PT2794628T

PT2794628T - Derivados nucleosídicos 4¿-azido-3¿-fluoro substituídos como inibidores de replicação de arn de vhc

Info

Publication number: PT2794628T
Application number: PT128087913T
Authority: PT
Inventors: Zhang Zhuming; Smith Mark; Xavier Talamas Francisco; Zhang Jing
Original assignee: Riboscience Llc
Priority date: 2011-12-20
Filing date: 2012-12-17
Publication date: 2017-07-05
Also published as: AU2012357986B2; NZ625844A; MX350810B; MA35749B1; WO2013092447A1; KR101687084B1; IN2014CN04530A; HK1199037A1; JP6118336B2; IL232843B; CA2869317C; ES2626484T3; ZA201404444B; AU2012357986A1; US20140369959A1; PH12014501283A1; EA201491180A1; JP2015500851A; UA110428C2; IL232843A0

Description

DESCRIÇÃO

DERIVADOS NUCLEOSIDICOS 4'-AZIDO-3'-FLUORO SUBSTITUÍDOS COMO INIBIDORES DE REPLICAÇÃO DE ARN DE VHC

CAMPO DA INVENÇÃO A invenção refere-se a derivados nucleosídicos como inibidores de replicação de ARM de replicão de VHC. Em particular, a invenção refere-se à utilização de derivados nucleosídicos de purina e pirimidina como inibidores de replicação de ARN de Vírus da Hepatite C (VHC) subgenómico e composições farmacêuticas que contêm tais compostos. 0 vírus da Hepatite C é a causa principal de doença hepática crónica em todo o mundo. Os pacientes infetados com VHC estão em risco de desenvolver cirrose do fígado e subsequente carcinoma hepatocelular e por isso o VHC é a principal indicação para a transplantação de fígado. Somente duas terapêuticas aprovadas estão atualmente disponíveis para o tratamento de infeção por VHC (R. G. Gish, Sem. Liver. Dis., 1999, 19, 35). Estas são monoterapia com interferão-α e, mais recentemente, combinação terapêutica do análogo de nucleósido, ribavirina (Virazole), com interferão-α.

Muitos dos fármacos aprovados para o tratamento de infeções virais são nucleósidos ou análogos de nucleósido e a maioria destes fármacos de análogo de nucleósido inibem a replicação virai, após a conversão aos trifosfatos correspondentes, através da inibição da enzima polimerase virai. Esta conversão ao trifosfato é comummente mediada por cinases celulares e portanto a avaliação direta de nucleósidos como inibidores de replicação de VHC é somente convenientemente levada a cabo usando um ensaio à base de células. Para o VHC falta a disponibilidade de um ensaio ou modelo animal de replicação virai à base de células verdadeiro de infeção. A atividade antiviral de análogos de monofluoro e difluoro de 4'-azidocitidina contra a Replicação de Vírus da Hepatite C foi avaliada por David B. Smith et al., J. Med. Chem., 2009, 52, 2971-2978. Consequentemente os mais potentes compostos foram os derivados de 4'-azido-2'-fluoro e 4'-azido-22'-difluoro de 4'-azidocitidina enquanto que os análogos de 3'-fluoro de 4'-azidocitidina eram completamente inativos. 0 vírus da Hepatite C pertence à família de Flaviviridae. É um vírus de ARN, o genoma de ARN que codifica uma grande poliproteína que após o processamento produz a maquinaria de replicação necessária para assegurar a síntese de ARN de progénie. Acredita-se que a maioria das proteínas não estruturais codificadas pelo genoma de ARN de VHC está envolvida na replicação de ARN. Lohmann et al. [V. Lohmann et al., Science, 1999, 285, 110-113] têm descrito a construção de uma linha de célula de Hepatoma Humano (Huh7) em que moléculas de ARN de VHC subgenómico foram introduzidas e demonstraram que se replicam com alta eficiência. Acredita-se que o mecanismo de replicação de ARN nestas linhas celulares é idêntico à replicação do genoma de ARN de VHC de comprimento total em hepatócitos infetados. Os clones de ADNc de VHC subgenómico usados para o isolamento destas linhas celulares têm formado a base para o desenvolvimento de um ensaio à base de células para identificar inibidores de análogo de nucleósido de replicação de VHC.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Os compostos de Fórmula I são úteis para o tratamento de doenças mediadas pelo Vírus da Hepatite C (VHC) e para composições farmacêuticas que compreendem tais compostos.

A invenção proporciona um composto de Fórmula I

I em que : R e H, Ci-7 haloalquilo, ou arilo, em que arilo e fenilo ou naftilo, opcionalmente substituído com um ou mais Ci-7 alquilo, C 2_7 alcenilo, C 2_7 alcinilo, Ci_7 alcoxi, halo,

Cl_7 haloalquilo, -N(Rlaj2, acilamino, -S02N (Rla) 2, -CORib, - S02 (Rlc) , -NHS02 (Rlc) , nitro ou ciano; cada Rla é independentemente H ou Ci_7 alquilo; cada Rlb é independentemente -0Ria ou -N(Rla)2; cada Rlc é Ci„7 alquilo; R2a e R2b são independentemente H ou Ci_7 alquilo; R3 é Ci_7alquilo, fenilo, ou fenilo Ci_7 alquilo; R4 é H, Ci-7 alquilo, ou R2d e R4 juntos formam (CH2)3; R5 é H, C (=0) Rlc, C (=0) Rlb, P (=0) (0R1) (0Rla) , ou P(=0) (0R1) (NR4R7) ; e R6 é

OU 5 ou um sal farmacologicamente aceitável do mesmo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I para utilização no tratamento de uma infeção por Vírus da Hepatite C (VHC), a dita utilização compreende administrar a um paciente em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula I. A invenção proporciona uma composição que compreende um composto de Fórmula I e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO

Os compostos de Fórmula I demonstraram ser inibidores de replicação de Vírus da Hepatite C subgenómico numa linha de célula de hepatoma. Estes compostos têm o potencial de serem eficazes como fãrmacos antivirais para o tratamento de infeções por VHC em seres humanos. 0 termo "alquilo" como usado no presente documento denota um resíduo de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada que contém 1 a 12 átomos de carbono. Preferentemente, o termo "alquilo" denota um resíduo de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada que contém 1 a 7 átomos de carbono. São mais preferidos metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, terc-butilo ou pentilo. 0 termo "cicloalquilo" como usado no presente documento denota um grupo cicloalquilo que contém 3 a 7 átomos de carbono, por exemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo ou cicloheptilo. 0 termo "alcoxi" como usado no presente documento denota um grupo alquil-oxi de cadeia linear ou ramificada em que a porção "alquilo" é como definido acima tal como metoxi, etoxi, n-propiloxi, i-propiloxi, n-butiloxi, i-butiloxi, terc-butiloxi, pentiloxi, hexiloxi, heptiloxi incluindo seus isómeros. 0 termo "alcoxialquilo" como usado no presente documento denota um grupo alcoxi como definido acima que é ligado a um grupo alquilo como definido acima. Exemplos são metoximetilo, metoxietilo, metoxipropilo, etoximetilo, etoxietilo, etoxypropilo, propiloxipropilo, metoxibutilo, etoxibutilo, propiloxibutilo, butiloxibutilo, terc-butiloxibutilo, metoxipentilo, etoxipentilo, propiloxipentilo incluindo seus isómeros. 0 termo "alcenilo" como usado no presente documento denota um radical de cadeia de hidrocarboneto que tem de 2 a 7 átomos de carbono, preferentemente de 2 a 4 átomos de carbono, e que tem um ou duas ligações duplas olefínicas, preferentemente uma ligação dupla olefínica. Exemplos são vinilo, 1-propenilo, 2-propenilo (alilo) ou 2-butenilo (crotilo). 0 termo "alcinilo" como usado no presente documento denota um radical de cadeia de hidrocarboneto que tem de 2 a 7 átomos de carbono, preferentemente 2 a 4 átomos de carbono, e que tem um ou onde possível duas ligações triplas, preferentemente uma ligação tripla. Exemplos são etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo ou 3-butinilo. 0 termo "hidroxialquilo" como usado no presente documento denota um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada como definido acima em que 1,2, 3 ou mais átomos de hidrogénio são substituídos por um grupo hidroxi. Exemplos são hidroximetilo, 1-hidroxietilo, 2-hidroxietilo, 1-hidroxipropilo, 2-hidroxipropilo, 3-hidroxipropilo, hidroxiisopropilo, hidroxibutilo e semelhantes. 0 termo "haloalquilo" como usado no presente documento denota um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada como definido acima em que 1,2, 3 ou mais átomos de hidrogénio são substituídos por um halogénio. Exemplos são 1-fluorometilo, 1-clorometilo, 1-bromometilo, 1-iodometilo, trifluorometilo, triclorometilo, tribromometilo, triiodometi1o, 1 —fluoroetilo, 1—cloroetilo, 1—bromoetilo, 1-iodoetilo, 2-fluoroetilo, 2-cloroetilo, 2-bromoetilo, 2-iodoetilo, 2,2-dicloroetilo, 3-bromopropilo ou 2,2,2-trifluoroetilo e semelhantes. 0 termo "alquiltio" como usado no presente documento denota um grupo (alquil)S- de cadeia linear ou ramificada em que a porção "alquilo" é como definido acima. Exemplos são metiltio, etiltio, n-propiltio, i-propiltio, n-butiltio, i-butiltio ou terc-butiltio. 0 termo "arilo" como usado no presente documento denota um fenilo ou naftilo (por exemplo, 1-naftilo, 2- naftilo ou 3~naftilo). 0 termo "heterociclilo" como usado no presente documento denota um sistema heterocíclico monocíclico, bicíclico ou tricíclico saturado, parcialmente insaturado ou aromático que contém um ou mais heteroátomos selecionados a partir de azoto, oxigénio e enxofre que pode também ser fusionado a um carbociclo ou heterociclo monocíclico saturado, parcialmente insaturado ou aromático.

Exemplos de heterociclos adequados são oxazolilo, isoxazolilo, furilo, tetrahidrofurilo, 1,3-dioxolanilo, dihidropiranilo, 2-tienilo, 3-tienilo, pirazinilo, isotiazolilo, dihidrooxazolilo, pirimidinilo, tetrazolilo, 1-pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo, 3-pirrolidinilo, pirrolidinonilo, (N-óxido)-piridinilo, 1-pirrolilo, 2-pirrolilo, triazolilo, por exemplo, 1,2,3-triazolilo ou 1,2,4-triazolilo, 1-pirazolilo, 2-pirazolilo, 4-pirazolilo, piperidinilo, morfolinilo (por exemplo, 4-morfolinilo), tiomorfolinilo (por exemplo, 4-tiomorfolinilo), tiazolilo, piridinilo, dihidrotiazolilo, imidazolidinilo, pirazolinilo, piperazinilo, 1-imidazolilo, 2-imidazolilo, 4 -imidazolilo, tiadiazolilo, por exemplo, 1,2,3 ~ tiadiazolilo, 4-metilpiperazinilo, 4-hidroxipiperidin-1-ilo. 0 termo "acilo" ("alquilcarbonilo") como usado no presente documento denota um grupo de fórmula C(=0)R em que R é hidrogénio, um resíduo de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada que contém 1 a 7 átomos de carbono ou um grupo fenilo. Grupos acilo mais preferidos são aqueles em que R é hidrogénio, um resíduo de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada não substituído que contém 1 a 4 átomos de carbono ou um grupo fenilo. 0 termo halogénio representa flúor, cloro, bromo ou iodo, preferível flúor, cloro, bromo.

Na representação ilustrativa dos compostos dados ao longo desta memória descritiva, uma linha afunilada espessada (““***) indica um substituinte que está acima do plano do anel ao qual pertence o carbono assimétrico e uma linha tracejada (»si»íeO indica um substituinte que está abaixo do plano do anel ao qual pertence o carbono assimétrico.

Os compostos de formula I exibem estereoisomerismo. Estes compostos podem ser qualquer isómero do composto de fórmula I ou misturas destes isómeros. Os compostos e intermediários da presente invenção que têm um ou mais átomos de carbono assimétricos podem ser obtidos como misturas racémicas de estereoisómeros que podem ser resolvidos.

Os compostos de fórmula I exibem tautomerismo o que significa que os compostos desta invenção podem existir como dois ou mais compostos químicos que têm a capacidade de interconversão fácil. Em muitos casos significa meramente a permuta de um átomo de hidrogénio entre dois outros átomos, a qualquer um dos quais forma uma ligação covalente. Os compostos tautoméricos existem num equilíbrio móvel um com o outro, de modo que tentativas de preparar as substâncias separadas usualmente resultam na formação de uma mistura que mostra todas as propriedades físicas e químicas a serem esperadas com base nas estruturas dos componentes. 0 tipo mais comum de tautomerismo é esse que envolve carbonilo, ou ceto, compostos e compostos de hidroxilo insaturados, ou enóis. A alteração estrutural é o deslocamento de um átomo de hidrogénio entre átomos de carbono e oxigénio, com o rearranjo de ligações. Por exemplo, em muitos aldeídos e cetonas alifáticas, tais como acetaldeído, a forma ceto é a predominante; em fenóis, a forma enol é o componente principal.

Os compostos de fórmula I que são básicos podem formar sais farmaceuticamente aceitáveis com ácidos inorgânicos tais como ácidos halídricos (por exemplo, ácido clorídrico e ácido bromídrico), ácido sulfúrico, ácido nítrico e ácido fosfórico, e semelhantes, e com ácidos orgânicos (por exemplo, com ácido acético, ácido tartárico, ácido sucínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido málico, ácido salicílico, ácido cítrico, ácido metanossulfónico e ácido p-tolueno sulfónico, e semelhantes). A formação e isolamento de tais sais podem ser levados a cabo de acordo com métodos conhecidos na especialidade.

Inibidores de VHC

A invenção proporciona um composto de Fórmula I

I em que: R e H, Ci-7 haloalquilo, ou arilo, em que arilo e fenilo ou naftilo, opcionalmente substituído com um ou mais Ci_7 alquilo, C2-7 alcenilo, C2-7 alcinilo, 0]_7 alcoxi, halo, C-l_7 haloalquilo, -N(Rla)2, acilamino, -S02N(Rla)2, -CORlD, S02 (Rlc) , -NHSO2 (Ric) , nitro ou ciano; cada R*a é independentemente H ou Ci-7 alquilo; cada Rib é independentemente -0Rla ou -N(Rla)2; cada Rlc ê C:L-7 alquilo; R2a e R2b gg0 (jj independentemente H ou Ci_7 alquilo; (ii) R2a é H e R2b e R4 juntos formam (CH2)3; ou (iii) R2a e R2b ambos são Ci_7 alquilo,· R. 0 C]_7alquil0J f0niXoJ ou fsriilo C^_7 alquilo/ R4 é H, Ci_7 alquilo, ou R2b e R4 juntos formam (CH2)3; R5 é H, C (=0) Rlc, C (=0) Rlb, P(=0) (0R1) (0Rla) , OU P(=0) (0R1) (NR4R7) ; e R6 é

ou um sal farmacologicamente aceitável do mesmo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R4 é H. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R4 é H e Rfa é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R4 é H e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo ou fenilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é fenilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é fenilo e R4 é H. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é fenilo, R4 é H, e R6

é * A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é fenilo, R4 é H, e R6 é

w A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo e R4 é H. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, e Rs é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R2a é H. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que Ri13 ê metilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R2a é H e R20 é metilo, A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2b é metilo, e Rb é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H e R2b é metilo, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R3 é isopropilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R3 é etilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R3 é benzi lo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo e RJ é isopropilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, e R3 é isopropilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R3 é isopropilo, e Rs é

X 1 A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R3 é etilo, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R3 é

benzilo, e Rb é A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R3 ê

isopropilo, e R6 ê A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R3 é etilo, e R6 é 1

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, RJ é benzilo, e R6 ê

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R3 é isopropilo, e R° é

-α- Α invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R2b é metilo, R3 é isopropilo, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é

H, R3 é isopropilo, e R6 é A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R2b é metilo, R3 é isopropilo, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R5 é H. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo e R5 é H. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, e R5 é H. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R3 é H, e R5 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R5 é H, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R^3 é H, R2b é metilo, Rb ê H, e R° é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R2b é metilo, R3 é isopropilo, R5 é H, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R2b é meti lo, R3 é etilo, R e H, e R e

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R2b é metilo, R3 é benzilo, R5 é H, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R2b é metilo, R3 é etilo, R~ e H, e r" e

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R2b é metilo, R3 é benzilo, Rb é H, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que Rb é C(=0)Rlc. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R“a é H, R2b é metilo, R3 é isopropilo, R5 é C(=0)Rlc, e R6 é

A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R 0 etilo. A invenção proporciona um composto de Fórmula I, em que R1 é naftilo, R4 é H, R2a é H, R2b é metilo, Rb é isopropilo, R5 é C (=0) CH2CEU,

e R5 é A invenção proporciona um composto selecionado a partir do grupo que consiste em: Éster isopropílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2- ilmetoxi]-fenoxi- fosforilamino}-propiónico; Éster etílico do ácido (5)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-dioxo-3 ,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-3-fluoro-4- hidroxi-tetrahidrofuran-2- ilmetoxi]-fenoxi- fosforilamino}-propiónico; Éster etílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,SR)-2-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2- ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico; Éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,SR)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-l-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico; Éster benzílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico; Éster etílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino- 2-oxo-2H-pirimidin-l-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2 -ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico; Éster isopropílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2 -iImetoxi]-fenoxi-fosforilamino}-propiónico; Éster isopropílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2 -iImetoxi]-hidroxi-fosforilamino}-propiónico; e Éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-propioniloxi-tetrahidrofuran-2-il- metoxi]-(naftalen-l-iloxi) -fosforilamino]-propiónico. A invenção proporciona um composto de Fórmula I para utilização no tratamento de uma infeção por Vírus da Hepatite C (VHC), a dita utilização compreende administrar a um paciente em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula I. A invenção proporciona o composto de Fórmula I para a utilização acima, que compreende ainda administrar um modulador do sistema imune ou um agente antiviral que inibe a replicação de VHC, ou uma combinação dos mesmos. A invenção proporciona o composto de Fórmula I para a utilização acima, em que o modulador do sistema imune é um interferão ou interferão quimicamente derivatizado. A invenção proporciona o composto de Fórmula I para as utilizações acima, em que o agente antiviral é selecionado a partir do grupo que consiste num inibidor de protease de VHC, um inibidor de polimerase de VHC, um inibidor de helicase de VHC, um inibidor de primase de VHC, um inibidor de fusão de VHC, e uma combinação dos mesmos. A invenção proporciona um composto de Fórmula I para utilização na inibição da replicação de VHC numa célula que compreende administrar o composto de Fórmula I. A invenção proporciona uma composição que compreende um composto de Fórmula I e um excipiente farmaceuticamente aceitável. A invenção proporciona uma utilização do composto de Fórmula I no fabrico de um medicamento para o tratamento de VHC. A invenção proporciona um composto, composição, ou utilização como descrito no presente documento.

Compostos

Exemplos de compostos representativos abrangidos pela presente invenção e dentro do âmbito da invenção são proporcionados no seguinte Quadro. Estes exemplos e preparações que se seguem são proporcionados para possibilitar aos peritos na especialidade entender mais claramente e praticar a presente invenção. Não deveriam ser considerados como limitação ao âmbito da invenção, mas meramente como sendo ilustrativos e representativos do mesmo.

Em geral, a nomenclatura usada nesta memória descritiva baseia-se em AUTONOMTM v.4.0, um sistema computadorizado do Beilstein Institute para a geração de nomenclatura sistemática da IUPAC. Se houver uma discrepância entre uma estrutura representada e um nome dado a essa estrutura, será atribuída à estrutura representada mais peso. Além disso, se a estereoquímica de uma estrutura ou uma porção de uma estrutura não for indicada com, por exemplo, negrito ou linhas tracejadas, a estrutura ou porção da estrutura é para ser interpretado como abrangendo todos os estereoisómeros deste. QUADRO I representa exemplos de compostos de acordo com Fórmula qenérica I.

Síntese

Esta memória descritiva refere-se à publicação Smith, David B. ; Kalayanov, Genadiy; Sund, Christian; Winqvist, Anna; Maltseva, Tatiana; Leveque, Vincent J.-P.; Rajyaguru, Sonal; Le Pogam, Sophie; Najera, Isabel; Benkestock, Kurt; et al Journal of Medicinal Chemistry (2009), 52(9), 2971- 2978 .

Esquemas Gerais

Os métodos discutidos acima são descritos em mais pormenores a seguir:

0 nucleósido comercialmente disponível 3'-fluoro-3'-deoxiuridina (1) pode também ser preparado de acordo com os procedimentos descritos por Gosselin, G. et al, Collect. Czech. Chem. Commun. (2006), Vol. 71, No. 7, 991-1010. A iodação seguida de eliminação de iodeto sob condição básica pode levar ao intermediário 3. A introdução do grupo azido à posição 4' no intermediário 3, seguida de deslocamento oxidativo de 5'-iodeto com ácido m-cloroperbenzoico no intermediário 4 para propiciar 5 pode ser conseguida de acordo com os métodos descritos por Smith, D. B. et al, J. Med. Chem. (2009), 52(9), 2971-2978. A desproteção de grupos 5' m-clorobenzoilo no intermediário 5 dá o intermediário uridina 6 (Esquema 1).

Esquema 1.

0 intermediário citidina 10 foi revelado por Smith, D. B. et al em J. Med. Chem. (2009), 52(9), 2971-2978.

Alternativamente, 10 pode também ser eficientemente preparado pela via sintética delineada no Esquema 2.

Esquema 2.

0 intermediário guanosina 12 (referência) pode ser preparado por meio da reação de transaminação a partir do intermediário 8 com guanina protegida seguida da reação de desproteção (Esquema 3).

Esquema 3.

Os compostos de fosforamidato da presente invenção (ou compostos de referência) podem ser preparados por meio da condensação do nucleõsido 6 ou 10 (ou nucleósido de referência 12) com um composto de fosfocloridato adequadamente substituído 15 na presença de uma base forte (Esquema 4) . A condensação pode ser levada a cabo no nucleósido não protegido 6 ou 10 (ou no nucleósido de referência não protegido 12) . 0 produto acoplado 16 na fórmula I é inicialmente obtido como uma mistura de dois diastereómeros sob a reação de acoplamento e pode ser separado nos seus enantiómeros quirais correspondentes por coluna quiral, HPLC quiral, ou cromatografia de SFC quiral,

Esauema 4.

A reação de condensação pode também ser conduzida no nucleósido protegido 6 ou 10 (ou no nucleósido de referência protegido 12). Por exemplo, o nucleósido 6 pode ser protegido a posição 2' para dar o intermediário 17. A reação de condensação com 17 pode levar ao composto 18 na fórmula I com rendimento melhorado. No caso R5 é o grupo trietilsililo, 18 pode ser seletivamente desprotegido para remover 2'- trietilsililo por meio do tratamento com ácido acético ou ácido fórmico à temperatura ambiente para gerar o composto 16 em que Rb é citidina (Esquema 5).

Esquema 5.

R5= SiEt, ou C(=0)Cl-6alquilo 10 17 18

Dosagem e Administração:

Como mostrado no Quadro acima os compostos de formula I têm o potencial de serem eficazes como fármacos antivirais para o tratamento de infeções por VHC em seres humanos, ou são metabolizados a um composto que exibe tal atividade.

Numa outra forma de realização da invenção, o composto ativo ou seu derivado ou sal pode ser administrado em combinação com um outro agente antiviral, tal como um agente anti-hepatite, incluindo aqueles de fórmula I. Quando o composto ativo ou seu derivado ou sal são administrados em combinação com um outro agente antiviral a atividade pode ser aumentada sobre o composto parental. Este pode ser facilmente avaliado por meio da preparação do derivado e testagem sua atividade anti-VHC de acordo com o método descrito no presente documento, A administração do composto ativo pode variar de administrações orais contínuas (gotejamento intravenoso) a diversas ao dia (por exemplo, Q.I.D) e pode incluir administração oral, tópica, parentérica, intramuscular, intravenosa, subcutânea, transdérmica (que pode incluir um agente de aumento de penetração), bucal e supositório, entre outras vias de administração.

Os derivados nucleosídicos 4'-substituídos, bem como seus sais farmaceuticamente utilizáveis, podem ser usados como medicamentos na forma de qualquer formulação farmacêutica. A formulação farmacêutica pode ser administrada entericamente, oralmente, por exemplo, na forma de comprimidos, comprimidos revestidos, drageias, cápsulas de gelatina dura e mole, soluções, emulsões, xaropes, ou suspensões, ou retalmente, por exemplo, na forma de supositórios. Podem também ser administrados parentericamente (intramuscularmente, intravenosamente, subcutaneamente ou injeção intraesternal ou técnicas de infusão), por exemplo, na forma de soluções de injeção, nasalmente, por exemplo, na forma de sprays nasais, ou spray de inalação, topicamente e assim por diante.

Para o fabrico de preparações farmacêuticas, os derivados nucleosídicos 4'-substituídos, bem como seus sais farmaceuticamente utilizáveis, podem ser formulados com um excipiente terapeuticamente inerte, inorgânico ou orgânico para a produção de comprimidos, comprimidos revestidos, drageias, cápsulas de gelatina dura e mole, soluções, emulsões ou suspensões.

Os compostos de fórmula I podem ser formulados em mistura por adição com um veículo farmaceuticamente aceitável. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem ser administrados oralmente como sais farmacologicamente aceitáveis. Por causa dos compostos da presente invenção serem principalmente solúveis em água, podem ser administrados intravenosamente em solução salina fisiológica (por exemplo, tamponada a um pH de cerca de 7,2 a 7,5). Tampões convencionais tais como fosfatos, bicarbonatos ou citratos podem ser usados para este propósito. Claro, um perito ordinário na especialidade pode modificar as formulações dentro dos ensinamentos da memória descritiva para proporcionar numerosas formulações para uma via de administração particular sem tornar as composições da presente invenção instáveis ou comprometer sua atividade terapêutica. Em particular, a modificação dos presentes compostos torna-os mais solúveis em água ou outro veículo, por exemplo, podem ser conseguidos facilmente por meio de modificações menores (formulação de sal, esterificação, etc.) que estão bem dentro da habilidade ordinária na especialidade. Está também bem dentro da habilidade ordinária da especialidade modificar a via de administração e regime de dosagem de um composto particular com a finalidade de gerir a farmacocinética dos presentes compostos para o efeito benéfico máximo em pacientes.

Para formulações parentéricas, o veículo compreenderá usualmente água estéril ou solução de cloreto de sódio aquoso, embora outros ingredientes incluindo aqueles que ajudam na dispersão possam ser incluídos. Claro, onde água estéril for para ser usada e mantida como estéril, as composições e veículos precisam também ser esterilizados. Suspensões injetáveis podem também ser preparadas, em cujo caso veículos líquidos apropriados, agentes de suspensão e semelhantes podem ser utilizados.

Excipientes adequados para comprimidos, comprimidos revestidos, drageias, e cápsulas de gelatina dura são, por exemplo, lactose, amido de milho e derivados do mesmo, talco, e ácido esteárico ou seus sais.

Se for desejado, os comprimidos ou cápsulas podem ter revestimento entérico ou ser de libertação sustentada por técnicas padrão.

Excipientes adequados para cápsulas de gelatina mole são, por exemplo, óleos vegetais, ceras, gorduras, poliõis semissólidos e líquidos.

Excipientes adequados para soluções de injeção são, por exemplo, água, solução salina, álcoois, poliõis, glicerina ou óleos vegetais.

Excipientes adequados para supositórios são, por exemplo, óleos naturais e endurecidos, ceras, gorduras, polióis semissólidos e líquidos.

Excipientes adequados para soluções e xaropes para utilização enterica sao, por exemplo, agua, poliois, sacarose, açúcar invertido e glucose.

As preparações farmacêuticas da presente invenção podem também ser proporcionadas como libertação sustentada formulações ou outras formulações apropriadas.

As preparações farmacêuticas podem também conter conservantes, solubilizantes, estabilizantes, agentes molhantes, emulsificant.es, adoçantes, corantes, aromatizantes, sais para ajuste da pressão osmõtica, tampões, agentes de mascaramento ou antioxidantes.

As preparações farmacêuticas podem também conter outras agentes terapeuticamente ativos conhecidos na especialidade. A dosagem pode variar dentro de amplos limites e será, claro, ajustada aos requisitos individuais em cada caso particular. Para administração oral, uma dosagem diária dentre cerca de 0,01 e cerca de 100 mg/kg de peso corporal ao dia deveria ser apropriado em monoterapia e/ou em combinação terapêutica. Uma dosagem diária preferida está entre cerca de 0,1 e cerca de 500 mg/kg de peso corporal, mais preferida 0,1 e cerca de 100 mg/kg de peso corporal e mais preferida 1,0 e cerca de 100 mg/kg de peso corporal ao dia. Uma preparação típica conterá desde cerca de 5 % até cerca de 95 % composto ativo (p/p) . A dosagem diária pode ser administrada como uma dosagem única ou em dosagens divididas, tipicamente entre 1 e 5 dosagens ao dia.

Em certas formas farmacêuticas, a forma de profármaco dos compostos, especialmente incluindo derivados acilados (acetilados ou outros), ésteres de piridina e várias formas de sal dos presentes compostos são preferidas. Um perito ordinário na especialidade reconhecerá como modificar prontamente os presentes compostos a formas de profármaco para facilitar a administração de compostos ativos a um local alvo dentro do paciente ou organismo hospedeiro. Um perito ordinário na especialidade aproveitará também os parâmetros farmacocinéticos favoráveis das formas de profármaco, onde for aplicável, na administração dos presentes compostos ao local alvo dentro do paciente ou organismo hospedeiro para maximizar o efeito pretendido do composto.

Indicações e Tratamento

Os compostos da invenção e suas formas isoméricas e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são úteis no tratamento e prevenção da infeção por VHC. A invenção proporciona um composto de Fórmula I para utilização no tratamento de uma infeção por Vírus da Hepatite C (VHC), a dita utilização compreende administrar a um paciente em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula I. A invenção proporciona um composto de Fórmula I para utilização na inibição de replicação de VHC numa célula, a dita utilização compreende administrar o composto de Fórmula I.

Terapêutica de Combinação

Os compostos da invenção e suas formas isoméricas e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são úteis no tratamento e prevenção da infeção por VHC em separado ou quando usado em combinação com outros compostos que têm como alvo elementos virais ou celulares ou funções envolvidas no ciclo de vida do VHC, Classes de compostos úteis na invenção incluem, sem limitação, todas as classes de antivirais de VHC.

Para terapêuticas de combinação, classes mecanísticas de agentes que podem ser úteis quando combinados com os compostos da invenção incluem, por exemplo, inibidores nucleosídicos e não nucleosídicos da polimerase de VHC, inibidores de protease, inibidores de helicase, inibidores de NS4B e agentes medicinais que inibem funcionalmente o local de entrada ribossomal interno (IRES) e outros medicamentos que inibem a união da célula de VHC ou entrada de vírus, tradução de ARN de VHC, transcrição de ARN de VHC, replicação ou maturação de VHC, montagem ou libertação de vírus. Compostos específicos nestas classes e úteis na invenção incluem, mas não se limitam a, inibidores de protease de VHC macrocíclicos, heterocíclicos e lineares tais como telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503Q34), narlaprevir (SCH-9005 18), ITMN- 191 (R-7227), TMC-435350 (a.k.a. TMC-435), MK- 7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH-10S5 (inibidor de cofator de protease NS4A de VHC) , VX-500, VX-8 13, PHX-1766, PHX2 054, IDX- 136, IDX-3 16, ABT-450 EP-Q 13420 (e congéneres) e VBY-376; os inibidores nucleosidicos de polimerase de VHC (replicase) úteis na invenção incluem, mas não se limitam a, R7128, PSI-785 1, IDX-1S4, IDX-102, R1479, UNX-08 189, PSI-6130, PSI-938 e PSI-879 e vários outros análogos nucleosidicos e nucleotídicos e inibidores de VHC incluindo (mas não limitado a) aqueles derivados como nucleósidos ou nucleõtidos 2'-C-metilo modificados, nucleósidos ou nucleótidos 4'-aza modificados, e nucleósidos ou nucleótidos 7'-deaza modificados. Os inibidores nucleosidicos de polimerase de VHC (replicase) úteis na invenção, incluem, mas não se limitam a, VHC-796, VHC-371, VCH-759, VCH-916, VCH- 222, ANA-598, MK-3281, ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A- 837093, JKT-109, GL-59728 e GL-60667.

Além disso, os compostos da invenção podem ser usados em combinação com antagonistas de ciclofilina e imunofilina (por exemplo, sem limitação, compostos de DEBIO, NM-811 bem como ciclosporina e seu derivados), inibidores de cinase, inibidores de proteínas de choque térmico (por exemplo, HSP90 e HSP70), outros agentes imunomoduladores que podem incluir, sem limitação, interferões (-alfa, -beta, -ómega, -gama, -lambda ou sintéticos) tal como Intron A, Roferon-A, Canferon-A30Q, Advaferon, Infergen, Humoferon, Sumiferon MP, Alfaferone, IFN-β, Feron e semelhantes; compostos de interferão derivatizados de polietileno glicol (pegilados), tais como PEG interferão-a-2a (Pegasys), PEG interferão-α-2b (PEGIntron) , IFN-cx-conl pegilado e semelhantes; formulações de longa atuação e derivatizações de compostos de interferão tais como o interferão fusionado a albumina, Albuferon, Locteron, e semelhantes; interferões com vários tipos de sistemas de administração controlada (por exemplo, ITCA-638, ómega-interferão administrado pelo sistema de administração subcutâneo DUROS); compostos que estimulam a síntese de interferão em células, tais como resiquimod e semelhantes; interleucinas; compostos que aumentam o desenvolvimento de resposta de célula T auxiliar do tipo 1, tal como SCV-07 e semelhantes; agonistas de recetor do tipo TOLL tais como CpG- 10101 (actilon), isotorabine, ANA773 e semelhantes; timosina cí-1; ANA-245 e ANA-246; dicloridrato de histamina; propagermãnio; tetraclorodecaóxido; ampligen; IMP-321; KRN-7000; anticorpos, tais como civacir, XTL-6865 e semelhantes e vacinas profiláticas e terapêuticas tais como InnoVac C, VHC E1E2/MF59 e semelhantes. Além disso, quaisquer das utilizações descritas acima que envolvem a administração de um inibidor de NS5A, um agonista de recetor de interferão do Tipo I (por exemplo, um IFN-α) e um agonista de recetor de interferão do Tipo II (por exemplo, um IFN-γ) pode ser aumentado pela administração de uma quantidade eficaz de um antagonista de TNF-a. Antagonistas de TNF-α exemplares, não limitativos que são adequados para utilização em tais terapêuticas de combinação incluem ENBREL, REMICADE, e HUMIRA.

Além disso, os compostos da invenção podem ser usados em combinação com antiprotozoãrios e outros antivirais conhecidos por serem eficazes no tratamento de infeção por VHC tal como, sem limitação, o profármaco nitazoxanida. A nitazoxanida pode ser usada como um agente em combinação com os compostos revelados nesta invenção bem como em combinação com outros agentes úteis no tratamento de infeção por VHC tal como peginterferão a-2a e ribavirina.

Os compostos da invenção podem também ser usados com formas alternativas de interferões e interferões pegilados, ribavirina ou seus análogos (por exemplo, tarabavarina, levoviron), microRNA, compostos de pequeno ARN de interferência (por exemplo, SIRPLEX-140- N e semelhantes), análogos nucleotídicos ou nucleosídicos, immunoglobulinas, hepatoprotetores, agentes anti-inflamatórios e outros inibidores de NS5A. Inibidores de outros alvos no ciclo de vida de VHC incluem inibidores de NS3 helicase; inibidores de cofator NS4A; inibidores de oligonucleótido antissense, tais como ISIS-14803, AVI-4065 e semelhantes; pequeno ARN de grampo codificado por vetor (shRNA); ribozimas específicas de VHC tais como heptazima, RPI, 13919 e semelhantes; inibidores de entrada tais como HepeX- C, HuMax-HepC e semelhantes; inibidores de alfa glucosidase tais como celgosivir, UT-231B e semelhantes; KPE-02003002 e BIVN 401 e inibidores de IMPDH. Outros compostos de inibidor de VHC ilustrativos incluem aqueles revelados nas seguintes publicações: Patentes IJS N° 5.807.876; 6.498.178; 6.344.465; e 6.054.472; Publicações de Pedidos de Patente PCT N° W097/40028; WO98/40381; WOOO/56331, W002/04425; W003/007945; W003/010141; W003/000254; WOOl/32153; WO00/06529; WOOO/18231; WO00/10573; WO00/13708; WOOl/85172; W0003/037893; WO03/037894; WO03/037895; W002/100851; W002/100846; WO99/01582; WO00/09543; WO02/18369; W098/17679, WO00/056331; W098/22496; WO99/07734; W005/073216, W005/073195 e W008/021927.

Adicionalmente, combinações de, por exemplo, ribavirina e interferão, podem ser administradas como terapêutica de combinação múltipla com pelo menos um dos compostos da invenção. A presente invenção não se limita às classes ou compostos mencionados acima e contempla conhecidos e novos compostos e combinações de agentes biologicamente ativos. Pretende-se que as terapêuticas de combinação da presente invenção incluam qualquer combinação quimicamente compatível de um composto deste grupo inventivo com outros compostos do grupo inventivo ou outros compostos fora do grupo inventivo, contanto que a combinação não elimine a atividade antiviral do composto deste grupo inventivo ou a atividade antiviral da composição farmacêutica em si. A terapêutica de combinação pode ser sequencial, que é o tratamento com um agente primeiro e então um segundo agente (por exemplo, onde cada tratamento compreende um composto diferente da invenção ou onde um tratamento compreende um composto da invenção e o outro compreende um ou mais agentes biologicamente ativos) ou pode ser tratamento com ambos os agentes ao mesmo tempo (concorrentemente). A terapêutica sequencial pode incluir um tempo razoável após a conclusão da primeira terapêutica antes de começar a segunda terapêutica. 0 tratamento com ambos os agentes ao mesmo tempo pode ser na mesma dose diária ou em doses separadas. A terapêutica de combinação não necessita ser limitada a dois agentes e pode incluir três ou mais agentes. As dosagens para ambas a terapêutica de combinação concorrente e sequencial dependerão da absorção, distribuição, metabolismo e taxas de excreção dos componentes da terapêutica de combinação bem como outros fatores conhecidos a um perito na especialidade. Os valores de dosagem variarão também com a gravidade da condição a ser aliviada. É para ser entendido ainda que para qualquer indivíduo particular, regimes de dosagem específicos e programas podem ser ajustados ao longo do tempo de acordo com a necessidade individual e o julgamento do perito na especialidade que administra ou supervisiona a administração da terapêutica de combinação. A invenção proporciona um composto de Fórmula I para utilização no tratamento de uma infeção por Vírus da Hepatite C (VHC), a dita utilização compreende administrar a um paciente em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula I. A invenção proporciona o composto de Fórmula I para a utilização acima, que compreende ainda administrar um modulador do sistema imune ou um agente antiviral que inibe a replicação de VHC, ou uma combinação dos mesmos. A invenção proporciona o composto de Fórmula I para a utilização acima, em que o modulador do sistema imune é um interferão ou interferão quimicamente derivatizado. A invenção proporciona o composto de Fórmula I para as utilizações acima, em que o agente antiviral é selecionado a partir do grupo que consiste num inibidor de protease de VHC, um inibidor de polimerase de VHC, um inibidor de helicase de VHC, um inibidor de primase de VHC, um inibidor de fusão de VHC, e uma combinação dos mesmos.

EXEMPLOS

Condições Gerais

Os compostos da invenção podem ser feitos por uma variedade de métodos representados nas reações sintéticas ilustrativas descritas a seguir na seção de Exemplos.

Os materiais de partida e reagentes usados na preparação destes compostos geralmente estão disponíveis junto a fornecedores comerciais, tais como Aldrich Chemical Co., ou são preparados por meio de métodos conhecidos aos peritos na especialidade seguindo os procedimentos apresentados em referências tais como Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: Nova Iorque, 1991, Volumes 1-15; Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 e

Suplementos; e Organic Reactions, Wiley & Sons: Nova Iorque, 1991, Volumes 1-40. Deveria ser apreciado que os esquemas de reação sintética mostrados na seção de Exemplos são meramente ilustrativos de alguns métodos pelos quais os compostos da invenção podem ser sintetizados, e várias modificações a estes esquemas de reação sintética podem ser feitas e serão sugeridas a um perito na especialidade tendo como referência a revelação contida nesta memória descritiva.

Os materiais de partida e os intermediários dos esquemas de reação sintética podem ser isolados e purificados se for desejado usando técnicas convencionais, incluindo, mas não limitado a, filtração, destilação, cristalizaçao, cromatografia, e semelhantes. Tais materiais podem ser caraterizados usando meios convencionais, incluindo constantes físicas e dados espetrais. A nâo ser que especificado ao contrário, as reações descritas no presente documento são tipicamente conduzidas sob um atmosfera inerte a pressão atmosférica numa temperatura de reação que varia de desde cerca de -78 °C a cerca de 150 °C, com frequência de cerca de 0 °C a cerca de 125 °C, e mais com frequência e convenientemente em cerca de temperatura ambiente (ou ambiental) , por exemplo, cerca de 20 °C. Vários substituintes nos compostos da invenção podem estar presentes nos compostos de partida, adicionados a qualquer um dos intermediários ou adicionados após formação dos produtos finais por meio dos métodos conhecidos de reações de substituição ou conversão. Se os substituintes por si mesmos forem reativos, então os substituintes podem por si mesmos ser protegidos de acordo com as técnicas conhecidas na especialidade. Uma variedade de grupos de proteção é conhecida na especialidade, e pode ser utilizada. Exemplos de muitos dos grupos possíveis podem ser encontrados em "Protective Groups in Organic Synthesis" de Green et al. , John Wiley and Sons, 1999. Por exemplo, grupos nitro podem ser adicionados por meio de nitração e o grupo nitro pode ser convertido a outros grupos, tais como amino por meio de redução, e halogénio por meio de diazotização do grupo amino e substituição do grupo diazo com halogénio. Grupos acilo podem ser adicionados por meio da acilação de Friedel-Crafts. Os grupos acilo podem então ser transformados aos grupos alquilo correspondentes por meio de vários métodos, incluindo a redução de Wolff-Kishner e redução de Clemmenson. Grupos amino podem ser alquilados para formar grupos mono- e di-alquilamino; e mercapto e grupos hidroxi podem ser alquilados para formar os éteres correspondentes. Álcoois primários podem ser oxidados por meio da oxidação de agentes conhecidos na especialidade para formar ácidos ou aldeídos carboxílicos, e álcoois secundários podem ser oxidados para formar cetonas. Assim, reações de substituição ou alteração podem ser utilizadas para proporcionar uma variedade de substituintes por todas as moléculas do material de partida, intermediários, ou o produto final, incluindo produtos isolados.

Abreviaturas

As abreviaturas usadas nesta memória descritiva incluem: acetilo (Ac), ácido acético (HOAc), azo-bis-isobutirilnitrilo (AIBN), 1-N-hidroxibenzotriazol (HOBt), atmosferas (Atm), cromatografia líquida de alta pressão (HPLC), 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (9-BBN ou BBN), metilo (Me) , terc-butoxicarbonilo (Boc), acetonitrilo (MeCN), pirocarbonato de di-terc-butilo ou anidrido de boc (BOC20) , cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCI), benzoilo (Bz), benzilo (Bn), ácido m-cloroperbenzoico (MCPBA), ácido m-clorobenzoico (MCBA), butilo (Bu), metanol (MeOH), benziloxicarbonilo (cbz ou Z), ponto de fusão (pf), carbonil diimidazol (GDI) , MeS02-(mesilo ou Ms), 1,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (DABCO), espetro de massa (ms), trifluoreto de dietilaminosenxofre (DAST), metil t-butil éter (MTBE), dibenzilidenoacetona (Dba), N-carboxianidrido (NCA), 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non- 5-eno (DBM), N-bromosucinimida (MBS), 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), N-metilmorfolina (NMM), N-metilpirrolidona (NMP), 1,2-dicloroetano (DCE), clorocromato de piridínio (PCC), N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), dicromato de piridínio (PDC), diclorometano (DCM), propilo (Pr), dietilo azodicarboxilato (DEAD), fenilo (Ph), di-íso-propilazodicarboxilato, DIAD, libras por polegada quadrada (psi), di-iso-propiletilamina (DIPEA), piridina (pir), di-íso-butilalumíniohidreto, DIBAL-H, temperatura ambiente, ta ou TA, acetamida de Ν,Ν-dimetilo (DMA), terc- butildimetilsililo ou t-BuMe2Si, (TBDMS), 4-N,N- dimetilaminopiridina (DMAP) , trietilamina (Et3N ou TEA) , N,N-dimetilformamida (DMF) , triflato ou CF3S02- (Tf) , sulfóxido de dimetilo (DMSO), ácido trifluoroacético (TFA), 1,1'-bis-(difenilfosfino)etano (dppe), 2,2,6,6- tetrametilheptano-2,6-diona (TMHD), 1,1'- bis- (difenilfosfino)ferroceno (dppf), thin layer cromatografia (TLC), acetato de etilo (EtOAc), tetrahidrofurano (THF), dietil éter (Et20) , trimetilsililo ou Me3Si(TMS), etilo (Et), monoidrato de ácido p-toluenossulfõnico (TsOH ou pTsOH), disilazano de hexametilo de litio (LiHMDS), 4-Me- C6H4S02-ou tosilo (Ts), iso-propilo (i-Pr), N-uretano-N-carboxianidrido (UNCA), etanol (EtOH). Nomenclatura convencional incluindo os prefixos norman (n), iso (i-), secundário (sec-), terciário (t ere-} e neo têm o seu significado habitual quando usado com uma fração alquilo. (J. Rigaudy e D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.).

Exemplos Preparativos Preparação 1

Preparação do intermediário quiral l-((2R,3S,4S,5S)-4-fluoro-3-hidroxi- 5 -iodometil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidina-2,4-diona

M.M. 356,09 C9H10FIN2O4 3'-Deoxi-3'- -fluoro-uridina quiral (Green ChemPharma) (5,2 g, 21 mmol) e PPh3 (7,7 g, 29 mmol) foram dissolvidos em CH3CN/Piridina (95:5, 250 mL) . Iodo (7,0 g, 27,5 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente sob N2 durante 12 h. Água (80 ml) foi adicionada, e o solvente foi evaporado até a secura sob pressão reduzida. Destilação azeotrópica com CH3CN e então com CHC13 foi realizada para remover a água restante. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna de sílica gel (2-4 % de EtOH em CH2C12) para dar o produto do título (5 g) . ΧΗ RMN (300 MHz, DMS0-d6): δ 11,45 (s, 1H), /,72-7,69 (d, u = 8,1 Hz, 1H), 5,87-5,84 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,74-5,71 (m, 2H), 5,00-4,80 (dd, J = 54,3 Hz, 4,2 Hz, 1H) , 4,53-4,41 (m, 1H) , 4,32-4,19 (m, 1H) , 3,56-3,40 (m, 2H) .

Preparação 2

Preparação do intermediário quiral 1-((2R,3S,4S)-4-fluoro- 3-hidroxi- 5-metileno-tetrahidrofuran-2-il)-IH-pirimidina- 2,4-diona

M.M. 228,18 C9H9FN204 A 1-((2R,3S,4S,5S)-4-Fluoro-3-hidroxi-5-iodometil- tetrahidrofuran-2-il)-lH-pirimidina-2,4-diona quiral (10,7 g) em metanol (6 50 ml) foi adicionado NaOMe (16,2 g, 30 mmol) . A mistura de reação foi aquecida ao refluxo durante 2 h. A mistura foi arrefecida até a temperatura ambiente, Resina (H+, lavada com água) foi adicionada porção a porção a 0 °C até alcançar o pH de 6-7. A Resina foi removida por meio de filtração e lavada com metanol, e o filtrado foi evaporado até a secura sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna de sílica gel (acetato de etilo como eluente) para dar o composto do título como um sólido amarelo (2,3 g) LH RMN (3 00 MHz, DMSO-d.6) ; δ 11,53 (s, 1H), 7,75-7,76 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,14-6,12 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 6,08-6,06 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,74-5,71 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,40-5,19 (dd, J = 55,8 Hz, 4,5 Hz, 1H), 4,71-4,54 (m, 3H).MS [M+H]+ = 229,2 Preparação 3

Preparação do intermediário quiral l-((2R,3S,4S,5S)-5-azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-iodometil-tetrahidrofuran-2-il) -1H- pirimidina-2,4-diona

M.M. 3 97,11 C9H9FIN5O4 [Bn (Et) 3N] Cl (17 g, 75 mmol) e NaN3 (4,5 g, 69 mmol) foram suspensos em CH?,CN anidro (2 00 ml) e agitados à temperatura ambiente durante a noite. A suspensão fina resultante foi filtrada numa solução de THF seco (30 ml) de 1-((2R,3S,4S)-4 -fluoro-3-hidroxi-5-metileno-tetrahidrofuran-2-il)-lH-pirimidina-2,4-diona quiral (2 g, 8,8 mmol) . 4-Metilmorfolina (0,3 ml, 2,6 mmol) foi adicionada, a solução resultante foi arrefecida num banho de gelo-ãgua, e uma solução de iodo (8 g, 31 mmol) em THF anidro (30 ml) foi adicionado gota a gota ao longo de um período de 60 min. A mistura de reação foi agitada a 0-9 °C durante 16 h. N-Acetil-L-cisteína foi adicionada, e a solução foi agitada até que a borbulhagem baixasse. 0 solvente foi concentrado sob pressão reduzida até a metade do volume, então uma solução de Na2S203 a 0,1 M e solução de NaHC03 saturado aquoso foram adicionadas. A mistura foi extraída com 10 % de EtOH em CH2C12 e lavada com salmoura. As camadas orgânicas foram secas em Na2S04, filtradas e evaporadas até a secura sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por meio de cromatografia em coluna de sílica gel [acetato de etilo : CH2C12 :EtOH; 200:100:3] para obter o produto bruto desejado. 0 produto bruto foi purificado por meio de cromatograf ia em sílica gel (0~3 % de EtOH em CH2C12) duas vezes para dar o composto do título como um sólido branco (0,73 g, 21 %) ΧΗ RMN (300 MHz, CDC13) : 59,09 (s, 1H) , 7,38-7,35 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,83-5,80 (d, <J = 8,1 Hz, 1H), 5,76-5,75 (d, J" = 4,2 Hz, 1H), 5,45-5,26 (dd, J = 52,2 Hz, 5,7 Hz, 1H), 4,84-4,77 (m, 1H), 3,60-3,48 (m, 1H).

Preparação 4

Preparação do intermediário quiral éster (2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin- 1-il)-3- fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetílico do ácido 3-cloro-benzoico

M.M. 4 2 5,76 Ci6H13C1FN506

Uma solução de 1-((2R,3S,4S,5S)- 5-azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-iodomet.il-tetrahidrofuran-2-il) -IH-pirimidina- 2,4-diona quiral (0,76 g, 1,9 mmol) em CH2C12 (120 ml) foi combinada com uma mistura de (Bu)4NHS04 (796 mg, 2,35 mmol) e ácido m-clorobenzoico (500 mg, 3,2 mmol) em K2HP04 (1,75 M, 40 ml) . 0 sistema de duas fases foi agitado vigorosamente à temperatura ambiente e uma porção de ácido m-cloroperbenzoico (3,6 g) [55 % em equilíbrio com ácido 3-clorobenzoico (10 %) e água (35 %) ] foi adicionada. Após 1 h, 3x1,2 g desta mistura de reagente foi adicionado a intervalos de 1 h. Após a última adição, a mistura foi vigorosamente agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A solução de Na2S203 (0,1 M) e NaHCQ?1 saturado aquoso foram adicionados (pH 7~8). A mistura foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente durante 15 min. A camada orgânica foi separada, e a camada de água foi extraída com CH2C12. 0 extrato orgânico combinado foi lavado com NaHC03 saturado aquoso. A camada orgânica foi separada e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna de sílica gel (0~3 % de EtOH em CH2C12) para dar o composto do título como um sólido branco (0,35 g, 43 %) :lH RMN (300 MHz, CDC13) : δ 9,00 (s, 1H) , 8,09-7,91 (m, 2H) , 7,59-7,56 (m, 1H), 7,44-7,39 (m, 1H), 7,32-7,29 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,79-5,73 (m, 2H), 5,61-5,42 (dd, J = 51,9 Hz, 5,7 Hz, 1H), 4,81-4,78 (m, 1H).

Preparação 5

Preparação do intermediário quiral l-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)- lH-pirimidina-2,4-diona

M.M. 287,21 C9H10FN5O5

Uma solução de NH3 em MeOH (7 N, 10 ml) foi adicionada ao éster 2R,3S,4S,5R)-2-azido- 5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3 -fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetílico do ácido 3-cloro-benzoico quiral ((100 mg, 0,24 mmol) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por meio de HPLC prep para dar o composto do título como um sólido branco (34,5 mg, 51 %) MS [M+H] + = 288,0; 1H RMN (300 MHz, DMS0-d6): δ 11,52 (s, 1H) , 7,84-7,82 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,18-6,15 (m, 2H), 5,88-5,77 (m, 2H), 5,23-5,03 (dd, J = 53,7 Hz, 4,5 Hz, 1H), 4,60-4,40 (m, 1H), 3,54-3,53 (d, J = 5,1 Hz,2H).

Preparação 6

Preparação do intermediário quiral (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-4- fluoro-5- iodometil-tetrahidrofuran-3-il esterina-2,4-diona do ácido benzoico

M. M , 501,22 C16H13FHI5O5 A uma solução de quiral l-((2R,3S,4S,5S)-5-azido-4-fluoro-3-hidroxi- 5 -iodometil-tetrahidrofuran-2 -il)-1H-pirimidina-2,4-diona preparado na Preparação 3 (1,5 g, 3,78 mmol) e DMAP (0,87 g, 7,56 mmol) em THF seco (20 ml) sob atmosfera de azoto a 0 °C foi adicionado BzCl (0,67 ml, 5,67 mmol) gota a gota. A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 5 min. A mistura foi então diluída com EA, lavada com salmoura e HC1 aquoso (0,1 M). A camada orgânica foi separada, seca em Na2S04 e concentrada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna de sílica gel (PE : EA = 5 : 1 a 2 : 1) para propiciar o composto do título como um sólido branco (1,78 g, 94 %). MS [M+H]+ = 502 Preparação 7

Preparação do intermediário quiral (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-4- fluoro-5- benzoilmetil-tetrahidrofuran-3-il esterina-2,4-diona do ácido benzoico

M.M. 4 95,43 C23H1.8FN5O7 A uma mistura de (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-dioxo- 3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-4-fluoro- 5-iodometil- tetrahidrofuran-3-il esterina-2,4-diona do ácido benzoico quiral (1,78 g, 3,55 mmol) em DMSO, benzoato de sódio (2,56 g, 17,76 tnmol) e 18-Coroa-6 (0,187 g, 0,71 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida sob azoto a 100 °C durante 18 h. A mistura foi arrefecida até a temperatura ambiente, diluída com acetato de etilo, então lavada com salmoura e água. A camada orgânica foi separada e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna de sílica gel (PE : EA = 5:1) para propiciar o composto do título como um sólido branco (1,30 g, 74 %). MS [M+H]+ = 496 Preparação 8

Preparação do intermediário quiral 4-amino-l-((2R,3S,4S,5R)- 5-azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)-lH-pirimidin-2-ona

Μ.Μ. 2 86,22 C9HnFN604 A uma solução de (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-dioxo- 3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il) -4-fluoro- 5-benzoilmetil-tetrahidrofuran-3-il esterina-2,4-diona de ácido benzoico quiral (0,2 g, 2,6 mmol) e IH-tetrazol (0,283 g, 26 mmol) em piridina seca (5 ml) sob atmosfera de azoto a 0 °C foi adicionado 4-clorofenilfosforodicloridato (0,297 g, 7,9 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0 - 5 °C durante 5 min, então deixada que se aquecesse até a temperatura ambiente e agitada durante 5 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dividido por partições entre DCM e NaHC03 saturado. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em Na2S04 e concentrada para propiciar o intermediário 1H- tetrazol bruto 9 no Esquema 2 e usado diretamente sem purificação adicional para a seguinte etapa. 0 produto IH-tetrazol 9 (0,2 g) foi dissolvido em dioxano (70 ml) à temperatura ambiente, NH3 ·H20 (10 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 0,5 h. A análise de TLC indicou que o material de partida foi completamente consumido. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em solução metanólica (7 N, 10 ml) de NH3. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi concentrada, e o resíduo foi purificado por meio de HPLC prep para propiciar o composto do título como um sólido branco (50 mg, 50 %).

MS [M+H]+ = 287,2; ΧΗ RMN (300 MHz, DMS0-ds) : 57,752-7,727 (d, 1 H, J = 7,5), 7,352 (1, 2 H), 6,220-6,195 (d, 1 H, J = 7,5), 6,018-5,997 (d, 1 H, J ----- 6,3), 5,816-5,791 (d, 1 H, J = 7,5), 5,758-5,719 (t, 1 Η), 5,195-5,001 (dd, 1 Η, J = 4,5, J = 53,4), 4,548-4,436 (m, 1 H), 3,539-3,462 (in, 2 H) Preparação 9

Preparação do intermediário quiral éster (2R,3S,4S,5R)-2-(2-acetilamino-6-oxo-1,6-dihidro-purin-9-il) -5-azido- 4- fluoro-5-benzoilmetil-tetrahidrofuran-3-ilico do ácido benzoico (referência)

M.M. 57 6,51 C26H21FN807 A uma mistura de N-(6-oxo-6,9-dihidro-lH-purin-2-il)-acetamida (154 mg, 0,8 mmol) em MeCN (20 ml) foi adicionado BSA (325 mg, 0,8 mmol). A mistura foi aquecida a 60 °C até se tornar uma solução clara. Uma solução de quiral (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4 -fluoro-5-benzoilmetil-tetrahidrofuran-3-il esterina-2,4-diona de ácido benzoico na Preparação 7 (200 mg, 0,4 mmol) em MeCN foi adicionada, seguido da adição de TMSOTf (357 mg, 1,6 mmol) . A mistura de reação resultante foi aquecida sob irradiação de micro-ondas a 100 °C durante 1 h. A mistura foi arrefecida até a temperatura ambiente, então extinta com solução de NaHC03 sat. (10 ml) . A mistura foi extraída com EA (10 mlx3). A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura (10 ml), seca com Na2S04, e concentrada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna (DCM:MeOH = 50:1) para propiciar o composto do título bruto (120 mg, 51 %) LC-MS (M+H)+ = 577,2; LC-MS (M+Na)+ = 599,1

Preparação 10

Preparação do intermediário quiral 2-amino-9-( (2R,3S,4S,5R)- 5-azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)-1,9-dihidro-purin-6-ona (referência)

M.M. 326,25 CioHnFNsCU A uma solução do éster (2R,3S,4S,5R)-2-(2-acetilamino- 6-oxo-1,6-dihidro-purin-9-il)- 5-azido-4-fluoro-5- benzoilmetil-tetrahidrofuran-3-ílico do ácido benzoico quiral bruto (12 0 mg, 0,2 6 mmol) em MeOH (2 ml) foi adicionada solução metanólica (2 ml, 7 N) de amónia. A mistura de reação foi agitada a 25 °C durante 18 h. A análise de TLC indicou que a reação foi completada. A mistura foi concentrada a vácuo, purificada por meio de HPLC prep para propiciar o composto do título como um sólido branco (15 mg, 22 %). LC-MS (M+H)+= 327,0 Exemplo 1

Preparação de éster isopropílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3 -fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-fenoxi-fosforilamino}-propiõnico

1-1

Μ.Μ. 556,45 C21H26FN609P

Etapa A.

Cloridrato de 2-aminopropanoato de (S)-isopropilo (Oakwood, 300 mg, 1,95 mmol) e fosforodicloridato de fenilo (Aldrich, 397 mg, 280 μΐ, 179 mmol) foram suspensos em DCM anidro (10 ml). A reação foi arrefecida até -78 °C.

Trietilamina (362 mg, 498 μΐ, 3,58 mmol) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 1 h, então deixada que se aquecesse até a temperatura ambiente e agitada durante 5 h. 0 solvente foi removido, o resíduo foi lavado com éter seco. 0 filtrado foi concentrado para dar 2- (cloro(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-isopropilo bruto como um óleo amarelo claro (0,5 g, 91 %) e usado sem purificação adicional.

Etapa B. A uma solução de quiral 1-( (2R, 35,4S,5R)-5-Azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)- 1H- pirimidina-2,4-diona preparada na Preparação 5 (54 mg, 188 μιηοΐ) em THF anidro (3,75 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (470 μΐ, 470 pmol) gota a gota. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, então a solução de THF (0,5 M) de 2 -(cloro(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-isopropilo bruto (940 μΐ, 470 pmol) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Então MeOH (2 ml) foi adicionado. 0 solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 40 g, 0-15 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco pérola (22 mg, 21 %) LC-MS (M+H)+ = 557,0 Exemplo 2

Preparação de éster etílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)- 2-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2 -iImetoxi] -fenoxi-fosforilamino}-propionico

1-2

M . M . 542,42 O 2 0^24 FM^Oc) P

Etapa A.

Cloridrato de 2-aminopropanoato de (S)-etilo (Aldrich, 300 mg, 1,95 mmol) e fosforodicloridato de fenilo (Aldrich, 434 mg, 306 μΐ, 195 mmol) foram suspensos em DCM anidro (20 ml) . A reação foi arrefecida até -78 °C. Trietilamina (395 mg, 544 μΐ, 3,91 mmol) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 1 h, então deixada que se aquecesse até a temperatura ambiente e agitada durante 5 h. 0 solvente foi removido, o resíduo foi lavado com éter seco. 0 filtrado foi concentrado para dar 2 -(cloro(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-etilo bruto como um óleo amarelo claro (0,5 g, 88 %) e usado sem purificação adicional.

Etapa B. A uma solução de 1-((2R,3S,4S,5R)-5-Azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)- 1H- pirimidina-2,4-diona quiral preparada na Preparação 5 (50 mg, 174 μιτιοί) em THF anidro (5 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (435 μΐ, 435 μιηοΐ) gota a gota. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, então a solução de THF (0,5 M) de 2- (cloro(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-etilo bruto (870 μΐ, 435 μπιοί) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Então MeOH (2 ml) foi adicionado. 0 solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 40 g, 0-15 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco pérola (7 mg, 7,4 %) . LC-MS (M+H)+ = 543,0 Exemplo 3

Preparação de éster etílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)- 2-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-(naftalen-1-iloxi)-fosforilamino]-propiónico

1-3

M.M. 592,48 C24H25FN6O9P

Etapa A.

Naftalen-1-ol (Aldrich, 0,72 g, 4,99 mmol) e oxicloreto de fósforo (V) (Aldrich, 767 mg, 466 μΐ, 5,00 mmol) foram suspensos em éter anidro (20 ml), e a temperatura foi arrefecida até -78 °C. Trietilamina (505 mg, 6 95 μΐ, 4,9 9 mmol) foi adicionada gota a gota e a

mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 0,5 h. A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante a noite. A mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado para dar fosforodicloridato de naftalen-l-ilo bruto como um óleo amarelo claro (1,3 g, 100 %) e usado para a seguinte etapa sem purificação adicional. Etapa B.

Cloridrato de 2-aminopropanoato de (S)-etilo (Aldrich, 300 mg, 1,95 mmol) e fosforodicloridato de naftalen-1-ilo (510 mg, 1,95 mmol) foram suspensos em DCM anidro (30 ml). A reação foi arrefecida até -78 °C. Trietilamina (395 mg, 544 μΐ, 3,91 mmol) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 1 h, então deixada que se aquecesse até a temperatura ambiente e agitada durante 5 h. 0 solvente foi removido, e o resíduo foi lavado com éter seco. 0 filtrado foi concentrado para dar 2- (cloro(naftalen-1-iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-etilo bruto como um óleo amarelo claro (0,6 g, 90 %) e usado sem purificação adicional.

Etapa C. A uma solução de 1-( (2R,3S,4S,5R)-5-Azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il) - 1H- pirimidina-2,4-diona quiral preparada na Preparação 5 (90 mg, 313 pmol) em THF anidro (6,25 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (783 μΐ, 783 μηιοί) gota a gota. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, então a solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-1- iloxi)fosforilaminão)propanoato de (2S)-etilo bruto (1,57 ml, 783 pmol) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Então MeOH (2 ml) foi adicionado. 0 solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 40 g, 0- 15 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido castanho claro (70 mg, 38 %) . LC-MS (M+H)+ = 593,0 Preparação 11

Preparação do intermediário quiral 4-amino-l- ((2R,3S,4S,5R)- 5-azido-4-fluoro-5-hidroximetil-3 -trietilsilaniloxi-tetrahidrofuran-2-il)-IH-pirimidin-2-ona

M.Mc 400,49 015^^25-^^604^4 A uma solução de 4-amino-l-((2R,3S,4S, 5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroxi- 5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2-ona quiral preparada na Preparação 8 (300 mg, 1,05 mmol) em piridina (24,5 ml) a -5 °C foi adicionado clorotrietilsilano (Fluka, 440 mg, 2,92 mmol) gota a gota ao longo de um período de 15 min. A mistura de reação foi agitada a 0 °C durante 2 h, então extinta pela adição de metanol (5 ml) . A mistura foi purificada diretamente por meio de cromatografia flash (5-15 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco (0,29 g, 69 %)

Preparação 12

Preparação de intermediário éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,SR)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)- 2-azido-3-fluoro-4-trietilsilaniloxi-tetrahidrofuran-2 -ilmetoxi]-(naftalen-1-iloxi)-fosforilamino]-propiõnico

M.M. 719,79 C31H43FN7O8PSÍ

Etapa A.

Cloridrato de 2-aminopropanoato de (S)-isopropilo (Oakwood, 0,706 g, 4,21 mmol) e fosforodicloridato de naftalen-l-ilo preparado no Exemplo 3 Etapa A (1,1 g, 4,21 mmol) foi suspenso em DCM anidro (25 ml) . A reação foi arrefecida até -78 °C. Trietilamina (852 mg, 1,17 ml, 8,42 mmol) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação foi agitada a -78 °C durante 1 h, então aquecida até a temperatura ambiente e agitado durante 5 h. 0 solvente foi removido, e o resíduo foi lavado com etil éter seco e filtrado. 0 filtrado foi concentrado para dar 2-(cloro(naftalen-1-iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-isopropilo bruto como um óleo amarelo claro (1,3 g, 87 %) e usado sem purificação adicional.

Etapa B. A uma solução de 4-amino-l-((2R,35,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-5-hidroximetil-3 -trietilsilaniloxi-tetrahidrofuran- 2-il)-lH-pirimidin-2-ona quiral preparada na Preparação 11 (0,29 g, 724 pmol) em THF anidro (42 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (1,81 ml, 1,81 mmol) gota a gota. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 15 min, então a solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-1-iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-isopropilo bruto (3,62 ml, 1,81 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, então seguido da adição de solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (0,9 ml, 0,9 mmol) e solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-1- iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-isopropilo bruto (1,81 ml, 0,9 mmol) sequencialmente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h adicionais. MeOH (5 ml) foi adicionado. 0 solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 40 g, 2-18 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco pérola (430 mg, 83 %) . LC-MS (M+H)+ = 720,3 Exemplo 4

Preparação de éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2 -azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran- 2-ilmetoxi]- (naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico

1-4

M.M. 605,52 C25H29FN708P Éster isopropílico do ácido (S)-2-[ [ (2R,3S,4S,5R)-5-(4-Amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3 -fluoro-4-trietilsilaniloxi-tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi) -fosforilamino]-propiónico preparado na Preparação 12 (0,43 g, 597 μιτιοί) foi dissolvido em ácido acético (80 %, 28 ml) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo ácido acético foi removido por meio da concentração azeotrópica com MeOH três vezes. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 2-18 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco (0,2 g, 55 %) . LC-MS (M+H)+ = 606,1 Exemplo 5

Preparação de éster benzílico do ácido (S)-2- [[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2 -azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran- 2-ilmetoxi]- (naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico

1-5

Μ.Μ, 653,57 C29H29FN7O8P

Etapa A.

Cloridrato de 2-aminopropanoato de (S)-benzilo (Chem Irnpex, 0,66 g, 3,06 mmol) e fosforodicloridato de naftalen- 1-ilo preparado no Exemplo 3 Etapa A (0,8 g, 3,06 mmol) foi suspenso em DCM anidro (15 ml). A reação foi arrefecida até -78 °C. Trietilamina (619 mg, 852 μΐ, 6,12 mmol) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação foi agitada a - 78 °C durante 1 h, então aquecida até a temperatura ambiente e agitada durante 5 h. 0 solvente foi removido, e o resíduo foi lavado com etil éter seco e filtrado. 0 filtrado foi concentrado para dar 2-(cloro(naftalen- 1-iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)- benzilo bruto como um óleo amarelo claro (1 g, 81 %) e usado sem purificação adicional.

Etapa B. A uma solução de 4-amino-l-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroxi- 5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2-ona quiral preparada na Preparação 8 (85 mg, 292 pmol) em THF anidro (8,5 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (742 μΐ, 742 μπιοί) gota a gota. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, então a solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-1- iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-benzilo bruto (1,48 ml, 742 mmol) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, então seguida da adição de solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (371 μΐ, 371 μπιοί) e solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-1- iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-benzilo bruto (0,74 μΐ, 371 μπιοί) sequencialmente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h adicionais. MeOH (2 ml) foi adicionado. 0 solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 0-20 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido amarelo claro (10 mg, 5 %). LC-MS (M+H)+ = 654,1 Exemplo 6

Preparação de éster etílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)- 5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-l-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran- 2- ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico

1-6

M.M. 591,50 C24H27FN708P A uma solução de 4-amino-l-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroxi- 5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2-ona quiral preparada na Preparação 8 (50 mg, 175 μπιοί) em THF anidro (5 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (437 μΐ, 43 7 μπιοί) gota a gota. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, então a solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-l- iloxi )fosforilaminão)propanoato de (2S)-etilo bruto preparado no Exemplo 3 Etapa B (873 μΐ, 437 μπιοί) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, então seguida da adição de solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (219 μΐ, 219 μπιοί) e solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-1-iloxi)fosforilamino)propanoato de

(2S) -benzilo bruto (437 μΐ, 219 μπιοί) sequencialmente, A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h adicionais. MeOH (2 ml) foi adicionado. 0 solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 0-16 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco (5 mg, 5 %) , LC-MS (M+H)+ = 592,2 Exemplo 7

Preparação de éster isopropílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2 -azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran- 2-ilmetoxi]- fenoxi-fosforilamino}-propiónico

1-7

M.M. 555,46 C21H27FN7O8P A uma solução de 4-amino-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroxi- 5-hidroximetil-tetrahidrofuran- 2 -i1)-1H-pirimidin-2-ona quiral preparada no Exemplo 8 (43 mg, 150 μπιοί) em THF anidro (8 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (376 μΐ, 376 μπιοί) gota a gota. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, então a solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(fenoxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-isopropilo bruto preparado no Exemplo 1 Etapa A (751 μΐ, 376 μπιοί) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, então seguido da adição de solução de THF (Aldrich, 1 M) de terc-butilmagnésio cloreto (188 μΐ, 188 μπιοί) e solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-1- iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-benzilo bruto (376 μΐ, 188 μπιοί) sequencialmente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. MeOH (2 ml) foi adicionado. 0 solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 0-18 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco (3 mg, 4 %). LC-MS (M+H) + = 556,0 Preparação 13

Preparação do intermediário 4-amino-l-[(2R,3S,4S, 5R)-5-azido-3-(terc-butildifenil-silaniloxi)-4-fluoro-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il]-lH-pirimidin-2-ona quiral

M.M. 524,63 CssHsgFN^Si A uma solução de 4-amino-l-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroxi-5-hidroximetil-tetrahidro- furan-2-il)-1H-pirimidin-2-ona quiral preparada no Exemplo 8 (50 mg, 175 μπιοί) e imidazol (119 mg, 1,75 mmol) em DMF anidro (2,62 ml) foi adicionado terc-butilclorodifenilsilano (Aldrich, 480 mg, 1,75 mmol) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 20 min. A mistura foi diluída com acetato de etilo, lavada com água diversas vezes e salmoura. A camada orgânica foi separada, seca em MgS04, e concentrada. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatograf ia flash (0-18 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco (36 mg, 39 %) Preparação 14

Preparação de intermediário éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)- 2-azido-4-(terc-butil-difenil- silaniloxi)-3-fluoro- tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico

M.M. 843,93 C41H47FN7O3PSÍ A uma solução de quiral 4-amino-1-[(2R,3S,4S,5R)-azido-3-(terc-butil-difenil-silaniloxi)-4-fluoro-5-hidroximetil-tetrahidrofuran-2-il]-lH-pirimidin-2-ona (20 mg, 3 8,1 pmol) em THF anidro (4 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de tere-butilmagnésio (95,3 μΐ, 95,3 μιτιοί) gota a gota. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 15 min, então a solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-l- iloxi) f osf orilamino) propanoato de (2S)-isopropilo bruto preparado 11a Preparação 12 Etapa A (191 μΐ, 95,3 μιτιοί) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, então seguido da adição de solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (48 μΐ, 48 μιτιοί) e solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-l-iloxi)fosforilaminão)propanoato de (2S)-isopropilo bruto preparado na Preparação 12 Etapa A (96 μΐ, 48 μηιοί) sequencialmente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. MeOH (2 ml) foi adicionado. 0 solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 40 g, 2-18 % de MeOH em DCM) para dar o composto do título como um sólido branco (22 mg, 68 %). LC-MS (M+H)+ = 844,2 Exemplo 8

Preparação de éster isopropílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2 -azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-hidroxi-fosforilamino}-propiónico quiral 1-8

M.M. 4 7 9,36 C15H23FN708P A uma solução de éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,SR)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido —4 — (t e r c — bu t r 1 — di f em 1 — s 11 am 1 oxi) —3 —fluoro — tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino] -propiónico (18 mg, 21,3 μιποί) em THF (2,88 ml) foi adicionada uma solução de THF (1 M) de TBAF (21,3 μΐ, 21,3 μιηοΐ) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. 0 solvente foi removido, e o resíduo foi purificado por meio de HPLC Prep para dar o composto do título como um sólido branco (6 mg, 59 %) . LC-MS (M+H)+ = 479,9 Exemplo 9

Preparação de éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3 ~ fluoro-4-propioniloxi-tetrahidrofuran-2 ~ ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico

1-9

M.M, 661,59 C28H33FN7G9P A uma solução de éster (2R,3S,4S,5R)-2-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-l-il)- 5-azido-4-fluoro-5 - hidroximetil- tetrahidrofuran-3-ílico do ácido propiónico quiral (a preparação será revelada separadamente, 25 mg, 73,0 umol) em THF anidro (5 ml) foi adicionada uma solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (183 μΐ, 183 μπιοί) gota a gota. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min, então a solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-l-iloxi)fosforilamino)propanoato de (2S)-isopropilo bruto preparado 11a Preparação 12 Etapa A (365 μΐ, 183 umol) foi adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, então seguido da adição de solução de THF (Aldrich, 1 M) de cloreto de terc-butilmagnésio (92 μΐ, 92 μπιοί) e solução de THF (0,5 M) de 2-(cloro(naftalen-l- iloxi) f osf orilamino) propanoato de (2S)-isopropilo bruto preparado na Preparação 12 Etapa A (183 μΐ, 92 μπιοί) sequencialmente. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. MeOH (2 ml) foi adicionado. O solvente foi removido. 0 resíduo foi purificado por meio de cromatografia flash (sílica gel, 40 g, 2-18 % de MeOH em DCM) , então Prep-HPLC para dar ο

composto do título como um sólido branco (28 mg, 58 %). LC-MS (M+H)+ = 662,2 Exemplos Biológicos Ensaio de replicão de VHC

Este ensaio mede a capacidade dos compostos de fórmula I de inibir a replicação de ARN de VHC, e portanto sua potencial utilidade para o tratamento de infeções por VHC. 0 ensaio utiliza um repórter como uma leitura simples para nível de ARN de replicão de VHC intracelular. 0 gene de Renilla luciferase foi introduzido na primeira grelha de leitura aberta de uma construção de replicão genótipo lb NK5.1 (N. Krieger et al. , J. Virol. 2001 75(10):4614), imediatamente após a sequência de local de entrada ribossomal interna (IRES) , e fusionado com o gene de neomicina fosfotransferase (NPTII) via um péptido 2A de autoclivagem do vírus da doença de boca e pé (M.D. Ryan & J. Drew, EMBO 1994 13(4) :928-933) . Após a transcrição in vitro o ARN foi electroporado em células Huh7 de hepatoma humano, e colónias resistentes a G418 foram isoladas e expandidas. A linha de células 2209-23 estavelmente selecionada contém ARN subgenómico de VHC replicativo, e a atividade de Renilla luciferase expressa pelo replicão reflete o seu nível de ARN nas células. 0 ensaio foi levado a cabo em placas em duplicata, uma em branco opaco e uma em transparente, com a finalidade de medir a atividade antiviral e citotoxicidade de um composto químico em paralelo assegurando que a atividade observada não é devido a proliferação celular diminuída ou devido a morte celular.

As células de replicão de VHC (2209-23), que expressam o repórter de Renilla luciferase, foram cultivadas em MEM de Dulbecco (n° de cat. de Invitrogen 1056 9-010) com 5 % soro bovino fetal (FBS, n° de cat. de Invitrogen 10082-147) e plaqueadas numa placa de 96 poços a 5000 células por poço, e incubadas durante a noite. Vinte e quatro horas depois, diferentes diluições de compostos químicos no meio de crescimento foram adicionadas às células, que foram então incubadas ainda a 37 °C durante três dias. No final do tempo de incubação, as células nas placas brancas foram colhidas e a atividade de luciferase foi medida usando o sistema de ensaio de R. luciferase (n° de cat. de Promega E2S20). Todos os reagentes descritos no seguinte parágrafo foram incluídos no kit do produtor, e as instruções do fabricante foram seguidas para as preparações dos reagentes. As células foram lavadas uma vez com 100 μΐ de solução salina tamponada com fosfato (pH 7,0) (PBS) por poço e lisadas com 20 μΐ de tampão de lise de ensaio de Ix R. luciferase antes da incubação à temperatura ambiente durante 20 min. A placa foi então inserida no luminómetro de microplaca Centro LB 960 (Berthold Technologies) , e 100 μΐ de tampão de ensaio de R. luciferase foram injetados em cada poço e o sinal medido usando um programa de medição de 2 segundos com 2 segundos de atraso. IC50, a concentração do fãrmaco requerido para reduzir o nível de replicão em 50 % em relação ao valor de controlo de célula não tratada, pode ser calculado a partir do gráfico de redução percentual da atividade de luciferase vs. concentração de fármaco como descrito acima. 0 reagente WST-1 da Roche Diagnostic (n° de cat. 1644807) foi usado para o ensaio de citotoxicidade. Dez microlitros de reagente WST-1 foram adicionados a cada poço das placas transparentes incluindo poços que contêm meios em separado como referências. As células foram então incubadas durante 2ha37° C, eo valor de OD foi medido usando o leitor de placa de microtitulação MRX Revelation (Lab System) a 450 nm (filtro de referência a 650 nm) . De novo, CC50, a concentração do fãrmaco requerido para reduzir o nível de replicão em 50 % em relação ao valor de controlo de célula não tratada, pode ser calculado a partir do gráfico de redução percentual do valor de WST-1 vs. concentração de fãrmaco como descrito acima.

Os dados biológicos representativos são mostrados no Quadro II a seguir: _QUADRO 11 ._

Será entendido que as referências no presente documento ao tratamento se estendem à profilaxia bem como ao tratamento de condições existentes, e que o tratamento de animais inclui o tratamento de seres humanos bem como outros mamíferos. Além disso, o tratamento de uma infeção por Vírus da Hepatite C (VHC), como usado no presente documento, também inclui tratamento ou profilaxia de uma doença ou uma condição associada a ou mediada pela infeção por Vírus da Hepatite C (VHC), ou os sintomas clínicos da mesma.

As caraterísticas reveladas na descrição anterior, ou as seguintes reivindicações, expressas em suas formas específicas ou em termos de um meio para realizar a função revelada, ou um método ou processo para obter o resultado revelado, como for apropriado, podem, separadamente, ou em qualquer combinação de tais caraterísticas, ser utilizadas para realizar a invenção em diversas formas da mesma. A invenção anterior foi descrita em alguns pormenores por meio de ilustração e exemplo, para propósitos de clareza e entendimento. É para ser entendido que a descrição acima é pretendida que seja ilustrativa e não restritiva. 0 âmbito da invenção deveria, portanto, ser determinado não com referência à descrição acima, mas deveria, ao invés disso, ser determinado com referência às seguintes reivindicações anexas.

DOCUMENTOS REFERIDOS NÃ DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, ο IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 5807876 A [0124] • US 6498178 B [0124] • US 6344465 B [0124] • US 6054472 A [0124] • WO 9740028 A [0124] • WO 9840381 A [0124] • WO 0056331 A [0124] • WO 0204425 A [0124] • WO 03007945 A [0124] • WO 03010141 A [0124] • WO 03000254 A [0124] • WO 0132153 A [0124] • WO 0006529 A [0124] • WO 0018231 A [0124] • WO 0010573 A [0124] • WO 0013708 A [0124] • WO 0185172 A [0124] • WO 003037893 A [0124] ® WO 03037894 A [0124] • WO 03037895 A [0124] • WO 02100851 A [0124] • WO 02100846 A [0124] • WO 9901582 A [0124] • WO 0009543 A [0124] • WO 0218369 A [0124] • WO 9817679 A [0124] • WO 00056331 A [0124] • WO 9822496 A [0124] • WO 9907734 A [0124] • WO 05073216 A [0124] • WO 05073195 A [0124] • WO 08021927 A [0124]

Documentos de não patente citados na descrição • R. G. GISH. Sem. Liver. Dis., 1999, vol. 19, 35 [0002] • DAVID B. SMITH et al. J. Med. Chem., 2009, vol. 52, 2971-2978 [0004] • V. LOHMANN et al. Science, 1999, vol. 285, 110-113 [0005] • SMITH, DAVID B. ; KALAYANOV, GENADIY ; SUND, CHRISTIAN ; WINQVIST, ANNA ; MALTSEVA, TATIANA ; LEVEQUE, VINCENT J.-P. ; RAJYAGURU, SONAL ; LE POGAM, SOPHIE ; NAJERA, ISABEL ; BENKESTOCK, KURT et al. Journal of Medicinal Chemistry, 2009, vol. 52 (9), 2971-2978 [0093] • GOSSELIN, G. et al. Collect. Czech. Chem. Commun., 2006, vol. 71 (7), 991-1010 [0094] • SMITH, D. B. et al. J. Med. Chem. , 2009, vol. 52 (9) , 2971-2978 [0094] [0095] • FIESER ; FIESER. Reagents for Organic Synthesis. Wiley õ Sons, 1991, vol. 1-15 [0132] • RODD. Chemistry of Carbon Compounds. Elsevier Science Publishers, 1989, vol. 1-5 [0132] • Organic Reactions. Wiley õ Sons, 1991, vol. 1-40 [0132] • GREEN et al. Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley and Sons, 1999 [0135] • IUPAC. J. RIGAUDY ; D. P. KLESNEY. Nomenclature in Organic Chemistry. Pergamon Press, 1979 [0136] • N. KRIEGER et al. J. Virol. , 2001, vol . 75 (10) , 4614 [0189] • M.D. RYAN ; J. DREW. EMBO, 1994, vol . 13 (4) , 928-933 [0189]

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Um composto de Fórmula I

I em que: R1 é H, Ci -7 haloalquilo, ou arilo, em que arilo é fenilo ou naftilo, opcionalmente substituído com um ou mais Ci_7 alquilo, C2-7 alcenilo, C2-7 alcinilo, Ci_7 alcoxi, halo, Ci-7 haloalquilo, -N(Ria)2, acilamino, -S02N(Ria)2, -CORlb, -S02 (Rlc) , -NHS02 (R1c) , nitro ou ciano; cada Rla é independentemente H ou Ci_7 alquilo,· cada Rib é independentemente -0Ria ou -N(Rla)2; cada Rlc é Ci_7 alquilo,* R2a e R2d sâo independentemente H ou CV7 alquilo,· R. θ C‘L-7 alquilo, fsriilo, ou foriilo C-l_7 alquilo/ R4 é H, Ci-7 alquilo, ou R2d e R4 juntos formam (CH2)3; R5 é H, C (=0) Rlc, C (=0) Rlb, P (=0) (0R1) (0Rla) , ou P (=0) (0R1 2) (NR4R7) ; e Rs é

ou > ou um sal farmacologicamente aceitável do mesmo. 1 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que R4 2 é H. 3. 0 composto de acordo com a reivindicação 2, em que R1 é naftilo ou fenilo. 4. 0 composto de acordo com a reivindicação 3, em que R2a é H. 5. 0 composto de acordo com a reivindicação 4, em que R2b é metilo, 6. 0 composto de acordo com a reivindicação 5, em que RJ e isopropilo, etilo, ou benzilo. 7. 0 composto de acordo com a reivindicação 6, em que R5 é H. 8. 0 composto de acordo com a reivindicação 6, em que R5 é C (=0) Rlc . 9. 0 composto de acordo com a reivindicação 8, em que Rlc é etilo. 10. 0 composto de acordo com a reivindicação 7, em que R6 é

1 1 0 composto de acordo com a reivindicação 7, em que Rs é

12. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que o dito composto é selecionado a partir do grupo que consiste em: Éster isopropílico do ácido (S)-2-{ [(2R,3S,4S,5R)-2 -azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-fenoxi-fosforilamino}-propiónico; Éster etílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2 -ilmetoxi]-fenoxi-fosforilamino}-propiónico; Éster etílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-dioxo-3,4-dihidro-2H-pirimidin-l-il)-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-ilmetoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico; Éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-l-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-il-metoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico; Éster benzílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3 -fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-il- metoxi]-(naftalen-l-iloxi)-fosforilamino]-propiónico; Éster etílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino- 2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3 -fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-il- metoxi]-(naftalen-l-iloxi)- fosforilamino]-propiónico; Éster isopropílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3 -fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-il- metoxi]-fenoxi- fosforilamino}-propiónico; Éster isopropílico do ácido (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3 -fluoro-4-hidroxi-tetrahidrofuran-2-il- metoxi]-hidroxi- fosforilamino}-propiónico; e Éster isopropílico do ácido (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-oxo-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-propioniloxi-tetrahidrofuran- 2-ilmetoxi]-(naftalen-1-iloxi)-fosforilamino]-propiõnico.
13. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-12 para utilização no tratamento ou profilaxia de infeção por Vírus da Hepatite C (VHC).
14. Uma composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-12 e veículos terapeuticamente inertes.