PT2321306E

PT2321306E - 3-cianopirrolidinil-fenil-oxazolidinonas como agentes antibacterianos

Info

Publication number: PT2321306E
Application number: PT09772403T
Authority: PT
Inventors: Antonio Guglietta; Montserrat Cano; Albert Palomer
Original assignee: Ferrer Int
Priority date: 2008-07-01
Filing date: 2009-06-29
Publication date: 2012-04-13
Also published as: RU2011103485A; PL2321306T3; CY1112684T1; SI2321306T1; CL2010001589A1; BRPI0913842A2; JP2011526589A; ATE541842T1; EP2321306B1; PE20110161A1; AR072389A1; EP2321306A1; KR20110036601A; CN102112471A; US20110152333A1; AU2009265790A1; ES2381155T3; MX2011000141A; TW201006828A; CA2729491A1

Description

DESCRIÇÃO

3—CIANOPIRROLIDINIL—FENIL—OXAZOLIDINONAS COMO AGENTES

ANTIBACTERIANOS

CAMPO TÉCNICO

Esta invenção refere-se a compostos oxazolidinona antimicrobianos que são activos contra bactérias Gram-positivas e algumas bactérias Gram-negativas, apresentando especificamente uma actividade potente contra estirpes resistentes à linezolida (LNZ-R) de bactérias Gram-positivas e mais especificamente contra bactérias Gram-positivas patogénicas do sistema respiratório.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

As oxazolidinonas são agentes antimicrobianos Gram-positivos. As oxazolidinonas ligam-se à subunidade 50S do ribossoma procariótico, evitando a formação do complexo de iniciação para a sintese proteica. Este é um novo modo de acção. Outros inibidores da sintese proteica ou bloqueiam a extensão polipeptidica ou provocam erros de leitura do ARNm. A linezolida (N-[[(5S)-3-[ 3- fluoro-4- (4-morfolinil) fenil ]-2-oxo-5-oxazolidinil]metil]acetamida), US5688792, é a primeira oxazolidinona antimicrobiana aprovada para uso clínico nos Estados Unidos da América ou em qualquer outro lado. A fórmula estrutural da linezolida é: 1

Linezolida

As concentrações inibitórias mínimas (CIM) variam ligeiramente dependendo do método de medição, laboratório, e à significância atribuídas a ligeiras névoas de bactéria que sobreviveram, mas todos os técnicos consideram que as distribuições de susceptibilidade são estreitas e unimodais com valores de CIM entre 0,5 e 4 yg/mL para estreptococos, enterococos e estafilococos. É retida a totalidade da actividade contra cocos Gram-positivos resistentes a outros antibióticos, incluindo estafilococos resistentes à meticilina e enterococos resistentes à vancomicina. As CIMs são de 2-8 yg/mL para Moraxella, Pasteurella e Bacteroides spp. mas outras bactérias Gram-negativas são resistentes como resultado de actividade endógena de efluxo assim como assimilação apresentada pela membrana celular exterior de bactérias Gram-negativas. A linezolida é indicada para o tratamento de pacientes adultos com as seguintes infecções: infecções de Enterococcus faecium resistentes à vancomicina, incluindo bacteriemia concomitante; pneumonia nosocomial; infecções complicadas da pele e da estrutura da pele; pneumonia adquirida na comunidade, incluindo bacteriemia concomitante; infecções do pé diabético; e infecções não complicadas da pele e da estrutura da pele. 2

Infelizmente, algumas bactérias Gram-positivas tais como Staphylococcus aureus (LNZ-R 432), Haemophylus influenzae (ATCC 49247) , Bacteroid.es fragilis (ATCC 25285) , Moraxella catarrhalis (HC1-78), e Enterococcus faecium (LNZ-R) apresentam uma resistência significativa à linezolida.

Também se conhecem outras oxazolidinonas para o tratamento de infecções microbianas. Por exemplo, WO 2005/054234 descreve feniloxazolidinonas substituídas por piperidino para o tratamento ou a prevenção de infecções microbianas Gram-positivas ou Gram-negativas, incluindo aquelas que resultam de estirpes multirresistentes, por exemplo, estirpes resistentes à linezolida. O pedido de patente internacional WO 96/13502 divulga fenil oxazolidinonas com uma unidade azetidinil ou pirrolidinil com vários substituintes. Estes compostos são agentes antimicrobianos úteis que são eficazes contra diversos patogénios humanos e veterinários, particularmente bactérias Gram-positivas aeróbicas, incluindo alguma actividade contra estafilococos, enterococos e estreptococos multirresistentes.

Apesar de serem conhecidas algumas oxazolidinonas que têm alguma actividade contra bactérias Gram-negativas resistentes à linezolida, continua a haver a necessidade de novos compostos oxazolidinona activos contra estas estirpes, uma vez que algumas delas são a origem de infecções graves e por vezes fatais, tais como sepsia e choque séptico. Existe ainda a necessidade para agentes melhorados contra bactérias Gram-positivas patogénicas do sistema respiratório, tais como Streptococcus pneumoniae, Haemophylus influenzae, e Moraxella catarrhalis. 3

RESUMO DA INVENÇÃO

Surpreendentemente, os compostos do presente pedido são agentes activos antimicrobianos potentes que apresentam uma actividade relevante contra bactérias Gram-positivas e mais especificamente contra bactérias Gram-positivas patogénicas do sistema respiratório. Diferentes propriedades características dos compostos da presente invenção relativamente à linezolida indicam a sua potencial utilização em infecções graves que não podem ser adequadamente tratadas com a linezolida.

Num primeiro aspecto a presente invenção refere-se a um composto de fórmula (I),

O) em forma livre ou na forma de um solvato, hidrato, enantiomérica ou de um sal farmaceuticamente aceitável, em que:

Ri e R2 são radicais idênticos ou diferentes e são independentemente seleccionados de hidrogénio e flúor; R3 é um grupo alquilo-Ci_6 linear ou ramificado opcionalmente substituído por um grupo seleccionado de flúor, hidroxi e OR4; e R4 é um grupo alquilo-Ci_6 linear ou ramificado. 4

Num segundo aspecto a presente invenção refere-se a um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) tal como definido no primeiro aspecto da invenção em forma livre ou na forma de um solvato, hidrato, enantiomérica ou de um sal farmaceuticamente aceitável, que compreende: (i) a reacçao de um intermediário de fórmula (II),

em que Ri e R2 são tais como definidos acima e R5 é seleccionado de alquilo-Ci_6 linear ou ramificado e benzilo opcionalmente substituído no fenilo por até três grupos alquilo-Ci_6 lineares ou ramificados, com um intermediário de fórmula (III),

O

(111) definido ramificado acima, Rê é um grupo Φ X é um átomo de em que R3 é tal como alquilo-Ci^e linear ou halogénio; e 5 (ii) a recuperação do composto resultante de fórmula (I) na forma livre ou em forma de um solvato, hidrato, enantiomérica ou de um sal farmaceuticamente aceitável.

Num terceiro aspecto, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de fórmula geral (I) de acordo com o primeiro aspecto da invenção, em conjunto com as quantidades apropriadas de excipientes ou veículos farmacêuticos.

Num quarto aspecto, a presente invenção refere-se a um composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto da invenção, para utilização como um medicamento.

Num quinto aspecto, a presente invenção refere-se à utilização de um composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto da invenção para o fabrico de um medicamento para o tratamento de infecções bacterianas num animal ou num ser humano. Este aspecto pode também ser formulado na forma de um composto de fórmula (I) de acordo com o primeiro aspecto da invenção para utilização no tratamento de infecções bacterianas.

Outro objecto desta invenção é proporcionar novos métodos para tratar um mamífero, incluindo um ser humano, que sofre de uma infecção bacteriana através da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I) em forma livre ou na forma de um solvato, hidrato, enantiomérica ou de um sal farmaceuticamente aceitável. 6

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO 0 termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" aqui utilizado abrange qualquer sal formado a partir de ácidos orgânicos ou inorgânicos, tais como os ácidos bromidrico, clorídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, acético, adípico, aspártico, benzenossulfónico, benzóico, cítrico, etanossulfónico, fórmico, fumárico, glutâmico, láctico, maleico, málico, malónico, mandélico, metanossulfónico, 1,5- naftalenodissulfónico, oxálico, piválico, propiónico, p- toluenossulfónico, succínico, tartárico, e semelhantes, e qualquer sal formado a partir de bases orgânicas e inorgânicas, tais como o metal alcalino e sais de metais alcalino terrosos, especialmente os sais de sódio e potássio, os sais de amónio e sais de aminas, incluindo aminas alquiladas inferiores, tais como metilamina, etilamina, trimetilamina e semelhantes, hidroxil alquilaminas inferiores, tais como etanolamina e dietanolamina, e aminas heterocíclicas, tais como morfolina e piperazina.

Numa realização preferida, a presente invenção refere-se a um composto de acordo com o primeiro aspecto da invenção em que Ri é flúor, R2 é seleccionado de flúor e hidrogénio, e R3 é metilo.

Preferentemente, o composto de acordo com o primeiro aspecto da invenção é seleccionado do grupo que consiste em: N-{(5S)-3-[3-fluoro-4-(3-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2- oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; N-{(5S)-3-[3,5-difluoro-4-(3-cianopirrolidin-l- il ) fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; 7 Ν-{ (5 S)-3-[3-fluoro-4-(3(R)-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; N—{(5S)-3-[3,5-difluoro-4-(3(R)-cianopirrolidin-l-il ) fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; N-{(5S)-3-[3-fluoro-4-(3(S)-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; e N—{(5S)-3-[3,5-difluoro-4-(3(S)-cianopirrolidin-l-il ) fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida.

Os compostos de fórmula geral (I) podem ser preparados através de (i) reacção de um intermediário de fórmula (II),

(ii) em que Ri e R2 são tais como definidos acima e R5 é seleccionado de alquilo C1-6 linear ou ramificado e benzilo opcionalmente substituído no fenilo por até três grupos alquilo C1-6 lineares ou ramificados, com um intermediário de fórmula (III), o

8 (III) em que R3 é tal como definido acima, Re é um grupo alquilo-Ci- 6 linear ou ramificado, e X é um átomo de halogéno; num solvente inerte e na presença de um catalisador fortemente básico; e (ii) a recuperação do composto resultante de fórmula (I) na forma livre ou em forma de um solvato, hidrato, enantiomérica ou de um sal farmaceuticamente aceitável.

Preferentemente R5 é benzilo, R6 é metilo e X é bromo.

Os solventes inertes no passo (i) são preferentemente solventes apróticos. Solventes apróticos adequados são éteres polares tais como, por exemplo, tetra-hidrofurano, metiltetra-hidrofurano, dioxano, éter terc-butil metilico, ou dimetoxi éter etílico, ou amidas tais como, por exemplo, dimetilformamida, ou lactamas tais como, por exemplo, N-metilpirrolidona, e suas misturas. Solventes adequados são também misturas tais como solventes apróticos e álcoois tais como, por exemplo, metanol ou etanol.

Exemplos de catalisadores básicos fortes incluem hidróxidos, tais como o hidróxido de lítio, hidróxido de sódio, e hidróxido de potássio, alcóxidos, tais como terc-butóxido de lítio, terc-butóxido de sódio, e terc-butóxido de potássio, alquil-lítios tais como terc-butil-lítio, n-butil-lítio, e metil-lítio, dialquilamidas tais como di-isopropilamida de lítio, dissililamidas tais como hexametildissilazida de lítio, hexametildissilazida de potássio, e hexametildissilazida de sódio, e hidretos, tais como hidreto de lítio, hidreto de sódio, e hidreto de potássio. 9

Processos úteis para a recuperação dos compostos resultantes no passo (ii) incluem métodos convencionais conhecidos pelos peritos na técnica tais como processos de cristalização e cromatográficos, resolução de formas racémicas por separação cromatográfica utilizando uma fase estacionária quiral, e também processos envolvendo cristalização fraccionada. Esta pode, em particular, envolver a separação de enantiómeros individuais, por exemplo, sais diaestereoisoméricos formados por ácidos quirais, por exemplo, ácido (+)-tartárico, ácido (-)-tartárico ou ácido (+)-10-canforsulfónico.

Os compostos da presente invenção são agentes antimicrobianos úteis, eficazes contra diversos microrganismos de interesse humano e veterinário. Numa realização preferida, os compostos da presente invenção são eficazes contra uma infecção produzida por bactérias Gram-positivas patogénicas do sistema respiratório. Alguns exemplos não limitativos destes microrganismos são Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Haemophylus influenzae, Bacteroides fragilis, Moraxella catarrhalis, e Enterococcus faecium. Tal como é ilustrado nos Exemplos 4 e 6, os compostos da presente invenção são mais activos contra estirpes resistentes à linezolida do que tanto a linezolida e a oxazolidinona substituída mais próxima estruturalmente do estado da técnica. São também mais activos contra bactérias patogénicas Gram-positivas do sistema respiratório do que tanto a linezolida e a oxazolidinona substituída mais próxima estruturalmente do estado da técnica.

Os compostos da presente invenção podem ser normalmente formulados de acordo com a prática farmacêutica convencional na forma de uma composição farmacêutica. 10

As composições farmacêuticas desta invenção podem ser administradas de um modo convencional para o estado de doença que se pretende tratar, por exemplo, através de administração oral, parenteral, por inalação, rectal, transdérmica ou tópica. Para estas finalidades, os compostos desta invenção podem ser formulados por meios conhecidos na técnica na forma de, por exemplo, comprimidos, cápsulas, xaropes, soluções ou suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pós dispersáveis, soluções inaláveis, supositórios, unguentos, cremes, gotas e soluções ou suspensões aquosas ou oleosas estéreis para injecção e semelhantes. As composições farmacêuticas podem conter agentes aromatizantes, adoçantes, etc. em veículos ou diluentes líquidos ou sólidos adequados, ou num meio estéril adequado para formar suspensões ou soluções adequadas para injecção intravenosa, subcutânea ou intramuscular. Tais composições contêm tipicamente de 1 a 40%, preferentemente 1 a 10% em peso de composto activo, sendo o remanescente da composição, solventes, diluentes, veículos farmaceuticamente aceitáveis e semelhantes.

Os compostos de fórmula (I) são administrados numa quantidade de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal/dia, preferentemente 1 a 50 mg/kg de peso corporal/dia. Os compostos e composições da presente invenção são úteis para o tratamento de condições tais como pneumonia nosocomial, pneumonia adquirida na comunidade, causada por Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA), incluindo bacteriemia concomitante, Streptococcus pneumoniae sensível e resistente à penicilina, infecções do pé diabético e infecções na pele e na estrutura da pele, e todas as outras infecções causadas por bactérias sensíveis aos compostos descritos na invenção. Os compostos da presente invenção são eficazes contra diversos patogénios 11 humanos ou animais, isolados clínicos, incluindo organismos resistentes à vancomicina, organismos resistentes à meticilina, e organismos LNZ-R.

Ao longo da descrição e das reivindicações, a palavra "compreende" e as variações desta palavra, tais como "compreendendo" não pretendem excluir outros atributos técnicos, aditivos, componentes, ou passos. Objectos, vantagens e características adicionais da invenção tornar-se-ão evidentes aos peritos na técnica durante o exame da descrição ou podem ser apreendidos através da prática da invenção. Os seguintes exemplos são proporcionadas por via de ilustração, e não se pretende que limitem a presente invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1: N-{(5S)-3-[3-fluoro-4-(3-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida a) 3-Fluoro-4-(3-cianopirrolidin-l-il)nitrobenzeno

Dissolvem-se 3-carbonitrilo pirrolidina (133 mg) e carbonato de potássio (268 mg) em dimetilformamida (1 mL) , e adiciona- se 3,4-difluoronitrobenzeno (198 mg). A mistura foi agitada à temperatura ambiente sob azoto durante 20 horas. Adicionou-se à mistura reaccional diclorometano (DCM) e lavou-se com água, salmoura e secou-se (sulfato de magnésio). O resíduo foi 12 purificado por cromatografia em coluna (11 g de silica gel, DCM) para se obter 249 mg do produto do título (Rendimento = 80%) . HPLC (t, %): 8,04 min, 100%. MS (ESI) m/z = 236 (M+l) ΧΗ RMN (400 MHz, ppm, CDC13) : 2,38 (2H, m), 3,27 (1H, m), 3,67 (1H, m) , 3,77 (1H, m) , 3,89 (2H, m) , 6,57 (1H, t, J = 9,2 Hz), 7,92 (2H, m) b) 3-Fluoro-4-(3-cianopirrolidin-l-il)fenilamina

Dissolveu-se 3-fluoro- 4 - [3-cianopirrolidinil] nitrobenzeno (220 mg) em etanol (20 mL) e tratou-se com cloreto de estanho (SnCl2.2H20, 1,5 g) . A mistura foi agitada e aquecida sob refluxo sob azoto durante 6 horas. Adicionou-se bicarbonato de sódio aquoso e DCM, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secas e concentradas para originar o composto do título (141 mg. Rendimento = 73%). HPLC (t, %): 6,41 min, 100%. MS (ESI) m/z = 206 (M+l) ΧΗ RMN (400 MHz, ppm, CDC13) : 2,68 (2H, m), 3,21 (1H, m), 3,30 (2H, m) , 3,35 (1H, m), 3,49 (1H, m), 6,45 (2H, m), 6,59 (1H, t, J = 8 Hz) 13 c) Ester benzílico do ácido 3-fluoro-4-(3-cianopirrolidin-l il)fenilcarbâmico

Dissolveu-se 3-fluoro-4-[3-cianopirrolidinil]fenilamina (120 mg) em acetona (4 mL) e arrefeceu-se a 0°C. Adicionou-se hidrogeno carbonato de sódio (196 mg, 4 eq) em água (2 mL), seguindo-se por cloroformato de benzilo (199 mg, 2 eq) ao longo de 30 minutos. A mistura foi agitada e deixou-se a temperatura aumentar até à temperatura ambiente durante 3 horas. Adicionou-se DCM e a fase orgânica foi separada, e lavada com água e salmoura. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (10 g de sílica gel) com eluição com DCM e DCM/MeOH 98/2 para originar 185 mg do produto do título (Rendimento = 93%). HPLC (t, %): 9,06 min, 100%. MS (ESI) m/z = 340 (M+l) XH RMN (400 MHz, ppm, CDC13) : 2,31 (2H, m) , 3,17 (1H, m) , 3,43 (2H, m) , 3,54 (1H, m) , 3,67 (1H, m) , 5,17 (2H,s), 6,50 (1H, m), 6,61 (1H, t, J = 9 Hz), 6,90 (1H, m), 7,38 (5H, m) d) N-{ (5 S)-3-[3-fluoro-4-(3-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinil metil}acetamida 14

A uma solução de 175 mg de éster benzílico do ácido 3-fluoro-4-[3-cianopirrolidinil]-fenilcarbâmico em 350 pL de dimetilformamida (DMF), adicionou-se 1,5 mL de uma solução de terc-butóxido de lítio a 1M em tetra-hidrofurano (THF) e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos.

Adicionou-se 42 pL de metanol e uma solução de 246 mg de (S)-N- (3-bromo-2-acetoxipropil)acetamida em 350 pL de DMF e deixou-se repousar à temperatura ambiente durante dois dias, altura em que a análise por HPLC revelou uma conversão de 30%. Adicionou-se a mesma quantidade de terc-butóxido de litio em THF, metanol e (S)-N- (3-bromo-2-acetoxipropil)-acetamida e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante mais dois dias. Adicionou-se uma solução aquosa saturada em cloreto de amónio à mistura reaccional e a fase orgânica separada foi lavada com água, salmoura e seca sobre sulfato de magnésio anidro. O solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (DCM, metanol com polaridade crescente) para resultar em 113 mg do composto do título (Rendimento = 63%). HPLC (t, %): 6,58 min, 100%. MS (ESI) m/z = 347 (M+l) 1H RMN (400 MHz, ppm, DMSO): 2,16 (1H, m), 2,30 (1H, m), 3,38 (4H, m), 3,66 (1H, dd, J = 6,8, 8,8 Hz), 4,05 (1H, t, J = 9 15

Hz), 4,67 (1H, m) , 6,83 (1H, t, J = 9 Hz), 7,11 (1H, dd, J = 2,4, 9 Hz), 7,43 (1H, dd, J = 2,8, 16 Hz)

Exemplo 2: N-{(5S)-3-[3,5-difluoro-4-(3-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida

Foi obtido de um modo similar ao do composto do Exemplo 1, partindo da alquilação de 3,4,5-trifluoronitrobenzeno com 3-carbonitrilo pirrolidina. HPLC (t, %): 6,94 min, 92%. MS (ESI) m/z = 365 (M+l) ΧΗ RMN (400 MHz, ppm, CDC13) : 1,82 (3H, s), 2,25 (2H, m), 3,13 (1H, q, J = 7,2 Hz), 3,58 (7H, m), 3,96 (1H, t, J = 9,2 Hz), 4,75 (1H, m) , 6,04 (1H, NH) , 7,06 (2H, d, J = 10,8 Hz)

Exemplo 3: Composições farmacêuticas farmacêuticas (I) ou um seu utilização

As seguintes ilustram composições representativas contendo um composto de fórmula sal farmaceuticamente aceitável para antimicrobiana em seres humanos ou animais: 16

Comprimido 1 mg/comprimido

Ingrediente activo 100 Lactose 179 Croscarmelose sódica 12 Polivinilpirrolidona 6 Estearato de magnésio 3

Comprimido 2 mg/comprimido Ingrediente activo 50 Lactose 229 Croscarmelose sódica 12 Polivinilpirrolidona 6 Estearato de magnésio 3

Comprimido 3 mg/comprimido Ingrediente activo 1 Lactose 92 Croscarmelose sódica 4 Polivinilpirrolidona 2 Estearato de magnésio 1 Cápsula mg/cápsula Ingrediente activo 10 Lactose 389 Croscarmelose sódica 100 Estearato de magnésio 1 17

Injecção

50 mg/mL

Ingrediente activo 5, 0% p/v

Solução aquosa isotónica até perfazer 100%

Podem ser utilizados para auxiliar à formulação co-solventes farmaceuticamente aceitáveis tais como polietileno glicol, polipropileno glicol, glicerol ou etanol ou agentes complexantes.

As formulações acima podem ser preparadas por intermédio de procedimentos convencionais bem conhecidos na técnica farmacêutica. Os comprimidos 1-3 podem ter um revestimento gastrorresistente por intermédio de meios convencionais para proporcionar um revestimento de ftalato acetato de celulose.

Exemplo 4;

Actividade antibacteriana comparada com a linezolida

Determinaram-se as CIMs utilizando um método de microdiluição padrão de acordo com o The National Committee for Clinicai Laboratory Standards (NCCLS), 5th Approved Standard M7-A5, 2001, Wayne, PA, EUA. Todos os compostos foram testados contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas que apresentavam diferentes especificações relevantes de susceptibilidade e resistência. Os microrganismos utilizados foram seleccionados de bactérias laboratoriais de referência e a partir de isolados clínicos. As concentrações testadas foram diluições duplas de 0,06 yg/mL a 128 yg/mL em microplacas de 96 poços.

As CIMs foram determinadas no meio de Sangue de Brucella suplementado para as estirpes anaeróbicas no meio de cultura 18 de Mueller-Hinton (ajustado para os catiões) para as bactérias aeróbicas.

Os compostos testados foram dissolvidos em DMSO, e foram diluídos até 2560 yg/mL com os diferentes meios de acordo com os requisitos específicos para cada grupo de estirpes. As microplacas seladas de 96 poços contendo as bactérias foram incubadas durante 16-24 h a 35°C e as denominadas bactérias fastidiosas, tais como M. catarrhalis e S. pneumoniae, durante 20-24 h a 35°C numa atmosfera microaeróbica contendo 5% de C02 (Anaerocult C, MERCK). Os resultados destes testes são fornecidos na Tabela 1.

Tabela 1

Ex. 1 Ex. 2 Linezolida s. aureus ATCC25923 MS 0,5 0,25 1,00 s. pneumoniae ATCC49619 PR 0,25 0,125 1, 00 E. faecium ATCC51559 MDR 0,25 0, 125 0,50 S. aureus LNZ-R 432 4 64 16-32 H. influenzae ATCC49247 4 2 16,00 B. fragilis sp. fragilis ATCC25285 0,5 0, 125 2,00 Moraxella catarrhalis HC1-78 2 0,25 2,00 E. faecium LNZ-R LR-4 8 4 64, 00

Os valores de MIC da tabela 1 mostram que é necessária uma concentração inferior dos compostos do exemplo 1 e 2 para inibir o crescimento bacteriano para a linezolida. Assim, os resultados anteriores mostram que os compostos da presente invenção são mais activos do que contra estirpes resistentes à linezolida.

Exemplo Comparativo 5: (S)-N-[[3-[4-(3-hidroxipirrolidinil)-3-fluorofenil]-2-oxo-5-oxazolidinil]metil]acetamida 19

Foi obtido de acordo com o processo divulgado no exemplo 10, página 50, do pedido de patente Internacional WO 9613502.

Exemplo 6:

Actividade antibacteriana comparada com o composto do Exemplo comparativo 5

Este exemplo copara a actividade antibacteriana contra estirpes resistentes à linezolida e bactérias Gram-positivas patogénicas do sistema respiratório do composto do exemplo 1 da presente invenção com o composto de referência do exemplo 5. O composto do exemplo 5 é a oxazolidinona estruturalmente mais próxima do estado da técnica, em que o anel pirrolidina contém uma unidade hidroxilo em vez do grupo ciano.

De modo a comparar a actividade antibacteriana de ambos os compostos, determinaram-se as CIMs pelos mesmos métodos descritos no exemplo 4 e as amostras testadas foram também preparadas como ilustrado no exemplo 4.

Os resultados são resumidos na Tabela 2. 20

Tabela 2

Ex. 1 (yg/mL) Ex. 5 (yg/mL) S. aureus estirpe clínica cfr. metilase 4 16 S. aureus 1199 1 2 S. aureus 199B 1 2 MRSE 0,25 1 MRSE-128 8 32 S. haemolyticus 8 32 E. faecalis ECFL-1 0, 125 2 E. faecalis ECFL-1-128 32 64 E. faecalis ECFL-2 1 4 E. faecium ECFM-1 0,5 2 E. faecium ECFM-1-128 32 64 E. faecium ECFM-2 0,5 2 Média Geométrica MIC Staphyl. 0,4 1,2 Média Geométrica MIC Enteroc. 0,3 1, 7 Média Geométrica MIC Gram+ 0,3 1,4 S. aureus ATCC33591 in vivo 0,25 2 S. pneumoniae ATCC6303 in vivo 0,25 0,5 S. aureus ATCC25923 MS 0,5 2 S. aureus ATCC43300 MR 0,5 1 S. aureus 1199B NorA overE 0,5 1 S. epidermidis ATCC12228 MR 0,25 1 S. pneumoniae ATCC49619 PR 0,25 1 E. faecalis ATCC29212 0,25 2 E. faecalis ATCC51575 MDR 0,25 2 E. faecium ATCC10541 0,25 2 E. faecium ATCC51559 MDR 0,25 1 E. faecium LNZ-R LR-4 8 32 E. coli TG1 32 64 E. coli KAM-3 1 4

Os valores das MIC da Tabela 2 mostram que é necessária uma concentração inferior do composto do exemplo 1 para inibir o crescimento bacteriano em relação ao composto do exemplo 5.

Deste modo, o composto do exemplo 1 é muito mais eficaz como agente antibacteriano incluindo estirpes resistentes à 21 linezolida e a bactérias patogénicas Gram positivas do sistema respiratório em todas as espécies antibacterianas testadas. 03-04-2012 22

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de fórmula (I),

(I) em forma livre ou na forma de um solvato, hidrato, enantiomérica ou de um sal farmaceuticamente aceitável, em que: Ri e R2 são radicais idênticos ou diferentes e são independentemente seleccionados de hidrogénio e flúor; R3 é um grupo alquilo-Ci-6 linear ou ramificado opcionalmente substituído por um grupo seleccionado de flúor, hidroxi e 0R4; e R4 é um grupo alquilo-Ci-6 linear ou ramificado.
2. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que Ri é flúor.
3. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que R2 é seleccionado de flúor e hidrogénio.
4. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que R3 é metilo.
5. 0 composto tal como reivindicado em qualquer uma das 1 reivindicações anteriores que é seleccionado do grupo que consiste em: N—{(5S)-3-[3—fluoro-4-(3-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; N-{(5S)-3-[3,5-difluoro-4-(3-cianopirrolidin-l-il ) fenil ] -2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; N-{(5S)-3-[3-fluoro-4-(3(R)-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; N—{(5S)-3-[3,5-difluoro-4-(3(R)-cianopirrolidin-l-il ) fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; N-{(5S)-3-[3-fluoro-4-(3(S)-cianopirrolidin-l-il)fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida; e N-{(5S)-3-[3,5-difluoro-4-(3(S)-cianopirrolidin-l-il ) fenil]-2-oxo-5-oxazolidinilmetil}acetamida.
6. Um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) em forma livre ou de um solvato, hidrato forma enantiomérica ou de um sal farmaceuticamente aceitável, que compreende: (i) reacção de um intermediário de fórmula (II),

em que Ri e R2 são tais como definidos acima e R5 é seleccionado de alquilo Ci-6 linear ou ramificado e benzilo opcionalmente substituído no fenilo por até três 2 grupos alquilo Ci-6 lineares ou ramificados, com um intermediário de fórmula (III), 0

0 NH

(III) em que R3 é tal como definido acima, R6 é um grupo alquilo-Ci-6 linear ou ramificado, e X é um átomo de halogéno; e (ii) a recuperação do composto resultante de fórmula (I) na forma livre ou em forma de um solvato, hidrato, enantiomérica ou de um sal farmaceuticamente aceitável.
7. 0 processo da reivindicação 6 em que R5 é benzilo, Rê é metilo e X é bromo.
8. Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de fórmula (I) tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em conjunto com as quantidades apropriadas de excipientes ou veiculos farmacêuticos.
9. Um composto de fórmula (I) tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para utilização como um medicamento. 3
10. Utilização de um composto de fórmula (I) tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5, para o fabrico de um medicamento para o tratamento de infecções bacterianas num animal ou ser humano.
11. Um composto de fórmula (I) tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 5 para utilização no tratamento de infecções bacterianas.
12. Um composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 11, em que a infecção bacteriana é uma infecção produzida por uma estirpe resistente à linezolida.
13. Um composto de fórmula (I) de acordo com a reivindicação 11, em que a infecção bacteriana é uma infecção produzida por uma bactéria Gram-positiva patogénica do sistema respiratório. 03-04-2012 4