PT792641E - Uso de antagonistas de estrogeneo e agonistas de estrogenio em condicoes patologicas inibidoras - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "USO DE ANTAGONISTAS DE ESTROGÉNIO E AGONISTAS DE ESTROGÉNIO EM CONDIÇÕES PATOLÓGICAS INIBIDORAS"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Certos agonistas de estrogénio têm sido descritos como sendo úteis inibindo condições patológicas relacionadas com sistemas orgânicos que respondem a agonistas ou antagonistas do estrogénio. Em particular, 2-fenil-3-aroilbenzotiofenos e l-(alquilaminoetoxifenil)-l-fenil-2-fenilbut-l-enos representados por raloxifeno e tamoxifeno têm grande aplicação como agonistas do estrogénio.

O^CH2CH2N(CH3)2

Raloxifeno tem sido reivindicado como sendo efectivo no tratamento do acne, U.S. 5,439,923; calvície, EP 0659414 A2; doença de Alzheimer, EP 0659418 Al; atrofia da pele e da vagina, US 5,461,064; doença auto-imune, EP 0664123; EP 0664123; cancro do peito US 4,418,068; doença do peito; EP 0659419; degeneração da cartilagem, US 5,418,252; problemas de CNS (pós menopausa), 94 EP 0309470; patologia dos órgãos endócrinos alvo, US -2-

‘Λ 4,418,068; puberdade retardada, US 5,451,589; doença de desmielinização, US 5,434,166; doença de desmaelinização, US 5,434,166; dismenorreia, US 5,446,053; endometriose, US 5,461,065; infertilidade feminina, EP 659429 Al; distúrbios de fertilidade; hirsutismo, EP 0659414 A2; hipoglicémia, EP 635264 A2; aumento do libido, US 5,439,931; inibição de fertilidade US 5,462,949; oxidação LDL, EP 0664121 A; hipercolesterolémia, US 5,464,845; lupus eritematose, EP 0664125; função macrofágica enfraquecida, EP 659425 Al; infertilidade masculina, EP 0659424 Al; enfarte do miocárdio, isquemia, desordem tromboembólica, inibição da trombina, EP 0664126; desordens da menopausa, EP 0659415; desordens da menstruação, US 5,462,950; obesidade, 94 EP 0309481; desordem obsessiva compulsiva, EP 0659428; osteoporose, US 5,457,117; digenese dos ovários, US 5,451,589; síndroma peri-menopausa, US 5,391,557; vasoconstrição periferal, US 5,470,883; CNS pós-menopausa, EP 0659415; síndroma pré-menstrual, US 5,389,670; carcinoma prostático; hiperplasia prostática; hipertensão pulmonar, US 5,447,941; danos de reperfusão, J. AM. Cardiol 25, 189 A (1993); neoplasma resistente, EP 0652004 Al; restenosis, US 5,462,937; artrite reumática, EP 0664125; seborreia, US 5,439,923; disfunção sexual; sexualidade precoce, US 5,451,590; expressão trombomodulina, EP 0659427; síndroma de Tumer, US 5,441,966; fíbrose uterina US 5,457,116; e sintomas vasomotores (pós menopausa), 94 EP 0309473. O tamoxifeno é muito empregado no tratamento do cancro do peito e tem sido referido como sendo efectivo no tratamento das seguintes doenças e condições: elevados níveis lipídicos, Drug Ther. 22/3, 109 (1992); cancro do ovário, J. Clin. Oncol. 11, N° 10, 1957-68 (1993); carcinoma de células renais, Br. J. Radiol 56, N° 670, 766-7 (1983); supressão do factor aterogénico homocisteína, Env. J. Câncer 29 Suppl. 6, SI 10 (1993); melanoma metastático, J. Clin. Oncol. 12, N° 8,1553-60 (1994), mastalgia, Drugs 32, N° 6,477-80, (1986); tumores da pituitária secretora prolactiva, J. Endocrinol. Invest. 3/4 , 343-347 -3 -

(1980); osteoporose, Proc. Annu Meet Am Assoe. Câncer Res.; 33; A566-7 (1992); fibrose netroperitoneal, Lancet 341, N° 8841, 382 (1993).

Pequenas alterações estruturais na estrutura do agonista do estrogénio causam profundas diferenças nas propriedades biológicas. Por exemplo, droloxifeno (3-hidroxitamoxifen) tem de 10 a 60 vezes maior afinidade de ligação para o receptor do estrogénio comparativamente ao tamoxifen. O droloxifen está livre de efeitos carcinogénicos ou mutagénicos in vivo ou in vitro. enquanto o tamoxifeno causa tumores no fígado de ratazanas. Hasmanu et al. Câncer LetterM, 101-116 (1994).

Droloxifen tem sido referido como sendo efectivo no tratamento do cancro do seio US 5,047,431 ; endometriose, US 5,455,275 ; diminuição de colesterol, US 5,426,123; osteoporose, US 5,254,594; hiperplasia prostática, US 5,441,986, e restenoses, US 5,384,332.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção providencia o uso de uma quantidade efectiva de um composto de fórmula I para a produção de um medicamento para inibição de uma condição patológica que é susceptível ou parcialmente susceptível de inibição por um antiestrogénio ou agonista do estrogénio, sendo a referida condição patológica seleccionada do grupo do cancro do útero, enxaqueca, incontinência, infecção da bexiga, ginecomastia senil, diabetes, hiperglicémia, falha de cura da lesão, melanoma, impotência, doença inflamatória do intestino, diminuição do libido, desordens do sistema imunitário, doença hipertensiva pulmonar, síndroma de Tumer, calvície e distúrbios obsessivos compulsivos. Composto de fórmula I

R4 é H, OH, F ou Cl; e B e E são independentemente seleccionados deCHeN.

Compostos especialmente preferidos são: Çis-6-(4-fluoro-fenil)-5-[4-(2-piperidin-l-il-etoxi)fenil]-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-ol; (-)-Çis-6-fenil-5-[4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)fenil]-5,6,7,8-tetra- hidronaftalen-2-ol; Çis-6-fenil-5-[4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)fenil]-5,6,7,8-tetra- hidronaftalen-2-ol;

Cis- l-[6,-pinOlodinoetoxi-3'-piridil]-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno; 1 -(4'-Pirrolidinoetoxifenil)-2-(4"-fluorofenil)-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina;

Cis-6-(4-hidroxifenil)-5-[4-(2-piperidin-l-il-etoxi)fenil]-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-ol; e 1 -(4'-Pirrolidinoetoxifenil)-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina.

DESCRICÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção está relacionada com métodos para inibição de condições patológicas que são susceptíveis ou parcialmente susceptíveis a inibição por um estrogénio, antiestrogénio ou agonista do estrogénio. Tais condições incluem cancro uterino, enxaqueca, incontinência, infecção da bexiga, ginecomastia senil, diabetes, hiperglicémia, falha de cura da lesão, melanoma, impotência, doença inflamatória do intestino, diminuição do libido, desordens do sistema imunitário, doença hipertensiva pulmonária, seborreia, síndroma de Tumer e desordens obsessivas compulsivas.

Alterações na aparência e textura da pele com o aumento da idade têm sido notórias e bem documentadas tanto quantitativamente como qualitativamente. É um assunto que é muito subjectivo na sua avaliação e no seu definitivo efeito no indivíduo. De um modo geral o efeito da atrofia geral da pele com a idade é cosmética, mas pode ter consequências patológicas, muitas das quais são de natureza psicológica, i.e., o sentimento de se ficar "velho", depressão, perda de atracção sexual, etc. Em alguns casos, a atrofia da pele em pessoas mais velhas pode ter patologias directamente associadas com ela, e. g., a capacidade da pele em restaurar na sicatrização das feridas. Em geral, a atrofia da pele é considerada uma consequência normal e progressiva do processo de envelhecimento e tido como "em boa graça". Além da aceitação normal do envelhecimento, há uma altura particular na vida da mulher, i. e., a menopausa, quando o modelo de envelhecimento progressivo está muito acelerado, / especialmente no que diz respeito a atrofia da pele. E muitas vezes esta rápida aceleração e precipitação de mudança que pode ser um contributo para a angúsriapatológica e psicológica. -6-

Como mencionada anteriormente, a atrofia ou envelhecimento da pele pode ter aspectos tanto qualitativos como quantitativos. Os aspectos qualitativos são: a alteração da suavidade e textura, causando então a "aspereza" na aparência e no toque no exterior da superfície da pele, a alteração da elasticidade da pele, afectando então as propriedades mecânicas da pele, e as alterações na pigmentação da pele. Estas alterações qualitativas resultam na circunstância vulgarmente descrita da pele atrofiada como: enrugada, áspera, seca, e manchada. Quantitativamente, o envelhecimento da pele nas mulheres pós-menopausa pode ser medido como: uma diminuição da velocidade mitótica de queratinocitos, alterações na espessura dérmica, diminuição de glicosaminoglicanos e colagénio solúvel que está ligado ao conteúdo da humidade da pele, e na diminuição da excreção urinária da hidroxiprolina, uma medida da diminuição de regeneração colagénio. As alterações qualitativas na pele, i. e., suavidade e propriedades mecânicas, são o resultado de alterações quantitativas, i. e., perda ou troca dos componentes da matriz extra-celular. Além disto, é possível avaliar um efeito benéfico de uma terapia para a atrofia da pele pós-menopausa sem confiar totalmente na análise subjectiva, mesmo sendo uma melhoria subjectiva pode ser o último efeito desejável. No caso da atrofia da vagina, o aspecto quantitativo é a quantidade de humidade vaginal que é controlada pela quantidade de secreção das glândulas da derme, o resultado qualitativo é o conforto subjectivo.

Correntemente, há duas terapias principais para o tratamento da pele e atrofia vaginal na mulher pós-menopausa: A primeira terapia é estritamente uma aproximação cosmética, e. g., o uso de maquilhagem, humidificadores da pele, cremes de noite, lubrificantes vaginais, etc. Ainda que esta terapia de cosmética não afecte a causa fisiológica adjacente da atrofia, atinge muitas vezes alguns benefícios subjectivos para o indivíduo. O segundo tipo de terapia envolve o tratamento das causas fisiológicas adjacentes agentes -7-medicinais activos, muito notavelmente a Vitamina A e estrogénio. A Vitamina A é usada, a sua eficácia é controversa, e é conhecida como tendo efeitos colaterais substanciais cujo limite é usado.

Na altura da menopausa, os níveis de estrogénio produzidos pelos ovários diminuem rapidamente. Este decréscimo no estrogénio pronuncia os efeitos na pele e na vagina causando uma aceleração rápida no processo natural da atrofia. A terapia de substituição do estrogénio é muitas vezes benéfica no tratamento da atrofia da pele e da vagina. No entanto, a terapia de substituição do estrogénio tem efeitos colaterais indesejáveis, o mais sério destes é o potencial para o desenvolvimento da ameaça do cancro. A inclusão de agentes progestinais origina efeitos fisiológicos indesejáveis. A utilização da terapia de substituição do estrogénio para a única proposta do tratamento da atrofia da pele e da vagina não é comum devido aos efeitos colaterais negativos. Claramente, um agente efectivo e seguro que afecta positivamente a fisiologia subjacente e melhora portanto os aspectos qualitativos das propriedades da pele e vagina nas mulheres pós-menopausa será muito útil.

Devido ao desenvolvimento nas ciências médicas, em conjunto com a educação, a qualidade e a longevidade aumentaram ambos. Como resultado, a população, como um todo, está viver mais tempo. Como tal, situações que têm sido apresentadas mas não em grandes números estão a tomar-se mais numerosas e reconhecidas.

Uma destas situações que foram apresentadas mas a que possivelmente não foi dado o devido realce é a sexualidade na velhice. Tem havido desde sempre alguns pensamentos de que as pessoas idosas são incapaz de se envolverem em actividades sexuais, o que é em parte suportado por um declínio definitivo na sexualidade de ambos os sexos à medida que eles

<'1 -8- envelhecem, a actividade sexual na idade madura não pode ser ignorada. Além disso problemas associados com tal actividade também não podem ser ignorados.

Enquanto o homem, desde cedo e na meia idade, tem um declínio relativamente firme na capacidade e actividade sexual, o mesmo não pode ser convincentemente referido acerca das mulheres. Está descrito que a capacidade sexual da mulher não varia muito até bastante tarde na vida. (Kinsey, A. C., et al., Sexual Behavior in the Human Female, Saunders, PA., pg. 353 (1953)). Em particular, o libido decresce substancialmente numa considerável percentagem de casos após a menopausa (Lauritzen et al., Estrogen Therapy the Benefits and Risks, 3rd International Workshop on estrogen Therapy in Geneva, Oct. 20-21, 1977, Frontiers of Hormone Research, Vol. 5, pg 10 (1978)). Esta crença é suportada por Pfeiffer, E., et al., Terminus of Sexual Behavior in Middle and Old Age; Journal of the American Geratric Society, pg. 2151-2158 (1972), e Pfeiffer et al., Sexual Behavior in Middle Life, American Journal of Psychiatry, 128, 1262-1267 (1972). Nos estudos de Pfeiffer, verificou-se um maior declínio tanto na actividade sexual como no interesse sexual nas mulheres com idades compreendidas entre os 45 e os 71 anos quando comparado com os homens da mesma idade, e a alteração mais dramática ocorreu em idades compreendidas entre 50-60, o que é concerteza, geralmente o período durante o qual as mulheres experimentam a menopausa ou estão na pós-menopausa. No grupo de idades 66-71, 50% das mulheres disseram não ter ou ter muito pouco interesse na actividade sexual e apenas 10 % no caso dos homens do mesmo grupo de idade.

Enquanto que não há ligação directa entre o declínio dos níveis de estrogénio e o declínio da sexualidade, ficou estabelecido que alterações hormonais seguindo-se uma menopausa natural, e certamente seguindo a menopausa cirúrgica, podem contribuir em certa parte para o declínio sexual na mulher. Exactamente como a menopausa contribui para a perda do libido não está -9-

1 bem compreendido, no entanto parece bastante evidente. (Brancroft, Human Sexuality and its Problems, 2nd ed., pg. 292-293, (1989)). No entanto, seria muito útil encontrar compostos que aumentem o libido nas mulheres na pós-menopausa. A hipertensão pulmonar representa um sério, espectro de vida ameaçador de doenças de múltipla etiologia. Estas incluem deformações congénitas dos pulmões, tórax e diafragma, doença valvular congénita ou adquirida ou doença do miocárdio, doença obstrutiva dos pulmões, e pode ser uma complicação de doenças auto-imunes, vasculares e doenças com base colagénio (Rubin, Chest. 104: 236, 1993). Pacientes com hipertensão pulmonar apresentam-se frequentemente com sintomas incluindo dispneia, fadiga, síncope, e dor do peito, e têm aumento da pressão arterial pulmonar e demonstram proeminência da artéria pulmonar principal, alargamento dos vasos hilários e diminuição dos vasos periferais em radiografias ao peito (Rich. Ann. Internai. Med.. 107: 216,1987).

Enquanto a hipertensão arterial tem múltiplas etiologias, a hipertensão pulmonar primária parece envolver um componente auto-imune e tem sido descrita como uma complicação em pacientes com doenças do tecido conectivo unida, síndroma Sjogren, esclerose sistémica e lúpus (Sato, Hum. Path. 24: 199, 1993). Hipertensão pulmonar primária ocorre em fêmeas 1,7 vezes mais frequentemente que em machos com a maior predominância entre a terceira e quarta década de vida (Rich, Ann. Internai. Med.. 107: 216, 1987). O aumento da incidência da hipertensão pulmonar primária na mulher em idade de procriar assim como as observações clinicas de que a doença pode ser agravada pela gravidez e contraceptivos orais (Miller, Ann. Rheum. Pis. 46: 159, 1987; e citado em Farhat et al., J. PET., 261: 686, 1992) sugerem o papel do estrogénio no processo de doença. Neste sentido, Farhat et al. demonstraram que o estradiol - 10-

aumenta a resposta vasopressora para trombaxane mimético em pulmões de ratazana perfurados (J. PET, 261: 686, 1992). No entanto, o papel do estrogénio na hipertensão pulmonar é complexo e pode ser dependente da etiologia do processo de doença. No modelo de hipertensão pulmonar do ratazana induzida por injecção de pirrole monocrotaline (Reindel, tax. Appl. Pharm., 106: 179, 1990) toma-se aparente hipertensão pulmonar progressiva, hipertrofia ventricular direita e edema intersticial circundando as vias largas e vasos sanguíneos, semelhantes á patologia observado no homem. O tratamento com estradiol diminui a hipertrofia ventricular direita e previne o edema intersticial neste modelo (Farhat et al.. Br. J. Pharm.. 110: 719, 1993) assim como atenua a resposta vasoconstritiva hipóxica em pulmões isolados de ovelhas (Gordon et ah, J. Appl. Phvsioh. 61: 2116,1986). A actual terapia para a hipertensão pulmonar é inadequada e está largamente dependente do uso de vasodilatadores, diuréticos e anticoagulantes (Rubin, Drugs. 43: 37, 1992, Palevsky, JAMA, 265: 1014, 1991). Os vasodilatadores são eficientes apenas numa pequena subpopulação de pacientes com hipertensão pulmonar primária é complicada por respostas hipotensivas sistémicas. Infusão de protaciclina e elevada dose de bloqueadores de canais de cálcio estão também a ser utilizados com eficácia limitada. Transplantes de coração-pulmão e apenas de pulmão foram utilizados em pacientes que não respondem à terapia vasodilatadora, no entanto, devido à morbidez e mortalidade cirúrgica, esta aproximação está normalmente limitada àqueles pacientes que se continuam a deteriorar não obstante a terapia agressiva nos centros com experiência nestas doenças. Os pacientes morrem frequentemente de falha direita no coração e aqueles indivíduos que têm sinais de falha direita no coração têm um tempo de sobrevivência de 6-12 meses.

Além disto, as doenças hipertensivas pulmonars são caracterizadas - 11 -

por terapias inadequadas, necessitando de transplantes de órgãos e de prognóstico reservado, e necessitam de êxitos para novas terapias.

Seborreia é uma classe geral de doenças de pele que é caracterizada por funções anormais (normalmente hiperactividade) das glândulas sebáceas na pele. O objectivo desta invenção é a utilização de compostos para inibir a seborreia. A seborreia ou dermatite seborreica é um grupo de doenças da pele que se pensou estarem associadas com funções anormais das glândulas sebáceas. Ocorre em áreas onde há um elevado número de glândulas sebáceas e é caracterizada por escamação da pele e sinais vermelhos e ligeiramente inflamados. Seborreia é mais comum no cabelo (uma forma de caspa), margens do couro cabeludo, sobrancelhas, pregas naso-labial, canais do ouvido externo, pregas auriculares posteriores, e área pre-estemal. Geralmente, a seborreia suave é controlada por medicação tópica como glucocorticoides e LDH em creme Nivea. No entanto, casos mais severos são mais difíceis de controlar. Há muitas condições nas quais os ovários não se desenvolvem e como consequência a puberdade não ocorre. Digenese gonodal resulta num estado de doença grave conhecido como Síndroma de Tumer resultando da ausência do segundo cromossoma do sexo (o cromossoma monossómico X). O síndroma está associado ao fenótipo feminino, estatura baixa, infantilismo sexual, e varias anormalidades somáticas. Observam-se muitos tipos de características nestes pacientes incluindo detalhes faciais., toráx quadrado, e pescoço pequeno e largo com membrana. Anormalidades adicionais incluem cubitus valgus, limfedema congénito dos pés e mãos, anormalidades renais, palato arqueado e alto, anormalidades do esqueleto, pigmentação nevi, formação queloide, unhas anormais, e otites média periódicas. Anormalidades cardiovasculares as válvulas -12- -12- η \ -fc.. \ aórticas bicúspidas, anormalidades parciais na drenagem venosa, e síndroma hipoplástico do lado esquerdo do coração (Miller, M. J., et al. J. Pediatric., 102: 47-50, (1983), Mazzanti, I. et al. Helv. Paediatr. Acta, 43: 25-31, (1988), Van Egmond, H. et al. Br. Heart J.. 60: 69-71, (1988)). Anormalidades renais incluem rotação do rim, rim de sapato de cavalo, duplicação da pélvis renal e uretéres, e hidroneprose secundária para obstrução ureteropélvica. A maturação do esqueleto é normal ou ligeiramente atrasada na infância mas retarda-se na adolescência como resultado duma deficiência esteroide gonodal. Tipicamente, ocorre aparência de rede de peixe causada por rarefacção localizada. Ocorre redução do conteúdo mineral dos ossos por volta dos 8 anos de idade assim como mais tarde na puberdade. Alterações na espinha dorsal, hipoplasia vertebral, e escoliose são também comuns. Verificam-se também anormalidades de carpal, pulso, joelho e pélvis. A estatura baixa, incluindo o retardamento do crescimento uterino, não é evidente até ao terceiro ano de vida a partir do qual a velocidade de crescimento diminui apreciavelmente (Park, E., et al. Pediatr. Res. 17: 1-7, (1983), Lyon, aJ. et al. Arch. Dis. Child.. 60 : 932-935, (1985)). Em geral, os pacientes sofrem de infantilismo sexual com canais sexuais e genitais externos imaturos. Como resultado, o desenvolvimento dos ovários é retardado. A terapia corrente está dirigida no sentido da correcção da estatura, anomalias somáticas e induzindo características secundárias sexuais. Dados recentes indicam que hormonas de crescimento é uma terapia viável para o desenvolvimento da estatura (Rosenfeld, R. G., et al. J. Pediatr.. 113: 393 (1988)). Pacientes não tratados com estrogénio desenvolvem frequentemente uma forma severa de osteoporose semelhante à verificada pelas fêmeas após a menopausa. São comuns fracturas e colapso vertebral. A terapia de hormonas esteróides é normalmente adiada até aos 15 anos de idade uma vez que se pensa - 13-

que o tratamento numa idade precoce pode resultar em maturação prematura do esqueleto e portanto um decréscimo na altura. De facto, doses farmacológicas de estrogénio podem acelerar a maturação óssea resultando numa fusão epifiseal numa idade precoce sem concomitante aumento de altura. Outros estudos mostraram que baixas doses de estrogénio permitem aos pacientes desenvolver seios sem causar nenhuma alteração na altura (Alexander, R. L. Et al., Clin. Res. 26: 174A (1978)). No entanto, estudos indicam um número de casos de cancro do endométrio em pacientes com digenese gonadal como um resultado da terapia do estrogénio (Levine, L. S., Pediatrics, 62: 1178-1183 (1979)).

Dados os efeitos colaterais adversos do estrogénio em pacientes com Síndroma de Tumer, existe a necessidade de um agente económico de osso que não possua significantes consequências uterotroficas. A diabetes mellitus é uma doença sistémica caracterizada por desordens na acção da insulina e outras hormonas reguladoras no metabolismo de hidratos de carbono, gorduras e proteínas, e na estrutura e função dos vasos sanguíneos. O primeiro sintoma da diabetes é hiperglicémia, muitas vezes acompanhada com glucosúria, a presença na urina de grandes quantidades de glucose, e poliúria, a excreção de grandes volumes de urina. Sintomas adicionais provêm da diabetes crónica ou da diabetes permanente. Estes sintomas incluem degeneração das paredes dos vasos sanguíneos. Ainda que muitos órgãos diferentes sejam afectados por estas alterações vasculares, os nervos, olhos e rins aparentam ser os mais susceptíveis. Como tal, diabetes mellitus permanente, mesmo quando tratada com insulina, é uma causa cegueira. Há dois tipos reconhecidos de diabetes. Diabetes do tipo I é de ataque juvenil, propensa à cetoacidose, desenvolve-se muito cedo com sintomas -14- -14-

C—vUi muito mais severos e tem uma próxima e certa perspectiva de envolvimento vascular mais tarde. O controlo deste tipo de diabetes é difícil e requer administração de insulina exógena. A diabetes mellitus do tipo II é de ataque adulto, resitente à cetoacidose, desenvolve-se tarde, é mais suave e tem um ataque mais gradual.

Um dos avanços mais significativos na história das ciências médicas aconteceu em 1922 quando Banting e Best demonstraram os efeitos terapêuticos em cães diabéticos. No entanto, ainda hoje, não é conhecida uma clara imagem dos defeitos bioquímicos básicos da doença, e a diabetes continua um sério problema de saúde. Acredita-se que dois por cento da população dos Estados Unidos está incomodada com uma das formas da diabetes. A introdução de agentes hipoglicémicos efectivos oralmente foi um importante desenvolvimento no tratamento da hiperglicémia. Agentes hipoglicémicos orais são normalmente usados no tratamento da diabetes de ataque adulto.

Observações do metabolismo da glucose em modelos animais e humanos para a diabetes tipo II sugerem que os esteroídes sexuais desenrolam um papel permissivo na expressão fenotípica da hiperglicémia. Estas observações promoveram estudos dos efeitos dos androgénios e estrogénios nos níveis da glucose no sangue. A administração de testosterona a fêmeas de ratazana intactas ou ovariectomizadas resultou numa marcada resistência de insulina que está correlaccionada com alterações morfológicas nos músculos, Holmang, et al., Am. J. Phvsiol.. 259. E555-560 (1990); Holmang, et al., Am. J. Phvsiol. 262. E851-855 (1992). Em ratazanas diabéticas por estreptocina, testosterona implantada antagoniza a habilidade da insulina residual em manter o controlo glicémico, Le et al., Endocrinology, 116. 2450-2455 (1985). Em contraste, a glucusúria -15-

desapareceu em ratinhos KK diabéticos castrados e reapareceu quando foram androgénios foram restabelecidos nesses ratinhos, Nonaka, et al., Jpn. J. Vet. Sei., 50,1121-1123 (1988): Higuichi, et al., Exp, Anim., 38,25-29 (1989).

Os resultados da administração de estrogénio também suporta a hipótese de que o balanço entre os androgénios e os estrogénios é crítico para o desenvolvimento da hiperglicémia. Administrações diárias de estradiol a ratinhos KK diabéticos normaliza os níveis da glucose sanguínea e elimina a glucosúria, Toshiro, et al., Jpn. J. Vet. Sei.. 51. 823-826, (1989). O estradiol também baixa os níveis de glucose sanguínea de ratinhos C57BL/6J-ob/ob, Dubuc, Proc. Soc. Exp. Biol. Med.. 180, 468-473 (1985) e de ratinhos C57BL/KsJ-db/db, Garris, Anatomical Record. 225. 310-317 (1989).

Em mulheres climactéricas, ansiedade, depressão, tensão e irritabilidade começam na perimenopausa e podem ser correlacionadas com os baixos níveis de estrogénio e a terapia de substituição de estrogénio tem sido recomendada para o tratamento destes sintomas (Malleson, J., Lancet. 2: 158, (1953); Wilson et al., J. Am. Geriatric Soc.. 11: 347 (1963)). O mecanismo para efeitos protectores do estrogénio neste caso é desconhecido, mas pode estar relacionado com efeitos potenciais do estrogénio em aminas biogénicas como a serotina (Aylward M., Int. Res. Communications System. Med. Sei., 1: 30 (1973)). Deste ponto de vista a serotina circulante está reduzida na mulher na pós-menopausa (Gonzales G., et al., Maturitas 17: 23-29 (1993)), e a serotina (assim como muitas outras aminas biogénicas) têm um papel putativo no comportamento depressivo.

Phillips e Sherwin (Psychoneuroendocrinology, 17: 485-495 (1992)) descreveram que na menopausa cirúrgica as mulheres que receberam estrogénio, os riscos em novos testes imediatos e atrasados são maiores que em mulheres semelhantes a quem não foi dado estrogénio. Duas hipóteses potenciais podem explicar este efeito. Há alguma evidência que agonistas do estrogénio parciais (ou anti-estrogánio) como o tamoxifeno interactuam com o receptor muscariníco (Bem-Baruch G., et al., Molec. Pharmacol. 21: 287-2963 (1982)), e agonistas muscariníco (M2) são conhecidos por produzirem efeitos positivos em numerosas tarefas associadas a memória e podem ter relevância clínica na Doença de Alzheimer. Outra possibilidade interessante pode estar relacionada com neuroquininas como a Substância P, que são conhecidas por possuírem efeitos neurotrófícos assim como efeitos promotores de memória (Thoenen H., Trends in Neuroscience. 14: 165-170 (1991), Huston J. et al., Neurosci. Biobehav. Rev. 13: 171-180 (1989)), portanto, através de um efeito tanto em receptor neurotransmissor em CNS como em receptor neuropeptídeo, um tecido selectivo a agonista/antagonista do estrogénio pode ter efeitos promotores da memória e cognitivos. Tal actividade será muito mais relevantemente acedida no homem, mas uma variedade de modelos animais (i. e. confusão de aprendizagem, extinção, etc.) estão disponíveis para testes pré-clínicos.

Provavelmente o problema mais frequentemente relacionado com CNS em mulheres climactéricas é a ocorrência de afrontamentos. Enquanto que isto indubitavelmente é um efeito somático mediado por efeitos na microvasculatura, evidências correntes apontam na direcção de efeitos CNS iniciados (Lomax P., et al., Pharmac. Ther. 57: 347-358 (1993)). Ainda, um tecido selectivo a agonistas/antagonistas do estrogénio pode oferecer a terapia ideal fornecendo o efeito desejável na ausência de efeitos colaterais desagradáveis no tecido reprodutivo. «ί -17-

Desordem obsessiva-compulsiva é uma das mais raras doenças psiquiátricas, ainda que sintomas obsessivos menores ocorrem provavelmente em um sexto da população (Encvclonedia of Medicine. American Medicai Association; Currente Diagnosis. W. B. Saunders Company, 1985). É caracterizada por um ou ambos os sintomas. O primeiro inclui considerações periódicas, intrusas que o paciente pode pensar que são insensatas mas acerca das quais não consegue parar de pensar. O mais comum destes são pensamentos de violência, contaminação, dúvida ou maldade pessoal. Normalmente, o paciente não acredita que estes pensamentos sejam verdadeiras reflexões da realidade. No entanto, alguns pacientes ficam convictos de que as suas considerações obsessivas são verdadeiras, e sofrem de desilusões psicológicas. O segundo inclui comportamentos repetitivos ritualistas que o paciente reconhece serem inúteis mas que não consegue deixar de os efectuar. Lavar as mão, contar, verificação de rituais, e rituais chocantes são exemplos de tais rituais. A realização de rituais não é constante, mas flutua e reflecte os níveis de ansiedade. São normalmente sentimentos intensos de pânico e ansiedade se o paciente é impedido de completar o ritual.

Enquanto a aparência deprimida, uma revisão da história de pacientes obsessivos-compulsivos revela normalmente que as obsessões e compulsões seguem o ataque dos estados humor disfórico e que os sentimentos depressivos estão relacionados com o impacto que o comportamento obsessivo-compulsivo tem na vida. Em casos graves, o paciente ficará incapacitado, completamente tomado pela distracção de constantes considerações obsessivas ou com a ordem para completar rituais compulsivos intermináveis.

Esta invenção está relacionada com métodos para inibir desordens obsessivas compulsivas. - 18- /

Calvície (queda de cabelo) pode ocorrer em mulheres devido a uma variedade de razões e inclui, o calvície de padrão feminino. O calvície de padrão feminino é caracterizado por queda de cabelo crónica e progressiva começando muitas vezes por volta dos trinta anos de idade e sendo acelerada na menopausa. A queda de cabelo está normalmente limitada ao pericrânio central num modelo difuso. Esta perda de cabelo é cosmeticamente prejudicial e muitas vezes psicologicamente perturbadora para a paciente. A etiologia da condição está ligada com elevados níveis de androgénios e a resposta subsequente dos folículos capilares sensíveis ao androgénio. O tratamento da condição é primeiramente de natureza cosmética, e. g., cabeleiras postiças, estilos de cabelo que cobrem a área afectada, etc. O fármaco, Eespirolactona, tem sido utilizada, mas tem efeitos colaterais. Claramente, um tratamento efectivo para esta condição seria útil.

Macrófagos desempenham um papel central na defesa do hospede através de uma variedade de mecanismos efectivos envolvendo tanto membranas relacionadas como resultados segregativos (Gordon et. al., Curr. Opin. Immunol.. 4, 25, 1992; Fuller, Brit. Med. J.. 48, 65, 1992). Fagocitose, quimiotaxia e apresentação antigene são membranas relacionadas com processos envolvidos em mecanismos da defesa imunológica necessários para a sobrevivência do hóspede. A importância dos macrófagos na defesa contra micróbios, vigilância imune, destruição de células de tumor, e na limpeza de eritrocitos senescentes tem sido bem documentada no homem e em modelos animais caracterizados por eliminação selectiva de macrófagos (Claassen et. al., J. Immunol Meth., 134, 153, 1990). Macrófagos também contribuem para defesa do hóspede através de secreção de proteínas bacteriostáticas e bactericídas, mediadores citoquines e lipídios, assim como intermediários de oxigénio e azoto reactivos. A capacidade secretora do macrófagos é central à sua função como estas células secretam mais

de 100 mediadores distintos e estão localizadas em todos os orgãos (Nathan, J. Clin. Invest.. 79, 319,1987).

Enquanto activação anormal das funções macrofágicas está associada com doenças auto-imunes assim como processos crónicos e inflamatórios agudos, a condição recíproca, supressão de funções macrofágicas efectivas está associada com a reocorrência de infecções patogénicas oportunistas e não oportunistas e contribui para a morbidez e mortalidade. Populações associadas com um estado imunocomprometido incluem pacientes queimados, transplantes, indivíduos infectados com HIV, pacientes com cancro a efectuar quimioterapia e pacientes cirúrgicos, estes notavelmente com um elevado risco de infecção como observado em pacientes toraxicoabdominal.

Aproximações terapêuticas correntes para estes pacientes incluem o uso de infusão intravenosa de macrófagos derivados de citoquines notavelmente factores estimulantes de colónia G-CSF, GM-CSF, e M-CSF (Nemunaitis, Tranfusion 33: 70,1993). Terapia de suporte com antibióticos e fluidos é também utilizada, no entanto, as limitações desta aproximação são demonstradas pelos problemas contínuos de infecção em pacientes imunocomprometidos e a emergência de formas mais mortais de organismos resistentes a antibióticos. Ainda mais, infecções de pacientes imunocomprometida com patogenes oportunistas incluindo infecções de Pneumocistis e Criptococócita permanecem significantes e resultam em complicações não obstante várias receitas de antibióticos. Claramente, novas terapias que podem selectivamente promover as funções macrofágicas effectivas aumentando a defesa do hóspede desempenhariam um papel central no manuseamento clínico destes pacientes.

Tem sido descrito que o estrogénio aumenta as funções -20- macrofágicas effectivas seleccionadas incluindo fagacitose Fc média, classe II expressão antigene, e secreção IL-1. Estas observações em conjunto com a conhecida propensão das mulheres em serem mais resistente a uma variedade de infecções (Ahmed et al.. Am. J. Path.. 121, 531, 1985) sugerem que compostos tipo estrogénio podem aumentar as funções macrofágicas effectivas e serem portanto benéficos em estados de doença associados com defesa depressiva do hóspede como infecções da bexiga ou cura de lesão desanimada. O termo "inibir" é definido incluindo o seu significado geral que inclui tratar profilacticamente de um assunto para prevenir a ocorrência de um ou mais destes estados de doença, influenciando os sintomas de tal estado de doença, e/ou tratando tais sintomas. Portanto, os métodos presentes incluem tanto terapêutica médica e/ou tratamento profiláctico, como apropriado.

Compostos de fórmula I são descritos como sendo efectivos no tratamento da doença da próstata, osteoporose, endometriose, doença cardiovadcular e hipercolesterolemia no vulgarmente conhecido pedido de Patente dos Estados Unidos n° de série 08/369,954 que foi publicado como W096/21656 em 18 de Julho de 1996.

Agonistas do estrogénio são aqui definidos como compostos químicos com capacidade de ligação aos locais receptores do estrogénio no tecido mamário, e imitando as acções do estrogénio em um ou mais tecidos.

Agonistas do estrogénio são aqui definidos como compostos químicos com capacidade de ligação aos locais receptores do estrogénio no tecido mamário, e bloqueando as acções do estrogénio em um ou mais tecidos. -21 -

Uma das mais vulgares habilidades reconhece que certos substituintes listados nesta invenção serão quimicamente incompatíveis com um outro ou com os heteroátomos nos compostos, e serão evitadas estas incompatibilidades seleccionando compostos desta invenção. Certos grupos funcionais podem requerer grupos protectores durante os procedimentos sintéticos que os químicos com alguma perícia reconhecerão.

Os químicos com alguma perícia reconhecerão que certos compostos desta invenção contêm átomos que poderão ter uma óptica particular ou configuração geométrica. Todos estes isómeros estão incluídos nesta invenção; são preferidos isómeros exemplares levógirios na configuração tis. De certa forma, o químico reconhece que vários ésteres farmaceuticamente aceitáveis e sais podes ser preparados a partir de certos compostos desta invenção. Todos estes ésteres e sais estão incluídos nesta invenção.

Os remédios para as condições e doenças para uso nos métodos desta invenção podem ser preparados por métodos normalmente empregados usando aditivos convencionais orgânicos ou inorgânicos, tais como excipientes (e. g., sacarose, amido), manitol, sorbitol, lactose, glucose, celulose, talco, fosfato de cálcio ou carbonato de cálcio), um ligante (e. g,, celulose, metilcelulose, hidroximetilcelulose, polipropilpirrolidona, polivinilpirrolidona, gelatina, goma arábica, polietilenoglicol, sacarose ou amido, um desintegrante (e. g., amido), carboximetilcelulose, hidroxipropilamido, hidroxipropilcelulose pouco substituída, bicarbonato de sódio, fosfato de cálcio ou citrato de cálcio), um lubrificante (e. g., estereato de magnésio, ácido silicíco anidro leve, talco ou laurilsulfato de sódio), um agente aromatizante (e. g., ácido cítrico, mentol, glicina, ou laranja em pó), um conservante (e. g., benzoato de sódio, bisulfito de sódio, metilparabeno ou propilparabeno), um estabilizante ( e. g., ácido cítrico, -22- -22-

I 1.1 citrato de sódio ou ácido acético), um agente de suspensão (e. g., metilcelulose, polivinilpirrolidona estereato de alumínio), um agente dispersante (e. g., hidroxipropilmetilcelulose), um diluente (e. g., água) e cera base (e. g., manteiga de cacau, petrolato branco ou polietilenoglicol). A quantidade do ingrediente activo na composição médica pode estar num nível que exercerá os efeitos terapêuticos desejáveis; por exemplo, cerca de 0,1 mg a 50 mg na unidade de dosagem tanto para administração oral como perenteral. O ingrediente activo pode ser normalmente administrado uma a quatro vezes por dia com a unidade de dosagem de 0,1 mg a 50 mg em pacientes humanos, mas a dosagem acima pode ser convenientemente variada dependendo da idade, peso do corpo e condição médica do paciente e tipo de administração. A dose preferida em pacientes humanos é de 0,25 mg a 25 mg. É preferível uma dose por dia.

Os compostos utilizados nos métodos da invenção são rapidamente preparados pelas reacções ilustradas nos esquemas abaixo.

Certos compostos de fórmula 1 são convenientemente preparados a partir de um intermediário insaturado

M

D

Y

A O, Π -23-por hidrogenação com um catalisador de um metal nobre numa reacção inerte ao solvente. A pressão e a temperatura não são críticas e a hidrogenação é normalmente realizada em poucas horas à temperatura ambiente a uma pressão de hidrogénio de 20-80 psi. O produto hidrogenado é isolado, purificado se desejado, e o grupo éter é quebrado com um catalisador ácido numa reacção inerte ao solvente a uma temperatura entre 0°C e 100°C dependendo do catalisador ácido utilizado. Verificou-se que brometo de hidrogénio a elevadas temperaturas, tribrometo de boro e cloreto de alumínio de 0°C à temperatura ambiente são eficientes para esta reacção. O produto, de Fórmula I é isolado e purificado por procedimentos padrão.

Intermediários de Fórmula II onde A é CH2, e B, D e E são CH estão descritos na patente U.S. 3,274,213; J. Med. Chem 10, 78 (1967); J. Med. Chem 10, 138 (1967); e J. Med. Chem 12, 881 (1969), as descobertas das quais estão aqui incorporados por referência. Podem também ser preparados pelos procedimentos abaixo descritos. A preparação dos compostos de Fórmula I onde e=l, A=CH2, Z'=OCH2CH2, G=cicloalquilamina, B=CH encontra-se no esquema 1. Compostos 1-2, onde D e E são CH são efectuados por alquilação do 4-bromofenol com a correspondente N-cloroetilamina utilizando carbonato de potássio num solvente aprótico polar como a dimetilformamida a elevadas temperaturas. A temperatura ideal é 100°C. Compostos 1-2 onde D e E ou ambos são N sintetizados por reacção de deslocamento nucleófilo efectuado nos dibrometos (1-1) usando hidroxietilcicloalquilaminas em condições de 1 -24-

transferência de fase produzindo bromoaminas (1-2). Synthesis, 77, 573 (1980). Seguindo troca de halogénio metal usando n-butil-lítio ou magnésio metálico, bromoaminas (1-2) fornecem o correspondente reagente de lítio ou magnésio que reage a baixas temperaturas na presença de cloreto de césio preferencialmente (sem cloreto de césio a reacção também ocorre) com 6-metoxi-l-tetralona originando carbinois (1-3) ou estirenos (1-4) após processamento de reacção acídico. O tratamento tanto dos carbinois (1-3) como dos estirenos (1-4) com um agente bromante como perbrometo de brometo de piridínio origina bromoestirenos (1-5). Cloretos de aril- ou heteroaril-zinco ou ácido arilborónicos ou heteroarilborónicos reagem com os brometos (1-5) na presença de um catalisador metálico de paládio como tetraquis-trifenilfosfína-paládio (0) para produzir os diarilestireno (1-6). [Pure & applied Chem. 63, 419, 81991) e Buli. Chem. Soc. Jpn. 61, 3008-3010. (1988)] Para preparar os compostos preferidos são utilizados nesta reacção os cloretos de fenilzinco substituídos ou ácidos fenilborónicos substituídos. Os cloretos de arilzinco são preparados por reacção do reagente de lítio correspondente com cloreto de zinco anidro. Os ácidos arilborónicos, que não estão disponíveis comercialmente são preparados por reacção do reagente de arilítio correspondente com trialquilborato, preferivelmente o borato de trimetilo ou tri-isopropilo, seguido de processamento da reacção aquoso ácido. Acta Chemica Scan. 47, 221-230 (1993). Os reagentes de lítio que não estão disponíveis comercialmente são preparados por troca halogénio metal do correspondente brometo ou haleto com n-butil- ou t-butil-lítio. Altemativamente, o reagente de lítio é preparado por litiações heteroatómicas facilitadas como descrito em Organic Reactions, volume 27, Capítulo 1. Hidrogenações catalíticas de 1-6 na presença de hidróxido de paládio em carvão, por exemplo, produz os correspondentes intermediários di-hidrometoxido que são subsequentemente desmetilados usando tribrometo de boro a 0°C em diclorometano ou de brometo de hidrogénio em ácido acético a 48% a 80-100°C fornecendo as estruturas objectivo (1-7). Estes compostos são -25-

racémicos e podem ser resolvidos nos seus enantiómeros por cromatografia liquida de alta pressão usando uma coluna com uma fase estacionária quiral como as colunas Chiralcel OD. Altemativamente pode ser efectuada a resolução óptica por recristalização dos sais diasterioméricos formados com ácidos opticamente puros como hidrogenofosfato de 1,1 ’-binaftil-2,2’-diil (ver exemplo 8).

Os compostos çis (1-7) poder ser isomerizados a compostos trans por tratamento com base (ver Exemplo 2).

Quando D e/ou E é azoto o intermediário (Fórmula II) e compostos de Fórmula I podem ser preparados a partir das correspondentes dihalopiridinas ou pirimidinas como ilustrado no Esquema 1 e como completamente descrito para 6-fenil-5-[6-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)piridin-3-il]-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-ol no Exemplo 6. O éter metxlico do composto de Fórmula I onde e=l. A=CH2, Z1=OCH2CH2, G=pirrolidina, D, E, B=CH, Y=Ph pode também ser convenientemente preparado através de um primeiro passo de hidrogenação de nafoxidina (Upjohn & Co., 700 Portage Road, Kalamazoo, MI 49001) num solvente de reacção inerte na presença de um catalisador de um metal nobre. A pressão e a temperatura não são críticas; a reacção decorre convenientemente em etanol à temperatura ambiente durante aproximadamente 20 horas a 50 psi. O segundo passo é a clivagem do grupo metóxido que decorre convenientemente à temperatura ambiente com um catalisador acídico como tribrometo de boro num solvente de reacção inerte ou a 80-100°C com brometo de hidrogénio em ácido acético. O produto é então isolado por métodos convencionais e convertido num sal ácido se desejado. -26-C___v.i-1 ESQUEMA 1

ArZnCl ou Ar B(OH)2, Pd(Ph3P)4

1-6 1-7 -27-

Compostos de Fórmula I onde B é azoto são preparados pelos procedimentos ilustrados no Esquema 2 e 3 e Exemplos 3-5 e 10-12. A síntese de compostos de Fórmula I onde B=N está ilustrada no

Esquema 2. Cloretos de ácidos arílicos (2-1) no tratamento com aminas primárias produzem arilaminas secundárias (2-2), que são reduzidas com hidreto de alumínio e lítio em solventes etéreos para originar aminas secundárias (2-3). Subsequente acilação de (2-3) com cloretos de ácidos aroílicos produz aminas terciárias (2-4), que podem ser ciclizadas em oxicloreto de fósforo a quente fornecendo sais de di-hidroisoquinolinio (2-5). Reducção com boro-hidreto de sódio a alcoxitetra-hidroisoquinolinas, seguidas de desmetilação com tribrometo de boro em diclorometano fornece as estruturas objectivo. ESQUEMA 2

2-1

2-2

O

2-4 2-3 poa

ZG

•Y 1)[H] 2) BBr-

Composto de Fórmula I B = Azoto -28-

A síntese dos compostos de Fórmula I onde B=N está também descrita abaixo no Esquema 3. Aminas secundárias (3-1) na acilacção com cloretos de benzilxiaroílo (3-2) originam amidas terciárias (3-3) que na ciclização com oxicloreto de fósforo a quente produzem sais de di-hidroisoquinolina (3-4). A redução com boro-hidreto de sódio de (3-4) seguida de desbenzilação ácido clorídrico aquoso origina isoquinolinas (3-5), que são alquiladas com os cloretos funcionalizados apropriadamente e desmetiladas com tribrometo de boro para produzir as estruturas objectivo desejadas. -29- ESQUEMA 3

+ C0C1

A(CH2)eCH2NHY 3-1 °γΕ och2c6h5 3-2 'r

OCH2C6H5

3-5 3-4

ClCH2(CH2)nG

3-6 -30-

(η

«-Α

Ainda que a forma de base livre dos compostos de fórmula I possa ser usada em métodos da presente invenção, é preferível preparar e usar a forma de sal farmaceuticamente aceitável. Portanto, os compostos utilizados no método desta invenção forma farmaceuticamente aceitável sais de adição de ácidos e bases com uma grande variedade de ácidos inorgânicos e, preferencialmente, ácidos orgânicos e incluindo os sais fisiologicamente aceitáveis que muitas vezes são utilizados em química farmacêutica. Tais sais são também parte desta invenção. Ácidos inorgânicos típicos usados para efectuar tais sais incluem clorídrico, bromídrico, iodídrico, nitríco, sulfurico, fosfórico, hipofosfórico, e semelhantes. Sais derivados de ácidos orgânicos, como ácidos monoalifáticos e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos fenil-substituídos, ácidos hidroxialcanóicos e hidroxialcanodióicos, ácidos aromáticos, ácidos alifáticos e aromático-sulfónicos, podem também ser usados. Tais sais farmaceuticamente aceitáveis incluem acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftaleno-2-benzoato, brometo, isobutirato, fenilbutirato, β-hidroxibutirato, butino-l,4-dioato, hexino-l,4-dioato, caprato, caprilato, cina-mato, citrato, formato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroximaleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonico-tinato, nitrato, oxalato, ftalato, tereftalato, fosfato, mono-hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metanofosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpr-pionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bissulfato, pirossulfato, sulfito, bissulfito, sulfonato, benzenessulfonato, p-bromofenilsulfonato, cloro-benzenosulfonato, etanosulfonato, 2-hidroxietanosulfonato, metanosulfonato, naftaleno-1 -sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, p-toluenosulfonato, xilenossulfo-nato, tartarato, e semelhantes. Um sal preferencial é o sal citrato.

Sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis são tipicamente formados por reacção de um composto de fórmula I com uma -31 -

A Ο ί \ quantidade equimolar ou em excesso de ácido. Os reagentes são geralmente misturados num solvente mútuo como éter dietílico ou benzeno. O sal normalmente precipita de uma hora a 10 dias e pode ser isolado por filtração ou o solvente pode ser removido por meios convencionais.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos de fórmula I possuem geralmente aumento de solubilidade característico comparado com o composto a partir do qual eles derivam, são portanto mais manusáveis para formulação como líquidos ou emulsões.

Uma vez preparados, a forma livre de base de sal dos compostos de fórmula I podem ser administrados a um indivíduo a necessitar de tratamento para os métodos aqui descritos. Os seguintes exemplos teste não limitantes ilustram os métodos da presente invenção.

Para os métodos da presente invenção, compostos de fórmula I são administrados continuamente, ou de 1 a 4 vezes por dia.

Como usado aqui, o termo "quantidade efectiva" significa uma quantidade de composto dos métodos da presente invenção que tem capacidade de inibir os sintomas das condições patológica aqui descritas. A dose específica de um composto administrado de acordo com esta invenção será, com certeza, a ser determinado pelas circunstâncias particulares que caracterizam o caso incluindo, por exemplo, o composto administrado, a via de administração, o estado de ser do paciente, e a gravidade da condição patológica a ser tratada. Uma dose diária típica conterá um nível não tóxico de dosagem de cerca de 0.25 mg a 100 mg/dia de um composto da presente invenção. Doses diárias preferenciais serão de cerca de 1 mg até 40 mg/dia.

Os compostos desta invenção podem ser administrados por uma variedade de vias, incluindo oral, rectal, transdermal, subcutânea, intravenosa, intramuscular, e intranasal. Estes compostos preferenciais são formulados antes da administração, a selecção de qual será escolhido ficará á atenção do médico. Normalmente, os compostos de fórmula I, ou o sal destes farmaceuticamente aceitável, é combinado com um veículo farmaceuticamente aceitável, diluente ou excipiente para efectuar a formulação farmacêutica. O total de ingredientes activos em tais formulações está no intervalo 0.1% a 99.9% por peso da formulação. Por "farmaceuticamente aceitável" pretende-se dizer que o veículo, diluente, excipiente, e/ou sal deve ser compatível com os outros ingredientes da formulação, e não nocivos para o recipiente.

Formulações farmacêuticas contendo um composto de fórmula I podem ser preparados por procedimentos conhecidos na arte utilizando ingredientes bem conhecidos e prontamente disponíveis. Por exemplo, os compostos de fórmula I podem ser formulados com excipientes, diluentes, ou veículos vulgares, e transformados em comprimidos, cápsulas suspensões pós, e tais que. Exemplos de excipientes, diluentes, e veículo que são susceptíveis de tais formulações são incluem os seguintes agentes de enchimento e extensores como amido, açúcares, manitol, e agentes ligantes de derivados silícicos como a carboximetilcelulose e outros derivados da celulose, alginatos gelatinas, e polivinil-pirrolidona; agentes humidificantes como o glicerol; agentes desintegrantes como o carbonato de cálcio e o bicarbonato de sódio agentes para retardar a dissolução como a parafina, aceleradores de reabsorção como compostos de amónio quaternário; agentes tensoactivos como o álcool cetílico, monoestearato de glicerol, veículos adsorventes como caulino e a bentonite; e lubrificantes como o talco, estearato de cálcio e de magnésio, e polietilglicois sólidos.

-33 - /l-f jU , y C r i-i

Os compostos podem também ser formulados como elixires ou soluções para conveniente administração oral ou como soluções apropriadas para administração perenteral, por exemplo, por via intramuscular, subcutânea ou intravenosa.

Adicionalmente, os compostos estão bem adaptados para formulação como formas de dosagem de libertação contínua e semelhantes. As formulações podem assim ser constituídas desde que libertem o ingrediente activo apenas ou preferivelmente num local fisiológico particular, possivelmente durante um período de tempo. A cobertura, envolvimentos, e matrizes protectoras podem ser feitas, por exemplo, a partir de substâncias poliméricas ou ceras.

Compostos de fórmula I serão geralmente administrados numa formulação conveniente. Os seguintes exemplos de formulação são apenas ilustrativos e não pretendem limitar o alcance da presente invenção.

Nas formulações que se seguem, "ingrediente activo" significa um composto de fórmula I, ou um sal dele.

Formulação I: Cápsulas de Gelatina Cápsulas duras de gelatina são preparados usando o seguinte:

Quantidade (mg/cápsula) 0,25-100 0-650 0-50 0-15

Ingrediente

Ingrediente activo

Amido, NF Pó de amido fluível

Fluido de silicone de 350 centistokes -34- Λ\ k*· A formulação em comprimido é preparada usando os ingredientes abaixo:

Formulção 2: Comprimidos

Ingrediente Ingrediente activo Celulose, microcristalina Dióxido de silício, micronizado r Acido estearato

Quantidade (mg/comprimido) 0,25-100 200-650 10-650 5-15

Os compostos são misturados e comprimidos para formar comprimidos.

Altemativamente, comprimidos contendo cada uma 0.25-100 mg do ingrediente activo são efectuadas como se segue:

Ingrediente Quantidade (mg/comprimido)

Ingrediente activo 0,25-100

Amido 45

Celulose, microcristalina 35

Polivinilpirrolidona (solução a 10% 4 em água)

Carboximetilcelulose de sódio 4,5

Esteareto de magnésio 0,5

Talco 1

Os ingredientes activos, amido, e celulose passam através de peneiros N° 45 de malha U.S. são misturados completamente. A solução de -35-

«Λ·

polivinilpirrolidona é misturada com os pós resultantes que são então filtrados através de através de peneiros N° 14 de malha U.S..Os grânulos são produzidos e secos a 50-60°C e filtrados através de peneiros N° 18 de malha U.S.. O amido, carboximetílico de sódio, estearato de magnésio, e talco, filtrados previamente por peneiros N° 60 U.S., e depois adicionados aos grânulos que, depois de misturados, são comprimidos numa maquina de fazer comprimido.

As suspensões contendo cada uma 0,25-100 mg de medicamento por doses de 5 ml são efectuadas como se segue:

Formulação 4: Suspensões

Quantidade (mg/5 ml) 0,25-100 mg 50 mg 1,25 mg 0,10 mL q.b. q. b. 5 mL

Ingrediente Ingrediente activo Carboximetilcelulose de sódio Xarope

Solução de ácido benzóico

Aroma

Corante r

Agua purificada para O medicamento passa através de peneiros N° 45 de malha U.S. e misturado com celulose carboximetílica de sódio e xarope para formar uma pasta macia. A solução de ácido benzóico, aroma e corante são diluídos com alguma água e adicionados, com agitação. E então adicionada água suficiente para atingir o volume requerido. Uma solução de aerossol é preparado contendo os seguintes ingredientes: -36-

A

t:

Formulação 5: Aerossol

Quantidade (% por peso) 0,25 20,75 70,00

Ingrediente Ingrediente activo Etanol

Propelante 22 (Clorodifluorometano) O ingrediente activo é misturado com etanol e a mistura adicionada a uma porção de propelante 22, arrefecido a 30°C, e transferidos para o meio de enchimento. A quantidade requerida é então transferida para um recipiente de aço inoxidável e diluída com o restante propelante. As unidades da válvula são então adaptadas ao recipiente.

Os supositórios são preparados como se segue:

Formulação 6: Supositórios

Ingrediente Quantidade (mg/supositório) Ingrediente activo 250 Glicéridos de ácidos gordos 2.000 saturados O ingrediente activo é filtrado através de um peneiro N° 60 de malha U.S. e suspendido em glicéridos de ácidos gordos saturados previamente derretidos usando o mínimo de calor necessário. A mistura é então vertida para um molde de supositório de 2 g de capacidade nominal e é arrefecida.

Uma formulação intravenosa é preparado como se segue: -37-

Formulação 7: Solução intravenosa

Quantidade 20 mg 1.000 mL

Ingrediente Ingrediente activo Solução de sais isotónica A solução dos ingredientes acima é administrada intravenosamente ao paciente a uma velocidade de cerca de 1 mL por minuto.

Antiestrogénios são compostos que impedem os estrogénios de expressar os seus efeitos em tecidos alvo dependentes do estrogénio antagonizando consequentemente uma variedade de processos dependentes do estrogénio. No entanto, muitos estrogénios como o tamoxifeno não são puros antagonistas, uma vez que eles exibem alguma actividade estrogénica. Os métodos abaixo permitem ao perito profissional determinar o efeito do estrogénio e antiestrogénio dos compostos desta invenção. U.S. 4,859,585 reivindica dois protocolos gerais alternativos pelos quais uma substância pode ser caracterizada como agonista do estrogénio e/ou antagonista do estrogénio. Métodos para determinar o potencial estrogénico e antiestrogénico.

Teste do peso uterino. Compostos de fórmula I são administrados oralmente a fêmeas imaturas de ratazanas Sprague-Dawley (SD) (20 dias de idade; 40 g de peso corporal; Charles River Wiga, Sulzfeld, F.R.G.) durante três dias consecutivos para testar a actividade estrogénica. Em adição a cada dose do composto de fórmula I é administrada uma dose padrão de 1 mg/kg de estradiol às ratazanas jovens SD para determinar o efeito antestrogénico dos compostos. Os compostos são suspensos em agar a 0.25% para a administração. Os animais são mortos ao 4o dia, o útero é removido, limpo de qualquer fluído intra-uterino e subsequentemente pesado em condição seca. A actividade estrogénica é estimada pelo aumento do peso uterino (efeito uterotrófico) iniciado pelas respectivas doses diárias dos compostos de fórmula I. O efeito antiestrogénico dos compostos é testado pela redução do peso uterino (efeito anti uterotrofico) na presença de 1 mg/kg de estradiol.

Ensaio ligante-receptor do estrogénio. Os receptores de estrogénio (RE) são determinados no citosol do tecido uterino das fêmeas imaturas de coelhos brancos Nova Zelândia (3 meses de idade). Os úteros são separados do tecido gordo circundante, limpo em solução salina de tampão fosfato arrefecida em gelo, e transferido imediatamente para azoto líquido. O tecido uterino congelado é colocado num cilindro com cápsula de Teflon pré-arrefecido em azoto líquido que é agitado (501 {7.) durante pelo menos 30 seg num microdesmembrador (Braun, Meisungen, f.R.G.) na presença de um bola de carboneto de tungsténio. O pó resultante é misturado com unidades (l:4/p:v) de tampão Tris (0,01 M Tr-is, 0,001 EDTA, pH 7,5), homogeneizado com um homogeneizador Dounce e centrifugado a 105 000 g durante 1 hora. O sobrenadante (citosol) é decantado e a concentração da proteína ajustada a 5 mg proteína/ml. A concentração da proteína é determinada de acordo com Lowry et al. [8]. Aliquotas de citosol são pipetadas para tubos de plástico, [17/?-3H] estradiol 2,5 x 10'9M, e são adicionados estradiol e antiestrogénios não etiquetados de fórmula I num intervalo de concentrações. A afinidade de ligação relativa dos antiestrogénios para os receptores de estrogénio são efectuadas com o método dextrano-carvão a 2°C como descrito por Devleesch et al [10].

Todos os passos são efectuados em triplicado. A afinidade de ligação relativa é definida como uma razão de concentrações entre 17/Testradiol radioinerte e o composto de fórmula I que é necessário para atingir 50% de inibição da ligação especifica [17&3H]estradiol. O limite de radioactividade na concentração mais elevada de 17/3-estradiol (2,5 χ Γ7Μ) é considerado como ligação não especifica e subtraído de todos os valores.

Procedimentos para avaliar compostos desta invenção para tratamento da pele e atrofia vaginal estão descritos na Patente U.S. 5,461,064.

Atrofia da pele [para propostas ilustrativas apenas] São seleccionadas três a vinte mulheres, que estão na pós-menopausa e de boa saúde. Adicionalmente, estas mulheres são seleccionadas com base na apresentação de alguns sinais de atrofia dérmica rápida, como aumento rápido do número de rugas faciais ou pés de galinha, rápida alteração da pigmentação da pele, i.e. "manchas da idade", ou outras lamentações de envelhecimento dérmico rápido. Deverá ser relembrado pelo médico que estes critérios podem ser muito subjectivos para a paciente e algumas considerações devem ser tidas em conta na selecção da paciente. Também, a atrofia dérmica pode ser o resultado de outros factores como danos de UV provenientes do sol ou outros insultos ambientais e que tais pacientes que sofrem destes efeitos deverão ser excluídos. A primeira componente deste estudo é qualitativa e subjectiva, i.e., uma avaliação da melhoria da aparência da paciente. Tal avaliação requer uma recolha de dados inicial para futura comparação. Algumas recolha de dados iniciais podem estar na forma de um conjunto padronizado de questões como as pacientes vem a sua própria aparência, fotografias, ou um perfil psicológico da imagem própria da paciente. A segunda componente é quantitativa; estes incluem a determinação da excreção urinária da hidroxiprolina, conteúdo de húmidade da pele, glicosaminoglicanos na pele, e alterações na elasticidade e flexibilidade da -40- fo* Ί

pele. Métodos para determinar estes factores encontram-se em "The Menopause", Ed. R.J. Beard, University Press, Capítulo 7 (1977) e "Methods in Skin Research", Ed. Skerrow, D. E Skerrow C. J., John Wiley & Sons Ltd., Capítulo 22, "Analysis of Sebaceous Lipids", p. 587-608 (1985), e demais referências aí citadas, todas aqui incorporadas como referência. Novamente, uma recolha de dados inicial destes factores qualitativos é obtida.

As mulheres, então seleccionadas e inicialmente avaliadas, são colocadas num protocolo clínico recebendo 20-100 mg de um composto desta invenção por administração oral tanto como dose única como dividida Altemativamente, estas pacientes são colocadas num protocolo para administração tópica nas áreas da pele mais afectadas pela atrofia. Este protocolo tópico inclui o uso de formulação conveniente contendo 5-50% (por peso) de um composto activo desta invenção aplicado na área afectada uma ou duas vezes por dia. Cada um destes protocolos continua de dois a doze meses. Avaliações subsequentes, tanto quantitativas como qualitativas, são efectuadas em intervalos apropriados.

Um resultado positivo é uma melhoria no índice qualitativo total da aparência das pacientes e/ou melhoria dos parâmetros qualitativos, e.g., um aumento na excreção urinária da hidroxiprolina significando um aumento in tumover e síntese do colagénio, um aumento do conteúdo de húmidade, glycosaminoglycans, flexibilidade, ou elasticidade da pele.

Atrofia Vaginal [Para propostas ilustrativas apenas] São seleccionadas três a vinte mulheres sofrendo de atrofia vaginal associada à menopausa. Estas mulheres estão em geral de boa saúde. Uma vez que a natureza desta desordem é altamente idiossincrática e subjectiva, a -41 - -41 -

l‘A avaliação da efectividade do tratamento será necessariamente de natureza subjectiva. Pede-se a estas pacientes para guardarem um diário anotando detalhes tais como comichão vaginal e escamação e o grau de conforto no decurso sexual. Estas mulheres são colocados num protocolo semelhante ao descrito acima para a atrofia da pele. É colocada particular ênfase no uso de supositórios vaginais contendo 5-25% de um composto activo desta invenção.

Um resultado positivo é uma melhoria do conforto no decurso sexual e/ou diminuição da comichão vaginal ou escamação. A utilidade dos compostos aqui descritos é exibida pelos resultados positivos observados num ou nos dois ensaios acima.

Procedimentos para avaliação da utilidade de um composto desta invenção para aumentar o libido nas mulheres na pós-menopausa são descritas na Patente dos Estados Unidos 5,439,931.

Ensaio 1

Os animais usados são ratazanas Sprague-Dawley ovariectomizadas ou ovariectomizadas/adrenalectomizadas (Specific Pathogen Free-Anticimex, Estocolmo) pesando 250-300 g. Eles são guardados numa sala mantida a uma temperatura de 24 °C sob iluminação indirecta (10 horas no escuro). Comida e água (ou solução salina) estão disponíveis ad libitum. Um composto da invenção é administrado a um grupo de ratazanas, e o outro grupo é mantido como controlo, e as observações comportamentais são efectuadas colocando cada fêmea com 2 machos sexualmente experientes adaptados a gaiolas durante um período de 5 minutos durante cerca de 20 meses. As seguintes determinações são gravadas: -42- /5íi h*·^ 1. Proporção de meses pelo macho que obteve gradualmente a resposta de lordose - L/M; 2. Intensidade de lordose medida numa escala de 3 pontos; 3. Duração de lordose (em segundos); 4. Razão de aceitação da fêmea - N° de acasalamentos dividido pelo N° de tentativas de acasalamento recusadas mais acasalamentos, uma medida da prontidão da fêmea a aceitar o macho quando ele tenta acasalar.

Actividade do composto é mostrado um impacto bastante positivo em qualquer uma das 4 observações, como comparado com o controlo.

Ensaio 2

Cinco a cinquenta mulheres são seleccionadas para o estudo clínico. Estas mulheres estão na pós-menopausa, i.e., pararam de menstruar durante 6 a 12 meses antes da iniciação do estudo, estão de boa saúde geral, e sofrem auto descrição perda do libido especialmente notada após a menopausa. Devido à natureza idiossincrática e subjectiva deste sintoma, o estudo tem um grupo de controlo placebo, i.e., as mulheres são divididas em dois grupos, um deles recebe o agente activo desta invenção e o outro recebe o placebo. As mulheres no grupo teste recebem entre 50-200 mg de fármaco por dia pela via oral. Elas continuam esta terapia durante 3-12 meses. Registos exactos são mantidos assim como o nível do libido das mulheres em ambos os grupos e no final do estudo estes resultados são comparados. A actividade dos compostos da invenção é ilustrada por efeitos positivos em pelo menos um dos ensaios anteriores. -43-

Procedimentos para determinar a eficácia dos compostos desta invenção no tratamento de doença hipertensiva pulmonar estão descritos na Patente U.S. 5,447,941.

Ensaio 1 O procedimento como estabelecido em Farhat et. al., J. PET, 261: 686 (1992) (aqui incorporado como referência) é tido em conta. São sacrificadas de quatro a trinta ratazanas. Os pulmões são exsanguentados por perfuração via veia pulmonar hepática. A artéria pulmonar é canulada tal como é a traqueia para manter a ventilação e a cânula pulmonar é conectada á linha de per perfuração fusão e todo o pulmão ventilado é removido e suspendido numa câmara de perfuração. Os efeitos das substancias vasoconstrisoras na pressão perfuração do pulmão perfurado e isolado é medida usando um transdutor de pressão Statham. E determinado o aumento na pressão perfusion (vasoconstrição) induzida por tromboxano mimeticos na presença de estradiol e será determinada a capacidade para bloquear os efeitos do tromboxano com um composto de fórmula I ou a potenciação do estradiol nos efeitos tromboxano. A actividade dos compostos de fórmula I é ilustrada por uma redução no aumento da pressão de perfusão pulmonar que se segue a estimulação mimética de tromboxano.

Ensaio 2 E administrada uma única dose IV de monocrotalina pirrole a cerca de cinco a cinquenta ratazanas, (3,5 mg/kg) e a doença pulmonar é avaliada por histopatologia, acumulação de dextrano conjugado com fluoresceína no fluido de X -44-

lavagem dos alvéolos dos brônquios (como uma medida do edema pulmonar), e medição da pressão arterial utilizando um transdutor de pressão Standtham P231D (Reindel et al., Tax and Applic. Pharm. 106:179-200 (1990). É administrado um composto de fórmula I e o efeito nas ratazanas é avaliado. A actividade dos compostos de fórmula I é ilustrada por uma redução na recuperação da fluoresceina dextran conjugada dos fluidos de lavagem dos brônquios dos animais tratados com um composto de fórmula I, indicando a redução do edema pulmonar. Os pulmões das ratazanas serão também removidos do tórax, perfuração com fixante Kamovskys modificado e processado por histopatologia. Uma redução do espessamento das paredes das artérias em ratazanas tratadas é evidente para o papel protector dos compostos de fórmula I como um decréscimo na pressão arterial pulmonar.

Ensaio 3 São seleccionadas cinco a cinquenta mulheres para o estudo clínico. As mulheres sofrem de doença hipertensiva pulmonar. Devido à natureza idiossincrática e subjectiva destas desordens, o estudo tem um grupo de controlo de placebo, i. e., as mulheres são divididas em dois grupos, um deles recebe um composto de fórmula I como agente activo e o outro recebe o placebo. As mulheres do grupo teste recebem entre 50-200 mg de fármaco por dia pela via oral. Elas continuam esta terapia durante 3-12 meses. Registos exactos são mantidos assim como o número e severidade dos sintomas em ambos os grupos e no final do estudo estes resultados são comparados. Estes resultados são comparados entre membros do mesmo grupo mas também os resultados para cada paciente são comparados com os sintomas registados por cada paciente antes do início do estudo. I -45-

A utilidade dos compostos de fórmula I é ilustrada pelo impacto positivo que eles têm em pelo menos um dos ensaios descritos acima, A utilidade de um composto desta invenção para inibição da seborreia é testada pelos procedimentos descritos na Patente U.S. 5,439,923.

Ensaio 1

Cada de entre dois a vinte pacientes seleccionados para avaliação clínica é colocado num ambiente confortável, i, e., temperatura confortável, humidade, iluminação, etc. Estes pacientes abstiveram-se de fortes exercícios e consumo de comidas condimentadas doze horas antes da avaliação. Uma área do corpo que contém um grande número de glândulas sebáceas afectadas por seborreia ou acne, como na testa, é limpa com uma gaze almofadada para remover os lípidos acumulados. O remendo da pele é tapado, formando um rectângulo de medidas 2,5 por 1,8 cm. Um bloco de papel de cigarro ou outro material absorvente apropriado de medidas 2,5 por 1,8 cm é colocado na área teste da pele. O material absorvente deve ter sido primeiramente desengordurado com éter antes da colocação na área teste para remover lipídios antecedentes. O pad está seguro no local com uma ligadura. Após quinze minutos o pad é substituído por um pad novo (pad teste). Este procedimento remove os lipídios antecedentes na pele e portanto a verdadeira velocidade de produção lipídica pelas glândulas sebáceas pode ser determinada. O bloco teste fica no local de três a seis horas e então removido. O bloco teste é então extraído com éter para remover os lípidos e o éter é evaporado. Os lípidos residuais são então pesados. O Λ resultado é expresso como o número de lípidos sebáceos (mg) por 10 cm por hora. O paciente toma então 30-400 mg do ingrediente activo por via oral, ou aplica diariamente uma formulação tópica contendo 5-20% por peso do ingrediente activo, ambos de três a nove semanas. A metodologia do bloco teste -46- bv- ’í % ir\

acima descrita é repetida várias vezes através de administração do ingrediente activo para monitorizar o progresso. Este ensaio pode também ser efectuado em animais para verificar a utilidade. O efeito positivo é reflectido por uma diminuição da velocidade de produção dos lípidos das glândulas sebáceas.

Ensaio 2 São recrutados entre dois a vinte pacientes para este protocolo clínico e são inicialmente avaliados por observação directa da pele e lesões nela. Isto é efectuado escolhendo secções de um cm de pele afectada e o número e tipo de lesões (amassados, lesões seborreicas, etc.) são anotadas. As áreas normalmente usadas são as faces, pericrânio ou costas. O paciente toma então diariamente ou 30-400 mg do ingrediente activo por via oral ou aplica a formulação tópica contendo 5-20% por peso ingrediente activo, ambos de três a nove semanas. As áreas da pele a serem avaliadas são verificadas durante o período de administração. Deverá ter-se cuidado de avaliar as mesmas áreas e no sentido do acompanhamento disto, uma pequena marca ou marcas podem ser efectuadas na pele por um marcador permanente. Um resultado positivo é reflectido por uma redução do número e/ou severidade das lesões nas áreas monitorizadas da pele. A utilidade dos compostos descritos aqui é exibida pelos resultados positivos observados em um ou ambos os ensaios acima. A utilidade dos compostos desta invenção para tratamento do síndroma de Tumer é determinada por um processo descrito na Patente U.S. 5,441,966.

Procedimento teste

Cinco a trinta fêmeas são seleccionadas para estudos clínicos. As fêmeas têm idade compreendida entre os doze e os dezoito e exibem características do síndroma de Tumer, mas estão aliás de boa saúde geral. O estudo tem um grupo controlo de placebo, i.e., as fêmeas são divididas em dois grupos, um deles recebe o agente activo desta invenção e o outro recebe o placebo. As fêmeas no grupo teste recebem de 10-100 mg do agente activo por dia por via oral. Elas continuam esta terapia durante 3-12 meses. Registos exactos são mantidos assim como o número e severidade dos sintomas acima mencionados em ambos os grupos e no final do estudo estes resultados são comparados. Estes resultados são comparados tanto entre membros de cada grupo mas também os resultados para cada paciente são comparados com os sintomas registados por cada paciente antes do início do estudo. A utilidade dos compostos desta invenção é ilustrada pelo impacto positivo que eles têm em um ou mais dos sintomas quando utilizados num estudo como acima. EP 0 659 419 AI fornece métodos para avaliação dos compostos da presente invenção para desordens de seio.

Ensaio 1 São seleccionadas cinco a cinquenta mulheres para o estudo clínico. As mulheres têm uma história de desordem de seio como descrito aqui, mas estão de boa saúde geral. Devido á natureza subjectiva destas desordens, o estudo tem um grupo de controlo de placebo, i. e., as mulheres são divididas em dois grupos, um deles recebe o agente activo desta invenção e o outro recebe o placebo. As mulheres no grupo teste recebem entre 50-200 mg do fármaco por dia pela via oral. Elas continuam esta terapia durante 3-12 meses. Registos exactos são mantidos assim como o estado da desordem de seio em ambos os grupos e no final do estudo estes resultados são comparados. Os resultados são comparados tanto entre membros do mesmo grupo e também os resultados para cada paciente são comparados com os sintomas registados por cada paciente antes do início do estudo. A utilidade dos compostos desta invenção é ilustrada pelo impacto positivo que eles têm na desordem ou no sintoma ou sintomas dela quando utilizados num estudo como acima.

Ensaio 2 São seleccionados de três a vinte pacientes machos sofrendo de ginecomastia ou galactorreia. Medidas iniciais de tamanho de seio e é anotado evidência de lactação. Os pacientes recebem de 30-100 mg de um composto activo desta invenção por dia como uma dose única ou dividida por via oral. Este tratamento é continuado durante 3-12 meses. Em intervalos apropriados, são efectuadas mais medições de tamanho de seio ou evidencia de lactação. A utilidade dos compostos desta invenção é ilustrada pelo impacto positivo na desordem ou nos seus sintomas.

Um método para a determinação da actividade hipoglicémica dos compostos desta invenção está estabelecida publicamente na EP 0 635 264 A2.

Machos de cinco a seis meses de idade, são usados ratinhos recém nascidos amarelos obeso-diabéticos. Os machos amarelos recém nascidos são obesos, hiperglicémicos, hiperinsulinemicos e resistentes à insulina. r -49- São guardados 6 ratinhos por gaiola de plástico com ninhos e alimentados com água e Purina Formulab Chow 5008 (Purina Mills, St. Lois, MO) ad libitum. A temperatura da sala dos animais é mantida a 23+ 2°C. As luzes nas salas dos animais estavam entre 0600 a 1800 h.

Os antiestrogénes são testados em várias doses como aditivos de comidas. Cada dose de antiestrogénio é testada nos 6 ratinhos da mesma gaiola. Os compostos são misturados em ração pulverizados e ressedimentados. Aos ratinhos que servem de controlo é dado comida ressedimentada sem qualquer composto teste. São colhidas amostras de sangue a partir da veia da cauda imediatamente antes e logo após o começo do teste. As concentrações de glucose no sangue são determinadas pelo método da glucose oxidase com um analisador de fluxo rápido Alpkem modelo 300 (Clackamaus, OR). A redução da concentração da glucose no sangue abaixo de níveis do controlo é indicativo de um antiestrogénio efectivo com utilidade no tratamento de diabetes e hiperglicémia. Métodos para avaliar o efeito de compostos desta invenção no tratamento de obsessiva - compulsiva são descritas em EP 0 659 428 Al.

Ensaio 4

Cinco a cinquenta mulheres são seleccionadas para o estudo clínico, As mulheres estão na pós-menopausa, i. e., cessaram de menstruar no intervalo de 6 a 12 meses antes do início do estudo, estão de boa saúde geral, e sofrem ou de desordens obsessivas compulsivas ou desordem tísica. Devido á natureza idiossincrática e subjectiva destas desordens, o estudo tem um grupo de

controlo de placebo, i. e., as mulheres são divididas em dois grupos, um deles recebe raloxifeno como agente activo e o outro recebe o placebo. As mulheres no grupo teste recebem entre 50-200 mg do fármaco por dia pela via oral. Elas continuam esta terapia durante 3-12 meses.

Registos exactos são mantidos assim como o número e severidade dos sintomas em ambos os grupos e no final do estudo estes resultados são comparados. Os resultados são comparados entre membros do mesmo grupo e também os resultados para cada paciente são comparados com os sintomas registados por cada paciente antes do início do estudo. A utilidade dos compostos de fórmula I é ilustrada pelo impacto positivo que eles têm em um ou mais desordens/sintomas quando utilizados no ensaio descrito acima. EP 0 659 414 A2 descreve métodos para avaliar compostos desta invenção para inibição da calvície.

Calvície São seleccionadas de três a vinte mulheres sofrendo do modela feminino de calvície de padrão feminino. Estas pacientes são inicialmente consideradas para a extensão e severidade da calvície. Esta avaliação clínica é efectuada pelos métodos descritos em "Methods of Skin Research" John Wiley and Sons, pp 308-318 (1985) e Habit, T., "Clinicai Dermatology", C.V. Mosby Co., capítulo 23, pp 493-504 (1985); e referências daí. Especialmente útil nestas avaliações é o procedimento "queda de cabelo" e medição da razão anagene telogene. As pacientes recebem 10-400 mg por dia de um composto activo desta invenção por dia como uma dose única ou dividida por administração oral.

I -51 -

Altemativamente, os pacientes aplicam 5-10% (por peso de um composto desta invenção) como um creme, loção, ou loção para limpeza da área afectada, uma ou duas vezes ao dia. Este protocolo continua durante seis meses. Em intervalos apropriados, é efectuada reavaliação por um dos métodos descritos nas referências acima. Um resultado positivo é exibido por um aumento da razão anagene telogene ou um aumento do número de pontas de cabelo na região do pericrânio afectada. A utilidade dos compostos desta invenção é ilustrado pelo impacto positivo que eles têm em um ou mais sintomas quando usados num estudo como o anterior.

Os ensaios que mostram a habilidade dos compostos da invenção para aumentar a função macrofágica são descritos na EP 0 659 425 Al.

Ensaio 1 É efectuado o procedimento descrito em Friedman et al.. J. Clin. Invest., 75, 162-167 (1985) (aqui incorporado como referência), com algumas modificações. São administradas doses orais no intervalo 1-10 mg/kg de um composto de fórmula I a entre cinco e uma centena de ratinhos numa base diária. A seguir à administração, são colhidos os macrófagos e são quantificadas alterações tanto no fagocitose imune (Fc mediado) como no não-imune usando partículas preparadas de fermento conjugado de fluoresceina baseado em Ragsdale, J. Immunol. Meth., 123-259 (1989). Para fagocitose medio imune, o fermento conjugado de fluoresceina é pré-incubado em cera de ratinho para promover a opsonização. O aumento na fluorescência pelos macrófagos é quantificada pelo aumento da emissão fluorescente usando comprimentos de onda de excitação e emissão de 482 e 520 nm, respectivamente. Este -52- procedimento é usado com culturas de macrófagos ex vivo ou in vitro e as alterações na fluorescência quantificadas.

Um aumento nas unidades fluorescente, comparado com o controlo indica actividade dos compostos de fórmula 1.

Ensaio 2 É efectuado o procedimento descrito em Zuckerman et al.. Cell Immunol. 103:207, (1986); J. Immunol.. 140:978 (1988) (aqui incorporado como referência). A capacidade para induzir antigenes da classe II e consequentemente promover a introdução do antigene é determinada em macrófagos peritoneais primárias e ex vivo e in vivo com a linha de célula macrófago P388D1. Entre cinco a cem ratinhos são doseados com um composto de fórmula 1, são colhidos os macrophages e provados com antibióticos contra antigenes de classe II do halotipo D. O aumento da expressão antigene da classe II é determinada por citometria de fluxo usando os anticorpos secundários apropriados. Os estudos in vitro avaliam os efeitos dos compostos no aumento dos níveis da expressão induzível interferão basal e gama de antigene de classe II por citometria de fluxo. Um aumento na expressão induzível interferão reflecte um aumento na activação macrofágica.

Ensaio 3 É efectuado o procedimento descrito em Seow et al., J. Immunol. Meth., 98, 113 (1987). O ensaio é utilizado para avaliar o aumento das funções macrofágicas efectivas que usa medidas de 2-deoxiglucose recuperada. Os macrófagos ex vivo e in vitro são colocados em pratos fundos 96 a 105 células por fundo e incubadas em tampão fosfato na presença de 0,78 uCi/ml de 3H-

I ( I (

-53- deoxiglicose, e é colocado um composto de fórmula I nos poços. A redução da quantidade da glucose extra celular reflecte a recuperação desta glucose análoga não metabolizada e consequentemente fornece um ensaio independente para a determinação do estado da activação do macrófago interposto pelo composto de fórmula 1. Aumento na recuperação da deoxiglucose pelo composto demonstra a abilidade dos compostos para aumentar o estado da activação do macrófago.

Ensaio 4 E efectuado o procedimento como descrito em Zuckerman, Circ Shock, 29. 279 (1989) (aqui incorporado como referência) para ilustrar a habilidade dos compostos de fórmula 1 em proteger em modelos de letalidade murina de sépsia e endotoxina. São doseados de entre cinco a cem ratinhos com 1-10 mg/kg com um composto de fórmula 1 durante 1 semana antes do desafio da sépsia. O desafio é efectuado usando uma injecção de uma pílula grande de endotoxina IV em condições nas quais é obtido um LD100 (200 pg lipopolissacarídeo). Glucocorticóides exógenos como a dexametasona a 20 mg/kg servem como um controlo positivo aumentando a sobrevivência. Os efeitos do composto de fórmula é também determinado usando um modelo sépsia envolvendo ligação cecal e picadura. A sépsia tanto dos organismos Gram positivos como dos Gram negativos resulta numa LD100 por 48 horas não obstante o uso de antibióticos. Um aumento do número de animais sobreviventes ou do tempo de sobrevivência, como comparado com o controlo, demonstra a actividade dos compostos.

Ensaio 5 A capacidade dos compostos de fórmula 1 para aumentar a secreção dos citoquines como TNF é quantificada irt vivo por medições será -54- Μ

efectuada usando TNF ELISAs específico comercialmente disponível para TNF de ratinho. São oralmente doseados de cinco a cem ratos com 1-10 mg/kg de um composto de fórmula 1 durante uma semana antes da injecção de uma dose letal ou subletal de lipossacarídeo (200 e 1 μg, respectivamente). Cerca da uma hora após a injecção LPS os ratinhos são sangrados e de base e são determinadas as quantidades induzidas de LPS de sérum TNF. Rotineiramente, são observados níveis de TNF abaixo de 10 pg/ml antes da injecção LPS e obtidos níveis de 5-20 ng/ml seguidamente a LPS. É determinada a capacidade dos compostos para modular os níveis de TNF de base ou induzidas. Um aumento no TNF de base sem engatilhar a libertação sistémica maciça de TNF em ratinhos tratados com composto demonstra a actividade dos compostos em promover a secreção citoquine. Finalmente, medições ex-vivo e in-vitro de TNF libertado pelos macrófagos peritoneais expostos a 1-5 μΜ de um composto in vitro são também efectuadas por ELISA para determinar a extensão do aumento de citiquine interposto por um composto de fórmula 1.

Ensaio 6 São seleccionadas de cinco a cinquenta mulheres para o estudo clínico. As mulheres estão imunosuprimidas. Devido á natureza idiossincrática e subjectiva destas desordens, o estudo tem um grupo de controlo de placebo, i.e., as mulheres são divididas em dois grupos, um deles recebe um composto de fórmula 1 como agente activo e o outro recebe o placebo. As mulheres no grupo teste recebem entre 50-200 mg do fármaco por dia. Elas continuam esta terapia durante 3-12 meses. Registos exactos são mantidos assim como o número e severidade dos sintomas em ambos os grupos e no final do estudo estes resultados são comparados. Os resultados são comparados entre membros de cada grupo e também os resultados para cada paciente são comparados com os sintomas registados por cada paciente antes do início do estudo. -55- A utilidade dos compostos de fórmula 1 no aumento da função macrófago é ilustrada pelo impacto positivo que eles têm em pelo menos um dos ensaios descritos acima. Tais compostos são úteis no combate de infecções e promovem a cicatrização de feridas.

Lisboa, 7 de Setembro de 2001

ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (14)

1. -1 -

   REIVINDICAÇÕES 1. A utilização dos compostos de fórmula I, ou de um seu isómero óptico ou geométricoe, ou de um seu sal de adição de ácido, N-óxido, éster ou sal de amónio quaternário, não tóxico farmacologicamente aceitável, para a produção de um medicamento para a inibição de uma condição patológica que é susceptível ou parcialmente susceptível de inibição por estrogénio, antiestrogénio ou agonista do estrogénio, sendo a referida condição patológica seleccionada do cancro uterino, enxaqueca, incontinência, infecção da bexiga, ginecomastia senil, diabetes hiperglicémia, insuficiência na cicatrização de feridas, melanoma, impotência, doença inflamatória do intestino, decréscimo do libido, doença do sistema imunitário, desordem hipertensiva pulmonar, seborreia, síndroma de Tumer, calvície e desordens obsessivas-compulsivas: ,OCH2CH2G

   I em que G é —N

   e R4 Ή, OH. F, ou Cl; e B e E são seleccionados independentemente a partir de CH eN. -2-
2. 2. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que o composto de fórmula I é seleccionado a partir do grupo que consiste em Çis-6-(4-fluoro-fenil)-5-[4-(piperidin-l-il-etoxo)-fenil]-5,6,7-tetra- hidronaftalen-2-ol, (-)-Çis-6-fenil-5-[4-(2-pirrolidin-l-il-etoxi)-feml]-5,6,7,8-tetra- hidronaftalen-2-ol, Çis-1-[6,pirrolidinoetoxi-3'-piridil]-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno, 1 -(4'-pirrolidinoetoxifenil)-2-(4"-fluorofenil)-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina, Çis-6-(4'hidroxifenil)-5-[4-(2-piperidin-l-il-etoxi)-fenil]-5,6,7,8-tetra-hidronaftalen-2-ol, e 1 -(4'-pirrolidinoetoxifenil)-2-fenil-6-hidroxi-1,2,3,4-tetra-hidroiso-quinolina.
3. 3. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é infecção da bexiga.
4. 4. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é ginecomastia senil.
5. 5. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é diabetes.
6. 6. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é hiperglicémia.
7. 7. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é insuficiência na cicatrização de feridas. -3-
8. 8. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é diminuição do libido.
9. 9. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é desordem do sistema imunitário.
10. 10. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é doença hipertensiva pulmonar.
11. 11. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é seborreia.
12. 12. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é síndroma de Tumer.
13. 13. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é calvície.
14. 14. A utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida condição patológica é desordem obsessiva-compulsiva. Lisboa, 7 de Setembro de 2001 La ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA