PT2325648E

PT2325648E - Método para detetar cancro

Info

Publication number: PT2325648E
Application number: PT98050107T
Authority: PT
Inventors: Fumiyoshi Okano; Kana Suzuki
Original assignee: Toray Industries
Priority date: 2008-08-05
Filing date: 2009-08-05
Publication date: 2014-06-24
Also published as: BRPI0911925B8; EP2325648A1; BRPI0911925A2; MX2011001445A; DK2325648T3; KR20110052665A; EP2733492B1; CN102171570A; EP2325648B1; JPWO2010016527A1; CA2732980C; WO2010016527A1; EP2733492A1; PL2733492T3; RU2671497C2; AU2009278387B2; AU2015238877A1; BRPI0911925B1; US20110136121A1; KR101606779B1

Description

ΕΡ2325648Β1

DESCRIÇÃO

MÉTODO PARA DETETAR CANCRO

CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se a um método para detetar cancro utilizando a CAPRINA-1 como um marcador de tumor.

ARTE ANTECEDENTE 0 cancro é a causa principal de morte. 0 tratamento realizado atualmente para cancro é principalmente terapêutica sintomática que consiste essencialmente em terapêutica cirúrgica com uma combinação de terapêutica de radiação e quimioterapêutica. Devido aos avanços na tecnologia médica, o cancro é agora quase uma doença curável se for detetado cedo. Assim, é agora necessário um método para detetar cancro, através do qual a deteção pode ser convenientemente realizada utilizando soro, urina ou afins sem impor sobrecargas físicas ou económicas em pacientes com cancro.

Como um método diagnóstico de cancro que utiliza sangue ou urina, um método para medir um produto de tumor tal como um marcador de tumor tornou-se recentemente popular. 0 termo "produto de tumor" refere-se a um antigeno associado a tumor, uma enzima, uma proteína específica, um metabolito, um gene de tumor, um produto de gene de tumor, um gene supressor de tumor e afins. 0 antigeno carcinoembriónico CEA, glicoproteína CA19-9, CA125, antigeno específico da próstata PSA, calcitonina, que são hormonas peptídicas produzidas na tiróide e afins são utilizados como marcadores de tumor para diagnóstico de alguns tipos de cancro. Contudo, marcadores de tumor úteis 1 ΕΡ2325648Β1 para diagnóstico de cancro estão ausentes para muitos tipos de cancro. Além disso, a maioria dos marcadores de tumor atualmente conhecidos estão presentes em apenas quantidades residuais (na ordem aproximadamente dos pg/mL) nos fluidos corporais. Portanto, são necessários métodos de medição altamente sensíveis ou técnicas especiais para detetar tais marcadores de tumor. Nas circunstâncias atuais, espera-se que a provisão de um novo meio de testar cancro capaz de detetar vários tipos de cancro com elevada sensibilidade envolvendo um procedimento conveniente procedimento crie aplicações de diagnóstico para vários tipos de cancro.

Além disso, tal meio de testar cancro é muit útil se for capaz de não só detetar cancro mas também diagnosticar cancro que se desenvolveu numa localização invisível a olho nú, a extensão do cancro, a malignidade ou curso pós-operatório do cancro, reincidência, metástases e afins.

Especificamente, se o diagnóstico do cancro que se desenvolveu numa localização invisível a olho nú se torna possível, tal meio de testar cancro seria útil para deteção precoce de cancro numa localização tal como uma parte intraperitoneal que é difícil de reconhecer. Além disso, pode ser detetado um tumor que não tem um tamanho excessivamente visível tal como cancro que não é detetado mesmo por ultrassonografia, CT (Tomografia computadorizada) ou MRI (imagem de ressonância magnética nuclear).

Além disso, a extensão do cancro é classificado com base no grau com que um tumor se espalha no local primário e na presença ou ausência de metástases para nódulos linfáticos regionais ou órgãos distantes. Em geral, existem 5 estádios de doença (cada um referido como "estádio") e números mais altos de estádios indicam estádios da doença mais avançados. Estritamente falando, a definição do 2 ΕΡ2325648Β1 estádio difere em função do órgão. Contudo, por exemplo, um cancro no estádio 0 é um cancro que permanece intraepitelial e um cancro no estádio IV é um cancro que metastizou para uma localização distantes. Se for observada tal extensão do cancro, as decisões acerca dos cursos de tratamento apropriados bem como o diagnóstico dos efeitos terapêuticos de um agente anti-cancerigeno tornam-se possíveis. Como exemplos específicos de decisões acerca de cursos de tratamento, no caso do cancro da próstata e afins, existe um tipo que não requer tratamento porque tem uma malignidade muito baixa e quase nunca progredirá. Por oposição, existe um tipo que requer tratamento porque é progressivo e metastatiza para o osso ou afins e causa uma morte dolorosa aos pacientes. As terapêuticas tais como terapêutica hormonal e cirurgia extirpative estão cada uma associadas com uma reação adversa. Assim, terapêuticas deveriam ser determinadas de forma apropriada e decididas no momento. Além disso, se a avaliação referente à seleção de um agente anti-cancerígeno pode ser feita de forma apropriada ou se o momento ou afins para o término da administração de um agente anti-cancerígeno pode ser determinado de forma apropriada, as cargas físicas e económicas nos pacientes também podem ser reduzidas. Portantp, é importante ser capaz de diagnosticar a extensão do cancro.

Uma das características das células cancerígenas é que sofrem blastogénese; ou seja, desdiferenciação. Com exceção de alguns tipos de cancro, células cancerígenas fracamente diferenciadas ou indiferenciadas com um baixo grau de diferenciação rapidamente crescem após a formação de metástases e resultam num prognóstico fraco após terapêutica. Diz-se que tal cancro tem elevada malignidade. Contrariamente, células cancerígenas altamente diferenciadas com um elevado grau de diferenciação retêm as 3 ΕΡ2325648Β1 características estruturais e funcionais dos órgãos afetados. Diz-se que tais cancros têm malignidade relativamente baixa. Se a malignidade do cancro pode ser determinada, podem ser tomadas as seguintes medidas. Mesmo que o tumor seja pequeno, pode ser assegurada uma margem cirúrgica ampla no momento da remoção do tumor, quando a malignidade é elevada. Além disso, é possível o seguimento enquanto se presta atenção a uma ampla gama de tecido periférico.

Se o diagnóstico dos cursos pós-operatórios incluindo reincidência e metástases é possível, o diagnóstico de se um tumor pode ser completamente removido ou não cirurgicamente torna-se possível. A remoção incompleta do tumor resulta provavelmente em reincidência. Assim, tal diagnóstico pode providenciar critérios para determinar se realizar de forma mais cuidadose um seguimento em intervalos curtos ou se realizar uma nova operação de forma precoce se necessário. Além disso, se ocorre reincidência, existe uma elevada possibilidade de deteção precoce. A deteção é frequentemente retardada quando ocorrem metástases distantes. Contudo, se o diagnóstico das metástases se torna possível, torna-se possível providenciar critérios pelos quais os intervalos de teste podem ser ampliados para incluir outras áreas que não o local de remoção e a periferia do mesmo.

Sabe-se que os cães envelhecem 7 vezes mais depressa do que os humanos. Recentemente, os animais de companhia estão a ser criados como membros de família e têm com frequência hábitos de estilo de vida semelhantes aos dos seus donos. Logo, é previsível que um risco do dono de desenvolver cancro seria elevado quando o seu animal de companhia desenvolve cancro. Se o diagnóstico de cancro conveniente e preciso se torna possível para animais de 4 ΕΡ2325648Β1 companhia, seria de esperar que providenciasse pistas para prevenir o cancro dos donos.

Atualmente, diz-se que o número de cães domésticos no Japão é cerca de 6.700.000 e o mesmo número para os Estados Unidos diz-se que é de cerca de 17.640.000. Vacinas combinadas quintivalentes, heptavalentes e octavalentes e afins tornaram-se prevalentes, além das vacinas contra a raiva e, portanto, doenças infeciosas diminuíram, tais como infeção por parvovírus canino, infeção pelo vírus da Cinomose Canina, parainfluenza canina (tosse do canil), infeção pelo adenovírus-2 canino (tosse do canil), hepatite canina infeciosa, infeção por coronavírus canino e leptospirose. Assim, a esperança de vida média dos cães aumentou. Cães mais velhos, which are seven years olcom sete anos ou mais velhos, representam 35,5% de todos os cães domésticos. As causas de morte dos cães domésticos também são parecidas às dos humanos, tais como cancro, hipertensão e doença cardíaca que estão a aumentar. Nos Estados Unidos, cerca de 4.000.000 cães são diagnosticados anualmente com cancro. Também no Japão, diz-se que cerca de 1.600.000 cães são potencialmente afetados com tumores.

Contudo, têm faltado agentes de diagnóstico de cancro convenientes para animais. Além disso, nos cuidados médicos animais, os métodos de teste que envolvem fotografar ou filmar utilizando raios X, imagens de tomografia computadorizada, imagens de ressonância magnética ou afins não têm sido predominantes. Após palpação, são realizados um simples teste sanguíneo e um teste utilizando fotografia de raios X, o diagnóstico atualmente depende significativamente da experiência dos veterinários. Os métodos de teste que utilizam soro foram parcialmente iniciados, mas os métodos utilizam marcadores de tumor humanos uma vez que não foi descoberto um marcador de tumor 5 ΕΡ2325648Β1 canino. 0 diagnóstico de cancro preciso requer cirurgia abdominal que impõe cargas físicas significativas nos cães e cargas económicas nos donos. Se o diagnóstico de cancro pode ser feito convenientemente para animais de companhia tais cães e gatos, conduziria à deteção precoce ou diagnóstico of cancro preciso e seria de esperar que fosse útil para terapêutica de cancro para animais de companhia. Além disso, se tal diagnóstico de cancro conveniente que utiliza soro se tornasse possível, seria de esperar não só que permitisse o diagnóstico de cancro mas também que contribuísse significativamente para exames de saúde periódicos, diagnóstico pré-operatório e decisões acerca da estratégia terapêutica. 0 exame de saúde para animais de companhia, ao contrário do caso dos humanos, não é predominante. Assim, a deteção de cancro ocorre com frequência demasiado tarde, de modo que o dono descobre a doença e depois vai a um hospital apenas depois do tumor se ter tornado grande em muitos casos. Se tal tumor que aumentou de tamanho for maligno, com frequência resulta num tratamento que é demasiado tardio, mesmo quando é realizada terapêutica cirúrgica tal como cirurgia ou medicação utilizando um agente anti-cancerígeno ou afins. Assim, quando um veterinário determina que o tumor é maligno, o tratamento com agente anti-cancerígeno é geralmente realizado sem cirurgia. Se for realizada cirurgia, medidas durante a cirurgia, tais como determinação do tamanho de margem a ser assegurado, determinação da quantidade de sangue necessária durante a cirurgia e medidas contra a fragmentação das células deveriam ser tomadas de forma estrita. É desejado que o tratamento com agente anti-cancerígeno seja iniciado imediatamente após a cirurgia e que o seguimento seja 6 ΕΡ2325648Β1 realizado em intervalos curtos. Espera-se que a incorporação do diagnóstico de cancro anterior nos exames rotineiros de saúde dos cães, que são cada vez mais comuns recentemente e são referidos como exames médicos completos para cães, conduza à deteção de cancro precoce.

Por outro lado, no caso de um tumor benigno, a cirurgia pode ser aconselhada mesmo se um tumor for grande. Após a cirurgia, apenas as áreas ressecadas exigem cuidados sem requerer qualquer tratamento com agente anti-cancerigeno caro e sem ser preciso ter preocupações com o seguimento.

Na situação atual, o fornecimento de um meio conveniente de detetar cancro com elevada sensibilidade, que é aplicável ao diagnóstico de cancro para animais, permite tratamento eficiente e preciso e resulta num número de vantagens para ambos donos e veterinários. A proteína 1 (CAPRINA-1) citoplasmática e associada à proliferação é uma proteína intracelular que é expressa quando as células normais na fase de repouso são ativadas ou submetidas a divisão celular. A CAPRINA-1 também é conhecida por estar envolvida no transporte de ARNm através da formação intracelular de grãos de stress intracelular com ARN e controlo de translação, por exemplo. Entretanto, a CAPRINA-1 tem muitos nomes diferentes. Exemplos de tais nomes incluem proteína 1 da membrana ancorada por GPI e proteína 1 marcadora da superfície do componente de membrana (M11S1), como se a proteína tenha sido conhecida por ser uma proteína da membrana. Estes nomes diferentes são derivados de um relato (J Biol Chem. 270: 20717-20723 (1995)) de que a sequência génica da CAPRINA-1 tem originalmente uma região de ligação a GPI e a CAPRINA-1 é uma proteína da membrana expressa em linhas de células 7 ΕΡ2325648Β1 derivadas do intestino grosso. Foi reportado posteriormente que: a sequência génica da CAPRINA-1 neste relato é um erro; ocorre a alteração da estrutura pela deleção de 1 nucleotideo da sequência génica da CAPRINA-1 atualmente registada no GenBank ou afins, de modo que 80 aminoácidos são apagados do terminal C e o artefato resultante (74 aminoácidos) corresponde à porção de ligação a GPI do relato anterior; e foi provado que também está presente um erro na extremidade 5' da sequência génica e deleção de 53 aminoácidos do terminal N (J Immunol. 172: 2389-2400 (2004)). Além disso, foi reportado que uma proteína codificada pela sequência génica da CAPRINA-1 atualmente registada no GenBank ou afins não é uma proteína da membrana celular (J Immunol. 172: 2389-2400 (2004)).

Além disso, com base nos resultados do J Biol Chem. 270: 20717-20723 (1995) de que a CAPRINA-1 é uma proteína da membrana celular, os documentos US2008/0075722 e W02005/100998 revelam que a CAPRINA-1 sob o nome de M11S1 pode ser um alvo para terapêutica de cancro como uma proteína da membrana celular (não mencionado nos Exemplos). Contudo, conforme reportado no J Immunol. 172: 2389-2400 (2004) , foi aceite desde o momento de submissão dos documentos US2008/0075722 e W02005/100998 até agora que a CAPRINA-1 não é expressa nas superfícies celulares. É óbvio que o conteúdo dos documentos US2008/0075722 e WO2005/100998 baseados apenas na falta de informação em relação ao facto de que a CAPRINA-1 é uma proteína da membrana celular não deveria ser compreendido como senso comum técnico de pessoas habilitadas na arte. Além disso, nunca foi reportado que a CAPRINA-1 é expressa em níveis mais elevados em células cancerígenas da mama ou afins do que em células normais. O documento WO 2004/076682 revela que uma proteína com 8 ΕΡ2325648Β1 uma sequência tipo CAPRINA-1 está envolvida na supressão da apoptose e um método para o diagnóstico de um tumor que inclui determinar o nivel daquela proteína como um biomarcador numa amostra de um paciente, sendo o nível do biomarcador indicativo da presença de células tumorais. 0 documento US 2008/107668 revela péptidos imunogénicos derivados de proteínas expressas em células cancerígenas, incluindo uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 e composições e métodos relacionados para o tratmento e diagnóstico de cancro. O documento US 2003/190640 revela que uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 é expressa de forma diferenciada no cancro da próstata e métodos para diagnosticar e tratar cancro da próstata. O documento US 2003/118599 revela a expressão de uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 no cancro do pulmão e a utilização dos polipeptídeos correspondentes em vacinas e métodos de diagnóstico. O documento WO 2004/097051 revela que um gene para uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 é expresso de forma diferenciada nas células da medula óssea de pacientes com síndromes mielodisplásticos (MDS) ou leucemia mieloide aguda (AML) quando comparado com humanos sem doença e a utilização desse gene como um marcador molecular para detetar a presença ou ausência de AML ou MDS. O documento US 2007/154931 revela a expressão de um gene para uma proteína com uma sequência da CAPRINA-1 como um marcador para leucemia mieloide crónica e métodos e sistemas de computador para monitorizar a progressão de CML num paciente com base em medições deste marcador molecular. 9 ΕΡ2325648Β1 0 documento US 2006/019256 revela a expressão regulada para cima de um gene para uma proteína com uma sequência da para uma proteína com uma sequência da CAPRINA-1 em células estaminais de tumor sólidas e a sua utilização como um marcador para o diagnóstico, caracterização e tratamento de células estaminais de tumor sólido. O documento US 2006/069054 revela a expressão de uma proteina com uma sequência tipo CAPRINA-1 no cancro da mama e a utilização dos polipeptídeos correspondentes na terapêutica e métodos de diagnóstico. O documento WO 02/092001 revela uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 como um polipeptídeo de tumor do pulmão e composições relacionadas para utilização no diagnóstico e tratamento do cancro do pulmão. O documento WO 2008/031041 revela métodos e composições para avaliar a expressão génica em amostras de melanoma, incluindo a expressão de um gene para uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1. O documento WO 2006/002378 revela a presença de um gene para uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 numa região cromossómica que é amplificada dentro de células cancerígenas e a utilização de genes nesta região cromossómica como alvos de fármacos. O documento US 6 335 170 revela métodos para analisar células tumorais, particularmente células tumorais da bexiga, medindo a expressão génica, incluindo o gene para uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 e métodos relacionados de diagnóstico e ferramentas de prognóstico. O documento WO 2005/007830 revela métodos e 10 ΕΡ2325648Β1 composições para o diagnóstico, avaliação do estádio, prognóstico e tratamento de cancro da próstata, com base em marcadores genómicos para metilação e/ou expressão génica do ADN genómico, incluindo silenciamento transcricional e/ou baseado em marcadores proteicos, incluindo uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1. 0 documento US 2004/029114 revela a expressão regulada para cima ou para baixo de uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 no cancro da mama e métodos e composições relacionados que podem ser utilizados para o diagnóstico e tratamento do cancro da mama. O documento WO 01/72295 revela que uma proteína com uma sequência tipo CAPRINA-1 é uma proteína do tumor do pulmão e composições farmacêuticas relacionadas para o diagnóstico e tratamento do cancro do pulmão.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

POBLEMA A SER RESOLVIDO PELA INVENÇÃO

Um objeto da presente invenção é providenciar um meio de detetar cancro que é útil para o diagnóstico de cancro.

MEIOS PARA RESOLVER O PROBLEMA

Como resultado de estudos intensivos, os presentes inventores obtiveram ADNc que codifica uma proteína que se liga a um anticorpo existente num soro derivado de um organismo vivo portador de cancro por um método SEREX utilizando uma biblioteca de ADNc derivada de testículo canino e o soro de um cão portador de cancro e, assim, prepararam proteínas CAPRINA caninas com as sequências de aminoácidos mostradas nas SEQ. ID N.°s 6, 8, 10, 12 e 14 11 ΕΡ2325648Β1 baseadas no ADNc. Além disso, os presentes inventores prepararam proteínas CAPRINA-1 humanas com as sequências de aminoácidos mostradas nas SEQ. ID N.°s 2 e 4 baseadas em genes humanos homólogos aos genes obtidos. Os presentes inventores descobriram, ainda, que: os genes que codificam estas proteínas são especificamente expressos em testículos caninos e humanos e células cancerígenas malignas (ver Exemplo 1 descrito posteriormente); polipeptídeos recombinantes preparados com base nas sequências de aminoácidos destas proteínas reagem especificamente apenas com soros de organismos vivos com cancro; e CAPRI-1 pode ser detetada especificamente num organismo vivo portador de cancro utilizando anticorpos preparados utilizando os polipeptídeos recombinantes. Assim, os presentes inventores completaram essa presente invenção.

Especificamente, a presente invenção providencia um método conforme definido nas reivindicações para detetar cancro compreendendo medir a expressão da CAPRINA-1, que é realizada para amostras separadas de organismos vivos. Além disso, são revelados um reagente para detetar cancro compreendendo um anticorpo que é induzido in vivo contra a CAPRINA-1 e um polipeptídeo que é submetido a uma reação antígeno-anticorpo e um reagente para detetar cancro compreendendo um anticorpo que é sujeito a uma reação antígeno-anticorpo com CAPRINA-1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e um reagente para detetar cancro compreendendo um polinucleotídeo que hibridiza especif icamente com uma sequência parcial de 15 ou mais nucleotídeos, preferencialmente 20 a 25 ou mais nucleotideos e mais preferencialmente 30 ou mais nucleotídeos nas sequências nucleotídicas mostradas nas SEQ. ID N.°s 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 ou afins na Listagem de Sequências. 12 ΕΡ2325648Β1

VANTAGEM DA INVENÇÃO

De acordo com a presente invenção, é providenciado um novo método para detetar um cancro. Conforme descrito especificamente nos Exemplos dados posteriormente, um polipeptideo recombinante preparado com base na sequência de aminoácidos da CAPRINA-1 (ou também referido como CAPRINA-1) reage com um anticorpo que existe especificamente no soro de um paciente com cancro. Logo, de acordo com a invenção, o cancro existente num corpo vivo pode ser detetado medindo o anticorpo numa amostra pelo método da presente invenção. Além disso (but outside the mas fora do âmbito das reivindicações) o cancro existente num corpo vivo existente num corpo vivo a própria CAPRINA-1. De acordo com o método da presente invenção, pode ser detetado um cancro de pequeno tamanho invisível a olho nú ou um cancro numa parte profunda in vivo. Assim, o método da presente invenção é útil para a deteção precoce de cancro no momento de exames de saúde ou afins. Além disso, o cancro reincidente pode ser detetado precocemente através da utilização do método da presente invenção para o seguimento de um paciente após o tratamento do cancro. Além disso, de acordo com o método da presente invenção, a extensão do cancro também pode ser diagnosticada, tal como o aumento do tumor, infiltração para o tecido periférico e metástases de cancro para um nódulo linfático e para um órgão distante. Além disso, o nível do anticorpo no soro é mais elevado num paciente com cancro altamente maligno do que num paciente com cancro pouco maligno. De acordo com o método da presente invenção, a malignidade do cancro também pode ser diagnosticada. Além disso, conforme descrito nos Exemplos a seguir, a CAPRINA-1 que codifica o ARNm é expressa especificamente em níveis elevados nos testículos e células cancerígenas. Portanto, os cancros também podem ser detetados (mas fora do âmbito das reivindicações) 13 ΕΡ2325648Β1 medindo o ARNm.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 mostra os padrões de expressão do gene que codifica uma proteína CAPRINA-1 em tecidos normais e linhas de células tumorais. A Referência N.° I indica os padrões de expressão do gene que codifica a proteína CAPRINA-1. A Referência N.° 2 indica os padrões de expressão do gene GAPDH. A Figura 2 mostra os resultados de detetar com coloração de Coomassie o polipeptídeo derivado da CAPRINA-1 canino que é um exemplo de polipeptídeos a serem utilizados na presente invenção, que foram produzidos e purificados utilizando Escherichia coli nos Exemplos. A Referência N.° 3 indica a banda de um polipeptídeo derivado da CAPRINA-1 canino. A Figura 3 mostra alguns dos resultados de diagnóstico de cancro para cães portadores de cancro utilizando os polipeptideos derivados da CAPRINA-1 caninos preparados nos Exemplos. A Figura 4 mostra alguns dos resultados do diagnóstico de cancro detalhado para cães portadores de cancro utilizando os polipeptideos derivados da CAPRINA-1 caninos preparados nos Exemplos.

MELHOR MODO DE REALIZAR A INVENÇÃO

De acordo com o método da presente invenção, a expressão da CAPRINA-1 é medida utilizando uma amostra separada de um organismo vivo. Exemplos de um método para medir a expressão da CAPRINA-1 incluem um método (1° método de acordo com a invenção) que envolve imunoensaio para um 14 ΕΡ2325648Β1 anticorpo contra a CAPRINA-1 contida numa amostra, um método (2° método fora do âmbito das reivindicações) que envolve imunoensaio para a própria CAPRINA-1 contida numa amostra e um método (3o método fora do âmbito das reivindicações) que envolve a medição da CAPRINA-1 que codifica ARNm contida numa amostra. No método da presente invenção, a expressão da CAPRINA-1 pode ser medida como definido nas reivindicações. Na presente invenção, o termo "medição" refere-se a qualquer uma de deteção, determinação qualitativa, determinação quantitativa e determinação semi-quantitativa. A sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14 é a sequência de aminoácidos da CAPRINA-1 canina. A CAPRINA-1 canina com a sequência de aminoácidos foi identificada como uma ligação polipeptidica a um anticorpo especificamente existente no soro derivado de cão portador de cancro pelo método SEREX utilizando uma biblioteca de ADNc derivada de testículo canino e o soro de um cão portador de cancro (ver Exemplo 1). Especificamente, um anticorpo contra a CAPRINA-1 com a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12, ou 14 é especificamente induzido in vivo num cão portador de cancro. Logo, o cancro canino pode ser detetado medindo o anticorpo contra a CAPRINA-1 supramencionado com a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14 utilizando o 1° método anterior (ver Exemplos 3 e 4). O cancro canino também pode ser detetado medindo a própria CAPRINA-1 como um antígeno mostrado na SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14 utilizando o 2o método anterior (ver Exemplos 5 e 6) . Além disso, o cancro canino pode ser detetado, conforme descrito nos Exemplos seguintes, medindo a CAPRINA-1 que codifica ARNm uma vez que o ARNm é expresso a níveis significativamente elevados nos testículos e células cancerígenas (ver Exemplo 1). 15 ΕΡ2325648Β1 0 termo "com uma sequência de aminoácidos", conforme utilizado aqui, refere-se a resíduos de aminoácidos a serem alinhados na ordem relevante. Portanto, por exemplo, a expressão "polipeptídeo com a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 2" refere-se a um polipeptídeo com 709 resíduos de aminoácidos, que consiste na sequência de aminoácidos de Met Pro Ser Ala··· (abreviado) - -Gin Gin Vai Asn mostrada na SEQ. ID N.° 2. Além disso, por exemplo, a expressão "polipeptídeo com a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 2" também pode ser abreviada para "o polipeptídeo da SEQ. ID N.° 2." O mesmo aplica-se à expressão "com uma/a sequência nucleotídica." Neste caso, o termo "com" pode ser substituído com as expressões "consistindo em."

Além disso, o termo "polipeptídeo", conforme utilizado aqui, refere-se a uma molécula que é formada através de ligação peptídica de uma pluralidade de aminoácidos. Exemplos de tal molécula incluem não só moléculas polipeptídicas com um grande número de aminoácidos constituintes, mas também moléculas com baixo peso molecular (oligopeptídeos) com um pequeno número de aminoácidos e proteínas de comprimento inteiro. A presente invenção abrange, ainda, proteínas CAPRINA-1 de comprimento inteiro cada com uma sequência de aminoácidos mostrada nas sequências ID pares de entre SEQ. ID N.°s 2-30.

No método da presente invenção, não só a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14, mas também a CAPRINA-1 de outros mamíferos (doravante, também pode ser referida como "homóloga" para CAPRINA-1 canina. Quando referida simplesmente como "CAPRINA-1, " a CAPRINA-1 não só de um cão mas também de outro mamífero está também abrangida aqui) são também sujeitas a medição. Conforme descrito especificamente nos Exemplos seguintes, a CAPRINA- 16 ΕΡ2325648Β1 1 humana que codifica ARNm é expressa de forma significa num nível elevado nos testículos humanos e células cancerígenas, como no caso da CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14. Contudo, não é detetado qualquer anticorpo contra a CAPRINA-1 humana num corpo humano saudável. Além disso, um anticorpo contra a CAPRINA-1 felina não é detetado num corpo feline saudável, mas é detetado apenas num gato portador de cancro. Logo, o cancro de um mamífero que não seja um cão pode ser detetado medindo a expressão da CAPRINA-1 no mamífero. Exemplos de CAPRINA-1 de mamíferos que não sejam cães, que são sujeitos de medição no método da presente invenção, incluem, mas não se limitam a, CAPRINA-1 humana e CAPRINA-1 felina. Uma sequência nucleotídica que codifica a CAPRINA-1 humana e a sequência de aminoácidos da mesma são conforme mostradas separadamente nas SEQ. ID N.°s 1 e 3 e 2 e 4, respetivamente, na Listagem de Sequências. A identidade de sequência com a CAPRINA-1 canina é de 94% em termos da sequência nucleotídica e é de 98% em termos da sequência de aminoácidos. Mesmo cães e humanos que são mamíferos geneticamente distantes partilham uma identidade de sequência tão alta quanto 98% em termos da sequência de aminoácidos da CAPRINA-1. Portanto, pensa-se que um cão e e um mamífero que não seja um humano; ou seja, a CAPRINA-1 canina e homólogo da mesma partilham uma identidade de sequência tão alta quanto cerca de 85% ou mais. Logo, a CAPRINA-1, a expressão da qual é medida no método da presente invenção, tem preferencialmente 85% ou mais e mais preferencialmente 95% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da CAPRINA-1 canina mostrada na SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14. Contudo, tais exemplos não estão particularmente limitados a isto.

No 1° método anterior, o anticorpo anterior que pode estar presente numa amostra pode ser facilmente medido por 17 ΕΡ2325648Β1 imunoensaio utilizando uma substância antigénica que passa por uma reação antigeno-anticorpo com o anticorpo. 0 próprio imunoensaio é um método convencional conhecido, conforme descrito especificamente a seguir. Como uma substância antigénica para imunoensaio, pode ser utilizada CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14 que causa a indução do anticorpo dentro de um corpo canino portador de cancro. Além disso, um anticorpo tem reatividade cruzada. Assim, mesmo uma molécula que não uma substância antigénica que tenha na realidade servido como um imunogene pode ligar-se aum anticorpo induzido contra o imunogene através de uma reação antígeno-anticorpo, desde que uma estrutura análoga ao epítopo do imunogene esteja presente na molécula. Em particular, uma proteína de um mamífero e homólogo da mesma de outro mamífero partilha uma identidade de sequência de aminoácidos elevada e, com frequência, têm estruturas de epítopo análogas uma à outra. Conforme descrito especificamente nos Exemplos seguintes, a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14 passa por uma reação antigeno-anticorpo não só com um anticorpo induzido contra a CAPRINA-1 canina num corpo canino portador de cancro, mas também com um anticorpo induzido contra a CAPRINA-1 felina num corpo felino portador de cancro. Além disso, a CAPRINA-1 humana passa por uma reação antigeno-anticorpo com o anticorpo anterior induzido nos corpos de um cão portador de cancro ou gato portador de cancro. Em conformidade, no Io método da presente invenção, pode ser utilizada CAPRINA-1 de qualquer mamifero como um antigeno para imunoensaio.

Em geral, quando uma substância antigénica é uma proteína ou afins com uma estrutura complicada e um elevado peso molecular, uma pluralidade de locais com diferentes estruturas está presente na molécula. Portanto, uma pluralidade de tipos de anticorpos capazes de reconhecerem 18 ΕΡ2325648Β1 e ligarem a diferentes locais de tais substâncias antigénicas são produzidos in vivo. Especificamente, um anticorpo que é produzido in vivo contra uma substância antigénica tal como proteína é um anticorpo policlonal que é uma mistura de uma pluralidade de tipos de anticorpo. Um anticorpo descoberto pelos presentes inventores também é um anticorpo policlonal. Está presente especificamente no soro derivado de um organismo vivo portador de cancro e liga-se especificamente a uma proteína CAPRINA-1 recombinante através de uma reação antígeno-anticorpo. 0 termo "anticorpo policlonal" utilizado na presente invenção refere-se a um anticorpo que existe no soro de um organismo vivo contendo uma substância antigénica no mesmo e é induzido in vivo contra a substância antigénica.

Nos Exemplos descritos posteriormente, os polipeptídeos das SEQ. ID N.° 6 e SEQ. ID N.° 8 (CAPRINA-1 canina) e o polipeptídeo da SEQ. ID N.° 2 (CAPRINA-1 humana) foram preparados como antígenos para imunoensaio de anticorpos específicos nos animais vivos portadores de cancro. Depois foi confirmada a reatividade entre estes polipeptídeos e o anticorpo anterior no soro de um organismo vivo portador de cancro. Contudo, o anticorpo anterior é um anticorpo policlonal, pelo que se liga naturalmente a um polipeptídeo que consiste no homólogo da SEQ. ID N.° 6, 8 ou 2. Mesmo no caso de um fragmento de ditos polipeptídeos, este pode ligar-se ao anticorpo anterior contido no soro de um organismo vivo portador de cancro, uma vez que o anticorpo policlonal pode conter um anticorpo capaz de reconhecer a estrutura do fragmento relevante. Ou seja, quer um polipeptídeo (ou seja, proteína CAPRINA-1 de comprimento inteiro) do homólogo da SEQ. ID N.° 6, 8 ou 2 ou um fragmento da mesma pode ser utilizado de forma semelhante para medição do anticorpo policlonal anterior contido especificamente no soro de um organismo 19 ΕΡ2325648Β1 vivo portador de cancro e é útil para a deteção de cancro. Portanto, exemplos de um polipeptídeo a ser utilizado como um antigeno para imunoensaio no 1 método da presente invenção incluem, não só um polipeptídeo que consiste da região de comprimento inteiro da CAPRINA-1 (por exemplo, SEQ. ID N. 0 6, 8 ou 2) , mas também um fragmento de polipeptídeo que consiste em 7 contínuos ou mais, preferencialmente 8 contínuos ou mais, 9 ou mais ou 10 ou mais aminoácidos na sequência de aminoácidos da CAPRINA-1 e passa por uma reação antígeno-anticorpo com um anticorpo policlonal contra a CAPRINA-1 (doravante, pode ser referida de forma conveniente como "um polipeptídeo parcial especificamente reativo"). É conhecido na arte que um polipeptídeo de cerca de 7 ou mais resíduos de aminoácidos exerce antigenicidade. Contudo, se o número de resíduos de aminoácidos que constituem um polipeptídeo é demasiado baixo, tal polipeptídeo muito provavelmente reage de forma cruzada com anticorpos, que existe na amostra, contra proteínas que não a CAPRINA-1. Em conformidade, tendo em vista aumentar a precisão do imunoensaio, o número desejável de resíduos de aminoácidos de um fragmento polipeptídico pode ser preferencialmente 30 ou mais ou 50 ou mais, ainda preferencialmente 100 ou mais ou 150 ou mais, ainda preferencialmente 300 ou mais, ainda mais preferencialmente 600 ou mais e ainda preferencialmente 1000 ou mais e 1500 ou mais.

Exemplos específicos preferidos dos polipeptídeos a serem utilizados como antígenos são os polipeptídeos das SEQ. ID N.°s pares 2-30 ou fragmentos das mesmas.

Sequências nucleotídicas de polinucleotídeos que codificam proteínas que consistem nas sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s pares 2-30 (ou seja, SEQ. ID N.°s 2, 4, 6---28, 30) são mostradas nas SEQ. ID N.°s 20 ΕΡ2325648Β1 ímpares 1-29 (ou seja, SEQ. ID N.°s 1, 3, 5·-27, 29).

Em geral, é amplamente sabido por pessoas habilitadas na arte que respeita a antígenos proteicos de tal modo que mesmo quando poucos resíduos de aminoácidos foram substituídos, apagados, adicionados ou inseridos na sequência de aminoácidos da proteína, o resultante pode reter antigenicidade quase equivalente ao da proteína original. Portanto, um polipeptídeo: com uma sequência que tem uma substituição, uma deleção e/ou uma inserção de uns poucos (preferencialmente um ou vários) resíduos de aminoácidos em relação à sequência de aminoácidos da CAPRINA-1 e tem 80% ou mais, 85% ou mais, preferencialmente 90% ou mais, mais preferencialmente 95% ou mais e ainda preferencialmente 98% ou mais de identidade de sequência com a sequência original; e ligação especificamente a um anticorpo policlonal contra a CAPRINA-1 através de uma reação antígeno-anticorpo (doravante, pode ser referida de forma conveniente como "polipeptídeo modificado especificamente reativo") pode ser utilizada para deteção de cancro de uma maneira semelhante à dos polipeptídeos anteriores. Preferencialmente, o polipeptídeo modificado especificamente reativo tem uma sequência de aminoácidos que tem uma substituição, uma deleção, uma dição e/ou uma inserção de um ou vários resíduos de aminoácidos em relação à sequência de aminoácidos da CAPRINA-1. O termo "vários", conforme utilizado aqui, refere-se a um número inteiro de 2-10, preferencialmente um número inteiro de 2-6 e ainda preferencialmente um número inteiro de 2-4. O termo "identidade de sequência (de sequências de aminoácidos)", conforme utilizado aqui, é obtido alinhando duas sequências de aminoácidos a serem comparadas de modo que os resíduos de aminoácidos correspondam o mais possível, subtraindo o número de resíduos de aminoácidos 21 ΕΡ2325648Β1 que corresponderam do número total de resíduos de aminoácidos e depois expressando o resultado na forma de percentagem. No momento do alinhamento anterior, se necessário, são inseridos intervalos de forma apropriada em uma ou em ambas sequências a serem comparadas. Tal alinhamento de sequências pode ser realizado utilizando um programa conhecido, tal como BLAST, FASTA ou CLUSTAL W (Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 87: 2264-2268, 1993; Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402, 1997).

Vinte tipos de aminoácidos que constituem proteínas naturais podem ser agrupados em aminoácidos neutrais com cadeias laterais com baixa polaridade (Gly, Ile, Vai, Leu, Ala, Met e Pro) , aminoácidos neutrais com cadeias laterais hidrofílicas (Asn, Gin, Thr, Ser, Tyr e Cys), aminoácidos acidicos (Asp e Glu), aminoácidos básicos (Arg, Lys e His), e aminoácidos aromáticos (Phe, Tyr, Trp e His) nos quais os membros de cada grupo têm propriedades análogas uns aos outros. É sabido que a substituição entre estes aminoácidos (ou seja, substituição conservadora) raramente altera as propriedades do polipeptídeo resultante. Portanto, quando os resíduos de aminoácidos da CAPRINA-1 são substituídos, a substituição é realizada entre membros do mesmo grupo para que a possibilidade de manter a ligação com o anticorpo correspondente aumente. Contudo, na presente invenção, a variante anterior pode envolver substituição não conservadora, desde que seja partilhada uma atividade indutora imune equivalente a ou quase equivalente à não variante.

Um polipeptídeo (doravante, pode ser referido de forma conveniente como "polipeptídeo de adição especificamente reativo") que contém como uma sequência parcial o polipeptídeo anterior a ser utilizado na presente invenção 22 ΕΡ2325648Β1 (ou seja, preparado por adição de outro (poli)peptídeo a uma extremidade ou a ambas extremidades de um polipeptídeo a ser utilizado na presente invenção) e que se liga especificamente a um anticorpo policlonal contra a CAPRINA-1 através de uma reação antígeno-anticorpo também pode ser utilizado para deteção de cancro de uma forma semelhante à dos polipeptídeos anteriores.

Os polipeptídeos anteriores a serem utilizados na presente invenção podem ser sintetizados de acordo com um método de síntese química tal como um método Fmoc (método fluorenilmetiloxicarbonilo) e um método tBoc (método t-butiloxi-carbonilo) (Editado pela Sociedade Bioquímica Japonesa, Seikagaku Jikken Koza (Biochemical Experimental Lecture Series) 1, Protein Chemistry IV, Chemical Modificação and Peptide Synthesis, ΤΟΚΥΟ KAGAKU DOZIN CO., LTD (Japão), 1981). Além disso, os polipeptídeos também podem ser sintetizados por um método convencional utilizando vários sintetizadores peptídicos disponíveis comercialmente. Em alternativa, os polipeptídeos podem ser facilmente preparados utilizando técnicas de engenharia genética conhecidas (Sambrook et al., Molecular Cloning, 2a Edição, Current Protocols in Molecular Biology (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, 3a Edição, A Compendium of Métodos from Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons e afins). Por exemplo, do ARN extraído de um tecido que expressa um gene que codifica a CAPRINA-1 humana da SEQ. ID N.° 2 ou um homólogo da mesma, o ADNc do gene é preparado por RT-PCR. A sequência de comprimento inteiro ou uma sequência parcial desejada do ADNc é incorporada num vetor de expressão e depois o vetor é introduzido em células hospedeiras, de modo que um polipeptídeo de interesse possa ser obtido. As sequências nucleotídicas de ADNc que codificam a CAPRINA-1 canina das 23 ΕΡ2325648Β1 SEQ. ID N.°s 6, 8, 10, 12 e 14 são mostradas nas SEQ. ID N.°s 5, 7, 9, 11 e 13, respetivamente. Os homólogos dos fatores humanos das mesmas; ou seja, as sequências nucleotidicas de ADNc que codificam a CAPRINA-1 humana das SEQ. ID N.°s 2 e 4 são mostradas nas SEQ. ID N.°s 1 e 3, respetivamente. Assim, os iniciadores a serem utilizados para RT-PCR podem ser facilmente desenhados com referência a estas sequências nucleotidicas. Além disso, conforme descrito posteriormente, um gene que codifica a CAPRINA-1 de um mamífero não humano pode ser amplificado utilizando iniciadores desenhados com referência às sequências nucleotídicas das SEQ. ID N.°s ímpares 1-29. Por exemplo, o ADNc que codifica a CAPRINA-1 felina pode ser facilmente preparado por técnicas semelhantes às técnicas anteriores. A extração de ARN, RT-PCR, incorporação de ADNc num vetor e introdução de um vetor em células hospedeiras pode ser realizado por métodos conhecidos, conforme descrito a seguir, por exemplo. Além disso, os vetores e células hospedeiras a serem utilizados aqui também são conhecidos e vários vetores e células hospedeiras estão disponíveis comercialmente.

As células hospedeiras anteriores podem ser quaisquer células, desde que possam expressar os polipeptídeos anteriores. Exemplos de células hospedeiras procariontes incluem Escherichia coli e afins. Exemplos de células hospedeiras eucariontes incluem células cultivadas de mamíferos tais como células de rim de macaco (COSI), células de ovário de hamster Chinês (CHO), a linha de células do rim embriónico humano (HEK293) e a linha de células de pele embriónica de ratinho (NIH3T3), leveduras germinantes, leveduras de fissão, células de bicho da seda e oócitos de Xenopus.

Quando são utilizadas células procariontes como 24 ΕΡ2325648Β1 células hospedeiras, são utilizados um vetor de expressão com uma origem de replicação em células procariontes, um promotor, um local de ligação ao ribossoma, um local de multi-clonagem, um terminador, um gene de resistência ao fármaco, um gene complementar auxotrófico e afins· Como vetores de expressão para Escherichia coli, vetores pUC, pBluescriptII, sistemas de expressão pET, sistemas de expressão pGEX e afins podem ser exemplificados. Um ADN que codifica o polipeptideo anterior é incorporado em tal vetor de expressão, células hospedeiras procariontes são transformadas com o vetor, e depois o assim obtido transformante é cultivado, de modo que o polipeptideo codificado pelo ADN possa ser expresso nas células hospedeiras procariontes. Neste momento, o polipeptideo também pode ser expresso como uma proteína de fusão com outra proteína. Um ADN que codifica o polipeptideo anterior pode ser obtido preparando um ADNc por RT-PCR, conforme descrito anteriormente, por exemplo. Além disso, tal ADN que codifica o polipeptideo anterior também pode ser sintetizado por um método convencional utilizando um sintetizador de ácidos nucleicos disponível comercialmente conforme descrito a seguir. As sequências nucleotídicas de ADNc dos genes que codificam a CAPRINA-1 das SEQ. ID N.°s 2 e 4 são mostradas nas SEQ. ID N.°s 1 e 3, respetivamente, na Listagem de Sequências.

Quando células eucariontes são utilizadas como células hospedeiras, são utilizados vetores de expressão para células eucariontes com um promotor, uma região splicing, um local poli (A) adicional e afins. Exemplos de tais vetores de expressão incluem pKAl, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, vetor EBV, pRS, pADNc3 e pYES2. De forma semelhante ao anterior, um ADN que codifica um polipeptideo a ser utilizado na presente invenção é incorporado em tal vetor de expressão, células hospedeiras 25 ΕΡ2325648Β1 eucariontes são transformadas com o vetor e depois o assim obtido transformante é cultivado, para que o polipeptídeo codificado pelo ADN anterior possa ser expresso em células hospedeiras eucariontes. Quando pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-Nl, pEGFP-Cl, ou afins é utilizado como um vetor de expressão, o polipeptídeo anterior pode ser expresso como uma proteína de fusão com várias etiquetas, tais como uma etiqueta His (por exemplo, (His)6 para (His)i0), uma etiqueta FLAG, uma etiqueta myc, uma etiqueta HA e GFP.

Para introdução de um vetor de expressão numa célula hospedeira, podem ser empregues métodos conhecidos tais como eletroporação, um método de fosfato de cálcio, um método de lipossoma, um método de dextrano DEAE, microinjeção, infeção virai, lipofeção e ligação com um péptido permeável à membrana celular. 0 isolamento e purificação de um polipeptídeo de interesse de células hospedeiras podem ser realizados utilizando técnicas de isolamento conhecidas em combinação. Exemplos de tais técnicas conhecidas incluem tratamento utilizando um agente desnaturante tal como ureia ou um tensoativo, ultrasonicação, digestão enzimática, dessalinização, fraccionamento de solvente e precipitação, diálise, centrifugação, ultrafiltração, filtração em gel, SDS-PAGE, focagem isoelétrica, cromatografia de troca de iões, cromatografia hidrofóbica, cromatografia de afinidade e cromatografia de fase reversa.

Polipeptideos obtidos pelos métodos anteriores incluem polipeptideos na forma de proteínas de fusão com quaisquer outras proteínas. Um exemplo de tal proteína de fusão inclui uma proteína de fusão com glutationa-S-transferase (GST), uma etiqueta His ou afins. Polipeptideos na forma de tais proteínas de fusão são também exemplos dos 26 ΕΡ2325648Β1 polipeptídeos de adição especificamente reativos anteriormente descritos e podem ser utilizados para o 1° método de deteção da presente invenção. Além disso, um polipeptideo expresso em células transformadas pode ser sujeito a vários tipos de modificação dentro das células após translação. Tal polipeptideo que seja modificado após translação pode ser utilizado no 1 método de deteção da presente invenção, desde que seja capaz de ligação a um anticorpo policlonal contra a CAPRINA-1. Exemplos de tal modificação pós-translação incluem a remoção de metionina N-terminal, acetilação N-terminal, glicosilação, proteólise limitada por protease intracelular, miristoilação, isoprenilação e fosforilação.

Um anticorpo numa amostra pode ser facilmente medido por imunoensaio utilizando o polipeptideo anterior como um antigeno. 0 próprio imunoensaio é conhecido na arte. 0 imunoensaio é classificado em método sandwich, método de competição, método de aglutinação, método Western blot e afins com base nos tipos de reação. Além disso, o imunoensaio é classificado com base nos rótulos em radioimunoensaio, imunoensaio de fluorescência, imunoensaio enzimático e imunoensaio de biotina, por exemplo. 0 imunoensaio do anticorpo anterior pode ser realizado utilizando qualquer um destes métodos. ELISA Sandwich ou o método de aglutinação são preferencialmente aplicáveis como uma técnica de imunoensaio para o anticorpo anterior no método da presente invenção, uma vez que os procedimentos destes métodos são convenientes e não requerem equipamento extensivos e afins. Mas as técnicas não se limitam a estes. Quando uma enzima é utilizada como um rótulo para um anticorpo, tal enzima não está particularmente limitada, desde que satisfaça as seguintes condições: o número de rotações é elevado; permanece estável mesmo se estiver ligado a um anticorpo, causa especificamente o 27 ΕΡ2325648Β1 desenvolvimento de cor do substrato e afins. Exemplos de enzimas que podem ser utilizadas para imunoensaio de enzimas geral incluem peroxidase, β-galactosidase, fosfatase alcalina, glicose oxidase, acetilcolina esterase, glucose-6-fosforilação dehidrogenase e ácido málico dehidrogenase. Além disso, podem ser utilizadas substâncias inibidoras de enzimas, coenzimas e afins. A ligação destas enzimas com anticorpos pode ser realizada por métodos conhecidos utilizando um agente reticulado tal como um composto maleimido. Como um substrato, uma substância conhecida pode ser utilizada dependendo do tipo de uma enzima a ser utilizada. Por exemplo, quando a peroxidase é utilizada como uma enzima, pode ser utilizada 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina. Também quando fosfatase alcalina é utilizada como uma enzima, pode ser utilizado paranitrofenol ou afins. Como um radioisótopo, um radioisótopo que é geralmente utilizado para radioimunoensaio, tal como 125I e 3H pode ser utilizado. Como um corante fluorescente, um corante fluorescente que seja utilizado para técnicas de anticorpo fluorescente gerais, tais como isotiocianato de fluorescência (FITC) e tetrametilrodamina isotiocianato (TRITC) podem ser utilizados. Não existe necessidade de explicar as técnicas de imunoensaio anteriores na Descrição, já que são bem conhecidas. Contudo, quando estas técnicas de imunoensaio são brevemente descritas, o método sandwich envolve immobilizer o polipeptídeo anterior a ser utilizado como um antígeno para uma fase sólida, reagindo-o com uma amostra tal como soro, lavando, reagindo com um anticorpo secundário apropriado, lavando e depois medindo o anticorpo secundário ligado à fase sólida, por exemplo. Um anticorpo secundário não ligado pode ser facilmente removido por imobilização de um polipeptídeo antígeno a uma fase sólida. 28 ΕΡ2325648Β1

Assim, isto é preferível como uma modalidade do método para detetar cancro da presente invenção. Como um anticorpo secundário, pode ser utilizado um anticorpo IgG anti-canino se uma amostra for derivada de um cão. Um anticorpo secundário é rotulado atempadamente com uma substância rotuladora exemplificada anteriormente, para que a ligação do anticorpo secundário a uma fase sólida possa ser medida. A quantidade assim medida do anticorpo secundário corresponde à quantidade do anticorpo anterior na amostra de soro. Quando uma enzima é utilizada como uma substância rotuladora, a quantidade do anticorpo pode ser medida adicionando um substrato que seja digerido para desenvolver cor por ação enzimática e depois medindo oticamente a quantidade do substrato degradado. Quando um radioisótopo é utilizado como uma substância rotuladora, a quantidade de radiação do radioisótopo pode ser medida utilizando um contador de cintilação ou afins.

No 2° método da presente revelação, é medida a CAPRINA-1 que pode estar contida numa amostra de um organismo vivo. Conforme descrito anteriormente, entre os pacientes portadores de cancro, a quantidade de um anticorpo que passa por uma reação antígeno-anticorpo com a CAPRINA-1 de um cão, um humano ou afins é significativamente alta. Isto indica que a quantidade da CAPRINA-1 acumulada como um antígeno é significativamente elevada em células cancerígenas. Cancro também pode ser detetado medindo diretamente a CAPRINA-1, conforme descrito especificamente nos Exemplos a seguir. Portanto, cancro pode ser detetado in vivo medindo a própria CAPRINA-1 de forma semelhante ao 1° método anterior.

Um polipeptídeo na amostra pode ser facilmente medido por técnicas de imunoensaio bem conhecidas. Especificamente, por exemplo, um anticorpo ou um fragmento 29 ΕΡ2325648Β1 de ligação ao antígeno do mesmo, que passa por uma reação antígeno-anticorpo com a CAPRINA-1, é preparado, é realizado o imunoensaio utilizando o anticorpo ou o seu fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e depois a CAPRINA-1 que pode estar presente na amostra pode ser medida. Conforme descrito anteriormente, um anticorpo tem reatividade cruzada. Assim, por exemplo, através da utilização de um anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que passa por uma reação antígeno-anticorpo com a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, não apenas a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, mas também o seu homólogo noutros mamíferos (por exemplo, a CAPRINA-1 humana da SEQ. ID N.° 2 ou 4 e a CAPRINA-1 felina) podem ser medidas. Uma própria técnica de imunoensaio é uma técnica convencional conhecida, conforme descrito anteriormente.

Este exame revelou que a CAPRINA-1 é uma proteína da membrana celular que é expressa nas superfícies das células cancerígenas. Um organismo vivo portador de cancro contém muitos tipos de proteases. Especificamente, num organismo vivo portador de cancro, uma porção expressa extracelularmente da sequência da CAPRINA-1 é separada das células cancerígenas por degradação, de modo que tal porção existe num nível superior ao da porção expressa intracelularmente da sequência da CAPRINA-1. Portanto, quando um anticorpo contra a CAPRINA-1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo a ser utilizado nesta medição, que se liga à superfície de uma célula cancerígena, é utilizado, a CAPRINA-1 pode ser detetada em níveis mais elevados e o cancro pode ser diagnosticado com maior sensibilidade. Logo, as ligações do anticorpo a uma porção da proteína CAPRINA-1 existente nas superfícies das células cancerígenas, são preferencialmente utilizadas. Um exemplo de um péptido parcial da proteína CAPRINA-1 existente nas 30 ΕΡ2325648Β1 superfícies das células cancerígenas, é um polipeptídeo compreendendo uma sequência de 7 ou mais resíduos de aminoácidos contínuos na região do resíduo de aminoácido N.°s (aa) 50-98 ou resíduo de aminoácido N.°s (aa) 233-305 nas sequências de aminoácidos mostradas nas SEQ. ID N.°s pares 2-30 na Listagem de Sequências excluindo a SEQ. ID N.° 6 e a SEQ. ID N.° 18. Um exemplo específico das mesmas é a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 43 ou na SEQ. ID N.° 61 (na sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 61, uma região da sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 62 ou SEQ. ID N.° 63 é preferida) ou uma sequência de aminoácidos com 80% ou mais, preferencialmente 85% ou mais, mais preferencialmente 90% ou mais, ainda preferencialmente 95% ou mais de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos relevante. Exemplos de um anticorpo a ser utilizado incluem todas as ligações de anticorpo a estes péptidos. Exemplos específicos do anticorpo incluem um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga à SEQ. ID N.° 43, um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 44 e 45, um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 44 e 46, um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 44 e 47, um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 44 e 48, um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 49 e 50, um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 51 e 52, um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 53 e 54, um 31 ΕΡ2325648Β1 anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antigeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N. °s 55 e 56, um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antigeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 57 e 58 ou um anticorpo monoclonal ou fragmento de ligação ao antigeno do mesmo com as sequências de aminoácidos das SEQ. ID N.°s 59 e 60. O termo "fragmento de ligação ao antigeno", conforme utilizado aqui, refere-se a um fragmento de anticorpo capaz de se ligar a um antigeno tal como um fragmento Fab e um fragmento F(ab')2 contido numa molécula de anticorpo. Um anticorpo a ser utilizado aqui pode ser um anticorpo policlonal ou um anticorpo monoclonal. Para imunoensaio e afins, um anticorpo monoclonal com elevada replicabilidade é preferível. Um método para preparar um anticorpo policlonal e um anticorpo monoclonal utilizando um polipeptídeo como um imunogene é conhecido e pode ser facilmente realizado por um método convencional. Por exemplo, a CAPRINA-1 é ligada a uma proteína transportadora, tal como hemocianina de lapa californiana (KLH), caseína ou albumina do soro e depois um animal é imunizado com o resultante como um imunogene junto com um adjuvante, e, assim, pode ser induzido um anticorpo contra a CAPRINA-1. Células produtoras de anticorpo tais como esplenócitos ou linfócitos colhidos do animal imunizado são fundidos com células de mieloma para preparar hibridomas e depois hibridomas que produzem um anticorpo que se liga à CAPRINA-1 são selecionados e depois crescidos, para que um anticorpo monoclonal, cujo antigeno correspondente é a CAPRINA-1, possa ser obtido a partir do sobrenadante cultivado. O método anterior é um método convencional conhecido.

No 3° método da presente revelação, é medido o ARNm 32 ΕΡ2325648Β1 que codifica a CAPRINA-1 que pode estar contido numa amostra obtida a partir de um organismo vivo. Conforme descrito especificamente nos Exemplos a seguir, o ARNm que codifica a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14 ou a CAPRINA-1 humana da SEQ. ID N.° 2 ou 4 é expresso a um nível significativamente elevado nas células cancerígenas. Logo, o cancro pode ser detetado in vivo medindo tal ARNm numa amostra. O ARNm numa amostra pode ser determinado quantitativamente por um método convencional tal como deteção em tempo real com RT-PCR utilizando o ARNm como um molde, por exemplo. Tal ARNm pode geralmente ser determinado quantitativamente com base numa intensidade de coloração ou afins no Northern blot que é um método convencional. As sequências de ADNc que codificam os polipeptideos da CAPRINA-1 das SEQ. ID N.°s pares 2-30 são mostradas nas SEQ. ID N.°s ímpares 1-29, respetivamente. Assim, com base nestas sequências, é preparado um polinucleotideo que hibridiza especificamente com uma região parcial na sequência nucleotídica mostrada em qualquer uma das SEQ. ID N.°s ímpares 1-29 (doravante, referido como "polinucleotideo para deteção de cancro") e depois a quantidade do ARNm numa amostra pode ser medida utilizando o polinucleotideo como uma sonda ou um iniciador para um método de amplificação de ácidos nucleicos. Conforme descrito posteriormente, se é um polinucleotideo que hibridiza especificamente com uma região parcial na sequência nucleotídica mostrada em qualquer uma das SEQ. ID N.°s ímpares 1-29, o ARNm que codifica a CAPRINA-1 em mamíferos que não cães nem humanos também pode ser determinado. Além disso, um polinucleotideo pode ser ARN ou ADN. O termo "que hibridiza especificamente com", conforme 33 ΕΡ2325648Β1 utilizado aqui, refere-se a que em condições de hibridização gerais, um sujeito hibridiza apenas com uma região parcial alvo, mas não hibridiza substancialmente com as outras regiões. 0 termo "(em) condições de hibridização gerais", conforme utilizado aqui, refere-se a condições empregues para emparelhamento numa PCR geral ou deteção utilizando uma sonda. Por exemplo, no caso de PCR que utiliza a Taq polimerase, o termo refere-se a condições sob as quais uma reação é realizada a uma temperatura de emparelhamento apropriada que oscila de cerca de 54°C a 60°C utilizando um tampão geral tal como 50 mM KC1, 10 mM Tris-HCl (pH 8,3-9,0) e 1,5 mM MgCl2- Além disso, no caso de hibridização Northern, por exemplo, o termo refere-se a condições sob as quais a reação é realizada utilizando uma solução de hibridização geral tal como 5 X SSPE, 50% formamida, 5 X solução de Denhard e 0,1% SDS-0,5% SDS ou 0,1-5 X SSC e 0,1-0,5% SDS e uma temperatura de hibridização apropriada que oscila de cerca de 42°C a 65°C. Além disso, após a hibridização, é realizada uma lavagem com 0,1-0,2 x SSC e 0,1% SDS, por exemplo. Contudo, as temperaturas de emparelhamento apropriadas ou temperaturas de hibridização não estão limitadas aos exemplos anteriores e são determinadas com base no valor Tm para um polinucleotideo para deteção de cancro, que é utilizado como um iniciador ou uma sonda, e com base na regra empírica dos experimentadores. Pessoas habilitadas na arte podem facilmente determinar tal intervalo de temperaturas. A expressão "não hibridiza substancialmente com", conforme utilizada aqui, refere-se a que um sujeito não hibidiza realmente com uma região parcial alvo ou um sujeito hibridiza com uma região parcial alvo numa quantidade significativamente baixa; ou seja, numa 34 ΕΡ2325648Β1 quantidade relativamente negligivel baixa, mesmo quando hibridiza com a região parcial alvo. Um exemplo de um polinucleotideo que hibridiza especificamente em tais condições é um polinucleotideo com uma identidade de sequência a um nível ou mais com a sequência nucleotídica de uma região parcial alvo. Um exemplo específico de tal polinucleotideo tem 70% ou mais, preferencialmente 80% ou mais, 85% ou mais, mais preferencialmente 90% ou mais, ainda preferencialmente 93% ou mais, ainda preferencialmente 95% ou mais e ainda mais preferencialmente 98% ou mais de identidade de sequência. Mais preferencialmente, o polinucleotideo tem uma sequência nucleotídica idêntica à sequência nucleotídica de uma região parcial alvo. A identidade de sequência é definida da mesma forma que para a identidade de sequência da sequência de aminoácidos anterior. Mesmo se um terminal de um polinucleotideo para deteção de cancro contém uma região que não hibridiza com um sujeito, no caso de uma sonda, pode ser utilizado para deteção, desde que uma região hibridizante ocupe tanto quanto cerca de metade ou mais da sonda inteira. Além disso, no caso de um iniciador, pode ser utilizado para deteção, desde que uma região hibridizante ocupe tanto quanto cerca de metade ou mais do iniciador inteiro e esteja localizada na extremidade do terminal 3', desde que o emparelhamento normal e a reação de extensão possam ocorrer. Conforme descrito anteriormente, quando um terminal de um polinucleotideo para deteção de cancro contém uma região não hibridizante, a identidade de sequência com a sequência nucleotídica alvo é calculada focando-se apenas numa região hibridizante sem tomar em consideração a região não hibridizante. O termo "sequência parcial" na presente invenção refere-se a uma sequência parcial nas sequências nucleotídicas mostradas nas SEQ. ID N.°s ímpares 1-29, 35 ΕΡ2325648Β1 especificamente a sequência parcial com uma sequência de 15 ou mais nucleotideos contínuos, preferencialmente 18 ou mais nucleotideos contínuos, mais preferencialmente 20 ou mais nucleotideos contínuos ou 25 ou mais nucleotideos e ainda preferencialmente 30, 40 ou 50 ou mais nucleotideos contínuos. A expressão "a sequência nucleotídica mostrada na SEQ. ID N.° 5", conforme utilizada aqui, refere-se a, além da sequência nucleotídica realmente mostrada na SEQ. ID N.° 5, uma sequência complementar à sequência. Logo, por exemplo, a expressão "um polinucleotídeo com a sequência nucleotídica mostrada na SEQ. ID N.° 5" refere-se a um polinucleotídeo de cadeia simples com a sequência nucleotídica realmente mostrada na SEQ. ID N.° 5, um polinucleotídeo de cadeia simples com a sequência nucleotídica complementar à mostrada na SEQ. ID N.° 5 e um polinucleotídeo de cadeia dupla compreendendo-os. Quando um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo a ser utilizado na presente invenção é preparado, qualquer uma sequência nucleotídica é selecionada de forma apropriada e esta seleção pode ser facilmente realizada por pessoas habilitadas na arte. 0 número de nucleotideos num polinucleotídeo para deteção de cancro é preferencialmente 18 ou mais nucleotideos com vista a assegurar especificidade. Quando utilizado como uma sonda, o tamanho do polinucleotídeo é preferencialmente 18 ou mais nucleotideos, é ainda preferencialmente 20 ou mais nucleotideos e o comprimento inteiro ou inferior da região codificante. Quando utilizado como um iniciador, o tamanho do polinucleotídeo é preferencialmente 18 ou mais nucleotideos e 50 ou menos nucleotideos. Um exemplo preferido do polinucleotídeo para deteção de cancro é um polinucleotídeo compreendendo 18 ou mais nucleotideos contínuos numa sequência nucleotídica mostrada em qualquer uma das SEQ. ID N.°s ímpares 1-29. 36 ΕΡ2325648Β1 É óbvio para pessoas habilitadas na arte que se referem a esta Descrição que: um polinucleotídeo que hibridiza especificamente com uma região parcial na SEQ. ID N.° 5, 7, 9, 11 ou 13 é utilizado para medição da quantidade de ARNm que codifica a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14, respetivamente; e um polinucleotídeo que hibridiza especificamente com uma região parcial na SEQ. ID N.° 1 ou 3 é utilizado para medição da quantidade de ARNm que codifica a CAPRINA-1 humana da SEQ. ID N.° 2 ou 4, respetivamente. Contudo, uma proteína de um mamífero e um homólogo da mesma de outro mamífero geralmente partilham elevada identidade de sequência mesmo ao nível da sequência nucleotídica. Assim, a identidade de sequência entre as sequências das SEQ. ID N.°s ímpares 1-13 também é tão alta quanto 94% a 100%. Em conformidade, um polinucleotídeo que hibridiza especificamente com uma região parcial da sequência da SEQ. ID N.° 5 também pode hibridizar especificamente com uma região parcial correspondente à região parcial relevante de qualquer uma das SEQ. ID N.°s ímpares 1-29.

Na realidade, conforme descrito nos Exemplos a seguir, um par de iniciadores com as sequências nucleotídicas mostradas nas SEQ. ID N.° 33 e 34, respetivamente, hibridiza especificamente com ambas região parcial de qualquer uma das sequências das SEQ. ID N.°s ímpares 1-29 e uma região parcial da sequência da SEQ. ID N.° 5, de modo que podem ser medidos ambos ARNm que codifica a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6 e ARNm que codifica um homólogo da mesma, por exemplo. Em conformidade, por exemplo, com a utilização de um polinucleotídeo que hibridiza especificamente com uma região parcial da sequência da SEQ. ID N.° 5, pode ser medido não apenas o ARNm que codifica a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 6, mas também o ARNm que codifica a CAPRINA-1 humana da SEQ. ID N.0 2 ou 4. De forma 37 ΕΡ2325648Β1 análoga, também pode ser medido um ARNm que codifica a CAPRINA-1 de outro mamífero tal como um gato. Quando um polinucleotídeo para deteção de cancro é desenhado, é desejável selecionar regiões parciais com uma identidade de sequência especificamente elevada entre as SEQ. ID N.°s (SEQ. ID N.°s ímpares 1-29) (preferencialmente, tashe sequências nucleotídicas são as mesmas). Se uma região parcial com identidade de sequência particularmente elevada entre um cão e um humano estiver presente, espera-se que esteja prsente uma região com identidade de sequência muito alta com a região num gene homólogo de outra espécie animal. Através da seleção de tais regiões parciais, pode ser aumentada a precisão para medir o ARNm que codifica a CAPRINA-1 de uma espécie animal que não sejam cães e humanos.

Um próprio método para medir um ácido nucleico teste utilizando um polinucleotídeo que hibridiza especificamente com uma região parcial do ácido nucleico teste como um iniciador ou uma sonda para um método de amplificação de ácidos nucleicos tal como PCR é bem conhecido. Exemplos de tal método incluem, além da RT-PCR que está descrita especificamente nos Exemplos a seguir, Northern blot e hibridização in situ. Qundo a quantidade de ARNm é medida, podem ser empregues todos estes métodos de medição conhecidos.

Um próprio método de amplificação de ácidos nucleicos tal como PCR é bem conhecido na arte e, por isso, estão disponíveis comercialmente kits de reagentes e equipamento para o mesmo, para que o método possa ser facilmente implementado. Especificamente, por exemplo, as etapas de desnaturação, emparelhamento e extensão são cada uma realizadas utilizando um ácido nucleico teste (por exemplo, o ADNc de um gene que codifica uma proteína com uma 38 ΕΡ2325648Β1 sequência de aminoácidos mostrada em qualquer uma das SEQ. ID N.°s pares 2-30) como um molde e um par de polinucleotideos (iniciadores) para deteção de cancro num tampão conhecido na presença de ADN polimerase termo-estável tal como Taq polimerase ou Pfu polimerase e dNTP (aqui, N = A, T, C ou G) variando a temperatura da solução de reação. Em geral, a etapa de desnaturação é realizada a 90°C-95°C, a etapa de emparelhamento é realizada a ou próximo da Tm do molde e os iniciadores (preferencialmente dentro de 64°C) e a etapa de extensão é realizada a 72°C que é uma temperatura ótima para o ADN polimerase termo-estável tal como Taq polimerase ou Pfu polimerase ou uma temperatura próxima da temperatura ótima. Cada etapa é realizada durante cerca de 30 segundos a 2 minutos, conforme selecionado de forma apropriada. Este ciclo de aquecimento é repetido cerca de 25 a 40 vezes, por exemplo, para que a região do ácido nucleico molde flanqueada por um par de iniciadores seja amplificada. Um método de amplificação de ácidos nucleicos não está limitado a PCR e quaisquer outros métodos de amplificação de ácidos nucleicos conhecidos na arte podem ser empregues aqui. Conforme descrito anteriormente, quando um método de amplificação de ácidos nucleicos é realizado utilizando um par de polinucleotideos para deteção de cancro como iniciadores e um ácido nucleico teste como um molde, o ácido nucleico teste é amplificado. Contudo, se não houver ácido nucleico teste contido numa amostra, a amplificação não ocorre. Assim, através da deteção ds produtos de amplificação, a presença ou ausência do ácido nucleico teste numa amostra pode ser confirmada. Um produto de amplificação pode ser detetado por um método que envolve sujeitar uma solução de reação após amplificação a eletroforese e depois corar a banda com brometo de etidio ou afins ou um método que envolve imobilizar um produto de amplificação após dita eletroforese numa fase sólida tal 39 ΕΡ2325648Β1 como uma membrana de náilon, realizando hibridização com uma sonda rotuladora que hibridiza especificamente com um ácido nucleico teste, lavando e depois detetando o rótulo. Além disso, nomeadamente a deteção em tempo real com PCR é realiada utilizando um corante fluorescente quencher e um corante fluorescente repórter e, assim, a quantidade de um ácido nucleico teste num especime pode ser determinada quantitativamente. Uma vez que os kits para deteção em tempo real com PCR estão disponíveis comercialmente, a deteção em tempo real com PCR pod ser facilmente implementada. Além disso, a determinação semi-quantitativa de um ácido nucleico teste também é possível com base na intensidade de banda de eletroforese. Um ácido nucleico teste pode ser ARNm ou ADNc resultante de ARNm através de transcrição reversa. Quando o ARNm é amplificado como um ácido nucleico teste, também pode ser empregue um método NASBA (método 3SR ou método TMA) utilizando o par de iniciadores anterior. 0 próprio método NASBA é bem conhecido e também estão comercialmente disponíveis kits para o método, de modo que o método pode ser facilmente implementado utilizando o par de iniciadores anterior.

Como uma sonda, pode ser utilizada uma sonda rotulada que é preparada rotulando um polinucleotídeo para deteção de cancro com um rótulo fluorescente, um radio-rótulo, um rótulo de biotina ou afins. Um método para rotular um próprio polinucleotídeo é bem conhecido. A presença ou ausência de um ácido nucleico teste numa amostra pode ser examinada imobilizando um ácido nucleico teste ou um produto de amplificação do mesmo, realizando hibridização com uma sonda rotulada, lavando e depois medindo o rótulo ligado à fase sólida. Em alternativa, um polinucleotídeo para deteção de cancro é imobilizado, um ácido nucleico teste é hibridizado com o mesmo e depois o ácido nucleico teste ligado à fase sólida pode ser detetado utilizando a 40 ΕΡ2325648Β1 sonda rotulada ou afins. Em tal caso, um polinucleotídeo para deteção de cancro ligado a uma fase sólida também é referido como uma sonda. Um método para medir um ácido nucleico teste utilizando uma sonda polinucleotídica também é conhecido na arte. 0 método pode ser realizado causando a entrada em contacto, num tampão, de uma sonda polinucleotídica com um ácido nucleico teste à Tm ou próximo da Tm (preferencialmente, a 64°C) para hibridização, lavando e depois medindo a sonda rotulada que hibridizou ou o ácido nucleico molde ligado à sonda de fase sólida. Exemplos de tal método incluem métodos bem conhecidos, tais como métodos Northern blot, hibridização in situ e Southern blot. Qualquer método bem conhecido é aplicável. É determinado pelo método de deteção da presente invenção se ou não um sujeito animal tem cancro com base no nível de expressão da CAPRINA-1 medido conforme descrito anteriormente. 0 cancro pode ser detetado apenas medindo a expressão da CAPRINA-1 num sujeito animal. Contudo, é preferível visando o aumento da precisão de deteção examiner os níveis de expressão (nível do anticorpo), da CAPRINA-1 numa ou numa pluralidade de amostras de sujeitos saudáveis para obter um valor padrãode sujeitos saudáveis e depois comparar o valor medido de um sujeito animal com o valor padrão obtido a partir de sujeitos saudáveis. Para aumentar ainda mais a precisão de deteção, os níveis de expressão da CAPRINA-1 são examinados para amostras obtidas a partir de muitos pacientes com cancro para obter um valor padrão de pacientes portadores de cancro e depois o valor medido de um sujeito animal pode ser comparado com ambos valor padrão de sujeitos saudáveis e o valor padrão de pacientes com cancro. Os valores padrão anteriores podem ser determinados quantificando o nível de expressão da CAPRINA-1 em cada amostra e depois calculando o valor médio 41 ΕΡ2325648Β1 dos mesmos, por exemplo. Uma valor padrão de sujeitos saudáveis e o mesmo dos pacientes com cancro podem ser determinados atempadamente examinando os níveis de expressão da CAPRINA-1 em muitos sujeitos saudáveis e pacientes com cancro. Logo, quando é realizada a comparação com um valor padrão no método da presente invenção, pode ser utilizado um valor padrão determinado atempadamente.

No método de deteção da presente invenção, os diagnósticos baseados noutros antígenos cancerígenos ou marcadores cancerígenos podem ser utilizados em combinação. Em conformidade, a precisão de deteção de cancro pode ser ainda mais aumentada. Por exemplo, quando um anticorpo especificamente existente em pacientes com cancro é medido pelo método da presente invenção, outro polipeptídeo que seja expresso com frequência num tecido cancerígeno pode ser utilizado em combinação como um antigeno de uma forma semelhante à dos polipeptídeos anteriores. Além disso, o método da presente invenção e diagnóstico utilizando um marcador cancerígeno previamente conhecido pode ser realizado em combinação. 0 cancro pode ser detetado in vivo de acordo com o método de deteção da presente invenção. Em particular, conforme descrito nos Exemplos a seguir, mesmo um tumor de pequeno tamanho, que é invisível a olho nú ou um tumor numa parte profunda in vivo pode ser detetado de acordo com o método da presente invenção. Assim, o método da presente invenção é útil para deteção precoce de cancro. Além disso, através da applicação do método de deteção da presente invenção a um paciente durante o seguimento após tratamento de cancro, o cancro pode ser detetado precocemente se ocorreu uma reincidência do cancro.

Além disso, num organismo vivo portador de cancro, 42 ΕΡ2325648Β1 como o número de células cancerígenas que expressam a CAPRINA-1 medidas na presente invenção aumenta, as quantidades da proteína e do seu ARNm acumulado no organismo vivo aumentam e a quantidade de produção do anticorpo contra a CAPRINA-1 no soro aumenta. Entretanto, como o número de células cancerígenas diminui, as quantidades da proteína e do seu ARNm acumulado in vivo diminuem e a quantidade do anticorpo contra a CAPRINA-1 no soro diminui. Logo, quando o nivel de expressão da CAPRINA-1 é superior ao de um controlo, pode ser determinado que um aumento de tumor ou metástases do cancro está a ocorrer; ou seja, a extensão do cancro progride. Na realidade, conforme descrito especificamente nos Exemplos a seguir, foi observado um aumento no nível de anticorpo no soro anterior num organismo vivo portador de cancro em associação com a progressão do cancro (maligno) tal como aumento de tumor e metástases. Conforme descrito anteriormente, a extensão do cancro também pode ser detetada pelo método da presente invenção.

Além disso, conforme descrito nos Exemplos a seguir, entre tumores do mesmo tipo, os níveis de anticorpo anteriores nos tumores de tipo maligno foram significativamente superiores aos dos nos tumores de tipo benigno. Em conformidade, quando o nível de expressão da CAPRINA-1 é alto, pode ser determinado que a malignidade do cancro é superior. Especificamente, a malignidade do cancro também pode ser detetada pelo método da presente invenção. 0 cancro a ser sujeito ao método para detetar cancro da presente invenção é cancro que expressa a CAPRINA-1. Exemplos de tal cancro incluem, mas não se limitam a, tumor cerebral, carcinoma de células escamosas da cabeça, pescoço, pulmão, útero ou esófago, melanoma, adenocarcinoma do pulmão ou útero, cancro renal, tumor misto maligno, 43 ΕΡ2325648Β1 carcinoma hepatocelular, carcinoma das células basais, tumor gengival tipo acantoma, tumor da cavidade oral, adenocarcinoma perianal, tumor do saco anal, adenocarcinoma apócrino do saco anal, carcinoma das células de Sertoli, cancro do vestíbulo vaginal, adenocarcinoma sebáceo, epitelioma sebáceo, adenoma sebáceo, carcinoma das glândulas sudoríparas, adenocarcinoma intranasal, adenocarcinoma nasal, cancro da tiróide, cancro do intestino grosso, adenocarcinoma bronquial, adenocarcinoma, carcinoma ductal, adenocarcinoma mamário, adenocarcinoma mamário tipo composto, tumor misto mamário maligno, adenocarcinoma papilar intraductal, fibrossarcoma, hemangiopericitoma, osteossarcoma, condrossarcoma, sarcoma dos tecidos moles, sarcoma histiocítico, mixossarcoma, sarcoma indiferenciado, cancro do pulmão, mastocitoma, leiomioma cutâneo, leiomioma intraperitoneal, leiomioma, leucemia linfocitica crónica, linfoma, linfoma gastrointestinal, linfoma digestivo, linfoma de células pequenas a médias, tumor adrenomedular, tumor das células granulosas e feocromocitoma. Além disso, um organismo vivo a ser sujeito ao método da presente invenção é um mamífero e é preferencialmente um humano, um cão ou um gato.

Exemplos de uma amostra a ser sujeita ao método da presente invenção incluem fluídos corporais tais como sangue, soro, plasma sanguíneo, ascites e efusão pleural, tecidos e células. Em particular, no 1° método e no 2° método anterior, soro, plasma sanguíneo, ascites e efusão pleural podem ser preferencialmente utilizados e no 3 método anterior para medição de ARNm, amostras de tecido e amostras de células são preferíveis.

Os polipeptídeos anteriores a serem utilizados como antígenos para imunoensaio no Io método (ou seja, a CAPRINA-1 canina da SEQ. ID N.° 2 e um homólogo da mesma, 44 ΕΡ2325648Β1 um polipeptídeo parcial especificamente reativo, um polipeptideo modificado especificamente reativo e um polipeptídeo de adição especificamente reativo) podem ser providenciados como reagentes para deteção de cancro. 0 reagente pode consistir de apenas o polipeptídeo anterior ou pode conter vários aditivos ou afins, por exemplo, úteis para a estabilização do polipeptídeo. Além disso, o reagente pode ser providenciado numa forma imobilizada para uma fase sólida tal como uma placa ou uma membrana. Exemplos preferidos do polipeptídeo são conforme descritos anteriormente.

Um anticorpo que passa por uma reação antígeno-anticorpo com CAPRINA-1 ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que é utilizado para imunoensaio da própria CAPRINA-1 no 2° método, também pode ser providenciado como um reagente para deteção de cancro. 0 reagente para deteção de cancro neste caso também pode consistir de apenas o anticorpo anterior ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou pode conter vários aditivos ou afins úteis para a estabilização e afins do anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Além disso, o anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser numa forma ligada a um metal tal como manganês ou ferro. Quando tal anticorpo ligado a metal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é administrado ao corpo de um organismo vivo, o anticorpo ligado a metal ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é acumulado a um nível aumentado num local onde a proteína do antígeno está presente num nível superior. Logo, o metal é medido por MRI ou afins e, assim, a presença de células cancerígenas que produzem a proteína do antígeno pode ser detetada.

Além disso, o polinucleotídeo anterior para deteção de cancro pode ser utilizado para medição de ARNm no 3 método 45 ΕΡ2325648Β1 também pode ser providenciado como um reagente para deteção de cancro. 0 reagente para deteção de cancro neste caso também pode consistir de apenas o polinucleotideo ou pode conter vários aditivos e afins useful para a estabilização e afins do polinucleotideo. 0 polinucleotideo para deteção de cancro contido no reagente é preferencialmente um iniciador ou uma sonda. Condições e exemplos preferidos do polinucleotideo para deteção de cancro são conforme descrito anteriormente.

EXEMPLOS A presente invenção será descrita em maior detalhe com referência aos exemplos apresentados a seguir; contudo, o âmbito técnico da presente invenção não está limitado aos exemplos.

Exemplo 1: Obtenção de nova proteina de antigeno

cancerígeno pelo método SEREX (1) Construção de biblioteca de ADNc 0 ARN total foi extraído a partir de tecido de testículo de um cão saudável por um método de ácido guanidino-fenol-clorofórmio e depois um ARN poliA foi purificado utilizando o Kit de purificação de ARNm Oligotex-dT30 (Takara Shuzo Co., Ltd.), de acordo com os protocolos incluídos no kit.

Uma biblioteca de fagos de ADNc de testículo canino foi sintetizada utilizando o assim obtido ARNm (5 yg) . A biblioteca de fagos ADNc foi construída utilizando um Kit de Síntese de ADNc, um Kit de Síntese de ADNc ZAP e um Kit de Clonagem de ADNc ΖΑΡ-GigapackIII Gold (STRATAGENE), de acordo com protocolos incluídos nos kits. 0 tamanho da 46 ΕΡ2325648Β1 biblioteca de fagos ADNc assim construída foi de 7,73 x 105 pfu/ml. (2) Triagem de biblioteca de ADNc utilizando soro

Foi realizada imunotriagem utilizando a biblioteca de fagos de ADNc de testículo canino anteriormente construída. Especificamente, o hospedeiro Escherichia coli (XLl-Azul MRF' ) foi infetado com o faho numa placa de agarose NZY (□90xl5mm) para obter 2210 clones. Células de E. coli foram cultivadas a 42°C durante 3 a 4 horas para formar placas. A placa foi coberta com uma membrana de nitrocelulose (Hybond C Extra: GE Healthcare Bio-Science) impregnada com IPTG (isopropil-3-D-tioga-lactosida) a 37°C durante 4 horas, para que a proteína fosse induzida, expressa e depois transferida para a membrana. Subsequentemente, a membrana foi colhida e depois imersa em TBS (10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl e pH 7,5) contendo 0,5% leito magro em pó, seguido de agitação durante a noite a 4°C, suppressimindo, assim, reação não especifica. 0 filtro foi reagido com um soro diluído 500 vezes de um paciente canino à temperatura ambiente durante 2 a 3 horas.

Tal como o soro anterior de um paciente canino, foi utilizado um soro colhido de um paciente canino portador de cancro da mama. Estes soros foram armazenados a -80°C e depois sujeitos a pré-tratamento imediatamente antes da utilização. Um método para pré-tratamento de soro é como se segue. Especificamente, o hospedeiro Escherichia coli (XLl-Azul MRF' ) foi infetado com um fago Λ ZAP Express no qual não tinha sido inserido qualquer gene estranho e depois cultivado durante a noite num meio de placa NZY a 37°C. Subsequentemente, foi adicionado à placa tampão (0,2 M NaHC03 e pH 8,3) contendo 0,5 M NaCl, a placa foi deixada repousar a 4°C durante 15 horas e depois o sobrenadante foi 47 ΕΡ2325648Β1 recolhido como um extrato Escherichia coli/fago. Depois, o assim colhido extrato Escherichia coli/fago foi aplicado a uma coluna NHS (GE Healthcare Bio-Science) , para que uma proteína derivada do fago de Escherichia coli fosse imobilizada. 0 soro de um paciente canino foi aplicado à coluna imobilizada com proteína para reação e depois a Escherichia coli e um anticorpo adsorvido ao fago foram removidos do soro. A fração do soro que tinha passado pela coluna foi diluída 500 vezes com TBS contendo 0,5% leite magro em pó. O resultante foi utilizado como um material de imunotriagem.

Uma membrana na qual o soro tratado e a proteína de fusão anterior foram sujeitos a blott foi lavada 4 vezes com TBS-T (0,05% Tween20/TBS) e depois causada para reagir com IgG de cabra anti-canino (IgG-h+I Cabra anti-Cão HRP conjugado (Laboratórios BETHYL)) diluída 5000 vezes com TBS contendo 0,5% leite magro em pó como um anticorpo secundário durante 1 hora à temperatura ambiente. A deteção foi realizada através de uma reação de coloração de enzima utilizando uma solução de reação NBT/BCIP (Roche). A colónias que corresponderam a locais positivas pra uma reação de coloração foram recolhidas da placa de agarose NZY (□90 x 15 mm) e depois suspensas em 500 μΐ de um tampão SM (100 mM NaCl, 10 mM MgCISCh, 50 mM Tris-HCl, 0,01% gelatina e pH 7,5) . Até as colónicas positivas para a reação de coloração serem unificadas, as triagens secundária e terciária foram repetidas por um método semelhante ao anterior, para que 30,940 clones de fago reagindo com IgG do soro fossem classificadas. Assim, foram isolados 5 clones positivos. (3) Procura de homologia para gene de antígeno isolado

Para análise da sequência nucleotídica de 5 clones 48 ΕΡ2325648Β1 positivos isolados pelo método anterior, foi realizado um procedimento para conversão de vetores fagos em vetores plasmideos. Especificamente, foram preparados 200 μΐ de uma solução para conter o hospedeiro Escherichia coli (XLl-Azul MRF') para que a absorvância OD6oo fosse 1,0. A solução foi misturada com 250 μΐ de uma solução de fago purificada e depois com 1 μΐ de um fago auxiliar ExAssist (STRATAGENE) , seguido de 15 minutos de reação a 37°C. Três mililitros de meio LB foram adicionados e depois o cultivo foi realizado a 37°C durante 2,5 a 3 horas. Imediatamente após o cultivo, a temperatura da solução foi mantida a 70°C em banho maria durante 20 minutos, foi realizada centrifugação a 4°C e 1000 X g durante 15 minutos e depois o sobrenadante foi recolhido como uma solução de fago. Subsequentemente, foram preparados 200 μΐ de uma solução para conter hospedeiro de fago Escherichia coli (SOLR) para que a absorvância OD6oo fosse 1,0. A solução foi misturada com 10 μΐ de uma solução de fago purificada, seguido de 15 minutos de reação a 37°C. A solução (50 μΐ) foi semeada em meio de agár LB contendo ampicilina (para uma concentração final de 50 pg/ml) e depois cultivada durante a noite a 37°C. Foram colhidas colónias únicas SOLR transformadas e depois cultivadas em meio LB contendo ampicilina (concentração final: 50 pg/ml) a 37°C. Um ADN de plasmideo contendo uma inserção de interesse foi purificado utilizando um Kit Miniprep de plasmideo QIAGEN (QIAGEN). 0 plasmideo purificado foi sujeito a análise da sequências de comprimento inteiro por um método de walking de iniciadores utilizando o iniciador T3, de acordo com a SEQ. ID N.° 31 e o iniciador T7, de acordo com a SEQ. ID N.° 32. Como resultado da análise de sequências, foram obtidas sequências génicas de acordo com as SEQ. ID N.°s 5, 7, 9, 11 e 13. Um programa de procura de homologia, BLAST search (http://www. ncbi. Nlm. Nih. gov/BLAST/), foi 49 ΕΡ2325648Β1 executado utilizando as sequências nucleotidicas dos genes e sequências de aminoácidos (SEQ. ID N.°S 6, 8, 10, 12 e 14) das proteínas codificadas pelos genes. Como resultado desta procura de homologia com genes conhecidos, foi revelado que todos os 5 genes obtidos codificavam a CAPRINA-1. Em relação às regiões a serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os 5 genes foi de 100% em termos da sequência nucleotídica e 99% em termos da sequência de aminoácidos. Além disso, em relação às regiões a serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os genes e genes que codificam o homólogo humano da mesma foi de 94% em termos da sequência nucleotídica e 98% em termos da sequência de aminoácidos. As sequências nucleotidicas do homólogo humano são mostradas nas SEQ. ID N.°s 1 e 3 e as sequências de aminoácidos do mesmo são mostradas nas SEQ. ID N.°s 2 e 4. Além disso, em relação às regiões a serem traduzidas em proteínas, a identidade de sequência entre os genes caninos obtidos e um gene que codifica um homólogo bovino foi de 94% em termos da sequência nucleotídica e 97% em termos da sequência de aminoácidos. A sequência nucleotídica do homólogo bovino é mostrada na SEQ. ID N.° 15 e a sequência de aminoácidos do mesmo é mostrada na SEQ. ID N.° 16. Em relação às regiões a serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo bovino foi de 94% em termos da sequência nucleotídica e oscilou de 93% a 97% em termos da sequência de aminoácidos. Além disso, em relação às regiões a serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os genes caninos obtidos e um gene que codifica um homólogo equino foi de 93% em termos da sequência nucleotídica e 97% em termos da sequência de aminoácidos. A sequência nucleotídica do homólogo equino é mostrada na SEQ. ID N.° 17 e a sequência de aminoácidos do mesmo é mostrada na SEQ. ID N.° 18. Em relação às regiões a 50 ΕΡ2325648Β1 serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo equino foi de 93% em termos da sequência nucleotídica e 96% em termos da sequência de aminoácidos. Além disso, em relação às regiões a serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os genes caninos obtidos e genes que codificam homólogo de ratinho ranged from 87% a 89% em termos da sequência nucleotídica e oscilou de 95% a 97% em termos da sequência de aminoácidos. As sequências nucleotídicas do homólogo de ratinho são mostradas nas SEQ. ID N.°S 19, 21, 23, 25 e 27 e as sequências de aminoácidos do mesmo são mostradas nas SEQ. ID N.°S 20, 22, 24, 26 e 28. Em relação às regiões a serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e os genes que codificam o homólogo de ratinho oscilaram de 89% a 91% em termos da sequência nucleotídica e oscilaram de 95% a 96% em termos da sequência de aminoácidos. Além disso, em relação às regiões a serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os genes caninos obtidos e um gene que codifica um homólogo de galinha foi de 82% em termos da sequência nucleotídica e 87% em termos da sequência de aminoácidos. A sequência nucleotídica do homólogo de galinha é mostrada na SEQ. ID N.° 2 9 e a sequência de aminoácidos do mesmo é mostrada na SEQ. ID N.° 30. Em relação às regiões a serem traduzidas para proteínas, a identidade de sequência entre os genes que codificam o homólogo humano e o gene que codifica o homólogo de galinha oscilou entre 81% a 82% em termos da sequência nucleotídica e foi de 86% em termos da sequência de aminoácidos. (4) Análise da expressão génica em cada tecido A expressão dos genes obtida pelo método anterior em 51 ΕΡ2325648Β1 tecidos normais caninos e humanos e várias linhas de células foi examinada por um método RT-PCR (Transcrição Reversa-PCR). Foi realizada uma reação de transcrição reversa conforme se segue. Especificamente, o ARN total foi extraído de cada tecido (50 mg a 100 mg) e cada linha de células (5 a 10 X 105 células) utilizando um reagente TRIZOL (Invitrogen Corporation), de acordo com os protocolos incluídos. O ADNc foi sintetizado utilizando o ARN total e Sistema de Síntese de Primeira Cadeia Sobrescrito para RT-PCR (Invitrogen Corporation), de acordo com os protocolos incluídos. Foi realizada PCR conforme se segue utilizando iniciadores específicos aos genes obtidos (de acordo com as SEQ. ID N.°s 33 e 34). Especificamente, a PCR foi realizada preparando uma solução de reação ajustada a uma quantidade total de 25 μΐ através da adição de cada reagente e um tampão incluído (0,25 μΐ de uma amostra preparada por reação de transcrição reversa, os iniciadores anteriores (2 μΜ cada), dNTP (0,2 mM each) e 0,65 U de ExTaq polimerase (Takara-baio Co., Ltd.)) e depois reagindo a solução repetindo 30 vezes um ciclo de 94°C/30 segundos, 60°C/30 segundos e 72°C/30 segundos utilizando um termociclador (BIORAD). Os iniciadores específicos de gene mencionados anteriormente foram utilizados para amplificar a região entre o nucleotídeo 206 e o nucleotídeo 632 na sequência nucleotídica da SEQ. ID N.° 5 (gene da CAPRINA-1 canina) e a região entre o nucleotídeo 698 e o nucleotídeo 1124 na sequência nucleotídica da SEQ. ID N.° 1 (gene da CAPRINA-1 humana). Como controlo, os iniciadores específicos de GAPDH (de acordo com as SEQ. ID N.°s 35 e 36) foram utilizados ao mesmo tempo. Como resultado, conforme mostrado na Figura 1, foi observada uma forte expressão nos testículos no caso de tecidos caninos saudáveis, ao passo que se observou expressão em tecidos caninos portadores de cancro da mama e adenocarcinoma. Além disso, também foi confirmada a expressão do homólogo humano 52 ΕΡ2325648Β1 dos genes obtidos. Como resultado, à semelhaça do caso dos genes da CAPRINA-1 canina, pôde ser confirmada expressão apenas nos testículos no caso de tecidos normais. Contudo, no caso de células cancerígenas, a expressão foi detetada em muitos tipos de linhas de células de cancro, tais como linhas de células de cancro da mama, tumor cerebral, leucemia, cancro do pulmão e cancro esofágico. A expressão foi confirmada num número particularmente grande de linhas de células de cancro da mama. Com base nos resultados, confirmou-se que a expressão da CAPRINA-1 não foi observada em tecidos normais que não fossem os dos testículos, ao passo que a CAPRINA-1 foi expressa em muitas células cancerígenas e particularmente em linhas de células de cancro da mama.

Além disso, na Figura 1, a Referência N.° 1 ao longo do eixo longitudinal indica o padrão de expressão década um dos genes anteriormente identificados e a Referência N.° 2 ao longo do mesmo eixo indica o padrão de expressão do gene GAPDH para controlo. (5) Coloração imunohistoquímica (5)-l Expressão da CAPRINA-1 em tecidos de ratinho e caninos normais

Ratinhos (Balb/c, fêmeas) e cães (cães beagle, fêmeas) foram exsanguinados sob anestesia com éter e com quetamina/isoflurano. Após laparotomia, os órgãos (estômago, fígado, globo ocular, glândula do timo, músculo, medula óssea, útero, intestino delgado, esófago, coração, rim, glândula salivar, intestino grosso, glândula mamária, cérebro, pulmão, pele, glândula adrenal, ovário, pâncreas, baço e bexiga) foram cada um transferidos para uma placa com 10 cm contendo PBS. Ada órgão foi aberto em PBS e depois fixo por perfusão durante a noite com 0,1 M tampão 53 ΕΡ2325648Β1 fosfato (pH 7,4) contendo 4% paraformaldeído (PFA). 0 perfusato foi descartado, a superfície do tecido de cada órgão foi enxaguada com PBS e depois foi adicionada uma solução de PBS contendo 10% sacarose a um tubo de centrífuga de 50 ml. Cada tecido foi depois colocado em cada tubo e depois agitado utilizando um rotor a 4°C durante 2 horas. Cada solução foi substituída com uma solução PBS contendo 20% sacarose e depois deixada repousar a 4°C até os tecidos precipitarem. Cada solução foi substituída com uma solução PBS contendo 30% sacarose e depois deixada repousar a 4°C até os tecidos precipitarem. Cadatecido foi removido e uma porção necessária foi excisada com um bisturi cirúrgico. A seguir, foi aplicado um composto OCT (Tissue Tek) e espalhado sobre a superfície de cada tecido e depois os tecidos foram colocados em Cryomold. Cryomold foi colocado em gelo seco para congelamento rápido. Os tecidos foram cortados em peças de 10 a 20 pm e comprimento utilizando um criostato (LEICA) e depois as peças de tecido cortadas foram secas ao ar em lâminas de vidro durante 30 minutos utilizando um secador de cabelo, para que as lâminas de vidro nas quais as peças de tecido cortadas foram aplicadas fossem preparadas. Posteriormente, cada lamina de vidro foi colocada numa garrafa corante cheia de PBS-T (solução salina contendo 0,05% Tween20), para que fosse realizado um procedimento envolvendo troca com PBS-T cada 5 minutos em 3 ocasiões. A água em excesso à volta de cada espécime foi removida utilizando Kimwipes e depois cada secção foi envolvida utilizando DAKOPEN (DAKO). Como soluções bloqueadoras, foi aplicado um reagente bloqueador Ig de ratinho MOM (VECTASTAIN) em tecido de ratinho e solução PBS-T contendo 10% soro bovino fetal foi aplicado em tecido canino. Os resultantes foram deixados a repousar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. A seguir, foi aplicada em cada lâmina de vidro uma solução preparada com solução 54 ΕΡ2325648Β1 bloqueadora para um 10 pg/ml anticorpo monoclonal anti-CAPRINA-1 (anticorpo monoclonal, #8) com a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 55 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 56, que reage com as superfícies das células cancerígenas preparadas no Exemplo 3, e depois deixada repousar numa câmara húmida a 4°C durante a noite. Após 3 ocasiões de 10 minutos de lavagem com PBS-T, foi aplicado um anticorpo anti-IgG rotulado com biotina MOM (VECTASTAIN) diluído 250 vezes com a solução bloqueadora em cada lâmina de vidro e depois deixado a repousar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. Após 3 ocasiões de 10 minutos de lavagem com PBS-T, foi aplicado um reagente ABC avidina-biotina (VECTASTAIN) e depois deixado a repousar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 5 minutos. Após 3 ocasiões de 10 minutos e lavagem com PBS-T, foi aplicada uma solução corante DAB (DAB 10 mg + 30% H202 10 μ1/0,05 M Tris-HCl (pH 7,6) 50 ml) e depois as lâminas de vidro foram deixadas a repousar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 30 minutos. As lâminas de vidro foram enxaguadas com água destilada e depois foi aplicado um reagente hematoxilina (DAKO). Depois de serem deixadas a repousar à temperatura ambiente durante 1 minuto, as lâminas de vidro foram enxaguadas com água destilada. As lâminas de vidro foram imersas em soluções de etanol a 70%, 80%, 90%, 95% e 100% por esta ordem durante 1 minuto cada e depois deixadas a repousar em xileno durante a noite. As lâminas de vidro foram removidas, cobertas com Meio de Montagem em Glicergel (DAKO) e depois observadas. Como resultado, a expressão da CAPRINA-1 foi observada num grau ligeiro nas células em todos os tecidos de glândula salivar, rim, cólon e estômago, mas a expressão da CAPRINA-1 nunca foi observada nas superfícies celulares. Além disso, não foi observada qualquer expressão da CAPRINA-1 nos tecidos de outros órgãos. 55 ΕΡ2325648Β1 (5)-2 Expressão da CAPRINA-1 em tecido canino portador de cancro da mama

Com a utilização de 108 espécimes de tecido caninos portadores de cancro da mama congelados provenientes de cães diagnosticados por diagnóstico patológico como tendo cancro da mama maligno, form preparados cortes de secção congelados por um método semelhante ao anterior e foi realizada coloração imunohistoquímica utilizando o anticorpo monoclonal #8 preparado no Exemplo 3. Como resultado, foi confirmada a expressão da CAPRINA-1 em 100 dos 108 espécimes (92,5%). A CAPRINA-1 foi fortemente expressa em particular nas superfícies de células cancerígenas altamente atípicas. (5)-3 Expressão da CAPRINA-1 em tecido humano portador de cancro da mama

Foi realizada coloração imunohistoquímica utilizando 188 espécimes de tecido portador de cancro da mama de um array de tecido humano portador de cancro da mama embebido em parafina (BIOMAX). Após 3 horas de tratamento a 60°C, o array de tecido humano portador de cancro da mama foi imerso numa garrafa corante cheia de xileno realizando-se a substituição do xileno a cada 5 minutos em 3 ocasiões. A seguir, foi realizado um procedimento semelhante utilizando etanol e PBS-T em vez de xileno. O array de tecido humano portador de cancro da mama embebido foi imerso numa garrafa corante cheia de 10 mM tampão citrato (pH 6,0) contendo 0,05% Tween20, tratado durante 5 minutos a 125°C e depois deixado a repousar à temperatura ambiente durante 40 minutos ou mais. A água em excesso à volta de cada espécime foi removida do array utilizando Kimwipes, cada secção foi envolvida utilizando DAKOPEN (DAKO) e depois foi adicionada ao array uma quantidade apropriada de Bloco Peroxidase 56 ΕΡ2325648Β1 (DAKO) gota a gota. Depois o array foi deixado a repousar à temperatura ambiente durante 5 minutos e depois imerso numa garrafa corante cheia de PBS-T. A substituição do PBS-T deu-se a cada 5 minutos em 3 ocasiões. Como solução bloqueadora, foi aplicada no array uma solução PBS-T contendo 10% FBS e depois o array foi deixado a repousar numa câmara húmida à temperatura ambiente durante 1 hora. A seguir, foi aplicado o anticorpo monoclonal #8 preparado no Exemplo 3 ajustado a 10 yg/ml utilizando uma solução PBS-T contendo 5% FBS e depois o array foi deixado a repousar durante a noite numa câmara húmida a 4°C. Após 3 ocasiões de 10 minutos de lavagem com PBS-T, foi adicionada ao array uma quantidade apropriada de Polímero Rotulado com Peroxidase Conjugado (DAKO) gota a gota e depois o array foi deixado a repousar à temperatura ambiente durante 30 minutos numa câmara húmida. Após 3 ocasiões de 10 minutos de lavagem com PBS-T, foi aplicada no array uma solução corante DAB (DAKO) e depois o array foi deixado a repousar à temperatura ambiente durante 10 minutos. A colução corante DAB foi descartada do array e depois foram realizados 10 minutos de lavagem com PBS-T em 3 ocasiões. O array foi enxaguado com água destilada e depois imerso em soluções de etanol a 70%, 80%, 90%, 95% e 100% por esta ordem durante 1 minuto cada e depois deixado a repousar em xileno durante a noite. O array foi removido, coberto com Meio de montagem Glicergel (DAKO) e depois observado. Como resultado, foi observada uma forte expressão da CAPRINA-1 para 138 (73%) do total de 188 espécimes de tecido portador de cancro da mama. (5)-4 Expressão da CAPRINA-1 em tumor cerebral humano maligno

Com a utilização de 247 espécimes de tecido de tumor cerebral humano maligno de arrays de tecido de tumor 57 ΕΡ2325648Β1 cerebral humano maligno embebidos em parafina (BIOMAX), foi realizada coloração imunohistoquímica por um método semelhante ao utilizado no (5)-3 anterior utilizando o anticorpo monoclonal #8 preparado no Exemplo 3. Como resultado, a expressão da CAPRINA-1 forte foi observada em 227 (92%) do total de 247 espécimes de tecido de tumor cerebral humano maligno, (5)-5 Expressão da CAPRINA-1 em nódulo linfático metastático humano portador de cancro da mama

Com a utilização de 150 espécies de tecido de nódulos linfáticos metastático humanos portadores de cancro da mama de arrays de tecido de nódulo linfático metastático humano portador de cancro da mama embebido em parafina (BIOMAX), foi realizada coloração imunohistoquímica por um método semelhante ao utilizado no (5)-3 anterior utilizando o anticorpo monoclonal #8 preparado no Exemplo 3. Como resultado, foi observada uma forte expressão da CAPRINA-1 em 136 (90%) do total de 150 espécimes de tecido de nódulos linfáticos metastáticos humanos portadores de cancro da mama. Especificamente, foi revelado gue a CAPRINA-1 também é fortemente expressa num tecido cancerígeno que metastizou do cancro da mama.

Exemplo 2: Preparação de novas proteínas de antígeno de cancro canino e humano (1) Preparação de proteína recombinante

Foi preparada uma proteína recombinante pelo método seguinte com base no gene da SEQ. ID N.° 5 obtida no

Exemplo 1. Foi realizada PCR preparando uma solução de reação ajustada para uma quantidade total de 50 μΐ através da adição de cada reagente e um tampão incluído (1 μΐ de um 58 ΕΡ2325648Β1 vetor preparado a partir da solução de fago obtida no Exemplo 1 e depois sujeita a análise de sequência, 2 tipos de iniciador (0,4 μΜ cada; de acordo com as SEQ. ID N.°s 37 e 38) contend as sequências de clivagem das enzimas de restrição Nde I e Κρη I, 0,2 mM dNTP, 1,25 U PrimeSTAR HS polimerase (Takara-baio Co., Ltd.)) e depois reagindo a solução repetindo 30 vezes um ciclo de 98°C/10 segundos e 68°C/1,5 minutos utilizando um termociclador (BIO RAD). Os 2 tipos de anteriores de iniciador foram utilizados para amplificar a região que codifica a sequência de aminoácidos de comprimento inteiro da SEQ. ID N.° 6 (P47). Após PCR, o ADN assim amplificado foi sujeito a eletroforese em gel de agarose 1% e depois um fragmento de ADN com cerca de 1,4 kpb foi purificado a partir do gel utilizando um Kit de Extração do Gel QIAquick (QIAGEN). 0 fragmento de ADN purificado foi ligado a um vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen Corporation). O vetor foi transformado em Escherichia coli e depois o plasmídeo foi recolhido. Confirmou-se com base na sequência que o fragmento do gene amplificado correspondia à sequência alvo. O plasmideo que correspondia à sequência de interesse foi tratado com as enzimas de restrição Nde I e Κρη I e depois o resultante foi purificado utilizando um Kit de Extração de Gel QIAquick. Depois a sequência génica de interesse foi inserida num vetor de expressão pET30b (Novagen) para Escherichia coli tratado com as enzimas de restrição Nde I e Κρη I. Pode ser produzida uma proteína recombinante fundida com etiqueta His utilizando o vetor. O plasmídeo foi transformado em Escherichia coli BL21 (DE3) para expressão e depois a indução da expressão foi realizada utilizando 1 mM IPTG, para que a proteína alvo fosse expressa em Escherichia coli.

Além disso, foi preparada uma proteína recombinante de 59 ΕΡ2325648Β1 um gene homólogo canino pelo método seguinte com base no da SEQ. ID N.° 7. Foi realizada PCR preparando uma solução de reação ajustada para uma guantidade total de 50 μΐ através da adição de cada reagente e um tampão incluido (1 μΐ de ADNc de entre os ADNcs de vários tecidos e/ou células construídas no Exemplo 1, para os quais a expressão poderia ser confirmada por um método RT-PCR, 2 tipos de iniciador (0,4 μΜ cada; de acordo com as SEQ. ID N.°s 39 e 40) contendo as sequências de clivagem das enzimas de restrição Nde I e Κρη I, 0,2 mM dNTP, 1,25 U PrimeSTAR HS polimerase (Takara-baio Co., Ltd.)) e depois reagindo a solução repetindo 30 vezes um ciclo de 98°C/10 segundos e 68°C/2.5 minutos utilizando um termociclador (BIO RAD) . Os 2 tipos de iniciador anteriores foram utilizados para amplificar a região que codifica a sequência de aminoácidos de comprimento inteiro da SEQ. ID N.° 8. Após PCR, o ADN assim amplificado foi fracionado com eletroforese em gel de agarose 1% e depois um fragmento de ADN com cerca de 2,2 kpb foi purificado utilizando um Kit de Extração de Gel QIAquick (QIAGEN). O fragmento de ADN purificado foi ligado a um vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen Corporation). O vetor foi transformado em Escherichia coli e depois o plasmídeo foi recolhido, com base na sequência que o fragmento do gene amplificado correspondia à sequência de interesse. O plasmídeo que correspondia à sequência de interesse foi tratado com as enzimas de restrição Nde I e Κρη I e depois o resultante foi purificado utilizando um Kit de Extração de Gel QIAquick. Depois a sequência génica de interesse foi inserida num vetor de expressão pET30b (Novagen) para Escherichia coli tratado com as enzimas de restrição Nde I e Κρη I. Pode ser produzida uma proteína recombinante fundida com etiqueta His utilizando o vetor. O plasmídeo foi transformado em Escherichia coli BL21 (DE3) para 60 ΕΡ2325648Β1 expressão e depois a indução da expressão foi realizada utilizando 1 mM IPTG, para que a proteína de interesse fosse expressa em Escherichia coli.

Além disso, foi preparada uma proteína recombinante de um gene homólogo humano pelo método seguinte com base no gene da SEQ. ID N.° 1. Foi realizada PCR preparando uma solução de reação ajustada para uma quantidade total de 50 μΐ através da adição de cada reagente e de um tampão incluído (ADNc (1 μΐ) de entre os ADNcs de vários tecidos e/ou células construídas no Exemplo 1, para os quais a expressão pode ser confirmada por um método RT-PCR, 2 tipos de iniciador (0,4 μΜ cada; de acordo com as SEQ. ID N.°s 41 e 42) contendo as sequências de clivagem das enzimas de restrição Sac I e Xho I, 0,2 mM dNTP, 1,25 U PrimeSTAR HS polimerase (Takara-baio Co., Ltd.)) e depois reagindo a solução repetindo 30 vezes um ciclo de 98°C/10 segundos e 68°C/2,5 minutos utilizando um termociclador (BIO RAD) . Os 2 tipos de iniciador anteriores foram utilizados para amplificar a região que codifica a sequência de aminoácidos de comprimento inteiro da SEQ. ID N.° 2. Após PCR, o ADN assim amplificado foi sujeito a eletroforese em gel de agarose 1% e depois foi purificado um fragmento de ADN com cerca de 2,1 kpb utilizando um Kit de Extração de Gel QIAquick (QIAGEN). O fragmento de ADN purificado foi ligado a um vetor de clonagem pCR-Blunt (Invitrogen Corporation). O vetor foi transformado em Escherichia colie depois o plasmídeo foi recolhido, com base na sequência que o fragmento do gene amplificado correspondia à sequência de interesse. 0 plasmídeo que correspondia à sequência de interesse foi tratado com as enzimas de restrição Sac I e Xho I e depois o resultante foi purificado utilizando um Kit de Extração de Gel QIAquick. Depois a sequência génica de interesse foi 61 ΕΡ2325648Β1 inserida num vetor de expressão pET30a (Novagen) para Escherichia coli tratado com as enzimas de restrição Sac I e Xho I. Pode ser produzida uma proteína recombinante fundida com etiqueta His utilizando o vetor. 0 plasmídeo foi transformado em Escherichia coli BL21 (DE3) para expressão e depois a indução da expressão foi realizada utilizando 1 mM IPTG, para que a proteína de interesse fosse expressa em Escherichia coli. (2) Purificação da proteína recombinante A Escherichia coli recombinante obtida anteriormente que expressa a SEQ. ID N.° 1, 5 ou 7 foi cultivada a 37°C em meio LB contendo 30 pg/ml canamicina até a absorvância a 600 nm atingir cerca de 0,7. Depois foi adicionado isopropil-p-D-l-tiogalactopiranosida a uma concentração final de 1 mM, seguido de 4 horas de cultivo a 37 °C. Subsequentemente, as células foram recolhidas através de 10 minutos de centrifugação a 4800 rpm. A bola de células foi suspensa em solução salina tamponada com fosfato e depois centrifugada a 4800 rpm durante 10 minutos para lavagem das células.

As células foram suspensas em solução salina tamponada com fosfato e depois sujeitas a ultrassonicação em gelo. A solução de assim Escherichia coli ultrassonicada foi centrifugada a 6000 rpm durante 20 minutos. O sobrenadante assim obtido foi utilizado como uma fração solúvel e o precipitado assim obtido foi utilizado como umafração insolúvel. A fração solúvel foi adicionada a uma coluna de quelato de níquel (veículo: Sefarose Quelante (TradeMark) Fluxo Rápido (GE Healthcare), capacidade da coluna: 5 mL, 50 mM tampão ácido hidroclorídrico (pH 8,0) como tampão 62 ΕΡ2325648Β1

equilibrado)) preparaddo de acordo com um método convencional. A fração não ligada foi lavada com 50 mM tampão ácido hidroclorídrico (pH 8,0) numa quantidade 10 vezes a capacidade da coluna e 20 mM tampão fosfato (pH 8,0) contendo 20 mM imidazol. Imediatamente após a lavagem, 6 camas foram eluidas com 20 mM tampão fosfato (pH 8,0) contendo 100 mM imidazol. Após a eluição da proteína de interesse ter sido confirmada por coloração de Coomassie, uma fração de eluição de 20 mM tampão fosfato (pH 8,0) contendo 100 mM imidazol foi adicionada a uma coluna de troca de iões forte (veiculo: Q Sefarose (TradeMark) Fluxo Rápido (GE Healthcare), capacidade da coluna: 5 mL e 20 mM tampão fosfato (pH 8,0) como tampão equilibrado) . A fração não ligada foi lavada com 20 mM tampão fosfato (pH 7,0) numa quantidade 10 vezes a capacidade da coluna e 20 mM tampão fosfato (pH 7,0) contendo 200 mM cloreto de sódio. Imediatamente após a lavagem, 5 camas foram eluidas utilizando 20 mM tampão fosfato (pH 7,0) contendo 400 mM cloreto de sódio. Assim, foram obtidas as frações purificadas das proteínas cada uma com a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 2, 6 ou 8. Estas frações purificadas foram depois utilizadas como materiais para um teste de administração. A Figura 2 mostra o resultado da proteína da SEQ. ID N.° 2 fracionada por eletroforese e detetada por coloração de Coomassie. 200 μΐ de cada preparação purificada obtida pelo método anterior foi dispensada em 1 ml de tampão de reação (20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 2 mM CaCl2 pH 7,4) e depois foram adicionados 2 μΐ de enteroquinase (Novagen). A preparação foi deixada a repousar à temperatura ambiente durante a noite para reação, a etiqueta His foi clivada e depois foi realizada a purificação de acordo com os protocolos incluídos utilizando um Kit de Captura de Clivagem de Enteroquinase (Novagen) . A seguir, 1,2 ml de 63 ΕΡ2325648Β1 cada preparação purificada obtida pelo método anterior foram substituídos com tampão fosfato fisiológico (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) utilizando ultrafiltração NANOSEP 10K OMEGA (PALL). Foi realizada filtração esterilizada utilizando 0,22 pm HT Tuffryn Acrodisc (PALL) e depois os resultantes foram utilizados para as experiências seguintes.

Exemplo 3: Preparação do anticorpo contra a CAPRINA-1 (1) Preparação de anticorpo policlonal contra o péptido derivado da CAPRINA-1

Para obter uma ligação do anticorpo a CAPRINA-1, foi sintetizado o péptido derivado da CAPRINA-1 (Arg-Asn-Leu-Glu-Lys-Lys-Lys-Gly-Lys-Leu-Asp-Asp-Tyr-Gln (SEQ. ID N.° 43)). Um miligrama do péptido como um antigeno foi misturado com uma solução adjuvante de Freund incompleto (IFA) numa quantidade equivalente o péptido. A mistura foi administrada subcutâneamente a um coelho 4 vezes a cada 2 semanas. Subsequentemente, foi colhido sangue, para que um antissoro contendo um anticorpo policlonal fosse obtido. Além disso, o antissoro foi purificado utilizando um veículo da proteína G (GE Healthcare Bio-Sciences) e depois foi obtido um anticorpo policlonal contra o péptido derivado da CAPRINA-1. A seguir, foi examinada a reatividade do anticorpo policlonal obtido à superfície da célula portadora de cancro da mama. Especificamente, 106 células da linha de células humanas portadoras de cancro da mama MDA-MB-231V foram sujeitas a centrifugação num tubo de microcentrifuga de 1,5 ml. Uma solução PBS suplementada com 0,1% soro bovino fetal (FBS) contendo o anticorpo

policlonal foi adicionada ao tubo. A solução foi deixada a repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, um anticorpo IgG anti-ratinho de cabra rotulado com FITC 64 ΕΡ2325648Β1 (Invitrogen Corporation) diluído 500 vezes com PBS contendo 0,1% FBS foi adicionado à solução e depois a solução foi deixada a repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, foi medida a intensidade de fluorescência utilizando um FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Entretanto, foi realizado um procedimento semelhante ao anterior para que um controlo fosse preparado adicionando PBS contendo 0,1% FBS em vez do anticorpo policlonal. Como resultado, revelou-se que se observou que a intensidade de fluorescência era mais forte nas células tratadas com o anticorpo policlonal do que nas células controlo. Logo, demonstrou-se que o anticorpo policlonal obtido liga-se à superfície da célula portadora de cancro da mama. (2)Preparação de anticorpo monoclonal contra a proteína CAPRINA-1 A proteína do antígeno (CAPRINA-1 humana) (100 yg) mostrada na SEQ. ID N.° 2 preparada no Exemplo 2 foi misturada com um adjuvante MPL+TDM (Sigma) numa quantidade equivalente à da proteína do antígeno. A mistura foi utilizada como uma solução de antígeno por ratinho. A solução de antígeno foi administrada por via intraperitoneal a um ratinho Balb/c com 6 semanas de idade (Japan SLC Inc.) e depois ainda administrado em 3 ocasiões cada semana. O baço foi removido no dia 3 após a imunização final e depois moído entre duas lâminas de vidro esterilizadas. O resultante foi lavado com PBS (-) (Nissui) e depois centrifugado a 1500 rpm durante 10 minutos, para que um procedimento para remover sobrenadantes fosse repetido 3 vezes. Assim, foram obtidas células do baço. As células de baço assim obtidas foram misturadas com células de mieloma de ratinho SP2/0 (compradas de ATCC) a uma razão de 10 : 1. A solução PEG preparada misturando 200 μΐ de meio RPMI1640 contendo 10% FBS aquecido a 37°C e 800 μΐ de 65 ΕΡ2325648Β1 PEG1500 (Boehringer) foi adicionada às células. A solução foi deixada a repousar durante 5 minutos para fusão das células. Foi realizada centrifugação a 1700 rpm durante 5 minutos para remover os sobrenadantes. As células foram suspensas em 150 ml de meio RPMI1640 (meio seletivo HAT) contendo 15% FBS, aos quais tinham sido adicionados 2% equivalente de solução HAT (Gibco) e depois semeados em quinze placas com 96 poços (Nunc) a 100 μΐ por poço. As células foram cultivadas durante 7 dias em condições de 37°C e 5% CO2, para que os hibridomas resultantes da fusão de células do baço às células de mieloma fossem conseguidos.

Os hibridomas foram selecionados utilizando como um indice a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas assim preparados pela proteína CAPRINA-1. A solução da proteína CAPRINA-1 (1 yg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a 100 μΐ por poço de placas com 96 poços e depois deixada a repousar a 4°C durante 18 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T e depois foi adicionada 0,5% solução de albumina do soro bovina (BSA) (Sigma) a 400 μΐ por poço e depois as placas foram deixadas a repousar à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida e depois cada poço foi lavado 3 vezes com 400 μΐ de PBS-T. Cada sobrenadante de cultura dos hibridomas obtidos anteriormente foi adicionado a 100 μΐ por poço e depois deixado a repousar à temperatura ambiente durante 2 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, foi adicionado um anticorpo IgG (H+L) anti-ratinho rotulado com HRP (Invitrogen Corporation) diluído 5000 vezes com PBS a 100 μΐ por poço e depois deixado a repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, uma solução de substrato TMB (Thermo) foi adicionada a 100 μΐ por poço e depois deixada a repousar durante 15-30 minutos, para que fosse realizada uma reação de coloração. 66 ΕΡ2325648Β1

Depois do desenvolvimento de cor, foi adicionado IN ácido sulfúrico a 100 μΐ por poço para parar a reação. A absorvância foi medida a 450 nm e 595 nm utilizando um espectrómetro de absorção. Como resultado, oram selecionados uma pluralidade de hibridomas que produzem anticorpos com elevadas absorvâncias.

Os hibridomas assim selecionados foram adicionados a 0,5 hibridomas por poço de placas com 96 poços e depois cultivados. Após 1 semana, foram observados hibridomas que formaram colónias únicas em poços. As células nestes poços foram depois cultivadas. Os hibridomas foram selecionados utilizando como um indice a afinidade de ligação do anticorpo produzido pelos hibridomas clonados pela proteína CAPRINA-1. A solução da proteína CAPRINA-1 (1 pg/ml) preparada no Exemplo 2 foi adicionada a 100 μΐ por poço de placas com 96 poços e depois deixada a repousar a 4°C durante 18 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T. Uma solução 0,5% BSA foi adicionada a 400 μΐ por poço e depois deixada a repousar à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi removida e depois cada poço foi lavado 3 vezes com 400 μΐ de PBS-T. Cada sobrenadante de cultura dos hibridomas obtidos anteriormente foi adicionado a 100 μΐ por poço e depois deixado a repousar à temperatura ambiente durante 2 horas. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T. Um anticorpo IgG (H+L) anti-ratinho rotulado com HRP (Invitrogen Corporation) diluído 5000 vezes com PBS foi adicionado a 100 μΐ por poço e depois deixado a repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Cada poço foi lavado 3 vezes com PBS-T, foi adicionada uma solução de substrato TMB (Thermo) a 100 μΐ por poço e depois deixada a repousar durante 15-30 minutos, para que fosse realizada uma reação de coloração. Depois do desenvolvimento da cor, foi adicionado IN ácido sulfúrico a 100 μΐ por poço para parar a reação. A absorvância foi medida a 450 nm e 595 nm 67 ΕΡ2325648Β1 utilizando um espectrómetro de absorção. Como resultado, foram obtidos uma pluralidade de linhas de células de hibridoma que produzem anticorpos monoclonais que exercem reatividade com a proteina CAPRINA-1. Os sobrenadantes das culturas de hibridomas foram purificados utilizando um veiculo da proteina G, para que fossem obtidos 150 anticorpos monoclonais ligados à proteina CAPRINA-1. A seguir, de entre estes anticorpos monoclonais, foram selecionados os anticorpos monoclonais que exercem reatividade com as superfícies das células cancerígenas da mama que expressam a CAPRINA-1. Especificamente, 106 células da linha de células humanas portadoras de cancro da mama MDA-MB-231V foram sujeitas a centrifugação com um tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. Fo adicionado o sobrenadante (100 μΐ) de cad hibridoma anterior e depois deixado a repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, foi adicionado um anticorpo IgG anti-ratinho de cabra rotulado com FITC (Invitrogen Corporation) diluído 500 vezes com PBS contendo 0,1% soro bovino fetal e depois deixado a repousar em gelo durante 1 hora. Após lavagem com PBS, foi medida a intensidade de fluorescência utilizando FACS Calibur (Becton, Dickinson and Company). Entretanto, um procedimento semelhante ao anterior foi realizado de modo que foi preparado um controlo suplementado com um meio em vez do anticorpo. Como resultado, 10 anticorpos monoclonais (#1—#10) com uma intensidade de fluorescência mais forte do que a do controlo; ou seja, reagindo com as superfícies das células cancerígenas da mama foram selecionados. As regiões variáveis da cadeia pesada e as regiões variáveis da cadeia leve destes anticorpos monoclonais foram mostradas nas SEQ. ID N.°s 44-60. O anticorpo monoclonal #1 anterior compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 44 and the região variável da cadeia leve of SEQ. ID N.° 45, o anticorpo monoclonal #2 compreende a região 68 ΕΡ2325648Β1 variável da. cadeia pesada da SEQ. ID N. 0 44 e a região variavel da cadeia leve da SEQ. ID N. ° 46, o anticoirpo monoclonal #3 compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 44 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 47, o anticorpo monoclonal #4 compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 44 e a região variável da cadeia leve da SEQ. id N.° 48, o anticorpo monoclonal #5 compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. id N.° 4 9 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 50, o anticorpo monoclonal #6 compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 51 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 52, o anticorpo monoclonal #7 compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 53 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 54, o anticorpo monoclonal #8 compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 55 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 56, o anticorpo monoclonal #9 compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 57 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 58 e o anticorpo monoclonal #10 compreende a região variável da cadeia pesada da SEQ. ID N.° 59 e a região variável da cadeia leve da SEQ. ID N.° 60. (3) Identificação de um péptido na proteína CAPRINA-1, ao qual se liga um anticorpo contra a CAPRINA-1 reagindo à superfície da célula cancerígena

Com a utilização dos anticorpos monoclonais #1-#10 contra a CAPRINA-1, reagindo com as superfícies das células cancerígenas obtidas anteriormente, foram identificadas sequências parciais na proteína CAPRINA-1 a serem reconhecidas por estes anticorpos monoclonais.

Em primeiro lugar, foi adicionado DTT (Fluka) a 100 μΐ 69 ΕΡ2325648Β1 de uma solução da proteína CAPRINA-1 recombinante ajustada para conter a proteína a uma concentração de 1 pg/pl com PBS a uma concentração final de 10 mM, seguido de 5 minutos de reação a 95°C, para que se desse a redução de ligações dissulfido dentro da proteína CAPRINA-1. A seguir, foi adicionada iodoacetamida (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) com uma concentração final de 20 mM e depois foi realizada uma reação de alquilação para grupos tiol a 37°C durante 30 minutos em condições de ensombramento. Cinquenta microgramas cada dos anticorpos monoclonais #1-#10 contra a CAPRINA-1 foram adicionados a 40 pg da proteína CAPRINA-1 reduzida-alquilada assim obtida. O volume da mistura foi ajustado para 1 mL de 20 mM tampão fosfato (pH 7,0) e depois a mistura foi deixada a reagir durante a noite a 4°C enquanto se agitava e misturava cada mistura. A seguir, foi adicionada tripsina (Promega) a uma concentração final de 0,2 pg. Após 1 hora, 2 horas, 4 horas e depois 12 horas de reação a 37°C, os resultantes foram misturados com pérolas de vidro de proteína A (GE) sujeitas antecipadamente a bloqueamento com PBS contendo 1% BSA (Sigma) e lavando com PBS em 1 mM carbonato de cálcio e tapão NP-40 (20 mM tampão fosfato (pH 7,4), 5 mM EDTA, 150 mM NaCl e 1% NP-40), seguido de 30 minutos de reação.

As soluções de reação foram cada uma lavadas com 25 mM tampão de carbonato de amónio (pH 8,0) e depois os complexos antígeno-anticorpo foram eluidos utilizando 100 pl de 0,1% ácido fórmico. Foi conduzida análise LC-MS para eluatos utilizando Q-TOF Premier (Waters-MicroMass) de acordo com os protocolos incluídos com o instrumento.

Como resultado, o polipeptídeo da SEQ. ID N.° 61 foi identificado como uma sequência parcial da CAPRINA-1, que foi reconhecida por todos os anticorpos monoclonais #1-#10 70 ΕΡ2325648Β1 contra CAPRINA-1. Além disso, o péptido da SEQ. ID N.° 62 foi identificado como uma sequência parcial no polipeptídeo da SEQ. ID N.° 61 anterior, que foi reconhecida pelos anticorpos monoclonais #l-#4, #5-#7 e #9. Foi ainda revelado que os anticorpos monoclonais #l-#4 reconheceram o péptido da SEQ. ID N.° 63 que foi um péptido da sequência parcial do mesmo.

Exemplo 4: Diagnóstico de cancro utilizando polipeptídeo da CAPRINA-1 (1) Diagnóstico de cancro canino

Foi colhido sangue de 342 pacientes caninos confirmados como tendo tumores malignos ou benignos e 6 cães saudáveis e o soro foi separado. Com a utilização do polipeptídeo da CAPRINA-1 canina (SEQ. ID N.° 8) e o anticorpo IgG anti-canino preparado no Exemplo 2, o título do soro do anticorpo IgG que reage especificamente com o polipeptídeo foi medido por um método ELISA. A imobilização do polipeptídeo assim preparado foi realizada adicionando uma solução da proteína recombinante diluída para 5 pg/mL com solução salina tamponada com fosfato para placas amino imobilizadoras com 96 poços (Nunc) a 100 μΐ/poço e depois deixando as placas a repousar a 4°C durante a noite. O bloqueamento foi realizado adicionando uma solução tampão de 50 mM bicarbonato de sódio (pH 8,4) (doravante, solução bloqueadora) contendo 0,5% BSA (albumina do soro bovina) (Sigma Aldrich Japan) a 100 μΐ/poço e depois agitando a solução à temperatura ambiente durante 1 hora. O soro diluído 1000 vezes com a solução bloqueadora foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas para reação. As soluções de reação foram lavadas 3 vezes 71 ΕΡ2325648Β1 com solução salina tamponada com fosfato (doravante, PBS-T) contendo 0,05% Tween20 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) . Um anticorpo IgG canino modificado HRP (IgG-h+I cabra anti-cão HRP conjugado: Laboratórios BETHYL) diluído 3000 vezes com a solução bloqueadora foi adicionado a 100 μΐ/poço, seguido de 1 hora de reação à temperatura ambiente enquanto se agita a solução. Após 3 ocasiões de lavagem com PBS-T, TMB substrato HRP (1-Step Turbo TMB (tetrametilbenzidina), PIERCE) foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois uma reação enzima-substrato foi conduzida à temperatura ambiente durante 30 minutos. Subsequentemente, foi adicionada uma solução de 0,5 M ácido sulfúrico (Sigma Aldrich Japan) a 100 μΐ/poço para parar a reação. Foi medida a absorvância a 450 nm utilizando um leitor de microplaca. Como controlos, um espécime em ligação com o qual não tinha sido imobilizada qualquer proteína recombinante preparada e um espécime em ligação com o qual uma reação com o soro de um cão portador de cancro não foi conduzida foram sujeitos de forma similar ao tratamento anterior e comparação.

Como resultado do diagnóstico patológico utilizando tecido de tumor excisado, o diagnóstico definitivo foi feito indicando que 215 do total de 342 espécimes utilizado para o diagnóstico de cancro eram malignos.

Especificamente, os espécimes foram diagnosticados como tendo cancro tal como melanoma maligno, tumor misto maligno, carcinoma hepatocelular, carcinoma das células basais, tumor gengival tipo acantoma, tumor da cavidade oral, adenocarcinoma perianal, tumor do saco anal, adenocarcinoma apócrino do saco anal, carcinoma das células de Sertoli, cancro do vestíbulo vaginal, adenocarcinoma sebáceo, epitelioma sebáceo, adenoma sebáceo, carcinoma das glândulas sudoríparas, intraadenocarcinoma nasal, nasal 72 ΕΡ2325648Β1 adenocarcinoma, cancro da tiróide, cancro do intestino grosso, adenocarcinoma bronquial, adenocarcinoma, carcinoma ductal, adenocarcinoma mamário, adenocarcinoma mamário tipo composto, tumor misto mamário maligno, adenocarcinoma papilar intraductal, fibrossarcoma, hemangiopericitoma, osteossarcoma, condrossarcoma, sarcoma dos tecidos moles, sarcoma histiocitico, mixossarcoma, sarcoma indiferenciado, cancro do pulmão, mastocitoma, leiomioma cutâneo, leiomioma intraperitoneal, leiomioma, carcinoma de células escamosas, leucemia linfocítica crónica, linfoma, linfoma gastrointestinal, linfoma digestivo, linfoma de células pequenas a médias, tumor adrenomedular, tumor das células granulosas e feocromocitoma.

Verificou-se que os soros dos corpos vivos destes cães portadores de cancro tinham títulos de anticorpo contra a proteína recombinante significativamente elevados conforme mostrado na Figura 3. Quando o valor de referência como cancro malign em relação ao método de diagnóstico foi determinado como sendo duas vezes ou mais o valor médio para cães saudáveis, demonstrou-se que a malignidade poderia ser diagnosticada para 108 espécimes, que representaram 50,2% de todos os espécimes. Os tipos de cancro destes 108 espécimes são como se segue. Apesar do desenvolvimento de uma pluralidade de tipos de cancro foram indicados para alguns espécimes, os seguintes valores numéricos são valores totais cumulativos para cada tipo de cancro: 6 casos de melanoma maligno, 11 casos de linfoma, 1 caso de inflamação supurativa, 1 caso de tumor das células granulosas, 4 casos de carcinoma hepatocelular, 3 casos de tumor testicular maligno, 3 casos de tumor da cavidade oral, 7 casos de adenocarcinoma perianal, 12 casos de sarcoma, 35 casos de adenocarcinoma 73 ΕΡ2325648Β1 mamário, 1 caso de cancro do pulmão, 6 casos de carcinoma ductal, 2 casos de adenocarcinoma sebáceo, 5 casos de mastocitoma, 1 caso de sarcoma do músculo liso, 3 casos de carcinoma de células escamosas, 2 casos de tumor misto maligno, 1 caso de hemangiopericitoma, 1 caso de cancro epitelial transicional, 1 caso de hemangiopericitoma, 1 caso de hemangiopericitoma e 1 caso de epitelioma sebáceo.

Como resultado de diagnóstico semelhante utilizando efusões pleurais e ascites recolhidas de pacientes caninos com cancro terminal, valores semelhantes aos resultados obtidos pelo método de diagnóstico utilizando soro poderiam ser detetados e poderia ser feito o diagnóstico de cancro.

Além disso, demonstrou-se que a utilização do método de diagnóstico permite o diagnóstico of cancro numa localização invisível a olho nú, a extensão do cancro, malignidade ou curso pós-operatório do cancro, reincidência, metástases e afins. Vários exemplos específicos de diagnóstico detalhado mostrados na Figura 4 são conforme descritos a seguir. (2)—1 Diagnóstico de cancro para tumor invisível a olho nú

No dia 7 de junho de 2007, não foi confirmada qualquer massa tumoral para o paciente canino 1 (retriever de pelo curto). Contudo, cerca de 20 dias mais tarde, no dia 24 de junho de 2007, uma massa tumoral peduncular com um diâmetro de 2 mm foi encontrada na gengiva na raiz do dente canino do maxilar esquerdo do paciente canino 1. No dia em que a massa foi encontrada, a porção peduncular foi liqada e excisada. Verificou-se que a absorvância a 450 nm era de 0,06 antes da massa tumoral poder ser confirmada visualmente e este valor era quase o mesmo que 0,04, que 74 ΕΡ2325648Β1 foi determinado quando o tumor foi encontrado. Também se demonstrou pelo resultado que o diagnóstico of cancro numa localização invisível a olho nú, tal como cancro intraperitoneal, é possível com a utilização desta técnica.

Além disso, pode dizer-se que foi detetado com sucesso um sinal de alerta do desenvolvimento de tumor, uma vez que um aumento no nível previamente mencionado pode ser confirmado antes do tumor poder ser confirmado a olho nú. Assim, confirmou-se que a técnica também é útil para exames de saúde, tais como exames médicos de rotina. (2)-2 Diagnóstico da extensão do cancro A extensão do cancro é determinada com base no tamanho do tumor, profundidade do tumor, como o tumor afeta o tecido periférico e a presença ou ausência de metástases. Revelou-se que um valor mais elevado foi detetado quando as metástases ocorriam ou o cancro tinha progredido. (2)-3 Diagnóstico da malignidade do cancro

Tumores de células basais incluem tumores de células basais malignos e tumores de células basais benignos. Em anos recentes, os tumores de células basais malignos tenderam a ser classificados como exemplos de carcinoma das células basais e os tumores de células basais benignos tendem a ser classificados como exemplos de tricoblastoma, de acordo com o novo WHO. 0 paciente canino 2 (Beagle) diagnosticado com carcinoma das células basais (maligno) foi sujeito a sorodiagnóstico em cirurgia, pelo que se verificou que a absorvância a 450 nm foi de 0,04. Entretanto, o paciente canino 3 (mongrel) diagnosticado com tricoblastoma 75 ΕΡ2325648Β1 (benigno) foi sujeito a sorodiagnóstico em cirurgia, pelo que se verificou que a absorvância a 450 nm foi de 0, indicando não deteção. Logo, deonstrou-se que diferentes tipos de tumores de células basais, isto é, carcinoma das células basais maligno e tricoblastoma benigno, podem ser diagnosticados, mesmo se forem classificados como tumores de células basais. A seguir, são dados exemplos de tumores das glândulas mamárias. Os tumores das glândulas mamárias são classificados em tumores malignos tais como adenocarcinoma mamário e tumor misto mamário maligno e tumores das glândulas mamárias benignos que não exibem qualquer malignidade. O paciente canino 4 (cão pastor Shetland) foi sujeito a cirurgia extirpativa no dia 17 de julho de 2007, para adenocarcinoma mamário. O paciente canino 4 tinha 3 tumores. O diagnóstico patológico utilizando tecido isolado resultou no mesmo diagnóstico. Tecido das glândulas mamárias invasivo e fortemente atípico experimentou um crescimento papilar-adenóide algo difuso e a invasão vascular também foi confirmada para os espécimes. Assim, o paciente canino 4 foi diagnosticado com cancro da mama altamente maligno. Como resultado do sorodiagnóstico utilizando sangue colhido em cirurgia, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,41.

Entretanto, o paciente canino 5 (toy poodle) sofreu cirurgia extirpativa no dia 9 de outubro de 2007, para um tumor das glândulas mamárias. O diagnóstico patológico utilizando tecidos isolados neste momento revelou que: ao passo que se formaram tumores nos quais as células epiteliais das glândulas mamárias e as células mioepiteliais cresceram, os componentes das células 76 ΕΡ2325648Β1 mioepiteliais eram células em fuso uniforme e não foi detetada qualquer malignidade e o componente das células epiteliais das glândulas mamárias exibiu uma ligeira diferença em tamanho e discariose conforme observado. Assim, o paciente canino 5 foi diagnosticado com um tumor das glândulas mamárias benigno para o qual não foi detetada qualquer malignidade. Como resultado da colheita de sangue e do sorodiagnóstico na cirurgia do mesmo, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0.

Os resultados anteriores para os 2 espécimes revelaram que a malignidade de um tumor altamente maligno é maior do que a de um tumor com baixa malignidade benigno.

Além disso, foi examinada a distribuição do diagnóstico para 54 espécimes com tumor maligno (cancro da mama), tais como adenocarcinoma mamário ou espécimes com tumor misto mamário maligno e 21 espécimes com tumor das glândulas mamárias benigno que não exibem qualquer malignidade. Ao passo que os espécimes com tumor das glândulas mamárias benigno mostraram uma distribuição semelhante à do caso de cães saudáveis, os espécimes com cancro da mama mostraram uma distribuição de valores elevados. (2)-4 Diagnóstico do curso pós-operatório O paciente canino 6 (mongrel) visitou o hospital por causa de mastocitoma e sofreu cirurgia extirpativa no dia 23 de maio de 2005. Como resultado do sorodiagnóstico feito nesta altura, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,10. O mastocitoma é um tumor que sofre repetida reincidência ou metástases quando ressecado de forma incompleta. Assim, é importante se a resseção do tumor completa pode ou não ser conseguida por cirurgia. No 77 ΕΡ2325648Β1 seguimento no dia 19 de dezembro de 2006, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,05, pelo que se confirmou uma diminuição do titulo do anticorpo. Neste momento, não foi confirmada reincidência. Portanto, no caso do paciente canino 6, pde dizer-se que, uma vez que o tumor pode ser ressecado completamente, os resultados do sorodiagnóstico fram inferiores aos do momento da cirurgia. 0 paciente canino 7 (Beagle) sofreu cirurgia extirpativa no dia 14 de fevereiro de 2008, por mastocitoma. Como resultado do sorodiagnóstico realizado nesta altura, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,17. Como resultado do diagnóstico histopatológico utilizando tecidos excisados, foi observada hiperplasia invasiva e o paciente canino 7 foi diagnosticado com mastocitoma correspondente ao tipo moderadamente diferenciado (Patnaik tipo II) . O paciente canino 7 visitou de novo o hospital para seguimento no dia 10 de março de 2008 e foi sujeito a novo sorodiagnóstico. Como resultado, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,07. Nesta altura, não foram confirmadas nem metástases nem reincidência. Assim, no caso do paciente canino 7, pode dizer-se que os resultados do sorodiagnóstico foram inferiores aos do momento da cirurgia uma vez que o tumor pode ser completamente ressecado. (2)-5 Diagnóstico de reincidência O paciente canino 8 (Husky) sofreu cirurgia extirpativa no dia 8 de maio de 2007, por adenocarcinoma mamário. Como resultado do sorodiagnóstico realizado nesse momento, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,05. Como resultado do diagnóstico patológico utilizando tecido excisado, células epiteliais fortemente atípicas cresceram formando principalmente uma estrutura tubular. 78 ΕΡ2325648Β1

Assim, paciente canino 8 foi diagnosticado com adenocarcinoma a partir da glândula mamária primária. Nesta altura, a presença de muitas células cancerígenas nos dutos linfáticos já tinha sido confirmada, indicando um risco elevado de metástases para ou reincidência nos nódulos linfáticos ou locais distantes. No dia 28 de junho de 2007, (cerca de 1 mês e meio depois da cirurgia), confirmou-se a reincidência no mesmo local. O resultado do sorodiagnóstico nesta altura foi de 0,09 e foi confirmado, assim, um valor aumentado. No caso do paciente canino 8, relou-se que por causa da resseção incompleta do tumor ou reincidência do mesmo, o resultados do diagnóstico foram mais elevados no final de junho do que no início de maio. (2)-6 Diagnóstico de metástases O paciente canino 9 (terrier Escocês) experimentou metástases e reincidências múltiplas, incluindo um tumor das glândulas mamárias em fevereiro de 2003, melanoma intraoral maligno em agosto de 2003, melanoma labial maligno em janeiro de 2005 e melanoma intraoral em 13 de abril de 2005. Todos estes tumores foram ressecados por cirurgia. O paciente canino 9 voltou a visitar o hospital no dia 17 de dezembro de 2006 para seguimento após reincidência do melanoma intraoral em abril de 2005 e foi sujeito a sorodiagnóstico. Como resultado, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,09. Meio ano mais tarde, o paciente canino 9 voltou a visitar o hospital no dia 20 de junho de 2007 por causa de linfóide cervical e hiperplasia linfóide popliteal. No caso de linfoma, os nódulos linfáticos incham sistemicamente. O paciente canino 9 tinha nódulos linfáticos inchados apenas em dois locais. Assim, o paciente canino 9 foi diagnosticado clinicamente como provavelmente tendo linfoma devido a metástases. O diagnóstico feito por esta técnica também revelou que a 79 ΕΡ2325648Β1 absorvância a 450 nm aumentou para 0,10, indicando que o linfoma foi causado por metástases do tumor prévio. O paciente canino 10 (Shiba inu) sofreu tumorectomia no dia 11 de março de 2006, por causa de melanoma intraoral maligno no lábio direito. O paciente canino 10 inha um historial de tratamento com um agente anti-cancerigeno (ciclofosfamida) de 10 de junho de 2006 a 26 de setembro de 2006, e estava sob medicação com BIREMO S com germânio orgânico como ingrediente principal desde 23 de maio de 2006. O sorodiagnóst ico foi feito no dia 20 de março de 2007, no momento da remoção de um tumor que se pensava que tinha resultado de metástases do tumor prévio, pelo que se verificou que a absorvância a 450 nm foi quase de 0,03, indicando quase ausência de deteção. O diagnóstico patológico foi feito para o tecido excisado nesta altura, pelo que a doença foi diagnosticada como melanoma maligno metastático. Contudo, ocorreram de novo metástases no dia 27 de junho de 2007, 3 meses após a cirurgia para melanoma metastático. Um tumor desenvolveu-se na porção direita do cérvice no dia 20 de março de 2007 e ocorreu desenvolvimento posterior de tumor no lado oposto a tal porção no dia 27 de junho de 2007. Os tumores formaram massas negras análogas às das observações prévias. O tamanho do tumor foi de 3,1 X 3,2 X 0,8 cm e os tumores foram diagnosticados clinicamente como tumores metastáticos. Como resultado do sorodiagnóstico nesta altura, confirmou-se que a absorvância a 450 nm tinha aumentado para 0,23, o que sugere que os tumores resultaram de metástases de tumores anteriores. (2)-7 Diagnóstico de cancro utilizando polipeptídeo derivado da CAPRINA-1 humana

Com a utilização do polipeptídeo (SEQ. ID N.° 2) da 80 ΕΡ2325648Β1 CAPRINA-1 humana preparada no Exemplo 2, o título do anticorpo IgG no soro canino que reage com o polipeptídeo foi medido de uma forma semelhante à utilizada anteriormente. Como resultado do exame utilizando soro de um cão saudável, não foi detetada quase nenhuma absorvância a 450 nm, à semelhança do caso anterior.

Entretanto, o paciente canino 11 (Shih tzu) sofreu cirurgia extirpativa para adenocarcinoma mamário no dia 21 de junho de 2007. Como resultado do diagnóstico patológico utilizando tecidos excisados, o paciente canino 11 foi diagnosticado com adenocarcinoma mamário de malignidade moderada, em que os tecidos das glândulas mamárias fortemente atípicos e invasivos sofreram crescimento adenóide-tubular-papilar para formar massas grandes e pequenas, além da presença de hiperplasia algo difusa dos tecidos conetivos fibrilares. Verificou-se que a absorvância a 450 nm para o paciente canino 11 foi de 0,26. (3) Diagnóstico de cancro felino A seguir, foram diagnosticados gatos portadores de cancro e gatos saudáveis. Com a utilização do polipeptídeo da CAPRINA-1 canina (utilizada anteriormente) e um anticorpo IgG anti-felino, foi medido o título do anticorpo IgG no soro felino que reagiu especificamente com o polipeptídeo, de uma forma semelhante à anterior. Como um anticorpo secundário, foi diluído um anticorpo IgG anti-felino modificado HRP (FRAÇÃO DE IgG DE CABRA CONJUGADA COM PEROXIDASE A IgG DE GATO (MOLÉCULA INTEIRA): CAPPEL RESERCH REAGENTS) 8000 vezes com uma solução bloqueadora e depois utilizado. O paciente felino 1 (mongrel) sofreu cirurgia extirpativa de tumor por adenocarcinoma mamário no dia 8 de 81 ΕΡ2325648Β1 maio de 2007. Verificou-se que a absorvância a 450 nm para o paciente felino 1 foi de 0,21. Além disso, no caso do paciente felino 2 (Himalaias) que sofreu cirurgia extirpativa por carcinoma ductal no dia 17 de outubro de 2006, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,18. Por outro lado, não foi detetada absorvância no caso de gatos saudáveis.

Além disso, com a utilização do polipeptídeo (SEQ. ID N.° 2) da CAPRINA-1 humana preparado no Exemplo 2, foi medido o titulo do anticorpo IgG no soro feline que reage com o polipeptideo de uma forma semelhante à anterior. Como resultado, no caso de gatos saudáveis, não foi praticamente detetada absorvância a 450 nm quando o polipeptideo foi imobilizado. Entretanto, o paciente felino 3 (pelo curto Americano) sofreu cirurgia extirpativa por adenocarcinoma mamário no dia 15 de abril de 2008. Como resultado do diagnóstico patológico utilizando tecidos excisados, o paciente felino 3 foi diagnosticado com adenocarcinoma mamário altamente maligno associado com tecidos mortos grandes e pequenos, em que os tecidos das glândulas mamárias fortemente atipicos e invasivos sofreram crescimento tipo folhas em massas grandes e pequenas. Também no caso do paciente felino 3, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi de 0,12.

Logo, demonstrou-se que o diagnóstico de cancro também é possivel em gatos por esta técnica, à semelhança dos cães, uma vez que foram detetados valores para espécimes de gatos com cancro, mas não foi detetado qualquer valor para espécimes de gatos saudáveis. (4) Diagnóstico de cancro humano

Com a utilização do polipeptídeo (SEQ. ID N.° 2) da 82 ΕΡ2325648Β1 CAPRINA-1 humana preparada no Exemplo 2 e de um anticorpo IgG anti-humano, foi medido o título de um anticorpo IgG no soro de um humano saudável que reage especificamente com o polipeptídeo. A imobilização do polipeptídeo preparado foi realizada adicionando uma solução da proteína recombinante diluída para 100 pg/mL com solução salina tamopnada com fosfato a placas amino imobilizadoras com 96 poços (Nunc) a 100 μΐ/poço e depois deixando as placas repousar durante a noite a 4°C. 0 bloqueamento foi realizado como se segue. Quatro gramas de pó Block Ace (DS PHARMA BIOMEDICAL Co. , Ltd.) foram dissolvidos em 100 ml de água purificada e depois a solução foi diluída 4 vezes com água purificada. Depois a solução (doravante, solução bloqueadora) foi adicionada a 100 μΐ/poço e depois agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. O soro diluído 1000 vezes com a solução bloqueadora foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois agitado à temperatura ambiente durante 3 horas para reação. Após lavagem 3 vezes com solução salina tamponada com fosfato (doravante, PBS-T) contendo 0,05% Tween20 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), um anticorpo IgG anti-humano modificado HRP (Conjugado IgG Anti-Humano HRP-cabra (H+L): Laboratórios Zymed) diluído 10000 vezes com a solução bloqueadora foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois agitado à temperatura ambiente durante 1 hora para reação. Após 3 ocasiões de lavagem com PBS-T, TMB substrato HRP (1-Step Turbo TMB (tetrametilbenzidina), PIERCE) foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois uma reação enzima-substrato foi realizada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Subsequentemente, foi adicionada uma solução 0,5 M ácido sulfuric (Sigma Aldrich Japan) a 100 μΐ/poço para parar a reação e depois foi medida a absorvância a 450 nm utilizando um leitor de microplacas. Um antígeno de ovalbumina ajustado para 50 pg/ml com solução salina tamponada com fosfato foi imobilizado e depois utilizado como controlo positivo. Como resultado, verificou-se que a 83 ΕΡ2325648Β1 absorvância a 450 nm foi tão alta quanto 0,45 em média como os resultados para 7 sujeitos saudáveis no caso do antigeno de ovalbumina, mas não foi detetada absorvância (0) no caso do polipeptideo anterior.

De uma forma semelhante à anterior, 17 espécimes de soro (comprados da ProMedDx) de pacientes com cancro da mama maligno foram ainda sujeitos a medição do titulo do anticorpo IgG no soro que reage especificamente com a proteína do antigeno cancerígeno derivado humano (a sequência de aminoácidos da SEQ. ID N.° 3). Como resultado, verificou-se que a absorvância a 450 nm foi tão elevada quanto 0,48 no caso do polipeptideo anterior, em média como os resultados para 17 pacientes com cancro da mama.

Além disso, com a utilização do polipeptideo (SEQ. ID N.° 8) da CAPRINA-1 canina preparado no Exemplo 2 e de um anticorpo IgG anti-humano, foi medido o título do anticorpo IgG no soro humano que reage especificamente com o polipeptideo de uma maneira semelhante à anterior. Como resultado, enquanto que a média dos resultados para 7 sujeitos saudáveis foi de 0,04, a média dos resultados para 17 pacientes portadores de cancro da mama foi tão elevada quanto 0,55.

Com base nos resultados anteriores, demonstrou-se que o cancro em humanos também pode ser detetado por esta técnica.

Exemplo 5: Diagnóstico de cancro através da medição de polipeptideo do antigeno

Com a utilização do anticorpo policlonal contra o péptido derivado da CAPRINA-1 (SEQ. ID N.° 43) obtido no Exemplo 3 (1) e cada anticorpo monoclonal contra a proteína 84 ΕΡ2325648Β1 CAPRINA-1 obtido no Exemplo 3 (2) em combinação, o próprio polipeptídeo do antigeno contido em espécimes (so derivado de organismo vivo portador de cancro) que reagiu positivo no diagnóstico de cancro utilizando o polipeptídeo da CAPRINA-1 no Exemplo 4 (1)-(3) foi detetado por ELISA Sandwich. 0 anticorpo policlonal foi utilizado como um anticorpo primário e cada anticorpo monoclonal foi utilizado como um anticorpo secundário. Foi medido o nível da proteína no soro da proteína que reage especificamente com cada um dos anticorpos anteriores. 0 anticorpo primário foi imobilizado adicionando o anticorpo policlonal diluído a uma concentração de 5 pg/ml com solução salina tamponada com fosfato a placas amino imobilizadoras com 96 poços (Nunc) a 100 μΐ/poço e depois agitando as placas à temperatura ambiente durante 2 horas. 0 bloqueamento foi realizado adicionando uma solução tampão 50 mM bicarbonato de sódio (pH 8,4) (doravante, solução bloqueadora) contendo 0,5% BSA (albumina do soro bovina, Sigma Aldrich Japan) a 100 μΐ/poço e depois agitando à temperatura ambiente durante 1 hora. Subsequentemente, um soro derivado de um organismo vivo portador de cancro diluído utilizando a solução bloqueadora foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois os resultantes foram agitados à temperatura ambiente durante 3 horas para reação. A taxa de diluição nesta altura foi ajustada com 10 vezes (10-1000 vezes) as séries de diluição. Após 3 ocasiões de lavagem com solução salina tamponada com fosfato (doravante, PBS-T) contendo 0,05% Tween20 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), cada anticorpo monoclonal como um anticorpo secundário diluído a uma concentração de 1 pg/ml com a solução bloqueadora foi adicionado a 100 μΐ/poço e depois o resultantess doram agitados à temperatura ambiente durante 1 hora para reação. Após 3 ocasiões de lavagem com PBS-T, foi adicionado um anticorpo IgG (H+L) anti-ratinho rotulado 85 ΕΡ2325648Β1 com HRP (Invitrogen Corporation) como um anticorpo terciário diluído 5000 vezes com a solução bloqueadora a 100 μΐ por poço e depois deixado a repousar à temperatura ambiente durante 1 hora. Após 3 ocasiões de lavagem dos poços com PBS-T, foi adicionada uma solução substrato TMB (Thermo) a 100 μΐ por poço e depois deixada a repousar durante 15-30 minutos para reação de coloração. Após desenvolvimento de cor, foi adicionado 1 N ácido sulfúrico a 100 μΐ por poço para parar a reação e depois foi medida a absorvância a 450 nm utilizando um espectrómetro de absorção.

Como resultado, quando os anticorpos monoclonais #1-#10 que reagem com as superfícies das células cancerígenas foram utilizados como anticorpos secundários, foram detetados valores de absorvância (níveis de polipeptídeos) de 0,3 ou superiores para todos os espécimes de cães com cancro e gatos com cancro com cancro da mama, melanoma maligno e afins, mas não foi detetada qualquer absorvância para cães saudáveis e gatos saudáveis. Por outro lado, quando os anticorpos monoclonais que reagem com a própria proteína CAPRINA-1 mas que não reagem com as superfícies das células cancerígenas foram utilizados como anticorpos secundários, foram detetados níveis de polipeptídeos para todos os espécimes, mas os valores de absorvância foram todos 0,05 ou inferiores, que eram inferiores aos resultados para as combinações de anticorpos que reagem com as superfícies das células cancerígenas.

Portanto, o cancro também pode ser diagnosticado por esta técnica que envolve a deteção de polipeptídeos de antígeno utilizando anticorpos contra CAPRINA-1. 86 ΕΡ2325648Β1

APLICABILIDADE INDUSTRIAL industrialmente para A presente invenção é útil diagnóstico ou deteção de cancro.

LISTA DE SEQUÊNCIAS TEXTO LIVRE SEQ. ID N.°s 31-42: iniciadores

LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> TORAY INDUSTRIES, INC. <120> Polipeptideos e Métodos para Diagnóstico de Cancros

<130> PH-4052-PCT <150> JP 2008-202320 <151> 05-08-2008 <16 0 > 63 <170> Patentln verção 3.1

<210> 1 <211> 5562 <212> ADN <213> Homo sapiens <22 0>

<221> CDS <222> (190) .. (2319) <223> <4 0 0> 1 87 60 ΕΡ2325648Β1 cagagggctg ctggctggct ctcteggtgc agcgggacag ggaagggacc gccacccttg aagtccctcc cgcteccggc ggcgaagcgg cctgcgccca ccccctcagc tgcccactcg tctcgcctca ctaggagcgg cggagcgcgc gacactgccc tgatttccag cggcctccgc 120 180 gcgcgcacg atg ccc tcg gcc acc age cac age ggg age ggc age aag teg 231

Mat Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser 15 10 tcc gga ccg cca ccg ccg tcg ggt tcc tcc ggg agt gag gcg gcc gcg 279 Ser Gly 15 Pro Pro Pro Pro 20 Ser Gly Ser Ser Gly 25 Ser Glu Ala Ala Ala 30 gga gcc 999 gcc gcc gcg ccg gct tet cag cac CCC gea acc ggc acc 327 Gly Ala Gly Ala Ala 35 Ala Pro Ala Ser Gin 40 His Pro Ala Thr Gly 45 Thr ggc got gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggg gtg ate gac 375 Gly Ala Vai Gin 50 Thr Glu Ala Hat Lys 55 Gin lie Leu Gly Vai Xle <0 Asp aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ctt gat gat tac 423 Lys Lys Leu 65 Arg Asn Leu Glu Lya 70 Lys Lys Gly Lya Leu 75 Asp Asp Tyr cag gaa cga atg aac aaa 999 gaa agg ctt aat caa gat cag ctg gat 471 Gin Glu 80 Arg Met Aan Lya Gly 35 Glu Arg Leu Asn Gin 90 Asp Gin Leu Asp gcc gtt tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gea aaa S19 Ala Vai 95 Ser Lya Tyr Gin 100 Glu vai Thr Asn Aan 105 Leu Glu Phe Ala Lys 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gea cta agt caa gat att cag aaa aca 567 Glu Leu Gin Arg Ser 115 Phe »et Ala Leu Ser 120 Gin Asp Xle Gin Lys 125 Thr ata aag aag aca gea cgt cgg gag cag ctt atg aga gaa gaa gct gaa 615 88 ΕΡ2325648Β1

Ile Lys Lye Tbr Ala Arg Arg Glu Gin teu Met Arg Glu Glu Ala Gin 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gea ctt gag cta cag tat gtt ttg gac aaa ¢¢3

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Lya Pro Vai Cya Gly Thr Thr Tyr Lya Vai Leu Lya Glu Ile Vai Glu 225 230 235 cgt gtt ttt cag tca aac tac ttt gac age acc cac aac cac cag aat 951

Arg Vai Phe Gin Ser Aan Tyr Phe Aap Ser Thr Hia Aan Hia Gin Aan 240 245 250 ggg ctg tgt gag gaa gaa gag gea geo tca gea cct gea gtt gaa gac 999

Gly Leu Cya Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Vai Glu Aap 255 260 265 270 cag gta cct gaa gct gaa act gag cca gea gaa gag tac act gag caa 1047

Gin Vai Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 285 agt gaa gtt gaa tca aaa gag tat gta aat aga cag tte atg gea gaa L095

Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 295 300 aca cag tte acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu lye Glu Gin Vai Aap Glu Trp Thr Vai 305 310 315 gaa aag gtt gag gtg gta aat tca ctc cag cag caa cct aag gct gea 1191

Glu Thr vai Glu vai vai Αβη Ser Leu Gin Gin Glr Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tca gta cca gag ccc cac tet ttg act cca gtg gct cag gea 1239

Ser Pro Ser vai Pro Glu Pro Hia Ser Leu Thr Frc Vai Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat cac ctt gtg aga aga cag cga gta caa gac ctt atg gea caa atg 1287

Aap Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat tte ata cag gat tca atg ctg gat ttt gaa aat 1335

Gin Gly Pro Tyr Aan Phe Ile Gin Aap Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ctt gat cct gee att gta tet gea cag cct atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Aap Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Aan Pro Thr 89 ΕΡ2325648Β1 385 330 395 eu aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tct gaa 1431 Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Pro Vai His Ser Glu 400 405 410 tct aga ctt gct cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcg aca 1479 ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai Pro vai Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tca tcc aca agt gag ggg tac aca gca tct caa 1527 Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 coo ttg tae cag cct tct cat gct aca gag caa cga cca cag aag gaa 1575 Pro Leu Tyr Gin Pro Ser Bis Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu 450 455 460 cca att gat cag att cag gca aca ate tct tta aat aca gac cag act 1623 Pro ile Asp Gin ile Gin Ala Thr ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gca tca tca tcc Ctt cct gct gcg tct cag cct caa gta ttt cag 1671 Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin 480 485 490 gct 999 aca age ua cct tta cat age agt gga ate aat gta aet gca 1719 Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Aan Val Asn Ala 495 500 505 S10 gct cca ttc caa tcc atg cu acg gtg ttc aat atg aat gac cca gtt 1767 Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe Asn Met Asn Ala Pro Val 515 520 525 cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815 Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lye Gin Gin Aan Gin Tyr Gin 530 535 540 yee agt tat aac cag age ttt tct agt cag cct cac caa gta gaa cu 1863 Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin val Glu Gin 545 550 555 aea gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt ggc act tac cat 1911 Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His 580 565 570 ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959 Gly Ser Pro Aep Gin Ser Hia Gin Vai Thr Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag coc tat tac aat 2007 Pro Gin Gin Αβη Thr Gly Phe Pro Arg Ser Aan Gin Pro Tyr Tyr Aan 595 600 605 agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggc tcc cgt ggt gct aga ggc ttg atg 2055 Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met €10 615 €20 aat gga tac egg ggc cct gçc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103 Aan Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac cgc cct tca ttc tct aac act cca uc agt ggt tat aca cag tct 2151 Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 90 ΕΡ2325648Β1 cag ttc agt gct ecc cgg gat tac tct ggc tat caa agg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arç Aep Gly Tyr 655 €60 665 670 cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca cga ggt egt gga ggg ccc oca aga ccc aac aga ggg atg ccg caa 2295

Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin 690 695 700 atg aac act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt ttaatcgcca 2349 Met Asn Thr Gin Gin Vai Asn 705 aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattate tatttgttct 2409 ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggaotacaat 2469 tgtcagcttt ctattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca tgttctgtcc 2529 taagcgteat cttgagcctt gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc ttaggagtaa 2589 aacaatatac tttacagggt gataataatc tccatagtta tttgaagtgg cttgaaaaag 2649 gcaagattga ctbttatgac attggataaa atctacaaat cagccctcga gttattcaat 2709 gataactgac aaactaaatt atttccctag aaaggaagat gâaaggagtg gagtgtggtt 2769 tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cagttaaatt ggagcactga acgttcagat 2829 gcataaeaaa ttatgcatgg gtcctaatca cacatataag gctggctacc agctttgaca 2889 cagrcactgtt catctggcca aacaactgtg gttaaaaaca catgtaaaat gctttttaac 2949 agetgatact gtataagaca aagccaagat gcaaaattag gctttgattg gcactttttg 3009' aaaaatatgc aacaaatatg ggatgtaatc cggatggccg cttctgtact taatgtgaaa 3069 tatttagata cctttttgaa caettaaeag tttctttgag acaatgactt ttgtaaggat 3129 tggtactatc tatcattcct tatgacatgt acattgtctg tcactaatcc ttggattttg 3189 ctgtattgtc acctaaattg gtacaggtac tgatgaaaat ctctagtgga taatcataac 3249 actctcggtc acatgttttt cottcagctt gaaagctttt ttttaaaagg aaaagatacc 3309 aaatgcctgc tgctaccacc cttttcaatt gctatctttt gaaaggcacc agtatgtgtt 3369 ttagattgat ttccctgttt cagggaaatc acggacagta gtttcagttc tgatggtata 3429 agcaaaacaa ataaaacgtt tataaaagtt gtatcttgaa acactggtgt tcaacagcta 3489 gcagcttatg tgattcaccc c&tgccacgt tagtgtcaca aattttatgg tttatctcca 3549 gcaacatttc tctagtactt gcacttatta tcttttgtct aatttaacct taactgaatt 3609 ctccgtttct cctggaggca tttatattca gtgataattc cttcccttag atgcataggg 3669 agagtctcta aatttgatgg aaatggacac ttgagtagtg acttagcctt atgtactctg 3729 ttggaatttg tçctagcagt ttgagcacta gttctgtgtg cctaggaagt taatgctgct 3789 91 ΕΡ2325648Β1 tattgtctca ttctgactto atggagaatt aatoccaeet ttaageaaag gctactaagt 3849 taatggtatt ttctgtgcag aaattaaatt ttattttcag catttagccc aggaattctt 3909 ccagtaggtg ctcagctatt taaaaacaaa actattctca aacattcatc attagacaae 3969 tggagttttt gctggttttg taaeetacea aaatggatag gctgttgaac attccacatt 4029 caaaagtttt- gtagggtggt gggaaatggg ggatcttcaa tgtttatttt aaaataaaat 4089 aaaataagtt cttgactttt ctcatgtgtg gttgtggtac atcatattgg aagggttaac 4149 ctgttacttt ggcaaatgag tatttttttg ctagcacctc cccttgcgtg ctttaaatga 4209 catctgcctg ggatgtacca caaeeatatg ttacctgtat cttaggggaa tggataaaat 4269 atttgtggtt tactgggtaa tccetagatg atgtatgctt gcagtcctat ataaaactaa 4329 atttgctatc tgtgtagaaa ataatttcat gacatttaca atcaggactg aagtaagttc 4389 ttcacacagt gaccfcctgaa tcagtttcag agaagggatg ggggagaaaa tgccttctag 4449 gttttgaact tctatgcatt agtgcagatg ttgtgaatgt gtaaaggtgt tcatagtttg 4509 actgtttcta tgtatgtttt ttcaaagaat tgttcctttt tttgaactat aatttttctt 4569 tttttggtta ttttaccatc aoagtttaaa tgtatatctt ttatgtcfcct actcagacca 4629 tatttttaaa ggggtgcctc attatggggc agagaacttt tcaataagtc tcattaagat 4689 ctgaatcttg gttctaagca ttetgtataa tatgtgattg cttgtcctag ctgcagaagg 4749 ecttttgttt ggtcaaatgc atattttagc agagtttcaa ggaaatgatt gtcacacatg 4809 tcaetgtagc ctcttggtgt agcaagctca catacaaaat acttttgtafc atgcataata 4869 taaatcatet catgtggata tgaaacttct tttttaaaac ttaaaaaggt agaatgttat 4929 tgattacctt gattagggca gttttatttc cagatcctaa taattcctaa aaaatatgga 4989 aaagtttttfc ttcaatcatt gtaccttgat attaaaacaa atatccttta agtatttcta 5049 atcagttagc ttctacagtt cttttgtctc cttttatatg cagctcttac gtgggagact 5109 tttccactta aaggagacat agaatgtgtg cttattctca gaaggttcat taactgaggt 5169 gatgagttaa caactagttg agcagtcagc ttcctaagtg ttttaggaca tttgttcatt 5229 atattttccg tcatataact agaggaagtg gaatgcagat aagtgccgaa ttcaaaccct 5289 tcattttatg tttaagctcc tgaatctgca ttccacttgg gttgttttta agcaftctaa 5349 atfcttagttg attataagtt agatttcaca gaatcagtat tgoocttgat ettgtccttt 5409 ttatggagtt aacggggagg aagacocctc aggaaaaoga aagtaaattg ttaaggctca 5469 tcttcatacc tttttccatt ttgaatccta caaaaatact gcaaaagact agtgaatgtt S529 taaaattaca ctagattaaa taatatgaaa gto 5562

<210> 2 <211> 709 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 92 ΕΡ2325648Β1

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Vai Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin Ile Leu Gly Vai Ile Asp Lys lys 50 55 60

Leu Arg Aen Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Aen Lys Gly Glu Arg Leu Aen Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr Aen Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu 100 105 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys Thr ile Lye 115 120 125

Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg Leu Lys Thr vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro 165 170 175

Ile Leu ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Vai Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser Ile His Leu Tzp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Vai Leu Lys Glu Ile Vai Glu Arg Vai 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255 93 ΕΡ2325648Β1

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Vai Glu Asp Gin Vai 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lya Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr 305 310 315 320

Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Vai Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro 340 345 350

Leu Vai Arg Arg Gin Arg vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Aan Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380

Leu Asp Pro Ala Xle Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn 385 390 395 400

Met Aap Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Pro Vai His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai 420 425 430

Pro Leu val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lya Glu Pro rie 450 4S5 460

Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser Leu Aan Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 480

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu Bis Ser Ser Gly Ile Aan Val Asn Ala Ala pro 500 505 510 94 ΕΡ2325648Β1

Phe 61n Ser Met Gin Thr Vai Phe Aan Met Αβη Ala Pro vai Pro Pro S15 520 525

Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Aan Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Aan Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Hie Gin Vai Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Vai Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly 610 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640

Pro Ser Phe Ser Aan Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 645 650 655

Ser Ala Pro Arg Aap Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 660 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 675 680 685

Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Aan Arg Gly Met Pro Gin Met Asn 690 695 700

Thr Gin Gin Vai Asn 705

<210> 3 <211> 3553 <212> ADN <213> Homo sapiens 95 ΕΡ2325648Β1 <22 0>

<221> CDS <222> (190) . . (2274) <223> <400> 3 cagagggctg ctggctggct aagtccctcc cgctcccggc tctcgcctca ctaggagcgg 60 96 ΕΡ2325648Β1 ctctcggtgc agcgggacag ggcgaagcgg cctgcgccca cggagcgcgc gacactgccc 120 ggaagggacc gccacccttg cceeetcagc tgcccactcg tgatttccag cggcctccgc 180 gcgcgcacg atg coc teg gee acc age eac age ggg age ggc age aag teg 231

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser 61y Ser Gly Ser Lys Ser 1 S 10 tcc gga ccg cca ccg ccg teg ggt tcc tcc ggg agt gag gcg gee gcg 279 Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala 15 20 25 30 gga gee otg gac goe gcg ccg gct tet cag cac ccc gea acc ggc acc 327 Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala ser Gin His Ero Ala Thr Gly Thr 35 40 45 ggc gct gtc cag acc gag gee atg aag cag att ctc ggg gtg ate gac 375 Gly Ala vai Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin lie Leu Gly val ile Asp 50 55 60 aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aag ctt gat gat tac 423 Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr 65 70 75 cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt aat caa gat cag ctg gat 471 Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp 80 85 90 gee gtt tet aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gea aaa 519 Ala Vai Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn leu Glu Phe Ala Lys 9S 100 105 110 gaa tta cag agg agt ttc atg gea cta agt caa gat att cag aaa aca 567 Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys Thr 115 120 12$ ata aag aag aca gea cgt cgg gag cag ctt atg aga gaa gaa gct gaa 615 Xle Lya Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu 130 135 140 cag aaa cgt tta aaa act gta ctt gag cta cag tat gtt ttg gac aaa 663 Gin Lys Arg Leu Lya Thr val Leu Glu leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys 145 150 155 ttg gga gat gat gaa gtg cgg act gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga 711 Leu Gly Aep ASp Glu Vai Arg Thr Asp leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly 160 165 170 etg cca ata ttg tcc gaa gag gag ttg tea ttg ttg gat gaa ttc tat 759 Vai Pro Ele Leu Smv Glu Glu Glu leu Ser Leu Leu Asp Glu phe Tyr 175 180 185 190 aag cta gta gac cct gaa cgg gac atg age ttg agg ttg aat gaa cag 807 Lya Leu Vai Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin 195 200 205 tat gaa cat gee toe att cac ctg tgg gac ctg ctg gaa ggg aag gaa 855 Tyr Glu His Ala Ser ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu 210 215 220 aaa oot gta tgt gga acc acc tat aaa gtt cta aag gaa att gtt gag 903 Lys Pro Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Vai leu Lys Glu Ile Val Glu 225 230 235 97 ΕΡ2325648Β1 cgt gtt ttt cag toa aae tac ttt gae age acc caa aao cao eag aat 951

Acg vai Phe Gin Ser Aan Tyr Phe Aap ser Thr His Asn Bis Gin Asn 240 245 250 ggg otg tgt gag gaa gaa gag gea gee tea gea cct gea gtt gaa gae 999

Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Vai Glu Aap 255 260 265 270 cag gta cct gaa gct gaa cct gag eca gea gaa gag tac aet gag caa 1047

Gin vai Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin 275 280 285 agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat aga cag ttc atg gaa gaa 1095

Ser Glu Vai Glu $er Thr Glu Tyr vai Aan Arg Gin Phe Met Ala Glu 290 295 300 aoa cag tte acc agt ggt gaa aag gag cag gta gat gag tgg aca gtt 1143

Thr Gin Phe Thr Ser Gly Glu lys Glu Gin Vai Aap Glu Trp Thr Vai 305 310 315 gaa aeg gtt gag gtg gta aat tea etc cag cag caa cct. cag gct gea 1191

Glu Thr Vai Glu Vai Vai Aan Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala 320 325 330 tcc cct tea gta cca gag ccc cac tet ttg aet cca gtg gct cag gea 1239

Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro Hie Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ala 335 340 345 350 gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta caa gae ctt atg gea caa atg 1287

Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Sln Asp Leu Met Ala Gin Met 355 360 365 cag ggt ccc tat aat ttc ata cag gat tea atg ctg gat ttt gaa aat 1335

Gin Gly Pro Tyr Asn Phe ile Gin Asp ser Met Leu Asp Phe Glu Asn 370 375 380 cag aca ctt gat cct gee att gta tet gea cag cct atg aat cca aca 1383

Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr 385 390 395 caa aae atg gae atg ccc cag ctg gtt tgc cct cca gtt cat tet gaa 1431

Gin Asn Hat Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Pro Vai His Ser Glu 400 405 410 tet aga ctt gct cag cct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcg aca 1479

Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr 415 420 425 430 cag gtt cct ttg gta tea tcc aca agt gag ggg tac aca gea tet caa 1527

Gin vai sro Leu Vai Ser Ses Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin 435 440 445 ccc ttg tac cag cot tet cat gct aca gag caa cga cca cag aag gaa 1575

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Pxo Ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr He Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr 465 470 475 aca gea tea tea tcc ctt cct gct gcg tet cag cct caa gta ttt cag 1671

Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin 480 485 490 gct ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta aat gea 1719 98 ΕΡ2325648Β1

Ala Gly Thr Ser Lys pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Vai Asn Ala 495 500 505 510 gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gcc oca gtt 1757

Ala Pro Pbe Gin Ser Met Gin Thr vai Phe Asn Met Asn Ala Pro vai 515 520 525 cot cct gtt aat gaa oca gaa act tta aaa cag caa aat cag tac cag 1815

Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin 530 535 540 gco agt tat aac cag age ttt tet agt cag cct cac caa gta gaa caa 1863

Ala Ser Tyr Aan Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Vai Glu Gin 545 550 555 aca gag ctt cag caa gaa cag ctt caa aca gtg gtt gge act tac cat 1911

Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His 560 565 570 ggt tcc cca gac cag tcc cat caa gtg act ggt aac cac cag cag cct 1959

Gly Ser Pro Asp Gin Ser His Gin Vai Thr Gly Asn His Gin Gin Pro 575 580 585 590 cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat cag ccc tat tac aat 2007

Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Axg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 600 605 agt cgt ggt gtg tet cgt gga gge tec cgt ggt gct aga ggc ttg atg 2055

Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Hat 6L0 615 620 aat gga tac cgg ggc cct gcc aat gga ttc aga gga gga tat gat ggt 2103

Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly 625 630 635 tac ege cct tea ttc tet aac act cca aac agt ggt tat aca cag tet 2151

Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser 640 645 650 cag ttc agt gct ccc cgg gat tac tet ggc tat caa cgg gat gga tat 2199

Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr 655 660 665 670 cag cag aat ttc aag cga ggc tet ggg cag agt gga cca cgg gga gcc 2247

Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala 675 680 685 cca cga ggt aat att ttg tgg tgg tga tCCtagetcc taagtggage 2294

Pro Arg Gly Aan Ile Leu Trp Trp 690 ttctgttctg gccttggaag agctgttaat agtctgcatg ttaggaatac atttatcctt 2354 tccagacttg ttgctaggga ttaaatgaaa tgetctgttt ctaaaactta atettggacc 2414 caaattttaa tttttgaatg atttaatttt ccctgttact atataaactg tcttgaaaac 2474 tagaacatat tctcttctca gaaaaagtgt ttttccaact gaaaattatt tttcaggtcc 2534 taaaacctgc taaatgtttt taggaagtac ttactgaaac atttttgtaa gacatttttg 2594 gaatgagatt gaacatttat ataaatttat tattcctctt tcattttttt gaaacatgcc 2654 tattatattt tagggccaga caccctttaa tggccggata agccatagtt aacatttaga 2714 99 ΕΡ2325648Β1 gaaccattta gaagtgatag aactaatgga atttgcaafcg ccttttggac ctctattagt 2774 gatataaata tcaagttatt tctgactttt aaacaaaact cccaaattcc taacttattg 2834 agctatactt aaaaaaaafct acaggtttag agagtttttt gtttttcttt tactgttgga 2894 aaactacttc ccattttggc aggaagttaa cctatttaac aattagagct agcatttcat 2954 gtagtctgaa attctaaatg gttctctgat ttgagggagg ttaaacatca aacaggtttc 3014 ctctattggo cataacatgt ataaaatgtg tgttaaggag gaattacaac gtactttgat 3074 ttgaatacta gtagaaactg gceaggaaaa aggtacattt ttctaaaaat taatggatca 3134 cttgggaatt actgacttga cfcagaagtafc caaaggatgt ttgcatgtga atgtgggtta 3194 tgttctttcc caccttgtag catattcgat gaaagttgag ttaactgata gctaaaaatc 3254 tgttttaaca gcatgtaaaa agttatttta tctgttaaaa gtcattatac agttttgaat 3314 gttatgtagt ttctttttaa cagtttaggt aataaggtct gttttcattc tggtgctttt 3374 attaattttg atagtatgat gttacttact actgaaatgt aagctagagt gtacactaga 3434 atgtaagcto catgagagca ctgtcttctc tgctgtatct attcccaacg 3494 cttgatgatg grtgcctggca catagtaggc actcaataaa tatttgttga atgaatgaa 3553 <2 Λ O \—1 4 <2 11> 694 <2 12> PRT <2 13> Homo <4 O o V 4 100 ΕΡ2325648Β1

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

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Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin Hie Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala 35 40 45

Vai Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin Xle Leu Gly Vai Xle Aap Lye Lya 50 55 60

Leu Arg Asn Leu Glu Lye Lya Lys Gly Lya Leu Aap Asp Tyr Gin Glu 65 70 75 80

Arg Met Asn Lya Gly Glu Arg Leu Aan Gin Aap Gin Leu Aap Ala Vai 85 90 95

Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Aan Leu Glu Phe Ala Lya Glu Leu 100 10S 110

Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Aap Xle Gin Lys Thr Ile Lya 101 ΕΡ2325648Β1 115 120 125 iys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys 130 135 140

Arg l>eu Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly 145 150 155 160

Asp Asp Glu Vai Arg Thr Aap Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro 165 170 175

Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu 180 185 190

Vai Asp Fro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 195 200 205

His Ala Ser Ile His Leu Trp Aap Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro 210 215 220

Vai Cya Gly Thr Thr Tyr Lys Vai Leu Lys Glu lie Vai Glu Arg Vai 225 230 235 240

Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr Bis Asn His Gin Asn Gly Leu 245 250 255

Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Vai Glu Asp Gin Vai 260 265 270

Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 275 280 285

Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin 290 295 300

Phe Thr Ser Gly Glu Lya Glu Gin vai Asp Glu Trp Thr vai Glu Thr 305 310 315 320

Vai Glu val vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro 325 330 335

Ser Val Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ala Aap Pro 340 345 350

Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Hat Gin Gly 355 360 365

Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr 370 375 380 102 ΕΡ2325648Β1

Leu Asp Pro Ala lie Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pco Thr Gin Aan 385 390 395 400

Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Pro Vai His Ser Glu Ser Arg 405 410 415

Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin vai 420 425 430

Pro Leu val Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu 435 440 445

Tyr Gin Pro Ser Bis Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Xle 450 455 460

Asp Gin Zle Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala 465 470 475 490

Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly 485 490 495

Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro 500 505 510

Phe Gin Ser Met Gin Thr Val Phe Aan Met Asn Ala Pro Val Pro Pro 515 520 525

Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser 530 535 540

Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Val Glu Gin Thr Glu 545 550 555 560

Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser 565 570 575

Pro Asp Gin Ser His Gin Val Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin 580 585 590

Gin Asn. Thr Gly Phe Pro Arg Ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 595 600 605

Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly €10 615 620

Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 625 630 635 640 103 ΕΡ2325648Β1

Pro Ser Phe Ser Aan Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe $45 650 $55

Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin $60 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg $75 680 685

Gly Asn Ile x*eu Trp Trp 690 <210> 5 <211> 1605 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> (46) . . (1392) <223> <4 0 0> 5 104 ΕΡ2325648Β1 gtcacaaata acttggagtt tgcaaaagaa ttacagagga gtttc atg gca tta agt 57

Met Ala Leu S«C 1 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gca cgt cgg gag cag ctt 105 Gin Asp Ile Gin Lya Thr Ile Lys Lya Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 5 10 15 20 atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag ctc 153 Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr val Leu Glu Leu 25 30 35 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 201 Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr Asp Leu 40 45 50 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg tcg 249 Lys Gin Gly Leu Asn Gly vai Pr© Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 55 60 65 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa cgg gac atg age 297 Leu Leu Aap Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 70 75 80 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat gct tac att cac ctg tgg gac 345 Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp 85 90 95 100 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 393 Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Sér Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 105 110 115 cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tca aat tac ttt gac age 441 Leu Lya Glu lie vai Glu Arg val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Aep Ser iao 125 130 act cac aac cac cag aat ggg cta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca 489 105 ΕΡ2325648Β1

Thr His Asn Hia Gin Aan Gly leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 135 no 145 gca cet aca çtt gaa gac caç gta gct gaa gct gag cet 919 oca gca 537

Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 150 155 1G0 gaa gaa tae act gaa caa agt gaa gtt gaa fcca aca gag tat gta aat 585

Glu Glu Tyr The Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn !65 170 175 180 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 633

Arg Gin Pha Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lye Glu Gin 185 130 195 gta gat gag tgg acg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea ctc cag 681

Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Lsu Gin 200 205 210 cag caa cct cag gct geg tet cet tea gta cca gãg cce cac tet ttg 729

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro Bis Ser Leu 215 220 225 act ccg gtg gct cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gtc cag 777

Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin 230 235 2d0 gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 825

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser 245 250 255 260 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ctc gat cct gee att gta tet gca 873

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala 265 270 275 cag cct atg aat ccg aca caa aao atg gac atg cac cag ctg gtt tgc 821

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys 280 285 290 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ctt gct caa cct aat caa gtt cct 869

Pro Pro Vai His Sec Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai Pro 295 300 305 gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag 1017 vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu 310 315 320 ggg tat aca gca tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat gct aca gag 1065

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro ser His Ala Thr Glu 325 330 335 340 caa cga cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tet 1113

Gin Arg Pro Gin Lye Glu Pro Ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 345 350 355 tta aat aca gac cag act aca gcg tea tea tcc ctt ccg gct gct tet 1161

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 360 365 370 cag cct cag gta ttc cag gct ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1209

Gin Pro Gin vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lye Pro Leu His Ser Ser

375 380 38S gga ate aat gta aat gca gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc 1257

Gly Ile Asn Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr vai Phe 106 ΕΡ2325648Β1 390 395 400 aat atg aat gcc cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1305 Asn 405 Hat Aan Ala PCO Vai 410 Pro Pro vai Aan Glu 415 Pro Glu Thr Leu Lya 420 caa caa aat cag tac cag gcc agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1353 Gin Gin Asn Gin Tyr 425 Gin Ala Ser Tyr Asn 430 Gin Ser Phe Ser Ser 435 Gin cct Pro cac His caa Gin gta vai 440 gaa Glu caa Gin aça Thr gag Glu gga Gly 445 tgc Cys cgc aaa Arg Lya tga acactcagca 1402 agtgaattaa tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgfca 1462 ccataatatg ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg 1522 taaagggact gttttcatcc cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg 1582 gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1605 <210> 6 <211> 448 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 6 107 ΕΡ2325648Β1

Met Ala Leu Ser Gin Aap lie Gin Lys Thr Xle Lys Lys Thr Ala Arg 1 5 10 15

Arg Glu Gin Leu Hat Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lya Arg Leu Lya Thr 20 25 30

Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Aap Lys Leu Gly Asp Aap Glu Vai 35 40 45

Arg Thr Asp Leu Lya Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro Ile Leu Ser Glu 50 55 50

Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu She Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu 65 70 75 80

Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile 85 90 95

His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Vai Cys Gly Thr 100 105 110

Thr Tyr Lya Ala Leu lya Glu ile Vai Glu Arg Vai Phe Gin Ser Asn 115 120 125

Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu 130 135 140 108 ΕΡ2325648Β1

Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu Ala Glu 145 150 155 ISO

Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr 165 170 175

Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Fhe Mefc Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly 180 185 180

Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai 195 200 205

Asn Ser Leu Gin Gin Gin pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu 210 215 220

Pro His Ser Leu Thr Pro vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg 225 230 235 240

Gin Arg Vai Gin Asp Leu Het Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe 245 250 255

Xle Gin Asp Ser Meb Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala 260 265 270

Xle Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro 275 280 285

Gin Leu Vai Cys Pro Pro Vai Hls Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro 290 295 300

Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu Vai Ser 305 310 315 320

Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro leu Tyr Gin Pro Ser 325 330 335

His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Xle Asp Gin rie Gin 340 345 350

Ala Thr Xle Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu 355 360 365

Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro 370 375 380

Leu His Ser Ser Gly Xle Asn Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met 385 390 395 400 109 ΕΡ2325648Β1

Gin Thr Vai Phe Aan Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro 405 410 415

Glu Thr Leu Lya Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser 420 425 430

Phe Ser Ser Gin Pro Hia Gin Vai Glu Gin Thr Glu Gly c*s *** Ly® 435 440 445

<210> 7 <211> 4154 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0>

<221> CDS <222> (1) .. (2154) <223> <400> 7 110 ΕΡ2325648Β1 atg ecg teg gee acc age ctc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48 Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15 ccg ccg ccc ccg teg ggt tcc tcc ggg age gag gcg gcg gcg gcg gcg 96 Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30 ggg gcg gcg ggg gcg gcg ggg gee ggg gcg gct gcg ccc gee tcc cag 144 Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 cac ccc gcg acc ggc acc ggc gct gtc cag acc gag gac atg aag cag 192 HiS Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin Thr Glu Ala Het Lys Gin 50 55 60 ate ctc ggg gtg ate gac aag aaa ctc cgg aac ctg gag aag aaa aag 240 Ile leu Gly vai Ile Aap Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80 9ÇO aag ctt gat gat tac cag gaa cga atg aac aaa ggg gaa agg ctt 288 Gly Lys Leu Aap Asp Tyr Gin Glu Arg Het Asn LyS Gly Glu Arg Leu 85 90 95 aat caa gat cag ctg gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336 Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr Asn 100 105 110 aac ttg gag ttt gea aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gea tta agt 384 Aan Leu Glu Fhe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Het Ala Leu Ser 115 120 125 caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gea cgt cgg gag cag Ctt 432 Gin Asp 11« em Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140 atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag ctc 480 Het Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu Leu 145 150 155 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528 Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu vai Arg Thr Asp Leu 111 ΕΡ2325648Β1 170 165 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata Lya Gin Gly Leu 180 Asn Gly val Pro ile 185 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gea Leu Leu Asp 195 Glu Phe Tyr Lys Leu Ala 200 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat Leu Arg 210 Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His 215 ttg etg gaa gga aag gaa aag tct gta Leu 225 Leu Glu Gly Lya Glu 230 Lys Ser val cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc Leu Lys Glu Ile Val 245 Glu Arg val Phe act cac aac cac cag aat ggg cta tgt Thr His Asn HiS 260 Gin Asn Gly Leu Cys 265 gea cct aca gtt gaa gac cag gta gct Ala Pro Thr 275 val Glu Asp Gin val Ala 280 gaa gaa tac act gaa eaa agt gaa gtt Glu Glu 290 Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val 295 aga caa ttt atg gea gaa aca cag ttc Arg 305 Gin Phe Met Ala Glu 310 Thr Gin Phe gta gat gag tgg acg gtc gaa aca gtg Vai Αβρ Glu Trp Thr 325 Val Glu Thr Val cag caa cct cag gct gcg tct cct tea Gin Gin Pro Gin 340 Ala Ala Ser Pro Ser 345 act ccg gtg gct cag gea gat ccc ctt Thr pro Vai 355 Ala Gin Ala Αβρ Pro Leu 360 gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc Asp Leu 370 Met Ala Gin Met Gin Gly Pro 375 atg etg gat ttt gaa aac cag aca ctc Met 385 Leu Asp Phe Glu Asn 390 Gin rhr Leu cag cct atg aat ccg aca caa aac atg Gin Pro Met Asn Pro 405 Thr Gin Asn Met cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt Pro Pro vai His 420 Ser Glu Ser Arg Leu 425 175 ttg tct gaa gaa gaa ttg tcg 576

Leu Ser 61u Glu Glu Leu Ser

ISO gac cct gaa cgg gac atg age 624

Asp pro Glu Arg Asp Met Ser 205 gct tee att cac etg tgg gac 672

Ala Ser Ile His Leu Trp Asp 220 tgt gga aca acc tat aaa gea 720

Cye Gly Thr Thr Tyr Lya Ala 235 240 cag tea aat tac ttt gac age 768

Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 250 255 gag gaa gaa gag gea gee tea 816

Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 270 gaa gct gag cct gag cca gea 864

Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 285 gaa tea aca gag tat gta aat 912

Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn 300 age agt ggt gaa aag gag cag 960

Ser Ser Gly Glu Lya Glu Gin 315 320 gag gtg gtg aat tea etc cag 1008 Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin 330 335 gta cca gag ccc cac tct ttg 1056 Vai Pro Glu Pro Bis Ser Leu 350 gtg aga aga cag cga gtc cag 1104 Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin 365 tat aat ttc ata cag gat tea 1152 Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser 380 gat cct gee att gta tct gea 1200 Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala 395 400 gac atg ccc cag etg gtt tgc 1248 Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys 410 415 gct caa cct aat caa gtt cct 1296 Gin Pro Asn Gin Vai Pro 430 112 ΕΡ2325648Β1 gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag 1344

Vai Gin Pro Glu Ala Tbr Gin vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser Hls Ala Thr Glu 450 455 460 caá cga cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gca aca ate tct 1440

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 465 470 475 480 tta aat aca gac cag act aca gcg tca tca tce ctt ccg gct gct tct 1488

Lett Asn Thr Aep Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag gct ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu flla Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gca gct cca tta caa tcc atg caa acg gtg ttc 1584

Gly Ile Asn vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag gca agt tat aac cag age ttt tot agt cag 1680

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala ser Tyr Asn Gin ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gac ctt cag caa gaa cag ctt caa aca 1728

Pro Kis Gin Vai Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tcc cag gac cag ccc cac caa gtg act 1776

Val Val Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro Hie Gin Vai Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1624

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt cag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tcc cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt gct aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttc 1920

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tca ttc tct aac act cca aac 1968

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655 agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt gct ccc cgg gac tac tct ggc 2016

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 113 ΕΡ2325648Β1 agt gga cca cgg gga gec cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga eco 2112

Ser Qly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Fro Pro Arg Pro 690 695 700 aac aga ggg atg ccg aaa atg aae aet eag eaa gtg aafc fcaa 2154

Asn Arg Gly Het Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin vai Asn 705 710 715 tctgattcac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214 ttaecagaag agttattatc tatttgttct ccctttoagg aaacttattg taaagggact 2274 gtttteatcc eataaagaea ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag 2334 gaaactattt ttattctgca tgttcttcct aagcgtcate ttgagccttg caeatgatac 2394 tcagattcct cacccttgct taggagtaaa acataataca ctttacaggg tgatatctce 2454 atagttattt gaagtggctt ggaaaaagea agattaactt ctgacattgg ataaaaatea 2514 acaaatcaga cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aaetaaaata tttcccttog 2574 agaaggagtg gaatgtggtt tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cggttaaatt 2634 ggagcactaa acgtttagat geataceaaa ttatgcatgg gcccttaata taaaaggetg 2694 gctaccagct ttgacacagc actattcatc etctggccaa acaactgtgg ttaaacaaca 2754 catgtaaatt gctttttaac agctgatact ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt 2814 gggctttgat tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatggc 2974 cgcttctgta cttaatgtga agtatttaga tacctttttg aaeaettaae agtttcttct 2934 gaeaatgaet tttgtaagga ttggtactat otateattec ttataatgta cattgtetgt 2994 cactaatcct cagatettgc tgtahtgtca cctaaattgg tacaggtact gatgaaaata 3054 tctaatggat aatcataaca ctcttggtca catgtttttc otgoagcotg aaggttttta 3114 aaagaaaaag afcatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat cttttgaaaa 3174 gcaccagtat gtgttttaça ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc 3234 agttctgatg gtataagcaa aacaeataaa acatgtttat aaaagttgta tcttgaaaca 3294 ctggtgttca acagetagea gcttatgtgg ttcaccccat gcattgttag tgtttcagat 3354 tttatggtta tctccagoag etgtttetgt agtacttgca tttatctttt gtctaaccct 3414 aatattctea cggaggcatt tatattcaaa gtggtgatec cttcacttag acgcataggg 3474 agagtcaeaa gtttgatgaa gaggacagtg tagtaattta tatgctgttg gaatttgtge 3534 tagoagtttg ageaetagtt ctgtgtgcet atgaacttaa tgctgctfegt catattccae 3594 tttgacttca fcggagaatta atcccatcta cteageaaag getataetaa tactaagtta 3654 atggtatttt ctgtgcagaa attgaatttt gttttattag catttagcta aggaattttt 3714 ccagtaggtg ctcagctact aaagaaaaac aaaaacaaga cacaaaacta ttctcaaaca 3774 ttoattgtta gacaactgga gtttttgctg gttttgtaac ctactaaaat ggataggctg 3834 ttgaacafctc cacattcaaa agttttttgt agggtggtgg ggaagggggg gtgtcttcaa 3894 114 ΕΡ2325648Β1 tgtttatttt aaaataaaat aagttcttga cttttctoat gtgrtggttgt ggtacatcat 3954 attggaaggg ttatctgttt acttttgcaa atgagtattt ctcttgctag cacctcccgt 4014 tgtgcgcttt aaatgacatc tgcetgggat gtaccacaac catatgttag ctgtatttta 4074 tggggaatag ataaaatat-t cgtggtttat tgggtaatcc ctagatgtgt atgcttacaa 4134 tcctatatat aaaactaaat 4154

<210> 8 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 8 115 ΕΡ2325648Β1

Het Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 €0

Ile Leu Gly Vai Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp Ile Gin Lys Thr ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Vai Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 116 ΕΡ2325648Β1

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Xle His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu Xle Vai Glu Arg Vai Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin 355 3€0 365

Asp X>eu Het Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Xle Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr leu Asp Pro Ala Xle Vai Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys 405 410 415

Pro Pro vai His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai Pro 420 425 430

Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 117 ΕΡ2325648Β1

Gly Tyr Ihr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser Hia Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 465 470 475 480

Leu Aan Thr Aap Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lya Pro Leu Hia Ser Ser 500 505 510

Gly Ile Aan Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe 515 520 525

Asn Met Aan Ala Pro Vai Pro Pro Vai Aan Glu Pro Glu Thr Leu Lya 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Aan Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro Hia Gin Vai Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575

Vai Vai Gly Thr Tyr Hia Gly Ser Gin Asp Gin Pro Hia Gin Vai Thr 580 585 590

Gly Aan Hia Gin Gin Pro Pro Gin Gin Aan Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Aan Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Aan Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Aan Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Aan £45 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Sar Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700 118 ΕΡ2325648Β1

Thr Gin Gin Vai Asn 715

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn 705 710 <210> 9 <211> 4939 <212> ADN <213> Canis familiaris <22 0> <221> CDS <222> <223> (D · · (2109) <4 0 0> 9 119 ΕΡ2325648Β1 atg ccg teg gee acc age etc age gga age ggc age aag teg teg ggc 48 Met Pro 1 ser Ala Thr 5 Ser Leu ser Gly ser 10 Gly Ser Lys Ser Ser 15 Gly ccg ccg ccc ccg teg ggt tcc tcc ggg age gag gcg gcg gcg gcg gcg 96 Pro Pro Pro Pro 20 Ser Gly Ser Ser Gly 25 Ser Glu Ala Ala Ala Ala 30 Ala GGG gog gcg ggg gcg gcg ggg gee ggg gcg gct gcg ccc gee tcc cag 144 Gly Ala Ala 35 Gly Ala Ala Gly Ala 40 Gly Ala Ala Ala Pro 45 Ala Ser Gin cac ccc gcg acc ggc acc ggc gct gtc cag acc gag gee atg aag cag 192 His Pro 50 Ala Thr Gly Thr Gly 55 Ala Vai Gin Thr Glu 60 Ala Met Lys Gin ate etc ggg gtg ate gac aag aaa etc cgg aac ctg gag aag aaa aag 240 Ile Leu 65 Gly Vai Ile Asp 70 Lys Lys Leu Arg Asn Leu 75 Glu Lya Lys Lys 80 ggc aag ctt gat gat tac cag gaa cga atg aac aaa GGG gaa agg Ctt 288 Gly Lys Leu Aap Asp 85 Tyr Gin Glu Arg Met 90 Asn Lys Gly Glu Arg 95 Leu aat caa gat cag otg gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336 Asn Gin Aap Gin 100 Leu ASp Ala Vai Ser 105 Lys Tyr Gin Glu Vai Thr 110 Asn aac ttg gag ttt gea aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gea tta agt 384 Asn Leu Glu 115 Phe Ala Lys Glu Leu 120 Gin Arg Ser Phe Het 125 Ala Leu Ser caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gea cgt cgg gag cag ctt 432 Gin Asp 130 Ile Gin Lys Thr Ile 135 Lys Lya Thr Ala Arg 140 Arg Glu Gin Leu atg aga g*g gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag etc 480 Hat Arg 145 Glu Glu Ala Glu 150 Gin Lys Arg Leu Lys Thr 155 Vai Leu Glu Leu 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528 Gin Tyr vai Leu Asp 165 Lys Leu Gly Asp Asp 170 Glu Vai Arg Thr Aap 175 Leu aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tet gaa gaa gaa ttg teg 576 Lys Gin Gly Leu ISO Asn Gly Vai Pro Ile 185 Leu Ser Glu Glu Glu Leu 190 Ser ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gea gac cct gaa cgg gac atg age 624 Leu Leu Aap Glu Phe Tyr l»ye Leu Ala ASp Pro Glu Arg Asp Met Ser 120 ΕΡ2325648Β1 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat gct tcc att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Hia Ala Ser lie Hia Leu Trp Asp 210 215 220 ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lya Glu Lys Ser Vai Cya Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tca aat tac ttt gae age 768

Leu Lya Glu Ile Vai Glu Arg Vai Phe Gin Ser Aen Tyr Phe Aap Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg cta tgt gag gaa gaa gag gca gee tca 816

Thr Hia Asn Hia Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca cct aca gtt gaa gac cag gta gct gaa gct gag çct gag cca gca 864

Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat 912

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn 290 295 300 aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg acg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tca ctc cag 1008

Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cot oag gct gcg tct cct tca gta cca gag occ cac tct ttg 1056

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His ser Leu 340 345 350 act ccg gtg gct cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gtc cag 1104

Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin 355 360 365 gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tca 1152

Asp Leu Met Ala Gin Ket Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ctc gat cct gee att gta tct gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala 385 390 395 400 oag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tct gaa tct aga ctt gct caa cct aat caa gtt cct 1296

Pro Pro vai Hia Ser Glu ser Arg Leu Ala Gin Pro Aen Gin Vai Pro 420 425 430 gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag 1344

Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gca tct caa ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca gag 1392

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460 121 ΕΡ2325648Β1 caa cga cea caa aag gaa cca att gae cag att cag gea aca ate tct 1440

Gin Arg Pro Gin lys Glu Pro Ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 465 470 475 480 tta aat aca gae cag act aca gcg tca tca tcc ctt ccg gct gct tct 1488

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta ttc cag gct ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536

Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu Bis Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gea gct cea ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc 1584

Gly lie Asn Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin ser Met Gin Thr Vai Phe 515 520 525 aat atg aat gee cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632

Asn Met Asn Ala Fro vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac cag geo agt tat aac cag age ttt tct agt cag 1680

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560 cct cac caa gta gaa caa aca gae ctt cag caa gaa cag ctt caa aca 1728

Pro His Gin Vai Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 gtg gtt ggc aot tac cat ggt too cag gae cag ccc cac caa gtg act 1776

Vai Vai Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Vai Thr 580 585 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605 agt aag ccc tat tac aat agt cgt ggt gtg tct cgt ggt ggt tcc cgt 1872

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 ggt gct aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttc 1920

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 6S5 agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt gct ccc cgg gae tac tct ggc 2016 3er Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670 tat cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag 2064

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685 agt gga cca cgg gga gee cca cga ggt aat att ttg tgg tgg tga 2109

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn Ile Leu Trp Trp 690 695 700 toctagctee taagtggage ttctgttetg gccttggaag agctgttcca tagtctgcat 2169 gtaggtteca tgttaggaat acatttatca ttaccagact tgttgctagg gattaaatga 2229 122 ΕΡ2325648Β1 aatgctctqrt ttctaaaact tctcttgaac ccaaatttaa ttttttgaat gactttccct 2289 gttactatat aaattgtctt gaaaactaga acatttctcc tcctcagaaa aagtgttttt 2349 ceaactgcaa attatttttc aggtcctaaa acctgctaaa tgtttttagg aagtacttac 2409 tgaaacattt ttgtaagaca tttttggaat gagattgaac atttatataa atttattatt 2489 attcctcttt catttttgaa catgcatatt atattttagg gtcagaaate ctttaatgge 2529 caaataagec atagttacat ttagagaacc atttagaagt gatagaacta aotgaaattt 2589 caatgccttt ggatcattaa tagcgatata aatttcaaat tgtttetgac ttttaaataa 2649 aaeateeaaa atoetaacta acttcctgaa ctatatttaa aaattacagg tttaaggagt 2709 ttctggtttt ttttctctta ccataggaaa actgtttcct gtttggccag gaagfccaace 2769 tgtgtaataa ttagaagtag catttcatat gatctgaagt tctaaatggt tctctgattt 2829 aagggaagtt aaattgaata ggtttcctct agfctattggc cataacafcgt ataaaatgta 2889 tattaaggag gaatacaaag tactttgatt tcaatgctag tagaaactgg ccagoaaaaa 2949 ggtgcatttt atfctttaaat taatggatca cttgggaatt actgacttga agtatcaaag 3009 gatatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc tttctcacct tgtagcatat tctatgaaag 3069 ttgagttgae tggtagctaa aaatctgttt taacagcatg taaaaagtta ttfcfcatetgt 3129 taeaagtcat tatacaattt tgaatgttat gtagtttctt tttaacagtt taggtaaeaa 3189 ggtctgtttt teattctggt gcttttatta attttgatag tatgatgtta ettaetaetg 3249 aaafcgtaagc tagagtgtac actagaatgt aagctccatg agagcaggta ccttgtctgt 3309 ctteactgct gtatctattt ccaacgcctg atgacagtgo ctgacacata gtaggeaote 3369 aataaatact tgttga&tga atgaatgaat gagtactggt ggaatactcc attagctcta 3429 ctcttctttt agctagagaa catgagcaaa tttgegcatg aeaacttcca ggacaggtga 3489 acactgaaga attgaectct fcaaacetaat aatgtggtga eaagctgeec aeatgcttet 3549 tgacttcaga tgaaaatctg cttgaaggca aagcaaataa tatttgaaag aaaaaccaaa 3609 tgceattttt gtcttctagg tcgtggaggg aooccaagac ccaaaagagg gatgaogoaa 3669 atga&cacte agcaagtgaa ttaatctgat tcacaggatt atgtttaaac gccaaaaaca 3729 cactggccag tgtaccataa tatgttacca gaagagttat tatctatttg ttctcccttt 3789 caggaaactt attgtaaagg gactgttttc atcccataaa gacaggacta caattgtcag 3849 ctttatafcta cctggatatg gaaggaaact atttttattc tgcatgttct tcctaagcgt 3909 catcttgagc cttgcacatg atactcagat teetcaccct tgcttaggag taaaacataa 3969 tacactttac agggtgatat ctccatagtt atttgaagtg gcttggaaaa agcaagatta 4029 acttctgaca ttggataaaa atcaacaaat cagccctaga gttattcaaa tggtaattga 4089 caaaaactaa aatatttcec ttcgagaagg agtggaatgt ggtttggcag aacaactgca 4149 tttcacagct tttccggtta aattggagca otaaacgttt agatgcatac caaattatge 4209 123 ΕΡ2325648Β1 atgggccctt aatataaaag gctggctace agctttgaca cagcactatt catcctctgg 4269 ccaaacaact gtggttaaac aacacatgta aattgctttt taacagctga tactataata 4329 agacaaagcc aaaatgcaaa aattgggctt tgattggcac tttttgaaaa atatgcaaca 4389 aatatgggat gtaatctgga tggccgcttc tgtacttaat gtgaagtatt tagatacctt 4449 tttgaacact taacagtttc ttctgacaat gacttttgta aggattggta ctatctatca 4509 ttccttataa tgtacattgt ctgtcactaa tcctcagatc tfcgctgtatfc gteaootaaa 4569 ttggtacagg tactgatgaa aatatctaat ggataatcat aacactcttg gtoacatgtt 4629 tttcctgcag ccfcgaaggtt tttaaaagaa aaagatatca aatgcctgct gctaccaccc 4689 ttttaaattg ctatcttttg aaaageacca gtatgtgttt tagattgatt tccctatttt 4749 agggaaatga cagacagtag tttcagttct gatggtataa gcaaaacaaa taaaacatgt 4809 tta-taaaagt tgtatcttga aacactggtg ttcaacagct agcagettat gtggttcaec 4869 ccatgcattg ttagtgtttc agattttatg gttatctcca geagctgttt ctgtagtact 4929 tgcatttatc 4939

<210> 10 <211> 702 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 10 124 ΕΡ2325648Β1

Het Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lya Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

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Xle Leu Gly Vai lie Asp Lys Lya Leu Arg Aan Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Het Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr Asn 100 105 HO

Asn Leu Glu Pha Ala Lya Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125 125 ΕΡ2325648Β1 61η Asp Ιΐθ 61η Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lya Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu Leu 145 150 155 100

Gin Tyr Vai Leu Asp Lye Leu Gly Asp Aep Glu Vai Arg Thr Aep Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro lie Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Fhe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser lie His Leu Irp Aep 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lye Glu Lys Ser Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu Xle Vai Glu Arg Vai Phe Gin Ser Asn Tyr Pbe Asp Ser 245 250 255

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Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu vai Glu Ser Thr Glu Tyr vai Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser vai Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

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Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe 11« Gin Asp Ser 370 375 380 126 ΕΡ2325648Β1

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp > Met Pro Gin Leu Vai Cys 40S 410 415

Pro Pro Vai His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai Pro 420 425 430

Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly Ile Asn Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Vai Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 565 570 575 val Vai Gly Thr Tyr His Gly ser Gin Asp Gin Pro His Gin vai Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Τγ*1 Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640 127 ΕΡ2325648Β1

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg 645 Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe 660 Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin 675 680 Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg 690 695 <2 10> 11 <2 11> 3306 <2 12> ADN <2 Λ PO \—I Canis familiaris Gly Asn Xle leu Trp Trp 700

Pro Ser Phe Ser Αβη Thr Pro Αβη 650 655

Ser Ala Pro Arg Aep Tyr Sec Gly 665 670

Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 685 <22 0>

<221> CDS <222> (1) .. (2040) <223> <4 0 0> 11 128 ΕΡ2325648Β1 atg ceg teg gee ace age etc age gga age ggo age aag teg teg ggc 48 Met pro 1 S«r Ala Thr 5 Ser Leu Ser Gly Ser 10 Gly Ser Lys Ser Ser 15 Gly ceg eeg coe ecg teg ggt tcc tcc ggg age gag gcg gcg gcg gcg geg 96 Pro Pro Pro Pro 20 ser Gly Ser Ser Gly Ser 25 Glu Ala Ala Ala 30 Ala Ala ggg gcg gcg GGG gcg gcg GGG gee ggg gcg gct gcg ccc gee tcc cag 144 Gly Ala Ala 35 Gly Ala Ala Gly Ala 40 Gly Ala Ala Ala Pro 45 Ala Ser Gin cac cee ace GGC acc ggc gct gtc eag aec gag gee atg aag cag 192 Hia Pro 50 Ala Thr Gly Thr Gly 55 Ala Val Gin Thr Glu 60 Ala Met Lys Gin ate etc GGG gtg ate gac aag aaa ctc cgg aac ctg gag aag aaa aag 240 ile Leu 65 Gly vai Ile Aap 70 Lys Lya Leu Arg Aan 75 Leu Glu Lya Lya Lya 80 ggc aag ctt gat gat tac cag gaa ega atg aae aaa Ggg gaa agg ctt 288 Gly Lya Leu Asp Aap 85 Tyr Gin Glu Arg Met 90 Aan Lya Gly Glu Arg 95 Leu aat caa gat cag ctg gat gee gta tet aag tac cag gaa gtc aca aat 336 Aan Gin Asp Gin 100 Leu Aap Ala Val Ser Lya 105 Tyr Gin Glu val 110 Thr Aan aae ttg gag ttt gea aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gea tta agt 384 Asn Leu Glu 115 Phe Ala Lya Glu Leu 120 Gin Arg Ser Phe Met 125 Ala Leu Ser caa gat att cag aaa aca ata aag aag act gea cgt cgg gag cag ctt 432 Gin Aap 130 Ile Gin Lya Thr Ile 135 Lya Lya Thr Ala Arg 140 Arg Glu Gin Leu atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag ctc 480 Hat Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lya Arg Leu Lya Thr Val Leu Glu Leu 129 ΕΡ2325648Β1 145 150 155 1«0 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528

Gin Tyr val Leu Asp Lys Leu Gly Aap Aap Glu Vai Arg Thr Asp Leu 165 170 175 aag caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg tcg 576

Lys Gin Gly Leu Aan Gly Vai Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190 ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa cgg gac atg age 624

Leu Leu Aap Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Aap Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205 ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat gct tcc att cac ctg tgg gac 672

Leu Arg Leu Aan Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Txp Asp 210 215 220 ttg. ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720

Leu Leu Glu Gly Lye Glu Lys Ser Vai Cya Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240 cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tea aat tac ttt gac age 768

Leu Lys Glu Ile Vai Glu Arg Vai Phe Glu Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255 act cac aac cac cag aat ggg cta tgt gag gaa gaa gag gca gee tea 816

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cya Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270 gca cct aca gtt gaa gac cag gta gct gaa gct gag cct gag cca gca Qea

Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285 gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat gta aat 912

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lya Glu Gin 305 310 315 320 gta gat gag tgg acg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tea ate cag 1008

Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu Gin 325 330 335 cag caa cct cag gct gcg tct cct tea gta cca gag ccc cac tct ttg 1056

Thr pro vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu vai Arg Arg Gin Arg vai Gin 355 360 365 gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tea 1152

Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca etc gat cct gee att gta tct gca 1200

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Zle Vai Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gao atg ccc cag ctg gtt tge 1248

Gin Pro Hat Asn Pro Thr Gin Asn Hat Asp Met Pro Gin Leu vai Cys 405 410 415 130 ΕΡ2325648Β1 GCt cca gtt cat tet gaa tet aga ctt gct caa cct aat caa gtt cct 1296 Pro Pro vai His 420 Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin 425 Pro Asn Gin Vai Pro 430 gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag 1344 Vai Gin Pro 435 Glu Ala Thr Gin Vai 440 Pro teu Vai Ser Ser Thr Ser Glu 445 999 tat aca gea tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat gct aca gag 1392 Gly Tyr 450 Thr Ala Ser Gin Pro 455 teu Tyr Gin Pro Ser Bis Ala Thr Glu 460 caa cga cca caa aag gaa cca att gac cag att cag gea aca ate tet 1440 Gin 465 Arg Pro Gin Lys Glu 470 Pro lie Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 475 480 tta aat aca gac cag act aca gcg tea toa tcc ctt ccg gct gct tet 1488 Leu Asn Thr Asp Gin 485 Thr Thr Ala Ser Ser Ser 490 teu Pro Ala Ala Ser 495 cag cct cag gta ttc cag gct 999 aca age aaa cca tta cat age agt 1536 Gin Pro Gin Vai 500 Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys 505 Pro Leu His Ser ser 510 99» ate aat gta aat gea gct cca ttc caa tcc atg caa acg gtg ttc 1584 Gly Ile Asn 515 vai Asn Ala Ala Pro 520 Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe 525 aat atg aat gac cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632 Asn Met 530 Asn Ala Pro vai Pro 535 Pro vai Asn Glu Pro Gly Thr Leu Lys 540 caa Caa aat cag tac cag gee agt tat aac cag age ttt tet agt cag 1680 Gin 545 Gin Asn Gin Tyr Gin 550 Ala Ser Tyr Asn Gin 555 Ser Phe Ser Ser Gin 560 cct caa caa gta gaa caa aca gac ctt cag caa gaa cag ctt Caa aca 1728 Pro Hi8 Gin vai Glu 565 Gin Thr Asp teu Gin Gin 570 Glu Gin teu Gin Thr 575 gtg gtt ggc act tac cat ggt tcc cag gac cag ccc cac ca» gtg act 1776 vai Vai Gly Thr 580 Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin 585 Pro His Gin val Thr 590 ggt aac cat cag cag cct ccc cag cag aac act gga ttt cca cgt age 1824 Gly Asn Bis 595 Gin Gin Pro Pro Gin 600 Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 605 agt cag ccc tat tac aat agt egt ggt gtg tet cgt ggt ggt tcc cgt 1872 Ser Gin 610 Pro Tyr Tyr Asn Ser 615 Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg 620 ggt gct aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga ttc 1920 Gly 625 Ala Arg Gly Leu Met 630 Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 635 640 aga gga 99» tat gat ggt tac ogc cct tea ttc tet aac act cca aac 1968 Arg Gly Gly Tyr Asp 645 Gly Tyr Arg pro ser Phe 650 Ser Asn Thr Pro λβη 655 agt ggt tat aca cag tet cag ttc agt gct ccc cgg gac tac tet ggc 2016 Ser Gly Tyr Thr 660 Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 665 670 131 ΕΡ2325648Β1 tat cag cgg gga tgc cgc aaa tga acactcagca agtgaattaa tctgattcac 2070 Tyr Gin Arg Gly Cys Arg Lys 675 aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact çgccagtgta ccataatatg ttaccagaag 2130 agttattatc tatttgttct cteotttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc 2190 cataaagaca ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt 2250 ttattctgca tgttcttcct aagcgtcatc ttgagecttg eacatgatae teagattcct 2310 cacccttgct taggagtaaa acataataca Otttacaggg tgatatctoc atagttattt 2370 gaagtggctt ggaaaaagca agattaactt etgacattgg ataaaaatca acaaatcagc 2430 cctagagtta ttcaaatggt aattgacaaa aaetaaaata ttteecttcg agaaggagtg 2490 gaatgtggtt tggcagaaca actgcatttc acagcttttc cggttaaatt ggagcactaa 2550 acgtttagat gcataeeaaà ttatgeatgg gcccttaata taaaaggctg gctaccagct 2610 ttgacacagc aetattcatc ctctggccaa acaactgtgg ttaaacaaca catgtaaatt 2670 gctttttaac agctgataet ataataagac aaagccaaaa tgcaaaaatt gggctttgat 2730 tggcactttt tgaaaaatat gcaacaaata tgggatgtaa tctggatggc cgcttctgta 2790 cttaafcgtga agtatttaga tacctttttg aacaettaac agtttcttct gacaafcgact 2850 tttgtaagga ttggtactat ctatcattcc ttataatgta cattgtctgt cactaatcct 2910 cagatottgc tgtattgtca cctaaattgg taoaggtact gatgaaaata tctaatggat 2970 aatcataaca otcttggtca catgtttttc ctgCagcctg aaggttttta aaagaaaaag 3030 atafceaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat cttttgaaaa gcaceagtat 3090 gtgttttaga ttgatttccc tattttaggg aaatgacaga cagtagtttc agfctctgatg 3150 gtataagcaa aaoaaataaa acatgtttat aaaagttgta tcttgaaaca ctggtgtt c a 3210 acagctagca gcttatgtgg ttcacccoat gcattgttag tgtttoagat tttatggtta 3270 tctccageag ctgtttctgt agtacttgca tttatc 3306

<210> 12 <211> 679 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 12

Met Pro Ser Ala Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Ly« Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45 132 ΕΡ2325648Β1

His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin Thr Glu Ala Met Lys Gin 50 55 60

Ile Leu Gly Vai Zle Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys Lys 65 70 75 80

Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 90 95

Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lya Tyr Gin Glu Vai Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser 115 120 125

Gin Asp Ile Gin Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu Leu 145 150 155 160

Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Vai Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu Ile vai Glu Arg Vai Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr vai Glu Asp Gin vai Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn 290 295 300 133 ΕΡ2325648Β1

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Sar San Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320 val Asp Glu Trp Thr vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Aan Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pr© Ser Val Fro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Val Ala Gin Ala Asp Pro Leu val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365

Asp Leu Hat Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp Ser 370 375 380

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Gin Pro Het Asn Pro Thr Gin Asn Het Asp Het Prõ Gin Leu Val Cys 405 410 415

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Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510

Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Het Gin Thr Val Phe 515 520 525

Asn Het Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Val Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr 134 ΕΡ2325648Β1 565 570 575

Vai Vai Gly The Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro Hie Gin Vai Thr 580 585 590

Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 630 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 665 670

Tyr Gin Arg Gly Cys Arg Lye 675 <210> 13 <211> 2281 <212> ADN <213> Canis familiaris <220> <221> CDS <222> (1) .. (2154) <223> <400> 13 135 ΕΡ2325648Β1 atg ccg teg gee acc age ctc age gga age ggc age aag teg teg gge 48 Met 1 Pro Ser Ma Thr Ser Leu Ser Gly Ser Gly 5 .10 Ser Lys Ser Ser 15 Gly ccg ccg ccc ccg teg ggt tcc tcc ggg age gag gcg gcg gcg gcg gcg 96 Pro Pro Pro Pro 20 Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 23 Ala Ala Ma 30 Ma Ma 999 geg gcg 999 gcg gcg ggg gee ggg geg gct geg eee gee tcc cag 144 Sly Ma Ma 35 Gly Ma Ma Gly Ma Gly Ma Ala 40 Ma Pro 45 Ala Ser Gin cae ccc geg acc ggc acc ggc gct gtc cag acc gag gee atg aag cag 192 His Pro 50 Ma Thr Gly Thr Gly Ma Vai Gin Thr 55 Glu 60 Ma Met Lys Gin ate ctc 999 gtg ate gac aag aaa ctc cgg aac ctg gag aag aaa aag 240 Ile 65 Leu Gly Vai Xle Aep Lys l>ya Leu Arg Asn 70 75 Leu Glu Lys Lys Lys 80 gge aag ctt gat gat tac cag gaa cga atg aac aaa 999 gaa agg ett 288 Gly Lys Leu ASp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Aen 85 90 Lys Gly Glu Arg 95 Leu 136 ΕΡ2325648Β1 aat caa gat cag ctg gat gcc gta tct aag tac cag gaa gtc aca aat 336 Asn Gin Asp Gin 100 Leu Asp Ala Val Ser Lys Tyr Gin Glu Val 105 110 Thr Asn aac ttg gag ttt gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt 384 Aan Leu Glu 115 Phe Ala Lys Glu Leu 120 Gin Arg Ser Phe Met Ala 125 Leu Ser caa gat att cag aaa aaa ata aag aag act gaa cgt cgg gag cag ctt 432 Gin Asp 130 ile Gin Lys Thr Ile Lys 135 Lys Thr Ala Arg Arg Glu 140 Gin Leu atg aga gag gaa gcg gaa caa aaa cgt tta aaa act gta ctt gag ctc 480 Met 145 Arg Glu Glu Ala Glu 150 Gin Lys Arg Leu Lys Thr Val Leu 155 Glu Leu 160 cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg 528 Gin Tyr Val Leu Asp 165 Lys Leu Gly Asp Asp Glu Val Arg Thr 170 Asp Leu 175 »M caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gaa gaa ttg teg 576 Lys Gin Gly Leu 180 Asn Gly Val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu 185 190 Leu Ser ttg ttg gat gaa ttc tac aaa tta gca gac cct gaa cgg gac atg age 624 Leu Leu Asp 195 Glu Phe Tyr Lys Leu 200 Ala Asp Pro Glu Arg Asp 205 Met Ser ttg agg ttg aat gag cag tat gaa cat gct tcc att cac ctg tgg gac 672 Leu Atg 210 Leu Asn Glu Gin Tyr Glu 215 Kis Ala Ser ile His Leu 220 Trp Asp ttg ctg gaa gga aag gaa aag tct gta tgt gga aca acc tat aaa gca 720 Leu 225 Leu Glu Gly Lys Glu 230 Lys Ser val Cys Gly Thr Thr Tyr 235 Lys Ala 240 cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tca aat tac ttt gac age 768 Leu Lye Glu zie Val 245 Glu Arg Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 250 Asp Ser 255 aet cac aac cac cag aat ggg cta tgt gag gaa gaa gag gca gcc tca 816 Thr Hia Asn ais 260 Gin Aan Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala 263 270 Ala Ser gca cct aca gtt gaa gac cag gta gct gaa gct gag cct gag cca gca 864 Ala Pro Thr 275 Val Glu Asp Gin val 280 Ala Glu Ala Glu Pro Glu 285 Pro Ala gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tca aca gag tat gta aat 912 Glu Glu 290 Tyr Thr Glu Gin Ser Glu 295 Val Glu Ser Thr Glu Tyr 300 Val Asn aga caa ttt atg gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag 960 Atg 305 Gin Phe Met Ala Glu 310 Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys 315 Glu Gin 320 gta gat gag tgg a cg gtc gaa aca gtg gag gtg gtg aat tca ctc cag 1008 vai ASP Glu Trp Thr 325 val Glu Thr val Glu val val Asn ser 330 Leu Gin 335 cag caa cct cag gct gcg tct cct tca gta cca gag ccc cac tct* ttg 1056 Gin Gin Pro Gin 340 Ala Ala Ser Prc Ser Val Pro Glu Pro His 345 350 Ser Leu 137 ΕΡ2325648Β1 act ccg gtg got cag gea gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta cag 1104 Thr Pro val Ala Gin Ala Asp Pro Leu Val Arg Arg Gin Arg Val Gin 355 360 365 gac ctt atg gcg cag atg cag ggg ccc tat aát ttc ata cag gat tea 1152 Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe ile Gin Asp Ser 370 375 380 atg ctg gat ttt gaa aac cag aca ctc gat cct gee att gta tet gea 1200 Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala ile val Ser Ala 385 390 395 400 cag cct atg aat ccg aca caa aac atg gac atg ccc cag ctg gtt tgc 1248 Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Val Cys 405 410 415 cct cca gtt cat tet gaa tet aga ctt gct caa cct aat caa gtt cct 1296 Pro Pro val His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin val Pro 420 425 430 gta caa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tea tcc aca agt gag 1344 Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Val Pro Leu Val Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445 ggg tat aca gea tet caa ccc ttg tac cag cct tet cat gct aca gag 1392 Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Sor His Ala Thr Glu 450 455 460 caa cga cca caa aeg gaa cca att gac cag att cag gea aca ate tet 1440 Gin Arg Pro Gin Lya Glu Pro ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 465 470 475 460 tta aat aca gac cag act aca gcg tea tea tcc ctt ccg gct gct tet 1488 Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495 cag cct cag gta tto cag gct ggg aca age aaa cca tta cat age agt 1536 Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser tys Pro Leu His Ser Ser 500 505 510 gga ate aat gta aat gaa gct cca ttc caa tcc atg caa aeg gtg ttc 1584 Gly Ile Asn Val Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe 515 520 525 aat atg aat geo cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act ttg aaa 1632 Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Val Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540 caa caa aat cag tac 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Ser Gin «10 Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg 615 Gly val Ser Arg Gly 620 Gly Ser Arg ggt gct aga ggc tta atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttc 1920 Gly «25 Ala Arg Gly Leu Met 630 Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala 635 Asn Gly Phe 640 aga gga gga tat gat ggt tac cgc cct tca ttc tct aac act cca aac 1968 Arg Gly Gly Tyr Aap 645 Gly Tyr Arg Pro Ser 650 Phe Ser Asn Thr Pro Asn 655 agt ggt tat aca cag tct cag ttc agt gct ccc cgg gac tac tct ggc 2016 Ser Gly Tyr Thr 660 Gin Ser Gin Phe Ser 665 Ala Pro Arg Asp Tyr 670 Ser Gly tat cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag 2064 Tyr Gin Arg 675 Asp Gly Tyr Gin Gin 660 Asn Phe Lys Arg Gly 685 Ser Gly Gin agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga ccc 2112 Ser Gly 690 Pro Arg Gly Ala Pro Arg 695 Gly Arg Gly Gly Pro 700 Pro Arg Pro aac Asn 705 aga Arg ggg Gly atg Met ccg Pro caa Gin 710 atg aac Met Asn act Thr cag Gin caa gtg aat Gin Val Asn 715 taa 2154 tctgatteac aggattatgt ttaaacgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg 2214 ttaccagaag agttattatc tatttggact grttttcatcc cataaagaca ggactaoaat 2274 tgtcagc 2281

<210> 14 <211> 717 <212> PRT <213> Canis familiaris <4 0 0> 14 139 ΕΡ2325648Β1

Met Pro Ser Ala The Ser Leu Ser Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin 35 40 45

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Gly LYS Leu Aap Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu Arg Leu 85 30 95 140 ΕΡ2325648Β1

Asrt Gin Αβρ Gin Leu Asp Ala Vai Ser lys Tyr Gin Glu Vai Thr Asn 100 105 110

Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phé Met Ala Lãu Ser 115 120 125

Gin Asp Ile Gin Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu 130 135 140

Hat Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Axg Leu Lys Thr vai Leu Glu Leu 145 150 155 U0

Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu Vai Arg Thr Asp Leu 165 170 175

Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser 180 185 190

Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser 195 200 205

Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Xle His Leu Trp Asp 210 215 220

Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala 225 230 235 240

Leu Lys Glu Ile Vai Glu Arg Vai Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser 245 250 255

Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser 260 265 270

Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala 275 280 285

Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vel Glu Ser Thr Glu Tyr Vai Asn 290 295 300

Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin 305 310 315 320

Vai Asp Glu Txp Thr Vai Glu Thr vai Glu Vai Vai Aan Ser Leu Gin 325 330 335

Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser Leu 340 345 350

Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg Sln Arg Vai Qln 141 ΕΡ2325648Β1 355 360 365 Αβρ leu Met Ala Gin Met Gin Gly íto lyr Αβη Phe Ile Gin Asp Ser 370 375 380

Met Leu Aap Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala ile Vai Ser Ala 385 390 395 400

Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Agn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cye 405 410 415

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Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu vai Ser Ser Thr Ser Glu 435 440 445

Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu 450 455 460

Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro lie Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser 465 470 475 480

Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser 485 490 495

Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu Bis Ser Ser 500 505 510

Gly Ile Asn Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe 515 520 525

Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys 530 535 540

Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin 545 550 555 560

Pro His Gin Vai Glu Gin Thr Asp Leu Gin Gin Glu Gin leu Gin Thr 565 570 575 val Vai Gly Thr Tyr Bis Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Vai Thr 580 585 590

Gly Asn Bis Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe pro Arg Ser 595 600 605

Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Val Ser Arg Gly Gly Ser Arg 610 615 620 142 ΕΡ2325648Β1

Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe 625 €30 635 640

Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn 645 650 655

Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly 660 €65 670

Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin 675 680 685

Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro 690 695 700

Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Vai Asn 705 710 715 <210> 15 <211> 3386 <212> ADN <213> Bos taurus <22 0> <221> CDS <222> <223> (82) .. (220 <400> 15 143 ΕΡ2325648Β1 cgcgtctcgc eccgtccacc gattgactcg ccgctcttgt ccttcotccc gctctttctt 60 ctctcccctt acggtttcaa g atg Met 1 cct Pro teg Ser gee Ala acc Thr 5 age Ser cae His age Ser gga Gly age Ser 10 111 ggc age aag teg tec gga ceg cea ceg eeg teg ggt tec tcc ggg aat 159 Gly Ser Lys Ser Ser 15 Gly Pro Pro Pro Pro 20 Ser Gly Ser Ser Gly 25 Asn gag gcg 999 gee 999 gee gee gog ceg get tcc caa cae ccc atg acc 207 Glu Ala Gly Ala 30 Gly Ala Ala Ala Pro 35 Ala Ser Gin HiS Pro 40 Met Thr ggc acc 999 get gtc cag .acc gag gee atg aag cag att etc 999 gtg 255 Gly Thr Gly 45 Ala Vai Gin Thr Glu 50 Ala Met Lys Gin Ile 55 Leu Gly Vai ata gac aag aaa ett C99 aac ctg gag aag aaa aag ggc aag ett gat 303 Ile Aap 60 Lys Lye Leu Arg Agn 65 Leu Glu Lys Lys Lys 70 Gly Lys Leu Asp gat tat cag gaa ega atg aac aaa 999 gaa agg ett aat caa gat cag 351 Aap 75 Tyr Gin Glu Arg Met 80 Aan Lys Gly Glu Arg 85 Leu Asn Gin Asp Gin 90 ctg gat gee gtg tet aag tac cag gaa gtc aca aat aac ttg gag ttt 399 Leu Aap Ala Vai Ser Lya Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe 144 ΕΡ2325648Β1 95 100 105 gca aaa gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta age caa gat att cag 447 Ala Lye Glu Leu 110 Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 115 Ser Gin Asp Ile Gin 120 aaa aca ata aag aag aca gca cgt cgg gag cag ctt atg aga gag gaa 495 Lys Thr ile 125 Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 130 Leu Met.Arg Glu Glu 135 gct gaa cag aaa cgt tta aaa aca gta ctt gag ctç cag tat gtt ttg 543 Ala Glu 140 Gin Lys Arg Leu Lys 145 Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu 150 gac aaa cta gga gat gat gaa gtg aga act gac ctg aag caa ggt ttg 591 Asp 155 Lys Leu Gly Asp Asp 160 Glu Val Arg Thr Asp 165 Leu Lys Gin Gly Leu 170 aat gga gtg cca ata ttg tct gaa gag gag ttg teg ttg tta gat gag 639 Asn Gly Vai Pro Ile Leu 175 Ser Glu Glu Glu Leu 180 Ser Leu Leu Asp Glu 185 ttc tac aaa tta gca gac cct gaa cga gac atg age ttg agg ttg aat 687 Phe Tyr Lye Leu 190 Ala Asp Pro Glu Arg Asp Met 195 Ser Leu Arg Leu Asn 200 gag cag tat gaa cat gcc tcc att cao ctg tgg gac ttg ctg gaa gga 735 Glu Gin Tyr 205 Glu ais Ala Ser ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly 210 215 aag gaa aaa cct gta tgt gga aca act tat aaa gct cta aag gaa att 783 Lys Glu 220 Lye Peo Val Cye Gly 225 Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu ile 230 gtt gag cgt gtt ttc cag tea aac tac ttt gac age acc cac aac cac 831 Vai 235 Glu Arg Vai phe Gin 240 Ser Asn Tyr phe Asp 245 Ser Thr His Asn His 250 cag aat ggt ctg hgh gag gaa gag gag gca gcc tea gca cct aaa gtt 879 Gin Asn Gly Leu Cys Glu 255 Glu Glu Glu Ala Ala 260 Ser Ala Pro Thr Val 265 gaa gac cag gca gct gaa gct gaa cct gag cca gtg gaa gaa tat act 927 Glu Aap Gin Ala 270 Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro 275 Val Glu Glu Tyr Thr 280 gaa caa aat gag gtt gaa tea aaa gag tat gta aat aga caa ttt atg 975 Glu Gin Asn 205 Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr val 290 Asn Arg Gin Phe «et 295 gca gaa aca cag ttc age agt ggt gaa aag gag cag gta gat gat tgg 1023 Ala Glu 300 Thr Gin Phe ser Ser 305 Gly Glu Lys Glu Gin val Asp Asp Trp 310 aca gtt gaa aca gtt gag gtg gta aat tea ctc cag cag caa cct cag 1071 Thr 315 Vai Glu Thr Val Glu 320 Val Val Asn Ser Leu 325 Gin Gin Gin Pro Gin 330 gct gca tct cot tea gta cca gaa ccc cac tct ttg acc cca gtg gct 1119 Ala Ala Ser Pro Ser val 335 Pro Glu Pro His Ser 340 Leu Thr Pro Val Ala 345 caa gcc gat ccc ctc gtg aga aga cag cga gta cag gac ctt atg gca 1167 Gin Ala Asp Pro 350 Leu Val Arg Arg Gin Arg Val 355 Gin Asp Leu Met Ala 360 145 ΕΡ2325648Β1 caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat tca atg ttg gat ttt 1215 Gin Hat GlA Gly Pro Tyr ASn Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe 385 370 375 gaa aac cag aca ctt gat cce gcc att gta tct gca cag ccg atg aat 1263 Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala ile vai Ser Ala Gin Pro Met Asn 380 385 390 oca gca cag aac atg gac ata CCC cag ctg gtt tge cct CCA gtt cat 1311 pro Ala Gin Aen Met Asp Ile Pro Gin Leu vai Cya Pro Pro Val His 395 400 405 410 tct gaa tct aga ctt gct caa cct aat caa gtt tat gta cag cca gaa 1359 ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin vai Ser Vai Gin Pro Glu 415 420 425 gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt gag gga tat aca gca 1407 Ala Thr Gin Vai Pro Leu vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala 430 435 440 tot caa ccc ttg tac caa cct tct cat gct act gac caa oga cca caa 1455 Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin 445 450 455 aag gaa ccg att gat cag att cag gcg acg ate tct tta aat aca gac 1503 Lye Glu Pro Ile Asp Gin Ile Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp 480 465 470 cag act aca gca tca tca tcc ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg 1551 Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin val 475 480 485 490 tto cag gct ggg aca age aaa cct tta cat age agt gga ate aat gta 1599 Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lye Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn val 495 500 505 aat gca gct cca ttc caa toe atg caa acg gta ttc aat atg aat gcc 1647 Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Ttar Val Phe Asn Met Asn Ala 510 515 520 cca gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta aaa cag caa aat cag 1695 Pro vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lye Gin Gin Asn Gin 525 530 535 tac oag gcc agt tac aac cag age ttt tcc agt cag cct c&c caa gta 1743 Ty r Gin Ala Ser Tyr Aen Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin val 340 545 550 gaa caa aca gag ctt cag caa gaa cag Ctt caa aca gtg gtt ggc act 1791 Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin Thr Val Val Gly Thr 555 560 565 570 tat cat ggt tct cag gac cag COO cat caa gtg act ggt aac cac cag 1839 ryr Hie Gly Ser Gin Asp Gin Pro Hie Gin Val Thr Gly Asn HiS Gin 575 580 585 cag cct cct cag cag aac act gga ttt cca cgt age aat caa CCC tat 1887 Gin Pro Pro Gin Gin Aen Thr Gly Phe Pro Arg ser Asn Gin Pro Tyr 590 595 600 * tac aac agt cgt ggt gtg tct cgt gga ggt tcc cgt ggt gct aga ggc 1935 Tyt Aen Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly 605 610 615 146 ΕΡ2325648Β1 ttg atg aat gga tac aga gga cct gct aat gga ttc aga gga gga tat 1983

Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Aan Gly Phe Arg Gly Gly Tyr 620 625 630 gat ggt tac cgc cct tca ttc tct act aac act oca aac agt ggt tat 2031

Aap Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Thr Aan Thr Pro Aen Ser Gly Tyr 635 640 $45 650 aca caa tct caa ttc agt gct ccc cgg gac tac tct ggc tat cag cgg 2079

Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Aap Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 655 660 665 gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca 2127

Aap Gly Tyr Gin Gin Aan Phe lya Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 670 675 680 cgg gga gee cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga cee aac aga ggg 2175

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Aan Arg Gly 685 690 695 atg ecg caa atg aae act cag caa gtg aat taa tctgattcac aggattatgt 2228

Met Pro Gin Met Aan Thr Sln Gin Vai Aan 700 705 ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta coataatatg ttaccagaag agttattatc 2288 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatcc cataaagaca 2348 ggactacaat tgtcagcttt atattacctg gatatggaag gaaactattt ttactctgca 2408 tgttctgtcc taagcgtcat cttgagcctt gcacatgata ctcagattcc tcacccttgc 2468 ttaggagtaa aacataatat actttaatgg ggtgatatct ccatagttat ttgaagtggc 2528 ttggataaag caagactgac ttctgacatt ggataaaatc tacaaatcag ccctagagtc 2588 attcagtggt aactgacaaa actaaaatat ttcccttgaa aggaagatgg aaggagtgga 2648 gtgtggtttg gcagaacaac tgcatttcac agcttttcca cttaaattgg agcactgaac 2708 atttagatgc ataccgaatt atgcatgggc ectaatcaca cagacaaggc tggtgccagc 2768 cttaggcttg acacggcagt gttcaccctc tggccagacg aotgtggtte aagacacatg 2828 taaattgctt tttaacagct gatactgtat aagacaaagc caaaatgcaa aattaggctt 2888 tgattggcac ttttcgaaaa atatgcaaca attaagggat ataatctgga tggccgcttc 2948 tgtacttaat gtgaaatatt tagatacctt tcaaacactt aacagtttct ttgacaatga 3008 gttttgtaag gattggtagt aaatataatt ccttatgacg tacattgtct gtcactaatc 3068 cttggatctt çctgtattçt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa tctaatggat 3128 aatcataaca ctcttggtta catgtttttc ctgcagcctg aaagttttta taagaaaaag 3188 acatcaaatg cctgctgctg ccaccctttt aaattgctat cttttgaaaa gcaccagtat 3248 gtgttttaga tbgatttccc tattttaggg aaatgacagt cagtagtttc acttctgatg 3308 gtataagcaa acaaat&aaa catgtttata aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3368 aaaaaaaaaa aaaaaaaa 3386 <210> 16 <211> 708 147 ΕΡ2325648Β1 <212> PRT <213> Bos taurus <4 Ο 0> 16 148 ΕΡ2325648Β1

Met pro Sec Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys ser Ser Gly 15 10 15

Pro Fro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Asn Glu Ala Gly Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Met Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin Ile Leu Gly Vai Xle Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys Thr Ile Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Glu val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pro Ile Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240 149 ΕΡ2325648Β1

Ser Asn Tyr Phe Asp 245

Glu Glu Glu Ala Ala 260

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 250 255

Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Ala Ala Glu 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Vai Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Asn Glu vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Net Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Asp Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Phe lie Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp 3S5 390 395 400 lie Pro Gin Leu Vai Cys Pro Pro Vai His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Pro Asn Gin vai Ser vai Gin pro Glu Ala Thr Gin vai Pro Leu 420 425 430

Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Asp Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Ile Asp Gin 450 455 460

He Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495 150 ΕΡ2325648Β1

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Vai Phe Aen Met Aen Ala Pro Vai Pro Pro Vai Aen 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Aen 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Bie Gin Vai Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Glu Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro Hie Gin Vai Thr Gly Asn Hie Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 580

Thr Gly Phe Pro Arg ser Asn Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai 585 600 605

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Thr Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser 645 650 655

Ala Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn 660 665 670

Phe Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly 675 680 685

Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr 680 685 700

Gin Gin Vai Asn 705

<210> 17 <211> 3150 <212> ADN <213> Equus caballus 151 ΕΡ2325648Β1 ΕΡ2325648Β1 <22 0> <221> <222> <223> <4 Ο 0>

CDS (1) .. (1917) 17 152 ΕΡ2325648Β1 atg gag ggc aag ctc gat gat tac caa gag cga atg aac aaa gga gaa 49 Met 1 Glu Gly Lya Leu 5 Asp Asp Tyr Gin Glu 10 Arg Met Aen Lye Gly Glu 15 agg ctt aat cag gat cag ctg gat gct gtg tet aag tac cag gaa gtc 96 Arg Leu Aan Gin 20 Aap Gin Leu Asp Ala 25 Val Ser Lys Tyr Gin 30 Glu Val aca aat aac ttg gag ttt geg aaa gaa ttg cag agg agt ttc atg gcg 144 Thr Aen Aan 35 Leu Glu Phe Ala Lya 40 Glu Leu Gin Arg Ser Phe 45 Met Ala ttg agt cag gat att cag aaa aca ata aag aag acg gea cgt cgg gag 192 Leu Ser 50 Gin Asp Xle Gin Lye 55 Thr Xle Lye Lys Thr Ala Arg 60 Arg Glu cag ctt atg aga gaa gaa gct gaa cag aaa cgt tta aaa act gta ctt 240 Gin 65 Leu Met Arg Glu Glu 70 Ala Glu Gin Lye Arg Leu Lye Thr 75 Val Leu 80 gag ctg cag tat gtt ttg gac aaa ttg gga gat gaa gaa gtg cga act 288 Glu Leu Gin Tyr Val 85 Leu Aap Lye Leu Gly 90 Asp Glu Glu Val Arg Thr 95 gac ctg aaa caa ggt ttg aat gga gtg cca ata ctc tet gaa gaa gag 336 Asp Leu Lye Gin 100 Gly Leu Aan Gly val 105 Pro Xle X^eu Ser Glu 110 Glu Glu ttg tcg ctg ttg gat gag ttc tac tta gea gac cct gta cgg gac 384 Leu Ser Leu 115 Leu Asp Glu Phe Tyr 120 Lys Leu Ala Asp Pro val 125 Arg Asp atg age ttg agg ttg aat gag cag tat gag cat gee tcc att cac ctg 432 Met Ser 130 Leu Arg Leu Asn Glu 135 Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile 140 His Leu tgg gac ttg ctg gaa ggg aag gaa aaa tet gtc tgt gga aca acc tat 480 Trp 145 Asp Leu Leu Glu Gly 150 Lys Glu Lye ser Val Cye Gly Thr 155 Thr Tyr 160 aaa gct ctg agg gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag tcc aac tac ttt 528 Lye Ala Leu Arg Glu 165 Xle Val Glu Arg val 170 Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 175 gac age acc cac aac cac cag aat ggg ctc tgt gag gag gaa gag gct 576 Asp Ser Thr His ISO Aen His Gin Aen Gly 185 Leu Cys Glu Glu Glu 190 Glu Ala acc tea gct cca aca gct gaa gac cag gga gct gaa gct gaa cct gag 624 Thr ser Ala 195 Fro Thr Ala Glu Αβρ 200 Gin Gly Ala Glu Ala Glu 205 Pro Glu cca gea gaa gaa tac act gaa caa agt gaa gtt gaa tea aca gag tat 672 Pro Ala 210 Glu Glu Tyr Thr Glu 215 Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr 220 Glu Tyr gta aat aga cag ttt atg gea gaa gcg cag ttc agt ggt gag aag gag 720 vai 225 Aan Arg Gin Pbe Met 230 Ala Glu Ala Gin Phe Ser Gly Glu 235 Lys Glu 240 cag gtg gat gag tgg aca gto gag aog gtc gag gtg gta aat tea ctc 768 Gin Val Asp Glu Trp Thr val Glu Thr val Glu Val val Asn ser Leu 153 ΕΡ2325648Β1 245 250 255 ca? cag caa cct cag gct gca tct cct toa gta ccg gag ccc cac tct 816

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Gin Pro tila Ser 260 265 270 ttg aot cca gtg gct cag gca gat ccc ctt gtg aga aga cag cga gta 864

Leu Thr Pro vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu vai Arg Arg Gin Arg vai 275 230 285 cag gac ctt atg gcg caa atg cag ggg ccc tat aat ttc ata cag gat 912

Gin Asp Leu Met Ala Gin Mat Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp 290 295 300 tca atg ctg gat ttt gaa aae cag aca ctt gat cct gcc att gta tct 960

Ser Met Leu Asp Phe Glu Aan Gin Thr Leu Asp Pro Ala Xle Vai Ser 305 310 315 320 gca cag cet atg aat cca gca cag aat atg gac atg ccc cag ctg gtt 1008

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin leu Vai 325 330 335 tgo cot ooa gtt cat gct gaa tct aga ctt gct caa cct aat caa gtt 1056

Cys Pro Pro Vai His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai 340 345 350 cct gta «aa cca gaa gct aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca agt 1104

Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser 355 360 365 gag ggg tat aca gca tct cag ccc ttg tac cag cct tct cat gct aca 1152

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr 370 375 380 gag caa cga ccg caa aag gaa ccg act gac cag ate cag gca aca ate 1200

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Αβρ Gin tle Gin Ala Thr Ile 385 390 395 400 tct tta aat aca gac cag aot aca gca tca tca tcc ctt cct gct gct 1248

Ser Leu Aan Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 410 415 tct cag cct cag gtg ttc cag gct ggg aca age aaa cct tta cac age 1296

Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Prc Leu His Ser 420 425 430 agt ggg ate aat gta aat gca gcg cca ttc cag tcc atg caa acg gtg 1344

Ser Gly Ile Asn Vai Asn Ala Ala Pro Pba Gin Ser Met Gin Thr Vai 435 440 445 ttc aac atg aat gcc ccg gtt cct cct gtt aat gaa cca gaa act tta 1392

Phe Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu 450 455 460 aaa cag caa aat cag tac cag gcc age tat aac cag age ttt tcc agt 1440

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480 ccg cct cac caa gta gag cag aca gag ctt ccg caa gag cag ctt cag 1486

Pro Pro His Gin vai Glu Gin Thr Glu Leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495 acg gtg gtt ggt act tac cat gct tcc caa gac cag ccc cat caa gtg 1536

Thr vai Vai Gly Thr Tyr His Ala Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Vai 500 505 510 154 ΕΡ2325648Β1 ace ggt aac cac cag cag cct ccc cag cag aac act ggg ttt cca egt 1584 Thr Gly Asn SIS Hla Gin Gin Pro Pro 520 Gin Gin Asn Thr Gly 525 Phe Pro Arg age agt cag ccc tat tac aac agt egt ggt gtg tet egt gga ggc tcc 1632 Ser Ser 530 Gin Pro Tyr Tyr Asn 535 Ser Arg Gly Vai Ser 540 Arg Gly Gly Ser egt ggt gct aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gee aat gga 1680 Arg 545 Gly Ala Arg Gly Leu 550 Met Asn Gly Tyr Arg Gly 555 sro Ala Asn Gly 560 ttc aga gga gga tat gat ggt tac ege CCt teg ttc tet aac act cca 1728 Phe Arg Gly Gly Tyr 565 Asp Gly Tyr Arg Pro 570 Ser Phe Ser Asn The 575 Pro aac age ggt tac aca cag tet cag ttc agt gct ccc cgg gac tac tet 1776 Asn Ser Gly Tyr 580 Thr Gin Ser Gin Phe 585 Ser Ala Pro Arg Asp 590 Tyr Ser ggc tat cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tet ggv 1824 Gly Tyr Gin 595 Arg Asp Gly Tyr Gin 600 Gin Asn Phe Lys Arg 605 Gly Ser Gly cag agt gga ccc cgg gga gee cca cga ggt egt gga ggg ccc cca aga 1872 Gin Ser 610 Gly Pro Arg Gly Ala 615 Pro Arg Gly Arg Gly 620 Gly Pro Pro Arg ccc Pro 625 aac Aen aga Arg ggg Gly atg Met ccg Pro 630 caa Gin atg Met aac Aen act Thr cag caa Gin Gin 635 gtg Vai aat Asn taa 1917 tctgattcac aggattatct ttaatogeca aaacacactg gccagtgtac cataatatgt 1977 taccagaaga gttattatct atttgttctc cctttcagga aacttattçft aaagggactg 2037 ttttcatccc ataaagacag gactacagtt gtcagcttta tattacctgg atatggaagg 2097 aaactatttt tactctgcat gttctgtcct aagcgtcatc ttgagccttg cacatgatac 2157 tcagattcct ttcccttgct taggagtaaa acataatata ctttatgggg tgataatatc 2217 tccatagtta tttgaagtgg cttggaaaaa gcaagattga cttttgacat tggataaaat 2277 cbacaaatca gccctagagt ttcatggtca ttcacaaaae taaaatattt cccttgaaag 2337 gaagatggaa ggactggagt gtggtttgge agaacaactg catttcacag cttttcctat 2397 taaattggag cactgaatgt taaatgcata ccaaattatg catgggccct kaafccacaca 24S7 tacatggcta ccagctttga cacagcacta ttcatcctct ggccaaacga ctgtggttaa 2517 aaacacgtgt aaattgcttt ttaacagctg atactgfcaaa agacaaagct aaaatgcaaa 2577 attaggcttt cattggcact tttcgaaaaa tatgcaacaa atttgggatg taatctggat 2637 ggccacttct gtacttaatg tgaagtattt agataeottt fctgaacactt aaoagtttct 2697 tcgacaatga cttttgtaag gattggtagt atatatcatt ccttatgaca tacattgtcfc 2757 gttgctaate ettggatctt gctgtattgt cacctaaatt ggtacaggta ctgatgaaaa 2817 tctctcatgg ataaacctaa caekcttcgt cacatgtttt tcctgcagcc tgaaggtttt 2877 155 ΕΡ2325648Β1 taaaaggaaa agatatcaaa tgcctgctgc taccaccctt ttaaattgct atettttgaa 2937 aagcaocagt atgtgttttt agattgattt ccctatttta gggaaatgac agtcagtagt 2997 ttcagttctg atggtataag caaagcaaat aaaacgtgtt tataaaagtt gtatcttgaa 3057 acactggtgrt tcaacagcta gcagottctg tggttcaccc cctgccttgt tagtgttacc 3117 catttatggt tatctccagc agcaatttct cta 3150

<210> 18 <211> 638 <212> PRT <213> Equus caballus <4 0 0> 18 156 ΕΡ2325648Β1

Met Glu Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met Asn Lys Gly Glu 15 10 15

Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys Tyr Gin Glu Vai 20 25 30

Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala 35 40 45

Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys Thr Xle Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu 50 55 60

Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu 65 70 75 80

Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Glu Glu Vai Arg Thr 85 90 95

Asp Leu Lys Gin Gly Leu Asn Gly Vai Pre Ile Leu Ser Glu Glu Glu 100 105 110

Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Ala Asp Pro Vai Arg Asp 115 120 125

Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala Ser Ile His Leu 130 135 140

Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Ser Vai Cys Gly Thr Thr Tyr 145 150 155 160

Lys Ala Leu Arg Glu ile vai Glu Arg vai Phe Gin Ser Asn Tyr Phe 165 170 175

Asp Ser Thr His Asn Bis Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala 180 185 190 157 ΕΡ2325648Β1

Thr Ser Ala Pro Thr Ala Glu Asp Gin Gly Ala Glti Ala Glu Pro Glu 195 200 205

Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr 210 215 220

Vai Aen Arg Gin Phe Hat Ala Glu Ala Gin Phe Ser Gly Glu lys Glu 225 230 235 240

Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Aen Ser Leu 245 250 255

Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser 260 265 270

Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu vai Arg Arg Gin Arg Vai 275 280 285

Gin Asp Leu Met Ala Gin Net Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gin Asp 290 295 300

Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser 305 310 315 320

Ala Gin Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai 325 330 335

Cys Pro Pro vai His Ala Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai 340 345 350

Pro Val Gin Pro Glu Ala Thr Gin vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser 355 360 365

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr 370 375 380

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Thr Asp Gin Ile Gin Ala Thr lie 385 390 395 400

Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala 405 . 410 415

Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser 420 425 430

Ser Gly Ile Asn Val Aen Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Val 435 440 445 158 ΕΡ2325648Β1

Phe Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Thr Leu 450 455 460

Lys Gin Gin Asn Gin Tyc Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser 465 470 475 480

Pro Pro His Gin Vai Glu Gin Thr Glu leu Pro Gin Glu Gin Leu Gin 485 490 495

Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His Ala Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Vai 500 505 510

Thr Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 515 520 525

Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser 530 535 540

Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 545 550 555 560

Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 565 570 575

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Ser Gin Phe Ser Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 580 585 590

Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 595 600 605

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 610 615 620

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Vai Asn 625 630 635

<210> 19 <211> 6181 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (179) .. (2302) <223> 159 ΕΡ2325648Β1 <400> 19 gctggctggc taagtccctc ccgcgccggc tcttgtccca ctaggagcag ctcagagccg eçrgggacagg gcgaagcggc ctgcgcccac ggagcgcacg tctctgttct caacgcagca ccacccttgc ccccctcggc tgcccactcc agacgtccag cggctccgcg cgcgcacg 60 120 178 160 ΕΡ2325648Β1 atg acc teg gee acc age cac age gga age gge age aaa teg teg gga 22«

Met pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly ser Lye Ser Ser Gly 1 5 10 15 ccg ecg ccg ccg tce ggt tec tce ggg agt gag gcg geg gee ggg gea 274

Pro Pro pro pro Ser Gly ser ser Gly ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30 get gog eeg get tet eag cat ccg gea acc ggc acc ggc gee gtc cag 322

Ala Ala Pro Ala Ser Gin Hla pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala vai Gin 35 40 45 acc gag gee atg aag cag att etc gge gta ate gac aag aaa ctt cgg 370

Thr Glu Ala Met Lye Gin ile Leu Gly vai xie Asp Lye Lye Leu Arg 50 55 60 aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat tac cag gaa cga atg 418

Asn Leu Glu Lye Lye Lye Gly Lys leu Aep Asp Tyr Gin Glu Arg Met €5 70 75 80 aat aaa ggg gaa agg ctc aat caa gac cag ctg gat gee gta tet aag 466

Asn Lye Gly Glu Arg Leu Asn Gin Aep Gin Leu Aep Ala Vai Ser Lye 85 90 95 tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gea aag gaa tta eag agg 514

Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lye Glu Leu Gin Arg 100 105 110 agt ttc atg gea tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Aep lie Gin lye Thr xie lye lye Thr 115 120 125 gea cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gea gaa cag aag ege tta 610

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin lye Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658

Lys Thr vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706

Aep Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Vai Pro lie Leu 165 170 175 tet gag gag gag ttg tea ttg ctg gat gag ttc tac aag ctc gta gat 754

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Asp 180 185 190 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gee 602

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Bia Ala 195 200 205 tea att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cct gtg tgt 850

Ser Ile Hla Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro vai Cys 210 215 220 gga aca acc tat aaa get cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 898

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile vai Glu Arg Vai Phe Gin 225 230 235 240 tea aac tac ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag gcg get tea gcg ccc aca gtg gag gac cag gta get gaa 994 161 ΕΡ2325648Β1 GLu Glu Glu Ala 260 Ala Ser Ala Pro Thr val Glu Asp Gin Val Ala Glu 265 270 gct gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042 Ala Glu Pro 275 Glu Pro Ala Glu Glu 280 Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 285 tca aca gag tat gto aat agg cag ttc atg gca gaa aca cag ttc age 1090 Ser Thr 290 Glu Tyr Val Asn Arg 295 Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138 Ser 305 Gly Glu Lys Glu Gin Val 310 Asp Glu Trp Thr 315 Val Glu Thr Val Glu 320 gtt gta aac tca ctc cag eag caa cct cag gat gcg tcc cct toa gtc 1186 Vai Val Asn Ser Leu 325 Gin Gin Gin Pro Gin Ala 330 Ala Ser Pro Ser Val 335 oca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag tca gat cca ctt gtg 1234 Pro Glu Pro Hie 340 Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin 345 Ser Asp Pro Leu Val 350 aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gca caa atg caa ggg ccc tat 1282 Arg Arg Gin 355 Arg Val Gin Asp Leu 360 Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 365 aat ttc ata cag gat tca atg ttg gat ttt gaa aat. cag acg ctt gat 1330 Aen Phe 370 Zle Gin Asp Ser Met 375 Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 380 oct gcc att gta tco gca cag cct atg aac cct acc cag aac atg gat 1378 Pro 385 Ala Xle val ser Ala Gin 390 Pro Met Asn Pro 395 Thr Gin Asn Met Asp 400 atg cct cag ctg gtt tge cct cag gtt cat tct gaa tct aga ctt gcc 1426 Met Pro Gin Leu Val 405 Cys Pro Gin Val Hie Ser 410 Glu Ser Arg leu Ala 415 caa tct aat caa gtt cct gta caa cca gaa goc aca cag gtt cct ttg 1474 Gin Ser Asn Gin 420 Val Pro Val Gin Pro Glu Ala 425 Thr Gin Val Pro Leu 430 gtt tca tcc aca agt gag ggg tat aca gca tct cag ccc ttg tac cag 1522 Val Ser Ser 435 Thr Ser Glu Gly Tyr 440 Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 445 cca tot cat gct acg gag cag cgg ccg cag aaa gag cca atg gat cag 1570 Pro Ser 450 Hie Ala Thr Glu Gin 455 Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 460 att oag gca aca ata tct ttg aat aca gaa cag act aca gca tcc tca 1618 Xle 465 Gin Ala Thr Xle Ser Leu 470 Aen Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 475 480 tco ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg ttc cag gct ggg aca agt 1666 Ser leu Pro Ala Ala 485 Ser Gin Pro Gin Val Phe Gin Ala Gly Thr Ser 490 495 aaa cot ttg oao age agt gga ate aat gta aat gca gct cca ttc cag 1714 Lys Pro Leu HiS 500 Ser Ser Gly He Asn Val Asn 505 Ala Ala Pro Phe Gin 510 tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gct cca gtc cct cct gct aat 1762 Ser Met Gin Thr Val Phe Asn Met Asn Ala Pro Val Pro Pro Ala Asn 162 ΕΡ2325648Β1 515 520 525 gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tao cag gcc act tat aac 1810 Glu Pre 530 Glu Thr Leu Lya Gin 535 Gin Ser Gin Tyr Gin Ala 540 Thr Tyr Aan cag agt ttt tcc agt cag ect cac caa gtg gaa caa aca gag ctt caa 1858 Gin 545 Ser Phe Ser Ser Gin 550 Pro His Gin Vai Glu 555 Gin Thr Glu Leu Gin 560 caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac 1906 Gin ASp Gin Leu Gin 565 Thr vai vai Gly Thr 570 Tyr His Gly Ser Gin 575 Asp cag ect cat eaa gtg cot ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac 1954 Gin Pro His Gin 580 vai Pro Gly Asn His 585 Gin Gin Pro Pro Gin 590 Gin Aan act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta 2002 Thr Gly Phe 595 Pro Arg Ser Ser Gin 600 Pro Tyr Tyr Asn Ser 605 Arg Gly Val tct cga gga 9G9 tct cgt ggt gcc aga ggc ttg atg aat gga tac agg 2050 Ser Arg 610 Gly Gly Ser Arg Gly 615 Ala Arg Gly Leu Met Aan 620 Gly Tyr Arg ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt'tac ege cct tea 2098 Gly 625 Pro Ala Aan Gly Phe 630 Arg Gly Gly Tyr Asp 635 Gly Tyr Arg Pro Ser 640 ttc tcg aao act cca aao agt ggt tat toa cag tct cag ttc act gct 2146 Phe Ser Asn Thr Pro 645 Asn Ser Gly Tyr Ser 650 Gin Ser Gin Phe Thr 655 Ala ccc cgg gac tac tct ggt tac cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc 2194 PrO Arg Asp Tyr 660 Ser >t 3 Tyr Gin Arg 665 Asp Gly Tyr Gin Gin 670 Asn Phe aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt cgt 2242 Lya Arg Gly 675 Ser Gly Gin Ser Gly 6Θ0 Pro Arg Gly Ala Pro 685 *tg Gly Arg gga ggg CCC cca aga ccc aac aga ggg atg eeg eaa atg aac act cag 2290 Gly Gly 690 Pro Pro Arg Ρεο Asn 695 Arg Gly Met Pro Gin Met 700 Asn Thr Gin eaa gtg aat taa tgtgataeae aggattatgt ttaatcgeca aaaacaoact 2342

Gin vai Asn 705 ggecagtgta ccataatatg aaacttattg taaagggact acattacctg gatatggaag cttgagectt gcacacaata tatatactts tggggtgata caagattgaa tttttgacct aattgacaaa gttaaagcat gcaaaactgc atttcatagc ttacoagaag agttattate gttttcatcc cataaagaca gaaactattt ttattctgca caataebcag attectcacc atatctcaat agttagttga tggataaaat ctacaatcag tttetttgaa aggaagatgg tttceoatta aattggagca tatttgttct ccotttoagg ggactgcaat tgtcagcttt tgttotgtoo taagcgtcat cfctgottagg agtaaaaaat açrtggcttgg aaaaaaaatg ecctagaact attcagtggt aaggagtgga gtgtggttta oogacagatt aaaagcatac 2402 2402 2522 2582 2642 2702 2762 2822 163 ΕΡ2325648Β1 caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca 2882 ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tctttagtag 2942 tggataetgt gtaagacaaa gccaaattge aaatcaggct ttgattggct ettctggaaa 3082 atatgcatca aatatggggg ataatctgga tgggotgctg ctgtgotcaa tgtgaactat 3082 ttagatacct ttggaacact taacagtttc tctgaaeaat gacttacatg gggattggtc 3122 ctgtttgtca ttcctcacoa taattgcatt gtcatcacta atccttggat cttgctgtat 3182 tgttaetcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta atggatggat aatcataaca 3242 cttttggtea catgttttct cctgcagccfc gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg 3302 cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat ctttagaaaa gcaccggtat gtgttttaga 3382 ttcatttccc tgttttaggg aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa 3422 taaaaaeatg tttctaaaag ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa 3482 agtaattcaa cccatgcatt gctagtgtca cagccttfcgg ttatgtctag tagctgtttc 3542 tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat ttaaccctgt ttgaattctc tcctttcctc 3802 aaggagaaac ttatgttcaa agtgttgatt ctfctgcctta ggtgcataga gagtagacag 3662 tttggagatg gaa&ggttag cagtgactfca gccatatgtt ctgtgttgga atttgtgcta 3722 gcagtttgag cactaçctct gcgtgcctat gaactgaatg ctgcttgtcc cattccattt 3782 tatgtcatgg agaaataatt ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg 3842 tacagaaatt aaattttact tttagccttt tgtaaaottt tttttttttt ttccaagccg 3902 gtatcagcta ctcaaaaeaa ttatoagata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg 3962 gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaacatt ccacafcfccaa aagttttgta 4022 gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg 4082 acttttctca tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tacttttgcc 4142 aagacfcattt tgcoagcacc tacacttgtg tgctttaaaa gacaactacc tgggatgtac 4202 caeaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa atgtttgtgg tttattggat 4262 aatacctaga tggtgtgtta cgtgtgtaga atataatttt atgatagtaa gaaagoaaaa 4322 ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca 4382 cgtttcgggc ttctacccaa agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgac 4442 ttgtttattt tttaagttgc ttattccttt caacagcaac atatcattag ctgtcattct 4502 accattgcag ttctagtgag ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaaccte 4562 actggaeaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc 4622 ttctataata tgoaaatgct tgtotagagg cagaagacct tttgtttggt caagtgtgta 4682 ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc ttagtgtagt aagactataa 4742 164 ΕΡ2325648Β1 aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac cacgtgtata atgcoccecc 4802 ctcccccagg tagcatgcea ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taceagggcc 4862 ttaatattcc fcaaaaagatg attttttttc atcctttctc ctcttttgat cattgtatct 4922 tgatattaaa aacatgaccfc tccaatgatt gtagtaaatt aacttctata gttcttttgt 4982 ctctatatgt attcatatat atgctattgt atagagactt eaaggagaca tggagatgea 5042 tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga 5X02 atgtagttaa goagottoat atatgtgcca ggoaatttgt tttgttaaat ttteatotac 5162 ttaaggaaat agggtattgt agcttaggct gatcataccc ttcatttcaa ccttaagctc 5222 tcaacatgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta 5282 acagaaaaag taaattaagc tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa 5342 acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat gaaaatgfcga ttgtttatag 5402 caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga 5462 agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact 5522 gtacattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg catagecttg atccttcacc 5582 gttggcattg aaaatagcag tatccctgat gtacttaaaa cttaaagtca ggtttfcggta 5642 tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc tctttagcga gacaacctga 5702 aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat ggceagtgtt aactattcag 5762 tggtgaaaaa attaccgetg aagaoaetgg agtgacccoa gatgtgtgta gtaagtggca 5822 tggttoaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagaet 5882 tgattgaaag ataattcagc tgacataagg atgagtgagg agtggcaaao tggataaaag 5942 agteaagaga cctgtattce agfcgactcct gttttgttt*. ageattagca agatctgtct 6002 ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt ttgtctcaac atttggaagc 6062 tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gecagaatag 6122 tgggtcatet aataaaactg ceatttaaaa gatcaa&aaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6181

<210> 20 <211> 707 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 20 165 ΕΡ2325648Β1

Het Pro Ser Ala Thr Ser Hia Ser 1 5 Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser 20 Ala Ala Pro Ala ser Gin Hia Pro GXy Ser Gly Ser Lys Ser Ser GlyXO is

Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 25 30

Ala Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin 166 ΕΡ2325648Β1 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin Ile Leu Oly Vai Ile Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lya Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu λrg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala vai Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp lie Gin Lys Thr Ile Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr Vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Vai Pro Ile Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Asp ISO 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cya 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Vai Glu Arg Vai Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu vai GLu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300 167 ΕΡ2325648Β1

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Fro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 325 330 335

Pro Glu Pro Hia Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ser Asp Pro Leu Vai 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365

Asn Fhe Ile Gin Asp Ser Het Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 370 375 380

Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Het Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 385 390 395 400

Hat Pro Gin Leu Vai Cys Pro Gin Vai His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu 420 425 430

Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tys Gin 435 440 445

Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460

Ile Gin Ala Thr Ile ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys Pro Leu His Ser Ser Gly ile Asn Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr Vai Phe Asn Het Asn Ala Pro Vai Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Vai Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560 168 ΕΡ2325648Β1

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp 565 570 575

Gin Pro His Gin Vai Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai 5S5 /•ΛΛ OUU . €05

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

Gin Vai Asn 705 <210> 21 <211> 6141 <212> ADN <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (139) .. (2262 <223> <4 0 0> 21 169 ΕΡ2325648Β1 cecaccgcgc gcgcgcgtag ccgcotgccc gaoogcccgc tgegegtttt gtcccgcgtc £0 tctccccgtc cgtctcctga ottgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctctco . 120 tctctteteg gtctaaag atg oee teg gce aee age cae age gga age ggc 171

Met Pro Ser Ala The Ser Hia Ser 61y Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ocg ccg ccg ceg tec ggt tee toc ggg agt gag 219

Ser Lys Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 gcg gcg gee ggg gea get gcg ccg gct tet cag cat ccg gea acc ggc 267 170 ΕΡ2325648Β1

Ala Ala Ala 30 Gly Ala Ala Ala Pro 35 Ala Ser Gin Hia pro Ala 40 Thr Gly acc ggo gcc gtc cag acc gag gcc atg aag cag att ctc ggc gta ate 315 rhr Gly 49 Ala val Gin Thr Glu 50 Ala Met lys Gin ile 55 leu Gly val ile gac aag aaa ctt cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat 363 Aap 60 lys Lys L«U Arg Asn Leu 65 Glu Lys lys lys 70 Gly Lys leu Asp ASp 75 tac cag gaa cga atg aat aaa 999 gaa agg ctc aat caa gac cag ctg 411 Tyr Gin Glu Arg Met SO Asn lys Gly Glu Arg 85 leu Aen Gin Asp Gin Leu 90 gat gce gta tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459 Aap Ala vai Ser 95 lys Tyr Gin Glu Val 100 Thr Asn Asn Leu Glu 105 Phe Ala aag gaa tta cag agg agt ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507 Lys Glu Leu 110 Gin Arg Sex Phe Met 115 Ala Leu Ser Gin Asp Ile 120 Gin Lys aca ata aag aag aca gca cgt cgg gaa cag Ctt atg aga gaa gaa gca 555 Thr Ile 125 lya lys Thr Ala Arg 130 Arg Glu Gin Leu Met 135 Arg Glu Glu Ala gaa cag aag cgc tta aaa aot gta ctt gag tta cag tat gta ttg gat 603 Glu 140 Gin lys Arg leu lys Thr 145 val leu Glu leu 150 Gin Tyr Val Leu Asp 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651 Lya leu Gly Αβρ Aap 160 Aap val Arg Thr Asp 165 leu Lys Gin Gly leu Ser 170 99» gtg cca ata ttg tct gag gag gag ttg tca ttg ctg gat gag ttc 699 Gly Val Pro Ile 175 leu Ser Glu Glu Glu 180 Leu Ser leu leu Asp 185 Glu Phe tac aag etc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747 Tyr lys Leu 190 Val Asp Pro Glu Arg 195 Asp Met Ser leu Arg leu 200 Asn Glu cag tat gaa cat gce tca att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795 Gin Tyr 205 Glu Hás Ala ser Ile 210 His leu Trp Asp leu 215 leu Glu Gly Lys gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa gct cta aag gaa att gtt 843 Glu 220 Lya Pro Val Cys Gly Thr 225 Thr Tyr lys Ala 230 leu lys Glu Ile Val 235 gag cgt gtfc ttc cag tca aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891 Glu Arg Val Phe Gin 240 Ser Asn Tyr Phe Asp 245 Ser Thr His Asn Hie Gin 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag geg gct tca geg ccc aca gtg gag 939 Asn Gly Leu Cys 255 Glu Glu Glu Glu Ala 260 Ala Ser Ala Pro Thr 265 Val Glu gac cag gta gct gaa gct gaa cct gag cca 9=9 gaa gaa tac aca gag 987 Aap Gin Val 270 Ala Glu Ala Glu Pro 275 Glu Pro Ala Glu Glu Tyr 280 Thr Glu caa agt gag gtt gaa toa aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035 Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr val Asn Arg Gin Phe Hat Ala 171 1083 1083 285 290 gaa aca eag ttc age agt ggt gag Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu 300 305 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aao Vai Gin Thr Vai Glu Vai Vai Asn 320 gcg tce ecfc tca gbc cea gag cee Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro 335 tca gat cca ctt gtg aga agg cag Ser Aap Pro Leu Vai Arg Arg Gin 350 355 atg caa ggg ccc tat aat ttc ata Het Gin Gly Pro Tyr Asn Phe ile 365 370 aat eag acg ctt gat cct gec att Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Xle 380 385 ΕΡ2325648Β1 295 aag gag caa gtg gat gag tgg aca Lya Glu Gin Vai Aap Glu Trp Thr 310 315 tca cta cag cag caa ect cag gct Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala 325 330 caa tct ttg aot cca gtg gct cag Hia Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin 340 345 cgt gta caa gat ctt atg gca caa Arg Vai Gin Asp Leu Het Ala Gin 360 cag gat tca atg ttg gat ttt gaa Gin Aap Ser Het Leu Aep Phe Glu 375 gta tcc gca cag cct atg aac cct Vai Ser Ala Gin Pro Het Aan Pro 390 395 acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tct

Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Gin Vai Hia Ser 400 4Φ5 410 gaa tat aga ctt gcc caa tct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc

Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Aan Gin Vai Pro vai Gin Pro Glu Ala 415 420 425 aca cag gtt cct ttg gtt tca tco aca agt gag ggg tat aca gca tct

Thr Gin vai Pro Leu vai ser ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser 430 435 440 cag ccc ttg tac cag cca tct cat gct acg gag cag cgg cog cag aaa

Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser ais Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lya 445 450 455 gag cca atg gat cag att cag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag

Glu Pro Met Aap Gin Xle Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin 460 465 470 475 act aca gca tcc tca tcc ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg ttc

Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin vai Phe 480 485 490 cag gct ggg aca agt aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat

Gin Ala Gly Thr Ser Lya Pro Leu 8ie Ser Ser Gly Xle Asn Vai Asn 495 500 505 gca gct cca ttc cag tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gct oca

Ala Ala Pro Phe Gin ser Het Gin Thr Vai Phe Asn Het Asn Ala Pro 510 515 520 gtc cct cct gct aat gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tac

Vai pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lya Gin Gin Ser Gin Tyr 525 530 535 cag gec act tat aac cag agt ett tcc agt cag cct cac caa gtg gaa

Gin Ala Thr Tyr Asn Gin ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin vai Glu 540 545 550 555 1131 1179 1227 1275 1323 1371 1419 1467 1515 1563 1611 1659 1707 1755 1803 172 ΕΡ2325648Β1 caa aca gag ctt caa aaa gac caa ctg caa aeg gtg çtt ggc act tac 1851 61η Thr Glu Leu Gin 560 Gin Asp Gin Leu Gin 565 Thr vai Vai Gly Thr 570 Tyr cat gga tcc cag gac Cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899 His Gly Ser Gin 575 Aap Gin Pro Ris Gin 580 Vai Pro Gly Aan Ris 585 Gin Gin ccc cca cag cag aac act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac 1947 Pro Pro Gin 550 Gin Asn Thr Gly Phe 595 Pro Arg Ser Ser Gin 600 Pro Tyr Tyr aae agt egt gag gta tct cga gga GGG tct cgt ggt gcc aga GGC ttg 1995 Asn Ser €05 Arg Gly vai Ser Arg 610 Gly Gly Ser Arg Gly 615 Ala Arg Gly Leu atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043 Met €20 Asn Gly Tyr Arg Gly 625 Pro Ala Asn Gly Phe 630 Arg Gly Gly Tyr Asp 635 ggt tac cgc cct tca ttc teg aac act cca aac agt ggt tat tca cag 2091 Gly Tyr Arg Pro Ser 640 Phe Ser Asn Thr Pro 645 Asn Ser Gly Tyr Ser 650 Gin tct cag ttc act gct ccc cgg gac tac tct ggt tac cag cgg Gat gga 2139 Ser Gin Phe Thr 655 Ala Pro Arg Asp Tyr 660 Ser Gly Tyr Gin Arg 665 Asp Gly tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct GGG cag agt gga cca cgg gga 2187 Tyr Gin Gin 670 Aan Phe lys Arg Gly 675 Ser Gly Gin Ser Gly 680 Pro Arg Gly gcc cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca age CCC aac aga GGG atg ccg 2235 Ala Pro 685 Arg Gly Arg Gly Gly 650 Pro Pro Arg Pro Aan 695 Arg Gly Met Pro caa Gin 700 atg Met aac Asn aat Thr cag Gin caa Gin 705 gtg Vai aat Aen taa tgtgatacac aggattatgt 2282 ttaatcgcca aaaacacact ggccagtgta ccataatatg ttaccagaag agttattatc 2342 tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact gttttcatco cataaagaca 2402 ggactgcaat tgtcagcttt acattacctg gatatggaag gaaactattt ttabtctgca 2462 tgttotgtcc taagcgtcat cttgagcctt gcacacaata caatactcag attcctcacc 2522 cttgcttagg agtaaaacat tatatactta tggggtgata atatctccat agttagttga 2582 agtggcttgg aaaaaaaatg caagattgaa tttttgacct tggataaaat ctacaatcag 2642 ccetagaaet attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat tttetttgaa aggaagatgg 2702 aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatagc tttcceatta aattggagca 2762 ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt actcacacaa gtgaggctgg 2822 ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa acgactgtga ttaaaacaca 2882 tgtaaattgc tctttagtag tggatactgt gtaagacaaa gccaaattgc aaabcaggct 2942 ttgattggct cttctggaaa atatgoatca aatatggggg ataatctgga tgggctgctg 3002 173 ΕΡ2325648Β1 ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact taacagtttc tctgaacaat 3062 gacttacatg gggattggtc ctgtttgtca ttccteaeca taattgcatt gtcafccacta 3122 atccttggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata ggtactgatg gaaatcgcta 3182 atggatggat aatcataaca cttttggtca catgfctttct cctgcagcct gaaagttctt 3242 aaagaaaaag atatcaaatg cctgctgcta ccaccctttt aaattgctat ctttagaaaa 3302 gcaccggtat gtgttttaga ttcatttccc tgrttttaggg aaatgacagg eagtagtfctc 3362 agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag ttgtafcettg aaacactggt 3422 gttcaacagc tagcagcfcaa agtaattcaa cccatgcatt. gctagtgtca cagcctttgg 3482 ttatgtctag tagctgttfcc tgaagtattt tcatttatct tttgtcaaat: ttaaccctgt 3542 ttgaattebc tcctttcctc aaggagacac ttatgtteaa agtgttgatt ctttgcctta 3602 ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag cagtgactta gccatatgtt 3662 ctgtgttgga afcttgtgcfca gcagtttgag cactagctct gcgtgcctat gaactgaatg 3722 ctgcttgtcc cattccattt tatgtoatgg agaaataatt ccacttggta acacaaaggc 3782 taagttaatg ttattttctg taeagaaatt aaattttaot tttagccttt tgtaaacttt 3842 tttttttttb ttccaagocg gtatcagcta ctcaaaacaa ttctcagata ttcatcatta 3902 gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac tgctgaggct gttgaaoatt 3962 ccaeattcaa aagttttgta gggtggtgga taatggggaa gcttcaatgt ttattttaaa 4022 ataaataaaa taagttcttg aettttetea tgtgtggtta tggtacatca tattggaagg 4082 gttatctgrtt tacttttgcc aagactattt tgccagcacc tacacttgtg fcgefcttaaaa 4142 gacaactaec tgggatgtac cacaaccata tgttaattgt attttattgg gatggataaa 4202 atgtttgtgg tttattggat aatocctaga tggtgtgfcfca cgtgtgtaga atataatttt 4262 atgatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt attgaatttg agtfcctgaag 4322 tgaattcagg gaatgtctca cgtttcgggc ttetacccaa agtgtagggc agaaggtgta 4382 aaagttgttt gtagtttgac ttgtttattt tttaagttgc ttatteettt caacagcaac 4442 atateattag otgtcattct accatfcgcag ttctegtgag fcfcfctaaegte tgcattcaag 4502 actgtttfcaa aagcaacctc actggacaga gaactgctaa agtcttttcc ttaagatctg 4562 agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct tgtctagagg eagaagacct 4622 tttgrtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa ctgatggtcc tacatgtctc 4682 ttagtgtagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa ttcacagtat gtttagatac 4742 caegtgtata atgccccccc efcecceeagrg tagcatgcca ttgatgactt tttgcttagg 4802 gccattttat taccagggcc ttaatattcc taaaaagatg attttttttc atcctttctc 4862 ctcttttgat cattgtatct tgatattaaa aacatgacct tccaatgatt gtagtaaatt 4922 aacttctata gttcttttgt ctctatatgt attcatatab atgctattgt atagagaett 4982 174 ΕΡ2325648Β1 caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt cactaaggtg cttggcagac 5042 aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat atatgtgcca ggcaatttgt 5102 tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt agettaggct gatcataccc 5162 ttcatttcaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac ttgagctatt aagtacttta 5222 gttttatega gtataagtta aoagaaaaag taaattaagc tttgocttta otattttgaa 5282 tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat ttcattagat taaattatat 5342 gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgcata caccctaagg aaaactcctt 5402 aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctgg tctttttaag aacaaagcta 5482 gactactgta tgttagcact gtaeattaat agtctgttgt gaagcttgag cagtttcctg 5522 catagccttg atccttcaco gttggcattg aaaafcagcag tatccctgat gtacttaaaa 5582 cttaaagtca ggttttggta tatttatttg taagtcttaa tttcctctaa atactatatc 5842 tctttagcga gacaacctga aatttattag cacatttggg tatctcttgc ttggcattat 5702 ggccagtgtt aactattcag fcggtgaaaaa attacccctc aagacactgg agtgacccca 5762 gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa tgataaatat atgacttagt 5822 cggtatgatc tggaaagaot tgattgaaag ataattcago tgacataagg atgagtgagg 5882 agtggcaaae tggataaaag agtcaagaga eotgtattcc agtgactoct gttttgttta 5942 agcattagca agatctgtct ggggaaactg gatagggcag ttttcttcca tgtttagttt 6002 ttgtctcaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg tgtgtattgt ttttttttgg 6062 ggggggggtg gccagaãtag tgggtcatct aataaaactg ccatttaaaa gatcaaaaaa 6122 aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6141

<210> 22 <211> 707 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 22 175 ΕΡ2325648Β1

Met Pto Set Ala Thr Sec His Set Gly Ser Gly Ser Lys Ser Ser Gly 1 5 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met lya Gin Ile Leu GlY Vai Ile Asp Lys Lys Leu Arg 50 55 β0 176 ΕΡ2325648Β1

Asn Leu 61« lya lya Lya Gly Lye Leu Aep Asp Tyr Gin 61u Arg Met 65 70 75 80

Asn Lye Gly Glu Arg Leu λβη Gin Aep Gin Leu Asp Ala vai Ser Lye 85 90 95

Tyr Gin Glu Vai Thr Aen Aan Leu Glu Phe Ala Lya Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Aep Ile Gin Lye Thr tle Lye Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lye Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr vai Leu Aep Lye Leu Gly Aep Aep 145 150 155 . 160

Asp Vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly Vai Pro lie Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Aep Glu Phe Tyr Lye Leu Vel Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Aep Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser XLe His Leu Trp Aep Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys 210 21S 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Cie Vai Glu Arg Vai Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn Bis Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Vai Glu Asp Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr vai Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lya Glu Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu 305 310 315 320

Vai Vai Asn Ser leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Vai 177 ΕΡ2325648Β1 335 325 330

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin Ser Asp Pro Leu Vai 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Vai Gin Aep Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365 λβη phe zie Gin Aep Ser Met Leu Aep Phe Glu Asa Gin Thr Leu Asp 370 375 3S0

Pro Ala ile vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp 305 390 395 400

Met Pro Gin Leu Vai Cya Pro Gin Vai Hás Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415

Gin Ser Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu 420 425 430

Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445

Pro Ser Mis Ala Thr Glu Gin Arg Pro Sln Lys Glu Pro Met Aep Gin 450 455 460

Xle Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495

Lys pro Leu Mis Ser Ser Gly Ile Asn Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin 500 505 510

Ser Met Gin Thr vai Phe Asn Met Asn Ala Pro vai Pro Pro Ala Asn 515 520 525

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro His Gin Vai Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly Thr Tyr Bis Gly Ser Gin Aep 565 570 575

Gin Pro His Gin Vai Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590 178 ΕΡ2325648Β1

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai 535 $00 £05

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg 610 615 620

Gly Pro Ala Aan Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640

Phe Ser Aan Thr Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670

Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg 675 680 685

Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Thr Gin 690 695 700

Gin Vai Asn 705

<210> 23 <211> 6114 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0>

<221> CDS <222> (139) .. (2235) <223> <400> 23 179 ΕΡ2325648Β1 cccaccgege gcgcgcgtag ccgccfcgccc gcccgcccgc tgcgcgtttt gtcccgcgte 60 tctccccgtc cgtctcctga cttgctggtc ttgtccttcc ctcccgcttt tttcctcfccc 120 tctcttctcg gtctaaag atg eae teg gee aee age cac age gga age gge 171

Hat Pro Ser Ala Thr Ser Hia Ser Gly Ser Gly 15 10 age aaa teg teg gga ccg ccg ccg ceg tcc ggt tce teo ggg agt gag 219

Ser Lya Ser Ser Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu 15 20 25 gcg gcg geo ggg gea gct gcg ccg gct tet cag cat ccg gea acc gge 267

Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly 30 35 40 aee gge gee gtc cag acc gag gea atg aag oag att ote gge gta àtc 315

Thr Gly Ala Vai Gin Thr Glu Ala Met lya Glnlle Leu Gly Vai Ile 45 50 55 180 ΕΡ2325648Β1 gac aag aaa cfct cgg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat 363

Asp Lys Lya Leu Arg Aaa Leu Glu Lys Lys Lya Gly Lys Leu Aap Asp 60 65 70 75 tac cag gaa cga atg aat aaa ggg gaa agg ctc aat caa gac cag ctg 411

Tyr Gin Glu Arg Met Aaa Lys Gly Glu Arg Leu Aaa Gin Asp Gin Leu $0 85 90 gat gcc gta tct aag tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca 459

Asp Ala val Ser Lya Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala 95 100 105 aag gaa tta cag agg agt'ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa 507

Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lye 110 115 120 aca ata aag aag aca gca cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gca 555

Thr Ile Lya Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala 125 130 135 gaa cag aag egc tta aaa act gta att gag tta cag tat gta ttg gat 603

Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp 140 145 150 155 aag ctg gga gat gat gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt 651

Lys Leu Gly Asp Asp Asp Val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser 160 165 170 gga gtg cca ata ttg tct gag gag gag ttg tca ttg ctg gat gag ttc 695

Gly val Pro Ile Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe 175 180 185 tac aag ctc gta gat cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag 747

Tyr Lya Leu Val Asp Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu 190 195 200 cag tat gaa cat gcc tca att cao ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa 795

Gin Tyr Glu Hás Ala Ser Ile Hás Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys 205 210 215 gaa aag cct gtg tgt gga aca acc tat aaa gct cta aag gaa att gtt 843

Glu Lys Pro Val Cys Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val 220 225 230 235 gag cgt gtt ttc cag tca aac tac ttt gat age act cac aat cat caa 891

Glu Arg Val Phe Glu Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr Hás Asn Hia Gin 240 245 250 aat ggg ttg tgt gag gag gaa gag gcg gct tca gcg cco aca gtg gag 939

Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu 255 260 265 gao cag gta gct gaa gct gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag 987

Asp Gin Val Ala Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu 270 275 280 caa agt gag gtt gaa tca aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gca 1035

Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

Glu Thr Gin Phe Ser Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr 300 305 310 315 gtt gaa aca gtt gag gtt gta aac toa ctc cag cag caa cct cag gct 1131 181 ΕΡ2325648Β1

Vai Glu Thr Vai Glu vai Vai Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin ala 320 325 330 gcg tcc cct tca gtc cca gag ccc cac tct ttg act cca gtg gct cag 1179

Ala Ser Pro Ser Vai Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin 335 340 345 tca gat cca ctt gtg aga agg ceg cgt gta caa gat ctt atg gca caa 1227

Ser Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg Vai Gin Asp Leu Hat Ala Gin 350 355 360 atg caa ggg ccc tat aat tte ata cag acg ctt gat cct gcc att gta 1275

Met Gin Gly Pro Tyr Aan Phe Ile Gin Thr Leu Asp pro Ala Ile Vai 365 370 375 tcc gca cag cct atg aac cct ace cag aac atg gat atg cct cag ctg 1323

Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu 380 385 390 395 gtt tgo cct cag gtt cat tat gaa tct aga ctt gcc oaa tct aat caa 1371

Vai Cye Pro Gin vai His ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Asn Gin 400 405 410 gtt cct gta caa cca gaa gcc aca cag gtt cct ttg gtt tca tcc aca 1419

Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ma Thr Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr 415 420 425 agt gag ggg tat aca gca ter cag ccc ttg tac cag cca tct cat gct 1467

Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala 430 435 440 acg gag cag cgg ccg cag aaa gag cca atg gat cag att cag gca aca 1515

Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lya Glu Pro Met Asp Gin Ile Gin Ala Thr 445 450 455 ata tct ttg aat aca gac cag act aca gca teo tca tcc ctt cct gct 1563

Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala 460 465 470 475 gct tct cag cct caa gtg ttc cag gct ggg aca agt aaa cct ttg cac 1611

Ala Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His 480 485 490 age agt gga ate aat gta aat gca gct cca ttc cag tcc atg caa acg 1659

Ser Ser Gly ile Asn vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr 495 500 505 gtg ttc aet atg aat gct cca gtc cct cct gct aat gaa cca gaa acg 1707

Vai Phe Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr 510 515 520 tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac cag agt ttt tcc 1755

Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr: Aan Gin Ser Phe Ser 525 530 535 agt cag cct cac caa gtg gaa caa aaa gag ctt caa eaa gac caa ctg 1803

Ser Gin Pro His Gin vai Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu 540 545 550 555 caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac cag cct cat caa 1851

Gin Thr Vai Vai Gly Thr Tyr Hia Gly Ser Gin Asp Gin Pro Hia Gin 560 565 570 gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac act ggc ttt oca 1899 vai Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro 182 ΕΡ2325648Β1 575 580 585 egt age agt cag cct tat tac aac agt cgt ggg gta tct cga gga Q99 1947 Arg Ser Ser 590 Gin Pro Tyr Tyr Asn 595 Ser Arg Gly Val Ser 600 Arg Gly Gly tct cgt ggt gee aga ggc ttg atg aat gga tac agg ggc cct gee aat 1995 Ser Arg 505 Gly Ala Arg Gly Leu 610 Met Aan Gly Tyr Arg 615 Gly Pro Ala Asn gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tea ttc teg aac act 2043 Gly ¢20 Phe Arg Gly Gly Tyr 625 Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 630 Phe Ser Aan Thr 635 cca aac agt ggt tat tea cag tct cag ttc act gct ccc cgg gac tac 2091 Pro Aan Ser Gly Tyr 640 Ser Gin Ser Gla Phe 645 Thr Ala Pro Arg Asp 650 Tyr tct ggt tac cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct 2139 Sar Gly Tyr Gin 655 Arg Asp Gly Tyr Gin 660 Gin Asn Phe Lys Arg Gly 665 Ser ggg cag agt gga cca cgg gga gee cca cga ggt cgt gga ggg ccc cca 2187 Gly Gin Ser 670 Gly pro Arg Gly Ala 675 Pro Arg Gly Arg Gly 680 Gly Pro Pro aga Arg ccc Pro 685 aac Asn aga Arg ggg Gly atg Met ccg Pro 690 caa Gin atg Met aac Asn act cag Thr Gin 695 caa Gin gtg aat val Asn taa 2235 tgtgatacac aggattatgt ttaatcgcca aaaacacact ggecagtgrta ocafcaatafcg 2295 ttaccagaag agttattatc tatttgttct ccctttcagg aaacttattg taaagggact 2355 gttttcatcc cataaagaca ggactgcaat tgteagettt acattacctg gatatggaag 2415 gaaactattt ttattctgca tgttctgtcc taagcgtcat cttgagcctt gcacacaata 2475 caatactcag attcctcacc cttgcttagg agtaaaacat tatatactta tggggtgata 2535 atatetccat agttaçttga agtggcttgg aaaaaaaatg oaagattgaa tttttgacct 2595 tggataaaat ctacaateag ccctagaact attcagtggt aattgacaaa gttaaagcat 2655 tttctttgaa aggaagatgg aaggagtgga gtgtggttta gcaaaactgc atttcatage 2715 tttcccatta aattggagca ccgacagatt aaaagcatac caaattatgc atgggtcctt 2775 actcacacaa gtgaggctgg ctaccagcct tgacatagca ctcactagtc ttctggccaa 2835 acgactgtga ttaaaacaca tgtaaattgc tctttagtag tggatactgt gfcaagacaaa 2895 gccaaattgc aaatcaggct ttgattggct cttctggaaa atatgcatca aatatggggg 2955 ataatetgga tgggetgetg ctgtgctcaa tgtgaactat ttagatacct ttggaacact 3015 taaeagttte tctgaacaat gaettacatg gggattggtc ctgtttgtca ttcetcacca 3075 taattgcatt gtcatoacta atoottggat cttgctgtat tgttactcaa attggtaata 3135 ggtaetgatg gaaategcta atggatggat aafcoataaoa cttttggtea catgttttct 3195 cctgcagcct gaaagttctt aaagaaaaag atatcaaatg ectgctgcta ccaccctttt 3255 aaattgctat ctttagaaa» geaecggtat gtgttttaga ttcatttcco tgttttaggg 3315 183 ΕΡ2325648Β1 aaatgacagg cagtagtttc agttctgatg gcaaaacaaa taaaaacatg tttctaaaag 3375 ttgtatcttg aaacactggt gttcaacagc tagcagctaa agtaattcaa cccatgcatt 3435 getagtgtca cagectttgg ttatgtetag tagetgrttte tgaagtattt tcatttatet 3495 tttgtcaaat ttaaccctgt ttgaattctc tcctttcctc aaggagacac ttatgttcaa 3555 agfcgttgafcfc ctttgcctta ggtgcataga gagtagacag tttggagatg gaaaggttag 3615 oagtgaatta geeatatgtt etgtgtfcgga atttgtgcta gcagfcttgag cactagctet 3675 gcgtgcotat gaactgaatg ctgcttgtcc cattceattt tatgtcatgg agaaataatt 3735 ccacttggta acacaaaggc taagttaatg ttattttctg tacagaaatt aaattttaot 3795 tttageottt tgtaaaottt tttttttttt ttccaagccg gtataagcta ctcaaaaeaa 3855 ttctcagata ttcatcatta gacaactgga gtttttgctg gttttgtagc ctactaaaac 3915 tgctgaggct gttgaacatt ccacattcaa aagttttgta ggçftggtgga taatggggaa 3975 gcttcaatgt ttattttaaa ataaataaaa taagttcttg acttttctca tgtgtggtta 4035 tggtacatca tattggaagg gttatctgtt tactttfcgcc aagactattt tgccagcacc 4095 tacacttgtg tgctttaaaa gaeaaetace tgggatgtac cacaaecata tgttaattgt 4155 attttattgg gatggataaa atgtttgtçg tttattggat aatccctaga tggtgtgtta 4215 cgtgtgtaga atataatttt afegatagtaa gaaagcaaaa ttgaagaaaa taagtttagt 4275 attgaatttg agttctgaag tgaattcagg gaatgtctca cgttteggge ttctacccaa 4335 agtgtagggc agaaggtgta aaagttgttt gtagtttgaa ttgtttattt tttaagtfcgc 4395 ttattcofctt eaacagcaac atatcattag ctgtcattct aacattgcag ttcfcagtgag 4455 ttttaacgtc tgcattcaag actgttttaa aagcaacctc actggacaga gaactgctaa 4515 agtcttttcc ttaagatctg agtctttgtt actcagtatc ttctataata tgcaaatgct 4575 tgtctagagg eagaagacct tttgtttggt caagtgtgta ttttaccaga gtacagggaa 4635 ctgatggtoo tacatgteto ttagtgfcagt aagactataa aatcttttgt acatgcacaa 4695 ttcacagtat gtttagatac eacgtgtata atgccccccc ctcocccagg tagcatgcca 4755 ttgatgactt tttgcttagg gccattttat taccagggcc ttaatattcc taaaaagatg 4815 attttfctfcte atcctttctc ctcttttgat cattgfcatct tgafcattaaa aacatgacct 4875 tccaatgatt gtagtaaatt aactfcctata gttcttttgt ctctatatgt attcatatat 4935 atgotattgt atagagactt caaggagaca tggagatgca tgcttattct caggttcatt 4995 cactaaggtg cttggcagac aaccagtttc taagtgcaga atgtagttaa gcagcttcat 5055 atatgtgcca ggcaatttgt tttgttaaat tttcatctac ttaaggaaat agggtattgt 5115 agcttaggct gatoatacco ttcatttoaa ccttaagctc tcaacctgca tccatccgac 5175 ttgagctatt aagtacttta gttttatcga gtataagtta acagaaaaag taaattaage 5235 184 ΕΡ2325648Β1 tttgccttta ctattttgaa tttatataca ttctggaaaa acttagaaac tgttgtatat 5295 ttoattagat taaattafcat gaaaatgtga ttgtttatag caaagcctgt gagttgeata 5355 caccctaagg aaaactcctt aagtgctcct tgaagagaga agaaacaatt ctgggtctçg 5415 tatttttaag aacaaagcta gactactgta tgttagcact gtacattaat agtctgttgt 5475 gaagcttgag cagtttcctg catagccttg atccttcacc gttggoattg aaaatagcag 5535 tateeetgat gtacttaaaa ottaaagtaa ggttttggta tatttatttg taagtcttaa 5595 tttcctotaa atactatatc tctttagcga gacaacctga aatttattag cacatttggg 5655 tatctcttgc ttggcattat ggccagtgtt aactatteag tggtgaaaaa attacccctc 5715 aagacactgg agtgacccca gatgtgtgta gtaagtggca tggttcaact gtgtggttaa 5775 tgataaatat atgacttagt cggtatgatc tggaaagact tgattgaaag ataattcagc 5835 tgacataagg atgagtgagg agtggeaaae tggataaaag agtcaagaga cctgtattcc 5895 agtgactcct gttttgttta agcattagca agafcctgtet ggggaaactg gatagggcag 5955 ttttcttcca tgtttagttt ttgtcteaac atttggaagc tattgaaggt tttaaaatgg 6015 tgrtgtattgt ttttttttgg ggggggggtg gccagaatag tgggtcatct aataaaactg 6075 ccatttaaaa gatcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 6114

<210> 24 <211> 698 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 24 185 ΕΡ2325648Β1

Met Pro Ser Ala Thr Ser His Ser Gly Ser Gly Ser Lys ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro Ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin Hie Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin 35 40 45

Thr Glu Ala Met Lys Gin Zle Leu Gly Vai Xle Aap Lys Lys Leu Arg 50 55 60

Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ale Vai ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110 186 ΕΡ2325648Β1

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys Thr Ile Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

Lys Thr Vai Leu Glu Leu Gin Tyr vai Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp 145 150 155 160

Asp val Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly vai Pro ile Leu 165 170 175

Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Het Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205

Ser Ile His Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu Ile Val Glu Arg Val Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin val Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val' Glu 275 280 285

Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr Val Glu 305 310 315 320

Val Val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335

Pro Glu Pro His Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350

Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365 187 ΕΡ2325648Β1

Asn Pha He Gin Thr Leu Asp pro Ala ile vai Ser Ala Gin Pro Met 370 375 380

Asn Pro Thr Gin Asn Met Asp Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Gin Vai 38S 390 395 400

His Ser Glu Ser Arg Leu Ala Gin Ser Aan Gin Vai Pro Vai Gin Pro 405 410 415

Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr 420 425 430

Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro 435 440 445

Gin Lys Glu Pro Met Aep Gin He Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr 450 455 460

Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin 465 470 475 480

Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly He Asn 485 490 495

Vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr vai Phe Asn Met Asn 500 505 510

Ala Pro vai Pro Pro Ala Asn Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin ser 515 520 525

Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Bis Gin 530 535 540

Vai Glu Gin Thr Glu Leu Gin Gin Asp Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly 545 550 555 560

Thr Tyr His Gly Ser Gin Asp Gin Pro His Gin Vai Pro Gly Asn His 565 570 575

Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro 580 585 590

Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg 595 600 605

Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly 610 615 620

Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro Asn Ser Gly Tyr 188 ΕΡ2325648Β1 625 630 635 640

Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala Pro Arg Aap Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg 645 650 655

Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe l>ys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro 660 665 670

Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg Pro Asn Arg Gly 675 680 685

Het Pro Gin Met Asn Thr Gin Gin Vai Asn 690 695 <210> 25 <211> 3548 <212> ADN <213> Mus musculus <22 0> <221> CDS <222> <223> (179) . . (2257 <4 0 0> 25 189 ΕΡ2325648Β1 gctggotggc taagtccctc oggggacagg gcgaagcggc ccacccttgc ccccctcggc ccgcgccggc tcttgtocca ctaggagcag ctgcgcccac ggagcgcacg tctotgttct tgeccactee agacgtccag cggctccgcg ctcagagccg oaacgcagca cgcgcacg 60 120 178 atg ccc tcg gcc acc age cac age gga age ggc age aaa tcg tcg gga 226 Met 1 Pro Ser Ala Thr 5 Ser His Ser Gly Ser 10 Gly Ser Lys Ser Ser 15 Gly ccg ccg ccg ccg tcc ggt tcc tcc 999 agt gag gcg gcg gcc 999 gca 274 Pro Pro Pro Pro 20 Ser Gly Ser Ser Gly 25 Ser Glu Ala Ala Ala 30 Gly Ala gct gog ccg gct tct cag cat ccg gca acc ggc acc ggc gcc gtc cag 322 Ala Ala Pro 35 Ala Ser Gin His Pro 40 Ala Thr Gly Thr Gly 45 Ala Val Gin acc gag gcc atg aag cag att ctc ggc gta ate gac aag aaa ctt cgg 370 Thr Glu 50 Ala Met Lys Gin lie 55 Leu Gly Val Ile Asp 60 Lys Lys Leu Arg aac ctg gag aag aaa aag ggt aaa ctt gat gat tac Cag gaa cga atg 418 Asn 65 Leu Glu Lys Lys Lys 70 Gly Lys Leu Asp ASp 75 Tyr Gin Glu Arg Met 80 aat aaá 999 gaa agg ctc aat caa gao cag ctg gat gcc gta tct aag 466 Asn Lys Gly Glu Arg 85 Leu Asn Gin Asp Gin 90 Leu Asp Ala val Ser 95 Lys tac cag gaa gtc aca aat aat ttg gag ttt gca aag gaa tta cag agg 514 Tyr Gin Glu vai 100 Thr Asn Asn Leu Glu 105 Phe Ala Lys Glu Leu 110 Gin Arg açft ttc atg gca tta agt caa gat att cag aaa aca ata aag aag aca 562 190 ΕΡ2325648Β1

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys Thr Ile Lys Lys Thr 115 120 125 gea cgt cgg gaa cag ctt atg aga gaa gaa gea gaa cag aag ege tta 610 &la Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140 aaa act gta ott gag tta cag tat gta ttg gat aag ctg gga gat gat 658 Lys Thr Val Leu Glu Leu Gin Tyr Val Leu Asp Lys Leu Gly Aap Asp 145 150 155 160 gat gtg aga aca gat ctg aaa caa ggt ttg agt gga gtg cca ata ttg 706 Aap vai Arg Thr Asp Leu Lys Gin Gly Leu Ser Gly val Prc Ile Leu 155 170 175 tct gag gag gag ttg tca ttg ctg gat gag ttc tac aag ctc gta gat 754 Ser Glu Glu Glu Leu Ser Leu Leu ASp Glu Phe Tyr Lys Leu Val Asp 180 185 190 cct gag cgt gac atg agt tta agg tta aat gag cag tat gaa cat gee 802 Pro Glu Arg Aap Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 205 tca att cac ttg tgg gat ttg ctg gaa ggg aaa gaa aag cot gtg tgt 850 Ser !le HiS Leu Trp Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Val Cys 210 215 220 «9» aca acc tat aaa gct cta aag gaa att gtt gag cgt gtt ttc cag 898 Gly Thr Thr Tyr Lys Ala Leu Lys Glu rie Val Glu Arg Val Phe Gin 925 230 235 240 toa aac tac ttt gat age act cac aat cat caa aat ggg ttg tgt gag 946 Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu 245 250 255 gag gaa gag gcg gct tca gcg ccc aca gtg gag gac cag gta gct gaà 994 Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Thr Val Glu Asp Gin Val Ala Glu 260 265 270 gct gaa cct gag cca gcg gaa gaa tac aca gag caa agt gag gtt gaa 1042 Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu 275 280 285 tca aca gag tat gtc aat agg cag ttc atg gea gaa aca cag ttc age 1090 Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300 agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca gtt gaa aca gtt gag 1138 Ser Gly Glu Lys Glu Gin Val Asp Glu Trp Thr Val Glu Thr val Glu 305 310 315 320 gtt gta aac tca ctc cag cag caa cct cag gct gcg tcc cct tca gtc 1186 Vai val Asn Ser Leu Gin Gin Gin Pro Gin Ala Ala Ser Pro Ser Val 325 330 335 cea gag ccc cae tct ttg act cca gtg gct cag tca gat cca ctt gtg 1234 Pro Glu Pro Bis Ser Leu Thr Pro Val Ala Gin Ser Asp Pro Leu Val 340 345 350 aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gea caa atg caa ggg ccc tat 1282 Arg Arg Gin Arg Val Gin Asp Leu Hat Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr 355 360 365 aat tto ata cag gat tca atg ttg gat ttt gaa aat cag aag ctt gat 1330 Aaa Phe Ile Gin Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp 191 ΕΡ2325648Β1 370 375 380 cct gcc att gta tcc gca cag cct atg aac cet acc eag aac atg gat 1378

Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro Thr Gin Aen Hat Asp 385 390 395 400 atg cct cag ctg gtt tgo cct cag gtt cat tct gaa tct aga ctt gcc 1426

Met Pro Gin Leu Vai Cye Pro Gin Vai His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410 415 caa tct aat caa gtt cct gta caa cca gaa gcc aca cag gtt cct ttg 1474

Gin Ser Aen Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu 420 425 430 gtt tca tcc aca agt gag ggg tat aca gca tct cag ccc ttg tac cag 1522 vai Ser Ser Thr Ser Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Leu Tyr Gin 435 440 445 cca tct cat gct acg gag cag cgg ccg cag aaa gag cca atg gat cag 1570

Pro Ser Hls Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lye Glu Pro Met Asp Gin 450 455 460 att cag gca aca ata tct ttg aat aca gac cag act aca gca tcc tca 1618

Ile Gin Ala Thr Ile Ser Leu Asn Thr Asp Gin Thr Thr Ala Ser Ser 465 470 475 480 tcc ctt cct gct gct tct cag cct caa gtg ttc cag gct ggg aca agt 1666

Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Thr Ser 485 490 495 aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat gca gct cca ttc cag 1714

Lye Pro Leu Hls Ser Ser Gly Ile Asn Vai Aan Ala Ala Pro Phe Gin 500 5Φ5 510 tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gct cca gto cct cct gct aat 1762

Ser Met Gin Thr vai Phe Asn Met Asn Ala Pro vai Pro Pro Ala Asn 515 520 525 gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tac cag gcc act tat aac 1810

Glu Pro Glu Thr Leu Lys Gin Gin Ser Gin Tyr Gin Ala Thr Tyr Asn 530 535 540 cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa caa aca gag ctt caa 1858

Gin Ser Phe Ser Ser Gin Pro Hls Gin Vai Glu Gin Thr Glu Leu Gin 545 550 555 560 caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac cat gga tcc cag gac 1906

Gin Asp Gin Leu Gin Thr Vai Vai Gly Thr Tyr Hls Gly Ser Gin Asp 565 570 575 cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa ccc cca cag cag aac 1954

Gin Pro His Gin Vai Pro Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn 580 585 590 act ggc ttt cca cgt aga agt cag aat tat tac aaa agt cgt ggg gta 2002

Thr Gly Phe Pro Arg Ser Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai 595 600 605 tct cga gga ggg tct cgt ggt gcc aga ggc ttg atg aat gga tac agg 2050

Ser Arg Gly Gly Ser Arg Gly Ala Arg Gly Leu Met Aan Gly Tyr Arg 610 615 620 ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat ggt tac ege cct tca 2098

Gly Pro Ala Asn Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser 625 630 635 640 192 ΕΡ2325648Β1 ttc tcg aac act cca aac agt ggt tat tca cag tct cag tto act gct 2146

Phe Ser Asn Thr Pro Aen Ser Gly Tyr Ser Gin Ser Gin Phe Thr Ala 645 650 655 cee cgg gac tac tct ggt tac cag cgg gat gga tat cag cag aat ttc 2194

Pro Arg Asp Tyr Ser Gly Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe 660 665 670 aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga gcc cca cga ggt aat 2242 lya Arg Gly Sar Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 ata ttg tgg tgg tga tcctagctcc tatgtggagc ttctgttctg gccttggaag 2297 lie Leu Trp Trp 690 aactgttcat agtccgcatg taggttacat gttaggaata catttatctt ttccagactt 2357 gttgctaaag attaaatgaa atgctctgtt tctaaaattt catcttgaat ccaaatttta 2417 atttttgaat gactttccct getgttgtct tcaaaatcag aacattttct ctgcctcaga 2477 aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt tcaggtctta aaacctgcta aatgttttta 2537 ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa cgagcttgaa catttatata 2597 aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat atttaggctg agaagccctt 2657 caaatggcca ga .taagccac agttttagct agagaaccat ttagaattga cataactaat 271? ctaaacttga acacttttag gaccaatgtt agtgttctaa ataccaacat atttctgatg 2777 tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat taaaatttag aatgacaagc 2837 ttaagaggct ttagtttcat ttgtttttca agtaatgaaa aataatttot tacatgggca 2897 gàtagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg taatctgatg ttctaaatgg 2957 ttctcttatt gaaggaggtt aaagaattag gtttcttaca gtttttggcrt ggccatgaca 3017 tgtataaaat gtatattaag gaggaattat aaagtacttt aatttgaatg ctagtggcaa 3077 ttgatcatta agaaagtact ttaaagcaaa aggttaatgg gtcatctggg aaaaatactg 3137 aagtatcaaa ggtatttgca tgtgaatgtg ggttatgttc ttctatccca ccttgtagca 3197 tattctatga aagttgagtt aaatgatagc taaaatatct gtttcaacag catgtaaaaa 3257 gttattttaa ctgttacaag tcattataca attttgaatg ttctgtagtt tctttttaac 3317 agtttaggta caaaggtctg ttttcattct ggtgcttttt attaattttg atagtatgat 3377 gtcacttcct attgaaatgt aagctagcgt gtaccttaga atgtgagctc catgagagca 3437 ggtaccttgt ttgtcttcac tgctgtatct attcccaacg octcatgaca gtgcctggca 3497 catagtaggc actcaataaa tacttgttga atgaatgaaa aaaaaaaaaa a 3548

<210> 26 <211> 692 <212> PRT <213> Mus musculus 193 ΕΡ2325648Β1 <4Ο0> 26 194 ΕΡ2325648Β1

Met Pxo Ser Ala Thr Ser Hia Sor Gly Ser Gly Ser lys Ser Ser Gly 15 10 15

Pro Pro Pro Pro ser Gly Ser Ser Gly Ser Glu Ala Ala Ala Gly Ala 20 25 30

Ala Ala Pro Ala Ser Gin His Pro Ala Thr Gly Thr Gly Ala Vai Gin 35 40 45

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Asn Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Met 65 70 75 80

Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys 85 90 95

Tyr Gin Glu Vai Thr Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg 100 105 110

Ser Phe Met Ala Leu Ser Gin Asp Ile Gin Lys Thr Xle Lys Lys Thr 115 120 125

Ala Arg Arg Glu Gin Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu 130 135 140

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Ser Glu Glu Glu l«eu Ser Leu Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu vai Asp 180 185 190

Pro Glu Arg Asp Met Ser Leu Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu His Ala 195 200 20S

Ser Ile His Leu Trp Asp Leu leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys 210 215 220

Gly Thr Thr Tyr Lya Ala Leu Lya Glu Ile vai Glu Arg vai Phe Gin 225 230 235 240

Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr Bis Asn His Gin Asn Gly leu Cys Glu 245 250 255 195 ΕΡ2325648Β1

Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Tbr Vai Glu Aap Gin Vai Ala Glu 260 265 270

Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu GLu Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Vai Glu 275 2S0 285

Ser Thr Glu Tyr vai Aen Arg Gin Phe Hat Ala Glu Thr Gin Phe Ser 290 295 300

Ser Gly Glu Lya Glu Gin Vai Aap Glu Trp Thr Vai Glu Thr vai Glu 305 310 315 320

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Pro Ala Xle Vai Ser Ala Gin Pro Hat Aen Pro Thr Gin Asn Met Aap 385 390 395 400

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Gin Ser Asn Gin vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu 420 425 430

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Ser Met Gin Thr Vai Phe Aen Met Aan Ala Fro Vai Pro Pro Ala Aan 515 520 525

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Gin ser Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr vai Asn Arg Gin Phe Het Ala 285 290 295 gaa aca cag ttc age agt ggt gag aag gag caa gtg gat gag tgg aca 1083

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Ala Ser Pro Ser vai Pro Glu Pro Hls Ser Leu Thr Pro Vai Ala Gin 335 340 345 tca gat cca ctt gtg aga agg cag cgt gta caa gat ctt atg gca caa 1227

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Met Gin Gly Pro Tyr Aan Phe ile Gin Aep Ser Met Leu Aap Phe Glu 365 370 375 aat cag acg ctt gat cct gee att gta tcc gca cag cct atg aac cct 1323

Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala Ile Vai Ser Ala Gin Pro Met Asn Pro 380 385 390 395 acc cag aac atg gat atg cct cag ctg gtt tgc cct cag gtt cat tet 1371

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Thr Thr Ala Ser Ser Ser Leu Pro Ala Ala Ser Gin Pro Gin Vai Phe 480 485 490 cag gct ggg aca agt aaa cct ttg cac age agt gga ate aat gta aat 1659

Gin Ala Gly Thr Ser Lys Pro Leu His Ser Ser Gly Ile Asn Vai Asn 495 500 505 gca gct cca ttc cag tcc atg caa acg gtg ttc aat atg aat gct cca 1707

Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai Phe Aen Met Asn Ala Pro 510 515 520 200 ΕΡ2325648Β1 gtc cct cct gct aat gaa cca gaa acg tta aaa caa cag agt cag tac 1755 vai Pro 525 Pro Ala Asn Glu Pro 530 Glu Thr Leu lys Gin 535 Gin Ser Gin Tyr cag gcc act tat aac cag agt ttt tcc agt cag cct cac caa gtg gaa 1803 Gin Ala 540 Thr Tyr Aen Gin 545 Ser Phe Ser Ser Gin 550 Pro His Gin val Glu 555 caa aca gag ctt caa caa gac caa ctg caa acg gtg gtt ggc act tac 1851 Gin Thr Glu Leu Gin S60 Gin Asp Gin teu Gin 565 Thr Val val Gly Thr 570 Tyr cat gga tcc cag gac cag cct cat caa gtg cct ggt aac cac cag caa 1899 Bia Gly Ser Gin 575 Aap Gin Pro Bla Gin 580 Val Pro Gly Asn Hls 5B5 Gin Gin cco eea cag cag aac act ggc ttt cca cgt age agt cag cct tat tac 1947 Pro Pro Gin 590 Gin Aen Thr Gly Phe 595 Pro Arg Ser Ser Gin 600 Pro Tyr Tyr aae agt cgt 999 gta tct cga gga ggg tct cgt ggt gcc aga ggc ttg 1995 Aen Ser 60S Arg Gly Vai Ser Arg 610 Gly Gly Ser Arg Gly 615 Ala Arg Gly Leu atg aat gga tac agg ggc cct gcc aat gga ttt aga gga gga tat gat 2043 Met Aen 620 Gly Tyr Arg Gly 625 Pro Ala Aen Gly Phe 630 Arg Gly Gly Tyr Asp 635 ggt tac cgc cct tca ttc tcg aac act cca aac agt ggt tat tca cag 2091 Gly Tyr Arg Pro Ser 640 Phe Ser Aen Thr Pro 645 Aen Ser Gly Tyr Ser 650 Gin tct cag ttc act gct ccc cgg gac tac tct ggt tac cag cgg gat gga 2139 Ser Gin Phe Thr 655 Ala Pro Arg Aap Tyr 660 Ser Gly Tyr Gin Arg 665 Asp Gly tat cag cag aat ttc aag cga ggc tct ggg cag agt gga cca cgg gga 2187 Tyr Gin Gin 670 Asn Phe Lye Arg Gly 675 Ser Gly Gin Ser Gly 680 Pro Arg Gly gcc cca Ala Pro 685 cga Arg ggt Gly aat Aan ata Cie ttg Leu 690 tgg Trp tgg Trp tga tcotagctcc tatgtggagc 2237 ttctgttctg gccttggaag aactgttcat agtccgcatg taggttaeat gttaggaata 2297 catttatett ttccagactt gttgctaaag attaaatgaa atgctetgtt tctaaaattt 2357 catcttgaat ccaaatttta atttttgaat gactttccct gctgttgtct tcaaaatcag 2417 aacattttct ctgcctcaga aaagcgtttt tccaactgga aatttatttt tcaggtctta 2477 aaacctgcta aatgttttta ggaagtacct actgaaactt tttgtaagac atttttggaa 2537 cgagcttgaa catttatata aatttattac cctctttgat ttttgaaaca tgcatattat 2597 atttaggctg agaagccctt caaatggcca gataagccac açttttagct agagaaccat 2657 ttagaattga cataactaat ctaaacttga acacttttag çaeeaatgtt agtgttctaa 2717 ataccaacat atttctgatg tttaaacaga tctcccaaat tcttaggacc ttgatgtcat 2777 taaaatttag aatgacaagc ttaagaggct ttaçtttcat ttgtttttca agtaatgaaa 2837 aataatttct tacatgggea gatagttaat ttgttgaaca attacaggta gcatttcatg 2897 201 ΕΡ2325648Β1

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Asn Lys Gly Glu Arg Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys 85 90 95

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Met Pro Gin Leu Vai Cys Pro Gin Vai His Ser Glu Ser Arg Leu Ala 405 410- 415

Gin Ser Asn Gin Vai Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu 420 425 430

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Pro Ser His Ala Thr Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Pro Met Aap Gin 450 455 460

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Lys Arg Gly Ser Gly Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Asn 675 680 685 lie Leu Trp Trp 690 <210> 29 <211> 2109 <212> ADN <213> Gallus gallus <22 0> <221> CDS <222> (1) . . (2109) <223> <4 0 0> 29 206 ΕΡ2325648Β1 atg ccc teg gct acc aac ggc acc atg gcg age age aga ggg aag gcg 48 Met 1 Pro Ser Ala Thr 5 Asn Gly Thr Met Ala 10 Ser Ser Ser Gly Lye 15 Ala qqa ccg ggc ggc aac gag cag gee ccg gcg «cg gea gcg gcg gee ccg 96 Gly Pro Gly Gly 20 Asn Glu Gin Ala Pro 25 Ala Ala Ala Ala Ala 30 Ala Pro cag geg teg ggc ggc age ate acc teg gtt cag acc gag gee atg aag 144 Gin Ala Ser 35 Gly Gly Ser Ile Thr 40 Ser Val Gin Thr Glu 45 Ala Met Lys cag ate ttg gga gtg ate gac aaa aag ctc ege aac ctc gag aag aaa 192 Gin Ile 50 Leu Gly Vai Xle Asp 55 Lys Lya Leu Arg Asn 60 Leu Glu Lys Lys aag age aaa ctt gac gat tac cag gaa cga atg aac aag ggg gaa cgt 240 Lye 65 Ser Lya Leu Asp Asp 70 Tyr Gin Glu Arg Met 75 Asn Lys Gly Glu Arg 80 cta aat caa gat caa ctg gat gea gtg tea aaa tac cag g« gtg aca 288 Leu Asn Gin Aap Gin 85 Leu Asp Ala Val Ser 30 Lys Tyr Gin Glu Val 95 Thr aat aac ctg gaa ttc gct aaa gaa ctg cag agg age ttt atg gea ctg 336 Asn Asn Leu Glu 100 Phe Ala Lya Glu Leu 105 Gin Arg Ser Phe Met 110 Ala Leu age caa gat ate cag aaa aca ata aaa aag acg gct ege agg gag cag 384 Ser Gin Asp 115 Ile Gin Lya Thr Ile 120 Lys Lys Thr Ala Arg 125 Arg Glu Gin ctg atg aga gaa gag gct gag cag aag cgt tta aag act gtg cta gag 432 Leu Met 130 Arg Glu Glu Ala Glu 135 Gin Lys Arg Leu Lys 140 Thr val Leu Glu ctg cag ttc att ttg gac aag ttg ggt gac gat gaa gtg ege agt gac 480 Leu 145 Gin Phe Ile Leu Asp 150 Lya Leu Gly Aap Aap 155 Glu Val Arg Ser Asp 160 ttg aaa caa gga tea aat gga gta ccg gta ctg aca gag gag gaa ctg 528 Leu Lye Gin Gly ser Asn Gly vai Pro val Leu Thr Glu Glu Glu Leu 207 ΕΡ2325648Β1 165 170 175 aca atg ctg gat gaa ttt tac aag cta gtt tao cct gaa agg gac atg 576

Thr Met Leu Aep Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Tyr Pro Glu Arg Asp Hat 180 185 190 aae atg agg ttg aat gag cag tat gag eaa gaa tet gtt cae ctg tgg 624

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser vai His Leu irp 195 200 205 gao tta etg gaa ggg aag gaa aaa cco gtt tgt gga aca aaa tat aaa 672

Aep Leu Leu Glu Gly Lye Glu Lys Pro Vai Cys Gly Thr xhr Tyr Lys 210 215 220 gce ctg aag gag gtt gtt gaa cgt att ctt caa act agt tac ttt gat 720

Ala Leu Lys Glu Vai Vai Glu Arg ile Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Aep 225 230 235 240 age acc cat aae cat cag aae ggg tta tgt gag gaa gaa gag gea gea 768

Ser Thr His Asn His Gin Asn Gly Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255 ccc aca cot gea gta gaa gac act gta gea gaa get gag cct gat cca 816

Pro Thr Pro Ala Vai Glu Asp Thr Vai Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270 gea gaa gaa ttt act gaa cct act gaa gtt gaa teg act gag tat gta 864

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai 275 280 285 aae aga caa tte atg gea gag act cag tteage agt agt gag aag gaa 912

Asn Arg Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 290 295 300 eag gta gat gag tgg aca gtt gaa aeg gtt gag gtt gta aat tea ctg 960

Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu 305 310 315 320 cag caa caa aca caa gct aca tet cet cca gtt cct gaa cct cat aca 1008

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr Ser Pro Pro Vai Pro Glu Pro Bis Thr 325 330 335 ctc act act gtg gct caa gea gat cct ctt gtt aga aga cag aga gta 1056

Leu Thr Thr Vai Ala Sln Ala Asp Pro Leu Vai Arg Arg Gin Arg vai 340 345 350 cag gac ctt atg gee cag atg cag ggt cca tat aae ttc atg cag gac 1104

Gin Aep Leu Met Ala Gin Met Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Met Gin Asp 355 360 365 tet atg ctg gag ttt gag aae cag aca ctt gat cct gee att gta tet 1152

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lie Vai Ser 370 375 380 gea cag ccc atg aat cca gea cag aat ttg gao atg ecg caa atg gtc 1200

Ala Gin Pro Met Asn Pco Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met vai 385 390 395 400 tgc cct cca gtt cat act gag tea aga ctt gee cag cct aat caa gtt 1248

Cya Pro Pro Vai His Thr Glu Ser Arg Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai 405 410 415 cct gtg caa cca gaa gct acg cag gtt ccc ttg gtt tea tet aca agt 1296

Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin Vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser 420 425 430 208 ΕΡ2325648Β1 gag gga tat aca gee tco cag ccc abg tat cag cct tct cat aca aca 1344

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser Hla Thr Thr 435 440 445 gag oaa cgg cca cag aag gaa tcc att gac cag att cag gct tca atg 1392

Glu Gin Arg Pro Gin Lys Glu Ser Ile Asp Gin Ile Gin Ala Ser Met 450 455 460 tca ctg aat gca gac cag acc ccg tca tca tca tca ctt ccc act gca 1440

Ser Leu Aan Ala Asp Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 463 470 475 480 tcc cag ccg caa gtt ttc caa gct gga tct age aaa cct ttg cat age 1498

Ser Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Ser Ser Lys Pro Leu Hia Ser 485 490 495 age gga ate aat gtt aat gca gct cca ttc aaa tco atg oaa aaa gba 1536

Ser Gly Ile Asn Vai Aan Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr Vai 500 505 510 ttc aac atg aat gca cct gtt cct cct gtt aat gag cca gaa gca ctt 1584

Phe Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525 aag caa caa aat cag tac cag gee agt tac aac cag agt ttc tcc aat 1632

Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540 cag cca cac caa gta gaa caa tca gat ctt cag caa gaa cag ctc cag 1680

Gin Pro His Gin Vai Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560 aca gtg gtt ggt act tac cat ggt tct ccg gac cag acc cat caa gtg 1728

Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Vai 565 570 575 gca gga aac cac cag caa cct ccc cag cag aat act gga ttt cca ege 1776

Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590 aac agt cag cct tat tac aac agt cgg gga gtg tct ogt ggt gga tca 1824

Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605 cgt ggg act cgt gga ttg atg aat ggt tac agg gga cot gca aat gga 1872

Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620 ttt aga gga gga tat gat ggc tac cgt cct tca ttt tco aac act ccg 1920

Phe Arg Gly Gly Tyr Aap Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 630 635 640 aac agt ggt tac acg cag ccc caa ttt aat gct cct cga gat tat tca 1968

Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655 aac tac cag cgg gat gga tat cag cag aac ttc aaa cgt ggt tct gga 2016

Asn tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670 caa agt ggg cct cgg gga gct cct cga ggt cgt gga ggg ccc cca aga 2064

Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685 cca aac aga ggg atg cct caa atg aac gct cag caa gtg aat taa 2109

Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Vai Asn 690 695 700 <210> 30 209 ΕΡ2325648Β1

<211> 702 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 30

Met Pro Ser Ala Thr Aan Gly Thr Met Ala Ser Ser Ser Gly Lys Ala 15 10 15

Gly Pro Gly Gly Asn Glu Gin Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro 20 25 30

Gin Ala Ser Gly Gly Ser Ile Thr Ser Vai Gin Thr Glu Ala Met Lys 35 40 45

Gin Ile Leu Gly Vai Ile Asp Lys Lys Leu Arg Asn Leu Glu Lys Lys 50 55 60

Lys Ser Lys Leu Asp Asp Tyr Gin Glu Arg Hat Asn Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80

Leu Asn Gin Asp Gin Leu Asp Ala Vai Ser Lys Tyr Gin Glu Vai Thr 85 90 95

Asn Asn Leu Glu Phe Ala Lys Glu Leu Gin Arg Ser Phe Met Ala Leu 100 105 110

Ser Gin Asp Ile Gin Lys Thr Ile Lys Lys Thr Ala Arg Arg Glu Gin 115 120 125

Leu Met Arg Glu Glu Ala Glu Gin Lys Arg Leu Lys Thr Vai Leu Glu 130 135 140

Leu Gin Phe Ile Leu Asp Lys Leu Gly Asp Asp Glu vai Arg Ser Asp 145 150 155 160

Leu Lys Gin Gly Ser Asn Gly Vai Pro Vai Leu Thr Glu Glu Glu Leu 165 170 175

Thr Met Leu Asp Glu Phe Tyr Lys Leu Vai Tyr Pro Glu Arg Asp Met 180 185 190

Asn Met Arg Leu Asn Glu Gin Tyr Glu Gin Ala Ser Vai Kis Leu Trp 195 200 205

Asp Leu Leu Glu Gly Lys Glu Lys Pro Vai Cys Gly Thr Thr Tyr Lys 210 ΕΡ2325648Β1 210 215 220

Ala Leu Lys Glu Vai Vai Glu Ar? Ile Leu Gin Thr Ser Tyr Phe Asp 225 230 235 240

Ser Thr Hie Aan Ris Gin Agn Gly Leu Cya Glu Glu Glu Glu Ala Ala 245 250 255

Pro Thr Pro Ala Vai Glu Aep Thr vai Ala Glu Ala Glu Pro Asp Pro 260 265 270

Ala Glu Glu Phe Thr Glu Pro Thr Glu Vai Glu Ser Thr Glu Tyr Vai 275 280 285

Aan Ar? Gin Phe Met Ala Glu Thr Gin Phe Ser Ser Ser Glu Lys Glu 280 295 300

Gin Vai Asp Glu Trp Thr Vai Glu Thr Vai Glu Vai Vai Asn Ser Leu 305 310 315 320

Gin Gin Gin Thr Gin Ala Thr ser Pro Pro vai Pro Glu Pro Hie Thr 325 330 335

Leu Thr Thr Vai Ala Gin Ala Asp Pro Leu Vai Ar? Ar? Gin Ar? Vai 340 345 350

Gin Asp Leu Met Ala Gin Hat Gin Gly Pro Tyr Asn Phe Hei: Gin Asp 355 360 365

Ser Met Leu Glu Phe Glu Asn Gin Thr Leu Asp Pro Ala lia vai Ser 370 375 380

Ala Glu Pro Met Asn Pro Ala Gin Asn Leu Asp Met Pro Gin Met Vai 385 390 395 400

Cys Pro Pro Vai Hie Thr Glu Ser Ar? Leu Ala Gin Pro Asn Gin Vai 405 410 415

Pro Vai Gin Pro Glu Ala Thr Gin vai Pro Leu Vai Ser Ser Thr Ser 420 425 430

Glu Gly Tyr Thr Ala Ser Gin Pro Met Tyr Gin Pro Ser Hie Thr Thr 435 440 445

Glu Gin Ar? Pro Gin Lys Glu Ser ile Asp Gin Ile Gin Ala ser Met 450 455 460

Ser Leu Asn Ala Aap Gin Thr Pro Ser Ser Ser Ser Leu Pro Thr Ala 465 4?0 475 480 211 ΕΡ2325648Β1

Sec Gin Pro Gin Vai Phe Gin Ala Gly Ser Ser lys Pro Leu HiS Ser 485 490 49S Ser Gly Ile Asn vai Asn Ala Ala Pro Phe Gin Ser Met Gin Thr vai 500 505 510 Phe Asn Met Asn Ala Pro Vai Pro Pro Vai Asn Glu Pro Glu Ala Leu 515 520 525 Lys Gin Gin Asn Gin Tyr Gin Ala Ser Tyr Asn Gin Ser Phe Ser Asn 530 535 540 Gin Pro His Gin Vai Glu Gin Ser Asp Leu Gin Gin Glu Gin Leu Gin 545 550 555 560 Thr Vai Vai Gly Thr Tyr His Gly Ser Pro Asp Gin Thr His Gin Vai 565 570 575 Ala Gly Asn His Gin Gin Pro Pro Gin Gin Asn Thr Gly Phe Pro Arg 580 585 590 Asn Ser Gin Pro Tyr Tyr Asn Ser Arg Gly Vai Ser Arg Gly Gly Ser 595 600 605 Arg Gly Thr Arg Gly Leu Met Asn Gly Tyr Arg Gly Pro Ala Asn Gly 610 615 620 Phe Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Tyr Arg Pro Ser Phe Ser Asn Thr Pro 625 • 630 635 640 Asn Ser Gly Tyr Thr Gin Pro Gin Phe Asn Ala Pro Arg Asp Tyr Ser 645 650 655 Asn Tyr Gin Arg Asp Gly Tyr Gin Gin Asn Phe Lys Arg Gly Ser Gly 660 665 670 Gin Ser Gly Pro Arg Gly Ala Pro Arg Gly Arg Gly Gly Pro Pro Arg 675 680 685 Pro Asn Arg Gly Met Pro Gin Met Asn Ala Gin Gin Vai Asn 690 695 700 <210> 31 <211> 20 <212> ADN 212 ΕΡ2325648Β1 <213> Artificial <22 0> <223> cebador T3 <4 0 0> 31 aattaaccct cactaaaggg 20 <210> <211> <212> <213> 32 19 ADN Artificial <22 0> <223> cebador T7 <4 0 0> 32 taatacgact cactatagg 19 <210> <211> <212> <213> 33 18 ADN Artificial <22 0> <223> cebador <4 0 0> 33 aaggtttgaa tggagtgc 18 <210> <211> <212> <213> 34 18 ADN Artificial <22 0> <223> cebador <4 0 0> 34 tgctcctttt caccactg 18 <210> <211> <212> <213> 35 18 ADN Artificial 213 ΕΡ2325648Β1 <22 0> <223> cebador GAPDH <4 0 0> 35 gggctgcttt taactctg 18 <210> <211> <212> <213> 36 18 ADN Artificial <22 0> <223> cebador GAPDH <4 0 0> 36 ccaggaaatg agcttgac 18 <210> <211> <212> <213> 37 27 ADN Artificial <22 0> <223> cebador <400> 37 catatggcat taagtcaaga tattcag <210> <211> <212> <213> 38 23 ADN Artificial <22 0> <223> cebador <4 0 0> 38 ggtacctttg cggcatccct ctg 23 <210> <211> <212> <213> 39 21 ADN Artificial <22 0> <223> cebador ΕΡ2325648Β1 <4Ο0> 39 catatgccgt cggccaccag c21 <210> <211> 40 22 <212> <213> ADN Artificial <22 0> <223> cebador <4 0 0> 40 ggtaccattc acttgctgag tg 22 <210> <211> <212> <213> 41 23 ADN Artificial <22 0> <223> cebador <4 0 0> 41 gagctcatgc cctcggccac cag 23 <210> <211> <212> <213> 42 23 ADN Artificial <22 0> <223> cebador <4 0 0> 42 ctcgagttaa ttcacttgct gag 23 <210> <211> <212> <213> 43 14 PRT Homo sapiens <4 0 0> 43

Arg Aen Leu Glu Lys Lys Lys Gly Lys Leu Asp Asp Tyr Gin 1 5 10 215 ΕΡ2325648Β1

<210> 44 <211> 148 <212> PRT <213> Mus musculus <4Ο0> 44

Met Glu Trp Ser Gly Vai Phe Ile Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly 15 10 15

Vai Leu Ser Glu vai Qln Leu His Gin Phe Gly Ala Glu Leu Vai Lys 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Vai Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr Asp Tyr Asn Met Asp Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu 50 55 60

Glu Trp Ile Gly Asp Ile Asn Pro Aan Tyr Asp Ser Thr Ser Tyr Asn 65 70 75 80

Gin Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Vai 100 105 HO

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Arg Ser Tyr Asp Tyr Glu Gly Phe Ala Tyr 115 120 125

Trp Gly Gin Gly Thr Leu vai Thr Vai Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro 130 135 140

Pro Ser Vai Tyr 145

<210> 45 <211> 132 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 45 216 ΕΡ2325648Β1

Ala Vai Leu Arg Cys Sec Arg Gly Leu Leu Vai Ile Trp lie Ser Asp 1 5 10 15

Ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ala Vai Thr Ala Gly Glu 20 25 30

Lys Vai Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Trp Ser Vai 35 40 45

Asn Gin Lys Aan Tyr Leu Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Gin Arg Gin Pre 50 55 £0

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ile Arg Glu Ser Trp Vai Pro 65 70 75 80

Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 85 90 95

Ser Asn Vai His Ala Glu Asp Leu Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Sis Asn 100 105 110

His Gly Ser Phe Leu Pro Ser Arg Ser Glu Gin Vai Pro Ser Trp Arg 115 120 125

Ser Asn Asn Arg 130

<210> 46 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 46

Arg Thr Thr Ser His Met Asp Ser Asp Ile Gin Leu Thr Gin Ser Pro 15 10 15

Ala Ser Leu Ser Ala Ser vai Gly Glu Thr Vai Thr He Thr Cys Arg 20 25 30

Ala Ser Gly Asn Ile His Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Gin 35 40 45

Gly Lys Ser Pro Gin Leu Leu Vai Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Asp 50 55 60 217 ΕΡ2325648Β1

Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gin Tyr Ser 65 70 75 80

Leu Lys lie Asn Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cye 85 90 95

Gin His Phe Trp Ser Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 100 105 110

Ile Lys Gin Ser Asp 115

<210> 47 <211> 94 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 47

Ser Gly Asp Arg Vai Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser ile Ser 15 10 15

Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Ris Glu Ser Pro Arg Leu 20 25 30

Leu ile Lys Tyr Ala Ser Gin Ser ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe 35 40 45

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Vai 50 55 60

Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Ser Trp 65 70 75 80

Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gin 85 90

<210> 48 <211> 105 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 48 218 ΕΡ2325648Β1

Gly Leu Fhe Cys Set Vai Glu Arg Cya Hie Tyr Gin Leu Gin Ser Ser 1 5 10 15

Gin Asn Leu Leu Set lie Vai Asn Arg Tyr His Tyt Met Ser Gly Aen 20 25 30

Pro Pro Lye Leu Leu Vai Tyr Pro Ala Leu Leu lie Tyr Glu Ala Ser 35 40 45

Cie Thr Lys Ser Cys Vai Pro Asp Arg Phe Thr Arg Ser Gly Ser Gly 50 55 60

Thr Aen Phe Thr Leu Thr Ile Asn Phe vai ais Ala Asp Asp Leu Ile 65 70 75 80

Phe Tyt Tyr Cys-Gin His Asn Arg Gly Ser Phe Leu Pro Ser Ser Set 85 90 95

Vai Gin Vai Pro Arg Arg Arg Ser Asn 100 <210> 49 <211> 100 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 49 219 ΕΡ2325648Β1

Asp Ile leu Gin Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn 15 10 15

Trp Vai Lys Gin Ser His Gly lys Asn leu Glu Trp He Gly Leu Ile 20 25 30

Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Lys Gly Lys 35 40 45

Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu 50 55 60

Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala Ara Trp 65 70 75 80

Gly Vai Trp Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr 85 90 95

Vai Ser Ser Lys 100

<210> 50 <211> 90 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 50

Asp Arg Vai Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asn Vai Arg Thr Ala 1 5 10 15 val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Arg Gin Sar Pro Lys Ala Leu Ile 20 25 30

Tyr Leu Ala Ser Asn Arg Asp Thr Gly Leu Pro Asp Arg Phe Pro Gly 35 40 45

Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile Thr Asn Val Gin Ser 50 55 60

Glu Asp Leu Glu Asp Tyr Phe Cys Leu Gin His Cys Asn Tyr Pro Asn 65 70 75 80

Glu Phe Arg Gly Cys Thr Lys val Pro Ile 85 90 220 ΕΡ2325648Β1 <210> 51 <211> 116 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 51

Leu Gin Glu Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Vai Lys 1 5 10 15

Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met Gin 20 25 30

Trp Vai Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie Gly Ala Ile 35 40 45

Tyr Pro Gly Asp Gly Aap Thr Arg Tyr Thr Gin Lys Phe Lys Gly Lys 50 55 60

Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gin Leu «5 70 75 80

Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cye Ala Arg Gly 85 90 95

Glu Tyr Gly Asn Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr 100 105 no

Vai Ser Ser Asn 115

<210> 52 <211> 100 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 52 221 ΕΡ2325648Β1

Thr Sec Asp Ala Ser Leu Gly Glu Arg vai Thr ile Thr Cys Lys Ala 15 10 15

Ser Gin Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly 20 25 30

Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Vai Asp Gly 35 40 45

Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gin Asp Tyr Ser Leu 50 55 60

Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu 65 70 75 80

Gin Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 85 90 95

Ile Lys Gin Lys 100

<210> 53 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 53 222 ΕΡ2325648Β1

Ala Trp Leu Ser Gin Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys 15 10 15

Asp Thr Tyr Met His Trp Vai Lys Gin Arg pro Glu Gin Gly Leu Glu 20 25 30

Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro 35 40 45

Lys Phe Gin Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr 50 55 60

Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr 65 70 75 80

Tyr Cys Ala Arg Pro Ile His Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Leu Ala Tyr 85 90 95

Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Lys 100 105 <210> 54 <211> 104 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 54 223 ΕΡ2325648Β1

Glu Phe His Ala Vai Ser Leu Gly Gin Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg 15 10 15

Ala Ser Glu Ser Vai Aap Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr 20 25 30

Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro Pro Lya Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser 35 40 45

Asn Leu Glu Ser Gly ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg 50 55 60

Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Vai Glu Ala Asp Asp Vai Ala 65 70 75 80

Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Glu Asp Pro Gly Arg Ser Glu Vai 85 90 95

Vai Pro Ser Trp Arg Ser Asn Lys 100

<210> 55 <211> 109 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 55 224 ΕΡ2325648Β1

Pro Arg Ala Ser Leu Gly Vai Ser Glu Thr Leu Leu Cya Thr Ser Gly 15 10 15

Phe Ibr Phe Thr Asp Tyr Tyr Het Ser Trp vai Arg Gin Pro Pro Gly 20 25 30

Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr 35 40 45

Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg 50 55 60

Asp Asn Ser Gin Ser Ile Leu Tyr Leu Gin Mat Asn Thr Leu Arg Ala 65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Gys Ala Arg Ala Asn Trp Ala Phe Asp 85 90 95

Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Sor Lys 100 105 <210> 56 <211> 94 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 56 225 ΕΡ2325648Β1

Ser Gly Asp Arg Vai Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Xle Ser 15 10 15

Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu 20 25 30

Leu Xle Lys Tyr Ala Ser Gin Ser Ile Ser Gly Xle Pro Ser Arg Phe 35 40 45

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Xle Asn Ser Vai 50 55 60

Glu Thr Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gin Gin Ser Asn Ser Trp 65 70 75 80

Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Xle Lys Gin 85 90

<210> 57 <211> 111 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 57

Pro Ala Cys Leu Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser 15 10 15

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Vai Arg Gin Pro Pro 20 25 30

Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Xle Arg Asn Lys Ala Asn Gly 35 40 45

Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser Vai Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser 50 55 60

Arg Asp Asn Ser Gin Ser Xle Leu Tyr Leu Gin Met Asn Thr Leu Arg 65 70 75 80

Ala Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Leu Leu Tyr 85 90 95

Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser 100 105 110 226 ΕΡ2325648Β1

<210> 58 <211> 102 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 58

Arg Leu Pro Phe Tyr Ser Leu Glu Gin Arg Ala Tbr Ile Ser Tyr Arg 15 10 15

Ala Ser Lys Asn Vai Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn 20 25 30

Gin Gin Lye Pro Gly Gin Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Vai Ser 35 40 45

Aan Leu Glu Ser Gly Vai Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 50 55 ¢0

Thr Asp Phe Thr Leu Aan Ile His Pro Vai Glu Glu Glu Asp Ala Ala 65 70 75 80

Thr Tyr Tyr Cys Gin His Ile Arg Glu Leu Thr Arg ser Glu Leu Vai 85 90 95

Pro Ser Trp Lys Ser Asn 100

<210> 59 <211> 101 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 59 227 ΕΡ2325648Β1

Vai Ser Cys lye Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His 1 S 10 15

Trp Vai lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly leu Glu Trp Ile Gly Met Xle 20 25 30

Asp Pro Ser Asn Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gin lys Phe lys Asp lye 35 40 45

Ala Thr leu Asn Vai Asp lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gin leu 50 55 60

Ser Ser leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly €5 70 75 80 leu Arg His Tyr Trp Tyr Phe Asp vai Trp Gly Gin Gly Thr Thr Vai 85 90 95

Thr vai Ser Ser lys 100 <210> 60 <211> 99 <212> PRT <213> Mus musculus <4 0 0> 60

Thr Ile leu Trp Arg Glu Gly Pro Phe Ser Tyr Arg.Ala Ser lys Ser 15 10 15

Vai Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gin Gin lys Pro 20 25 30

Gly Gin Pro Pro Arg leu leu Ile Tyr leu Vai Ser Asn leu Glu Ser 35 40 45

Gly Vai Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 50 55 60 leu Asn Xle His Pro Vai Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 65 70 75 80

Gin His Xle Arg Glu leu Thr Arg Ser Glu Glu Vai Pro Ser Trp Arg 85 90 95

Ser Asn lys 228 ΕΡ2325648Β1

<210> 61 <211> 58 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61

Val Phe Gin Ser Asn Tyr Phe Asp Ser Thr Hi3 Asn His Gin Asn. Gly 1 5 10 15

Leu Cys Glu Glu Glu Glu Ala Ala Ser Ala Pro Ala Val Glu Asp Gin 20 25 30

Val Pro Glu Ala Glu Pro Glu Pro Ala Glu Glu Tyr Thr Glu Gin Ser 35 40 45

Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg 50 55

<210> 62 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62

Tyr Thr Glu Gin Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg 15 10 15 <210> 63 <211> 11 <212> PRT <213> Homo <400> 63 sapiens

Ser Glu Val Glu Ser Thr Glu Tyr Val Asn Arg 15 10 229 ΕΡ2325648Β1

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição JP 6700000 B [0010] us 17640000 B [0010] us 4000000 A [0010] JP 1600000 A [0010] us 20080075722 A [0017] wo 2005100998 A [0017] wo 2004076682 A [0018] us 2008107668 A [0019] us 2003190640 A [0020] us 2003118599 A [0021] wo 2004097051 A [0022] us 2007154931 A [0023] us 2006019256 A [0024] us 2006069054 A [0025] wo 02092001 A [0026] wo 2008031041 A [0027] wo 2006002378 A [0028] us 6335170 B [0029] wo 2005007830 A [0030] us 2004029114 A [0031] wo 0172295 A [0032] JP 2008202320 A [0160] 230 ΕΡ2325648Β1

Literatura não relacionada com patentes referida na descrição • J Biol Chem., 1995, vol. 270, 20717-20723 [0016] [0017] • J Immunol., 2004, vol. 172, 2389-2400 [0016] [0017] • KARLIN ; ALTSCHUL. Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 1993, vol. 87, 2264-2268 [0049] • ALTSCHUL et al. Nucleic Acids Res., 1997, vol. 25, 3389-3402 [0049] • The Japanese Biochemical Society, Seikagaku Jikken

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Lisboa, 11 de Junho de 2014 231

Claims

ΕΡ2325648Β1 REIVINDICAÇÕES 1. Um método para detetar um cancro, compreendendo medir a expressão de um polipeptídeo com uma reatividade de ligação através de uma reação antigeno-anticorpo a um anticorpo contra uma proteína CAPRINA-1 com qualquer uma das sequências de aminoácidos mostrada nas SEQ. ID N.°s pares 2-30 na Listagem de Sequências, numa amostra de soro, plasma sanguíneo, ascite ou efusão pleural separada de um organismo vivo, em que a expressão do polipeptídeo é medida por imunoensaio de um anticorpo que pode estar contido n amostra de soro, plasma sanguíneo, ascite ou efusão pleural e é induzido in vivo contra o polipeptídeo a ser medido.
2. O método de acordo com a reivindicação 1, em que o polipeptídeo a ser medido é uma proteína CAPRINA-1 com qualquer uma das sequências de aminoácidos mostradas nas SEQ. ID N.°s pares 2-30 ou um polipeptídeo com 85% ou mais de identidade de sequência com a proteína CAPRINA-1.
3. O método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o organismo vivo é um humano, um cão ou um gato.
4. 0 método de acordo com a reivindicação 3, em que o organismo vivo é um cão e o polipeptídeo a ser medido tem uma sequência de aminoácidos mostrada em qualquer uma das SEQ. ID N.°s pares 2-30.
5. O método de acordo com a reivindicação 4, em que o organismo vivo é um cão e o polipeptídeo a ser medido tem a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 6, 8, 10, 12 ou 14. 1 ΕΡ2325648Β1 6. 0 método de acordo com a reivindicação 3, em que o organismo vivo é um humano e o polipeptídeo a ser medido tem a sequência de aminoácidos mostrada na SEQ. ID N.° 2 ou 4. 7. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que o cancro é pelo menos um tipo de cancro selecionado do grupo que consiste em tumor cerebral, carcinoma de células escamosas da cabeça, pescoço, pulmão, útero ou esófago, melanoma, adenocarcinoma do pulmão ou útero, cancro renal, tumor misto maligno, carcinoma hepatocelular, carcinoma das células basais, tumor gengival tipo acantoma, tumor da cavidade oral, adenocarcinoma perianal, tumor do saco anal, adenocarcinoma apócrino do saco anal, carcinoma das células de Sertoli, cancro do vestíbulo vaginal, adenocarcinoma sebáceo, epitelioma sebáceo, adenoma sebáceo, carcinoma das glândulas sudoríparas, adenocarcinoma intranasal, adenocarcinoma nasal, cancro da tiróide, cancro do intestino grosso, adenocarcinoma bronquial, adenocarcinoma, carcinoma ductal, adenocarcinoma mamário, adenocarcinoma mamário tipo composto, tumor misto mamário maligno, adenocarcinoma papilar intraductal, fibrossarcoma, hemangiopericitoma, osteossarcoma, condrossarcoma, sarcoma dos tecidos moles, sarcoma histiocítico, mixossarcoma, sarcoma indiferenciado, cancro do pulmão, mastocitoma, leiomioma cutâneo, leiomioma intraperitoneal, leiomioma, leucemia linfocítica crónica, linfoma, linfoma gastrointestinal, linfoma digestivo, linfoma de células pequenas a médias, tumor adrenomedular, tumor das células granulosas e feocromocitoma. 8. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, compreendendo ainda detetar a malignidade de um cancro com base no facto de que a malignidade do cancro é elevada quando o nível de expressão do polipeptideo é 2 ΕΡ2325648Β1 superior ao de um controlo. 9. 0 método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, compreendendo ainda detetar a progressão do cancro com base no indicador de que a extensão do cancro é avançada quando o nível de expressão do polipeptídeo é superior ao de um controlo. Lisboa, 11 de Junho de 2014 3