PT1812448E - Compostos orgânicos - Google Patents

Description

ΡΕ1812448 1 DESCRIÇÃO "COMPOSTOS ORGÂNICOS" A invenção diz respeito a uma nova forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina, ao processo para a preparação da forma cristalina II da N-benzoil-estauros-porina, a composições contendo a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina, e à forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina para utilização num método de tratamento de uma doença tumoral, cada qual conforme especificado abaixo e nas reivindicações. A revelação também descreve IV-benzoil-estauros-porina amorfa, o processo para a preparação de IV-benzoil--estaurosporina amorfa, composições contendo amorfos de IV-benzoil-estaurosporina, e o uso de IV-benzoil-estauros-porina amorfa em métodos de diagnóstico ou tratamento terapêutico de animais de sangue quente, especialmente seres humanos.

Antecedentes da Invenção 0 fármaco IV-benzoil-estaurosporina é usado como um agente antitumoral. Em geral, a preparação de IV-benzoil-estaurosporina é conhecida na técnica. Contudo, é também conhecido que formas polimórficas diferentes do mesmo 2 ΡΕ1812448 fármaco podem ter diferenças substanciais em certas propriedades farmaceuticamente importantes. Por conseguinte, existe uma necessidade continua de novas formas sólidas de IV-benzoil-estaurosporina e novos métodos de preparação. US 5 093 330, EP 0 296 110 e JP 5247955 não descrevem nenhuma forma cristalina de IV-benzoil-estaurosporina.

Sumário da Invenção

De acordo com um aspeto, a invenção proporciona uma forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina, tal como definido na reivindicação 1 aqui incorporada por referência. De preferência, a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina tem um padrão de difração de raios X, com um pico num ângulo de refracção 2-teta (6) de 8,7 ± 0,2, conforme delineado na Figura 1.

De acordo com ainda outro aspeto, a invenção proporciona uma composição que contém IV-benzoil-estaurospo-rina numa forma sólida, em que pelo menos 80% numa base ponderai da N-benzoil-estaurosporina sólida é a sua forma cristalina II, tendo especialmente um padrão de difração de raios X com um pico num ângulo de refração 2Θ de 8,7 ± 0,2, conforme delineado na Figura 1. São proporcionadas várias incorporações e variantes.

De acordo com ainda outro aspeto, a invenção proporciona uma composição farmacêutica que inclui a forma cristalina II de IV-benzoil-estaurosporina e um agente de 3 ΡΕ1812448 suporte ou diluente farmaceuticamente aceitável. Preferivelmente, a composição farmacêutica é para administração oral. A presente revelação descreve também N-benzoil--estaurosporina amorfa, o processo para a preparação de IV-benzoil-estaurosporina amorfa e composições contendo IV-benzoil-estaurosporina amorfa. A presente revelação, além disso, proporciona uma composição farmacêutica que inclui uma quantidade profila-ticamente ou terapeuticamente eficaz de IV-benzoil-estauros-porina amorfa e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. As composições farmacêuticas deste aspeto da invenção podem ser formuladas, por exemplo, para administração oral.

De acordo com ainda outro aspeto, a invenção proporciona processos para a purificação de estaurosporina conforme definido nas reivindicações 13 e 14, ambas aqui incorporadas por referência.

De acordo com ainda outro aspeto, a invenção proporciona um processo para a preparação de N- benzoil--estaurosporina por reação de estaurosporina com anidrido benzóico. Este processo, definido na reivindicação 16 aqui incorporada por referência, compreende facultativamente ainda a sementeira da solução reacional para produzir a forma cristalina II de IV-benzoil-estaurosporina, descreven- 4 ΡΕ1812448 do também a presente revelação um processo em que a forma amorfa é produzida. A presente revelação também proporciona um processo para a preparação de iV-benzoil-estaurosporina amorfa envolvendo a secagem por pulverização de uma solução contendo IV-benzoil-estaurosporina.

As composições farmacêuticas que incluem uma quantidade profilaticamente ou terapeuticamente eficaz de IV-benzoil-estaurosporina amorfa produzida pelo processo descrito, e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, também são fornecidas na presente revelação.

De acordo com ainda outro aspeto, a invenção proporciona um processo para fazer a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina, incluindo o processo: (a) a produção duma solução de IV-benzoil-estauros-porina num qualquer solvente prótico ou aprótico; (b) a sementeira com a forma cristalina II de IV-benzoil-estaurosporina e o contacto da mistura reacional com um solvente de álcool para formar um precipitado; e (c) o isolamento do precipitado, o qual é a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina. São proporcionadas várias incorporações e variantes . 5 ΡΕ1812448

Breve Descrição dos Desenhos

FIG. 1: mostra o diagrama de difração de raios X pelo método do pó da forma cristalina II da N- benzoil--estaurosporina. FIG. 2: mostra um espetro de infravermelhos carate rístico da forma cristalina II da iV-benzoil-estaurosporina.

FIG. 3: mostra o diagrama de difração de raios X pelo método do pó de uma forma puramente amorfa de IV-benzoil-estaurosporina.

FIG. 4: mostra o diagrama de difração de raios X pelo método do pó de uma forma essencialmente amorfa de IV-benzoil-estaurosporina.

Descrição Detalhada da Invenção A menos que definido em contrário, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado conforme comummente entendido por um vulgar perito na técnica à qual esta invenção pertence. Embora quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos aqui descritos possam ser utilizados na prática ou testagem da presente invenção, são descritos os métodos e os materiais preferidos.

Para os fins da presente invenção, os seguintes termos são definidos abaixo. 6 ΡΕ1812448 0 composto cristalino, aqui designada como "forma cristalina II" e referido daqui em diante como forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina, caracteriza-se por difração de raios X pelo método do pó, e/ou espetros-copia de infravermelho. É ainda descrito abaixo. "Farmaceuticamente aceitável" significa que isso é útil na preparação de uma composição farmacêutica, que é geralmente não tóxico e não é biologicamente indesejável e inclui aquilo que é aceitável para uso veterinário e/ou uso farmacêutico humano. "Antissolvente" é um solvente que quando adicionado a uma solução existente de uma substância reduziu a solubilidade da substância. 0 termo "composição" inclui, mas sem constituir limitação, um pó, uma solução, uma suspensão, um gel, uma pomada, uma emulsão e/ou suas misturas. 0 termo composição tem a intenção de englobar um produto que contém os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto, o qual resulta, direta ou indiretamente, da combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas. Uma "composição" pode conter um único composto ou uma mistura de compostos. Um "composto" é uma substância química que inclui moléculas da mesma estrutura química. 7 ΡΕ1812448 0 termo "composição farmacêutica" tem a intenção de englobar um produto que compreende o ou os ingredientes ativos, excipientes farmaceuticamente aceitáveis que compõem o agente de suporte, bem como qualquer produto que resulta, direta ou indiretamente, da combinação, comple-xação ou agregação de quaisquer dois ou mais dos ingredientes, ou da dissociação de um ou mais dos ingredientes, ou de outros tipos de reações ou interações de um ou mais dos ingredientes. Assim, as composições farmacêuticas da presente invenção englobam qualquer composição feita por mistura do ingrediente ativo, ingrediente ou ingredientes ativos adicionais e excipientes farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo "excipiente" significa um componente de um produto farmacêutico que não é o ingrediente ativo, tal como agente de enchimento, diluente e agente de suporte. Os excipientes que são úteis na preparação de uma composição farmacêutica são preferivelmente geralmente seguros, não tóxicos e nem biologicamente nem de outro modo indesejáveis, e são aceitáveis para utilização veterinária, assim como para uso farmacêutico humano. Um "excipiente farmaceuticamente aceitável", tal como usado na Descrição e Reivindicações, inclui tanto um como mais do que um tal excipiente. "Quantidade terapeuticamente eficaz" significa a quantidade de um composto que, quando administrada para o tratamento ou prevenção de uma doença, é suficiente para ΡΕ1812448 efetuar tal tratamento ou prevenção para a doença. A "quantidade terapeuticamente eficaz" irá variar dependendo do composto, da doença e sua severidade e da idade, peso, etc., do paciente a ser tratado.

Ao referir-se a uma reação quimica, os termos "tratamento", "contactando" e "reagindo" são aqui utilizados intermutavelmente e referem-se a adicionar ou misturar dois ou mais reagentes sob condições apropriadas para produzir o produto indicado e/ou desejado. Deve ser apreciado que a reação que produz o produto indicado e/ou desejado pode não resultar necessariamente diretamente a partir da combinação de dois reagentes que foram inicialmente adicionados, isto é, pode haver um ou mais intermediários que são produzidos na mistura que finalmente conduz à formação do produto indicado e/ou desejado. 0 termo "substancialmente livre de" em referência a uma composição, tal como aqui utilizado, significa que a substância que é libertada a partir da dita composição não pode ser detectada através de métodos conhecidos dos peritos na técnica. 0 termo "amorfo" significa um material que pode estar substancialmente livre de impurezas cristalinas, ou contém quantidades substanciais de impurezas cristalinas. Material amorfo contendo quantidades substanciais de materiais cristalinos como impurezas fica referido como 9 ΡΕ1812448 "IV-benzoil-estaurosporina essencialmente amorfa". Conforme ilustrado na FIG. 4, a presença de impurezas cristalinas não permite um bom padrão da forma halo tipica da forma amorfa que é substancialmente livre de material cristalino. 0 material amorfo que está substancialmente livre de formas cristalinas é aqui referido como "IV-benzoil-estaurosporina puramente amorfa". A FIG. 3 ilustra um padrão de difratograma de raios X para esta forma, onde a forma halo do padrão ilustra a ausência substancial de estrutura cristalina. Os picos estão particularmente ausentes nas regiões caraterísticas de forma cristalina.

Os exemplos ilustram ainda processos para a obtenção de ambas "IV-benzoil-estaurosporina essencialmente amorfa" e "IV-benzoil-estaurosporina puramente amorfa". IV-benzoil-estaurosporina é conhecida como (9α, 10β, 11β, 13a) -IV- (2,3,10,11,12,13-hexa-hidro-10-metoxi-9--metil-l-oxo-9,13-epoxi-lh,9H-di-indolo[l,2,3-gh:3',2',l'--1 m] pirrolo [3,4-j] [1,7] benzodiazonin-ll-il) -IV-metil-benza-mida) e tem a seguinte estrutura química:

10 ΡΕ1812448 A Patente dos E.U.A. N° 5 093 330 (a Patente 330), aqui incorporada por referência na sua totalidade, reivindica IV-benzoil-estaurosporina. A invenção refere-se especialmente a uma forma particular, preferivelmente a que é referida daqui em diante como forma cristalina II de um derivado de IV-benzoil-estaurosporina do composto de fórmula (I), acima descrito, e a presente revelação também descreve as formas amorfas de IV-benzoil-estaurosporina.

Formas sólidas diferentes do mesmo fármaco podem apresentar propriedades diferentes, incluindo caraterísticas que têm implicações funcionais no que diz respeito à sua utilização como fármaco podem ter diferenças substanciais em tais propriedades farmaceuticamente importantes como as velocidades de dissolução e a biodisponibilidade. Da mesma forma, polimorfos diferentes podem ter propriedades de processamento diferentes, tais como higroscopi-cidade, fluidez e semelhantes, que podem afetar a sua adequabilidade como produtos farmacêuticos ativos para a produção comercial.

Os padrões de difração de raios X pelo método do pó foram medidos num Scintag INC X 1 usando a geometria de parafocalização de Bragg-Brentano. O padrão de difração de raios X representado na FIG. 1 está sumariado na Tabela 1. ΡΕ1812448

Tabela 1

Picos de Difração de Raios X pelo Método do Pó para a Modificação Cristalina Forma II da N-Benzoil-estaurosporina 2Θ (graus) espaçamento d (Â) Intensidade relativa 3,4 26, 1 médio 6, 0 14,8 médio 7,8 11,3 médio 8,7 10,1 forte 9,2 9, 6 médio 9,7 9,1 médio 10,1 8,8 médio 10,4 8,5 baixo 11,2 7, 9 médio 12, 6 7,0 médio 14,1 6, 3 médio 15,7 5,7 médio 16, 8 5, 3 médio 18,2 4,9 médio 18, 9 4,7 médio 19, 3 4,6 médio 19, 6 4,5 forte 20,2 4,4 forte 24,5 3, 6 médio

Deve ser mantido em mente que ligeiras variações nos ângulos 2Θ ou valores de espaçamento observados são esperadas com base no difratómetro especifico empregue, no analista e na técnica de preparação da amostra. Mais variação é esperada para as intensidades dos picos relativos. A identificação da forma cristalina exata de um 12 ΡΕ1812448 composto deverá ser baseada principalmente nos ângulos 2Θ observados com menor importância atribuída a intensidades dos picos relativos.

Alguns margem de erro está presente em cada uma das 2 atribuições de ângulo 2Θ aqui relatadas. A margem de erro atribuída, numa variante preferida, a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina é de aproximadamente ±0,2 para cada uma das atribuições de pico. A forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina pode ser também caracterizada por espetroscopia de infravermelho. A forma cristalina II exibe um padrão de absorção caraterístico na análise espetroscópica no infravermelho (IV) conforme delineado na FIG 2. A análise espetroscópica de IV foi medida num Bruker IFS-55. A forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina tem absorções caraterísticas, as quais podem ser distinguidas das de outros polimorfos, em cerca de 789, 773, 743, 704, 1066, 1026, 1458, 1398, 1383, 1602, 1577, 1497, 1627, 1680, 2934 e 3055 cm"1 em análise espetroscópica de IV. Alguma margem de erro está presente em cada uma das absorções caraterísticas aqui relatadas. A margem de erro atribuída nas absorções caraterísticas é aproximadamente 2 cm'1 na gama de 1900-800 cm"1.

Uma ou mais das propriedades físicas e/ou propriedades espetroscópicas podem ser a base para a caracterização das formas cristalina ou polimórfica da IV-benzoil-estaurosporina. 13 ΡΕ1812448 A invenção também proporciona uma composição contendo IV-benzoil-estaurosporina sólida, a qual é pelo menos 80%, numa base ponderai total da N-benzoil-estauros-porina sólida na composição, a sua forma cristalina II. A forma preferida desta composição é pó de IV-benzoil-estaurosporina sólida adequado para uso como inqrediente ativo na formulação de produtos farmacêuticos. O restante da IV-benzoil-estaurosporina sólida na composição, isto é, 20% ou menos do peso total da IV-benzoil-estaurosporina pode ser, por exemplo, outras formas cristalinas de IV-benzoil- estaurosporina. Numa incorporação específica, a composição contém pelo menos 90% da forma cristalina II de IV-benzoil- estaurosporina com respeito à massa total da IV-benzoil- estaurosporina sólida na composição. Noutra incorporação específica, a composição contém pelo menos 95 % da forma cristalina II com respeito à massa total da N-benzoil- estaurosporina sólida na composição. A presente revelação também proporciona processos para a purificação de estaurosporina. Embora a revelação não esteja limitada a qualquer teoria especifica, os inventores descobriram que um processo envolve: (a) proporcionar uma suspensão de estaurosporina num solvente alcoólico; (b) fazer contactar a suspensão com ácido metanossul-fónico para obter uma solução; (c) contactar ainda a solução com trietilamina; e (d) isolar o produto. O processo compreende ainda a lavagem do produto 14 ΡΕ1812448 num solvente prótico ou aprótico. Um exemplo não limitante dum solvente prótico é etanol e um exemplo não limitante dum solvente aprótico é tetra-hidrofurano (THF). A invenção também proporciona um processo para: (a) proporcionar uma solução de estaurosporina em bruto em qualquer solvente prótico ou aprótico (b) semear a solução com estaurosporina purificada; (c) fazer contactar a mistura reacional com etanol para formar um precipitado; e (d) isolar o produto que é a estaurosporina purificada.

Depois do material de partida estar purificado, o material pode ser convertido para uma qualquer forma cristalina II ou amorfa de IV-benzoil-estaurosporina. 0 material pode ser convertido para a forma cristalina II de N-benzoil-estaurosporina, compreendendo um processo revelado: (a) a reação de estaurosporina num solvente alcoólico, tal como etanol, com anidrido benzóico; e (b) a sementeira da solução de reação com a forma cristalina II de IV-benzoil-estaurosporina para produzir o produto; e (c) o isolamento do produto que é a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina. 0 material pode ser convertido para IV-benzoil--estaurosporina amorfa por: (a) reação de estaurosporina num solvente, tal como etanol ou THF, com anidrido benzóico; e (b) sementeira da reação com a IV-benzoil-estaurospo-rina para produzir o produto; e 15 ΡΕ1812448 (c) isolamento do produto que é N-benzoil-estaurospo-rina amorfa. 0 produto pode ser ainda lavado com o solvente múltiplas vezes para produzir IV-benzoil-estaurosporina essencialmente amorfa. A técnica de secagem por pulverização pode também ser usada para preparar IV-benzoil-estaurosporina puramente amorfa.

B4 16 ΡΕ1812448 A revelação também proporciona uma composição contendo IV-benzoil-estaurosporina essencialmente amorfa. A revelação também proporciona uma composição contendo IV-benzoil-estaurosporina puramente amorfa.

Um processo para a preparação da forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina também é fornecido. 0 processo envolve: (a) proporcionar uma solução de IV-benzoil-estauros-porina num qualquer solvente prótico ou aprótico; (b) semear a solução com a forma cristalina II de IV-benzoil-estaurosporina; (c) fazer contactar a suspensão com um solvente de álcool para formar um precipitado; e (d) isolar o precipitado, o qual é a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina.

Exemplos não limitativos dos solventes próticos ou apróticos são listados na Tabela abaixo:

Exemplos Álcool benzilico Etanol

Dimetilsulfóxido (DMSO) Dimetilformamida (DMF)

THF Ácido acético _Polietilenoglicol (PEG 200) 17 ΡΕ1812448

Os picos do difratograma de raios X pelo método do pó da forma cristalina II, que são de média a baixa força obtidos a partir dos solventes acima identificados podem mostrar algumas variações devidas à presença de diferentes moléculas de solvente dentro da estrutura de rede cristalina.

Numa incorporação, N-benzoil-estaurosporina é dissolvida em álcool benzilico, precipitada pela adição de cristais de sementeira da forma cristalina II de IV-benzoil--estaurosporina e adição de etanol como antissolvente, e a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina é obtida. Este processo é altamente reproduzível e o produto cristalino resultante tem uma boa filtragem. 0 teor de solvente residual em B6 é cerca de 4,3% m/m de álcool benzilico e 0,5-1% m/m de etanol. O processo é mostrado esquematicamente como:

84

H

ProcessoSP

Cristalização em áícooi benzilico e etanol 8» 18 ΡΕ1812448

As condições acima na preparação seletiva das formas cristalinas individuais não são conclusivas. Em geral, por exemplo, é possivel fazer variar parâmetros tais como a proporção ponderai do composto de fórmula (I) para o solvente e antissolvente. São também proporcionadas composições farmacêuticas contendo uma forma cristalina II ou amorfa de IV-ben-zoil-estaurosporina e um agente de suporte farmaceuticamen-te aceitável. Além do composto ativo, a composição farmacêutica inclui um ou mais agentes de suporte farmaceutica-mente aceitáveis, também conhecidos como excipientes, que normalmente não possuem atividade farmacêutica, mas têm várias propriedades úteis que podem, por exemplo, melhorar a estabilidade, a esterilidade, a biodisponibilidade e a facilidade de formulação de uma composição farmacêutica. Estes agentes de suporte são farmaceuticamente aceitáveis, o que significa que eles não são prejudiciais para os seres humanos ou animais quando tomados de modo apropriado e são compatíveis com outros ingredientes numa dada formulação. Os agentes de suporte podem ser sólidos, semi-sólidos ou liquidos, e podem ser formulados com o composto em grandes quantidades, mas por fim na forma de uma formulação de dose unitária, isto é, uma unidade fisicamente discreta contendo uma quantidade especifica de ingrediente ativo, tal como um comprimido ou cápsula. As composições farmacêuticas podem incluir, em adição a um composto desta invenção, um ou mais compostos farmacêuticos ativos. ΡΕ1812448

As composições farmacêuticas podem estar na forma de suspensões, soluções, elixires, aerossóis ou formas de dosagem sólidas.

As composições farmacêuticas são contempladas em várias formulações adequadas para vários modos de administração incluindo, mas sem constituir limitação, administração por inalação, oral, retal, parentérica (incluindo subcutânea, intradérmica, intramuscular e intravenosa), implantável e transdérmica. A via de administração mais adequada num dado caso depende da duração da condição do sujeito, da duração do tratamento desejado, da natureza e gravidade da condição a ser tratada, e da formulação particular que está a ser usada. As formulações podem ser a granel ou em forma de dosagem unitária, e podem ser preparadas por métodos bem conhecidos na técnica para uma dada formulação. A quantidade de ingrediente ativo incluído numa forma de dosagem unitária depende do tipo de formulação na qual o ingrediente ativo é apresentado. Uma composição farmacêutica conterá geralmente de cerca de 0,1% numa base ponderai até cerca de 99% numa base ponderai do ingrediente ativo, preferivelmente cerca de 1% numa base ponderai a 50% numa base ponderai para administração oral, e de cerca de 0,2% numa base ponderai a cerca de 20% numa base ponderai para administração parentérica.

As formulações adequadas para administração oral ΡΕ1812448 incluem cápsulas (duras e moles), hóstias, pastilhas, xaropes, supositórios e comprimidos, cada um contendo uma quantidade predeterminada do composto ativo; na forma de um pó ou grânulos, como uma solução ou uma suspensão num liquido aquoso ou não aquoso, ou na forma de uma emulsão de óleo em água ou de água em óleo. Tais formulações podem ser preparadas por qualquer método de farmácia adequado que inclui o passo de trazer em associação o composto ativo e um agente de suporte ou agentes de suporte adequados. A quantidade de ingrediente ativo por unidade de dosagem de formulações sólidas pode ser conforme descrito na técnica anterior para preparações de N-benzoil-estaurosporina.

Num outro aspeto, a invenção também proporciona os compostos e as composições farmacêuticas desta invenção para utilização em métodos de tratamento. Os compostos e composições desta invenção podem ser administrados a um indivíduo numa quantidade eficaz para ser usada para o tratamento e prevenção das condições reveladas na Patente 330. Por indivíduo deve entender-se um ser humano ou um animal, preferivelmente um humano. Os animais contemplados por esta invenção incluem qualquer animal tratável com segurança por compostos da presente invenção. Mais notavelmente, a forma cristalina II (e também iV-benzoil-estauros-porina amorfa) mostram elevada atividade antiproliferativa e antitumoral, como um resultado da inibição da proteína cinase C (PKC) , que pode ser extremamente útil para o tratamento do cancro. Além disso, a sua altamente selectiva e potente inibição da PKC pode levar a resultados clínicos ΡΕ1812448 superiores para o paciente, isto é, atrasar ou suprimir a progressão da doença, com regimes igualmente toleráveis. As aplicações potenciais incluem uma variedade de tumores sólidos e, mais especificamente, por exemplo, cancro de mama, cancro de cólon, cancro do ovário e leucemia. Além disso, várias outras indicações que podem ser afetadas pela atividade de PKC podem ser eficazmente tratadas por estas composições, incluindo resistência a múltiplos fármacos (MDR), um dos principais problemas na quimioterapia do cancro correntemente empregue e doenças inflamatórias em geral. A invenção refere-se especialmente à forma cristalina II aqui revelada para o tratamento de uma das referidas doenças ou na preparação de um agente farmacológico para este tratamento. A revelação também descreve um processo para o tratamento de animais de sangue quente sofrendo das referidas doenças, especialmente uma doença tumoral, em que uma quantidade da forma cristalina II ou amorfa de IV-benzoil-estaurosporina, a qual é eficaz contra a doença em causa, especialmente uma quantidade com eficácia antiproliferativa e especialmente na inibição de tumor, é administrado a animais de sangue quente com necessidade de tal tratamento. A revelação diz respeito além disso à utilização da forma cristalina II ou amorfa de IV-benzoil-estaurosporina para a inibição da PKC acima mencionada, ou como parte da invenção do uso da forma II da benzoil--estaurosporina para a preparação de composições farmacêu- 22 ΡΕ1812448 ticas para utilização no tratamento do corpo humano ou animal, especialmente para o tratamento de uma variedade de tumores sólidos e, mais especificamente, por exemplo, cancro de mama, cancro de cólon, cancro de ovário e leucemia. Dependendo da espécie, idade, condição individual, modo de administração e do quadro clinico em questão, as doses eficazes, por exemplo, doses diárias de cerca de 1-2500 mg, preferivelmente 1-1000 mg, especialmente 5-500 mg, são administrados a animais de sangue quente de cerca de 70 kg de massa corporal. A invenção refere-se também a preparações farmacêuticas que contêm uma quantidade eficaz, especialmente uma quantidade eficaz para a prevenção ou tratamento de uma das referidas doenças, da forma cristalina II de N-benzoil-estaurosporina de fórmula (I), juntamente com agentes de suporte farmaceuticamente aceitáveis que são adequados para administração tópica, entérica, por exemplo, oral ou retal, ou parentérica, e podem ser inorgânicas ou orgânicas e sólidas ou liquidas. Especialmente os comprimidos ou cápsulas de gelatina contendo a substância ativa juntamente com diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicerina; e/ou lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico ou seus sais, tipicamente estearato de magnésio ou cálcio; e/ou PEG, são utilizados para administração oral. Os comprimidos podem igualmente conter agentes aglutinantes, por exemplo, silicato de alumínio e magnésio, amidos, tipicamente amido de milho, trigo ou arroz, gelatina, metilcelulose, 23 ΡΕ1812448 carboximetilcelulose sódica e/ou polivinilpirrolidona; e, se assim desejado, desintegrantes, por exemplo, amidos, ágar, ácido alginico ou um seu sal, tipicamente alginato de sódio; e/ou misturas efervescentes, ou adsorventes, agentes corantes, agentes aromatizantes e edulcorantes. Os compostos farmacologicamente ativos da presente invenção podem ainda ser usados na forma de preparações para administração parentérica ou soluções de infusão. Tais soluções são preferivelmente soluções ou suspensões aquosas isotónicas, sendo estas possivelmente preparadas antes do uso, por exemplo, no caso de preparações liofilizadas contendo a substância ativa quer isolada quer juntamente com um agente de suporte, por exemplo, manitol. As substâncias farmacêuticas podem ser esterilizadas e/ou podem conter excipientes, por exemplo, agentes conservantes, estabilizantes, molhantes e/ou emulsionantes; solubili-zantes; sais para a regulação da pressão osmótica; e/ou tampões. As preparações farmacêuticas presentes que, se assim for desejado, podem conter ainda substâncias farmacologicamente ativas, tais como antibióticos, são preparadas de uma maneira conhecida per se, por exemplo, por meio de processos convencionais de mistura, granulação, revestimento, dissolução ou liofilização, e contêm desde cerca de 1 a 100%, especialmente desde cerca de 1% até cerca de 20%, da substância ou substâncias ativas. A invenção é ainda definida por referência aos seguintes exemplos que descrevem em pormenor a preparação do composto e das composições da presente invenção, bem - 24 - ΡΕ1812448 como a sua utilidade. Os exemplos que se seguem não se destinam a limitar o âmbito e alcance da invenção conforme aqui anteriormente definido ou conforme reivindicado abaixo. EXEMPLOS Exemplo 1

Purificação de estaurosporina Bl a estaurosporina B2 usando ácido metanossulfónico e trietilamina (Exemplo de

Referência)

Um reator é carregado com estaurosporina Bl e etanol. A suspensão é aquecida a cerca de 70 °C. Ácido metanossulfónico é adicionado à suspensão e a solução obtida é curada. Carvão vegetal ativado e Hyf lo são adicionados e a mistura é curada. A suspensão é filtrada e o aparelho de filtro e o bolo do filtro são lavados várias vezes com etanol. A solução límpida filtrada é transferida para outro reator e arrefecida até cerca de 60 °C. Trietilamina diluida em etanol é adicionada lentamente à mistura reacional. Depois disso, a suspensão é arrefecida até cerca de 20 °C e curada. A estaurosporina B2 é isolada por filtração. O produto é lavado várias vezes com etanol.

Exemplo 2

Purificação da estaurosporina Bl em bruto a estaurosporina B2 através de cristalização

Um reator é carregado com estaurosporina Bl e 25 ΡΕ1812448 álcool benzilico. A suspensão é aquecida a cerca de 85 °C e curada. Carvão ativado e Hyflo são adicionados à solução e a mistura é curada novamente. A suspensão é filtrada a cerca de 90 °C. O aparelho de filtro e o bolo do filtro são lavados várias vezes com álcool benzilico. A solução filtrada limpida é transferida para outro reator e

arrefecida até cerca de 70 °C. A solução é semeada com estaurosporina B2 suspensa em etanol. Depois disso, etanol é adicionado à suspensão e a suspensão é curada e em seguida arrefecida até cerca de 0 °C. A suspensão é curada mais uma vez durante pelo menos 2 horas a cerca de 0 °C. A estaurosporina B2 é isolada por filtração. O produto é lavado várias vezes com etanol.

Exemplo 3

Benzilação de estaurosporina B2 para preparar W-benzoil-es-taurosporina essencialmente amorfa (Exemplo de Referência)

Um reator é carregado com estaurosporina B2 com anidrido benzóico, etanol e água. A mistura reacional é aquecida a cerca de 70 °C e curada. A solução é filtrada e o aparelho de filtro e o bolo do filtro são lavados várias vezes com etanol. A solução filtrada é transferida para outro reator e arrefecida até cerca de 60 °C. É adicionada água lentamente à solução. A solução é semeada com IV-benzoil-estaurosporina amorfa. A suspensão é curada, em seguida arrefecida até cerca de 20 °C e depois curada outra vez. IV-benzoil-estaurosporina é isolada por filtração. O bolo húmido de IV-benzoil-estaurosporina é enxaguado várias 26 ΡΕ1812448 vezes com etanol absoluto. 0 bolo húmido é então ressuspenso no aparelho de filtro em etanol, curado a cerca de 25 °C, em seguida arrefecido até cerca de 0-5 °C e curado novamente. Este passo do processo pode ser repetido várias vezes. N-benzoil-estaurosporina é isolada por filtração. O bolo húmido é seco num forno de vácuo a uma temperatura externa de cerca de 40 °C e um vácuo de aproximadamente 10-20 mbar durante cerca de 24 horas para se obter o produto: 35-40 g de bolo seco: 27 g teoria dominar. Rendimento: aproximadamente 82% da teoria teoria dominar relacionada com BI 100%. A utilização de etanol na reação acima pode ser substituída por THF.

Exemplo 4

Benzilação de estaurosporina B2 para preparar a forma cristalina II de N-benzoil-estaurosporina B4

Um reator é carregado com estaurosporina B2 com anidrido benzóico, etanol absoluto e água. A mistura reacional é aquecida a cerca de 70 °C e curada. No final do tempo de reação, a mistura reacional é semeada com a forma cristalina II de N-benzoil-estaurosporina suspensa em etanol absoluto. Após a cura, etanol absoluto e água são lentamente adicionados à suspensão. A suspensão é curada novamente, em seguida arrefecida até cerca de 0 °C antes da forma cristalina II de N-benzoil-estaurosporina ser isolada por filtração. O bolo húmido de N-benzoil-estaurosporina é enxaguado várias vezes com etanol absoluto e em seguida ΡΕ1812448 seco num forno de vácuo a uma temperatura externa de 60 °C e um vácuo de cerca de 5-30 mbar durante cerca de 16 horas para se obter o produto: 39, 70 g de bolo seco: 27,2 g teoria dominar. Rendimento: aproximadamente 91,5% da teoria dominar relacionada com BI 100%.

Exemplo 5

Preparação da forma cristalina II de W-benzoil--estaurosporina utilizando álcool benzilico e etanol

Um reator é carregado com IV-benzoil-estaurospori-na em bruto e álcool benzilico. A mistura é aquecida a 85 °C e a solução é subsequentemente curada. A solução é arrefecida até cerca de 70 °C, em seguida semeada com a forma cristalina II purificada de IV-benzoil-estaurosporina B6 suspensa em etanol. Depois disso, é adicionado etanol e a suspensão é curada, em seguida arrefecida até cerca de 0 °C antes da forma cristalina II da IV-benzoil-estaurospo-rina ser isolada por filtração. O bolo húmido é lavado com etanol múltiplas vezes e seco.

Exemplo 6

Preparação da forma cristalina II de N-benzoil--estaurosporina utilizando ácido acético e etanol

Um reator é carregado com IV-benzoil-estaurospori-na em bruto e ácido acético. A mistura é aquecida até cerca de 70 °C e a solução é subsequentemente curada. A solução é em seguida semeada com a forma cristalina II purificada de IV-benzoil-estaurosporina B6 suspensa em etanol. Depois 28 ΡΕ1812448 disso, é adicionado etanol à suspensão e a suspensão é curada, em seguida arrefecida até cerca de 20 °C antes da forma cristalina II de N-benzoil-estaurosporina é isolada por filtração. O bolo húmido é lavado com etanol várias vezes e secas.

Exemplo 7

Preparação da forma cristalina II de W-benzoil--estaurosporina utilizando PEG

Um reator é carregado com IV-benzoil-estaurospori-na em bruto e PEG. A mistura é aquecida até cerca de 90 °C e a solução é subsequentemente curada. A solução é arrefecida até cerca de 70 °C e semeada com a forma cristalina II purificada de IV-benzoil-estaurosporina B6 suspensa em etanol. Depois de etanol/água numa proporção de 1:1 ser lentamente adicionada, a suspensão é em seguida curada antes de ser arrefecida até 20 °C. A forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina é isolada por filtração. O bolo húmido é lavado com etanol várias vezes e seco.

Exemplo 8

Preparação da forma cristalina II da N-benzoil--estaurosporina utilizando DMSO

Um reator é carregado com IV-benzoil-estaurospori-na e DMSO. A mistura é aquecida até cerca de 70 °C e a solução é subsequentemente curada e em seguida semeada com a forma cristalina II purificada da IV-benzoil-estaurospori- 29 ΡΕ1812448 na B6 suspensa em etanol. Depois disso, o etanol é adicionado à suspensão e a suspensão é curada a 70 °C, em seguida arrefecida até cerca de 20 °C. A suspensão é curada novamente antes da forma cristalina II de IV-benzoil--estaurosporina ser isolada por filtração. O produto é lavado com etanol vezes múltiplas e seco.

Exemplo 9

Preparação da forma cristalina II da W-benzoil--estaurosporina usando DMF

Um reator é carregado com IV-benzoil-estaurospori-na e DMF. A mistura é aquecida até cerca de 70 °C, curada e em seguida semeada com a forma cristalina II purificada de IV-benzoil-estaurosporina B8 em etanol. Em seguida, é adicionado etanol à suspensão e a suspensão é curada a cerca de 70 °C e em seguida arrefecida até cerca de 20 °C. A suspensão é curada novamente antes da forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina ser isolada por filtração. O produto é lavado com etanol várias vezes e seco.

Exemplo de Referencia 10

Preparação da forma cristalina II da W-benzoil--estaurosporina usando THF

Um reator é carregado com IV-benzoil-estaurospori-na amorfa e THF. A mistura é aquecida até cerca de 65 °C, curada e em seguida semeada com a forma cristalina II de IV-benzoil-estaurosporina B6 em THF. A suspensão é curada, em seguida arrefecida até cerca de 20 °C e novamente curada 30 ΡΕ1812448 antes da forma cristalina II da N-benzoil-estaurosporina ser isolada por filtração. O produto é lavado várias vezes com THF e seco.

Exemplo de Referencia 11

Preparação da forma cristalina II da N-benzoil--estaurosporina usando etanol

Um reator é carregado com IV-benzoil-estaurospori-na amorfa e etanol. A mistura é aquecida até cerca de 70 °C, curada e em seguida semeada com a forma cristalina II de IV-benzoil-estaurosporina B6 em etanol. A suspensão é curada, arrefecida até cerca de 20 °C e novamente curada antes da forma cristalina II de iV-benzoil-estaurosporina ser isolada por filtração. O produto é lavado várias vezes com etanol e seco.

Exemplo de Referencia 12

Experimento de secagem por pulverização para se obter PKC412 amorfa A solução de alimentação é preparada por dissolução de 10 g de PKC412 (forma cristalina II) em aproximadamente 160 g de diclorometano. A alimentação está pronta a ser atomizada em goticulas a partir das quais o solvente orgânico é evaporado na câmara de secagem por azoto aquecido resultando na formação de PKC412 amorfa. A temperatura de entrada é ajustada para 60 °C, enquanto a temperatura de saida é definida como 40 °C. O conteúdo de solvente residual após secagem por pulverização foi de 31 ΡΕ1812448 aproximadamente 1% m/m. PKC412 é ainda seca sob vácuo para se obter um material livre de solventes.

Exemplo de Referência 13

Experimento de secagem por pulverização para se obter PKC412 amorfa A solução de alimentação foi preparada dissolvendo 7 g de PKC412 (forma cristalina II) em cerca de 400 g de THF. A alimentação está pronta a ser atomizada em goticulas a partir das quais o solvente orgânico é evaporado na câmara de secagem por azoto aquecido resultando na formação de PKC412 amorfa. A temperatura de entrada é ajustada para 110-120 °C, enquanto a temperatura de saida é ajustada para 70-80 °C. O conteúdo de solvente residual, após secagem por pulverização, é de cerca de 3% m/m. PKC412 é adicionalmente seca sob vácuo para se obter um material livre de solventes.

Exemplo de Referência 14

Experimento de secagem por pulverização para se obter PKC412 amorfa A solução de alimentação é preparada por dissolução de 7 g de PKC412 (forma cristalina II) em aproximadamente 350 g de etanol/ácido acético 70:30 m/m. A alimentação está pronta a ser atomizada em goticulas a partir das quais o solvente orgânico é evaporado na câmara de secagem por azoto aquecido resultando na formação de PKC412 amorfa. A temperatura de entrada é ajustada para 32 ΡΕ1812448 215 °C, enquanto a temperatura de saída é definida como 120 °C. O conteúdo de solvente residual após secagem por pulverização é inferior a 0,5%. Secagem convencional adicional não é necessária.

Exemplo 15

Comprimidos com a forma cristalina II da W-benzoil- -estaurosporina

Comprimidos contendo 100 mg da substância ativa nomeada em título são geralmente preparados na seguinte composição:

Composição Quantidade (mg) Ingrediente ativo 100 Lactose cristalina 240 Avicel 80 PVPPXL 20 Aerosil 2 Estearato de magnésio 5 Total 447

Preparação: A substância ativa é misturada com materiais agentes de suporte e sujeita a compressão numa máquina de fazer comprimidos (Korsch EKO, diâmetro da punção 10 mm).

Avicel é uma celulose microcristalina (FMC,

Filadélfia, EUA). 33 ΡΕ1812448 PVPPXL é polivinilpolipirrolidona, reticulada (BASF, Alemanha).

Aerosil é dióxido de silício (Degussa, Alemanha).

Exemplo 16 Cápsulas com a forma cristalina II de Jí-benzoil- -estaurosporina Cápsulas contendo 100 mg do composto mencionado em título como substância ativa são geralmente preparadas com a seguinte composição:

Composição Quantidade (mg) Ingrediente ativo 100 Avicel 200 PVPPXL 15 Aerosil 2 Estearato de magnésio 1,5 Total 318,5

As cápsulas são preparadas por mistura dos componentes e enchimento da mistura em cápsulas de gelatina dura, tamanho 1.

Em geral, para referência, a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina pode ser obtida por a) um processo para a preparação da forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina compreendendo: 34 ΡΕ1812448 (a) a produção duma solução de IV-benzoil-estaurospo-rina num solvente; (b) fazer contactar a solução com um segundo solvente para formar um precipitado; e (c) o isolamento do precipitado, ou por um processo de acordo com parágrafo precedente a), em que o solvente é seleccionado a partir de álcool benzilico, DMF, DMSO, ácido acético ou PEG, ou por um processo de acordo com o parágrafo precedente a) , em que o segundo solvente é seleccionado a partir de etanol, THF ou uma solução de etanol em água; ou pelo processo de acordo com um parágrafo precedente a), compreendendo ainda a secagem do precipitado isolado.

Lisboa, 20 de Agosto de 2012

Claims (17)

1. ΡΕ1812448 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto que é uma forma cristalina II de iV-benzoil-estaurosporina, tendo um padrão de difração de raios X, expresso em termos de ângulos 2Θ, que inclui cinco ou mais picos seleccionados de entre o grupo constituído por cerca de 3,4, 6,0, 7,8, 8,7, 9,2, 9,7, 10,1, 10,4, 11,2, 12,6, 14,1 , 15,7, 16,8, 18,2, 18,9, 19,3, 19,6, 20,2 e 24,5 ± 0,2 graus.
2. 2. O composto de acordo com a Reivindicação 1, tendo substancialmente o mesmo padrão de difração de raios X conforme mostrado na Figura 1.
3. 3. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1, que continua a estar seco a 95% de humidade relativa e 25 °C.
4. 4. 0 composto de acordo com a Reivindicação 1, tendo um espetro de absorção de infravermelhos com bandas de absorção em cerca de 789, 773, 743, 704, 1066, 1026, 1458, 1398, 1383, 1602, 1577, 1497, 1627, 1680, 2934 e 3055 cm-1 ± 2 cm”1.
5. 5. Uma composição compreendendo N-benzoil--estaurosporina na forma de um sólido, em que pelo menos 80% numa base ponderai da referida N-benzoil-estaurosporina sólida é a forma cristalina II da Reivindicação 1. 2 ΡΕ1812448
6. 6. A composição de acordo com a Reivindicação 5, em que pelo menos 90% numa base ponderai da referida N-benzoil-estaurosporina sólida é a forma cristalina II.
7. 7. A composição de acordo com a Reivindicação 5, em que pelo menos 95% numa base ponderai da referida N-benzoil-estaurosporina sólida é a forma cristalina II.
8. 8. Uma composição farmacêutica compreendendo: (a) o composto da Reivindicação 1; e (b) um agente de suporte ou diluente farmaceuticamen- te aceitável.
9. 9. A composição farmacêutica de acordo com a Reivindicação 8, compreendendo ainda um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
10. 10. A composição farmacêutica de acordo com a Reivindicação 8, que é uma forma de dosagem adequada para administração oral.
11. 11. A composição farmacêutica de acordo com a Reivindicação 10, em que a referida forma de dosagem é seleccionada a partir de um comprimido, cápsula ou solução.
12. 12. N-benzoil-estaurosporina de acordo com qualquer uma das Reivindicações 1-8, para utilização no tratamento de uma doença tumoral. 3 ΡΕ1812448
13. 13. Um processo para a preparação da forma cristalina II da Reivindicação 1 de N-benzoil-estaurospori-na que compreende: (a) a produção duma solução de iV-benzoil-estauros-porina num solvente; (b) o contacto da solução com um segundo solvente para formar um precipitado; e (c) o isolamento do precipitado; em que o solvente é seleccionado de entre álcool benzílico, DMF, DMSO, ácido acético ou PEG; e em que o segundo solvente é seleccionado de entre etanol, THF ou uma solução de etanol em água.
14. 14. 0 processo de acordo com a Reivindicação 13, compreendendo ainda a secagem do precipitado isolado.
15. 15. Um composto que é a forma cristalina II da N- benzoil-estaurosporina produzida pelo processo da Reivindicação 13.
16. 16. Um processo para a preparação de forma cristalina II da Reivindicação 1 de N-benzoil-estaurospori-na que compreende: (a) a reação da estaurosporina com anidrido benzóico para formar uma solução; (b) a sementeira da solução com forma cristalina II de N-benzoil-estaurosporina; 4 ΡΕ1812448 (c) a adição dum segundo solvente; e (d) o isolamento do produto; em que o segundo solvente é seleccionado de entre etanol ou uma solução de etanol em água.
17. 17. Um composto que é a forma cristalina II da IV-benzoil-estaurosporina produzida pelo processo da Reivindicação 16. Lisboa, 20 de Agosto de 2012