PT2239257E - Novo derivado de quinazolina-2,4-diona e composições médicas para a profilaxia e tratamento da doença dos nervos cranianos contendo o dito derivado - Google Patents

Description

Descrição

NOVO DERIVADO DE QUINAZOLINA-2,4-DIONA E COMPOSIÇÕES MÉDICAS PARA A PROFILAXIA E TRATAMENTO DA DOENÇA DOS NERVOS CRANIANOS

CONTENDO O DITO DERIVADO

CAMPO TÉCNICO A presente invenção relaciona-se com um novo derivado de quinazolina-2,4-diona da fórmula (I)

I

em que

Ri é hidrogénio ou alquilo; cada R2 e R3 é independentemente seleccionado de hidrogénio, alquilo, -CORê, -SO2R7, ou fenil ou benzil substituído ou não substituído, em que R6 é alquilo, alcoxi, fenil, feniloxi ou benziloxi, cada um dos quais é substituído ou não substituído com halogénio, hidroxi, metoxi, etoxi ou nitro, e R7 é alquilo ou arilo inferior substituído ou não substituído; A é -(CH2)n- ou -CH2CH=CHCH2-, em que n é um número inteiro seleccionado de 2 a 4; R4 é hidrogénio e R5 é hidrogénio ou benzoil não substituído ou substituído com um ou mais halogénio, hidroxi, alcoxi ou nitro em anel de benzeno, ou quando R4 e R5 em conjunto com N formam um anel, R4 e R5 formam um grupo divalente de 1/56

ο ο Μ 41 C ου em que Rs é hidrogénio ou alquilo; cada um de l e m é independentemente um número inteiro seleccionado de 2 a 4; epé um número inteiro de 0 ou 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma composição farmacêutica compreendendo o composto da fórmula (I) como um ingrediente activo para evitar ou tratar doenças neurológicas do cérebro.

ANTECEDENTES DA TÉCNICA

As doenças neurológicas do cérebro progridem devido à morte de células nervosas durante um período de tempo curto ou longo e resulta na perda fatal de função cerebral. 0 AVC é uma das doenças cardiovasculares mais frequentes. Porque os distúrbios dos nervos cranianos em pacientes, no grupo etário vigoroso dos quarentas aos cinquentas, aumentaram bastante, é referido que não é apenas um problema individual mas sim um problema nacional.

Existem dois tipos de AVC: enfarte cerebral e hemorragia cerebral. 0 enfarte cerebral resulta da necrose do tecido cerebral provocada por um bloqueio do fornecimento de sangue ao tecido cerebral devido a um trombo, etc. A hemorragia cerebral, por outro lado, resulta da perda de sangue devido a vasos sanguíneos com ruptura no cérebro. Apesar de as patogéneses do enfarte cerebral e hemorragia cerebral serem diferentes, os seus sintomas são frequentemente semelhantes. 2/56 0 método padrão para tratar o período agudo de enfarte é actualmente a trombólise. 0 período de tempo antes de iniciar o tratamento e após o surgimento do enfarte cerebral é muito importante, e é conhecido que o estado funcional do paciente pode ser melhorado quando um agente trombolítico é administrado no prazo de 3 horas após o surgimento do enfarte cerebral. A causa da necrose de células cerebrais devido a isquémia tem sido elucidada por muitos investigadores, e o caminho principal a seguir é sugerido como toxicidade excitável por neurotransmissor excessivo, toxicidade oxidativa por stress, toxicidade de zinco, apoptose, etc. 0 glutamato, o qual é uma das substâncias tóxicas excitáveis, é um neurotransmissor excitável do sistema nervoso central, e reage com o receptor NMDA (N-metil-D-aspartato) . A morte das células nervosas é induzida quando o glutamato é produzido em excesso por isquémia. Foi recentemente conhecido que estas toxicidades excitáveis podem ser o mecanismo principal da morte das células nervosas por AVC isquémico, assim como epilepsia. Se o fornecimento de oxigénio-glucose ao tecido nervoso após a isquémia for reduzido, o glutamato que é um neurotransmissor excitável, é acumulado na união entre os neurónios. De seguida, ocorre principalmente a morte das células nervosas por actividade excessiva do receptor de glutamato NMDA. Deste modo, a morte das células nervosas por AVC isquémico pode ser suprimida ao usar um antagonista do receptor de glutamato NMDA.

Os radicais livres são também um dos principais mecanismos da morte das células nervosas. Um aumento dos radicais livres devido a isquémia e outros nas células nervosas induz a destruição do lípido da membrana devido à peroxidação dos 3/56 lípidos, danos de ácidos nucleicos por radicais de oxigénio, desnaturação de proteína e semelhantes. Isto resulta em danos fatais em factores essenciais para a sobrevivência das células. Muitos investigadores reportaram que a isquémia leva a aumentos de oxigénio activo no cérebro, as espécies de oxigénio reactivo na doença de Parkinson, doença de Huntington e doença de Alzheimer, catálase (uma enzima redutora de radicais), actividade de superóxido dismutase Cu/Zn (SOD) e Fe2+.

Como acima mencionado, apesar de muitos mecanismos tratarem os distúrbios de nervos cranianos, o desenvolvimento de novos fármacos é atrasado devido a problemas acerca da eficácia e toxicidade.

Os presentes inventores descobriram que são libertadas substâncias naturais de Eisenia andrei e Eisenia fétida vivas aplicando electroestimulação, enquanto as estudávamos a partir de remédios populares usados há muito no Oriente. E descobrimos que os compostos específicos destas substâncias mostram a protecção válida dos nervos cranianos. Muitos compostos derivativos, incluindo novos compostos isolados de produtos naturais, foram sintetizados com base nesta descoberta. Foi descoberto que o composto derivado de quinazolina-2,4-diona da fórmula (I) e um sal do mesmo tem um efeito superior na protecção da actividade das células nervosas, e aperfeiçoámos a presente invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

OBJECTO DA INVENÇÃO 0 objectivo da presente invenção é providenciar um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, 4/56 e uma composição farmacêutica que compreende o dito composto como um ingrediente activo para evitar ou tratar doenças cerebrais neurológicas.

[MEIOS TÉCNICOS] A presente invenção relaciona-se com um novo derivado de quinazolina-2,4-diona da fórmula (I)

em que

Ri é hidrogénio ou alquilo; cada R2 e R3 é independentemente seleccionado de hidrogénio, alquilo, -C0R6, -SO2R7, ou fenil ou benzil substituído ou não substituído, em que R6 é alquilo, alcoxi, fenil, feniloxi ou benziloxi, cada um dos quais é substituído ou não substituído com halogénio, hidroxi, metoxi, etoxi ou nitro, e R7 é alquilo ou arilo inferior substituído ou não substituído; A é -(CH2)n- ou -CH2CH=CHCH2-, em que n é um número inteiro seleccionado de 2 a 4; R4 é hidrogénio e R5 é hidrogénio ou benzoil não substituído ou substituído com um ou mais halogénio, hidroxi, alcoxi ou nitro em anel de benzeno, ou quando R4 e R5 em conjunto com N formam um anel, R4 e R5 formam um grupo divalente de 5/56

em que R8 é hidrogénio ou alquilo; cada um de l e m é independentemente um número inteiro seleccionado de 2 a 4; e p é um número inteiro de 0 ou 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Como aqui utilizado, o termo "alquilo" refere-se a um alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo, uma cadeia alifática de hidrocarboneto incluindo cadeia simples, cadeia ramificada ou forma cíclica como metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, sec-butil, isobutil, tert-butil, n-pentil, 2-metilpentil, hexil e ciclohexil. 0 termo "alquilo inferior" refere-se a uma cadeia de hidrocarbonetos ramificada ou simples com 1 a 4 átomos de carbono. 0 termo "alcoxi" refere-se a -O-alquilo, em que "alquilo" refere-se a uma cadeia de hidrocarbonetos ramificada ou simples com 1 a 4 átomos de carbono.

Os compostos da fórmula (I) podem ser usados sob a forma de sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos e os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição ácidos convencionalmente conhecidos ou sais de metais alcalinos na técnica.

Exemplos típicos da fórmula (I) de acordo com a presente invenção são os seguintes: 6/56 3-{3-[4-(3-aminopropilamino)butilamino]propil}-lH-quinazoli na-2,4-diona;3—(3—{4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazoli na-3- il)propilamino]butilamino jpropil)-lH-quinazolina-2, 4-diona;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi 1]-N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilam ino]butil}acetamida;N-(4-[acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi1]aminojbutil)-N-[3-(2,4-dioxo-l,4 -dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]acetamida;[3-(2,4-dioxo -1, 4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[3-(2,4-dioxo-l ,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil)éster-etil ico-de-ácidocarbâmico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinaz olina-3-il)propi1]-N-(4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quina zolina-3-il)propil]metilamino}butil)acetamida;3—{4—[3—(2,4 — dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}-1H -quinazolina-2,4-diona;N-(3-{4-[3 —(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H -quinazolina-3-il)propilamino]butilamino jpropil)-hidroxiben zamida;3-{3-[4-({N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina -3-il)propil]-N-benzil}amino)butilamino]propi1}-lH-quinazol ina-2,4-diona;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi1]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}benzamida;Éster butilico terciário do ácido[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamin o]butil}carbâmico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolin a-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolin a-3-il)propilamino]butiljmetanosulfonamida;N-(4-{benzi1-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi1]amino}but il)-N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi1] acetamida;(4-{acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazoli na-3-i1)propi1]aminojbutil)-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-qu inazolina-3-il)propil]éster etílico de ácido carbâmico;3-{ [3-(4-{N-[3-(2,4-dioxo-l, 4-dihidro-2H-quinazol ina-3-il)propil]-N-benzilamino}butil)-N-benzilamino]propil} -lH-quinazolina-2,4-diona;[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quin 7/56 azolina-3-il)propil]- (4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quina zolina-3-il)propil]etoxicarbonilamino[butil)éster etílico de ácido carbâmico; Éster butílico terciário do ácido(4-{terc-butoxicarbonil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-q uinazolina-3-il)propil]amino}butil)-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihid ro-2H-quinazolina-3-il)propil]carbâmico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4 -dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-(4-{[3-(2,4-dioxo-l, 4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]metanosulfonil-amino}b util)metanosulfonamida;N-[3-(acetilo{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-di hidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}amino)propil]-4 -hidroxibenzamida;N-[3-(4-{acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro -2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butilamino)propil]-4-hidr oxibenzamida;N-{3-[acetil-(4-{acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihi dro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butil)amino]propil}-4-hidroxibenzamida;N-[4-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina —3 — i1)butil]-N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-i 1)propil]acetamida;3—(2—{3—[2—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-qui nazolina-3-il)etilamino]propilamino}etil)-lH-quinazolina-2, 4-diona;3—(3—[3—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]propilamino}propil)-lH-quinazolina-2,4-diona ;3—(3—[4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) prop ilamino]-2-butenilamino}propil)-lH-quinazolina-2, 4-diona; Ester butílico terciário do ácido(4-{terc-butoxicarbonil-[3-(1-metil-2,4-dioxo-l,4-dihi dro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butil)-[3-(1-metil-2,4 -dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]carbâmico;1-m etil-3-(3-{4-[3-(l-metil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazoli na-3-il)propilamino]butilamino[propil)-lH-quinazolina-2,4-d iona;3—(3—[4—[3—(1,3-dioxo-1,3-dihidro-isoindol-2-i1)propil amino]butilamino}propil)-lH-quinazolina-2, 4-diona;3-(3-{2-[ 3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]et ilamino[propil)-lH-quinazolina-2,4-diona; Éster butílico terciário-do-ácido[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]—(4—{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3 8/56 -il)propil]hexilamino}butil)carbâmico;3 - [3-(4-{N-[3-(2,4-di oxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-hexilamino}bu tilamino]propil]-lH-quinazolina- 2,4-diona;Éster butilico terciário-do-ácido(4-{terc-butoxicarbonil-[3-(1-hexi1-2,4-d ioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]aminobutil)-[3-(l-hexil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolin-3-il)propil]ca rbâmico;l-hexil-3-(3 —{4—[3-(l-hexil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2 H-quinazolina-3-il)propilamino]buti1amino}propil)-lH-quinaz olina-2,4-diona; Éster butilico terciário do-ácido[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi 1] — (4 —{ [3 —(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil ]heptanoilamino}butil)carbâmico; [3 —(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2 H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino] butiljamida do ácido heptanóico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butil}-2,2,2-trifluoroacetamida;N-[3-(2,4-dioxo -1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[[3-(2,4-diox o-l, 4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(2,2,2-trifluoroa cetil)amino]butil}-2,2,2-trifluoro-acetamida;N-[3-(2,4-diox o-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-diox o-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}-2-meto xiacetamida;[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)p ropil]-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)pro pilamino] butiljéster benzílico de ácido carbâmico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)p ropil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butil)-4-metilbenzenosulfonamida;N-[3-(2,4-diox o-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-(4-{ ([3 —(2,4-di oxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-metilbenzenosul fonilamino]butil)-4-metilbenzenosulfonamida;e-(3—{4—[3—(2,5 -dioxo-pirrolidina-l-il)propilamino]butilamino}propi1)-lH-q uinazolina-2,4-diona. 9/56 0 composto da fórmula (I) pode ser preparado pelas reacções como descrito nos seguintes esquemas de reacção I a III. Assim, é ainda outro objecto da presente invenção providenciar tais processos de preparação.

Contudo, os seguintes esquemas de reacção ilustram os processos de preparação mais gerais da presente invenção. Os processos para preparar o composto da fórmula (I), de acordo com a presente invenção, não são limitados aos seguintes esquemas de reacção ilustrados. 0 composto da fórmula (I) pode ser preparado através de vários processos conhecidos na técnica.

Esquema de reacção I

H aN-CO,-A!k Ç-L + HjN- - -A— O (IV) (V)

-A-N—^CHj^-NR.Rj (IX)

Ao reagir o composto derivado de ácido benzóico (IV) com um substituinte alcoxicarbonilamino na posição 2 com um composto amino (V) , no qual A é adequadamente seleccionado para formar um anel sob a existência ou a ausência de um solvente, pode ser obtido um derivado de quinazolina-2,4-diona do composto amino primário (IV) com uma estrutura esqueleto quinazolina-2,4-diona, em que R4 e R5 são hidrogénios. Alternativamente, ao aumentar as quantias estequiométricas do composto (IV), o derivado de quinazolina-2,4-diona de compostos (IV) pode ser obtido, no qual R4 e R5 formam uma quinazolina-2,4-diona cíclica com N átomos. A reacção de fusão do anel sob a ausência de solventes deverá ser efectuada a uma temperatura suficiente para derreter os dois reagentes. 10/56

No esquema de reacção acima, A, l, mep são o mesmo como definido acima, R4 e R5 representam hidrogénios, ou quando R4 e R5 juntamente com N formam um anel, R4 e R5 formam um grupo divalente de

0 HO e Alk representa alquilo. L representa um grupo abandonante que é preferencialmente hidroxi, alcoxi ou halogénio.

Esquema de reacção II

Por reacção do composto (VI) com o composto (VII) ou (VIII) com substituintes R4 e R5, pode ser obtido um derivado de quinazolina-2,4-diona do composto (IX), no qual R4 e R5 são adequadamente introduzidos em amino primário terminal, em que a reacção pode ser efectuada sob a existência dos solventes, a reacção de fusão pode ser efectuada sob a ausência de solventes ou a reacção de condensação pode ser efectuada, se X for hidroxi. A reacção de condensação pode ser efectuada usando DCC (diciclohexilcarbodiimida) ou EDC (1-(3- dimetilaminopropil) -3-etil-carbodiimida). Alternativamente, o composto (IX) pode ser obtido ao converter o grupo carboxil num grupo mais reactivo tal como ácido anidrido ou ácido clorídrico, e depois reagindo com o composto (VI). 11/56

No esquema de reacção acima, A, R4, R5, l , m e p são o mesmo como acima definido, R5 não é Η, X representa hidroxi, halogénio, alcoxi ou -OR5. Cada um do Y e Y' é hidroxi, halogénio, alcoxi ou quando YeY' formam um anel, YeY' formam -0-.

Esquema de Reacção III

H N^O

(IX)

Ao substituir, pelo menos, um hidrogénio do composto da fórmula (IX) com R2 e/ou R3, pode ser obtido um derivado de quinazolina-2,4-diona do composto (I), em que R2 e R3 são adequadamente introduzidos na posição amino, Ri é hidrogénio, e, pelo menos, um de R2 e R3 não é hidrogénio. No caso de obter o composto no qual R2 e R3 são os mesmos substituintes, os substituintes R2 e R3 podem ser imediatamente introduzidos.

No caso de obter o composto no qual R2 e R3 são diferentes substituintes, o substituinte R2 pode ser introduzido em primeiro lugar no composto (IX) para obter o derivado quinazolina-2,4-diona do composto (I) que R4 e R3 são hidrogénio, e de seguida o substituinte R3 pode ser introduzido na presença do solvente orgânico e base. Por outro lado, o substituinte R3 pode ser introduzido em primeiro lugar em compostos (IX) e de seguida o substituinte R2 pode ser introduzido no composto substituinte R3 para obter o derivado de quinazolina-2,4-diona do composto (I), no qual R2 e R3 são adequadamente substituídos e R4 é hidrogénio. 12/56

Além disso, após os substituintes desejados serem introduzidos na posição secundária amina do composto (IX), o derivado de quinazolina-2,4-diona do composto (I), no qual Ri é alquilo e os substituintes desejados são introduzidos, pode ser obtido por alquilação da posição 1 no anel quinazolina com agente alquilante sob a existência da base ou desprotecção adicional após a alquilação. 0 haleto de alquilo, sulfato dialquilo ou sulfonato de alquilo podem ser usados como o agente alquilante acima.

No esquema de reacção acima, A, Ri, R2, R3, R4, R5, l, m e p são 0 mesmo como definido acima, e R5 não é H. As condições de reacção mais especificas são descritas nos seguintes Exemplos 1 a 42.

Por outro lado, o composto da fórmula (I), de acordo com a presente invenção, preparada pelos processos acima, pode ser sujeito a isolamento e purificação adicionais através de métodos de pós-tratamento convencionais ou podem ser preparados como um sal farmaceuticamente aceitável correspondente através de métodos convencionais. 0 sal, como habitualmente conhecido por técnicos, deverá ser farmaceuticamente aceitável e não tóxico. Podem ser usados vários sais para produzir os compostos da presente invenção e um sal farmaceuticamente aceitável não tóxico do mesmo. 0 sal farmaceuticamente aceitável dos compostos de acordo com a presente invenção inclui sais de adição ou sais metálicos de alcali. Tais sais de adição podem, mas não estão limitados a, um sal com ácido hidroclórico, ácido hidrobrómico, ácido hidroiódico, ácido sulfúrico, ácido acético, ácido benzenossulfónico, ácido metanosulfónico, ácido fosfórico, ácido nítrico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido succínico, ácido glucólico, ácido láctico, ácido málico, ácido orótico, ácido nicotínico, ácido adípico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido benzóico, 13/56 acilo salicílico, ácido fumárico, ácido camsilico ou ácido carboxilico e tais sais metálicos de alcali podem ser, mas não estão limitados a, um sal de sódio, potássio, litio, magnésio ou cálcio.

Adicionalmente, a presente invenção providencia uma composição farmacêutica, a qual é útil para evitar ou tratar doenças neurológicas do cérebro como acima mencionado ao combinar o composto derivado de quinazolina-2,4-diona da fórmula (I) e o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo com um veiculo farmaceuticamente aceitável. 0 composto da fórmula (I) de acordo com a presente invenção é útil para tratar uma doença provocada por degeneração normal ou anormal do sistema neurológico do cérebro ou proteger as células nervosas do mesmo, como provado pelos resultados dos seguintes exemplos. A presente invenção providencia uma composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como um ingrediente activo com um veiculo farmaceuticamente aceitável, para evitar ou tratar distúrbios do sistema neurológico do cérebro, doença neurológica degenerativa do cérebro ou disfunção do sistema nervoso. Mais especificamente, uma composição farmacêutica de acordo com a presente invenção é útil na prevenção ou tratamento de doenças seleccionadas de disfunção neurológica, perda de memória, insuficiência cerebrovascular, lesões cerebrais locais, trauma cerebral focal, trauma cerebral difuso, lesões da espinal medula, isquémia cerebral, hemorragia cerebral, AVC isquémico, AVC hemorrágico, demência, enfarte cerebral, oclusão embólica, oclusão trombótica, reperfusão após isquémia aguda, ataque isquémico transiente, lesão hipóxico-isquémica perinatal, paragem 14/56 cardíaca, hemorragia intracranial, hemorragia subaracnóide, aneurisma cerebral, aneurisma de Willis, hemiplegia infantil aguda, lesão associada ao efeito "chicotada", síndrome do bebé sacudido, doença de Alzheimer, doença de Pick, doença de corpos Lewy difusa, paralisia supra nuclear progressiva (síndrome Steel-Richardson) , degeneração multisistémica (síndrome Shy-Drager) , condições de epilepsia crónica associadas à neuroregeneração, doenças neuromotoras, esclerose lateral amiotrófica, esclerose lateral primária, ataxias degenerativas, degeneração basal cortical, panencefalite esclerosante subaguda, doença de Huntington, doença de Parkinson, sinucleinopatias, afasia progressiva primária, atrofia muscular espinal e atrofia muscular espinobulbar (doença de Kennedy), esclerose múltipla, doença de Tay-Sach, paraplegia espástica, doença dos Priões, doença de Creutzfeldt-Jakob, epilepsia, plexopatia ou neuropatia; e melhoramento da memória. A composição farmacêutica da presente invenção pode ser preparada ao combinar um composto da presente invenção com um veículo inactivo farmaceuticamente aceitável na forma de um sólido ou líquido e pode ser concebido numa forma farmaceuticamente aceitável para administração. A formulação acima pode ser preparada na forma de libertação imediata ou libertação contínua, o que pode ser conhecido para um especialista da técnica. A composição farmacêutica pode ser em comprimidos, grânulos, pós, cápsulas, suspensões, xaropes, elixires, soluções, emulsões ou injecções para administração oral, intravenosa ou parenteral. A composição farmacêutica pode ser em comprimidos, cápsulas, pós, microgranulos, soluções ou suspensões esterilizadas para administração rectal ou supositórios. 15/56 0 veículo farmaceuticamente aceitável acima pode incluir lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, malditol, amido, goma-arábica, alginato, gelatina, fosfato de cálcio, silicato de cálcio, celulose, metilcelulose, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, água, metilhidroxibenzoato, propil hidroxibenzoato, talco, estearato de magnésio ou óleos minerais. Adicionalmente, o veículo farmaceuticamente aceitável acima pode incluir diluentes ou aditivos tais como excipientes, distensores, agentes de união, agentes humectantes, desintegrantes, tensioactivos, etc. A formulação sólida para administração oral pode ser em comprimidos, pós, grânulos, cápsulas, etc. e pode incluir, pelo menos, um aditivo, por exemplo tal como o amido, carbonato de cálcio, sacarose, lactose e gelatina, ou lubrificantes tais como estearato de magnésio, talco, etc. A formulação líquida para administração oral pode ser em suspensões, soluções, emulsões, xaropes, etc., e pode incluir diluentes tais como água e parafina líquida, agentes humectantes, adoçantes, aromáticos ou conservantes. A formulação para administração parenteral pode ser na forma de soluções esterilizadas, solventes não aquosos, suspensões, emulsões, liofilizações ou supositórios. Os solventes não aquosos e suspensões incluem propilenoglicol, polietilenoglicol, óleos vegetais tais como azeite, esteres injectáveis tais como etil oleato, etc. Foi usado witepsol, macrogol, tween 61, óleo de cacau, óleo lauryn, glicerogelatina e semelhantes como veículo para os supositórios. A dose desejável do composto da fórmula (I) ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, incluída na composição farmacêutica da presente invenção, varia dependendo da condição, peso, idade e sexo do paciente, gravidade da doença, 16/56 forma do fármaco, e forma e período de administração, e pode ser escolhida por aqueles com experiência na técnica. Por exemplo, é geralmente recomendado administrar uma quantidade que varie entre 0,01 a 500 mg/kg, preferencialmente, 0,1 a 100 mg/kg por peso/dia dos compostos da fórmula (I) ou do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, mas não está limitado neste âmbito. Pode ser administrada uma única dose ou pode ser dividida em várias vezes por dia ou semana.

Adicionalmente, a composição farmacêutica da presente invenção pode incluir 0,001 a 50 % de peso, preferencialmente 0,1 a 50 % de peso do composto da fórmula (I) ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com base no peso total da composição, mas não é limitada neste âmbito.

EFEITOS VANTAJOSOS

Um derivado de quinazolina-2,4-diona, um sal farmacêutico do mesmo e uma composição compreendendo o derivado de quinazolina-2,4-diona e o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a presente invenção, tem efeitos na supressão da morte celular no cérebro, protecção das células nervosas, anti-oxidação, anti-convulsão e relaxamento dos vasos sanguíneos, e assim são úteis para evitar ou tratar as várias doenças acima mencionadas, por exemplo, AVC, doença de Alzheimer e epilepsia, assim como melhorar a memória.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A figura 1 mostra o efeito anti-avc do composto 3 num modelo de oclusão da artéria cerebral média (MCAO). A cor vermelha (coloração) representa a área normal do cérebro e a cor branca (sem coloração) representa a área da oclusão. Foram administrados 100 mg/kg de composto 3 e 2000 mg/kg de 17/56 citicolina à 1 hora e logo antes de induzir o AVC (foram usados oito camundongos em cada grupo experimental). A figura 2 mostra um efeito do composto 3 sob supressão de stress oxidativo induzido por NMDA das células cerebrais em camundongos. 0 "controlo normal" são células normais sem qualquer tratamento, e o "controlo negativo" são células cerebrais com tratamento de 300 pm NMDA. 125 pg/mL e 250 pg/mL do composto 3 foram administrados (grupos tratados com compostos). As marcas #, * e ** têm como objectivo mostrar a diferença significativa de P<0,05, como comparado com cada controlo correspondente, em caso de executar o teste ANOVA e Student-t (#; para comparar o controlo normal com o controlo negativo; e * e **; para comparar grupos tratados com compostos com controlo negativo).

FORMAS DE REALIZAÇÃO CONCRETAS PARA REALIZAR A INVENÇÃO A presente invenção será mais especificamente explicada através de referência aos seguintes exemplos, os quais são providenciados através de ilustração e não se pretende que sejam limitativos.

Exemplo 1 3-{3-[4-(3-aminopropilamino)butilamino]propil}-1H-quinazolina-2,4-diona(Composto 1) 1) Preparação de etil 2-etoxicarbonilamino benzoato: O 2-aminobenzoato de etilo (20 g, 0,12 mol) foi dissolvido em 140 ml de xileno e foi adicionado cloroformato de etilo (13,8 mL, 0,15 mol). Após reagir sob refluxo durante 3 horas, o solvente foi removido através de destilação sob pressão 18/56 reduzida. 30 mL de éter de petróleo foi adicionado ao resíduo e arrefecido. O composto base do sólido branco (26 g, 90,5%) foi obtido ao reunir o sólido formado através de filtração e por concentração e cristalização da solução filtrada. 1H NMR(CDCI3) : 10.51 (s, 1 H) , 8.43(dd, 1 H), 8.01(dd, 1H), 7.51 (t, 1H), 7.01(t, 1H), 4.37(q, 2H), 4.22(q, 2H), l,40(t, 3H), 1.32 (t, 3H) ; 2) Preparação de 3 —{3 —[4-(3-aminopropilamino)butilamino] propil}-lH-quinazolina-2,4-diona: O etil 2-etoxicarbonilamino benzoato (8,0 g, 33,7 mmol) e N,N'-bis-(3-aminopropil)butano-1,4-diamina (8,87 g, 43,8 mmol) foram derretidos com calor. Após agitar durante 4 horas a 125-135 °C, o isopropil álcool foi adicionado e o ácido hidroclórico concentrado foi adicionado para formar um sólido. O sólido obtido por filtração foi dissolvido em água e neutralizado com solução aquosa de hidróxido de sódio. Após a remoção da água por destilação sob pressão reduzida, foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica para resultar no composto base em forma de óleo (5,0 g, 43%) 1H NMR(D20) : 7.48 (dd, 1H), 7.30(t, 1H), 6.83(m, 2H), 3.73(t, 2H) , 2.59(t, 2H), 2.52(t, 2H) , 2.46(t, 6H) , 1.66(m, 2H) , 1.56 (m, 2H), 1.3 7 (m, 4H) ;

Exemplo 2 3—(3—{4—[3—(2, 4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilamino}propil)-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 2) (Processo 1) 19/56 0 Etil 2-etoxicarbonilamino benzoato (4,9 g, 20,6 mmol) e N,N'-bis-(3-aminopropil)butano-1,4-diamina (2,1 g, 10,3 mmol) foram derretidos com calor. Após agitar durante 5 horas a 125-135 °C, 23 ml de isopropril álcool foram adicionados ao mesmo para criar um sólido e foram secos sob pressão reduzida após filtração para resultar no composto base do sólido branco (3,3 g, 64%) . 1H NMR(CDCI3) : 8.05(d, 2H) , 7.62(t, 2H) , 7.22(t, 2H) , 7.15(d, 2H), 4.11(t, 4H), 2.62(m, 8H), 1.94(m, 4H), 1.55(s, 4H); (Processo 2) O 3-{3-[4-(3-aminopropilamino)butilamino]propil}-1H- quinazolina-2,4-diona(2,1 g, 6,0 mmol) e etil 2-etoxicarbonilamino benzoato (1,6 g, 6,6 mmol) foram derretidos a 125-135 °C. Após 5 horas, 20 ml de isopropil álcool foram adicionados ao mesmo para resultar num sólido e foram secos sob pressão reduzida após filtração para resultar no composto base do sólido branco (2,2 g, 74%), o qual é o mesmo que o composto obtido pelo Processo 1.

Exemplo 3

Sal de ácido hidroclorídrico de N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l, 4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil} acetamida (Composto 3)

Após 3—(3—{4—[3—(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilaminoJpropil)-lH-quinazolina-2,4-diona (3 g, 6,1 mmol) foi dissolvido em 60 ml de piridina, foi adicionado anidrido acético (0,7 mL, 7,3 mmol). Após 2 horas, a piridina foi removida por destilação sob pressão reduzida. 0 diclorometano e água foram adicionados ao restante resíduo, e cada camada foi separada na solução após o sólido formado 20/56 ter sido removido por processo de filtração. 0 ácido hidroclórico concentrado foi adicionado à camada aquosa, e o pH foi ajustado para 2-3. Após remoção de água por destilação sob pressão reduzida, foi realizada cromatografia de coluna com gel de sílica no restante resíduo para resultar no composto base (1,1 g, 32%). 1H NMR(MeOD) : 7.97(m, 2H) , 7.61(m, 2H), 7.17(m, 4H), 4.14(m, 2H), 4.02(m, 2H) , 3.47(m, 4H) , 3.07(m, 4H) , 2.12(m, 5H) , 1.96(m, 2H), 1.73(m, 4H) ;

Ao tratar o composto 1,0 g do Exemplo 3 acima com resina de troca iónica, foi obtido o composto na forma base, N-[3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4 -dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil} acetamida (0,65 g). ΧΗ NMR(MeOD) : 7.89(m, 2H), 7.53(m, 2H), 7.15-7.01(m, 4H), 3.9 7(m, 4H), 3.40(t, 2H), 3.32(q, 2H), 2.54(m, 4H), 2.05(d, 3H), 1.94-1,83(m, 4H), 1.61-1,44(m, 4H);

Exemplo 4 N-(acetilo[3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)pr opil]aminojbutil)-N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazoli na-3-il) propil]acetamida (Composto 4)

Apósisso,3—(3—{4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butilamino[propil)-lH-quinazolina-2,4-dio na (2 g, 4,1 mmol) foram dissolvidos em 50 ml de piridina, foi adicionado anidrido acético (1,0 mL, 10,2 mmol). Após 2 horas, a piridina foi removida por destilação sob pressão reduzida, foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica do restante resíduo para resultar no composto base (2,1 g, 90%) 21/56 NMR(DMSO-de) : 11.40(s, 2H) , 7.91(m, 2H) , 7.63(m, 2H) , 7.17(m, 4H), 3.86(m, 4H), 3.27(m, 8H), 1.95(m, 6H) , 1.80(m, 4H) , 1.43(m, 4H);

Exemplo 5

Sal de ácido hidroclórico [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]—{4—[ 3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino] butil}éster etílico do ácido carbâmico (Composto 5) 3—(3—{4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)prop ilamino]butilamino}propil)-lH-quinazolina-2,4-diona(2g, 4, 1 mmol) foi dissolvido em 20 ml de hexametilfosforamida com calor, arrefecido e foi adicionado cloroformato de etilo (0,5 ml, 4,1 mmol). Após 2 horas, foi realizada cromatografia de coluna de gel de sílica da mistura de reacção para resultar no composto base do sólido amarelo (0,48 g, 20%)1H NMR(MeOD) : 8.00 (t, 2H), 7.63(q, 2H) , 7.21(q, 2H) , 7.14(m, 2H) , 4.15(t, 2H), 4.0 9(q, 2H), 4.02(t, 2H), 3.36(m, 4H), 3.05 (m, 4H) , 2.10 (m, 2H) , 1.95 (m, 2H) , 1.71 (t, 4H) , 1.21 (bs, 3 H) ;

Exemplo 6 N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-(4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] metilamino}butil)acetamida (Composto 6)

Sal de ácido hidroclórico de N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro -2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}acetamida (2 g, 3,5 mmol) foi dissolvido em 80 ml de diclorometano e 10 ml de metanol. Trietilamina (0,45 g, 4,5 mmol) e paraformaldeído (0,14 g, 4,5 mmol) foram aí adicionados e agitados durante 2 22/56 horas à temperatura ambiente. Após a concentração do solvente, foram aí adicionados 40 ml de metanol e borohidreto de sódio (0,76 g, 20,2 mmol) e agitados durante 15 horas. Após a remoção de metanol por destilação sob pressão reduzida, foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica ao restante resíduo para resultar no composto base na forma de sólido branco (1,2 g, 62%) 1H NMR(MeOD) : 7.98(m, 2H), 7.60(m, 2H), 7.19(m, 2H), 7.11(m, 2H), 4.02(m, 4H), 3.46-3.36(m, 4H), 2.69-2.52(m, 4H), 2.41,2.34(s, 3H), 2.10(d, 3H) , 1.98-1.90 (m, 4H) , 1.63-1.51 (m, 4H) ;

Exemplo 7 3-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propila mino]butil}-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 7)

Etil 2-etoxicarbonilamino benzoato (7 g, 29,5 mmol) e N-(3-aminopropil)butano-1,4-diamina (2,1 g, 14,8 mmol) foram derretidos a 140 °C. Após 3 horas, 50 ml de isopropil álcool foram adicionados para formação do sólido, filtrados e secos sob pressão reduzida. Foi obtido o composto base do sólido amarelo (3,2 g, 50%). ΧΗ NMR(DMSO-de) : 7.91(m, 2H) , 7.63(m, 2H) , 7.18(m, 4H) , 3.9 0(m, 4H), 2.50(m, 4H), 1.69(m, 2H), 1.58(m, 2H), 1.39(m, 2H) ;

Exemplo 8

Sal de ácido dihidroclórico de N—(3—{4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilamino}propil)-4-hidroxibenzamida (Composto 8) 23/56 Ácido 4-hidroxibenzóico (1,13 g, 8,2 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (1,27 g, 9,4 mmol), 1,3-diciclohexilcarbodiimida (1,94 g, 9,4 mmol) e N,N'-diisopropiletilamina (1,64 mL, 9,4 mmol) foram adicionados em 20 mL de dimetilsulfóxido e agitados durante 15 minutos. 3-{3-[4-(3-aminopropilamino)butilamino]propil} -lH-quinazolina-2,4-diona (2,18 g, 6,3 mmol) foram dissolvidos em dimetilsufóxido 10 ml foram ai adicionados e agitados a 50 °C com calor. Após 5 horas, o dimetilsulfóxido foi removido, a restante solução foi dissolvida com ácido hidroclorídrico concentrado. Após a remoção de metanol foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica para resultar no composto base do sólido branco (1,6 g, 47%) 1H NMR(D20) : 7.91 (d, 1H) , 7.74(t, 1H), 7.63(d, 2H), 7.33(t, 1H), 7.16(d, 1H), 6.8 7(d, 2H) , 4.07(t, 2H) , 3.53(t, 2H) , 3.20(m, 8H), 2.11(m, 4H), 1.91(s, 4H) ;

Exemplo 9 3-{3-[4-({N-[3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il )propil]-N-benzil}amino)butilamino]propil}-lH-quinazolina -2,4-diona (Composto 9) 3—(3—{4—[3—(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilamino}propil)-lH-quinazolina-2, 4-diona(2 g, 4,1 mmol) foram dissolvidos em 60 mL de tetrahidrofurano e hidróxido de sódio (0,3 g, 8,1 mol) solução aquosa 60 ml e foram arrefecidos. Foi adicionado brometo de benzilo (0,48 mL, 4,1 mmol) através de gotas. Após 15 horas, os sólidos formados foram filtrados e o filtrado foi destilado sob pressão reduzida. Foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica do restante resíduo para resultar no composto base do branco sólido (0,28 g, 12%) 24/56 1H NMR(CDCI3) : 7.91(dd, 2H) , 7.48(m, 4H), 7.29-7.04(m, 7H), 4.13(t, 2H), 3.92(t, 2H) , 3.57(s, 2H), 3.13(t, 2H), 3.04(t, 2H) , 2.51(m, 4H) , 2.30(m, 2H) , 2.00(m, 2H) , 1.78(m, 2H) , 1.63(m, 2H);

Exemplo 10

Sal de ácido hidroclórico de N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro -2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butiljbenzamida (Composto 10)

No Exemplo 5 acima, o cloreto de benzoíla (0,69 g, 4,9 mmol) foi usado em vez de cloroformato de etilo. O mesmo procedimento descrito no Exemplo 5 acima foi efectuado para resultar no composto base do sólido branco (0,2 g, 7,8%). lE NMR(DMSO-d6) : 7.94-7.84(m, 2H), 7.65(m, 2H), 7.38(m, 2H), 7.22-7.01 (m, 7H), 3.96-3.72(m, 4H), 3.48-3.16(m, 4H), 2.89-2.64(m, 4H), 1.96-1,82(m, 4H), 1.62-1,34(m, 4H) ;

Exemplo 11 Éster butilico terciário do ácido [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(4 -[3-(2, 4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilami no] butil} carbâmico (Composto 11) 3—(3—{4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilaminoJpropil)-lH-quinazolina-2,4-diona (2 g, 4,1 mmol) foi dissolvido em piridina 20 ml e depois arrefecido. 0,93 g de di-tert-butil dicarbonato (4,3 mmol) foram ai adicionados. Após 3 horas, a piridina foi removida sob pressão reduzida, foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica para resultar no composto base do sólido amarelo (0,25 g, 10,4%) 25/56 ΧΗ NMR(MeOD) : 7.99(m, 2H), 7.60(m, 2H), 7.22-7.09(m, 4H), 4.04(m, 4H) , 3.25 (t, 4H), 2.59(m, 4H) , l,90(m, 4H) , 1.60-1.48 (m, 4H), 1.40(s, 9H);

Exemplo 12

Sal de ácido hidroclórico de N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l ,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butilJmetano-sulfonamida (Composto 12) 3—(3—{4—[3—(2, 4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilamino}propil)-lH-quinazolina-2,4-diona (2 g, 4,1 mmol) foi dissolvido em hexametilfosforamida 10 mL com calor. Foi adicionado aí diclorometano 30 mL e arrefecido, e depois foi adicionado cloreto de metanossulfonila (0,5, 4,3 mmol) . Após 2 horas, o diclorometano foi removido sob pressão reduzida, foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica do restante resíduo para resultar no composto base do sólido branco (0,67 g, 27%) 1tt NMR(DMSO-de) : 7.93(m, 2H) , 7.64(m, 2H) , 7.20(m, 4H) , 3.97(t, 2H), 3.91(t, 2H), 3.17(m, 4H), 2.90(s, 3H), 2.89(m, 4H), 1.9 7(m, 2H), 1.85(m, 2H), 1.61 (s, 4H);

Exemplo 13 N-(4-{benzil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il )propil]amino}butil)-N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinaz olina-3-il)propil)acetamida (Composto 13) 3- 3-[4-({N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propil]-N-benzil}amino)butilamino]propil-lH-quinazolina-2, 4- diona (0,28 g, 0,48 mmol) foi dissolvido em 5 mL de diclorometano. Trietilamina (0,13 mL, 0,96 mmol) e anidrido acético (0,06 mL, 0,58 mmol) foram adicionados e agitados 26/56 durante 1 hora. A camada orgânica foi separada ao adicionar água e secada com sulfato de magnésio. Após filtração e concentração, foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica do restante resíduo para resultar no composto base na forma de óleo (0,12 g, 40%) ^ NMR(MeOD) : 7.96(t, 2H), 7.58(m, 2H), 7.32(d, 2H), 7.25-7.06 (m, 7H), 4.01(m, 4H) , 3.64,3.59(s, 2H), 3.41 (m, 2H), 3.29 (m, 2H), 2.54(m, 4H) , 2.09,2.04(s, 3H) , 1.98-1,85 (m, 4H) , 1.63-1,49(m, 4H);

Exemplo 14 (4-{acetilo[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]aminojbutil)-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quina zolina-3-il) propil ] éster etílico de ácido carbâmico (Composto 14)

No Exemplo 4 acima, o sal de ácido hidroclórico de N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilami no]butil}acetamida 3 g (5,3 mmol) e cloroformato de etilo 0,6 mL(6,3 mmol) foram usados, em vez de 3-(3-4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi lamino]butilaminopropil)-lH-quinazolina-2,4-diona e anidrido acético. 0 mesmo procedimento do Exemplo 4 acima foi realizado para resultar no composto base do sólido branco (1,1 g, 34%) na mistura-solvente de piridina e diclorometano. 1H NMR(CDCI3) : 10.40(d, 2H) , 8.06(m, 2H) , 7.56(m, 2H) , 7.17(m, 4H), 4.10(m, 6H) , 3.50-3.30 (m, 8H), 2.10(s, 3H), l,97(m, 4H), 1.55(d, 4H), 1.21(m, 3H) ;

Exemplo 15 27/56 3—[3—(4—{Ν—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propil]-N-benzilamino}buil)-N-benzilamino]propil-lH-quinaz olina-2,4-diona (Composto 15)

No Exemplo 9 acima, o composto base (0,4 g, 15%) foi obtido por filtração de sólidos brancos formados por reacção de 15 horas. 1H NMR(DMSO-d6) : 7.88(d, 2H) , 7.61(t, 2H) , 7.27-7.13(m, 14H), 3.88(t, 4H), 3.46(s, 4H), 2.39(t, 4H), 2.29(s, 4H), 1.72(m, 4H) , 1.36 (s, 4H) ;

Exemplo 16 [3-(2, 4-dioxo-l, 4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] -(4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] etoxicarbonilamino}butil)éster etilico de ácido carbâmico (Composto 16) 3—(3—{4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilamino}propil)-lH-quinazolina-2,4-diona(2 g, 4,1 mmol) foi dissolvido em 40 ml de piridina e cloroformato de etilo (0,46 ml, 4,9 mmol) foi ai adicionado. Após 2 horas, a piridina foi removida sob pressão reduzida e o diclorometano e água foram adicionados ao restante resíduo. Após cada camada ter sido separada, o diclorometano foi removido e foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica do restante resíduo para resultar no composto base do sólido amarelo (0,61 g, 24%) ^ NMR(CDCI3) : 8.09(d, 2H) , 7.58(t, 2H), 7.20(t, 2H), 7.12(d, 2H) , 4.09 (m, 8H) , 3.35-3.25(m, 8H) , l,96(m, 4H) , l,52(s, 4H) , 1.21 (t, 6H);

Exemplo 17 28/56 terciário do Éster butilico ácido(4-{tert-butoxicarbonil[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]aminojbutil)-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]carbâmico (Composto 17)

No exemplo 11 acima, o composto base do sólido branco (0,3 g, 11%) foi obtido ao retirar outra fracção de cromatografia de gel de sílica. ΧΗ NMR(CDCI3) : 10.08(bs, 2H) , 8.09(d, 2H) , 7.56(t, 2H) , 7.19(t, 2H), 7.12(d, 2H) , 4.05(m, 4H) , 3.30-3.20 (m, 8H) , 1.94(t, 4H), 1.51(s, 4H) , 1.42(s, 18H);

Exemplo 18 N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-(4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]m etanosulfonilamino}butil)metanosulfonamida (Composto 18)

No exemplo 12 acima, o composto base do sólido branco (0,24 g, 9,1 %) foi obtido ao retirar outra fracção de cromatografia de gel de sílica. ΧΗ NMR(DMSO-ds) : ll,36(s, 2H) , 7.90(d, 2H) , 7.62(t, 2H) , 7.16(m, 4H) , 3.9 0 (t, 4H) , 3.21-3.13 (m, 8H) , 2.88(s, 6H) , 1,8 4(m, 4H), 1.56(s, 4H);

Exemplo 19 N_[3-(acetil-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3 - il)propilamino]butil}amino)propil]-4-hidroxibenzamida (Composto 19) N-(3-{4-[3-(2, 4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilamino}propil)-4-hidroxibenzamida (1,27 g, 2, 72 mmol) foi dissolvido em 10 ml de piridina e foi adicionado 29/56 aí anidrido acético (0,4 ml, 4,07 mmol). Após 2 horas, a piridina foi removida por destilação sob pressão reduzida e o diclorometano e água foram aí adicionados. A camada orgânica foi separada e removida. Após a concentração sob pressão reduzida, o restante resíduo foi tratado por cromatografia de coluna de gel de sílica e resina de troca iónica para resultar no composto base na forma de óleo (0,06 g, 4,3%). 1H NMR (MeOD) : 8.00(d, 1H) , 7.70(d, 2H) , 7.63(t, 1H) , 7.21 (t, 1H), 7.16(d, 1H), 6.80(d, 2H), 4.09(t, 2H), 3.39(m, 6H), 2.77 (m, 4H), 2.12,2.09(s, 3H), 1.99-1,82(m, 4H), 1.59(m, 4H);

Exemplo 20 N-[3-(4-{acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina -3-il)propil]amino}butilamino)propil]-4-hidroxibenzamida (Composto 20)

No Exemplo 19 acima, o composto base na forma de óleo (0,06 g, 4,0%) foi obtido ao retirar outra fracção de cromatografia de gel de sílica e tratar a fracção com resina de troca iónica GC-50 . 1H NMR(MeOD) : 7.99(m, 1H), 7.70(d, 2H), 7.61(m, 1H), 7.17(m, 2H) , 6.80(d, 2H), 4.01(m, 2H) , 3.42(m, 6H) , 2.87(m, 4H) , 2.10(s, 3H), 1.97-1,90(m, 4H), 1.64(m, 4H);

Exemplo 21 N-{3-[acetil-(4-{acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino Jbutil)amino]propil}-4-hidroxibenzamida (Composto 21)

No exemplo 19 acima, o composto base do sólido branco (0,53 g, 35,4%) foi obtido ao retirar outra fracção de cromatografia de gel de sílica. 30/56 ΧΗ NMR(MeOD) : 7.98(t, 1H) , 7.70(dd, 2H) , 7.60(m, 1H) , 7.15(m, 2H), 6.8 0(dd, 2H), 3.99(m, 2H), 3.42-3.30 (m, 10H) , 2.09 (t, 3H), 2.07(t, 3H), 1.92-1,78(m, 4H), 1.55(m, 4H);

Exemplo 22 N-[4-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)butil]-N-[3-(2, 4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] acetamida (Composto 22)

No Exemplo 4 acima, 3-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro -2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}-lH-quinazolina-2,4 -diona (1 g, 2,3 mmol) foi usado em vez de 3-(3-4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butilaminopropil)-lH-quinazolina-2,4-diona. 0 mesmo procedimento do Exemplo 4 acima foi realizado para resultar no composto base do sólido branco (0,89 g, 81 %) na mistura-solvente de piridina e diclorometano. 1H NMR(MeOD) : 7.98(m, 2H) , 7.60(m, 2H) , 7.16(m, 4H) , 4.02(m, 4H), 3.42(m, 4H), 2.09(d, 3H) , 1.95(m, 2H), 1.64(m, 4H);

Exemplo 23 3—(2—{3—[2—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) etilamino]propilamino}etil)-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 23)

No Exemplo 7 acima, foi usado N,N'-bis (2-aminoetil)-1,3-propanediamina 2,4 g (14, 8 mmol) em vez de N-(3-aminopropil)butano-1,4-diamina. 0 mesmo procedimento do Exemplo 7 acima foi efectuado para resultar no composto base do sólido amarelo (3,7 g, 55%). NMR(DMSO-de) : 7.88(d, 2H) , 7.59(t, 2H) , 7.14(m, 4H) , 3.92(t, 4H), 2.65(t, 4H), 2.47(m, 4H), 1.43(m, 2H); 31/56

Exemplo 24 3-(3—{3—[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]propilamino}propil)-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 24)

No Exemplo 7 acima, foi usado N,N'-bis(3-aminopropil)-1,3-propanediamina 2,8 g (14,8 mmol) em vez de N-(3-aminopropil)butano-1,4-diamina. 0 mesmo procedimento do Exemplo 7 acima foi efectuado para resultar no composto base do sólido branco (2,9 g, 41%). 1H NMR(DMSO-dg) : 7.91(d, 2H) , 7.63(t, 2H) , 7.17(m, 4H) , 3.92(t, 4H), 2.49(t, 8H), 1.70(m, 4H) , 1.49(m, 2H) ;

Exemplo 25 3-(3-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]-2-butenilamino}propil)-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 25)

No Exemplo 7 acima, foi usado N,Ν'-bis(3-aminopropil)-2-buteno-l,4-diamina 2,96 g (14,8 mmol em vez de N-(3-aminopropil)butano-1,4-diamina. 0 mesmo procedimento do Exemplo 7 acima foi efectuado para resultar no composto base do sólido branco (4,5 g, 62%). ΧΗ NMR(DMSO-ds) : 7.91(d, 2H) , 7.62(t, 2H) , 7.17(m, 4H) , 5.51(s, 2H), 3.91(t, 4H), 3.06(s, 4H), 2.47(m, 4H), 1.68(m, 4H) ;

Exemplo 26 Éster butilico terciário do ácido (4-{tert-butoxicarbonil-[3-(l-metil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinaz olina-3-il)propi1]aminojbutil)-[3-(1-metil- 2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]carbâmico (Composto 26) 32/56 terciário ácido do Éster butilico (4-{tert-butoxicarbonil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butil)-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]carbâmico (2 g, 2,9 mmol) foi dissolvido em 10 ml de tetrahidrof urano e 10 ml de diclorometano e arrefecido. Foi adicionado hidreto de sódio (0,2 g, 8,3 mmol) e iodometano (0,6 mL, 9,6 mmol) e agitados durante 2 horas. Após o solvente ter sido concentrado sob pressão reduzida, foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica do restante resíduo para resultar no composto base na forma de óleo (1,9 g, 91%) 1H NMR(CDCI3) : 8.21(d, 2H) , 7.66(t, 2H) , 7.24(t, 2H) , 7.18(d, 2H) , 4.09(t, 4H) , 3.59(s, 6H) , 3.26-3.19(m, 8H) , 1.9.1(m, 4H) , 1.48(s, 4H), 1.40(s, 18H);

Exemplο 2Ί

Sal de ácido hidroclórico de l-metil-3-(3-{4-[3-(1-metil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino] butilaminojpropil)-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 27) Éster butilico terciário do ácido (4-{tert-butoxicarbonil-[3-(1-meti1-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butil)-[3-(1-meti1-2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] carbâmico (1,8 g, 2,5 mmol) foi dissolvido em 20 mL de metanol, o ácido hidroclórico concentrado foi adicionado aí e agitado. Após o metanol ter sido concentrado, o composto base do sólido branco (1,3 g, 88%) foi obtido por cristalização. ΧΗ NMR(D20) : 7.81(d, 2H), 7.71(t, 2H), 7.25(t, 2H), 7.19(d, 2H), 4.04 (t, 4H) , 3.34(s, 6H) , 3.13(m, 8H) , 2.10(m, 4H) , 1.89(s, 4H); 33/56

Exemplo 28

Sal de ácido hidroclórico de 3—(3—{4— [ 3 — (1,3-dioxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il)propilamino] butilaminojpropil)-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 28) 3-{3-[4-(3-aminopropilamino)butilamino]propil}-1H-quinazolina-2,4-diona(1,06 g, 3,1 mmol) e dietilftalato (0,68 g, 3,1 mmol) foram aquecidos e agitados a 125-130 °C . Após 3 horas, 25 ml de isopropil álcool e ácido hidroclórico concentrado foram adicionados ai para formar um sólido. Foi realizada a cromatografia de coluna de gel de silica do sólido obtido por filtração para resultar no composto base do sólido branco (0,25 g, 15%) 1H NMR(D20) : 7.77(d, 1H), 7.71 (m, 4H), 7.61 (m, 1H), 7.19(t, 1H), 6.9 9 (d, 1H) , 3.98(t, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.10(m, 8H) , 2.06 (m, 4H) , 1.81 (s, 4 H) ;

Exemplo 29

Sal de ácido hidroclórico de 3-(3-{2-[3-(2,4-dioxo-l, 4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]etilamino jpropil) -lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 29)

No Exemplo 7 acima, foi usado, N,N'-bis(3-aminopropil)etilenodiamina (2,5 g, 14,3 mmol) em vez de N-(3-aminopropil)butano-1,4-diamina. O mesmo procedimento do Exemplo 7 acima foi efectuado para formar um sólido e ácido hidroclórico concentrado foi então tratado para resultar no composto base do sólido branco (1,5 g, 9,5%) em metanol. NMR(D20) : 7.91(d, 2H), 7.64(m, 2H), 7.25(m, 2H), 7.07(d, 2 H), 4.07(t, 4H), 3.48 (s, 4H), 3.21 (t, 4H), 2.12(m, 4H);

Exemplo 30 34/56 Éster butílico terciário do ácido [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(4-{ [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] hexilaminojbutil)carbâmico (Composto 30) Éster butilico terciário do ácido [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butil}carbâmico (2 g, 3,4 mmol) foi dissolvido em 40 mL de tetrahidrof urano. Hidreto de sódio (0,16 g, 6,7 mmol) e 1-bromo-hexano (0,67 g, 4,0 mmol) foram adicionados ai e agitados sob refluxo. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida, e foi realizada a cromatografia de coluna de gel de sílica do restante resíduo para resultar no composto base do sólido branco (0,52 g, 23%) 1H NMR(MeOD) : 7.99(m, 2H) , 7.61(m, 2H) , 7.20(m, 2H) , 7.12(dd, 2H), 4.04(m, 4H) , 3.26(m, 4H) , 2.74(m, 6H) , l,93(m, 4H) , 1.54(m, 6H), 1.40(s, 9H), 1.29(s, 6H), 0.88(t, 3H);

Exemplo 31

Sal de ácido dihidroclórico de 3-[3-(4-{N-[3-(2,4-dioxo-1, 4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-hexilamino} butilamino) propil]-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 31) Éster butílico terciário do ácido [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(4-[ {3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] hexilaminojbutil)carbâmico 0,4 g (0,6 mmol) foi desprotegido pelo mesmo procedimento do Exemplo 27 acima e separado por cromatografia para resultar no composto base do sólido branco (0,1 g, 26%) . 1H NMR(MeOD) : 7.97(m, 2H), 7.60(m, 2H), 7.20(m, 2H), 7.11(t, 2H), 4.13 (t, 2H) , 4.0 4 (t, 2H) , 3.04(m, 4H) , 2.75(t, 2H) , 2.67 35/56 (m, 4H), 2.10(m, 2H), 1.91 (m, 2H) , 1.79(m, 2H), 1.70(m, 2H), 1.55(m, 2H), 1.30(m, 6H) , 0.88(t, 3H);

Exemplo 32 Éster butílico terciário do ácido (4-{tert-butoxicarbonil-[3-(l-hexil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butil)-[3-(l-hexil-2, 4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] carbâmico (Composto 32) Éster butilico terciário do ácido (4-{tert-butoxicarbonil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]aminojbutil)-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]carbâmico (3 g, 4,3 mmol) foi dissolvido em 120 mL de acetonitrilo. O carbonato de potássio (3,45 g, 25,0 mmol) e 1-bromo-hexano (3,5 g, 21,1 mmol) foram adicionados aí e agitados durante 3 horas sob refluxo. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida, e foi realizada a cromatografia em coluna de gel de sílica do restante resíduo para resultar no composto base na forma de óleo sem cor (3,7 g, 99%). NMR(CDCI3) : 8.13(d, 2H) , 7.57(t, 2H) , 7.14(t, 2H) , 7.09(d, 2H), 4.01 (m, 8H) , 3.13 (m, 8H) , l,84(m, 4H) , l,64(m, 4H) , 1.36 (s, 18H), 1.41-1.25(m, 16H) , 0.82(t, 6H);

Exemplo 33

Sal de ácido hidroclórico de l-hexil-3-(3-{4-[3-(1-hexil -2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-i)propilamino] butilaminojpropil)-lH-quinazolina-2,4-diona (Composto 33) Éster butílico terciário do ácido (4-{tert-butoxicarbonil-[3-(l-hexil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-36/56 2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butil)-[3-(1-hexil-2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]carbâmico (2 g, 2,3 inmol) foi desprotegido pelo mesmo procedimento como no Exemplo 27 acima e cristalizado em etanol para resultar no composto base do sólido branco (1,07 g, 63%). 1H NMR(MeOD) : 8.15(d, 2H), 7.78(m, 2H) , 7.43(d, 2H), 7.30(t, 2H), 4.17(m, 8H), 3.09(t, 8H), 2.12(m, 4H), l,84(s, 4H), 1.72 (m, 4H), 1.45-1,35(m, 12H), 0.91 (t, 6H) ;

Exemplo 34 Éster butilico terciário do ácido [3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(4-{ [3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil] heptanoilamino}butil)carbâmico (Composto 34) Éster butilico terciário do ácido [3 —(2, 4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[ 3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]b util}carbâmico (0,4 g, 0,7 mmol) foi deixado reagir com anidrido heptanóico (0,2 g, 0,8 mmol) em vez de anidrido acético do Exemplo 4 acima. 0 composto base do sólido branco (0,37 g, 88%) foi obtido através do mesmo procedimento como no Exemplo 4. ΧΗ NMR(CDCI3) : 8.10(m, 2H), 7.58(m, 2H), 7.26-7.10(m, 4H), 4.08(m, 4H) , 3.49-3.23 (m, 8H) , 2.28(t, 2H) , 1.95(m, 4H) , 1.66-1.50(m, 6H), 1.43(d, 9H), 1.27(m, 6H), 0.87(m, 3H);

Exemplo 35

Sal de ácido hidrocloridrico de [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro -2H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}amida de ácido heptanóico (Composto 35) 37/56

Usando éster butílico terciário do ácido [3-(2, 4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propil]-(4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3- il) propil]heptanoilamino}butil)carbâmico (0,36 g, 0,5 mmol), o composto base do sólido branco (0,2 g, 61 %) foi obtido através do mesmo procedimento como no Exemplo 31 acima. ΧΗ NMR(MeOD) : 8.01 (m, 2H), 7.63(m, 2H), 7.23-7.13(m, 4H), 4.14(t, 2H), 4.05(m, 2H), 3.45(m, 4H), 3.02(m, 4H), 2.35(m, 2H), 2.10-1,95(m, 4H) , 1.76-l,55(m, 6H) , 1.27(m, 6H) , 0.87(m, 3H) ;

Exemplo 36

Sal de ácido hidroclorídrico de N-[3-(2,4-dioxo-l,4 -dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4—[3—(2,4— dioxo -l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}-2,2,2-trifluoroacetamida (Composto 36)

No Exemplo 3 acima, foi usado anidrido trifluoroacético 1,5 g (7,3 mmol) em vez de anidrido acético, e o composto base do sólido amarelo (0,6 g, 15,8%) foi obtido através do mesmo procedimento como no Exemplo 3 acima. 1h NMR(MeOD) : 8.00(m, 2H), 7.63(m, 2H), 7.25-7.13(m, 4H), 4.14(m, 2H) , 4.06(m, 2H), 3.54(m, 4H), 3.01(m, 4H), 2.07(m, 4H) , 1 . 74 (m, 4H) ;

Exemplo 37 N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(2,2,2-trifluoroacetilo)amino]butil}-2,2,2-trifluoroacetamida (Composto 37) 38/56 0 composto base do sólido branco (1,1 g, 26,4%) foi obtido ao retirar outra fracção da cromatografia de coluna de gel de sílica e o sólido formado no Exemplo 36 acima. 1H NMR(MeOD) : 8.01(m, 2H) , 7.62(m, 2H) , 7.23-7.12(m, 4H), 4.03(m, 4H), 3.50(m, 8H), 2.01 (m, 4H), 1.65(m, 4H);

Exemplo 38

Sal de ácido hidroclorídrico de N-[3-(2,4-dioxo-l,4 -dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}-2- metoxiacetamida (Composto 38)

Foi usado o material primário do Exemplo 5 acima 0,5 g (1,0 mmol) e cloreto de metoxiacetil (0,12 g, 1,1 mmol) em vez de cloroformato de etilo. O mesmo procedimento do Exemplo 5 acima foi executado para resultar no composto base do sólido branco (0,1 g, 16,4%) . ΧΗ NMR(MeOD) : 8.00(m, 2H), 7.63(m, 2H), 7.23-7.12(m, 4H), 4.14(m, 4H) , 4.05(m, 2H) , 3.48-3.32 (m, 7H) , 3.01(m, 4H) , 2.12-2.01(m, 4H), 1.70(m, 4H) ;

Exemplo 39

Sal de ácido hidroclorídrico de [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[ 3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]b util}éster benzílico de ácido carbâmico (Composto 39)

Foram usados 1,05 g de cloroformato de benzilo (6,1 mmol) em vez do anidrido acético do Exemplo 3 acima, e o mesmo procedimento do Exemplo 3 acima foi executado para resultar no composto base do sólido amarelo (0,34 g, 8,4%) . ΧΗ NMR(MeOD) : 8.00(m, 2H), 7.63(m, 2H), 7.33-7.19(m, 7H), 7.13 (t, 2H), 5.08 (s, 2H), 4.13(t, 2H), 4.00(m, 2H), 3.41(m, 4H) , 3.00-2.92 (m, 4H) , 2.06(m, 2H) , 1.96(m, 2H) , 1.69(bs, 4H) ; 39/56

Exemplο 40 N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino] butil}-4-metilbenzenosulfonamida (Composto 40)

Em vez de cloreto de metanosulfonil do Exemplo 12 acima, foram usados 1,4 g de cloreto p-toluenossulfonila (7,3 mmol) . O mesmo procedimento do Exemplo 12 acima foi executado em metanol e de seguida a resina de troca iónica CG-50 foi tratada para resultar no composto base do sólido branco (0,3 g, 8%). 1H NMR(MeOD) : 7.95(d, 2H), 7.66(d, 2H), 7.58(m, 2H), 7.33(d, 2H), 7.18-7.08 (m, 4H) , 4.02(m, 4H), 3.23(t, 2H), 3.15(t, 2H), 2.55(q, 4H), 2.39(s, 3H) , 1.89(m, 4H), 1.63(m, 2H), 1.52(m, 2H) ;

Exemplo 41 N- [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-(4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-4-metilbenzenosulfonilamino}butil)-4-metilbenzenosulfonamida (Composto 41)

No Exemplo 40 acima, foi obtido o composto base do sólido branco (1,27 g, 26%) ao retirar outra fracção da cromatografia da coluna de gel de sílica. ΧΗ NMR(DMSO-ds) : ll,40(s, 2H) , 7.90(d, 2H) , 7.62(m, 6H) , 7.32(d, 4H), 7.17(m, 4H), 3.86(t, 4H), 3.08(m, 8H), 2.35(s, 6H), 1.75(m, 4H), 1.42(s, 4H);

Exemplo 42 40/56

Sal de ácido dihidroclórico de 3—(3—{4—[3— (2,5-dioxo-pirrolidina-l-il)propilamino]butilaminojpropil) -lH-quinazolina-2, 4-diona (Composto 42)

Foram usados 1,5 g de material primário (4,3 mmol) do Exemplo 28 acima, e foi usado anidrido succinico (0,43 g, 4,33 mmol) em vez de ftalato de dietilo. 0 mesmo procedimento do Exemplo 28 acima foi executado para resultar no composto base do sólido amarelo (0,23 g, 11%). 1H NMR(MeOD) : 8.05(d, 1H), 7.67(m, 1H), 7.25(t, 1H), 7.20(d, 1H), 4.16 (t, 2H), 3.61 (t, 2H), 3.07(m, 8H), 2.72(s, 4H), 2.12 (m, 2H), 1.9 7(m, 2H), 1.82(m, 4H);

Será explicado com mais detalhe que o composto da fórmula (I) acima, de acordo com a presente invenção tem efeitos excelentes como agente neuroprotector, pelos seguintes Exemplos usando os compostos preparados pelos Exemplos acima.

Os seguintes Exemplos experimentais são indicados para ajudar na compreensão da invenção, e não deverão ser, de forma alguma, interpretados como limitativos da invenção indicada nas reivindicações que seguem mais adiante. <Exemplo Experimental 1> Experiência de efeito anti-avc no modelo de oclusão da artéria cerebral média (MCAO)

Foram usados ratos machos de espécies SD com 290-300 g de peso corporal como animais de laboratório, e foram usados 8 ratos em cada grupo experimental. A operação foi executada ao usar o método de Nagasawa et al. (Nagasawa, H. and Gogure, K. 1989, Stroke, 20: 1037-1043).

Os ratos foram anestesiados com Cetamina, e a operação foi executada à medida que a temperatura corporal foi mantida 41/56 usando termoplaca. Foi realizada uma incisão na região cerebral seguindo a linha média do pescoço, e a artéria carótida comum esquerda, artéria carótida interna e artéria carótida externa foram separadas, tendo cuidado para não danificar o nervo vagus. A artéria carótida comum e a artéria carótida externa foram ligadas, e uma sonda foi inserida na artéria carótida interna a partir do ponto de ramificação das artérias carótida interna e externa. E de seguida, o fundus da artéria cerebral média foi ocluido por ligadura mesmo no lado superior da região da inserção. Uma sonda foi criada ao aquecer a extremidade de uma sutura cirúrgica de nylon 4-0 (Dafilon, B.Braun, Germany) e cortada em 30 mm. A extremidade de 7-9 mm da sonda foi revestida com a mistura de silicone (Xantopren VL plus, Heraeus Kulzer, Germany) e agente de tratamento (Optosyl-Xantopren VL plus, Heraeus Kulzer, Germany), e a espessura deveria ser 0,3-0,4 mm. Após a intervenção da inserção da sonda e os animais terem acordado da anestesia, os sujeitos, nos quais foram observados sintomas de défice neurológico (rodar para o lado direito), foram incluídos no grupo de isquémia.

Após 3 horas em isquémia, a sonda inserida foi removida para reperfusão da circulação sanguínea. O cérebro foi extraído após 24 horas, seguido por uma coloração histológica. O composto 3 foi administrado a uma altura programada, antes ou após a inserção da sonda, com administração oral ou intravenosa. A coloração TTC (cloreto 2,3,5-trifeniltetrazolium) foi executada para estimar os danos do tecido cerebral por isquémia. O procéfalo do cérebro extraído foi dissecado em secções sequenciais de 2 mm ao usar uma matriz cerebral (ASI instrument, Warren, MI, USA) . As secções foram colocadas em 2% de solução TTC e incubadas a 37 °C durante 60 minutos para coloração. A secção de cérebro colorido com TTC foi fixo em 10% de solução-tampão com 42/56 formalina e a frente de cada secção foi fotografada com uma câmara digital. As áreas enfartadas (cm2) que não foram coloridas com vermelho forte em cada imagem captada foram medidas usando um analisador de imagem, o volume enfartado total (cm3) foi calculado ao multiplicar a espessura das secções.

Como resultado, a administração oral (100 mg/kg) do composto 3 mostrou o efeito inibidor de que a percentagem do volume enfartado cerebral era de 22,3% e 69,8% comparado com o controlo negativo por administração oral efectuada durante uma hora e mesmo antes de induzir o AVC. A citicolina (2 g/kg), administrada como controlo positivo, foi observada 51,1 e 37,8 % em cada (Tabela 1 e Figura 1).

Na experiência, a sonda foi removida após a indução do AVC para que a circulação fosse reperfundida. 0 composto 3 foi então administrado num tempo intermédio com dose de 5 mg/kg, o efeito inibidor de volume de necrose de 62,7% foi observado mesmo apesar de a administração ter sido executada 12 horas após a reperfusão. Por outro lado, o MK-801 administrado como controlo positivo mostrou o efeito máximo aos 30 minutos após a reperfusão (Tabela 2). Por isso, o composto 3 tem efeitos óbvios na prevenção e tratamento de AVC, e pode também ser aplicado a pacientes cujo tratamento foi atrasado após o surgimento do AVC. 43/56

Tabela 1. Efeito anti-avc por administraçao oral

Tempo de tratamento (antes de induzir AVC isquémico) Composto 3 (100 mg/kg, po) Citicolina (2 g/kg, po) Volume enfartado (cm3, Média ± desvio padrão) Percentagem inibitória comparada com o controlo negativo (%) Volume enfartado (cm3, Média ± desvio padrão) Percentagem inibitória comparada com o controlo negativo (%) 0 0,14+0,02 69, 8 0,28±0,04 37, 8 1 0,35±0,07 22, 3 0,22±0,03 51,1 Volume enfartado do controlo negativo 0,45±0,03 Tabela 2. Efeito anti-avc por administração intravenosa Tempo de tratamento (Após reperfusão) Composto 3 (5 mg/kg, iv) MK-801 (1 mg/kg, iv) Volume enfartado (cm3, Média ± desvio padrão) Percentagem inibitória comparada com o controlo negativo (%) Volume enfartado (cm3, Média ± desvio padrão) Percentagem inibitória comparada com o controlo negativo (%) LO O 1 0,14±0,03 67,2 0,19±0,06 55, 4 0,5 0,12±0,03 72,3 0,21 ±0,04 50, 2 1 0,20±0,04 53, 8 0,31 ±0,02 27, 0 2 0,22±0,02 49, 9 0,33±0,02 22, 8 4 0,22±0,09 47, 9 0,28±0,08 34, 4 6 0,17±0,04 60, 9 0,37±0,06 13,3 12 0,16±0,04 62, 7 0,39±0,06 8,7 18 0,37±0,03 13,5 0,40±0,08 7,4 24 0,36±0,08 16,3 0,39±0,05 8, 8

Volume enfartado do controlo negativo 0,43±0,02 <Exemplo Experimental 2> Efeito inibitório da neurotoxicidade excitável em cultura misturada de células nervosas-células gliais 0 isolamento e cultura de células nervosas foram executados pelo método de Choi (Choi, D. W. 1985, Neurosci. Lett., 58: 293-297). Isto é, o córtex foi isolado no feto do rato fêmea ICR que estava grávida de 14 dias, e depois foram obtidas células simples a partir do tecido usando uma pipeta. As células foram aliquotadas em 2 X 105/densidade de poço numa placa de 24 poços (Falcon), na qual as células gliais do córtex cerebral foram cultivadas numa incubadora mantida a 37 °C com 44/56 5% de C02 durante mais de 3 semanas. 0 meio de cultura foi suplementado com MEM (meio essencial mínimo, Sigma), 2 mM de glutamina, 21 m de glucose, 26,5 mM de bicarbonato, 10% de soro fetal bovino (FBS). Em 3-5 dias após alíquota, 10 μΜ Ara-C (citosina arabinosídeo) foram tratados para suprimir a proliferação de neuroglia. E foi tratado com 100 μΜ de NMDA e 1 pg/mL ou 2 μg/mL de cada amostra (composto) para induzir a morte das células nervosas devido à toxicidade excitável durante 20 minutos, em 12-15 dias após alíquota. Devido à morte das células nervosas, a desidrogenase láctica (LDH) acumulada em proporção ao número das células mortas. Nas 24 horas após o tratamento com o fármaco, a quantidade de desidrogenase (LDH) libertada para fora das células foi medida ao usar um kit de medição LDA (CytoTox 96, Promega). Após a reacção estar completa, a mudança na absorvância, dependendo da quantidade de LDH, foi medida ao usar um espectrofotómetro de microplacas. 0 efeito inibidor na morte da célula comparado com o controlo negativo foi mostrado na Tabela 3, e mostrou um efeito significativo. 45/56

Tabela 3. Efeito de protecçao na morte de células nervosas induzida por NMDA em _cultura mista de células nervosas - células gliais_

Composto Efeito inibitório da morte celular por neurotoxicidade excitável induzida por NMDA, % Composto Efeito inibitório da morte celular por neurotoxicidade excitável induzida por NMDA, % 1 pg/ ml 2 pg/ml 1 pg/ml 2 pg/ ml MK-801 49, 0 63,6 21 19,6 16,6 1 16,1 2,4 22 17, 0 14, 0 2 11,0 0,7 23 36,0 32,2 3 45,5 54, 4 24 27, 4 30,3 4 22,3 7,4 25 35,2 28, 8 5 11,4 39, 4 26 8, 8 29, 7 7 26,0 39, 7 27 33,7 36,0 8 20, 0 28,2 28 23,1 22, 4 9 21,4 33,3 29 8,5 29,5 10 15, 4 13,7 30 38,3 44, 4 11 15, 0 ND 32 32, 0 29, 8 12 5, 7 2,6 33 14,6 65, 1 13 17, 4 23,0 35 32,5 35, 7 14 18, 9 26,9 36 32,2 18, 4 15 22, 4 22,3 37 27,3 25, 0 16 18, 1 ND 38 33,5 13,5 17 21,0 10, 7 39 30, 8 17,1 18 44, 4 21,0 40 ND 34,5 19 40, 1 45,2 41 ND 28,5 20 36,4 42,5 42 24,6 21,8 ND: Nao detectado 46/56

<Exemplo Experimental 3> Efeito inibidor na citotoxicidade mediada com H2O2 em células SH-SY5Y

As células SH-SY5Y, que são orientadas por linha de células nervosas de humanos, foram cultivadas com concentração de células 3 X 104 numa placa de 96 poços, e a amostra foi tratada. Após 30 minutos, 200 μΜ de peróxido de hidrogénio foram tratados para induzir a toxicidade durante 24 horas. Após a reacção estar concluída, a taxa de sobrevivência das células foi medida por ensaio MTT.

Como resultado, foi identificado que a taxa de sobrevivência das células SH-SY5Y foi positivamente correlacionada com a concentração do Composto 4, e foi mostrado cerca de 35% do efeito de protecção nas células na concentração de 100 pg/ml (Tabela 4) .

Tabela 4. Efeito inibitório na toxicidade oxidativa induzida por hidroperóxido

Concentração Percentagem inibitória (%) 5 pg/ml 2,0±0,4 50 pg/ml 18,1±2,1 100 pg/ml 34,5±5,8

<Exemplo Experimental 4> Efeito inibidor na citotoxicidade mediada com ZnS04 em células SH-SY5Y

As células SH-SY5Y foram cultivadas com concentração de célula 3 X 104 em placas de 96 poços, e o composto (50 pg/ml) foi tratado. Após 30 minutos, 600 μΜ de sulfato de zinco foram tratados para induzir toxicidade durante 24 horas e a taxa de sobrevivência das células foi medida pelo ensaio MTT. O resultado mostrou um efeito inibidor de 9,1 a 21,7% na toxicidade (Tabela 5). 47/56

Tabela 5. Efeito inibitório na toxicidade induzida por zinco

Composto Percentagem inibitória (%) 2 21,7±4,1 3 17,6±3,5 12 12,7+4,3 35 9,1±1,8 <Exemplo Experimental 5> Efeito inibidor na produção ROS nas células cerebrais 0 stress oxidativo foi medido para testar os efeitos inibidores na produção das espécies de oxigénio reactivo (ROS) ao usar DCF-DA, que é uma sonda fluorescente. As células cerebrais foram obtidas a partir do córtex cerebral do rato para preparar a solução celular com 2x1 O6 células/ml. Cada célula cerebral foi tratada com 11 μΜ de DCF-DA, seguido pela reacção num incubador a 37 °C, 5% de C02 durante uma hora.

Após lavar duas vezes, o Composto 3 foi tratado com uma concentração de 125 pg/ml e 250 pg/ml. Ao mesmo tempo, 300 μΜ de NMDA foram tratados e incubados num incubador a 37 °C, 5% de C02 durante 24 horas. Após a reacção estar concluída, a fluorescência que mostrou oxigénio reactivo na solução de reacção foi medida ao usar um espectrofotómetro de fluorescência (excitação 480 nm/emissão, 535 nm). Como resultado, o Composto 3 suprimiu o stress oxidativo induzido por NMDA das células nervosas de uma forma dependente da dose (Figura 2) . O efeito inibidor ROS dos compostos foi representado para a dose que suprime 50% da produção do oxigénio reactivo comparado com o controlo. Foi observado aumento da actividade da dismutase do superóxido (SOD), uma enzima que desempenha o papel na produção de oxigénio reactivo, e uma taxa de aumento 48/56 foi representada comparada ao controlo. A actividade do dismutase do superóxido (SOD) foi medida ao usar um kit adquirido na Sigma. Como resultado, a maioria dos compostos mostraram doses inferiores de ID50 comparado com MK-801, que é controlo positivo. Indica que têm um efeito superior com doses mais baixas do que MK-801.

Tabela 6 . Efeito inibitório na produção de ROS nas células cerebrais do rato

Composto Efeito inibitório ROS Composto Efeito inibitório ROS ID50 (yg/ml) ID50 (yg/ml) MK-801 164,8±17,6 27 21,9+16,1 1 73,0±14,1 28 30,9+13,7 3 108,3±27,2 29 10,1 ±17,3 5 24,4±10,5 30 79,5+15,7 7 17,7±17,3 32 14,4+7,6 8 102,7±20,4 33 172,7+19,7 13 87,3±10,9 35 140,0+18,6 14 90,1 ±12,2 37 22,9+17,3 22 172,5+23,6 38 136,1+11,0 23 55,5+27,2 39 32,3+20,0 24 122,4+32,4 40 31,0+8,1 25 104,0+32,5 41 27,2+18,6 42 137,7+21,0 49/56

Tabela 7. Efeito no aumento de actividade de dismutase do superóxido (SOD) nas células cerebrais do rato

Composto Aumento de actividade SOD Composto Aumento da actividade SOD 100 pg/ml, comparado com controlo 100 pg/ml, comparado com controlo MK-801 -0,5+2,9 21 -0,3+3,7 1 0,7±5,6 22 3,7±0,8 2 2,8±4,0 23 4,0±10 3 3,2±2,7 24 6,9±3,8 4 0,6±2,2 25 1,6±9,3 5 2,5±2,8 26 0,7±5,7 7 ND 27 2,4±7,8 8 ND 28 ND 9 ND 29 3,0±1,1 10 ND 30 6,2±6,2 11 2,3±3,4 32 0,3±7, 1 12 2,8±1,8 33 ND 13 7,6±2,9 35 3,4±7,9 14 2,7+1,0 36 4,9+1,2 15 1,3±3,1 37 2,0±5,8 16 7,5±2,3 38 3,2±4,9 17 0,3±0,0 39 19,0±6,3 18 ND 40 8,3±3,2 19 ND 41 2,0±0,9 20 ND 42 1,6±2,6

Os efeitos antagonísticos dos compostos no receptor NMDA, examinados nos Exemplos Experimentais 2 a 5, demonstraram que os compostos da presente invenção podem ser usados como um fármaco não apenas para tratar AVC isquémico mas também para evitar e tratar doença cerebral degenerativa relacionada com este receptor, tal como epilepsia, esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença de Parkinson, doença de Huntington, doença de Alzheimer, e lesões cerebrais traumáticas ou lesões na espinal medula. Também podem ser usados para melhoramento da memória. 50/56 <Exemplo Experimental 6> Experiência de efeito anti-convulsivo

Uma experiência foi realizada pelo método de Ali et al. (Ali, A. et al. 2006, Pharmacological Reports, 58: 242-245) . Uma dose de 10 mg/kg do composto foi administrada intraperitonealmente para identificar o efeito anti-convulsivo e o efeito foi observado (Tabela 8) . A pesquisa do processo de actividade foi executada pelo Programa de Desenvolvimento de Fármacos Antiepilépticos (ADD) de NIH durante o desenvolvimento do fármaco anti-convulsivo. Um dos artigos avaliados na actividade anti-convulsiva no primeiro passo deste programa é o teste pentilenotetrazol (PTZ). Após administração do fármaco de teste, uma dose de 80 mg/kg de PTZ foi subcutaneamente administrada e foi observada durante, pelo menos, 30 minutos. Após 10 mg/kg do fármaco de teste terem sido administrados, a análise foi realizada ao estimar o tempo de início da convulsão, duração até a convulsão ter desaparecido por completo e a taxa de mortalidade. Foi analisada como tendo um efeito anti-convulsivo quando um único episódio de espasmo clónico não foi mostrado durante 5 segundos em, pelo menos, um dos 4 animais de laboratório após administração de PTZ. 51/56

Tabela 8. Efeito anti-convulsivo dos compostos

Composto Tempo de início da convulsão (min) Duração da convulsão (min) Percentagem de indução da convulsão (%) Taxa de mortalidade (%) Controlo negativo 5,0±0,7 46,7±3,3 100(23/23) 70(17/23) Controlo positivo Diazepam N . D . * * N . D . * * 0(0/6) 0(0/6) 1 16,1 ±9,0* 43,9±9,0 83(5/6) 67(4/6) 2 12,9±3,7** 35,7±7,1 100(6/6) 67(4/6) 3 34,7±7,7** 11,8±5,6** 50(6/12) 17 (2/12) 7 3,1±0,3 42,9±8,7 100(6/6) 67(4/6) 9 4,4±0,7 39,8±10,3 100(6/6) 67(4/6) 10 5,8±1,4 49,9±5,4 100(6/6) 17(1/6) 11 10,1 ±4,9 44,9±5,8 100(6/6) 17(1/6) 12 13,7±6,2* 39,3±8,8 100(6/6) 67(4/6) 14 8,5±1,8* 2,9±2,1** 100(6/6) 0(0/6) 15 25,7+7,2** 34,3+7,2 83(5/6) 83(5/6) 16 7,6±1,7 6,4±2,3 * * 100(6/6) 0(0/6) 18 19,1±8,4** 5,2±3,4** 83(5/6) 0(0/6) 19 38,7±1,5** 1,8±2,7** 50(3/6) 0(0/6) 20 44.7±11.0** 0.9±1.9** 50(3/6) 0(0/6) 21 22.2±11.9** 6.7±3.1** 67(4/6) 0(0/6) 22 15.2±9.0* 7.0±3.2* * 83(5/6) 0(0/6) 23 9.3±2.5* 28.7±8.6 * 100(6/6) 33(2/6) 24 6.1 ±1.7 35.7±84 100(6/6) 50(3/3) 25 6.2±1.5 48.3±5.9 100(6/6) 83(5/6) 26 15.4±9.0* 33.0±9.5 83(5/6) 50(3/6) 27 8.4±2.6 35.8±9.8 100(6/6) 50(3/6) 28 4.8±2.2 26.9±6.5* 100(6/6) 0(0/6) 29 18.2±9.1 * * 30.3±11.1 83(5/6) 17(1/6) 30 15.9±9.0* 44.1 ±9.0 83(5/6) 83(5/6) 32 11.3±4.5* 29.8±12.0 100(6/6) 50(3/6) 33 16.1 ±2.2** 36.6±7.6 100(6/6) 83(5/6) 35 5.4±1.6 33.3±7.3 100(6/6) 33(2/6) 36 8.9±2.3* 25.1 ±9.7* 100(6/6) 33(2/6) 38 16.0±9.0* 11,2±7.3** 83(5/6) 17(1/6) 39 9.5±2.8* 19.8±6.4 * * 100(6/6) 0(0/6) 40 11.2±2.4* * 42.3±8.5 100(6/6) 83(5/6) 42 9.8±4.1* 18.2±8.6 * * 100(6/6) 17(1/6) Cada valor representa um valor médio (n=6) de medição (no caso do controlo negativo, n=23) *: Significância estatística comparada com controlo (95% confiança) **: Significância estatística comparada com controlo (99% confiança) N.D.: Não Detectado. 52/56 <Exemplo Experimental 7> Efeito relaxante na aorta torácica nos ratos

Após ratos machos das espécies SD (250-300 g) terem sido anestesiados por inalação de éter, as suas aortas torácicas foram extraídas e colocadas numa solução-tampão Krebs (mM; NaCI 118, NaHC03 27,3, KCI 4,8, MgS04 1,2, KH2P04 1,0, CaCI2 1,25, glucose 11,1) . Foi cortado um anel aórtico de 2 mm sob um microscópio de dissecação e cultivado num banho de órgão para medir a tensão dos vasos sanguíneos. O banho de órgão foi cheio com solução-tampão Krebs e saturado com 95% de 02, 5% de C02 para manter oxigénio dissolvido e pH fisiológico. A alteração da tensão foi medida por um medidor de tensão (Hugo-sachs, modelo K30) e registada por um gravador fisiológico (Coulboum polygraph). O comprimento dos vasos sanguíneos foi aumentado passo a passo para perfazer 1,0 g de tensão basal durante 90 minutos. O vaso sanguíneo equilibrado foi contraído por fenilefrina (0,5 μΜ) . Quando o sulco de contracção atingiu o equilíbrio, foram adicionados compostos, seguido por observação de resposta de relaxamento.

Um resultado de que o Composto 3 foi adicionado com uma dose de 50 pg/mL, 100 pg/mL e 200 pg/mL foi listado na Tabela 9, e o Composto 3 dependente da dose relaxou a aorta torácica dos ratos contraída por fenilefrina (Tabela 9) . O resultado de que cada composto foi administrado com uma dose de 67 pg/mL está listado na Tabela 10, e pode ser presumido que este resultado atrasa a morte da célula e induz a ressuscitação das células mortas, devido ao aumento da corrente sanguínea pela expansão de um vaso sanguíneo num corpo. 53/56

Tabela 9. Efeito de relaxamento dependente da dose nos músculos dos vasos sanguíneos

Dose (yg/ mL) Percentagem de relaxamento (%), (Média ± desvio padrão) Controlo - 0 Composto 3 50 16,2±4,4 100 44,2±8,5 200 65,6±7,1

Cada valor representa um valor médio ± desvio padrão (n=3) de medida.

Tabela 10. Efeito de relaxamento nos compostos dos músculos do vaso sanguíneo da aorta torácica

Composto Percentagem de relaxamento (%) Composto Percentagem de relaxamento (%) MK-801 ND 21 2,6 1 12, 8 22 ND 2 10, 9 23 20, 4 3 27, 4 24 ND 4 7,7 25 20, 0 5 19, 2 26 3,7 7 56,8 27 ND 8 35, 7 28 8,3 9 95, 5 29 ND 10 4,9 30 40, 4 11 10, 9 32 ND 12 10, 9 33 38, 5 13 9,3 35 42,6 14 ND 36 ND 15 ND 37 7,9 16 ND 38 88, 2 17 51,7 39 54, 8 18 42, 4 40 ND 19 11,8 41 7,1 20 15, 2 42 14, 6 Cada valor representa uma média (n=3) da medição. ND: Não Detectado. 54/56

Um efeito relaxante superior dos músculos do vaso sanguíneo foi observado, comparado com o controlo na maioria dos compostos.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

Como mencionado acima nos exemplos, os compostos da presente invenção mostram um efeito anti-avc, efeito antagonístico no receptor NMDA, efeito inibidor na toxicidade H2O2 e toxicidade ZnS04 em células nervosas, efeito antioxidante nas células nervosas, efeito anti-convulsivo e efeito relaxante da aorta torácica. Por isso, podem ser usados como um fármaco para evitar e tratar várias doenças acima mencionadas tais como AVC, distúrbio do funcionamento do sistema nervoso central, perda de memória, disfunção cerebrovascular, lesões cerebrais e na espinal medula, isquémia cerebral, demência, doença de Alzheimer, doença de Parkinson e epilepsia.

Lisboa, 05 de Setembro de 2012 55/56

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para a conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento de Patente Europeia. Embora muito cuidado tenha sido tomado na compilação das referências, erros e omissões não podem ser excluídos e o EPO nega qualquer responsabilidade neste sentido.

Documentos de patentes não citadas na descrição • Nagasawa, H., Gogure, K. Stroke, 1989, vol.20, 1037-1043 [0089] • Choi, D.W. Neurosci. Lett. , 1985, vol.58, 293-297 [0095] • Ali, A. et al. PharmacologicalReports, 2006, vol.58, 242-245 [0103] 56/56

Claims (15)

1. Reivindicações 1. Um composto de quinazolina-2,4-diona da fórmula (I)

   O

   em que Ri é hidrogénio ou alquilo; cada R2 e R3 é independentemente seleccionado de hidrogénio, alquilo, -COR6, -SO2R7, ou fenil ou benzil substituído ou não substituído, em que R6 é alquilo, alcoxi, fenil, feniloxi ou benziloxi, cada um dos quais é substituído ou não substituído com halogénio, hidroxi, metoxi, etoxi ou nitro, e R7 é substituído ou não substituído com alquilo em C1-C4 ou aril; A é -(CH2)n- ou -CH2CH=CHCH2-, em que n é um número inteiro seleccionado de 2 a 4;R4 é hidrogénio e Rs é hidrogénio ou benzoil não substituído ou substituído com um ou mais halogénio, hidroxi, alcoxi ou nitro em anel de benzeno, ou quando R4 e R5 em conjunto com N formam um anel, R4 e R5 formam um grupo divalente de

   em que Rs é hidrogénio ou alquilo; cada um de l e m é independentemente um número inteiro seleccionado de 2 a 4; e p é um número inteiro de 0 ou l,ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
2. 2. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1 em que Ri é hidrogénio; 1/11 cada R2 e R3 é independentemente seleccionado de hidrogénio, alquilo em Ci_6, -COR6, -SO2R7, ou fenil ou benzil substituído ou não substituído, em que R6é alquilo, alcoxi, fenil, feniloxi ou benziloxi, cada um dos quais é substituído ou não substituído com halogénio, hidroxi, metoxi, etoxi ou nitro, e R7 é substituído ou não substituído com alquilo em C1-C4 ou aril; A é -(CH2)n- ou -CH2CH=CHCH2-, em que n é um número inteiro seleccionado de 2 a 4; R4 é hidrogénio e R5 é hidrogénio ou benzoil não substituído ou substituído com um ou mais halogénio, hidroxi, alcoxi ou nitro em anel de benzeno, ou quando R4 e R5 em conjunto com N formam um anel, R4 e R5 formam um grupo divalente de

   em que R8 é hidrogénio ou alquilo; cada um de l e m é independentemente um número inteiro seleccionado de 2 a 4; e p é um número inteiro de 0 ou l,ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
3. 3. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1 o qual é seleccionado do grupo composto por:3-{3-[4-(3-aminopropilamino)butilamino]propil}-lH-quina zolina-2,4-diona;3-(3—{4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quina zolina-3-il)propilamino]butilamino}propil)-lH-quinazolina-2 ,4-diona;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)pr opil]-N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi lamino]butil}acetamida;N-(4-[acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihid ro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butil)-N-[3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]acetamida;[3-(2,4-di oxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[3-(2,4-diox o-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil)éster-e 2/11 tílico-de-ácido-carbâmico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-qu inazolina-3-il)propil]-N-(4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-q uinazolina-3-il)propil]metilamino Jbutil)acetamida;3-{4-[3-( 2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil }-lH-quinazolina-2,4-diona;N-(3-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidr o-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butilamino}propi1)-hidrox ibenzamida;3-{3-[4-({N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazo lina-3-il)propil]-N-benzil}amino)butilamino]propil}-lH-quin azolina-2,4-diona;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolin a-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolin a-3-il) propilamino]butil}benzamida;Éster butilico terciário doácido[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil ]-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilam ino]butil}carbâmico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazol ina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazol ina-3-il)propilamino]butilJmetanosulfonamida;N-(4-{benzi1-[ 3- (2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}b util)-N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi 1]acetamida; (4-{acetil-[3 —(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazo lina-3-il)propil]amino}butil)-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]éster etílico de ácido carbâmico; 3 - { [3 — (4—{ΊΝΓ— [3 — (2, 4-dioxo-l, 4-dihidr o-2H-quinazol ina-3-il)propil]-N-benzilamino jbutil)-N-benzilamino]propil} -lH-quinazolina-2,4-diona;[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quin azolina-3-il)propil]-(4-{ [3 —(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quina zolina-3- il)propil]etoxicarbonilaminoJbutil)éster etílico de ácido carbâmico;Éster butilico terciário do ácido(4-{terc-butoxicarbonil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-q uinazolina-3-il)propil]amino]butil)-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihid ro-2H-quinazolina-3-il)propil]carbâmico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4 -dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-(4-{[3-(2,4-dioxo-l, 4- dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]metanosulfonilamino}bu til)metanosulfonamida;N-[3-(acetilo{4—[3—(2,4-dioxo-l,4-dih idro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}amino)propil]-4- 3/11 hidroxibenzamida;N-[3-(4-{acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butilamino)propil]-4-hidro xibenzamida;N-{3-[acetil-(4-{acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihid ro-2H-quinazolina-3-il)propil]amino}butil)amino]propil}-4-h idroxibenzamida;N-[4-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)butil]-N-[3-(2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il )propil]acetamida;3-(2-{3-[2-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quin azolina-3-il)etilamino]propilamino}etil)-lH-quinazolina-2, 4 -diona;3-(3-{3-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-i 1)propilamino]propilamino}propil)-lH-quinazolina-2,4-diona; 3-(3-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propi lamino]-2-butenilaminojpropil)-lH-quinazolina-2,4-diona;Ést erbutílico-terciário-do-ácido(4-{terc-butoxicarbonil-[3 —(1 — metil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]amin o}butil)-[3-(1-meti1-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3 -il)propil]carbâmico;1-meti1-3-(3-{4-[3-(1-meti1-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butilamino}prop il)-lH-quinazolina-2,4-diona;3—(3—{4—[3—(1,3-dioxo-1,3-dihi dro-isoindol-2-il)propilamino]butilamino jpropil)-lH-quinazo lina-2,4-diona;3-(3—{2—[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazo lina-3-il)propilamino]etilaminojpropil)-lH-quinazolina-2, 4-diona;Éster butílico terciário do ácido[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(4-{[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]he xilamino}butil)carbâmico;3-[3-(4-{N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihid ro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-hexi1amino}butilamino]prop il]-lH-quinazolina- 2,4-diona;Éster butílico terciário do ácido(4-{terc-butoxicarbonil-[3-(l-hexil-2,4-dioxo-l,4-dihi dro-2H-quinazolina-3-il)propil]aminobutil)-[3-(l-hexil-2,4-dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolin-3-il)propil]carbâmico;1-hex il—3—(3—{4—[3—(l-hexil-2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina —3—il)propilamino]butilamino jpropil)-lH-quinazolina-2, 4-dio na;Éster butílico terciário do ácido [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(4-{[ 4/11 3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]heptano ilamino}butil)carbâmico;[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinaz olina-3-il)propil]-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazol ina-3-il)propilamino] butil}amida de ácido heptanóico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propil]—N—{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butil}-2,2,2-trifluoroacetamida;N-[3-(2,4-dioxo -1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[[3-(2,4-diox o-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(2,2,2-trifluoroa cetil)amino]butil}-2,2,2-trifluoroacetamida;N-[3-(2,4-dioxo -1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo -1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}-2-metox iacetamida;[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)pr opil]-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)prop ilamino]butil}éster benzílico de ácido carbâmico;N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)p ropil]—N—{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamino]butil)-4-metilbenzenosulfonamida;N-[3-(2,4-diox o-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-(4—{([3-(2,4-di oxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-metilbenzenosul fonilamino}butil)-4-metilbenzenosulfonamida;e3-(3-{4-[3-(2, 5-dioxo-pirrolidina-l-il)propilamino]butilamino}propil)-1H-quinazolina-2,4-diona,ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
4. 4. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1, o qual é N- [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilami no]butil}acetamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou o qual é 3-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propila mino]butil}-lH-quinazolina-2,4-diona,ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
5. 5/11 5. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1, o qual é 3—{3—[4—({N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propil]-N-benzil}amino)butilamino]propil}-lH-quinazolina-2 ,4-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou o qual é N-[3-(acetil-{4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilamino]butil}amino)propil]-4-hidroxi benzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
6. 6. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1, o qual é N-[3-(4-{acetil-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3 -il)propil]amino}butilamino)propil]-4-hidroxibenzamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou o qual é 3 — (2 — {3-[2-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)etilamino ]propilamino}etil)-lH-quinazolina-2, 4-diona, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
7. 7. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1, o qual é éster butílico terciário do ácido [3-(2,4 -dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-(4-{[3-(2,4 -dioxo-1,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]hexilamino}b util)carbâmico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou o qual é [3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-{4-[3-(2, 4-dioxo-l, 4-dihidro-2H-quinazolina-3-il) propilamina] butiljéster benzílico de ácido carbâmico, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
8. 8. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1, o qual é N-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propil]-N- {4-[3-(2,4-dioxo-l,4-dihidro-2H-quinazolina-3-il)propilami no]butil}-4-metilbenzenosulfonamida, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. 6/11
9. 9 . Um processo para preparar um composto de fórmula (IX) que compreende um passo de fazer reagir um composto de fórmula (IV) com um composto amino de fórmula (V) para obter o composto de fórmula (IX) sob a existência ou a ausência dos solventes: H

   em que At, m e p são o mesmo como definido na Reivindicação 1; r4 e R5 representam hidrogénios, ou quando R4 e R5 em conjunto com N formam um anel, R4 e R5 formam um grupo divalente de O HO f Alk representa alquil; e L representa um grupo abandonante.
10. 10. O processo para preparar um composto de fórmula (IX) de acordo com a Reivindicação 9, em que o composto de fórmula (IV) é etil 2-etoxicarbonilamino benzoato, o qual é obtido pela reacção de 2-aminobenzoato de etilo de fórmula (II) e cloroformato de etilo de fórmula (III) num solvente orgânico: 7/11

    νη2 ο C02Et (II) , ci^OEt CII1)
11. 11. Um processo para preparar um composto de fórmula (IX) que compreende o passo de fazer reagir um composto amino primário de fórmula (VI) com um composto de fórmula (VII) ou fórmula (VIII) para obter o composto de fórmula (IX) sob a existência ou a ausência dos solventes: H

    R5-X (VII),

    H

    (IX). em que At são o mesmo como definido na Reivindicação 1; Rs não é hidrogénio; X representa hidroxi, halogénio, alcoxi ou -OR5; 8/11 Cada Y e Y' é hidroxi, halogénio ou alcoxi, ou quando Y e Y' formam um anel, Y e Y' formam -0-.
12. 12. Um processo para preparar um composto de fórmula (Ia) que compreende um passo de obter um composto de fórmula (Ia), no qual pelo menos um de R2 e R3 não é hidrogénio ao substituir pelo menos um hidrogénio de um composto amino secundário de fórmula (IX) com R2, R3, ou R2 e R3:

    em que r2, r3, r4, r5, A, l, m e p são o mesmo como definido na Reivindicação 1, desde que R5 não seja hidrogénio.
13. 13. Um processo para preparar um composto de fórmula (I) no qual Rl é alquilo, compreendendo um passo de fazer reagir um composto de fórmula (Ia) com um agente alquilante e, se necessário, removendo um grupo de protecção para obter um composto de fórmula (I) no qual Rl é alquilo 9/11

    em que Ri, R2, R3, R4, R5, A, l, m e p são o mesmo como definido na Reivindicação 1, desde que Ri e R5 não sejam hidrogénio.
14. 14. Uma composição farmacêutica para usar na protecção de células nervosas, melhoramento da memória, ou evitar ou tratar doença cerebral neurológica, doença cerebral neurológica degenerativa, AVC, doença de Alzheimer ou epilepsia, que compreende como ingrediente activo o composto de acordo com uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
15. 15. Uma composição farmacêutica que compreende como ingrediente activo o composto de acordo com uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para usar na prevenção ou tratamento de doenças que são seleccionadas de disfunção neurológica, perda de memória, insuficiência cerebrovascular, lesões cerebrais locais, 10/11 trauma cerebral focal, trauma cerebral difuso, lesões da espinal medula, isquémia cerebral, hemorragia cerebral, AVC isquémico, AVC hemorrágico, demência, enfarte cerebral, oclusão embólica, oclusão trombótica, reperfusão após isquémia aguda, ataque isquémico transiente, lesão hipóxico-isquémica perinatal, paragem cardíaca, hemorragia intracranial, hemorragia subaracnóide, aneurisma cerebral, aneurisma de Willis, hemiplegia infantil aguda, lesão associada ao efeito “chicotada", síndrome do bebé sacudido, doença de Alzheimer, doença de Pick, doença de corpos Lewy difusa, paralisia supra nuclear progressiva (síndrome Steel-Richardson) , degeneração multisistémica (síndrome Shy-Drager), condições de epilepsia crónica associadas à neuroregeneração, doenças neuromotoras, esclerose lateral amiotrófica, esclerose lateral primária, ataxias degenerativas, degeneração basal cortical, panencefalite esclerosante subaguda, doença de Huntington, doença de Parkinson, sinucleinopatias, afasia progressiva primária, atrofia muscular espinal e atrofia muscular espinobulbar (doença de Kennedy), esclerose múltipla, doença de Tay-Sach, paraplegia espástica, doença dos Priões, doença de Creutzfeldt-Jakob, epilepsia, plexopatia e neuropatia. Lisboa, 05 de Setembro de 2012 11/11