PT2234645E - Formulações de peg-interferão-beta - Google Patents

Formulações de peg-interferão-beta Download PDF

Info

Publication number
PT2234645E
PT2234645E PT08863833T PT08863833T PT2234645E PT 2234645 E PT2234645 E PT 2234645E PT 08863833 T PT08863833 T PT 08863833T PT 08863833 T PT08863833 T PT 08863833T PT 2234645 E PT2234645 E PT 2234645E
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
peg
ifn
weeks
met
composition
Prior art date
Application number
PT08863833T
Other languages
English (en)
Inventor
Alessandra Del Rio
Joel Richard
Original Assignee
Merck Serono Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Serono Sa filed Critical Merck Serono Sa
Publication of PT2234645E publication Critical patent/PT2234645E/pt

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/565—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

1
DESCRIÇÃO "FORMULAÇÕES DE PEG-INTERFERÃO-BETA"
Campo da Invenção A presente invenção refere-se a formulações de Interferão-beta peguilado (PEG-IFN-β).
Antecedentes da Invenção 0 Interferão-β é uma proteína que foi identificada como um medicamento útil aplicado atualmente, por exemplo, para o tratamento de Esclerose Múltipla (MS).
As proteínas podem ser modificadas na sua sequência ou por outras modificações a fim de alterar ou melhorar, por exemplo, a sua atividade ou estabilidade. Uma dessas modificações é a introdução de uma ligação a polímeros tal como o polietileno glicol (PEG). 0 Interferão-β ligado ao polietileno glicol (PEG-IFN-β) foi descrito, por exemplo nos documentos W099/55377 e EP 0 593 868 Al.
No campo da medicina, foram adotadas várias abordagens para estabilizar proteínas por liofilização ou na forma de composição farmacêutica líquida. Os materiais liofilizados têm de ser reconstituídos numa solução antes da utilização. Mais fáceis e portanto de particular interesse são as composições farmacêuticas líquidas concentradas ou prontas a usar que não necessitam de preparação adicional para a sua aplicação ao doente.
As formulações líquidas de Interferão-β são descritas, por exemplo nos documentos W095/31213 e WO2004/096263. 2 0 documento W02005/084303 descreve composições de conjugado de interferão-beta lb-polímero. O documento US 6,531,122 refere-se a variantes de interferão peguilado numa formulação com excipientes, solubilizantes e um tampão. 0 documento W02004/060299 proporciona métodos para a síntese de conjugados poliméricos de citocinas que incluem interferão-beta e seus antagonistas de ligação ao receptor. 0 documento US20060051320 Al refere-se a formulações liofilizadas de interferão peguilado preparado pela utilização de trealose como crioprotetor. 0 documento W099/48535 proporciona formulações que evitam a perda e o dano de conjugados PEG-interferão alfa durante e a seguir à liofilização. 0 documento WO03002152 refere-se em particular a composições estabilizadas que compreendem um polipéptido interferão e um derivado de sulfoalquil éter ciclodextrina.
Nenhuma das referências acima mencionadas divulga ou sugere as formulações líquidas de acordo com a invenção.
Sumário da Invenção
De acordo com um aspecto da invenção, é proporcionada uma composição farmacêutica líquida que compreende um interferão-beta peguilado (PEG-IFN-β), um excipiente, um tensioativo e um tampão, em que o referido excipiente é um poliol, em que o referido tensioativo é poloxâmero 188, em que o referido tampão é um tampão de acetato de sódio, e em que o pH da composição farmacêutica é 4,2 ± 0,2. 3
De acordo com outro aspecto da invenção, é proporcionado um método para preparar uma composição farmacêutica liquida, em que o referido método compreende adicionar uma quantidade calculada de excipiente e tensioativo à solução tamponada e depois adicionar o PEG-IFN-β de acordo com a presente reivindicação 18.
De acordo com outro aspecto da invenção, é proporcionado um recipiente hermeticamente fechado em condições estéreis e apropriado para armazenamento antes da utilização, que compreende a formulação farmacêutica liquida de acordo com a invenção.
De acordo com outro aspecto da invenção, é proporcionado um kit de uma composição farmacêutica em que o kit compreende um recipiente cheio com uma composição farmacêutica de acordo com a invenção.
Breve Descrição das Tabelas e Figura I. Formulações de acordo com a invenção contendo 0,044 mg/mL de PEG-IFN-beta: A Tabela 1 representa várias formulações de acordo com a invenção contendo 0,044 mg/mL de PEG-IFN-beta. A Tabela 2 descreve um ensaio de estabilidade (SE-HPLC) a 40 °C, 25 °C e 2-8 °C, respectivamente, de formulações de acordo com a invenção com um pH de 4,2 ao longo do tempo. A Tabela 3 descreve um ensaio de estabilidade (RP-HPLC) a 40 °C, 25 °C e 2-8 °C, respectivamente, de formulações de acordo com a invenção com um pH de 4,2 ao longo do tempo. 4 A Tabela 4 representa títulos (mcg/mL) de formulações de acordo com a invenção por SE-HPLC. A Tabela 5 representa títulos (mcg/mL) de formulações de acordo com a invenção por SE-HPLC; antes e depois de filtração com % de recuperação e uma representação como um gráfico (Figura 1: % de recuperação apresentada como recuperação AF e TO em %). A Tabela 6 apresenta os valores de pH de formulações de acordo com a invenção durante um período de 4 a 26 semanas a 25 °C e 2-8 °C, respectivamente. A Tabela 7 representa resultados de bioensaios de formulações de acordo com a invenção ao longo do tempo. II. Formulações de acordo com a invenção contendo 0,055 e 0.110 mg/mL de PEG-IFN-beta, respectivamente:
Nestas formulações a quantidade de PEG-IFN-beta foi aumentada para 0,055 e 0,110 mg/mL de PEG-IFN-beta la, respectivamente. A Tabela 8 representa um ensaio SE-HPLC que mede a pureza a 40 °C, 25 °C e 2-8 °C, respectivamente, de formulações de acordo com a invenção com um pH 4,2 ao longo do tempo. A Tabela 9 representa um ensaio SE-HPLC que mede o teor de proteína a 40 °C, 25 °C e 2-8 °C, respectivamente, de formulações de acordo com a invenção com um pH 4,2 ao longo do tempo. A Tabela 10 representa um ensaio RP-HPLC que mede a pureza a 40 °C, 25 °C e 2-8 °C, respectivamente, de formulações de acordo com a invenção com um pH 4,2 ao longo do tempo. 5 A Tabela 11 apresenta os valores de pH de formulações de acordo com a invenção durante um período de 4 a 13 semanas a 25 °C e 2-8 °C, respectivamente, ao longo do tempo. A Tabela 12 apresenta dados de um bioensaio de formulações de acordo com a invenção a 25 °C e 2-8 °C, respectivamente, ao longo do tempo. A Tabela 13 representa dados referentes a formas oxidadas por mapeamento peptídico de PEG-IFN-beta de formulações de acordo com a invenção.
Descrição Detalhada da Invenção
Num aspecto a invenção refere-se a uma composição farmacêutica líquida que compreende um PEG-IFN-β, um excipiente, um tensioativo e um tampão, em que o referido excipiente é um poliol, em que o referido tensioativo é poloxâmero 188, em que o referido tampão é um tampão de acetato de sódio, e em que o pH da composição farmacêutica é 4,2 ± 0,2.
Os parágrafos a seguir proporcionam definições dos vários compostos que constituem a formulação de acordo com a invenção e devem ser aplicados uniformemente por todo o pedido e reivindicações salvo uma definição expressamente estipulada de outra forma proporcione uma definição mais ampla. O interferão-beta peguilado da formulação pode ser qualquer interferão-beta que tem como modificação covalente um polietileno glicol ou uma modificação comparável. Um exemplo de um PEG-interferão-beta é um PEG-interferão-beta em que a PEGuilação pode ser levada a cabo por meio de 6 métodos conhecidos, tais como aqueles descritos no documento W099/55377.
Em particular, de acordo com a invenção o IFN-beta tem ligado de forma covalente o polímero hidrofílico polietileno glicol (PEG), também conhecido como óxido de polietileno (PEO) . 0 PEG pode ser um polímero linear que tem grupos hidroxilo em cada terminal:
H0CH2CH20 (CH2CH2O) 11CH2CH2OH
Pode também ser utilizado como metoxi-PEG-OH(m-PEG), no qual um terminal é o grupo metoxi relativamente inerte, enquanto o outro terminal é um grupo hidroxilo que é submetido a modificações químicas:
CH30 (CH2CH2O) 11CH2CH2OH
No acima, n pode ser 1 a várias centenas.
Em outra forma de realização preferida o PEG também pode ser um PEG ramificado representado por R(PEG-OH)m, em que R representa uma unidade de núcleo central tal como pentaeritritol ou glicerol, e m representa o número de braços da ramificação. Os braços da ramificação (m) podem variar de três a cem ou várias centenas. Os grupos hidroxilo são submetidos a modificações químicas.
Outra forma de ramificação de acordo com a invenção está descrita, por exemplo, no documento W096/21469, em que o PEG tem um terminal único que é submetido a modificação química. Este tipo de PEG pode ser representado como (CH3OPEG) pRX, em que p é igual a 2 ou 3, R representa um núcleo central tal como lisina ou glicerol, e X representa 7 um grupo funcional tal como carboxilo que é submetido a ativação química.
Outra forma de ramificação de acordo com a invenção é indicada "PEG pendente" e tem grupos reativos, tais como carboxilo, ao longo da estrutura de base do PEG em vez da extremidade das cadeias do PEG.
Além disso, é possível preparar o PEG-IFN-beta de acordo com a invenção com ligações fracas ou degradáveis na estrutura de base como descrito, por exemplo, no pedido de patente US 06/026, 716. Em concordância, o PEG pode ser preparado com ligações éster na estrutura de base do polímero que são submetidas a hidrólise. A hidrólise resulta em clivagem do polímero em fragmentos de peso molecular mais baixo, de acordo com o esquema de reação: PEG-CO2-PEG + H20 -PEG-CO2H + HO-PEG-
Os copolímeros de óxido de etileno e óxido de propileno estão estreitamente relacionados ao PEG na sua química e de acordo com a invenção os mesmos podem ser utilizados em vez de PEG.
Foi desenvolvida uma variedade de métodos para PEGuilar proteínas. O PEG pode ser ligado a grupos reativos encontrados na proteína, em geral, utilizando derivados de PEG eletrofilicamente ativados. Pode-se utilizar os grupos α ou ε-amino encontrados em resíduos de lisina e no N-terminal resultando num conjugado que consiste numa mistura de produtos.
Os conjugados consistem, preferencialmente, numa população de uma a várias moléculas de PEG ligadas por molécula de 8 proteína que varia de um até o número de aminoácidos na proteína. É preferido introduzir a PEGuilação sítio-dirigida no IFN-beta como descrito, por exemplo, em Woghiren et al., em Bioconjugate Chem., 4(5): 314-318, 1993, que sintetiza um derivado de PEG seletivo para tiol.
Numa forma de realização o IFN é especificamente PEGuilado. Uma PEGuilação específica pode ser realizada de acordo com o documento EP 675 201 no resíduo do N-terminal com, por exemplo, mPEG-proprionaldeído. Particularmente preferido é uma mono-PEGuilação sítio-específica conforme descrito por Woghiren et al., Bioconjugate Chem., 4(5): 314-318, 1993.
Uma forma de realização de acordo com a invenção é um IFN-beta que tem uma mono-PEGuilação ligada de forma covalente a Cys17 conforme descrito em W099/55377. A unidade PEG pode ser linear ou ramificada, metoxi PEG, PEG hidroliticamente ou enzimaticamente degradável e um ou mais polióis e copolímeros de PEG e PLGA (poli(ácido láctico/glicólico)). O grupo tiol da cisteína de acordo com uma forma de realização da invenção pode ser feito reagir com um agente de PEGuilação que reage com tiol. Pode ser um grupo funcional que contém PEG tal como dissulfeto de ortopiridilo, vinilsulfona, maleimida, iodoacetimida. Preferencialmente, o agente de PEGuilação que reage com tiol é o dissulfeto de ortopiridilo (OPSS) derivado de PEG. O agente de PEGuilação é utilizado na sua forma mono-metilada onde só um terminal está disponível para conjugação, ou na forma bifuncional onde ambos os terminais estão disponíveis para conjugação. 9
Numa forma de realização preferida é utilizada a reação de um IFN-p-Cys17 e reage de acordo com o esquema de reação conforme descrito nesse pedido. Esta reação é sítio- específica para Cys17 porque os outros dois resíduos de cisterna em IFN-β (posições 31 e 141) formam uma ponte dissulfeto e desse modo não são acessíveis à PEGuilação. 0 PEG-IFN-β tem um tamanho efetivo equivalente ao de uma proteína com um peso molecular de 50 a 110 kDa, preferencialmente cerca de 70 kDa. Na modificação de IFN- β sítio-específica a molécula de PEG ligada tem preferencialmente um peso molecular superior a 20 kDa. Numa forma de realização a molécula de PEG ligada a Cys17 tem 2 x 20 kDa ligados por meio de um espaçador. O espaçador e o IFN formam um IFN-PEG 2 kDA - OPSS de acordo com o esquema de síntese adiante. A seguir à PEGuilação a solução é purificada a fim de separar o PEG-IFN-β do espaçador livre e/ou PEG. Preferencialmente esta etapa de purificação é realizada por meio de ultrafiltração. A ultrafiltração é realizada a uma temperatura inferior a 10 °C, preferencialmente a 5 +/- 3 °C, mais preferencialmente a 4 °C em condições básicas. Preferencialmente, é utilizado NaOH 0,1 M na etapa de purificação. A solução de PEG-IFN-β resultante contém menos de 0,5 EU/mL de endotoxinas, preferencialmente menos de 0,25 EU/mL de endotoxinas.
Numa forma de realização a PEGuilação é introduzida no IFN-β de acordo com o seguinte esquema: 10
PBG m>a~{OPSS)i (Espàçadoc)
Piríd.ífíá 2-tiona
ÍFN-PEG 2KDO-0FSS (INP-Eapaçador) IFfH-Cya n»~45
+
Numa forma de realização uma unidade PEG de baixo peso molecular pode ser ligada ao IFN-β.
Uma unidade PEG de baixo peso molecular tem a fórmula:
W-CH2CH20 (CH2CH20) nCH2CH2-X 11 em que W e X são grupos que independentemente reagem com um grupo funcional amina, sulfidrilo, carboxilo ou hidroxilo para ligar a unidade PEG de baixo peso molecular ao IFN-β. W e X são preferencialmente independentemente selecionados de dissulfeto de ortopiridilo, maleimidas, vinil sulfonas, iodoacetamidas, aminas, tióis, carboxilos, ésteres ativos, carbonatos de benzotriazole, carbonatos de p-nitrofenol, isocianatos, e biotina. A unidade PEG de baixo peso molecular preferencialmente tem um peso molecular de 100 a 5000 daltons. Numa forma de realização preferida a mesma tem 1000 a 3000 daltons, preferencialmente 1500 a 2000 daltons e mais preferencialmente 2000 daltons. A unidade PEG monofuncional ou bifuncional para a ligação ao terminal livre de um PEG de baixo peso molecular que é ligado ao IFN-β tem, preferencialmente, tem um peso molecular na ordem de cerca de 100 a 200 daltons. É preferencialmente um metoxi PEG, PEG ramificado, PEG hidroliticamente ou enzimaticamente degradável, PEG pendente ou PEG dendrimero. O PEG monofuncional ou bifuncional, além disso, tem a fórmula:
Y-CH2CH20 (CH2CH20) mCH2CH2-Z onde Y é reativo a um grupo terminal no terminal livre da unidade PEG de baixo peso molecular que está ligada ao IFN-β e Z é -OCH3 ou um grupo reativo para formar um conjugado bifuncional. 12
Desse modo, de uma maneira escalonada duas ou mais unidades de PEG podem ser utilizadas para produzir PEG-IFN-β úteis na composição da invenção e para utilização como um medicamento.
Com vantagem, a ligação dissulfeto entre o PEG e o IFN-β é estável na circulação e pode ser clivada depois de entrar na célula. 0 PEG-IFN-β utilizado na formulação de acordo com a invenção tem uma atividade de cerca da mesma ou superior à do interferão-β em comparação como o interferão-β nativo. 0 excipiente pode ser qualquer poliol que juntamente com outros componentes da formulação resulta numa formulação estável de PEG-interferão-beta. Exemplos de polióis são manitol (PEARLITOL®), sorbitol (NEOSORB®), maltitol (MALTISORB), xilitol (XYLISORB) e maltitol (LYCASIN). Um excipiente poliol preferido é manitol.
De acordo com a invenção é utilizado um tensioativo não iónico, um poloxâmero 188. 0 tampão é um tampão de acetato de sódio. 0 interferão-beta pode ser o interferão-beta humano que ocorre naturalmente ou um produzido de forma recombinante que tem uma peguilação de acordo com a invenção. Além disso, o interferão-beta (IFN-β) de acordo com a invenção refere-se a glicoproteínas produzidas pelo corpo em resposta a uma infecção virai. A unidade interferão ou unidade Internacional para interferão (U ou IU, para Unidade Internacional) foi 13 indicada como uma medida da atividade do IFN definida como a quantidade necessária para proteger 50% das células contra lesão virai. O ensaio que pode ser utilizado para medir a bioatividade é o ensaio de inibição do efeito citopático conforme descrito (Rubinstein, et ai., 1981; Familletti, P. C., et ai., 1981). Neste ensaio antiviral para interferão cerca de 1 unidade/mL de interferão é a quantidade necessária para produzir um efeito citopático de 50%. As unidades são determinadas com respeito ao padrão de referência internacional para Hu-IFN-beta proporcionado pelos Institutos Nacionais da Saúde (National Institutes of Health) (Pestka, S. 1986).
Os interferões são também chamados modificadores da resposta biológica (Biological Response Modifiers, BRMs), pelo facto dos mesmos terem um efeito sobre a resposta do organismo ao tumor, afectando o reconhecimento por meio de imunomodulação. O interferão humano de fibroblasto (IFN-β) tem atividade antiviral e também pode estimular as células exterminadoras naturais contra células neoplásticas. É um polipéptido de cerca de 20.000 Da induzido por virus e ARNs de fita dupla. A partir da sequência de nucleótido do gene para interferão de fibroblasto, clonado por tecnologia de ADN recombinante, (Derynk et al. 1980) deduziram a sequência completa de aminoácidos da proteina. A mesma tem 166 aminoácidos de comprimento.
Rebif® (Merck Serono - Interferão-β recombinante humano) , uma terapêutica com interferão para esclerose múltipla (MS), é o interferão (IFN)-beta-la, produzido de linhas celulares de mamíferos. A sua Denominação Internacional 14
Comum (International Nonproprietary Name, INN) recomendada é "Interferão-beta-la".
Um "interferão beta" ou "IFN-β", conforme utilizado neste contexto, destina-se a incluir qualquer molécula definida como tal na literatura, compreendendo, por exemplo, quaisquer tipos de IFN-βΞ mencionados na secção acima. 0 IFN-β adequado de acordo com a presente invenção está disponível no mercado, por exemplo, como Rebif® (Merck Serono), Avonex® (Bioqen Idec) desde que o mesmo exiba os sitios de liqação para PEGuilação especifica. A utilização de interferão beta de oriqem humana é também preferido de acordo com a presente invenção. 0 termo interferão beta, conforme utilizado neste contexto, destina-se a abranqer sais. 0 termo "interferão-beta (IFN-β)", conforme utilizado neste contexto, destina-se a incluir interferão de fibroblasto em particular de origem humana, conforme obtido por isolamento de fluidos biológicos ou conforme obtido por técnicas de ADN recombinante a partir de células hospedeiras eucarióticas, bem como os seus sais. Preferencialmente, IFN-beta destina-se a significar Interferão beta-la.
Foram descritos bioensaios para a determinação da atividade do ΙΕΝ-β/ΡΕΘ-ΙΓΝ-β. Um ensaio para IFN pode, por exemplo, ser levado a cabo conforme descrito por Rubinstein et. al, 1981. Desse modo, pode ser determinado se qualquer dada muteina tem uma atividade substancialmente similar ou mesmo melhor do que o IFN-β por meio de experimentação de rotina. 0 termo "sais", conforme utilizado neste contexto, refere-se tanto a sais de grupos carboxilo como a sais de adição de ácido de grupos amino das proteínas descritas acima ou 15 seus análogos. Os sais de um grupo carboxilo podem ser formados por meios conhecidos na técnica e incluem sais inorgânicos, por exemplo, sais de sódio, cálcio, amónio, férrico ou zinco, e outros, e sais com bases orgânicas como aqueles formados, por exemplo, com aminas, tais como trietanolamina, arginina ou lisina, piperidina, procaina e outras. Os sais de adição de ácido incluem, por exemplo, sais com ácidos minerais, tais como, por exemplo, ácido clorídrico ou ácido sulfúrico, e sais com ácidos orgânicos, tais como, por exemplo, ácido acético ou ácido oxálico. Naturalmente, qualquer desses sais deve reter a atividade biológica das proteínas (IFN) relevantes para a presente invenção, isto é, a capacidade de ligar-se ao receptor correspondente e iniciar sinalização ao receptor.
Preferencialmente o PEG-IFN-beta está presente na composição a uma concentração de 0,1 mg/mL a 0,01 mg/mL, preferencialmente 0,06 mg/mL a 0,03 mg/mL e ainda mais preferencialmente a uma concentração de 0,044 mg/mL.
Em outra forma de realização o PEG-IFN-beta está presente na composição de acordo com a invenção numa concentração de 0,05 a 0,150 mg/mL, preferencialmente 0,055 ou 0,110 mg/mL. A dosagem utilizada na composição e que pode ser aplicada a um indivíduo irá variar dependendo de uma variedade de fatores, incluindo as propriedades farmacocinéticas, a via de administração, as condições e características do doente (sexo, idade, peso corporal, saúde, tamanho), extensão dos sintomas, tratamentos simultâneos, frequência do tratamento e o efeito desejado.
As dosagens padrão de IFN-beta humano variam de 80.000 Ul/kg a 200.000 Ul/kg por dia, ou 6 MUI (Milhões de 16
Unidades Internacionais) a 12 MUI por pessoa por dia, ou 22 a 44 yg (microgramas) de equivalente de IFN-beta por pessoa. De acordo com a presente invenção, o PEG-IFN-β na composição da invenção pode ser utilizado, preferencialmente a uma dosagem de cerca de 1 a 50 yg, mais preferencialmente de cerca de 10 a 30 yg ou cerca de 10 a 20 yg por pessoa por dia de equivalente a IFN-beta. A administração de ingredientes ativos de acordo com a presente invenção pode ser por via intravenosa, intramuscular ou subcutânea. As vias preferidas de administração para a composição da invenção são a via subcutânea e a via intramuscular. A composição de PEG-IFN-β da invenção também pode ser administrada diariamente ou em dias alternados, ou menos frequentemente. Preferencialmente, a composição de PEG-IFN-β é administrada uma, duas ou três vezes por semana. Preferencialmente, é administrada uma vez a cada duas semanas. A via preferida de administração é a administração subcutânea, administrada, por exemplo, três vezes por semana. Uma outra via preferida de administração é a administração intramuscular, que pode, por exemplo, ser aplicada uma vez por semana.
Preferencialmente, 22 a 44 yg ou 6 MUI a 12 MUI equivalentes a IFN-beta de PEG-IFN-beta na composição da invenção são administrados três vezes por semana por injeção subcutânea. A composição de PEG-IFN-beta pode ser administrada por via subcutânea, a uma dosagem de 25 a 30 yg ou 8 MUI a 9,6 MUI, 17 em dias alternados. 30 yg ou 6 MUI equivalentes a IFN-beta de PEG-IFN-beta podem ser ainda administrados por via intramuscular uma vez por semana. O termo "estabilidade" refere-se à estabilidade física, quimica e conformacional das formulações de interferão da presente invenção (incluindo a manutenção da potência biológica). A instabilidade da formulação da proteina pode ser causada por degradação quimica ou agregação das moléculas da proteina para formar polímeros de ordem mais elevada, desglicosilação, modificação de glicosilação, oxidação ou qualquer outra modificação estrutural que reduz pelo menos uma atividade biológica de um polipéptido interferão incluído na presente invenção.
Uma composição, solução ou formulação "estável" é uma em que o grau de degradação, modificação, agregação, perda de atividade biológica e outros, das proteínas aí contidas é aceitavelmente controlado e não aumenta de forma inaceitável com o tempo. Preferencialmente, a formulação retém pelo menos ou cerca de 60%, mais preferencialmente pelo menos ou cerca de 70%, mais preferencialmente pelo menos ou cerca de 80% da atividade do interferão marcado durante um período de 12 a 24 meses. As composições PEG-IFN-β preferidas da invenção, preferencialmente têm uma vida em armazenamento de pelo menos cerca de 6 meses, 12 meses, 18 meses, mais preferencialmente pelo menos 20 meses, ainda mais preferencialmente pelo menos cerca de 22 meses e mais preferencialmente pelo menos cerca de 24 meses quando armazenados a 2-8 °C.
Os métodos para monitorizar a estabilidade das composições farmacêuticas líquidas de PEG-IFN-β da invenção estão disponíveis na técnica, incluindo estes métodos aqui 18 descritos. Desse modo, a formação de agregado de PEG-IFN-β durante o armazenamento de uma composição farmacêutica liquida da invenção pode ser prontamente determinada por meio da medição da mudança em PEG-IFN-β solúvel em solução ao longo do tempo. A quantidade de polipéptido solúvel em solução pode ser quantificada por vários ensaios analíticos adaptados para a detecção do PEG-IFN-β particular. Tais ensaios incluem, por exemplo, (RP)-HPLC de fase reversa e espectroscopia de absorção de UV, conforme descrito nos Exemplos adiante. A determinação dos agregados tanto solúveis como insolúveis durante o armazenamento em composições líquidas pode ser obtida, por exemplo, utilizando ultracentrifugação analítica conforme indicado nos Exemplos adiante para distinguir entre a porção do polipéptido solúvel que está presente como agregados solúveis e a porção que está presente na forma molecular biologicamente ativa, não agregada. 0 termo "tampão" ou "tampão fisiologicamente aceitável" refere-se a soluções de compostos que são conhecidos como sendo seguros para utilização farmacêutica e veterinária em formulação e que têm o efeito de manter ou controlar o pH da formulação na gama de pH desejada para a formulação. Os presentes tampões são tampões de acetato de sódio. 0 excipiente está preferencialmente presente a uma concentração de 30 mg/mL a 50 mg/mL, mais preferencialmente numa concentração de 40 mg/mL a 50 mg/mL, ainda mais preferencialmente numa concentração de 45 mg/mL.
Preferencialmente, o tensioativo tem uma concentração de 0,1 mg/mL a 1 mg/mL, preferencialmente uma concentração de 19 0,4 mg/mL a 0,7 mg/mL, ainda mais preferencialmente uma concentração de 0,5 mg/mL. O termo "tensioativo" refere-se a um composto solúvel que reduz a tensão de superfície de líquidos, ou reduz a tensão interfacial entre dois líquidos ou um líquido e um sólido, a tensão de superfície sendo a força que atua sobre a superfície de um líquido, tendendo a minimizar a área da superfície.
Os tensioativos foram utilizados algumas vezes em formulações farmacêuticas, incluindo a administração de fármacos e polipéptidos de baixa massa molecular, a fim de modificar a absorção do fármaco ou a sua administração a tecidos alvo. Tensioativos bem conhecidos incluem polissorbatos (derivados de polioxietileno de ésteres gordos de sorbitol; Tween®), bem como Poloxâmeros tais como Pluronic® ou Lutrol® comercializado pela BASF, Alemanha.
De acordo com a invenção, constatou-se que ao se formular um PEG-IFN-β com Pluronic® F68 (BASF, Pluronic® F68 é também conhecido como Poloxâmero 188) obtém-se formulações estáveis que minimizam a perda de princípio ativo causada pela adsorção sobre as superfícies do frasco e/ou dispositivo de administração (por exemplo, seringa, bomba, cateter, etc.). Constatou-se também que ao se formular um PEG-IFN-β com Pluronic® F68 (BASF, Pluronic® F68 é também conhecido como Poloxâmero 188) obtém-se uma composição estável que é mais resistente à oxidação e à formação de agregados de proteínas.
Os tensioativos Pluronic® são copolímeros em bloco de óxido de etileno (EO) e óxido de propileno (PO). O bloco de óxido 20 de propileno (PO) é colocado entre dois blocos de óxido de etileno (EO). CHc HO—(CH2CH20)-(CH2CH0)-(CH2CH20) -h
EO
PO
EO
No Pluronic® F77, (hidrófilo) é 70%, (polioxipropileno) é a percentagem de polioxietileno e o peso molecular do hidrófobo aproximadamente 2.306 Da.
No Pluronic® F87, a percentagem de polioxietileno (hidrófilo) é 70%, e o peso molecular do hidrófobo (polioxipropileno) é aproximadamente 2.644 Da.
No Pluronic® F88, a percentagem de polioxietileno (hidrófilo) é 80%, e o peso molecular do hidrófobo (polioxipropileno) é aproximadamente 2.644 Da.
No Pluronic® F68, a percentagem de polioxietileno (hidrófilo) é 80%, e o peso molecular do hidrófobo (polioxipropileno) é aproximadamente 1.967 Da. O Pluronic, particularmente o Pluronic® F68, está preferencialmente presente numa concentração que é suficiente para manter a estabilidade do PEG-IFN-β, durante o periodo de armazenamento desejado (por exemplo, 12 a 24 meses) , e também a uma concentração que é suficiente para evitar perdas de proteína devido à adsorção sobre as superfícies, tais como a superfície do frasco, ampola ou cartucho ou da seringa. 21
Em outra forma de realização preferida é utilizada metionina, em particular a L-metionina. Particularmente útil é uma concentração de 0,1 mg/mL a 0,5 mg/mL, preferencialmente uma concentração de cerca de 0,1 mg/mL a 0,3 mg/mL, mais preferencialmente cerca de 0,25 mg/mL a cerca de 0,12 mg/mL.
Constatou-se que pela adição de metionina, vantajosamente a formulação foi adicionalmente estabilizada e a oxidação da proteína foi reduzida.
Os vários compostos contidos ou compreendidos na formulação de acordo com a invenção poderiam ser variados conforme descrito acima e o efeito positivo da metionina poderia ser obtido. Numa forma de realização a formulação é compreendida ou contém 0,055 mg/mL de PEG-IFN-beta, tampão de acetato de sódio 10 mM a cerca de um pH 3,5 a 4,5, preferencialmente um pH 4,2, 45 mg/mL de manitol e 0,5 mg/mL de poloxâmetro 188, alternativamente 0,110 mg/mL de PEG-IFN-beta. A composição da invenção contém um tampão numa quantidade suficiente para manter o pH da referida composição em 4,2 ± 0,2 . O tampão está presente na composição da invenção a uma concentração de cerca de 5 mM a 500 mM, preferencialmente numa concentração de cerca de 10 mM.
Preferencialmente, a composição é uma solução aquosa. A invenção inclui composições líquidas. O solvente preferido é água para injeção. 22
Poderia ser demonstrado que por meio do ajuste do pH para 4,2 +/- 0,2 para as composições de PEG-IFN-β, poderiam ser proporcionadas formulações estáveis.
As composições de acordo com a invenção conseguiram influenciar de forma positiva o processo de degradação do PEG-IFN-β, cujo processo de degradação pode ser influenciado de forma negativa em composições líquidas. Esta influência pode ser medida por SE-HPLC, por exemplo, a 40 °C e 25 °C, respectivamente. A composição da invenção conseguiu que não fosse observada qualquer diminuição significativa de teor de PEG-IFN-β (SE-HPLC) . Em particular, não foi detectada qualquer diminuição em teor de PEG-IFN-β até 2 semanas a 40 °C e até 6 semanas a 25 °C. As composições da invenção exibem boas caracteristicas de estabilidade e, em particular, pode ser conseguida uma redução na agregação de proteína depois de armazenamento.
Os resultados positivos puderam em particular ser conseguidos para uma composição que contém 0,044 mg/mL de PEG-IFN-β, tampão de acetado de sódio 10 mM de pH 4,2, 45 mg/mL de manitol e 0,5 mg/mL de Poloxâmero 188 preparada em frascos de vidro, preferencialmente de 3 mL, ou seringas de vidro, preferencialmente de 1 mL.
As composições da invenção demonstram boa estabilidade quando medidas quanto à pureza por meio da utilização de SE-HPLC, RP-HPLC, teor de proteína quando medidas por SE-HPLC e atividade biológica.
Noutro aspecto, a invenção refere-se a um método para preparar uma composição farmacêutica líquida conforme descrito acima, em que o referido método compreende adicionar uma quantidade calculada de excipiente e 23 tensioativo à solução tamponada e depois adicionar PEG-IFN- β·
Em ainda outro aspecto, a invenção refere-se a um recipiente hermeticamente fechado em condições estéreis e apropriado para armazenamento antes da utilização, que compreende a formulação farmacêutica liquida de acordo com a invenção.
Qualquer recipiente apropriado para aplicações médicas pode ser utilizado. 0 recipiente é preferencialmente uma seringa pré-carregada, um frasco ou um cartucho para um auto-inj etor.
As formulações da invenção podem ser administradas por meio da utilização de dispositivos reconhecidos. Exemplos que compreendem estes sistemas de frascos únicos incluem dispositivos auto-injetores ou canetas injetoras para a administração de uma solução tal como Rebiject®.
Os produtos presentemente reivindicados incluem material de embalagem. 0 material de embalagem proporciona, para além da informação exigida pelas agências reguladoras, as condições nas quais o produto pode ser utilizado. 0 material de embalagem da presente invenção proporciona instruções ao doente, se necessário, para preparar a solução final e para utilizar tal solução final durante um período de vinte e quatro horas ou mais para os dois frascos, de produto húmido/seco. Para o frasco único, o produto em solução, o rótulo indica que tal solução pode ser utilizada por um período de vinte e quatro horas ou mais. Os produtos presentemente reivindicados são úteis para utilização do produto farmacêutico por seres humanos. As composições podem ser proporcionadas ao doente como soluções límpidas. 24 Ο PEG-IFN-β pode ser administrado a um doente de acordo com a invenção por meio de uma variedade de métodos de administração que incluem injeção SC ou IM; meio transdérmico, pulmonar, transmucosa, implante, bomba osmótica, cartucho, micro bomba, oral, ou outros meios apreciados pelo especialista na técnica, como é conhecido na técnica.
Em outro aspecto, a invenção refere-se a um kit de uma composição farmacêutica, em que o kit compreende um recipiente cheio com uma composição farmacêutica da invenção. 0 recipiente é preferencialmente uma seringa para utilização num dispositivo de administração. A seguir a presente invenção será ilustrada por meio dos exemplos.
Exemplos
As formas de realização preferidas da invenção serão descritas pelos seguintes exemplos. 1. Preparação de um conjugado PEG-IFN-β
Exemplos da preparação de PEG-IFN-β são representados nos seguintes esquemas: 25
Fluxoqrama de Síntese e Purificação de PEG-IFN: m
Adição de Espaçador
UF
Remoção do Espaçador Livro 5 mmote ÍFN/50mmoies PEG 2k OPSS/ pH7 j, 20°C, T««ipo-2 h plí 7 J-T=50C-lempo™2 horas
ϊ ί'Ν - K SPAÇ AI) OR
Adição de PEG40K .Tratado csíB ξ'ΡΒβ 2«)2 2 C3ss G k
redação por DTT
up IIP UF
ÍSnuaotes PE0(2í)K)j / ρϋ6,§5-3?3ίΜοίηρο-2 h SP Bmksmm FF Remoção de íPEG20K )j livre Sepfaacrvf S 200 Remoção de ΙΓΝ-β Livre E ÍFN-PEO 2K-OPS5 IFJV-PEG-2K-( PEG-28K)j PEG 2k OPSS = (2- Kridiiditioi h ^0-2K PEG (20K)j = RS- Cisteamii» -Lys-<PEG~20K)? 26
Fluxograma de Sintese e Purificação de PEG-IFN:
26 I
Adição de Espaçador Λ 1 mmoíe IFN/50mmoles PE<3 2k OPSS/ pH6.85, 3?°C,Tempo-2 b
tá W
UF
3 73 O > O
AdicSo de PKG40K Tratado um (PEG 20K)2
S
PE0-SH redução por DTT
Remoção do Espaçador Livre IFN-ESPAÇADOR25m«ioÍes PEG(20K)2 / pH6.85-37°C-Tempo-4 b
TJF
DF
DF
Sephacryl S 200 Reatoçâo de ΙΡΝ*β LivreE IFN-PEG 2K-OPSS SP Sepharose FF Remoção de (PEG20K)2 livre OT-ίΈ G-2K-{FEG-20Kh 2. Formulação
As composições de PEG-IFN-β foram formuladas utilizando PEG-IFN-beta la. A solução foi filtrada através de uma membrana de 0,22 ym (Durapore) e colocada dentro do recipiente final (1 mL em frasco ou seringa). A composição de teste continha 0,044 mg/mL de PEG-IFN-beta la, tampão de acetato de sódio 10 mM pH 4,2, 45 mg/mL de manitol e 0,5 mg/mL de Poloxâmero 188. Alternativamente, continha 0,055 ou 0,110 mg/mL de PEG-IFN-beta la e possivelmente juntamente com metionina. 27
Amostras da composição de teste foram armazenadas a 40 °C, 25 °C e 2-8 °C, respectivamente, e foram realizados testes para determinação da pureza por SE-HPLC ou RP-HPLC, de teor de proteína por SE-HPLC, de atividade biológica e um ensaio antiviral com base na proteção de células induzida por IFN-beta e pH ao longo do tempo, bem como medição das formas oxidadas por mapeamento peptídico/análise UPLC. 3. Ensaios de Estabilidade e Outras Experiências
3.1. Pureza e ensaio por SE-HPLC A pureza por SE-HPLC foi avaliada numa coluna Shodex (SE Aquoso, Código KW-803); a eluição foi realização no modo isocrático a 1,0 mL/min utilizando PBS lx preparado por uma diluição de 10 vezes em água a partir de PBS lOx (Gibco BRL código 70013-016); a detecção foi realizada por UV a 214 nm.
As amostras formuladas de IFN-PEG foram injetadas utilizando os seguintes volumes de injeção: 200 mcL (para amostras de 44 e 55 mcg/mL; 100 mcL para amostras de 110 mcg/mL).
Para o ensaio, a quantificação de proteína foi realizada contra o padrão de referência PS200-01 (ensaio de ponto único) .
3.2 Pureza por RP-HPLC A pureza por RP-HPLC foi realizada numa coluna C4 (Symmetry 300 C4, 5 m tamanho 4,46x250 mm, Waters) com a temperatura controlada por termostato a 35 °C; o comprimento de onda foi regulado em 214 nm e a eluição foi realizada a 1 mL/min utilizando as seguintes condições: 28
Fase móvel: A=0,1% TFA/água; B=0,1% TFA/acetonitrilo Gradiente: 30% —> 70% B em 40 minutos
Tempo (min) Fluxo (mL/min) % A % B 0 1,0 70 30 3 1,0 70 30 40 1,0 30 70 45 1,0 70 30
As amostras formuladas de IFN-PEG foram injetadas como tal utilizando os seguintes volumes de injeção: 160 mcL (para amostras de 44 mcg/mL) ; 200 mcL (para amostras de 55 mcg/mL); 100 mcL (para amostras de 110 mcg/mL). 3.3 Atividade biológica (bioensaio in vitro) A atividade biológica foi medida utilizando o método disponível para IFN-β, que é um ensaio antiviral, com base na proteção de células induzida por IFN-β (WISH tecido amniótico de células humanas) contra o efeito citopático de um vírus (Vírus da Estomatite Vesicular).
3.4 Determinação do pH
As medições do pH foram realizadas utilizando um medidor de pH calibrado (Mettler-Toledo, mod. 713) de acordo com um procedimento operacional padrão.
3.5 Formas Oxidadas por Mapeamento Peptidico/UPLC O método para a quantificação dos resíduos oxidados de metionina (Met 1, Met 117, Met 36) prevê a digestão proteolítica da amostra de IFN-PEG com Endoproteinase Lys-C, seguido por uma análise gradiente de UPLC; um pré-tratamento da amostra formulada é realizado antes da 29 digestão proteolítica com a finalidade de remover qualquer interferência com os componentes da matriz. A separação da mistura proteolítica é realizada numa coluna analitica Acquity UPCL (BEH C18 1,7 ym 2,1x50 mm cód. 1860002350, Waters); a eluição é realizada em condições gradientes utilizando 0,1% de TFA/água (Al) e 0,1% de TFA/acetonitrilo (Bl).
Podem ser utilizadas as seguintes configurações de instrumentos e parâmetros de análise:
Detector de comprimento de onda UV 214 nm Temperatura do Adestrador automático +5° C ± 3“ C Temperatura da Coluna +40° C ± 5" C Taxa de fluxo da coluna 0,6 mL/rain Duração da Análise 2 3 min Demora da próxima injeção 10 min Gradiente linear: Tempo {min) Fluxo (mL/min) Al {%> Bl {%) Curva 0 0, 6 95 5 “ 1, o 0,6 95 5 6 3, 0 0,6 SO 10 6 8,0 0, 6 64 36 6 O 00 i—! 0,6 60 40 6 20,0 0, 6 0 100 6 22, 0 0, 6 Q 100 6 23, 0 0,6 9 S 5 6 Análise do tempo total 33 minutos 30
Tabela 1
Composição de formulações de PEG-IFN-beta (mg/mL)
PEG- IFN Tampão Manitol L- Metionina Boloxâmero 188 Recipiente PEG-IFN Man/ F68-frasco 0, 044 Acetato 10 mM pH 4,2 (*) 45,0 0,5 Frasco DIN2R PEG-IFN Man/Met-frasco (**) 0, 044 Acetato 10 mM pH 4,2 (*) 45,0 0, 12 Frasco DIN2R PEG-IFN Man/F68/ Met-frasco 0, 044 Acetato 10 mM pH 4,2 (*) 45,0 0, 12 0,5 Frasco DIN2R PEG-IFN Man/Man/F68/Met-seringa 0, 044 Acetato 10 mM pH 4,2 (*) 45, 0 0, 12 0,5 Seringa de 1 mL (*) Tampão PBS residual também está presente do volume (devido a diluição de 5 vezes da substância de fármaco PEG-IFN) (**) referencial 31
Tabela 2
% de Pureza por SE-HPLC
Tempo zero 1 semana + 40 °C 2 semanas + 40 °C 4 semanas + 40 °C Monómero Monómero Monómero Monómero PEG-IFN Man/ F68-frasco 85,2 83,3 82, 1 79,8 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 85,3 84,3 82,1 80,3 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 85,0 83,0 81,1 78,7 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 85,2 83,4 82, 0 78,8 Tempo zero 2 semanas + 25°C 4 semanas + 25°C 6 semanas + 25 °C 8 semanas + 25 °C 13 semanas + 25°C 26 semanas + 25°C Monómero Monómero Monómero Mxórero Maxmero Mxórero Mxórero PEG-IFN Man/ F68-frasco 85,2 87,1 87,1 87,2 87,3 86,3 86,7 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 85,3 87,2 87,3 86,9 85,5 85,5 84, 7 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 85,0 87,0 86, 7 86, 8 86, 7 85,8 86,1 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 85,2 87,3 86, 7 86, 9 86, 8 86,3 86, 7 Tempo zero 4 semanas + 2-8 °C 6 semanas + 2-8°C 8 semanas + 2-8°C 13 semanas + 2-8°C 26 semanas + 2-8°C Monómero Monómero Monómero Mxórero Mxórero Mxórero PEG-IFN Man/ F68-frasco 85,2 86, 4 86, 3 86,7 86,4 88,1 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 85,3 86, 4 86, 3 86,0 84,8 87,3 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 85,0 85,8 85, 9 85,7 85,7 87,5 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 85,2 85, 9 86, 3 86,7 86,4 87,0 (**) referencial 32
Tabela 3
% de Pureza por RP-HPLC
Tempo zero 1 semana + 40 °C 2 semanas + 40 °C 4 semanas + 40 °C PEG-IFN Man/ F68-frasco 96, 0 94, 1 91, 7 87,4 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 96,3 93, 9 90, 8 8 8,5 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 95, 9 93, 7 92,3 90, 0 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 96,4 93,4 92,5 88, 8
Tempo zero 2 semanas + 25 °C 4 semanas + 25 °C 6 semanas + 25 °C 8 semanas + 25 °C 12 semanas + 25°C 26 semanas + 25 °C PEG-IFN Man/ F68-frasco 96, 0 95, 0 94,5 93,3 93,5 93,9 90,6 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 96,3 94,3 95, 0 93,4 93,3 94,1 90,9 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 95, 9 94,5 94,4 93,4 93,1 94,3 90,8 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 96,4 94,3 94,3 93,3 93,4 93,1 90,6
Tempo zero 4 semanas + 2-8 °C 6 semanas + 2-8 °C 8 semanas + 2-8°C 12 semanas + 2-8°C 26 semanas + 2-8°C PEG-IFN Man/ F68-frasco 96, 0 94,5 94, 9 94,4 95,7 96,0 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 96,3 95,2 93, 9 94,0 95,1 95,8 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 95, 9 94, 9 94,5 93,9 95,3 95,7 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 96,4 94, 7 94, 1 94, 6 94,7 96,1 (**) referencial 33
Tabela 4
Título (mcg/mL) por SE-HPLC
Tempo zero 1 semana + 40 °C 2 semanas + 40 °C 4 semanas + 40 °C PEG-IFN Man/ F68-frasco 41,2 44,4 44,3 43, 7 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 40,5 43, 1 43,3 41,5 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 43, 0 46,3 45,3 44, 9 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 43,4 46,7 4 6,0 45, 7
Tempo zero 2 semanas + 25 °C 4 semanas + 25 °C 6 semanas + 25 °C 8 semanas + 25 °C 12 semanas + 25°C 26 semanas + 25 °C PEG-IFN Man/ F68-frasco 41,2 43, 6 42, 7 41,9 44,5 41,8 41,4 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 40,5 42, 0 41,2 40,4 42,7 40, 6 38,4 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 43, 0 45, 1 44,2 43,3 45,7 43,1 42,5 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 43,4 45, 6 44, 6 43,7 46,2 43,8 43,5
Tempo zero 4 semanas + 2-8 °C 6 semanas + 2-8 °C 8 semanas + 2-8°C 12 semanas + 2-8°C 26 semanas + 2-8°C PEG-IFN Man/ F68-frasco 41,2 42, 7 42, 0 44,4 42,2 41,9 PEG-IFN Man/Met frasco (**) 40,5 41, 7 40,4 43,3 41,1 39,9 PEG-IFN Man/F68/Met- frasco 43, 0 44,4 43,3 45,7 43,6 43,3 PEG- IFN/Man/F68/Met -seringa 43,4 44, 7 44, 1 46,4 44,3 44,2 (**) referencial 34
Tabela 5
Título (mcg/mL) por SE-HPLC
Antes de Filtração (mcg/mL) Depois de Filtração (mcg/mL) TO (mcg/mL) Recuperação AF (%) Recuperação TO (%) PEG-IFN Man/F68-frasco 43,4 41,7 41,2 96, 1 94, 9 PEG-IFN Man/Met-frasco (**) 43,4 42, 7 40,2 98,3 92,5 PEG-IFN Man/F68/Met-frasco 43,5 42,0 43,0 96, 7 98, 9 PEG-IFN Man/F68/Met-seringa 43,5 42,0 43,4 96, 7 99, 9
Tabela 6
Determinação do pH
Tempo Zero 4 semanas + 25°C 8 semanas + 25°C 12 semanas + 25 °C 26 semanas + 25°C PEG-IFN Man/F68-frasco 4,22 4,20 4,16 4,19 4,22 PEG-IFN Man/Met-frasco (**) 4,23 4,20 4, 17 4,21 4,20 PEG-IFN Man/F68/Met-frasco 4,22 4,21 4,19 4,23 4,22 PEG-IFN Man/F68/Met-seringa 4,22 4,20 4,19 4,22 4,21 Tempo Zero 4 semanas + 2-8 °C 8 semanas + 2-8°C 12 semanas + 2-8°C 26 semanas + 2-8°C PEG-IFN Man/F68-frasco 4,22 4,22 4,17 4,21 4,17 PEG-IFN Man/Met-frasco (**) 4,23 4,23 4,17 4,19 co «—1 PEG-IFN Man/F68/Met-frasco 4,22 4,25 4,19 4,23 4,20 PEG-IFN Man/F68/Met-seringa 4,22 4,26 4,18 4,24 4,22
Tabela 7
Bioenssaio (MUI/mL)
Tempo Zero 4 semanas + 25°C 8 semanas + 25°C 12 semanas + 25°C 26 semanas + 25°C PEG-IFN Man/F68/Met-frasco 33, 9 36, 6 35,7 33, 6 27,0 PEG-IFN Man/F68/Met-seringa 34,8 37, 9 40,1 32, 6 30,2 Tempo Zero 4 semanas + 2-8°C 8 semanas + 2-8°C 12 semanas + 2-8°C 26 semanas + 2-8°C PEG-IFN Man/F68/Met-frasco 33, 9 38,8 36, 8 34,0 31,5 PEG-IFN Man/F68/Met-seringa 34,8 38,1 40,1 34,5 31,3 (**) referencial 35
Tabela 8
Pureza por SE-HPLC (%) 40° C 1 =0 1 semana 2 semanas 4 semanas HMW + Dim Mcnánero HMW + Dim Manémero HMW + Dim Mcnáreco HMW + Dim Msncmero PEG-IFN/Acet 55 mcg 3,5 96,5 4,0 96,0 3, 8 96,2 4,4 95,6 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 3,5 96,5 3,8 96,2 4, 1 95,9 4,4 95,7 PEG-IFN/Acet 110 mcg 3, 6 96,4 4,5 95,5 5, 6 94,4 5, 7 94,3 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 3,9 96,1 4,3 95,7 4,5 95,5 5,1 94,9
25 °C 1 =0 4 semanas 8 semanas 13 semanas HMW + Dim Maránero HMW + Dim Manónero HMW + Dim Maaáreco HMW + Dim Manánezo PEG-IFN/Acet 55 mcg 3,5 96,5 3,4 96,6 3, 6 96,4 3,5 96,5 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 3,5 96,5 3,3 96,7 3, 6 96,4 3,5 96,5 PEG-IFN/Acet 110 mcg 3, 6 96,4 3,7 96,3 4, 0 96,0 3,7 96,3 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 3,9 96,1 3,7 96,3 4,0 96,1 3,9 96,1
2-8 °C 1 =0 4 semanas 8 semanas 13 semanas HMW + Dim Mcncrero HMW + Dim Manórero HMW + Dim Mancmeco HMW + Dim Mxórero PEG-IFN/Acet 55 mcg 3, 5 96,5 3,9 96,1 3,8 96,2 3, 6 96,4 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 3, 5 96,5 3,6 96,4 4,0 96,0 3, 6 96,4 PEG-IFN/Acet 110 mcg 3, 6 96,4 3,9 96,1 4,2 95,8 3,9 96,1 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 3,9 96,1 3,9 96,1 4,1 95,9 3,8 96,2 36
Tabela 9
Teor de Proteína por SE-HPLC (mcg/mL)
40 °C T=0 1 semana 2 semanas 4 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 52, 7 51, 9 52,3 51, 9 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 53, 0 52, 1 52,2 51, 8 PEG-IFN/Acet 110 mcg 110,2 109, 1 107, 9 108, 0 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 110, 9 108, 7 107, 9 107,5
25 °C T=0 4 semanas 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 52, 7 52,5 53, 0 51, 6 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 53, 0 53,4 53, 1 51,2 PEG-IFN/Acet 110 mcg 110,2 110, 0 109,5 107, 0 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 110, 9 109, 6 109, 1 106, 7
2-8 °C T=0 4 semanas 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 52, 7 54,4 53, 8 51, 9 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 53,0 54, 0 53, 7 52,4 PEG-IFN/Acet 110 mcg 110,2 111, 1 110,5 108, 6 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 110, 9 111, 0 110,5 108,3
Tabela 10
Pureza por RP-HPLC (%) 40 °C T=0 1 semana 2 semanas 4 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 97,6 96, 1 94,4 94,6 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 97, 7 95, 7 94,2 94,6 PEG-IFN/Acet 110 mcg 95,9 95,5 93, 8 94,4 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 96, 0 95, 7 93, 7 94,2
25 °C i-3 II o 4 semanas 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 98, 7 98,3 9 6,5 97,3 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 98,7 98,8 96, 8 96,2 PEG-IFN/Acet 110 mcg 97, 0 98, 6 96, 8 9 6,5 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 97,0 98,5 9 6,5 95, 9
2-8 °C T=0 4 semanas 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 98, 7 99,3 98, 1 98, 6 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 98, 7 9 9,6 98,3 98,4 PEG-IFN/Acet 110 mcg 97, 0 98,3 96, 8 9 6,6 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 97, 0 98,3 9 6,7 9 6,9 37
Tabela 11
Valores de pH 25 °C T=0 4 semanas 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 4,22 4,21 4,22 4, 12 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 4,21 4,19 4,23 4,21 PEG-IFN/Acet 110 mcg 4,21 4, 15 4,25 4,21 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 4,20 4, 15 4,19 4,19
2-8 °C T=0 4 semanas 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 4,22 4, 15 4, 17 4,19 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 4,21 4,16 4,19 4,21 PEG-IFN/Acet 110 mcg 4,21 4, 15 4, 17 4,20 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 4,20 4,16 4, 15 4,19
Tabela 12
Bio ensaio (U/mL) 25 °C T=0 4 semanas 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 40,3 36,0 32, 7 32,4 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 38, 7 33, 0 34, 9 30, 0 PEG-IFN/Acet 110 mcg 81, 9 65, 7 70, 8 63, 9 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 77, 0 63, 7 72, 9 65,6
2-8 °C T=0 4 semanas 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg 40,3 40, 7 34, 9 28, 0 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 38, 7 40, 1 35, 7 27,4 PEG-IFN/Acet 110 mcg 81, 9 68, 8 72, 0 57, 7 PEG-IFN/Acet 110 mcg/0,25 Met 77, 0 75,3 70, 0 56,8 38
Tabela 13
Forma Oxidadas por Mapeamento Pepditico/UPLC (%)
2-8 °C
Met 1 T=0 8 semanas 13 semanas Inclinação (% Mês) PEG-IFN/Acet 55 mcg/ Sem Met 1,7 2,0 1,3 -0,09 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 1,6 1,5 1,2 -0,13 PEG-IFN/Acet 110 mcg/ Sem Met 1,5 1,6 1,3 1 O o co PEG-IFN/AcetllO mcg/0,25 Met 1,3 1,6 1,3 0,02 Met 117 T=0 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg/ Sem Met 4,6 5,5 5,3 0,24 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 4,8 4,7 4,4 1 o o PEG-IFN/Acet 110 mcg/ Sem Met 5,0 5,1 5,1 0,06 PEG-IFN/AcetllO mcg/0,25 Met 5,3 5,1 4,5 -0,24 Met36 t=o 8 semanas 13 semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg/ Sem Met 4,0 4,3 4,7 0,20 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 4,2 3,8 4,0 -0,07 PEG-IFN/Acet 110 mcg/ Sem Met 3,8 4,2 4,5 0,24 PEG-IFN/AcetllO mcg/0,25 Met 3,9 3,9 4,0 0,03 0 2 3
25 °C
Met 1 T=0 4 8 13 Inclinação semanas semanas semanas (% Mês) PEG-IFN/Acet 55 mcg/ Sem Met 1, 7 1,4 1, 9 1, 6 0, 01 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 1, 6 1,2 1,8 1,3 -0, 03 PEG-IFN/Acet 110 mcg/ Sem Met 1,5 - 1, 9 1,5 0, 05 PEG-IFN/AcetllO mcg/0,25 Met 1,3 1,2 1, 7 1,3 0,06 Met 117 T=0 4 8 13 semanas semanas semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg/ Sem Met 4, 6 4,2 5,4 5,3 0,29 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 4,8 4,4 4, 9 4,7 0,02 PEG-IFN/Acet 110 mcg/ Sem Met 5,0 - 5,2 5,0 0,02 PEG-IFN/AcetllO mcg/0,25 Met 5,3 4,4 5, 0 4,5 -0,20 Met36 t=o 4 8 13 semanas semanas semanas PEG-IFN/Acet 55 mcg/ Sem Met 4,0 3,5 4,6 4,7 0,36 PEG-IFN/Acet 55 mcg/0,25 Met 4,2 3,4 3,7 4,1 0,02 PEG-IFN/Acet 110 mcg/ Sem Met 3,8 - 4,3 4,6 0,26 PEG-IFN/AcetllO mcg/0,25 Met 3,9 3,6 3,8 4,0 0,06 0 1 2 3
Dim
Observação: em todas as tabelas, mcg significa microgramas, HMW significa espécies de alto peso molecular, significa dímero. 39
Lista de Referência 1. Derynk R. et al., Nature 1980; 285, 542-547;
2. Familletti, P. C, Rubinstein, S., e Pestka, S. 1981 "A
Convenient and Rapid Cytopathic Effect Inhibition Assay for Interferon, " em Methods in Enzymology, Vol. 78 (S.
Pestka, ed.), Academic Press, Nova Iorque, 387-394; 3. Mark D. F. et al., Proc. Natl. Acad. Sei. EUA., 81 (18) 5662-5666 (1984); 4. Pestka, S. (1986) "Interferon Standards and General Abbreviations, em Methods in Enzymology (S. Pestka, ed.), Academic Press, Nova Iorque 119, 14-23; 5. Rubinstein, S., Familletti, P. C, e Pestka, S.
Convenient Assay for Interferons. J. Virol 1981; 37, 755-758; 6. Shepard Η. M. et al., Nature 1981 ; 294, 563-565. 7. Woghiren et al. em Bioconjugate Chem., 4(5): 314-318, 1993
Lisboa, 9 de Maio de 2012

Claims (12)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica liquida que compreende um interferão-β peguilado (PEG-IFN- β), um excipiente poliol, um tensioativo poloxâmero 188 e um tampão de acetado de sódio, em que o pH da composição farmacêutica é 4,2 ± 0,2.
2. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que o referido excipiente poliol é manitol.
3. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o referido PEG-IFN-β está presente a uma concentração de 0,01 mg/mL a 0,1 mg/mL.
4. Composição de acordo com a reivindicação 3, em que o referido PEG-IFN-β está presente a uma concentração de 0,044 mg/mL, 0,055 mg/mL, ou 0,110 mg/mL.
5. Composição de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, em que o PEG-IFN-β contém um PEG linear ou ramificado, preferencialmente um PEG ramificado.
6. Composição de acordo com a reivindicação 5, em que o PEG tem um peso molecular de pelo menos 20 kDa, preferencialmente pelo menos 40 kDa, mais preferencialmente 40 kDa.
7. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o referido excipiente poliol está presente a uma concentração de 30 mg/mL a 50 mg/mL.
8. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o referido excipiente poliol está presente a uma concentração de 40 mg/mL a 50 mg/mL. 2 9. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que 10 . 11. 12 . o referido excipiente poliol está presente a uma concentração de 45 mg/mL. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o referido poloxâmero 188 está presente a uma concentração de 0,1 mg/mL a 1 mg/mL. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o referido poloxâmero 188 está presente a uma concentração de 0,4 mg/mL a 0,7 mg/mL. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o referido poloxâmero 188 está presente a uma concentração de 0,5 mg/mL. 13. 14 . 15. 16. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o referido tampão de acetato de sódio está presente a uma concentração de 5 mM a 500 mM. Composição de acordo com a reivindicação 13, em que o referido tampão de acetato de sódio está presente a uma concentração de 10 mM. Composição de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, em que a referida composição é uma solução aquosa. Composição de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, em que a referida composição compreende ainda metionina. Composição de acordo com a reivindicação 16, em que a metionina está presente numa concentração de 0,10 a 0,50 mg/mL, preferencialmente 0,20 a 0,40 mg/mL, mais preferencialmente 0,12 ou 0,25 mg/mL. 17 . 3
18. Método para preparar uma composição farmacêutica de acordo com qualquer das reivindicações 1-17, em que o referido método compreende adicionar uma quantidade calculada de um excipiente poliol e poloxâmero 188 à solução tamponada de acetado de sódio e depois adicionar o PEG-IFN-beta.
19. Recipiente hermeticamente fechado em condições estéreis e apropriado para armazenamento antes da utilização, que compreende a formulação farmacêutica liquida de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 17.
20. Recipiente de acordo com a reivindicação 19, em que o referido recipiente é uma seringa pré-carregada, ou um frasco para um auto-injetor.
21. Kit de uma composição farmacêutica, em que o kit compreende um recipiente cheio com uma composição farmacêutica de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 17. Lisboa, 9 de Maio de 2012
PT08863833T 2007-12-20 2008-12-18 Formulações de peg-interferão-beta PT2234645E (pt)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP07150258 2007-12-20
US1025808P 2008-01-07 2008-01-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PT2234645E true PT2234645E (pt) 2012-05-21

Family

ID=39760852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT08863833T PT2234645E (pt) 2007-12-20 2008-12-18 Formulações de peg-interferão-beta

Country Status (20)

Country Link
US (1) US9138403B2 (pt)
EP (1) EP2234645B1 (pt)
JP (2) JP5563475B2 (pt)
KR (1) KR20100099298A (pt)
CN (1) CN101878043A (pt)
AT (1) ATE555812T1 (pt)
AU (1) AU2008340058A1 (pt)
BR (1) BRPI0821029A2 (pt)
CY (1) CY1112820T1 (pt)
DK (1) DK2234645T3 (pt)
EA (1) EA201070773A1 (pt)
ES (1) ES2387236T3 (pt)
HR (1) HRP20120483T1 (pt)
IL (1) IL206441A0 (pt)
PL (1) PL2234645T3 (pt)
PT (1) PT2234645E (pt)
RS (1) RS52417B (pt)
SI (1) SI2234645T1 (pt)
WO (1) WO2009080699A2 (pt)
ZA (1) ZA201001908B (pt)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA201070773A1 (ru) * 2007-12-20 2010-12-30 Мерк Сероно С. А. Составы пэг-интерферона-бета
US20120269770A1 (en) * 2010-11-22 2012-10-25 Mark Brader Stable Preserved Compositions of Interferon-Beta
AU2014243839B2 (en) * 2013-03-13 2019-01-03 Buzzard Pharmaceuticals AB Chimeric cytokine formulations for ocular delivery
JPWO2016052584A1 (ja) * 2014-09-30 2017-07-13 東レ株式会社 ポリエチレングリコール修飾インターフェロン−βの検出及び定量に使用する試料液の前処理方法、ポリエチレングリコール修飾インターフェロン−βの検出方法及び定量方法
US10308937B2 (en) * 2014-11-10 2019-06-04 Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited Combination long acting compositions and methods for Hepatitis C
WO2016163764A2 (ko) * 2015-04-07 2016-10-13 에이비온 주식회사 인터페론 베타 변이체의 안정화 제제
KR101943160B1 (ko) 2016-10-06 2019-01-30 에이비온 주식회사 인터페론 베타 변이체의 안정화 제제
CN116023466B (zh) * 2023-03-30 2023-06-27 北京生物制品研究所有限责任公司 纯化PEG修饰重组人干扰素β1b蛋白的方法

Family Cites Families (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6936694B1 (en) * 1982-05-06 2005-08-30 Intermune, Inc. Manufacture and expression of large structural genes
US4609546A (en) 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
US4588585A (en) * 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4737462A (en) * 1982-10-19 1988-04-12 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β
US4432895A (en) * 1982-11-24 1984-02-21 Hoffmann-La Roche Inc. Monomeric interferons
US4469228A (en) * 1983-05-31 1984-09-04 Schering Corporation Interferon kit
US4636383A (en) 1984-08-29 1987-01-13 Schering Corporation Interferon-cyclaradine combination
US4959314A (en) * 1984-11-09 1990-09-25 Cetus Corporation Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US5116943A (en) * 1985-01-18 1992-05-26 Cetus Corporation Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein
US5017691A (en) * 1986-07-03 1991-05-21 Schering Corporation Mammalian interleukin-4
US4879111A (en) * 1986-04-17 1989-11-07 Cetus Corporation Treatment of infections with lymphokines
US4965195A (en) * 1987-10-26 1990-10-23 Immunex Corp. Interleukin-7
US4904584A (en) * 1987-12-23 1990-02-27 Genetics Institute, Inc. Site-specific homogeneous modification of polypeptides
US5997856A (en) * 1988-10-05 1999-12-07 Chiron Corporation Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins
IT1244511B (it) 1991-04-15 1994-07-15 Isi Ist Sierovaccinogeno Ital Idrogeli a base di policarbossilati sintetici e proteine per il rilascio controllato di farmaci e procedimento per la loro preparazione.
KR950014915B1 (ko) * 1991-06-19 1995-12-18 주식회사녹십자 탈시알로당단백-포함화합물
US6582728B1 (en) * 1992-07-08 2003-06-24 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Spray drying of macromolecules to produce inhaleable dry powders
IT1272252B (it) * 1994-05-16 1997-06-16 Applied Research Systems Formulazioni liquide di interferone beta
JP2758154B2 (ja) 1995-04-06 1998-05-28 エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー インターフェロンを含む液体製剤
US5656730A (en) * 1995-04-07 1997-08-12 Enzon, Inc. Stabilized monomeric protein compositions
US5814485A (en) * 1995-06-06 1998-09-29 Chiron Corporation Production of interferon-β (IFN-β) in E. coli
US5858001A (en) * 1995-12-11 1999-01-12 Elan Medical Technologies Limited Cartridge-based drug delivery device
CA2275587C (en) * 1996-12-20 2006-10-24 Alza Corporation Injectable depot gel composition and method of preparing the composition
KR20000069664A (ko) 1996-12-24 2000-11-25 아스트루 마이클 제이 안정한 액체 인터페론 제제
US6013253A (en) * 1997-08-15 2000-01-11 Amgen, Inc. Treatment of multiple sclerosis using consensus interferon and IL-1 receptor antagonist
PT1017413E (pt) 1997-09-23 2003-02-28 Rentschler Biotech Gmbh Formulacoes liquidas de interferao (beta)
US6299869B1 (en) * 1997-12-08 2001-10-09 Genentech, Inc. Human interferon-epsilon: a type I interferon
ATE297761T1 (de) 1998-03-26 2005-07-15 Schering Corp Zubereitungen zur stabilisierung von peg- interferon alpha konjugaten
JP4574007B2 (ja) * 1998-04-28 2010-11-04 メルク・セローノ・ソシエテ・アノニム ポリオール−ｉｆｎ−ベータ複体
EP1121156B1 (en) 1998-10-16 2006-02-22 Biogen Idec MA Inc. Polymer conjugates of interferon beta- 1a and their uses
US6143314A (en) 1998-10-28 2000-11-07 Atrix Laboratories, Inc. Controlled release liquid delivery compositions with low initial drug burst
JP4944324B2 (ja) 1999-07-13 2012-05-30 ボルダー バイオテクノロジー， インコーポレイテッド 免疫グロブリン融合タンパク質
US6531122B1 (en) * 1999-08-27 2003-03-11 Maxygen Aps Interferon-β variants and conjugates
CN1175901C (zh) 1999-12-06 2004-11-17 天津华立达生物工程有限公司 一种稳定的干扰素水溶液
US6465425B1 (en) * 2000-02-10 2002-10-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Microencapsulation and sustained release of biologically active acid-stable or free sulfhydryl-containing proteins
WO2002003472A2 (en) 2000-06-29 2002-01-10 California Institute Of Technology Aerosol silicon nanoparticles for use in semiconductor device fabrication
KR100396983B1 (ko) 2000-07-29 2003-09-02 이강춘 고반응성의 가지 달린 고분자 유도체 및 고분자와 단백질또는 펩타이드의 접합체
CA2431890C (en) 2000-12-27 2011-05-10 Ares Trading S.A. Lipid microparticles by cryogenic micronization
US6887462B2 (en) * 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
EP1414498A2 (en) 2001-06-29 2004-05-06 Maxygen Aps Stabilized formulations of interferons with sulfoalkyl ether cyclodextrins
JP2005517012A (ja) 2002-02-08 2005-06-09 アルカーメス コントロールド セラピューティクス，インコーポレイテッド 持続放出のためのポリマーベース組成物
WO2003095522A1 (fr) * 2002-05-14 2003-11-20 Beijing Jiankai Technology Co. Ltd. Polymeres hydrophiles de ciblage se liant a l'interferon et composite medical les comprenant
US20040037809A1 (en) 2002-06-28 2004-02-26 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of interferon beta
CN1681527A (zh) * 2002-07-17 2005-10-12 比奥根艾迪克Ma公司 使用干扰素－β治疗肾衰竭
JP2006514094A (ja) 2002-11-29 2006-04-27 ゲーペーツェー バイオテック アクチェンゲゼルシャフト Ｃ型肝炎ウイルス感染に対して有用な製剤
RS20050502A (en) 2002-12-26 2007-08-03 Mountain View Pharmaceuticals Inc., Polymer conjugates of interferon- beta with enhanced biological potency
TWI272948B (en) 2003-05-01 2007-02-11 Ares Trading Sa HSA-free stabilized interferon liquid formulations
NZ563042A (en) * 2003-05-12 2008-09-26 Affymax Inc Novel spacer moiety for poly(ethylene glycol)-modified peptide-based compounds
AR044302A1 (es) * 2003-05-13 2005-09-07 Ares Trading Sa Formulaciones con proteinas liquidas estabilizadas en recipientes farmaceuticos
EP1666496B1 (en) * 2003-08-25 2014-03-12 Toray Industries, Inc. Interferon-beta composite
DK1691825T3 (da) * 2003-12-11 2011-12-05 Ares Trading Sa Stabiliserede flydende interferon-formuleringer
WO2005084303A2 (en) * 2004-03-01 2005-09-15 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Interferon-beta polymer conjugates
AU2005244448B2 (en) * 2004-05-17 2011-03-17 Ares Trading S.A. Hydrogel interferon formulations
ES2381674T3 (es) * 2004-06-01 2012-05-30 Ares Trading S.A. Método de estabilizar proteínas
BRPI0510526A (pt) * 2004-06-01 2007-10-30 Ares Trading Sa formulações lìquidas estabilizadas de interferon
CA2576549C (en) * 2004-08-12 2011-01-18 Schering Corporation Stable pegylated interferon formulation
EA201070773A1 (ru) * 2007-12-20 2010-12-30 Мерк Сероно С. А. Составы пэг-интерферона-бета

Also Published As

Publication number Publication date
DK2234645T3 (da) 2012-07-09
AU2008340058A1 (en) 2009-07-02
SI2234645T1 (sl) 2012-07-31
CN101878043A (zh) 2010-11-03
EP2234645A2 (en) 2010-10-06
ES2387236T3 (es) 2012-09-18
US20100239529A1 (en) 2010-09-23
JP5563475B2 (ja) 2014-07-30
RS52417B (en) 2013-02-28
BRPI0821029A2 (pt) 2015-06-16
WO2009080699A3 (en) 2009-11-26
EA201070773A1 (ru) 2010-12-30
PL2234645T3 (pl) 2012-10-31
ATE555812T1 (de) 2012-05-15
KR20100099298A (ko) 2010-09-10
IL206441A0 (en) 2010-12-30
JP2011506562A (ja) 2011-03-03
JP2014159445A (ja) 2014-09-04
ZA201001908B (en) 2011-05-25
CY1112820T1 (el) 2016-02-10
WO2009080699A2 (en) 2009-07-02
US9138403B2 (en) 2015-09-22
HRP20120483T1 (hr) 2012-07-31
EP2234645B1 (en) 2012-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PT2234645E (pt) Formulações de peg-interferão-beta
Qiu et al. A hydrogel prepared by in situ cross-linking of a thiol-containing poly (ethylene glycol)-based copolymer: a new biomaterial for protein drug delivery
ES2418833T3 (es) Formulaciones líquidas de interferón estabilizadas
KR100266145B1 (ko) G-csf의 안정한 동결건조된 약제학적 제제
EP2459228B1 (en) Prodrugs comprising an insulin linker conjugate
RU2324494C2 (ru) Новое применение эритропоэтина при сердечных заболеваниях
HUT77529A (hu) Pegilező reagensek és az azokkal képzett vegyületek
PT1421956E (pt) Processo para a ligação por passos de polietileno glicol ( peg ) a um polipéptido
DK2512450T3 (en) Dry growth hormone composition transiently bound to a polymer carrier
CZ292775B6 (cs) Fyziologicky aktivní konjugát polyethylenglykol-interferon alfa, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje
BRPI0614257A2 (pt) conjugados de uma porção de g-csf e um polìmero
JP5138699B2 (ja) Ｐｅｇ−インターフェロンアルファ接合体の配合物
ES2365832T3 (es) Composiciones que comprenden conjugados de peg-interferón alfa y rafinosa como crioprotector.
HU228877B1 (en) Formulations for stabilization of peg-interferon alpha conjugates and method for preparation such formulations
BRPI0622128A2 (pt) conjugado de polietileno glicol-g-csf
ES2374530T3 (es) Formulaciones líquidas de interferón estabilizado.
JP4949828B2 (ja) 溶液中での成長ホルモンの安定化
JP2005281302A (ja) 修飾インターロイキン−１１及びそれを含有する医薬組成物
EP3200767A1 (en) Stable, benzyl alcohol-free aqueous solution formulations containing alpha-type interferon