PT831100E

PT831100E - Novos derivados de peptido

Info

Publication number: PT831100E
Application number: PT96908363T
Authority: PT
Inventors: Kyoichi Sakakibara; Masaaki Gondo; Koichi Miyazaki; Takeshi Ito; Akihiro Sugimura; Motohiro Kobayashi
Original assignee: Teikoku Hormone Mfg Co Ltd
Priority date: 1995-04-21
Filing date: 1996-04-08
Publication date: 2001-01-31
Also published as: WO1996033212A1; EP0831100A1; DK0831100T3; KR100408909B1; AU704973B2; ATE196913T1; GR3034924T3; ES2150664T3; AU5162796A; DE69610627D1; EP0831100A4; KR19980703203A; CN1113066C; EP0831100B1; US5840699A; DE69610627T2; CN1182434A; CA2218606A1

Description

84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ DESCRICÀO “Novos derivados de péptido”

Este invento refere-se a novos derivados de péptido que possuem uma actividade anti-tumoral e, mais particularmente, a derivados de péptido de fórmula

(I) 0 ou sais destes, em que: (a) Q, representa um grupo l-dimetilamino-2-metilpropilo e Q, representa um grupo (R)- ou (S)-2-hidroxi-2-feniletilamino, ou

(b) Q, representa um grupo l-metil-2-pirrolidinilo e Q2 representa -NH-CH-CH, -B

A em que A representa um átomo de hidrogénio ou

em que Y representa um átomo de hidrogénio ou -COR,, e R, representa um grupo hidroxilo, um grupo alcoxi de não mais de 6 átomos de carbono, um grupo benziloxi, um grupo fenetiloxi ou 7 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ em que R: e R3 podem ser os mesmos ou diferentes e cada um representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo de não mais de 6 átomos de carbono, um grupo fenilo ou um grupo heterocíclico de quatro a sete membros contendo um ou dois heteroátomos seleccionados de S, O e N, ou R: e R3, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, podem formar um grupo heterocíclico de quatro a sete membros que pode ainda conter um heteroátomo seleccionado de S, O e N, e B representa um grupo fenilo que pode opcionalmente ser substituído com um átomo de halogéneo, um grupo hidroxilo, um grupo alquilo de não mais de 6 átomos de carbono, ou um grupo alcoxi de não mais de 6 átomos de carbono.

Até agora, foram isolados vários compostos possuindo actividade inibidora do crescimento celular e/ou anti-neoplásica a partir de um molusco marinho (Dolabella auricularia) que é da família das lebres marinhas, e estes compostos são designados por dolastatinas 1-15. Entre estes, a dolastatina 10 é um pentapéptido extraído do Oceano Indico (lebre marinha Dolabella auncularia) por Pettit em 1987 e possuindo a fórmula estrutural dada a seguir, e é conhecido como sendo um composto que possui a mais potente actividade inibidora de crescimento celular de todos os compostos existentes (ver Pettit et al., Journal of the American Chemical Societγ, Vol. 109, p. 6883, 1997 e Patente U.S. 4,816,444).

[Dolastatina 10]

Depois disso, a síntese total da dolastatina 10 foi também relatada (ver Patente U.S. 4,978,744).

Entretanto, os presentes inventores descreveram previamente certos derivados da dolastatina 10 (ver documentos WO 93/03054 e WO 95/09864).

Agora, os presentes inventores verificaram que (a) certos derivados da dolastatina 10

84 975

EPO 831 ÍOO/PT obtidos por substituição da dolafenina [a-(tiazolil)fenetilamina] localizada no terminal C da dolastatina 10 por outro grupo substituinte, e (b) certos derivados da dolastatina 10 obtidos por substituição da dolavalina (Ν,Ν-dimetilvalina) localizada no terminal N da dolastatina 10 por N-metilprolina, possuem uma actividade anti-tumoral muito mais potente do que a dolastatina 10. A patente EP 0 598 129 refere novos derivados de tetrapéptidos possuindo uma actividade anti-tumoral que são compostos de dolastatina 10 substituídos com aminoácidos, derivados carboxilados do anel triazolo e derivados de tetrapéptidos em que o anel de triazolo é eliminado.

Os grupos ou compostos possuindo não mais do que seis átomos de carbono têm preferencialmente não mais do que quatro átomos de carbono.

Na fórmula (I) anterior, exemplos do referido grupo alquilo incluem grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo. sec-butilo, terc-butilo, e n-hexilo, e exemplos do “grupo alquilo inferior” incluem grupos metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi e n-butoxi. Para além disso, o referido grupo aralquiloxi significa um grupo aril-(alquiloC,-C6)oxi, e exemplos destes incluem benziloxi e fenetiloxi. Os “átomos de halogéneo” incluem átomos de flúor, cloro, bromo e iodo.

Quando R„ ou R, representa “um grupo heterocíclico com quatro a sete membros contendo um ou dois heteroátomos seleccionados de S, O e N”, exemplos de grupos heterocíclicos incluem grupos azetidinilo, furilo, tienilo, piridilo, piperidinilo, azepinilo, tiazolilo, imidazolilo, oxazolilo, pirimidinilo e piridazinilo. Por outro lado, quando R, ou R3, “em conjunto com o átomo de azoto a que estão ligados, formam um grupo heterocíclico de quatro a sete membros que pode ainda conter um heteroátomo seleccionado de S, O e N”, exemplos do grupo heterocíclico incluem grupos azetidino, pirrolidino, piperidino, 1-per-hidroazepinilo, piperazino, morfolino, e tiomorfolino.

Deste modo, exemplos do grupo

-N Λ V incluem grupos amino, metilamino, etilamino, isopropilamino, terc-butilamino,

84 975 ΕΡ0 831 100/ΡΤ 4 dimetilamino, dietilamino, fenilamino, N-metil-N-fenilamino, furilamino, piridilamino, 2-tiazolilamino, imidazolilamino, pirimidilamino, pirrolidino, piperidino e morfolino. O “grupo fenilo que pode ser opcionalmente substituído com um átomo de halogéneo, um grupo hidroxi, um grupo alquilo CrC,, ou um grupo alcoxi C,-C6”, tal como representado pelo símbolo B, significa um grupo fenilo não-substituído ou um grupo fenilo substituído com um átomo de halogéneo, um grupo hidroxi, um grupo alquilo C,-C6 ou um grupo alcoxi C,-C6 , e exemplos destes incluem grupos fenilo, 2-fluorofenilo, 2-clorofenilo, 2-bromofenilo, 3-fluorofenilo, 3-iodofenilo, 4-fluorofenilo, 4-clorofenilo, 4-bromofenilo, 2-hidroxifenilo, 4-hidroxifenilo, 2-metilfenilo, 4-etilfenilo, 2-metoxifenilo e 4-etoxifenilo.

Um grupo de compostos preferidos de acordo com o presente invento são os compostos de fórmula (I) anterior em que Q, representa um grupo l-dimetilamino-2-metilpropilo e Q2 representa um grupo (R)- ou (S)-2-hidroxi-2-feniletilamino.

Outro grupo de compostos preferidos de acordo com o presente invento são os compostos de fórmula (I) anteriores em que Q; representa

-NH-CH-CH, -B

I

A onde A é um átomo de hidrogénio e B é um grupo fenilo que pode opcionalmente ser substituído com um átomo de halogéneo (em particular, um átomo de flúor).

Ainda outro grupo de compostos preferidos de acordo com o presente invento são os compostos de fórmula (I) anteriores em que Q, representa

-NH-CH-CH, -B

I

A onde A é um grupo 2-tiazolilo que pode opcionalmente ser substituído com um grupo N-(alquilo C,-C6)carbamoílo, e B é um grupo fenilo não-substituído.

Nos compostos de fórmula (I) anteriores de acordo com o presente invento, os átomos de carbono a que os grupos isopropilo, sec-butilo, metoxi ou metilo estão ligados são átomos de carbono assimétricos e deste modo podem possuir qualquer configuração 5 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ estereoisomérica (R) ou (S). Embora todos estes compostos estejam dentro do domínio do presente invento, os compostos que possuem a mesma configuração estereoisomérica da dolastatina 10 são preferidos do ponto de vista da actividade farmacológica.

Os compostos de péptido de fórmula (I) anterior podem também existir sob a forma de sais. Exemplos de tais sais incluem cloridratos, bromidratos, trifluoroacetatos, p-toluenossulfonatos e acetatos.

Na prática do presente invento, os compostos de péptido de fórmula (I) anterior podem ser preparados por condensação dos aminoácidos ou fragmentos de péptido apropriados, por exemplo, de acordo com um método de síntese em fase líquida (ver E. Schrõder e K. Lubke. “The Peptides”, Vol. 1, p. 76-136, 1965, Academic Press) que é bem conhecido no domínio da química dos péptidos.

Por exemplo, de modo a evitar a racemização durante a condensação, é adequado sintetizar os compostos de péptido por condensação de um fragmento de tripéptido com a seguinte fórmula (II)

0 em que Q, possui o mesmo significado que foi descrito previamente, com um fragmento com a seguinte fórmula (ΠΙ)

OH) em que Q: possui o mesmo significado que foi descrito previamente.

Para além disso, de modo a sintetizar eficientemente muitos dos compostos do

84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ 6 presente invento, é preferível condensar um fragmento de tetrapéptido com fórmula (IV)

em que Q, possui o mesmo significado que foi descrito previamente, com um fragmento com a seguinte fórmula (V) H-Q: (V) em que Q2 possui o mesmo significado que foi descrito previamente.

As reacções de condensação podem geralmente ser realizadas por tratamento com um agente de condensação tal. como diciclo-hexilcarbodiimida (DCC), difenilfosforilazida (DPPA), cianofosfato dietílico (DEPC) ou reagente BOP. no seio de um solvente inerte tal como clorofórmio, acetato de etilo, tetra-hidrofurano (THF), dimetilformamida (DMF) ou acetonitrilo, e na presença de uma base orgânica tal como trietilamina, N-metilmorfolina ou diisopropiletilamina (DIEA), se necessário. A temperatura da reacção varia geralmente de -10°C até à temperatura ambiente e é preferencialmente à volta de 0°C. Nas proporções com que o composto de fórmula (III), a base orgânica e o agente de condensação são usados em relação ao composto de fórmula (Π), é vantajoso usar pelo menos 1 mole, preferencialmente cerca de 1,0-1,1 moles do composto de fórmula (III), cerca de 1-2 moles de base orgânica e cerca de 1 mole do agente de condensação, por mole do composto de fórmula (II). A reacção do composto de fórmula (IV) com o composto de fórmula (V) pode ser realizada sob as mesmas condições que foram descritas anteriormente para a reacção do composto de fórmula (II) com o composto de fórmula (III).

Os compostos de fórmula (I) em que Y é um grupo carboxilo podem ser também preparados hidrolisando um composto de fórmula (I) em que Y é um grupo (alcoxi inferior)carbonilo, na presença de uma base.

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Os compostos de péptido de fórmula (I) formados do modo atrás descrito podem ser isolados a partir da mistura reaccional e purificados por recristalização, cromatografia de permuta iónica, filtração em gel, cromatografia líquida de alta eficiência ou outros equivalentes. A maioria dos compostos com as fórmulas (II), (III) e (IV) anteriores usados como materiais de partida nas reacções atrás descritas são compostos novos que não foram até à data descritos na literatura. Contudo, estes podem ser rapidamente preparados condensando os seus aminoácidos constituintes de acordo com o método de síntese em fase líquida.

Os compostos de fórmula (I) de acordo com o presente invento possuem uma actividade anti-tumoral mais potente do que a dolastatina 10, e também possuem elevadas razões terapêuticas. De acordo com isto, estes são úteis para o tratamento ou terapia de, por exemplo, leucemia, carcinoma de células não-pequenas do pulmão, carcinoma de células pequenas do pulmão, cancro do cólon, cancro de CNS. melanoma, carcinoma dos ovários, cancro dos rins, cancro do estômago, e cancro da bexiga urinária. A actividade anti-tumoral dos compostos de fórmula (I) de acordo com o presente invento pode ser determinada da seguinte maneira. 0,1 ml (106 células por rato) de células de leucemia de rato P388 foram transplantados para a cavidade abdominal de ratos CDF-1 com 7 semanas de idade. No primeiro dia (o dia seguinte) e no quinto dia após transplante, uma droga foi administrada intraperitonealmente e a vida ou morte dos ratos foi observada durante 60 dias. Então, a percentagem de aumento da esperança de vida (ILS) foi calculada a partir dos resultados da observação de acordo com a equação seguinte. Na equação seguinte, T designa o número médio de dias que os ratos do grupo tratado com a droga sobreviveram, e C designa o número médio de dias que os ratos do grupo de controlo sobreviveram.

T-C ILS = - x 100

C

Os resultados obtidos deste modo são mostrados na tabela seguinte. A actividade anti-tumoral de cada droga está expressa como valor relativo com base na actividade anti-tumoral da dolastatina 10. para a qual a ILS é considerada 1.

Actividade anti-tumoral 1,5 1,9 1,3 1 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ 8

Tabela Ν° de Exemplo do composto Exemplo 1 Exemplo 2 Exemplo 7 Dolastatina 10

Quando os compostos do presente invento são usados como drogas, estas podem ser formuladas como qualquer uma das preparações farmacêuticas de acordo com o fim pretendido. Estas preparações farmacêuticas incluem preparações sólidas tais como comprimidos, cápsulas duras, cápsulas moles, grânulos, pós, grânulos subtilizados, pílulas e pastilhas; preparações semi-sólidas tais como supositórios e unguentos; e preparações líquidas tais como injecções, emulsões, suspensões, loções e pulverizações. Os aditivos não tóxicos que podem ser usados nas preparações farmacêuticas anteriormente mencionadas incluem por exemplo amido, gelatina, glucose, lactose, frutose, maltose, carbonato de magnésio, talco, estearato de magnésio, metilcelulose. carboximetilcelulose e sais destes, goma arábica, polietilenoglicol, ésteres alquílicos de ácido p-hidroxibenzóico, xarope, etanol. propilenogíicol. vaselina, carbowax. glicerina, cloreto de sódio, sulfito de sódio, fosfato de sódio e ácido cítrico. As preparações farmacêuticas anteriormente mencionadas podem ainda conter outras drogas terapeuticamente eficazes. O teor dos compostos do presente invento nas preparações farmacêuticas anteriormente mencionadas pode variar de acordo com a forma de dosagem. Geralmente, é desejável que as preparações sólidas e semi-sólidas contenham os compostos do presente invento numa quantidade de 0,1 a 50% em peso e que as preparações líquidas os contenham numa quantidade de 0,05 a 10% em peso. O doseamento dos compostos do presente invento pode variar largamente de acordo com o tipo do animal de sangue quente (incluindo seres humanos) a ser tratado, a via de administração, a gravidade dos sintomas, o diagnóstico do médico, e outros do género. Geralmente, estes podem ser administrados com uma dose diária de 0,01 a 50 mg/kg. Contudo, é claro que podem ser administrados com doses inferiores ao limite inferior da referida gama ou superiores ao limite superior desta, dependendo da gravidade dos sintomas do paciente e do diagnóstico do médico. A dose diária atrás mencionada pode ser tomada de uma vez ou em várias doses divididas. 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ 9

Exemplos Ο presente invento é mais especificamente explicado com referência aos seguintes Exemplos de referência e Exemplos.

Tal como para as estruturas dos compostos correspondentes aos números dos compostos usados nos Exemplos de referência e Exemplos, ver os seguintes Diagramas 1 a 3. Nestes diagramas, Bu‘, Boc. Bzl, Z e Me representam grupos terc-butilo, terc-butoxicarbonilo, benzilo, benziloxicarbonilo e metilo, respectivamente. Q2, B e Y possuem os mesmos significados que descritos previamente. (Seguem Diagramas) 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ 10

Diagrama 1

Ο 3ζ1 Composto 2

ΓΟ ί Exemolo áe Referência 2 ν

Exemplos 1 - 2

k 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ 11

Diagrama 2 Ο Q Η ι ζ Ζ - Η

C Ο Ο Β u *

Composto ό

Exemplo de Referência 3

N

SM- i i I M o n j Exemplo de Referência 4 v c Ο Ο Β α 1 O M e

Composto. 8

Composto 2

Exemplo de Referência 5

C O O Bzl M e

Composto 9

Exemplo de Referência 6 12 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ

13 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ

Diagrama 3

Composto 8

84 975 ΕΡ Ο 831 ΙΟΟ/ΡΤ 14

Exemplo de referência 1 830,7 mg (1,71 milimoles) do composto 1 foram dissolvidos em 20 ml de ácido trifluoroacético/diclorometano a 50% sob arrefecimento com gelo. Esta solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e então evaporada até à secura sob pressão reduzida.

Após o resíduo ter sido dissolvido em 5 ml de dimetilformamida (DMF), foram adicionados 2,4 ml de trietilamina sob arrefecimento com gelo e a mistura resultante foi evaporada até à secura sob pressão reduzida.

Por outro lado, 644,3 mg (1,71 milimoles) do composto 2 foram dissolvidos em 8,6 ml de ácido clorídrico 4N/dioxano após arrefecimento com gelo. Esta solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas e então evaporada até à secura sob pressão reduzida.

Ambos os resíduos anteriores foram combinados e dissolvidos em 7 ml de DMF. Ao mesmo tempo que esta solução foi sendo agitada sob arrefecimento com gelo, 352 mg (2,16 milimoles) de cianofosfato de dietilo (DEPC) e 0,53 ml (3.82 milimoles) de trietilamina foram-lhe adicionados, e a mistura resultante foi agitada durante a noite a temperaturas variando de 0°C até à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi diluída com uma mistura acetato de etilo-benzeno (4:1), lavada com uma solução aquosa saturada de . bicarbonato de sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e então seca. Após vj o solvente ter sido removido por destilação, a matéria oleosa remanescente (1,35 g) foi purificada por cromatografia em coluna Sephadex LH-20 usando hexeno-metanol-diclorometano (4:5:15) como eluente. Deste modo, foram obtidos 1,06 g do composto 3 desejado, como um material amorfo (com um rendimento de 89,7%).

[ccfD = -48,2° (c=0,375, MeOH)

Exemplo de referência 2 688 mg (1,00 milimoles) do composto 3 foram dissolvidos em 10 ml de t-butanol-água (9:1), e 0,1 g de 5% paládio-carbono foram-lhe adicionados. Esta mistura foi agitada com uma corrente de hidrogénio durante 5 horas. Após o catalisador ter sido removido por filtração e lavado, o filtrado e as águas de lavagens foram combinadas e evaporadas até à secura sob pressão reduzida. Deste modo, foram obtidos 590 mg do composto 4 desejado,

84 975 ΕΡ0 831 100/ΡΤ 15 sob a forma de um material em espuma sem cor (com um rendimento de 98,7%).

[ocf’D = -57,3° (0=0,955. MeOH) Ή-RMN (CDC1,, δ): 0.7-1,1 (m), 1,17 (3H. d, J= 4,4Hz), l,6-2,2(m), 2,54 (6H, s), 3.04 e 3,08 (3H, s), 3,27 e 3,31 (3H. s), 3,36 e 3,42 (3H. s), 4.0-4,3 (m). 4,6-5.0 (m). 5,0-5,4 (m), 6,97 (1H, d largo).

Exemplo 1 30 mg (50 micromoles) do composto 4 e 10 mg (58 micromoles) de cloridrato de (R)-2-hidroxi-2-feniletilamina foram dissolvidos em 0,5 ml de DMF. Ao mesmo tempo que esta soluçào foi sendo agitada sob arrefecimento com gelo, foram-lhe adicionados 9,5 mg (58 micromoles) de DEPC e 16 μΐ (11,5 micromoles) de trietilamina, e a mistura resultante foi agitada durante a noite a temperaturas variando de 0°C até à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi diluída com diclorometano. lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e uma salmoura saturada, e então seca. Após o solvente ter sido removido por destilação, o resíduo resultante foi purificado por TLC preparativa [solvente de revelação: diclorometano:metanol (10:1)], e então por cromatografia numa coluna Sephadex LH-20 usando hexano-metanol-diclorometano (4:5:15) como eluente. Deste modo obtiveram-se 25,1 mg do composto 5-A desejado ii.e. o composto 5 em que Q; é um grupo (R)-2-hidroxi-2-feniletilamino) sob a forma de um material amorfo (com um rendimento de 69,9%).

[a]:;’D = -43,8° (c=0,319, MeOH) Ή-RMN (CDClj, δ): 0,7-1,1 (m), 1,27 (3H, d. J= 7,0Hz), l,6-2,2(m), 2,27 (6H, s), 2,3-2,6 (m), 3,02 (3H, s), 3,32 (3H, s), 3,43 (3H, s), 3,82 (1H, d largo), 4,0-4,2 (m), 4,77 (1H. dd, J= 9,0Hz, 6,8Hz), 6,6-7.0 (m), 7,2-7,5 (5H, m).

Exemplo 2

Usando o composto 4 e (S)-2-hidroxi-2-feniletilamina. foi obtido o composto 5-B (i.e. o composto 5 em que Q; é um grupo (S)-2-hidroxi-2-feniletilamino) (com um rendimento de 79,1%), do mesmo modo descrito no Exemplo 1.

[afD = -44,5° (c=0,330, MeOH) Ή-RMN (CDClj, δ): 0,7-1,1 (m), 1,26 (3H, d, J= 7,0Hz), l,5-2,2(m), 2,65 (6H, s), 3,02 (3H, s), 3,32 (3H, s), 3,40 (3H, s), 3,85 (1H, dd, J= 9,5Hz, 1,5Hz), 4,0-4,2 (m), 4,71

84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ 16 (1Η, dd, .1= 8,1 Hz, 6,8Ηζ),4.8-5.1 (m), 6,7-6,9 (m), 7,2-7,5 (5H, m)

Exemplo de referência 3 0,85 g (1,73 milimoles) do composto 6 foram dissolvidos em 15 ml de t-butanol-água (9:1), e foram-lhe adicionados 0,1 g de 5% paládio-carbono. Esta mistura foi agitada numa corrente de hidrogénio. Após 3 horas de reacção. o catalisador foi removido por filtração e lavado, e o filtrado e as águas de lavagem foram combinadas e evaporadas até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 20 ml de benzeno, e esta solução foi evaporada até à secura sob pressão reduzida. Este procedimento foi repetido mais uma vez para se obter uma matéria oleosa. Esta matéria oleosa, em conjunto com 0,48 g (1,93 milimoles) de Z-prolina e 0,31 g de (1,90 milimoles) de cianofosfato de dietilo (DEPC), foi dissolvida em 10 ml de dimetilformamida (DMF). Ao mesmo tempo que esta solução foi sendo agitada sob arrefecimento com gelo, foi-lhe adicionada, gota a gota, uma solução de 0,19 g (1,88 milimoles) de trietilamina em 1 ml de DMF.

Depois disto, a agitação continuou a 0°C durante 4 horas e à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reaccional límpida resultante foi completamente diluída em acetato de etilo, lavada com ácido clorídrico 2N arrefecido com gelo e uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, e então seca. O solvente foi removido por destilação sob pressão reduzida para se obterem 1,01 g de um material oleoso. Este material oleoso foi purificado por cromatografia numa coluna de sílica gel [eluente: acetato de etilo-hexano (2:1)]. Deste modo, foram obtidos 0,97 g de composto 7 desejado, sob a forma de um material em espuma sem cor (com um rendimento de 95.1%).

[cc]:7D =-81,7° (c=l,025, MeOH) Ή-RMN (CDC13, δ): 0,75-1,05 (12H. m), 1,46 (9H, s), 1,S-2,2(4H, m), 2,3-2,4 (2H, m), 2,96 (3H, s), 3,34 (3H, s), 3.4-3,6 (2H, m), 3,8-4,0 (1H. m), 4,2-4,4 (1H, m), 4,73 (1H, dd, J= 8,9Hz, 6,3Hz), 5,17 (2H, s largo), 7,32 (5H. s).

Exemplo de referência 4 0,50 g (0,85 milimoles) do composto 7 foram dissolvidos em 20 ml de metanol, e 1,0 g de formalina a 37% e 0,4 g de 5% paládio-carbono foram-lhe adicionados. Esta mistura foi agitada com uma corrente de hidrogénio durante 48 horas. Após 0 catalisador ter sido removido por filtração e lavado com metanol, o filtrado e as águas de lavagens foram combinados e evaporados até à secura sob pressão reduzida. O material oleoso resultante foi

84 975 ΕΡ 0 831 ιοο/ρτ 17 dissolvido em acetato de etilo-hexano (1:1), e qualquer material insolúvel foi removido por filtração. Após o filtrado ter sido evaporado até à secura sob pressão reduzida, o material oleoso remanescente foi purificado por cromatografia numa coluna de sílica gel [eluente: acetato de etilo-hexano (2:1)]. Deste modo. foram obtidos 0,36 g de composto 8 desejado, sob a forma de um material em espuma sem cor (com um rendimento de 90,0%).

[a]25D = -76,2° (c=l,10. MeOH) Ή-RMN (CDCl„ δ): 0,7-1.05 (12H, m), 1,46 (9H, s), 1.6-1,9 (4H, m), 2,31 (3H, s), 2.3- 2.45 (2H, m), 2,99 (3H, s), 3,36 (3H, s), 3.75-4.0 (1H, m), 4,73 (1H. dd, J= 8,9Hz, 7,1 Hz), 7,81 (2H, d largo).

Exemplo de referência 5 310 mg (0,66 milimoles) do composto 8 foram dissolvidos em ácido trifluoroacético a 50%/diclorometano a 0°C. Esta solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e então evaporada até à secura sob pressão reduzida.

Por outro lado, 263 mg (0,70 milimoles) do composto 2 foram dissolvidos em ácido clorídrico 4N/dioxano a 0°C. Esta solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e então evaporada até à secura sob pressão reduzida. Após o resíduo ter sido dissolvido em 3 ml de DMF, foram adicionados 0,9 ml de trietilamina, sob arrefecimento com gelo, e a mistura resultante foi evaporada até à secura sob pressão reduzida. Após estes resíduos terem sido combinados e dissolvidos em 3 ml de DMF. foram adicionados 136 mg (0,83 milimoles) de DEPC e 0,11 ml (0,79 milimoles) de trietilamina sob arrefecimento com gelo, e a mistura resultante foi deixada como tal durante a noite, com agitação. A mistura reaccional foi diluída com uma mistura acetato de etilo-oenzeno (4:1) lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e uma salmoura saturada, e então seca. Após o solvente ter sido removido por destilação obtiveram-se 449 mg de um material oleoso. Este material oleoso foi purificado por cromatografia numa coluna de sílica gel [eluente: diclorometano-metanol (30:1 —> 10:1)]. Deste modo, foram obtidos 185 g do composto 9 desejado, sob a forma de um material oleoso sem cor (com um rendimento de 41,5%).

[a]D = n.d. Ή-RMN (CDC13, Ô): 0,7-1,1 (m), 1,27 (3H, d, J= 7,0Hz), 1,5-2,3 (m), 2,34 (3H, s), 2.3- 2,9 (m), 3,00 (3H, s), 3,30 (3H, s), 3,35 (3H, s), 3,85-4,3 (m), 4,68 (1H, dd, J= 8,7Hz, 18 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ 4,9Ηζ), 5,13 (2Η, s), 7,34 (5Η, s).

Exemplo de referência 6 185 mg do composto 9 foram dissolvidos em 3 ml de t-butanol-água (9:1), e foram adicionados 40 mg de 5% paládio-carbono. Esta mistura foi agitada numa corrente de. hidrogénio durante 5 horas. Após o catalisador ter sido removido por filtração e lavado, o filtrado e as águas de lavagem foram combinados e evaporados até à secura sob pressão reduzida. Deste modo, foram obtidos 155 g de composto 10 desejado sob a forma de um material oleoso sem cor (com um rendimento de 97,1%).

[oc]D = -83,3° (c=0,365, MeOH)

Exemplo 3 23,4 mg (40 micromoles) do composto 10 e 12,1 mg (100 micromoles) de fenetilamina foram dissolvidos em 0,5 ml de DMF. Ao mesmo tempo que esta solução foi sendo agitada sob arrefecimento com gelo, foram adicionados 9,6 mg (59 micromoles) de DEPC e 8 μΐ de trietilamina, e a mistura resultante foi deixada como tal durante a noite, com agitação. A mistura reaccional foi diluída com diclorometano, lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e então seca. O solvente foi removido por filtração para se obterem 23,0 mg de resíduo. Este resíduo foi purificado por cromatografia numa coluna Sephadex LH-20 [eluente: hexano-metanol-diclorometano (4:5:15)]. Deste modo foram obtidos 18,8 mg do desejado composto 11-A (ou seja, o composto 11 em que B é um grupo fenilo), sob a forma de um material ceroso sem cor (com um rendimento de 68,6%).

[a]25D = -61,0° (c=0,39, MeOH) Ή-RMN (CDClj, δ): 0,7-1,1 (m), 1,21 (3H, d, J= 7,0Hz), 1,5-2,2 (m), 2,38 (3H, s), 2,83 (2H, t, J= 7,0Hz), 3,01 (3H, s), 3,32 (3H. s), 3,36 (3H, s), 3,2-3,6 (m), 3,84 (1H, dd, J= 9,2Hz, 7,0Hz), 6,3-6,6 (m), 7.23 (5H, s), 7,7-8,1 (1H, m).

Os compostos dos Exemplos 4-6 foram obtidos fazendo reagir o composto 10 com derivados da fenetilamina, do mesmo modo descrito no Exemplo 3.

84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ 19

Exemplo 4

Foi obtido ο composto l L-B (i.e. o composto 11 onde B é um grupo 2-fluorofenilo) sob a forma de um material ceroso (com um rendimento de 73,0%).

[afD = -61,7° (c=0,326, MeOH) Ή-RMN (CDC1-., δ): 0,7-1,1 (m), 1,21 (3H, d. .1= 7,1Hz), 1,5-2,3 (m), 2,33 (3H, s), 2,3-2.6 (m), 2.88 (2H, t, J= 7,3Hz), 3.01 (3H, s), 3,32 (3H, s), 3,37 (3H, s), 3,2-3,7 (m), 3,84 (1H, dd, J= 8,0Hz, 2,5Hz), 3,9-4,2 (br), 4,5-4,9 (1H, m), 6,4-6.6 (1H, m), 6,8-7,3 (4H, m), 7,6-8,1 (1H, m).

Exemplo 5

Foi obtido o composto 11-C (i.e. o composto 11 onde B é um grupo 3-fluorofenilo), sob a forma de um pó amorfo (com um rendimento de 70,9%).

[a]28D = -56,7° (c=0,287, MeOH)

2.3- (1H Ή-RMN (CDC1„ ô): 0,7-1,1 (m), 1,22 (3H, d, J= 7,0Hz), 1,5-2,2 (m), 2,34 (3H, s), 2.7 (m), 2,84 (2H, t, J= 6,8Hz), 3,02 (3H, s), 3,32 (3H, s), 3,36 (3H, s), 3,3-3,6 (m), 3,83 , dd, J= 8,4Hz, 2,2Hz), 3,9-4,3 (m), 4,5-4,9 (m), 6,5-6,7 (1H, m), 6,8-7,2 (4H, m), 7,7-8,1 (1H. m).

Exemplo 6

Foi obtido o composto 11-D (i.e. o composto 11 onde B é um grupo 4-fluorofenilo), sob a forma de um pó amorfo (com um rendimento de 72,7%).

[α]28α = -55,9° (c=0,285, MeOH) Ή-RMN (CDClj, δ): 0,7-1,1 (m), 1,22 (3H, d, J= 7,3Hz), 1,5-2,2 (m), 2,34 (3H, s largo), 2,80 (2H, t, J= 7,0Hz), 3,01 (3H, s), 3,32 (3H, s), 3,36 (3H, s), 3,2-3,6 (m), 3,75-3,95 (1H, m), 3,95-4,3 (m), 4,5-4,9 (m), 6,4-6,6 (1H, m), 6,8-7,2 (4H, m).

Exemplo 7 0,4 ml de ácido trifluoroacético a 50%/diclorometano foram adicionados a 14,8 mg (32 micromoles) do composto 8 sob arrefecimento com gelo. Esta mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas e então evaporada até à secura borbulhando azoto

84 975 ΕΡ0 831 100/ΡΤ 20 gasoso. Por outro lado, 14,3 mg (30 micromoles) do composto 12-A (i.e. o composto 12 em que Y é um átomo de hidrogénio) foram tratados com 0,4 ml de ácido trifluoroacético a 50%/diclorometano, do mesmo modo descrito anteriormente. Depois, esta mistura foi evaporada até à secura. Após ambos estes resíduos terem sido combinados e dissolvidos em 1 ml de DMF, foram adicionados 85 μΐ de trietilamina sob arrefecimento com gelo, e a mistura resultante foi evaporada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido novamente em 0,4 ml de DMF. Ao mesmo tempo que esta solução foi sendo agitada sob arrefecimento com gelo, foram adicionados 6,7 mg (41 micromoles) de DEPC e 10 μ1 (72 micromoles) de trietilamina, e a mistura resultante foi deixada como tal durante a noite, com agitação. A mistura reaccional foi evaporada até à secura sob pressão reduzida. Após o resíduo ter sido dissolvido em diclorometano, esta solução foi lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e uma salmoura saturada, e então seca. Após o solvente ter sido removido por filtração, o resíduo resultante foi purificado por TLC preparativa [solvente de revelação: diclorometano-metanol (10:1)]. Deste modo foram obtidos 14,5 mg do composto desejado 13-A {i.e. o composto 13 em que Y é um átomo de hidrogénio) sob a forma de um pó branco (com um rendimento de 62,0%).

[afD = -92,4° (c=0,218, MeOH) Ή-RMN (CDClj, ô): 0,7-1,2 (m), 1,22 (3H. d, J= 7,0Hz), 1,5-2,0 (m), 2,35 (3H, s), 3.01 (3H, s), 3,33 (3H, s), 3,36 (3H, s), 3,89 (1H. dd. J= 7,0Hz, 2,2Hz), 4,0-4,3 (1H, m), 4,66 (1H, dd, J= 7,9Hz, 6,6Hz), 5,5-5.7 (1H, m), 7,21 (5H, s), 7,73 (1H, d, J= 3,3Hz).

Exemplo 8 O composto 8 foi feito reagir com o composto 12-B {i.e. o composto 12 em que Y é um grupo metoxicarbonilo), do mesmo modo descrito no Exemplo 9. Deste modo, foi obtido o composto 13-B {i.e. o composto 13 em que Y é um grupo metoxicarbonilo) sob a forma de um sólido amorfo (com um rendimento de 78,2%).

[a]D = n.d. Ή-RMN (CDC13, ô): 0,7-1,1 (m), 1,11 (3H, d, J= 7,0Hz), 1,5-2,1 (m), 2,35 (3H, s), 3.02 (3H, s), 3,32 (3H, s), 3,33 (3H, s), 3,95 (3H, s), 3,8-4,3 (m), 4,70 (1H, dd, J= 7,5Hz, 6,8Hz), 5,4-5,8 (1H, m), 7,23 (5H, s), 8,05 (1H, s). 21 84 975 ΕΡ Ο 831 100/ΡΤ

Exemplo 9

Uma solução aquosa a 70% de etilamina foi adicionada a 38,7 mg (47 micromoles) do composto 13-B, sob arrefecimento com gelo. Após a dissolução se ter completado, a mistura resultante foi deixada durante a noite à temperatura ambiente e então evaporada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por TLC preparativa [solvente de evolução: diclorometano-metanol (10:1)] e então por cromatografia em coluna Sephadex LH-20 usando como eluente hexano-metanol-diclorometano (4:5:15). Deste modo foi obtido 34,8 mg do composto desejado 13-C (ou seja, o composto 13 em que Y é um grupo N-etilcarbamoílo) sob a forma de um sólido amorfo (com um rendimento de 88,5%).

[cc]2Sd -81,4o (c=0,309, MeOH) Ή-RMN (CDClj, δ): 0,7-1,1 (m), 1.11 (3H. d, J=7,3 Hz), 1,26 (3H, t, J=7,3 Hz), 1,5-2,2 (m), 2,36 (3H, s), 3,02 (3H, s), 3,33 (6H, s), 3,2-3,7 (m), 3,8-4,0 (1H, br. dd), 4,0-4,3 (m), 4,69 (1H, dd, J = 8,8 Hz, 6,8 Hz), 5,3-5.7 (1H, m), 7,24 (5H. s), 7,95 (1H, s).

Lisboa, "6. UCV. WUU

Por TEIKOKU HORMONE MFG. CO„ LTD. - O AGENTE OFICIAL -

Claims

REIVINDICAÇÕES ,% 1 - Derivado de péptido de fórmula n

0 ou um sal deste, em que: (a) Q, representa um grupo l-dimetilamino-2-metilpropilo e Q, representa um grupo (R)- ou (S)-2-hidroxi-2-feniletilamino, ou (b) Q, representa um grupo l-metil-2-pirrolidiniIo e Q: representa -ΝΉ-CH-CH, -B A em que A é um átomo de hidrogénio ou

em que Y é um átomo de hidrogénio ou -COR,, e R, é um grupo hidroxilo, um grupo alcoxi de não mais do que 6 átomos de carbono, um grupo benziloxi, um grupo fenetiloxi ou

em que R, e R3 podem ser os mesmos ou diferentes, e cada um é um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo de não mais do que 6 átomos de carbono, um grupo fenilo, ou um grupo

84 975

ΕΡ Ο 831 100 2/3 ^eterocíclico de quatro a sete membros contendo um ou dois heteroátomos seleccionados de !*jp S\0 e N, ou R: e R3, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ligados, podem formar um grupo heterocíclico de quatro a sete membros que pode ainda conter um heteroátomo seleccionado de S, O e N, e B é um grupo fenilo que pode opcionalmente ser substituído com um átomo de halogéneo, um grupo hidroxilo, um grupo alquilo de não mais do que 6 átomos de carbono, ou um grupo alcoxi de não mais do que 6 átomos de carbono.
2 - Derivado de péptido ou um sal deste, de acordo com a reivindicação 1, em que Q, representa um grupo l-metil-2-pirrolidinilo e Q2 representa -NH-CH-CH: -B i ! A em que A é um átomo de hidrogénio e B é um grupo fenilo que pode opcionalmente ser substituído com um átomo de halogéneo.
3 - Derivado de péptido ou um sal deste, de acordo com a reivindicação 2, em que o átomo de halogéneo é um átomo de flúor.
4 - Derivado de péptido ou um sal deste, de acordo com a reivindicação 1, em que Q, representa um grupo l-metil-2-pirrolidinilo e Q; representa -NH-CH-CH, -B I A em que A é um grupo 2-tiazolilo que pode opcionalmente ser substituído por um grupo N-(alquilo de não mais do que 6 átomos de carbonojcarbamoílo e B é um grupo fenilo não-substituído.
5 - Medicamento contendo um derivado de péptido ou um sal deste, de acordo com a reivindicação 1.
6 - Agente anti-tumoral contendo um derivado de péptido ou um sal deste, de acordo com a reivindicação 1. i

84 975 EPO 831 100 3/3
7 - Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um derivado de péptido ou um sal deste, de acordo com a reivindicação 1, e um aditivo farmaceuticamente aceitável.
8 - Utilização de um derivado de péptido ou um sal deste, de acordo com a reivindicação 1, para a produção de um medicamento para o tratamento de um tumor num paciente. Lisboa, -6. l:C'f 2íLu Por TEIKOKU HORMONE MFG. CO., LTD.