PT1853303E - Composições estabilizadas para administração tópica, e métodos para a sua preparação - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSIÇÕES ESTABILIZADAS PARA ADMINISTRAÇÃO TÓPICA, EMÉTODOS PARA A SUA PREPARAÇÃO"

DOMÍNIO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a métodos para aestabilização de ingredientes ativos em composiçõesfarmacêuticas, com a finalidade de proporcionar uma vidaprolongada em armazenagem, com uma disponibilidademelhorada dos ingredientes ativos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Para a estabilidade da armazenagem e para a conveniência demanipulação, as composições farmacêuticas são formuladasfrequentemente como um pó liofilizado ou seco em vácuo, esão armazenadas a temperaturas baixas, entre -10 °C e 4 °C.O pó seco é reconstituído tipicamente com um liquidoapropriado, tal como soro fisiológico ou água, antes daadministração a um paciente. Em alternativa, a composiçãofarmacêutica pode ser formulada como uma solução oususpensão aquosa, que inclui um estabilizador para impedira degradação. No entanto, muitos compostos são difíceis deestabilizar e pode verificar-se uma perda do composto ou deatividade, durante a formulação, reconstituição e/ou operíodo de armazenagem. Os problemas de estabilidade podemocorrer em resultado de uma desnaturação, degradação,dimerização e/ou polimerização da proteína. Têm sidousados, com diferentes graus de êxito, vários excipientespara experimentar e estabilizar um agente ativo numacomposição farmacêutica. Os estabilizadores também podemser eficazes para reduzir a adesão do agente ativo às superficies, tais como as superficies dos aparelhos devidro do laboratório e outras, nomeadamente dosrecipientes, do frasco em que a composição farmacêutica éreconstituída, ou da superfície interna de uma seringausada para injetar a composição farmacêutica. Do mesmo modoque são capazes de estabilizar um agente ativo numacomposição, um agente estabilizador ideal deverá ter umaimunogenicidade desprezável, quando administrado a umpaciente humano.

Provou-se ser particularmente difícil estabilizar agentesativos para composições dermatológicas, cosméticas outópicas. Vários tipos de agentes ativos são úteis para aprofilaxia e o tratamento de alterações cosméticas edermatológicas da pele, tais como o envelhecimento da pelee, em particular, o envelhecimento induzido por processosde oxidação ou degenerativos. É também desejável prepararcomposições que possam ser administradas por via tópica,para facilitar a cura da ferida ou para tratar neuropatiasdolorosas. Têm sido encontrados vários problemas ao tentar-se fornecer ingredientes ativos através da pele. 0 tamanhode muitos agentes ativos torna difícil fazê-los penetraratravés da pele e também se revelou difícil estabilizaralguns agentes no que toca à armazenagem à temperaturaambiente.

Um exemplo de um agente ativo que tem sido muito procuradopara melhorar o aspeto de linhas da pele é a toxina debotulina tipo A. No entanto, a toxina de botulina pura éextremamente suscetível de desnaturação, devida àdesnaturação de superfície, calor e condições alcalinas. Atoxina inativada forma proteínas toxoides, que podem serimunogénicas, e os anticorpos resultantes podem tornar umpaciente refratário aos efeitos da toxina. Além disso, adiluição do complexo da toxina, obtido por processos de cultura, fermentação e purificação, para as concentraçõesmuito mais baixas da toxina, usadas para uma composiçãofarmacêutica, têm como resultado uma rápida desintoxicaçãoda toxina, a menos que esteja presente um agenteestabilizador apropriado. As formulações correntes datoxina de botulina têm que ser ministradas dentro de quatrohoras após a reconstituição, visto que a molécula da toxinaé muto instável. Durante este período de tempo, a toxina debotulina reconstituída é conservada em frigorífico (4 °C) .A decomposição da toxina em toxoides pode induzir respostasimunes ao toxoide, que podem interferir com os tratamentossubsequentes. Os estabilizadores correntes que têm sidousados nas formulações da toxina de botulina são albuminasprovenientes de animais, e gelatina. No entanto, estesestabilizadores não são apropriados para estabilizarsuficientemente a toxina de botulina no que se refere àarmazenagem à temperatura ambiente. Deste modo, havia umanecessidade específica de uma formulação que pudessemelhorar a estabilidade da toxina de botulina e, também,promover a sua permeação através da pele. Têm sido desenvolvidos vários esforços para providenciarformulações de toxina de botulina que possam serestabilizadas e fornecidas por vias de alternativa. Porexemplo, a patente dos Estados Unidos n° 6,585,993 divulgaum implante biocompatível para a libertação contínua de umaneurotoxina ao longo de um período de tratamento que seestende de um mês até cinco anos. Embora um tal sistemaimplantável possa ser útil para algumas situações, taiscomo para o tratamento de enxaqueca, este tipo de sistemade implante não é exequível para o tratamento de rugasfaciais, do pescoço ou das mãos. 0 pedido de patente dos Estados Unidos n° 2004/0247623sugere um método para o tratamento de distúrbios relacionados com os neurónios sensoriais, através daaplicação transdérmica de uma neurotoxina. Este pedido depatente é dirigido, em particular, a um método para otratamento de enxaqueca. 0 pedido de patente sugere que atoxina de botulina pode ser administrada por umadiversidade de vias. 0 pedido de patente internacional WO 0158472 descreve umacomposição farmacêutica que compreende a toxina de botulinae um polissacarideo. Este pedido de patente revela que opolissacarideo estabiliza a neurotoxina. No entanto, outrosestudos demonstraram que os sacarideos são fracosestabilizadores para a toxina de botulina. O pedido de patente internacional WO 04/060384 divulga umacomposição farmacêutica da toxina de botulina, que incluium agente de sequestro. A finalidade do agente de sequestroé evitar a difusão da toxina de botulina para longe dolocal da injeção. Isto não se aplica à necessidade decomposições estáveis que possam ser aplicadas à superfícieda pele.

Embora a toxina de botulina possa atenuar linhas e rugasfinas para a maioria dos utentes, há graves inconvenientesassociados à sua utilização corrente. A toxina de botulinatem que ser ministrada num consultório de um médico. Asinjeções podem ser dolorosas e podem ser contundentes.Ocorrem efeitos colaterais adversos em alguns pacientestratados com injeções. Os efeitos colaterais mais comunspara o tratamento de linhas franzidas incluem pálpebraspendentes, náuseas, sintomas gripais (febre, etc.),cefaleias e infeções respiratórias. As reações menosfrequentes podem incluir dores faciais, vermelhidão nolocal da injeção, e fraqueza dos músculos em outros locais.Os tratamentos repetidos podem conduzir à paralisia permanente dos músculos faciais, deixando a face semexpressão. Nesta conformidade, havia uma necessidade demétodos de alternativa para o fornecimento da toxina debotulina à pele.

Um outro agente ativo que seria desejável fornecer atravésda pele é o ácido hialurónico (HA). 0 ácido hialurónico éum polissacarídeo de alto peso molecular, de ocorrêncianatural, que se encontra presente em muitos tecidos docorpo. 0 ácido hialurónico foi associado à manutenção dahumidade na pele, bem como com a promoção da cura deferidas e incitamento à formação de vasos. A patente alemãDE 19805827A descreve o efeito protetor do ácidohialurónico sobre as irritações da pele. A patente dosEstados Unidos n° 5,728,391 sugere também a utilização doácido hialurónico como um agente para o tratamento dedoenças da pele. Têm sido sugeridas diversas formulaçõespara o fornecimento oral de HA. Para promover o efeito doHA sobre a pele é desejável formular uma composição quepossa ser aplicada à pele por via tópica. No entanto, umadas dificuldades ao tentar-se aumentar a permeação do HA napele é o tamanho da molécula. A grande estrutura poliméricaque dá ao HA os seus efeitos benéficos também torna difícila sua obtenção a partir do exterior do corpo. Havia, pois,uma necessidade, inatingida, de formulações melhoradas deHA que possam ser aplicadas por via tópica. 0 processo que conduz ao envelhecimento da pele e às rugasé complexo. Uma causa primária do aparecimento de rugas éuma formação de uma placa tóxica de radicais livres que seliga ao colagénio e às fibras de elastina, dando origem aque a estrutura de suporte da pele se torne inflexível edoente. Aparecem as linhas do riso, do sorriso, pés degalinha ou rugas faciais em áreas em que ocorrem movimentosmusculares repetidos. Por conseguinte, seria desejável poder-se fornecer à pele agentes de captura de radicaislivres. A toxina de botulina, o ácido hialurónico e osantioxidantes são apenas alguns exemplos de agentes ativosque é desejável fornecer à pele. Outros agentes ativospodem compreender inibidores de enzimas, vasodilatadores,perfluorcarbonetos, hormonas, fatores do crescimento,vacinas, medicamentos, pequenas moléculas, aminas,peróxidos, analgésicos e outros agentes terapêuticos. Osagentes que promovem a cura de feridas ou reduzem a dor sãotambém agentes ativos que seria desejável administraratravés da pele.

Nesta conformidade, havia uma necessidade de novos métodospara a estabilização de agentes ativos para a preparação decomposições tópicas e cosméticas. Havia igualmente umanecessidade de sistemas aperfeiçoados para o fornecimento àpele de agentes ativos. A presente invenção é dirigida aestas necessidades.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção é dirigida à necessidade de umfornecimento dermatológico melhorado de agentes ativos,mediante a provisão de um método para a estabilização dosagentes ativos para a armazenagem à temperatura ambiente epara melhorar a permeação dos ingredientes ativos na pele.A invenção também fornece composições preparadas mediante autilização do método para o fornecimento tópico de pelomenos um agente ativo.

Num aspeto da invenção, o método compreende a encapsulaçãode um agente ativo num revestimento de tipo micela, de natureza de fosfolipido. 0 agente ativo é em seguidamisturado com uma solução contendo colagénio e elastina.

Num outro aspeto da invenção, é revelada uma composiçãopara o fornecimento tópico de pelo menos um agente ativo. Acomposição compreende o agente ativo numa micela defosfolipido, colagénio e um veiculo aceitável. A composiçãoinclui também elastina, de preferência elastina reticulada,de baixo peso molecular.

Numa forma de realização preferida, o agente ativo éescolhido de um grupo que consiste em um agente deparalisação muscular, ácido hialurónico, vitamina A,vitamina C, vitamina E, zinco, selénio, licopeno, N-acetil-cisteína, extratos vegetais naturais de casca de uva,arando e chá verde, vasodilatadores, hormonas, fatores docrescimento, inibidores de enzimas, agentes de vacinas,medicamentos, proteínas terapêuticas, pequenas moléculas,agentes anti-transpiração, aminas, peróxidos, analgésicos ecombinações dos mesmos.

Os fosfolípidos preferidos incluem esfingosina ecerebrosídeos. Numa variante preferida de realização, amicela compreende tanto esfingosina como cerebrosídeos.Numa forma de realização particular a esfingosina e oscerebrosídeos são combinados em quantidades iguais.

Numa outra forma de realização preferida, a composição dapresente invenção compreende ainda um promotor de absorção.0 promotor pode ser escolhido do grupo que consiste em d-limoneno, alantoína, ácido fúlvico, mirra, hidroquinona-glicina, quillaja saponária (QTS), e acanthophyllumsquarrusom (ATS).

Numa outra forma de realização preferida, a composição éformulada num formato escolhido no grupo que consiste em umcreme, uma loção, uma composição para pulverização, umapomada, um gel, uma máscara em pó, uma pasta, um agente delimpeza, e uma base. A composição pode incluir opcionalmente um aditivoescolhido no grupo que consiste em um perfume, corante,espessante, óleo vegetal, emulsionante, solvente, agente deregulação do pH, agente antissético, conservante, vitamina,protetor solar, agentes tensioativos e combinações dosmesmos.

Numa forma de realização preferida, a presente invençãofornece uma composição que compreende: aproximadamente 1 a 40% em peso de colagénio;aproximadamente 1 a 40% em peso de elastina;aproximadamente 0,1 a 15% em peso do fosfolipidoesfingosina; e aproximadamente 0,1 a 15% em peso do fosfolipidocerebrosideo.

Num outro aspeto, a presente invenção revela um método paraa preparação de uma composição estabilizada do agenteativo. O método compreende os passos de: i. a preparação de uma solução de fosfolipido,compreendendo um fosfolipido num solvente; ii. a mistura da solução de fosfolipido com umagente ativo, de modo a formar uma solução doagente ativo encapsulada numa micela defosfolipido; e iii. a combinação da solução da micela com umasolução de colagénio solubilizado e elastina.

Numa forma preferida da realização do método, o fosfolipidoé escolhido no grupo que consiste em esfingosina,cerebrosídeo e combinações dos mesmos. Maispreferivelmente, a esfingosina e o cerebrosídeo são usadosem quantidades iguais.

Numa outra forma de realização preferida, o solvente usadoé um álcool. Os álcoois preferidos incluem o isopropanol,etanol, e misturas dos mesmos.

Numa outra forma de realização preferida, a solução decolagénio solubilizado e elastina compreende quantidadesiguais de colagénio e elastina.

Os agentes ativos que podem ser usados no método dainvenção compreendem a toxina de botulina, ácidohialurónico, vitamina A, vitamina C, vitamina E, zinco,selénio, licopeno, N-acetil-cisteína, extratos vegetaisnaturais de casca de uva, arando e chá verde,vasodilatadores, hormonas, fatores do crescimento, agentesde vacinas, medicamentos, proteínas terapêuticas, pequenasmoléculas, agentes anti-transpiração, agentes analgésicos ecombinações dos mesmos. Os agentes ativos preferidos parautilização no método são o ácido hialurónico e/ou a toxinade botulina. 0 método da presente invenção pode incluir o passoadicional de se adicionar um composto potenciador dapermeação. 0 composto potenciador é escolhido depreferência no grupo que consiste em d-limoneno, alantoína,ácido fúlvico, mirra, hidroquinona-glicina, quillajasaponária, e acanthophyllum squarrusom.

Num método preferido da invenção, são usados cerca de 0,1 a15% (p/p) da esfingosina e cerca de 0,1 a 15% (p/p) docerebrosideo para formar o revestimento micelar.

Num outro método preferido, são adicionados ingredientesadicionais para formar um creme, uma loção, um gel, umapomada ou uma composição para pulverização.

Num outro aspeto da invenção, é revelado um método para otratamento da pele. O método compreende a aplicação diáriada composição acima descrita, em áreas da pele que estejamenrugadas ou danificadas. A presente invenção é aplicada a muitos dos problemas datécnica anterior. Por exemplo, a toxina de botulina eoutros ingredientes ativos podem ser fornecidos seminjeções dolorosas. As composições da presente invençãopodem ser usadas com segurança em áreas tais como agarganta e o pescoço, em torno da boca, na vizinhança dosolhos e nas mãos. As composições podem ser formuladas comoum creme ou loção e podem ser conservadas à temperaturaambiente durante longos períodos de tempo, sem qualquerperda de atividade do ingrediente ativo. Uma vantagem dométodo da presente invenção é o facto de este eliminar anecessidade da utilização, como agentes de estabilização,de produtos derivados do sangue. Além disso, os métodos ecomposições da presente invenção têm custos utilizáveis esão simples de usar. Em vez de ser fornecida de uma só vez,em um único local, uma dose única grande, os métodos e ascomposições da presente invenção permitem que o agenteativo seja administrado diariamente, em baixas doses, paraproporcionar um tratamento eficaz com segurança acrescida eefeitos colaterais reduzidos.

Algumas das composições da invenção são úteis para reduzirlinhas finas e rugas, aumentar o nivel de hidratação dapele, aumentar a elasticidade e a resiliência da pele,aumentar a firmeza da pele, melhorar o tónus, a textura e aradiância global da pele, para diminuir os inchaços sob osolhos, rejuvenescer a pele, evitar os danos da pressãoquímica, proteger a pele dos danos causados por raios UV eradicais livres, promover a cura de feridas e remover apigmentação irregular. Composições específicas da invençãopodem ser úteis para o tratamento de dores.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Estas e outras caraterísticas da invenção tornar-se-ão maisevidentes a partir da descrição seguinte, em que é feitareferência aos desenhos anexos, e nos quais: a figura 1 ilustra uma análise em gel de poliacrilamida SDSda toxina de botulina estabilizada; as figuras 2A e 2B ilustram análises Western Blotrepresentativas da composição da toxina de botulina dainvenção; as figuras 3A a 3D são fotografias de pacientes tratadoscom a composição da toxina de botulina da presenteinvenção; a figura 4 é uma série de fotografias de pacientes tratadoscom a composição de HA da presente invenção.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA A presente invenção apresenta métodos para a preparação deuma composição farmacêutica ou cosmética, para o fornecimento tópico melhorado de pelo menos um agenteativo, e composições preparadas por esses métodos. 0 método da invenção compreende a encapsulação de um agenteativo numa micela de fosfolipido. Em seguida, a solução damicela é, de preferência, combinada com uma composição debase que inclui colagénio. Resumidamente, o fosfolipido édissolvido num solvente apropriado, tal como um álcool. Porexemplo, o fosfolipido pode ser dissolvido em etanol ounuma mistura de etanol e isopropanol. 0 álcool é removido,por exemplo, por evaporação em evaporador rotativo, sobvácuo. É então adicionada uma solução aquosa contendo oagente ativo. Deste modo, o agente ativo fica encapsuladopor uma estrutura de micela de fosfolipido. Esta soluçãopode ser combinada em seguida com uma solução de base, quecontém colagénio. Descobriu-se também que era vantajosoincluir elastina na composição de base, em especialelastina reticulada, de baixo peso molecular. 0 colagénio pode atuar como um estabilizador. Além disso, ocolagénio contribui para melhorar a base subjacente aotecido e contribui para a hidratação. 0 colagénio tem acapacidade de penetrar na pele sem o auxilio de quaisquerpromotores de penetração.

Num método preferido da invenção, é também incluída aelastina. A elastina de baixo peso molecular é capaz depenetrar na pele sem o auxílio de quaisquer promotores depenetração. 0 complexo de colagénio e de elastina solúvel,de baixo peso molecular, em conjunção com um agente ativopotenciador da pele, tal como a toxina de botulina e oácido hialurónico, contribuem para diminuir o aspeto dasrugas.

Embora possam ser usados vários tipos de fosfolípidos paraformar as micelas, um fosfolípido preferido é uma X-esfingosina. 0 esfingolipido, ou 1-fosfato de esfingosina,foi reconhecido como uma molécula bioativa envolvida naregulação do crescimento, diferenciação, sobrevivência eguimiotaxia da célula, assim como na angiogénese eembriogénese. São também úteis na presente invenção outrasespécies de ceramidas ou esf ingolípidos, tais como a (N-acil-esfingosina) e a dihidroceramida (N-acil-esfingosina).É também um fosfolípido preferido a galactosilceramida(cerebrosídeo), um metabolito dos esfingolípidos. 0 cerebrosídeo é uma proteína relacionada com a mielina,que desempenha um papel importante na regulação docrescimento, na diferenciação, na sobrevivência e naquimiotaxia da célula. Os sulfatos de cerebrosídeo sãoconstituintes importantes das membranas. Tanto aesfingosina como o cerebrosídeo têm demonstrado serexcelentes fosfolípidos para utilização no método dapresente invenção. Embora qualquer destes fosfolípidospossa ser utilizado individualmente, são particularmenteeficazes as combinações de esfingosina e cerebrosídeo.Quando são usados em quantidades iguais, a esfingosina e ocerebrosídeo formam uma estrutura de micela que proporcionaum veículo muito eficaz para o fornecimento de agentesativos. São também altamente eficazes outros fosfolípidos,tais como a fosfatidil-colina ou a fosfatidil-serina, querisoladas ou em combinação. São igualmente úteis na invençãooutros fosfolípidos que possam formar uma estruturamicelar.

De acordo com um método preferido da invenção, é produzidauma composição estabilizada por meio da combinação dequantidades iguais de colagénio e de elastina de baixo pesomolecular num solvente, tal como o soro fisiológico. Num balão separado, são dissolvidas num álcool, de preferênciaetanol, quantidades iguais de esfingosina e cerebrosideo. 0álcool é removido em seguida por evaporação sob vácuo, emevaporador rotativo. 0 resultado é a formação de umrevestimento de esfingosina e cerebrosideo sobre o balão. Éadicionada ao balão uma solução que contém o agente ativo.Daqui resulta a formação de micelas de esfingosina,cerebrosideo e agente ativo. A composição micelar éadicionada á mistura de colagénio e elastina, e é agitada.Esta composição pode ser conservada em seguida àtemperatura ambiente.

Numa outra forma de realização preferida, a composiçãocompreende cerca de 1 a 40 % em peso de colagénio, 1 a 40%em peso de elastina, 0,1 a 15% em peso de esfingosina e 0,1a 15% em peso de cerebrosideo e agente ativo.

Podem ser também incluídos componentes adicionais quemelhorem a estabilidade ou facilitem a absorção/penetração.Podem ser ainda incluídos outros componentes adicionaispara formular a composição num formato tal como um creme,uma loção, um produto para pulverização, uma máscara, umgel, etc., que seja apropriado para administração tópica.São incluídos facultativamente ingredientes que melhorem aapetência da composição, tais como corantes, fragrâncias,emolientes, etc. A composição pode ser também incorporadaem formulações de maquilhagem, tais como bases ou bálsamospara os lábios.

Podem ser incorporados estabilizadores que auxiliem aconservação ou a manutenção da estrutura biológica (isto é,a conformação tridimensional) e/ou a atividade biológica deum agente ativo. Os estabilizadores podem ser proteínas oupolissacarídeos. Os exemplos de estabilizadores deproteínas incluem hidroxietil-amido ("hetastarch”), gelatina, colagénio, ou colagénio. 0 estabilizador primáriopode ser um agente sintético que não induza uma respostaimune, ou induza uma resposta imune atenuada, num paciente.Podem ser também incluídos estabilizadores adicionais numacomposição. Estes estabilizadores adicionais ouestabilizadores secundários podem ser usados isoladamenteou em combinação com estabilizadores primários. Os exemplosde estabilizadores secundários incluem, sem estaremlimitados a estes, derivados não oxidantes de aminoácidos(tais como um derivado de triptofano, tal como N-acetil-triptofano ("NAT")), caprilatos (isto é, caprilato desódio), um polissorbato (isto é, P 80), aminoácidos, ecatiões de metais bivalentes, tais como zinco. Umacomposição pode incluir também agentes conservantes, taiscomo, álcool benzílico, ácido benzóico, fenol, parabenos eácido sórbico, ou um cresol, tal como um m-cresol.

Podem ser também incluídos nas composições da invençãoagentes estimulantes que promovam a absorção de um agenteativo pela pele. Os exemplos de agentes estimulantesincluem, sem estarem limitados a estes, álcoois, tais comoálcoois de cadeia curta, álcoois de cadeia longa, oupoliálcoois, aminas e amidas, tais como ureia, aminoácidosou os seus ésteres, amidas, AZONE(R)), derivados deAZONE(R)), pirrolidonas, ou derivados de pirrolidonas;terpenos e derivados de terpenos; ácidos gordos e os seusésteres; compostos macrocíclicos; meios tensioativos; ousulfóxidos, tais como decilmetilsulfóxido. Podem tambématuar como agentes estimuladores lipossomas, transfersomas,vesículas de lecitina, etosomas, meios tensioativos daágua, tais como meios tensioativos aniónicos, catiónicos enão iónicos, polióis, e óleos essenciais.

Numa forma de realização da invenção, é incluído o d-limoneno na composição para promover a penetração de um agente ativo através da camada da derme. O limoneno provouser um promotor eficaz a 0,30%, favorecendo a penetração napele da toxina de botulina tipo A, aproximadamente quatrovezes mais.

Numa outra forma preferida de realização da invenção, éincluída alantoína na composição. A alantoina atua como umprotetor da pele e como um promotor neutro e suave depermeação na pele.

Numa outra forma preferida de realização é incluído ácidofúlvico na composição. O ácido fúlvico é um antioxidante debaixo peso molecular, que favorece a absorção demedicamentos pelo corpo através da via transdérmica, semquaisquer efeitos colaterais. A mirra é um outro ingrediente opcional na preparação de umcreme para a pele, de acordo com a invenção. A mirra é umaresina tipo goma extraída de arbustos da Arábia e daSomália, que contribui para suavizar os tecidos inflamadose a rejuvenescer a pele, o cabelo e as unhas.

Pode ser também incorporado o "eldopaque" ou hidroquinona-glicina. É usada para clarear as manchas de cor escura dapele causadas pelas pílulas de controle anticoncecional,medicamentos de hormonas, lesões da pele, ou simplesmente oenvelhecimento. Pode ser incorporada conjuntamente com umprotetor solar para prevenir que estas manchas voltem aocorrer em consequência da exposição à luz solar ou àradiação UV.

As saponinas totais quillaja saponária (QTS) eacanthophyllum squarrusom (ATS) são dois agentesestimuladores naturais que podem ser também incluídos numa composição da invenção. Demonstraram uma atividade moderadacomo promotores de penetração na pele.

Os agentes potenciadores podem ser incluídos em váriasfases do processo. Podem, por exemplo, ser adicionados àcomposição estabilizada ao mesmo tempo que a composiçãomicelar é adicionada à mistura de colagénio e elastina. Oscompostos potenciadores são introduzidos numa formulaçãofarmacêutica ou cosmética, de preferência, durante aformulação da composição estabilizada. A preparação de umexemplo de formulação para aplicação tópica é descrita noExemplo 3 adiante.

As composições tópicas preparadas de acordo com os métodosda invenção proporcionam sistemas eficazes para ofornecimento dermatológico de agentes ativos. Num aspeto, apresente invenção revela uma composição para o fornecimentopreferido da toxina de botulina. As toxinas de botulinatipo A, tipo B, tipo C, tipo D, tipo E, tipo F e/ou tipo Gpodem ser formuladas de acordo com o método da invenção,numa composição para o fornecimento tópico. 0 método dapresente invenção, baseado na utilização de colagénio emcombinação com a proteína de ligação da elastina (EBP) e emmistura com a esfingosina e o cerebrosídeo mantém aintegridade do complexo, sem o desnaturar ou fragmentar oudesintoxicar. A toxina de botulina pode ser estabilizadadeste modo, usando os métodos da pressente invenção, e atoxina estabilizada pode ser fornecida com êxito por viatransdérmica, para se obterem resultados semelhantes aosque são obtidos por injeção intramuscular da toxina debotulina. A formulação pode ser aplicada em toda a face eno pescoço e mãos, ao contrário de uma injeção da toxina debotulina, que é dirigida principalmente a áreas em tornodos olhos e na testa, para reduzir as rugas. Uma outra vantagem é o facto de as proteínas, como o colagénio, aelastina e as esfingomielinas, não serem imunogénicas. É descrito no exemplo 1, adiante, um método preferido paraa preparação de uma composição estabilizada de toxina debotulina. 0 método da presente invenção foi usado paraestabilizar a toxina de botulina A no formato de um creme,apropriado para a aplicação à pele. Em resumo, quantidadesiguais de colagénio e elastina são solubilizadas em sorofisiológico. Num balão separado são dissolvidas em álcoolquantidades iguais esfingosina e de cerebrosídeo. Emseguida, o álcool é removido. A toxina de botulina A édissolvida em soro fisiológico e é depois adicionada aobalão, e o balão é agitado vigorosamente de modo a cobrir aproteína da toxina de botulina com um revestimento demicela de fosfolípido. Esta solução é adicionada em seguidaà solução de colagénio e elastina. As figuras 1 e 2ilustram análises SDS-PAGE e "Western blots" de composiçõesde toxina de botulina estabilizada. É perfeitamenteevidente que este método pode ser usado para prepararcomposições que tenham outros tipos de toxina de botulina. A presente invenção revela uma composição que é capaz defornecer uma toxina de botulina através da pele de umapessoa. A composição contém um agente potenciador quefacilita a permeação da toxina de botulina através da peledo paciente. A composição é apropriada para a administraçãotópica num formato em que a composição penetre na pele epromova o desnervamento, por via transdérmica, de ummúsculo subjacente. A composição pode ser também fornecidanum penso que é fixado por colagem na pele, de forma que atoxina possa passar do penso e através da pele paradesnervar um músculo subjacente. As composições que contêma toxina de botulina e um agente potenciador podem serusadas para tratar com êxito vários tipos de distúrbios associados à libertação de um neurotransmissor, quando éaplicado na pele de uma pessoa. Os exemplos de distúrbiossensíveis ao tratamento por meio da administração tópicadas composições aqui apresentadas incluem, sem estarlimitados a estes, rugas, rugas das sobrancelhas, dores decabeça, tais como a enxaqueca, cefaleias, distoniacervical, distonia de mão focal, inflamação neurogénica,hiperhidrose, blefarospasmo, estrabismo, espasmohemifacial, distúrbios das pálpebras, paralisia cerebral,espasticidade focal, espasticidade dos membros, tiques,tremores, bruxomania, fissura anal, fibromialgia, disfagia,lacrimação, e dores de espasmos musculares. As composiçõesaqui reveladas proporcionam alivio localizado através dofornecimento da a toxina de botulina.

As composições e formulações da invenção são úteis parareduzir os sinais do envelhecimento. Foram conduzidosensaios clínicos utilizando uma formulação de creme tópicoque continha a toxina de botulina. Os pormenores dosensaios podem ser encontrados no exemplo 4, adiante. Comose pode ver nitidamente nas fotografias "antes" e "depois",na figura 3, a administração tópica do creme estabilizadoda toxina de botulina reduz significativamente os sinais doenvelhecimento. Foram também avaliados os efeitos, sobre ossinais de envelhecimento, de uma composição que continhaácido hialurónico. Como se mostra na figura 4, a composiçãode ácido hialurónico foi altamente eficaz.

Num outro aspeto da invenção, é apresentada uma formulaçãofarmacêutica ou cosmética, contendo uma quantidade eficazde um agente ativo e uma quantidade eficaz da composiçãopromotora da estabilização, e um veículo farmaceuticamenteaceitável, apropriado para a administração tópica outransdérmica. A formulação pode encontrar-se em qualquerforma adequada para a aplicação na pele. Pode, por exemplo, tomar a forma de um creme, de uma loção, de um gel, de umapomada, de uma pasta ou de uma solução. A formulação podeincluir lipozonas, micelas ou microsferas. A formulaçãopode ser uma composição cosmética que, além dosestabilizantes e dos ingredientes ativos, inclua água eoutros aditivos que são normalmente usados em cosméticos.Pode incluir, por exemplo, agentes espessantes,conservantes, emulsionantes, aromas, corantes ou pigmentos,óleos vegetais ou minerais, agentes antisséticos, agentesacidificantes ou alcalinizantes, vitaminas, agentes anti-UV, meios tensioativos, solventes, agentes estabilizadoresdo pH, e outros ingredientes ativos conhecidos por seremeficazes sobre a pele. A composição cosmética pode sertambém fornecida como uma base para a pele, bálsamo para oslábios, etc.

Os métodos da presente invenção podem ser também usadospara se prepararem composições para o fornecimento tópicodo ácido hialurónico. Podem ser encontrados no exemplo 6,adiante, os pormenores de um método preferido para apreparação de uma composição compreendendo ácidohialurónico. Em resumo, quantidades iguais de colagénio ede elastina são dissolvidas em soro fisiológico. Num balãoseparado são dissolvidas num álcool quantidades iguais deesfingosina ou fosfatidil-colina e cerebrosídeo oufosfatidil-serina. 0 álcool é removido em seguida. 0resultado é a formação de um revestimento de esfingosina ecerebrosídeo sobre o balão. Em seguida é adicionada aobalão uma solução de ácido hialurónico ou de hialuronato desódio, e o balão é agitado vigorosamente de modo a cobrir oagente ativo. Esta solução é adicionada em seguida àsolução de colagénio e elastina. As fotografias queilustram os efeitos do tratamento com esta composição sãoapresentadas na figura 4. Nesta composição, o colagénio e a elastina são incorporados como componentes opcionais, paraestimular a cura da pele.

Podem ser fornecidos outros agentes ativos para estimular apele, através de métodos e de composições da presenteinvenção, que incluem vários tipos de antioxidantes. Algunsexemplos de agentes de captura de radicais livres, quepodem ser incorporados nas composições da invenção,incluem, sem estar limitados a estes, as vitaminas A, C eE, os minerais zinco e selénio licopeno, o aminoácido N-acetil-cisteína e extratos vegetais naturais de casca deuva, arando e chá verde.

Num outro aspeto da invenção, o sistema de fornecimento dapresente invenção pode ser usado para fornecer agentes quepromovam a cura. Por exemplo, os vasodilatadores, tais comonitroglicerina e mononitrato de glicerina podem serencapsulados numa micela de fosfolípido e em seguidacombinados com colagénio e/ou elastina numa formulação deloção ou creme, e ser aplicados à pele. Sem que se estejalimitado pela explicação, crê-se que a formulação devasodilatadores numa composição tópica de acordo com ainvenção melhora a taxa de penetração, em comparação com avia de administração, por exemplo, um penso na pele. Ainclusão de peróxido de hidrogénio e/ou de umperfluorcarbono podem melhorar ainda mais a oxigenação e acura.

Os métodos da invenção provaram ser úteis para a formulaçãode agentes muito diferentes, por exemplo, a toxina debotulina e HA. É razoável concluir-se que os métodos e ascomposições da presente invenção podem ser também usadospara fornecer eficientemente à pele outros agentes ativos.Os exemplos de outros agentes ativos incluem outros agentesque paralisam os músculos, hormonas, fatores do crescimento, agentes de vacinas, medicamentos, proteínasterapêuticas, moléculas pequenas e agentes anti-transpiração. Os métodos da presente invenção podem sertambém usados para formular composições para o tratamentode dores, compreendendo como agente ativo analgésicos.

Os exemplos de outros agentes ativos que podem serfornecidos em composições da invenção incluem, sem estarlimitados a estes, androgénios, androstenediol eandroisoxazóis (para distúrbios anabólicos), testosterona(hipogonadismo, músculos debilitados, impotência do homem,sintomas pós-menopausa na mulher), desidrotestosterona,(hipogonadismo, músculos debilitados), desidroepiandro-testosterona, (músculos debilitados, redução de gorduras,ginástica); estrogénios (sintomas pós-menopausa, controleanticoncecional), 17-beta-estradiol, 3,17-diacetato deestradiol, 3-acetato de estradiol, 17-acetato de estradiol,3,17-valerato de estradiol, 3-valerato de estradiol, 17-valerato de estradiol, etinil-estradiol, estrona;progesteronas (prevenção da endometriose, prevenção docancro do endométrio, controle do aborto habitual,supressão ou sincronização do desejo sexual, promoção docrescimento do cabelo), progesterona (pregna-4-eno-3,20-diona), noretinodrona, norgestrienona, norgestadienona,norgestrel, norgestimate, ácido progestogénico,dihidroprogesterol, nomagesterol. A hormona testosteronapode ser usada em qualquer das suas formas habituais, taiscomo acetato, propionato, 17-beta-ciclopentanopropionato,enantanato, isobutirato, undeconato, e semelhantes,analogamente, os estradióis podem ser usados adicionalmenteem qualquer das formas conhecidas ou recentementedesenvolvidas, tais como, por exemplo, pivalato,propionato, cipionato, benzoato ou outros ésteres. Podemser fornecidos outros medicamentos, utilizando ascomposições da presente invenção, tais como insulina, fatores do crescimento, de tipo insulina, vacinas,peptideos, como GLP, IGF, heparina, hirugéneo, hirulos,huridina, vacinas contra a papeira, sarampo e rubéola,vacina contra a febre tifoide, vacina contra a hepatite A,vacina contra a hepatite B, contra o virus herpes simplex,contra toxoides bacterianos, subunidade B da toxina dacólera, vacina da gripe, "bordetala pertussis" virusvaccinia, adenovirus, doenças pustulosas, virus da vacinada polio, "plasmodium falciparum", bacilo calmette geurin(BCG), "klebsiella pneumoniae", glicoproteinas do invólucrode VIH, somatripona de bovinos, estrogênios, androgénios,fatores de crescimento insulinicos, interleuquina-I,interleuquina-II e citoquinas, medicamentos de pequenasmoléculas, tais como NSAJD, narcóticos, etc..

As composições da presente invenção podem conter, na mesmacomposição, um único agente ativo ou múltiplos agentesativos. Por exemplo, uma composição para o fornecimento porvia tópica pode compreender a toxina de botulina, ou ácidohialurónico, ou ambos, encapsulados em micelas. Sãoconsideradas várias combinações de agentes ativos parainclusão nas composições da invenção. A presente invenção foi descrita com vista a uma ou maisformas de realização. No entanto, é evidente para osperitos na técnica que podem ser feitas algumas alteraçõesou modificações, sem que se afastem do âmbito da invenção,tal como é definida nas reivindicações. A apresentação acima descreve genericamente a presenteinvenção. Pode ser obtido um entendimento mais completo comreferência aos exemplos concretos a seguir. Estes exemplossão descritos unicamente com a finalidade de ilustração enão são entendidos como limitativos do âmbito da invenção.Estão previstas alterações na forma e a substituição de equivalentes, conforme as circunstâncias possam sugerir outornar conveniente. Embora tenham sido aqui usados termosespecíficos, estes termos são entendidos num sentidodescritivo e não com fins limitativos.

EXEMPLOS

Os exemplos são descritos com a finalidade de ilustração enão são entendidos como limitativos da invenção. EXEMPLO 1. Preparação de composições de toxina de botulina

Os frascos da toxina de botulina (BOTOX™) foram reconstituídos a partir de solução esterilizada de sorofisiológico (0,9%). Os frascos foram agitados vigorosamentepara dissolver a toxina de botulina. Os frascosreconstituídos foram mantidos arrefecidos e foram utilizados durante a primeira hora de reconstituição.

Num balão de fundo redondo, de 50 mL de capacidade, foramcombinados 10 mg de colagénio solúvel e 10 mg de elastina.A mistura foi dissolvida em 10 mL de solução esterilizadade soro fisiológico (0,9%), mediante agitação contínua. Numbalão separado, de fundo redondo, de 50 mL, foramcombinados 5 mg de esfingosina e 5 mg de cerebrosídeo. Estamistura foi dissolvida em etanol puro. O álcool foiremovido completamente por evaporação sob vácuo, emevaporador rotativo, para se obter um revestimento uniformede esfingosina e de cerebrosídeo na parede do balão. Foramadicionados a este balão, em seguida, 800 unidades desolução de toxina de botulina em 6 mL de soro fisiológico(a 0,9%). O balão foi agitado vigorosamente e depois foiagitado 5 minutos à temperatura ambiente para revestiruniformemente a toxina de botulina com o revestimento demicelas de esfingosina e cerebrosídeo. Esta solução de toxina de botulina, revestida e preservada na formamicelar, foi depois adicionada ao balão que continha amistura de colagénio e elastina reticulada, de baixo pesomolecular. A solução foi agitada durante cerca de 5 minutose em seguida foi conservada à temperatura ambiente numfrasco de vidro castanho.

Exemplo 2. Análises por SDS-PAGE e Western blot A estabilidade da solução de toxina de botulina conservadafoi analisada por técnicas analíticas convencionais, usandoa análise SDS-PAGE e Western-blot, e análise HPLC noinstante zero (poucos minutos depois da preparação dasolução revestida estabilizada) e em seguida todos osmeses. A preparação foi comparada com a solução nãorevestida de toxina de botulina. A análise SDS-PAGE foi realizada, em todos os casos, emcondições de redução, com um dispositivo BioRad Mini-cell(BioRad, Calif.) com 10% de geles de tricina pré-fundidos.A toxina de botulina recém-diluída (amostra pura diluídacom soro fisiológico) foi carregada numa pista e a toxinade botulina estabilizada foi carregada numa segunda pista.Ambas as pistas foram carregadas com cerca de 100 unidadesda toxina. 0 tampão de carga, o tampão do tanque e osmarcadores de peso molecular foram obtidos dos LaboratóriosBioRad. As bandas de proteína foram visualizadas pelatécnica da coloração com azul de "Coomassie". Aconcentração (densidade) da proteína dos geles SDS depoliacrilamida foram medidas com um sistema dedensitometria BioRad e foram analisadas com o analisadornormalizado de "software" de imagiologia. A comparação dasbandas de toxina de botulina A, ou seja, a toxina debotulina pura sem estabilização, e a toxina de botulinaestabilizada, revelou ausência de degradação na toxina de botulina estabilizada, que foi mantida à temperaturaambiente durante 6 meses. Os resultados são apresentados nafigura 1.

Análise Western blot

Para a análise Western blot, as proteínas separadas nosgeles de poliacrilamida SDS foram transferidas paramembranas de nitrocelulose a 25 V por 60 mm, usando ummódulo de coloração de proteínas BioRad. Depois datransferência completa da proteína do gel, os pontos deligação da proteína sobre as membranas foram bloqueados porincubação à temperatura ambiente em leite desnatado a 5%-soro fisiológico tamponizado com Tris (TBS) durante 60 mm.Em seguida as membranas foram incubadas à temperaturaambiente com MAb purificado por afinidade, produzido contraa toxina de botulina a 5 yg/mL em 5% de leite desnatado-TBSdurante 4 h. Depois de várias lavagens com o tampão TBS, asmembranas foram incubadas à temperatura ambiente com IgGanti-rato de cabra, purificado por afinidade (Sigma) a 4yg/mL em tampão 5% de leite desnatado-TBS, durante 3 horas.Depois de outras 4 a 5 lavagens com o tampão TBS, asmembranas foram incubadas com substrato de membrana de TMB[3,3' , 5,5']-tetrametilbenzidina (Laboratórios BioRad) atéao desenvolvimento da cor. Esta análise revelou que, ao fimde 6 meses, a toxina de botulina à temperatura ambiente eraestável e não se encontrava degradada nem desnaturada. Osresultados dos dois Western-blots apresentados comoexemplos são exibidos nas figuras 2A e 2B.

Exemplo 3. Formulação de creme de toxina de botulina A composição de toxina de botulina estabilizada foiformulada na forma de um creme para administração tópica,como será exposto a seguir.

Volume total do creme (400 mL)

Fase A: Água desionizada 74,7% EDTA tetrassódico 0,5-0,7% metil-parabeno 0,2% propilenoglicol 3,0%-4,0% glicerina 3,0%-4,0%

Fase B: Álcool cetilico (Ado 1 52 NE) 2,0% Álcool cetearilico 2,0%

Estearato de glicerilo 2,0%

Estearato de PEG-100 1-2% Ácido esteárico (Emersol 132) 4,5%

Palmitato de sorbitano 0,5-0,7%

Polissorbato 85 1,0%

Polissorbato 60 0,5-1,0% Álcool lanolina (Ritachol) 1,0% Óleo HoHoba 0,5-1%

Lanolina 1-2% acetato de tocoferilo 0,5-1%

Dimeticona 200 0,7-1,0% BHA 0,1%

Propilparabeno 0,1%

Diazolidinil-ureia 0,2%

Fase C:

Fragrância (lilás, jasmim) conforme necessário

Aloe Vera (pó) l,5%-2,0%

Co-QlO 0,5%

Retinil A 0,03-0,05% Ácido hialurónico (puro) 1,0-1,5% Pó de talco (TÍO2) 1,0-1,5%

Fase D: d-limoneno 0,7%

Alantoína 0,5% Ácido fúlvico 0,5%

Quillaja saponária (QTS) 0,3%

Acanthophyllum squaimsom (ATS) 0,3%

Extrato de mirra 0,2%

Hidroquinona-glicina 4,0%

Fase E:

Toxina de botulina estabilizada em matriz de colagénio 800 unidades

Procedimento:

Aquecem-se a Fase A e a Fase B separadamente, sob agitaçãoa 75 °C. Adiciona-se a Fase A à Fase B e mistura-se durante30 minutos a 75 °C. Arrefece-se até 20-22 °C e em seguidaadicionam-se as Fases C, D e E e continua-se a agitar atéestar homogéneo e numa só fase.

Exemplo 4. Estudos clínicos em pacientes humanos A eficácia da toxina de botulina estabilizada (botox) foiensaiada, usando-se uma formulação de creme. Pacienteshumanos com rugas aplicaram o creme durante um período deum mês ou mais. Os pacientes foram fotografados antes edepois de um mês da aplicação do creme na sua face. A toxina de botulina tipo A não estava presente no sangueperiférico em níveis mensuráveis após a aplicação dérmicado creme à dose baixa de 1,7 unidades por mL do creme. Cadafrasco de creme continha 50 unidades de toxina de botulinaem 30 mL de creme. As quantidades recomendadas daneurotoxina administradas em cada tratamento (de manhã e à hora de deitar) não tiveram como resultado efeitos clínicossistémicos adversos, isto é, fraqueza muscular, empacientes sem outra disfunção neuromuscular.

Exemplo 5. Estudos clínicos: avaliação das linhas qlabelares

Foi realizado, em um grupo paralelo, um estudo aleatório decentro simples, duplamente cego, controlado por placebo (ocreme placebo continha todos os ingredientes, exceto atoxina de botulina), para se avaliar a eficácia do creme detoxina de botulina estabilizada da invenção para utilizaçãona melhoria temporária do aspeto de linhas faciaisglabelares moderadas a graves. 0 estudo envolveu 40pacientes adultos (idades 40 a 75 anos, femininos oumasculinos) com linhas glabelares de gravidade pelo menosmoderada, no máximo franzidas. Foram excluídos pacientesque tivessem uma infeção ou problemas de pele, historial deparalisia dos nervos faciais, assimetria facialpronunciada, ptose, dermatocalázio excessivo, cicatrizesprofundas da derme, pele sebácea espessa, incapacidade parasubstancialmente menos linhas glabelares, mesmo afastando-as fisicamente, ou tinham um historial conhecido dedistúrbios neuromusculares ou de outros distúrbios quepudessem interferir com a função neuromuscular. Foi pedidoaos pacientes que aplicassem o creme duas vezes por dia,uma vez de manhã e ao deitar, durante um mês. Os pacientesforam instruídos para, primeiro, lavarem bem o rosto comágua quente e sabonete, para remover das suas faces o suor,sujidade e óleos. Foram ensinados a aplicar o creme detoxina de botulina estabilizada ou o creme placebo, com oaplicador fornecido, em torno dos seus olhos, testa epescoço, ou sobre as áreas da pele com rugas, de modo aevitar qualquer contaminação do produto pelas mãos. Todosos pacientes foram examinados antes do início do estudo por um dermatologista qualificado e foram declarados saudáveis,e aptos a participar no estudo. Foram fotografados antes doinicio do estudo. Pediu-se a todos os pacientes queprosseguissem a sua rotina diária normal sem qualquerrestrição, e pediu-se-lhes que fizessem o seu estilo devida normal.

As medições primárias de eficácia foram a classificação doinvestigador da gravidade das linhas glabelares, no máximofranzidas, no 30° dia pós-tratamento, e a avaliação globaldo paciente quanto a alterações no aspeto das linhasglabelares no 30° dia pós-tratamento. Para a classificaçãodo investigador foi fornecido a cada centro de estudo umguia fotográfico para auxiliar a escalonar a gravidade daslinhas glabelares, utilizando uma escala de classificaçãode 4 pontos (0 = nenhuma; 1 = ligeira; 2 = moderada; 3 =grave) . Foi definido um respondedor como tendo um grau degravidade de 0 ou 1. Para a avaliação global da alteraçãodo aspeto das linhas glabelares, o paciente deveriaresponder à questão: "como classificaria a alteração doaspeto das suas linhas glabelares, em comparação com omesmo imediatamente antes do seu tratamento com o creme nãoinvasivo de toxina de botulina?" As classificações dasrespostas pelos pacientes variaram de +4 (melhoria total,cerca de 100%) até -4 (agravamento muito pronunciado, cercade 100% pior ou superior). Foi definido um respondedor comotendo um grau de pelo menos +2 (melhoria moderada, cerca de50%) .

Um termo final secundário de eficácia foi a classificaçãodo investigador da gravidade da linha glabelar em repousono 30° dia pós-tratamento, nos pacientes em que mostravam,na linha base, um grau de gravidade da linha glabelar emrepouso de moderada ou grave. Para a classificação doinvestigador, o critério da eficácia foi uma diferença de pontos percentuais de 30 entre o creme da toxina debotulina estabilizada e os grupos de tratamento com oplacebo na incidência de pacientes com uma classificação doinvestigador da gravidade da linha glabelar de ligeira, nomáximo de franzida. Para a classificação do paciente, ocritério de eficácia foi uma diferença de 25 pontospercentuais entre o creme da toxina de botulinaestabilizada e os grupos de tratamento com o placebo naincidência de pacientes com uma classificação de pelo menos+2 (melhoria moderada) na avaliação global do paciente daalteração do aspeto das linhas glabelares.

Os resultados combinados são apresentados no Quadro 1,abaixo. Havia 40 pacientes (20 pacientes no grupo tratadocom o creme da toxina de botulina, e 20 pacientes no grupotratado com o creme do placebo) que tinham valores dagravidade da linha glabelar em repouso de moderadas ougraves. A idade média era de 54 anos, com uma faixa dos 40 aos 74anos. Destes, as maiorias eram de ^ 50 anos de idade e 6,0%eram > 65 anos de idade. A maior parte dos pacientes eramdo sexo feminino, 80% (32/40) e caucasianas, 83,8%.

Nestes estudos, a gravidade das linhas glabelares foireduzida em menos de 7 dias no grupo do creme da toxina debotulina, em comparação com o grupo do creme de placebo,quando medidas tanto pela classificação do investigador dagravidade da linha glabelar no máximo franzida e emrepouso, e pela classificação global dos pacientes daalteração do aspeto das linhas glabelares. No 10° dia, 80%(16/20) dos pacientes tinham alcançado um nível degravidade de ligeira, no máximo franzida, pela avaliação doinvestigador. Esta aumentou para 92% no dia do termo daeficácia primária do 30° dia, em comparação com os pacientes tratados com o placebo (Quadro 1) . No 10° dia,84% dos pacientes no grupo ativo classificaram o seupróprio aspeto com uma melhoria moderada ou melhor (+2 oumelhor). Este aumentou para 93% no dia do termo da eficáciaprimária do 30° dia, em comparação com 3% dos pacientestratados com o placebo. Com base no aspeto em repouso, talcomo é avaliado pelo investigador, 62% dos pacientesalcançaram um nivel de gravidade de nenhuma ou ligeira no11° dia, e 94% no dia do termo de eficácia do 30° dia.

Quadro 1

Dia creme Botox Placebo diferença valor p 7 7 6%(15/2 0) 3% (1/20) 73% < 0,0001 10 80%(16/20) 3% (1/20) 77% < 0,0001 20 88% (18/20) 5% (1/20) 83% < 0, 0001 30 94%(19/20) 5% (1/20) 89% < 0, 0001

Os resultados dos exemplos podem ser vistos nas fotografias"antes" e "depois" das figuras 3A a 3D.

Exemplo 6. Sistema de fornecimento de ácido hialurónico

Num balão de fundo redondo, de 50 mL de capacidade, forampesados 10 mg de colagénio solúvel, e 10 mg de elastina. Amistura foi dissolvida em 10 mL de solução esterilizada desoro fisiológico (0,9%). A mistura foi agitada continuamente. Num balão separado, de fundo redondo, de 50mL de capacidade, foram combinados 25 mg de esfingosina +25 mg de cerebrosideo (ou 20 mg de fosfatidil-colina + 25mg de fosfatidil-serina) e a mistura foi dissolvida emetanol puro ou numa mistura de isopropanol:etanol 70:30. Oálcool foi completamente removido por evaporação emevaporador rotativo, sob vácuo, para se obter um revestimento uniforme da mistura dos fosfolípidos sobre aparede do balão. Foram adicionados 500 mg de ácidohialurónico ou de solução de hialuronato de sódio em 50 mLde soro fisiológico (0,9%) . O balão foi agitadovigorosamente e em seguida foi agitado continuamente durante vários minutos, à temperatura ambiente. Destaforma, o ácido hialurónico foi revestido uniformemente como revestimento de micelas dos fosfolípidos. Esta soluçãomicelar de ácido hialurónico, revestida e preservada, foidepois adicionada ao balão que continha a mistura decolagénio e de elastina reticulada, de baixo pesomolecular. A solução foi agitada lentamente durante cercade 5 minutos e em seguida foi mantida à temperatura ambiente, num frasco de vidro castanho.

Exemplo 7. Preparação de um creme contendo HA encapsulada

Foram usados os seguintes componentes para se preparar umcreme para aplicação tópica:

Fase A: Água desionizada 74,7% EDTA tetrassódico 0,3-0,5% metil-parabeno 0,2% propilenoglicol 2,0%-3,0% alfa-hidróxiácido (ácido de frutos) l,0%-2,0% (Total 78,2%)

Fase B: Álcool cetílico (Ado 1 52 NF) 1,0-2,0% Álcool cetearílico 1,0-2,0%

Estearato de glicerilo 1,0-2,0%

Estearato de PEG-100 1-2% Ácido esteárico (Emersol 132) 4,5%

Palmitato de sorbitano 0,5-0,7%

Polissorbato 85 0,5-1,0% Óleo de HoHoba 2-5%

Lanolina 1-2% acetato de tocoferilo 0,3-0,5%

Dimeticona 200 0,5-0,7% BHA 0,1%

Propilparabeno 0,1%

Diazolidinil-ureia 0,2% (total 13,7%)

Fase C:

Fragrância (lilás, jasmim) conforme necessário

Aloe Vera (pó) 0,5-1,0%

Retinil A (puro) 0,03-0,05% Ácido hialurónico (micela) 1,0-1,5%

Colagénio+elastina 1,0-1,5% Pó de talco (Ti02) 0,1-0,3% (total 2,63%)

Fase D (promotores de absorção):d-limoneno 0,7%

Alantoina 0,5% Ácido fúlvico 0,5%

Quillaja saponária (QTS) 0,3%

Extrato de mirra 0,2%

Glicina (agente branqueador) 3,5-4,0% (Total 5,5%)

Exemplo 8. Estudos clínicos com o creme de HA

Este estudo foi realizado sob a supervisão de umdermatologista/cirurgião plástico. Os pacientes forampreviamente examinados atentamente e foram declaradossaudáveis. Foi-lhes dado um frasco do creme de ácidohialurónico e foram instruídos a aplicá-lo uma vez, ao anoitecer, durante 30 dias. Os pacientes foram instruídos aremover a sua maquilhagem e foi-lhes pedido que lavassem orosto com água quente e sabonete ou um agente de limpeza.Foi pedido aos pacientes que aplicassem o creme com oaplicador fornecido, sobre a área com rugas da face e dopescoço. Todos os pacientes foram fotografados antes edepois para se avaliar o efeito, no final do período de 30dias. Os resultados ilustrativos podem ser vistos nasfotografias que se mostram na figura 4.

Claims (27)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Composição para o fornecimento, por via tópica, de pelomenos um agente ativo, compreendendo a referidacomposição o agente ativo numa micela de fosfolipido,colagénio, elastina e uma substância veicularaceitável, em que a elastina é elastina reticulada, debaixo peso molecular.
2. 2. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que o agente ativo é escolhido no grupo que consiste em umagente paralisante, ácido hialurónico, antioxidantes,hormonas, fatores de crescimento, agentes de vacinas,medicamentos, vasodilatadores, proteínas terapêuticas,pequenas moléculas, aminas, peróxidos, agentes anti-transpiração, analgésicos, e combinações dos mesmos.
3. 3. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que a micela compreende esfingosina.
4. 4. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que a micela compreende cerebrosídeo.
5. 5. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que a micela compreende tanto esfingosina como cerebrosídeo.
6. 6. Composição de acordo com a reivindicação 5, em que a esfingosina e o cerebrosídeo são combinados emquantidades iguais.
7. 7. Composição de acordo com a reivindicação 1, compreendendo quantidades iguais de colagénio e deelastina.
8. 8. Composição de acordo com a reivindicação 1, compreendendo adicionalmente um promotor de absorção.
9. 9. Composição de acordo com a reivindicação 8, em que o promotor é escolhido do grupo que consiste em d-limoneno, alantoina, ácido fúlvico, mirra, hidroquinona-glicina, quillaja saponária (QTS) eacanthophyllum squarrusom (ATS).
10. 10. Composição de acordo com a reivindicação 2, em que oagente paralisante é a toxina de botulina.
11. 11. Composição de acordo com a reivindicação 2, em que oagente ativo é o ácido hialurónico.
12. 12. Composição de acordo com a reivindicação 10, compreendendo tanto a toxina de botulina como o ácidohialurónico.
13. 13. Composição de acordo com a reivindicação 1, formulada num formato escolhido do grupo que consiste em um creme, uma loção, um produto pulverizável, uma pomada,um gel, uma máscara em pó, uma pasta, um agente de limpeza, e uma base.
14. 14. Composição de acordo com a reivindicação 13, compreendendo um aditivo escolhido do grupo queconsiste em um perfume, corante, espessante, óleovegetal, emulsionante, solvente, agente para oajustamento do pH, agente antissético, conservante,vitamina, protetor solar, meios tensioativos ecombinações dos mesmos.
15. 15. Composição de acordo com a reivindicação 1,compreendendo: i. aproximadamente 1 a 40% em peso de colagénio; ii. aproximadamente 1 a 40% em peso de elastina; iii. aproximadamente 0,1 a 15% em peso do fosfolipido esfingosina; e iv. aproximadamente 0,1 a 15% em peso do fosfolipido cerebrosídeo.
16. 16. Método para a preparação de uma composição estabilizadade um agente ativo, compreendendo o referido método ospassos de: i. a dissolução de um fosfolipido num solvente, para a preparação de uma solução do fosfolipido; ii. a mistura da solução de fosfolipido com umagente ativo, de modo a formar uma solução doagente ativo encapsulada numa micela defosfolipido; e iii. a combinação da solução da micela com umasolução de colagénio solubilizado e deelastina reticulada, de baixo peso molecular.
17. 17. Método de acordo com a reivindicação 16, em que o fosfolipido é escolhido do grupo que consiste em esfingosina, cerebrosídeo e combinações dos mesmos.
18. 18. Método de acordo com a reivindicação 17, em que a esfingosina e o cerebrosídeo são usados em quantidadesiguais.
19. 19. Método de acordo com a reivindicação 16, em que o solvente é um álcool.
20. 20. Método de acordo com a reivindicação 19, em que o álcool é escolhido do grupo que consiste emisopropanol, etanol e misturas dos mesmos.
21. 21. Método de acordo com a reivindicação 16, em que a solução de colagénio estabilizado e elastina compreendequantidades iguais de colagénio e de elastina.
22. 22. Método de acordo com a reivindicação 16, em que o agente ativo é escolhido do grupo que consiste emtoxina de botulina, ácido hialurónico, vitamina A,vitamina C, vitamina E, zinco, selénio, licopeno, N-acetil-cisteína, extratos vegetais naturais da casca dauva, arando e chá verde, vasodilatadores, hormonas,fatores do crescimento, agentes de vacinas, medicamentos, proteínas terapêuticas, pequenasmoléculas, agentes anti-transpiração, analgésicos ecombinações dos mesmos.
23. 23. Método de acordo com a reivindicação 22, em que o agente ativo é o ácido hialurónico e/ou a toxina de botulina.
24. 24. Método de acordo com a reivindicação 16, compreendendo adicionalmente o passo de se adicionar um compostopromotor da permeação, escolhido do grupo que consisteem d-limoneno, alantoína, ácido fúlvico, mirra, hidroquinona-glicina, quillaja saponária e acanthophyllum squarrusom.
25. 25. Método de acordo com a reivindicação 17, em que a concentração da esfingosina é de cerca de 0,1 a 15% empeso e a concentração do cerebrosídeo é de cerca de 0,1a 15% em peso.
26. 26. Método para a preparação de uma formulação farmacêuticaou cosmética, para o fornecimento de um agente ativo,compreendendo o referido método os passos dareivindicação 16 para a preparação de uma composição,tal como é definida na reivindicação 1, e a combinaçãoda composição com ingredientes adicionais para aformação de um creme, uma loção, um gel, uma pomada ouum produto pulverizável.
27. 27. Composição tal como é definida na reivindicação 1, paraa utilização num método para o tratamento da peledanificada.