PT90099B

PT90099B - Processp aara a preparacao de 2',3'-di-dehidronucleosidos

Info

Publication number: PT90099B
Application number: PT90099A
Authority: PT
Inventors: Henry G Howell; John C Martin; Muzammil M Mansuri; John E Starrett Jr; Carl E Fuller
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1988-03-24
Filing date: 1989-03-23
Publication date: 1994-07-29
Also published as: DK146489A; FI891338A0; FI891338A; FI93111C; KR0140889B1; PT90099A; KR890014528A; EP0334368A2; IL105573A; DK146489D0; EP0334368A3; NO171367C; NO891208D0; JPH02149595A; NZ228390A; EG18661A; NO891208L; KR0142109B1; IL89693A; CA1339448C

Description

DESCRIÇÃO

DA

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 90 099

REQUERENTE: BMS NAME CHANGE SUB CO.,norte-americana,com sede em 345 Park Avenue, New York, New York 10154, Estados Unidos da América.

EPÍGRAFE: » PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE 2 * , 3’-DI-DESOXI-2*,3’ -DI-DEHIDRONUCLEOSIDOS .

INVENTORES: John E. Starrett, Jr., Muzammil M.Mansuri,

John C. Martin, Cari E. Fuller e Henry G. Howel.

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883. Estados Unidos da América, em 24 de Março de 1988, sob o n^e. 173,473.

INPI MOO 113 RF 16732

r.

Patente de invenção N9 90.099

Processo

BRISTOL-MYERS COMPANY para a preparação de 2', 3' -di-desoxi ' -di-dihidronucleosidos

BRISTOL-MYERS COMPANY

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE 2 ¹ ,3 ¹-DI-DESOXI-2' , 3 ¹-DI-DEHIDRONUCLEOSIDOS

Antecedentes da Invenção

A presente invenção diz respeito a processos melhorados para preparar 2' ,3 '-didesoxi-2¹ ,3 ¹ -didesidronuc1eosidos .

Descrição dos antecedentes e referências relacionadas síndroma da imunodeficiência adquirida (SIDA) resulta de uma infecção provocada pelo(s) vírus da i munodefi ciência humana (HIV)\ Este retrovírus apresenta um tropismo esoecífico para as células T indutoras/auxi1iares conduzindo a sua deplecão. A imunodeficiência resultante predispõe doentes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (ΗIV) para infecções oportunistas que DÕem em perigo a sua vida.

Embora até ao presente não exista cura oara a SIDA, um derivado nucleõsídico a 3azido-3¹-desoxitimidina (AZT, Retrovir ^), provou jã,em ensaios clínicos, ser um agente eficaz no tratamento da SIDA, tendo a sua utilização nos doentes afectados 3 por esta doença sido autorizada pelo organismo oficial apropriado. Tem sido referido um grande numero de outros agentes químicos e biológicos que apresentam acção biológica contra o HIV. Os compostos seguintes foram todos referidos como sendo

-2activos contra o HTV: 2',3¹-didesoxicítidina (ddC), 2',3'-dides2 xiadenosina (ddA)\ 2¹,3'-didesoxi-2',3'-didesidrocitidina (d4c)^ suramina e os seus análogos^, ribavarin?, foscarnet® , HPA-23^ , d-penici1aminaθ , castanospermina^ , ácido fusídico^, 3'-azido13 14 guanosina (AZG) e 3 '-fluoro-3'-desoxiti mi dina (FDDT)

Na literatura especializada tem aparecido um certo nume ro de relatórios que demonstram que a 2 ' , 3 ' -d i des o x i-2 ¹ ,3 ' -d i de?

sidrotimidina (d4T) actua, i n vitro, contra o HTV em diversas i nhas de celulas

Horwitz et al. preparavam, por duas vias diferentes, a ¹ ,3 '-didesoxi-2' , 3'-didesidrotimi dina (d4T) 16,17^

A primeira destas vias de síntese consiste em submeter o derivado 3',5'-anidro da timidina a uma reacção de eliminação. A segunda destas vias consiste em submeter o derivado núcleos ídi co 2,3'-anidro 5 '-0-protegido da timidina a uma reacção de eliminação mediante a abertura do núcleo.

A utilização de nucleosidos anidros como comoostos intermédios na síntese de nucleosidos estã bem documentada na 1it£ , 1θ ratura especializada do domínio técnico em que se insere a presente invenção.

Com a descoberta recente da capacidade da 2 ' ,3 '-didesoxi-2 ' , 3 '-di des i droti midi na (d4T) para actuar como agente anti-HIV tornou-se importante um processo que permite a preparação económica a escala industrial de 2',3'-didesoxi-2',3'-didesidro-3nucleosidos, incluindo o d4T.

A via de Horwitz para preparar o d4T a partir do composto 3 ¹ ,5 '-ani dro^ ^não ê viável 5 escala industrial porque a eliminação completa do grande volume de dimeti1 sulfõxido utilizado no processo de Horwitz e muito difícil de conseguir, exigindo um va. zio alto (0,01 mmHg e aquecimento até uma temperatura comoreeji d ida entre cerca de 40° e 50°C) durante um longo período. Estas condições conduzem ã cisão da ligação glicosTdica,obtendo-se timina como produto secundário indesejável. Também contactos pr£ longados com um meio alcalino, necessário quando os dissolventes não são o dimetiIsulfõxido, mas são, por exemplo, o tetra-hidrofurano ou a dimetilformamida, conduzem ã decomposição da d4T, obtendo-se, também, timina como produto secundário indesejável.

A técnica alternativa de Horwitz exige a protecção do grupo oxidrilo em posição 5' antes da formação do 2,5 '-ani dronu. cleosido. Este 2,5 '-anidronuc1eosido pode cindir-se,obtendo-se um nucleósido 5'-0-protegido.

2,3'-anidronucleosido pretendido pode preparar-se directamente fazendo reagir a timidina com a di eti 1-(2-cl oro-1 ,1 1 9

-2-trif1uoroeti1)-amina

Sumário da invenção

A presente invenção diz respeito a um processo para a pre paração de 2¹,3'-didesoxi-2',3'-didesidronucleosidos de formula geral

com rendimentos elevados numa escala relativamente larga.

Descrição pormenorizada da invenção

Na generalidade, a presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de 2 ' ,3 '-didesoxi-2' ,3 *-didesidronu cleosidos de fórmula geral

o grupo alcalino representa uma base eventualmente subs tituTda escolhida entre a pirimidina, a aza-pi ri midina

-5e a desaza-pirimidina;

X representa um átomo de azoto ou um grupo C-H;

Y representa um átomo de azoto ou um grupo de fórmula geral C-Rg, na qual R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo que comporta eventual mente como subs tituinte um átomo de halogéneo e tem a fórmula geral ^n^R2n^’ ^na 9^ua^ ⁿ representa um numero inteiro de 1 a 3 e A representa um átomo de hidrogénio, flúor, cloro, bro mo ou iodo; ou um grupo alcenilo que comporta, eventualmente, como substituinte um átomo de halogéneo e tem a fórmula geral -(CH^J-CHsCHA, na qual m representa zero ou um número inteiro de 1 a 3 e A tem o significado defj_ nido antes;

Z representa um átomo de azoto ou um grupo C-H; e representa um grupo OH ou NH^;

que consiste em:

a) converter um 2'-desoxinuc1eosido de fórmula geral

HO_

N

HO

6na qual

X, Y, Z e têm os significados definidos antes, num 3¹,5¹-anidro-2¹-desoxinucleosido intermédio reactivo de fõr mula geral na qual

X, Y, Z e R^ têm os significados definidos antes, e b, converter, na presença de uma base forte, o 3',5'-anidro-2'-desoxinucleosido reactivo preparado na fase a) no 2¹,3'-didesoxi-2¹,3'-didesidronucleosido pretendido; em que o aperfeiçoamento consiste em:

i) fazer reagir o 3',5'-anidro-2'-desoxinucleosido , citado antes, com uma base forte escolhida entre K0tBu,\n-butil-lTtio, hidreto de sódio e LDA, na presença de um d is. solvente polar escolhido entre dimetilsulfoxido, tetra-hidrofurano , dimeti1formamida , DME ou misturas destes

-7dissolventes;

ii) triturar o sal resultante na presença de um dissolvente orgânico;

iii) extrair o sal intermédio bruto sob a forma de um sólido a partir da fase i i) ;

iv) dissolver em água o sal preparado em iii);

v) neutralizar o sal resultante da fase iv); e vi) em obter a.base livre do nucleósido sob a forma de um sõ lido.

Num outro aspecto, a presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de 2',3'-didesoxi-2¹ ,3'-didesidronuc1eosidos de fórmula geral

na qual o grupo alcalino é uma base eventua1mente substituída, escolhida entre a pirimidina, a aza-pirimidina e a desa *8 * za-pirimidina;

X representa um átomo de azoto ou um grupo C-H;

Y representa um átomo de azoto ou um grupo de fórmula geral C-R,-,na qual R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo que comporta eventua1mente como substituinte um átomo de halogêneo e tem a fórmula geral C_n^2n^* ^na 9^ua^ ⁿ representa um numero inteiro de 1 a 3 e A representa um átomo de hidrogénio, flúor, cloro, bro mo ou iodo; ou um grupo alcenilo comportando, eventualmente, como substituinte um átomo de halogêneo e com a fórmula geral C_nH_nA, na qual n representa um número inteiro de 1 a 3 e A tem o significado definido antes;

Z representa um átomo de azoto ou um grupo C-H: e

R₄ representa um grupo OH ou NH^;

que consi ste em:

a) converter um 2 '-desoxinuc1eosido de fórmula geral

HO

-9na qual

X, Y, Z e tem os significados definidos antes, num 2,3 '-anidro-2'-desoxinucleosido intermédio reactivo de fõr mula geral

na qual

X, Y, Z e R^ têm os significados definidos antes, e

b) em converter, na presença de uma base eventualmente nucleofTlica, 0 2,3'-anidro-2'-desoxinucleosido preparado na fase a), citada antes, em um 2¹ ,3¹-didesoxi-2 ' ,3'-di desidronucleosido.

Ainda num outro aspecto, a presente invenção diz resoei to a um processo para a preparação de 2',3¹-didesoxi-2¹,3'-dide

-10sidronucleosidos de fórmula geral

na qual representa uma base escolhida entre a nurina, a aza-pu rina_r a desaza-purina, a pirimidina, a aza-pirimidina, a desáza-pirim dina e bases que comportam um núcleo triazõlico, que consiste em:

a) fazer reagir um ribonucleosido inicial de fórmula ge ral

na qual

B tem o significado definido antes, com ortoformato de trimetilo na presença de um dissolvente polar em condições anidras, para se obter um composto intermédio reactivo de fórmula geral

V ' '

na qual tem o significado definido antes;

(b) submeter o composto intermédio oreparado na fase (a) a uma reacção de eliminação mediante tratamento com P-T_s0H no seio de anidrido acético, a uma temoe ratura elevada compreendida entre cerca de 120° e 160°C durante cerca<lde 4 a 8 horas;

e (c) em desproteger o grupo 5¹-OAc resultante mediante uma hidrólise alcalina moderada.

Ainda num outro aspecto geral, a presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de 2¹,3'-didesoxi-2' ,3' -didesidronucleosidos de fórmu1 a geral

-12na qual

B representa uma base escolhida entre a purina, a aza-purina, a desaza-purina, a pirimidina, a aza-pirimidina, a desaza-pirimidina e bases comportando um núcleo t r i a z õ 1 i c o , que consiste em:

(a) fazer reagir um ribonucleosido inicial de formula geral

na qual

B tem o significado definido antes, com um reagente que comporta grupos protectores do radical hidrq xi capaz de proteger selectivamente o grupo 5'-hidroxi (gruoo hidroxi primário);

(b) fazer reagir um ribonucleosido que comoorta um grupo 5¹-OH protegido preparado na fase (a) com um reagente escolhido entre 1,1-tiocarbodiímidazol e tiofosgénio em condições anidras, para se obter um

-13comoosto intermédio reactivo de fórmula geral

na qual

B tem o significado definido antes;

(c) submeter o composto intermédio preparado na fase (b) a uma reacção de eliminação mediante tratamento com PfOEt)^ no seio de um dissolvente oolar a uma temperatura elevada compreendida entre cerca de 140° e

175°C durante um Deríodo compreendido entre 30 minu tos e 4 horas; e (d) em desproteger o gruoo 5¹-0-protector resultante me diante uma hidrólise ácida moderada.

Num outro aspecto geral, a presente invenção diz resneito a um processo para a oreparação de 2¹,3'-didesoxi-2',3'-didesidronucleosidos de formula geral

na qual

B representa uma base escolhida entre a purina, a aza-purina, a desaza-purina, a pirimidina, a aza-oirimidi na, a desaza-Dirimidina e bases comportando um núcleo triazõlico, que consiste em:

(a) fazer reagir um rfbonucleosido inicial de fórmula geral

na qual

B tem o significado definido antes, com um brometo de aci1oxiisoButiri 1 o, de preferência Brometo de

-152-acetoxiisobutiri 1 ο, no seio de um dissolvente polar sob condições anidras, a uma temperatura elevada compreendida entre cerca de 75° e 100°C durante 1 a 3 horas para se obter um composto intermédio reactivo de formula geral

na qual

R representa um grupo aci1oxiisobutiri 1 o,

R' reoresenta o gruDO acilo do brometo de aci1oxiisobut i r i 1 o , e

B tem o significado definido antes;

Cb) submeter o composto intermédio orenarado na fase (a) a uma reacção de eliminação mediante tratamento do referido composto intermédio no seio de um dissolvente polar aprõtico, com um reagente de Zn/Cu, para se obter um composto de formula geral

RO

16na qual

R e B têm o significado definido antes, (c) em desproteger o grupo 5'-0-protector no composto intermédio preparado na fase (b) mediante reacção com uma base fraca, de preferência uma solução meta nõlica de amoníaco,para se obter um derivado de 2' ,3'-didesoxi-2',3'-didesidronucleosido.

Como se desrceveu antes, a presente invenção diz resoeito a duas variantes de um processo para a oreparação de 2',3'-dide· soxi-2',3¹-didesidronuc1eosidos em que o composto inicial ê um 2 ¹-desoxinucleosido e em que B representa uma base derivada de uma das seguintes bases: oirimidina eventua 1 mente substituída, aza-pirimidina ou desaza-pirimidina, de nreferência pirimi iina eventual mente substituída. A base utilizada nestas duas variantes é, com maior preferência,a pirimidina eventua1mente substituída citada antes que corresponde ã fórmula e descrição aorese£ tadas segui damente relativamente a bases pirimidínicas aoropriadas eventua1 mente substituídas. Correspondendo ainda a uma maior preferência, a base e, nestas duas variantes, escolhida entre a timina (5-meti1 -2,6-di-hidroxipirimidina) , a citosina (2-hidroxi-6-aminopirimidina) , o uracilo (2,6-di-hidroxi-pirimi dinaJ e o

5-etil-, 5-vinil-, 5-ha 1ogenovini1 -, 5-halogenometi1 - e 5-haloge noeti1-2,6-di-hidroxipirimidina-3-i1 o. Entre todas,a base que se prefere utilizar nestas duas variantes ê a timina.

-17Como se descreveu antes, a presente invenção diz respeito a três variantes de um processo para a preparação de 2',3'-didesoxi-2¹,3'-didesidronuc1eosidos em que o composto inicial e um ribonucleosido e B reoresenta uma base escolhida entre purina aza-purina, desaza-purina, pirimidina, aza-oirimidina, desaz a -pirimidina e as bases que comportam um núcleo triazõlico todas eventualmente substituídas. A base ê escolhida, de preferência, entre a purina e a pirimidina. Mais preferivelmente,a base escolhida ê uma base pirimidínica, incluindo o uracilo e a timina.

Bases purínicas aprooriadas eventualmente substituídas incluem as bases purínicas representadas Dela fórmula estrutural

na qual e , iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou de halogêneo como, oor exemplo, um átomo de flúor, cloro ou bromo ou um grupo hidroxi, amino, monoa 1 qu i 1 ami no , d i al_ quilamino, alcoxi ou ciano em que o radical al quilo ê escolhido entre grupos alquilo C^_₃·

Bases pirimidínicas apropriadas eventualmente substituí-18das incluem as representadas pela fórmula estrutural

na qual p

representa um grupo hidroxi, amino ou sulfidrilo;

R4 representa um ãtomo de hidrogénio ou um gruDO hidroxi, ami n0 ou sulfidrilo;

Rg representa um grupo hidroxi ou amino; e

Rg representa um ãtomo de hidrogénio ou um ãtomo de halogéneo escolhido entre flúor, cloro, bromo ou iodo, ou um grupo alquilo C-|_i , alcenilo ^2-3’ halogenoalcenilo C^_3 com 1 a 5 ãtomos de halogêneo, alcini_ 1° ^2-3’ ^a^^{cox1 em} 9^{ue 0} radical alquilo tem 1 a 3 ãtomos de carbono, ou ciano.

Quando derivados de bases purínicas, são gruoos caracterTsticos representados pelo símbolo B:

-196-aminopurin-9-ilo

2-aminopuriη-9-ilo

2,6-di ami nopuriη-9-ι1 o

2-amino-6-hidroxipurin-9-ilo (guani η-9-ι1 o)

6-hidroxipurin-9-ilo

Adiciona 1mente aos grupos ja mencionados, o componente representado pelo símbolo 3 pode ser um grupo 2-halogenopurin-9-ilo, 6-ha1ogenopuriη-9-i1 o ou 2,6-di-halogeno-nuriη-9-ilo,caso em que o componente bãsico não necessita de ser activado, por exemplo completamente si 1 i lado, para poder ser submetido a uma reacção de condensação ou de acoplamento na fase e).

Quando e derivado de bases pirimidTnicas , B pode represen ta r:

2,4-di-h i drox i p i ri mi d i n-1-i1 o

5-me t i 1 -2,4 -d i -h i d ro x i p i r i mi d i η -1 -1 1 o

5-etil-2,4-aminooirimidin-1-ilo

2-h i d roxi-4-ami nop i ri mi d i n-1-i1 o

5-vi ni1 - 2,4-d i-h id rox i pi ri mi d i n-1-i1 o

5-halogenovinil-2,4-di-hidroxipirimidin-l-ilo

5-halogenoetil-2,4-di-hidroxipirimidin-l-ilo

Os substituintes 5-metilo e 5-etilo citados antes são re presentativos dos substituintes 5-alquilo e o substituinte 5-vi nilo é representativo dos substituintes 5-alcenilo. Exemolos

-20de átomos de halogéneo incluídos no grupo 5-halogenovini1 o ou 5-halogenoalcenilo são, por exemplo, 1 a 4 átomos de flúor, cloro ou bromo.

Na variante do processo de acordo com a presente invenção mencionada em primeiro lugar, a primeira fase envolve a preparação de um 3',5'-a ηidro-2¹-desoxinuc1eosido intermédio a partir de um 2 '-desoxinuc1eosido inicial. Este composto intermédio conhecido obtêm-se fazendo reagir um 2¹-desoxinucleosido correspondente com quantidade suficiente de um reagente convencional capaz de activar o grupo protector do radical hidroxi como, por exemplo, cloreto de mesilo ou cloreto de tosilo, em condições convencionais, para obter como primeiro composto intermédio um 35'-O-grupo protector-2 '-desoxinuc1eosido e fazendo reagir este primeiro composto intermédio com uma base forte escolhida entre hidróxido de sódio e hidróxido de potássio no seio de um dissolven esco 1 hido entre ãgua e etanol. Embora se possa utilizar qualquer reagente bem conhecido e útil no domínio científico onde se inclui a presente invenção, caoaz de activar grupos Drotectores do radical hidroxi, o cloreto de mesilo ê o mais vantajosamente utilizado de acordo com a técnica de Horwitz et al.

A segunda fase desta variante envolve uma reacção de e 1 minação de um ãtomo de hidrogénio na presença de uma base forte utilizando um método convencional e na presença de um dissolvente polar que permite abrir o núcleo 3',5'-anidro e formar a ligação dupla 2'-eno para obter o 2¹,3¹-didesoxi-2¹,3¹-didesidron£ cleosido pretendido.

-21A presente invenção, na primeira variante do processo de acordo com a mesma, diz respeito a melhoramentos na selecção e manuseamento e processamento dos reagentes, compostos intermédios e produtos. Esta melhoria consiste em:

(i) fazer reagir o 3¹,5'-anidro-2¹-desoxinucleosido, ci tado antes, com uma base forte escolhida entre KOtBu, £-buti1-1Ttio, hidreto de sódio e LDA na presença de um dissolvente polar escolhido entre dimetilsulfóxido, tetra-hi drofurano , dimetilformàmida, DÍ1E ou as misturas destes dissolventes e, de preferência, a uma temperatura compreendida entre 18° e 80°C, ma is preferivelmente entre cerca de 18° e 22°C;

(ii1 triturar o sal resultante na presença de um dissolvente orgânico;

(iii) recolher o comoosto intermédio preoarado na fase (ii) sob a forma de um sal bruto sólido;

(iv) dissolver, na agua, o sal oreoarado na fase (iii);

(v) neutralizar o sal obtido na fase (iv); e (vi) obter o produto, sob a forma da base livre do nuclet) sido, no estado sólido.

Adicionalmente aos melhoramentos citados antes na fase (b), descobriu-se que, na fase (a), reduzindo o volume do disso}

-22vente na adição de hidróxido de potássio e concentrando depois a pasta, apôs neutralização, até cerca de 20% do seu volume original, os compostos intermédios pretendidos precipitam e podem separar-se por filtração enquanto o produto secundário, cloreto de potássio, permanece dissolvido no dissolvente. Isto faz com que não seja necessário tratar a mistura reaccional da fase (a), com pletamente evaporada, com acetona quente para separar o composto intermédio reactivo.

Uma alternativa para se obter os 2¹,3'-didesoxi-2',3'-didesidronucleosidos a partir dos 2'-desoxinucleosidos correspondentes seria partir do ribonucleosido corresoondente. Conse quentemente, descobriu-se que se pode tratar a uridina com ortoformato de trimetilo para se obter o éster orto corresoondente como composto intermédio reactivo.

Na fase (ii) da variante mencionada em primeiro lugar oo de utilizar-se como dissolvente qualquer dissolvente orgânico compatível com os reagentes e o sal intermédio obtido na fase (i). 0 dissolvente escolhe-se, de Dreferência, entre tolueno, acetona e acetato de etilo, de Dreferência o tolueno. A temperatura a que se realiza a trituração na fase (ii) estã, de prefe rência, compreendida entre cerca de 0° e 10°C, com maior preferência entre cerca de 0° e 4°C.

Na variante do processo de acordo com a presente invenção mencionada em segundo lugar, a orimeira fase inclui a preparação do composto intermédio reactivo conhecido, o 2,3'-anidro-2¹-desoxinucleosido,fazendo reagir um 2-desoxinucleosido inici-23al correspondente com uma base forte eficaz oara se obter um 2,3¹-anidro-2¹-desoxinucleosido . Um reagente aoropriado que permite a formação deste núcleo é o reagente convencional dietil-(2-c1oro-1 ,1,2-trifluoroeti1)-amina. Este composto intermédio tem-se feito reagir com nucleofilos para se obter nucleósidos substituídos como, por exemplo, a 3 '-azido-23'-didesoxitimidina (AZT)²⁰.

A segunda fase deste exemolo envolve não a adição núcleo, fílica, mas, mais propriamente, a reacção de abertura do núcleo anidro do composto intermédio reactivo citado antes. Reagentes apropriados para realizar esta abertura do núcleo são quer bases não nuc1eofί1icas tais como o fluoreto de tetrabuti1-amónio,quer bases nucleofílicas escolhidas entre KOtBu, hidróxido de sódio, hidróxido de Dotãssio ou outras similares.

Na variante do processo de acordo com a presente invenção mencionada em terceiro lugar, a fase inicial envolve a reacção de um ribonuc1eosido inicial com ortoformato de trimetilo na

2122 presença de um dissolvente polar em condiçoes anidras ’ oara se obter um composto intermédio reactivo sob a forma de um or to-éster representado pela fórmula geral

Na fase seguinte submete-se o composto intermédio reacti

-24- 23 vo a uma reacçao de eliminação mediante tratamento com um ácido orgânico como, por exemplo, P-TsOR no seio de anidrido acético a uma temperatura elevada compreendida entre cerca de 120° e 160°C durante cerca de 4 a 8 horas. Finalmente, a última fase eri volve a desprotecção do grupo 5'-0Ac resultante do composto intermédio reactivo sob a forma de um orto-êster mediante tratamen to em condições de hidrólise suave com uma base^^.

Na variante do processo de acordo com a presente invenção mencionada em quarto lugar, a primeira fase envolve a reacção de um ribonucleosido inicial com qualquer grupo protector convencional de radicais hidroxi eficaz para proteger selectivamente o grupo 5'-hidroxi, isto é, o grupo hidroxi primário que se diferencia dos grupos hidroxi secundários ligados ao núcleo do açúcar. A segunda fase envolve a reacção do ribonucleosido 5'· -0-protegido , com 1 ,1 -1iocarboni1 diimi dazo1 ou com tiofosgénio em condições anidras, para se obter um comoosto intermédio tiocarbonato reactivo de formula geral

Na fase seguinte, submete-se o composto intermédio reactivo a uma reacção de eliminação mediante tratamento com P(QEt)g no seio de um dissolvente polar a uma temperatura elevada compreendida entre cerca de 140° e 175°C durante cerca de 30 minutos

-25a 4 horas. Finalmente, a quarta e ultima fase envolve a desprotec ção do grupo protector situado em 5¹-0 do composto intermédio reactivo sob a forma de tiocarbonato mediante tratamento em condições de hidrólise suave com um acido.

Na variante do processo de acordo com a presente invenção mencionada em quinto e último lugar, a fase inicial envolve a reacção de um ribonucleosido inicial com brometo de 2-acetoxi24 isobutirilo para se obter um comDOSto intermédio reactivo de fórmula geral

(Br) R '0

Br (OR')

Seguidamente, faz-se reagir a mistura intermédia reactiva com reagente Zn/Cu no seio de um dissolvente polar aprõtico para realizar a eliminação, para obter o 2',3'-didesoxi-2' ,3'2 5

-didesidronucleosido

Esquema I ilustra esquematicamente o processo represen. tativo característico de acordo com a presente invenção. A via A ilustra a primeira variante mencionada, que utiliza um composto intermédio reactivo 3',5'-anidro, ou oxetano. A via B ilustra a variante mencionada em segundo lugar, que utiliza um composto intermédio reactivo 2,3'-anidro. Ouer a via A,quer a via Β,uti1 zam como composto inicial um 2'-desoxinucleosido. A via C ilus-26tra as variantes mencionadas em terceiro e quarto lugares e utiliza um ribonucleosido inicial, passando por um comDOSto intermê dio reactivo sob a forma de um orto-êster ou tiocarbonato, respect i vamente. A via P ilustra a variante mencionada em último l£ gar e passa por um 3'-0-aceti1-2'-bromo-2'-desoxinucleosido e/ou um 3'-bromo-2'-0-acetilo intermédio.

ESQUEMA 1

VIA A o o

TIMIDINA

D4T

VIA B

-27VIA C

5-METIL-URIDINA β-OEt, =₃

VIA D

Os problemas que surgem quando se pretende oõr em nrática a denominada via oxetano, de acordo com Horwitz et al., que utiliza um composto intermédio 3¹,5'-anidro,estão associados, principa1 mente, com a maior importância da reacção de eliminação final. A eliminação do dissolvente em larga escala conduz ã eliminação da timina devido a exoosição orolongada ao calor. A utilização de quantidades maiores de base fornece também timina como um produto indesejável.

Os melhoramentos específicos introduzidos na via oxetano, que constitui uma das variantes da presente invencão,envolvem (1) a utilização de uma quantidade muito menor de ãgua na

-28conversão do mesilato em oxetano, realizando, consequentemente, a reacção em condições mais concentradas e (2) a modificação do processamento da fase final em que se precipita por trituração do sal de potássio obtido na fase final envolvendo um tratamento com KOtBu/dimetiIsulfoxido do composto intermédio reactivo. Adicionalmente, o processamento da fase (a) simplificou-se para as operações de neutralização da mistura reaecional, redução da quantidade de ãgua e separação do produto resultante. Isto e muito mais fãcil do que eliminar comoletamente a ãgua, suspender os s£ is resultantes em acetona quente, filtrar e tratar o filtrado com vapor. Isto permite recolher o produto, neutralizar e tornar a recolher. A vantagem destes melhoramentos relativamente ãs técnicas convencionais consiste em que não é necessário a eliminação de grandes volumes de dimetilsulfoxido sob vazio e também não é necessário um aquecimento prolongado que destrói o nroduto,mas que, por outro lado, é necessário para eliminar o dimetiIsulfõnico xido sob vazio. Como resultado destes melhoramentos,obtém-se uma quantidade de produto relativamente puro.

Os problemas apresentados oelos métodos convencionais para preparar os 2',3'-didesoxi-2',3'-didesidronucleosidos via um composto intermédio reactivo 2,3'-anidro envolve a utilização da dieti1 -(2-cloro-1,1,2-trif1uoroeti1J-amina, um reagente fluoramina difícil de preparar e que requer equipamento especializado. Alternativamente, a literatura da especialidade descreve uma técnica mais demorada de 4 fases que envolve uma 5'-0-triti 1 ação, uma 3¹-0-mesi1 ação , uma destriti 1 ação e a formação de um composto anidro. A literatura da especialidade refere a formação de di. versos produtos e produtos secundários Dara além dos 2' ,3'-dide-29soxi-2',3'-didesidronucleosidos.

As melhorias especificas realizadas na via publicada, que utiliza um composto intermédio reactivo 2,3'-anidro, envolvem a descoberta de que a utilização do reagente fluoreto de tetrabu til-amónio (TBAF) em condições não nucleofí1icas dá origem ao produto pretendido puro e num rendimento elevado. Al ternativamen. te,a utilização de KOtBu/dimeti1 sulfõxido e hidróxido de sódio/ dimetilformamida, mas não cianeto de sõdio/dimetilformamida ou DBU/dimeti1formamida ou hidróxido de sÓdio/metano1 ou KOtBu/butanol , em vez de fluoreto de tetrabuti1amÓnio em tetra-h i drof ura^ no ou dimeti 1 formamida, da' oriqem ao produto oretendido,embora se obtenham rendimentos mais baixos e um pouco de produto secundário indesejável (3¹-epi-ti mi dina ) quando se utiliza hidróxido de sõdio/dimetilformamida.

Assim, os processos de acordo com a presente invenção são úteis para a oreparação de um grande número de 2',3'-didesoxi- 2 ¹ ,3'-didesidronuc1eosidos, especialmente nucleósidos derivados da pirimidina e da purina, com acção antiviral , antimetabõlica e anti neop 1 ãs i ca, bem como acção contra os vírus da i munodef i ci ên. cia no homem.

Os exemplos seguintes,que não limitam o âmbito da presen te invenção, ilustram apenas algumas variantes representativas dos processos de acordo com a mesma e destinam-se a ensinar aos entendidos na matéria como pôr em prática a presente invenção. Todas as partes e percentagens são em peso e as temperaturas em graus Celsius, salvo indicação em contrário.

-30No Quadro I podem observar-se dados Biológicos, incluindo dados anti-HIV da 2' ,3'-didesoxi-2¹,3¹-didesidrotimidina (d4T) preparada por um processo de acordo com a presente invenção. Estes dados estão de acordo com os dados publicados.

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-34Parte Experimental

Os pontos de fusão, que não foram corrigidos, determinaram-se utilizando um dispositivo de tubo capilar EIectrotherma1.

A cromatografia em camada fina (TLC) realizou-se em Dlacas de gel de sílica 60 F-254 adquiridas a E. Merck and Co., e a cromatografia em coluna realizou-se sobre gel de sílica flash de Dar tículas com a dimensão de 40pM da firma Baker.. A análise elemeji tar realizou-se no departamento analítico, Bristol Mvers, Walling 1 13 ford. Os espectros de RMN He C foram registados por um esoectrometro de RMN Bruker AM360 utilizando tetrameti1si1 ano como padrão interno; os desvios químicos estão registados em Dartes por milhão. A HPLC analítica realizou-se utilizando uma coluna de fase inversa C18 Haters.

3',5'-di-0-(metanosu1fonil)-ti mi di na

Um balão de fundo redondo com a capacidade de 3 litros e com 3 tubuladuras foi equiDado com um agitador de oã susoenso, um funil de gotejamento de 500 ml e um adaDtador de Claisen que continha um tubo de secagem e um termómetro. A este balão adiciq naram-se 200g (0,82 mole ) de timidina e 750 ml de piridina. Agi_ tou-se a mistura e aqueceu-se com um banho de ãgua durante 20 mj_ nutos para se obter uma solução límpida. Arrefeceu-se deoois a solução num banho de gelo até uma temperatura compreendida entre 0° e 3°C e encheu-se o funil de gotejamento com 206,5g (1,08 mole) de cloreto de metano-sulfoni1 o, que se adicionou, gota a gota, durante 40 minutos sem se observar libertação de calor. Agitou-se a solução ã temperatura de 0°C durante 1 hora e conservou

-35-se depois ã temperatura de 5°C durante 18 horas. Verteu-se depois a mistura castanha clara sobre 3 litros de agua agitados energicamente e contendo aproximadamente 500g de gelo. 0 produto pretendido cristalizou imediatamente. Após agitação durante 30 minutos, separou-se o produto por filtração e lavou-se com 3x100 ml de água. Secou-se depois o sólido branco sob vazio durante toda a noite. Obtiveram-se 322 g de peso bruto (rendimento 98%). Recristalizou-se o produto em acetona quente, obtendo-se 267g (reii dimento 81%) de um sólido branco. P. F. 169-171°C (na bibliografia 170°-171°C). RMN ^]H (360 MHz, dg-DMSO) 11,40 (s, 1H, NH) ,

7,50 (s, 1H, H-6), 6,21 (t, 1H, H-l'), 5,29 (m, 1H, H-3'), 4,45 (m, 1H, H-4' ) , 3,31 (s, 6H, SOgCHg), 2,50 (m, 2H, H-2'), 1,78 (s, 3H, CH₃). Análise (C_]2 ^H>a^N2⁰9^S2^C’ ^H’ ^N' l-3,5-anidro-2-desoxi-B-D-treo-pentofuranosil)-timina

A uma solução agitada de 74,7 g (1,87 mole) de hidróxido de sódio em 1,6 litros de água adicionaram-se, pouco a pouco,

248g (0,62 mole) de 3¹,5¹-di-0-(metano-su1foni1)-timidina. Após a adição a mistura reaccional tornou-se uma solução cor de laraji ja amarelada. Aqueceu-se depois a refluxo esta solução agitada durante 2 horas. Deixou-se a mistura reaccional arrefecer até a temperatura ambiente, depois do que se adicionaram 100 ml de ac_i_ do clorídrico 6N. Concentrou-se a mistura reaccional sob vazio eliminando 1,3 litros de água. Arrefeceu-se a pasta resultante num banho de gelo durante 2 horas. Filtrou-se depois o sólido e lavou-se ligeiramente com água gelada, depois do que se secou sob vazio até peso constante. Obtiveram-se 103,7g (rendimento 74%).

produto resultante utilizou-se tal e qual. P. F. 188^o-190°C (na bibliografia 190°-193°C). RMN ^]H (360 MHz, dg-DMSO) 11,35 (s, 1H. NH), 3,01 (s, 1H, H-6), 6,49 (q, 1H, H-l¹], 5,47 (m, 1H, H-3'), 4,88 e 4,67 (m, 2H, Η-5'J, 4,22 (d, 1H, H-4'), 2,47 (m, 2H, H-2* ) , 1,77 (s, 3H, CH3). NMR ¹³C (75 MHz, dg-DMS0)J63,64 (C2), 151,10 (C4), 136,57 (C6), 109,62 (C5), 88,29 (C4‘), 36,85 (Cl'), 79,83 (C3‘), 75,14 (C5‘ ) , 37,17 (C2'), 12,33 (CH₃). Análise ^(C10^H12^N2°4^{} C}’ ^H’ ^N· l-(2,3-didesoxi-p-D-glicero-oent-2-enofuranosil)-timina

A um balão de fundo redondo com a caoacidade de 1 litro, com 3 tubuladuras, equipado com um agitador mecânico, termómetro e uma entrada para azoto, adicionaram-se 400 ml de dimeti1 sulfóxido anidro e 90,Og (0,402 mole) de oxetano, A esta solução adicionaram-se 74g (0,643 mole) de KOtBu a 97% em fracções de 1,5g durante 25 minutos. A temperatura manteve-se entre 18° e 22°C utilizando um banho de gelo externo. Concluída a adição,agitou-se a reacção durante mais 1 hora,não se observando qualquer aumento de temperatura, e a cromatografia em camada fina indicou que aproximadamente 90% da reacção estava concluída. Agitou-se a mistura reaccional ã temperatura de 21°C durante 16 horas, oeríodo depois do qual uma cromatografia em camada fina indicou que a reacção estava concluída. Verteu-se a solução viscosa sobre 3 litros de tolueno arrefecidos a 4°C, obtendo-^se um orecioj_ tado de cor bege. A temperatura da mistura aumentou até 7°C após a adição de uma solução de dimeti1 sulfÓxido. A mistura foi ocasionalmente agitada durante 20 minutos e depois filtrada através de um funil de Buchner de 18,5 cm. 0 sólido amarelado recolhido foi lavado duas vezes com tolueno frio depois do que se se

-37cou por sucção durante 1 hora. Dissolveu-se o sólido em 300 ml de ãgua, obtendo-se duas camadas. Colocou-se a mistura numa amoo la de separação e rejeitou-se a camada superior que continha tolueno residual. Colocou-se a camada aquosa num copo de 1 litro equipado com um elêctrodo de pH, um agitador magnético e um termómetro. Utilizando um banho de gelo externo baixou-se a tempera, tura até 10°C. Gota a gota, adicionou-se acido clorídrico conceji trado ã solução agitada a uma velocidade que oermitiu manter a temperatura a valores inferiores a 15°C. Concluída a adição de

50,5 ml (0,61 mole) de acido clorídrico, observou-se um pH igual a 7 + 0,1 e o início da formação de um orecioitado, A esta mist£ ra espessa adicionaram-se 70g de cloreto de ootãssio e a agitação continuou ã temperatura de 5°C durante 1 hora. Separou-se o precipitado e secou-se por sucção durante 2 horas e depois ao ar durante 16 horas. Triturou-se o sólido, formou-se uma pasta com 500 ml de acetona quente e filtrou-se. Lavou-se o resíduo no papel de filtro com 2 x 200 ml de acetona quente, formou-se mais uma vez uma pasta com 300 ml de acetona quente, filtrou-se e lavou-se mais uma vez com 2 x 100 ml de acetona quente. Concentro^ -se o filtrado reunido até ã secura obtendo-se 51,3g (rendimento 57%) da 2' , 3'-didesoxi-2',3¹-didesidrotimidina (d4T) sob a forma de um sólido esbranquiçado. P.F. 165°-166°C, [czl -45,1 (c = =0,7, ãgua). RMN ^]H (360 MHz, dg-OMSO) 11,29 (s, 1H, NH), 7,63 (s, 1H, H-6), 6,80 (d, 1H, J = 1,2 Hz, H-T), 6,33 (d, 1H, J = = 5,9 Hz, H-3'), 5,90 (dd, 1H, J = 1,1, 4,7 Hz, H-3’), 5,01 (m, 1H, 0H), 4,76 (s, 1H, H-4' ) , 3,60 (dd, 2H, J = 4,8, 3,6 Hz, H-5'), 1,71 (d, 3H, J = 1,2 Hz, CH₃). RMN ¹³C (75 MHz, dg-DMSO) 164,42 (C4), 151,30 (C2), 137,23 (C2‘), 135,36 (C3 ’ ) , 126,35 (C6), 109,33 (C5), 89,15 (Cl'), 87,56 (C4' ) , 62,41 (C5’), 12,15

-38(C5CH₃). EM m/e (metano DCI) (intensidade relativa) 225 (M+H,

20), 207 ( 1 5), 1 93 (8), 1 55 (1 3), 1 27 (100), 99 (.20). IV (cm*¹) 3463, 3159, 3033, 1691, 1469, 1116, 1093. Analise (^_1θΗ_]2Ν₂0₄)

C, Η, N.

l-(2,3-didesoxi-p-D-g!icero-pent-2-enofuranosil)-timina

A uma suspensão de 25 mg (0,11 mole) do anidronucleosido em 3 ml de tetra-hidrofurano anidro adicionaram-se 0,22 ml (0,22 mmole, 1,0 M) de fluoreto de tetrabuti1 amónio. Agitou-se durante 3 horas a temperatura de 22 C, deoois do que uma cromatografia em camada fina mostrou apenas composto inicial. Aqueceu-se a mis tura a refluxo durante 18 horas, período depois do qual a reacção pareceu estar concluída. Após arrefecimento,e1imi naram-se os dissolventes sob vazio e dissolveu-se o resíduo em diclorometano/ãlcool metílico/hidroxido de amónio. A Durificação realizou-se numa coluna de cromatograf!a rãpida de 20 mm, utilizando co mo eluente uma mistura de dic1 orometano/meta no 1/hidrõxido de amõ nio (90:10:1). A concentração das fracções que continham o produ. to deu 18 mg (rendimento 72*) da 2',3¹-didesoxi-2¹,3'-didesidroti mi d i na (d4T) .

l-(5'~O-tritil-2¹^'-tiocarbonilribofuranosil)-u rac i1o

Sob atmosfera de ãrgon, adicionaram-se a um balão de fu£ do redondo, seco, com a capacidade de 250 ml, 10,6g (22 mmoles) de 5¹-0-triti 1 uridina . Adiclonaram-se 110 ml de tetra-hidrofurano anidro e agitou-se a mistura reaccional atê se obter uma mistura homogénea. Quando se adicionaram ã solução 4,3g (27 mmoles) rt de 1 ,1-tiocarboni1diimidazol a mistura reaccional tornou-se amarela, continuando-se a agitação ã temperatura ambiente durante 72 horas. Eliminou-se o dissolvente sob vazio e submeteu-se o xa_ rope resultante a uma cromatografia rápida sobre gel de sílica utilizando como eluente uma mistura de acetato de etilo/hexano ( 75:25 ). Isolou-se o produto, depois do que se recrista 1izou em etanol absoluto para se obter 8g (rendimento 7 7%) de um oõ esbranquiçado. RMN ^]H (360 Mhz, CDClg) 8,9 (S largo, 1H, ilil) , 7,3 (m, 16H, 3xC₆H₅, H6), 5,7 (d, 1H, H5), 5,6 (m, 2H, H2', H3') , 5,4 (m, 1H, Hl '), 3,4 (q, 2H, H5 ' ) .

5¹ -0-1 r i t i1 -2' ,3'-didesoxi- 2' ,3'-didesidrouridina

A 30 ml de fosfito de trietilo adicionaram-se 6,0q (11,5 mmoles) de l-(5'-0-triti1-2',3'-tiocarbonilribofuranosil)-uracilo. 0 fosfito de trietilo aqueceu-se previamente até ã temperatjj ra de 1 60°C. Aqueceu-se a mistura reaccional ã temperatura de 160°C durante 1 hora. Eliminou-se depois o dissolvente sob vazio e submeteu-se o sólido vítreo resultante a uma cromatografia rápida sobre sílica utilizando como eluente uma mistura de acetato de etilo/hexano (75:25). Retirou-se o produto pretendido da colu. na e recrista 1izou-se numa mistura de acetato de eti1o/hexano, de pois do que se recolheram 2,0g (rendimento 40%) sob a forma de um sólido branco. P.F. 188°-191°C. RMN ^]H (360 Mhz, CDC1₃) 3,95 (br2, 1H, NH), 8,00 (d, 1H, H6), 7,5 (m, 15H, 3xC_&H₅), 7,2 (m,

1H, Hl'), 5,7 (m, 1H, H2'), 6,05 (m, 1H, H3') , 5,2 fdd, 1H, H5),5,10 (3, largo.lH, H4'), 3,6 (m, 2H, H5’ ).

-402 ¹ ,3'-didesoxi-2' ,3¹-dides i drouri dina (d4tl)

Em uma mistura de 10 ml de clorofórmio e 2 ml de metanol contendo 2% de acido p-tolueno-sulfÓnico dissolveu-se 0,5g (1,1 mmole) de 5'-0-tri ti 1 - 23'-didesoxi-2¹,3¹-didesidrouridina . A mistura reaccional agitou-se durante 45 minutos ã temoeratura am biente e neutralizou-se depois com 0,5 ml de hidróxido de sódio 2N. Eliminou-se o dissolvente sob vazio e cromatogra^£ou-se o resíduo sobre sílica utilizando como eluente uma mistura de clorofÕrmio/acetona (2:1). Isolou-se o Droduto pretendido sob a forma de um solido cristalino branco com as mesmas características físicas e espectroscópicas da 2' ,3'-didesoxi-2',3¹-didesidrouridina (d4U) preparada por um método alternativo. P.F. 155°C. RMN ^]H (360 Mhz, DgO/OMSO) 7,8 (d, 1H, H6), 6,7 (m, 1H, Hl'), 6,37

(m,	1H, H2	'),	5,8 (m, 1H, H3 ' ),	5,56	(d,	1H , H5),	4,7	(m, 1 Η,
H4‘ )	, 3,5	(m,	2H , H5’). RMN ¹³C	(7 0	Mhz ,	DgO/DMSO)	163	(C4), 151
(C2)	, 141	(C2 ¹	' ) , 135 (C3'1, 126	(C6)	, 101	(C5) 89	(Cl '	) , 37
(C4 '	)., 62	(C 5 ¹	)·
2' ,3	'-metoximetilidenouridina

Sob atmosfera de azo to, adicionaram-se a um balão de fundo redondo com a capacidade de 1 litro 50g (205 mmoles) de uridina. À mistura reaccional adicionaram-se 500 ml ^e tetra-hidrofurano anidro recentemente destilado e 5g (20 moles)de £-tolueno-sul fonato de piridínio. Utilizando um funil a dicio naram-se, deoois, lentamente, 109g (1,03 mole) de ortoformato de trimetilo. Aqito^ -se a mistura reaccional durante 18 horas ã temperatura ambiente, obtendo-se uma mistura homogénea. Adicionaram-se 18g (1 mole) de agua e agitou-se a mistura reaccional durante mais 30 minutos,de pois do que se adicionaram 20 ml de piridina. Agitou-se a reacção durante mais 18 horas ã temperatura ambíente,depois do que se eliminaram os dissolventes sob vazio. Submeteu-se o sólido branco resultante a uma cromatografia rãoida sobre sílica,obtendo-se 40g (rendimento 68%) de um sólido branco . P.F, 188°-190°C (na bibliografia 189°-190°C).

5-0-acetil-2' ,3'-didesoxi-2',3'-didesidrouridina

Em 110 ml de anidrido acético dissolveram-se 11,8g (41 mmoles) de metoximetilideno e adicionaram-se 20 mg de o.-tolueno-sulfonato, aquecendo-se a reacção até ã temperatura de 140°C du. rante 6 horas. Arrefeceu-se a mistura reaccional e adicionou-se ml de trietilamina. Eliminaram-se os dissolventes sob vazio e cromatografou-se o produto sobre sílica utilizando como eluente uma mistura de clorofÓrmio/acetona (4:1 ) obtendo-se o produto pre tendido sob a forma de um Óleo límpido, RMN (360 Mhz, DMSO) 11,3 (3, largo.lH, NH 1, 7,4 (d, 1H, H6), 6,8 (m, 1H, Hl'), 6,4 (m, 1H, H2‘), 5,9 (m, 1H, H3'), 5,6 (d, 1H, H5), 5,0 (m, 1H, H4 ' ) 4,2 (m, 2H, H5' ) , 2,0 (s,’ 3H, CHg).

5'-0 -( 2'-acetoxi i sobuti ri l)-3-O-acetil-2^l-br orno-2'-desoxi uri dina

Em 90 ml de acetonitrilo suspenderam-se 5,0q (0,021 mole) de uridina, adicionaram-se 12,85g (0,063 mole) de brometo de 2-acetoxiisobutiri 1 o durante mais de 15 minutos e aqueceu-se a reacção durante 3 horas ã temperatura de 80°C. Arrefeceu-se a solução homogénea atê ã temperatura ambiente e eliminou-se o di£

-42solvente sob vazio. Dissolveu-se o xarooe resultante em 200 ml de acetato de etilo e lavou-se com 3x100 ml de bidrogenocarbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de magné sio e eliminou-se o dissolvente sob vazio, Uma cromatografia sobre dióxido de silício utilizando como eluente acetato de etilo/ hexano (75:25) forneceu 6,⁷ g /rendimento 67%) de uma espuma bran. ca. P.F. 68°-70°C. E.M. m* 477.

2' ,3'-di-hidro-2' , 3¹-di des ox i u ri d i na (04 U)

Em 3 ml de dimetilformamida dissolveram-se 2g /4,2 moles) de bromouridina e adicionaram-se, gota a gota, 0,70g /10,5 moles) de uma pasta de Zn/Cu em 25 ml de dimeti1formamida anidra. Agitou-se a mistura reaccional durante 2,5 horas a temperatura amb i_ ente, depois do que não se observou a presença de nenhum comoosto inicial por cromatografia em camada fina. Filtrou-se a mistura reaccional através de celite e concentrou-se o filtrado sob vazio num sistema de vazio elevado, ã temoeratura de 20°C, Dissolveram-se 1,lg (rendimento 85%) do solido branco resultante em metanol e arrefeceu-se até ã temperatura de 0°C com um Banho de ãgua e gelo. Fez-se borbulhar amoníaco anidro durante 20 minutos e aqueceu-se a solução até ã temperatura de 60°C durante mais de 18 horas. Uma cromatografia em camada fina /TLC) revelou uma man. cha correspondente ao produto do título (D4U). Eliminaram-se os dissolventes e cromatografou-se o sólido branco resultante sobre diõxido de silício utilizando como eluente ãlcool metílico a 10% e cloreto de meti 1eno,obtendo-se 0,5g /rendimento 63%1 do produto pretendido. P.F. 155°C /na bibliografia: 154°-155°C),

QUADRO I:	Comparação in vitro da eficácia³ anti-HTV e da toxicidade celular^³ de AZT e d4T
Composto	DI₅₀ ^C tpMl DICTg_Q ^d (pM)
AZT	0,45 54,0
d4T	0,33 39,0
(Exemplo p	. 38)
a	0 ensaio antiviral foi realizado sobre células CEM in fectadas com ΗIV (estirpe LAV) .
b	A toxicidade celular determinou-se em células CEM.
c	Dose capaz de inibir 50%.
d	Dose capaz de inibir 50% da cultura tecidular.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1.- Processo para a preparação de 23'-di-desoxi-23'-di-dehidronucleosidos de fórmula geral na qual o grupo alcalino representa uma base eventualmente substituída escolhida entre a pirimid.ina, a aza-pix imidina e a desaza-pirimidina:

X representa um átomo de azoto ou um grupo C-H;

Y representa um átomo de azoto ou um grupo de fórmula

-45geral C-R$ , na qual R_s representa um átomo de hidrogéneo ; um grupo alquilo comportando eventualmente como substituinte um átomo de halogéneo e exibindo a fórmula geral CnH^n A, na qual n representa um numero intei. ro de 1 a 3 e A representa um átomo de hidrogéneo, flúor, cloro, bromo ou iodo; ou um grupo alcenilo comportando, eventualmente, como substituinte um átomo de halogéneo e exibindo a formula geral -(CH?)m-CH=CHA, na qual m representa zero ou um número inteiro de 1 a 3 e A tem o significado definido antes;

Z representa um átomo de azoto ou um grupo C-H; e representa um grupo OH ou NH^;

caracterizado pelo facto:

(a) de se converter um 2 '-desoxinucleosido de fórmula geral na qual

X, Y, Z e têm os significados definidos antes, em um 3',5'-anidro-2'-desoxinucleosido intermédio reactivo de forΊ

BAD ORIGINAL ’

-46mula geral na qual

X, Y, Z e R^ têm os significados definidos antes, e

(b) de se converter, na presença de uma base forte, o 3’,5^r-anidro-2’-desoxinucleosido reactivo preparado na fase (a) no 2’,3'-di-desoxi-2 ’ ,3¹-di-dehidronucleosido pretendido;

e ainda pelo facto:

(i) de se fazer reagir o 3 ' ,5 ' -anidro-2’-desoxinucleosido, citado antes, com uma base forte escolhida entre KotBu, butil n.-lítio, hidreto de sódio e LDA, na presença de um dissolvente polar escolhido entre dimetilsulfóxido, tetra-hidrofurano, dimetilformamida , DME, ou misturas destes dissolventes;

(ii) de se triturar o sal resultante na presença de um dissolvente orgânico;

(iii) de se extrair o sal intermédio bruto sob a forma de um sólido a partir da fase (ii);

(iv) de se dissolver em égua o sal preparado em (iii);

(v) de se neutralizar o sal resultante da fase (iv); e

-47vi) de se obter a base livre de nucleósido sob a forma de um sólido .
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se utilizar como base um derivado da pirimidina, eventualmente substituído.
3.- Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de se utilizar uma base pirimidínica escolhida entre timina (S-metil-2 ,4-di-hidroxipirimidina), citosina (2-hidroxi-4-aminopirimidina) , uracilo (2 ,4-di-hidroxipirimidina) e 5-etil- ou 5-vinil- ou 5-halogeno-vinil- ou 5-halogeno-metil- ou 5-halogeno-etil-2,4-di-hidroxipirimidin-3-ilo.
4 . pelo facto

Processo de acordo com a reivindicação 2 de se utilizar como base a timina.

caracterizado pelo sido
5.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado facto de se obter o 3’, 5 ’-anidro-2 ’-desoxipirimidi.na-nucleointermedio reactivo de fórmula geral bad original na qual

X, Y, Z e têm os significados definidos antes, fazendo reagir um 2 ’-desoxinucleosido correspondente com uma quantidade suficiente de reagente capaz de activar o grupo proteetor do radical hidroxi para se obter o primeiro composto intermédio, c 3', 5’-O-grupo protector-2^T-desoxinucleosido , e fazendo reagir depois este primeiro composto intermédio resultante com uma base forte escolhida entre hidróxido de sódio e hidróxido de potássio no seio de um dissolvente escolhido entre a água e o metanol.
6.- Processo para a preparação de 2', 3 ’-di-desoxi-2', 3'-di-dehidronucleosidos de fórmula geral

-49na qual o grupo alcalino é uma base eventualmente substituída, escolhida entre a pirimidina, a aza-pirimidina e a desaza-pirimidina ;

X representa um átomo de azoto ou um grupo C-H;

Y representa um átomo de azoto ou um grupo de fórmula gerai

C-Rg , na qual R$ representa um átomo de hidrogénio; um grupo alquilo comportando eventualmente como substituinte um átomo de halogé.oeo e exibindo a fórmula geral C H. A na ° n Zn qual n representa um número inteiro de 1 a 3 e A representa um átomo de hidrogénio, flúor, cloro, bromo ou iodo; ou um grupo alcenilo comportando, eventualmente, como substituinte um átomo de halogéneo e exibindo a fórmula geral

-(CH_) -CH=CHA, na qual m reDresenta zero ou um número in2 m teiro de 1 a 3 e A tem o significado definido antes;

Z representa um átomo de azoto ou um grupo C-H; e R_u representa um grupo OH ou ;

caracterizado pelo facto:

(a) de se converter um 2’-desoxinucleosido de fórmula geral

-50na qual

X, Y, Z e têm os significados definidos antes, em um 2, 3'-anidro-2’-desoxinucleosido intermédio reactivo de fórmula geral na qual

X, Y, Z e têm os significados definidos antes, e

(b) de se converter, na presença de uma base eventualmente nucleofílica, o 2 ,3 '-anidro-2'- desoxinucleosido preparado na fase (a) citada antes em um 2’, 3'-di-desoxi-2^T , 3 '-di-dehidronucleosido.
7. - Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo facto de se utilizar na fase (b), como base não nucleofílica, o fluoreto de tetra-butilamónio.
8. - Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo facto de se utilizar na fase (b) uma base nucleofílica escolhida entre K0t3u, hidróxido de sódio e hidróxido de potássio.

BAD ORIGINAL }

....... .-J

-519.- Processo de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo facto de se utilizar como base uma pirimidina eventualmente substituída.
10.- Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo facto de se utilizar uma base pirimidínica escolhida entre ti mina (5-metil-2,4-di-hidroxipirimidina), citosina (2-hidroxi-4-ami nopirimidina) , uracilo (2 ,4-di-hidroxipirimidina) e 5-etil- ou 5-vinil- ou 5-halogenovinil- ou 5-halogenometil- ou 5-halogeno-etil-2 ,4-di-hidroxipirimidin-3-ilo.
11.- Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo facto de se utilizar como base a timina.
12·- Processo para a preparação de 2 ',3 '-di-desoxi-2’,3 '-didehidronucleosidos de fórmula geral

B ^H0— na qual

B representa uma base escolhida entre a purina, a aza-purina a desaza-purina, a pirimidina, a aza-pirimidina, a desaza-pirimidina e bases comportando um núcleo triazol, caracterizado pelo facto:

(a) de se fazer reagir um ribonucleosido inicial de fórmula geral bad OFUG'N^AL na qual

B tem os significados definidos antes, com tri-metil-ortoformato na presença de um dissolvente polar em condições anidras , para se obter um composto intermédio reactivo de fórmula geral na qual

B tem os significados definidos antes ;

(b) de se submeter o composto intermédio preparado na fase (a) a uma reacção de eliminação mediante tratamento com um ácido orgânico no seio de anidrido acético a uma temperatura elevada compreendida entre cerca de 120° e 150° C durante cerca de 4 a 8 ho ras ;

e (c) dí se desproteger o grupo 5’-0Ac resultante mediante uma hidrólise alcalina moderada.

BAD ORIGINAL ¹

-5313.- Processo de acordo com a reivindicação 12, caracteriza do pelo facto de se utilizar como base representada pelo símbolo B a purina ou a pirimidina.

lu.- Processo de acordo com a reivindicação 13, caracteriza do pelo facto de se utilizar como base representada pelo símbolo 3 a pirimidina.
15.- Processo de acordo com a reivindicação 14, caracteriza do pelo facto de se utilizar uma base pirimidínica escolhida entre a uridina e a 5-metil-uridina.

15.- Processo para a preparação de 23 ’-di-desoxi-2',3'-di-dehidronucleosidos de fórmula geral na qual

B representa uma base escolhida entre a purina, a aza-purina, a desaza-purina, a pirimidina, a aza-pirimidina, a desaza-pirimidina e bases comportando um núcleo triazol, caracterizado pelo facto:

(a) de se fazer reagir um ribonucleosido inicial de fórmula geral

η.

_0A0 originai-54- na qual

B tem os significados definidos antes, com um reagente comportando grupos protectores do radical hidroxi capaz de proteger, selectivamente o grupo 5’-hidroxi (grupo hidroxi primário);

(b) de se fazer reagir um ribonucleosido comportando um grupo 5’-0H protegido preparado na fase (a) com um reagente escolhido en tre 1,1-tiocarbodiimidazol e tiofosgenio em condições anidras para se obter um composto intermédio reactivo de fórmula geral na qual

B tem o significado definido antes;

(c) de se submeter o composto intermédio preparado na fase (b) a uma reacção de eliminação mediante tratamento com PfOEt)^ no seio de um dissolvente polar a uma temperatura elevada compreendida entre cerca de 140° e 175° C durante um período compreendido entre

-5530 minutos e 4 horas;

e (d) de se desproteger o grupo 5'-0-protector resultante mediante uma hidrólise ácida moderada.
17, - Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo facto de se utilizar como base representada pelo símbolo B a purina ou a pirimidina.
18. - Processo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo facto de se utilizar como base representada pelo símbolo B a pirimidina.
19,- Processo de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo facto de se utilizar uma base escolhida entre a uridina e a 5-metiluridina.
20.- Processo para a preparação de 2’, 3'-di-desoxi-2', 3 ’ -di-dehidronucleosidos de fórmula geral na qual

B representa uma base escolhida entre a purina, a aza-purina, a desaza-purina, a pirimidina, a aza-pirimidina, a desaza-56-pirimidina e bases comportando um núcleo triazol, caracterizado pelo facto:

(a) de se fazer reagir um ribonucleosido inicial de fórmula geral na qual

B tem os significados definidos antes, com um brometo de aciloxiisobutirilo no seio de um dissolvente polar sob condições anidras a uma temperatura elevada compreendida entre cerca de 75° e 100° C durante 1 a 3 horas para se obter um composto intermédio reactivo de fórmula geral na qual

R representa um grupo aciloxiisobutirilo,

R' representa o grupo acilo do brometo de aciloxiisobutirilo, e

B tem os significados definidos antes;

(b) de se submeter o composto intermédio preparado na fase (a) a uma reacção de eliminação mediante tratamento do composto intermédio citado antes no seio de um dissolvente polar aprótico, com uma mistura reaccional de Zn/Cu, para se obter um composto de formula geral na qual

R e B têm os significados definidos antes, e

(c) de se desproteger o grupo 5 '-O-protector no composto intermédio preparado na fase (b) mediante tratamento do composto intermédio, citado antes, com uma base fraca para se obter um derivado de 2’,3'-di-desoxi-2’,3’-di-dehidronucleosido.
21. - Processo de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo facto de se utilizar uma base representada pelo símbolo B escolhida entre a purina e a pirimidina.
22. - Processo de acordo com a reivindicação 21, caracteriza do pelo facto de se utilizar como base representada pelo símbolo B a pirimidina.
23.- Processo de acordo com a reivindicação 22, caracteriza do pelo facto de se utilizar como base pirimidínica a uridina ou a 5--metiluridina,

b.\D ORIGINAL

Lisboa, 23 de Março de 1989

-58RESUMO

Processo para a preparação de 2’,3’-di-desoxi-2',3’-di-dehidronucleosidos

Descrevem-se processos novos para a preparação, à escala industrial, de 2’,3 ’-di-desoxi-23’-di-dehidronucleosidos com rendimentos elevados.

A preparação de 2 ¹ ,3 ’-di-desoxi-2*-3’-di-dehidronucleosidos de fórmula geral utilizando como material inicial um 2’-desoxi-nucleosido que comporta uma base escolhida entre uma pirimidina eventualmente substituída, aza-pirimidina ou desaza-pirimidina, consiste em converter um 2’-desoxinucleosido de fórmula geral em um composto intermédio (a.) 35'-anidro-2'-desoxinucleosido de fórmula geral γ

ou (b) 2, 3'-anidro-2 '-desoxinucleosido de fórmula geral e em converter depois estes compostos intermédios no composto pretendido, respectivamente, na presença de uma base forte ou de uma base eventualmente nucleofílica.

-60Estes compostos, que se utilizam como agentes anti-virais são especialmente eficazes contra o vírus que provoca a imunode fi ciência no homem (HIV).