PT87234B

PT87234B - Processo para a preparacao de extractos de frutos de serenoa repens consistindo em alcoois esterolicos e triterpenicos e de composicoes farmaceuticos que os contem

Info

Publication number: PT87234B
Application number: PT87234A
Authority: PT
Inventors: Maria Jose Magistretti; Giancarlo Jommi; Luisella Verotta
Original assignee: Idb Holding Spa; Consiglio Nazionale Ricerche
Priority date: 1987-04-17
Filing date: 1988-04-14
Publication date: 1992-07-31
Also published as: CS270241B2; IT8720181A0; EP0287000A1; JPH03500044A; WO1988007866A1; EP0365530A1; CS255088A2; PT87234A; AU1628988A; IT1203934B

Description

CCNSIG-LIC

RICERCHE’

INVERNI DELIA ΒΑΡΕΑ

O *P ..-.1 · “PROCESSO PâRA A PREPARAÇAC j3 DE FRUTOS DE SEWGA

REPENS CONSISTINDO E?i ALCGCIS EST3.RGLICG.3 Ξ TRITERPENI0C3 E DE CCKPOSIÇCs.3 MRHACEUTICaS SUE CS ΟΟ'ΙΊΈΝ

'âstes extractos podem ser constituídos, nomeadamente por 20% de álcoois triterpénicos tendo a estrutura poliprenólica de fórmula (I):

(Π n · 1-4

OH também referido o processo para a preparação de composições farmacêuticas contendo como o principio activo a fracção alcoolica obtida a partir do extracto lipofílico total dos frutos de Serenoa repens.

C extracto é dotado de uma melhor actividade antiandrogénica em comparação com o extracto lipo fílico total.

Processo de preparação do referi do extracto consiste em se submeter o extracto lipofílico to tal a hidrólise alcalina em solventes hidroalcoolicos, segui da de filtração e extracção do filtrado com ura solvente não miscível com a água.

(

-50 invento refere-se a composições farmacêuticas úteis para o tratamento de condições patológicas da próstata contendo uma mistura de álcoois de cadeia longa, saturados e não saturados, esterolicos e triterpénicos, extraídos dos frutos de Serenoa repens, e aos respectivos processos de preparação.

1'

Os frutos de Serenoa repens (Bart) Pequena, palmeira pequena também conhecida como Sabal serrulatum e Sabal serrulata Roem, and Schult., tíoica da flora do sudeste dos Estados Unidos, têm sido usados desde há muito tempo em fitotetapia para o tratamento de perturbações funcionais relacionadas com hipertrofia prostática. A sua utilização é citada por exemplo em Dispensatory of the United States of América” (J.B. Lippincot Co., philadephia, 19 60, 252 Ed., 1840 ) e é referida na American Pharmacopeia ( National Formulary VIII, 82 Sd., 457).

Foram recentemente patenteados pro cessos de preparação de extractos dos referidos frutos, apresentando a utilização de solventes com baixa polaridade ( FR• A-2.480.754) ou de um gás inerte em condições hipercríticas (Requerimento da Patente Italiana No. 20815 A/86 ).

Por meio dos referidos processos,

I obteve-se um extracto lipofílico total, com um rendimento pon deral de 10% começando a partir do material vegetal, dotado de propriedades curativas das doenças causadas por hipertrofia prostática benigna.

Este extracto é composto por 8% em uma mistura de ácidos gordos ( essencialmente ácidos capronico, caprinico, decanoico, laurico, miristico, palmitico,

-4oleico e esteárico) e em 1% por uma mistura de ésteres etílico e metílico dos referidos ácidos, por álcoois de cadeia longa saturados e não saturados sob a forma livre e esterifi cada com os ácidos atrás referidos e por álcoois esterólicos e triterpénicos que se apresentam também sob a forma livre e esterifiçada. Particularmente, a fracção alcoólica surge como sendo composta pelos álcoois n-docosanol (C23^45^)» ⁿ“ tricosanol (8253^0^), n-tetracosanol (C24H49OH), n-hexacosa nol (C26H55OH), n-octacosanol (028^57^), farnesal, geranilgeraniol, estigmaesterol,/h- sitoesterol, cicloartenol, lupeal, 24-metilenecicloartanol e quatro poliprenois tendo a estrutura geral (I), cujas taxas relativas serão referidas aqui a seguir.

(I) n - l-<

Verificou-se actualmente que é pos sivel aumentar a actividade farmacológica do extracto total submetendo-o a hidrólise alcalina em condições apropriadas e separando a fracção alcoólica da fracção acídica, a qual é eliminada.

De acordo com uma primeira apresen tação do processo do invento, 0 extracto lipofílico total ob tido de acordo com métodos conhecidos é tratado com produto alcalino em mistura hidroalcoólica e a mistura acídica é eli minada por filtração dos sais formados. A mistura dos álcoois é obtida por extracção do filtrado com um solvente não miscí vel com a água e evaporação até à secura da fase orgânica.

-5Alternativamente, quando se deseja obter uma diminuição do consumo de solvente, o extracto li pofílico total pode ser purificado preventivamente a partir do componente acídico por dissolução do extracto em álcool ( por exemplo álcool metílico ) e eluição numa resina básica de permuta ionica, por exemplo Amberlite IRA 400* ou elite 2a ·

A fracção neutra eluida é então submetida a tratamento com produto alcalino concentrado e extracção com um solvente não miscível com a água.

A mistura de álcoois do presente invento, que é obtida com um rendimento de cerca de 0,5-0,% em peso no que se refere ao material vegetal de partida, de acordo com diferentes técnicas cromatográficas e análise espectroscópica cuidadosa ( MS, ^^C-RMN ), é composta por três classes de compostos:

a) álcoois de cadeia longa saturados e não saturados contendo uma porção alcoólica primária, totalizando 20% do peso da mistura, tendo a composição relativa referida aqui a seguir

b) álcoois esterólicos e triterpénicos, importando em 40% da mistura, tendo a composição relativa referida aqui a seguir;

c) álcoois não saturados tendo a estrutura poliprenolica (1), importando em 40% do peso da mistura, tendo a composição relativa referida aqui a seguir.

às composições quantitativas de a-b-c podem por vezes revelar variações de acordo com o mate rial vegetal usado·

A actividade antiandrogenica da fracção obtida de acordo com o invento (PA), foi ensaiada em ratazanas orquiectomizado tratado com androgênios exógenos. Em particular ratos-toupeira foram orquiectomizados e tratados subcutâneamente durante 6 dias com propionato de testosterona dissolvido em azeite na dose de 12 mg/molde. Qontempo râneamente ao tratamento esteroide, os animais foram tratados com doses de 50mg/molde da fracção alcoólica atrás referida ou 4C0mg/molde do extracto lipofílico total de 8. repens(EL) como referência.

No fim da experiencia, foram pesa das a próstata ventral e as vesículas seminais dos animais tratados e dos contrôlos (testemunhas).

Ambos os produtos ensaiados diminuíram de um modo estatisticamente significativo o peso destes orgãos, tal como é indicado no Quadrol. Contudo, a fracção alcoólica, administrada numa dose 8 vezes inferior à do extra cto total, induziu surpreendentemente uma diminuição percentu al maior do peso dos orgãos.

Quadro 1 - Efeito antiandrogénico do extracto lipofílico total (EL) de 3. repens e da fracção alcoólica (FA) nele conti da sobre o peso da próstata ventral e das vesículas seminais de ratos orquiectomizados tratados com 12 mg/ molde de palmi tato de testosterona (TP).

Eatos	N^s animais	Peso do corpo	Próstata mg	ventral mg/100 g do peso corporal	Vesículas mg	-7- seminais mg/100 g do peso corporal
Controlos normais	15	113+3	36,9+2,7	32,9+2,6	33,1+2,9	29,7+2,9
Controlos Orquiectomizados	15	107+4	5,1+1,2	4,9+1,3	15,2+1,1	14,1+0,7
Orquiectomizados + TP	15	112+2	30,2+3,0	27,4+2,7	26,1+1,7	23,3+1,4
Orquiectomizados + TP + FA (50 mg)	15	104+3	14,5+1,5 (55) ⁰	15,7+1,4 (50) ⁰	18,6+1,5 (29) ⁰	17,8+0,2 (24) ⁰
Orquiectomizados + TP + EL (400 mg)	15	108+4	18,7.+1,8 (58) ⁰	17,5+1,6 (57) ⁰	22,7+1,6 (15) ⁰	21,0+1,0 (10) ⁰
⁰ Diminuição percentual dos orgãos no que se refere a ratos tratados apenas com TP.

-8A ausência de toxicidade e a aç tividade antiandrogénica no animal torna a aplicação do extracto contendo os álcoois elevados do invento particularmen te vantajosos na terapêutica do adenoma benigno da próstata.

Para realizar este objecto, o ex tracto do invento é formulado convenientemente em composições farmacêuticas que podem ser administradas por via oral ou rectal, usando métodos e excipientes convencionais, tais como os descritos em Remington’s pharmaceutical Sciences Handbook”, Hack Pub. Co., jqt., U.S.A. A posologia diária depende da evolução das condições do doente ( peso, sexo, idade) e da gravidade da doença: ela variará contudo geralmente entre 20 e 100 mg, divididos em duas ou mais administreções por dia.

Os exemplos que se seguem ilustram o invento sem o limitarem.

EXEMPLO 1

Frutos e sementes finalmente moi dos de S. repens (1 Kg) foram extraídos à temperatura ambien te com quatro porções de 1,5 1 de n-hexano, sendo cada extrac ção realizada durante 12 horas.

Os percolatos foram concentrados sob vácuo até eliminação total do solvente e o resíduo (90g) foi tratado durante 48 horas à temperatura ambiente com 4 1 de metanol e 1, 2 1 de KOH 2,5 N. A mistura da reacção foi filtrada do sólido separado e os líquidos mãe foram diluídos com 15 1 de água purificada.

Foram realizadas duas extracções com duas porções de 51 de cloreto de metileno e as fases or-

gânicas foram lavadas com 2 1 de uma solução tornada ácida por meio de ácido clorídrico 1 N, em seguida com água e fi nalmente secas (Ia₂S0₄). Após evaporação, foram obtidos 3 g de um resíduo oleoso amarelo pálido, compreendendo uma mis tura de álcoois.

A mistura das composições foi avaliada pelos métodos que se seguem:

g do produto, submetido a cromatografia de coluna conten do 100 g de gel de sílica, deu origem, após eluição com cio reto de metileno e quantidades crescentes de acetato de eti lo, a três fracções:

- Fracção 1 (200 mg). No exame CGL-EM, revela após sililação a composição seguinte;

	abundancia relativa
-fainesol	0,18	294
-fitol	8,83	368
-geramilgeraniol	6,88	362
^_η“°22^Η45^0Η	0,18	385 (M-15)
n—C₂ jH^rjOH	0,33	411 (M-15)
η-^^Η^θΟΗ	1,00	425 (M-15)
ⁿ’^C26^H53^0H	1,44	439 (M-15)
^28^	2,20	467 (M-15)
cujos tempos de retenção	e espectros de massa	foram compa·

rados com amostras autênticas.

- Fracgão 2 (400mg). Após tratamento com 3 ml de anidrido acético em 2 ml de piridina e fraccionamento sobre coluna contendo 80 g de gel de sílica impregnado com nitrato de prata a 10% (eluente éter de petróleo e quantidades crescentes de cloreto de metileno), foram isolados desta frac ção os seguintes álcoois esterólicos e triterpénicos:

abundancia relativa

-acetato de estigmaesterol	1,62	394	(M-AcCH)	142°
-B-sitosterol	12,23	396	(M-AcOH)	126-7
-cicloartenol	5,97	468		123°
-lupeol	2,40	468		220°
-24-metilenecicloartanol	1,00	482		104-5'

As caracteristicas quimico-físi cas e espectroscópicas (ly, ^H-RMN, MS) dos produtos isolads revelaram ser idênticos às da amostra autêntica.

- Fracção 3 (400 mg). Esta fracção, composta por poliprenais, foi fraccionada por meio de cromatografia de coluna conten do 90 g de Lichroprep RP 18^R (Merck) com acetona aquosa a 90%.

Foram isolados os poliprenois que se seguem com a estrutura geral (1);

abundancia relativa ( como derivados-TMS )

n 1	1,00
n = 2	7,00
n = 5	54-,00
n - 4	5,60

498

566

654

702 cuja configuração foi determinada por meio de ressônância magnética nuclear de protões e carbono. Em particular, 0 es “

pectro C-RMN dos poliprenois revela os seguintes sinais metílicosj

17,7 (Me trans terminal), 25,7 (Me cis terminal), 25,4 (sinal cismetilo 5), 16,0 (sinais metil trans n), 25,4 ppm (Me em C-5).

Foram obtidos resultados qualitativamente e quantitativamente idênticos realizando a extrac ção com CO2 hipercritico e submetendo 0 extracto aos tratamentos atrás descritos.

EXEMPLO 2 resíduo (90 g) obtido a partir da extracção do hexano de acordo com 0 Exemplo 1 de 1 Kg de frutos de Serenoa repens, foi misturado com 2,21 de metanol. A solução obtida foi filtrada a partir das partículas não dis solvidas e eluidas numa coluna contendo 5 1 de resina fortemente basica Amberlite XRA 400 .

produto eluido metanólico neutro

-12contendo 15,5 g de resíduo, foi concentrado sob vácuo até um volume de 500 ml e tratado à temperatura ambiente durante 24 horas com 100 ml de solução aquosa de KOH 2,5 N. A mis tura da reacção foi filtrada do sólido e os líquidos mãe separados, diluidos, com 1,5 1 de água, foram extraidos com 2 x 200 ml de cloreto de di metileno. As fases orgânicas foram recolhidas, lavadas até à neutralidade com água e secas ( Na^O^)· Após evaporação sob vácuo foram obtidas 3 g de re síduo oleoso, composto por uma mistura de álcoois idêntica à descrita no Exemplo 1.

EXEMPLO 5

Composição farmacêutica em comprimidos contendo a preparação consistindo em álcoois naturais. Cada comprimido de 100 mg contem:

Fracção alcoólica extraida de S. repens	mg 20
Celulose granular	mg 40
p Crospovidone	mg 20
Celulose carboximetilica de sódio	mg 10
polivinilpirrolidona PM 50.000	mg 5
Sílica coloidal	mg 5
Talco	mg 2

EXEMPLO 4

Formulação farmacêutica para supositórios contendo a preparação consistindo em álcoois naturaX 8 ·

Cada supositorio de 1,5 g contem*

Fracção alcoólica extraída de S. repens Glicerídeos semi-sintéticos F.U. (excipiente para supositórios) mg 50 mg 1450

Claims

lã.- Processo para a preparação de extractos de frutos de Serenoa repens consistindo em álcooisi de cadeia longa, saturados e não saturados, esterólicos e triterpénicos, caracterizado por o extracto lipofílico total, facultativamente purificado preventivamente a partir do componente acídico por eluição sobre resinas de permuta iónica, ser submetido a hidrólise alcalina alcalina em solventes hidroalcoolicos, seguida de filtração facultativa e de extracção do filtrado com um solvente não miscível com a água.
2^a.- processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por se preparar extracto dos frutos de Serenoa repens consistindo em 2(M de álcoois de cadeia longa saturados contendo ema porção hidroxi primário, os quais são álcoois triterpénicos tendo estrutura poliprenólica com a fórmula I ãê.- Processo para a preparação de composições farmacêuticas, dotadas de actividade antiandrogénica, caracterizado por se incluir nas referidas composições, álcoois de cadeia longa, saturados e não saturados, esterólicos e triterpénicos, extraídos dos frutos de Serenoa repens.
4â.- processo, de acordo coe a reivindicação 5, caracterizada pelo facto do principio activo consistir em 20% de álcoois de cadeia longa saturados ou não saturados, contendo uma porção hidroxi primária, os quais sãc álcoois triterpénicos tendo a estrutura poliprenólica com a fórmula I vindicação 3 ou 4, caracterizado por se preparar composições farmacêuticas apropriadas para administração cral ou rectal.