PT86936B - Processo para a preparacao de fluoroxirano-carboxilatos - Google Patents

Description

Este invento relaciona-se com ácidos oxirano-carboxílicos substituidos com fenil-mono- e di-fluor£ alquilo e com a sua utilização como inibidores da oxidaçao dos ácidos gordos e como agentes hipoglicémicos.

Os fenoximetiloxiranos e os esteres de ácido feniloxiranocarboxilico têm sido investigados como substratos ou inibidores potenciais em relaçao à hidrase epóxida dos microsomas do fígado de cobaias / F. Oesch et al., Biochem. , 10(26) 1971, 4858-66_7. Além disso, os ácidos oxira. no-carboxilicos substituidos com 2-fenilalquilo e 2-fenoxialquilo tais como os apresentados nas Patentes dos E.U.A. Nos. 4.324.796 e 4.337.267, revelaram possuir actividade hipoglic£ mica e hipocetónica, o que os torna úteis para a profilaxia e tratamento de perturbações tais como a diabetes, que dependem do metabolismo da glucose ou da gordura.

Uma das maneiras de tratar indivíduos com níveis de glucose sanguínea elevados, tal como os diabéticos, consiste em usar como agentes hipoglicémicos, inibidores da oxidaçao do ácido gordo. A base para está abordagem do tratamento é constituida pela reconhecida relaçao reciproca que existe entre a gordura e o metabolismo dos hidratos de carbono. Assim, em certos indivíduos, tal como no diabético, o qual apresenta frequentemente uma utilização aumentada dos ãcidos gordos (e também gluconeogénese hepatica aumentada), uma redução na oxidaçao dos ácidos gordos deverá aumentar a utilização dos hidratos de carbono, com uma consequente descji da dos níveis da glucose sanguínea. Além disso, pelo menos tao importante é o facto de uma diminuição da oxidaçao dos ácidos gordos hepáticos levar a uma diminuição da produção de glucose hepática, reduzindo desse modo ainda mais os niveis da glucose sanguínea.

mecanismo biológico chave pelo qual os ácidos gordos sao oxidados reside no passo que limita a ta xa do transporte de grupos acilo de ácidos gordos de cadeia longa para as mitocondrias celulares. Os ácidos gordos de cadeia longa sao transportados para as mitocondrias por meio de um processo dependente da carnitina catalisado pelos dois enzimas, transferase I e II palmitoil carnitina (CPT I e II). CoAs de acilo gordo sao transesterifiçados em carnitina pelo enzima CPT I na face externa da membrana interna da membrana da mitocondria. Seguindo a translocaçao através da membrana mitocondrial, a reacçao reversa e catalisada por CPT IL. A oxidaçao dos ácidos gordos ocorre quando os ácidos gordos se encontram na mitocondria. Os inibidores da oxidaçao dos ácidos gordos actuam inibindo a transferase I palmitoil carnitina (CPT I), evitando desse modo o transporte dos ácidos gordos para as mitocondrias. As mitocondrias dos tecidos do fígado, coraçao e diafragma sao altamente sensíveis aos efeitos dos inibidores da oxidaçao dos ácidos gordos.

fígado é um orgao ambivalente no que toca a sua preferência em relaçao aos ácidos gordos ou a glucose como sua fonte de energia. Assim, interrompendo o seu fornecimento de ácidos gordos por meio de inibidores da oxidja çao dos ácidos gordos, o figado irá nao sómente consumir glucose, mas irá também diminuir a sua produção, diminuindo desse modo os níveis de glucose sanguínea. Por outro lado, o coraçao vai buscar a maior parte da sua energia a oxidaçao dos ácidos gordos. Consequentemente, a principal preocupação no que se refere à utilização crónica (permanente) de inibidores da oxidaçao dos ácidos gordos relaciona-se com o seu potencial para cardiotoxicidade ou pelo menos comprometimento da fuii çao cardíaca normal. Este potencial torna-se ainda mais prejudicial quando se considera que a principal populaçao de do5-

entes que é alvo do tratamento com inibidores da oxidaçao dos ácidos gordos sao diabéticos, nos quais o processo patológico é caracterizado por, inter alia, doença dos grandes vasos e doença microvascular, isto é, doentes nos quais qualquer dimi, nuiçao da função cardíaca normal pode ser minimamente tolerada durante o tratamento do processo patológico subjacente.

mecanismo preciso por meio do qual o coraçao transporta ácidos gordos de cadeia longa para a sua utilização nao foi elucidado sendo assim possível que possam estar envolvidos isoenzimas de CPT. Em qualquer caso, verificou-se que a técnica anterior de inibição da oxidaçao de ácidos gordos com ácidos oxirano-carboxílicos substituídos com fe_ nilalquileno e fenoxialquilo revela uma inibição muito significativa da oxidaçao dos ácidos gordos pelo tecido cardíaco. Ver Seitelberger et al., J. Cardiovas. Pharmacol., 6 (1984) j 902 and Seitelberger et al., J. Cardiovas. Pharmacol., / (1985) 273. Os efeitos cardíacos prejudiciais que resultam da administraçao crónica (permanente) de um outro inibidor da οχχ daçao dos ácidos gordos, o éster metílico de 2-tetradecilglici dato, foram estudados e referidos por Bachmann et al., Biochem. Pharmacol., 33 (1984) 1947; Lee et al., Diabetes, 31 (1982) 12; e Lee et al., Biochem. Med., 33, (1985) 104.

Assim torna-se aparente, que o inibidor ideal da oxidaçao dos ácidos gordos e um inibidor que a presenta um efeito significativo sobre a utilização hepática dos ácidos gordos e diminua a produção da glucose hepatica, resultando assim numa utilização hepática preferencial da gl.u cose com uma descida concomitante dos níveis de glucose sanguínea, tendo entretanto ao mesmo tempo um efeito significati. vo comparativamente pequeno ou nulo sobre os níveis de utilização dos ácidos gordos cardíacos. Verificou-se actualmente que os novos compostos do presente invento apresentam precisa^ mente este perfil de actividade. 0 presente invento proporcio na novos compostos tendo a fórmula que se segue:

A-(CH₉) -X-(CH₉) m 2

(I) co₂r³ em que

12R e R sao cada um deles, independentemente, hidrogénio, hidroxi, alquilo inferior, halo alquilo inferior, halo alquilo inferior sulfonilo, halo ou nitro;

R é hidrogénio, alquilo inferior, ou arilo com 7-12 átomos de carbono;

X é -CH₉-CH-, -CH₉-C- ou -CH=C-;

I / \ I

F F F F

A é -CH₂~, -0- ou -S-;

m e 1 - 8;

n é 0 - 7, com a condição de que m + n 4 8;

ou um seu sal farmacológicamente aceitável.

As axpressoes alquilo inferior e alcoxi inferior referm-se a metades tendo 1 a 6 átomos de carbono. A expressão halo refere-se a fluoro, bromo ou cio- ¹ r o.

Os sais farmacológicamente aceitáveis incluem os de ácidos inorgânicos e orgânicos farmacológicamen. te aceitáveis, tais como ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, metanossulfónico, benzenossulfónico, acético, cítrico, fumárico, málico, maleico, succínico, etc. Os catioes usados para a formaçao de sal sao os de metais alcalinos, metais alcalino terrosos ou metais terrosos, tais co mo lítio, sódio, potássio, magnésio, cálcio e alumínio. Podem também ser usados os catioes que correspondem a bases de azo- I to orgânicas, tais como aminas, aminoalcanois, aminoaçucares i e amino ácidos básicos. Sao exemplos destes últimos a etileno^ diamina, dimetilamina, dietilamina, morfoline, piperidina, pi. perazina, metilciclohexilamina, benzilamina, etanolamina, di- e tri-etanolamina, tris-(hidroximetil)aminometano, glucamina lisina, ornitina, arginina, etc.

Os compostos do invento em virtude da sua configuração, apresentam estereoisomerismo. Consequentemente, os compostos do invento incluem diastereómeros, enan tiomorfos, racematos e suas misturas.

Os compostos do invento podem ser preparados por meio de uma série de vias sintéticas usando m£ todos convencionais. Por exemplo, os compostos do invento em que X representa -CI^-CHF- podem ser preparados por epoxidação de um fluoreto alílico com a fórmula

(II)

3em que R , R , R e n sao tal como foi atras definido.

A epoxidaçao pode ser realizada com um agente de epoxidaçao, por exemplo um composto peroxídado tal como peróxido de hidrogénio, ácido paracético, ácido trifluoroperacético, acido 3,5-dinitroperbenzoico ou acido m-cloroperoxibenzoico.

Um método compreende a fluoraçao de um epoxiálcool com a fórmula

(III)

12α ' 4 em que R , R , m e n tem os significados atras indicados e R é alquilo inferior ou arilo com 7 a 12 átomos de carbono.

composto pode ser fluorado com um agente de fluoraçao tal como trifluoreto de dietilamino-enxofre, tetrafluoreto de enxofre ou trifluoreto de fenil-enxof re.

fluoreto alílico (II) e o epoxi al. cool (III) podem ser preparados a partir de um intermediário comum, um álcool alílico com a fórmula (IV)

10I

(IV)

A fluoração do álcool alílico (por exemplo com um dos agentes de fluoraçao atrás mencionados) dá origem ao fluoreto alílico i

- 'i (II) em que R e alquilo inferior ou arilo; este ester pode ,3 ser hidrolisado dando origem ao fluoreto alilico em que R e , ~i hidrogénio. A epoxidaçao (por exemplo com um dos agentes de epoxidizaçao atras mencionados) do álcool alílico dá origem ao álcool epoxi (III).

álcool alílico (IV) em que n=o pode ser preparado fazendo reagir um aldeido com a formula

A-ÍC-^-CHO

com um acrilato de alquilo inferior ou de C^-^-arilo tal como é ilustrado abaixo em que o aldeido é feito reagir com acri, lato de metilo para dar origem a um intermediário álcool alílico:

ch₂=chcoocH3

OH

A-tCS₂)_m-C-Ç-·^C0-^CH3 ch₂ intermediário álcool alílico pode ser então fluorado para proporcionar o fluoreto alílico, o qual pode ser então submetido a epoxidaçao para proporcionar uma mistura de dois fluoroepoxidos diastereomericos, os quais podem ser separados por meio de separaçao cromatográfica:

-12(±)

R¹

R² (±)

F

A4CH₂)_m~CII—C—CO₂CH₃

CH₂

fluoração epoxidação (±)

A4CH₂)_m-ÇH-X i CO₂CIi₃ (±)

CO₂CH₃

Num esquema alternativo, o álcool alílico pode ser primeiro epoxidado para proporcionar dois e. poxiálcoois diastereoméricos. A mistura pode ser então fluorada para dar origem a uma mistura de produtos finais que po^ dem ser separados cromatográficamente.

Ê também possivel preparar os álcoois epoxi diasteroméricos, os quais podem ser em primeiro lu_ gar separados por cromatografia preparativa, e cada diastere^ omero pode ser então convertido individualmente no seu fluoroepóxido correspondente.

álcool alílico (IV) em que n é di fernte de 0 pode ser preparado por meio de uma reacçao de W_i tting sobre o composto ceto

Os compostos do invento em que X representa -CH2CF2 ou -CH=CF- podem ser preparados por meio de fluoraçao, por exemplo com um agente de fluoraçao tal como foi atrás mencionado, um composto ceto com a fórmula

e, se desejado, hidrolisando o ester com a fórmula (I) em que

R e alquilo inferior ou arilo com 7-12 átomos de carbono * para dar origem ao acido livre com a formula (I) em que R e hidrogénio.

A reacçao de fluoraçao dá origem a uma mistura de compostos contendo gem-difluoro e vinilfluoro que podem ser separados por meio de processos padrao.

composto ceto com a fórmula (V) po_ de ser preparado por oxidaçao de álcool correspondente:

OH

Uma apresentaçao especifica para a preparaçao dos compostos contendo gem-difluoro e vinilfluoro é ilustrada a seguir:

OH

R¹

R¹

No último passo, a reacçao do intercetona com o trifluoreto de dietilaminoenxofre proos compostos contendo tanto gem-difluoro como vinilos quais podem ser separados por meio de cromatogra.

mediario porciona

-fluoro, fia líquida de elevada pressão.

de partida nas sequêntodos materiais dispoOs materiais cias preparativas atras referidas sao niveis comercialmente ou podem ser preparados por métodos con. vencionais tal como é indicado na bibliografia química.

Os compostos do invento, em virtude da sua capacidade para inibir a transferase palmitoil carniti. na nas mitocondrias hepáticas, apresentam actividade hipoglicémica, e como tal sao indicados no tratamento de perturbações tendo como base perturbações do metabolismo da glucose e da gordura. Assim, estes compostos podem ser usados para o trata, mento de diabetes manifesta (evidente) em adultos e diabetes (instável) lábil em indivíduos mais novos. Os compostos podem ser também usados no controlo e alívio dos sintomas que acompanham a produção aumentada de cetonas (produtos cetónicos). Igualmente importante, os compostos do invento, quando comparados com as técnicas anteriores de inibidores da oxidaçao dos ácidos gordos com uma estrutura semelhante, demonstram uma inibição muito significativamente reduzida da oxidaçao dos ácidos gordos pelas mitocondrias do coraçao, possuindo desse modo o beneficio completamente inesperado e muito significatji vo de um potencial pequeno ou nulo ou prejuizo da função cardíaca normal devido a administraçao crónica (permanente).

Quando os compostos do invento sao utilizados como agentes hipoglicémicos, tal como no tratamento da diabetes, eles podem ser formulados para formas de dosa, gem oral tais como comprimidos, cápsulas, etc. Os compostos

podem ser administrados isoladamente ou combinando-os com veji culos convencionais, tais como carbonato de magnésio, esteara to de magnésio, talco, açúcar, lactose, pectina, dextrina, anui do, gelatina, tragacanto, celulose metílica, celulose carboximetílica, cera manteiga de macau, com baixo ponto de fusão, etc. Podem ser utilizados diluentes, agentes de aromatizaçao, agentes de solubilização, agentes de lubrificação, agentes de suspensão, agentes de ligaçao, agentes desintegradores dos com primidos, etc. Os compostos podem ser encapsulados com ou sem outros veículos. Em todos os casos, a proporção dos ingredieii tes activos nas referidas composiçoes tanto solidas como liqui das será tal que lhes comunique a actividade desejada pela sua administraçao oral. Os compostos podem também ser injectados ! parentéricamente, e nesse caso eles sao usados sob a forma de uma solução estéril contendo outros solutos, por exemplo, solução salina ou glucose suficientes para tornar a solução iso. tónica.

ί I

As necessidades de dosagem variam de acordo com as composiçoes particulares utilizadas, com a via de administraçao, com a gravidade dos sintomas apresentados e com o particular indivíduo a ser tratado. 0 tratamento sera g.e ralmente iniciado com pequenas doses inferiores à dose óptima do composto. Em seguida a dosagem é aumentada até se alcançar o efeito óptimo nessas circunstâncias. Em geral, os compostos do invento sao mais desejavelmente administrados com uma concentração que proporcione geralmente resultados eficazes sem causarem quaisquer efeitos secundários prejudiciais ou perniciosos, e podem ser administrados quer como uma dose unitária simples, quer se desejado, a dosagem pode ser dividida em subunidades convenientes administradas a horas apropriadas ao longo do dia.

A capacidade dos compostos do invento para inibirem a transferase palmitoil carnitina nas mitocondrias do fígado e o seu potencial significativamente redu»

zido para prejudicar a função cardíaca normal podem ser de- i monstrados por meio de processos farmacológicos conhecidos. | Os exemplos que se seguem mostram tanto a preparaçao como os 1 testes farmacológicos dos compostos que pertencem ao invento. [

EXEMFLO 1 éster metílico de ácido 2-(1-fluorο-5-fenilpentil)-2-oxirano-carboxíli co

Método A

1) Éster metílico de ácido ft-hidr oxi-°4-metilenobenzeno-heptanoico

a) 5-fenil-l-pentanal

A uma suspensão de 20 g (93 mmol) de clorocromato de piridinio em 30 ml de cloreto de metileno adi. cionaram-se 9,9 g (60 mmol) de 5-fenil-l-pentanol. A mistura é mantida é mantida á temperatura ambiente com agitaçao vigorosa durante 1,75 horas, diluida com éter etílico e e deixada repousar durante a noite. A mistura é filtrada através de Fio. risil com éter etílico e rotoeveporada para dar origem a 8,4 g de aldeido cru o qual e usado na reacçao seguinte sem posterior caracterizaçao.

b) Éster metílico de acido ft-hidroxi-<X-metilenobenzeno-

-heptanoico

Uma mistura de 8,4 g (52 mmol) de 5-fenilpentanal, 8,95 g (104 mmol) de acrilato de metilo e 200 mg de 1,4-diazabiciclo/ 2.2.27-octano é deixada repousar a temperatura ambiente durante 120 horas.

A rotoevaporaçao dá origem a um óleo que e purificado cromatográficamente (gel de sílica; hexano: eter etílico (3:2)) para proporcionar 3,1 g do composto do t£ tulo: IV (puro) y 3440, 1715 cm^-1; RMN (CDCip $ 1,28-1,74 (6H, m), 2,61 (2H, t, J=8Hz), 3,78 (3H, s), 4,39 (1H, t, J= =6Hz), 5,78 (1H, s), 6,23 (1H, s), 7,19 (3H, m) e 7,28 (2H, m)

Análise para:	C15	H20°3
Calculados:	C,	72,55;	H,	8,12
Encontrados:	C,	72,37;	H,	8,09

2) Éster metílico de ácido 2-/~l-hidroxi-5-fenilpentil7-2-oxirano-carboxílico (isomero A)

Éster metílico de ácido 2-/~l-hidroxi-5-fenilpentil7-2carboxílico (isómero B)

Uma solução de 11,2 g (45 mmol) de éster metílico de ácido β-hidroxi-o(-metilenobenzeno-heptanoico em 300 ml de 1,2-dicloroetano é tratado com 200 mg de 4,4’-tiobis(6-butil-m-cresol) e 24,5 g (138 mmol) de ácido m-cloro-peroxibenzoico. A mistura e aquecida até refluxo sob azoto durante 26 horas.

A mistura é diluida com cloreto de metileno e é lavada duas vazes com sulfito de sodio saturado

aquoso. As camadas combinadas de cloreto de metileno sao lava_ das com bicarbonato de sódio aquoso, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e rotoevaporadas. 0 óleo resultante é sub metido a CLEP preparativa (gradiente de eluição - hexano:acetato de etilo (9:1) através de acetato de etilo) para dar ori gem a 2,36 g do isómero A mais movei (Rf 0,23 em hexano: eter etílico (1:1)): IV (puro) y 3520 (amplo), 1730 cm \ RMN ( (CDC1₃)ó 1,42-1,84 (6H, m), 2,31 (1H, amplo d, removido por permuta de , 2,64 (2H, t, J=7Hz), 3,01 (1H, d, J=6Hz), 3,15 (1H, d, J=6Hz), 3,80 (3H, s), 3,86 (1H, amplo m), 7,21 (3H, m) e 7,30 (2H, m).

Analise para:

^C15^H20°4

Calculados:

C, 68,16; H, 7,63

Encontrados:

C, 67,98; H, 7,53.

e 0,68 g do isómero B menos móvel (Rf 0,92 em hexano:éter eti lico (1:1)): IV (puro) γ 3480 (amplo), 1728 cm^-1; RMN (CDClg) $ 1,30-1,80 (6H, m), 2,11 (1H, amplo s, removido por permuta de D₂0), 2,63 (2H, T, J=7Hz), 2,98 (1H, d, J=6Hz), 3,07 (1H, d, J=6Hz) 3,76 (3H, s), 4,12 (1H, dd, J=3,10Hz), 7,20 (3H, m) e 7,30 (2H, m).

3) Ester metílico de ácido 2-(l-fluoro-5-fenilpentil)-2-oxi- ranocarboxilico (isomero A)

A uma solução de 2,44 g (15 mmol;

2,0 ml) de trifluoreto de dietilaminoenxofre em 50 ml de cloreto de metileno arrefecida até -78^eC sob uma atmosfera de azoto adicionou-se gota a gota uma solução de 2,00 g (7,6 mmol) de éster metílico de ácido 2-/ l-hidroxi-5-fenilpentil7-2-oxi_

ranocarboxilico (isomero A) em 50 ml de cloreto de metileno durante 30 minutos. A mistura é agitada a -78°C durante 90 mi. nutos sendo então deixada voltar até a temperatura ambiente. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas, e arrefecida com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e é extraída com éter etilico. Os extractos etéreos com binados sao secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e roto, evaporados. 0 óleo resultante é purificado cromatográficamente (gel de silica; hexano: acetato de etilo (9:1) para dar origem a 1,19 g do composto do título (Rf 0,54 em hexano:éter etilico (3:2)): IV (puro) γ 1750 cm¹; RMN (CDC1₃) $ 1,40-1,96 (6H, m), 2,64 (2H, t, J=8Hz), 3,07 (1H, dd, J=4, 6Hz), 3,15 (1H, d, J=6Hz), 3,79 (3H, s), 5,14 (1H, ddd, J_HF=48Hz, J-10, 3Hz), 7,21

(2H, d, J=8Hz) e 7,31 (2H, d, J=8Hz).
Análise para: C^PH^F0o	7,14
Calculados: C,	67,67;	H,
Encontrados: C,	67,73;	H,	7,30

Método B

1) Ester metílico de ácido β -f luoro-(X-metilenobenzeno-heptanoico

A uma solução de 1,93 g (12 mmol;

1,47 ml) de trifluoreto de dietilaminoenxofre em 30 ml de cloreto de metileno arrefecida até -78°C sob uma atmosfera de azo. to adiciona-se durante 30 minutos uma solução de 1,49 g (6 mmol) de ester metílico de ácido p-hidroxi-<X-metileno-benzenoheptanoico do Método A, passo 1 atrás referido, em 30 ml de

cloreto de metileno. Após 30 minutos a -78°C, a solução é dejl xada subir até à temperatura ambiente e é mantida com agitaçao durante 1,5 horas.

A solução é diluida com solução salina e extraída com cloreto de metileno. Os extractos orgânicos combinados sao lavados com solução salina, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e rotoevaporados para darem origem ao

produto cru.

A cromatografia de coluna sobre gel

de sílica (hexano:éter etílico (4:1)) dá origem a 797 ml do composto do título: IV (puro) y 1721 cm ; RMN (CDCl^) <$ 1,28-

-1,88 (6H, m)	2,52 (2H, t, J=8Hz), 3,66 (3H, s), 5,2 (1H,
ddd, Jjjp=48Hz 7,09 (3H, m),	e J=3, 9Hz), 5,83 (1H, s), 6,25 (1H, d, J=3Hz), 7,19 (2H, d, J=8Hz).
Análise para:	C15H19F02
Calculados:	C, 71,97; H, 7,65
Encontrados:	C, 72,07; H, 7,71.

2) Sster metílico de ácido 2-(1-fluoro-5-fenilpentil)-2-oxiranocarboxílico (isomero A)

Sster metílico de ácido 2-(1-fluoro-5-fenilpentil)-2-oxiranocarboxílico (isómero B)

Uma solução de 500 mg (2,0 mmol) de éster metílico de ácido -f luor o-<X-metilenobenzenoheptanoico em 50 ml de 1,2-dicloroetano é tratada com 1,38 g (8 mmol) de ácido m-cloroperoxibenzóico e 20 mg de 4,4’-tiobis(6-t-butil-m-cresol). A mistura é aquecida até refluxo e mantida sob azo

I

to durante 10,5 horas. Acrescentam-se 1,38 g (8 mmol) adicionais de ácido m-cloroperoxibenzoico e 20 mg adicionais de 4,4' -tiobis(6-t-butil-m-cresol) e mantem-se o refluxo durante 8 ho. ras.

, - - !

A mistura e diluida com eter etilico ί e lavada sequencialmente com sulfito de sódio aquoso, bicarbo. ! nato de sódio aquoso, sulfito de sódio aquoso e finalmente bi. carbonato de sódio aquoso. A solução etérea é seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada.

residuo e cromatografado preparatji vamente sobre gel de sílica (hexano:éter etílico (3:1)) para dar origem ao composto do título do Exemplo 1 (isómero A) (Rf 0,37 em hexano:éter etílico (3:2)) e isómero B (Rf 0,25 em hg xano: éter etílico (3:2): IV (puro) γ 1742 cm RMN (CDCl^) $ 1,40-1,88 (6H, m), 2,64 (2H, t, J=8Hz), 2,94 (1H, d, J=6Hz), 3,13 (1H, dd, J=6Hz, J_RF=3Hz), 3,81 (3H, s), 4,93 (1H, ddd, J_HF=48Hz, J=10, 3Hz), 7,20 (2H, d, J=8Hz) e 7,31 (2H, d, J=8Hz).

EXEMPLO 2

Éster metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-fluoropentil7-2-oxiranocarboxílico

Método A

1) Éster metílico de ácido β-hidroxi-(X-metileno-7-(4-clorof enoxi)-heptanoico

a) 5-(4-clorofenoxi)-l-pentanal

A uma suspensão de 33 g (0,15 mmol) de clorocromato de piridinio em 450 ml de cloreto de metileno adicionam-se 21,4 g (0,1 mol) de 5-(4-clorofenoxi)-l-pentanol. A mistura é mantida com agitaçao durante 3 horas, diluida com 900 ml de eter etilico e agitada durante 1 hora adicional.

A mistura é filtrada através de Florisil para dar origem após rotoevaporaçao a 18,2 g do produto do título: IV (puro) 1728, 1493 e 1248 cm

b) Éster metílico de ácido -hidroxi-tX-metileno-7-(4-clorofenoxi)-heptanoico

Uma mistura de 18,0 g (84,6 mmol) de 5-(4-clorofenoxi)-1-pentanal, 10,9 g (127 mmol) de acrilato de metilo e 1,1 g (10 mmol) de 1,4-diazabiciclo/ 2.2.27octano é deixada repousar á temperatura ambiente durante 139 horas.

excesso de acrilato de metilo e re movido da mistura sob uma corrente de azoto e por rotoevapora_ çao. 0 óleo residual é dividido entre ácido clorídrico a 10% aquoso e éter etílico arrefecidos pelo gelo. Os extractos ete reos combinados sao lavados com ácido clorídrico a 10% aquoso arrefecido pelo gelo, secos sobre sulfato de magnésio, filtrji dos e rotoevaporados para darem origem ao produto cru.

A cromatografia de coluna sobre de sílica usando hexano:éter etílico (3:2) como eluente dá origem a 10,3 g do composto do título: IV (puro) y 3460 (amplo), 1715, 1491 e 1242 cm'¹; RMN (CDClg) $ 1,41-1,94 (6H, m), 2,54 (1H, amplo s removido por permuta , 3,78 (3H, s), 3,94 (2H, t, J=7Hz), 4,45 (1H, t, J=7Hz), 5,84 (1H, s), 6,27 (1H, s),

2) Éster metílico de ácido 2-/~5-(4-clorofenoxi)-l-hidroxipentil7-2-oxiranocarboxilico (isomero A)

Éster metílico de ácido 2-/~5-(4-clorofenoxi)-1-hidroxipentil7-2-oxiranocarboxílico (isómero B)

Uma solução de éster metílico de áci^ do -hidroxi-<X-metileno-5-(4-clorof enoxi) heptanoico (10,3 g; 34,5 mmol) em 100 ml de 1,2-dicloroetano é tratada com 100 mg de 4,4'-tiobis(6-t-butil-m-cresol) e 12,1 g (700 mmol) de acji do m-cloroperoxibenzoico. A mistura é aquecida até refluxo sob azoto durante 17 horas.

A mistura é arrefecida, tratada com sulfito de sódio aquoso a 10% e extraída com éter etílico. 0 extracto etéreo é lavado com bicarbonato de sódio aquoso,sulfito de sódio aquoso a 10% e bicarbonato de sódio aquoso. 0 extracto orgânico é seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e rotoevaporado para dar origem a um óleo sob a forma de uma mistura 3:1 (isómero A : isómero B) dos compostos diastereom£ ricos do título.

A mistura é separada cromatográficamente (gel de sílica: hexano: éter etílico (3:2)) para dar origem a 1,38 g de isómero A (Rf 0,16 em hexano:éter etílico (1:1)):IV (puro) γ 3520 (amplo), 1739, 1493, e 1247 cm^-1; RMN (CDC1₃) $ 1,54-1,71 (2H, m), 1,71 (4H, m), 2,38 (1H, ambo s, removido por permuta D2O), 3,03 (1H, d, J=6Hz) 3,17 (1H, d, J=6Hz), 3,80 (3H, s), 3,91 (1H, m), 3,97 (2H, t, J=6Hz), 6,85 (2H, d, J=10Hz), 7,26 (2H, d, J=10Hz).

Análise para: ^15^19^^^5

Calculados; C, 57,23; H, 6,08

Exncontrados: C, 56,86; H, 5,99 e 0,46 g de isómero B (Rf 0,10 em hexano : éter etílico ( 1:1) ) :j IV (puro) γ 3480 (amplo), 1738, 1497 e 1249 cm¹; RMN (CDCip j

1,52-1,96 (6H, m), 2,12 (1H, amplo s, removido por permuta I D0), 3,04 (1H, d, J=6Hz), 3,14 (1H, d, J=6Hz), 3,80 (3H, s), 3,96 (2H, t, J=6Hz), 4,18 (1H, m), 6,85 (2H, d, J=9Hz), 7,16 (2H, d, J=9Hz).

Análise para:

^C13^H19^C1°5

Calculados:

C, 57,23; H,

6,08

Encontrados:

C, 56,69; H,

6,26.

3) Sster metílico de ácido

2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-fluoropentil7-2-oxiranocarboxílico (isómero A)

A uma solução de 967 mg (6 mmol, 733 jil) de trifluoreto de dietilaminoenxofre em 25 ml de cloreto de metileno arrefecia até -78°C sob uma atmosfera de azoto adiciona-se gota a gota uma solução de 945 mg (3 mmol) de éster metílico de acido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-hidroxipentil7-2-oxjl ranocarboxílico (isómero A) em 25 ml de cloreto de metileno dju rante 30 minutos. A mistura e agitada a temperatura ambiente durante 1,5 horas, é arrefecida com solução salina e é extraída com eter etílico. 0s extractos etéreos combinados sao secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e rotoevaporados para dar origem a um sólido crú. A trituração com ciclohexano:éter isopropílico e subsequente secagem sob vácuo elevado proporciona 597 mg do composto do título (isómero A) (Rf 0,45 em hexano :

éter etilico (1:1)): p.f. 76-78°C; IV (KBr) v 1740, 1497, 1257, 832 e 758 cm^-1; RMN (CDC1 ) φ 1,54-2,02 (6H, m), 3,10 (1H, dd, J=3, 6Hz), 3,18 (1H, d, J=6Hz), 3,80 (3H, s), 3,96 (2H, t, J=7Hz), 5,19 (1H, ddd, J_HF=48 Hz, J=3, 10Hz),, 6,85 (2H, d, J=7Hz) e 7,27 (2H, d, J=7Hz).

Análise para:

Calculados:

Encontrados;

^C15^H18^FC104

C, 56,88; H, 5,73

C, 55,82; H, 5,65.

fister metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-fluoropentil7-2-oxiranocarboxílico (isómero B)

A uma solução de 1,03 g (6,36 mmol, 777 jul) de trifluoreto de dietilaminoenxofre em 25 ml de cloreto de metileno arrefecida até -78°C sob uma atmosfera de azo. to adiciona-se gota a gota durante 5 minutos uma solução de 1,0 g (3,18 mmol) de éster metilico de acido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-hidroxipentil7-2-oxiranocarboxílico (isómero B) em 10 ml de cloreto de metileno. A mistura e deixada aquecer a temperatura ambiente e é agitada durante 1,5 horas.

A mistura é arrefecida num banho de gelo e é arrefecida rápidamente gota a gota com bicarbonato de sodio aquoso. A solução é extraida com éter etílico, e os extractos etéreos combinados sao secos sobre sulfato de magn£ sio. A filtraçao e a rotoevaporaçao dao origem a 1,0 g do pro^ duto cru o qual é submetido a uma cromatografia em coluna pre^ parativa sobre gel de sílica (hexano: éter etílico (7:3)). As fracções apropriadas (RF 0,23 (hexano : éter etilico (3:2) sao combinadas e rotoevaporadoas para dar origem a 555 mg (55,1%)

do composto do título: IV (película) 1730 cm ; RMN (CDCl^) <5 1,54-1,96 (6H, mc), 2,97 (1H, d, J=6Hz), 3,16 (1H, dd, J=6,2Hz} 3,83 (3H, s), 3,97 (2H, t, J=8Hz), 4,98 (1H, ddd, J_HF=48Hz, 10,2Hz), 6,85 (2H, d, J=10Hz), 7,28 (2H, d, J=10Hz).

Analise para:

^C15^H18^C1F04

Calculados:

C, 56,88; H, 5,73

Encontrados:

C, 56,34; H, 5,66.

EXEMPLO 3

Éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-1-fluoro-hexil7~ -2-oxiranocarboxílico

Método A

1) Éster metílico de ácido# -hidroxi-U(-metileno-8-(4-clorofenoxi)-octanoico

a) 6-(4-clorofenoxi)-l-hexanal

A uma suspençao de 32 g (0,15 mol) de clorocromato de piridinio em 450 ml de cloreto de metileno adicionam-se 23 g (0,1 mol) de 6-(4-clorofenoxi)-l-hexanol. A mistura é mantida sob uma atmosfera de azoto durante 2 horas, é diluida com 1.000 ml de éter etílico e é agitada durante 1,5 horas.

A mistura é feita passar através de uma coluna de Florisil e de alumina neutra usando éter etílico para a eluição. A rotoevaporaçao deu origem ao composto do titulo o qual é usado sem caracterizaçao.

b) Éster metilico de ácidoβ-hidroxi-ç(,-metileno-8-(clorofenoxi)-octanoico

Uma mistura de 18,9 g (0,083 mol) de 6-(4-clorofenoxi)-l-hexanal, 21,5 (0,25 mol) de acrilato de metilo e 500 mg de 1,4-diazabiciclo/ 2.2.2/octano é deixada repousar à temperatura ambiente durante 112,5 horas (acrescentam-se 500 mg adicionais de I,4-diazabicilo/ 2.2.27octano após 66 horas e 96 horas). 0 excesso de acrilato de metilo é removido sob uma corrente de azoto para dar origem a um óleo cru.

A cromatografia de coluna sobre gel de silica (hexano: éter etilico (3:2)) proporciona 2,7 g do composto do titulo.

Obtém-se uma amostra analitica por cromatografia de camada preparativa (Rf 0,14 em hexano:eter etilico (3:2)): IV (puro) 1713, 1490, 1241 e 819 cm^{1; RMN} (CDC1₃) 1,30-1,98 (8H, m), 3,80 (3H, s), 3,93 (2H, t, J=8 Hz)

4,42 (1H, t, J=7 Hz), 5,83 (1H, s), 6,26 (1H, s), 6,84 (2H, d, J=9 Hz), e 7,25 (2H, d, J=9 Hz).

Análise para:

^C16^H20^C104

Calculados:

C, 61,63; H, 6,47

Encontrados:

C, 61,40; H, 6,67.

2) Éster metílico de ácido 2-/~6-(4-clorofenoxi)-l-hidroxihexil7-2-oxiranocarboxílico (isómero A)

Éster metílico de ácido 2-/~6-(4-clorofenoxi)-l-hidroxil7 -2-oxiranocarboxílico (isómero B)

Uma solução de 1,5 g (5,0 mmol) de éster metílico de ácido /5 -hidroxi-<X -metileno-8-(4-clorofeno. xi)octanoico em 50 ml de 1,2-dicloroetano é tratada com 25 mg de 4,4'-tiobis(6-t-butil-m-cresol) e 1,73 g (10 mmol) de acido m-cloroperoxibenzoico. A mistura é agitada à temperatura ambiente durante 2,5 horas. A mistura é aquecida até refluxo sob uma atmosfera de azoto e é mantida durante 15,5 horas.

A mistura e diluida com cloreto de metileno sendo então lavada sequencialmente com sulfito de só. dio aquoso e com bicarbonato de sodio aquoso. As lavagens com sulfito de sódio e com bicarbonato de sódio sao repetidas e a camada orgânica é finalmente seca sobre sulfato de magnésio. A filtraçao e a rotoevaporaçao dao origem a um óleo o qual é submetido a separaçao por cromatografia de coluna (gel de silica; hexano:éter etílico (1:1)) para dar origem a 480 mg de isómero A (Rf 0,20 em hexano:éter etílico (1:1)): RMN (CDClg) ó 1,22-1,86 (8H, m), 3,01 (1H, d, J=6Hz), 3,16 (1H, d, J=6Hz), 3,80 (3H, s), 3,89 (1H, m), 3,92 (2H, t, J=7Hz), 6,84 (2H, d, J=9Hz) e 7,25 (2H, d, J=9Hz); e 82 mg de isómero B(Rf 0,12 em hexano: éter etílico (1:1)): RMN (CDCl^) £ 1,42-1,86 (10H, m), 3,03 (1H, d, J=6Hz), 3,13 (1H, d, J=6Hz), 3,81 (3H, s), 3,95 (2H, t, J=7Hz), 4,16 (1H, m), 6,85 (2H, d, J=9Hz) e 7,16 (2H, d, J=9Hz).

3) Éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-hexil7-2-oxiranocarboxilico (isómero A)

A uma solução de 474 mg (2,94 mmol;

359 μΐ) de trifluoreto de dietilaminoenxofre em 25 ml de cloreto de metileno arrefecido até -78° sob uma atmosfera de azo to adiciona-se gota a gota durante 45 minutos uma solução de 480 mg (1,47 mmol) de éster metílico de acido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-hidroxi-hexil7-2-oxiranocarboxílico em 25 ml de cio. reto de metileno. A solução é mantida a -78°C com agitaçao d.u rante 1,25 horas sendo então deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 1 hora a solução é arrefecida com 25 ml de bicarbonato de sódio saturado aquoso e é agitada durante 30 minutos.

A mistura e então diluida com bicarbonato de sódio aquoso extraído com éter etílico. Os extractos etéreos combinados sao secos sobre sulfato de magnésio, filtra^ dos e rotoevaporados para dar origem ao produto crú. A cromatografia de coluna (gel de sílica; hexano:éter etílico (7:3)) proporciona 432 mg do composto do titulo (isomero A; Rf 0,32 em hexano:éter etílico (3:2)): IV (puro)γ 1735, 1490, e 1242 cm^-1; RMN (CDClg) 5 1,42-2,00 (8H, m), 3,09 (1H, dd, J=7,5Hz), 3,17 (1H, d, J=7Hz), 3,80 (3H, s), 3,95 (2H, t, J=6Hz), 5,18 (1H, ddd, J_Hp=48Hz, J=9, 4Hz) e 6,85 (2H, d, J=9Hz).

Análise para:

^C16^H20^C1F04

Calculados:

C, 58,09; H, 6,09

Encontrados:

C, 57,56; H, 6,08.

Êster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-hexil7-2-oxiranocarboxílico (isomero B)

A uma solução de 1,77 g (10,96 mmol, ! 1,45 ml) de trifluoreto de dietilaminoenxofre em 95 ml de cio. reto de metileno arrefecida até -78°C sob azoto adiciona-se go. I ta a gota uma solução de 1,80 g (5,48 mmol) de éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-hidroxi-hexil7-2-oxiranocarb£ xílico (isomero B) durante 60 minutos. A mistura é agitada a -78°C durante 75 minutos, é deixada voltar à temperatura ambiente durante 1 hora e é agitada durante 1 hora adicional. A mistura é arrefecida rápidamente até 0°C pela adiçao gota a go. ta de bicarbonato de sodio aquoso e e agitada durante 30 minu tos. A diluição com bicarbonato de sódio aquoso e a extracçao com éter etílico proporciona, após secagem sobre sulfato de ma. gnésio, filtrado e rotoevaporaçao dos extractos etéreos combinados, o produto cru.

A cromatografia de coluna sobre gel de sílica (hexano:éter etílico (7:3)) dao origem a 0,25 g (13,8%) do composto do título: IV (película) 1740 cm \ RMN (CDC1₃) á 1,42-1,92 (8H, mc), 2,97 (1H, d, J=6Hz), 3,16 (1H, dd, J=6, 3Hz), 3,84 (3H, s), 3,96 (2H, t, J=8Hz), 4,97 (1H, ddd, J_Rp=48, 10, 2Hz), 6,86 (2H, d, J=10Hz), 7,28 (2H, d, J= =10Hz).

Análise para:

^C16^H2O^C1FO4

Calculados:

C, 58,09; H, 6,09

Encontrados:

C, 57,50; H, 6,10.

Sal de sódio de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-fluoropentil7-2-oxiranocarboxílico (isómero A)

Uma solução de éster metílico de acjL do 2-/^-5-(4-clorofenoxi)-l-fluoropenti17-2-oxiranocarboxílico (2,53 g, 8 mmol) do Exemplo 2 em 25 ml de etanol absoluto é tratada com uma solução de 320 mg (8 mmol) de idróxido de sódio em 12 ml de água. A mistura é mantida com agitaçao à temperatura ambiente durante 2 horas sendo então rotoevaporada. Os sólido obtido é triturado três vezes com eter etilico, o solvente é removido por rotoevaporaçao e o solido é seco sob vácuo elevado sobre pentóxido de fosforo para dar origem a 2,25 g (86,6%) do composto do titulo: p.f. 159-175°C; IV (KBr) 1630, 1608, 1490 e 1242 cm'¹; RMN (d₆~DMSO) £ 1,54 (2H, m) , 1,73 (4H, m), 2,65 (1H, m) 2,73 (1H, d, J=6Hz), 3,98 (2H, t, J=6Hz), 5,22 (1H, ddd, J_HF=48, 10, 3Hz), 7,00 (2H, d, J= 9Hz) e 7,36 (2H, d, J=9Hz).

Análise para:	C14H15NaFC104
Calculados:	C, 51,78; H, 4,66
Encontrados:	C, 51,37; H, 4,53.

EXEMPLO 5

Sal de sódio de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-hexil7-2-oxiranocarboxílico (isómero A)

A uma suspensão de 1,79 g (5,41 mmol) de éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-fluorohexil ,7-2-oxiranocarboxílico (isómero A) do exemplo 3 em 5,14 ml de etanol absoluto adicionam-se à temperatura ambiente 5,14 ml (5,14 mmol) de hidróxido de sódio aquoso. Após 30 minutos, adji cionam-se 4,0 ml de tetra-hidrofurano para se conseguir uma dissolução total e a agitaçao e mantida durante 1,25 horas. A evaporaçao dos solventes e a trituração com pentano e éter isq propílico dao origem a 1,46 g (79,7%) do composto do título:

p.f. 112-125°C; IV (KBr) 1640, 1608 cm¹; RMN (dg-DMSO) £ 1,47 (4H, m), 1,74 (4H, m), 2,63 (1H, dd, J=8, 3Hz), 2,73 (1H, d, J=8Hz), 3,98 (2H, t, J=9Hz), 5,19 (1H, ddd, J=48, 10, 2Hz), 6,98 (2H, d, J=8Hz) e 7,32 (2H, d, J=8Hz).

Analise para:

(L -H.^ClFO.Na

17 4

Calculados:

C, 53,19; H, 5,06

Encontrados:

C, 51,22; H, 5,03.

Êster metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l,l-difluoropentil7-2-oxiranocarboxílico

Ester metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-l-pentenil7-2-oxiranocarboxílico

1) Éster metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-oxopentil7-2-oxiranocarboxílico

A uma suspensão de 9,05 g (42 mmol) de clorocromato de piridinio e 3,4 g (42 mmol) de acetato de sódio em 150 ml de cloreto de metileno adicionam-se 2,2 g (7 mmol) de éster metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-hidro xixipentil7-2-oxiranocarboxílico do Exemplo 2, parte 2. A mistura é agitada durante 4 horas, é diluida com éter dietílico e é filtrada através de Florisil. A solução é rotoevaporada e é cromatografada preparativamente sobre gel de silica usando como solvente de eluição exano:éter etílico (3:2). As fracções apropriadas sao combinadas, lavadas com sulfato de cobre aqu£ so e solução salina e secas sobre sulfato de magnésio. A filtração e a rotoevaporaçao dao origem ao produto crú. A cromatografia de coluna (gel de sílica ; hexano:éter etílico (3:2)) proporciona 523 mg (23,9%) do composto do título: IV (película) 1746, 1717 cm^-1; RMN (CDC1₃) 1,80 (4H, m), 2,66 (2H, m),

3,08 (1H, d, J=6Hz), 3,34 (1H, d, J=6Hz), 3,84 (3H, s), 3,94 (2H, t, J=6Hz), 6,82 (2H, d, J=10Hz) e 7,24 (2H, d, J=10Hz).

Análise para:

^C15^H17^C105

Calculados:

C, 57,60; H, 5,48

-35ι

Encontrados:

C, 57,41; H, 5,56.

2) Éster metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi-1,1-difluoropentil7-2-oxiranocarboxílico ι

Éster metílico de ácido 2-/~5-(4-clorofenoxi)-l-fluoro- I -l-pentanil7-2-oxiranocarboxílico | !

A uma solução de 6,48 g (40 mmol,

5,31 ml) de trifluoreto de dietilaminoenxofre em 50 ml de gli ma anidra adicionam-se a temperatura ambiente 3,13 g (10 mmol) ' de éster metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)l-oxopentil7- j -2-oxiranocarboxílico. A mistura é aquecida num banho de óleo | mantido a 110°C durante 4 horas.

A mistura é arrefecida até à temper_a ^! tura do banho de gelo e é arrefecida rápidamente com bicarbonato de sódio arrefecido pelo gelo aquoso. A mistura é extrai^ da com éter etílico e os extractos etéreos combinados sao secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e rotoevaporados para darem origem aos produtos crus.

material crú é submetido a CLEP preparativa (gradiente de eluição do hexano para o hexano :ace_ tato de etilo (95:5)) duas vezes para dar origem a 551 mg (16, 5%) de éster metílico de ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l,l-diflu_ oropentil7-2-oxiranocarboxílico (Rf 0,47 hexano:eter etílico (1:1)) :p.f. 40-48°C, IV (KBr) 1741 cm¹; RMN (CDC1 ) $ 1,75 (2H, m), 1,85 (2H, m), 2,29 (2H, m), 3,16 (1H, dd, J36, 2Hz), 3,23 (1H, d, J=6Hz), 3,84 (3H, s), 3,97 (2H, t, J=7Hz), 6,85 (2H, d, J=9Hz), 7,28 (2H, d, J=9Hz).

Análise para:

^C15^H17

ClFgO^

Calculados: C, 53,82; H, 5,12

Encontrados: C, 53,66; H, 5,06.

e 487 mg (15,5%) de óleo éster metílico de ácido 2-/ 5-(4clorofenoxi)-l-fluoro-l-pentenil7-2-oxiranicarboxílico (Rf 0,42 em hexano:éter etílico (1:1)): IV (película) 1748, 1488 e 1240 cm^-1; RMN (CDC1₃) 6 1,89 (2H, p, J=9Hz), 2,37 (2H, m), 3,12 (1H, d, J=7Hz), 3,29 (1H, dd, J=7, 2Hz), 3,82 (3H, s), 3,96 (2H, t, J=6Hz), 5,24 (1H, dt, J=36, 8Hz), 6,85 (2H, d, J=8Hz) e 7,27 (2H, d, J=8Hz).

Analise para:

Calculados:

Encontrados:

^C15^H16^C1F04

C, 57,24; H, 5,12

C, 56,90; H, 4,95.

I

EXEMPLO 7

Éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l,l-difluorohexil7-2-oxiranocarboxílico

Éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-l-hexe- ι nil7-2-oxiranocarboxílico

1) Éster metílico de acido 2-7 6-(4-clorofenoxi)-l-oxo-hexil7-2-oxiranocarboxilico

A uma suspensão de 11,6 g (54 mmol) de clorocromato de piridinio e 4,4 g (54 mmol) de acetato de sódio em 200 ml de cloreto de metileno adicionam-se 2,95 g (9 mmol) de éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-hidroxi-hexil7-2-oxiranocarboxílico (isómero A) preparado de acordo com o processo do Exemplo 3, parte 2, à temperatura ambiente sob atmosfera de azoto. A mistura é agitada durante 4 horas, é diluida com 600 ml de éter etílico e é filtrada atra vés de Florisil. A rotoevaporaçao dá origem a 2,2 g do produto crú. A cromatografia de coluna preparativa (gel de sílica; hexano:éter etílico (3:2)) proporciona 1,66 g (56,4%) do composto do título: IV (película) 1746, 1719 cm RMN (CDCl^) £ 1,49 (2H; p, J=8Hz), 1,62-1,86 (4H, mc), 2,62 (2H, m), 3,05 (1H, d, J=6Hz), 3,36 (1H, d, J=6Hz), 3,86 (3H, s), 3,94 (2H, t, J=6Hz), 6,84 (2H, d, J=8Hz) e 7,27 (2H, d, J=8Hz).

Análise para:

^C16^H19 cio₅

Calculados:

C, 58,81; H, 5,86

Encontrados:

C, 58,99; H, 5,80.

2) Éster metílico de ácido 2-/~6-(4-clorofenoxi)-l,l-difluoro-hexil7-2-oxiranocarboxílico

Ester metílico de ácido 2-/~6-(4-clorofenoxi)-1-fluoro-1-hexeni17-2-oxiranocarboxilico

A uma solução de 1,29 (8 mmol), 1,06 ml) de trifluoreto de dietilaminoenxofre em 50 ml de glima ang dra adicionam-se 1,31 g (4 mmol) de éster metílico de ácido 2-/~6-(4-clorofenoxi)-l-oxo-hexil7-2-oxiranocarboxílico. A mis| tura é aquecida até refluxo sob azoto durante 2,5 horas. Acre^ centam-se 2,58 g (16 mmol, 2,1 ml) adicionais de trifluoreto de dietilaminoenxofre e o refluxo é mantido durante 5,5 horas. A mistura é deixada voltar à temperatura ambiente durante 16 horas sendo então aquecida até refluxo durante 3 horas. A mis. tura é arrefecida até a uma temperatura de banho de gelo e ar refecida rápidamente gota a gota com bicarbonato de sodio aquq so saturado. A mistura é extraída com éter etílico e os extractos etéreos sao secos sobre sulfato de magnésio. A filtraçao e a rotoevaporaçao dao origem a um oleo o qual cristaliza apos refrigeração durante a noite. 0 sódio é triturado e cristaliza, do a partir de hexano:ciclohexano (1:1) para dar origem a um sólido crú (p.f. 44-46°C).

A cromatografia luminosa sobre gel de sílica (crivo 230-400) utilizando hexano : benzeno : acetato de etilo (12:5.2) como solvente de eluição dá origem a 250 mg (23,3%) de éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l,1-difluoro-hexil7-2-oxiranocarboxilico (Rf 0,54 em hexano : éter etílico (1:1)): p.f. 54-55°C; IV (KBr) 1740 cm RMN (CDC1₃) $ 1,79 (6H, mc), 1,83 (2H, p, J=8Hz), 2,26 (2H, m), 3,16 (1H, dd, J=6, 2Hz), 3,24 (1H, J=6Hz), 3,85 (3H, s), 3,96 (2H, t, J=8Hz), 6,86 (2H, d, J=10Hz) e 7,48 (2H, d, J=10Hz).

Análise para:

^C16^H19^C1F2°4

Calculados: C, 55,10; H, 5,49

Encontrados: C, 55,03; H, 5,47.

e a um óleo crú o qual é submetido sequencialmente a cromatografia luminosa preparativa (gel de sílica; tolueno : hexano (9:1)). Obtiveram-se 63 mg (4,8%) de éster metílico de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-l-hexanil7-2-oxiranocarboxílico (Rf 0,46 em hexano : eter etilico (1:1)): IV (peliculo) 1740 cm¹; RMN (CDClg) 6 1,60 (2H, m), 1,82 (2H, m), 2,27 (2H, m), 3,14 (1H, d, J=6Hz), 3,29 (1H, dd, J=6, 2Hz), 3,86 (3H, s), 3,96 (2H, t, J=7Hz), 5,22 (1H, dt, J_HF=36, J=7Hz), 6,85 (2H, d, J=9Hz), 7,28 (2H, d, J=9Hz).

Análise para:	C16H18C1F0	'4
Calculados:	C, 58,45;	H, 5,52
Encontrados:	C, 58,52;	H, 5,56

EXEMPLO 8

Sal de sodio de acido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l,l-difluoro-hexil7-2-oxiranocarboxí11co

Uma solução de 348 mg (1 mmol) de es ter metílico do ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l,1-difluoro-hexil7-2-oxiranocarboxílico do Exemplo 7 em 10 ml de etanol a 95% é tratada com uma solução de 40 mg (1 mmol) de hidróxido

de sódio em 5 ml de água. A solução é agitada a temperatura ambiente durante 3 horas sendo então rotoevaporada. 0 solido obtido é triturado duas vezes com éter etílico e o solvente é removido para dar origem a 289 mg (77,1%) do composto do tí. tulo: p.f. 140-153°C; IV (KBr) 1645, 1618 cm¹; RMN (d,-DMSO) ^b I ύ 1,46 (4H, m), 1,73 (2H, p, J=7Hz), 2,42 (2H, m), 2,70 (1H,| d, J=7Hz), 2,76 (1H, d, J=7Hz), 3,98 (2H, t, J=7Hz), 7,00 (2H, | d, J=10Hz) e 7,36 (2H, d, J=10Hz).

Análise para:

Calculados:

Encontrados:

C_n-Η.,ClF„NaO.

16 2 4

C, 48,07; H, 4,84

C, 48,13; H, 4,47.

EXEMPLO 9 ensaio que se segue mede a capacidade dos compostos do invento para inibirem a actividade da transferase palmitoil carnitina nas mitocondrias do fígado e do coraçao.

De acordo com este processo, sao realizados os passos que se seguem:

1) Isolamento das Mitocondrias

a) mitocondrias do fígado: 5 g de fígado de um rato com

300 g sao picados, homogenizados com 40 ml (30 ml para as mitocondrias do coraçao) de sucrose, 25 M, Tris 10 mM e EDTA 1 mM, pH 7,4 e centrifugada a 600 xg durante 15 minutos. 0 produto flutuante decantado é centrifugado a 7,900 xg durante 15 minutos. A pílula resultante é suspensa de novo num total de 20 ml (total de 16 ml para as mitocondrias do coraçao) de tam ^! pao sacarose e centrifugada 7,900 xg durante 15 minutos. A pí. ¹ lula é então suspensa de novo num total de 30 ml (11 ml para as mitocondrias do coraçao) de KC1, 15 M, Tris. Cl 5 mM, pH 7,4 e este é usado como fonte de enzima.

I ι

b) mitocondrias do coraçao: quatro coraçoes de ratos sao processados tal como foi descrito no passo a) atras referido para se obter uma fracçao das mitocondrias do coraçao.

2) Mistura da Reacçao

A 28 tubos de ensaio de vidro de 3 ml adicionam-se 350 jul da mistura que se segue:

0,15 ml de ATP 200 mM

0,03 ml de MgCl₂ 1 M

0,	171	ml	de	GSH	50 mM
0,	720	ml	de	KCi	3 M
0,	188	ml	de	Tris	1 M
81	mg	de	alb	'umin	a livre
0,	435	ml	de	KCN	100 mM
7,	3 ml	de	H2	0

1,5 ml de CoA palmitoilo 0,5 mM

Adicionam-se então a estes tubos de ensaio 50 jil de agua, 50 . 3 pl de carnitina 10 mM e, 25 jul carnitina-Ci H, e os tubos sao colocados num banho de agua a 30°C.

3) Suspensões Mitocondriais

Sao preparados doze tubos de incubaçao plásticos adicionando o que se segue aos tubos:

Tubo

1

0,15

ml

h2o

+

0,05

ml

DMSO

Tubo

2

0,05

ml

h20

+

0,05

ml

DMSO

Tubo

3

0,19

ml

h20

+

0,01

ml

de

inibidor 1

mM

a

ser

testado

Tubo

4

0,05

ml

h20

+

0,05

ml

f!

n

0,001

mM

tt

tt

tt

Tubo

5

0,09

ml

h20

+

0,01

ml

tt

ft

0,01

mM

tt

tt

ff

Tubo

6

0,05

ml

h20

+

0,05

ml

tt

tt

0,01

mM

tt

tt

ff

Tubo

7

0,09

ml

h2o

+

0,01

ml

tf

tl

0,1

mM

tt

tt

ff

Tubo

8

0,08

ml

h20

+

0,08

ml

f!

f!

0,02

mM

tt

tt

Tt

Tubo

9

0,05

ml

h20

+

0,05

ml

tf

tt

0,05

mM

tt

tt

11

Tubo

10

0,09

ml

H2°

+

0,05

ml

f!

l!

0,01

mM

tt

tt

ff

Tudo

11

0,05

ml

h20

+

0,05

ml

tf

tt

0,05

mM

tt

tt

ff

Tubo

12

0,05

ml

h20

+

0,05

ml

!!

composto 0

,05

mM

da

técnica

anterior

A cada um dos tubos, com excepçao dos tubos 1 e 3, sao adicionados 30 ju.1 de ATP 200 mM, 20 μΐ de MgCl₂ 333 mM e 50 jul de CoA 1,5 mg/ml. Sao adicionados a cada tubo 800 jil de mitocondrias do passo 1) atrás referido, e os tubos sao incubados à temperatura ambiente durante 20 minutos. Os tubos sao centrifugados a 7,900 xg durante 3 minutos e a pílula resultante é suspensa de novo em 1 ml de KCL 150 mM gelado, TRIS 5 mM, pH 7,4.

4) Ensaio pl de suspensão mitocondrial do passo 3) atrás referido sao adicionados aos 28 tubos do passo 2) como se segue: (com intervalos de 15 segundos):

Tubos	1,2	suspensão de	novo	em	tampao (KC1
		150 mM, Tris	5 mM,	pH	7,4.
Tubos	3,4	mitocondrias	a partir	do isola-
		mento diluido	4:5	com	o tampao

da nova suspensão.

Tubos	5,6	Incubaçao	tubo	No.	1
Tubos	7,8	Incubaçao	tubo	No.	2
Tubos	9,10	Incubaçao	tubo	No.	3
Tubos	11,12	Incubaçao	tubo	No.	4
Tubos	13,14	Incubaçao	tubo	No.	5
Tubos	15,16	Incubaçao	tubo	No.	6
Tubos	17,18	Incubaçao	tubo	No.	7
Tubos	19,20	Incubaçao	tubo	No.	8
Tubos	21,22	Incubaçao	tubo	No.	9
Tubos	23,24	Incubaçao	tubo	No.	10
Tubos	25,26	Incubaçao	tubo	No.	11
Tubos	27,28	Incubaçao	tubo	No.	12

Os tubos sao incubados durante 5 minutos a 30°C adicionando-se então a cada tubo, com intervalos de 15 segundos, 50 pl de HC1 concentrado, 1,45 ml de agua e 1 ml de n-butanol. Os tubos sao misturados, gelados em gelo durante 20 minutos sendo então centrifugados durante 10 minutos a 2.500 rpm para clarificar as camadas. Em seguida, 500 pl da camada superior de butanol de cada tubo sao pipetados para 100 pl de água e 500 pl de água saturada com butanol, os tubos são misturados e gelados em gelo durante 20 minutos e centrifugados de novo durante 10 minutos a 2,500 rpm. 200 pl da camada de butanol de cada tubo sao pipetados para um frasco de cintilação ao qual se adicionam 10 ml de Aquasol, e as amos-, tras sao contadas num Contador de Cintilação PacKard Tri-Carb.

Os resultados sao usados para calcular a percentagem de inibição da transferase palmitoil carnitji na pelos compostos testados.

Quando testado neste ensaio, o compojs to do Exemplo 2 (isómero A) e o composto da técnica anterior éster etílico de ácido 2-/~6-(4-clorofenoxi)hexil7oxirano-2-carboxílico (Composto A) deram os resultados que se seguem:

		Composto e	% de Inibição	+ SEM
Composto
	Exemplo 2	Composto A
Concentração,	uM
	fígado	coraçao	fígado	coraçao
0	0	0	0	0
0,05	5 + 3	6 + 5	9 + 7	5 + 6
0,10	11 + 5	17+ 5	11+ 6	8 ± 7
0,50	23+ 7	18+ 4	60+ 7	36+10
1,0	61+ 9	34+ 3	79+ 2	38+15
2,0	78+ 7	35+ 3	82+ 2	51 + 15
5,0	79+ 8	40+ 4	86+ 3	68+11
10,0	80+ 9	50+ 2	83+ 3	81+ 1
50,0	82+10	52+ 4	85+ 2	84+ 1
IC50	0,97+0,18		0,33+0,04 0,25+1,5

Os resultados revelam que enquanto os dois compostos testados demonstram um efeito inibidor significativo sobre a transferase palmitoil carnitina do fígado, o composto do invento testado revela um efeito inibidor muito significativamente reduzido sobre o enzima do composto quando comparado com o efeito exercido pelo composto da técnica anterior, evidenciando um potencial significativamente diminuído quando a efeitos prejudiciais sobre a função cardíaca normal.

Quando testados pelo processo atrás

indicado, dois outros compostos do invento e o composto da te_ cnica anterior o éster etilico do acido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)hexil7-oxirano-2-carboxílico (Composto A) deram os resultados que se seguem:
Composto do Exemplo No.	Inibição da CPTase Hepática, ^50’	% da Inibição Máxima sobre a CTPase Cardíaca a 50 ^μΜ
7 (Composto gem-difLu oro)	0,35	26 + 4
8	0,25	24 + 6
Composto A	0,31	85 + 2

Estes últimos resultados revelam que nao apenas os compostos do invento apresentam um efeito muito significativo sobre a transferase palmitoil carnitina do fíga. do mas que também estes compostos apresentam um efeito inibidor extremamente reduzido sobre a transferase palmitoil carnjí tina do coraçao quando comparados com o composto da técnica anterior, evidenciando de novo um potencial grandemente diminuido do efeito prejudicial sobre a função cardíaca normal.

Quando testados no ensaio atras refe. rido usando apenas mitocondrias do fígado, outros compostos do invento dao os resultados que se seguem.

Quadro 2

Composto do

Exemplo No.

% da Inibição da CPTase hepática, ΙΟ^θ, pM

(isómero A)	1,08
(isómero A)	0,97
(isómero A)	0,85
(isómero B)	1,75
	0,50
	0,52
(Composto gem-difluor0)	5,9
(Composto fluoro-vinilo)	5,5
(Composto fluoro-vinilo)	0,70

Os resultados revelam que os compostos testados apresentam uma significativa inibição da transfe^ rase palmitoil carnitina nas mitocondrias do fígado, evidencji ando uma excelente actividade inibidora sobre a oxidaçao dos ácidos gordos.

Claims (7)

1. REIVINDICAÇÕES

   I^a.-Processo para a preparaçao de um composto tendo a fórmula

   Cl)

   12em que R e R sao cada um deles, independentemente, hidrogénio, hidroxi, alquilo inferior, alcoxi inferior, halo-alquilo 3 , inferior, halo-alquil inferior-sulfonilo, halo ou nitro; R e hidrogénio, alquilo inferior, ou arilo com 7-12 átomos de car bono; X e

   -CH₉-CH-,

   -CH₀-C l/\ F ou

   F

   -CH=C-;

   *

   A é —CH₂ ^_, -0- ou -S-; mél-8; néO-7, desde que m + n _ 8; ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado por compreender:

   (a) a epoxidaçao de um fluoreto alilico com a formula em que R^, R^, R^, A, dos ou n sao tal como foram atrás defini(b) a fluoraçao de um epoxi- álcool com a fórmula

   R (III) em

   R⁴

   1 o que R¹, R^Z A, m e n sao tal como foram atrás definidos e é alquilo inferior ou arilo com 7 a 12 átomos de carbono, ou (c) a fluoraçao de um composto ceto com a fórmula (V) em que R , R , A, m e n sao tal como foram definidos na ante-

   4 , riormente e R e tal como foi atras definido e separaçao dos compostos resultantes com a fórmula (I) em que X representa

   -CH₂CF₂- e -CH=CF-, ou (d) a separaçao de uma mistura diastereomérica dos isq meros com a formula (I), ou (e) a hidrólise de um ester com a fórmula (I) em que R³ e alquilo inferior ou arilo com 7 - 12 átomos de carbono no acido com a fórmula (I) em r>3 que R é hidrogénio, ou (f) a conversão de um ácido com a fórmula (I) em que R³

   e hidrogénio num seu sal farmaceuticamente aceitavel.
2. 2^a.- Processo de acordo com a rei vindicação 1, caracterizado por o produto obtido ser o éster metílico do ácido 2—(1—fluoro-5-fenilpentil)-2-oxiranocarboxi lico, ou o éster metílico do ácido 2-/ 5-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-pentil7- 2-oxiranocarboxilico ou o éster metílico do ácido 2-/^-6-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-hexil-2-oxiranocarboxili co.
3. 3^a.- Processo de acordo com a rei. vindicaçao 1, caracterizado por o produto obtido ser o sal de sodio do ácido 2-/ 5-(4-cloro-fenoxi)-l-fluoro-pentil7~2-oxiranocarboxilico, ou o sal de sodio de ácido 2-/ 6-(4-clorofenoxi)-l-fluoro-hexil7-2-oxiranocarboxilico.
4. 4^ã.~ Processo de acordo com a rei vindicaçao 1, caracterizado por o produto obtido ser o éster metílico do ácido 2-/ 5-(4-cloro-fenoxi)-l,1-difluoropentil7~ -2-oxiranocarboxilico, ou o éster metílico do ácido 2-/ 6-(4-cloro-fenoxi)-l,1-difluoro-hexil7-2-oxiranocarboxilico ou o sal de sódio do ácido 2-/ 6-(4-cloro-fenoxi)-1,1-difluoro-hexil7-2-oxiranocarboxilico.
5. 5^a.- Processo de acordo com a rei vindicaçao 1, caracterizado por o produto ser o éster metilico do ácido 2-/ 5-(4-cloro-fenoxi)-l-fluoro-l-pentenil7-2-oxi ranocarboxilico, ou o éster metílico de acido 2-/
6. 6-(4-cloro-fenoxi)-l-fluoro-l-hexenil7_2-oxiranocarboxilico.

   -526-.- Processo para a preparaçao de uma composição farmacêutica caracterizado por se levar um composto com a fórmula (I) tal como foi definido na reivindicação 1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitavel a associar-se com um veiculo farmaceuticamente aceitavel.
7. 7-.- Processo de acordo com a reji vindicaçao 6 caracterizado por o composto com a fórmula (I) ou o seu sal farmaceuticamente aceitável ser preparado por meio de um processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5.