PT1910288E - Composto de 3-aminocarbazole, composições farmacêuticas contendo o mesmo e métodos para a sua preparação - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "COMPOSTO DE 3-AMINOCARBAZOLE, COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS CONTENDO O MESMO E MÉTODOS PARA A SUA PREPARAÇÃO"

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção relaciona-se com um composto 3-aminocarbazole, com uma composição farmacêutica contendo o mesmo e com um método para a sua preparação.

Mais particularmente, a presente invenção relaciona-se com um composto 3-aminocarbazole que é útil para tratar ou prevenir perturbações associadas à produção de prostaglandina E2 (PGE2), por exemplo processos inflamatórios, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose.

TÉCNICA ANTECEDENTE 0 valor das prostaglandinas E2 (PGE2) advém do papel que desempenham como reguladores biológicos, juntamente com outros prostanóides produzidos metabolicamente a partir do ácido araquidónico, e como mediadores de inflamação.

Os prostanóides são uma classe de compostos incluindo as prostaglandinas, os tromboxanos e as prostaciclinas. Os prostanóides são mediadores lipidicos que actuam como hormonas locais nas células adjacentes ao sitio da sua libertação. Os prostanóides são produzidos principalmente a partir do ácido araquidónico através de oxidação enzimática activada pela ciclooxigenase. As ciclooxigenases (prostaglandina G/H sintases) catalisam a formação sequencial de PGG2 e PGH2 a partir do ácido araquidónico. A PGH2 é em seguida convertida através de enzimas especificas em vários prostanóides. As prostaglandinas D2 (PGD2), 2 prostaglandinas E2 (PGE2), prostaglandinas F2a (PGF2c() , prostaglandinas I2 (PGI2) e tromboxanos A2 (TXA2) são formados deste modo.

Com a ejecção de fluido seminal, os prostanóides não são acumulados. Após vários estímulos (inflamatório, imunológico, hormonal, por luz ultravioleta, agentes tumorais e também agitação mecânica), são sintetizados e libertados no espaço extracelular, a partir de onde passam para o plasma, a urina e outros fluidos biológicos.

Os prostanóides desempenham um papel importante nos mecanismos de defesa de funcionamento de órgãos e na integridade do corpo. Isto é demonstrado pela função citoprotectora no tracto gastrointestinal, através da regulação da função renal e da circulação capilar, pela regulação da agregação das plaquetas e da coagulação do sangue, do envolvimento na diferenciação de células imunes e na reparação de feridas, metabolismo ósseo e ovulação.

Em particular, deverá ser sublinhada a acção vasoprotectora dos prostanóides PGI2, que são essenciais para manter o tónus vascular e para prevenir o trombo-embolismo e a aterosclerose ao nível endotelial, e a acção anti-inflamatória e anti- proliferativa dos prostanóides PGD2, cujo metabolito, 15d-PGJ2, é capaz de exercer efeitos anti-inflamatórios através da activação dos receptores nucleares PPARy (receptor-gama activado por peroxisoma proliferador) (Inoue et al., 2000).

Os prostanóides são assim reguladores biológicos, mas também mediadores importantes de inflamação e de outras patologias. 3

Em particular, os prostanóides PGE2 são abundantes nos sítios de inflamação e são responsáveis por vários aspectos patológicos de inflamação aguda e crónica, por exemplo o edema, a formação de eritemas, a dor inflamatória, a inflamação articular e a febre. De facto, os prostanóides PGE2 representam agentes pró-inflamatórios e algogénicos potentes. Os anticorpos anti-PGE2 possuem actividade anti-inflamatória e os animais com deficiência de receptores de PGE2 exibem uma resposta reduzida aos estímulos inflamatórios (Portanova et al., 1996, Ueno et al.r 2001) e uma resposta febril ausente aos estímulos pirogénicos (Ushikubi et al., 1998).

Os fármacos anti-inflamatórios não esteróides (NSAIDs) e os fármacos COX-2 selectivos presentemente em utilização reduzem os sintomas relacionados com a inflamação através da inibição não selectiva da produção de eicosanóides (PGE2, PGD2, PGF2c PGI2 e TXA2) tendo em conta a sua acção inibidora nas ciclooxigenases 1 e 2 (FitzGerald and Patrono, 2001) .

Em particular, os fármacos COX-2 selectivos comercializados presentemente reduziram a toxicidade gastrointestinal quando comparados com fármacos anti-inflamatórios não esteróides (NSAIDs) convencionais. Contudo, os referidos fármacos COX-2 selectivos reduzem a produção de prostaciclina vascular (PGI2, que é produzida predominantemente a partir de COX-2), alterando o equilíbrio normal entre os eicosanóides pró-trombóticos e anti-trombóticos em favor dos pró-trombóticos (TXA2, que é produzido predominantemente a partir de COX-1), e dá origem a um risco aumentado de eventos trombótico-cardiovasculares (S. Malhotra, MD, DM; N. Shafiq, MD; P. Pandhi, MD Medscape General Medicine 6(1), 2004; D. Mukherjee and E.J. Topol 4

Cardiovascular risk and COX-2 inhibitors, Arthritis Res. Ther. 2003, 5:8-11-2002).

Foram estudados vários compostos de 3-aminocarbazole relativamente à sua capacidade de se ligar selectivamente ao receptor de Y5 humano e de modular a sua actividade. Esta capacidade torna-os úteis no tratamento de patologias metabólicas e do apetite, por exemplo obesidade, bulimia nervosa, anorexia nervosa, perturbações do sono, dependência da morfina e ataques epilépticos (WO 01/07409 Al, WO 02/051806, WO 02/096902 e US 6 399 631). A EP 310 179 revela ésteres tetrahidrocarbazole que actuam como antagonistas de prostaglandina e tromboxano e são úteis para tratar asma, diarreia, hipertensão, angina, agregação de plaquetas, espasmo cerebral, parto prematuro, aborto espontâneo e dismenorreia e nefrotoxicidade causada pela ciclosporina A e como agentes citoprotectores. A EP 310 179 não revela os compostos da presente invenção.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Surpreendentemente, foi agora descoberto, que certos compostos de 3-aminocarbazole são capazes de inibir selectivamente a produção de prostaglandina E2 (PGE2) .

Estes compostos são capazes de reduzir a produção de PGE2 e são assim activos em todos os estados patológicos em que a PGE2 actua como um mediador (por exemplo: processos inflamatórios, dor, febre, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose).

Exemplos típicos de tais processos inflamatórios são edema, eritema, inflamação articular, artrite reumatóide e artrose. 5

Exemplos típicos de tais tumores são carcinoma colo-rectal e pulmonar e adenocarcinoma.

Os compostos da presente invenção inibem selectivamente a síntese de PGE2. Esta selectividade possui a vantagem de inibir um mediador potente de inflamação, dor e febre, enquanto deixa inalterada a produção de outros prostanóides produzidos simultaneamente na cascada de ácido araquidónico, tais como PGF2c(, TXA2, PGI2 e PGD2. Todos os mecanismos de defesa do funcionamento de órgãos e da integridade do corpo que são típicos da actividade dos outros prostanóides permanecem assim invariáveis.

Semelhantemente aos fármacos anti-inflamatórios não esteróides convencionais, os compostos da presente invenção possuem propriedades anti-inflamatórias, anti-piréticas e analgésicas, e são assim activas em patologias tais como inflamação, dor, febre, artrite reumatóide e artrose. Em adição, desde que é conhecido na literatura o envolvimento de PGE2 em tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose, os compostos da presente invenção possuem também aplicações na prevenção e no tratamento destas patologias.

Vantajosamente, estes compostos exibem contudo poucos efeitos secundários quando comparados com NSAIDs e fármacos COX-2 selectivos, que, através da inibição de ciclooxigenases, não discriminam entre os prostanóides.

Em particular, estes derivados são úteis em ambos o tratamento e a prevenção de processos inflamatórios.

Em particular, os compostos da presente invenção exibem reduzida toxicidade gastrointestinal, renal e vascular.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO 6 6 Num primeiro um composto seleccionado da Tabela 1 com ser stos aspecto, a presente invenção relaciona-se de 3-aminocarbazole caracterizado por a partir do grupo compreendendo os compo abaixo: TABELA 1 R5 "Ογγ x Rí II 1VVm T ' Corap. N° RI R2 R3 R4 R5 R6 X Y 1 ch3 Cl H H H H H H 2 CH(CH3)2 Cl H H H H H H 3 PhCH2 Cl H H H H H H 4 CH3CH2 cf3 H H H H H H 5 ch3ch2 ch3 H H H ch3 H H 6 ch3ch2 F H H H cf3 H H 7 ch3ch2 cf3 H F H H H H 8 ch3ch2 Br H H H och3 H H 9 ch3ch2 Cl H H Cl och3 H H 10 PhCH2 nh2 H H H H H H 11 CH3CH2 n(ch3)2 H H H H H H 12 CH3(CH2)4 Cl H H H H H H 13 ch3och2ch2 Cl H H H H H H 14 HOOC (CH2) 3 Cl H H H H H H 15 ch3ch2 Cl H H H H ch3 ch3 16 ch3ch2 Cl H H H H ch3 H 17 ch3ch2 Cl H H H H H ch3 18 ch3ch2 Cl H H H H ch3 och3 e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Tabela 1

Como é conhecido daqueles peritos na técnica, os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da serão: 7 - sais de adição de ácido quando o composto é básico, por exemplo o composto 10 ou 11, ou - sais de adição de base quando o composto é acidico, por exemplo o composto 14.

Exemplos de ácidos farmaceuticamente aceitáveis adequados são ácidos minerais tais como HC1, HBr, H2S04 e H3P04, e ácidos orgânicos tais como ácido oxálico, ácido tartárico, ácido metanossulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido maleico, ácido succinico, ácido láctico e ácido cítrico.

Exemplos de bases farmaceuticamente aceitáveis adequadas são metais alcalinos e metais alcalino-terrosos tais como Na+, K+, Mg++ e Ca++, e bases orgânicas tais como trometamina, colina e lisina.

Num segundo aspecto, a presente invenção relaciona-se com uma composição farmacêutica caracterizada por esta compreender uma dose terapeuticamente eficaz de um composto de 3-aminocarbazole seleccionado a partir do grupo compreendendo os compostos da Tabela 1 acima ou um seu sal farmaceuticamente aceitável juntamente com pelo menos um veículo inerte farmaceuticamente aceitável.

Preferencialmente, as composições farmacêuticas da presente invenção são preparadas em formas de dosagem adequadas.

Exemplos de formas de dosagem adequadas são comprimidos, cápsulas, comprimidos revestidos, grânulos, e soluções e xaropes para administração oral; cremes, unguentos e emplastros anti-sépticos para administração tópica; supositórios para administração rectal e soluções estéreis para administração por injecção, ou aerossol ou administração oftálmica.

Vantajosamente, estas formas de dosagem são assim formuladas para garantir uma libertação controlada ao longo do tempo de um composto da Tabela 1 acima ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. Especificamente, dependendo do tipo de terapia, o tempo de libertação requerido poderá ser muito curto, normal ou longo.

As formas de dosagem poderão também conter outros componentes convencionais, por exemplo: agentes de conservação, estabilizantes, tensioactivos, tampões, sais para regulação da pressão osmótica, emulsionantes, adoçantes, corantes, aromatizantes e seus semelhantes.

Adicionalmente, quando requerido para terapias particulares, a composição farmacêutica da presente invenção poderá também conter outros componentes farmacologicamente activos cuja administração simultânea é útil. A quantidade de composto da presente invenção na composição farmacêutica poderá variar num intervalo amplo como uma função de factores conhecidos, por exemplo o tipo de doença a ser tratada, a gravidade da doença, o peso corporal do paciente, a forma de dosagem, a via de administração seleccionada, o número de administrações diárias e a eficácia do composto seleccionado. Contudo, a quantidade óptima poderá ser determinada rapidamente e rotineiramente por uma pessoa perita na técnica.

Tipicamente, a quantidade de composto da presente invenção na composição farmacêutica será tal que esta garanta o nivel de administração de entre 0,0001 e 100 mg/kg/dia e mesmo mais preferencialmente entre 0,01 e 10 mg/kg/dia. 9

As formas de dosagem da composição farmacêutica da presente invenção poderão ser preparadas de acordo com técnicas que são bem conhecidas de químicos farmacêuticos, incluindo mistura, granulação, formação de comprimidos, dissolução, esterilização e semelhantes.

Num terceiro aspecto, a presente invenção relaciona-se com o uso de um composto de 3-aminocarbazole seleccionado a partir do grupo consistindo de compostos da Tabela 1 acima ou de um seu sal f armaceuticamente aceitável para uma pessoa em sua necessidade para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de processos inflamatórios, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose em mamíferos.

Preferencialmente, o processo inflamatório é seleccionado a partir do grupo compreendendo edema, eritema, inflamação articular, artrite reumatóide e artrose, e o tumor é seleccionado a partir do grupo compreendendo carcinoma colo-rectal ou pulmonar e adenocarcinoma.

Os 3-aminocarbazoles da Tabela 1 acima poderão ser preparados de acordo com métodos conhecidos, por exemplo por reacção de um ácido, ou de um seu derivado reactivo, com a amina seleccionada (pedido de patente WO 02/096902 Al, WO 02/051806, J. Med. Chem. 2002 vol. 45, pp. 3509-3523). Exemplos típicos de derivados reactivos são halogenetos de acilo, anidridos ou ésteres.

Num quarto aspecto, a presente invenção relaciona-se assim com um método para preparar um 3-aminocarbazole da Tabela 1 acima, caracterizado por compreender os passos seguintes: a) reacção de uma amina de fórmula (II) 10

indicados na

Tabela 1, com um composto de fórmula (III)

em que R2, R3, R4, R5 e R6 têm os significados indicados na Tabela 1, e Z é seleccionado a partir do grupo compreendendo Cl, Br, OH, OR e 0C(0)R, em que R é um alquilo linear ou ramificado contendo de 1 a 6 átomos de carbono, para originar um composto de 3-aminocarbazole de fórmula (I) R5

em que significados indicados na Tabela 1, e Y têm os b) formação opcional de um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (I) assim obtido. 11

Tipicamente, o passo (a) é realizado na presença de um diluente adequado a uma temperatura no intervalo entre 0 e 140 °C, durante um tempo no intervalo entre 0,5 e 24 horas. Preferencialmente, a temperatura reaccional está no intervalo entre 15 e 40 °C. Vantajosamente, o tempo reaccional varia de 2 a 18 horas.

Preferencialmente, o diluente é aprótico, polar ou apoiar. Mesmo mais preferencialmente, este é um diluente polar aprótico. Exemplos de diluentes polares apróticos adequados são a dimetilformamida e o diclorometano.

Na concretização em que Z é Cl ou Br, a reacção é vantajosamente realizada na presença de um aceitador ácido orgânico ou mineral adequado. Exemplos de aceitadores orgânicos adequados são diisopropiletilenodiamina, trietilenoamina, piridina e dimetilaminopiridina. Exemplos de aceitadores minerais adequados são carbonatos de metais alcalinos ou bicarbonatos.

Na concretização em que Z é OH, a reacção é realizada preferencialmente na presença de um agente de acoplamento adequado, por exemplo diciclohexilcarbodiimida (também suportado numa resina de poliestireno) ou carbonildiimidazole.

Os exemplos que se seguem são dados para ilustrar a invenção em grande detalhe sem, contudo, limitá-la.

Exemplo 1

Preparação do Composto 1 (RI = CH3, R2 = Cl, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) 12 a) 9-metil-9ff-carbazole A uma solução de carbazole (5 g; 0,030 mol) em dimetilf ormamida (50 mL) foi adicionado de uma só vez hidreto de sódio (suspensão a 60 % em óleo mineral, 1,15 g; 0,030 mol) e a suspensão obtida foi agitada à temperatura ambiente durante 0,5 horas. Foi seguidamente adicionado iodometano (1,43 mL; 0,030 mol). A suspensão assim obtida foi agitada durante 16 horas e foi seguidamente adicionada H20 cautelosamente até a precipitação estar completa. 0 precipitado foi recolhido por filtração sob vácuo e seco num forno de vácuo.

Foram assim obtidos 5,3 g do produto desejado e foram utilizados sem purificação adicional. ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 3,87 (s, 3 H), 7,20 (t, J = 7,5 Hz, 2 H) , 7, 43 - 7, 49 (m, 2 H) , 7,56 - 7,61 (m, 2 H) , 8,15 (d, J=7,5 Hz, 2 H). b) 9-metil-3-nitro-9H-carbazole 0 produto obtido como descrito no passo a) acima (3,9 g; 0,022 mol) foi dissolvido em ácido acético glacial (70 mL). Foi adicionada seguidamente gota a gota uma mistura contendo ácido nítrico fumante (1,05 mL) em ácido acético glacial (3,11 mL) durante 30 minutos. A solução assim obtida foi agitada durante uns 30 minutos adicionais. A mistura reaccional foi seguidamente colocada em H20 e gelo, agitada durante 15 minutos e filtrada. O resíduo assim obtido (4 g) foi purificado por cromatografia flash, eluindo com uma mistura de hexano/acetato de etilo 85/15. 13

Foi assim obtido o produto desejado (2,2 g). XH RMN (300 MHz, clorofórmio-d) δ ppm 3,92 (s, 3 H), 7,27 -7,51 (m, 3 H) , 7,54 - 7, 63 (m, 1 H) , 8,15 (d, J=7, 9 Hz, 1 H), 8,40 (dd, J= 8,9, 2,2 Hz, 1 H) , 9,01 (d, J= 2,0 Hz, 1 H) . c) 9-metil-9g-carbazole-3-amina O produto obtido como descrito no passo b) acima (1,94 g; 0, 009 mol) foi dissolvido em etanol absoluto (20 mL) . Foi adicionado seguidamente cloreto estanoso dihidratado (8,16 g; 0,043 mol). A mistura assim obtida foi sujeita a refluxo durante 16 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente foi seguidamente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi colocado em H20. O pH foi levado até 7,5 pela adição de solução de bicarbonato de sódio saturado e a mistura foi transferida para uma ampola de decantação. A fase orgânica foi extraída com acetato de etilo (2 x 100 mL). Os extractos orgânicos foram combinados com água saturada com NaCl (2 x 100 mL) . A fase orgânica foi removida e seca sobre Na2S04. 0 solvente foi seguidamente removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo assim obtido (1,5 g) foi utilizado sem purificação adicional. ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-de) : δ ppm 3, 76 (s, 3 H) , 4, 72 (s largo, 2 H), 6,84 (dd, J= 8,8, 2,0 Hz, 1 H), 7, 04 - 7, 11 (m, 1 H), 7,25- - 7,30 (m, 2 H), 7,32 - 7,39 (m, 1 H) , 7, 44 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 7, 93 (dt, J=7, 6, 1,0 Hz, 1 H) . d) 2-cloro-Jf- (9-metil-9H-carbazol-3-il) benzamida O produto obtido como descrito no passo c) acima (1,5 g; 0, 008 mol) foi dissolvido em diclorometano (20 mL) . Foram 14 seguidamente adicionados diisopropiletilenodiamina (1,19 g; 0, 009 mol) e cloreto de 2-clorobenzoílo (1,16 mL; 0,009 mol) à solução. A mistura assim obtida foi agitada durante 3 horas. A mistura reaccional foi transferida para uma ampola de decantação e lavada com uma solução de HC1 1 N (50 mL), com NaOH 1 N (50 mL) e com H20 (50 mL) . A fase orgânica foi removida e seca sobre Na2S04. O solvente foi seguidamente removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo assim obtido (3 g) foi cristalizado a partir de mistura de 1/2 hexano/acetato de etilo.

Foi assim obtida a 2-cloro-lV- (9-metil-9íf-carbazol-3-il)benzamida (1,2 g). p.f.: 206 °C

Análise elementar para C2oHi5ClN20 C H N Encontrado % 71, 81 4, 34 8, 37 Calculado % 71, 75 4, 52 8, 37 (7=6, 9 1 H), ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 3,88 (s, 3 H) , 7,20 (t, Hz, 1 H), 7, 43 - 7, 73 (m, 8 H) , 8,09 (d, J= 7,6 Hz, 8,57 (d, J= 1,7 Hz, 1 H), 10,48 (s largo, 1 H).

Exemplo 2

Preparação do Composto 2 (RI = CH(CH3)2, R2 = Cl, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) a) 9-(1-metiletil)-9fl-carbazole 15

Foi feito reagir carbazole (5 g; 0,03 mol) com brometo de isopropilo (5,61 mL; 0,06 mol) procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo la). 0 produto sólido obtido após filtração (4 g) foi purificado por cromatografia flash, eluindo com uma mistura de hexano/ acetato de etilo 97/3 para originar 3,3 g do produto desejado. XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm, 1,63 (d, J= 7,0 Hz, 6 H) , 5,11 (hepteto, J=7, 0 Hz, 1 H) , 7,18 (t, J= 7,5 Hz, 2 H) , 7, 38 - 7, 45 (m, 2 H) , 7,69 (d, J=8,2 Hz, 2 H) , 8,15 (dt, J=7, 6, 1,0 Hz, 2 H) . b) 9-(1-metiletil)-3-nitro-9g-carbazole O produto obtido como descrito no passo a) acima (3,3 g; 0,016 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo lb). O produto sólido obtido após filtração (3,7 g) foi purificado por cromatografia flash, eluindo com uma mistura hexano/acetato de etilo 95/5 para originar 1,8 g do produto desejado. XH RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm, 1,67 (d, J=7, 0 Hz, 6 H) , 5,23 (hepteto, J= 7,0, Hz, 6 H) , 7,33 (t, J=7, 0 Hz, 1 H) , 7, 53 - 7, 60 (m, 1 H) , 7,85 (d, J=8, 0 Hz, 1 H) , 7,90 (d, J=9,2 Hz, 1 H), 8,31 (dd, J= 9,2, 2,3 Hz, 1 H) , 8,43 (dq, J=8,0, 0,7 Hz, 1 H), 9,18 (d, J=2,3 Hz, 1 H). c) 9-(1-metiletil)-9fl-carbazole-3-amina O produto obtido como descrito no passo b) acima (1,7 g; 0,007 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo lc). 16 0 produto assim obtido (1,3 g) foi utilizado sem purificação adicional. XH RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 1,57 (d, J= 7,0 Hz, 6H) , 4,71 (s largo, 2 H), 4,95 (hepteto, J= 7,0 Hz, 1 H), 6,80 (dd, J= 8,6, 2,2 Hz, 1 H) , 7,04 (t, J= 6,9 Hz, 1 H), 7,25 -7,34 (m, 2 H), 7,38 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 7,53 (d, J= 8,6 Hz, 1 H), 7,92 (dq, J=7,8, 0,7 Hz, 1 H) . d) 2-cloro-W- [9-(1-metiletil)-9ff-carbazol-3-il]benzamida O produto obtido como descrito no passo c) acima (1,2 g; 0,005 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo ld). O produto assim obtido (2,2 g) foi cristalizado duas vezes a partir da mistura hexano/acetato de etilo 1/9.

Foi assim obtido 2-cloro-IV- [9-(1-metiletil)-9H-carbazol-3-il]benzamida (1,1 g). p.f.: 195 °C

Análise elementar para C22H19CIN2O C H N Encontrado % 72, 71 5, 16 7, 88 Calculado % 72, 82 5, 28 7, 72 XH RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 1,63 (d, σ') KD II •d Hz, 6 H) 5, 09 (hepteto, J= 6,9 Hz, 1 H) , 7, 18 (t, J= 7, 4 Hz, 1 H) 7, 38 - 7, 73 (m, 8 H) , 8, 08 (d, J=7,3 Hz, 1 H) , 8, 56 (d J=l,7 Hz, 1 H), 10,47 (s largo, 1 H).

Exemplo 3 17

Preparação do Composto 3 (RI = CH2Ph, R2 = Cl, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) a) 9-(fenilmetil)-9fl-carbazole

Foi feito reagir carbazole (5g; 0,03 mol) com brometo de benzilo (7,11 mL; 0,06 mol) procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo la). O produto sólido obtido após filtração (8 g) lavado com hexano para originar 7,2 g do produto desejado. ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5,66 (s, 2 H) , 7, 13 - 7,47 (m, 9 H), 7,62 (d, J=8,2 Hz, 2 H), 8,18 (d, J=7,6 Hz, 2 H). b) 3-nitro-9-(fenilmetil)-9ff-carbazole O produto obtido como descrito no passo a) acima (6,7 g; 0,026 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo lb). O produto sólido obtido após filtração (7 g) foi purificado por cromatografia flash, eluindo com uma mistura de hexano/acetato de etilo 95/5 para originar 2,5 g do produto desejado. - 7,39 1 H), 1 H), ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5,78 (s, 2H) , 7,15 (m, 6 H), 7, 52 - 7,60 (m, 1 H) , 7,75 (d, J= 8,5 Hz, 7,85 (d, J= 9,1 Hz, 1 H), 8,34 (dd, J=9,l, 2,3 Hz, 8,45 (d, J=1,3 Hz, 1 H), 9,22 (d, J= 2,3 Hz, 1 H) . c) 9-(fenilmetil)-9fl-carbazole-3-amina O produto obtido como descrito no passo b) acima (1 g; 0,003 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo lc). 18 0 produto assim obtido (1 g) foi utilizado sem purificação adicional. XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4,75 (s largo, 2H) , 5,52 (s, 2 H), 6,79 (dd, J= 8,6, 2,2 Hz, 1 H) , 7, 05 - 7, 36 (m, 9H), 7,48 (d, J=8, 5 Hz, 1 H) , 7,95 (d, J=7,3 Hz, 1 H) . d) 2-cloro-N- [9-(fenilmetil)-9H-carbazol-3-il]benzamida O produto obtido como descrito no passo c) acima (0,9 g; 0,003 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo ld). O produto assim obtido (1,5 g) foi cristalizado a partir de acetato de etilo.

Foi assim obtido 2-cloro-iV- [9- (fenilmetil) -9i7-carbazol-3-il)benzamida (550 mg). 2H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5,66 (s, 2 H) , 7,11-7,31 (m, 6 H), 7,39-7,68 (m, 8 H), 8,12 (d, J=7,6 Hz, 1 H) , 8,59 (d, J=l,4 Hz, 1 H), 10,48 (s largo, 1 H).

Exemplo 4

Preparação do Composto 4 (RI = CH3CH2, R2 = CF3, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) a) N- (9-etil-9ff-carbazol-3-il)-2-(trifluorometil)benzamida A uma solução de 3-amino-9-etilcarbazole (4 g; 0,019 mol) em diclorometano (30 mL) foram adicionados trietilamina (2,9 mL; 0,021 mol) e cloreto de 2-(trifluorometil)benzoílo (3,1 mL; 0,021 mol). A mistura assim obtida foi agitada durante 16 horas. 19 A mistura reaccional foi transferida para uma ampola de decantação e lavada com H20 (2 x 50 mL) . A fase orgânica foi separada e seca sobre Na2S04, o solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo assim obtido (4 g) foi cristalizado a partir de etanol.

Foi assim obtida a IV-( 9-Etil-9H-carbazol-3-il)-2-(trifluorometil)benzamida (3,5 g). p.f.: 206 - 207 °C

Análise elementar para C22Hi7F3N20 C H N Encontrado % 68, 87 4, 26 7, 30 Calculado % 69, 01 4, 48 7, 33 3 H), - 7,50 1 H), XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,32 (t, J=7, 1 Hz, 4,44 (q, J=7, 1 Hz, 2 H), 7,16 - 7,23 (m, 1 H) , 7,42 (m, 1 H), 7, 55 - 7, 90 (m, 7 H) , 8,09 (d, J=7, 7 Hz, 8,51 (d, J= 1,2 Hz, 1 H), 10,53 (s largo, 1 H).

Exemplo 5

Preparação do Composto 5 (RI = CH3CH2, R2 = R6 = CH3, R3 = R4 = R5 = X = Y = H) a) Cloreto de 2,6-dimetilbenzoílo A uma mistura de ácido 2,6-dimetilbenzoico (3 g; 0,02 mol) em tolueno (50 mL) foi adicionado cloreto de tionilo (3,6 mL; 0,05 mol). A mistura assim obtida foi sujeita a refluxo durante 2 horas. O solvente e o excesso de cloreto de tionilo foram seguidamente removidos por evaporação sob pressão reduzida. O resíduo assim obtido foi colocado em tolueno (50 mL) três vezes e evaporado sob pressão 20 reduzida. O produto assim obtido (3,6 g) foi utilizado sem purificação adicional. b) N- (9-etil-9fl-carbazol-3-il)-2,6-dimetilbenzamida O produto obtido como descrito no passo a) acima (3,3 g; 0,020 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao que é descrito no Exemplo 4. O produto obtido (2,4 g) foi cristalizado a partir de isopropanol. Foi assim obtido o N-(9-etil-9#-carbazol-3-il)-2,6-dimetilbenzamida (1,4 g).

p.f.: 192-193 °C Análise elementar para C23H22N2O C H N Encontrado % 80, 57 6, 48 8, 16 Calculado % 80,67 6, 48 8,18 ΧΗ RMN (300 MHz, DMS0-d6) δ ppm 1,31 (t, J=7, 1 Hz, 3 H) , 2,34 (s, 6 H), 4,43 (q, J=7, 1 Hz, 2 H) , 7, 08 - 7,27 (m, 4 H), 7,41 - 7, 49 (m, 1 H) , 7,54- 7,62 (m, 2 H) , 7,68 (dd J= 8,8, 1,8 Hz, 1 H), 8,10 (d, J=7,6 Hz, 1 H), 8, 59 (d J=1,8 Hz, 1 H) , 10,34 (s largo, 1 H).

Exemplos 6-9

Preparação dos Compostos 6-9

Uma suspensão contendo 9-etil-3-aminocarbazole (0,1 g; 0,48 mmol) e o ácido benzóico adequado (0,70 mmol) em que R2, R3, R4, R5 e R6 têm os significados indicados na Tabela 1, em diclorometano (4 mL) e DMF (0,8 mL), foi agitada durante 10 minutos. 21

Foi adicionada resina carbodiimida polistireno-divinilbenzeno (PS-carbodiimida) (0,73 g; 0,9 mmol) à mistura reaccional assim obtida, sob atmosfera inerte. A suspensão foi seguidamente agitada durante 16 horas. A mistura reaccional foi filtrada e o produto sólido obtido foi lavado com diclorometano. A solução foi seguidamente tratada com resina Amberlyst 15 (200 mg; 0,8 mmol) e resina Amberlyst A21 (250 mg; 1 mmol) e agitada durante 2 horas. As resinas foram separadas por filtração e lavadas com diclorometano (2x5 mL) e o solvente orgânico foi removido por evaporação sob pressão reduzida para originar o produto desejado.

Composto No. P.M. Rendimento (mg) LC/MS (M+H)+ 6 400,38 51 401,3 7 400,38 129 401,3 8 423,31 80 423, 2 9 413,31 18 413, 1

Exemplo 10

Preparação do Composto 10 (RI = PhCH2, R2 = NH2, X = R3 = R4 = R5 = R6 = Y = H) a) ácido 2-[(terbutoxicarbonil)amino]benzóico

Uma mistura de ácido antranílico (6,8 g; 0,050 mol), dicarbonato de diterbutilo (16,4 mL; 0,071 mol), NaOH 0,5 N (100 mL), dioxano (50 mL) e acetonitrilo (10 mL), foi mantida sob agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo foi tratado com uma mistura de 100 g de gelo e 100 ml de uma solução aquosa a 10 % de ácido cítrico. A solução foi extraída com acetato de etilo (3 x 22 100 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de NaCl (50 mL) e seguidamente secas sobre Na2S04.

Após filtração o solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida. O resíduo assim obtido foi cristalizado a partir de uma mistura de hexano:acetato de etilo = 3:1 para originar o produto intitulado (4,9 g). XH RMN (3 00 MHz, DMSO- -d6) δ ppm 1,49 (s, 9H) , 7, 07 (td, J=7, 80, 7,50, 1,20 Hz, 1 H), 7,57 (td, J= 8 ,53, 7,22, 1,82 Hz, 1 H), 7,96 (dd, J=7, 9 7 , 1,72 Hz , 1 H), 8,28 (dd, J= 8,58, 0,91 Hz, 1 H), 10,51 (s, 1H), 13,55 (s largo, 1 H) . b) cloridrato de 2-3πι1ηο-^- (9-benzil-9H-carbazol-3-il)benzamida 4-dimetilaminopiridina (0,31 g, 0,0025 mol) e 9-(fenilmetil)-9iJ-carbazol-3-amina, obtidas como descrito no Exemplo 3c) (0,626 g, 0,0023 mol), foram adicionadas a uma solução do produto obtido no passo a) prévio (0,496 g, 0,0021 mol) em diclorometano (5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos, foi adicionada N, AJ-diciclohexilcarbodiimida (0,475 g, 0,0023 mol) e mantida sob agitação a temperatura ambiente durante 2 dias. A seguir a mistura foi diluída com diclorometano (15 mL) e filtrada através de uma camada de sílica. A solução foi lavada com uma solução aquosa a 10 % de ácido cítrico (3 x 10 mL), água (2 x 10 mL) e uma solução saturada de NaCl (10 ml), respectivamente. A fase orgânica foi seca sobre Na2S04 e o solvente foi removido sob pressão reduzida. 23 0 produto assim obtido (1,3 g) foi purificado por cromatografia flash por eluição com uma mistura de hexano: acetato de etilo= 7:3, e seguidamente cristalizado a partir da mistura hexano:acetato de etilo = 95:5. 0 produto assim obtido (350 mg, 0,712 mmol) foi dissolvido em acetato de etilo (50 mL) e tratado com uma solução de HC1 em etanol 3 M (26 mL) . O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo foi cristalizado a partir de uma mistura de etanol absoluto: acetato de etilo = 1:1. Foi assim obtido o cloridrato de 2-amino-iV- (9-benzil-9H-carbazol-3-il) benzamida (0,2 g) . ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5,66 (s, 2 H) , 7,01 (t, J=7,51 Hz, 1 H), 7, 08 - 7, 50 (m, 12 H), 7,62 (d, J= 8,59 Hz, 2 H), 7,70 (dd, J=8, 82, 1, 80 Hz, 1 H) , 7,84 (dd, J=7,76, 0,99 Hz, 1 H), 8,10 (d, J=7,60 Hz, 1 H) , 8,56 (d, <7=1,6 5 Hz, 1 H), 10,34 (s largo, 1 H).

Exemplo 11

Preparação do Composto 11 (RI = CH3CH2, R2 = N(CH3)2, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) a) cloridrato de 2-dimetilamino-W- (9-etil-9ff-carbazol-3-il)benzamida 3-amino-9-etilcarbazole (0,484 g, 0,0023 mol) foi feito reagir com ácido IV-dimetilantranílico (0,347 g, 0,0021 mol) procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo 10b. O produto assim obtido (0,9 g) foi purificado por cromatografia flash por eluição com uma mistura de hexano: acetato de etilo = 8:2. A seguir, foi dissolvido em etanol, tratado com uma solução de HC1 em etanol 3 M (2,0 ml) e mantida à temperatura ambiente durante 3 horas. 24

Seguidamente o solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi cristalizado a partir da mistura de álcool isopropílico:éter isopropílico = 1:3.

Foi assim obtido o cloridrato de 2-dimetilamino-IV- (9-etil-9H-carbazol-3-il)benzamida (0,25 g) . XH RMN (300 MH; z, DMSO- 'de + d2 0) δ ppm 1,29 1,38 (m, J= :7, 01, 7,01 Hz, 3 H) , 3 ,21 ( s, 6 H)( . 4, 45 (q, = 71 , 16 H '.z, 2 H) r 7,2· 4 (td, J=7,86, 7, 05 r 0,88 Hz, 1 H) r 7 , 50 (td, J= :8, 26, 7,09, 1, 17 Hz, : L H), 7, 56 - 7,69 (m, 3 H) , 7, 73 - 7, 83 (m, 2 H) , 7,91 (d, J= 8, 00 Hz, 1 H), 8, 0 9 - 8, 16 (m, 2H), 8,56 (d, J=l,75 Hz, 1 H).

Exemplo 12

Preparação do Composto 12 (RI = CH3(CH2)4, R2 = Cl, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) a) 9-pentil-9ff-carbazole

Foi feito reagir carbazole (5 g, 0,030 mol) com 1-bromopentano (7,5 mL, 0,06 mol) procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo la). O produto sólido obtido após filtração a frio (8 g) foi purificado por filtração através de uma camada de sílica por eluição com uma mistura de hexano:acetato de etilo = 8:2.

Foi assim obtido o produto desejado (6 g). XH RMN (3 00 MHz, CLOROFÓRMIO- -d) δ ppm 0,82 - 0,94 (m, J=7, 00, 7,00 Hz, 3 H), 1,28 - 1,44 (m, 4 H), 1,79 - 1 , 94 (m, 2 H) , 4,28 (t, J=7,23 Hz, 2 H), 7 ,21 (td, J=7,86, 6, 76, 1,32 Hz, 2H), 7,36 - 7,49 (m, 4 H), 8,09 (d, J=7,75 Hz , 2 H) . 25 b) 3-nitro-9-pentil-9H-carbazole 0 produto obtido como descrito no passo a) precedente (1 g, 0, 0042 mol) foi sujeito a reacção procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo lb). 0 produto assim obtido (0,9 g) foi purificado por cromatografia flash por eluição com uma mistura de hexano: acetato de etilo = 10 : 1 e o produto resultante (0,54 g) foi utilizado sem purificação adicional. RMN (300 MHz, DMSO '-de) δ ppm 0,75 - 0, 85 (m, J= 7, 00 v, 00 Hz, 3 H), 1,19 - 1, 37 (m, 4 H), 1,70 - 1, 86 (m , 2 H) 4, 47 (t, J= = 7, 10 Hz, 2 H) , 7, 33 (td, J=7,90, 7, 00, 0 , 80 Hz 1 H), 7, 58 (td, J=7,68 , i, 16 Hz r 1 H) , 7,72 (d , J-- =8 ,42 Hz 1 H) , 7, 78 (d, J= 9,08 Hz, 1 H), 8 ,33 (dd, J- = 9, 17, 2 ,39 Hz 1 H) , 8, 40 (d, J=7,76 Hz, : L H), 9, 17 (d, J= 2 ,31 Hz r 1 H) c) 9-pentil-9H-carbazol-3-amina 0 produto obtido como descrito no passo b) precedente (2,6 g, 0, 0092 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo lc). 0 produto assim obtido (2 g) foi purificado por cristalização a partir de hexano para originar o produto desejado (1,3 g) . GC/MS (m/z): 252 (ião molecular), 195 (pico básico). d) 2-cloro-N- (9-pentil-9fl-carbazol-3-il)benzamida O produto obtido como descrito no passo c) precedente (0,6 g, 0, 0024 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo ld). 0 produto assim obtido (0,9 g) foi purificado por cristalização a partir da mistura de hexano:acetato de 26 etilo = 4:1. Foi assim obtido o 2-cloro-IV- (9-pentil-9ií- carbazol-3-il)benzamida (0,3 g). 2H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,81 (t, J=7,00 Hz, 3 H) , 1,21 - 1,36 (m, 4 H), 1,71 - 1,86 (m, 2 H) , 4,38 (t, J=6,97 Hz, 2 H), 7,19 (td, J=7, 90, 7, 00, 0, 80 Hz, 1 H) , 7,41 -7,71 (m, 8 H), 8,09 (d, J=7, 49 Hz, 1 H), 8,56 (d, J=l,74 Hz, 1 H), 10,47 (s, 1 H).

Exemplo 13

Preparação do Composto 13 (RI = CH3OCH2CH2, R2 = Cl, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) a) 9-(2-metoxietil)-9ff-carbazole

Foi adicionado carbonato de césio (19,5 g, 0,06 mol) a uma solução de carbazole (5 g, 0,030 mol) em DMF (100 ml) e a mistura foi mantida sob agitação durante 1 hora à temperatura ambiente. Foi adicionado éter 2-bromoetilmetílico (5,6 ml, 0,06 mol) e a mistura foi mantida sob agitação a 90 °C durante 5 horas. A seguir a mistura reaccional foi colocada em água (300 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O sólido (4,8 g) foi filtrado e utilizado sem purificação adicional. 2h RMN (300 MHz, DMSO- d6) δ ppm 3, 18 (s, 3 Η) ( r 3, 71 (t, J= 5 ,41 Hz, 2 H) , 4, 55 (t, J=5,41 Hz, 2 H) , 7 ,19 (td, J=7 , 80 , 7, 10 , 1,00 Hz, 2 H) , 7, 44 (td, J-- =8,26, 7, 09, 1,17 Hz, 2 H), 7, 60 (d, J= 8, 18 Hz, 2 H), 8, 14 (dt, J= = 7, 75, 0,90 Hz, 2 H) . b) 3-nitro-9-(2-metoxietil)-9fl-carbazole O produto obtido como descrito no passo a) precedente (6 g, 0,027 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo 1 b). 27 0 produto assim obtido (7,2 g) foi purificado por cristalização a partir de tolueno para originar o produto desejado (4,5 g). ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 3,16 (s, 3 H) , 3,74 (t, J= 5, 19 Hz, r 2 H), 4,66 (t, . J= =5,19 Hz, 2 H) , 7,33 (ddd, J= 8, 00 , 7, 00 , 0,88 Hz, 1 H) , 7, , 57 (ddd, J= 8 ,25, 7,20, 1,17 Hz, 1 H) , 7, 74 (dt, J= 8, 18, 0,í 38 Hz, 1 H), 7, 79 (d, J= = 9,06 Hz, 1 H), 8,33 (dd, J- = 9, 21, 2,34 Hz, 1 H) , 8,40 (dt, J= 7, 75 , o, 88 Hz, 1 H), 9, 16 (d, J=2,34 Hz, 1 H) . c) 9-(2-metoxietil)-9H-carbazol-3-amina O produto obtido como descrito no passo b) precedente (3 g, 0,011 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo lc). 0 produto assim obtido (2, 7 g) foi cristalizado a partir duma mistura de hexano:acetato de etilo = 2:1 para originar o produto desejado (1,1 g). ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 3,18 (s, 3H) , 3,66 (t, J=5, 55 Hz, 2 H), 4,42 (t, J=5,48 Hz, 2 H) , 4,70 (s, 2 H) , 6,81 (dd, J=8,48, 2,19 Hz, 1 H) , 7,06 (ddd, J=7, 80, 7, 00, 0,88 Hz, 1 H), 7,26 (d, J=l, 90 Hz, 1 H) , 7,29 (d, J=8,48 Hz, 1 H), 7,32 (ddd, J= 8,25, 7, 00, 1, 25 Hz, 1 H) , 7,46 (dt, J= 8, 25, 0, 88 Hz, 1 H), 7,91 (dt, J=7,60, 0,88 Hz, 1 H) . d) 2-cloro-N- [9-(2-metoxietil)-9H-carbazol-3-il]benzamida O produto obtido como descrito no passo c) precedente (0,58 g, 0,0024 mol) foi feito reagir com cloreto de 2-clorobenzoílo (0,36 mL, 0,0028 mol) procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo ld). O produto assim obtido (0,9 g) foi cristalizado a partir duma mistura de hexano: acetato de etilo = 2:1. Foi assim 28 obtido a 2-cloro-iV-[9-(2-metoxietil)-9H-carbazol-3-il] benzamida (0,5 g). ΧΗ RMN (300 MHz, DMS0-d6) δ ppm 3,18 (s, 3 H) , 3,72 (t, J= 5,28 Hz, 2 H), 4,55 (t, J= 5,37 Hz, 2 H) , 7,19 (ddd, J= 7, 90, 7, 00, 0, 88 Hz, 1 H) , 7,39 - 7,69 (m, 8 H) , 8,08 (d, J=7,76 Hz, 1 H), 8,54 (d, J=l, 82 Hz, 1 H), 10,47 (s, 1 H) .

Exemplo 14

Preparação do Composto 14 (RI = HOOC(CH2)3, R2 = Cl, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) a) 4-(9ff-carbazol-9-il)butanonitrilo

Carbazole (10 g, 0,060 mol) foi feito reagir com 4- bromobutironitrilo (11,9 mL, 0,12 mol) procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo la). 0 produto sólido obtido após filtração a frio (18 g) foi purificado por cromatografia flash por eluição com uma mistura de hexano:acetato de etilo = 8:2. Foi assim obtido o produto desejado (10 g). XH RMN (300 MHz, DMS0-d6) δ ppm 2,03 - 2,15 (m, J= 7,23, 7, 23, 7,23, 7,23 Hz, 2 H), 2,55 (t, J=7, 23 Hz, 2 H) , 4,46 (t, J=7,16 Hz, 2 H), 7,21 (td, J=7, 86, 7, 05, 1,02 Hz, 2 H) , 7,47 (td, J= 8, 26, 7, 09, 1,32 Hz, 2 H) , 7,62 (dt, J= 8,22, 0,79 Hz, 2 H), 8,16 (dq, J=7, 75, 0, 73, 0,58 Hz, 2 H) . b) 4-(3-nitro-9H-carbazol-9-il)butanonitrilo O produto obtido como descrito no passo a) precedente (5 g, 0,0213 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo lb). 29 0 produto assim obtido (5,2 g) foi cristalizado a partir etanol a 95 ° para originar o produto desejado (4,8 g) . GC/MS (m/z): 279 (ião molecular), 225 (pico básico). c) 4-(3-amino-9H-carbazol-9-il)butanonitrilo 0 produto obtido como descrito no passo b) precedente (2,3 g, 0, 0082 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo lc). O produto assim obtido (2,3 g) foi purificado por cromatografia flash por eluição com uma mistura de hexano: acetato de etilo = 4:6. Foi assim obtido o produto desejado (1,4 g). ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 1,95 - 2,12 (m, J=7,20, 7, 20, 7,20, 7,20 Hz, 2 H) , 2,50 (t, J=7,20 Hz, 2 H) , 4,33 (t, J= 7,16 Hz, 2 H), 4,74 (s, 2 H) , 6,84 (dd, J= 8,62, 2,19 Hz, 1 H), 7,09 (td, J=7, 90, 7, 00, 1, 00 Hz, 1 H) , 7,28 (d, J=l,9 0 Hz, 1 H), 7,31 (d, J= 8,62 Hz, 1 H) , 7,36 (td, J= 8, 22, 7, 05, 1, 24 Hz, 1 H) , 7,48 (d, J= 8,30 Hz, 1 H) , 7,94 (d, J=7,45 Hz, 1 H). d) ácido 4-(3-amino-9H-carbazol-9-il)butanóico O produto obtido como descrito no passo c) precedente (0,7 g, 2,81 mmol) foi feito reagir em água (5 mL) com ácido sulfúrico a 95 % (2,8 mL, 50 mmol) ao refluxo durante uma noite.

Seguidamente a mistura reaccional foi arrefecida, colocada em gelo (50 g) e o produto sólido foi recolhido por filtração. Foi assim obtido o produto desejado (0,83 g) , que foi utilizado na próxima reacção sem qualquer purificação adicional. 30 e) ácido_4-{ [3- (2-clorobenzamido) ] -9H-carbazol-9- il}butanóico 0 produto obtido como descrito no passo d) precedente (0,3 g, 1,19 mmol) foi feito reagir com cloreto de 2-clorobenzoílo (0,171 mL, 1,35 mmol) procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo ld). A mistura reaccional foi lavada com HC1 1 N (3x6 mL) . As fase orgânicas foram separadas. 0 solvente foi removido a partir das fases orgânicas combinadas sob pressão reduzida.

Foi assim obtido o ácido 4-{ [3-(2-clorobenzamido)]-9H-carbazol-9-il}butanóico (0,15 g). XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1, 92 - 2, 07 (m, J=7,00, 7, 00, 7, 00, 7, 00 Hz, 2 H), 2,27 (t, J=7, 00 Hz, 2 H) , 4,41 (t, J=7, 14 Hz, 1 H), 7,20 (td, J=7, 80, 7, 00, 0,80 Hz, 1 H), 7, 37 - 7, 80 (m, 9 H) , 8,10 (d, J=7,50 Hz, 1 H) , 8,57 (d, J=1,83 Hz, 1 H), 10,48 (s, 2 H).

Exemplo 15

Preparação do Composto 15 (RI = CH3CH2, R2 = Cl, X = Y = CH3, R3 = R4 = R5 = R6 = H) a) 6-bromo-9-etil-l,4-dimetil-3-nitro-9H-carbazole 6-bromo-l, 4-dimetil-3-nitro-9iJ-carbazole (preparado como descrito em Chem. Pharm. Buli 35(1), 425-428 (1987), (4,8 g, 0,015 mol) foi feito reagir com iodoetano procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo la). 0 produto sólido obtido após filtração (5,1 g) foi utilizado sem purificação adicional. ΧΗ RMN (3 00 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,3 4 (t, J= 7,02 Hz, 3 H) , 2,83 (s, 3 H), 2,93 (s, 3 H) , 4,67 (q, J=7,21 Hz, 2 H) , 31 7,71 (dd, J=8, 70, 1, 70 Hz, 1 H) , 7,77 (d, J= 8,50 Hz, 1H) , 7,88 (s, 1 H), 8,38 (d, J=l,75 Hz, 1 H). b) 6-bromo-9-etil-l,4-dimetil-3-amino-9H-carbazole O produto obtido como descrito no passo a) precedente (5 g, 0,014 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo lc). 0 produto sólido obtido após filtração (5,1 g) foi utilizado sem qualquer purificação adicional. GC/MS (m/z): 316, 318 (ião molecular, pico básico). c) 9-etil-l,4-dimetil-3-amino-9H-carbazole

Uma solução do produto obtido no passo b) precedente (2 g, 0,006 mol) em THF (25 mL) foi adicionada a uma suspensão de LiAlH4 (0,95 g, 0,025 mol) em THF anidro (25 mL) . A suspensão foi sujeita a refluxo durante 24 horas. A seguir, a suspensão foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e adicionada com uma mistura de H20 e THF 1:1 e NaOH (1,9 g).

Foi removido THF por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo aquoso foi colocado numa ampola de separação e extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL). A fase orgânica foi separada e seca sobre Na2S04. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo assim obtido (1,3 g) foi utilizado sem qualquer purificação adicional. GC/MS (m/z): 238 (ião molecular), 209 (pico básico). d) 2-cloro-N- (9-etil-l,4-dimetil-9H-carbazol-3-il)benzamida O produto obtido como descrito no passo c) precedente (1,2 g, 0,005 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo ld). 32 0 produto assim obtido (2 g) foi purificado por cromatografia flash por eluição com uma mistura de hexano: acetato de etilo = 8:2 e seguidamente cristalizado a partir de uma mistura de clorofórmio:hexano = 1:1.

Foi assim obtido a 2-cloro-IV- (9-etil-l, 4-dimetil-9ií-carbazol-3-il)benzamida (0,2 g). ΧΗ RMN (300 MHz, DMS0-d6) δ ppm 1,32 (t, J=7,00 Hz, 3 H) , 2,72 (s, 3 H), 2,79 (s, 3 H) , 4,65 (q, J=6,94 Hz, 2 H) , 7,17 (s, 1 H), 7,22 (td, J=8,00, 7, 00, 0, 80 Hz, 1 H) , 7,42 - 7,70 (m, 6 H), 8,21 (d, J=7,93 Hz, 1 H), 10,03 (s, 1 H).

Exemplo 16

Preparação do Composto 16 (RI = CH3CH2, R2 = Cl, X = CH3 ,R3 = R4 = R5 = R6 = Y = H) a) 9-etil-9H-carbazole

Foi feito reagir carbazole (4 g, 0,024 mol) com iodoetano procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo la). O produto sólido obtido após filtração (4,4 g) foi utilizado sem qualquer purificação adicional. 2H RMN (300 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,31 (t, J=7,16 Hz, 3 H) , 4,44 (q, J=7,02 Hz, 2H), 7,16 - 7,23 (m, J= 7, 90, 7, 00, 1,00 Hz, 2 H), 7,45 (td, J=8, 30, 7, 00, 1, 10 Hz, 2 H) , 7,60 (d, J=8,18 Hz, 2 H), 8,15 (d, J= 7,60 Hz, 2 H) . b) 9-etil-3-nitro-9H-carbazole 0 produto obtido como descrito no passo a) precedente (4 g, 0,0014 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo lb). 33 0 produto assim obtido (6 g) foi purificado por cromatografia flash por eluição com uma mistura de hexano: acetato de etilo = 8:2. Foi assim obtido o produto desejado (2,8 g). 2H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,35 (t, J=7,16 Hz, 3 H) , 4,54 (q, J=7,31 Hz, 2 H), 7,34 (ddd, J=8,20, 7,40, 0,80 Hz, 1 H), 7,59 (ddd, J=8, 20, 7, 30, 1, 30 Hz, 1 H) , 7,74 (dt, J= 8,18, 0,80 Hz, 1 H), 7,80 (d, J=9,06 Hz, 1 H) , 8,35 (dd, J=9, 06, 2,34 Hz, 1 H) , 8,41 (dt, J=7,60, 0, 80 Hz, 1 H) , 9,18 (d, J=2,34 Hz, 1 H). c) 9-etil-4-metil-3-nitro-9H-carbazole O produto obtido como descrito no passo b) precedente (2,8 g, 0,0012 mol) foi dissolvido em THF anidro (cerca de 100 mL) . A solução foi levada a -15 °C numa atmosfera inerte. Foi adicionada uma solução de CH3MgCl 3 M em THF (5,7 mL, 0,012 mol) e a mistura reaccional foi mantida sob agitação durante 1 hora a -15 °C. A seguir, foi adicionada DDQ (2,3— dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona) (4,5 g, 0,0020 mol) e a mistura reaccional foi deixada atingir a temperatura ambiente e manteve-se sob agitação durante 48 horas. A mistura reaccional foi diluída com diclorometano (100 mL) e lavada com água (2 x 60 mL). A fase orgânica foi separada e seca sobre Na2S04. 0 solvente foi seguidamente removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo assim obtido foi purificado por cromatografia flash por eluição com uma mistura de hexano:acetato de etilo = 8:2. As fracções puras foram combinadas para originar o produto desejado (0,6 g). XH RMN (300 MHz, DMS0-c?6) δ ppm 1,33 (t, J=7, 16 Hz, 3 H) , 3,03 (s, 3H), 4,53 (q, J=7, 31 Hz, 2 H) , 7,35 (ddd, J=8,18, 7,00, 1,20 Hz, 1 H), 7,59 (ddd, J=8, 20, 7,30, 1, 20 Hz, 1 H) , 7,67 34 (d, (7=9, 06 Hz, 1 H), 7,77 (d, 7=8,18 Hz, 1 H) , 8,10 (d, J=9,06 Hz, 1 H), 8,33 (d, J=8,18 Hz, 1 H). d) 9-etil-4-metil-9fl-carbazol-3-amina O produto obtido como descrito no passo c) precedente (0,4 g, 0,0016 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo lc). O produto assim obtido (0,5 g) foi purificado por cromatografia flash por eluição com CHC13. Foi assim obtido 0 produto desejado (0,3 g). ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 1,24 (t, 7=7, 02 Hz, 3H) , 2,57 (s, 3H) , 4,32 (q, 7=7,02 Hz, 2H) , 4,55 (s, 2H) , 6,91 (d, 7=8,48 Hz, 1H), 7,09 (ddd, 7=8,18, 7,00, 1,00 Hz, 1H), 7,18 (d, 7=8,48 Hz, 1H) , 7,35 (ddd, 7=8, 00, 7, 20, 1,20 Hz, 1 H), 7,48 (d, 7=8,18 Hz, 1H) , 8,15 (d, 7=7,89 Hz, 1H) . d) 2-cloro-N-(9-etil-4-metil-9H-carbazol-3-il)benzamida 0 produto obtido como descrito no passo d) precedente (0,3 g, 0,0013 mol) foi feito reagir procedendo de uma forma semelhante ao Exemplo ld). O produto assim obtido (0,5 g) foi cristalizado 2 vezes a partir de uma mistura de hexano:acetato de etilo = 1:2. Foi assim obtido a 2-cloro-N-(9-etil-4-metil-9H-carbazol-3-il)benzamida (0,23 g). 2H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,31 (t, 7=7,10 Hz, 3 H) , 2,77 (s, 3 H), 4,47 (q, 7=7,05 Hz, 2 H) , 7,23 (ddd, 7=8,00, 7, 00, 1,00 Hz, 1 H), 7,39 - 7, 72 (m, 8 H) , 8,23 (d, 7=7,93

Hz, 1 H), 10,09 (s, 1 H).

Exemplos 17 e 18

Preparação dos Compostos 17 e 18 35

Os compostos 17 e 18 poderão ser preparados procedendo de uma forma semelhante ao descrito nos Exemplos 1-16 acima.

Exemplo 19

Preparação do Composto Comparativo A (RI = CH3CH2, R2 = OH, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) a) N- (9-etil-9H-carbazol-3-il)-2-metoxibenzamida

Foi feito reagir 3-amino-9-etilcarbazole (5,6 g; 0,027 mol) com cloreto de 2-metoxibenzoílo (4,35 mL; 0,029 mol) procedendo de uma forma semelhante à descrita no Exemplo 4. 0 resíduo assim obtido (3,5 g) foi cristalizado a partir isopropanol para originar o produto desejado (2,5 g). 2H RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 1,32 (t, J=7, 1 Hz, 3 H) , 3,96 (s, 3 H), 4,43 (q, J=7, 1 Hz, 2 H) , 7,10 (td, J=7,4, 1,0 Hz, 1 H), 7,15 - 7,24 (m, 2 H) , 7,41 - 7,48 (m, 1 H) , 7, 48 - 7, 55 (m, 1 H) , 7,55 - 7,61 (m, 2 H) , 7, 70 - 7, 79 (m, 2 H), 8,10 (d, J=7,6 Hz, 1 H) , 8,58 (d, J=l, 8 Hz, 1 H) , 10,13 (s largo, 1 H). b) N- (9-etil-9fl-carbazol-3-il)-2-hidroxibenzamida A uma solução contendo tribrometo de boro (1 M em diclorometano, 0,2 mL; 0,001 mol) em diclorometano (10 mL) foi adicionado o produto obtido como descrito no passo a) acima (0,5 g; 0,001 mol). A mistura assim obtida foi agitada durante 16 horas. A mistura reaccional foi transferida para uma ampola de decantação e lavada com H20 (2 x 50 mL) . A fase orgânica foi separada e seca sobre Na2S04. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e o resíduo assim obtido (0,4 g) foi cristalizado a partir de etanol. 36

Foi assim obtido N- (9-etil-9H-carbazol-3-il)-2- hidroxibenzamida (0,25 g). ΧΗ RMN (300 MHz, DMSO-d6, 70 °C), δ ppm 1,37 (t, J=7,l Hz, 3 H), 4,45 (q, J=7,l Hz, 2 H), 5,55 (s largo, 1 H) , 6,94 - 7,02 (m, 2 H), 7,21 (t, J=7,0 Hz, 1 H), 7,41 - 7,77 (m, 5 H), 8,04 - 8,15 (m, 2 H) , 8,42 - 8,48 (m, 1 H) , 10,33 (s largo, 1 H).

Exemplo 20

Preparação do Composto Comparativo B (RI = CH3CH2, R2 = SCH3, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H) O Composto Comparativo B foi preparado de uma maneira semelhante àquela descrita com respeito aos Compostos 6 -9, começando com 9-etil-3-aminocarbazole e ácido 2-metilmercaptobenzóico. LC/MS (M+H)+ = 361,2.

Exemplo 21

Teste de actividade in vitro

Este teste permite a avaliação da capacidade inibidora na produção das prostaglandinas PGE2 e da selectividade relativa para a produção das prostaglandinas PGF2c(.

Foi utilizada a linha celular A549, adenocarcinoma pulmonar humano, que é particularmente sensível à estimulação com citoquinas pró-inflamatórias, por exemplo IL-Ιβ, e, em resposta a esta estimulação, é particularmente activa na Produção e libertação de dois prostanóides: PGE2 e PGF2c( (Thoren S. Jakobsson P-J, 2000). 37

As células foram estimuladas com IL-lp (1 ng/mL) e tratadas simultaneamente com o composto de teste durante 18 horas num meio de cultura adequado (DMEM - Meio de Eagle Modificado de Dulbecco) suplementado com 5 % de soro de bovino fetal e L-glutamina (4 mM final) numa incubadora a 37 °C e a uma concentração de CO2 de 5 %.

Após a incubação, foram avaliadas as quantidades de PGE2 e de PGF2a produzidas e libertadas no sobrenadante utilizando um kit (conjunto) EIA (produzido e vendido por Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, USA).

Os compostos comparativos utilizados foram indometacina (Sigma-Aldrich), um fármaco anti-inflamatório não esteróide que inibe em igual medida ambos o PGE2 e o PGF2c(, e também os compostos de fórmula (I) em que RI = CH3CH2, R2 = OH, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H (composto comparativo A) e RI = CH3CH2, R2 = SCH3, R3 = R4 = R5 = R6 = X = Y = H (composto comparativo B).

Os resultados, dados como percentagens de inibição da produção de PGE2 e de PGF2c< a uma concentração de 10 pm, são apresentados na Tabela 2. 38 TABELA 2

Composto % de inibição a 10 pM pge2 PGF2a 1 59 27 2 90 6 6 3 86 7 5 93 60 6 76 26 7 90 48 8 77 16 A 88 84 B na na indometacina 100 100 na = não activo à concentração experimental

Para propósitos ilustrativos, a Tabela 3 apresenta os valores de pIC50 de certos compostos da invenção, em que pIC5o é o logaritmo negativo do valor de IC5o, que, por sua vez, é a concentração de composto que inibe 50 % da produção de PGE2 ou de PGF2c< relativamente a células que foram estimuladas mas não tratadas com o mesmo composto. TABELA 3

Composto PIC50 pge2 PGF2a 2 6, 1 5 3 5, 9 < 4 4 6,2 4 6 6, 4 < 4 7 5, 7 < 4 8 5, 4 < 4 indometacina 8,3 to co

Exemplo 22

Teste de actividade in vivo 39

Este teste permite a avaliação da actividade dos compostos da invenção num teste nociceptivo de origem inflamatória.

Os compostos de teste foram avaliados num modelo experimental que provoca o alongamento induzido com ácido acético em murganhos (Stock J.L. et al., J. Clin. Inv. 2001, 107: 325-331). Para o teste foram utilizados murganhos fêmeas CD-I pesando 25 - 30 g.

Os animais foram tratados oralmente com o composto (30 mg/kg) suspenso em metilcelulose (MTC). Os animais de controlo foram tratados oralmente apenas com o veiculo (MTC).

Uma hora após o tratamento, foi dada uma injecção intraperitoneal de ácido acético (0,7 % v/v em solução salina fisiológica, 16 μΐ/g de peso corporal) aos animais para induzir dor inflamatória e para verificar os efeitos do tratamento na resposta nociceptiva.

Imediatamente após a administração de ácido acético e durante os 20 minutos seguintes foi medido o número alongamentos, que representa o parâmetro para avaliação da resposta nociceptiva.

Os animais tratados com os compostos da invenção exibiram uma redução significativa no alongamento nos 20 minutos após a administração de ácido acético, comparados com os animais tratados apenas com MTC.

Os resultados obtidos com o Composto 4 são apresentados na Fig. 1.

Exemplo 23

Teste em células endoteliais primárias humanas (HUVEC) 40

Este teste permite a avaliação da capacidade dos compostos da invenção para inibir a produção de PGI2. A ausência de actividade inibidora neste prostanóide pode assegurar a manutenção da acção vasoprotectora dos prostanóides PGI2 e providencia informação farmacológica útil referente à ausência de efeitos secundários adversos no endotélio. A acção dos compostos de teste é avaliada em células HUVEC sob condições basais e condições de estimulação (J. Immunol. 1989, June 1; 142(11): 3993-9).

Os resultados são dados como uma percentagem de inibição relativa à actividade enzimática de controlo. A indometacina é utilizada como composto de referência.

Os compostos da invenção não exibiram qualquer inibição significativa de secreção de PGI2.

Os resultados são apresentados na Tabela 4. TABELA 4

Composto LogM Inibição (%) Composto de Comparação IC50 2 -5 31 indometacina O co 1 4 -5 21 indometacina 0 co 1 6 -5 15 indometacina 0 co 1 7 -5 30 indometacina 0 co 1

Lisboa, 11 de Agosto de 2010

Claims (4)

1/ REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de 3-aminocarbazole, caracterizado por ser seleccionado a partir do grupo constituído pelos compostos da Tabela 1 abaixo: TABELA 1 R5 “'tVVVv* r2 ° | RI Y (I) Corap. N° Rl R2 R3 R4 R5 R6 X Y 1 ch3 cl H H H H H H 2 CH(CH3)2 Cl H H H H H H 3 PhCH2 Cl H H H H H H 4 CH3CH2 cf3 H H H H H H 5 ch3ch2 ch3 H H H ch3 H H 6 ch3ch2 F H H H cf3 H H 7 ch3ch2 cf3 H F H H H H 8 ch3ch2 Br H H H och3 H H 9 ch3ch2 Cl H H Cl och3 H H 10 PhCH2 nh2 H H H H H H 11 ch3ch2 n(ch3) 2 H H H H H H 12 CH3(CH2)4 Cl H H H H H H 13 ch3och2ch2 Cl H H H H H H 14 HOOC(CH2) 3 Cl H H H H H H 15 ch3ch2 Cl H H H H ch3 ch3 16 ch3ch2 Cl H H H H ch3 H 17 ch3ch2 Cl H H H H H ch3 18 ch3ch2 Cl H H H H ch3 och3 e um seu sal farmaceuticamente aceitável.

2. Uma composição farmacêutica, caracterizada por compreender uma dose terapeuticamente efectiva de um composto de 3-aminocarbazole seleccionado a partir do 2/ grupo constituído pelos compostos da Tabela 1 da Reivindicação 1 acima, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, juntamente com pelo menos um veículo inerte farmaceuticamente aceitável.

3. Utilização de um composto de 3-aminocarbazole seleccionado a partir do grupo constituído pelos compostos da Tabela 1 da Reivindicação 1 acima, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou a prevenção de processos inflamatórios, tumores, doença de Alzheimer e aterosclerose em mamíferos.

4. Um método para preparar um 3-aminocarbazole da Tabela 1 da Reivindicação 1 acima, caracterizado por compreender os passos seguintes: a) reacção de uma amina de fórmula (II)

em que Rl, X e Y têm os significados indicados na Tabela 1, com um composto de fórmula (III) R5

R2 0 (III) 3/ em que R2, R3, R4, R5 e indicados na Tabela 1, e Z é seleccionado a partir do Br, OH, OR e 0C(0)R, em que ramificado contendo de 1 a 6 para originar um composto fórmula (I) R6 têm os significados grupo compreendendo Cl, R é um alquilo linear ou átomos de carbono, de 3-aminocarbazole de R5

em que Rl, R2, R3, R4, R5, R6, X e Y têm os significados indicados na Tabela 1, e b) formação opcional de um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (I) assim obtido. Lisboa, 11 de Agosto de 2010 1/1 1/1 número de alongamentos/20 minutos 80 η

70- 60- 50- 40- 30- 20- 10- 0-8 murganhos/grupo *p<0,05 vs grupo tratado com veiculo por ANOVA