PT819687E - Compostos de benzotiofeno e seus usos e formulacoes - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS DE BENZOTIOFENO E SEUS USOS E FORMULAÇÕES " O sistema fibrinolítico desempenha um papel fundamental na manutenção do equilíbrio hemostático normal. Um factor crítico neste sistema é o activador-inibidor I do plasminogénio (PAI-1), que reduz a capacidade endógena de remover a fibrina pela inibição dos activadores do plasminogénio como o activador do plasminogénio do tipo tecido (tPA). Estudos documentaram que os aumentos de PAI-1 estão associados a maior risco de trombose venosa profunda. Além disso, os aumentos em PAI-1 são encontrados em pacientes que sofrem de enfarte do miocárdio e septicémia. Como a menor capacidade fibrinolítica está associada a um maior risco cardiovascular, baixar o PAI-1 deveria resultar em protecção cardíaca. Com efeito, estudos recentes sobre a análise de níveis de PAI-1 em mulheres pré e pós-menopáusicas no "Framingham Offspring Study" demonstraram que as mulheres pós-menopáusicas têm níveis de PAI-1 marcadamente mais elevados, que podem ser reduzidos até níveis pré-menopáusicos com uma terapia de estrogénios. Crê-se que esta redução no efeito do PAI-1 contribui para o efeito global da terapia de substituição dos estrogénios sobre o risco reduzido das doenças cardíacas.

Enquanto o PAI-1 pode ser produzido numa variedade de tecidos, podem ser segregados níveis substanciais pela célula endotelial vascular. O endotélio vascular constitui um órgão principal que influi na regulação da coagulação sanguínea, na inflamação e na troca de fluidos e de mediadores entre o compartimento intravascular e os tecidos do parênquima. Como tal, a própria função do endotélio é critica para a homeostase global. Como o PAI-1 pode ser aumentado nas células endoteliais em resposta a certos estímulos, incluindo as cilociuas, contribui para um estado disfuncional que pode resultar cm defeitos de coagulação, em inflamação vascular local e sistémica, e no potenciamento da disseminação e na ruptura da placa aterosclerótica. Estes efeitos podem ainda resultar em condições que incluem o enfarte do miocárdio, trombose venosa profunda e trombose intravascular disseminada.

Porque o controlo localizado do PAI-1 na junção da célula endotelial/plasma pode desempenhar um papel fundamental em muitos processos patológicos, os agentes que inibem a expressão de PAI-1 no endotélio podiam ser úteis para tratar ou evitar condições como septicémia, feridas que impliquem sérios danos dos tecidos e trauma, síndroma de resposta inflamatória sistémica, síndroma da septicémia, choque séptico e síndroma da disfunção orgânica múltipla (incluindo DIC) bem como o enfarte do miocárdio, trombose venosa profunda, trombose intravascular disseminada, ruptura da placa aterosclerótica e suas sequelas associadas.

Além disso, o tPA (Activador do Plasminogénio dos tecidos) é actualmente administrado a pacientes que sofreram condições que os colocam em risco de acontecimentos trombóticos prejudiciais. Demonstrou-se que o tPA administrado exogenamente era eficaz e está disponível no comércio para o tratamento desses pacientes. Contudo, a eficácia desta terapia pode ser limitada porque o PAI-1 inibe o tPA administrado exogenamente bem como o tPA derivado endogenamente. Portanto, seria de grande valor se existisse um agente que pudesse quer prolongar a meia-vida quer reduzir a quantidade de tPA administrado exogenamente.

Além disso, devido ao papel crítico da fíbrina na biologia das células tumorais, os agentes que modulam o PAI-1 podem ser usados como agentes anti-metastásicos.

Certos compostos de 6-benzotiofeno substituído são revelados na patente francesa 2329271 e nas publicações das patentes europeias 62503 e 641791.

Esta invenção fornece compostos de fórmula 1

onde Rj, R2 e R3 são, independentemente, -OH, -OCO(CrC6 alquil), -0(C0)0(CrC6 alquil), -OCO-Ar, onde Ar é fenilo ou fenilo substituído, ou-0(C0)0-fenil; e R4 é N-pirrolidinilo, N-piperidinilo, ou N-hexametileno-imino; ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.

Também, incluídos no âmbito da presente invenção estão os compostos de fórmula II, que são úteis na síntese dos compostos de fórmula I:

onde R5 e Ré são, independentemente, CrC6 alquilo.

Além disso, os compostos de fórmula IV são fornecidos para a síntese dos compostos de fórmula I.

onde R4, R5 e R$ têm os significados atribuídos anteriormente. A presente invenção refere-se ao uso dos compostos de fórmula I para o fabrico de um medicamento para inibir o PAI-1. A presente invenção refere-se também a formulações farmacêuticas contendo compostos de fórmula I. A corrente invenção diz respeito à descoberta de um grupo seleccionado de novos 2-fenil-3-aroíl-benzo[b]tiofenos, os de fórmula I, e seu uso para inibir o PAI-1. Os métodos utilizáveis nesta invenção são postos em prática pela administração, a um ser humano que dela necessite, de uma dose de um composto de fórmula I, ou de um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável, que seja eficaz para inibir o PAI-1 ou uma condição fisiológica associada a um excesso de actividade, ou actividade indesejável, do mesmo. O termo "inibir" abrange o seu significado geralmente aceite que inclui proibir, evitar, restringir e retardar, parar ou reverter a progressão, severidade ou melhoria dc um sintoma ou efeito resultantes.

Os termos gerais usados na descrição dos compostos aqui descritos exibem o seu significado habitual. Por exemplo, "Cj-Cô alquilo" refere-se a cadeias alifáticas lineares ou ramificadas de 1 a 6 átomos de carbono incluindo 4 4 -5-

metilo, ctilo, propilo, iso-propilo, n-butilo, pentilo, iso-pcntilo, hexilo, c afins. O termo "fenilo substituído" refere-se a um grupo fenilo tendo um ou mais substituintes seleccionados a partir do grupo consistindo em C1-C4 alquilo, C1-C3 alcoxi, hidroxi, nitro, cloro, fluoro, ou tri(cloro ou fluoro)metilo. "C1-C3 alcoxi" refere-se a um grupo C1-C3 alquilo ligado através de uma ponte de oxigénio como metoxi, etoxi, n-propoxi, iso-propoxi.

Os compostos da fórmúla I incluem o seguinte:

Di-hidrato de [4,6-di-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-[2-( 1 -pirrolidinil)etoxi] fenil]metanona.

Di-hidrato de [4,6-di-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-[2-( 1 -hexametileno)etoxi]fenil]metanona.

Di-hidrato de [4,6-di-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi] fenil]metanona.

Di-hidrato de [4,6-diacetoxi-2-(4-acetoxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]metanona.

Hidrocloreto de [4-hidroxi,6-acetoxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]ti-en-3-il] [4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]metanona.

[4,6-di-hidroxi-2-(4-acetoxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-[2-(l-piperi- dinil)etoxi]fenil]metanona.

Di-hidrato de [4,6-di-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]metanona. Λ -6- /Ο

ί-4

Hidrocloreto de [4,6-dibenzoíloxi-2-(4-benzoíloxifenil)benzo[b]ti-en-3-il] [4-[2-( 1 -pirrolidinil)etoxi]fenil]metanona.

Hidrocloreto de |4,6-dipentanoíloxi-2-(4-pentanoíloxifenil)ben-zo[b]tien-3-il] [4- [2-( 1 -hexametilenoimino)etoxi]fenil]metanona.

Hidrocloreto de [4,6-dibenziloxiformiloxi-2-(4-hidroxifenil)ben-zo[b]tien-3-il] [4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]metanona.

[4,6-dietiloxiformiloxi-2-(4-etiloxiformiloxifenil)benzo[b]tien-3- il][4-[2-(l-pirrolidinil)etoxi]fenil]metanona.

Hidrocloreto de [4,6-di-(4-metoxibenzoíloxi)-2-(4-metoxibenzoílo-xi)benzo[b]tien-3-il] [4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]metanona.

Di-hidrato de [4,6-di-2-propanoíloxi-2-(4-2-propanoíloxifenil)ben-zo[b]tien-3-il][4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]metanona.

Citrato de [4,6-di-hidroxi-2-(4-benzoíloxifenil)benzo[b]tien-3-il][4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fenil]metanona.

Um modelo de realização preferido desta invenção é o di-hidrato de [4,6-di-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il] [4-[2-( 1 -piperidinil)etoxi]fe-niljmetanona.

Os compostos de fórmula I são derivados da estrutura benzo[b]tio-feno que é nomeada e numerada de acordo com o "Ring Index, The American Chemical Society”, como segue:

O esquema I ilustra um método para preparar compostos de fórmula V:

Esquema I

(Ci-C6 alquilo ) O

(Ci-Cg alquilo JO (Π) o Γ* ‘Rs

0CH2CH2R4 ' r

m 0((^-Cg alquilo) “-Q. (C 1-Cg alquilo )0 9|

(Ci-Cealquilo)O

O^Ct-Ce alquilo ) (V) 0 4,6-dialcoxi benzo[b]tiofeno como o seu derivado 2-dialquil-amino (fórmula II) onde R5 e são, independentemente, CrC6 alquilo, é preparado pela ciclização de 2-(2,4-dialquilfenil)-2-hidroxi-N,N-dialquil-tioace-tamida com um catalisador de ácido forte, como o ácido metanossulfónico, a temperatura ambiente ou elevada, aproximadamente 25° a 150° C, num solvente inerte, como dicloroetano ou afim. Esta reacção é exemplificada na Preparação 2. A tioacetamida pode ser preparada a partir da condensação de 2,4-dialcoxibenzaldeído com Ν,Ν-dialquiltioformato, sendo preferido o N,N-dimetiltioformato, e o di-isopropilameto de lítio (LDA) a baixa temperatura, aproximadamente -80° a -50°C, e num solvente inerte como hexano. Esta reacção é exemplificada na Preparação 1. A função 3-aroílo apresentando a cadeia lateral contendo azoto é introduzida numa molécula intermediária (fórmula IV) pela reacção de 2-(2,4-dialcoxifenil)-2-hidroxi-N,N-dialquiltioacetamida com um composto de fórmula III a temperatura elevada (50° a 150°C) num solvente apropriado como tolueno, clorobenzeno, ou afins. A porção que activa o carbonilo do composto ΙΠ, (X), pode ser cloro, bromo, um anidrido misto ou afins. A porção preferida de actividade carbonilo é cloro. Os compostos de fórmula ΙΠ podem ser facilmente preparados por métodos conhecidos na técnica como na Pat. US No. 4.133.814, aqui incorporada como referência. Um exemplo desta síntese está ilustrado na Preparação 3. O derivado 2-fenilalcoxi (fórmula V) é preparado a partir de um -9- &

composto de fórmula IV por reacção com brometo de 4-alcoxifenilmagnésio (reagente de Grignard) num solvente inerte como THF, éter, ou CH2CI2, a uma temperatura na gama de 0o a 50°C. Uma ilustração desta reacção é dada na Preparação 4.

Um composto de fórmula Ia:

pode ser preparado desprotegendo (desalcoxilando) um composto de fórmula V. Esses métodos de desprotecção são ensinados na Pat. US atrás referida, ou ilustrada no Exemplo 1, que se segue.

Os compostos de fórmula I podem também ser preparados por variações de outras vias (ver: Jones, C.D., et al., J. Med. Chem., 1984, 27, p. 1057), sendo essas vias e as modificações apropriadas, óbvias e conhecidas dos especialistas medianamente versados na técnica da química orgânica.

Uma via sintética alternativa está ilustrada no Esquema II que se segue. -10- h

Esquema Π

VIII (Ci-Çg alquilo )0 r(CfC^ alquilo )0

OfCj-Cç alquilo)

Esta sequência de reacção começa com a S-alquilação de um tiofenol (VI) com um brometo de fenacilo sustituído (VII)· Os substratos preferidos para estas reacções seriam os compostos onde (Ci-C6 alquil)0 é CH3O-. Esta reacção decorre na presença de uma base forte como K2CO3, Na2C03, e afins, em solventes inertes como THF, DMF, éter, etc. Embora a reacção prossiga a uma variedade de temperaturas (25° a 125°C), as temperaturas mais elevadas diminuem o tempo até se completar a reacção. Uma temperatura preferida seria a temperatura de refluxo de um solvente preferido como DMF. A reação completa-se, geralmente, dentro de uma a seis horas. O ariltioéter (VIII) é convertido no benzo[bjliofeno (IX) por um rearranjo térmico catalisado por ácido. Esta reacção é usualmente efectuada num solvente de elevado ponto de ebulição, como éter difenílico, halobenzeno, xile-nos, etc., sendo o preferido xileno. O ácido forte pode ser ácido toluenossul-fónico, ácido sulfurico, etc., sendo o preferido o ácido poli-fosfórico. A reacção é efectuada a cerca de 120°C e completa-se dentro de seis a dezoito horas.

Os compostos de fórmula IX podem ser acilados na posição 3 do núcleo do benzotiofeno com porções de um carboxilo activado de um composto de fórmula III sob condições padrão de Friedel-Crafts. Em geral, as condições de acilação seriam o uso de um ácido Lewis como AICI3, BF3, e afins, num solvente apropriado como um hidrocarboneto halogenado, a temperaturas de 0-100°C. As porções de carboxilo activado dos compostos de fórmula III são haletos de acilo, anidridos mistos e afins, sendo o preferido o cloreto de ácido. Esta acilação produz os compostos de fórmula V.

Outros compostos preferidos de fórmula I são preparados pela substituição das porções hidroxi na posição 6, 4 e/ou -4', quando presentes, com uma porção da fórmula -0-C0-(Ci-C6 alquil) por meio de processos bem conhecidos. Ver, por exemplo, a Pat. U.S. No. 4358.593, aqui incorporada como referência.

Por exemplo, quando se deseja um grupo -0-C0-(Ci-C6 alquil), faz-se reagir um composto mono-, di- ou tri-hidroxi de fórmula I com um agente como cloreto, brometo, cianeto ou azeto de acilo, ou com um anidrido ou anidrido misto apropriado. As reacções são convenientemente efectuadas num solvente básico como piridina, lutidina, quinolina ou isoquinolina, ou num solvente de amina terciária como a trietilamina, tributilamina, metilpiperidina e afins. A reacção também pode ser efectuada num solvente inerte como acetato de U -12-

,.Α , v^··- etilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, doxano, dimetoxietano, acetonitrilo, acetona, metil-etil-cetona e afins, aos quais foi adicionado pelo menos um equivalente de um eliminador de ácido (excepto como a seguir indicado), tal como uma amina terciária. Se se desejar, podem ser usados catalisadores de acilação como 4-dimetilaminopiridina ou 4-pirrolidinopiridina. Ver, por exemplo, Haslam, et al.. Tetrahedron, 36:2409-2433 (1980).

As presentes reacções são efectuadas a temperaturas moderadas, na gama de cerca de -25°C até cerca de 100°C, frequentemente sob uma atmosfera inerte como gás azoto. Contudo, a temperatura ambiente é usualmente adequada para que a reacção se processe. A acilação de um grupo hidroxi na posição 6, -4 e/ou -4' também pode ser efectuada por reacções catalisadas por ácido dos apropriados ácidos carboxílicos em solventes orgânicos inertes. São usados catalisadores de ácido como ácido sulfurico, ácido polifosfórico, ácido metanossulfónico e afins.

Os grupos Rj, R2 e/ou R3 de compostos de fórmula I atrás referidos também podem ser produzidos pela formação de um éster activo do ácido apropriado, como os ésteres formados por reagentes conhecidos como diciclo-hexilcarbodiimida (DCC), acilimidazoles, nitrofenóis, pentaclorofenol, N-hidroxi-succinimida e 1-hidroxibenzotriazole. Ver, por exemplo, Buli Chem. Soc. Japan, 38:1979 (1965), e Chem. Ber., 788 e 2024 (1970).

Cada uma das técnicas acima que produzem porções -0-C0-(Ci-C6 alquil) são processadas em solventes como atrás referimos. Claro que essas técnicas, que não produzem um produto ácido no decorrer da reacção, não exigem o uso de um eliminador de ácido na mistura de reacção. São conhecidos na técnica outros métodos relacionados com a protecção e desprotecção das funções hidroxilo (ver: por exemplo, J.W. Barton, "Protective Groups in Organic Chemistry"; J.G. W McOmie (ed.), Plenum Press, New York, NY, 1973, Capítulo 2 e T.W. Green, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, New York, NY, 1981, Capítulo 7). Outros exemplos da derivatização dos fenóis estão ilustrados na Pat. US No. 5.393.763 que é aqui incorporada como referência.

Preparação 1 N.N-Dimetil-2-f2.4-dimetoxifeniB-2-hidroxitioacetamida

Gerou-se 110 mL de uma solução de di-isopropilameto de lítio (LDA) (80 mmol) a partir de uma solução de hexano 1,6 M de n-butil-lítio (50 mL, 80 mmol) e di-isopropilamina (11,2 mL, 80 mmol) a -10°C e, então, arrefeceu-se até - 78°C. Arrefeceram-se 50 mL de uma solução de 2,4-dimetoxibenzaldeído (12 g, 72 mmol) e N,N-dimetiltioformamida (6,8 mL, 80 mmol) até 0°C e foram adicionados à solução de LDA a -78°C a uma velocidade tal que mantenha a temperatura inferior a -70°C. A mistura de reacção foi agitada a -75°C durante 2,5 horas, deixou-se aquecer até 0°C, temperou-se com NH4CI aquoso saturado e extraído com EtOAc três vezes. Os extractos de EtOAc foram combinados, lavados com salmoura, secos (Na2S04), concentrados, triturados com Et20/éter de pet., filtrados, e secos in vácuo para produzir 8,4 g (46% de rendimento) de produto: pf 139-140 °C; 1H NMR (CDCI3) d 3,05 (s, 3H, NCH3), 3,50 (s, 3H, NCH3), 3,80 (s, 3H, OCH3), 3,89 (s, 3H, OCH3), 5,19-5,21 (d, 1H, J = 7 Hz, OH), 5,72-5,74 (d, 1H, J= 7 Hz, CH), 6,43-6,47 (m, 2H, ArH), 7,24(s, 1H, ArH); MS (FD) 255(M+). Anal. Cale. para C12H17N03S: C, 56,45; H,6,71; N, 5,49. Encontrado: C, 56,64; H, 6,49; N, 5,59.

Preparação 2 2-N.N-Dimetilamino-4-6-dimetoxibenzotiofeno

Porção a porção, adicionou-se ácido metanossulfónico (2,8 mL, 20 mmol) a 150 mL uma solução de CH2C12 de N,N-dimetil-2-(4,6-dimetoxifenil)-2-hidroxitioacetamida (2,5 g, 10 mmol) e foi agitado a temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura de reacção foi vertida para dentro de NaHC03 aquoso saturado/gelo, extraído com CH2C12, os extractos de CH2C12 combinados, lavados com salmoura, secos (Na2S04) e concentrados. O produto em bruto foi purificado por cromatografia prep. (gradiente de EtOAc/hexano) para produzir 1,6 g (70% de rendimento) de produto como um óleo claro que solidificou quando em repouso: pf 70-73 °C; ’H NMR (CDC13) 2,97 (s, 6H, NCH3), 3,84 (s, 3H, OCH3), 3,91 (s, 3H, OCH3), 6,09 (s, 1H, ArH), 6,40, (s, 1H, ArH), 6,77 (s, 1H, ArH); MS (FD) 237(M+). Anal. Cale. para C12Hi5N02S: C, 60,73; H, 6,37; N, 5,90. Encontrado: C, 60,80; H, 6,36; N, 5,84.

Preparação 3 r4.6-Dimetoxi-2-fN.N-dimetilamino)benzorbltien-3-in Γ4-Γ2-Π-piperidiniDetoxil fenillmetanona.

Uma mistura do 2-dimetilamino-4,6-metoxibenzotiofeno (2,9 g, 12 mmol) e do hidrocloreto cloreto de 4-[2-(l-piperidinil)etoxi]benzoílo (4 g, 13 mmol) em 200 mL de clorobenzeno foi agitado a 100-105°C durante 20 horas, arrefecido, concentrado, triturado com Et20, filtrado e seco in vacuo para produzir o sal hidrocloreto em bruto como um sólido amarelo. O material foi transformado em lama em NaHC03 aquoso saturado, extraído com CH2C12 por três vezes, os extractos de CH2C12 combinados, lavados com salmoura, secos (Na7S04) e concentrados para produzir 2,7 g (47% de rendimento) de uma goma amarela que foi usada no passo seguinte sem purificação adicional. A espec. de i i

-15- massa e a RMN indicaram que a goma era o produto desejado: *H NMR (CDCI3) 1,44-1,62 (comp, 6H, piperidina), 2,50 (bs, 4H, piperidina), 2,76-2,78 (m, 2H, CH2N), 2,81 (s, 6H, NCH3), 3,41, (s, 3H, OCH3), 3,82 (s, 3H, OCH3), 4,12-4,15 (m, 2H, OCH2), 6,27 (m, 1H, ArH), 6,78 (s, 1H, ArH), 6,86-6,89 (m, 2H, ArH), 7,80-7,82 (m, 2H, ArH); MS (FD) 468(M*).

Preparação 4 f4,6-Dimetoxi-2-í4-metoxifenillbenzorbltien-3-ill Γ4-Γ2-Γ1-piperidiniDetoxilfeninmetanona.

Uma mistura de aparas de magnésio (0,26 g, 10 mmol) e 4-bromoanisole (1,2 mL, 10 mmol) em 10 mL de THF foi agitada e sonicada até o magnésio estar consumido para produzir uma solução de 1 M THF de brometo de 4-metoxifenilmagnésio. Uma solução de 20 mL de THF de 2-dimetilamino-4,6-dimetoxibenzotiofeno (0,7 g, 1,5 mmol) foi agitada a 0°C enquanto a solução de 1 M THF de brometo de 4-metoxifenilmagnésio (10 mL, 10 mmol) foi adicionada porção a porção. O banho de gelo foi removido e a mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 1,5 horas, então re-arrefecida e temperada com água gelada, extraída três vezes com CH2CI2, os extractos de CH2CI2 combinados, lavados com salmoura, secos (Na2S04), concentrados, purificados por cromatografia prep. (gradiente de EtOH/CH2Cl2) e triturados com Et20/ éter de pet., filtrados e secos in vacuo para produzir 0,7 g (88% de rendimento) de produto: pf 108-110°C; 'H NMR (CDC13) 1,44-1,63 (comp, 6H, piperidina), 2,49 (bs, 4H, piperidina), 2,73-2,77 (m, 2H, CH2N), 3,52 (s, 3H, OCH3), 3,75, (s, 3H, OCH3), 3,87 (s, 3H, OCH3), 4,08-4,12 (m, 2H, OCH2), 6,33 (s, 1H, ArH), 6,78-6,88 (m, 4H, ArH), 6,91 (s, 1H, ArH), 7,40-7,43 (m, 2H, ArH), 7,75-7,78 (m, 2H, ArH); MS (FD) 531^+). Anal. Cale. para C31H33N05S: C, 69,99; H, 6,24; N, 2,53. Encontrado: C, 70,03; H, 6,26; N, 2,63.

Exemplo 1

Di-hidrato de r4.6-di-hidroxi-2-('4-hidroxifenil')benzorb1tien-3-ill Γ4- Γ2-Π -piperidiniDetoxil fenillmetanona.

Agitaram-se 20 mL de uma solução de MeOH de 4,6-dimetoxi-2-(4-metoxifenil) benzo[b]tien-3-il ][4-[2-(l-piperidinil)etoxi]fenil]metanona (4,8 g, 9 mmol) a 0°C enquanto se adicionavam 10 mL de MeOH saturado com HC1; então, foi agitado durante 15 min., concentrado, transformado em lama com Et20 e concentrado para produzir o sal hidrocloreto como uma espuma. 50 mL de uma solução de dicloroetano (DCE) do sal HC1 (5 g, 9 mmol) foi agitada a 0°C enquanto uma solução de BCI3/DCE de 5.5M (7 mL, 38 mmol) foi adicionada porção a porção; o frasco foi tapado e a mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura de reacção foi temperada a 0°C com 10 mL de MeOH e foi vertida para dentro de NaHC03 aquoso saturado/gelo, extraída duas vezes com CH2CI2, os extractos CH2C12 combinados, lavados com salmoura, secos (Na2S04), concentrados, purificados por cromatografia prep. (gradiente de EtOH/CH2Cl2), triturado com EtOH/Et20, filtrado e seco in vacuo para produzir 2,9 g (63% de rendimento) de produto como o di-hidrato: pf 151-155°C; *H NMR (CDCI3) 1,31-1,55 (comp, 6H, piperidina), 2,21 (bs, 4H, piperidina), 2,55-2,60 (m, 2H, CH2N), 3,30 (bs, 4H, H20), 4,05-4,11 (m, 2H, OCH2), 6,20 (s, 1H, ArH), 6,65-6,75 (m, 3H, ArH), 6,88-6,94 (m, 2H, ArH), 7,15-7,20 (m, 2H, ArH), 7,55-7,60 (m, 2H, ArH), 9,55 (bs, 1H, ArOH), 9,70 (bs, 2H, ArOH); MS (FD) 489(M+). Anal. Cale. para C28H27N05S · 2 H20: C, 63,98; H, 5,94; N, 2,66. Encontrado: C, 63,49; H, 5,70; N, 2,62.

Os compostos usados nos métodos desta invenção formam sais ácidos farmaceuticamente aceitáveis com uma grande variedade de ácidos orgânicos e inorgânicos e incluem os sais fisiologicamente aceitáveis que são frequentemente usados em química farmacêutica. Esses sais também fazem parte t -17- 7 ê desta invenção. Entre os ácidos inorgânicos típicos usados para formar esses sais incluem-se clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, sulfurico, fosfórico, hipo-fosfórico e afins. Os sais derivados de ácidos orgânicos, tais como ácidos alifáticos mono e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos fenil-substituídos, ácidos hidroxialcanóicos e hidroxialcanodióicos, ácidos aromáticos, ácidos alifático- e aromático-sulfónicos também podem ser usados. Esses sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, portanto, acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxi-benzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftaleno-2-benzoato, brometo, sobutirato, fenilbutirato, β-hidroxibutirato, butino-l,4-dioato, hexino-l,4-dioato, caprato, caprilato, cloreto, cinamato, citrato, formato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, teraftalato, fosfato, mono-hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bissulfato, pirossulfato, sulfito, bissulfito, sulfonato, benzenossulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobenzenossulfonato, etanossulfonato, 2-hidroxieta-nossulfonato, metanossulfonato, naftaleno-1 -sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, p-toluenossulfonato, xilenossulfonato, tartarato e afins. Um sal preferido é o sal hidrocloreto.

Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis são tipicamente formados pela reacção de um composto de fórmula I com uma quantidade equimolar ou em excesso de ácido. Os reagentes são geralmente combinados num solvente mútuo como éter dietílico ou benzeno. O sal precipita normalmente a partir da solução dentro de cerca de uma hora até 10 dias e pode ser isolado por filtração ou o solvente pode ser retirado por meios convencionais.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis têm, em geral, características de solubilidade potenciadas comparadas com o composto a partir do qual derivam e, assim, são muitas vezes mais acessíveis a formulação como líquidos ou emulsões.

As formulações farmacêuticas podem ser preparadas por processos conhecidos na técnica. Por exemplo, os compostos podem ser formulados com excipi entes comuns, diluentes, ou suportes, e formados em comprimidos, cápsulas, suspensões, pós e afins. Exemplos de excipientes, diluentes e suportes que são adequados para essas formulações incluem os seguintes: agentes de enchimento e de extensão como amido, açúcares, manitol e derivados silícicos; agentes de ligação como carboximetil-celulose e outros derivados de celulose, alginatos, gelatina, e polivinil-pirrolidona; agentes de humidificação tais como glicerol; agentes de desintegração como carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio; agentes para retardar a dissolução como parafina; aceleradores de absorção tais como compostos de amónio quaternário; agentes tensioactivos como álcool cetílico, mono-estearato de glicerol; suportes adsorventes como caulino e bentonite; e lubrificantes como talco, cálcio e estearato de magnésio e glicóis polietílicos sólidos.

Os compostos podem também ser formulados como elixires ou soluções para conveniente administração oral ou como soluções apropriadas para administração parentérica, por exemplo, por vias intramusculares, subcutâneas ou intravenosas. Adicionalmente, os compostos são bem adequados a formulação como formas de doseamento de libertação sustentada e afins. As formulações podem ser constituídas de maneira a libertarem apenas o ingrediente activo ou, preferivelmente, numa porção particular do tracto intestinal, possivelmente durante algum tempo. Os revestimentos, envelopes e matrizes protectoras podem ser feitas, por exemplo, a partir de substâncias poliméricas ou ceras. O doseamento particular de um composto de fórmula I necessário para inibir o PAI-1, ou qualquer outro uso aqui revelado e de acordo com esta 4

invenção dependerá da severidade da condição, da via de administração e dc factores relacionados que serão decididos pelo médico assistente. Geralmente, as doses diárias aceites e eficazes serão entre cerca de 0,1 e cerca de 1.000 mg/dia e, mais tipicamente, entre cerca de 50 e cerca de 200 mg/dia. Essas doses serão administradas a um sujeito que delas necessite, de uma a cerca de três vezes todos os dias ou, mais frequentemente, como necessário para inibir eficazmente o PAI-1, ou qualquer outro uso aqui revelado.

Formulações

Nas formulações que se seguem, "ingrediente activo" significa um composto de fórmula I.

Formulação 1: Cápsulas de gelatina São preparadas cápsulas de gelatina dura usando o seguinte:

Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 0,1 -1000 Amido, NF 0 - 650 Pó fluível de amido 0 - 650 Fluído de silicone de 350 centistokes 0 - 15

Os ingredientes são misturados, passados por um crivo de malha U.S. No. 45, e introduzidos em cápsulas de gelatina dura.

As formulações específicas atrás referidas podem ser modificadas de acordo com as variações razoáveis fornecidas. -20- -20- Λ íl /r\& /<3 ν

Uma formulação dc comprimido c preparada usando os ingredientes que se seguem:

Formulação 2: Comprimidos

Ingrediente Quantidade (mg/comprimido) Ingrediente activo 0,1 -1000 Celulose, microcristalina 0 - 650 Dióxido de silício, micronizado 0 - 650 Acido de estearato 0 - 15 Os componentes comprimidos. são misturados e compactados para formar Altemativamente, comprimidos contendo, cada, 0,1-1000 mg de ingrediente activo são feitos como segue: Formulação 3: ComDiimidos Ingrediente Quantidade (mg/comprimido) Ingrediente activo 0,1 - 1000 Amido 45 Celulose, microcristalina 35 Polivinilpirrolidona (como solução a 10% em água) 4 Carboximetil-celulose de sódio 4,5 Estearato de magnésio 0,5 Talco 1 O ingrediente activo, amido, e celulose são passados através de um crivo de malha U.S. No. 45 e completamente misturados. A solução de polivinilpirrolidona é misturada com os pós resultantes que são então passados por um cnvo de malha U.S. No. 14. Os grânulos assim produzidos são secos a 50°-60°C e passados através de um crivo de malha U.S. No. 18. O amido carboximetílico de sódio, estearato de magnésio e talco, previamente passado por um crivo de malha U.S. No. 60, são então adicionados aos grânulos que, depois de misturados, são compactados numa máquina de fazer comprimidos para produzir comprimidos.

Suspensões, contendo, cada, 0,1-1000 mg de medicamento por dose de 5 mL são feitas como segue:

Formulação 4: Suspensões

Ingrediente Quantidade (mg/5 ml) Ingrediente activo 0,1 - 1000 mg Carboximetil-celulose de sódio 50 mg Xarope 1,25 mg Solução de ácido benzóico 0,10 mL Aromatizante q.b. Corante q.b. Água purificada até 5 mL O medicamento é passado por um crivo de malha U.S. No. 45 e misturado com a carboximetil-celulose de sódio e xarope para formar uma pasta lisa. A solução de ácido benzóico, aromatizante e corante são diluídos com alguma da água e adicionados com agitação. Adiciona-se, então, água suficiente para produzir o volume necessário.

Para demonstrar a utilidade dos compostos de fórmula I em inibir a PAI-1, foi efectuado o seguinte processo experimental.

Ensaio de PAI-1 de células endoteliais

Prepararam-se placas de 96 cavidades para cultura de tecidos com lxlO4 células endoteliais humanas (HUVEC) por cavidade em Meio de Crescimento de Células Endoteliais (EGM) da Clonetics suplementada com 2% de FBS. No seguimento da incubação durante a noite a 37°C, o meio foi substituído por meio isento de soro (meio DMEM/F-12, 20 mM-HEPES, pH 7,5, 50 pg/ml de gentamicina, 1 pg/ml de transferrina humana e 1 pg/ml de insulina bovina) com ou sem composto 1, (onde Rj, R2 e R3 são hidroxi, e R4 é piperidinil), e com ou sem 1 nM IL-l-beta. Seguindo-se a incubação durante a noite a 37°C, amostras de meio de cultura foram ensaiadas para o PAI-1 segregado usando o Plasma Imubind PAI-1 ELISA (American Diagnostic Inc. #822/1S).

Resultados Células endoteliais da veia umbilical dos seres humanos (HUVEC) foram tratadas com o composto 1 (Exemplo I) concorrente à indução de PAI-1 com IL-1. Em experiências iniciais com vários lotes de células obtidos a partir de um fornecedor comercial (Clonetics), descobrimos que nem todos os lotes respondiam ao estradiol 17-beta e, por isso, não foram usados em experiências para determinar o efeito do composto 1 sobre a secreção PAI-1. Tal como apresentado no Quadro 1, usando uma linha de resposta ao estrogénio, observámos que o Composto 1 reduziu significativamente a indução de PAI-1 por IL-1 a uma concentração de 1 nM. Estes dados demonstram que o composto 1 é φ < -23-um potente inibiilor da indução de PAI-1 a partir das células endoteliais activadas e deveria resultar num efeito cardioprotector, isto é, redução na incidência de ocorrências cardiovasculares, devidas à potenciação do potencial fibrinolítico. Além disso, o efeito positivo do composto 1 na redução do PAI-1 pode ser útil em situações agudas e crónicas em condições onde níveis elevados são associados a patologia ou podem ser usados para evitar essas condições patológicas.

Quadro 1

Efeito do composto 1 sobre a secreção de PAI-1 a partir de células endoteliais

Tratamento

Indução de PAI-1 % de IL-1 Controlo +/-SE1 2 100 42 +/-9 14 +/-5

ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial

KUA VICTOR COROO N, 14 1200 LISBOA 1 II-1 Controlo

IL-1 & Composto 1 de 1 nM IL-1 & Composto 1 de 10 nM 2 (tratados com fármaco - controlo) / (tratados com II-1- controlo) x 100%

Lisboa, 2 de Abril de 2001

Claims (12)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula I:

   onde Ri, R2 e R3 são, independentemente -OH, -OCO(Ci-C6 alquil), -0(C0)0(Ci-Cô alquil), -OCO-Ar, onde Ar é fenilo ou fenilo tendo um ou mais substituintes seleccionados a partir do grupo consistindo em C1-C4 alquilo, C,-C3 alcoxi, hidroxi, nitro, cloro, fluoro, ou tri(cloro ou fluoro)metilo, ou -0(C0)0-fenil; e R4 é N-pirrolidinilo, N-piperidinilo, ou N-hexametileno-imino; ou um seu sal ou solvato farmaceuticamente aceitável.
2. 2. Um composto de acordo com a Reivindicação 1 que é o di-hidrato de [4,6-di-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzorbltien-3-ill í4-[2-(l-piperidi-nil)etoxi] feniljmetanona.
3. 3. Um composto de fórmula II: -2-

   onde R5 e R<5 são, independentemente, C,-C6 alquilo ou um seu sal ou solvato.
4. 4. Um composto de acordo com a Reivindicação 3 que é o 2-N,N-dimetilamino-4,6-dimetoxibenzo[b]tiofeno.
5. 5. Um composto de fórmula IV:

   onde Rj é N-pirrolidinilo, N-piperidinilo, ou N-hexametileno-imino; e R5 e R^ são, independentemente, Ci-C6 alquilo; ou um seu sal ou solvato.
6. 6. Um composto de acordo com a Reivindicação 5 que é a [4,6-dimetoxi-2-(N,N-dimetilamino)benzo[b]tien-3-il][4-[2-(l-piperidmil)eto-xi] feniljmetanona. -3-
7. 7. Um composto de fónnula I de Reivindicação 1 para inibir o PAI-1 ou uma condição fisiológica a ele associada num ser humano.
8. 8. Um composto de acordo com a Reivindicação 7 que é o di-hidrato de [4,6-di-hidroxi-2-(4-hidroxifenil)benzo[b]tien-3-il] [4-[2-(l-piperidi-nil)etoxi]fenil] metanona.
9. 9. Uma formulação farmacêutica compreendendo um composto de fórmula I de Reivindicação 1 e um ou mais diluentes, excipientes ou suportes.
10. 10. Um composto de fórmula I de Reivindicação 1 para prolongar a acção fisiológica do activador de plasminogénio num ser humano.
11. 11. O uso de um composto de fórmula I de Reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para inibir o PAI-1 ou uma condição fisiológica a ele associada num ser humano.
12. 12. O uso de um composto de fórmula I de Reivindicação 1 para o fabrico de um medicamento para prolongar a acção fisiológica do activador de plasminogénio num ser humano. Lisboa, 2 de Abril de 2001 /ftVyiOrN <-— ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industria^ RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA