoles) de 4-(dimetil-amino )piridina e 0,91* ml (6,7 mmoles) de trietilamina, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 24-1 obtendo-se 4,7 g (rendimento 100 %) de (2R,4S)-N-aliloxi-carbonil-2-[(3S)-N-t-butoxicarbonil-5-t-butildimetilsililoxime til-2-oxopirrolidin-3-il-metil]-4-tritil-tio-pirrolidina. RMN (CDClg) ói 0,04(3H, s), 0,06(3H, s), 0,9(9H, s), 1,5 (2H, m), 1,52(9H, s), 1,9(2H, m), 2,15 (2H, m), 2,8-3,0(4H, m), 3,62(1H, m), 3»7(1H, dd, J=10,2Hz), 3,9(1H, dd, J=10,4Hz), 4,1(1H, m), 4,5(2H, largo, s), 5,1-5,3(2H, m) , 5,9(1H, m), 7,2-7,6(15H, m) 4) 344

Utilizando 4,7 g (6,1 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, 518 mg (12,2 mmoles) de cloreto de lítio e 463 mg (12,2 mmoles) de hidreto de boro e sódio, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 24-2, obtendo-se 2,18 g (rendimento 46 %) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(4S)-4-t-butoxicarbonilamino-5-t--butildimetilsililoxi-2-hidroximetil-pentil]-4-tritil-tio-pirrolidina. RMN(CDC13) i : 0,04(6H, s), 0,9(9H, s), 1,4-1,8(6H, m), 1,48(9H, s), 2,2(1H, m), 2,6-3,0(3H, m), 3,5-3,9(6H, m), 4,5(2H, largo, s), 4,7 (1H, largo, s), 5,2-5,4(2H, m) , 5,9(1H, m) , 7,2-7,6(15H, m) - 345 - 5) οτββ::.= Ηf. Τ'

Ti Η

Boc OMs

Utilizando 2,18 g (2,8 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior, 0,24 ml (3 mmoles) de cloreto de metanossulfonilo e 0,47 ml (3,4 mmoles) de trietil-amina, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 24-3, obtendo-se 2,15 g (rendimento 90 %) de (2R, 4S)-N-alilcDdcaiv bcniL^-t(4S)-WxitaxicarbcnLlanirD-5--t -1>ut i 1 dime t i 1 s i 1 i 1 oxi - 2-me tanos-sulfoniloximetil-pentil ]-4-tritil-tiopirrolidina. RMN(CDC13) £ : 0,04(6H, s) , 0,9(9H, s), 1 ,3-1,9(6H, m), 1 ,45(9H, s) , 2,2(1H, m), 2,6-3,0(3H, o oo e (3H, s), 3,4· -3,8(4H, m) , 4,1-4,7(5H, m) , (15H, m) 5,1-5,3(2H, m), 5,9(1H, m), 7,2-7,6 6) 346

Utilizando 2,15 g (2,52 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, 25 ml de uma solução metanólica 1N de ácido clorídrico, 0,35 ml (3,28 mmoles) de cloroformato de alilo e 1,76 ml (12,6 mmoles) de trietil-amina, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referên cia 24-4, obtendo-se 1,21 g (rendimento 77 %) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-hidroxime tilpirrolidin-4-il-metil]-4-tritil-tiopirrolidina. RMN(CDC13) S : 1,3-2,2(7H, m), 2,6-3,05(4H, m), 3,5-3,7 (4H, m), 4,05(1H, m), 4,45(2H, largo, d, J=4Hz), 4,6(2H, m), 5,1-5,3(4H,m), 5,8-6,0(2H, m), 7,2-7,6(15H, m)

V 7) 347

À temperatura ambiente agitou-se durante 16 horas uma soluçeo de 1,21 g (1,93 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior (3»6 3 g (9*65 mmoles) de dicro-mato de piridínio e 7,2 ml de N,N-dimetilformamida. A mistura reaccional adicionaram-se 50 ml de acetato de etilo e lavou-se a mistura com 2 x 20 ml de água. À camada orgânica adicionaram-se 30 ml de água contendo 270 mg (1,93 mmoles) de carbonato de potássio para se conseguir a separaçSo dos líquidos. Acidificou-se a camada aquosa com ácido clorídrico 6N, e adicionaram-se 50 ml de acetato de etilo para se obter a separação dos líquidos. Lavou-se a camada orgânica com 20 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou obtendó-se 1g (rendimento 81 %) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil--2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-carboxipirrolidin-4-il-metil]--4-tritil-tiopirrolidina. RMN(CDC13) 1,3-1,5(2H, m), 1,8-2,4(5H, a), 2,7-3,1 (4H, m), 3,5-3,9(2H, m), M,3_4j8(5h> m) , 5,1- -5,5(, m), 5,8-6,0(2H, m), 7,2-7,6(15H, m) 8)

TrS

A temperatura de -15°c adicionaram-se, gota a gota, 90^1 (0,69 mmole) de cloroformato de isobutilo a uma solução constituída por 400 mg (0,62 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior,96 μΐ (0,69 mmole) de trietilamina e 6 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 20 minutos à mesma temperatura. Adicionou-se seguidamente 0,18 ml de uma solução aquosa concentrada de amoníaco e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura de 0°C. À mistura reaccional adicionou-se 30 ml de acetato de etilo e lavou-se a mistura sequencialmente com 15 ml de uma solução aquosa saturada de carbonato de hidro- 349 génio e sódio e 15 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou obtendo-se 310 mg (rendimento 78 %) de (2R, MS )-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-car-bamoilpirrolidin-M-il-metil]-M-tritil-tio-pirrolidina. rmn(cdci3) 6 ' 1,3-2,5(7H, m), 2,7-3,1(4H, m), 3,72(2H, m), Μ , 3-4 , 7(5H, m), 5,1-5,5(5H, m), 5,9-6,1(2,5H,m), 6,8(0,5H, largo, s), 7,2-7,6(15H, m) 9)

Utilizando 310 mg (0,48 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior e 81 ^al (0,51 mmole) de trietilsilano, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 22-2, obtendo-se 190 mg (rendimento 100 %) do composto identificado antes. 350 RMN(CDC13) :S : 1>5-2,7(8H, m), 3,0-3,3(3H, m) , 3,7(1H, m) , 3,86( TH, m), 4,06(1H, m), 4,4(1H, d, J=8Hz), 4,6(4H, m), 5,2-5,5(5H, m) , 5,8-6,0(2,5H, m) , 6,8(0,5H, largo, s) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 26 (2R,4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2--(metil-carbamoil)pirrolidin-4-il-metil]-4-mercaptopir-rolidina 1)

TrS

Utilizando 300 mg (0,47 mmole) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-carboxi-pirrolidin-4-il-metil]-4-tritil-tiopirrolidina, 74 μΐ (0,56 mmole) de cloroformato de isobutilo, 78 ^il (0,56 mmole) de 351 trietilamina e 0,19 ul de trietilamina e 0,19 ml de uma solução aquosa a 90 % de metilamina, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 25-8, obtendo-se 300 mg (rendimento 98 %) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)--N-aliloxicarbonil-2-(metilcarbamoil)pirrolidin-4-il-metil]--4-tritil-tiopirrolidina. RMN(CDC13) S : 1 ,3-2,5(7H, m), J=5Hz), 3,6(2H, 4,4-4,6(4H, m), 2,6-3,0(3H, m), 2,8(3H, d, m), 4,3(1H, d, J = 8Hz) , 5,1-5,4(4H, m), 5,8-6,0 (2,5H, m), 6,7(0,5H, largo, s), 7,2-7,6 (15H, m) 2)

Utilizando 300 mg (0,46 mmole) do composto obtido na reacção anterior e 83 ^1 (0,5 mmole) de tri- 352 etilsilano, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 22-2, obtendo-se 168 mg (rendimento 89 %) do composto identificado antes. RMN (CDClg) & : 1,5-2,7(8H, m), 2,82(3H, d, J=5Hz), 3,0-3,3 (3H, m), 3,7(1H, m), 3,9(1H, m), 4,1(1H, m) , 4,4(1H, d, J = 8Hz), 4,6(4H, m) , 5,2-5,4(4H, m) , 5,8-6,1(2,5H, m), 6,9(0,5H, largo, s) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 27 (2R,4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-(dimetilcarbamoil)pirrolidin-4-il-metil]-4-mercapto-pirrolidina 1)

TrS

ON*M< COO COO 3 53 -

Utilizando 300 mg (0,47 mmole) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-[(2S)-N-aliloxicarbonil-2-carboxipir-rolidin-4-il-metil]-4-tritil-tiopirrolidina, 74 μΐ (0,56 mmole) de cloroformato de isobutilo, 78 μΐ (0,56 mmole) de trietilamina e 0,27 ml de uma soluçSo aquosa a 50 % de dimetilamina, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 25-8, obtendo-se 290 mg (rendimento 93 %) de (2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-[( 2S)-N-aliloxicarboni1-2-(dimetil--carbamoil)pirrolidin-4-il-metil]-4-tritil-tiopirrolidina. RMNÍCDCl^) 6 : 1,3-2,3(7H, m), 2,6-3,0(4H, m) , 2,9(6H, s) 3,5(2H, M), 4,1-4,7(5H, m), 5,1-5,3(4H, m) 5,7-5,9(2H, m), 7,2-7,6(15H, m) 2)

HS

H

X- C0NNeo

CO

V - 354 -

Utilizando 290 mg (0,43 mmole) do composto obtido na reacção anterior e 76 μΐ (0,48 mmole) de trietilsilano realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 22-2, obtendo-se 110 mg (rendimento 60 %) do composto identificado antes. RMN(CDCl^) : 1,5-2,7(8H, m), 2,9-3,3(3H, m) , 2,98(3H, s), 3,1(3H, s), 3,7-4,2(3H, m) , 4,4-4,8(5H, m), 5,2-5,4(4H, m), 5,9(2H, m) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 28 (2S,4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5-il)-4-(p-metoxibenzil--tio)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina

PMBS

PXZ

HN

O

XH

Sob atmosfera de azoto e à temperatura 355 de -78°C adicionaram-se, gota a gota, 1,3 ml (14,9 mmoles) de cloreto de oxalilo a uma solução de 2,2 ml (3,10 mmoles) de sulfóxido de dimetilo em 30 ml de cloreto de meti-leno e agitou-se a mistura reaccional durante 30 minutos à mesma temepratura. A esta mistura adicionou-se, gota a gota, uma solução de 4,32 g (9,99 mmoles) de (2S,4S)-2-hidroxi-meti1-4-(p-metoxibenzil-tio)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina em 20 ml de cloreto de metileno arrefecido até à temperatura de -78°C. Agitou-se esta mistura durante 30 minutos à mesma temperatura e adicionaram-se depois, gota a gota, 7,0 ml (50,2 mmoles) de trietilamina. Agitou-se esta mistura durante 10 minutos à mesma temperatura e durante mais 1 hora à temperatura ambiente. Adicionaram--se depois 400 ml de cloreto de metileno e lavou-se a mistura com uma solução aquosa 1N de sulfato de hidrogénio e de potássio e água. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio anidro. Eliminou-se depois o dissolvente por destilação obtendo-se um aldeído bruto. Dissolveu-se o aldeído bruto obtido na reacção anterior em uma mistura de dissolventes constituída por 15 ml de etanol, 15 ml de água e 6 ml de N,N-dimetilformamida. Adicionaram-se depois 4,50 g (46,8 mmoles) de carbamato de amónio e seguidamente 0,98g(20,0 mmoles) de cianeto de sódio e agitou-se a mistura durante 6 horas à temperatura de 60°C. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente. Eliminou-se depois o dissolvente orgânico por destilação e adicionaram-se ao resíduo 100 ml de água e 100 ml de clorofórmio. Separou-se a camada orgâ- 356 nica e extraiu-se depois a camada aquosa com 2 x 100 ml de clorofórmio. Reuniram-se as camadas orgânicas depois do que se lavaram, sequencialmente, com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de sódio anidro. Eliminou-se o dissolvente por destila çâo sob pressão reduzida e submeteu-se o resíduo a uma croma

t TM tografia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C--300 e como agente de eluição metanol/clorofórmio. Obtiveram-se 1 ,82 g (rendimento 36 %) do composto identificado antes. 1770, 1730, 1710, 1610, 1350 I.V.(KBr)cnf1 3250, 1510, RMN(CDC13 + CD30D) £ : 1,9-2,3(2H, m), 3,7-4,1(1H, m), 4,26(1H, m), 7,22 e 5,04(1H, s), 5,22(2H, s), 6,68(2H, d, J=8Hz), 7,24(2H, d, J=8Hz), 7,51(2H, d, J= 8Hz), 8,26(2H, d, J=8Hz) 357 EXEMPLO DE REFERÊNCIA 29

í 2R, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5-il--roetil)-4-tritil-tiopirrolidina, diastereoisómeros A e B υ

TrS

Alloc TBDMS

Sob atmosfera de azoto e á temperatura de -78°C adicionaram-se, gota a gota, 4,1 ml (6,56 mmo-les) de uma solução 1,6 M de n-butil-lítio em hexano a uma outra solução de 1 ml (7,14 mmoles) de diisopropilamina em 5 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura reaccional durante 10 minutos à mesma temperatura mediante arrefecimento com gelo durante 30 minutos. A esta mistura reaccional adicionaram-se, gota a gota, e á temepratura de -78°C uma solução de 1,65 g (5,02 mmoles) de N,N-bis(t-butildime tilsilil)hidantoína e 2 ml de tetrahidrofurano. Agitou-se esta solução durante 1 hora à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se depois 1,75 ml (10 mmoles) de tria mida hexametilfosfòrica e agitou-se a mistura durante 10 358 minutos. Adicionou-se depois, gota a gota, uma solução de 2,28 g (4,00 mmoles) de (2S, 4S)-N-aliloxicarbonil-2-iodome-til-4-tritil-tiopirrolidina composto do Exemplo de Referência 21-2 em 3 ml de tetra-hidrofurano. Agitou-se a mistura reaccional durante 2 horas à mesma temperatura. À mistura reaccional adicionaram-se 10 ml de uma solução aquosa satu-ada de cloreto de amónio e 300 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com uma solução aquosa 1N de sulfato de hidrogénio e de potássio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secou-se depois sobre sulfato de sódio anidro. Eliminou-se o dissolvente por destilação sob pressão reduzida e submeteu-se

o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de , TM sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/ace-tato de etilo. Obtiveram-se 1,19 g (rendimetno 45 %) de (2R , 4S)-N-aliloxicarbonil-2-( 1 -t-butildimetilsilil-2,4-dioxo imidazolidin-5-il-metil)-4-tritil-tiopirrolidina. I.V.(KBr)cm"1: 3420, 3250, 1765, 1700, 1400, 1200 RMN(CDC13) £ : 0,27 e 0,35(6H, s), 0,94 e 0,97(9H, s), 1,5(1H, m), 1 ,7(1H, m), 2,25(1H, m) , 2,6-3,0 (3H, m), 4,2(1H, m), 4,3-4,6(3H, m), 5,25 (2H, m), 6,85(1H, m), 7,1-7,7(15H, m) , 8,06 e 8,11(1H, m) 2) 359 -

TrS

A uma solução de 1,10 g (1,68 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 15 ml de acetoni-trilo, adicionou-se uma mistura de 1,5 ml de ácido fluorí-drico a 49 % e 13,5 ml de acetonitrilo. Agitou-se esta solução durante toda a noite à temperatura ambiente. Adicionaram-se à mistura reaccional 300 ml de acetato de etilo. Lavou-se a solução, sequencialmente com água, uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro. Eliminou-se o dissolvente por destilação sob pressão reduzida e submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando , TM gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição metanol/clorofórmio. Obtiveram-se 550 mg (rendimento 61 %) do diastereoisómero A (composto polar) e 220 mg (rendimento 24 %) do diastereoisómero B (composto menos polar) do composto identificado antes. - 36ο _

Diastereoisómero A I.V. (KBr)cnf1; 3550, 3480, 3^20, 1770, 173^ 1680, 1445, 1410 RMN(CDC13) Si 1,2-2,4(4H, m), 2,75(2H, m), 3,05(1H, m) , 3,8( TH, m), l|,10(1H, d, J=8Hz), 4,49 (2H, d, J=6Hz), 5,26(2H, m), 5,9(1H, m), 6,54(1H, s), 7,0-7,7(15H, m), 8,41(ih, s)

Diastereoisómero B I.V. (KBr)cnf1: 3420, 3230, 1775, 1730, 1700, 1445, 1410 rmn(cdci3) S : 1,2-1,9(2H, m), 1 ,95-2,45(2H, m), 2,7(2H, m) , 3,05(1H, m), 3,8-4,05(2H, m), 4,46(2H, d, J= =5Hz), 5,26(2H, m), 5,85(1H, m) , 6,59(1H,s), 7,1-7,6(15H, m), 8,12(1H, s) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 30 (2R,4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)- 361 - ;;2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il-metil)pirrolidina 1)

A temperatura de 60°C submeteram-se a hidrogenaçSo catalítica durante 3 horas 10 g (26,8 mmoles) de 3-[ (2S ,4R)-4-t-butildimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-pirrolidin-2-il]acrilato de etilo em 200 ml de etanol utilizando 500 mg de paládio a 10 % sobre carvSo como catalisador. Deixou-se a mistura reaccional arrefecer e separou-se o catalisador por diltraçâo. Concentrou-se o filtrado sob pres^ sSo reduzida e submeteu-se o resíduo a uma cromatografia

Tm em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçSo 300 ml de acetato de etilo/hexano (1: :10). Obtiveram-se 9,91 g (rendimento 98 %) de 3-[(2R,4R)--4-t-butildimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonilpirrolidin-2--il]propionato de etilo.

RMN(CDClg) S 0,04(6H, s), 0,90(9H, s), 1,28(3H, t, J= 362 = δΗζ) , 1,48(9Η, s), 1,78(2Η, m), 2,00(2Η, m) 2,30(2Η, Μ), 3,38(2Η, m) , 3,96(1Η, m) , 4,14(2Η, q,J=8Hz), 4,32(1Η, m) 2) ΤΓ p?!SO .....'/

COOEt

Boc

Sob atmosfera de azoto e à temperatura de -78°C adicionaram-se, gota a gota, 7,6 ml (16,0 mmoles) de uma solução 2,1M de lítio-diisopropilamida a uma outra solução de 5,0g (13,3 mmoles) do composto obtido na reac- çâo anterior em 250 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura durante 10 minutos. Adicionaram-se depois, gota a gota, 3,46 ml (40 mmoles) de brometo de alilo e agitou-se a mistura durante 30 minutos à mesma temepratura. Interrompeu-se o arrefecimento e agitou-se a mistura durante 30 minutos. Adicionou-se depois uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio e extraiu-se a mistura com acetato de etilo. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se seguidamente. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de - 363 -

, TM sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçSo acetato de etilo/hexano (1:6). Obtiveram-se 6,09 g (rendimento 110 %) de 2-etoxicarbonil-1-[(2R, 4R)-4-t-butildimetilsililoxi-N--t-butoxicarbonilpirrolidin-2-il]-4-penteno. RMN(CDC13) é> : 0,08(6H, s), 0,86( : 9H, s), 1 ,26' (3H, t, J=8Hz) 1,48(9H, s), 1,50- -2,20(3H, m), 2,16-2,74 (2H, m), 3.3M2H, m) , 3, 90( 1H , m), 4,14 (2 H, m), 4,32(1H, m) , 5,04(2H, m), 5,70 (1H, m) 1 3)

COOEt

COOH

Boc A uma mistura de 507 mg (1,22 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior, 2,5 ml de tetracloreto de carbono, 2,5 ml de acetonitrilo, 1,1 g (5,14 mmoles) de periodato de sódio e 3>75 ml de água, adiciona-ram-se 6,25 mg (30 mmoles) de tricloreto de ruténio. Agi- _ 3 64 -tou-se a mistura reaccional durante 2 horas e extraiu-se seguidamente com cloreto de metileno. Secou-se a camada or gânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se.

Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utili-, TM zando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de elui-ção acetato de etilo/hexano (1:1). Obtiveram-se 480 mg (rendiemnto 90 %) do ácido 3-etoxicarbonil-4-[(2R , 4R)-4--t-butildimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonilpirrolidin-2-il]-butírico. RMN(CDC13) ^ : 0,08(6H, s), 0,88(9H, s), 1,28(3H, t, J=8Hz), 1,48(9H, s), 1,78(2H, m), 2,04(2H, m), 2,80 (3H, m), 3,38(2H, m)f 3j90(1H, m), 4,20 (2H, m), 4,36(1H, m)

Boc

H 365

À temperatura ambiente adicionaram--se 475 mg (2,93 mmoles) de carbonil-diimidazol a uma solução de 847 mg (1,95 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 17 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora. Adicionaram-se depois 3»^ml de uma solução aquosa concentrada de amoníaco. Agitou-se a mistura reaccional durante mais 30 minutos e diluiu-se depois com acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou. Dissolveu-se o resíduo em 15 ml de tetra-hidrofurano. Adicionaram-se depois mediante arrefecimento com gelo, 9^mg (2,3 mmoles) de hidreto de sódio a 60 % e agitou-se a mistura durante 20 minutos. Submeteu-se a mistura a uma separação dos líquidos de acordo com a técnica descrita antes e secou--se a camada orgânica e concentrou-se. Submeteu-se o resíduo a uma croamtografia em coluna utilizando gel de sílica TM

Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo acetato de etilo/ /hexano (1:1). Obtiveram-se 576 mg (rendimento 76 %) de (2R, 4R)- 4-t-butildimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-2-(2,5--dioxopirrolidin-3-il-metil)pirrolidina. RMN(CDC13) $ : 0,08(6H, s), 0,90(9H, s), 1,70(2H, m), 2,00(2H, m), 1,48(6H, s), 2,58(1H, m), - 36 6 - 2,90(3Η, m), 3,3δ(2Η, m), H,12(1H, m) , 4,40(1Η, m) 5)

>'sC

O K

PXZ

Mediante arrefecimento com gelo dis solveram-se 570 mg (1,47 mmoles) do composto obtido na reac ção anterior em uma misutra de 11 ml de metanol e 0,32 ml (4,4 mmoles) de cloreto de tionilo. Deixou-se que a tempe ratura da mistura reaccional atingisse de novo os valores da temperatura ambiente e agitou-se durante 30 minutos de pois do que se concentrou sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em 10 ml de clorofórmio. Adicionaram--se depois 0,61 ml (5,86 mmoles) de trietilamina e 470 mg (1,47 mmoles) de 4,6-dimetil-2-(p-nitrobenziloxicarbonil--tio)pirimidina e agitou-se a mistura durante toda anoite. Lavou-se a mistura reaccional com ácido clorídrico 1N depois do que se secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou. Dissolveu-se o resíduo em 10 ml de cloreto - 367 - de metileno. Adicionaram-se depois 0,1^ ml (1,77 mmoles) de cloreto de metanossulfonilo e 0,31 ml (2,2 mmoles) de trietilamina e agitou-se a mistura durante 30 minutos à tem peratura ambiente. Verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e extraiu-se com cloreto de metileno. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se.

Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utili-, TM zando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição acetato de etilo. Obtiveram-se 420 mg (rendiemtno 62 %) de (2R, 4R)-4-metanossulfoniloxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il-metil)pirrolidina. RMN (CDC13> $ : 1 ,80-2,40(4H, m), 2,45-3,30(5H, m), 3,06 (3H, s), 4,00-4,40(2H, m), 5,26(2H, m), 7,54(2H, d, J=8Hz), 8,28(2H, d, J=8Hz) 6)

368 - À temperatura de 70°C agitou-se durante

1 hora uma mistura constituída por 410 mg (0,90 mmole) do com posto obtido na reacção anterior, 4,1 ml de N,N-dimetilforma-mida e 308 mg (2,70 mmoles) de tioacetato de potássio. Verteu -se a mistura reaccional sobre água e extraiu-se com acetato de etilo. Secou-se a camada orgânica e concentrou-se. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando , TM gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo acetato de etilo/hexano (1:1). Obtiveram-se 251 mg (rendimento 64 %) de (2R,4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--2-(2,5-dioxopirrolidin-3-il-metil)pirrolidina. RMN (CDClj) £ : 1 ,70(2H, m), 2,16(2H, m), 2,38(3H, s), 2,40- -3,40(5H, M), 3,80-4,30(2H, m), 5,22(2H, m) , 7,56 (2H, d, J=8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 31 (2S,4S)-4-acetil-tio-N-aliloxicarbonil-2-(1-aliloxicarbonil--5-oxopiperazin-2-il /pirrolidina

TBDMSO

Boc

OH 1) - 36 9 -

Mediante agitação e arrefecimento com gelo adicionaram-se 1,27 ml (9,55 mmoles) de trietilamina a uma solução de 19,1 g (57,87 mmoles) de (2S, 4R)-4-t-butil-dime-tilsililoxi-N-t-butoxicarobnilprolinal em 95 ml de nitrome-tano. Conservou-se a solução em repouso durante 15 horas à temperatura ambiente. Separou-se o dissolvente por destilação sob pressão reduzida e submeteu-se o resíduo a uma cromatogra tm fia em coluna utiliznado gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (9:1). Obtiveram-se 14,81 g (rendimento 65,5 %) de (2S ,4R)-4-t-butil-dimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-2-(1-hidroxi-2-nitroetil)-pirrolidina, sob a forma de um óleo. I.V. (KBr)cnf1: 3420, 1675-1700, 1560, 1415, 1255, 1165, 840, 780 RMN(CDC13) 5 : 0,07(6H, s), 0,87(9H, s), 1,49(9H, s), 1,7-2,1 (2H, m), 3,2-3,6(2H, m), 4,12-4,56(5H, m) TBDMSO,

H

Boc 2) - 370 - À temperatura de -50°C adicionaram-se, gota a gota, 3,58 ml (49,33 mmoles) de cloreto de tionilo a uma solução de 14,8 g (37,89 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 150 ml de cloreto de metileno. Agitou-se - o a mistura reaccional durante 5 minutos a temperatura de -50 C e adicionaram-se depois, gota a gota, 16,5 ml (118,39 mmoles) de trietilamina. Retirou-se o banho de arrefecimento e agitou-se a mistura reaccional durante 3 horas à temperatura ambiente, depois do que se verteu sobre 100 ml de água gelada e extraiu com cloreto de metielno. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa a 10 $ de carbonato de hidro génio e sódio depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou. Submeteu-se o resíduo a uma cromato-grafia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo hexano/acetato de etilo (95:5)· Obtiveram-se 11,48 g (rendimento 81,3 %) de (2S,4R)-4-t--butildimetilsililoxi-N-t-butoxicarbonil-2-(2-nitrovinil)pir-rolidina sob a forma de um sólido. I.V. (KBr)cnf1) : 1685, 1520, 1400, 1350, 1250, 1160, 835, 770 RMN(CDC13) £ : 0,09(6H, s), 0,8θ(9H, s), 1,46(9H, largo, s), 1,80-2,28(2H, m), 3,40-3,71(2H, m), 4,36-4,76 (2H, m), 7,02-7,24(2H, m) 3) 371T?u::?r

I!

Boc HN COOLt

À temperatura ambiente adicionou-se 0,74 ml (5,58 mmoles) de trietilamina a uma mistura constituída por 2,0 g (5,37 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, 40 ml de cloreto de metileno, 10 ml de tetrahidrofurano e 750 ml (5,37 mmoles) de cloridrato do éster etílico da gli-cina, e agitou-se a mistura durante 30 minutos depois do que se verteu sobre uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e extraiu com cloreto de metileno. Secou--se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em

/ TM coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo acetato de etilo/hexano (1:3)· Obtiveram-se 2,32 g (rendimento 91 %) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butil-dimetilsililoxi-2-[1-(etoxicarbonilmetil)amino-2-nitroetil ]-pirrolidina. RMiKCDClg) è» : 0,08(6h, s), Ο,88(9H, s), 1,28(3H, t, J=6Hz), 1,50(9H, largo, s ), 1,98(2H, m), 3,24(1H, m) , 3,50(2H, m), 3,80(1H, m), 4,08(1H, m) , 4,20 (2H, q, J = 6Hz), 4,40(3H, m) 4)

TBDMSO

Boc

 temperatura ambiente tratou-se durante 1 hora com 300 mg de paládio a 10 % sobre carvão, uma mistura de 1,26 g (2,65 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, 1,67 g (26,6 mmoles) de formato de amónio e 25 ml de metanol, e depois durante 1 hora à temperatura de 60°C. Filtrou-se a mistura reaccional para separar o paládio sobre carvão e concentrou-se . Dissolveu-se o resíduo em cloreto de metileno e lavou-se com água. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se obtendo-se uma substância oleosa contendo o composto (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t- - 373 - -butildimetilsiloxi-2-( 5-oxopiperazin-2-ii)pir,rolidina RMN(CDC13)<^ : 0,06 (6H , s), 0,86(9H, s), 1,48(9H) largo, s), 1,96(2H, m), 3,22(3H, s), 3,52(3H, m) , 4,10 (1H, m), 4,32(1H, m), 4,38(iH, m)

TBDMSO

H

Mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se 0,33 ml (3 >18 mmoles) de clorocarbonato de alilo e 0,55 ml (3»98 mmoles) de trietilamina a uma solução do composto obtido na reacção anterior em 25 ml de cloreto de meti-leno e agitou-se a mistura durante 1 hora. Verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio depois do que se extraiu com cloreto de meti leno, secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou. 3 74

Submeteu-se ο resíduo a uma cromatografia em coluna utilizan do gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição acetato de etilo/hexano (3:1). Obtiveram-se 710 mg [rendimento (duas fases) 59 %] do diastereoisómero A (composto menos polar) da (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildime-tilsiloxi-2-(1-aliloxicarbonil-5-oxo-piperazin-2-il)pirro-lidina e 290 mg [rendimento (duas fases) 24 %] do diastereo-jsómero B (um composto muito polar).

Diastereoisómero A RMN(CDC13) S : 0,06(6H, 1,86(2H, 4,38(1H, (2H, m), s), 0,86(9H, s), m) , 3,20-3,90(5H, m), 4,48(2H, m)., 5 * 90(1H, m) 1,46(9H, largo, s), m), 4,10(1H, m), 4,64(2H, m), 5,30

Diastereoisómero B RMN(CDClg) £ : 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1,44(9H, largo, s), 1,82(1H, m), 2,00(1H, m), 3,10-3,8θ(4H, m), 4,00-4,50(5H, m), 4,60(2H, m), 5,30(2H, m), 5,90(1H, m) 6) ο 7 5 -

Mediante arrefecimento com gelo adiciona ram-se U,5 ml de cloreto de metileno e M,5 ml de ácido tri-fluoroacético a 993 mg (2,05 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior (diastereoisómero A) e deixou-se que a tempe ratura da mistura reaccional atingisse novamente o valor da temperatura ambiente depois do que se agitou durante 10 minu tos e concentrou sob pressão reduzida. Adicionaram-se depois 18 ml de cloreto de metileno e 1,51 ml (10,3 mmoles) de tri-etilamina e adicionou-se, gota a gota, e mediante arrefecimento com gelo, 0,69 ml (6,16 mmoles) de clorocarbonato de alilo em 2,8 ml de cloreto de metileno. Agitou-se a mistura durante 1 hora depois do que se verteu sobre uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e extraiu com cloreto de metileno. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel de sí- ΊΡμ lica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo acetato de - 376 - etilo. Obtiveram-se 698 mg (rendimento 73 %) de (2S, 4R)--N-aliloxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxi-2-(1-aliloxicar-bonil-5-oxopiperazin-2-il)pirrolidina, diastereoisómero A.

Utilizando 726 mg (1,50 mmoles) do diastereoisómero B obtido na reacção anterior, realizou-se a mesma técnica de preparação obtendo-se 451mg (rendimento 64 %) de (2S,4R)-N-aliloxicarbonil-4-t-butildimetilsiloxi--2-(1-aliloxicarbonil-5-oxopiperazin-2-il)pirrolidina, diastereoisómero B.

Diastereoisómero A RMN(CDC13) £: s), 1,86(2H, m), 3,50 4,16(1Η, m), 4,44(3H, m), m), 5,32(4H, m), 0,04(6H, s), 0,86(9H, (4H, m), 3,80(1H, m), 4,58(2H, m), 4,66(2H, 5,96(2H, m)

Diastereoisómero B RMN(CDC13) s : 0,04(6H, s), 0,86(9H, s), 1,86(1H, m), 2,02 (1H, m), 3,20-3,8θ(4H, m), 4,20(3H, m), 4,44 (2H, m), 4,6θ(4H, m), 5,30(4H, m), 5,92(2H, m) 377 - 7)

X COO li

Mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se 2,28 ml (2,28 mmoles) de uma solução 1M de fluoreto de tetrabutilamónio a uma outra solução de 698 mg (1,49 mmo-mes) do composto obtido na reacção anterior (diastereoisómero A) em 7,0 ml de tetra-hidrofurano, e agitou-se a mistura durante 2 horas à temperatura ambiente. Diluiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo depois do que se lavou com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se. Dissolveu-se o resíduo em 14 ml de cloreto de metileno e mediante arrefecimento com gelo adicionaram-se 0,88 ml (5,98 m-moles) de trietilamina e 0,24 ml (2,99 mmoles) de cloreto de metanossulfonilo. Agitou-se a mistura durante 40 minutos. Verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio depois do que se extraiu com cloreto de metileno, secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em 378 - coluna utilizando gel de sílica Wakogel ™ c-300 e como agente de eluição acetato de etilo. Obtiveram-se 487 mg (rendimento 75 %) de (2S,4R)-N-aliloxicarbonil-4-metanossulfoniloxi- -2-(1-aliloxicarbonil-5-oxopiperazin-2-il)-pirrolidina, dias-tereoisómero A.

Utilizando 451 mg (0,96 mmole) do dias-tereoisómero B obtido na reacção anterior, realizou-se a mesma técnica de preparação, obtendo-se 285 mg (rendimento 68 %) de (2S, 4R)-N-aliloxicarbonil-4-metanossulfoniloxi--2-(1-1-aliloxicarbonil-5-oxopiperazin-2-il)-pirrolidina, diastereoisómero B.

Diastereoisómero A RMN(CDC13) £ ' m), 3,58 4,50(2H, m), m) 2,24(2H, m), 3,08(3H, s), 3,56(2H, (1H, m), 3,72(2H, m), 4,18(2H, m) , 4,64(4H , m), 5,36(4H, m), 5,86(2H,

Diastereoisómero B RMN(CDC13) £ : 2,18(1H, m), 2,48(1H, m), 3,04(3H, s), 3,20- -3,80(4H, m), 3,90-4,30(4H, m) , 4,62(5H, m), 5,30(4H, m), 5,92(2H, m) 8) 37α -

Durante 90 minutos agitou-se à temperatura de 70°C uma mistura constituída por 487 mg (1,12 mmoles) do diastereoisómero A obtido na reacçfio anterior, 386 mg (3,38 mmoles) de tioacetato de potássio e 9,7 ml de N,N- -dimetilformamida. Deixou-se arrefecer a mistura depois do que se diluiu com acetato deetilo, lavou com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou. Submeteu-se o resíduo a uma

, TM cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo acetato de etilo. Obtiveram--se 508 mg (rendimento 109 %) de (2S, 4S)-N-aliloxicar-bonil-4-acetil-tio-2-(1-aliloxicarbonil-5-oxopiperazin-2--il)pirrolidina, diastereoisómero A.

Utilizando o diastereoisómero B obtido na reacçâo anterior realizou-se a mesma técnica de preparação descrita antes, obtendo-se 200 mg (rendimento 73 %) ?8θ de (2S , 4S )-N-aliloxicarbonil-4-acetil-tio-2-(1 -aliloxi-carbonil-5-oxopiperazin-2-il)pirrolidina, diastereoisómero B.

Diastereoisómero A RMN(CDC13) $ : 1,78 ( 1H, m), 2,36(3H, s), 2,44(1H, m) , 3,10 (1H, m), 3,52(2H, m), 3,82(2H, m) , 4,36(4H, m) , 4,66(4H, m), 5,34(4H, m), 5,98(2H, m)

Diastereoisómero B RMN(CDC13) $: 1,80(1H, m), 2,64(1H, m) , 2,38(3H, s), 3,30 (1H, m), 3,68(2H, m), 3,9ô(1H, m), 4,10-4,60 (5H, m), 4,62(4H, m), 5,28(4H, m) , 5,98(2H, m) EXEMPLO DE REFERfiNCIA 32 (2S , 4S)-4mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N--(p-nitrobenziloxicarbonil)piperazin-4-il]-pirrolidina 1) ο $

s 'X

Boc

COOLt 3 8ι -

Sob atmosfera de azoto e à temperatura de -78°C adicionou-se, gota a gota, e durante mais de 30 minutos, uma mistura 3,18 ml (25,0 mmoles) de cloreto de trime-tilsililo e 2,0 g (5,0 mmoles) de éster etílico do ácido (E)-3-[(2S,MR)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsililoxipir-rolidin-2-il]acrílico em 30 ml de tetra-hidrofurano. Agi-tou-se a mistura reaccional durante 2 horas à mesma temperatura e interrompeu-se depois com 15 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio e extraiu-se com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sequencialmente, com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma

TM cromatografia em coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluiçâo hexano/acetato de etilo (15:1). Obtiveram-e 1,7 g (rendimento 79,^ %) de éster etílico do ácido 3-[(2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t- -butildimetilsiloxipirrolidin-2-il]-5-pentenóico. RMN(CDC13) 8* 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,2M3H, t, J=8Hz), 1,48(9H, s), 1,66-1,97(2H, m), 2,12-2,59(2H, m), 3,10-3,30(2H, ro), 3,33-3,70( 1H, m) , 3,93.11,24 (3H, m), 4,30(1H, m), 5,08(1H, d, J=10Hz), 5,11 (1H, d, J=18Hz), 5,64(1H, m), 2)

TBDMSO

Sob atmosfera de azoto e à temperatura de 0°C adicionaram-se 1,7 g (3,98 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior em 10 ml de tetra-hidrofurano a uma solução de 113 mg (2,98 mmoles) de hidreto de alumínio e lítio, e agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora à mesma tem peratura. Interrompeu-se a reacçâo com 5 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio e extraiu-se com 100ml de acetato deetilo. Lavou-se, sucessivamente, a camada orgâ nica com uma solução aquosa 1N de hidróxido de sódio, água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou--se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo obtido a uma cromatografia em , tm coluna utilizando gel de sílica Wakogel C-?0C e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (5.1). Obtiveram-se 1,09g (rendimento 59,9 %) de 3[(2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-bu-tildimetilsililoxipirrolidin-2-il]pent-4-en-1-ol. RMN(CDC13) «5 : 0,04(6H, s), -1 ,95(MH, m), 3,32-3,77(3H, 5;12(2H, m), 0,86(3H, s), 1,46(9H, s), 1,50- 2,73(1H, m), 3,12(1H, dd, J=12,4Hz), m), 3,88-4,20(1H, m), 4,32(1H, m), 5,64(1H, m)

Sob atmosfera de azoto adicionaram-se 1,0 g (3,81 mmoles) de trifenilfosfina e 0,63 g (4,28 mmoles) - 384 de ftalimida a uma solução agitada de 1,09 g (2,83 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 30 ml de tetra- -hidrofurano e depois mediante arrefecimento com gelo 0,58 ml (3,68 mmoles) de azodicarboxilato de dietilo. Agitou-se a mistura reaccional durante 2 horas à mesma temperatura depois do que se extraiu com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu- -se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando gel

TM de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/ /acetato de etilo (6:1). Obtiveram-se 1,31 g (rendimento 90 %) de 3-[ (2S ,4R )-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsilo-xipirrolidin-2-il]-5-ftalimido-1-penteno. RMN(CDC13) b : 0,03(6H, s), 0,84(9H, s), 1,42(9H, s), 1,50- -1 ,93(4H, m), 2,73(1H, m), 3,20(1H, dd, J = = 12,4Hz), 3,28-3,80(3H, m), 3,84-4,17(1H , m) , 5,62(1H, m), 4,28(1H, m), 5,04-5,30(2H, m), 7,71(2H, m), 7,84(2H, m) 4) 3¾ 5 - ρ

À temperatura ambiente adicionou-se 0,37 ml (7,63 mmoles) de monohidrato de hidrazina a uma solu ção de 1,31 g (2,55 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 15 ml de etanol. Agitou-se a mistura reaccio-nal durante toda a noite à mesma temperatura depois do que se concentrou sob pressão reduzida. Tratou-se o resíduo com água e acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica, sucessivamente , com, uma solução aquosa 2N de hidroxido de amonio,agua e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio depois do que se secou sobre sulfato de só dio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Dissolveu--se o resíduo em 30 ml de tetra-hidrofurano e adicionaram-se depois 6^)0 mg (2,93 mmoles) de dicarbonato de di-t-butilo à temperatura ambiente. Após agitação durante 1 hora concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e sub^

meteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando , TM gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição hexano/acetato de etilo (5:1). Obtiveram-se 983 mg (rendimento 79,3 %) de 3-[ (2S ,MR )-N-t-butoxicarbonil-M-t-butildi. metilsiloxipirrolidin-2-il]-5-t-butoxicarbonilamino-1-pente- 386 - no . rmn(cdci3) é 0,04(6H, s), 0,86(9H, s), 1,42(9H, s), 1,46 (9H, s), 1,82(2H, m), 2,48-2,82(1H, m), 3,00 ΠΗ, m), 3,22(2H, m), 3,37-3,73 ( 1H, m), 4,01 OH, m), 4,30( 1H, m) , 4,42-4 ,75( 1H, m) , 5,02-5,22(2H, m), 5,58(1H, m) 5)

TBDMSO

Sob atmosfera de azoto e á temperatura ambiente adicionaram-se 545 mg (2,23 mmoles) de uma solução de 9-borabiciclo[3.3·1]nonano em 10 ml de tetra-hidrofurano a uma solução de 980 mg (2,02 mmoles) do composto obtido na reacção anterior em 5 ml de tetra-hidrofurano e agitou-se a mistura reaccional durante 2,5 horas à mesma temperatura. Adicioanram-se 6 ml de água e 1,23 g (7,99 mmoles) de tetra--hidrato de perborato de sódio. Agitou-se a mistura resultan te energicamente durante toda a noite à temperatura ambiente 3?7 e extraiu-se depois com 50 ml de acetato de etilo. Lavou-se a camada orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sodio depois do que se secou sobre sulfato de sódio anidro e concentrou sob pressão reduzida. Submeteu- -se o resíduo a uma cromatografia em coluna utilizando

TM gel de sílica Wakogel C-300 e como agente de eluição he-xano/acetato de etilo (2:1). Obtiveram-se 753 mg (rendimento 71,5 %) de 3-[(2S ,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetil-siloxipirrolidin-2-il[-5-t-butoxicarbonilamino-1-propanol. RMN(CDC13) à : 0,06(6H, s), 0,87(9H, s), 1,44(9H, s), 2,30 (1H, m), 3,00-3, 40(4H, m), 3,54(1H, m), 3,74(2H, m), 4,08(1H, m), 4,30(1H, m) 6)

TBDMSO

-Boc Boc - 388 -

Utilizando 753 mg (1,50 ramoles) do composto obtido na reacção anterior, 370 mg (3,30 mmoles) de t-butóxido de potássio e 315 mg (1,65 mmoles) de cloreto de p-toluenossulfonilo , realizou-se a técnica descrita no Exem pio de Referência 13-4, obtendo-se 494 mg (rendimento 68,0 %) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsi-loxi-2-(N-t-butoxicarbonilpiperidin-4-il)pirrolidina. RMN(CDC13) ^ : 0,05(6H, s), 0,87(9H, s), 1,00-1,28(2Hf m) , 1,45(18H, s), 1,78(2H, m), 2,64(2H, m) , 2,64 (2H, m), 3 >22(1H, dd, J=12,4Hz), 3,38-3,66 (1H, m), 3,96(1H, m), 4,14(2H, m), 4,29(1H, m) 7)

HO

H

PNZ

Utilizando 494 mg (1,02 mmoles) do composto obtido na reacção anterior e 684 mg (2,14 mmoles) de 389 - 4,6-dimetil-2-(p-nitrobenziloxicarbonil-tio)pirimidina , realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-3, obtendo-se 485 mg (rendimento 89,8 %) de (2S,4R)-4-hidroxi--N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-piperidin-4-ii]pirrolidina. RMN(CDC13) S : 1 ,05-1 ,3M2H, m), 1 ,42-1,70(2H, m), 1,94(2H, m), 2,13-2 ,46(2H, m), 2,58-2,94(2H, m), 3,38(1H, m), 3,76(1H,m), 4,03-4,36(3H, m), 4,45(1H, m), 5,12-5,37(4H, m), 7,54(4H, d, J=8Hz), 8,23(2H, d, J=8Hz), 8,24(2H, d, J=8Hz) 8)

MsO

-ΓΝΖ

Utilizando'485 mg (0,92 mmole) do composto obtido na reacção anterior e 82 μΐ (1,06 mmoles) de cloreto de metanossulfonilo realizou“se a técnica descrita 3 90 no Exemplo de Referência 5-4, obtendo-se 556 mg (rendimento 99,9 %) de (2S, 4R )-4-metanossulfoniloxi-N-(p-nitrobenzilo-xicarbonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)piperidin-4-il]-pirrolidina. rmn(cdci3) S ' 1 ,04-1 ,32(2H, m), 1 ,44-1 , 75(2H , m), 1,93-2,38 (3H, m), 2,78(2H, m), 3,05(3H, s)3,48(1H, m) , 4,04-4,35(4H, m), 5,12-5,38(5H , m), 7,53 (2H , d, J = 8Hz), 7,55(2H , d, J = 8Hz), 8,25(2H, d, J = 8Hz) , 8,26(2H, d, J = 8Hz) 9)

Utilizando 556 mg (0,92 mmole9 do composto obtido na reacçáo anterior, 210 mg (1,84 mmoles) de tioacetato de potássio e 155 mg (1,03 mmoles) de iodeto -391 - de sódio realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 13-9, obtendo-se 476 mg (rendimento 88,5 %) de (2S, 4S)-4-acetil-tio-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitro-benziloxicarbonil)piperidin-4-il]pirrolidina. RMN(CDC13) & : 1,07-1,35(2H, m), 1,45-1,84(3H , m), 2,10-2,46 (5H, m), 2,76(2H, m), 3,00(1H, t, J=10Hz), 3,80(1H, m), 3,98(1H, m) , 4,26(3H, m) , 5,23(4H, s), 7,52(2H, d, J = 8Hz), 7,54(2H, d, J = 8Hz) , 8,23(2H, d, J = 8Hz), 8,24(2H, d, J = 8Hz) 10)

Utilizando o composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 1-9, obtendo-se 433 mg (rendimento 98 %) do composto identificado antes. - 392 - EXEMPLO DE REFERfiNCIA 33

(2S,4S)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--pirrolidin-4-il]-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)--pirrolidina , diastereoisómero III 1) T13L»iS0

Boc

Utilizando 10,0 g (26,0 mmoles) de (2S, HR^N-t-butoxicarbonil-il-t-butildimetilsiloxi^-^-pir-rolidon-il-il )pirrolidina, diastereoisómero B (composto do Exemplo de Referência 12) realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 6-2, obtendo-se 12,37 (rendimento 98,1 %) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsi-loxi-2-(N-t-butoxicarboni1-2-pirrolidon-4-il)pirrolidina, diastereoisómero B. RMN(CDC13) ^ : 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1,H6(9H, s), 1,52 (9H,s), (1 ,66(1H, m), 1,96(1H, m), 2,27 - 393 (1Η , dd, J=18,10Hz) , 2,50(1H, dd, J=18,8Hz), 3,24(1H, dd, J=13,4hz), 3,62(1H , dd, J=13,8Hz), 3,82(1H, dd, J=10,8Hz), 4,09(1H, m), 4,32 (1H, m)

Utilizando 12,3 g (25,4 mmoles) do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 13-2, obtendo-se 10,39g (rendimento 79,8 %) de 5-[ (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4--t-butildimetilsiloxipirrolidin-2-il]-6-t-butoxicarbonil-amino-1-hexen-3-ona, diastereoisómero B. RMN(CDC13) S : 0,04(6H, s), 0,85(9H, s), 1,42(9H, s), 1,47 (9H, s), 1,68(1H, m), 1,92(1H, m), 2,24- -2,57(2H, m), 3,16(1H, dd, J=12,4Hz), 3,23- -3,68(2H, m), 4,03(1H, m), 4,33(1H, m), 3) 394 5,82(1Η, largo, d, J = 10Hz), 6,20(1H, largo, d, J=l8Hz), 6,38(1H, dd, J=18,10Hz) TBu:-;so

Utilizando 10,3 g (20,1 mmoles) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 13-3, obtendo-se 2,84 g (rendimento 27,5 %) de 5-[(2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-butildimetilsiloxipirrolidin-2-il]-6-t-butoxicarbonilamino--1-hexen-3-ol. RMN(CDC13) $ : 0,04(6H, s), 0,86(9H, s), 1,44(9H, s), 1,46 (9H, s), 1,73(1H, m), 1,95(1H, m) , 2,95 (1H, m), 3,18(1H, dd , J=12,4Hz), 3,56(2H, m), 3,94(1H, m), 4,30(1H, m), 5,10(1H, d, J=10Hz), 5,30(1H, d, J=18Hz), 5,86(1H, m) 4) 395

Boc

Utilizando 2,84 g (5,52 mmoles) do composto obtido na reacção anterior,realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 13-4, obtendo-se 1,04 g (rendimento 37,9 %) de (2S,4R)-N-t-butoxicarbonil-4-t-bu-tildimetilsiloxi-2-(N-t-butoxicarboni1-2-vinil-pirrolidin--4-il)pirrolidina. RMN(CDC13) £ : 0,05(6H, s), 0,86(9H, s), 1,42(9H, s), 1,46 (9H, s), 1 ,66-2,34(4H, m), 3,02-3,34(2H, m) , 3,30-3,84(2H, m), 3,86-4,28(2H, m), 4,34 (1H, m), 5,08(2H, m), 5,76(1H, m) . 5) - 396 -

:οοη

Utilizando 1,04 g (2,1 mmoles) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 13-5, obtendo-se 500 mg (rendimento 46,4$ ) de (2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-t-butil-dimetilsiloxi-2-(N-t-butoxicarbonil-2-carboxipirrolidin-4--il)pirrolidina. RMN(CDCl^) S : 0,06(6H, s), 0,86(9H, s), 1 ,46(18H, s), 1,68- -2,50(5H, m), 3,26(2H, m), 3,38-3,8θ(2H, m), 3,90-4,40(3H, m) 6)-39 7-

TLLi-.SO / /

Boc

Utilizou-se 500 mg (0,97 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 9-3, obtendo-se 388 mg (rendimento 77,7 %) de (2S, 4R)-N-t-butoxicarbonil-4-butil-dimetilsiloxi-2-(N-t-butoxicarbonil-2-carbamoilpirrolidin--4-il)pirrolidina. RMN(CDC13) : 0,02(6H, s), 0,84(9H, s), 1,42(18H, s), 1,64- -2,42(5H, m), 3,25(2H, m), 3,36-3,8θ(2H, m), 3,88-4,35(3H, m) 7) - 3 98 -

Utilizando 388 mg (0,76 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-3» obtendo-se 360 mg (rendimento 85,4 %) de (2S, 4R)-2-[2-carbamoil-N-(p-nitrobenzi-loxicarbonil)pirrolidin-4-il]-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)pirrolidina. RMN(CDC13) £ : 1 ,72-2,50(5H, m), 3,22-3,55(2H, m), 3,62-3,92 (2H , m), 4,04-4,35(2H, m), 4,46(1H, m) , 5,24 (4H, m), 7,52(4H, m), 8,20(4H, m) 8) 39 9 -

ΡΝΖ

Utilizando-se 360 mg (0,65 mmole) do composto obtido na reacçSo anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 5-4, obtendo-se 229 mg (rendimento 55,8 %) de (2S,4R)-2-[2-carbamoil-N-(p--nitrobenziloxicarobnil)pirrolidin-4-il]-4-metanossulfoni-loxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina. RMN(CDC13) 6 : 1,72-2,64(5H, m), 3,07(3H, s), 3,26-3,65 (2H, m), 3,84(1H, m), 4,08-4,36(3H, m) , 5,26(5H, m), 7,52(4H, m), 8,18(4H, m) 9) uoo

Utilizando 229 mg (0,36 mmole) do composto obtido na reacção anterior, realizou-se a técnica descrita no Exemplo de Referência 13-9, obtendo-se 191 mg (ren dimento 86,5 %) de (2S,4S)-4-acetil-tio-2-[2-carbamoil-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)pirrolidin-4-il]-N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)pirrolidina. RMNCCDCl^) S í 1,58-1,88(2H, m), 2,28(3H,s), 2,48(3H, m) , 3,10(1H, m), 3,38(1H, m), 3,78(2H, m), 4,00 (1H, m), 4,09(2H, m), 5,15(4H, largo, s), 7,46(4H, m), 8,10(4H, largo, d, J=8Hz) 10) - ϋοΐ -

Utilizando 191 mg (0,31 mmole) do composto obtido na reacçâo anterior, realizou-se a técnica des crita no Exemplo de Referência 1-9, obtendo-se 175 mg (rendimento 98,3 % ) do composto identificado antes. 402 EXEMPLO 45

Diastereoisómeros A e B do ácido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2- - [N-(carbamoilmetil)-pirrolidin-3-il]-pirrolidin-4-iltio]~ — 6—[(R) — 1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxílico 1)

HO H T

C00PNB PN2

0 processo utilizado no Exemplo 1-1) foi realizado utilizando-se 570 mg (0,96 mmole) de (1R,5S ,6S)-2--difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen -2-2m-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 540 mg (0,97 mmole) de trifluorometanossulfonato de (2S,4S)-2-[N-(carbamoilme-til )-pirrolidin-3-il]-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil) -pirrolidina para se obterem 197 mg, rendimento 27,3 de (1R ,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[N-(carbamoilmetil)-pirrolidin-3-il]--N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidin-4-iltio]-6-[(R)-1--hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p--nitrobenzilo. IV (KBr) cm 1 : 1770, 1700, 1520, 1350 - 403 ΓΊΝ (CDC13) é> : 1,28(3H, t, J=7Hz), 1,35 (3H, t, J=6Hz), 3,61 (1H, m), 4,04-4,35 (4H, m), 5,10-5,3¾ (3H, m) , 5,53 (1H, d, J=14Hz), 7,52 (2H, d, J = 8Hz) , 7,66 (2H, d, J = 8Hz), 8,22 (4H, m)

0 processo utilizado no Exemplo 1-2) foi realizado partindo-se do composto obtido através da reac-çâo anterior, 195 mg (126 mmoles) para se obter o diaste-reoisómero B, na quantidade de 27 mg cada um e ambos com ren dimento de 23,8 % do composto identificado anteriormente.

Diastereómero A IV (KBr)cra ^ : 1760, 1670, 1590, 1390 RMN (D20) / : J=6Hz), 1,45- 1 ,20 (3H, t, J=7Hz), 1,29 (3H, t, 404 -1,78 (2Η, m), 2,15 (1H, m), 2,43-2,64 ( 3H, m) , 2,84 (2H, m), 3,02 (1H, m), 3,20 (1H, dd, J= = 12,4Hz), 3,30-3,54 (6H, m), 3,92 (1H, m), 4,23 (2H, m) HPLC (as mesmas condições como no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 3,28 min.

Diastereómero B IV (KBr)cm-1 : 1760, 1670, 1590, 1390 RMN (D20) 1,22 (3H, t, J=7Hz), 1,30 (3H, t, J=6Hz), 1,66 (2H, m), 2,17 (1H, m), 2,52-2,80 (3H, m), 2,87 (2H, t, J=7Hz), 3,03 (1H, m), 3,22-3,64 (7H, m) , 3,94 (1H, m), 4,24 (2H, m) HPLC (as mesmas condições que no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 6,16 min. EXEMPLO 46

Diastereoisómero A do ácido (1R,5S,6S)-6-[(R).1-hidroxietil--1-metil-2-[(2S T4S)-2-(pirrolidin-2-il)-pirrolidin-4-iltio]--2-carbapen-2-em-3-carboxílico 405 -

D

405 - HO

0 processo descrito no Exemplo 39-1) foi aplicado partindo-se do diastereoisómero A (186 mg, 0,487 mmole, o composto de referência do Exemplo 3*0, (2S,4S)- -4-acetiltio-N-aliloxicarbonil-2-(N-aliloxicarbonilpirrolidin- -2-il)-pirrolidina, para se obter o diastereoisómero A de (2S, 4S),aliloxicarbonil-2-(N-aliloxicarbonilpirrolidin-2-il)-4- -mercaptopirrolidina. 0 processo como descrito no Exemplo 1-1) foi realizado utilizando-se o tiol obtido na reacçSo citada anteriormente e 243 mg (0,487 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxi- fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3- -carboxilato de alilo para se obter (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N- -aliloxicarbonil-2-(N-aliloxicarbonilpirrolidin-2-il)-4-il- tio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxi- lato de alilo, diastereómero A (160 mg, rendimento 55,7 $). IV(KBr)cnf1: 1780, 1700, 1550, 1410 406 H ivlw (CDClg) d: 1,25 (3H, d, J=7Hz), 1,34 (3H, d, J=6Hz), 1,5- -2,1(5H, m), 2,3-2,9(2H, m), 3,07(1H, t, J=11Hz), 3.2- 3,8(6H, m), 4,1-4,4(4H, m) , 4,5-5,0(6H, m), 5.2- 5,6(6H, ra) 5,8-6,2(3H, m)

O processo utilizado no Exemplo 9-2) foi realizado utilizando-se o composto obtido pela reacção citada anteriormente, diastereómero A, 157 mg, 0,266mnole) para se obter o composto identificado supra, o diastereómero A na quantidade de 28,5 g, com o rendimento de 28 %. IV(KBr)cm_1: 1750, 1590, 1390 RMN(D20) S : 1,16(3H, d, J=7Hz), 1,24(3H, d, J=6Hz), 1,42(1H, m), 1,74(1H, m), 2,00(2H, m), 2,24(1H, m) , 2,53(1H, 407

(1Η, m), 4,1-4,3(2Η, m) HPLC (as mesmas condições como no Exemplo 1)

Tempo de retenção 2,8 min. EXEMPLO 47

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S , 4S)--2-(pirrolidin-2-il)pirrolidin-4-iltio]-1-carbapen-2-em-3--carboxílico, diastereómero B

Alloc 1)

Alloc 0 processo descrito no Exemplo 39-1 foi realizado partindo-se de 133 mg, 0,348 mmoles, do composto de referência do Exemplo 5, (2S,4S)-4-acetiltio-N-aliloxicarbo-nil-2-(N-aliloxicarbonilpirrolidin-2-il)-pirrolidina, para se obter (2S,4S)-N-aliloxicarboni1-2-( N-aliloxicarbonilpirroli-din-2-il)-4-mercaptopirrolidina, diastereómero B. 408 0 processo como descrito no Exemplo 1--1) foi realizado utilizando-se o tiol obtido na reacçSo citada anteriormente e 174 mg (0,348 mmole) de (1R,5S,6S)-2--difenoxifosforiloxi-6-[ (R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carba-pen-2-em-3-carboxilato de alilo para se obterem 109 mg, rendimento 53,1 %, de (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N-aliloxicarbonil--2-(N-aliloxicarbonilpirrolidin-2-il)-pirrolidin-4-iltio]--6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de alilo, diastereómero B. IV(KBr)cm-1: 1780, 1700, 1550, 1410 RMN(CDC13) $ : 1,26(3H,d,J=7Hz),1,35(3H,d,J=6Hz),1,65(2H,m)1,93 (3H,m),2,3-2,7(2H,m),3,1-3,8(6H,m),4,0-4,5(4H,m) , 4,5-5,0(6H,m),5,1-5,6(6H,m),5,8-6,1(3H,m)

409 - O processo utilizado no Exemplo 9-2) foi realizado utilizando-se o composto obtido pela reacção citada anteriormente, o diastereómero B, 103 mg, 0,175 mmole) para se obter o composto identificado anteriormente, o diastereómero B, na quantidade de 10,0 mg, com o rendimento de 15 %. IV(KBr)cm”1 : 1750, 1590, 1390 HPLC(as mesmas condiçOes como no Exemplo 1)

Tempo de retenção: 3»4 min.

EXEMPLO UB

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(5-oxopiperazin-3-il)pjrroli-din-4-iltio]-6-[(R)-l-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em--3-carboxilico

410 O processo como descrito no Exemplo 39-1) foi realizado utilizando-se 168 mg, 0,44 mmole, de (2S, 4S)-4-acetiltio-N-aliloxicarbonil-2-(1-aliloxicarbonil-5-oxo piperazin-3-il)-pirrolidina, para se obter (2S,4S)-N-aliloxi carboni1-2-(1-aliloxicarbonil-5-oxopiperazin-3-il)-4-mercap-topirrolidina, diastereómero B. 0 processo como descrito no Exemplo 9-1) foi realizado utilizando-se tiol obtido na reacçâo descrita anteriormente e 200 mg (0,40 mmole) de (1R,5S,6S)-2-difenoxi fosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de alilo para se obter (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-N--aliloxicarboni1-2-(1-aliloxicarbonil-5-oxopiperazin-3-il--pirrolidin-4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carba-pen-2-em-3-carboxilato de alilo, 156 mg, rendimento 58 %). RMN (CDC13) $ : 1,28(3H,d,J=8Hz),1,34(3H,d,J=8Hz),1,80(1H,m),2,60 (1H,m),2,90-5,00(19H,m),5,20-5,60(6H,m)5,96(3H,m) 2) 4 1 1

COOH K Η

\ Ν Η

Utilizando-se ο processo como descrito no Exemplo 9-2) mas a partir do composto obtido na reacçao descrita anteriormente, 156 mg (0,25 mmole) obteve-se o com posto identificado anteriormente, na quantidade de 50,0 mg, com o rendimento de 48 %. RMN(D20) S :

HPLCs

Eluente: TampSo de fosfato 0,01M, (pH 6,5)-Metanol (85:15) Débito: 0,8 ml / min

As outras condiçOes eram idênticas às descritas no Exemplo 1

Tempo de Retenção: 4,91 min *112QUADRO 1 Concentração Inibidora Mínima ε bO =*v O M 2 cn -=r 0 σ\ vO -H t— m un o. ·“· ε O o cu X ω <υ| CQ L CU 4-> O vO PO co L C\1 in r— to 0) 1 •H ε o *—* o Q Ό o. ε <D| cu Li <C X CU ω 4-> O co vO co L CNJ C~- in co 0) ·* •H ε O o *— Q Ό <M r— 0)1 L < 0 0) r-H 4-> O vO VO Q. co L 1 LTi lo ε co 0) ** *« cu •H ε T— r— X Q o ω 0)1 CQ S- CU -P O vO vO m L CM ITi LTl co 0) ·» ** ·«· r— •H ε O r— T- Q '0 o rH o. 0)1 ε < cu L X 0) CO co ω J-> 0 t- b- CO L ·* ·* CO 0) o o O •H ε a '0 o ε CO cO C0 oo co CO CO •H o o o c c c c CO H •r^ •H bO t£ bfl bC L o 3 3 3 O •o L O L C\J Li * O CO 0) O 0) O 0) L -P CO O C0 O C0 t— O CO tn in 0= •H 0) • CQ * CQ • iP 2 H 0u 2 a. 2 OU <

Microorganismo produtor de β -lactamase * - 413 - QUADRO 1 (Cont.) Concentração Inibidora Mínima (MIC: jig/ml)

Microorganismo produtor de /3-lactamase

414 C\J

QUADRO ι Cuac Q 'CU d) •σcu Ό

•H Xi Ή 4->acuoto 3 (0 (D

CU C O Ή εcuc d) 4-> CU•o CU> •H X> CU d)t, CU C CU Ή £-

cU X3 •H 4-> C CU CU •H Oc <d> x> O Qu

m E— o o c— -H ·* o a OJ t— ε CM CM cu X ω C\J m in o o LPi ·* —H o a 1 cr> \í ε r- <υ X Cd m «— tn o o LTV —H o a ε 1 T“ V cu X Cd Ol ffl d> in í* O m in o (U c- ·* ·* x> d) CM o n cu ε *o V 0 •H to rH Q •H o. ε α> Ol X < ω cu L, o iTl d> c- CM c- o 4-> o ·*· ·* ·* co ε in CM O 05 •H Ό to T- V Q •H

d) •o CU Ό CU •H co •H o •H c X> co •H •H 3 bO X> M « d) 3 a i i a ce t. id) 0- X 3 1 d) O X 4-> CU £ CU HO Q d) a: · 13 £ 00 E-« Ou 00 'CU 415

415 iα.ac Q 'CO d) Ό (0•o •H QUEDRO 2 (Cont.

O p α ω o m 3 to d) to c

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O c «μ

-P o o-

EXEMPLO 49

Acido (1R,5S,6S)-6~r(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2S,4S)- -2-(N-metilpiperidin-4-il)pirrolidin-4-iltio3-1-carbapen-2- -em-3-carboxílico

PNZ A uma solução constituída por 2,50 g (4,2 mmoles) de (1R,5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1--hidroxietil]-1-metil-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitro benzilo em 60 ml de acetonitrilo, adicionaram-se gota a gota sob uma corrente de azoto e arrefecimento com gelo, N,N-di-isopropiletilamina, seguida da adição de uma solução gota a gota de o sal do ácido (2S,4S)-4-mercapto-2-(N-metilpiperi-din-4-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina trifluoro acético, 2,30 g (4,6 mmole), o composto de referência do Exemplo 37 em 60 ml de acetonitrilo. Após agitação da mistu- 417 ra à temperatura de 0°C por um período de 15 horas, recolheu -se o precipitado por filtração, lavou-se com acetonitrilo e secou-se para se obterem 2,12 g (rendimento 69,7 %) de (1R, 5S,6S)-6-[(R)-i-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(N-metil-piperidin-4-il)-pirrolidin-4-il-tio]-1-carbapen-2-em-3-car-boxilato de p-nitrobenzeno. IV(KBr)cm”1: 1770, 1700, 1520, 1345 RMN(CDC13) S : 1,28(3H,d,J=8Hz),1,36(3H,d,J=7Hz),1,2-2,2(9H,m), 2,25(3H,s),2,2(1H,m),2,8-3,2(3H,m),3,2-3,6(3H,m), 3,97( 1H,m) ,4,2-4,35(2H,m)5,15-5,3(3H,m)5,53(2H,d, J=13Hz) ,7,56(2H,d,J=9Hz),7,70(2H,d,J=8Hz),8,27(2H, d,J=8Hz),8,28(2H,d,J=9Hz) 2)

OH

l’NZ 0 processo como descrito no Exemplo ^9-1) foi realizado utilizando-se 3,86 g (6,5 mmoles) de (1R, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)- 1-hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carbaxilato de p-nitrobenzilo, 2,88 g (3,9 mmoles) do cloridrato de (2S,4S)-4-mercapto-2-(N-metil-piperidin-4-il)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidona, o composto de referência do Exemplo 38 e 2,61 ml (15 mmoles) de Ν,Ν-diisopropiletilamina, para se obterem 3,74 g (rendimento 79,5 %) de (1R ,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil--2-[(2S,4S)-2-(N-metilpiperidin-4-il)-piperidin-4-il-tio ]--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. Os resulta dos dos diversos espectros deste composto concordaram com os resultados obtidos a partir do composto obtido no Exemplo 49-1).

A uma solução do composto constituída por 1,12 g (1,55 mmoles) do composto obtido na reacção des- 419 crita anteriormente em 31 ml de tetrahidrofuranu, 5 ml de etanol, adicionaram-se 31 ml de uma solução tampão de pH 7,0 de 3-morfolinopropeno-sulfonato de sódio 0,25 M e 750 mg de paládio sobre carvão a 10 í como catalisador, agitando-se a mistura sob uma corrente de hidrogénio, à temperatura ambiente, por um período de 3 horas. Retirou-se o catalisador por filtração da mistura reaccional e destilou-se o dissolvente orgânico sob pressão reduzida e em seguida na fase aquosa separaram-se por filtração os materiais insolúveis.

Concentrou-se o filtrado obtido para o volume de 20 ml e submeteu-se o resíduo a uma cromatografia

TM em coluna de fase inversa (IMC-GEL 0DS-AQ 120-S50, uma solução aquosa metanólica a 20 %). A fracçâo pretendida foi concentrada e liofilizada para se obterem 556 mg (rendimento 87,5 %) do composto identificado anteiormente. IV(KBr)cm"1: 1750, 1590, 1390 RMN(CDC13) δ : 1,21(3H,d,J=7Hz),1,29(3H,d,J=6Hz),1,2-1,82(6H,m), 1,84-2-16(2H,m),2,53(1H,m),2,74(3H,s),2,7-3,12(3H, ®) ,3,12-3,5(4H,m),3,9(1H,m),4,13-4,32(2H,m) 420 EXEMPLO 50

Acido (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N-etilpirrolidin-3-il)bir -rolidin-4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2--em-3-carboxílico

HO

Sob atmosfera de azoto e à temperatura de -20°C adicionaram-se, a uma solução de 13,6 g (23,1 mmo-les) de (1R,5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitroben-zilo em 150 ml de acetonitrilo, 13,44 ml (77,1 mmoles) de N ,N-diisopropiletilamina seguida de uma suspensão de 7,0 g (25,7 mmoles) de dicloridrato de (2S,4S)-2-(N-etilpirroli-din-3-il)-4-mercaptopirrolidina, o composto de referência do Exemplo 40, em 40 ml de N,N-dimetilformamida. Após agitação durante a noite à temperatura de -20°C concentrou-se sob vácuo a mistura reaccional. 0 precipitado resultante foi recolhido por filtração e lavado com 30 ml de acetonitrilo, 421 seguidos de 30 ml de éter isopropílico para se obterem 10,1g (rendimento 72 %) sob a forma de um cristal não purificado, (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N-etilpirrolidin-3-ϋ)-pirrolidin--4-iltio]-6-[(R)-i-hidroxietil] -1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzilo. IV(KBr)cnf1: 3350, 2900, 2660, 1770, 1700, 1605, 1515 RMN (DMSO-dg) S : 1,18(3H,d,J=8Hz),1,19(3H,d,J=8Hz),1,24(3H,t,J=9Hz), 1,6(2H,m),1,8-2,3(2H,m),2,4-3,8(12H,m),4,0(1H,m), 3,0(1H,m),5,15(1H,m),5,28(lH,d,J=16Hz),5,5(1H,d,J= =16Hz),7,75(2H,d,J=8Hz),8,27(2H,d,J+8Hz) D.P: 216°C (dec)

422 A uma solução do composto obtido na re-acção descrita anteriormente, 10 g (18,3 mmoles) em 500 ml de tetra-hidrofurano, 500 ml de tampão de ácido 3-morfolino-propanossulfónico 0,5 M (pH 7,0) e 150 ml de etanol adicionaram-se 10 g de paládio sobre carvão a 10 % como catalisador e hidrogenou-se a mistura sob pressão atmosférica e à temperatura ambiente durante 2 horas. Retirou-se o catalisador por filtração e concentrou-se o filtrado a fim de eliminar o tetra-hidrofurano e o etanol, sob vácuo. A solução aquosa residual lavou-se com clorofórmio e uma pequena quantidade de matéria insolúvel foi retirada por filtração. A so luçâo aquosa resultante foi de novo concentrada sob vácuo e purificada por cromatografia em coluna (HP-20SS 250 ml, elui çâo com metanol aquoso a 30 %) para se obterem 3,39 g do com posto em título (rendimento 45,2 %) sob a forma cristalina. 0 líquido-mãe foi de novo purificado para se obter um se -gundo cristal na quantidade de 1,94 g com o rendimento de 25,9 %. IV(KBr)cm”1: 3220, 1745, 1675, 1580, 1540, 1390 RMN (DMSO-dg) § : 1,l8(3H,d,J = 8Hz),1,19(3H,d,J=8Hz),1,24(3H , t, J=9Hz) , 1 ,2-1,8(2H,m),2,2-3,0(6H,m),3,0-3,2(2H,m),3,4-4,2 (10H,m) 423 423 UV V max (TarapSo de ácido 3-niorfolinopropanosulfónico 0,1M pH 7,0): 299 nra (£ = 6840) EXEMPLO 51

Acido (lR,5S,6S)-2-[ (2S,4S)-2-(N-etilpiperidin-4-il)pir,roli-din-4-iltio]-6-[(R)-l-hidroxietil]-l-metil-1-carbapen-2-em--3-carboxílico 1)

HO

0 processo como descrito no Exemplo 49--1) foi realizado utilizando-se 595 mg (1,0 mmole) de (1R, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo, 463 mg (1,08 mmoles) de cloridrato de (2S,4S)-2-(N-etilpiperidin- -4-il)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina, sintetizada pelo processo como descrito no Exemplo de refe- rência 37, 0,4 ml (2,3 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina, e 28 ml de acetonitrilo para se obterem 479 mg (rendimento 74,9 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N-etilpiperidin-4-il)--(N-p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidin-4-iltio]-6-[(R)-1--hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-ni-trobenzilo. IV(KBr)cm”1: 1770, 1700, 1520, 1345

0 processo como descrito no Exemplo 49--3) foi repetido utilizando-se o composto obtido na reacçâo citada anteriormente, 460 mg (0,62 mmole), 12 ml de tetra--hidrofurano, 2 ml de etanol, 12 ml de solução tampão de 3--morfolinopropanossulfato de sódio 0,25 M e 300 mg de paládio sobre carvão a 10 % como catalisador, para se obter o composto em título na quantidade de 189 mg, com o rendimento 425 de 72,3 %. IV(KBr)cm“1: 1750, 1590, 1390 EXEMPLO 52 (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S )-2-( Ν,Ν-dimet il-4-piperidinio)pirrolid-in.. -4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato

A uma solução de 1,0 g (1,38 mmole), o composto do Exemplo 49-1), de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxi-etil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(N-etilpiperidin-4-il)-pirroli-din-4-iltio]-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo em 25 ml de acetona, adicionaram-se 0,86 ml (13,8 mmoles) de iodeto de metilo. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente por um período de 15 horas e eliminou-se o dissolvente orgânico por destilação sob pressão reduzida. 426 0 processa como descrito no Exemplo 49--3) foi realizado utilizando-se o resíduo obtido, 20 ml de tetra-hidrofurano, 20 ml de etanol, 31 ml de uma soluçSo tam páo de 3-morfolinopropanossulfonato de sódio 0,25 M de pH 7,0 e 750 mg de paládio sobre carvão a 10 í como catalisador para se obter o composto identificado anteriormente na quantidade de 402 mg, com o rendimento de 69,3 IV(KBr)cm-1: 1750, 1590, 1390 RMN(D20) g : 1,21(3H,d,J=7Hz),1,29(3H,d,J=6Hz),1,2-1,5(2H,m), 1,63-2-15(6H,m),2,54(1H,m),3,08(3H,s),3,15(3H,s), 2,84-3-6(7H,m),3,78(1H,m),4,13-4,33(2H,m) EXEMPLO 53

Acido (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(azetidin-3-il)pirrolidin-4--iltio3-6-[(R)-l-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-car-boxilico 1) 427

1) 427 HO

PNZ

PNZ O processo como descrito no Exemplo 1--1) foi realizado utilizando-se 83 mg (0,14 mmoles) de (IR, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 83 mg (0,14 mmoles) de (2S,4S)-4-raercapto-N-(p-nitrobenziloxicar-bonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-azetidi-3-il]-pir -rolidina, o composto de referência do Exemplo 41, para se obterem 86,8 mg (rendimento 72,2 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1--hidroxietil]-1-meti1-2-[(2S,4S)-2-[N-(p-nitrobenziloxicar-bonil)-azetidin-3-il]-pirrolidin-4-iltio]-1-carbapen-2-em-3--carboxilato de p-nitrobenzilo. ΐν(ΚΒΓ)αη_1: 1770, 1700, 1600, 1520, 1340 RMN(CDC13) $ : 1,28(3H,d,J=8Hz),1,35(3H,d,J=7Hz),1,72(1H,m),2,32- 428 -2,72(2Η ,ιη) ,2,95-3-50( 4Η ,m) ,5,1 0-5-34 (5Η ,m) ,5,53 (1H,d,J=15Hz) ,7,51(4H,d,J=9Hz),7,66(2H,d,J = 9Hz) , 8,22(6H ,d , J = 9Hz)

428 2> HO

O processa como descrito no Exemplo 1--2) foi realizado utilizando-se o composto obtido na reacçâo descrita anteriormente, 86,8 mg (0,10 mmole) para se obter o composto era título, 14,4 mg, com o rendimento de 38,8 %. IV(KBr)cm’1: 1750, 1600, 1390 RMN(D20) £ : M8(3H,d,J=8Hz) ,1 ,27(3H,d,J=7Hz) ,2,48( 1H,m) ,2,88 (1H,dd,J=14,4Hz),3,03-3-30(3H,m),3,32-3,57(3H,m), 3,76(1H,m),3,95(2H,m),4,20(4H,m) 429 EXEMPLO 54

Acido (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2--(N-metilazetidin-3-il)pirrolidin-4-iltio]-1-carbapen-2-em--3-carboxílico 1)

0 processo como descrito no Exemplo 49--1) foi realizado utilizando-se 300 mg (0,50 mmole) de (1R, 5S ,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 195 mg (0,50 mmole) de cloridrato de (2S,4S)-4-mercapto-2-(N-roetil-azetidin-3-ϋ)-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina, o composto de referência do Exemplo 42, para se obterem 280 mg (rendimento 80 %) de (1R,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-1--metil-2-[(2S,4S)-2-(N-metilazetidin-3-il)-(N-p-nitrobenzil-oxicarbonil)-pirrolidin-4-iltio]-1-carbapen-2-em-3-carboxi-lato de p-nitrobenzilo. - ^30 - IV(KBr)cm“1: 1770, 1700, 1520, 1350 2)

HO

PNZ

Me 0 processo como descrito no Exemplo 49--2) foi realizado utilizando-se o composto obtido na reacção descrita anteriormente, 140 mg (0,20mmole) para se obter o composto identificado supra na quantidade de 42 mg, com o rendimento de 55 %. IV(KBr)cm~1: 1750, 1590, 1390 EXEMPLO 55 (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N,N-dimetil-3-azetidinio)pirroli-din-4-iltio}-6-[(R)-1-hidroxetil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3--carboxilato - U31

0 processo como descrito no Exemplo 52 foi realizado utilizando-se 140 mg (0,20 mmole) de (1R,5S, 6S)-6-[(R)-l-hidroxietil]-1-metil-2-[(2S,4S)-2-(N-metilaze-tidin-3-il)-(N-p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidin-4-iltio] -1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo, o composto do Exemplo 5H — 1) , para se obterem 32 mg (rendimento 40,6 %) do composto em título. IV(KBr)cm".1 : 1750, 1590, 1390 EXEMPLO 56

Acido(1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N-etilazetidin-3-il)pirroli-din-4-iltio1-6-[(R)-l-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em--3~carboxílico 432

D

432 HO

O processo como descrito no Exemplo 49--1) foi realizado utilizando-se 168 mg (0,28 mmole) de (1R, 5S,6S)-2-difenoxifosforiloxi-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil--1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo e 113 mg (0,28 mmole) do cloridrato de (2S,4S)-2-(N-etilazetidin-3--il)-4-mercapto-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina, o composto de referência do Exemplo 43, para se obterem 130 mg (rendimento 105 %) de (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N-etilazeti-din-3-il)-(N-p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidin-4-iltio ]--6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-1-carbapen-2-em-3-carboxilato de p-nitrobenzilo. IV(KBr)cm-1: 1770, 1700, 1520, 1350

2) 433 - HO

O processo como descrito no Exemplo 49- -3) foi realizado utilizando-se o composto obtido na reacçâo descrita anteriormente, 130 mg (0,18 mmole) para se obter o composto identificado supra na quantidade de 38 mg, com o rendimento de 52,4 %. -1 IV(KBr)cm : 1750, 1590, 1390 EXEMPLO DE REFERÊNCIA 31»

(2S.4S)-4-acetiltio-N-alliloxicarbonil-2-(N-alliloxicarbo-nilpirrolidin-2-il)pirrolidina diastereómero A - -

D

TBDMSO *

A uma solução de 15,2 g (109 mmoles) de éter 2-tetra-hidropiranil propargílico em 165 mg de tetra --hidrofurano, adicionaram-se 68,1 ml (109 mmole) de n-butil--lítio 1,6 N em hexano sob uma corrente de azoto e arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura sob arrefecimento com gelo durante 1 hora. Arrefeceu-se a mistura para a temperatura de -78°C e adicionou-se a uma solução de 31,7 g (90,3 mmoles) de (2S ,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butil-dime-tilsililoxi-2-formilpirrolidina em 150 ml de tetra-hidrofu-rano obtida aplicando-se o processo do Exemplo de Referência 1-3) em uma corrente de azoto a esta temperatura e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura de -78°C. Em seguida, deixou-se a mistura reaccional retomar a temperatura de -20° C e agitou-se durante 1 hora e 30 minutos a esta temperatura adicionando-se sob agitação 150 ml de uma solução aquosa de cloreto de amónio saturada. Adicionou-se de uma só vez ace- - 435 - tato de etilo, lavou-se a fase orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Sub meteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna de gel de mw sílica (Wakogel1 C-300, hexano-acetato de etilo a 1:1) para se obter (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butil-dimetil-sililoxi-2-[1-hidroxi-(2-tetrahidropiraniloxi)-2-butinil ]--pirrolidina na quantidade de 38,2 g, com o rendimento de 90 %. IV(KBr)cm-1: 3400, 2950, 1700, 1680, 1400 RMN(CDC13) S : 0,06(6H,s),0,86(9H,s),1,46(9H,s),1,1-2,2(8H,m) , 3,34(1H,m),3,43-3-63(2H,m),3,83(1H,m),4,04-4-54 (5H,m),4,80(1H,br s) 2) TBDMS0 /

0-THP Boc 0H A uma solução do composto obtido na re-acção citada anteriormente, 17,5 g (37,2 mmoles) em 300 ml de metanol, adicionaram-se 7 g de paládio sobre carvão a 10% como catalisador e agitou-se a mistura sob uma corrente de hirogénio à temperatura ambiente durante 3 horas. Adicionaram-se mais 7 g de paládio sobre carvão a 10 % como catalisador e agitou-se a mistura sob uma corrente de hidrogénio â temperatura ambiente durante 4 horas. Retirou-se o catalisador por filtração e concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obterem 14,8 g (rendimento 84 %) de (2S, 4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butil-dimetilsililoxi-2-[1--hidroxi-4-(2-tetra-hidropiraniloxi)-butinil]-pirrolidina. 3)

TBDMSO

H *

A uma solução do composto obtido na re-acçâo descrita anteriormente, 19,0 g (40,1 mmoles) em 420 ml de etanol adicionaram-se 1,27 g (4,75 mmoles) de p-toluenos-sulfonato de piridínio e agitou-se a mistura à temperatura de 55°C durante 1 hora e 30 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e adicionou-se de uma só vez 437 acetato de etilo, lavou-se sequencialmente com soluçSo aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro. Concentrou-se o dissolvente sob pressão reduzida para se obterem 15,4 g (rendimento 99 %) de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butil-dimetilsililoxi--2-[1,4-di-hidroxibutil]-pirrolidona. IV(KBr)cm“^: 3400, 2950, 1670, 1400 RMN(CDC13) â :

TBDMSO.

OTs

OH

Boc 0 composto obtido pela reacção descrita anteriormente, 2,42 g (6,21 mmoles) e 1,20 g (6,29 mmoles) - í438 - de cloreto de p-toluenossulfonilo foi dissolvido em piridina e a solução agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Adicionou-se éter dietílico à solução reaccional e retirou--se o precipitado por filtração. Lavou-se o filtrado sequencialmente com água, ácido cítrico a 10 jt, uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio; secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Sub meteu-se o resíduo a uma cromatografia sobre uma coluna de gel de sílica (Wakogel 1 C-300, heptano-acetato de etilo a 1:1) para se obterem 2,08 g (rendimento 62 %) de (2S,4R)-N--terc-butoxicarbonil-4-terc-butil-dimetilsililoxi-2-(1-hi-droxi-4-p-toluenossulfoniloxibutiD-pirrolidina. 5)

TBDMSO * * β

Boc OH A uma solução do composto obtido mediante a reacção anterior, 2,08 g (3,82 mmoles) em 63 ml de dimetilsulfóxido, adicionaram-se 0,90 g (14 mmoles) de azida de sódio e agitou-se a mistura à temperatura de 70°C durante 3 horas. Adicionou-se acetato de etilo, lavou-se com água, - ^39 - secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida para se obterem 1,42 g (rendimento 90 % de (2S,4R)-2-(4-azido-1-hidroxi-butil)-N-terc-butildimetil-sililoxi-pirrolidina. IV(KBr)cm_1 : 3450, 2100, 1700, 1680, 1410 RMN(CDC13) £ : 0,06(6H,s),0,86(9H,s),1,46(9H,s),1,5-2,1(7H,m), 3,2-4,4(7H,m) 6) TBDMSO/ ✓

A uma solução de 0,724 ml (0,5 mmoles) de dimetilsulfóxido em 13 ml de cloreto de metileno, adicionaram-se 0,472 ml (5,41 mmoles) de cloreto de oxalilo, gota a gota, sob corrente de azoto e à temperatura de -78° C. Agi tou-se a solução reaccional àquela temperatura durante 45 minutos. A mistura adicionou-se, gota a gota, uma solução de - 1+14 ο -1,21,g (2,92 mmoles)do composto de azida em 4 ml de cloreto de metileno, à temperatura de -78aC. Após agitação da mistura àquela temperatura durante 30 minutos adicionaram-se 2,44 ml (17,5 mmoles) de trietilamina e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 20 minutos. Lavou-se a mistura sequencialmente com água, solução diluída de ácido cio rídrico e uma solução aquosa saturada de carbonato de hidro génio e sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromato -grafia sobre uma coluna de gel de sílica (Wakogel C-300, heptano-acetato de etilo a 2:1) para se obterem 1,02 g (ren dimento 85 %) de (2S,4R)-2-(4-azidobutil)-N-terc-butoxicar-bonil-4-terc-butil-dimetilsililoxipirrolidina. IV(KBr)cm"1 : 2100, 1700, 1400 RMN(CDC13) $ : 0,06(6H,s),0,86(9H,s),1,46(9H,s),1,7-2,2(4H,m) , 2,62(2H,m),3,34(2H,m),3,56(2H,m)4,3-4,6(2H,m)

7) 441 TBDMSO Η

N Η

Boc A uma solução do composto obtido me diante a reacçâo anterior, 2,3*1 g (5,67 mmoles) em 60 ml de metanol, adicionaram-se 236 mg de paládio sobre carvão a 10Í como catalisador e agitou-se a mistura sob uma corrente de hidrogénio à temperatura ambiente durante 1 hora. Adicio-naram-se 236 mg de paládio sobre carvão a 10 % como catalisador e procedeu-se à hidrogenaçâo à temperatura ambiente du rante 1 hora, seguida de outra adição de paládio sobre carvão a 10 % e de hidrogenaçâo por mais 2 horas. Retirou-se o catalisador por filtração e adicionou-se ao filtrado 0,67 ml (11,7 mmoles) de ácido acético e 736 mg (11,7 mmoles) de cianoboro-hidreto de sódio sob arrefecimento com gelo e agi-tou-se a mistura àquela temperatura durante 30 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida. Dis -solveu-se o resíduo em clorofórmio, lavou-se com solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio e concentrou-se sob pressão reduzida. Subraeteu-se o resíduo a. uma cromatografia sobre coluna Φιι de gel de sílica (Wakogel C-300, clorofórmio-etanol a 97:3) para se obterem 883 mg (rendimento 42 %) de (2S,4R)-N-terc- 442 -butoxicarbonil-4-terc-butildimetilsililoxi-2-(pirrolidin-2--il)-pirrulidina. RMN(CDC13) $ : 0,08(6H,s),0,86(9H,s),1,47 e 1,48 (total 9H, ambos s),1,5-1,8(2H,m),1,9-2,4(4H,m),3,1-4,2(6H,m),4,32 (1H,br s) 8)

TBDMSO

0 composto obtido na reacçâo anterior, 883 mg (2,38 mmoles) em 4,5 ml de piridina adicionou-se uma solução de 0,47 ml (4,43 mmoles) de clorocarbonato de alilo em 2,2 ml de cloreto de metileno sob arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura durante a noite à temperatura ambiente. Adicionou-se acetato de etilo à solução reaccional, lavou-se sequencialmente com água, ácido cítrico a 10 %, solução aquo sa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu- - 443 -

-se o resíduu a uma cromatografia em coluna de gel de sílica TM (Wakogel C-300, heptano-acetato de etilo a 2:1) para se obterem 718 mg (rendimento 66,8 %) de (2S,4R)-2-(N-aliloxi-carbonilpirrolidin-2-il)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butil-dimetilsililoxipirrolidina. 9)

TBDMSO

Alloc Alloc A uma solução do composto obtido me -diante a reacção anterior, 912 mg (2,00 mmoles) e 0,47 ml de 2,6-lutidina (4,1 mmoles) em 16 ml de cloreto de metileno, adicionaram-se gota a gota 0,60 ml (3,0 mmoles) de trimetil-sililotrifluorometano-sulfonato e agitou-se a mistura reac-cional àquela temperatura durante 1 hora e 30 minutos. Após se adicionar à mistura reaccional 2,4 ml de metanol e de agi taçâo à temperatura ambiente por um período de 45 minutos, retirou-se o dissolvente por destilação sob pressão redu -zida. Dissolveu-se o resíduo em 16 ml de cloreto de metileno e adicionou-se à solução 0,61 ml de trietilamina (4,38 mmoles) seguidos da adição de 0,426 ml (4,02 mmoles) de clo-rocarbonato de alilo, sob arrefecimento com gelo e agitou-se 444 a mistura reaccional àquela temperatura durante 1 hora e em seguida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Lavou-se a solução reaccional sequencialmente com ácido clorídrico diluído, solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-s^ sobre sulfato de magnésio e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia so-bre coluna de gel de sílica (Wakogel C-300, hexano-acetato de etilo a 2:1) para se obterem 330 mg do diastereoisómero A, o composto com menos polaridade, com o rendimento de 38í) e 242 mg do diastereoisómero B, o composto polar, com o rendimento também de 28 % de (2S,4R)-N-aliloxicarbonil-2-(N-aljL loxicarbonilpirrolidin-2-il)-4-terc-butildimetilsililoxipir-rolidina .

Diastereómero A RMN(CDC13) S : 0,05(6H,s),0,85(9H,s),1,88(6H,m),3,2-3-8(5H,m), 4,13(1H,m),4,42(1H,m),4,59(4H,m),5,1-5,4(4H,m), 5,8-6,1(2H,m)

Diastereómero B RMN(CDC13) S :

10)

MsO

N

Alloc

Alloc A uma solução de 330 mg (0,752 mmoles) do diastereoisómero A obtido pela reacçâo descrita anterior-mente em 4 ml de tetra-hidrofurano, adicionaram-se 0,83 ml (0,83 mmole) de fluoreto de tri-n-butilamónio 1 M em tetra-hidrofurano, sob arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura àquela temperatura durante 45 minutos. Adicionou-se acetato de etilo à solução reaccional, lavou-se sequencialmente com solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio e concentrou-se sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo em 7 ml de cloreto de metileno e adicionou-se à solução 0,44 ml (3,0 mmoles) de trietilamina seguida de adição de 0,12 ml (1,5 mmole) de cio reto de metanossulfonilo, sob arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura reaccional àquela temperatura durante 1 hora. Lavou-se a solução reaccional com solução aquosa satu- 446 rada de carbonato de hidrogénio e sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida

Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia sobre coluna de , TM gel de sílica (Wakogel C-300, hexano-acetato de etilo a 2:1) para se obterem 249 mg (rendimento 82 %) do diastereo-isómero A, (2S,4R)-N-aliloxicarbonil-2-(N-aliloxicarbonilpir rolidin-2-il)-4-metanossulfoniloxipirrolidona. RMN(CDC13) ò : 1,89(4H,m),2,24(2H,m),3,04(3H,s),3,36(1H,m),3,54 (2H,m),3,9-4,4(3H,m),4,62(4H,m),5,2-5,5(5H ,m),5,8--6,1(2H,m) 11)

Alloc Alloc A uma solução do diastereoisómero A obtido pela reacção descrita anteriormente, 249 mg (0,619 mmole) em 2,7 ml de N,N-dimetilformamida adicionaram-se 141 mg (1,24 mmole) de tioacetato de potássio e 92,9 mg (0,619 mmoles) de iodeto de sódio e agitou-se a mistura à temperatura de 70°C durante 4 horas. Após arrefecimento, adicionou- 447 - -se acetato de etilo à solução reaccional, lavou-se com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia sobre co

TM luna de gel de sílica (Wakogel C-300, hexano-acetato de etilo a 2:1) para se obterem 186 mg (rendimento 79 %) do com posto em título. RMN(CDC13) S : 1,84(5H,m),2,34(3H,s),2,46(1H,m),3,01(1H,t,J=10Hz) , 3,36(1H,m),3,58(1H,m),3,79(1Hfm),4,23(3H,m),4,61 (4H,d,J=6Hz),5,1-5,5(4H,m),5,8-6,1(2H,m) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 35

(2S,4S)-4-acetiltio-N-alliloxicarbonil-2-(N-alliloxicarbo-nilpirrolidin-2-il)pirrolidine, diastereómero B

Alloc Alloc 448 0 processo como descrito no Exemplo de Referência 34-10) foi realizado utilizando-se 242 mg (0,552 mmoles) de o diastereómero B de (2S,4R)-N-aliloxicarbonil-2--(N-aliloxicarbonilpirrolidin-2-il)-4-terc-butildimetilsi-liloxipirrolidina, o composto de referência do Exemplo 34-9)» para se obter o diastereómero B, 172 mg (rendimento 78 %) de (2S,4R)-N-aliloxicarbonil-2-(N-aliloxicarbonilpirrolidin-2--il)-4-metanossulfoniloxipirrolidina. RMN(CDC13) S : 1,5-2,5(6H,m),3,04(3H,s),3,2-4,6(6H,m),4,60(4H, br s),5,1-5,5(5H,m),5,8-6,1(2H,m) 2)

AcS

0 processo como descrito no Exemplo de Referência 34-11) foi realizado utilizando-se o composto obtido pela reacçâo descrita anteriormente, 172 mg (0,428 mmoles) para se obter o composto identificado anteriormente na quantidade de 133 mg com o rendimento de 81 %. 449 - RMN(CDC13) § : 449 -

5,1-5,5(4H,m),5,8-6,1(2H,m) EXEMPLO DE REFERÊNCIA 36 (2S,4S)-4-acetiltio-N-alliloxicarbonil-2-(1-alliloxicarbo-nil-5-oxopiperazin-3-il)pirrolidina 1)

TBDMSO

H

OH

Boc A uma mistura de 4,0 g (13,2 mmoles) de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildimetilsililoxi-2--vinilpirrolidona, 40 ml de acetona, 40 ml de água e 2,5 g (20 mmoles) de N-metilmorfolina-N-óxido, adicionou-se uma soluçAo aquosa a 4 % de tetróxido de ósmio e agitou-se a mis tura durante a noite à temperatura ambiente. Após a eliminação de acetona sob pressão reduzida ajustou-se o pH da solução reaccional para 2 com ácido sulfúrico 6 N e extraiu-se com acetato de etilo. Secou-se a fase orgânica e concentrou- 450 -se para se obterem 4,35 g (rendimento 98 %) de uma substância oleosa contendo (2S , 4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-bu-tildimetilsililoxi-2-(1,2-di-hidroxietil)-pirrolidona. RMN(CDC13) g : 0,06(6H,s) ,0,82(9H,s),1,40(9H,s),2,00(2H,m),3,28 (2H,m),3,52(2H,m),3,98(1H,m),4,30(2H,m) 2) TBDMSO, OMs

Boc OMs A uma solução do composto obtido de acordo com a reacção obtida anteriormente, 8,7 mg (26,0 mmoles) em 174 ml de cloreto de metileno, adicionaram-se 6,0 ml (78 mmoles) de cloreto de metanossulfonilo e 6,2 ml (116 mmoles) de trietilamina sob arrefecimento com gelo e agitou--se a mistura reaccional durante 1 hora. Lavou-se a solução reaccional com solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se. Submeteu-se o resíduo a uma cromato -grafia sobre coluna de gel de sílica (Wakogel C-300, hexa- 451 no-acetato de etilo a 1:1) para se obterem 9,50 g (rendimen to 74,5 %) de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildi-metilsiioxi -2-[1,2-di(metanosulfoniloxi)etil]pirrolidina. rmn(cdci3) ò * 0,06(6H,s),0,84(9H,s),1,46(9H,br s),2,00(2H,m), 3,04(3H,s),3,08(3H,s),3,36(2H,m),4,10(1H,m),4,30 (1H,m),4,36(2H,m)5,40(1H,m) 3) TBDMS0

H s s

Uma mistura do composto obtido a partir da reacçâo descrita anteriormente, 9,50 g (19,3 mmoles), 8,72 g (134 mmoles) de azida de sódio e 95 ml de dimetilsul- fóxido foi agitada è temperatura de 100°C durante 1 hora e 30 minutos. Após arrefecimento adicionou-se à mistura reac- cional acetato de etilo, lavou-se sequencialmente com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se. Submeteu-se o

resíduo a uma coluna cromatográfica de gel de sílica (Wako-TM gel C-300, hexano-acetato de etilo a 5:1) para se obterem - 1494 - IV(KBr)cm~1: 3450, 2920, 1690, 1390, 1360, 1250 RMN(CDC13) è : 0,06(6H,s),0,88(9H,s),1,15(3H,t,J=9Hz),1,48(9H,s) , 1,8-2,1(2H,m),2,2-2,6(2H,m),3,1-3,5(6H,m),3,6(1H, m),4,12(1H,m) ,4,35(1H,m) 2) TBDMSO,

A uma soluçSo de 40 g (96,9 mmoles) do composto obtido peia reacção descrita anteriormente, em 200 ml de tetra-hidrofurano adicionaram-se 23,01 ml (242 mmoles) do complexo de borano-dimetilsulfureto sob arrefecimento com gelo e submeteu-se a mistura a refluxo durante 30 minutos. Após arrefecimento, adicionaram-se à mistura reaccional 100 ml de metanol e em seguida agitou-se durante 10 minutos à 495 - temperatura ambiente. Apús remoção do dissolvente sob vácuo, extraíu-se o resíduo com 500 ml de acetato de etilo e lavou--se o extracto com 200 ml por duas vezes de solução aquosa de cloreto de sódio saturada. Secou-se o extracto sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se para se obterem 35,9 g do complexo (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildime-tilsiloxi-2-(N-etilpirrolidin-3-il)-pirrolidina-borano, com o rendimento de 89,7 %. IV(KBr)cm“1: 3450, 2920, 2370, 1690, 1460, 1390 RMN(CDC13) £ :

3)

HO

H

N

Boc

.BH Et 3 496 A uma solução de 35,8 g (86,8 mmoles) do composto obtido pela reacção descrita anteriormente, em 200 ml de tetra-hidrofurano adicionaram-se 91 ml de tetra- -hidrofuranu contendo fluoreto de tetrabutilamónio 1 M, sob arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura ambiente. Adicionaram-se à mistura reaccional 500 ml de acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica com 200 ml de água seguidos de 100 ml de solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Secou-se o dissolvente sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob vácuo. Purificou-se o resí-

, TM duo por cromatografia em coluna de gel de sílica (Wakogel C-300, metanol a 5 %-clorofórmio) para se obterem 44,1 g do complexo (2S, 4R)-N-terc-butoxicarbonil-2-(N-etil-2-pirroli-din-3-il)-4-hidroxipirrolidina-borano. IV(KBr)cm-1: 3300, 2970, 2370, 1690, 1460, 1390, 1250 RMN(CDC13) δ : 1,32(3H,t,J=9Hz),1,48(9H,s),1,8-2,3(2H,m),2,7-3,0 (6H,m),3,2-3,3(2H,m),3,6(1H,m),4,2(1H,m),4,5(1H,m) 497 -

A uma solução do composto obtido pela reacçãu anterior, 44 g (86,8 mmoles) em 300 ml de cloreto de metileno, adicionaram-se 13,3 ml (95,5 mmoles) de trietil-amina e 7,4 ml (95,5 mmoles) de cloreto de metanossulfonilo sob arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura reaccional durante 1 hora a essa temperatura. A mistura reaccional foi adicionada com 200 ml de cloreto de metileno, a fase orgânica lavada com 200 ml de água seguidos de 100 ml de solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se o dissolvente sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se para se obterem 30,39 g (rendimento 80,6 Ϊ) do complexo (2S,4R)-N--terc-butoxicarboni1-2-(N-etilpirrolidin-3-il)-4-metanos-sulfoniloxipirrolidina-borano. IV(KBr)cm~1: 3450, 2970, 2360, 1690, 1450, 1390, 1360 - Μ9δ - RMN(CDC13) è : 1 ,35(3H,t,J = 9Hz),1,48(9H,s),1,8-2,3(2H,m),2,3-3,0 (8H,m),3,06(3H,s),3,25(2H,m),3,4(1H,m),4,2(1H,m) , 5,24(1H,m)

A uma suspensão de 11,6 g (84 mmoles) de carbonato de potássio anidro em 300 ml de N,N-dimetilfor-mamida adicionaram-se 6,0 ml (84 mmoles) de ácido tioacético sob arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura reaccional durante 30 minutos sob atmosfera de azoto. A mistura adicionaram-se 11,5 g (77 mmoles) de iodeto de sódio e uma solução do composto obtido pela reacçâo anterior constituída por 30g (70 mmoles) deste composto e 100 ml de N,N-dimetilformamida. Agitou-se a mistura durante a noite a uma temperatura entre 60U-70WC e adicionou-se à mistura reaccional 1 1 de acetato de etilo, lavou-se esta com 500 ml de água de cada vez, por 499 três vezes, seguidas de duas vezes com 100 ml de cada vez de uma solução aquusa saturada de cloreto de sódio. Secou-se o extracto sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob

vácuo. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna de r TM gel de sílica (Wakogel C-300, cloroformio) para se obterem 17,3 g (rendimento (59,6 %) do complexo (2S , 4S)-4-acetiltio--N-terc-butoxicarbonil-2-(N-etilpirrolidin-3-il)-pirroli-dina-borano. IV(KBr)cm~^: 3420, 2970, 2360, 1700, 1690, 1390, 1360 rmn(cdci3> â : 1 ,3(3H,t,J = 9Hz),1,48(9H,s),1,8-2,3(2H,m),2,5(2H,m), 2,6-3,1(6H,m),3,2(2H,m),3,8(1H,m),4,1(2H,m) 6)

Et 500 0 composto obtido pela reacção descrita anteriormente, 17 g (41 mmoles) fui dissulvido em uma mistura de ácidu clurídricu 1,18N - metanul de 104 ml e a solu-çãu agitada à temperatura ambiente durante 1 hora seguida de mais 4 horas a uma temperatura entre 6θυ e 70°C. Removeu-se sob vácuo o excesso de ácido clorídrico-metanol e adiciona-ram-se ao resíduo 30 ml de etanol. Recolheu-se o cristal resultante por filtração, lavou-se com etanol arrefecido e secou-se para se obter o composto identificado supra, 7,1 g, como rendimento de 63,6 %. 0 líquido-mâe foi concentrado para se obter a segunda cristalização, 2,8 g com um rendimento de 25,1 % . IV(KBr)cm”1: 3400, 2930, 2690, 1450, 1410, 1115 RMN(DMS0-dg) S : 1,23(3H,t,J=9Hz),1,6(1H,m)1 ,8-2,4(2H,m),2,52(1H, m) ,2,95(1H,m),2,15(4H,ra),2,2-2,7(7H,m)

P.F. 178° C EXEMPLO DE REFERÊNCIA 41 (2S , 4S)-2-(azetidin-3-il)-4-mercaptu-N-(p-nitrubenziluxicar-bonil)pirrolidina 501 TBDMS0 , * ê * **

Boc A uma solução de 7,02 g (18,8 mmoles) de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildimetilsiloxi--2-(2-nitrovinil)-pirrolidina, o composto de referência do Exemplo 31-2), em 80 ml de clorofórmio (Wakogel C-300, 10 g) e 10 ml de isopropanol. A esta solução adicionaram-se 3,40 g (90 mmoles) de boro-hidreto de sódio À temperatura de 0°C. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 3 horas e em seguida arrefeceu-se com um banho de gelo, adicionaram-se 30 ml de águà e ácido clorídrico 3 N para se corrigir o pH para um valor de 4 e, em seguida, para um valor de 10 com hidróxido de sódio 3 N. Filtrou-se a mistura, extraíu-se em seguida com 200 ml de clorofórmio, lavou-se a fase orgânica sequencialmente com solução aquosa saturada de cloreto de amónio, uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se com sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Wakogel^ C-300, hexano-acetato de etilo a 8:1 ——> 6:1) para se obterem 502 4,68 g de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildimetil-siloxi-2-(2-nitruetil)-pirrolidina com um rendimento de 67%. RMN(CDC13) S : 0,04(6H,s)0,84(9H,s),1,44(9H,s),1,64(1H,m),2,04 (1H,m),2,14-2,44(2H,m),3,20-3,60(2H,m),4,04(1H,m), 4,32(1H,m),4,48(2H,m) 2)

TBDMSO

CHO BOC A uma solução de hidreto de sódio a 60 % (2,56 g, 64 mmoles) adicionaram-se 50 ml de álcool bu-tílico terceário sob uma corrente de azoto à temperatura ambiente e agitou-se a mistura durante 20 minutos. A esta mistura, adicionaram-se 11,8 g (32 mmoles) de (2S,4R)-N-terc--butoxicarbonil-4-terc-butildimetilsiloxi-2-(2-nitroetil)--pirrolidina dissolvidos em 30 ml de álcool butílico terceário. Após agitação durante 20 minutos adicionou-se a mistura a 1 1 de heptano arrefecido previamente num banho de gelo e em seguida agitou-se durante 10 minutos à temperatura de 0UC. A mistura reaccional adicionou-se uma soluçSo 503 ue 5,06 g (32 mmoles) de permanganato de potássio em 100 mi de água e uma solução de 3,9^ g (6M ramoles) de ácido bórico em 50 mi de água e agitou-se a mistura durante 15 minutos. A mistura reaccional adicionaram-se 15,88 g (6M mmoles) de penta-hidrato de tiossulfato de sódio em 50 ml de água e 51* ml de ácido sulfúrico 1 N. Após agitação durante 10 minutos filtrou-se a mistura reaccional com celite e lavou-se com 200 ml de heptano.

Reuniu-se o filtrado com os líquidos de lavagem, lavou-se a fase orgânica sequencialmente com 200 ml de uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e 200 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e concentrou- -se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo oleoso obti-

Tm do a uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Wakogel C-300, heptano-acetato de etilo a 5:1) para se obterem 7,0 g de (2S,UR)-N-terc-butoxicarbonil-M-terc-butildimetilsiloxi--2-(formilmetil)pirrolidina, com um rendimento de 66 %. RMN(CDC13) S : 0,04(6H,s),0,86(9H,s),1,4U(9H,s),1,72(1H,m),2,15 (1H,m),2,52(1H,m),2,90(1H,m),3,38(2H,m),4,33(2H,m), 9,78(1H,t,J=2Hz) 3) 504

TBDMSO 3) 504

CHO Boc A uma solução constituída por 2,92 g (8,81 mmoles) do composto obtido pela reacção descrita ante-riormente, em 30 ml de cloreto de metileno, adicionaram-se 1,6 g (17,6 mmoles) de cloreto de N,N-dimetilmetilenoamónio e 2,8 ml (20 mmoles) de trietilamina, à temperatura ambiente e agitou-se a mistura reaccional durante a noite a essa temperatura. Após a adição de 100 ml de clorofórmio, lavou-se a mistura reaccional com água e solução aquosa saturada de cio reto de sódio, secou-se com sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob pressSo reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma

TM cromatografia em coluna de gel de sílica (Wakogel C-300, hexano-acetato de etilo a 3:1) para se obterem 2,54 g de (2S 4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildimetilsiloxi-2-(1-for mivinil)pirrolidina, com um rendimento de 81 %. RMN(CDC13) 3 : 0,07(6H,s),0,88(9H,s),1,28(4,5H,br s),1,47(4,5H, br s),1,78(1H,m),2,22(1H,m),3,52(2H,m),4,32(1H,m), 505 4 ,76( ΐΗ,ια) ,6,06( 1H,br s) ,6,28( 1H ,br s ) ,9,62 (1H , s) 4) TBDMSO ,(<

A uma solução do composto obtido pela reacção descrita anteriormente, 2,45 g (6,9 mmoles) em 10 ml de metanol, adicionou-se uma solução 2,50 g (7,0 mmoles) de hexa-hidrato tricloreto de serium em 10 ml de metanol. À mis tura adicionaram-se 270 mg (7,1 mmoles) de cloro hidreto de sódio à temperatura de 0°C e agitou-se a mistura durante 10 minutos à temperatura ambiente. Após a adição de 15 ml de água e 80 ml de acetato de etilo, lavou-se a fase orgânica sequencialmente com solução diluída de ácido clorídrico, água, solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida para se obterem 2,4 g de (2S,4R)-N-terc--butoxicarbonil-4-terc-butildimetilsiloxi-2-[1-(hidroxime-til)-vinil]-pirrolidina não purificada, com um rendimento de 97 *. RMN(CDC13) S : 506 0,06(6H,s),0,88(9H,s),1,42(9H,s),1,94(1H,m),2,08 (lH,m),3,26(2H,br s),4,01(2H,br s),4,38(1H,m),4,51 (1H,m),5,02(1H,br s), 5,12(1H br s) 5) TBDMSO^

H

Boc

OTHP A uma solução do composto obtido pela reacção anterior, 4,09 g (11,4 mmoles) em 40 ml de cloreto de metileno, adicionaram-se 2,1 ml (23 mmoles) de 3,4-hidro-pirano e 300 mg (1,2 mmoles) de p-toluenossulfonato piridí-nio à temperatura ambiente. Após agitação durante 6 horas a essa temperatura, lavou-se a mistura reaccional por 2 vezes com 20 ml de água de cada vez e 20 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se com sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida para se obterem 4,7 g de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildimetil-siloxi-2-[1-(tetra-hidropiraniloximetil)-vinil]-pirrolidina com um rendimento de 93 %, não purificada. RMN(CDC13) S : 0,06(6H,s),0,86(9H,s),1,41(9H,S),3,50(3H,m),3,74- 507 4,5U(5H,m),4,64(1H,m),5,01(1H,br s ) , 5 , 10(1H,br s) 5076) TBDMSO,

OTHP A uma solução do composto obtido pela reacçâo anterior, 550 mg (1,25 mmoles) em 5 ml de tetra --hidrofurano anidro, adicionou-se uma solução constituída por 340 mg de 9-borobiciclo[3·3·1Inonano (1,4 mmole) em 5 ml de tetra-hidrofurano anidro, à temperatura ambiente e agitou-se a mistura durante a noite a esta temperatura. A essa solução adicionaram-se 770 mg (5 mmoles) de tetra-hidrato de perborato de sódio e 5 ml de água sob arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura durant 7 horas à temperatura ambiente. À mistura reaccional adicionaram-se 100 ml de acetato de etilo e em seguida lavou-se a mistura com 50 ml de água e 20 ml de uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de sódio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo oleoso obtido a uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Wakogel™ C-300, hexano-acetato de etilo a 3:1) para se obterem 542 mg de 508 (2S , 4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildimetilsiloxi-2--[2-hidroxi-1-(tetra-hidropiraniloximetii)-etil]-pirroli-dina, com um rendimento de 94 $· RMN(CDC13) S : 0,04(6H,s),0,86(9H,s),4,34(1H,m),4,58(1H,m)

0 mesmo processo como descrito no Exemplo 32-3) foi realizado utilizando-se o composto obtido pela reacçSo descrita anteriormente para se obterem 1,94 g de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butildimetilsolixi-2--[2-ftalimido-1-(tetra-hidropiraniloximetil)-etil3-pirroli-dina, com um rendimento de 94,2 %. RMN(CDC13) δ : 0,06(6H,s) ,0,86(9H,s),1,20-1,70(15H,m) ,1,94-2,15 509

8)

TBDMSO ΟΤΗΡ

H

NH - Ts

Boc A uma solução do composto obtido pela reacçSo descrita anteriormente, 1,94 g (3,3 mmoles), em 20 ml de etanol, adicionaram-se 0,48 ml (9,9 mmoles) de mono--hidrato de hidrazina e agitou-se a mistura reaccional durante a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura resultante sob pressão reduzida e extraíu-se o resíduo com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica sequencialmente com três vezes amoníaco aquoso 2N e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Dis solveu-se o resíduo em 25 ml de tetra-hidrofurano e à solu-çSo resultante adicionaram-se 0,58 ml (4,17 mmoles) de tri-etilamina e 630 mg (3,3 mmoles) de cloreto de p-toluenossul-fonilo sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura duran te uma hora e trinta minutos àquela temperatura e extraíu-se com 100 ml de acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se 510 com sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em co-

TM luna de gel de sílica (Wakogel C-300, hexano-acetato de etilo a 6:1) para se obterem 1,38 g de (2S,4R)-N-terc-butoxi_ carbonil-4-terc-butildimetilsiloxi-2-[l-(tetra-hidropiranil-oximetil)-2-(p-toluenossulfonilamino)-etil]-pirrolidina, com um rendimento de 68,1 % . RMN(CDC13) S : 0,03(6H,s),0,85(9H,s),1,38-1,98(17H,m),2,43(3H,m), 4,27(1H,m),4,42-4,62(1H,m),7,30(2H,br d,J=8Hz),7,76 (2H,br d,J=8Hz)

Boc

OH NH - Ts A uma solução do composto obtido pela reacção descrita anteriormente, 1,38 g (2,25 mmoles), em 40 ml de metanol, adicionaram-se 60 mg (0,24 mmole) de p-tolu-enossulfonato de piridínio e agitou-se a mistura reaccional durante 4 horas e 30 minutos a uma temperatura entre 45° e 511 jO'C. A mistura resultante concentrou-se sob pressão reduzida e extraíu-se o resíduo com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o

resíduo a uma cromatografia em coluna de gel de sílica TM (Wakogel C-300, hexano-acetato de etilo a 3:1) para se obterem 912 mg de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butil-dimetilsiloxi-2-[1-(hidroximetil)-2-(p-toluenossulfonil -amino)-etil]-pirrolidina, com um rendimento de 76,6 $ . RMN(CDC13) 8 :

10)

TBDMSO

OMs -NH - Ts

Boc A uma solução do composto obtido pela reacção descrita anteriormente, 912 mg (1,73 mmole) em 15 ml de tetra-hidrofurano, adicionaram-se 0,288 ml (2,07 mmoles) 512 de trietilamina e 0,153 ml (1,98 mmule) de cloreto de meta-nossulfonilo, sucessivamente, sob arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura durante 40 minutos àquela temperatura. Extraíu-se a mistura reaccional com 70 ml de acetato de etilo, lavou-se a fase orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida para se obterem 980 mg de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4--terc-butildimetilsiloxi-2-[1-(metanossulf oniloximetil)-2--(p-toluenossulfonilamino)-etil]-pirrolidina, com um rendimento de 93,6 %. RMN(CDC13) & :

11)

TBDMSO

Boc A uma solução do composto obtido pela 513 reacçâo descrita anteriormente, 980 mg (1,62 mmole) em 80 ml de N ,Ν-dimetilfurmamida, adicionaram-se 97 mg (2,42 mmules) de hidreto de sódio a 60 í, sob atmosfera de azoto e arrefecimento com gelo e agitou-se a mistura resultante durante 15 minutos àquela temperatura e em seguida durante 4 horas à temperatura ambiente. Concentou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraíu-se o resíduo com 70 ml de acetato de etilo. Lavou-se a fase orgânica com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-

-se o resíduo a uma cromatografia em coluna de gel de sílica . TM (Wakogel C-300, hexano-acetato de etilo a 8:1) para se obterem 682 mg de (2S,4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc--butildimetilsiloxi-2-[N-(p-toluenossulfonil)-azetidin-3--il]-pirrolidina, com um rendimento de 82,7 % . RMN(CDC13) £ : 0,02(6H,s),0,82(9H,s),1,41(9H,s),1,58(1H,m),1,87 (1H,m),2,46(3H,s),2,76(1H,m),3,15(1H,m),3,42(2H,m), 3,73(3H,m),3,90(1H,m),4,22(1H,m),7,38(2H,d,J=8Hz), 7,73(2H,d,J=8Hz) 12) - 514 -

TBDMSO

Boc A uma solução do composto obtido pela reacção descrita anteriormente, 682 mg (1,34 mmole) em 10 ml de tetra-hidrofurano, adicionaram-se cerca de 20 ml de amoníaco líquido sob atmosfera de azoto a uma temperatura de -78° C e à solução daí resultante adicionaram-se 140 mg (6,1 mmoles) de sódio metálico. Agitou-se a mistura reaccio-nal durante 30 minutos à temperatura ambiente e em seguida retirou-se o dissolvente por destilação. Dissolveu-se o resíduo em 20 ml de tetra-hidrofurano, 0,186 ml (1,34 mmole) de trietilamina e adicionaram-se 383 mg (1,20 mmole) de 4,6 dimetil-2-(p-nitrobenziloxicarboniltio)-pirimidina sob arrefecimento com gelo. Agitou-se a mistura reaccional durante 2 horas à temperatura ambiente e em seguida extraíu-se com 70 ml de acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada sequencialmente com solução aquosa de hidróxido de sódio 1 N, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Wakogel™ C-300, hexano-acetato de etilu a 5:1) para se obterem 283 mg de (2S, 4R)-N-terc-butoxi carbonil-4-terc-butildimetilsiloxi-2-[N-(p-nitrobenziloxi-carbonil)-azetidin-3-il[-pirrolidina, com um rendimento de 39,5 %. RMN(CDC13) & : 0,06( 6H,s) ,0,87(9H,s) ,1 ,46(9H,s) ,1 ,74(1H,m) ,2,02 (1H,m),2,96(1H,m),3,30(1H,m),3,42-3,86(2H,m),3,90-4,l4(3H,m),4,15-4,38(2H,m),5,20(2H,s),7,53(2H,d,J= =9Hz),8,23(2H,d,J=9Hz)

13) HO

0 composto obtido pela reacçflo descrita anteriormente, 283 mg (0,53 mmole) foi dissolvido em 5 ml de uma mistura de cloreto de hidrogénio 0,65 N - metanol e a mistura resultante agitada durante a noite à temperatura ambiente. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressSo reduzida e dissolveu-se o resíduo em 5 ml de dioxano e 2,5 ml de água. Ajustou-se o pH da mistura para 9 com uma solução aquo 516 sa de hidróxido de sódio 1 N e adicionaram-se 170 mg (0,53 mmole) de 4,6-dimetil-2-p-nitrobenziloxicarboniltio)-piri-midina. Agitou-se a mistura resultante durante a noite à temperatura ambiente e em seguida concentrou-se sob pressão reduzida. Extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato de eti-lo. Lavou-se a fase orgânica sequencialmente com solução aquosa de hidróxido de sódio 1 N, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se com sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna de gel de sílica Tm (Wakogel C-300, metanol a 1 %-clorofórmio) para se obterem 87 mg de (2S,4R)-4-hidroxi-N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-2--[N(p-nitrobenziloxicarbonil)-azetidin-3-il]-pirrolidina, com um rendimento de 32,9 % . RMN(CDC13) 8 : 1,86(1H,m),2,l8(1H,m),3,02(1H,m),3,10-3,62(2H,m), 3,64-3,90(2H,m), 3,9^-4,20(2H,m),4,34(1H,m),4,50(1H, m),5,10-5,30(4H,m),7,51(4H,d,J=9Hz),8,22(4H,m) 14) 517

AcS

A uma solução do composto obtido pela reacçSo descrita anteriormente, 87 mg (0,147 mmole) em 5 ml de tetra-hidrofurano, adicionaram-se 92 mg (0,35 mmole) de trifenilfosfina e 55 μΐ (0,35 mmole) de azodicarboxilato de dietilo, sequencialmente, sob atmosfera de azoto e arrefecimento com gelo, agitando-se a mistura reaccional durante 30 minutos a essa temperatura. Â mistura adicionaram-se 31 μΐ de ácido acético (0,43 mmole) e a mistura resultante foi de novo agitada durante 2 horas sob arrefecimento com gelo. À mistura reaccional extraiu-se com 50 ml de acetato de etilo e lavou-se a fase orgânica com água e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia em camada fina preparativa (sílica gel 60 F254 Merck» hexano-acetato de etilo a 1:3) para se obterem 78,9 mg de (2S,4S)-4-acetiltio-N-(p--nitrobenziloxicarbonil)-2-[N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-aze tidin-3-ϋ]-pirrolidina, com um rendimento de 81,3 $ . 518

RiVlNÍCDClg) õ : 1,65(1H,m),2,36(3H,s),2,58(1H,m),3,05(1H,m),3,23 (1H,m),3,66-4,30(7H,m),5,12-5,18(4H,m),7,52[4H,m), 8,23(4H,m) 15)

O processo como descrito no Exemplo de Referência 32-10) foi realizado utilizando-se o composto obtido pela reacçSo descrita anteriormente, 78,9 mg (0,14 mmole) para se obter o composto identificado anteriormente, 73 mg, com o rendimento de 100 %. EXEMPLO DE REFERÊNCIA 42

Cloridrato de (2S,4S)-4-mercapto-2-(N-metilazetidin-3-il)--N-(p-nitrobenziloxicarbonil)-pirrolidina 519

D

TBDMSO

A uma solução de 880 mg (2,39 mmoles) de (2S,UR)-2-(azetidin-3-il-N-terc-butoxicarbonil-4-terc--butildimetilsiloxipirrolidina, obtida mediante a reacçâo do Exemplo de Referência 41 — 12), em 10 ml de acetonitrilo, adi-cionaram-se 0,65 ml de formalina a 37 % e 0,8 ml de ácido acético à temperatura ambiente. Adicionou-se à mistura reac-cional 370 mg de cianoboro-hidreto de sódio (5,9 mmoles) e em seguida a mistura resultante agitou-se durante 30 minutos. Concentrou-se a mistura reaccional sob pressão reduzida e extraiu-se o resíduo com 50 ml de acetato de etilo. Lavou--se a fase orgânica sequencialmente com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secou-se sobre sulfato de magnésio anidro e concentrou-se sob pressão reduzida.

Submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna de gel

TM de sílica (Wakogel C-300, metanol a 10 ^-clorofórmio) para se obterem 620 mg de (2S,HR)-N-terc-butoxicarbonil-M-terc--butildiraetilsiloxi-2-(N-metilazetidin-3-il)-pirrolidina, com um rendimento de 70 % . 520 IV(KBr)cm_1: 1700, 1400, 1250, 1170 2)

PNZ

Os processos como descritos nos Exemplos de Referência 38-6), 7), 8), 9), 10), foram aplicados utilizando-se o composto obtido pela reacçâo descrita ante-riormente, 620 mg (1,68 mmole) para se obter o composto iden tificado anteriormente na quantidade de 195 mg. IV(KBr)cm-^: 1700, 1520, 1350, 1110 EXEMPLO DE REFERÊNCIA 43

Cloridrato de (2S,4S)-2-(N-etilazetidin-3-il)-4-mercapto-N--(p-nitrobenziloxicarbonil)pirrolidina 1) 521 TBDMSO,

N.

Et

PNZ O processo como descrito no Exemplo de

Referência 42-1) foi realizado utilizando-se 400 mg de (2S, 4R)-2-(azetidin-3-il)-N-terc-butoxicarbonil-4-terc-butil-dimetilsiloxipirrolidina, obtida pela reacçSo descrita no Exemplo de Referência 41-12) para se obterem 280 mg de (2S, 4R)-N-terc-butoxicarbonil-4-butildimetilsiloxi-2-(N-etil-azetidin-3-il)-pirrolidina, com um rendimento de 65 % . IV(KBr)cm”1: 1700, 1400, 1250, 1170

HS

PNZ 2) 522

Os prucessus como descritos no Exemplo de Referência 38-6), 7), 8), 9), 10), foram realizados utilizando-se o composto obtido de acordo com a reacçSo descrita anteriormente (280 mg, 0,73 mmoles) para se obter o composto identificado supra (113 mg). IV(KBr)cm 1: 1700, 1520, 1350, 1110

Claims (19)

1 REIVINDICAÇÕES 1.- Processo para a preparação de compostos de fõrmu la geral HO ?,

na qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo me tilo; R^ representa um átomo de hidrogénio ou uma carga negativa; 2 R2 e ^3' ^-Suais ou âiferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, formimidoilo ou acetoimi-doilo ou um grupo de fórmula geral -COOR^, -conír5)r6, -jj(r5)r6, -ch2coor4, -ch2n(r5)r6 ou -CH2CON(R5)Rg em que R4 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior e Rg e Rg, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou Rg e Rg formam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto adjacente, um grupo heterocíclico es colhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, pir-rolidinilo ou piperidilo; A representa um grupo de fórmula geral =NR^, =N+(R7)Rg, -CON(R7)-, -CON(R7)CO-, -CON(R?)CON (Rg )-, -N(R7)CO(CH2)sN(Rg)-, -N(R7)CO(CH2)sCON(Rg)-, —CON (R?) N (Rg ) ou -N(R?) (CH2)gN{Rg)- em que R? e Rg , iguais ou diferentes representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi--alquilo inferior, formimidoilo ou acetoimidoilo ou um grupo de fórmula geral -COOR4, -CON(Rg)Rg, -N(Rg)Rg, -CH2COOR4, -CH2N(Rg)Rg OU -CH2CON(Rg ) Rg e s representa um número inteiro de 1 a 3; p representa zero ou um número inteiro de 1 a 3; e q e r, iguais ou diferentes, representam, cada um, 3 zero ou um número inteiro de la 5, com a condição de q e r não representarem simultaneamente zero e q + r ser igual ou inferior a 6, ou dos seus sais ou ésteres aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmula geral

COOR (II) 14 na qual R tem os significados definidos antes; R13 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical hidroxi; e r14 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical carboxilo, ou um seu derivado reactivo com um composto de fórmula geral HS

'30 “15 (III) na qual R^g representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector do radical imino; 4 1*20 e ^3 0/ iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior eventualmente prote gidc, formimidoilo eventualmente protegido ou ace-toimidoilo eventualmente protegido ou um grupo de fórmula geral -COOR4Q, -CON(R5Q)Rg0, -N(R50)Rg0, -CH2COOR40, -CH2N(RS0)Rg0 ou -CH2CON(R5q)R6q em que R40 representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior ou um grupo protector do radical carboxilo e R^g e Rgg, iguais ou diferentes, repre sentam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior ou um grupo protector do radical amino ou um grupo protector do radical imino ou R5Q e Rgg formam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto adjacente, um grupo heterociclico escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, pirrolidinilo ou piperidilo; B representa um grupo de fórmula geral =NR^g, + =N(R70)R80, -con(r70)-, -CON(R70)CO-, -CON(R70)CON(Rg0)-, -N(R70)CO(CH2)sN(R80)-, -N(R70)CO(CH2)sCON(R80)-, -CON(R7q)N(R80)- ou -N(R7q) (CH2)sN(R8q) em que R7q e Rgg, iguais ou di ferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior eventualmente protegido, formimidoilo 5 eventuaImante protegido cu acetoinidoilo eventualmente protegido, um grupo protector do radical imi no ou um grupo de fórmula geral -COOR4Q, -CON(R50)R60, -N(RS0)R60, -ch2coor40, -CH2N(RS0)R60 ou -CH2CON(Rjq)RgQ e s representa um número inteiro de 1 a 3; e p, q e r têm os significados definidos antes, para se obter um composto de fórmula geral

* '30 (IV) na qual R, R13, R14, R15, R20' r30' b' P' <3 e r têm os si2 nifiçados definidos antes, e de se remover, eventualmente, qualquer grupo protector desse composto.

2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral HO 3

C-a) C 6 na qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo; representa um grupo de fórmula geral =NRg, -CON(R^0) ou -CON(R1q)CO- em que Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, formimidoilo ou acetoimidoilo e R^q representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, e m e n, iguais ou diferentes, representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 3, com a condição de m e n não representarem simultaneamente zero, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

3.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral

na qual R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo me tilo; representa um grupo de fórmula geral =NRr . 7 -CQN(R^q)- ou -CON(R^q)CO-, em que Rg representa um átcmo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, formimidoilo ou acetoimidoilo e R^g representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, e m, n e p, iguais ou diferentes, representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 3, com a condi ção de m e n não representarem simultaneamente zero, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

4.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral HO R

(CH2)s (2-c) na qual R representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo metilo; R^ representa um átomo de hidrogénio ou uma carga negativa; A2 representa um grupo de fórmula geral =Ni:g.. + = N(Rl:L)R12, -CON(R10)- ou -CON(R10)CO- em que Rg 8 representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, formimidoilo ou acetoimidoilo, R^q representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo in ferior e e R^» ou diferentes, represen tam, cada um, um grupo alquilo inferior; e m, n e p, iguais ou diferentes, representam, cada um, zero ou um número inteiro de 1 a 3, com a condi ção de m e n não representarem simultaneamente zero, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

5.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual A representa + um grupo de fórmula geral =NR7, sNÍR^Rg, -CON(R7)-, -CON(R7)CO-, -CON(R7)CON(Rg)-, -N(R?)COCH2N(Rg) -, -CON(R?)N(Rg)-ou -N(R7) em que R7 e Rg, iguais ou diferentes, re presentam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo in ferior, hidroxi-alquilo inferior, formimidoilo ou acetoimidoilo ou um grupo de fórmula geral -COOR4, -CON(R5)Rg, -N(Rg)Rg, -CíÍ2COOR4, -CHjNÍRgJRg ou Ci^CONtRgiRg em que R4 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior e Rg e Rg, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogé nio ou um grupo alquilo inferior ou R- e Rg formam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto adjacente, um grupo hete 9 rocíclico escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, pirro lidinilo ou piperidilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

6. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual A representa um grupo de fórmula geral =NR?, N(R7) Rg ou -CON(R7)- em que R7 e Rg, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo inferior, hidroxi-alquilo inferior, formimidoilo ou acetoimidoilo ou um grupo de fórmula geral -COOR4, -CON(R5)Rg, -N(Rs)Rg, -CH2COOR4, -CH2N(Rs)R6 OU -CH2CON (Rg) Rg em que R4 representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior e Rg e Rg, iguais ou diferentes, represen tam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo inferior ou Rg e Rg formam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto adjacente, um grupo heterocíclico escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinilo, pirrolidinilo ou piperidilo, carac terizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

7. - Processo de acordo com as reivindicações 2 ou 3, para a preparação de compostos de fórmula geral I-a ou I-b em que A^ representa um grupo de fórmula geral =NRg ou -CON(R1Q)-, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos. 10

8. - Processo de acordo com a reivindicação 4, para a preparação de compostos de fórmula geral I-c na qual A2 repre-senta um grupo de fórmula geral =NRg, =N(R^)R12 ou -CON(R^g)-, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

9. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R2 e R^, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um grupo carbamoílo, alquil(inferior)-carbamoílo, di-alquil (inferior)-carbamoílo ou amino, caracterizado pelo fac to de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente subs tituídos.

10. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual p representa zero, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

11. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual p representa o número inteiro 1 ou 2, caracterizado pelo facto de se utiliza rem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

12. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o grupo de fórmula geral

’ '3 representa um substituinte escolhido entre grupos aziridinilo, azetidinio, 2-carbamoilazetidinilo, 2-oxoazetxdi-nilo, N-metil-2-oxoazetxdinxlo, pirrolidinilo, N-metilpirroli-dinilo, Ν,Ν-dimetilpirrolidinio, 2-oxopirrolxdxnilo, 2.5- dioxopirrolidinilo, N-(2-hidroxietil)pirrolidinilo, 2.5- dioxo-N-metilpxrrolidinilo, 2-carbamoilpirrolidinxlo, 2-(N--metilcarbamoil)pirrolidinil, 2-(Ν,Ν-dxmetxlcarbamoil)pirrolxdi nilo, 3-amxno-2-oxopirrolidinilo, pirazolidinilo, 3-oxopirazo-lidinilo, iraidazilidinilo, 2,4-dioxoimidazolidinilo, piperazi-nio, 2-oxopiperazinxlo, piperidxlo, N-metxlpiperidilo, N,N-dimetilpxperidinio, 2-oxopiperidilo, 2,6-dxoxopiperidilo, 2-carbamoilpiperidilo, hexa-hidroazepinxlo, N-metil-hexano--hidroazepinilo, N,N-dxmetil-hexa-hidroazepinio, hexa-hidro-2--oxazepinilo, 2,7-dioxo-hexa-hidroazepinxlo, 2-carbamoil-hexa--hidroazepinilo, hexa-h.idro-lH-l,4-dia2epinilo, hexa-hxdro-2--oxo-lH-1,4-diazepinilo, octa-hxdroazocinilo, N-metilocta-hi-droazocinilo ou N,N-dimetilocta-hidroazocinio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais cor respondentemente substituídos. 12

13.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o grupo de fórmula geral 12 /·/... ' _Τ’— —vCr.·}/; -" · ff* "3 representa um substituinte escolhido entre grupos 2-oxoazetidinilo, pirrolidinilo, N,N-dimetilpirrolidinio, 2--carbamoilpirrolidinilo, 3-amino-2-oxopirrolidinilo, 2-oxopir-rolidinilo, piperidilo ou 2-oxopiperidilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

14.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o grupo de fórmula geral

"3 —(C representa um substituinte escolhido entre grupos aziridinilmetilo, azitidinilmetilo, 2-carbamoilazetidinilmetilo, 2-oxoazetidinilmetilo, N-metil-2-oxoazetidinilmetilo, pirroli-dinilmetilo, N-metilpirrolidinilmetilo, N,N-dimetilpirroli-diniometilo, 2-oxopirrolidinilmetilo, 2,5-dioxopirrolidinilmetil, 13 N- (2-hidroxietil) pirrolidinilmetilo, 2,5-dioxo-N-metilpirroli-dinilmetilo, 2-carbamoilpirrolidinilmetilo, 2- (N-metilcar-bamoil) pirrolidinilmetilo, 2- (N,N-dimetilcarbamoil)pirrolidinilmetilo, 3-amino-2-oxopirrolidinilmetilo, pirazolidinilme-tilo, 3-oxopirazolidinilmetilo, imidazolidinilmetilo, 2,4--dioxoimidazolidinilmetilo, piperazinilmetilo, 2-oxopiperazi-nilmetilo, piperidilmetilo, N-metilpiperidilmetilo, N,N-dime-tilpiperidiniometilo, 2-oxopiperidilmetilo, 2,6-dioxopiperi-dilmetilo, 2-carbamoilpiperidilmetilo, hexa-hidroazepinilmeti-lo, N-metil-hexa-hidroazepinilmetilo, N,N-dimetil-hexa-hidroaze piniometilo, hexa-hidro-2-oxoazepinilnietilo, 2,7-dioxo-hexa--hidroazepinilmetilo, 2-carbamoil-hexa-hidroazepinilmetilo, hexa-hidro-lH-1,4-diazepinilmetilo, hexa-hidro-2-oxo-lH,l,4--diazepinilmetilo, octa-hidroazocinilmetilo, N-metilocta-hi-droazocinilmetilo ou Ν,Ν-dimetilocta-hidroazociniometilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais cor respondentemente substituídos.

15.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o grupo de fórmula geral (Cr \/c·. :^2 14 representa um substituinte escolhido entre grupos 2-oxoazetidinilmetilo, pirrolidinilmetilo, Ν,Ν-dimetilpirroli-diniometilo, 2-carbamoilpirrolidinilmetilo, 3-amino-2-oxopirro lidinilmetilo, 2-oxopirrolidinilmetilo, piperidilmetilo ou 2-oxcpiperidilmetilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

16.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de ácido(5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[ (2S,4S)-2-(2-pirrolidon--4-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico? ácido(IR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2S,4S)-2--(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3--carboxllico; ácido(5R,6S)-6-t(R)-1-hidroxietil]-2-( (2R,4S)-2-(2-pirrolidon--4-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(IR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2R,4S)-2--(2-pirrolidon-4-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3--carboxílico; ácido(5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-azetidinon-4-il)pirrolidin-4--iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(lR,5S/6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-azetidinon-4-il)pirrolidin-4--iltio]-6-[ (R) -1-hidroxietil]-l-metil-l-carbapen-2-em-3-carbo-xílico; 15 ácido(5R, 6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2R,4S)-2-(2-pirrolidon--3-ilmetil)pirrolidin—4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carbox£lico; ácido(IR,5S,6 S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2R,4S)-2--(2-pirrolidon-3-ilmetil)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em--3-carbcxíl ico; ácidc(5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2-azetidinon-3-ilmetil)pirrolidin--4-iltio] -6- [ (R) -1-hidroxietil]-l-carbapen-2-em-3-carbox£lico; ácido(IR,5S,6S)-2-[(2R,4S)-2- (2-azetidinon-3-ilmetil)pirrolidin-4-iltio] -6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-l-carbapen-2-em-3--carboxílico; ácido (5R, õS) -6- [ (R) -1-hidroxietil] -2- [ (2S,4S) -2- (pirrolidin--3-il) pirrolidin-4-iltio] -l-carbapen-2-em-3—carbox£lico; ácido (IR, 5S,6S)-6- [ (R)-1-hidroxietil] -l-metil-2- [ (2S,4S)-2- - (pirrolidin-3-il) pirrolidin-4-iltio] -l-carbapen-2-em-3-carbo- xllico; ácido (5R, 6S)-6-[(R)-l-hidroxietil] 2- [ (2S,4S) -2- (N-metilpirrolidin--3-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carbox£lico; ácido(IR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2S ,4S) -2- - (N-metilpirrolidin-3-il) pirrolidin-4-iltio] -l-carbapen-2-em--3-carboxIlico; (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(N,N-dimetil-3-pirrolidinio)pirrolidin-4--iltio] -6- [ (R) -1-hidroxietil] -l-carbapen-2-em-3-carboxilato; (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2- (N,N-dimetil-3-pirrolidinio)pirrolidin--4-iltio] -6-C(R)-1-hidroxietil]-l-metil-l-carbapen-2-em-3-car-boxilato; 16 ácido(5R, 6S) -6- [(R)-1-hidroxietil]-2- [(2S,4S)-2-(N-metil-2--azetidinon-4-il) pirrolidin-4-iltio] -l-carbapen-2-em-3-carbo-xílico; ácido(lR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2S,4S) -2--(N-metil-2-azetidinon-4-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2--em-3-carboxílico; ácido(5R,6S)-6-[ (R)-1-hidroxietil]-2-[ (2S,4S)-2-(N-metil-2,5--dioxopirrolidin-3-il) pirrolidin-4-iltio] -l-carbapen-2-em-3--carboxílico; ácido(IR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2S,4S) -2--(N-metil-2,5-dioxopirrolidin-3-il)pirrolidin-4-iltio] -1--carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido (5R/6S)-2-[(2S,4S) -2- (2,5-dioxopirrolidin-3-il) pirrolidin--4-iltio] -6- [ (R) -1-hidroxietil] -l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido (lRf 5S/6S) -2- [ (2S,4S)-2- (2,5-dioxopirrolidin-3-il)pirroli-din-4-iltio] -6- [ (R)-1-hidroxietil] -l-metil-l-carbapen-2-em-3--carboxílico; ácido (5R, 6S) -6- [ (R)-1-hidroxietil] -2- ( (2S,4S) -2- (3-pirazolidincn--5-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(IR,5S,6 S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-((2S,4S) -2--(3-pirazolidinon-5-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3--carboxilico; ácido(5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2S,4S)-2-(2-pirrolidon--3-il) pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(IR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-((2S,4S)-2- 17 -(2-pirrolidon-3-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carbo xílico; ácido(5R, 6S) -2- [(2S,4S)-2-(2-carbamoilpirrolidin-4-il)pirroli-din-4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-carbapen-2-em-3-carboxIli-co; ácido(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2- (2-carbamoilpirrolidin-4--il)pirrolidin-4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-l--carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(5R,6 S)-2-[(2S,4S)-2-(3-amino-2-pirrolidon-4-il)-pirrolidin--4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico? ácido(IR,5S/6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-amino-2-pirrolidon-4-il)pirroli-din-4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-l-carbapen-2-em-3--carboxílico; ácido (5R, 6S) -6- [ (R) -1-hidroxietil] -2- [ (2R,4S) -2- (pirrolidin--3-ilmetil) pirrolidin-4-iltio] -l-carbapen-2-em-3-carboxíiico ; ácido (lR,5S/6S)-6- [ (R) -1-hidroxietil] -l-metil-2- [ (2R,4S) -2--(pirrolidin-3-ilmetil)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3--carboxílico; ácido (5R,6S) -2- [ (2R,4S) -2-[ (2S)-2-carbamoilpirrolidin-4--ilmetil] pirrolidin-4-iltio] -6-1 (R) -1-hidroxietil] -1-carbapen--2-em-3-carboxílico; ácido (IR, 5S, 6S) -2- [ (2R, 4S) -2- [ (2S) -2-carbauaoilpirrolidin-4--ilmetil] pirrolidin-4-iltio]-6-[(R) -1-hidroxietil]-1-metil-l--carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2R,4S)-2-[(2S)-2-(N- 18 -metilcarbamoil) pirrolidin-4-ilmetil] pirrolidin-4-iltio] -1--carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(IR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2R,4S) -2- - [ (2S) —2— (N-metilcarbamoil)pirrolidin-4-ilmetil] pirrolidin-4--iltio]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2R, 4 S)-2-[(2S)-2-(N,N--dimetilcarbamoil)pirrolidin-4-ilmetil] pirrolidin-4-iltio] -1--carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido (IR, 5S,6S) -6-( (R) -1-hidroxietil] -l-metil-2- [ (2R/4S) -2- - [ (2S) -2- (N,N—dimetilcarbamoil)pirrolidin—4-ilmetil] pirrolidin--4-iltio] -l-carbapen-2-em-3-carboxilico; ácido(5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5- -il) pirrolidin-4-iltio] -6- [ (R)-1-hidroxietil] -l-carbapen-2-em- -3-carboxllico; ácido(IR,SS,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5- -il) pirrolidin-4-iltio] -6 [ (R)-1-hidroxietil] -1-metil-l-carbapen- -2-em-3-carboxílico; ácido(5R,6S)-2-[(2R,4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5--ilmetil) pirrolidin-4-iltio] -6- [ (R) -1-hidroxietil] -1-carbapen--2-em-3-carboxílico; ácido(IR,5S,6S)-2-[ (2R, 4S)-2-(2,4-dioxoimidazolidin-5--ilmetil)pirrolidin-4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil] -1-metil--l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(5R,6S)-2-[ (2R,4S)-2-(2,5-dioxopirrolidin-3- -ilmetil) pirrolidin-4-iltio] -6- [ (R) -1-hidroxietil] -1-carbapen- 19 -2-em-3-carboxIlico; ácido(IR,5S,6 S)-2-[(2R,4S)-2-(2,5-dioxopirrolidin-3--ilmetil)pirrolidin-4-iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-1-metil-l--carbapen-2-em-3-carboxílico; ácido(5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-oxopiperazin-5-il)pirrolidin-4--iltio]-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ác ido(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-oxopiperaz in-5-il)pirrolidin--4-iltio]-6- [ (R)-1-hidroxietil]-l-metil-l-carbapen-2-em-3--carboxílico; ácido(5R,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-2-[(2S,4S)-2-(piperidin-4--il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carboxílico; ou ácido(IR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2Sr4S)-2--(piperidin-4-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carbo-xílico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

17.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de ãcido(lR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2S,4S)-2--(pirrolidin-3-il)pirrolidin-4-iltio]-l-carbapen-2-em-3-carboxí lico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos. 20

18. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de ácido(IR,5S,6S)-6-[(R)-1-hidroxietil]-l-metil-2-[(2S,4S) -2--piperidin-4-il) pirrolidin-4-iltio] -l-carbapen-2-em-3-carboxíli co, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

19. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas com acção antibacteriana, caracterizado pelo facto de se misturar, como ingrediente activo, uma quantidade eficaz de um composto de fórmula geral I preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1 ou de um seu sal ou éster aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, com um veículo ou um diluen-te aceitáveis em farmácia. Lisboa, 26 de Março de 1991