PT1745064E - Compostos para a inibição de uma enzima de proteassoma - Google Patents

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DESCRIÇÃO "COMPOSTOS PARA A INIBIÇÃO DE UMA ENZIMA DE PROTEASSOMA" Campo técnico A presente invenção diz respeito a compostos e a métodos para a inibição enzimática. Em particular, a invenção diz respeito a métodos terapêuticos com base na inibição de enzimas.

Antecedentes da invenção

Nos eucariotas, a degradação de proteínas é predominantemente mediada pela via de ubiquitina, na qual as proteínas que se pretende destruir se encontram ligadas ao polipeptido de 76 aminoácidos de ubiquitina. Após alvejadas, as proteínas ubiquitinadas servem então como substratos para o proteassoma 26S, uma protease multicatalítica, que cliva as proteínas em péptidos curtos por meio da acção das suas três actividades proteolíticas principais. Embora apresenta uma função geral na conversão de proteínas intracelulares, a degradação mediada por proteassomas também desempenha um papel importante em diversos processos, tais como na apresentação do complexo de histocompatibilidade principal (MHC) de classe I, apoptose, divisão celular e activação de NF-kB. 0 proteassoma 20S é um complexo de protease multicatalítico com a forma de um cilindro de 700 kDa constituído por 28 subunidades organizadas em quatro anéis que desempenham papéis importantes na regulação do crescimento celular, na apresentação do complexo de histocompatibilidade principal de classe I, na apoptose, no 2 processamento de antigénios, na activação de NF-κΒ e na transdução de sinais pró-inflamatórios. Em leveduras e em outros eucariotas, 7 subunidades α diferentes formam os anéis exteriores e 7 subunidades β diferentes formam os anéis interiores. As subunidades α servem como locais de ligação para os complexos reguladores 19S (PA700) e 11S (PA28), bem como barreira física para a câmara proteolítica interior formada pelas dois anéis das subunidades β. Assim, in vivo, crê-se que o proteassoma exista sob a forma de uma partícula 26S ("o proteassoma 26S") . Experiências in vivo demonstraram que a inibição da forma 20S do proteassoma é facilmente correlacionada com a inibição do proteassoma 26S. A clivagem de pró-sequências do terminal amino de subunidades β durante a formação de partículas expõe os resíduos treonina no terminal amino, os quais servem como nucleófilos catalíticos. As subunidades responsáveis pela actividade catalítica nas proteassomas possuem assim um resíduo nucleofílico no terminal amino e estas subunidades pertencem à família das hidrolases nucleofílicas no terminal N (Ntn) (em que o resíduo nucleofílico no terminal N é, por exemplo, Cys, Ser, Thr e outros radicais nucleofílicos). Esta família compreende, por exemplo, penicilina G-acilase (PGA), penicilina v-acilase (PVA), glutamina PRPP-amidotransferase (GAT) e glicosil-asparaginase bacteriana. Para além das subunidades [β] expressas ubiquitina, os vertebrados superiores também possuem três subunidades [β] indutíveis por interferão [γ] (LMP7, LMP2 e MECLl), as quais substituem as suas réplicas normais, X, Y e Z, respectivamente, alterando assim as actividades catalíticas do proteassoma. Por meio da utilização de substratos peptídicos diferentes, foram 3 definidas três actividades proteoliticas principais para o proteassoma 20S do eucariota: uma actividade do tipo quimotripsina (CT-L), que efectua a clivagem após residuos hidrofóbicos longos; uma actividade do tipo tripsina (T-L), que efectua a clivagem após residuos básicos; e uma actividade de hidrólise do péptido peptidilglutamilo (PGPH), que efectua a clivagem após residuos acidicos. Foram também descritas duas actividades suplementares, menos caracterizadas, em relação à proteassoma: uma actividade BrAAP, que efectua a clivagem após aminoácidos de cadeia ramificada; e uma actividade SNAAP, que efectua a clivagem após aminoácidos pequenos neutros. As actividades proteoliticas principais do proteassoma parecem ser fornecidas por diferentes locais catalíticos, uma vez que os inibidores, as mutações pontuais nas subunidades [β] e a permuta de subunidades [β] indutiveis por interferão [γ] alteram estas actividades em diversos níveis.

Existem diversos exemplos de moléculas pequenas que são utilizadas para a inibição da actividade de proteassoma; no entanto, normalmente falta a estes compostos a especificidade, a estabilidade ou a potência necessárias para explorar e utilizar os papéis das proteassomas aos níveis celular e molecular. Assim sendo, é necessário uma síntese de moléculas pequenas de inibidor com uma especificidade aumentada para o local, uma estabilidade e solubilidade melhoradas e uma potência aumentada para permitir a exploração dos papéis das proteassomas aos níveis celular e molecular.

Por exemplo, encontram-se descritos péptidos como inibidores de proteassomas no documento WO 01/28579, por Myung J. et al.: "Lack of Proteasome Active Site Allostery 4 as Revealed by Subunit-Specific Inhibitors", Molecular Cell, Fevereiro de 2001, volume 7, no. 2, Fevereiro de 2001 (2001-02), páginas 411-420; e Kim, K.P. et al., "Proteasome Inhibition by the Natural Products Epoxomicin and Dihydroeponemycin: Insights into Specificity and Potency", Bio. Org. Med. Chem. Let., volume 9, 1999, páginas 3335-3340 .

Descrição abreviada da invenção A invenção diz respeito análogos e pró-fármacos de classes de moléculas designadas por α',β'-epóxidos de péptidos. Sabe-se que as moléculas congéneres se ligam eficaz, irreversível e selectivamente a hidrolases nucleofilicas do terminal N (Ntn) e podem inibir especificamente actividades particulares de enzimas que possuem uma actividade catalítica múltipla.

No início pensava-se que as proteassomas serviam apenas para eliminar as proteínas desnaturadas e mal dobradas, sabe-se agora que as proteassomas constituem uma maquinaria proteolítica que regula os níveis de diversas proteínas intracelulares através da sua degradação, de um modo dependente dos sinais. Assim, existe um grande interesse em identificar reagentes que possam perturbar especificamente as actividades das proteassomas e de outras hidrolases Ntn, podendo ser utilizadas como sondas para o estudo do papel destas enzimas nos processos biológicos. Os análogos e pró-fármacos de compostos dirigidos a hidrolases Ntn são aqui descritos, sintetizados e investigados. São aqui descritos e reivindicados epóxidos peptídicos que possam inibir de um modo potente, selectivo e irreversível 5 actividades particulares de proteassomas, conforme definidos pela fórmula estrutural II infra.

Ao contrário de outros inibidores com base em péptidos, não é esperado que os epóxidos de péptidos e as aziridinas de péptidos aqui descritos inibam substancialmente proteases não proteassómicas, tais como tripsina, quimotripsina, catepsina B, papaina e calpaína para concentrações até 50 μΜ. Para concentrações superiores, é possível observar inibição, mas é esperado que seja competitiva e não irreversível, se o inibidor apenas competir com o substrato. Também é esperado que os novos epóxidos de péptidos e aziridinas de péptidos inibam a activação de NF-κΒ e que estabilizem os níveis de p53 em culturas de células. Além do mais, é esperado que estes compostos possuam actividade anti-inflamatória. Assim, estes compostos podem ser sondas moleculares únicas, que apresentem a versatilidade para explorar a função de enzimas Ntn em processos biológicos e patológicos normais.

De acordo com um aspecto, a invenção proporciona análogos e pró-fármacos de inibidores que compreendem um anel com três membros que contém um heteroátomo, conforme definidos pelas fórmula estrutural II infra. Estes inibidores podem inibir a actividade catalítica de enzimas hidrolase nucleofílica no terminal N (por exemplo, o proteassoma 20S ou o proteassoma 26S), no caso de o referido inibidor estar presente numa concentração inferior a 50 μΜ. No que diz respeito ao proteassoma 20S, inibidores particulares de hidrolase inibem a actividade de tipo quimotripsina do proteassoma 20S, no caso de o inibidor estar presente numa concentração inferior a 5 μΜ e não inibem uma actividade de tipo tripsina um uma actividade 6 PGPH do proteassoma 20S, no caso de estar presente numa concentração inferior a 5 μΜ. 0 inibidor de hidrolase é um péptido oí' , β' -epóxido-cetona e o péptido pode ser um tetrapéptido. 0 tetrapéptido pode compreender cadeias laterais ramificadas ou não ramificadas, tais como hidrogénio, alquilo(Ci-C6), hidroxialquilo(Ci-C6), alcoxi-alquilo (Ci—C6), arilo, aralquilo (Ci—C6), alquil (Ci-Cê) -amida, alquil (Ci-Cê)-amina, ácido carboxílico (Ci-Cê) , éster carboxilico (Ci-C6) , alquil (Ci-C6) -tiol ou alquil (Ci—C6) -tio-éter, por exemplo, isobutilo, fenilmetilo e 2-feniletilo. O carbono a.' do a.', β' -epóxido-cetona pode ser um átomo de carbono quiral, tal como um carbono (R) ou com a configuração β, tais como os aqui definidos.

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona composições farmacêuticas, incluindo um veiculo farmaceuticamente aceitável e uma quantidade farmacêutica eficaz de análogos ou pró-fármacos do inibidor de hidrolase, as quais melhoram os efeitos de doenças neurodegenerativas (tais como a doença de Alzheimer), doenças de perda muscular, cancro, doenças infecciosas crónicas, febre, inactividade muscular, enervação, lesões nos nervos, jejum e patologias associadas à imunidade, entre outras.

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona composições anti-inflamatórias.

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona compostos utilizáveis para o seguinte: inibir ou reduzir uma infecção com VIH num sujeito; afectar o nível da expressão de genes virais num sujeito; alterar a variedade de péptidos antigénicos produzidos pelo proteassoma num organismo; determinar se um processo celular, de 7 desenvolvimento ou fisiológico ou resultado num organismo é regulado pela actividade proteolítica de uma hidrolase Ntn particular; tratar a doença de Alzheimer num sujeito; reduzir a taxa de degradação de proteínas nos músculos numa célula; reduzir a taxa de degradação intracelular de proteínas numa célula; reduzir a taxa de degradação de proteínas p53 numa célula; inibir o desenvolvimento de cancros associados a p53 num sujeito; inibir a apresentação de antigénios numa célula; suprimir o sistema imunitário de um sujeito; inibir a degradação de ΙκΒ-α num organismo; reduzir o teor de NF-κΒ numa célula, músculo, órgão ou sujeito; afectar os ciclos de células eucarióticas dependentes de ciclina; tratar doenças proliferativas num sujeito; afectar a regulação dependente de proteassoma de oncoproteínas numa célula; tratar o desenvolvimento de cancro num sujeito e tratar a apoptose associada a p53 num sujeito e pesquisa de proteínas processadas por hidrolases nucleofilicas no terminal N numa célula. Cada uma destas utilizações implica a administração ou a promoção de contacto de uma quantidade eficaz de uma composição que compreende os inibidores de hidrolase aqui descritos, a um sujeito, uma célula, um tecido, um órgão ou um organismo. Há outras características e vantagens da invenção que se tornarão aparentes a partir da descrição detalhada seguinte e a partir das reivindicações.

Descrição detalhada da invenção A invenção diz respeito a compostos úteis enquanto inibidores de enzimas. De um modo geral, estes compostos são úteis para inibir enzimas que possuem um grupo nucleofilico no terminal N. Por exemplo, as actividades de enzimas ou de subunidades de enzimas que possuem aminoácidos no terminal N com nucleófilos nas suas cadeias laterais, tais como treonina, serina ou cisteina, podem ser inibidas com sucesso pelos inibidores de enzimas aqui descritos. As actividades de enzimas ou de subunidades de enzimas que possuem grupos nucleofilicos não aminoácidos no seu terminal N, tais como, por exemplo, grupos protectores ou hidratos de carbono, também podem ser inibidas com sucessos pelos inibidores de enzimas aqui descritos.

Embora não estejam associados a qualquer teoria particular de funcionamento, crê-se que tais nucleófilos no terminal N de Ntn formam adutos covalentes com o grupo funcional epóxido dos inibidores de enzimas aqui descritos. Por exemplo, na subunidade P5/Pre2 do proteassoma 20S, crê-se que a treonina no terminal N forme irreversivelmente um aduto morfolino ou piperazino após reacção com um epóxido de péptido, tal como os aqui descritos. Tal formação de aduto implica a clivagem epóxido por abertura do anel.

De acordo com variantes que incluem tais grupos ligados a carbonos a', a estereoquimica do carbono a' (o carbono que forma uma parte do anel epóxido) pode ser (R) ou (S). No contexto da invenção, a estereoquimica do carbono a' é (R), isto é, o átomo X é β ou está acima do plano da molécula.

No que diz respeito à estereoquimica, são seguidas as regras de Cahn-Ingold-Prelog para a determinação da estereoquimica absoluta. Estas regras encontram-se descritas, por exemplo, na obra Organic Chemistry, Fox and Whitesell; Jones and Bartlett Publishers, Boston, Mass. (1994); Secção 5-6, págs. 177-178. Os péptidos podem possuir uma estrutura principal repetivel com cadeias 9 laterais que se prolongam a partir das unidades principais. De um modo geral, cada unidade principal possui uma cadeia lateral a si associada, embora haja alguns casos em que a cadeia lateral é um átomo de hidrogénio.

As cadeias laterais que se prolongam a partir das unidades principais podem incluir cadeias laterais de aminoácidos alifáticos ou aromáticos naturais, tais como metilo (alanina), isopropilo (valina), sec-butilo (isoleucina), isobutilo (leucina) e fenilmetilo (fenil-alanina). As cadeias laterais também podem ser outros grupos alifáticos ou aromáticos ramificados ou não ramificados, tais como etilo, n-propilo, n-butilo, t-butilo e derivados substituídos de arilo, tais como 1-feniletilo, 2-feniletilo, (1-naftil)-metilo, (2-naftil)-metilo, 1—(1— naftil)-etilo, 1-(2-naftil)-etilo, 2-(1-naftil)-etilo, 2-(2-naftil)-etilo e compostos semelhantes.

De acordo com algumas variantes, é possível introduzir resíduos polares ou carregados nos epóxidos de péptidos. Por exemplo, é possível introduzir aminoácidos que ocorrem naturalmente, tais como é possível (Thr, Tyr, Ser) que contêm hidroxi ou (Met, Cys) que contêm enxofre, bem como aminoácidos não essenciais, por exemplo, taurina, carnitina, citrulina, cistina, ornitina, norleucina e outros. Também é possível incluir radicais carregados ou polares com substituintes na cadeia lateral que não ocorrem naturalmente, tais como, por exemplo, cadeias alquilo(Ci— Ce) ou grupos arilo (C6-C12) com um ou vários grupos hidroxi, alcoxi de cadeia pequena, sulfureto, tio, carboxilo, éster, amido ou amino, ou tais substituintes serem substituídos com um ou vários átomos de halogéneo. De acordo com algumas 10 variantes preferidas, existe pelo menos um grupo arilo presente na cadeia lateral do residuo peptídico.

De acordo com algumas variantes, as unidades principais são unidades de amida [-NH-CHR-C(=0)-], em que o simbolo R representa a cadeia lateral.

De acordo com outras variantes, as unidades principais são unidades amida alquiladas em N (por exemplo, N-metil e semelhantes). Ainda de acordo com outras variantes, o carbono α do aminoácido é modificado por substituição a-alquilo, por exemplo, ácido aminoisobutírico. De acordo com outras variantes em que se usam grupos aminoácidos, é possivel utilizar aminoácidos D.

De acordo com a invenção, o inibidor possui uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável,

em que o simbolo L está ausente ou é seleccionado entre C=0, C=S e SO2 e de preferência o simbolo L está ausente ou é C=0; o simbolo Q está ausente ou é seleccionado entre 0, NH e N-alquilo (Ci-C6), de preferência o simbolo Q está ausente ou é 0 ou NH e mais preferencialmente Q está ausente ou é 0; o símbolo X representa 0; cada um dos símbolo R2 e R4 representa um grupo seleccionado independentemente entre alquilo(Ci-C6), hidroxi-alquilo(C4-Cê), alcoxialquilo (Ci-Cê), arilo e aralquilo (Ci-Cê), cada um 11 dos quais é facultativamente substituído com um ou vários substituintes amida, amina, ácido carboxílico (ou um seu sal), éster (incluindo éster alquílico (C1-C5) e éster arílico), tiol ou tio-éter; o símbolo R5 representa N(R6)LQR7; 0 símbolo R6 representa um grupo seleccionado entre hidrogénio, OH e alquilo (Ci- C6) e de preferência é alquilo(Ci— c6); 0 símbolo R7 representa um grupo seleccionado entre CM 0 σι th 0 00 çC (=0)0-alquil (Ci—Ce) -, (R 10) 2N-alquil (Cr -C12)-, (R10) 3N+-alquil (C1-C12) heterociclil-, cada um dos símbolos R8 e R9 representa um grupo seleccionado independentemente entre hidrogénio, um catião metálico, alquilo (Ci—C6), alcenilo (Ci-C6), alcinilo (Ci-C6), arilo, heteroarilo, aralquilo(Ci-C6) e heteroaralquilo(Ci-C6) e de preferência entre hidrogénio, um catião metálico e alquilo(Ci—C6), ou os símbolos R8 e R9, em conjunto, representam alquilo(Ci—C6), formando assim um anel; cada um dos símbolos R10 representa um grupo seleccionado independentemente entre hidrogénio e alquilo(Ci-C6) e de preferência alquilo (Ci-C6) ; desde que no caso de o símbolo R6 representar H ou CH3 e o símbolo Q estar ausente, então o radical LR7 não é hidrogénio, alquilo(Οχ-Οβ)-C=0 insubstituído, uma outra cadeia de aminoácidos, t-butoxicarbonilo (Boc), benzoílo (Bz) , fluoreno-9-ilmetoxicarbonilo (Fmoc), trifenilmetil-(tritil), benziloxicarbonilo (Cbz), tricloroetoxicarbonilo (Troe); ou arilo ou heteroarilo substituído ou insubstituído.

De acordo com algumas variantes, o símbolo L representa C=0, o símbolo Q está ausente e os símbolos R2 e 12 R4 representam um grupo seleccionado entre alquilo(Ci—C6) e aralquilo (Ci-Cê) . Em tais variantes, de preferência, os símbolos R2 e R4 representam alquilo (Ci-C6) . Na variante mais preferida, os símbolos R2 e R4 representam isobutilo.

De acordo com algumas variantes, o símbolo L representa C=0, o símbolo Q está ausente, o símbolo R6 representa H, os símbolos R2 e R4 representam isobutilo e o símbolo R7 representa heterociclil-, em que o heterociclo é um heterociclo que contém azoto, tal como piperazino (incluindo N-(alquil inferior)-piperazino), morfolino e piperidino.

De acordo com algumas variantes, um composto de fórmula estrutural II é seleccionado entre:

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De acordo com algumas variantes, são especificamente excluídos os compostos descritos na patente de invenção norte-americana n° 6 831 099.

Um aspecto da invenção diz respeito a um dispositivo médico que compreende uma composição aqui descrita, a qual inclui um inibidor que satisfaz a estrutura da fórmula estrutural II. De acordo com uma variante, a composição é incorporada num dispositivo médico. De acordo com algumas 14 variantes, o dispositivo médico é um gel que compreende uma matriz polimérica ou uma matriz de cerâmica e um inibidor. 0 referido polímero pode ser um polímero que ocorre naturalmente ou sintético. De acordo com outra variante, o referido gel serve como depósito do fármaco, como adesivo, como sutura, como barreira ou como selante.

De acordo com outro aspecto, a invenção diz respeito a um dispositivo médico que compreende um substrato que possui uma superfície sobre a qual de coloca um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II. De acordo com uma variante, o inibidor é colocado directamente sobre o dispositivo médico. De acordo com outra variante, é colocado um revestimento, revestimento esse que compreende uma matriz polimérica ou uma matriz de cerâmica com um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II, disperso ou dissolvido no revestimento.

De acordo com uma variante, o dispositivo médico é uma endoprótese coronária, vascular, periférica ou biliar. Mais particularmente, a endoprótese da presente invenção é uma endoprótese expansível. Quando revestida com uma matriz que contém um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula geral II, a matriz é flexível para acomodar estados comprimidos ou expandidos de tal endoprótese expansível. De acordo com outra variante da presente invenção, a endoprótese possui pelo menos uma porção que pode ser inserida ou implantada no corpo de um paciente, em que a porção possui uma superfície que estão adaptada para a exposição ao tecido corporal e em que pelo menos uma parte da superfície está revestida com um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II ou está 15 revestida com um revestimento que compreende uma matriz que possui um inibidor com uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II, ai disperso ou dissolvido. Como exemplo de uma endoprótese adequada refere-se a descrita na patente de invenção norte-americana n° 4 733 665, a qual se considera aqui incorporada por referência na sua totalidade.

De acordo com outra variante, o dispositivo médico da presente invenção é um implemento cirúrgico, tal como um implante vascular, um dispositivo intraluminal, um selante cirúrgico ou um suporte vascular. Mais particularmente, o dispositivo médico da presente invenção é um cateter, uma porta de acesso vascular implantada, um cateter venoso central, um cateter arterial, um enxerto vascular, uma bomba de balão intra-aórtica, uma sutura, uma bomba de assistência ventricular, uma barreira de eluição de fármaco, um adesivo, um revestimento vascular, um suporte extra/perivascular, um filtro de sangue ou um filtro adaptado para a distribuição num vaso sanguíneo, revestido com um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II, quer directamente quer por meio de uma matriz que contém um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula geral II.

De acordo com algumas variantes, o dispositivo médico intraluminal é revestido com um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II, um revestimento que compreende uma matriz biologicamente tolerada e um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II, em que o referido dispositivo possui uma superfície interior e uma superfície exterior, em que o revestimento é aplicada pelo menos a uma 16 parte da superfície interior, da superfície exterior ou de ambas.

De acordo com algumas variantes, o dispositivo médico pode ser útil para a prevenção de restenose após angioplastia. 0 dispositivo médico também pode ser útil para o tratamento de diversas doenças ou patologias uma vez que proporciona uma administração localizada de um inibidor que possui uma estrutura que satisfaz a fórmula estrutural II. Como tais doenças ou patologias refere-se restenose, inflamação, artrite reumatóide, lesões teciduais devido a inflamação, doenças hiperproliferativas, psoríase grave ou artrítica, doenças de perda muscular, doenças infecciosas crónicas, resposta imune anormal, patologias que implicam placas vulneráveis, lesões associadas a patologias isquémicas e infecção e proliferação virai. Como exemplos de doenças e patologias que podem ser submetidas a um tratamento, incluindo os dispositivos médicos revestidos com fármaco da presente invenção, refere-se aterosclerose, síndrome coronário agudo, doença de Alzheimer, cancro, febre, atrofia muscular, enervação, oclusões vasculares, apoplexia, infecção por VIH, lesão de nervos, insuficiência renal associada a acidose e insuficiência hepática. Ver, v.g., Goldberg, patente de invenção norte-americana n° 5 340 736. O termo "alquilo(Cx-Cy)" designa grupos hidrocarboneto saturados substituídos ou insubstituídos, incluindo grupo alquilo de cadeia linear ou alquilo de cadeia ramificada que contêm entre x e y átomos de carbono na cadeia, incluindo grupos haloalquilo, tais como trifluorometilo e 2,2,2-trifluoroetiolo, etc.. O termo alquilo(C0) designa um hidrogénio em que o grupo está numa posição terminal ou uma 17 ligação se interno. Os termos "alcenilo (C2-Cy)" e "alcinilo (C2-Cy)" designam grupos alifáticos insaturados análogos em comprimento e com as substituições possíveis dos grupos alquilo descritos antes, mas que contém pelo menos uma ligação dupla ou ligação tripla, respectivamente. 0 termo "alcoxi" designa um grupo alquilo que possui um átomo de oxigénio a ele ligado. Como grupos alcoxi representativos refere-se metoxi, etoxi, propoxi, terc-butoxi e semelhantes. 0 termo "éter" designa dois hidrocarbonetos ligados de um modo covalente por meio de um oxigénio. Assim, o substituinte de um grupo alquilo que permita obter um éter desse alquilo é um alcoxi ou assemelha-se a este. 0 termo "alcoalquilo(Ci-C6) " designa um grupo alquilo (C2—C6) substituído com um grupo alcoxi, formando assim um éter. 0 termo "aralquilo (Ci-C6) ", tal como aqui utilizado, designa um grupo alquilo (C2—C6) substituído com um grupo arilo.

Os termos "amina" e "amino" são conhecidos na especialidade e designam aminas não substituídas e substituídas e seus sais, v.g., um radical que pode ser representado pela fórmula geral:

em que cada um dos símbolos R9, R10 e Rltv representa independentemente um átomo de hidrogénio, um alquilo, um alcenilo, -(CH2)m-R8, ou então os símbolos R9 e R10, considerados em conjunto com o átomo de N ao qual se encontram ligados, formam um heterociclo que possui entre 4 18 e 8 átomos na estrutura do anel; o símbolo R8 representa um arilo, um cicloalquilo, um cicloalcenilo, um heterociclilo ou um policiclilo; e o símbolo m representa zero ou um número inteiro compreendido entre 1 e 18. De acordo com variantes preferidas, apenas um dos símbolos R9 ou R10 pode representar um carbonilo, v.g., R9, R10 e o átomo de azoto em conjunto não formam uma imida. De acordo com variantes ainda mais preferidas, cada um dos símbolos R9 e R10 (e facultativamente R10 ) representa independentemente um átomo de hidrogénio, u alquilo, um alcenilo ou -(CH2)m-R8. De acordo com algumas variantes, o grupo amino é básico, o que significa que possui um valor de pKa > 7,00. As formas protonadas destes grupos funcionais possuem valores de pKa superiores a 7,00.

Os termos "amida" e "amido" são conhecidos na especialidade como grupos carbonilo substituídos com amino e compreendem um radical que pode ser representado pela fórmula geral:

em que os símbolos R9 e R10 possui as significações definidas antes. De acordo com variantes preferidas, a amida não inclui imidas, as quais podem ser instáveis. O termo "arilo", tal como aqui utilizado, designa grupos aromáticos com um único anel com 5, 6 ou 7 membros, em que cada átomo do anel é um átomo de carbono. O termo "arilo" também designa sistemas de anéis policíclicos que possuem dois ou mais anéis cíclicos, em que dois ou mais átomos de carbono são comuns a dois anéis unidos e em que pelo menos um dos anéis é aromático, v.g., os outro anéis 19 cíclicos podem ser cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos. Como grupos arilo refere-se benzeno, naftaleno, fenantreno e semelhantes.

Os termos "carbociclo" e "carbociclilo", tal como aqui utilizados, designam um anel não aromático substituído ou insubstituído, em que cada átomo do anel é um átomo de carbono. Os termos "carbociclo" e "carbociclilo" também designam sistemas de anéis policíclicos que possuem dois ou mais anéis cíclicos, em que dois ou mais átomos de carbono são comuns a dois anéis unidos e em que pelo menos um dos anéis é carbocíclico, v.g., os outro anéis cíclicos podem ser cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos. 0 termo "carbonilo" é conhecido na especialidade e compreende radicais que podem ser representados pela fórmula geral:

em que o símbolo X representa uma ligação ou representa um átomo de oxigénio ou enxofre e o símbolo R11 representa um átomo de hidrogénio, um alquilo, um alcenilo, -(CH2)m-R8 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, o símbolo R11' representa um átomo de hidrogénio, um alquilo, um alcenilo ou - (CH2)m-R8, em que os símbolos m e R8 possuem as significações definidas antes. No caso de o símbolo X representar um átomo de oxigénio e os símbolos R11 ou Rir representarem um grupo diferente de hidrogénio, então a fórmula representa um "éster". No caso de o símbolo X representar um átomo de oxigénio e o símbolo R11 20 representar um átomo de hidrogénio, então a fórmula representa um "ácido carboxilico".

Tal como aqui utilizado, o termo "enzima" pode ser qualquer molécula proteinácea parcial ou total que desempenha uma reacção química de um modo catalítico. Tais enzimas podem ser enzimas nativas, enzimas de fusão, pró-enzimas, apoenzimas, enzimas desnaturadas, enzimas famesiladas, enzimas ubiquitinadas, enzimas aciladas gordas, enzimas gerangeraniladas, enzimas ligadas a GPI, enzimas ligadas a lípidos, enzimas preniladas, enzimas mutantes que ocorrem naturalmente ou geradas artificialmente, enzimas com modificações na cadeia lateral ou na estrutura principal, enzimas que possuem sequências líder e enzimas complexadas com material não-proteináceo, tal como proteoglicanos, proteolipossomas. As enzimas podem ser preparadas por quaisquer meios, incluindo expressão natural, expressão promovida, clonagem, sínteses peptídicas com base em sólidos ou com base em diversas soluções e métodos semelhantes conhecidos pelos especialistas na matéria. O termo "heteroarilo (Ci-C6) ", tal como aqui utilizado, designa um grupo alquilo (Ci-C6) substituído com um grupo heteroarilo. O termo "heteroarilo" compreende estruturas de anéis aromáticos com 5 a 7 membros, substituído ou insubstituídos, mais preferencialmente anéis com 5 a 6 membros, cujas estruturas de anel incluem entre um e quatro heteroátomos. O termo "heteroarilo" também compreende sistemas de anéis policíclicos que possuem dois ou mais anéis cíclicos, em que dois ou mais átomos de carbono são comuns a dois anéis unidos e em que pelo menos um dos anéis é heteroaromático, 21 v.g., os outro anéis cíclicos podem ser cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos. Como grupos heteroarilo refere-se, por exemplo, pirrole, furano, tiofeno, imidazole, oxazole, tiazole, triazole, pirazole, piridina, pirazina, piridazina, pirimidina e semelhantes. 0 termo "heteroátomo", tal como aqui utilizado, designa um átomo de qualquer elemento diferente de carbono ou hidrogénio. Como heteroátomos preferidos refere-se azoto, oxigénio, fósforo e enxofre.

Os termos "heterociclilo" ou "grupo heterociclico" designa estruturas de anéis não aromáticos, substituídos ou insubstituídos, com 3 a 10 membros, mais preferencialmente anéis com 3 a 7 membros, cujas estruturas de anel compreendem um a quatro heteroátomos. Os termos "heterociclilo" ou "grupo heterociclico" compreendem ainda sistemas de anéis policíclicos que possuem dois ou mais anéis cíclicos, em que dois ou mais átomos de carbono são comuns a dois anéis unidos e em que pelo menos um dos anéis é heterociclico, v.g., os outro anéis cíclicos podem ser cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos. Como grupos heterociclo refere-se, por exemplo, piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina, lactonas, lactamas e semelhantes. O termo "hidroxialquilo(Ci-C6)" designa um grupo alquilo(Ci-C6) substituído com um grupo hidroxi.

Tal como aqui utilizado, o termo "inibidor" pretende descrever um composto que bloqueia ou reduz uma actividade de uma enzima (por exemplo, inibição da clivagem proteolítica de substratos peptídicos fluorogénicos convencionais, tais como suc-LLVY-AMC, Box-LLR-AMC e Z-LLE- 22 AMC, inibição de diversas actividades catalíticas do proteassoma 20S). Um inibidor pode actuar com uma inibição competitiva, não competitiva ou sem competição. Um inibidor pode ligar-se de um modo reversível ou irreversível, pelo que o termo compreende compostos que são substratos suicidas de uma enzima. Um inibidor pode modificar um ou vários locais no local activo da enzima ou próximo deste, ou pode provocar uma alteração conformacional num outro local da enzima.

Tal como aqui utilizado, o termo "péptido" compreende a ligação amida convencional com substituintes α convencionais mas também os peptidomiméticos normalmente utilizados, outras ligações modificadas, cadeias laterais que não ocorrem naturalmente e modificações de cadeias laterais, conforme a seguir se descreve mais minuciosamente.

Os termos "policiclilo" ou "policíclico" designam dois ou mais anéis (v.g., cicloalquilos, cicloalcenilos, cicloalcinilos, arilos, heteroarilos e/ou heterociclilos), nos quais dois ou mais átomos de carbono são comuns a dois anéis adjacentes, v.g., os anéis são "anéis fundidos". Cada um dos anéis do policiclo pode ser substituído ou insubstituido. 0 termo "prevenir" é conhecido na especialidade e quando é utilizado em relação a uma patologia, tal como uma recorrência local (v.g., dor), uma doença tal como o cancro, um complexo de síndrome tal como paragem cardíaca ou qualquer outra patologia médica, é bem conhecido na especialidade e compreende a administração de uma composição que reduz a frequência, ou atrasa o inicio, de sintomas de uma patologia médica num sujeito, em relação a um sujeito que não receba a composição. Assim, a prevenção 23 do cancro compreende, por exemplo, a redução do número de crescimentos cancerígenos detectáveis numa população de pacientes que estejam a receber um tratamento profiláctico, em relação a uma população de controlo não tratada, e/ou retardar o aparecimento de crescimentos cancerígenos detectáveis numa população tratada versus uma população de controlo não tratada, v.g., por uma quantidade estatística e/ou clinicamente significativa. A prevenção de uma infecção compreende, por exemplo, a redução do número de diagnósticos da infecção numa população tratada versus uma população de controlo não tratada; e/ou retardar o início dos sintomas da infecção numa população tratada versus uma população de controlo não tratada. A prevenção de dor compreende, por exemplo, a redução da magnitude de sensações de dor, ou em alternativa o seu atraso, verificado por sujeitos numa população tratada versus uma população de controlo não tratada. 0 termo "pró-fármaco" compreende os compostos que, sob condições fisiológicas, são convertidos em agentes terapeuticamente activos. Constitui um método comum para a produção de um pró-fármaco a inclusão de radicais seleccionados que sejam hidrolisáveis em condições fisiológicas para se obter a molécula desejada. De acordo com outras variantes, o pró-fármaco é convertido por meio de uma actividade enzimática do animal hospedeiro. 0 termo tratamento "profiláctico ou terapêutico" é conhecido na especialidade e compreende a administração ao hospedeiro de uma ou várias das composições referidas. No caso de ser administrada antes de manifestações clínicas da patologia indesejada (v.g., doenças ou outra patologia indesejada no animal hospedeiro), então o tratamento é 24 profiláctico (isto é, protege o hospedeiro contra o desenvolvimento da patologia indesejada), ao passo que no caso ser administrada após a manifestação da patologia indesejada, então o tratamento é terapêutico (isto é, pretende diminuir, melhorar ou estabilizar a patologia indesejada existente ou os seus efeitos secundários). 0 termo "proteassoma", tal como aqui utilizado, pretende incluir imuno-proteassomas e proteassomas constitutivos. 0 termo "substituído" designa radiais que possuem substituintes a substituir um átomo de hidrogénio num ou em diversos átomos de carbono da estrutura principal. Faz-se observar que os termos "substituição" ou "substituído com" compreendem a condição implícita de que tal substituição está em conformidade com a valência permitida do átomo substituído e do substituinte, e que a substituição dá origem a um composto estável, v.g., o qual não sofre uma transformação espontânea, tal como por rearranjo, ciclização, eliminação, etc.. Tal como aqui utilizado, o termo "substituído" pretende abranger todos os substituintes permitidos de compostos orgânicos. De acordo com um aspecto mais amplo, os substituintes permitidos compreendem os substituintes acíclicos ou cíclicos, ramificados ou não ramificados, carbocíclicos ou heterocíclicos, aromáticos ou não aromáticos de compostos orgânicos. Os substituintes permitidos podem ser um ou vários e iguais ou diferentes para compostos orgânicos adequados. Para o propósito da presente invenção, os heteroátomos, tais como azoto, podem ter substituintes hidrogénio e/ou quaisquer substituintes permitidos de compostos orgânicos aqui descritos que satisfaçam as 25 valências dos heteroátomos. Como exemplos de substituintes refere-se um átomo de halogéneo, um hidroxilo, um carbonilo (tal como, um carboxilo, um alcoxicarbonilo, um formilo ou um acilo), um tiocarbonilo (tal como um tioéster, um tioacetato ou um tioformato), um alcoxi, um fosforilo, um fosfato, um fosfonato, um fosfinato, um amino, um amido, uma amidina, , uma imina, um ciano, um nitro, um azido, um sulfidrilo, um alquiltio, um sulfato, um sulfonato, um sulfamoílo, um sulfonamido, um sulfonilo, um heterociclilo, um aralquilo ou um radical aromático ou heteroaromático. É do conhecimento dos especialistas na matéria que os radicais substituídos na cadeia hidrocarboneto podem eles próprios ser substituídos, se adequado. A expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto no que diz respeito ao método de tratamento do sujeito, designa uma quantidade do composto numa preparação que, no caso de ser administrada como parte de um regime de dosagem desejado (a um mamífero e de preferência a um ser humano), provoque o alívio de um sintoma, melhore a patologia ou retarde o início da doença de acordo com padrões clinicamente aceitáveis para o distúrbio ou patologia que se pretende tratar ou para fins cosméticos, v.g., com uma razão benefício/risco razoável, aplicável a qualquer tratamento médico. 0 termo "tioéter" designa um grupo alquilo, tal como definido antes, que possui um radical enxofre a si ligado. De acordo com variantes preferidas, o termo "tioéter" é representado por -S-alquilo. Como grupos tioéter representativos refere-se metiltio, etiltio e semelhantes.

Tal como aqui utilizado, o termo "tratar" ou "tratamento" compreende a reversão, redução ou a 26 interrupção dos sintomas, dos sinais clínicos e da patologia subjacente a um estado patológico, de modo a melhorar ou estabilizar o estado de um sujeito.

Selectividade para proteassoma 2OS

Os análogos e pró-fármacos dos inibidores enzimáticos aqui descritos são úteis em parte devido à sua acção de inibição do proteassoma 20S. Além disso, ao contrário de outros inibidores de proteassoma 20S, os compostos aqui descritos são possuem uma selectividade elevada para o proteassoma 20S, em comparação com outras enzimas protease. Isto é, os compostos da presente invenção apresentam selectividades para o proteassoma 20S superiores a outras proteases, tais como catepsinas, calpaínas, papaínas, quimotripsina, tripasina, tripeptidil-pepsidase li. As selectividades dos inibidores enzimáticos de proteassoma 20S são tais que a concentrações inferiores a 50 μΜ, os inibidores enzimáticos apresentam uma inibição da actividade catalítica do proteassoma 20S, não demonstrando inibição da actividade catalítica de outras proteases, tais como catepsinas, calpaínas, papaínas, quimotripsina, tripasina, tripeptidil-pepsidase II. De acordo com variantes preferidas, os inibidores enzimáticos apresentam inibição da actividade catalítica do proteassoma 20S para concentrações inferiores a cerca de 10 μΜ, não demonstrando inibição da actividade catalítica de outras proteases para estas concentrações. De acordo com variantes ainda mais preferíveis, os inibidores enzimáticos apresentam inibição da actividade catalítica do proteassoma 20S para concentrações inferiores a cerca de 1 μΜ, não demonstrando inibição da actividade catalítica de outras proteases para 27 estas concentrações. Os ensaios cinéticos de enzimas encontram-se descritos no pedido de patente de invenção norte-americana com o número de série 09/569748, exemplo 2 e por Stein et al., Biochem. (1996), 35, 3899-3908.

Selectividade para actividade do tipo quimotripsina

De acordo com variantes particulares para a inibição enzimática, os análogos e pró-fármacos dos compostos aqui descritos são ainda úteis visto que podem inibir eficaz e selectivamente a actividade de tipo quimotripsina do proteassoma 20S, em comparação com a actividade de tipo tripsina e a actividade PGHP. A actividade de tipo quimotripsina de proteassoma 20S é caracterizada pela clivagem de péptidos na vizinhança próxima de resíduos hidrofóbicos grandes. Em particular, a actividade de tipo quimotripsina de hidrolases Ntn pode ser determinada pela clivagem de um substrato padrão. Exemplos de tais substratos são conhecidos na especialidade. Por exemplo, é possível utilizar um derivado de leucilleucilvalinil-tirosina. Os ensaios cinéticos de enzimas encontram-se descritos no pedido de patente de invenção norte-americana com o número de série 09/569748, exemplo 2 e por Stein et al., Biochem. (1996), 35, 3899-3908.

Utilizações dos inibidores enzimáticos

As consequências biológicas da inibição de proteassoma são inúmeras. Ao nível celular, foi já descrita a acumulação de proteínas poliubiquitinada, as alterações morfológicas de células e a apoptose após tratamento de células com diversos inibidores de proteassoma. A inibição de proteassoma também já foi sugerida como possível 28 estratégia terapêutica anti-tumoral. O facto de a epoxomicina ter sido inicialmente identificada numa pesquisa de compostos anti-tumorais vem confirmar o proteassoma como alvo quimioterapêutico anti-tumoral. Assim sendo, estes compostos são úteis para o tratamento de cancro. A inibição de proteassoma também foi associada à inibição da activação de NF-κΒ e à estabilização dos niveis de p53. Assim, os compostos da invenção também podem ser úteis para inibir a activação de NF-κΒ e para a estabilização dos niveis de p53 em culturas de células. Uma vez que o NF-κΒ é um regulador importante da inflamação, constitui um alvo atractivo para a intervenção terapêutica anti-inflamatória. Assim, os compostos da invenção podem ser úteis para o tratamento de patologias associadas a inflamação crónica, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, COPD, psoriase, bronquite, enfisema e fibrose cística.

Os compostos aqui descritos podem ser utilizados para o tratamento de patologias mediadas directamente pela função proteolitica do proteassoma, tal como perda muscular, ou então mediadas indirectamente por meio de proteínas que são processadas pelo proteassoma, tais como NF-κΒ. 0 proteassoma participa na eliminação rápida e no processamento pós-tradução de proteínas (v.g., enzimas) implicadas na regulação celular (v.g., ciclo celular, transcrição de genes e vias metabólicas), na comunicação intercelular e na resposta imune (v.g., apresentação de antigénios). Como exemplos específicos a seguir apresentados refere-se a proteína β-amilóide e as proteínas reguladoras, tais como ciclinas, TGF-β e o factor de transcrição NF-kB. 29

Uma outra variante da invenção diz respeito aos compostos aqui descritos utilizáveis para o tratamento de doenças e patologias neurodegenerativas, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, apoplexia, lesão isquémica do sistema nervoso, trauma neural (v.g., lesão cerebral percussiva, lesão da espinal-medula e lesão traumática do sistema nervoso), esclerose múltipla e outras neuropatias imuno-mediadas (v.g., sindrome de Guillain-Barre e suas variantes, neuropatia axonal motora aguda, polineuropatia desmielinizante inflamatória aguda e sindrome de Fisher), complexo de demência associado a VIH/SIDA, axonomia, neuropatia diabética, doença de Parkinson, doença de Huntington, esclerose múltipla, meningite bacteriana, fúngica e virai, encefalite, demência vascular, demência de enfartes múltiplos, demência com corpos de Lewy, demência do lobo frontal, tal como doença de Pick, demências subcorticais (tais como Huntington ou paralisia supranuclear progressiva), sindromes de atrofia cortical focal (tais como afasia primária), demência metabólicas-tóxicas (tais como hipotiroidismo crónico ou deficiência em B12) e demências provocadas por infecções (tais como sifilis ou meningite crónica). A doença de Alzheimer é caracterizada pelos depósitos extracelulares de proteina β-amilóide (β-ΑΡ) nas placas senis e nos vasos cerebrais. A β-ΑΡ é um fragmento peptidico com 39 a 42 aminoácidos obtido a partir de um precursor da proteina amilóide (APP). São conhecidas pelo menos três isoformas de APP (695, 751 e 770 aminoácidos). A união alternativa de ARNm dá origem às isoformas; o processamento normal afecta uma porção da sequência de β-ΑΡ, evitando assim a geração de β-ΑΡ. Crê-se que o 30 processamento anormal de proteína pelo proteassoma contribui para a abundância de β-ΑΡ no cérebro de um paciente com Alzheimer. A enzima de processamento de APP em ratos contém cerca de dez subunidades diferentes (22 kDa-32 kDa) . A subunidade de 25 kDa possui uma sequência no terminal N de X-Gln-Asn-Pro-Met-X-Thr-Gly-Thr-Ser, que é idêntica à subunidade β de macropaína humana (Kojima, S. et ai., Fed. Eur. Biochem. Soc., (1992) 304:57-60). A enzima de processamento de APP é clivada na ligação Gln15-Lys16; na presença do ião cálcio, a enzima também se cliva na ligação Met-^Asp1 e nas ligações Asp^Ala2 para libertar o domínio extracelular de β-ΑΡ.

Assim, uma variante diz respeito a compostos utilizáveis para o tratamento da doença de Alzheimer, incluindo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de um composto (v.g., composição farmacêutica) aqui descrito. Tal tratamento compreende a redução da taxa de processamento de β-ΑΡ, a redução da taxa de formação de placas de β-ΑΡ, a redução da taxa de geração de β-ΑΡ e a redução dos sinais clínicos da doença de Alzheimer.

De acordo com outras variantes, a invenção diz respeito a caquexia e a doenças de perda muscular. O proteassoma degrada diversas proteínas em reticulócitos em maturação e em fibroblastos em crescimento. Em células privadas de insulina ou de soro, a taxa de proteólise é praticamente o dobro. A inibição de proteassoma reduz a proteólise, reduzindo assim a perda de proteínas dos músculos e a carga em nitrogénio nos rins ou no fígado. Os inibidores da invenção são úteis para o tratamento de patologias tais como o cancro, doenças infecciosas crónicas, febre, atrofia muscular, e enervação, lesão no 31 nervo, jejum, insuficiência renal associada a acidose, diabetes e insuficiência hepática. Ver, v.g., Goldberg, patente de invenção norte-americana n° 5 340 736. Assim, de acordo com variantes, a invenção compreende métodos para: reduzir a taxa de degradação de proteínas dos músculos numa célula; reduzir a taxa de degradação intracelular de proteínas; reduzir a taxa de degradação da proteína p53 numa célula; e inibir o crescimento de cancros associados a p53. cada um destes métodos compreende o contacto de uma célula (in vivo ou in vitro, v.g., um músculo de um sujeito) com uma quantidade eficaz de um composto (v.g., composição farmacêutica) aqui descrito.

Uma outra proteína processada pelo proteassoma é o NF-kB, que é um membro da família das proteínas Rei. A família Rei de proteínas activadoras transcricionais pode ser dividia em dois grupos. O primeiro grupo necessita de processamento proteolítico e compreende a p50 (NF-kB1, 105 kDa) e a p52 (NF-k2, 100 kDa). O segundo grupo não necessita de processamento proteolítico e compreende a p65 (RelA, Rei (c-Rel) e RelB) . Tanto os homodímeros como os heterodímeros podem ser formados por membros da família Rei; a NF-κΒ, por exemplo, é um heterodímero p50-p65. Após fosforilação e ubiquitinação de IkB e pl05, as duas proteínas são degradadas e processadas, respectivamente, para produzir o NF-κΒ activo, o qual é transportado do citoplasma para o núcleo. A pl05 ubiquitinada também é processada por proteassomas purificadas (Palombella et al.r Cell (1994) 78:773-785). O NF-κΒ activo forma um complexo potenciador estereoespecífico com outros activadores transcricionais, v.g., HMG I(Y), induz a expressão selectiva de um gene particular. 32 Ο NF-κΒ regula os genes implicados na resposta imune e inflamatória e eventos mitóticos. Por exemplo, o NF-κΒ é necessário para a expressão do gene κ de cadeia leve de imunoglobulina, do gene de cadeia α do receptor de IL-2, da classe I de genes complexos de histocompatibilidade principal e de diversos genes de citoquinas que codificam, por exemplo, IL-2, IL-6, factor estimulador da colónia de granulócitos e IFN-β (Palombella et al., Cell (1994) 78:773-785). Algumas variantes da invenção compreendem compostos que são utilizados para afectar o nível de expressão de IL-2, MHC-I, IL-6, TNFa, IFN-β ou de qualquer outras proteínas referidas antes, em que cada utilização compreende a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito. Os complexos que compreendem a p50 são mediadores rápidos das respostas inflamatória e imune agudas (Thanos, D. e Maniatis, T., Cell (1995) 80:529-532). O NF-κΒ também participa na expressão de genes de adesão celular que codificam E-selectina, P-selectina, ICAM e VCAM-1 (Collins, T., Lab. Invest. (1993) 68:499-508). Um variante da invenção diz respeito a um método para a inibição da adesão celular (v.g., adesão celular mediada por E-selectina, P-selectina, ICAM ou VCAM-1), incluindo o contacto a célula (ou a administração a um sujeito) com uma quantidade eficaz de um composto (ou uma composição) aqui descrito. O NF-κΒ também se liga especificamente ao potenciador/promotor do VIH. Quando comparado com o Nef de mac239, a proteína Nef reguladora do VIH de pbjl4 difere em dois aminoácidos na região que controla a ligação da proteína cinase. Crê-se que a proteína cinase sinaliza a 33 fosforilação de ΙκΒ, fazendo iniciar a degradação de IkB através da via ubiquitina-proteassoma. Após a degradação, o NF-κΒ é libertado no núcleo, aumentando assim a transcrição de VIH (Cohen, J., Science, (1995) 267:960). De acordo com duas variantes, a invenção compreende compostos utilizáveis na inibição ou na redução da infecção por VIH num sujeito e um método para a diminuição dos níveis de expressão de genes virais, métodos esses que compreendem a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito. A sobreprodução de citoquinas induzida por lipopolissacáridos (LPS), tais como TNFa, é considerada central para os processos associados ao choque séptico. Além do mais, é geralmente aceite que o primeiro passo para a activação de células por lps seja a ligação de LPS a receptores específicos de membranas. As subunidades α e β do complexo de proteassoma 20S foram identificadas como proteínas que se ligam a LPS, o que sugere que a transdução do sinal induzido por LPS pode constituir um alvo terapêutico importante para o tratamento ou para a prevenção de sepsis (Qureshi, N. et al., J. Immun. (2003) 171: 1515-1525). Assim sendo, de acordo com determinadas variantes, os compostos da invenção podem ser utilizados para a inibição de TNFa para a prevenção e/ou tratamento do choque séptico. A proteólise intracelular dá origem a péptidos pequenos para apresentação a linfócitos T para a indução de respostas imunes mediadas por MHC de classe I. O sistema imune pesquisa por células autólogas que estejam infectadas com vírus ou que tenham sofrido transformação oncogénica. Uma variante diz respeito a compostos utilizáveis para 34 inibir a apresentação de antigénios numa célula, incluindo a exposição da célula a um composto aqui descrito. É possivel utilizar um composto da invenção para o tratamento de patologias associadas à imunidade, tais como alergia, asma, rejeição de órgãos/tecidos (doença de enxerto versus hospedeiro), e de doenças auto-imunes, incluindo, mas sem que isso constitua qualquer limitação, lúpus, artrite reumatóide, psoriase, esclerose múltipla e doenças inflamatórias do intestino (tais como colite ulcerativa e doença de Crohn). Assim, constitui uma outra variante, um composto utilizável na supressão do sistema imune de um sujeito (v.g., inibição da rejeição a transplantes, alergias e asma), incluindo a administração ao sujeito de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito.

Constitui uma outra variante, um composto utilizável para alterar o reportório de péptidos antigénicos produzidos pelo proteassoma ou por outro Ntn com actividade multicatalitica. Por exemplo, no caso da actividade PGPH do proteassoma 20S ser inibida selectivamente, então irá ser produzido um conjunto diferente de péptidos antigénicos pelo proteassoma e irão ser apresentados em moléculas MHC nas superfícies das células do que os que seriam produzidos ou apresentados sem qualquer inibição de enzima ou, por exemplo, com a inibição selectiva da actividade de tipo quimotripsina do proteassoma.

Determinados inibidores de proteassoma bloqueiam a degradação e o processamento de NF-κΒ ubiquitinado in vitro e in vivo. Os inibidores de proteassoma também bloqueiam a degradação de ΙκΒ-α e a activação de NF-κΒ (Palombella, et al. Cell (1994) 78:773-785; e Traenckner, et al., EMBO J. (1994) 13:5433-5441). De acordo com uma variante, a 35 invenção diz respeito a um composto utilizável para a inibição da degradação de ΐκΒ-α, o qual compreende o contacto da célula com um composto aqui descrito. Uma outra variante compreende um composto utilizável para a redução do teor celular em NF-κΒ numa célula, músculo, órgão ou sujeito, a qual compreende o contacto da célula, músculo, órgão ou sujeito com um composto aqui descrito.

Como outros factor de transcrição eucariótica que necessitam de processamento proteolitico refere-se o factor de transcrição geral TFIIA, a proteína acessória do vírus do herpes simplex VP16 (factor de célula hospedeira), a proteína do factor 2 de regulação de IFN indutível por vírus e a proteína 1 de ligação ao elemento regulador de esterol ligado à membrana.

De acordo com outras variantes, a invenção compreende compostos utilizáveis para afectar os ciclos celulares eucarióticos dependentes de ciclina, incluindo a exposição da célula {in vitro ou in vivo) a um composto aqui descrito. As ciclinas são proteínas implicadas no controlo do ciclo celular. 0 proteassoma participa na degradação de ciclinas. Como exemplos de ciclinas refere-se ciclinas mitóticas, ciclinas G1 e ciclina B. A degradação de ciclinas permite que uma célula saia de uma etapa de um ciclo celular (v.g.r mitose) e entre noutra (v.g., divisão). Crê-se que todas as ciclinas estão associadas à proteína cinase p34.sup.cdc2 ou a cinases congéneres. 0 sinal dirigido à proteólise está localizado nos aminoácidos 42-RAALGNISEN-50 (caixa de destruição). Há evidências de que a ciclina é convertida para uma forma vulnerável a ubiquitina-ligase ou que uma ligase específica de ciclina é activada durante a mitose (Ciechanover, A., Cell, (1994) 36 79:13-21). A inibição de proteassoma inibe a degradação de ciclina, inibindo assim a proliferação de célula, por exemplo, em cancros associados a ciclina (Kumatori et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA (1990) 87:7071-7075). De acordo com uma variante, a invenção diz respeito a compostos utilizáveis para o tratamento de uma doença proliferativa num sujeito (v.g., cancro, psoriase ou restenose), incluindo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito. A invenção também compreende compostos utilizáveis para o tratamento de inflamações associadas a ciclina num sujeito, incluindo a administração a um sujeito de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto aqui descrito.

De acordo com outras variantes, a invenção diz respeito a compostos utilizáveis para afectar a regulação dependente de proteassoma de oncoproteinas e a métodos para o tratamento ou para a inibição do desenvolvimento de cancro, as quais incluem a exposição da célula (in vivo, v.g., num sujeito, ou in vitro) a um composto aqui descrito. As proteínas E6 obtidas a partir de HPV-16 e HPV-18 estimulam a conjugação dependente de ATP e de ubiquitina e a degradação de p53 em lisados de reticulócitos impuros. Demonstrou-se que o oncogene recesivo p53 era acumulado à temperatura não permitida numa linhagem celular com uma El termolábil mutada. Os níveis elevados de p53 podem dar origem a apoptose. Como exemplos de proto-oncoproteínas degradadas pelo sistema de ubiquitina refere-se c-Mos, c-Fos e c-Jun. Constitui uma variante, um composto utilizável para o tratamento de apoptose associada a p53; incluindo a administração a um sujeito de uma quantidade eficaz de um composto aqui descrito. 37

De acordo com outra variante, os compostos descritos são úteis para o tratamento de uma infecção parasitica, tal como as infecções provocadas por parasitas protozoários. Considera-se que o proteassoma destes parasitas está implicado principalmente nas actividades de diferenciação e replicação de células (Paugam et al., Trends Parasitol. 2003, 19(2): 55-59). Além disso, demonstrou-se que as espécies de entamoeba perdem a capacidade de enquistação quando expostas a inibidores de proteassoma (Gonzales, et al., Arch. Med. Res. 1997, 28, Spec No: 139-140). De acordo com determinadas variantes, os compostos descritos são úteis para o tratamento de infecções parasiticas em seres humanos provocadas por um parasita protozoário seleccionado entre Plasmodium sps. (incluindo P. falciparum, P. vivax, P. malariae e P. ovale, que provoca a malária), Trypanosoma sps. (incluindo T. cruzi, que provoca a doença de Chagas, e T. brucei que provoca a doença do sono africana), Leishmania sps. (incluindo L. amazonensis, L. donovani, L. infantum, L. mexicana, etc.), Pneumocystis carinii (um protozoário conhecido por provocar pneumonia em pacientes com SIDA e outros pacientes imunossuprimidos), Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Entamoeba invadens e Giardia lamblia. De acordo com algumas variantes, os compostos descritos são úteis para o tratamento de infecções parasiticas em animais e animais de criação provocadas por um parasita protozoário seleccionado entre Plasmodium hermani, Cryptosporidium sps., Echinococcus granulosus, Eimeria tenella, Sarcocystis neurona e Neurospora crassa. No documento WO 98/10779, o qual se considera aqui incorporado na sua totalidade, encontram-se descritos 38 outros compostos úteis como inibidores de proteassoma para o tratamento de doenças parasíticas.

De acordo com determinadas variantes, os compostos descritos inibem irreversivelmente a actividade de proteassoma num parasita. Tal inibição irreversível demonstrou induzir a paragem da actividade enzimática sem recuperação em células vermelhas sanguíneas e em células brancas sanguíneas. De acordo com algumas de tais variantes, o período de semi-vida longo das células sanguíneas pode proporcionar uma protecção prolongada no que diz respeito a terapia contra exposições recorrentes a parasitas. De acordo com algumas variantes, o período de semi-vida longo de células sanguíneas pode proporcionar uma protecção prolongada no que diz respeito a quimioprofilaxia contra infecções futuras.

Também foi já demonstrado que os inibidores que se ligam o proteassoma 20S estimulam a formação de osso em culturas ósseas de órgãos. Além do mais, no caso de tais inibidores serem administrados sistemicamente a murganhos, então determinados inibidores de proteassoma aumentaram a taxa de volume ósseo e de formação óssea num valor superior a 70% (Garrett, I. R. et al., J. Clin. Invest. (2003) 111: 1771-1782), o que sugere que a maquinaria ubiquitina-proteassoma regula a diferenciação de osteoblastos e a formação óssea. Assim sendo, os compostos descritos podem ser úteis para o tratamento e/ou para a prevenção de doenças associadas a perda óssea, tais como osteoporose. O tecido ósseo é uma excelente fonte para factores que possuem a capacidade para estimular células ósseas. Assim, os extractos de tecidos ósseos de bovinos não contêm apenas proteínas estruturais responsáveis pela manutenção da 39 integridade estrutural do osso, mas também factores de crescimento ósseo biologicamente activos que podem estimular a proliferação de células ósseas. Entre estes últimos factores encontra-se uma familia recentemente descrita de proteínas designadas por proteínas morfogenéticas ósseas (BMP). Todos esses factores de crescimento possuem um efeito sobre outros tipos de células, bem como sobre células ósseas, incluindo Hardy, M. H., et al.r Trans Genet (1992) 8:55-61, que descrevem evidências que as proteínas morfogenéticas ósseas (BMP), são expressas diferencialmente em folículos de cabelos durante o desenvolvimento. Harris, S. E., et al., J Bone Miner Res (1994) 9:855-863, descrevem os efeitos de TGF-β sobre a expressão de BMP-2 e de outras substâncias em células ósseas. A expressão de bmp-2 em folículos maduros também ocorre durante a maturação e após o período de proliferação celular (Hardy, et al. (1992, supra)). Assim, os compostos da invenção também podem ser úteis para a estimulação do crescimento de folículos de cabelo.

Por último, os compostos descritos também são úteis enquanto agentes de diagnóstico (v.g., em estojos de diagnóstico ou para utilização em laboratórios clínicos) para a pesquisa de proteínas (v.g., enzimas, factores de transcrição) processados por hidrolases Ntn, incluindo o proteassoma. Os compostos descritos também são úteis como reagentes de pesquisa para a ligação específica da subunidade X/MBl ou da cadeia α e para a inibição das actividades proteolíticas a ela associadas. Por exemplo, é possível determinar a actividade (e inibidores específicos) de outras subunidades do proteassoma. 40 A maior parte das proteínas celulares são submetidas a processamento proteolítico durante a maturação ou activação. Os inibidores enzimáticos aqui descritos podem ser utilizados para determinar se um processo ou uma saída celular, de desenvolvimento ou fisiológico é regulado pela actividade proteolítica de uma hidrolase Ntn particular. Tal método compreende a obtenção de um organismo, de uma preparação de células intactas ou de um extracto de célula; a exposição do organismo, da preparação de células ou do extracto de células a um composto aqui descrito; a exposição do organismo, da preparação de células ou do extracto de células exposto ao composto a um sinal e a monitorização do processo ou da saída. A elevada selectividade dos compostos aqui descritos permite uma eliminação ou implicação rápida e precisa de Ntn (por exemplo, o proteassoma 20S) num determinado processo celular, de desenvolvimento ou fisiológico.

Administração

Os compostos preparados em conformidade com o aqui descrito podem ser administrados sob diversas formas, em função do distúrbios que se pretende tratar e da idade, do estado geral e da massa corporal do paciente, tal como é bem conhecido na especialidade. Por exemplo, no caso de se administrar os compostos por via oral, então estes podem ser formulados como comprimidos, cápsulas, pós ou xaropes; ou no caso de administração por via parentérica, podem ser formulados como injecções (intravenosas, intramusculares ou subcutâneas), preparações de infusão por gotas ou supositórios. Para a aplicação por via da membrana mucosa oftálmica, podem ser formulados como gotas para os olhos ou 41 unguentos para os olhos. Estas formulações podem ser preparadas por métodos convencionais, e, se desejado, o ingrediente activo pode ser misturado com qualquer aditivo ou excipiente suplementar, tal como um aglutinante, um agente de desintegração, um lubrificante, um modificador, um agente de solubilização, um auxiliar de suspensão, um agente emulsionante, um agente de revestimento, uma ciclodextrina e/ou um tampão. Embora a dosagem seja variável em função dos sintomas, da idade e da massa corporal do paciente, da natureza e da gravidade do distúrbio que se pretende tratar ou prevenir, da via de administração e da forma do fármaco, de um modo geral, é recomendada uma dosagem diária compreendida entre 0,01 mg e 2000 mg do composto para um paciente adulto humano, podendo ser administrada num dose individual ou em doses divididas. De um modo geral, a quantidade de ingrediente activo que pode ser combinado com um veiculo para a produção de uma forma de dosagem individual será a quantidade de composto que produza um efeito terapêutico. 0 tempo preciso de administração e/ou quantidade da composição que irá proporcionar os resultados mais eficazes em termos de eficácia de tratamento para um determinado paciente irá depender da actividade, da farmacocinética e da biodisponibilidade de um composto particular, do estado fisiológico do paciente (incluindo a idade, o sexo, o tipo e o estado da doença, do estado geral de saúde, da resposta para uma determinada dosagem e do tipo de medicação), da via de administração, etc.. No entanto, as linhas gerais anteriores podem ser utilizadas como base para a afinação do tratamento, v.g., determinação do tempo e/ou da quantidade administrada óptimos, para a qual será apenas 42 necessária a experimentação habitual que consiste na monitorização do paciente e do ajuste da dosagem e/ou do tempo. A expressão "farmaceuticamente aceitável" é aqui utilizada para designar aqueles ligandos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, de acordo com o âmbito de julgamento médico, adequados para utilização em contacto com tecidos de seres humanos e de animais sem provocares problemas ou complicações excessivas de toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outros, com uma taxa razoável de benefício/risco. A expressão "veiculo farmaceuticamente aceitável", tal como aqui utilizada, designa um material, composição ou veiculo farmaceuticamente aceitável, tal como uma carga líquida ou sólida, um diluente, um excipiente, um solvente ou um material de encapsulamento. Cada veículo deverá ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não ser prejudicial para o paciente. Como alguns exemplos de materiais que podem actuar como veículos farmaceuticamente aceitáveis refere-se: (1) açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; (2) amidos, tais como amido de milho, amido de batata e β-ciclodextrina substituída ou insubstituída; (3) celulose e os seus derivados, tais como carboximetil-celulose de sódio, etil-celulose e acetato de celulose; (4) goma adragante em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras para supositórios; (9) óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de sementes de algodão, óleo de girassol, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de soja; (10) glicóis, tais como propileno-glicol; (11) polióis, tais como glicerina, 43 sorbitol, manitol e polietileno-glicol; (12) ésteres, tais como oleato de etilo e laurato de etilo; (13) ágar; (14) agentes tampão, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água isenta de pirogénio; (17) soluto salino isotónico; (18) solução de Ringer; (19) álcool etílico; (20) soluções de tampão de fosfato; e (21) outras substâncias não tóxicas compatíveis utilizadas em formulações farmacêuticas. De acordo com algumas variantes, as composições farmacêuticas da presente invenção são não pirogénicas, isto é, não induzem aumentos de temperatura significativos quando administradas a um paciente. A expressão "sal farmaceuticamente aceitável" designa sais de adição de ácidos inorgânicos e orgânicos não tóxicos do(s) inibidor(es). Estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento final e purificação do(s) inibidor(es) ou por reacção em separado de um inibidor purificado sob a forma da sua base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado e subsequente isolamento do sal assim formado. Como sais representativos refere-se os sais de bromidrato, cloridrato, sulfato, bissulfato, fosfato, nitrato, acetato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, gluco-heptonato, lactobionato, laurilsulfonato, sais de aminoácidos e semelhantes. (Ver, por exemplo, Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sei. 66:1-19).

Em outros casos, os inibidores úteis para os métodos da presente invenção podem conter um ou vários grupos funcionais acídicos, sendo assim capazes de formar sais farmaceuticamente aceitáveis com bases farmaceuticamente 44 aceitáveis. Nestas circunstâncias, a expressão "sais farmaceuticamente aceitáveis" designa sais de adição de bases inorgânicas ou orgânicas relativamente não tóxicos de um inibidor. De igual modo, estes sais podem ser preparados in situ durante o isolamento final e a purificação do inibidor ou por reacção em separado de um inibidor purificado sob a forma do seu ácido livre com uma base adequada, tal como hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um catião metálico farmaceuticamente aceitável, com amónia ou com uma amina primária, secundária ou terciária farmaceuticamente aceitável. Como sais alcalinos ou alcalino-terrosos representativos refere-se os sais de litio, sódio, potássio, cálcio, magnésio e alumínio, e semelhantes. Como aminas orgânicas representativas úteis para a formação de sais de adição de bases refere-se etilamina, dietilamina, etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina e semelhantes (ver, por exemplo, Berge et al., supra).

Também podem estar presentes nas composições agentes humectantes, emulsionantes e lubrificantes, tais como lauril-sulfato e estearato de magnésio, bem como agentes corantes, agentes de libertação, agentes de revestimento, edulcorantes, agentes aromatizantes e agentes para perfumar, conservantes e antioxidantes.

Como exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis refere-se: (1) antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteina, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e semelhantes; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbilo, hidroxianisole butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, gaiato de 45 propilo, α-tocoferol e semelhantes; e (3) agentes quelantes de metais, tais como ácido cítrico, ácido etilenodamina-tetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e semelhantes.

As formulações adequadas para a administração por via oral podem estar sob a forma de cápsulas, hóstias, pílulas, comprimidos, drageias (utilizando uma base aromatizante, normalmente sacarose e acácia ou goma adragante), pós, grânulos ou sob a forma de uma solução ou suspensão num líquido aquoso ou não aquoso, ou sob a forma de uma emulsão líquida de tipo óleo-em-água ou água-em-óleo, ou sob a forma de um elixir ou xarope, ou sob a forma de pastilhas (utilizando uma matriz inerte, tal como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia) e/ou soluções para a lavagem da boca e semelhantes, cada uma das quais contendo uma quantidade predeterminada de um inibidor, como ingrediente activo. Uma composição também pode ser administrada sob a forma de um bolo, electuário ou pasta.

Nas formas de dosagem sólidas para administração por via oral (cápsulas, comprimidos, pastilhas, drageias, pós, grânulos e semelhantes), o ingrediente activo é misturado com um ou vários veículos farmaceuticamente aceitáveis, tais como citrato de sódio ou fosfato dicálcico, e/ou com qualquer um dos seguintes: (1) cargas ou extensores, tais como amidos, ciclodextrinas, lactose, sacarose, glicose, manitol e/ou ácido silícico; (2) aglutinantes, tais como, por exemplo, carboximetil-celulose, alginatos, gelatina, polivinil-pirrolidona, sacarose e/ou acácia; (3) humectantes, tais como glicerol; (4) agentes de desintegração, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou de tapioca, ácido algínico, determinados 46 silicatos e carbonato de sódio; (5) agentes para retardar a solução, tais como parafina; (6) aceleradores de absorção, tais como compostos de amónio quaternário; (7) agentes humectantes, tais como, por exemplo, álcool acetilico e monoestearato de glicerol; (8) absorventes, tais como caolina e cimento de bentonite; (9) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno-glicóis sólidos, lauril-sulfato de sódio e suas misturas; e (10) agentes corantes. No caso das cápsulas, comprimidos e pílulas, as composições farmacêuticas podem ainda compreender agentes tampão. As composições sólidas de um tipo semelhante podem ser utilizadas como cargas para cápsulas de gelatina mole ou dura, utilizando excipientes tais como lactose ou açúcares lácteos, bem como polietileno-glicóis com elevado peso molecular e semelhantes.

Um comprimido pode ser preparado por compressão ou moldagem, facultativamente com um ou vários ingredientes suplementares. Os comprimidos por compressão podem ser preparados utilizando aglutinantes (por exemplo, gelatina ou hidroxipropilmetil-celulose), lubrificantes, diluentes inertes, conservantes, desintegrantes (por exemplo, glicolato de amido de sódio ou carboximetil-celulose reticulada de sódio), tensioactivos ou agentes de dispersão. Os comprimidos moldados podem ser preparados por moldagem, numa máquina adequada, de uma mistura do(s) inibidor(es) em pó humedecida com um diluente liquido inerte.

Os comprimidos e as outras formas de dosagem sólidas, tais como drageias, cápsulas, pílulas e grânulos, podem ser facultativamente preparadas com revestimentos e invólucros, 47 tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na especialidade de formulação farmacêutica. Também podem ser formulados de modo a proporcionar uma libertação lenta ou controlada do ingrediente activo, utilizando, por exemplo, hidroxipropilmetil-celulose em várias proporções para se obter o perfil de libertação desejado, outras matrizes poliméricas, lipossomas e/ou microesferas. Podem ser esterilizados, por exemplo, por filtração através de um filtro de retenção de bactérias ou por meio da incorporação de agentes de esterilização na forma de composições sólidas estéreis, as quais podem ser dissolvidas em água estéril ou em qualquer outro meio injectável estéril, imediatamente antes da sua utilização. Estas composições também podem conter facultativamente agentes de opacidade e podem apresentar uma composição que liberte o(s) ingrediente(s) activo(s) apenas, ou preferencialmente, numa determinada porção do tracto gastrointestinal, facultativamente de um modo retardado. Como exemplos de composições embebidas que é possível utilizar refere-se substâncias poliméricas e ceras. 0 ingrediente activo também pode estar sob uma forma micro-encapsulada, se adequado, com um ou vários dos excipientes descritos antes.

As formas de dosagem liquidas para administração por via oral compreendem emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Para além do ingrediente activo, as formas de dosagem liquidas podem conter diluentes inertes normalmente utilizados na especialidade, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes de solubilização e emulsionantes, tais como álcool etilico, álcool 48 isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, álcool benzílico, benzoato de benzilo, propileno-glicol, 1,3-butileno-glicol, óleos (em particular, óleos de sementes de algodão, amendoim, milho, gérmen, azeite, rícino e sésamo), glicerol, álcool tetra-hidrofurílico, polietileno-glicóis e ésteres de ácidos gordos de sorbitano e suas misturas.

Para além de diluentes inertes, as composições orais também podem conter adjuvantes, tais como agentes humectantes, agentes emulsionantes e de suspensão, edulcorantes, aromatizantes, corantes, perfumantes e agentes conservantes.

As suspensões, para além do(s) inibidor(es) activo(s) também podem conter agentes de suspensão, tais como, por exemplo, álcoois isoestearílicos etoxilados, polioxietileno-sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonite, ágar-ágar e goma adragante e suas misturas.

As formulações para administração por via rectal ou vaginal podem ser apresentadas sob a forma de um supositório, o qual pode ser preparado por mistura de um ou vários inibidores com um ou vários excipientes ou veículos não irritantes adequados, tais como, por exemplo, manteiga de cacau, polietileno-glicol, uma cera para supositório ou um salicilato, o qual é sólido à temperatura ambiente, mas líquido à temperatura corporal, pelo que irão derreter no recto ou na cavidade vaginal e libertar o agente activo.

Como formulações adequadas para administração por via vaginal também se refere pessários, tampões, cremes, geles, pastas, espumas ou formulações em pulverização que contêm tais veículos, conforme adequados de acordo com o conhecimento na especialidade. 49

As formas de dosagem para administração por via tópica ou transdérmica de um inibidor incluem pós, pulverizações, unguentos, pastas, cremes, loções, geles, soluções, adesivos e inalantes. 0 componente activo pode ser misturado, sob condições estéreis, com um veiculo farmaceuticamente aceitável e com quaisquer conservantes, tampões ou propulsores que possam ser necessários.

Os unguentos, pastas, cremes e geles podem conter, para além do(s) inibidor(es), excipientes, tais como gorduras animais e vegetais, óleos, ceras, parafinas, amido, goma adragante, derivados de celulose, polietileno-glicóis, óxidos de silicio, bentonites, ácido silicico, talco e óxido de zinco, ou suas misturas.

Os pós e pulverizações podem conter, para além do(s) inibidor(es), excipientes, tais como lactose, talco, ácido silicico, hidróxido de aluminio, silicatos de cálcio e poliamida em pó, ou misturas destas substâncias. As pulverizações podem conter ainda propulsores convencionais, tais como hidrocarbonetos clorofluorados e hidrocarbonetos voláteis não substituídos, tais como butano e propano.

Em alternativa, os inibidores podem ser administrados por meio de aerossóis. Tal pode ser realizado por meio da preparação de um aerossol aquoso, de uma preparação lipossómica ou por partículas sólidas que contêm a composição. Também é possível utilizar uma suspensão não aquosa (v.g., propulsor fluorocarbonado) . Os nebulizadores sónicos são preferíveis uma vez que minimizam a exposição do agente ao corte, o qual pode provocar a degradação do composto.

Normalmente, um aerossol aquoso é preparado por meio da formulação de uma solução ou suspensão aquosa do agente 50 em conjunto com veículos ou estabilizadores convencionais farmaceuticamente aceitáveis. Os veículos e estabilizadores variam consoante as necessidades da composição particular, mas incluem tipicamente tensioactivos não iónicos ('Tweens', 'Pluronics', ésteres de sorbitano, lecitina, 'Cremophors'), co-solventes farmaceuticamente aceitáveis, tais como polietileno-glicol, proteínas inócuas, tais como albumina do soro, ácido oleico, aminoácidos, tais como glicina, tampões, sais, açúcares ou álcoois de açúcares. De um modo geral, os aerossóis são preparados a partir de soluções isotónicas.

Os adesivos transdérmicos apresentam a vantagem de proporciona um administração controlada de um inibidor ao corpo. Tais formas de dosagem podem ser preparadas por dissolução ou dispersão do agente num meio adequado. Também é possível utilizar potenciadores de absorção para aumentar o fluxo de inibidor através da pele. A taxa de tal fluxo pode ser controlada por meio de uma membrana para o controlo da taxa ou por meio da distribuição do inibidor numa matriz polimérica ou gel.

As composições farmacêuticas da presente invenção adequadas para administração por via parentérica compreendem um ou vários inibidores em combinação com uma ou várias outras soluções, dispersões, suspensões ou emulsões estéreis, aquosas ou não aquosas, farmaceuticamente aceitáveis ou pós estéreis que podem ser reconstituídos em soluções ou dispersões injectáveis estéreis imediatamente antes da sua utilização, as quais podem conter anti-oxidantes, tampões, bacteriostáticos, solutos que tornam a formulação isotónica com o sangue do recipiente pretendido ou agentes de suspensão ou agentes espessantes. 51

Como exemplos de veículos aquosos ou não aquosos adequados que podem ser utilizados nas composições farmacêuticas da invenção refere-se água, etanol, polióis (tais como glicerol, propileno-glicol, polietileno-glicol e semelhantes) e suas misturas adequadas, óleos vegetais, tais como azeite, e ésteres orgânicos injectáveis, tais como oleato de etilo. É possível manter uma fluidez adequada, por exemplo, por meio da utilização de materiais de revestimento, tais como lecitina, por meio da manutenção do tamanho de partículas necessário para o caso de dispersões e por meio da utilização de tensioactivos.

Estas composições também podem conter adjuvantes, tais como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes e agentes dispersantes. A prevenção da acção de microrganismos pode ser assegurada pela inclusão de diversos agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, ácido fenol-escórbico e semelhantes. Também pode ser desejável incluir nas composições agentes para ajustar a tonicidade, tais como açúcares, cloreto de sódio e semelhantes. Além disso, também é possível conseguir uma absorção prolongada da forma farmacêutica injectável por meio da inclusão de agentes que retardem a absorção, tais como monoestearato de alumínio e gelatina.

Em alguns casos, para se prolongar o efeito de um fármaco, é desejável diminuir a absorção do fármaco a partir da injecção subcutânea ou intramuscular. Por exemplo, a absorção retardada de uma forma de fármaco administrado por via parentérica é alcançada por dissolução ou suspensão do fármaco num veículo oleoso. 52

As formas de depósitos injectáveis são preparadas por meio da formação de matrizes microencapsuladas de inibidores em polímeros biodegradáveis, tais como polilactida-poliglicólido. Em função da proporção entre fármaco e o polimero e da natureza do polímero particular utilizado, é possível controlar a taxa de libertação do fármaco. Como exemplos de outros polímeros biodegradáveis refere-se poli(ortoésteres) e poli(anidridos). As formulações injectáveis de depósito também são preparadas por meio da fixação do fármaco a lipossomas ou microemulsões gue sejam compatíveis com o tecido corporal.

As preparações de agentes podem ser administradas por via oral, parentérica, tópica ou rectal. São administradas, evidentemente, em formas adequadas para cada via de administração. Por exemplo, são administradas em comprimidos ou cápsulas, por injecção, inalação, loção para os olhos, unguento, supositório, infusão; por via tópica por loções ou unguentos e por via rectal por supositórios. A administração por via oral é preferível.

As expressões "administração por via parentérica" e "administrado por via parentérica", tal como aqui utilizadas, designam modos de administração diferentes da administração por via entérica ou tópica, normalmente por injecção, e compreendem, mas sem que isso constitua qualquer limitação, a injecção intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intra-orbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnóide, intra-espinal e intra-esternal, e infusão.

As expressões "administração sistémica", "administrado sistemicamente", "administração por via periférica" e 53 "administrado perifericamente", tal como aqui utilizadas, designam a administração de um ligando, fármaco ou outro material por uma via diferente da directa ao sistema nervoso central, de tal modo que entre no sistema do paciente e seja sujeita a metabolismo, e outros processos semelhantes, por exemplo, administração por via subcutânea.

Estes inibidores podem ser administrados a seres humanos e a outros animais como terapia por qualquer via de administração adequada, incluindo a via oral, nasal, tal como, por exemplo, com um pulverizador, rectal, intravaginal, parentérica, intracisternal, por via tópica por meio de pós, unguentos ou gotas, incluindo por via bucal e sublingual.

Independentemente da via de administração seleccionada, os inibidores, os quais podem ser utilizados sob uma forma hidratada adequada, e/ou as composições farmacêuticas da presente invenção, são formuladas em formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis por métodos convencionais conhecidos pelos especialistas na matéria.

Os niveis de dosagem real dos ingredientes activos nas composições farmacêuticas da presente invenção podem variar de modo a se obter uma quantidade de ingrediente activo eficaz para se atingir a resposta terapêutica desejada para um paciente, composição e modo de administração particulares, sem no entanto ser tóxico para o paciente. A concentração de um composto da invenção numa mistura farmaceuticamente aceitável irá variar em função de diversos factores, incluindo a dosagem do composto que se pretende administrar, as caracteristicas farmacocinéticas do(s) composto(s) utilizado(s) e da via de administração. De um modo geral, as composições da presente invenção podem 54 ser proporcionadas numa solução aquosa que contém entre cerca de 0,1% e 10% p/v de um composto aqui descrito, entre outras substâncias, para administração por via parentérica. Os intervalos de dosagem típicos estão compreendidos entre cerca de 0,01 e cerca de 50 mg/kg de massa corporal por dia, e são administrada em 1 a 4 doses divididas. Cada dose dividida pode conter compostos da invenção iguais ou diferentes. A dosagem irá ser uma quantidade eficaz em função de diversos factores, incluindo o estado geral de saúde do paciente e a formulação e a via de administração do(s) composto(s) seleccionado(s).

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona compostos da invenção utilizáveis numa terapia em combinação, em que um ou vários outros agentes terapêuticos são administrados com o inibidor de proteassoma. Tal tratamento em combinação pode ser alcançado por meio de dosagens simultâneas, sequenciais ou em separado dos componentes individuais do tratamento.

De acordo com estas variantes, um composto da invenção é administrado em combinação com um quimio-terapêutico. Como quimioterapêuticos é possível referir produtos naturais, tais como alcaloides vinca (isto é, vinblastina, vincristina e vinorelbina), paclitaxel, epidipodofilotoxinas (isto é, etopósido, tenipósido), antibióticos (dactinomicina (actinomicina D) daunorubicina, doxorubicina e idarubicina), antraciclinas, mitoxantrona, bleomicinas, plicamicina (mitramicina) e mitomicina, enzimas (L-asparaginase que metaboliza sistemicamente L-asparagina e priva as células que não tenham a capacidade para sintetizar a sua própria asparagina); agentes antiplaquetas; agentes alquilantes antiproliferativos/ 55 /antimitóticos, tais como mostardas de azoto (mecloretamina, ciclofosfamida e análogos, melfalano, clorambucilo), etileniminas e metilmelaminas (hexametil-melamina e tiotepa), sulfonatos de alquilo (bussulfano), nitro-ureias (carmustina (BCNU) e análogos, estreptozocina), trazenos-dacarbazinina (DTIC); antimetabolitos anti-proliferativos/antimitóticos, tais como análogos de ácido fólico (metotrexato), análogos de pirimidina (fluorouracilo, floxuridina e citarabina), análogos de purina e inibidores associados (mercaptopurina, tioguanina, pentostatina e 2-clorodesoxiadenosina); inibidores de aromatase (anastrozole, exemestano e letrozole); e complexos de coordenação de platina (cisplatina, carboplatina), procarbazina, hidroxi-ureia, mitotano, aminoglutetimida; hormonas (isto é, estrogénio) e agonistas de hormonas, tais como agonistas da hormona de libertação da hormona leutinizante (LHRH) (goserelina, leuprolida e triptorelina) . Como outros agentes quimioterapêuticos é possível referir mecloretamina, camptotecina, ifosfamida, tamoxifeno, raloxifeno, gemcitabina, navelbina ou qualquer variante análoga ou derivado dos supramencionados.

Um composto da invenção é administrado em combinação com um esteróide. Como esteróides adequados refere-se, mas sem que isso constitua qualquer limitação, 21-acetoxiypregnenolona, alclometasona, algestona, amcinonida, beclometasona, betametasona, budesonida, cloroprednisona, clobetasol, clocortolona, cloprednol, corticosterona, cortisona, cortivazol, deflazacort, desonida, desoximetasona, dexametasona, diflorasona, diflucortolona, difuprednato, enoxolona, fluazacort, flucloronida, flumetasona, flunisolida, fluocinolona-acetonida, 56 fluocinonida, fluocortina-butilo, fluocortolona, fluorometolona, acetato de fluperolona, acetato de fluprednideno, fluprednisolona, flurandrenolida, propionato de fluticasona, formocortal, halcinonida, propionato de halobetasol, halometasona, hidrocortisona, etabonato de loteprednol, mazipredona, medrisona, meprednisona, metilprednisolona, furoato de mometasona, parametasona, prednicarbato, prednisolona, 25-dietilaminoacetato de prednisolona, fosfato de sódio de prednisolona, prednisona, prednival, prednilideno, rimexolona, tixocortol, triamcinolona, acetonida de triamcinolona, benetonida de triamcinolona, hexacetonida de triamcinolona e seus sais e/ou derivados.

Um composto da invenção é administrado em combinação com um agente imunoterapêutico. Como agentes imuno-terapêuticos adequados refere-se, mas sem que isso constitua qualquer limitação, ciclosporina, talidomida e anticorpos monoclonais. Os anticorpos monoclonais podem ser "despidos" ou conjugados, tais como rituximab, tositumomab, alemtuzumab, epratuzumab, ibritumomab tiuxetano, ozogamicina de gemtuzumab, bevacizumab, cetuximab, erlotinib e trastuzumab. 57

Exemplos

1)Ώ*λΒΕΙί

Síntese de (B) A uma solução de NBoc-leucina (50,0 mmol, 11,56 g) e éster fenilalanina-metílico (50,0 mmol, 10,78 g) em 500 mL de DMF adicionou-se HOBT (10,81 g, 80,0 mmol) e DIEA (200,0 mmol, 25, 85 g, 35 mL) . Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo fundente e adicionou-se, em diversas porções, BOP (80,0 mmol, 35, 38 g) , ao longo de cinco minutos. Colocou-se a mistura de reacção sob uma atmosfera de árgon e agitou-se de um dia para o outro. Diluiu-se a mistura de reacção com salmoura (1000 mL) e extraiu-se com EtOAc (5 x 58 200 mL) . Combinou-se as camadas orgânicas, lavou-se com água (10 x 100 mL) e com salmoura (2 x 150 mL) e secou-se sobre MgS04. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto (A) (18,17 g). A uma solução de 50 mL, arrefecida até 0°C, de TFA a 80% /DCM adicionou-se BocNHLeuPheOMe (45,86 mmol, 18,0 g). Agitou-se a solução e deixou-se aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 2 horas. Removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter um óleo. A este óleo adicionou-se BocNHhPhe (45,86 mmol, 12,81 g), DMF (500 mL), HOBT (73,37 mmol, 9,91 g) e DIEA (183,44 mmol, 23,70 g, 32,0 mL). Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo fundente e adicionou-se, em diversas porções BOP (73,37 mmol, 32, 45 g), ao longo de cinco minutos. Colocou-se a mistura de reacção sob uma atmosfera de árgon e deixou-se aquecer até à temperatura ambiente de um dia para o outro. Diluiu-se a mistura de reacção com H20 (1500 mL) e extraiu-se com DCM (5 x 300 mL). Combinou-se as camadas orgânicas, lavou-se com h20 (6 x 300 mL) e com salmoura (1 x 300 mL) e secou-se sobre MgS04. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter um sólido amarelo. Ao sólido adicionou-se 200 mL de EtOH a 95% e aqueceu-se a mistura até 65°C para se dissolver todos os sólidos. Adicionou-se então a solução a 1000 mL de H20 gelada e recolheu-se o precipitado resultante para se obter o composto (B) (21,59 g). Síntese de (C)

Misturou-se o composto (B) (1,47 mmol, 0,81g) com TFA/DCM (80%) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 59 hora, período esse ao fim do qual se concentrou a mistura e se submeteu a uma pressão hipobárica elevada durante 2 horas para se obter o sal de TFA do tri-péptido de amina (Q). A uma solução a 0°C do sal de TFA (1,47 mmol) em DMF (10 mL) adicionou-se DIEA (4,4 mmol, 0,77 mL) e depois cloreto de benziloxiacetilo (2,21 mmol, 0, 343 mL) . Deixou-se a mistura de reacção aquecer até à temperatura ambiente, sob agitação, durante 2 horas e sob uma atmosfera de azoto. Diluiu-se a mistura com salmoura (15 mL) e extraiu-se com EtOAc (3 x 15 mL). Combinou-se as camadas orgânicas, lavou- se com H20 (2 x 15 mL) e com salmoura (1 x 15 mL) e secou- se sobre Na2SC>4. Removeu-se o Na2S04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida. Purificou-se o material impuro por cromatografia rápida para se obter o composto (C) (0,83 g). Síntese de (D) A uma massa do composto (C) (1,38 mmol, 0,830 g) em 28 mL de uma mistura a 3:1 de Me0H/H20, arrefecida até 0°C, adicionou-se LiOH (13,8 mmol, 0,331 g) . Após 18 horas a 5°C, extinguiu-se a mistura de reacção com 20 mL de uma solução saturada de NH4C1 e diluiu-se novamente com 150 mL de h20. Ajustou-se o valor de pH da mistura de reacção até 2 com HC1 1 N e recolheu-se os sólidos por filtração para se obter o composto (D)(0,900 g). Síntese de (E)

Dissolveu-se o composto (D) (0,17 mmol, 0,10 g) em

MeOH (10 mL), adicionou-se Pd-C (a 5%, 0,08 g) e agitou-se a mistura de reacção sob 1 atmosfera de H2 à temperatura ambiente durante 2 horas. Purgou-se então a mistura com 60 árgon, filtrou-se através de Celite e concentrou-se para se obter o composto (E). Síntese do composto 1 A uma solução agitada de (F) [ver: Bioorg. Med. Chem. Letter 1999, 9, 2283-88] (0,164 mmol) em DMF (2 mL) adicionou-se o composto (E) (0,17 mmol), DIEA (0,652 mmol, 0,114 mL) e HOBT (0,266 mmol, 0, 036 g) . Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo e adicionou-se, em diversas porções, BOP (0,262 mmol, 0,116 g) . Agitou-se a mistura a 5°C sob uma atmosfera de árgon de um dia para o outro. Diluiu-se a mistura de reacção com salmoura (15 mL) e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com

água, com uma solução saturada de NaHC03 e com salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Removeu-se o MgSCg por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida. Purificou-se o material impuro por HPLC preparativa para se obter o composto 1 (CI5o 20S CT-L < 50 nM, Ci5o com base na célula CT-L < 100 nM). 61

Esquema 2: síntese do exemplo 2

Síntese de (G)

Dissolveu-se o composto (C) (1,0 mmol, 0,601 g) em

MeOH (25 mL), adicionou-se Pd-C (a 10%, 600 mg) e agitou-se a mistura de reacção sob 1 atmosfera de H2 à temperatura ambiente durante 48 horas. Purgou-se então a mistura com árgon, filtrou-se através de Celite e concentrou-se para se obter o composto (G) (600 mg). Síntese de (H) A uma solução a 0°C do composto (G) (1,0 mmol, 0,511 g) em DCM (40 mL) adicionou-se DIEA (2,0 mmol, 0,348 mL) e cloreto de dibenzilfosforilo (2,0 mmol, 0,593 g) e manteve-se a mistura sob agitação de um dia para o outro à 62 temperatura ambiente e sob uma atmosfera de azoto. Concentrou-se então a mistura de reacção sob uma pressão hipobárica e purificou-se o material impuro por cromatografia rápida para se obter o composto (H) (0,181 g) · Síntese de (I) A uma massa do composto (H) (0,11 mmol, 0,090 g) em 4 mL de uma mistura a 3:1 de Me0H/H20, arrefecida até 0°C, adicionou-se LiOH (1,6 mmol, 0,4 mL, 4 M aq.). Após 45 minutos a 5°C, extinguiu-se a mistura de reacção com 10 mL de uma solução saturada de NH4C1. Ajustou-se o valor de pH da mistura de reacção até 2 com HC1 1 N HC1 e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com água e com salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto (I). Síntese de (J) A uma solução agitada de (F) [ver: Bioorg. Med. Chem. Letter 1999, 9, 2283-88] (0,082 mmol) em DMF (2 mL)

adicionou-se o composto (I) (0, 082 mmol, 0, 062 g), DIEA (0,328 mmol, 0,057 mL) e HOBT (0,133 mmol, 0,018 g).

Arrefeceu-se a mistura até 0°C nu banho de gelo e adicionou-se, em diversas porções, BOP (0,131 mmol, 0,058 g). Agitou-se então a mistura a 5°C e sob uma atmosfera de árgon de um dia para o outro. Diluiu-se a mistura de reacção com Η20 (15 mL) e recolheu-se por filtração o composto (J) (0,081 g). 63 Síntese do composto 2 A uma solução do composto (J) (0,005 mmol, 0,005 g) em THF (1 mL) adicionou-se 4 gotas de H20 e Pd a 10%/c (5 mg). Agitou-se a mistura em ambiente de H2 à temperatura ambiente durante 1 hora, filtrou-se através de Celite e tratou-se o filtrado com Na2C03 (0,263 g em 3 mL de H20) . Recolheu-se os sólidos por filtração e colocou-se sob uma pressão hipobárica elevada para se obter o composto 2 (0,004 g).

Esquema 3: síntese do exemplo 3

ΙΚΜ.ΜβΟΗ,ΗίΟ

Síntese de (L) A uma solução do composto (K) (0,19 mmol, 0,10 g) em THF (20 mL) adicionou-se Kl (0,038 mmol, 0,0063 g), dimetilamina (0,456 mmol, 0,228 mL, 2 M em THF) e agitou-se a mistura de um dia para o outro sob uma atmosfera de azoto. Removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida, retomou-se o material impuro em EtOAc (15 mL), lavou-se com H20 (2 x 10 mL) e com salmoura (2 x 10 mL) e 64 secou-se sobre MgS04. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto (L) (0,100 g). Síntese de (M) A uma massa do composto (L) (0,186 mmol, 0,100 g) em 4 mL de uma mistura a 3:1 de Me0H/H20, arrefecida até 0°C, adicionou-se LiOH (1,86 mmol, 0, 045 g) . Após 12 horas a 5°C, extinguiu-se a mistura de reacção com 20 mL de uma solução saturada de NH4C1 e diluiu-se novamente com 10 mL de H20. Ajustou-se o valor de pH da mistura de reacção até 3 com HC1 1 N, extraiu-se com CHC13 (3 x 15 mL) e secou-se sobre MgS04. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto (M) . Síntese do composto 3 A uma solução agitada do composto (F) [ver: Bioorg. Med. Chem. Letter 1999, 9, 2283-88] (0,082 mmol) em DMF (1 mL) adicionou-se o composto (M) (0,021 mmol), DIEA (0,28 mmol, 0,05 mL) e HOBT (0,133 mmol, 0,018 g). Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo e adicionou-se, em diversas porções, BOP (0,131 mmol, 0, 058 g) . Agitou-se a mistura a 5°C sob uma atmosfera de árgon de um dia para o outro. Diluiu-se então a mistura de reacção com salmoura (15 mL) e extraiu-se com. Lavou-se a camada orgânica com água, com uma solução saturada de NaHC03 e com salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto 3 (CI50 20S CT-L < lOOnM; com base na célula CT-L < 100 nM) . 65

Esquema 4: síntese do exemplo 4 (referência) 65

Síntese de (N)

Misturou-se o composto (B) (1,80 mmol, 1,0 g) com TFA/DCM (80%) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora, período esse ao fim do qual se concentrou a mistura e se colocou sob uma pressão hipobárica elevada durante 2 horas para se obter o sal de TFA do tripéptido de amina. A uma solução a 0aC do sal de TFA (1,80 mmol) em DMF (10 mL) adicionou-se DIEA (3,6 mmol, 0,7 mL) e depois cloreto de cloroacetilo (2,7 mmol, 0,215 mL). Deixou-se aquecer a mistura de reacção até à temperatura ambiente, sob agitação, de um dia para o outro, sob uma atmosfera de azoto. Diluiu-se então a mistura com salmoura (15 mL) e extraiu-se com EtOAc (3 x 15 mL) . Combinou-se as camadas orgânicas, lavou-se com H20 (2 x 15 mL) e com salmoura (2 x 66 15 mL) e secou-se sobre Na2S04. Removeu-se o Na2S04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida. Colocou-se em suspensão o material impuro em EtOAc e filtrou-se para se obter o composto (N) (0,640 g). Síntese de (O) A uma solução do composto (N) (0,094 mmol, 0,050 g) em THF (10 mL) adicionou-se Kl (0,019 mmol, 0,0032 g) e piperidina (0,113 mmol, 0,0096 g) e agitou-se a mistura de um dia para o outro sob uma atmosfera de azoto. Removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida, retomou-se o material impuro em EtOAc (15 mL), lavou-se com H20 (2 x 10 mL) e com salmoura (2 x 10 mL) e secou-se sobre MgS04. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto (O). Síntese de (P) A uma massa do composto (O) (0,094 mmol) em 4 mL de uma mistura a 3:1 de Me0H/H20, arrefecida até 0°C, adicionou-se LiOH (0,94 mmol, 0, 023 g) . Após 12 horas a 5°C, extinguiu-se a mistura de reacção com 20 mL de uma solução saturada de NH4C1 e diluiu-se novamente com 10 mL de H20. Ajustou-se o valor de pH da mistura de reacção até 3 com HC1 1 N, extraiu-se com DCM (3 x 15 mL) e secou-se sobre MgS04. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto (P) . Síntese do composto 4 A uma solução agitada do composto (F) [ver: Bioorg. Med. Chem. Letter 1999, 9, 2283-88] (0,082 mmol) em DMF (2 67 mL) adicionou-se o composto (P) (0,082 mmol, 0,046 g), DIEA (0,328 mmol, 0,057 mL) e HOBT (0,133 mmol, 0,018 g). Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo e adicionou-se, em diversas porções, BOP (0,131 mmol, 0,058 g). Agitou-se a mistura a 5°C sob uma atmosfera de árgon de um dia para o outro. Diluiu-se então a mistura de reacção com H20 (15 mL) e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com água, com uma solução saturada de NaHC03 e com salmoura e secou-se sobre MgS04 anidro. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto 4 (0,034 g) (Ci5o 20S CTL < 100 nM; CI50 com base na célula CT-L < 100 nM) .

Síntese de (T)

Obteve-se o composto (T) de um modo praticamente idêntico ao procedimento para a conversão do composto (E) no composto 1, substituindo o composto (F) pelo composto (Q) e o composto (E) por ácido ciclopropilacético. 68 Síntese de (U)

Obteve-se o composto (U) de um modo praticamente idêntico ao procedimento para a conversão do composto (C) no composto (D) , substituindo o composto (C) pelo composto (T) . Síntese do composto 5

Obteve-se o composto 5 de um modo praticamente idêntico ao procedimento para a conversão do composto (E) no composto 1, substituindo o composto (E) pelo composto (U).

Esquema 6: síntese do exemplo 6

Síntese de (W)

Misturou-se o composto (V) (0,25 g, 0,39 mmol) com 12 mL de TFA/DCM (80%) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora, período esse ao fim do qual se concentrou a 69 mistura e se submeteu a uma pressão hipobárica elevada durante 2 horas para se obter o sal de tfa do tripéptido de amina. Dissolveu-se o sal de amina impuro em 6 mL de DMF e adicionou-se ácido 2-morfolino-acético (0,074 g, 0,507 mmol) e depois DIEA (0,504 g, 0,68 mL, 3,90 mmol). Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo, adicionou-se PyBOP (0,32 g, 0,62 mmol) e agitou-se sob uma atmosfera de árgon, aquecendo até à temperatura ambiente de um dia para o outro. Diluiu-se a mistura com salmoura (50 mL) e extraiu-se com EtOAc (5 x 20 mL) . Combinou-se as camadas orgânicas, lavou-se com uma solução saturada de NaHCCb (5 x 15 mL) e com salmoura (1 x 25 mL) e secou-se sobre MgSCg. Removeu-se o MgSCg por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o intermediário éster (0,195 g) . Ao intermediário éster (0,150 g, 0,23 mmol) adicionou-se Pd a 10%/C (0,05 g) e depois 5 mL de uma mistura a 1:1 de MeOH e EtOAc e colocou-se a mistura em ambiente de hidrogénio. Decorridas 2 horas, filtrou-se o conteúdo através de uma camada de Celite e concentrou-se sob uma pressão hipobárica para se obter o composto (W) (0,12 g). Síntese do composto 6 A uma solução agitada do composto (F) [ver: Bioorg. Med. Chem. Letter 1999, 9, 2283-88] (1,3 eq., 0,27 mmol, 0, 083 mg) em MeCN (5 mL) adicionou-se o composto (W) (1 eq., 0,17 mmol, 0,10 g), DIEA (10 eq., 1,73 mmol, 0,30 mL) e HOBT (1,6 eq., 0,27 mmol, 0, 037 mg). Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo e adicionou-se, em diversas porções, PyBOP (1,6 eq., 0,27 mmol, 0,14 g) . Agitou-se a mistura a 5°C sob uma atmosfera de árgon de um 70 dia para o outro, depois diluiu-se a mistura de reacção com uma solução saturada de NaCl e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com água e com salmoura, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se até se obter uma massa. Dissolveu-se o material impuro numa quantidade minima de MeOH e adicionou-se lentamente a água gelada a 0°C (100 mL), sob agitação rápida. Isolou-se então por purificação o composto 6 (0,080 g).

Esquema 7: síntese do exemplo 7

i

71 Síntese de (X) A uma solução de NBoc-leucina (19,81 g, 85,67 mmol, 1.0 eq) e éster fenilalanina-benzílico (25,0 g, 85,67 mmol, 1.0 eq.) em 900 mL de MeCN adicionou-se DIEA (44,29 g, 60 mL, 342,68 mmol, 4,0 eq.) e arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo. A esta mistura adicionou-se HOBT (18,52 g, 137,08 mmol, 1,6 eq) e depois acrescentou-se, em diversas porções, PyBOP (71,33 g, 137,08 mmol, 1,6 eq), ao longo de cinco minutos. Colocou-se a mistura de reacção sob uma atmosfera de árgon e agitou-se de um dia para o outro. Removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida, retomou-se o material restante em 500 mL de EtOAc, lavou-se com uma solução saturada de NaHC03, com H20 e com salmoura e secou-se sobre MgS04. Removeu-se o MgS04 por filtração e removeu-se os materiais voláteis sob pressão reduzida para se obter o composto (X). Síntese de (Y) A uma solução arrefecida a 0°C de 70% de TFA/DCM (150 mL) adicionou-se o composto (X) (25,0 g, 53,35 mmol, 1,0 eq.). Agitou-se a solução e deixou-se aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 2 horas, período esse ao fim do qual se concentrou a mistura e se submeteu a uma pressão hipobárica elevada durante 2 horas para se obter o sal de TFA do dipéptido de amina. Ao óleo resultante adicionou-se BocNHhPhe (14,68 g, 53,35 mmol, 1,0 eq.), 550 mL de MeCN e DIEA (27,58 g, 37,2 mL, 213,4 mmol, 4,0 eq.) e arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo. À mistura arrefecida adicionou-se HOBT (11,53 g, 85,36 mmol, 1,6 eq.) e depois acrescentou-se, em diversas porções, PyBOP (44,42 g, 85,36 mmol, 1,6 eq.), ao longo de cinco minutos. 72

Colocou-se a mistura de reacção sob uma atmosfera de árgon e deixou-se aquecer até à temperatura ambiente de um dia para o outro, periodo esse ao fim do qual se tinha formado um precipitado branco. Arrefeceu-se a mistura de reacção, recolheu-se os sólidos por filtração e depois lavou-se com MeCN frio para se obter o composto (Y) (24,86 g). Síntese de (Z)

Misturou-se o composto (Y) (0, 023 mol, 14,5 g) com TFA/DCM (80%) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora, periodo esse ao fim do qual se concentrou a mistura e se colocou sob uma pressão hipobárica elevada durante 2 horas para se obter o sal de TFA do tri-péptido de amina. A uma solução do sal de TFA (0,023 mol, 1 eq.) em MeCN (120 mL) adicionou-se cloreto de 4-clorobutirilo (1,2 eq., 0,028 mol, 0,32 mL) e DIEA (4 eq., 0,092mol, 16 mL). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 horas, depois concentrou-se e purificou-se por cromatografia rápida para se obter o composto (Z) (8 g) . Síntese de (AA) A uma solução do composto (Z) (1 eq., 0,095 mmol, 60 mg) em acetona anidra (8 mL) adicionou-se Nal (5 eq., 0,47 mmol, 70,5 mg). Agitou-se a mistura ao refluxo, sob uma atmosfera de azoto, de um dia para o outro. Concentrou-se então a mistura de reacção até à secura e retomou-se o resíduo em DCM. Lavou-se a camada orgânica com água e com salmoura, secou-se sobre MgSCt anidro e concentrou-se para se obter o composto (AA) com o aspecto de um sólido amarelo (50 mg). 73 Síntese de (BB) A uma solução do composto (AA) (30 mg, 0,041 mmol) em THF (2 mL) adicionou-se dimetilamina (1,2 eq., 0,05 mmol, 2M em THF, 25 pL) e DIEA (1 eq., 0,041 mmol, 7,2 pL) . Agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrou-se até à secura. Retomou-se o resíduo em acetato de etilo, lavou-se com água e com salmoura, secou-se sobre MgSC>4 anidro e concentrou-se para se obter um produto oleoso. Dissolveu-se o éster impuro em MeOH/EtOAc (a 1:1, 10 mL), adicionou-se Pd-C (a 5%, 20 mg) e agitou-se a mistura de reacção sob 1 atmosfera de H2 à temperatura ambiente durante 2 horas. Purgou-se então a mistura com árgon, filtrou-se através de Celite e concentrou-se para se obter o composto (BB) (21 mg) . Síntese do composto 7 A uma solução agitada do composto (F) [ver: Bioorg.

Med. Chem. Letter 1999, 9, 2283-88] (1,2 eq., 0, 054 mmol) em dmf (3 mL) adicionou-se o composto (BB) (1 eq., 0,045 mmol, 21 mg), DIEA (4 eq., 0,18 mmol, 31 pL) e HOBT (1,6 eq., 0,072 mmol, 10 mg). Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo e adicionou-se, em diversas porções, PyBOP (1,6 eq., 0,072 mmol, 37 mg). Agitou-se então a mistura a 5°C sob uma atmosfera de azoto, de um dia para o outro. Diluiu-se então a mistura de reacção com uma solução saturada de NaCl e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com água e com salmoura, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se até se obter um óleo, o qual se purificou por cromatografia rápida para se obter o composto T_ (16,7 mg) (CI50 20S CT-L < 50 nM, com base na célula CT-L < 150 nM). 74

Esquema 8: síntese do exemplo 8 0

1.17WOCM

C

PH | Síntese de (CC)

Dissolveu-se o composto (Y) (1,55 g, 0,0023 mol) em MeOH/EtOAc (a 1:1, 40 mL) e adicionou-se Pd-C (a 5%, 500 mg). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente em ambiente de hidrogénio durante 2 horas, depois filtrou-se através de Celite e concentrou-se para se obter o intermediário ácido carboxílico. A uma solução agitada do composto (F) [ver: Bioorg. Med. Chem. Letter 1999, 9, 2283-88] (1,2 eq., 2,55 mmol, 436 mg) em DMF (50 mL) adicionou-se o intermediário ácido carboxílico (1 eq., 2,12 mmol, 1,24 g), DIEA (4 eq., 8,4 8 mmol, 1,5 mL) e HOBT (1,6 eq., 3,39 mmol, 4 58 mg). Arrefeceu-se a mistura até 0°C num banho de gelo e adicionou-se, em diversas porções, PyBOP (1,6 eq., 3,39 mmol, 1,76 g) . Agitou-se a mistura a 5°C e sob uma atmosfera de azoto de um dia para o outro. Diluiu-se a mistura de reacção com uma solução saturada de NaCl e extraiu-se com EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com água e 75 com salmoura, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se até se obter um óleo, o qual se purificou por cromatografia rápida para se obter o composto (CC) (356 mg). Síntese do composto 8

Misturou-se o composto (CC) (23,6 mg, 0,034 mmol) com TFA/DCM (80%) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora, período esse ao fim do qual se concentrou a mistura e se colocou sob uma pressão hipobárica elevada durante 2 horas para se obter o sal de TFA do tetra-péptido de amina. A uma solução em DCM do sal de TFA adicionou-se cloreto de 1,3,5-trimetil-l-H-pirazole-4-sulfonilo (1,2 eq., 0,041 mmol, 8,5 mg) e TEA (4 eq., 0,136 mmol, 26 PL) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Concentrou-se a mistura impura até à secura e retomou-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com água e com salmoura, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se até se obter um óleo, o qual se purificou por cromatografia rápida para se obter o composto 8 (2 mg) (CI50 20S CT-L < 100 nM, com base na célula CT-L < 100 nM).

Esquema 9: síntese do exemplo 9 (referência)

Síntese do composto 9

Misturou-se o composto (CC) (63,7 mg, 0,092 mmol) com TFA/DCM (80%) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora, período esse ao fim do qual se concentrou a mistura e 76 se colocou sob uma pressão hipobárica elevada durante 2 horas para se obter o sal de tfa do tetra-péptido de amina. A uma solução em DCM do sal de TFA adicionou-se isocianato de fenilo (1,5 eq., 0,14 mmol, 15 PL) e DIEA (3 eq., 0,276 mmol, 50 pL) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Concentrou-se a mistura impura até à secura e retomou-se em EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com água e com salmoura, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se até se obter um óleo, o qual se purificou por cromatografia rápida para se obter o composto 9 (2,8 mg).

Esquema 10: síntese do exemplo 10 (referência)

Síntese do composto 10

Misturou-se o composto (CC) (48,5 mg, 0,07 mmol) com TFA/DCM (80%) e agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora, período esse ao fim do qual se concentrou a mistura e se colocou sob uma pressão hipobárica elevada durante 2 horas para se obter o sal de TFA do tetra-péptido de amina. A uma solução em D CM do sal de TFA adicionou-se isotiocianato de fenilo (1,5 eq., 0,105 mmol, 20 pL) DIEA (3 eq., 0,21 mmol, 40 pL) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente de um dia para o outro. Concentrou-se a mistura impura até à secura e retomou-se o resíduo em EtOAc. Lavou-se a camada orgânica com água e com salmoura, secou-se sobre MgS04 anidro e concentrou-se até se obter um 77 óleo, o qual se purificou por cromatografia rápida para se obter o composto 10 (1 mg).

Equivalentes

Os especialistas na matéria serão capazes de reconhecer, ou poderão confirmar através da utilização de experimentação rotineira, inúmeros equivalentes dos compostos e dos métodos para a sua utilização aqui descritos. Considera-se que tais equivalentes pertencem ao âmbito da presente invenção, sendo abrangidos pelas reivindicações seguintes. 78

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pelo requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o IEP não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição • WO 0128579 A [0005] • US 6831099 B [0026] • US 4733665 A [0029] • US 5340736 A [0032] [0066] • US 569748 A [0059] [0060] • WO 9810779 A [0078]

Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • Myung J. et al. Lack of Proteasome Active Site Allostery as Revealed by Subunit-Specific Inhibitors. Molecular Cell, Fevereiro de 2001, vol. 7 (2), 411-420 [0005] • Kim, K.P. et al. Proteasome Inhibition by the Natural Products Epoxomicin and Dihydroeponemycin: Insights into Specificity and Potency. Bio. Org. Med. Chem. Let., 1999, vol. 9, 3335-3340 [0005] • Fox; Whitesell. Organic Chemistry. Jones and Bartlett Publishers, 1994, 177-178 [0017] • Stein et al. Biochem., 1996, vol. 35, 3899-3908 [0059] [0060] 79 • Kojima, S. et al. Fed. Eur. Biochem. Soc.r 1992, vol. 304, 57-60 [0064] • Palombella et al. Cell, 1994, vol. 78, 773-785 [0067] [0068] [0074] • Thanos, D.; Maniatis, T. Cell, 1995, vol. 80, 529-532 [0068] • Collins, T. Lab. Invest., 1993, vol. 68, 499-508 [0069] • Cohen, J. Science, 1995, vol. 267, 960 [0070] • Qureshi, N. et al. J. Immun., 2003, vol. 171, 1515-1525 [0071] • Traenckner et al. EMBO J., 1994, vol. 13, 5433-5441 [0074] • Ciechanover, A. Cell, 1994, vol. 79, 13-21 [0076] • Kumatori et al. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1990, vol. 87, 7071-7075 [0076] • Paugam et al. Trends Parasitol., 2003, vol. 19 (2), 55-59 [0078] • Gonzales et al. Arch. Med. Res., 1997, vol. 28, 139-140 [0078] • Garrett, I. R. et al. J. Clin. Invest., 2003, vol. 111, 1771-1782 [0080] • Hardy, Μ. H. et al. Trans Genet, 1992, vol. 8, 55-61 [0081] • Harris, S. E. et al. J Bone Miner Res, 1994, vol. 9, 855-863 [0081] • Berge et al. Pharmaceutical Salts. J. Pharm. Sei., 1977, vol. 66, 1-19 [0088] • Bioorg. Med Chem. Lett., 1999, vol. 9, 2283-2288 [0132] [0136] [0140] [0145] [0151] [0152]

Claims (14)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto que satisfaz a estrutura da fórmula estrutural II, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável,

em que o símbolo L está ausente ou é seleccionado entre C=0, C=S e S02; o símbolo Q está ausente ou é seleccionado entre 0, NH e N-alquilo (Ci-C6) ; o símbolo X representa 0; cada um dos símbolo R2 e R4 representa um qrupo seleccionado independentemente entre alquilo(Ci—Cg), hidroxi-alquilo (Ci—C6) , alcoxialquilo (Ci-C6), arilo e aralquilo(Ci— C6), cada um dos quais é facultativamente substituído com um ou vários substituintes amida, amina, ácido carboxílico (ou um seu sal), éster, tiol ou tio-éter; o símbolo R5 representa N(R6)LQR7; o símbolo R6 representa um grupo seleccionado entre hidrogénio, OH e alquilo(Ci-C6); o símbolo R7 representa um grupo seleccionado entre (R80) (R90)P(=0)0-alquil(Ci-C8)-, (R10) 2N-alquil (Ci-Ci2) -, (R10)3N+- alquil (C1-C12)-, heterociclil-; cada um dos símbolos R8 e R9 representa um grupo seleccionado independentemente entre hidrogénio, um catião 2 metálico, alquilo (Ci-C6), alcenilo (Ci-C6), alcinilo (Ci-C6), arilo, heteroarilo, aralquilo (Ci-Cê) e heteroaralquilo(Ci— Cê) e de preferência entre hidrogénio, um catião metálico e alquilo (Ci-C6), ou os símbolos R8 e R9, em conjunto, representam alquilo (Ci-C6), formando assim um anel e cada um dos símbolos R10 representa um grupo seleccionado independentemente entre hidrogénio e alquilo (Ci-C6) e de preferência alquilo (Ci-Cê) ; em que o termo "alquilo (Cx-Cy)" designa grupos hidrocarboneto saturados, incluindo grupo alquilo de cadeia linear ou alquilo de cadeia ramificada que contêm entre x e y átomos de carbono na cadeia, incluindo grupos haloalquilo, os termos "alcenilo(C2-Cy) " e "alcinilo(C2-Cy)" designam grupos alifáticos insaturados que contêm entre 2 e y átomos de carbono na cadeia, incluindo grupos halogenados e que contêm pelo menos uma ligação dupla ou ligação tripla, respectivamente, o termo "aralquilo(Ci-C6)" designa um grupo alquilo (Ci—C6) substituído com um grupo arilo e o termo "arilo" compreende sistemas de anéis policíclicos que possuem dois ou mais anéis cíclicos, em que dois ou mais átomos de carbono são comuns a dois anéis unidos e em que pelo menos um dos anéis é aromático; desde que no caso de o símbolo R6 representar H ou CH3 e o símbolo Q estar ausente, então o radical LR7 não é hidrogénio, alquilo(Ci-C6)-C=0 insubstituído, uma outra cadeia de aminoácidos, t-butoxicarbonilo (Boc), benzoilo (Bz), fluoreno-9-ilmetoxicarbonilo (Fmoc), trifenilmetilo (tritilo), benziloxicarbonilo (Cbz), tricloroetoxicarbonilo (Troe); ou arilo ou heteroarilo substituído ou insubstituído. 3

2. Composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com a reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para inibir uma hidrolase nucleofílica no terminal N.

4. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável no tratamento da inflamação.

5. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para inibir ou reduzir uma infecção por VIH.

6. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para o tratamento de doenças neurodegenerativas.

7 . Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para o tratamento de doenças atrofia muscular.

8. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para o tratamento de cancro.

9. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para o tratamento de doenças infecciosas crónicas

10. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para o tratamento de febre.

11. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para o tratamento de patologias associadas à imunidade. 4

12. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para o tratamento de enervação ou lesão dos nervos.

13. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para afectar o nível de expressão genética virai num sujeito.

14. Composto de acordo com a reivindicação 1 utilizável para alterar a variedade de péptidos antigénicos produzidos pelo proteassoma num organismo.