CN113599513A - 一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法及接种方法 - Google Patents

一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法及接种方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法，包括如下步骤：一、载体准备：(1)、研制病毒/乳酸杆菌的免疫复合体：二、物理吸附：(2)、将新型冠状病毒灭活株与乳酸杆菌分别洗涤3遍，然后收集乳酸杆菌，镜下看形态，用比浊法计数，配制成105‑106个菌/mL，备用；(3)、混合，20‑25℃下震荡48h，摇床160‑180r/min，形成复合体；三、获取新型冠状病毒疫苗：(4)、在电镜下观察到新型冠状病毒附着在乳酸杆菌表面时即形成新型冠状病毒乳酸杆菌的复合体，即免疫复合体。本发明接种更容易，便于大群体进行免疫，且成本低廉，通过喷射或呼吸的方式即可实现疫苗成功接种。

Description

一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法及接 种方法
技术领域
本发明属于疫苗技术领域，尤其涉及一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法及接种方法。
背景技术
世界人类目前受到新型冠状病毒的侵扰，每天都有上千万人在生死线上挣扎。新冠病毒像瘟神一样到处飘扰，损害者人类的呼吸、脏器，使人们防不胜防，谈其色变的程度，稍有不慎便会被侵扰，其程度一夜则几十、甚几百、几千人会被感染，住进医院，抢救死亡，厄运会悄悄的来到身边。人们在呻吟、在绝望，在默默的承受着痛苦。世界医务工作者带领人们想尽一切办法对其进行抵抗，科学家更是彻夜不眠的绞尽脑筋，研究新冠病毒的特性，以及如何消灭它。采取各种措施戴口罩、隔离、勤洗手……等等，挽救着每一条生命。
目前关于新型冠状病毒疫苗的制备与接种，国外以美国为例，应用机体免疫原理而制备疫苗的方法较为繁琐、复杂。产出后使用结果暂不讨论。国内应用杀死灭活病毒加腺病毒的DNA片段载体结合形成疫苗的方法，是注射用，为使用研究开辟了较为平坦道路，建立了标准，雾化法也是同样。尽管新冠疫苗正在不断涌现，但疫苗的接种注射本身就是一项高度专业的事情，从而使疫苗大面积安全接种仍然面临困境。因此，如何能开辟一条更简便、更高效和更安全的新方法、新途径和新产品体已成当务之急。通过筛选灭活疫苗株，通过喷射与呼吸直接到达人体咽喉的接种方式，以口罩为接种媒介开发专门的咽喉部疫苗，从而使人们通过佩戴口罩即可获得安全有效的免疫。
由于新冠病毒以及新冠病毒的变异株“德尔塔”都是主要通过呼吸道传播的病毒。因此，将新冠病毒疫苗直接喷洒于人的咽喉部，即可产生细胞免疫，产生分泌型IgA、IgG及IgM抗体，
分泌型的抗新冠病毒的抗体,即分泌型免疫球蛋白(IgA)，分泌型IgA是机体粘膜局部抗感染免疫的重要因素。如果有病毒进入胃肠道、胃肠道系膜淋巴组织分泌的IgA均有抗病毒的作用，均可阻止病毒再深入侵入肺部等器官，增强人类对病毒的抵抗能力。所以说，分泌型IgA是机体粘膜局部抗病毒感染免疫的重要因素。
研究表明，新冠病毒主要通过呼吸道传播，如果能开发一款适用于喷射或呼吸接种方式的新型冠状病毒疫苗，使人们通过呼吸、喷射或佩戴专门的口罩一段时间即可实现疫苗接种，无疑是提供了一种即安全又高效的疫苗接种新方法和新产品。本项目通过开发一种可以口腔喷以及与口罩耦合的咽喉部疫苗接种器，使人们通过呼吸吞咽和佩戴口罩即可把疫苗精准地吸入鼻咽喉部，这样疫苗在咽喉部即可刺激机体产生分泌型IgA抗体，可有效抵抗和杀灭病毒，阻止侵入机体深层损坏机体脏器而危及生命。如今，预防接种的疫苗不断涌现，但世个界仍在告急！如何用更简便、更易让人接受、且更易形成规模，而对人类机体少受损伤，能更直接阻止病毒(新冠)进入人体而伤害人类的方法，尤为儿童的防疫方法，成为目前世界医学领域亟待解决的一个问题！
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明所要解决的技术问题是，提供一种具有接种更容易，便于大群体进行免疫，且成本低廉等优势，通过喷射或呼吸的方式即可实现疫苗成功接种的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法及接种方法。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法，包括如下步骤：
一、载体准备：
(1)、研制病毒/乳酸杆菌的免疫复合体：准备新型冠状病毒灭活株、乳酸杆菌，将乳酸杆菌作为载体，新型冠状病毒灭活株按其重量标定，乳酸杆菌数量为105-106个菌/mL，乳酸杆菌经加热灭活处理，灭活温度设置80℃，灭活时间30min，备用；
二、物理吸附：
(2)、将新型冠状病毒灭活株与乳酸杆菌分别洗涤3遍，然后收集乳酸杆菌，镜下看形态，用比浊法计数，配制成105-106个菌/mL，备用；
(3)、然后将配制成的乳酸杆菌与洗涤后的新型冠状病毒灭活株进行混合，在20-25℃环境下震荡48h，摇床160-180r/min，形成新型冠状病毒+乳酸杆菌的复合体；
三、获取新型冠状病毒疫苗：
(4)、在电镜下，观察新型冠状病毒嵌入乳酸杆菌表面的复合体形态，当观察到新型冠状病毒附着在乳酸杆菌表面时即形成新型冠状病毒乳酸杆菌的复合体，即免疫复合体，获得新型冠状病毒疫苗。
上述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法，所述步骤(1)中，新型冠状病毒灭活株为新型冠状病毒标准株经56℃加热，30分钟杀死灭亡获得。
上述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法，所述新型冠状病毒灭活株可以替换为其变异的“德尔塔”病毒灭活株或其他新型冠状病毒变异病毒灭活株。
一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，将权利要求1-3任一项所述的制备获得的新型冠状病毒疫苗通过喷射接种或呼吸接种方式进入接种人体的咽喉部，获得免疫。
上述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，所述喷射接种方式为喷雾器，将新型冠状病毒疫苗喷洒于接种人体的咽喉部。
上述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，所述呼吸接种方式是将新型冠状病毒疫苗涂敷或固定于口罩内，接种人体在呼吸时，通过口腔呼出的水分使口罩潮湿后将口罩上的新型冠状病毒疫苗保护层溶解，裸露出新型冠状病毒疫苗，吸气时把疫苗吸入接种人体的咽喉部。
上述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，所述呼吸接种方式包括如下步骤：
(1)、选择口罩，在口罩上设置可与所述口罩可拆卸组合的呼吸单向导通装置；
(2)、将制备完成的病毒疫苗置于呼吸单项导通装置内，并安装到口罩上；
(3)、佩戴前，将呼吸单项导通装置的盖体打开，正常佩戴，通过呼吸将免疫复合体送入鼻咽喉部，完成疫苗接种。
上述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，所述口罩包括由口罩外层、口罩内层及熔喷层组成的口罩本体，其特征是：所述口罩本体上设置有一用于存放病毒疫苗的呼吸单向导通装置，所述呼吸单向导通装置包括一具有盖体的盒体，在盒体上设置有一防止病毒疫苗呼出口罩本体外的单向导通膜。
本发明适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法及接种方法的优点是：利用灭活新冠病毒(标准型)核糖核酸的抗原性与孔酸菌进行灭活处理(获取形态典型、染色性好的乳酸菌)作为载体用物理吸附法将病毒附着于载体上(电镜证实)形具有免疫原性的复合体。使之即保留新冠病毒的抗原决定簇，有具有免疫原性，最终形成一种新型疫苗体。然后喷射或吸入于人的咽喉部、使其获得免疫而预防疾病的发生，达到预防治疗目的。本研究的核心技术是将灭活病毒附载到乳酸杆菌表面，形成一种全新免疫复合体，通过全面的安全评价研究后，再将其制备成适合咽喉部接种的疫苗，同时对现有口罩进行改型设计，使疫苗接种器与口罩实现稳定有效结合，最后再对其进行安全评价，确认其安全有效后，即可作为疫苗投入推广接种。本发明无疑为有效阻击疫情，开辟了一条全新的免疫接种途径。研发新型的新冠病毒免疫方法及其产品将会更简便、更易形成规模，更直接阻止新冠病毒进入人体，给人类的健康带来福音，同时创造巨大的社会经济效益。
附图说明
图1为本发明疫苗制备、接种的工艺流程图；
图2为口罩的结构示意图；
具体实施方式
下面结合附图及具体实施例对本发明做进一步详细说明；
如图1所示，一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法，包括如下步骤：
一、载体准备：
(1)、研制病毒/乳酸杆菌的免疫复合体：准备新型冠状病毒灭活株、乳酸杆菌，将乳酸杆菌作为载体，新型冠状病毒灭活株按其重量标定，乳酸杆菌数量为105-106个菌/mL，乳酸杆菌经加热灭活处理，灭活温度设置80℃，灭活时间30min，备用；新型冠状病毒灭活株为新型冠状病毒标准株经56℃加热，30分钟杀死灭亡获得。
二、物理吸附：
(2)、将新型冠状病毒灭活株与乳酸杆菌分别洗涤3遍，然后收集乳酸杆菌，镜下看形态，用比浊法计数，配制成105-106个菌/mL，备用；
(3)、然后将配制成的乳酸杆菌与洗涤后的新型冠状病毒灭活株进行混合，在20-25℃环境下震荡48h，摇床160-180r/min，形成新型冠状病毒+乳酸杆菌的复合体；
三、获取新型冠状病毒疫苗：
(4)、在电镜下，观察新型冠状病毒嵌入乳酸杆菌表面的复合体形态，当观察到新型冠状病毒附着在乳酸杆菌表面时即形成新型冠状病毒乳酸杆菌的复合体，即免疫复合体，获得新型冠状病毒疫苗。
四、动物安全实验：
(4)、选用纯系昆明株小鼠，进行LD50试验，进行病理实验，通过HE染色试验观察局部组织形态，通过ABC试验考察病毒颗粒存在率；进行TCD50试验，在扫描电子显微镜下观察细胞变化；进行体内动物试验：a涂于豚鼠鼻咽外部，b喷射于豚鼠的咽喉部，观察局部变化和全身变，同时进行毒理学试验，a染色体畸变试验，拍照记录结果，b染色体姊妹染色体互换实验，拍照记录结果，c微核实验，拍照记录结果；进而开展2-3例大动物(猴)试验；最后进入临床阶段，召集志愿者进行I期和II期临床试验，III期临床试验可到国外去完成，对各实验结果进行统计学分析，综合统计大数据；分析各种不同环境中疫苗的效价情况，选择最佳适宜环境。当然，疫苗的安全实验与临床试验均根据国家关于疫苗生产规定进行，本申请并不局限于所记载的上述动物安全实验过程。
作为优选方案，本发明在步骤(1)中，新型冠状病毒灭活株可以替换为其变异的“德尔塔”病毒灭活株或其他新型冠状病毒变异病毒灭活株。
本发明的制备方法及原理：把已经杀死灭亡的新冠病毒标准株(灭活株)与乳酸杆菌(有益保加利亚株灭活处理后的乳酸杆菌)作为载体，用物理吸附的方法进行相接合，形成复合体体(具有免疫原性，保留新冠病毒的抗原决定簇)形成疫苗。本发明制备获得的新型冠状病毒疫苗可以通过喷射接种或呼吸接种方式进入接种人体的咽喉部，获得免疫。
本发明新型冠状病毒疫苗的接种应用途径分为两种:
1.喷射于人类的咽喉部(直接法)：
原理：新冠物毒的致病途径是主要通过呼吸道而传播的。新冠疫苗喷洒于人体的咽喉部，使其局部受到新冠病毒疫苗的刺激，除细包免疫外，机体在咽喉部产生分泌型的抗新冠病毒的特异性抗体IgA；分泌型IgA是机体粘膜局部抗感染免疫的重要因素。即使有进入胃肠道，胃肠道膜淋巴组织能分泌大量的分泌性IgA，均有杀病毒的作用。所以说除细胞免疫外，分泌性IgA是抗体粘膜局部抗病毒感染免疫的重要因素。阻止病毒再次深入侵犯肺部等器官，增强人类对病毒的的抵抗能力，这是我们该法的目的。喷射接种方式为喷雾器，将新型冠状病毒疫苗喷洒于接种人体的咽喉部。本发明的喷雾器可以选择常规的医用喷雾瓶，通过在常规的医用喷雾瓶的出雾口处，安装可以拆卸及更换的出液杆，出液杆能够伸入接种人体的口腔内，将新型冠状病毒疫苗直接喷射到咽喉部。实现一人一杆，安全卫生，而且不会造成新型冠状病毒疫苗泄露于空气中。
2、把新型冠状病毒疫苗置于口罩上：
原理：呼吸接种方式是将新型冠状病毒疫苗涂敷或固定于口罩内，接种人体在呼吸时，通过口腔呼出的水分使口罩潮湿后将口罩上的新型冠状病毒疫苗保护层溶解，裸露出新型冠状病毒疫苗，吸气时把疫苗吸入接种人体的咽喉部。这样疫苗在咽喉部刺激机体产生分泌型IgA和细胞免疫细胞抵抗病毒，并杀灭病毒，阻止侵入机体深层损坏机体脏器而危及生命。
呼吸接种方式需要借助口罩实现，其接种方法及过程包括如下步骤：
(1)、选择口罩，在口罩上设置可与所述口罩可拆卸组合的呼吸单向导通装置；
(2)、将制备完成的病毒疫苗置于呼吸单项导通装置内，并安装到口罩上；
(3)、佩戴前，将呼吸单项导通装置的盖体打开，正常佩戴，通过呼吸将免疫复合体送入鼻咽喉部，完成疫苗接种。
如图2所示，用于本发明咽喉部接种方法的口罩，包括由口罩外层、口罩内层及熔喷层组成的口罩本体1，口罩本体1上设置有一用于存放病毒疫苗2的呼吸单向导通装置3，呼吸单向导通装置3包括一具有盖体4的盒体5，在盒体5上设置有一防止病毒疫苗2呼出口罩本体1外的单向导通膜6。病毒疫苗2的接种剂量可根据实际接种效果进行调整。
本发明将疫苗采用喷射法或呼吸法，因为新冠病毒是呼吸道病毒，利用喷射法进入人体口腔，当病毒进入人体的通道时，人类在咽喉部的免极系绕就能识别杀伤、杀死病毒，这时无论细胞免疫、体液免疫均被调动其活性发挥其作用，就算有漏网的病毒也会在肠道的强大的免疫系统也会进一步杀灭亡。与传统“创伤式”的注射接种方式相比，这种简易的“无创接种”方法无论对成年人、老年人、及儿童都能适用并易得到人类的推广应用。
当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例，本技术领域的普通技术人员，在本发明的实质范围内，作出的变化、改型、添加或替换，都应属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
一、载体准备：
(1)、研制病毒/乳酸杆菌的免疫复合体：准备新型冠状病毒灭活株、乳酸杆菌，将乳酸杆菌作为载体，新型冠状病毒灭活株按其重量标定，乳酸杆菌数量为105-106个菌/mL，乳酸杆菌经加热灭活处理，灭活温度设置80℃，灭活时间30min，备用；
二、物理吸附：
(2)、将新型冠状病毒灭活株与乳酸杆菌分别洗涤3遍，然后收集乳酸杆菌，镜下看形态，用比浊法计数，配制成105-106个菌/mL，备用；
(3)、然后将配制成的乳酸杆菌与洗涤后的新型冠状病毒灭活株进行混合，在20-25℃环境下震荡48h，摇床160-180r/min，形成新型冠状病毒+乳酸杆菌的复合体；
三、获取新型冠状病毒疫苗：
(4)、在电镜下，观察新型冠状病毒嵌入乳酸杆菌表面的复合体形态，当观察到新型冠状病毒附着在乳酸杆菌表面时即形成新型冠状病毒乳酸杆菌的复合体，即免疫复合体，获得新型冠状病毒疫苗。
2.根据权利要求1所述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法，其特征是：所述步骤(1)中，新型冠状病毒灭活株为新型冠状病毒标准株经56℃加热，30分钟杀死灭亡获得。
3.根据权利要求1所述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的制备方法，其特征是：所述新型冠状病毒灭活株可以替换为其变异的“德尔塔”病毒灭活株或其他新型冠状病毒变异病毒灭活株。
4.一种适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，其特征在于：将权利要求1-3任一项所述的制备获得的新型冠状病毒疫苗通过喷射接种或呼吸接种方式进入接种人体的咽喉部，获得免疫。
5.根据权利要求4所述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，其特征是：所述喷射接种方式为喷雾器，将新型冠状病毒疫苗喷洒于接种人体的咽喉部。
6.根据权利要求4所述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，其特征是：所述呼吸接种方式是将新型冠状病毒疫苗涂敷或固定于口罩内，接种人体在呼吸时，通过口腔呼出的水分使口罩潮湿后将口罩上的新型冠状病毒疫苗保护层溶解，裸露出新型冠状病毒疫苗，吸气时把疫苗吸入接种人体的咽喉部。
7.根据权利要求6所述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，其特征是，所述呼吸接种方式包括如下步骤：
(1)、选择口罩，在口罩上设置可与所述口罩可拆卸组合的呼吸单向导通装置；
(2)、将制备完成的病毒疫苗置于呼吸单项导通装置内，并安装到口罩上；
(3)、佩戴前，将呼吸单项导通装置的盖体打开，正常佩戴，通过呼吸将免疫复合体送入鼻咽喉部，完成疫苗接种。
8.根据权利要求7所述的适用于咽喉部接种的新型冠状病毒疫苗的接种方法，其特征是，所述口罩包括由口罩外层、口罩内层及熔喷层组成的口罩本体，其特征是：所述口罩本体上设置有一用于存放病毒疫苗的呼吸单向导通装置，所述呼吸单向导通装置包括一具有盖体的盒体，在盒体上设置有一防止病毒疫苗呼出口罩本体外的单向导通膜。
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