PT1993605E - Composições em pó e sistemas para a vacinação de aves de capoeira - Google Patents

Description

ΡΕ1993605 1

DESCRIÇÃO

"COMPOSIÇÕES EM PÓ E SISTEMAS PARA A VACINAÇÃO DE AVES DE CAPOEIRA"

Campo da invenção A presente invenção relaciona-se com composições em pó seco para a vacinação veterinária útil para induzir respostas protectoras em aves de capoeira contra doenças de aves, tais como, mas não limitado a, doença de Newcastle e gripe das aves. A presente invenção também se relaciona a sistemas para efectuar a vacinação nas aves de capoeira por inalação utilizando essas composições em pó.

Fundamento da invenção

As doenças infecciosas das aves são bem conhecidas pelo seu impacto económico negativo na produção aves de capoeira e, possivelmente, sobre a saúde de outros animais (em particular mamíferos) e os seres humanos que podem estar directa ou indirectamente em contato com as aves infectadas.

Os exemplos de agentes patogénicos específicos, tais como, mas não estão limitados a, o vírus da doença de Newcastle (seguidamente abreviado para VDN), vírus da 2 ΡΕ1993605 bronquite infecciosa (IBV), vírus da bursite infecciosa (IBDV), rinotraqueíte vírica dos perús (TRTV), vírus da laringotraqueíte infecciosa (ILTV), vírus da síndrome da queda de postura (EDS), encefalomielite vírica das aves, vírus da reticulendoteliose, vírus da varíola aviária, adenovírus das aves, rinite infecciosa, febre tifoide das galinhas, cólera das aves, gripe das aves, Mycoplasma gallisepticum, Escherichia coli, Salmonella spp, etc. podem espalhar-se a partir de aves infectadas.

Mais especificamente, a doença de Newcastle é uma infecção virai das aves com uma ampla distribuição geográfica, que pode causar grandes perdas económicas para a avicultura. 0 VDN é o agente etiológico da referida doença e representa o protótipo do vírus do género Paramyxovirus. Existem nove serotipos de paramyxovírus das aves designadas por APMV-1 a APMV-9. A doença de Newcastle é complicada na medida em que as diferentes estirpes de VDN podem induzir alterações muito significativas na gravidade da doença. A infecção pode ocorrer por inalação ou ingestão e a forma infecciosa do vírus é depois espalhada de uma ave para outra ave.

A gripe aviária, ou "gripe das aves", é uma doença contagiosa dos animais causada pelo vírus da gripe A que normalmente infecta apenas aves e, menos frequentemente, porcos. 0 vírus da gripe das aves tende a ser específico da espécie, mas pode atravessar a barreira das espécies para infectar mamíferos e seres humanos. O 3 ΡΕ1993605 vírus da gripe A tem 16 subtipos H. Apenas são conhecidos os vírus dos subtipos H5 e H7 por causarem a forma altamente patogénica da doença. 0 vírus H5N1, responsável pela actual epidemia mundial de gripe das aves tem demonstrado ser especialmente tenaz, e actualmente é de particular preocupação para a saúde humana. A vacinação por pulverização e por aerossol, respectivamente com gotículas grossa e finas de liquido, são habitualmente utilizadas em técnicas de vacinação em massa para protecção das aves de capoeira contra infecções víricas ao nível respiratórias. Métodos e dispositivos para nebulização para a vacinação por atomização e aerossol, são particularmente importantes para a vacinação das aves de capoeira desde que tenha requisitos específicos, por exemplo, os dispositivos têm que ser utilizados com uma fonte de energia externa.

As aves são normalmente vacinadas várias vezes durante a sua vida seguindo as especificações do fabricante ou programas feitos à medida, a fim de evitar surtos de doenças de forma optimizada. A vacinação chamada primária (imunização inicial) é geralmente realizada em frangos com idade inferior a cerca de duas a três semanas. Esta vacinação primária é geralmente seguida por uma ou mais das chamadas vacinações secundárias (vacinação de reforço).

Aproximadamente 48 horas após a vacinação das aves de capoeira, podem aparecer reacções à vacinação com 4 ΡΕ1993605 alguns vírus respiratórios, particularmente com o VDN. As aves de capoeira afectadas (por exemplo, galinhas) podem apresentar sintomas respiratórios, anorexia, depressão, atraso no crescimento e aumento da mortalidade. A reacção à vacinação pode ser ainda mais complicada pela colibacilose secundária (infecção a Escherichia coli). Com o objectivo de evitar essa situação, são administrados às aves, tratamentos com antibióticos, 36 horas após a vacinação, o que se revela, muitas vezes eficaz. No entanto, a utilização excessiva ou má utilização pode induzir a resistência bacteriana, o que pode dificultar o tratamento adequado, sempre que ocorram reacções à vacinação agravadas por estirpes multi-resistentes. São normalmente utilizados, para a vacinação de aves de capoeira, vírus vivos de baixa virulência (lentogénico) ou de moderada virulência (mesogénico) contra a doença de Newcastle, dependendo da situação da doença. As vacinas mesogénicas contra o vírus ND são apenas adequadas para a vacinação de reforço. No entanto, existe também uma considerável gama de virulência no grupo lentogénico. As vacinas normalmente utilizadas com estirpes vivas incluem as estirpes lentogénicas tais como, V4, Hitchner Bl, F e La Sota, e estirpes mesogénicas tais como, estirpe H, Mukteswar, Koinarov e Roakin. A principal vantagem das vacinas com estirpes vivas de VDN é poderem ser administradas através de técnicas pouco dispendiosas para adaministração em massa, 5 ΡΕ1993605 tais como, aplicação por nebulização, aerossol e na água de beber. No entanto, conforme mencionado anteriormente, as vacinas com estirpes vivas podem provocar reacções graves à vacinação, em particular, ao nível do tracto respiratório inferior após a vacinação por aerossol. De forma a minimizar este inconveniente, é importante utilizar vírus extremamente pouco agressivos, especialmente como agentes na vacinação primária. No entanto, mesmo as estirpes vivas pouco agressivas do VDN, Hitchner BI e La Sota, normalmente utilizadas pode ainda assim causar reacções respiratórias moderadas à vacinação. Por conseguinte, existe uma necessidade urgente para melhorar a técnica de vacinação contra o VDN, de modo a evitar reacções à vacinação em animais inoculados, mas produzindo ainda uma sólida imunidade contra a doença.

Para as partículas de aerossol serem eficazes, sabe-se que as partículas inaladas devem ser depositadas em zonas específicas do tracto respiratório de aves, tomando em consideração os parâmetros, tais como, mas não limitado a, espécies de ave, sua idade, tamanho das partículas a serem inaladas e a sensibilidade a reacções pós-vacinação.

Actualmente os nebulizadores comercialmente disponíveis utilizados para a produção de pulverizações grosseiras libertam uma proporção significativa de partículas que vão depositar-se nas vias respiratórias mais profundas, ou seja, a distribuição de tamanho de partículas em torno do tamanho ideal é muito ampla. Embora este efeito seja 6 ΡΕ1993605 desejado para as vacinações de reforço, pode resultar em reacções adversas à vacinação em aves mais jovens.

As gotículas recentemente produzidas irão evaporar até cerca de 10% do seu tamanho original. Quando geradas através de técnicas de pulverização actualmente disponíveis, esse fenômeno irá prejudicar os resultados adequado de vacinação, uma vez que: - durante a vacinação primária, uma percentagem significativa das partículas da vacina irão depositar-se nas vias respiratórias mais profundas das aves, considerando que não deve ser, o que explica assim a elevada incidência de reacções respiratórias observadas após a vacinação; - devido a uma ampla e não controlada distribuição de tamanho de partícula, apenas uma pequena percentagem de partículas evaporadas das gotículas é inalado atingindo as vias aéreas inferiores durante a segunda vacinação.

Paralelamente a uma distribuição de tamanho de gotícula inadequado, a perda do vírus da vacina, devido à inactivação durante a produção, reconstituição e nebuli-zação é uma segunda principal razão para a diminuição de eficácia das vacinas conhecidas por aerossol e por pulverização. Em primeiro lugar, o vírus da vacina, que é geralmente produzido num meio líquido, por exemplo, a cavidade alantóide do ovo isenta de agentes patogénicos específicos (SPF) é liofilizado para armazenamento. Embora os vírus sejam menos susceptíveis a factores de inactivação ambientais na forma seca e embora possam ser adicionados 7 ΡΕ1993605 excipientes estabilizantes antes da secagem, existe ainda uma certa perda da concentração virica durante a produção e armazenamento da vacina de estirpes vivas. Antes da nebu-lização, o bolo da vacina necessita de ser reconstituído e a concentração virica pode ser ainda mais reduzido uma vez que podem existir vestígios de desinfectante presente na água utilizada para a reconstituição e devido à sensibilidade à temperatura do vírus num meio líquido. Esta inactivação aumenta ainda mais quando as gotículas da vacina evaporam após a dispersão. A grande redução na concentração da vacina durante a vacinação por pulverização e aerossol pode pôr em perigo a indução de uma resposta imunológica suficiente. Além disso, as actuais vacinas em suspensões líquidas sofrem de uma falta significativa de estabilidade.

Allan et al. em Avian Pathology (1980) 9:153-162 ensinam que a utilização de soluções de vírus da doença de Newcastle contendo sorbitol dissolvido em água para gerar, a partir da superfície de um pião que gira a velocidade elevada, as partículas molhadas de aerossol podem secar antes da câmara de exposição através da passagem por uma série de colunas para produzir aerossóis quase mono-dispersos com tamanhos de partículas desde 1 até 4 μιη para a vacinação de galinhas. O WO 97/36578 descreve micro-partículas secas por pulverização, com pelo menos, 90% das quais com um volume ΡΕ1993605 médio de tamanho de partícula de 1 até 10 μιη, compreendendo uma mistura substancialmente uniforme de um agente para a terapêutica genética e um excipiente tal como um hidrato de carbono. Estas micropartículas podem ser formuladas com um veículo com um tamanho grande e a formulação resultante pode ser administrada utilizando um inalador para pó seco. 0 WO 97/36578 é omisso relativamente à vacinação, aplicações em veterinária, bem como, sobre a poli-dispersão do tamanho das micro-partículas. 0 WO 99/52550 descreve um sistema de distribuição de vacina em partículas poliméricas através da incorporação de um antigénio proteico insolúvel em água, sendo o referido sistema produzido a partir de uma emulsão de um copolímero poli(lactido-co-glicolido) biodegradável, em que as partículas do polímero resultantes têm um diâmetro médio de 0,05 a 20 μιη, de acordo com a distribuição do tamanho do volume. A Figura 2 apresenta o tamanho da dispersão das partículas exemplificativas com um diâmetro médio de 10 μιη. 0 WO 99/52550 é omisso relativamente a vírus da gripe das aves e à nebulização, e não ensinar quanto à presença de açúcares no sistema de distribuição da vacina. A Patente dos EUA N° 6 651 655 descreve um método para a criação de uma resposta imunológica num doente, utilizando um inalador de pó seco isento de qualquer outro gás propulsor, ou seja, accionado pela respiração. A formulação da vacina é carregada no referido inalador de pó que compreende partículas de vacina em pó seco contendo um 9 ΡΕ1993605 tamanho de partícula aerodinâmico inferior a 50 μιη, e a figura 1 apresenta a distribuição de tamanho de partícula de um pó de vacina triturado exemplif icativo. Uma vez que partículas tão pequenas foram produzidas para deposição pulmonar profunda, a substância micronizada é misturada com partículas grandes de lactose, ou seja, com cerca de 100 μιη ou cerca de 50 vezes maiores do que as partículas de vacinas trituradas. Devido aos seus princípios de construção, o inalador de pó seco da Patente dos EUA N° 6 651 655 não é obviamente adequado para a vacinação de aves de capoeira. 0 WO 2005/123131 descreve formulações para a pulverização a seco de um anticorpo ou de uma vacina, que compreende 4% a 10% em peso de uma vacina de anticorpo ou de antigénio, de 0,1 mM a 50 mM de um ou mais aminoácidos, de 0,5 a 4% em peso de um açúcar e água. Dependendo do equipamento de pulverização de alta pressão utilizado, as gotículas irão produzir partículas de pó seco que variam em tamanho desde 0,5 até 100 μιη. O WO 2005/123131 é omisso relativamente à poli-dispersão do tamanho da micro-partícula e não considera as outras formulações para além de uma associação de aminoácidos e açúcares.

Meszaros et al. em Acta Veterinária Hungaria (1992) 40:121-127 descreve a imunização de frangos com 1 a 10 dias de idade contra a doença de Newcastle através da vacinação por aerossol utilizando um aparelho Masterdrop MD-2500 proporcionando gotículas inferiores a 10 μιη de 10 ΡΕ1993605 tamanho de gotícula. Esta publicação acrescenta um estabilizador de goticulas para evitar a evaporação das gotículas em partículas secas e também é omisso relativamente ao tamanho médio e à polidispersão das gotículas. 0 objecto da presente invenção é o de ultrapassar estas desvantagens.

Sumário da invenção A presente invenção permite ultrapassar os inconvenientes da actual tecnologia de vacinação de aves de capoeira de um modo simples e económico, proporcionando composições em pó seco eficazes para a vacinação veterinária, em particular para a vacinaçao de aves de capoeira, que podem ser utilizadas tanto para a vacinaçao inicial como para as vacinações de reforço.

Em primeiro lugar, a presente invenção refere-se a uma composição em pó para a vacinação de aves de capoeira compreendendo uma quantidade eficaz de um agente de vacinação para aves de capoeira, seleccionado a partir do grupo constituído por vírus, bactérias, fungos, parasitas e suas partes, e uma quantidade de veículos suportando o referido agente de vacinação de aves de capoeira, os referidos veículos consistem essencialmente numa associação de um açúcar redutor ou não redutor e um polímero biocompatível, em que a referida composição em pó está na forma de partículas com um tamanho médio de partícula de 11 ΡΕ1993605 cerca de 2 a 30 μιη e uma polidispersão de tamanho de partícula desde 1,1 a 4,0, e, em que, a proporção do peso de referido polímero biocompatível relativamente ao referido açúcar redutor ou não redutor na referida associação de veículos é desde 1/1 até 1/8. Em segundo lugar, a presente invenção refere-se a um sistema para a realização de vacinações em aves de capoeira por inalação compreendendo uma câmara que contém uma composição de vacinas em pó conforme definido anteriormente e meios para a nebulização da composição de vacina em pó sobre as referidas aves de capoeira. Em terceiro lugar, a presente invenção refere-se a métodos e processos para a produção das anteriormente descritas composições de vacinação em pó para aves de capoeira, compreendendo a secagem por pulverização de uma fase líquida compreendendo uma mistura de um agente da vacina seleccionado a partir do grupo constituído por vírus, bactérias, fungos, parasitas e suas partes, um veículo líquido e uma quantidade de veículos sólidos de suporte constituído essencialmente por uma associação de um açúcar redutor ou não redutor e um polímero biocompatível para proporcionar a referida composição de vacinação em pó na forma de partículas com um tamanho de partícula média de 2 a 30 μιη.

Num aspecto, a invenção proporciona composições de pó para a vacinação de aves de capoeira adequadas para a nebulização directa sobre as aves de capoeira sem reconstituição de uma solução de vacina, ultrapassando assim a perda da concentração da vacina inerente a qualquer passo 12 ΡΕ1993605 de reconstituição, e ultrapassando o risco significativo da secagem não controlada das goticulas, que está associado à prática corrente na avicultura de dissolver uma composição de vacinação antes da nebulização sobre as aves. Neste aspecto da presente invenção, a nebulização de uma composição de vacinação em pó, sem a reconstituição prévia de uma solução de vacina, permite uma distribuição fácil e eficiente e evita o risco significativo da aglomeração de partículas o que pode tornar o tamanho de partícula inadequado para inalação.

Breve descrição das figuras A Figura 1 apresenta a distribuição do tamanho de partículas (em micron) de uma composição em pó exempli-ficativa para vacinação para uso veterinário de acordo com a presente invenção, em volume percentual por cada fracção (escala da esquerda) e por fracções cumulativas (escala da direita). A Figura 2 apresenta a distribuição de tamanho de partícula cumulativo de vacinas em pó seco nebulizadas de acordo com a invenção, em comparação com a distribuição do tamanho de goticulas cumulativa de uma vacina líquida nebulizada do estado da técnica, conforme determinado através da técnica de difracção de raios laser. A Figura 3 apresenta a concentração vírica expressa em EID50 por m3 de ar para uma vacina em pó 13 ΡΕ1993605 finamente nebulizada de acordo com a invenção, em comparação com uma vacina liquida finamente nebulizada do estado da técnica. A Figura 4 apresenta a média dos títulos séricos da inibição da hemaglutinação (IH) obtidos nas 2 e 4 semanas após a vacinação com vacinas em pó nebulizadas. As barras de erro representam os desvios padrão.

Descrição detalhada da invenção

As características mais relevantes do primeiro aspecto da presente invenção, são as seguintes: a presença de uma quantidade de veículo de suporte, consistindo essencialmente por uma associação de um açúcar redutor ou não redutor e um polímero biocompatível, e - a composição em pó para vacinação está na forma de partículas com um tamanho médio de partícula de 2 até 30 μιη, e uma polidispersão do tamanho de partícula desde 1,1 até 4,0, e a proporção em peso do referido polímero biocompatível em relação ao referido açúcar redutor ou não redutor na referida associação de veículos é desde 1/1 até 1/8

Quando relacionado com o tamanho das partículas de um pó para vacinação a seco, o termo "polidispersão", tal como aqui é utilizado, salvo indicação em contrário, refere-se à razão d (84%) / d (50%), ou seja, o diâmetro 14 ΡΕ1993605 correspondente a 84% na curva cumulativa da distribuição do tamanho de partículas baseado no volume dividido pelo diâmetro correspodente a 50% na curva cumulativa da distribuição do tamanho de partícula baseado no volume.

Enquanto se cumprem os objectivos da presente invenção, composições para vacinação úteis podem ser adequadamente seleccionadas através da particular associação de sub-gamas dos parâmetros importantes acima indicados, dependendo do tipo (espécies) e idade das aves de capoeira a serem vacinadas. Neste sentido, o tipo (espécies) de aves de capoeira não é um parâmetro crítico da invenção, e pode não incluir apenas galinhas, mas também as aves de avicultura, tais como perús, gansos, faisões, patos e outros semelhantes e aves de estimação. Por exemplo, uma composição de pó com um tamanho médio de partícula de cerca de 10 a 30 μιη, preferencialmente desde cerca de 15 a 25 μιη, ou melhor ainda, cerca de 20 μιη, é especialmente desejado para a primeira vacinação de frangos com idade de um dia até cerca de três semanas. Por outro lado, uma composição para vacinação em pó com um tamanho médio de partícula desde cerca de 3 a 9 μιη, por exemplo, desde cerca de 3 a 6 μιη, ou cerca de 5 μιη, é preferido para a vacinação secundária (reforço) de aves de capoeira.

Uma polidispersão de tamanho de partícula tão pequena quanto possível, é um parâmetro importante no controlo rigoroso das composições para vacinação em pó e dos sistemas da presente invenção, e é um parâmetro 15 ΡΕ1993605 determinante no êxito final dos métodos de vacinação correspondentes. A eficácia da vacinação adequada já pode ser obtida ao utilizar uma composição em pó seco da presente invenção, em que, a polidispersão do tamanho de partícula é inferior a 3,0, preferencialmente inferior a 2,5 e ainda mais preferencialmente inferior a 2,0. Uma vez que o controlo da polidispersão é mais difícil de alcançar quando o tamanho de partícula é menor, e uma vez que, deve haver um ligeiro equilíbrio entre a eficácia da vacinação e os custos do controlo da polidispersão, em muitos casos, pode ser suficiente para a polidispersão do tamanho de partícula das composições para vacinação em pó seco, estar, pelo menos a 1,3 ou, pelo menos a 1,5 e, até mesmo, pelo menos a 1,7, tendo em consideração as exigências contraditórias de reprodutividade no fabrico e os custos e, a eficácia da vacinação. Os intervalos adequados de trabalho para a polidispersão do tamanho de partículas da composição em pó da presente invenção são, portanto, desde cerca de 1,3 até cerca de 3,0, preferencialmente de 1,5 a 2,5. A proporção dos veículos presentes na composição para a vacinação em pó seco não é uma característica de limitação da presente invenção, e geralmente, não influencia a viabilidade do fabrico da composição. Esta proporção pode ser seleccionada por especialistas na matéria, utilizando os padrão do conhecimento da técnica, dependendo de vários parâmetros, tais como, mas não limitados a, função(ões) técnica(s) e o número de veículos, 16 ΡΕ1993605 as suas compatibilidades mútuas, o tipo e a concentração do agente de vacina de aves de capoeira, e, facultativamente, o objectivo do tamanho de partículas médio a ser atingido (por exemplo, dependendo do tipo e da idade das aves de capoeira a serem vacinadas). A proporção de um ou mais dos veículos referidos pode estar geralmente na gama desde 0,1% a 99,999%, por exemplo, desde 0,1% a 99,9%, tal como, desde 0,5% a 99,5% em peso da referida composição da vacina em pó, ou desde 1% a 99%, ou desde 2% a 98%, por exemplo, desde 90% a 99,999% em peso. Consequentemente, a proporção do agente de vacinação, pode variar entre 0,001% e 99,9% em peso, por exemplo, desde 0,001% a 10% em peso da referida composição para vacinação em pó. O tipo e a natureza de um ou mais dos referidos veículos presentes na composição para a vacinação em pó não é uma característica limitante da presente invenção, desde que participem na estabilidade da vacina e facilitem a nebulização directa na forma de pó, e possam ser seleccionados pelo especialista na matéria, utilizando os conhecimentos padrão da matéria, dependendo de vários parâmetros, tais como, mas não limitados, à função técnica a ser realizado por cada veículo individualmente, à sua compatibilidade com os outros veículos), e considerações económicas. Um ou mais dos referidos veículos são preferencialmente de uma qualidade aceitável para uso veterinário e podem ser adequadamente seleccionados, mas sem limitação, a partir do grupo consistindo em: - açúcares redutores, tais como, mas não limitados a, 17 ΡΕ1993605 glucose, frutose, manose, galactose, sorbose, xilose, ribose, lactose, maltose, celobiose e outros semelhantes, - açúcares não-redutores, tais como, mas não limitados a, trealose, sacarose, e outros semelhantes, polióis, tais como, mas não limitados a, manitol, sorbitol, maltitol, xilitol, eritritol, inositol e outros semelhantes, - polímeros biocompatíveis, tais como, mas não limitados a, polivinilpirrolidona, acetato de polivinilo, poliésteres alifáticos, poli(lactido), poli(glicólido), polilactido-co-glicólido), policaprolactona, poli(lactido-co-caprolacto-na) , ácido poliacrílico, carragenina, quitosano, derivados da celulose, dextrano, dextrano quimicamente modificado, inulina, maltodextrina, polietilenoglicol, óxido de poli-etileno, polimetacrilatos, álcool polivinílico, amido e outros semelhantes, - proteínas, tais como, mas não limitadas a, albumina, soro de leite em pó, caseína e outros semelhantes, e - lípidos, tais como, mas não limitados a, DPPC, DSPC e outros semelhantes.

Surpreendentemente foi verificado que, a associação de um açúcar redutor ou não-redutor com um polímero biocompatível, tem efeitos superiores em termos da estabilidade da vacina e na facilidade de nebulização directa na forma de pó, em relação a outros tipos de veículos aceitáveis para uso veterinário conhecidos no estado da técnica de vacinação de aves de capoeira. Portanto, uma tal associação constitui a parte essencial 18 ΡΕ1993605 dos veículos presentes nas composições para vacinação em pó da presente invenção. Em circunstâncias particulares, pode ser desejável complementar esta associação específica de veículos com outros tipos de veículos especificados ante-riormente, tais como, mas não limitados a, polióis, lípidos, proteínas e outros semelhantes. A utilização de um açúcar não redutor como um veículo nas composições para vacinação em pó da presente invenção é geralmente preferível em relação aos açúcares redutores. Esta preferência também pode ser alcançada através da utilização de uma das suas misturas, em que, a proporção de açúcares não redutores é predominante na mistura.

Por exemplo, os veículos de estabilização adequados tendem a tornar-se amorfo após secagem, e/ou funcionam como materiais de substituição da água e/ou protegem o material por encapsulação, cujo comportamento pode ajudar na preservação da estrutura original do microrganismo (por exemplo, do vírus) contido na composição em pó e contribuem para a estabilidade do pó ao longo do tempo.

As vacinas vivas atenuadas e inactivadas convencionais, bem como, as vacinas recombinantes, de sub-unidade, péptido e de ADN podem ser adequadamente utilizadas como agente activo para a vacinação de uso 19 ΡΕ1993605 veterinário nas composiçoes em pó para a vacinaçao de aves de capoeira da invenção.

Os agentes da vacina, tais como, vírus atenuados que podem ser incorporado adequadamente numa composição de pó para a vacinação de aves de capoeira por inalação, de acordo com a presente invenção, podem ser obtidos por qualquer dos métodos convencionais conhecidos. Em resumo, um substrato susceptível pode ser inoculado com o vírus relevante e propagado até que o vírus se replique até uma concentração desejada, após esse tempo, o material contendo o vírus é recolhido. Qualquer substrato capaz de sustentar a replicação do vírus pode ser adequado para ser utilizado na presente invenção, incluindo culturas de células primárias (aviária), tais como as células de fibroblastos embrionárias de galinha (FEG) ou células de rim de galinha (CK) , ou linhas celulares de células de mamífero, tais como, linhagem de células VERO ou linhagem célular de rim de hamster bebés (BHK). Preferencialmente, o vírus é propagado em embriões de galinha isentos de agentes pato-génicos específicos (SPF).

Mais particularmente, um substrato adequado no qual o vírus relevante pode ser propagado são os ovos embrionados SPF. Os ovos embrionados podem ser inoculados por exemplo, com 0,2 ml de VDN contendo fluído alantóico compreendendo, pelo menos, 102 doses infecciosas para o ovo embrionário 50 (seguidamente abreviada para EID50) por ovo. Preferencialmente, os ovos embrionados com 9-12 dias de 20 ΡΕ1993605 idade são inoculados com cerca de 105 EID50 e posteriormente incubados a 37°C durante 2 a 4 dias, após esse tempo o produto do vírus DN pode ser colhido, preferencialmente através da colecta do fluido alantóico. 0 fluído pode então ser centrifugado durante cerca de 10 minutos a 2500g, seguido por filtração do sobrenadante através de um filtro (ΙΟΟμιη) . A presente invenção também se relaciona com um método de produção da anteriormente referida composição em pó seco para a vacinação de aves de capoeira por administração por inalação, o referido método compreende a liofilização de uma formulação aquosa compreendendo uma mistura de uma quantidade eficaz de um agente activo para vacinação de aves de capoeira e uma quantidade de suporte constituído por uma associação de um açúcar redutor ou não redutor e um polímero biocompatível e, em seguida, a trituração directa do produto no referido passo de liofilização, tal como para proporcionar a referida composição para a vacinação em pó na forma de partículas secas contendo um tamanho médio de partícula desde 2 até 30 μιη e, facultativamente, uma polidispersão de tamanho de partícula desde 1,1 a 4,0. As sub-gamas do último parâmetro são como as descritas anteriormente.

Ainda num outro aspecto, a presente invenção relaciona-se com um método de produção da composição em pó anteriormente mencionada para a vacinação de aves de capoeira por inalação, compreendendo, o referido método, a 21 ΡΕ1993605 secagem por pulverização de uma fase líquida compreendendo uma mistura de uma quantidade eficaz de uma vacina para uso veterinário e uma quantidade de suporte constituída por uma associação de um açúcar redutor ou não redutor e um polímero biocompatível, de modo a proporcionar a referida composição de pó na forma de partículas secas com um tamanho médio de partícula desde 2 μιη até 3 0 μιη, e facultativamente, uma polidispersão de tamanho de partículas desde cerca de 1,1 a 4,0. O método de produção da invenção, preferencialmente, a secagem por pulverização, pode ser efectuada a uma temperatura, ou seja, uma temperatura de entrada, como seguidamente descrita, variando desde cerca de 30°C até cerca de 170°C, ou mesmo temperaturas tão elevadas como 190°C. 0 especialista na matéria entende que, dependendo do tipo de equipamento de secagem por pulverização e, da taxa de alimentação utilizada, a temperatura de secagem por pulverização pode ser batante diferente à entrada e à saída do dispositivo de secagem por pulverização. A temperatura de secagem por pulverização não é uma característica limitante deste aspecto da invenção e a temperatura convencional varia na gama desde cerca de 40°C até cerca de 160°C. O equipamento de secagem por pulverização utilizado neste aspecto da invenção, não é uma característica crítica da invenção e pode ser de qualquer tipo comercialmente disponível ou padrão da técnica. A composição em pó para vacinação de uso veterinário da presente invenção é, em virtude do seu 22 ΡΕ1993605 tamanho médio de partícula e/ou características de polidispersão de tamanho de partícula, inaláveis pelas aves e pode portanto, ser utilizado de forma eficiente na imunização terapêutica ou profiláctica de aves de capoeira, por exemplo, qualquer tipo de aves galináceas e uma via de administração adequada inclui, mas não está limitado a, nebulização da composição para vacinação em pó sobre as referidas aves de capoeira.

Num outro aspecto, a invenção proporciona composições em pó para a vacinação das aves de capoeira adequadas para inclusão num sistema para nebulização directa sobre aves de capoeira sem a reconstituição de uma solução de vacina, evitando a perda de concentração da vacina e a aglomeração de partículas.

Um outro aspecto da presente invenção relaciona-se com um sistema de vacinação, tal como, um equipamento de nebulização, incluindo uma composição de pó seco para a vacinação de aves de capoeira, de acordo com a descrição anterior. Mais especificamente, a presente invenção relaciona-se com um sistema para a realização de vacinação em aves de capoeira por inalação compreendendo: - uma câmara que contém uma composição para vacinação em pó, tal como definido anteriormente, e - meios para a nebulização da composição de vacinação em pó sobre as referidas aves de capoeira.

Preferencialmente, este equipamento inclui meios 23 ΡΕ1993605 para pulsar a referida composição de pó em conjunto com um gás para aves de capoeira. Preferivelmente, o referido gás é ar. Não há necessidade de um desempenho eficaz da presente invenção para a utilização de gases propulsores especiais que podem ser inalados pelas aves e causar-lhes problemas ao nivel do tracto respiratório. 0 último aspecto da invenção é útil para realizar a vacinação de aves de capoeira por nebulização de uma composição de pó, tal como descrito anteriormente sobre as referidas aves. Quando este passo de vacinação é uma vacinação primária (imunização inicial) em aves de capoeira com idade inferior a duas a três semanas, a referida composição de pó está, preferencialmente, sob a forma de partículas contendo um tamanho de partícula média desde cerca de 10 a 30 μιη, e mais preferencialmente desde cerca de 15 a 25 μιιι, ou ainda mais preferencialmente, com cerca de 20 . Quando esta vacinação é uma vacinação secundária (vacina de reforço) em aves de capoeira com mais de 2 a 3 semanas, a referida composição de pó está preferencialmente sob a forma de partículas contendo um tamanho de partícula média de cerca de 3 a 9 μιη, mais preferencialmente cerca de 5 μιη. A "composição para vacinação de aves de capoeira" como aqui é utilizada refere-se a uma composição que compreende pelo menos uma proteína ou um seu fragmento, o qual provoca uma resposta imunitária que protege uma ave da doença, quando administrada em quantidades eficazes para o - 24 - ΡΕ1993605 referido animal. Para a utilização de uma composição para vacinação, de acordo com a presente invenção, o agente activo de uso veterinário pode compreender adequadamente um microorganismo vivo atenuado, inactivado ou recombinante tal como, mas não limitado a, vírus, bactérias, micoplasma ou clamidofila.

As vacinas particularmente adequadas são, tais como, microrganismos vivos, atenuados ou inactivados e vacinas recombinante, sub-unidade, péptido e ADN a partir de: - Vírus, tais como, mas não limitados a, Paramyxoviridae (por exemplo, Vírus da Doença de Newcastle, Pneumovirose) , Orthomyxoviridae (por exemplo, vírus da gripe), Coronaviridae (por exemplo, Vírus da Bronquite infecciosa, Coronavirus dos Perú, Torovirus do Perú), Picornaviridae (por exemplo, vírus da Encefalomielite Aviária, vírus da Hepatite no Pato, vírus da hepatite no Perú), Reoviridae (por exemplo, Rotavírus), Birnaviridae (por exemplo, vírus da Bursite Infecciosa ou doença de Gumboro), Retroviridae (por exemplo, vírus do Sarcoma/Leucose Aviária), Astroviridae, Parvoviridae (por exemplo Parvovírus no Ganso) , Adenoviridae, Herpesviridae (por exemplo, vírus da laringotraqueíte infecciosa, vírus da Doença de Marek), Pox viridae, Hepadnaviridae (por exemplo, vírus da Hepatite no Pato, vírus da hepatite no Perú), Circoviridae, Papova-viridae (por exemplo, Poliomavírus Hemorrágico no Ganso), Caliciviridae, Togaviridae, Arteriviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Rhabdoviridae, Filoviridae, Arenaviridae, 25 ΡΕ1993605 - Bactérias, tais como, mas não limitadas a, Salmonella, Campylobacter, Escherichia coli, Pasteurella (Cólera das aves), Rimerella anatipestifer, Ornithobacterium rhino-tracheale, Hemophilus paragallinarum, Bordetella avium (rinite do perú), Micoplasma (em particular, Mycoplasma gallisepticum), Clostridia, Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Spirochetes, Mycobacterium e Chlamydophlla (psitacose, ornitose), - Fungos, tais como, mas não limitados a, Aspergillus e outros semelhantes, e - Parasitas, tais como, mas não limitados a: nematóides, Acanthocephalans, Coccidia, Cryptosporidium and Cochlosoma anatis

Como uma ilustração de uma forma de realização particularmente útil da presente invenção, podem ser utilizadas as seguintes estirpes de vírus da doença de Newcastle: - vacinas lentogénicas tais como, mas não limitadas a,

Hitchner Bl, LaSota, Clone 30, V4, NDW 112 e F, e - vacinas mesogénicas, tais como, mas não limitadas a,

Roakin e Lukteswar Komarov.

Como outra ilustração de uma forma de realização particularmente útil da presente invenção, pode ser utilizada a seguinte estirpe da gripe aviária: estirpe asiática H5N1.

De acordo com a presente invenção, a imunização é 26 ΡΕ1993605 obtida por inalação da composição de pó seco da invenção pelas aves de capoeira. Para exemplo, as galinhas são expostas a uma nuvem da composição de pó com o tamanho médio de partícula seleccionado e da associação seleccionada de veículos e a polidispersão do tamanho de partícula seleccionado. A duração da imunidade pode depender do programa de vacinação escolhido. Uma das considerações mais importantes que afetam os programas de vacinação é o nível de imunidade materna em frangos jovens, que pode variar consideravelmente de exploração de avicultura para exploração de avicultura, de lote para lote, e individualmente entre os frangos. Por esta razão, podem ser utilizadas uma ou mais das várias estratégias conforme se segue. Ou os pássaros não são vacinados até às 2 a 4 semanas de idade, quando a maioria deles vai ser susceptível, ou aves com 1 dia de idade, são vacinadas com a aplicação de uma pulverização grosseira. A vacinação de reforço é então realizada 3 a 4 semanas mais tarde. A secagem por pulverização é capaz de fornecer directamente as partículas de pó seco dispersíveis com um tamanho médio de partícula adequado e uma polidispersão de tamanho de partícula adequada sem a necessidade de trituração após o passo de secagem por pulverização. Neste processo, uma suspensão líquida do vírus é rapidamente transformada numa forma de partículas secas de tamanho de partícula médio adequado e distribuição de tamanho de partícula adequado por atomização num meio gasoso quente de secagem, tal como, mas não limitado, a ar. É criada uma 27 ΡΕ1993605 grande área interfacial de água em ar, a água evapora rapidamente e seca completamente numa questão de alguns segundos. Durante o inicio do passo de secagem, em que a superfície da gotícula permanece com 100% da humidade relativa, a temperatura da superfície mantém uma temperatura de bolbo húmido, que é significativamente inferior à temperatura do ar quente. 0 próprio vírus não será exposto a temperaturas elevadas, o que contribui para a estabilidade desejada da formulação em pó resultante. Quando a água é evaporada, o ar em torno da partícula contendo o vírus sólido já está arrefecido devido à humidade captada. A desnaturação do vírus pode também ser evitada através da utilização de veículos que são habitualmente utilizados para a estabilização de materiais lábeis, tais como, preferencialmente, uma combinação de açúcares redutores ou não redutores e polímeros biocompatíveis, e, facultativamente os polióis, proteínas ou lípidos ou suas misturas, em qualquer proporção adequada, conforme anteriormente mencionado. É bem conhecido da pessoa especialista na matéria que a secagem completa de uma composição em pó não pode ser facilmente atingida ou mantida ao longo do tempo a menos que sejam proporcionadas condições de produção e/ou armazenamento especiais e normalmente dispendiosas. O termo "seco", tal como aqui é utilizado, não se refere por conseguinte, a condições rigorosas de uma ausência completa de humidade. Se adequadamente realizada com todas as precauções industriais padronizadas e utilizando equipa- 28 ΡΕ1993605 mento disponível comercialmente, os métodos de produção de secagem por pulverização e liofilização descritos ante-riormente são capazes de atingir de forma reprodutível composições em pó com um teor de água não superior a cerca de 4% em peso, preferencialmente não superior a cerca de 3% em peso, e mais preferencialmente não acima de cerca de 2% em peso, no momento da produção. Esses níveis do conteúdo de humidade residual da composição de vacinação em pó são bem aceites para incluir o referido pó no sistema de vacinação da invenção, e para a realização de vacinação. Se armazenadas convenientemente antes da utilização (isto é, evitando a temperatura de armazenamento excessiva e/ou a humidade excessiva na sala de armazenamento, o conteúdo em água desses composições de vacinação em pó, não aumenta significativamente ao longo do tempo, e, em particular, não excede cerca de 6%, em peso, após 12 semanas de armazenamento .

Tipicamente, a composição em pó de vacina para uso veterinário, de acordo com a invenção, pode ser administrada numa dose de cerca de 103 a 108 EID50 por animal, preferencialmente numa dose variando desde cerca de 105 até 107 EIDso. A presente invenção será descrita nos exemplos seguintes, relativamente a uma forma de realização particular de trabalho, contudo a invenção não está limitada a esses exemplos, mas apenas pelas reivindicações. 29 ΡΕ1993605 EXEMPLO 1 - preparaçao de uma composição para vacinação em pó por secagem por pulverização:

Uma solução aquosa contendo 4% em peso de trealose e 1%, em peso de polivinilpirrolidona como veículos e vírus da doença de Newcastle (2,1012 EID50 por grama de sólidos), foi seca por pulverização através da utilização de um secador por pulverização Mobile Minor. Um bico de dois fluidos de 1 mm foi accionado a uma pressão de ar de atomização de 1 bar. A temperatura de entrada foi fixada a 160°C, o que resultou, juntamente com uma velocidade de alimentação de 26 mL/minuto, numa temperatura de saída a 70°C. O pó resultante foi avaliado: - para o conteúdo de água e de absorção de água utilizou-se a titulação por Karl Fischer, - para as propriedades termodinâmicas com análise diferencial calorimetria, e - para a distribuição do tamanho de partícula utilizou-se a difracção a raios laser (ver Figura 1), o equipamento utilizado foi uma versão do Mastersizer S de bancada comprida (de Malvern).

Imediatamente após a produção, o conteúdo em água no pó resultante foi de 3,1% em peso e aumentou para 5,9% em peso, após uma semana de armazenamento em frascos de vidro fechados com tampas contendo sílica gel a 22°C e 42% de humidade relativa. O material obtido era completamente 30 ΡΕ1993605 amorfo com uma temperatura de transição vítrea de 65°C. A polidispersão do tamanho de partícula (conforme definido anteriormente) do pó seco foi de 1,8, e a média do tamanho de partículas era de 6 μιη, conforme apresentado na Figura 1.

Imediatamente após a secagem, foi inoculada, uma alíquota do pó em ovos isentos de agentes patogénicos específicos (SPF) e após a incubação, foi determinado o conteúdo em vírus nos fluídos alantóicos por meio de um teste de hemaglutinação. Isso demonstrou que 2,1011 EID50 poderiam ser retidas por grama de pó por pulverização. EXEMPLO 2 - avaliação comparativa das concentrações víricas, no ar, após nebulização de uma vacina em pó fino e seco e de uma vacina líquida.

Uma vacina em pó fino e seco contendo um teor em água de 3,8% em peso, e com um tamanho de partícula adequado para a vacinação de reforço de aves de capoeira (o seja, para deposição nas vias aéreas inferiores), foi preparada de acordo com a invenção a partir de uma solução aquosa por meio da utilização de um secador industrial de escala piloto Mobile Minor, com um bico de 1 mm para dois fluídos (temperatura de entrada de 160°C, temperatura de saída de 70°C, fluxo de alimentação de 25 mL/minuto, o fluxo do gás de secagem 80 kg/hora, 2 bar de pressão do ar de atomização). A solução de alimentação submetida a secagem por pulverização continha 3% (p/p) de dihidrato de 31 ΡΕ1993605 trealose, 1% (p/p) de polivinilpirrolidona (PVP), 1% (p/p) de albumina de soro de bovino (BSA) em água destilada, à qual foi adicionado 107 EID5o de virus de vacina clone 30 por mL de solução de alimentação.

Para fins de comparação, foi reconstituída uma vacina de clone 30 disponível comercialmente, em 5 mL de água destilada, dos quais, 30 μί foram ainda diluídos para 5 mL para nebulização com um pulverizador Walther Pilot I que é utilizado muitas vezes para aplicações experimental de vacinas de reforço em aerossol fino. A distribuição do tamanho de partícula da vacina em pó da invenção e a distribuição do tamanho das gotículas (ao nível dos bicos) do nebulizado em comparação com a vacina líquida foram determinadas por difracção laser. Os resultados estão apresentados na Figura 2, em que, a curva (1) relaciona-se com a vacina em pó seco BSA-PVP-trealose fino da presente invenção e a curva (2) relaciona-se com o comparativo aerossol líquido fino. A polidispersão do tamanho de partícula da composição de vacinação em pó seco da presente invenção foi de 2,0 e o seu tamanho médio de partícula foi de 7 μιη. O tamanho médio das gotículas de aerossol líquido comparativo foi de 24 μιη.

Foram nebulizados, 1 g da vacina em pó e 5 mL da vacina líquida diluída em locais isolados com 1,3 m3 (28°C e 40%HR) e imediatamente depois da nebulização, foram recolhidas amostras de ar em filtros de gelatina para 32 ΡΕ1993605 avaliar a concentração vírica no ar (incubação em ovos embrionados com 10 dias, posteriormente doseamento por hemaglutinação).

Os resultados estão apresentados na Figura 3, em que o termo "Dose nebulizada de vírus" representa a dose teórica de vírus que deve estar presente no ar, se nenhum vírus desaparece-se do ar por sedimentação ou por inactivação durante o processo de nebulização e, em que, a coluna (1) refere-se à vacina de pó seco trealose-PVP-BSA fino e a coluna (2) refere-se à vacina líquida por nebulização fina de comparação. Estes resultados demonstram que o vírus de concentrações elevadas no ar foram obtidos com a vacina em pó imediatamente após a nebulização e que a concentração foi apenas ligeiramente inferior em relação à concentração teórica nebulizada (redução de 106'5 para 106'1) . No entanto, ocorreu uma grande redução na concentração do vírus após a nebulização fina da vacina líquida (de 107'4 para menos do que 103'4) , atribuído à evaporação das gotículas da vacina, nas condições climáticas anteriormente mencionadas. EXEMPLO 3 - A imunização de galinhas com uma composição para vacinação em pó contendo um tamanho médio de partícula de 7 μιη. O pó de vacinação fino e seco produzido e caracterizado no exemplo 2 foi administrado a frangos Broiler com 4 semanas de idade isentos de agentes patogé- 33 ΡΕ1993605 nicos específicos (ou seja, sem anticorpos DNC), os quais foram colocados nos locais isolados com um volume de 1,3 m3. Um grupo recebeu a vacina em pó fino e seco e um grupo não vacinado foi usado como branco de controlo. Ás duas e quatro semanas após a vacinação, foram recolhidas amostras de sangue e avaliada para a detecção de anticorpos contra o vírus da DNC por ensaio de inibição da hemaglutinação (IH). Os resultados estão apresentados na Figura 4, em que, a coluna (1) refere-se ao pó BSA-PVP-trealose fino. A composição de pó seco da invenção proporciona uma resposta imunitária suficiente às 2 semanas após a vacinação, com títulos de IH que são superiores aos títulos de IH obtidos habitualmente de 24 a 26 após uma única aplicação de uma vacina lentogénica da DNC. A análise estatística por método ANOVA através de determinações repetidas, demonstrou um aumento significativo do título desde as 2 até às 4 semanas após a vacinação. EXEMPLO 4 - A imunização de galinhas com uma composição para vacinação em pó grosseiro seco

Um pó de vacinação seco e grosseiro com um teor de água de 3,3% em peso e com um tamanho de partícula apropriado para a vacinação primária (isto é, para a deposição nas vias aéreas superiores), foi preparado a partir da mesma solução aquosa de alimentação como no exemplo 2, mas utilizando um secador por pulverização com um bico de atomização piezoeléctrico de 30 μιη (temperatura 34 ΡΕ1993605 de entrada de 90°C, temperatura de saída de 70°C, fluxo de alimentação de 30 mL/minuto, um fluxo de gás de secagem de 25 kg/hora, frequência de geração de gotículas de 50kHz). A distribuição do tamanho de partícula foi

avaliada pelo mesmo método e equipamento utilizado no exemplo 2 (difracção a laser) e os resultados estão apre- sentados na Figura 2, em que, a curva (3) refere-se à vacina em pó BSA- -PVP-trealose grosseiro e seco. A polidispersao do tamanho de partícula foi de 1,2 e o tamanho médio das partícula foi de 29 μιη. A vacina foi administrada a frangos Boiler com 4 semanas de idade, isentos de agentes patogénicos específicos (isto é, isentos de anticorpos DNC), os quais foram colocados em locais isolados, com um volume de 1,3 m3. Um grupo recebeu a vacina em pó grosseiro e seco e um grupo não vacinado foi utilizado como branco de controlo.

Foram recolhidas amostras de sangue, às duas e quatro semanas após a vacinação e foram avaliadas para a detecção de anticorpos contra o vírus da DNC através do ensaio de inibição da hemaglutinação (IH). Os resultados estão apresentados na Figura 4, em que a coluna (3) refere-se a pó de BSA-PVP-trealose grosseiro. A composição em pó seco da invenção proporciona uma resposta imunológica suficiente às 2 semanas após a vacinação, com títulos de IH que se encontram dentro da gama de títulos de IH obtidos regularmente de 24 a 26 após uma única aplicação de uma 35 ΡΕ1993605 vacina lentogénica contra a DNC. A análise estatística pelo método ANOVA através de determinações repetidas, demonstrou um aumento significativo do título desde as 2 até às 4 semanas após a vacinação. A menor resposta significativamente imunológica em comparação com o pó BSA-PVP-trealose fino do exemplo 3 refere-se aos diferentes locais de deposição da vacina (ou seja, nas vias aéreas superiores com o pó grosseiro, nas vias aéreas inferiores com o pó fino).

Lisboa, 10 de Setembro de 2012

Claims (15)

1. ΡΕ1993605 1 REIVINDICAÇÕES 1. Composição de pó seco para a vacinação de aves de capoeira por inalação compreendendo uma quantidade eficaz de um agente de vacina para aves de capoeira seleccionado a partir do grupo consistindo em virus, bactérias, fungos, parasitas e suas partes, e uma quantidade de veículos para suporte do referido agente de vacina para aves de capoeira, os referidos veículos consistem essencialmente por uma associação de um açúcar redutor ou não redutor e um polímero biocompatível, a referida composição de pó seco encontrando-se na forma de partículas com um tamanho de partícula médio desde 2 até 30 μιη e uma polidispersão de tamanho de partícula desde 1,1 até 4,0 e, em que, a proporção em peso do referido polímero biocompatível para o referido açúcar redutor ou não redutor, na referida associação de veículos, é desde 1/1 até 1/8.
2. 2. Composição de pó seco para a vacinação de aves de capoeira de acordo com a reivindicação 1, em que o vírus é seleccionado a partir do grupo constituído por Paramyxoviridae, Vírus da Doença de Newcastle, Pneumo-virose, Orthomyxoviridae, Vírus da gripe, Coronaviridae, Vírus da Bronquite Infecciosa, Coronavirus do Perú, Torovirus do Perú, Picornaviridae, vírus da Encefalomielite Aviária, vírus da Hepatite no Pato, vírus da hepatite no Perú, Reoviridae, Rotavírus, Birnaviridae, vírus da Bursite 2 ΡΕ1993605 Infecciosa ou doença de Gumboro, Retroviridae, vírus do Sarcoma/Leucose Aviária, Astroviridae, Parvoviridae, Parvo-vírus do Ganso, Adenoviridae, Herpesviridae, vírus da laringotraqueíte infecciosa, vírus da Doença de Marek, Pox viridae, Hepadnaviridae, vírus da Hepatite no Pato, vírus da hepatite no Perú, Circoviridae, Papovaviridae, Polioma-vírus Hemorrágico do Ganso, Caliciviridae, Togaviridae, Arteriviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Rhabdoviridae, Filoviridae, Arenaviridae,
3. 3. Composição de pó seco para a vacinação de aves de capoeira de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que, o referido pó seco está na forma de partículas com um tamanho de partícula médio desde 10 até 3 0 μιη.
4. 4. Composição de pó seco para a vacinação de aves de capoeira de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que, o referido pó seco está na forma de partículas com um tamanho de partícula médio desde 3 até 9 μιη.
5. 5. Composição de pó seco para a vacinação de aves de capoeira de acordo com quaisquer das reivindicações de 1 até 4, em que, o referido açúcar redutor é selec-cionado a partir do grupo constituído por glucose, frutose, manose, galactose, sorbose, xilose ribose, lactose, maltose, celobiose, e suas misturas. 3 ΡΕ1993605
6. 6. Composição de pó seco para a vacinação de aves de capoeira de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 até 5, em que, o referido açúcar não redutor é seleccionado a partir do qrupo constituído por trealose e sacarose.
7. 7. Composição de pó seco para a vacinação de aves de capoeira de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 até 6, em que, o referido polímero biocompatível é seleccionado a partir do qrupo constituído por polivinilpirrolidona, acetato de polivinilo, poliés-teres alifáticos, poli(lactido), poli(glicólido), poli-lactido-co-glicólido, policaprolactona, poli(lactido-co-caprolactona) , ácido poliacrílico, carragenina, quitosano, derivados da celulose, dextrano, dextrano quimicamente modificado, inulina, maltodextrina, polietilenoglicol, óxido de polietileno, polimetacrilatos, álcool polivinílico e amido.
8. 8. Método para a produção de uma composição para vacinação em pó seco de acordo com a reivindicação 1, o referido método compreende a secagem por pulverização de uma fase líquida compreendendo uma mistura de um agente de vacina seleccionado a partir do grupo constituído por vírus, bactérias, fungos, parasitas e suas partes, um veículo líquido e uma quantidade de veículos sólidos para suporte, consistindo essencialmente numa associação de um açúcar redutor ou não redutor e um polímero biocompatível para proporcionar a referida composição de vacinação em pó 4 ΡΕ1993605 seco na forma de partículas com um tamanho de partícula médio desde 2 até 30 μιη.
9. 9. Método de acordo com a reivindicação 8, em que o vírus é seleccionado a partir do grupo constituído por Paramyxoviridae, Vírus da Doença de Newcastle, Pneumovirose, Orthomyxoviridae, Vírus da gripe, Corona- viridae, Vírus da Bronquite Infecciosa, Coronavirus do Perú, Torovirus do Perú, Picornaviridae, vírus da Ence- falomielite Aviária, vírus da Hepatite no Pato, vírus da hepatite no Perú, Reoviridae, Rotavírus, Birnaviridae, vírus da Bursite Infecciosa, Retroviridae, vírus do Sarcoma/Leucose Aviária, Astroviridae, Parvoviridae, Par-vovírus do Ganso, Adenoviridae, Herpesviridae, vírus da laringotraqueíte infecciosa, vírus da Doença de Marek, Pox viridae, Hepadnaviridae, vírus da Hepatite no Pato, vírus da hepatite no Perú, Circoviridae, Papovaviridae, Poli-omavírus Hemorrágico do Ganso, Caliciviridae, Togaviridae, Arteriviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Rhabdoviridae, Filoviridae, Arenaviridae,
10. 10. Método de acordo com a reivindicação 8 ou reivindicação 9, em que a secagem por pulverização é realizada a uma temperatura variando no intervalo desde 160°C até 190°C.
11. 11. Sistema para a realização de vacinação em aves de capoeira por administração por inalação compreendendo : 5 ΡΕ1993605 - câmara contendo a composição para vacinação em pó seco de acordo com a reivindicação 1, e - meios para a nebulização da composição de vacinação em pó seco sobre as referidas aves de capoeira.
12. 12. Sistema para a realização de vacinação em aves de capoeira de acordo com a reivindicação 11, em que, o virus é seleccionado a partir do grupo constituido por Paramyxoviridae, Virus da Doença de Newcastle, Pneumo-virose, Orthomyxoviridae, Virus da gripe, Coronaviridae, Virus da Bronquite Infecciosa, Coronavirus do Perú, Torovirus do Perú, Picornaviridae, virus da Encefalomielite Aviária, virus da Hepatite no Pato, virus da hepatite no Perú, Reoviridae, Rotavírus, Birnaviridae, virus da Bursite Infecciosa, Retroviridae, virus do Sarcoma/Leucose Aviária, Astroviridae, Parvoviridae, Parvovírus do Ganso, Adeno-viridae, Herpesviridae, virus da laringotraqueíte infecciosa, virus da Doença de Marek, Pox viridae, Hepadna-viridae, virus da Hepatite no Pato, virus da hepatite no Perú, Circoviridae, Papovaviridae, Poliomavirus Hemorrágico do Ganso, Caliciviridae, Togaviridae, Arteriviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Rhabdoviridae, Filoviridae, Arenaviridae.
13. 13. Sistema para a realização da vacinação em aves de capoeira de acordo a reivindicação 11 ou 12, em que o conteúdo em água da referida composição de pó seco não está acima de 4% em peso. 6 ΡΕ1993605
14. 14. Sistema para a realização de vacinação em aves de capoeira de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 11 a 13, em que o açúcar não redutor da composição de vacinação em pó seco contida na referida câmara é seleccionado a partir do grupo consistindo em trealose e sacarose.
15. 15. Sistema para a realização de vacinação em aves de capoeira de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 14, em que, o polímero biocompatível da composição de vacinação em pó contido na referida câmara é seleccionado a partir do grupo consistindo em polivinil-pirrolidona, acetato de polivinilo, poliésteres alifáticos, poli(lactido), poli(glicólido), polilactido-co-glicólido), policaprolactona, poli(lactido-co-caprolactona) , ácido po-liacrílico, carragenina, quitosano, derivados da celulose, dextrano, dextrano quimicamente modificado, inulina, mal-todextrina, polietilenoglicol, óxido de polietileno, poli-metacrilatos, álcool polivinílico e amido. Lisboa, 10 de Setembro de 2012