PT87111B - Processo para a preparacao de peptidos ciclicos e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents
Processo para a preparacao de peptidos ciclicos e de composicoes farmaceuticas que os contem Download PDFInfo
- Publication number
- PT87111B PT87111B PT87111A PT8711188A PT87111B PT 87111 B PT87111 B PT 87111B PT 87111 A PT87111 A PT 87111A PT 8711188 A PT8711188 A PT 8711188A PT 87111 B PT87111 B PT 87111B
- Authority
- PT
- Portugal
- Prior art keywords
- group
- met
- phe
- peptide
- methyl
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 33
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 title description 23
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 title description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 113
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 45
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 24
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 17
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 claims description 13
- 230000037406 food intake Effects 0.000 claims description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims 12
- 230000001180 sulfating effect Effects 0.000 claims 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241001331845 Equus asinus x caballus Species 0.000 claims 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 43
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 41
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 35
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 35
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 22
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 19
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 17
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 13
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 13
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 12
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000036186 satiety Effects 0.000 description 9
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- -1 aryl esters Chemical class 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 7
- RAMGWDLTLUIASL-UHFFFAOYSA-N pyridine;sulfo acetate Chemical compound C1=CC=NC=C1.CC(=O)OS(O)(=O)=O RAMGWDLTLUIASL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 5
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 5
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- IMUSLIHRIYOHEV-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C IMUSLIHRIYOHEV-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 4
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 4
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- POJQCKMUKSKXST-GIZYWFQPSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-amino-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(4-sulfooxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]acetyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-4-ox Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 POJQCKMUKSKXST-GIZYWFQPSA-N 0.000 description 3
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 108010046118 cholecystokinin (27-33) Proteins 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- BDUPRNVPXOHWIL-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfite Chemical compound COS(=O)OC BDUPRNVPXOHWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 3
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AJGJINVEYVTDNH-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[methyl-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N(C)[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 AJGJINVEYVTDNH-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(O)=O VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 2
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 2
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- LPNYRYQCGLBWQJ-YPMHNXCESA-N (2S,3R)-2-[benzyl-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyloxy]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)ON([C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 LPNYRYQCGLBWQJ-YPMHNXCESA-N 0.000 description 1
- DHSAFIANOVAARS-SFHVURJKSA-N (2s)-2-[(2,6-dichlorophenyl)methyl-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N([C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)CC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DHSAFIANOVAARS-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- AJKVQEKCUACUMD-UHFFFAOYSA-N 2-Acetylpyridine Chemical compound CC(=O)C1=CC=CC=N1 AJKVQEKCUACUMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027324 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Human genes 0.000 description 1
- XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 6-(4-aminophenyl)sulfonylpyridin-3-amine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=N1 XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 101100114413 Bacillus subtilis (strain 168) comZ gene Proteins 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100172886 Caenorhabditis elegans sec-6 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N Cyanamide Chemical compound NC#N XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101001009252 Homo sapiens 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- SCIFESDRCALIIM-UHFFFAOYSA-N N-Me-Phenylalanine Natural products CNC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SCIFESDRCALIIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SCIFESDRCALIIM-VIFPVBQESA-N N-methyl-L-phenylalanine Chemical compound C[NH2+][C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 SCIFESDRCALIIM-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101100321409 Rattus norvegicus Zdhhc23 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000978776 Senegalia senegal Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Natural products C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- MICFJCRQBFSKPA-UMPQAUOISA-N Trp-Met-Thr Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)=CNC2=C1 MICFJCRQBFSKPA-UMPQAUOISA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000011166 aliquoting Methods 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 150000007860 aryl ester derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- QFLBZJPOIZFFJQ-UHFFFAOYSA-N cholecystokinin 33 Chemical compound C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(=O)NC(CCSC)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NC(CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)C(CCSC)NC(=O)C(C=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C1N(CCC1)C(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CCSC)NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)CNC(=O)C(CO)NC(=O)C1N(CCC1)C(=O)C(C)NC(=O)C(N)CCCCN)C(C)CC)C(C)C)CC1=CNC=N1 QFLBZJPOIZFFJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- OFESGEKAXKKFQT-UHFFFAOYSA-N n-ethenyl-n-methylformamide Chemical compound C=CN(C)C=O OFESGEKAXKKFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012154 short term therapy Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000004001 thioalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000013585 weight reducing agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/12—Cyclic peptides with only normal peptide bonds in the ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/595—Gastrins; Cholecystokinins [CCK]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/27—Cyclic peptide or cyclic protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Obesity (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Description
A redução de peso é muitas vezes recomendada como uma primeira atitude para doentes que sofrem de NIDD, hipertensão, hipercolesterolémia, doenças das artérias coronárias, gota e osteoartrite. Contudo, existem relativamente poucos instrumentos terapêuticos que os médicos possam utilizar para realizar a perda de peso. Agentes farmacêuticos que são utilizados correntemente como auxiliares da diéta aconselháveis são eficazes numa terapêutica a curto prazo mas não são aceitáveis para uso prolongado devido a um desenvolvimento de tolerância, da sua actividade sob o sistema nervoso central e efeitos secundários indesejáveis. Assim aproximadamente 95:/ destes doentes que obtêm sucesso em perder peso, voltam aos eeus pesos iniciais dentro de 12 a 84 meses.
Um agente que reduza a ingestão de alimentos porque mimetiza os sinais de saciedade periféricos corporais, espera-se que seja mais bem sucedido para se utilizar numa terapêutica crónica, possua menos efeitos secundários nocivos e esteja isento de actividade sob o sistema nervoso central.
A colecistoquinina (CCK) é uma hormona polipeptídica que foi isolada primeiramente sob a forma dum péptido com 35 aminoácidos no trato gastrointestinal porcino (Mutt et al, Biochem J. (Proced. Biochem Soc.) 125; 57p-58p,; 1971; Mutt et al., Clin. Endocrinol., Supplement, jj; 1755-1835; 1976).A/.OGK administrada perifericamente exibe uma saciedade no rato, coelho e no macaco (Jorpes et al., Acta Chem.Scand., 18, 2408-2410, 1964; Della-Fera
- 3 et al., Science, 206, 4-71-73, 1979; G-ils et al., 1973; J. Comp. e Physicol, Psychol, 84; 488-4-95). Perfusões de CCK-8, o octapéptido análogo a CC-K, têm mostrado diminuir a ingestão de alimento pelo homem magro ou obeso (J. Smith. Int. J. of Obesity, 8, 1984, Supplement 1, 35~38). Presentemente aceita-se que CCK possui o efeito que induz a saciedade e portanto pode ser utilizável para reduzir ou suprimir a ingestão de alimentos pelo ser humano.
A hormona polipeptídica, CCK-33, tem a sequência de aminoácidos seguinte:
Lys- Ala- Pr o- Se r-Gly- Arg- Vai- Ser-Me t-1 leLys-Asn-Leu-Gln-Ser-Leu-Asp-Pro-Ser-HisArg-Ile-Ser-Asp-Arg-Asp-Tyr-(SO^ H)-Met-Gly-TrpMet-Asp-Phe-NHg·
Fragmentos de CCK, por exemplo, CCK-8 e CCK-7 também têm mostrado uma acção que induz à saciedade. A CCK-8 tem a seguinte sequência de aminoácidos:
2' 28 29 30 31 32 33
Asp-Tyr( SO^^-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Fhe-NHg.
a CCK-7 tem menos um aminoácido do que CCK-8 ist-^ é, CCK-8 menos a Asp na posição 26.
Os péptidos conhecidos possuem uma configuração linear.
4ΖGeralmente os péptidos lineares são constituídos por mo léculas muito flexíveis e ausência de conformação bem definida. Cada amino-ácido de um pêptido linear está exposto ao meio circundante o que dá origem portanto, a um pêptido muito mais susceptível para a degradação químico-enzimática do que os péptidos com uma conformação bem definida.
As formas lineares de CCK-53, CCK-8 e dos seus vários análogos, assim como o CCK-7 sabem-se que exibem efeitos que induzem à saciedade, mas estes péptidos têm uma acção curta. Além disso a CCK-8 linear, por exemplo, degrada-se muito rapidamente após contacto com o suco gástrico humano. A administração oral eficaz dos compostos que induzem a saciedade está impedida. Descobrir fórmulas destes compostos que actuem mais largamente e que induzem à saciedade assim como uma administração por via oral efi caz tem naturalmente interesse.
Um pêptido cíclico é um pêptido em que os terminais, car boxílico, beta ou gama de um amino-ácido na cadeia péptidica estão ligados ao terminal aminado, alfa, delta ou épsilon de outro aminoácido na cadeia pepbídica, via formação de uma ligação amida. A ligação entre os dois aminoácidos na cadeia- , gera uma estrutu ra em anel.
As propriedades biológicas dos péptidos cíclicos são alteradas de um modo consideravelmente relativo às propriedades dos seus análogos lineares. Os péptidos cíclicos são muito mais rígi
dos, de formatos bem definidos e com resíduos de aminoácidos interiores que estão bem protegidos do meio circundante. Estas alterações refletem-se nas propriedades biológicas de péptido, 0 aspecto, a duração da acção dos péptidos cíclicos será maior uma vez que a estru tura compacta os torna menos susceptíveis a uma degradação enzima tica ou quimíca. A biodisponibilidade do péptido cíclico será aumentada devido a alterar nos tecidos a distribuição provocada pela protecção dos resíduos de aminoácidos interiores. Além disso, o formato bem definido do péptido cíclico fornece-lhe uma maior especificidade para um determinado receptor, reduzindo portanto a probabilidade de uma actividade biológica indesejável, simultânea mente com a actividade desejada. Em contraste, com os péptidos li neares existem geralmente receptores centrais e periféricos para um péptido linear dado, e é considerável a existência de radioactividade cruzada de um dado péptido com os receptores para outro péptido.
A presente invenção diz respeito a péptidos lineares com sequências específicas aqui descritas e a fórmulas cíclicas destes péptidos e dos seus sais aceitáveis em farmácia. A presente invenção também diz respeito a métodos para suprimir a ingestão de alimentos em animais que consistem em se administrar a um referido animal uma quantidade eficaz dos péptidos da presente invenção ou dos seus sais aceitáveis em farmácia, que suprima a ingestão de alimentos.
No contexto da presente invenção define-se um péptido
cíclico como um péptido em que o terminal carboxilo beta ou gama de um aminoácido da cadeia peptídica está ligada ao terminal amino alfa, delta ou épsilon de outro aminoácido da cadeia peptídica.
A menos que estabelecido de outro modo nos péptidos da presente invenção aplicam-se as configurações seguintes:
Aminoácidos
Terminal de
| na cadeia | aminoácido ligado para constituir o peptídico cíclico | |||
| Lys | £ | Amino | ( £ | épsilon) |
| Ora | Δ | amino | (Δ z | delta) |
| Tyr(SO^H) | ot | amino | ( α x | alfa) |
| Asp | β | carboxilo | ( 0 = | beta) |
| Glu | Y | carboxilo | (Y = | gama) |
Os péptidos cíclicos específicos da presente invenção são constituídos de forma a proteger o grupo funcional dos aminoácidos na cadeia onde a ligação ciclíca não é desejada, permitindo os aminoácidos ligarem-se conjuntamente para formar uma estrutura cíclica não protegida. Nos métodos de síntese em fase sólida os grupos da cadeia lateral reactivos dos vários radicais de aminoácidos, são protegidos tipicamente com grupos protectores apropriados que impedirão a reacção química de se realizar nesse local até que os grupos de protecção sejam finalmente removidos. Cada aminoácido da cadeia pode ser protegido mediante qualquer grupo de protecção convencionalmente utilizado para o respectivo
- 7 7 aminoácido na síntese de fase em solução. Os aminoácidos não protegidos da cadeia, serão depois ligadps para formarem os pêptidos cíclicos da presente invenção.
As abreviaturas que se seguem ou símbolos são utilizados para representar os aminoácidos, grupos activos, grupos protectores e outros
- ε -
Símbclo
AA
Ac
Orn
2-cloro-Z
Z
DMF
Boc
TFA
Phe-Níi2
Significado
Aminoácido
Acetil urnitina
2-cloro-b enz iloxicarboni1o
Benziloxicarbonil
Dimetilformamida terc.Butiloxicarboniln
Ácido trifluoroacético
Àcetonitrilo .. n
N- me t i 1- Phe- NTIp
Phe-NHCfí-^
TI- me t i 1- Phe- NHC H.
Os aminoácidos são citados pela designação de três letras comumente utilizadas, a menos que especificadas de outro modo signifiquem o isómero L.
A presente invenção também diz respeito a péptidos cícli cos de fórmula geral I.
X-Tyr(SO^H)-R-Gly-Trp-R^-Asp-R na qual
X representa
R representa representa
R representa e Y representa um grupo 00-alquilo inferior;
um grupo Lys ou Orn;
um grupo Met ou Nle;
um grupo Phe ou N-metil-Phe;
um grupo NH2 ou NHCHj,
São particularmente preferidos os péptidos com as fórmu las:
CH^~00-Tyr(SQ^H)-Lys-GlyTrp-Met-Asp-N-metil-Phe-NH2 C H^-CO- Tyr( S 0^ H)- Lys-Gly- Trp-Me t-Asp-Phe-NH2 CH,-C0-Tyr(S0xH)-Lys-Gly-Trp-Nle-Asp-N-metil-Phe-NH2 > i_________________________________________i
CH^-CO- Tyr( SO^H)- Orn-Gly-Trp-Met- Asp-N-Me t i 1- Phe-NH2
A presente invenção também diz respeito a péptidos de fórmula geral II
- 10Tyr(SO,H)-R-Glu-Trp-R1-N- metil-Phe-Y
I__________I________________J
na qual
R representa um grupo Met ou Mie
R1 representa um grupo Met ou Nle 2
R representa um grupo Thr(SO^H), Ser (SO^H) , HypCSG^H)
Y representa NH2 ou NHOH^
Ê particularmente preferido um péptido com a fórmula
Tyr(SO,H)-Met-GlU“Trp-Met-Thr(SO3H)-N-metil-Phe-MH2 i p_________________I 3
A presente invenção também diz respeito a péptidos de fórmula geral III
Tyr ( SO ,H)- R-Gly- Trp- Glu-R^-N- me t il- Phe-Y
L .......,......_?______________________________________I na qual
R representa um grupo Met ou Nle r! representa um grupo ThrCSO^H)
Ser (SO^H), HypCS^H)
Y representa um grupo NH2, NHCH^
E particularmente preferido um péptido de acordo com a fórmula·
Tyr(SO3H)-Met-Gly-Trp-Glu-lni ($O3H)-N-metil“Piie-NH2
Relativamente aos péptidos de fórmula geral I, em queR representa um grupo Lys, o terminal (épsilon) amino de Lys é o terminal que se liga ao terminal, (beta) carboxílieo de Asp para formar o péptido cíclico. Na fórmula geral I, em que R repre senta Orn é o terminal (delta) amino de Orn que se liga com o terminal (beta) carboxilo de Asp para formar o péptido cíclico.
Relativamente à fórmula geral II é um terminal (alfa) amino de Tyr (SO^H) que se liga ao (gamma) carboxilo terminal de Glu para formar o péptido cíclico.
Relativamente à fórmula geral III ê um terminal (alfa) amino de Tyr (SO^H) que se liga ao terminal (gamma) carboxílieo de Glu para formar o péptido cíclico.
A presenta invenção também diz respeito a péptidos lineares de fórmula geral IV:
) X-Tyr( SO5H)-R-Gly-Trp-R1-Asp-R2-Y na qual
Σ representa um grupo CO-alquilo inferior
R representa um grupo Lys ou Orn
R^representa um grupo Met ou Nle
R representa um grupo Phe ou N-metil-Phe
Y representa um grupo NH^ ou NHCH^
ou a péptidos de fórmula geral V
Ty r ( SO H)- R- Glu- Trp- R1- R2-N- me t i 1- Phe- Y na qual
R representa um grupo Met ou Nie r! representa um grupo Met ou Nle
R representa um grupo Thr(SC^H),
Ser ( SU^H) , Hyp( SQ^H)
Y representa um grupo NH2 ou NHOH^ ou péptidos de fórmula geral VI
Tyr(SO^H)-R-Gly-Trp-Glu-R1-N-metil-Ph.e-Y na qual
R representa um grupo Met ou Nle
R^representa um grupo Thr(SO^H), Ser(SO^H), Hyp(SO^H)
Y representa um grupo NH2 ou NHCHj
Os péptidos da presente invenção possuem um efeito que induz à saciedade em animais e, são utilizáveis para suprimir a ingestão de alimentos. Podem ser utilizados através de um programa para controlar ou reduzir o peso corporal do animal.
A presente invenção também diz respeito a pêptidos cíclicos com sequências de aminoácidos descritas nas fórmulas gerais,
I, II, III ou aos seus sais aceitáveis em farmácia e às composições que contêm estes pêptidos.
Esta invenção também diz respeito a pêptidos lineares com sequências de aminoácidos indicadas nas fórmulas IV, V, e VI e, aos seus sais aceitáveis em farmácia.
A presente invenção também descreve um método para suprimir a ingestão de alimentos nos animais que compreende a administração a um referido animal de uma quantidade eficaz que suprima a ingestão de alimentos dos pêptidos desta invenção.
Tal como aqui se utiliza a designação quantidade que suprime a ingestão de alimento refere-se à quantidade de péptido (baseado num peso) por Kg. de peso corporal do animal que pode ser administrado para suprimir a ingestão de alimentos. Pertence aos técnicos desta matéria calcular as quantidades que se consideram para a administração ao animal em causa e do peso do animal. 0 nível dos tétricos nesta matéria que se relaciona com a utilização de CCK-8 como agente de saciedade está descrita nas referências resumidas em Morley. J.E., Minireview The Ascent to Cholecystokinin (CCK) From Gut to Brain Life Sciences, 3,0 479-493, at pages
485-488, 1982.
processo de síntese dos péptidos da presente invenção consiste:
a) em se preparar um péptido linear em bloco correspondentemente ligado a uma resina de fase sólida.
b) em se remover o péptido linear da resina e se purifi car através de HPLC
c) em se tratar o péptido linear com agente de ciclização para se obter um péptido cíclico mediante a formação de uma ligação amida e purificação através de HPLC.
d) em se sulfatar o péptido cíclico e se purificar atra vés de HPLC.
a) A preparação do péptido linear em bloco correspondentemente ligado a uma resina de fase sólida*
Os péptidos podem ser preparados utilizando-se a síntese de fase sólida pelo método descrito dum modo geral por Merrifield, J.Am. Chem. Soc. 85 2149-2154 (1963) ainda que outros métodos de síntese química equivalentes conhecidos também possam ser utiliza dos.
A síntese de fase sólida é iniciada a partir do terminal carboxílico do péptido que se vai sintetizar mediante ligação a um ácido alfa amínico protegido, por uma ligação amida a uma resi na apropriada, por exemplo, resina de benzilidrilamina (BHA) ou resina de metilbenzilidrilamina (MBHA). Os suportes resinosos BHA
1' e MBHA são comercializados e utilizados geralmente quando se deseja sintetizar um péptido que tem uma função amida não substituída no terminal carboxilo.
Todos os dissolventes utilizados nas preparações descritas aqui, por exemplo, cloreto de metileno (OHgC^^^-propanol e dimetil-formamida (DMF) eram do grau destilado em vidro fornecido por Burdick â Jackson e sem destilação posterior. 0 ácido trifluoro-acético (TFA),a iiisopropiletilamina (DIPEA), e diciclo-hexilcarbodiimida (DGC) foram obtidos da Chemical Cyanamid Corporation e eram do grau de pureza sequencial. 0 etanc-ditiol (EDT) foi obtido da sigma Chemical Co. e utilizado sem purificação posterior. Todos os aminoácidos protegidos possuíam a configuração L a menos que indicado de outro modo e foram obtidos da Bachem.
Nos métodos de síntese de fase sólida, os grupos da cadeia lateral reactivos dos vários radicais de aminoácidos foram tipicamente protegidos com grupos protectores apropriados que impediram a reacção química no local até que um grupo protector fosse finalmente eliminado. Ainda que os grupos de protecção específicos sejam descritos relativamente ao aspecto da síntese de fase sólida, deve notar-se que cada aminoácido pode ser protegido por qualquer grupo protector convencionalmente utilizado para o respectivo ami. noácido, numa síntese de fase em solução.
Entre estes grupos protectores estão incluídos por exemplo grupos protectores convencionais para grupos carboxilos colhi dos entre ésteres tais como os ésteres arílicos, particularmente, grupos fenilo eventualmente substituídos tendo como substituinte um átomo de halogéneo ou um grupo alquilo inferior, nitro, tio ou tio-alquilo inferior com 1 a 7 átomos de carbono. Todos os grupos alfa-amino foram bloqueados com funções terc.- butiloxicarbonilo (Boc). Os grupos de cadeia lateral foram substituídos do seguinte modo: Asp, Glu, Thr, com benzilo; Trp com formilo e Tyr com 2,6-diclorobenziló; Lys com 2-cloro- Z ou comZ .
A pureza destes compostos foi confirmada por cromotografia em camada fina (CCB) e rotação óptica. A resina benzilidrilamina (BHA) era um copolímero de estireno-divinilbenzeno 1% sob a forma de pérolas (20^-4^0 malhas) obtida da Beckman Instruments.
conteúdo total em azoto era de 0,654 meq/g.
Utilizaram-se cs aparelhos seguintes: a Cromatografia em camada fina (CCF) foi realizada com vidro pré-revestido com I gel de sílica 60 F254 (Merck) utilizandc-se sistemas de dissolven’ tes apropriados. A detecção das manchas foi feita por fluorescência UV (254 nm de absorção) visualização com iodo ou atomização de ninidrina (para as aminas primárias e para as aminas secundárias)
Para a análise de aminoácidos os péptidos foram hidrolisados em HC1 6N que continha fenol à temperatura de 115 °C durante 24 horas em tubos de hidrólise Reacti-Therm (Wheaton Scientific
Company, Milville, N. J. 08332). As análises foram obtidas num analisador de aminoâcidos Beckman 121 M.
A cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) foi realizada num equipamento de laboratório que consistia numa bomba Constametric I, uma bomba Constametric III um programador e mistu rador de dissolventes Gradient Master e um detector de U.V. de comprimento variável Spectromonitor III.
A cromatografia líquida da alta resolução analítica foi realizada com colunas de fase reversa Waters Micro Bondapack C-^g (0,4- x 25 cm). A HPLC preparativa para separação, foi realizada em colunas Whatman (2,5 x 50 cm) Partisil M 20 lu/50 ODS-3 ou colunas (2,3 x 30 cm) micro Bondapack °18· Em qualquer dos casos foi utilizada uma pré-coluna Whatman Co; Pell ODS de compactação pelicular.
Os péptidos foram reunidos por fases num suporte sólido
I utilizando-se um sintetizador de péptidos Vega 250. 0 módulo químico foi controlado por um processador Model 300 Micro da Vega Biochemicals com operações manuais nos passos 16 e 20.
g de Boc-N-metil-Phe (17 nmol) foram ligados com 5 5 de resina benzilidrilamina utilizando-se 1,8 g de DCC (9 nmol) à temperatura de 0°C. A impregnação foi determinada por análise de aminoâcidos com um valor de 0,2u nmol/g de resina. Grupos amino
não reagidos foram capeados mediante tratamento com 6 equivalentes de cada um dos reagentes anidrido acético e piridina.
| A síntese foi iniciada com resina e o protocolo para um ciclo sintético típico foi o seguinte: | ||
| Passo | Reagente | Tempo |
| 1 | 1% edt/ch2ci2 | 1x30 sec |
| 2 | 50% TÍA/CH2C12 1% EDT | lxl min |
| 3 | Repet. passo 1 | |
| 4 | 50% TFA/CH2C12 1% EDT | 1x15 min |
| 5 | CH2G12 | 1x30 sec |
| 6 | 2-Propanol | 1x30 sec |
| 7-8 | Repet. passos 5 & 6 | |
| 9 | ch2ci2 | 2x30 sec |
| lv | 8% RIPEA | 2χ2 min |
| 11-15 | Repet. passo 5-9 | |
| 16 | 5 equiv. Boc-AA anidrido | 1x30 min |
| 17 | 1% RIPEA | 1x5 min |
| 18-19 | Repet. passos 6&9 | |
| 20-21 | Repet. passos 16&17 se Kaiser | teste positivo |
| 22 | 2-Propanol | 1x30 sec |
| 23-24 | Repet. passos 5&6 | |
| 25 | CH2C12 | 1x30 sec |
| 26 | BMF | 2x30 sec |
| 27 | ch2ci2 | 3x30 sec |
- 19,Os dissolventes para todas as lavagens e ligações foram medidos em volumes de 10-20 ml/g de resina. As ligações foram realizadas como anidridos simétricos de aminoácidos Boc. Estas foram realizadas em ΟΗ2012 à temperatura de 0 C durante 15 minutos, utilizando-se 10 equivalentes de amincácido Boc e 5 equivalentes de DCC.
As reacções de ligação foram controladas por um ensaio com a ninidrina de Kaiser para determinar se a ligação era completa após 0 passo 19 (Kaiser, Ξ. et al. Anal. Biochem, 54, 595“ -598 (1970). os ciclos totais foram compreendidos entre 54-160 minutos para cada resíduo.
b) Remoção do pêptido linear da resina e purificação por HPLC preparativa?
As resinas peptidicas reunidas totais foram secas sob alto vácuo durante a noite. As condições de desbloqueamento e cisão foram as de Tam et al modificadas, Tetrahedron Letters, 25 4455-4458 (1982) que foram optimizadas para os analogos de CCK-8 na generalidade. A resina peptídica foi tratada num aparelho de teflon HF (Península) com HF, dimetil-sulfureto e paracresol (5:15:2) ml durante 1 hora à temperatura 0°C, após evaporação para um volume reduzido de HF anidro recente destilou-se no reci piente da reacção (18 ml), para um segundo tratamento durante 1 hora e meia a temperatura de 0 C. Apôs cuidadosa evaporação a
- -
resina seca foi lavada com três volumes de cada reagente EZ2° e EZOAc, e em seguida titulada com 4 x 15 ml de ácido acético a 30% e filtrada. A liofilização do filtrado aquoso forneceu um pêptido linear bruto.
A purificação preparativa foi realizada directamente com 0 pêptido sob a forma bruta através de HPLC numa coluna micro Bon dapack C, o (2,3 χ 30 cm) ou numa coluna Whatman ODS-3 (2,5 x 5^cm).
-Lo
Os péptidos foram aplicados num volume mínimo de AcOH 50% e dilui dos com um gradiente lento durante 4 horas de 5-85 %, 0,022% de TFA/CH^ CN, para um débito de 8,0 ml/minuto. As fracções foram recolhidas com iritervalos de 3 minutos e foram feitos cortes apôs inspecção por HPLC analítica. As fracções consideradas com uma pureza superior a 97 % foram reunidas e liofilizadas.
A pureza do pêptido foi avaliada através de HPLC e era de 99% em todos os casos. A análise de aminoácidos dos péptidos individuais foi realizada e foram obtidos os valores esperados para cada caso. Também se realizaram análises por 17,V., I.V. e M.S. nos compostos análogos que confirmaram a integridade química dos péptidos.
c) Tratamento do pêptido linear com agente de ciclização para se obter um pêptido cíclico através da formação de uma ligação amida e para purificação por HPIC.
Dissolveu-se o peptido linear em dimetilformamida e tratou- se com uma mistura de HOL 3N e Dioxano para protonar o grupo amino livre sob a forma de cloridrato. Este foi tratado com difenilfosfenilazida e activado durante 1 nora à temperatura de -20°C. Em seguida diluiu-se a mistura reaccional (15 volumes) com dimetilformamida e adicionou-se N-metil-morfoiina a um pH de 7,5. A reacção de ciclização foi realizada durante 2 dias à temperatura de +5°C durante o qual o pH foi verificado e mantido para um valor neutro (pH 7,4) mediante adição de N-metil-morfolina. 0 pH num dissolvente orgânico foi determinado por aplicação de uma porção da solução a papel de escalas de pH humedecido.
progresso da ciclização foi seguido por análise de aliquotas da mistura reacional utilizando-se HPLC. Usualmente apôs ou 2 dias o péptido linear inicial é convertido num monómero cíclico ou numa fórmula polimérica do péptido linear.
Os péptidos cíclicos brutos obtidos foram verificados por HPLC preparativa numa coluna de (2,3 x 30 cm) micro Bondapack C 18. Os péptidos foram aplicados num volume mínimo de ácido acético e eluídos com gradiente lento (4,h.) de 5-6,5 % 0,C22% TFA/CH^CN com um débito de 8,0 ml/minuto. Recolheram-se fracções com intervalos de 3 minutos e foram feitos cortes após inspecção por análise de HPLC. A pureza dos péptidos cíclicos foi verificada por HPLC, análise de aminoácidos e MS.
d) Sulfatação do péptido cíclico e purificação por HPLC:
grupo éster do ácido sulfúrico que continha pétidos foi preparado por dupla sulfação do grupo hidroxilo (tirosina, serina, Treonina ou hidroxiprolina) utilizando-se o reagente de ácido sulfúrico acetilpiridina. A sulfatação típica foi realizada do seguinte modo*
60-24u mg de acetil sulfato de piridinium (PÁS) foram dissolvidos em 5 ml úe piridina e misturados à temperatura de 60 °C durante 10 minutos, 0 análogo de N-acetil-CCK8 (10 mg) foi dissolvido em 5 ml de piridina a que se adicionou o reagente PAS. Após aquecimento e agitação durante 40-60 minutos à temperatura de 60°C, neutralizou-se com 2 volumes de bicarbonato de amónio 0,05 M, liofilizou-se e purificou-se através de HPLC.
Os péptidos sulfatados fcram purificados por HPLC de fase inversa preparativa numa coluna (1,25 X 30 cm) utilizando-se um gradiente (ES Industries) de de 2 horas (10-40%), de acetonitrilo em carbonato hidrogénio e amónio 0,05 M com um débito de 5 ml/minuto e detecção a 24o nm. As fracçóes a serem reunidas e a pureza do péptido foram determinadas por HPLC analí tica utilizando-se uma coluna Bondapack CL o, 10a Waters com lo 7 (0,30 x 30 cm ) e acetonitrilo em gradiente de bicabornato de amónio com um débito de 2 ml e detecção a 215 mm.
A pureza dos péptidos sulfatados foi determinada por
HPLC analítica, análise de aminoácidos, UV, IV, MS e RMN.
Os exemplos que se seguem ilustram detalhadamente a preparação dos péptidos com actividade reguladora do apetite, da presente invenção utilizando-se o processo descrito antes. Nos exemplos descritos a seguir, a menos que se estabeleça de outro modo, os péptidos foram caracterizados e a sua pureza determinada mediante aplicação de análise de aminoácidos HPIX3 analítica UV, IV, e MS.
EXEMPLO I
Preparação de Ac-Tyr(SO,H)-Lys-Gly-Trp-Met-Asp-N-metil-Phe-NH>
i j
BocN-metil-Fe-(5gí 17»8 nmoles), foi dissolvida numa mistura de 50 ml de cloreto de metileno e 50 ml de dimetilformamida arrefecida à temperatura de 0°C, adicionou-se (1,8 g, 9 nmoles) com agitação diciclo-hexilcarbodiimida e agitou-se a mistura durante 60 minutos à temperatura de 0°C.
Separadamente lavou-se 5 g de benzilidrilaminoresina (0,56 nmoles N/g), (copolímero de ligação cruzada do estireno com 1% de divinilbenzeno) com diisopropiletilamina a 109É em cloreto de metileno durante 30 minutos, filtrou-se e lavou-se com cloreto de metileno, dimetilformamida e cloreto de metileno. A mistura arrefecida foi adicionada à resina e agitada durante 24 horas à temperatura ambiente. A resina foi filtrada, lavada com cloreto
de metileno, dimetilformamida, isopropanol, cloreto de metileno, dimebilformamida, isopropanol e cloreto de metileno e seca sob vácuo elevado.
A análise de aminoácidos mostrou que a resina continha
0,20 mmoles de N-metilfenil-alanina por grama de resina. Grupos amino que não reagiram foram capeados mediante agitação da resina com 5 ml de anidrido acético e 5 ml de diisopropiletilamina em cloreto de metileno durante 60 minutos. A resina foi filtrada e lavada com cloreto de metileno, isopropanol, dimetilformamida e cloreto de metileno. 4,8 g (0,96 mmoles) da resina de Boc-N-metilfenilalanina foi submetida a uma síntese de fase sólida sequencial utilizando-se o processo descrito antes. Todas as ligações foram realizadas utilizando-se anidridos simétricos dos ácidos Boc-amino como se descreveu. No passo 16 e 20 os aminoácidos activados foram adicionados com tempos de reacção que correspondiam ao seguinte; seis ciclos individuais foram realizados com Bod-ácido aspártico-/3- éster benzílico (1,6 g, 5 mmoles, 60 minutos, 1,6 g, 5 mmoles, 60 minutos), Boc-metionina (1,25 g, 5 mmoles, 30 minutos, 1,25 g, 30 minutos, 5 mmoles), Boc-N^- formil-triptofano (1,70 g, 5 mmoles, 30 minutos, 1,70 g 5 mmoles, 30 minutos), Boc-glicina (900 mg, 5 mmoles, 30 minutos, 900 mg, 5 mmoles, 30 minutos) Boc-£-2-cloro- Z— lisina (2,10g, 5 mmoles, 30 minutos, 2,10g, 5 mmoles, 30 minutos), e Boc-2,6-diclorobenzil-tirosina, (2,2 g, 5 mmoles, 30 minutos, 2,2 g, 5 mmoles, 30 minutos).
A clivagem dos grupos protectores Boc e a acetilação da resina com 20 ml de anidrido acético, 20 ml de piridina em clore to de metileno durante 60 minutos forneceu 5,2 g de resina hepta péptidil acetilada.
1,9 g de resina de péptidilo foi cindido mediante trata mento com 25 ml de hidrofurano que continha dimetil-sulfito (2 ml) ( 1 ml) de anisol e ditioetano, (0,7 ml), durante 1 hora à temperatura de 0°C. Apés evaporação cuidadosa a resina foi lavada com 2 volumes de acetato de etilo e em seguida titulada com 4 x 15 ml de ácido acético a 30%, filtrada e liofilizada para fornecer 30υ mg do péptido sob a forma bruta.
150 mg do péptido sob a forma bruta foram purificados através de HPLC preparativa com uma coluna de (2,3 x 30 cm) micro Bondapack Clg. 0 péptido foi eluido com gradiente linear de 5 a 65%, 0,022% TFA/CH^CN com um débito de 8 ml/minuto e detecção a 280 nm. 0 pico principal foi recolhido e liofilizado para fornecer 2o mg (11%) de Ac-Tyr-Lys-Gly-Trp-Met-Asp-N-Metil-Fe-Mg· te material era homogéneo como revelou a HPLC e forneceu uma análise e MS de aminoácidos correctos. 19 mg (0,02 mmoles) do péptido linear foram dissolvidos em 1 ml de dimetilformamida e adicionados a 0,1 ml de uma mistura de HC1 3 M / Dioxano. A mistura reac cional foi evaporada à secura e redissolvida em 1 ml de dimetil-formamida. Adicionou-se 0,13 ml (0,005 mmoles) de difenilfosforilazida e em seguida a mistura foi arrefecida à temperatura de -20°C
2'6 e, deixada sob a agitação durante 1 hora a essa temperatura. Em seguida a mistura reacional foi diluída com 15 ml de DMF e o pH corrigido para 7,5 (medido por tiras de pH humedecidas) com N-metilmorfolina.
A mistura reacional foi aquecida à temperatura de 5°C θ deixada em repouso durante 2 dias a esta temperatura a um pH de 7,4. 0 pH foi mantido com a adição de pequenas quantidades de N-metilmorfolina.
A mistura reacional foi concentrada sob vácuo e o resíduo dissolvido em 1 ml de ácido acético e aplicado a uma coluna de (2,J x 50 cm) micro Bondapack C-^g. A coluna foi eluída com gradiente lento (4 horas) de 5-65%, 0,022% TFA/CH^CN com um débito de 8,0 ml/minuto. A detecção fez-se a 280 nm. Recolheram-se fracções com 5 minutos de intervalo e os cortes foram feitos após inspecção por HPLC analítica. 0 pico que correspondia ao péptido cíclico foi recolhido e liofilizado para fornecer 8 mg (rendimen| to 4-5%) de:
Ac- Tyr- Lys-Gly- Trp-Met- Asp-N- me t i 1- Phe-NH?
1_____________________________________________________I
Este material era homogéneo através de HPLC e forneceu a análise de aminoácidos seguinte: Asp 1,00 (1); Gly 1,07 (1); líet 1,00 (1); Tyr 1,12 (1); Lys 1,00 (1); 0 Trp e o N-metil-Phe não foram determinados e, tinham a US correcta. A fórmula empírica ^9%2N10°10S; pes0 molecular 982,14.
Adicionaram-se a 190 mg de acetil sulfato de piridínio (PAS) 10 ml de piridina destilada anidra. A mistura resultante foi aquecida â temperatura de 60°C sob agitação durante lOm. A solução foi deixada arrefecer e adicionaram-se 8 mg de Ac-Tyr-Lys-Gly-Trp-Met-Asp-N-metil-Phe dissolvida em 10 ml de piridina à solução e a mistura reacional foi agitada durante 1 hora à tem peratura de 60 °C. Em seguida a mistura reacional foi neutralizada com 2 volumes de bicarbonato de amonium liofilizado. A purificação foi conseguida por HPLC de fase inversa preparativa numa coluna ES Industries Clg~ 1Ο/λ(1,25 x 50 cm) utilizando-se um gradiente linear de 10-4u% de 0,05 M / CH^ CN em 120 minutos com um débito de 5 ml/minuto e detecção a 240 nm. u rendimen to foi de 87% correspondente a 7,0 mg de: Ac-Tyr(S0^H)-Lys-Gly-Trp-Met-Asp-N-Metil-Phe-NH2
A análise de aminoácidos: Asp 1,00 (1); Gly 1,00 (1);
Met 1,00 (1) ; Tyr 1,12 (1); Lys 1,0o (1); Trp e N-metil-Phe n.d.
Fórmula empirical G49H62N10^ 15S2
P.M. 1065,21
EZEMPLu 2
Preparação de Tyr(SOxH)-Met-Glu-Trp-Met-Thr-(SOxH)-N-metil-Phe-NHp !_________1___________! 2 g (0,8 nmoles) de resina Boc-N-metilfenilalanina que foi obtida do mesmo modo como descrito no Exemplo 1, foi submetida a uma sínΛ.
tese de fase sólida sequencial utilizando-se o mesmo processo como descrito no Exemplo 1. Todas as ligações foram realizadas utilizando-se anidridos simétricos de Boc-aminoácidos como descrito antes. Na fase 16 e 20 os aminoácidos activados foram adicionados com os tempos de reacção correspondentes seguintes: seis ciclos individuais foram realizados com : Boc-O-benzil-treonina (1,5 g, 5 mmoles, 60 minutos l,5g» 5 mmoles, 60 minutos), Boc-metionina (l,25g, 5 mmoles, 30 minutos, l,25g, 5 mmoles, 30 minutos), Boc-N^formiltriptofano (l,7g, 5 mmoles, 30 minutos; l,7g , 5 mmoles, 30 minutos) Boc-ácido glutâmico-Y-éster benzílico (1,6 g, 5 mmoles, 30 minutos; l,6g, 5 mmoles, 30 minutos) Boc-metionina (l,25g, 5 mmoles, 30 m., 1,25 g, 5 mmoles, 30 m. ) e Boc-2,6-diclorobenzil-tirosina (2,2g, 5 mmoles, 30 m. 2,2g 5 mmoles, 30 m.). A desprotecção dos grupos de protecção Boc foi realizada como descrito no Exemplo 1 para fornecer 4,9 g da heptapeptidil resina. 1 g da resina foi cortado por tratamento com 5 ml de HF que continna dimetil-sulfito (12 ml), p-cresol (2,0 ml) e ditioetano (1 ml) durante 1 hora à temperatura de 0°C. Após evaporação até um pequeno volume, foi destilado HF anidro recente (18 ml) num recipiente de reacção para um segundo tratamento durante 2 horas à temperatura de 0°C.
Após evaporação cuidadosa a resina foi lavada com acetato de etilo, em seguida titulada com ácido acético a 30%, filtrada, liofilizada para fornecer 210 mg do péptido sob a forma bruta. Purificaram-se 10v mg deste péptido sob a forma bruta através de
HPLC preparativa, numa coluna com (2,5 x30 cm ) micro Bondapack
péptido foi eluido com
0,C22% TFA/CH^CN com um débito um gradiente linear de 5~85% » de 8 ml/minuto e detecção a 280 nm.
pico principal foi recolhido e liofilizado para fornecer 15 mg (rendimento 19%) de Tyr-Met-Glu-Trp-Met-Thr-N- metil-Pe-NHg que era um material homogéneo através de HPLC e que forneceu a análise de aminoácidos MS correcta.
Ciclizaram-se 15 mg (0,υ2 mmoles) do péptido linear, uti lizando-se difenilfosforilazida como descrito em detalhe no Exemplo 1 para se obterem 6 mg (rendimento 41% ) de:
Tyr- Me t- G lu- T rp- Me t- Thr- N- me t i 1- Phe- NH? ι_________________________________________________ι este material era homogéneo a HPLC e forneceu a análise de aminoácidos seguinte; Thr 0,94 (1); Glu 1,00 (1); Met 2,00 (2); Tyr 1,00 (1); Trp 0,80 (1); N-metil-Fe n.d., com M S correcta. Fórmula Empírica PM . 1002,G
A 80 mg de acetil sulfato de piridina (PAS) adicionaram-se 6 ml de piridina destilada anidra; A mistura reacional foi aquecida à temperatura de 60°0 sob agitação durante 10 minutos. A solução foi deixada arrefecer e 5 mg de Tyr-Met-Glu-Trp-Met-Thr-N-metil-Phe-NHg dissolvido em 3 ml de piridina foram adicionados à solução e a mistura reacional foi agitada durante 1 hora à temperatura de 60 C. Em seguida a mistura reacional foi neutralisada com 2 volumes de bicabornato de amónio e liofilizada.
Çr
A purificação foi obtida por HPLC de fase inversa preparativa numa coluna ES- Industries C^g- 10/ (1,25 x JO cm), utilizando-se um gradiente linear de 10-40% de 0,05 NH^HCO^/CH^CN em 12u minutos com um débito de 5 ml/minuto e detecção a 240 nm. Obtiveram-se l,4mg (rendimento 45%) de:
Tvr( SO , H)-Me t-G lu- Trp-Met- Thr- ( SO x H)-N- Me t il- Phe-NH? l
Análise de aminoácidos: Thr 0,85(1); Glu l,uu(l); Met 1,80(2)· Tyr l,uu(l); Trp u,75(l); N-metil-PRe n.d.
Fórmula Empírica Ο^Ηθ-Ν^Ο^θβ^ PM 1162,32
EXEMPLO 3
Preparação de Tyr(SOzH)-Met-Gly-Trp-Glu-Thr(SvzH)-N-Metil-Phe-NHp
I_________£___________________ | *
5,0g (1 mmole) de resina Boc-N-metilfenilalamina que foi obtida do mesmo modo como descrito no Exemplo 1, foram submetidos a uma síntese de fase sólida sequencial utilizando-se o mesmo processo como descrito no Exemplo 1. Todas as lirrções foram realizadas utilizando-se anidridos simétricos de Bcc- aminoácidos como descrito antes. Nos passos 16 e 20 os aminoácidos activados foram adicionados com tempos de reacção correspondentes do seguinte modo· seis ciclos individuais foram realizados com Boc-O-benzil ” Ç
-Treonina (l,5g, 5 mmoles 60 min., 1,5 g, 5 mmoles, 60 min.); Boc-ácicLo glutâmico- Y-éster benzílico (}.,6g, 5 mmoles, 50 m., l,6g, mmoles, 50 m.); Boc-N^-formil-Triptofano (l,7g, 5 mmoles, 30 m., l,7g, 5 mmoles, 30 minutos);
Boc-glicina(900 mg, 5 mmoles, 50m., 900mg, 5 mmoles, 30 m.); Boc-metionina (l,25g, 5mmoles, 30 m. l,25g, 5 mmoles, 30 m.) e Boc-2,6-diclorobenzil-tirosina (2,2 g, 5 mmoles, 30 m. 2,2 g, 5 mmoles, 30 m.).
A desprotecção dos grupos protectores Boc foi realizada como descrito no Exemplo 1, para se obterem 5»80g. de resina de heptapeptidilo. Cindiram-se 2,4 g da resina mediante tratamento com HF que continha dimetil-sulfito, p-cresol e ditioetano utilizando-se o mesmo processo como descrito no Exemplo 2. A resina foi lavada com acetato de etilo, em seguida titulada com ácido acético a 30%, filtrada e liofilizada para fornecer 452 mg de pêptido sob a forma bruta.
100 mg de pêptido sob a forma bruta foram purificados através de HPLC preparativa numa coluna com (2,3 x 30 cm) micro Bondapack C^g. 0 pêptido foi eluído com gradiente linear de 5 até 65% 0,022% TFA/ /CH^CN com um débito de 8 ml/m. A detecção foi a 280 nm. o pico principal foi recolhido e liofilizado para fornecer 2o mg (rendimento 25%) de j Tyr-Met-Gly-Trp-Glu-Thr-N-iíetil-Phe-H^.
Esto material era homogéneo através de HPCL e forneceu
a análise de aminoâcidos e de MS correctos.
2o mg (0,ú2 mmoles) do péptido linear foram ciclizados utilizando-se difenilfosforilazida como descrito em detalhe no Exemplo 1 para se obterem 4 mg (rendimento 21%) de
Tyr- Me t- G ly- Trp- G lu- Thr- N- Me t i 1- Phe- NHn
I__________________________________________________________________________________I
Este material foi homogéneo através de HPLC e forneceu a análise de aminoâcidos seguinte·
Thr 0,90(1); Glu l,uu(l); Gly l,õo(l); Met 0,90(1); Tyr 0,97(1);
Trp u,63(l); N-metil-Phe n.d. e tinha MS c^rrecta.
Fórmula Empírica PM 928,u7
Dissolveram-se 4 mg de Tyr-Met-Gly-Trp-Glu-Thr-N-meti1-Phe-NH2, em 5 ml de piridina e adicionaram-se a uma solução de 80 mg de acetil sulfato de piridina (PÁS) em 5 ml de piridina, pre parada do mesmo modo como descrito no Exemplo 1. A mistura reacional foi agitada durante 1 hora à temperatura de 60 °C, a seguir neutralizada com 2 volumes de bicabornato de amónio e liofilizada.
Obteve-se a purificação através de HPLC preparativa utilizando-se as mesmas condições como descritas no Exemplo 1. Obtiveram-se 3,8mg (rendimento 94%) de:
Tyr-(S0^H)-Met-Gly-Trp-Glu-Thr-(S0^H)-N-metil-Phe-NH2
- ?3 / v:
Análise de aminoácidos· Thr 0,90(1); Glu 1,04(1); Gly 1,01(1);
Met 0,85(1); N-metil-Phe-e Trp n.d.
Fórmula Empírica C
P.M. Iv88,2u
EXEMPLO 4
Ensaio de ligação de receptor in vitro
Homogenizaram-se aproximadamente 5 g de estriado de bòvino congelado e pâncreas de rato fresco, aproximadamente 5 8? limpo de gordura e de tecido estranho, em tampão HEPES NS1 (10 mM HEPES , 13o mM NaCl, 5 mM MgCl2, pH 7,4) utilizando-se 35 partes de tampão por cada parte de tecido em peso húmido/base de volume (aproximadamente 175 ml). 0 tecido foi homogeneizado 2 vezes durante 15 segundos aproximadamente à temperatura de 0°C, utilizan do-se um homogeneizador Polytron regulado para 6. 0 tecido foi isolado por centrifugação a 48.000 x g durante 10 minutos â temperatura de 0°C. A porção de tecido resultante foi ressuspensa em tampão HEPES NQ2 (10 mM HEPES, 13o mM NaCl, 5mM MgCl2, 1 mg/L de fluoreto de fenilmetano-sulfonilo (PMSF) 200 mg/L de Bacitracina) · uma parte de tecido estriado (peso original húmido) por 80 partes de tampão e uma parte de tecido de pâncreas (peso original húmido) por 70 partes de tampão.
Iniciou-se a incubação por combinação de concentrações diversas de péptidos naturais CCK-8 ou péptidos de fórmula geral I com ''H-CCK-S-CSO^H) (concentração final = 0,15 mM) e homogeneizado de tecido (estriado 0,26 mg de proteína em 2 ml de volume final; pâncreas 0,165 mg de proteína em 1 ml de volume final). As amostras foram incubadas durante 30 minutos à temperatura de 25°0 e a incubação terminou por colocação da mistura em papel de filtro pré-humedecido Whatman GF/B num Sandbeck Vacuum Filtration Manifold. Os tubos de incubação foram lavados com 2 x 3 ml de tampão HEPES N22 arrefecido em gelo e, as lavagens filtradas através de um filtro GF/B.
filtra foi seco com ar durante 10 minutos e em seguida colocado numa ampola de cintilação com 12 ml de cocktail de cinti lação Beckman HP/b Ready-Solv. Os frascos foram agitados durante 2-12 horas e em seguida contados utilizando-se um espectrómetro de cintilação Beckman Model 780o. A ligação não específica foi determinada na presença del^de CCK-S natural e subtraída de todas as amostras para se determinar a ligação específica. A concentração de pépticlo necessário para inibir 50% da ligação total específica H-CCK-8-(S0^H) (CI^-) foi determinada por análise de sonda-log.
Os resultados resumem-se no Quadro I.
Ο
Ε>
ο
| <n φ | r-M C | |
| φ | Pd | Ρ |
| rd | <πι | -Ρ |
| C CXJ | «—4 >-4 | |
| C | Ρ | C |
| W5 | d | ο |
| -Ρ | φ | |
| ia | Η «Η | φ |
| φ | •Η Φ | Ό |
| άθ | r-1 Μ | |
| d | ctí mi | |
| H | Η |
Φ Μ) ω Λί C \
| ω | ||
| d φ | c | |
| d | Φ Ρ | |
| ο | •d d | Íh |
| d | Ρ | |
| <ctí ff |
| P | c | Z^X |
| d | φ d | »K+» |
| •ri | Ti -ri | |
| d | > | |
| P | c | |
| ω | fh |
οι a
| ω | ||
| # | • * | |
| * | 'Ά * | |
| * | * 3 | * |
| ω | Ο >—1 | •4 lf\ |
| + 1 | + 1+1 /λ α | +1+1 |
| σ> | η α | |
| τ | Α ~ | 1—1 Μ'\ |
| rH | ι—1 ι—1 | ι—1 ι—1 |
| * | * | |
| * | ¥ | |
| ο- | □ * | * * |
| rH | rH Α | <3 b- |
| + 1 L. | *1+4 | + 1+ 1 rH Α |
| 0J | θ'- rH | oo < |
| • | |||
| * * ο | * | * * | Η Α |
| ιΗ | 0^ | σ> | r-4 |
| + 1 | + 1 | + 1 | + 1 |
| Cd | 1-4 | Η | =τ |
| Νλ | Π* | Α | r-4 |
| rH | r-l | .-4 | ι—1 |
| * | ¥ | * ¥ | ¥ |
| Ο | 3 | * | Ο |
| -4 | rH | Ο- | r-4 |
| + ! | + 1 | + 1 | + 1 |
| ϊ'- | OJ | CJ | Α |
| X | IX | Α | ο- |
| CXJ | CXJ 3 | CX1 3 | 3 | O | O | 3 |
| A | ACd | A CXJ | Cd | cu | Cd | CXJ |
| A | IA | A | A | A | A |
0-J
| ·» | 3 | A | 3 | 3 | •3 | 3 |
| A | 3 | 4‘ | O | O | 3 | O |
| | | O | O | •í | 3 | ||
| r4 | r-4 | Φ | A | A | O | |
| r4 | rH |
ctí ο •Η Ό *ίΗ Ρ
Pd φ
Ρι ctí •Η ο d <Φ σ’ φ ω
| 0 | ||||||||
| 3 | Ο | o | 0 | 0 | ||||
| 4- | CS | 3 | '3 | 3 | O | 0 | ||
| o | Ο | 3 | O | ’J | 0 | |||
| r4 | A | Ρ | rH | O | rH | 0 | ||
| Δ | A | Cd A | Λ | rH | ||||
| A | c | |||||||
| rH | ||||||||
| 1—1 | Cd | A | c | |||||
| d | ||||||||
| P | ||||||||
| d | ||||||||
| c | ||||||||
| 0 | ||||||||
| Cd | CXJ | |||||||
| CO | Pr-4 4-+H | S | ra | |||||
| s | c | |||||||
| M | cu | Cd | CXJ | 1 | 1 | í> | A | |
| O | i-r-1 | s | H-4 f-Μ | Φ | Φ | •H | ||
| o | d | AH | 1--—1 | _d | Jd | P | O | |
| 1 | 1 | 1 | Pd | Ph | ϋ | |||
| Φ | Φ | Φ | 1 | 1 | Φ | •3 | ||
| Cd | .d | 3 | 3 | rH | 1—1 | Pd | V/ | |
| !——< 4—4 | Pd | Pd | fd | •Η | •H | ia | ||
| 1 | 1 | 1 | P | P | φ | Pd | ||
| | | rH | CXJ | r-4 | rH | Φ | Φ | d | |
| Φ | •ri | 4-τ-4 4~Μ | •ri | •rH | a | a | ||
| r—4 rP4 | P | S | P | P | 1 | 1 | ω | * |
| Pd 1 | Φ | 1 | Φ | Φ | K | s | c | |
| a | φ | s | s | J | j | rd | ||
| Pd | ι | 3 | 1 | 1 | ||||
| ω | Hr <—4 | Pd | 125 | t-^r +—i | hrH 1—4 | LC | Φ | |
| •4* | 1 | 1 | I | 1 | A | A | •fO | |
| 1 | Pd | Pd | Pd | 3 | O | d | •x | |
| P | CQ — | . Ρ — | p - | ÚJ — | CO | ω | φ | r4 |
| Φ | <íl} | --4 | 1 -4 | -4 | V-- | d | 0 | |
| I | I | 1 | 1 | d | d | Φ | *5 | |
| 1 | -P | Ρ | Φ | P | r-^d | 3 | M-4 | 3 |
| Pd d | Φ br-4 | φ +4 | r-4 Ê5 | Φ *21 | EH 1 | EH 1 | •ΓΊ rd | V |
| EH | I | I | 1 | 1 | P | 3 | Pd | |
| 1 | 04 | Pd | Pd | Pd | Φ | rH - | φ | |
| t>9 | d | d | d | d | 0 | P | ¥ | |
| rH | EH | EH | Eh | EH | f | 1 | q | ¥ |
| O | 1 | 1 | 1 | 1 | Pd | P< | φ | |
| 1 | ha | h> | í>a | !>> | d | P | s | |
| P | r-4 | r-4 | r-4 | rH | EH | Eh | «j | |
| Φ | o | 0 | 0 | O | 1 | 1 | l> | |
| a | ζ | 1 | 1 | 1 | P | •H | ||
| 1 zX | •a | ia i>s- | ω í>J | d d J | rH rH O 0 | 4J Ctí | •1 | |
| w | A | >3 | 43 | O | 1 | ! | O | rH |
| A | l | 1 | 1 | 1 | 43 | _P | •rH | O |
| C | z~x | <~x | Φ | Φ | 0 | |||
| ω | s | rH 1 | EH | í-r4 F-M | *^4 | t.-H *4 | •r! | |
| >—.· | A | A | A | A | 1 | 1 | d | 0 |
| d | O | 3 | O | 3 | U) | V | ||
| h | ω | tíj | ω | 03 | 1-1-1 | •ri | ||
| EH | X.U | t | “a | ΝΛ | ífl | |||
| l | d | rd | d | 3 | Pd | |||
| Pd | Ρ’ί | rS> | k> | C2 | d | |||
| M | EH | EH | E4 | EH | 0 | |||
| *4 | | | | | 1 | 1 | d | 0 | rH | * |
| | | ύ | O | O | O | r3- | tá | * | |
| <4 | 4 | -4 | <4 | eH | EH | ¥ |
C ί> •Η Ρ
Ctí
Ο •ri Μ •rH d
ίιΟ •Η
Ρ
Ο κΰ
Ρ !Ι
Cj
EXEMPLO 5
Ensaio de alimentação com duas refeições
Foram aclimatados ratos machos Sprague-Dawley (CD) com 180-200g de peso (Charles River Breeding Laboratories) a ciclos de 12 h. alternados de luz/escuro (6 a.m. a 6 p.m.) num quarto mantido à temperatura de 22°C. Em seguida foram mantidos em jejum durante 2 dias, pesados, colocados em gaiolas individuais e iniciou-se um período de treino de refeições de 4 dias. Durante este tempo os ratos foram alimentados com comida de laboratório em recipientes (Purina Lab Chow) durante 1 h;
das 9 até às 10 da manhã, depois as tigelas foram retiradas das 10 às 12 horat e novamente colocadas nas gaiolas das 12 horas até à 1 hora da tarde. Após este regime de refeições 1-2-1 a maior parte dos ratos aprenderam a comer aproximadamente tanto por dia, durante as 2 como se tivessem acesso aos alimentos ad libitum num período de 24 horas por dia.
No quarto dia os ratos foram pesados e qualquer perda de peso superior a 5 g excluía o animal do ensaio. Os animais foram em seguida distribuídos em grupos experimentais (n=5 a 6) e grupos de controlo (n=6-12), mas não foram misturados pelo peso corporal.
Os péptidos da presente invenção foram suspensos em solução de cloreto de sódio se solúveis, ou em goma arábica a 1%, se insolú-
veis com uma concentração de 32 a 320 g/ml/Kg de peso corporal e,
- 37 administrados por via intraperitoneal 15 m. antes da primeira refeição do 5° dia de alimentação. Em seguida os ratos ingeriram as suas refeições como tinha sido feito durante os quatro dias anteriores e, as taças com a alimentação foram pesadas antes e após a refeição para se determinar o consumo de alimento.
A ingestão de alimento foi expressa sob a forma da média e de erro padrão da média conouma percentagem dos valores do controlo para os vários grupos. Os valores dos grupos tratados foram comparados com os valores dos grupos de controlo por análise de teste-t. Os resultados estão resumidos no Quadro I.
EXEMPLO 6
Incubaram-se 4uu microlitros de suco gástrico e 20u micro gramas do péptido do Exemplo I (Ac-Tyr(SOzH)-Lys-Gly-Trp-Met-Asp> i-----------------------------------------1
-N-metil-Phe-NHg) e CCK-8 (H-Asp-Tyr(SO^H)-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2), à temperatura de 37°0 durante diversos períodos de tempo. A degradação foi controlada por HPLC analítica numa coluna micro Bondapack Cjg de (0,4 x 300cm) com um gradiente linear de 10-4u% de 0,01 M NH^Ac/CH^CN em 40 m. com um débito de 2 ml/m e deteção a 225 nm.
As taxas para 0 Exemplo I estão baseadas na produção presumível de Ac-Tyr-Lys-Gly-Trp-Met-Asp-N-metil-Phe-NHo isento de i___________________________________________J enxofre e para CCK-8 no desaparecimento do pico que corresponde a
CCK-8.
| Péptido | Tempo de incubação | Percentagem de degradação |
| em minutos | por área | |
| Exemplo 1 | 0 | u |
| 60 | 1,4 | |
| 18G | 3,6 | |
| 158G | 12,8 | |
| CCK-8 | ϋ | ú |
| 15 | 90 | |
| 60 | luu |
Claims (19)
- Reivindicações1.- Processo para a preparação de péptidos de fórmula geralX representa um grupo CO-alquilo inferior;R representa um grupo Lys ou Orn;R^ representa um grupo Met ou Nle;R^ representa um grupo Phe ou N-metil-Phe; eY representa um grupo NH^ ou NHCH^;e dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se tratar o pêptido não sulfatado correspondente com um agente de sulfatação e, eventualmente, de se converter o pêptido assim obtido em seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
- 2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a pre paração de péptidos de fórmula geral I na qual X representa um-40' grupo CO-CH3, R representa um resto Lys ou Orn, R1 representa um grupo Met ou Nle; R2 representa um grupo N-metil-Phe ou Phe e Y representa um grupo caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 3. - Processo de acordo com a reivindicação 2r para a preparação de comjoostos de formula geral I na qual R representa um resto Lys, R^ representa um resto Met ou Nle e R2 representa um grupo N-metil-Phe ou Phe, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 4. - Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de compostos de fórmula geral 1 na qual R^ representa um resto Met e R2 representa um grupo N-metil-Phe,ou seja um péptido de fórmulaCH--CO-Tyr(SO,H)-Lys-Gly-Trp-Met-Asp-N-metil-Phe-NHn, 3 3 í____________________________1 2 caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 5.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a pre- paração de compostos de fórmula geral I na qual R^ representa um grupo Met e R2 representa um grupo Phe, ou seja um péptido de fór-
mula CH_-CO-Tyr-(SO,H)-Lys-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH0, J J i______________________________ι 2 caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais corres - 6. - Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual representa um resto Nle e R2 representa um grupo N-metil-Phe, ou seja um péptido de fórmulaCH3-CO-Tyr(SO3H)-Lys-Gly-Trp-Nle-Asp-N-metil-Phe-NH2, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 7. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R representa um grupo Orn, representa um grupo Met e R2 representa um grupo N-metil-Phe, ou seja um péptido de fórmulaCH3-CO-Tyr(SOgH)-Orn-Gly-Trp-Met~Asp-N-metil-Phe-NH2Z caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 8.- Processo para a preparação de péptidos de fórmula geralT^r(S03H)-R-G1u-Trp R representa um grupo R^ representa um grupo representa um grupo Hyp(SO3H);Y representa um grupo •R -R -N-metil-Phe-Y IIMet ou Nle;Met ou Nle;Thr(SO3H), Ser(SO3H), ouNH2 OU NHCH3; e na qual:dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se tratar um péptido não sulfatado correspondente com um agente de sulfatação e, eventualmente, de se converter o péptido assim obtido em um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
- 9. - Processo de acordo com a reivindicação 8, para a preparação de péptidos de fórmula geral II na qual R representa um resto Met ou Nle, R^ representa um resto Met ou Nle, R2 representa um grupo Thr(SO3H), SerCSO^H) ou HypíSO^H) e Y representa um grupo NH2, caraeterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 10. - Processo de acordo com a reivindicação 9, para a preparação de péptidos de fórmula geral II na qual R representa um grupo Met, R^ representa um grupo Met ou Nle e R2 representa um grupo ThríSO^H), SerÇSO^H), ou HypCSO^H), caraeterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 11. - Processo de acordo com a reivindicação 10, para a preparação de compostos de formula geral II, na qual R^ representa um grupo Met e R2 representa um grupo ThríSO^H), ou seja um péptido de fórmulaTyr(SO^H)-Met-Glu-Trp-Met-Thr(SO,H)-N-metil-Phe-NH-,I 3 I 3 2 caraeterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais corres pondentemente substituídos.
- 12. - Processo para a preparação de péptidos de fórmula geralTyr(SO_H)-R-Gly-Trp-Glu-R,-N-metil-Phe-Y III1 3 _____________i 1 na qualR representa um grupo Met ou Nle;R^ representa um grupo ThríSO^H), SeríSO^H) ouHyp(SO3H); eY representa um grupo NH^ ou NHCH^;ou dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se tratar um péptido não sulfatado correspondente com um agente de sulfatação e, eventualmente de se converter o péptido assim obtido em um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
- 13. - Processo de acordo com a reivindicação 12, para a preparação de péptidos de fórmula geral III na qual R representa um grupo Met ou Nle, R^ representa um grupo ThrCSO^H), Ser(SO^H) ou Hyp(SOjtl) e Y representa um grupo NH^, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos .
- 14. - Processo de acordo com a reivindicação 13, para a preparação de péptidos de fórmula geral III na qual R representa um grupo Met e R^ representa um grupo ThríSO^H), SerCSO^H) ou HypíSO^H), caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 15.- Processo de acordo com a reivindicação 14, para a preparação de compostos de fórmula geral III, na qual R^ representa o grupo ThríSO^H), ou seja um pêpetido de fórmulaTyr(SOqH)-Met-Gly-Trp-Glu-Thr(SO-H)-N-metil-PheNH_,I__________________-__________________l 3 2 caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.
- 16, - Processo para a preparação de péptidos de fórmula geralX-Tyr (SO3H) -R-Gly-Trp-R-^Asp-R^Y IV na qualX representa um grupo CO-alquilo inferior;R representa um grupo Lys ou Orn; representa um grupo Met ou Nle;R^ representa um grupo Phe ou N-metil-Phe; eY representa um grupo NH^ ou NIíCH-j;ou dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se tratar um péptido não sulfatado correspondente com um agente de sulfatação e, eventualmente, de se transformar o péptido assim obtido em um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
- 17. - Processo para a preparação de péptidos de fórmula geralTyr(SO3H)-R-Glu-Trp-R^-R2-N-metil-Phe-Y V na qualR representa um grupo Met ou Nle;R^ representa um grupo Met ou Nle;r2 representa um grupo Thr(SO3H), Ser(SO3H), ouHyp(SO3H); eY representa um grupo NH2 ou NHCH3;ou dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se tratar um péptido não sulfatado correspondente com um agente de sulfataçao e, eventualmente, de se converter o péptido assim obtido em um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
- 18.- Processo para a preparação de pêptidos de formula geralTyr (SO3H) -R-Gly-Trp-Glu-R-^N-metil-Phe-Y VI na qualR representa um grupo Met ou Nle;R^ representa um grupo ThríSOgH),Ser(SO3H) ou Hyp(SO3H); eY representa um grupo NH2 ou NHCH3;ou dos seus sais aceitáveis em farmácia, caracterizado pelo facto de se tratar um péptido não sulfatado correspondente, com um agente de sulfataçao e, eventualmente, de se converter o péptido assim obtido em um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêu tico.
- 19.- Processo para a preparação de composições farma...cêuticas apropriadas em especial para controlar ou suprimir a ingestão de alimentos, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade terapêutica eficaz de um pêptido preparado pelo processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 18 ou de um seu sal aceitável em farmácia, e eventualmente, uma ou mais outras substâncias terapeuticamente activas, com um veículo inerte) aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, e de se converter a mistura resultante em uma forma dé administração galénica.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/031,632 US4808701A (en) | 1987-03-30 | 1987-03-30 | Cyclic peptides having appetite regulating activity |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PT87111A PT87111A (pt) | 1988-04-01 |
| PT87111B true PT87111B (pt) | 1992-07-31 |
Family
ID=21860562
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PT87111A PT87111B (pt) | 1987-03-30 | 1988-03-29 | Processo para a preparacao de peptidos ciclicos e de composicoes farmaceuticas que os contem |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4808701A (pt) |
| EP (1) | EP0285061A3 (pt) |
| JP (1) | JPS63258489A (pt) |
| KR (1) | KR880011198A (pt) |
| AU (1) | AU610144B2 (pt) |
| DK (1) | DK174388A (pt) |
| FI (1) | FI881470A (pt) |
| HU (1) | HU201098B (pt) |
| IL (1) | IL85885A0 (pt) |
| MC (1) | MC1913A1 (pt) |
| NO (1) | NO881384L (pt) |
| NZ (1) | NZ224051A (pt) |
| PH (1) | PH25149A (pt) |
| PT (1) | PT87111B (pt) |
| YU (2) | YU62688A (pt) |
| ZA (1) | ZA881621B (pt) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5086042A (en) * | 1985-12-19 | 1992-02-04 | Fisons Corporation | Peptides with sulfate ester groups |
| FR2611722B1 (fr) * | 1987-03-02 | 1989-08-11 | Inst Nat Sante Rech Med | Nouveaux peptides derives de la cck8, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| US5395823A (en) * | 1988-08-26 | 1995-03-07 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Neuropeptide Y agonists and partial agonists |
| US5084442A (en) * | 1988-09-06 | 1992-01-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cyclic growth hormone releasing factor analogs and method for the manufacture thereof |
| US5270302A (en) * | 1988-12-21 | 1993-12-14 | Abbott Laboratories | Derivatives of tetrapeptides as CCK agonists |
| US5502164A (en) * | 1989-11-27 | 1996-03-26 | Fisons Corporation | Peptide compounds having therapeutic activity |
| AU644128B2 (en) * | 1989-11-27 | 1993-12-02 | Astra Aktiebolag | Hexapeptides with sulphate ester groups |
| WO1994025482A1 (en) * | 1993-04-23 | 1994-11-10 | Evans Herbert J | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site |
| US6258550B1 (en) | 1993-04-23 | 2001-07-10 | Virginia Commonwealth University | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site |
| US5965698A (en) * | 1993-04-23 | 1999-10-12 | Virginia Commonwealth University | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein--protein interaction site |
| US5952465A (en) * | 1993-04-23 | 1999-09-14 | Virginia Commonwealth University | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site |
| US5928896A (en) * | 1993-04-23 | 1999-07-27 | Virginia Commonwealth University | Polypeptides that include conformation-constraining groups which flank a protein--protein interaction site |
| US6084066A (en) * | 1993-10-29 | 2000-07-04 | Virginia Commonwealth University | Polypetides that include conformation-constraining groups which flank a protein-protein interaction site |
| AU2002256093A1 (en) * | 2001-04-09 | 2002-10-21 | Danisco Usa, Inc. | Bulking agents as satiety agents |
| FI20020078A (fi) * | 2002-01-15 | 2003-07-16 | Danisco | Immuunijärjestelmän stimulointi polydextroosilla |
| CN115353553B (zh) * | 2022-06-27 | 2023-06-02 | 上海理工大学 | 一种靶向钙敏感受体的促cck分泌肽及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3705140A (en) * | 1967-10-05 | 1972-12-05 | Luigi Bernardi | Peptides related to the c-terminal sequence of cck-pz and caerulein |
| US3839315A (en) * | 1968-05-03 | 1974-10-01 | Squibb & Sons Inc | Novel peptides having cholecystokinin activity and intermediates therefor |
| US4351289A (en) * | 1980-08-06 | 1982-09-28 | Renda Vince A | Water injection system for internal combustion engines |
| US4351829A (en) * | 1980-09-26 | 1982-09-28 | Farmitalia Carlo Erba Spa | Use of polypeptides as analgesic drugs |
| US4490364A (en) * | 1983-05-20 | 1984-12-25 | The Salk Institute For Biological Studies | CCK Agonists II |
| NZ218607A (en) * | 1985-12-19 | 1989-10-27 | Pennwalt Corp | Tri-to acta-peptides with sulphate ester groups: obesity treatment |
| ZA873796B (en) * | 1986-06-06 | 1987-12-07 | F. Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft | Peptides |
-
1987
- 1987-03-30 US US07/031,632 patent/US4808701A/en not_active Expired - Fee Related
-
1988
- 1988-03-07 ZA ZA881621A patent/ZA881621B/xx unknown
- 1988-03-28 HU HU881539A patent/HU201098B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-03-28 NZ NZ224051A patent/NZ224051A/xx unknown
- 1988-03-28 EP EP88104969A patent/EP0285061A3/de not_active Withdrawn
- 1988-03-28 IL IL85885A patent/IL85885A0/xx unknown
- 1988-03-29 DK DK174388A patent/DK174388A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-03-29 PH PH36712A patent/PH25149A/en unknown
- 1988-03-29 KR KR1019880003392A patent/KR880011198A/ko not_active Application Discontinuation
- 1988-03-29 YU YU00626/88A patent/YU62688A/xx unknown
- 1988-03-29 AU AU13824/88A patent/AU610144B2/en not_active Ceased
- 1988-03-29 FI FI881470A patent/FI881470A/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-03-29 PT PT87111A patent/PT87111B/pt active IP Right Grant
- 1988-03-29 MC MC881966A patent/MC1913A1/xx unknown
- 1988-03-29 NO NO881384A patent/NO881384L/no unknown
- 1988-03-30 JP JP63074896A patent/JPS63258489A/ja active Pending
-
1989
- 1989-05-26 YU YU01090/89A patent/YU109089A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63258489A (ja) | 1988-10-25 |
| IL85885A0 (en) | 1988-09-30 |
| MC1913A1 (fr) | 1989-04-06 |
| KR880011198A (ko) | 1988-10-27 |
| YU62688A (en) | 1989-10-31 |
| EP0285061A2 (de) | 1988-10-05 |
| ZA881621B (en) | 1988-11-30 |
| NO881384D0 (no) | 1988-03-29 |
| EP0285061A3 (de) | 1990-07-25 |
| HUT46709A (en) | 1988-11-28 |
| US4808701A (en) | 1989-02-28 |
| NZ224051A (en) | 1991-02-26 |
| HU201098B (en) | 1990-09-28 |
| PH25149A (en) | 1991-03-13 |
| AU610144B2 (en) | 1991-05-16 |
| PT87111A (pt) | 1988-04-01 |
| DK174388A (da) | 1988-10-01 |
| DK174388D0 (da) | 1988-03-29 |
| FI881470A0 (fi) | 1988-03-29 |
| NO881384L (no) | 1988-10-03 |
| YU109089A (en) | 1991-04-30 |
| AU1382488A (en) | 1988-09-29 |
| FI881470A (fi) | 1988-10-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7084244B2 (en) | Conformationally constrained backbone cyclized peptide analogs | |
| PT87111B (pt) | Processo para a preparacao de peptidos ciclicos e de composicoes farmaceuticas que os contem | |
| EP0804468B1 (en) | Method of making an omega-functionalized amino acid derivative | |
| US4428938A (en) | Peptides affecting the immune regulation and a process for their preparation | |
| CA2138161C (en) | Glucagon-like peptide and insulinotropin derivatives | |
| JPH06500311A (ja) | ヒスチジン置換されたヒト成長ホルモン放出因子類縁体 | |
| JPH0291098A (ja) | 生長ホルモン放出因子ペプチド | |
| RU2073685C1 (ru) | Полипептиды или их соли, фармацевтическая композиция, обладающая противовирусной активностью в отношении вируса иммунодефицита человека | |
| US6528618B1 (en) | Anti-inflammatory peptides derived from C-reactive protein | |
| US5079231A (en) | Immunostimulating peptides, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| US5814610A (en) | Osteogenic growth oligopeptides and pharmaceutical compositions containing them | |
| US5013722A (en) | Cholecystokinin analogs for controlling appetite | |
| PT87780B (pt) | Processo para a preparacao de analogos da colecistoquinina apropriados para o controlo do apetite | |
| Rodriguez et al. | Peptide sweeteners. 8. Synthesis and structure-taste relationship studies of L-aspartyl-D-alanyl tripeptides | |
| US5225400A (en) | Immunostimulating peptides, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| CA2144104C (en) | Peptide derivatives having binding activity to modified low density lipoprotein | |
| EP0495013B1 (en) | Hexapeptides with sulphate ester groups | |
| US6265534B1 (en) | Superpotent calcitonin analogs having greatly increased hypocalcemic action in vivo | |
| AU604785B2 (en) | Peptides with sulfate ester groups | |
| AU724386B2 (en) | Conformationally constrained backbone cyclized peptide analogs | |
| JPS61271300A (ja) | 新規ペプチド | |
| EP0324130A2 (en) | 8-Glycine, 16-X, Des-19-Leucine-Calcitonin | |
| HU183579B (en) | Process for producing l-arginyl-l-lizyl-l-asparagyl-l-valyl-l-tirosine pentapeptide | |
| CZ280695B6 (cs) | Analogy karboxyterminálního oktapeptidu B-23-B-30 B-řetězce lidského insulinu s modifikací v poloze B-24 a B-25 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG3A | Patent granted, date of granting |
Effective date: 19920110 |