PT1325130E - Homólogos do receptor de nogo - Google Patents

Description

ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

DESCRIÇÃO "Homólogos do receptor de Nogo"

CAMPO DO INVENTO 0 presente invento refere-se a neurologia e biologia molecular. Mais particularmente, o presente invento refere-se a neurónios do SNC e crescimento axonal.

ANTECEDENTES DO INVENTO

Entre os mecanismos através dos guais as células de um organismo comunicam umas com as outras e obtêm informação e estímulos do seu ambiente é através de moléculas receptoras da membrana celular expressas na superfície celular. Muitos de tais receptores foram identificados, caracterizados e por vezes classificados em superfamílias principais de receptores com base em motivos estruturais e características de transdução de sinal. Os receptores são um primeiro elo essencial para a tradução de um sinal extracelular numa resposta fisiológica celular.

Os receptores dos neurónios são particularmente importantes no desenvolvimento do sistema nervoso durante a embriogénese. Os neurónios formam ligações com células alvo durante o desenvolvimento através de alongamento axonal dos neurónios para as células alvo num processo mediado por receptores. Os axónios e as dendrites têm uma região especializada das suas pontas distais conhecidas como o cone de crescimento. Os cones de crescimento permitem gue o neurónio sinta o ambiente local através de um processo mediado por receptores e dirija o movimento do axónio ou da dendrite do neurónio para a célula alvo do neurónio. Este processo é conhecido como alongamento. Os cones de crescimento podem ser sensíveis a várias pistas orientadoras, por exemplo, capacidade de adesão da superfície, factores de crescimento, neurotransmissores e campos eléctricos. A orientação do crescimento no cone depende de várias classes de moléculas de adesão, sinais intercelulares, bem como factores que estimulam e inibem os cones de crescimento. 2

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT É interessante que os neurónios danificados não se alongam no sistema nervoso central (SNC) após lesão devida a traumatismo ou doença, enquanto os axónios no sistema nervoso periférico (SNP) regeneram-se facilmente. 0 facto de os neurónios do SNC lesionados não conseguirem alongar não é devido a uma propriedade intrinseca dos axónios do SNC, mas antes devido ao ambiente do SNC que não é permissivo ao alongamento axonal. Experiências clássicas de enxertia por Aguayo e colegas (p.ex., Richardson et al., Nature 284: 264-265, 1980) demonstraram que os axónios do SNC podem de facto alongar-se ao longo de distâncias substanciais com enxertos de nervos periféricos e que a mielina do SNC inibe o alongamento dos axónios do SNC. Portanto, dado o ambiente apropriado, os axónios do SNC podem regenerar, implicando que a lesão axonal do SNC pode potencialmente ser abordada através da manipulação apropriada do ambiente do SNC. A ausência de regeneração dos axónios após lesão pode ser atribuída à presença de inibidores do crescimento dos axónios. Estes inibidores estão predominantemente associados a mielina e constituem uma importante barreira à regeneração. Os inibidores do crescimento dos axónios estão presentes em mielina derivada do SNC e na membrana plasmática de oligodendrócitos que sintetizam mielina no SNC (Schwab et al., Annu. Rev. Neurosci. 16: 565-595, 1993). Os inibidores associados à mielina parecem ser um contribuinte primário para a insuficiência da regeneração dos axónios do SNC in vivo após uma interrupção da continuidade axonal, enquanto outros inibidores do crescimento dos axónios não associados à mielina no SNC podem ter um papel menor. Estes inibidores bloqueiam a regeneração axonal após lesão neuronal devido a traumatismo, AVC ou infecção virai.

Numerosos inibidores do crescimento de axónios derivados de mielina foram caracterizados (ver, para revisão, David et al., (1999) W0995394547,; Bandman et al., Patente U.S. N.° 5858708; Schwab, Neurochem. Res. 21: 755-761, 1996). Vários componentes da substância branca do SNC, NI35, NI250 (Nogo) e a glicoproteina associada à Mielina (MAG), que têm actividade inibidora da extensão axonal, foram também descritos (Schwab et al., (1990) W09005191; Schwab et al., (1997) Patente U.S. 3 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ Ν.° 5684133). Em particular, Nogo é um inibidor do crescimento dos axónios associado à mielina de 250 kDa que foi originalmente caracterizado com base nos efeitos da proteína purificada in vitro e de anticorpos monoclonais que neutralizam a actividade da proteína (Schwab, Exp. Neurol. 109: 2-5, 1990). O ADNc de Nogo foi identificado pela primeira vez através de análise aleatória do ADNc do cérebro e não foi sugerida qualquer função (Nagase et al., DNA Res. 5: 355-364: 1998). A identificação deste ADNc de Nogo como o ADNc codificando o inibidor do crescimento de axónios associado à mielina de 250 kDa foi descoberta apenas recentemente (GrandPre et al., Nature 403: 439-444, 2000; Chen et al.,

Nature 403: 434-439, 2000; Prinjha et al., Nature 403: 383- 384, 2000) .

Importantemente, mostrou-se que Nogo era o componente primário da mielina do SNC responsável pela inibição do alongamento e da regeneração axonal. A expressão selectiva de Nogo por oligodendrócitos e não por células de Schwann (as células que mielinizam os axónios do SP) é consistente com os efeitos inibidores da mielina do SNC, em contraste com a mielina do SP (GrandPre et al., Nature 403: 434-439, 2000). Em cultura, Nogo inibe o alongamento axonal e causa colapso do cone de crescimento (Spillmann et al., J. Biol. Chem. 272: 19283-19293, 1998). Foi mostrado que anticorpos (p.ex., IN-1) contra Nogo bloqueiam a maior parte da acção inibidora da mielina do SNC no crescimento de neurites in vitro (Spillmann et al., J. Biol. Chem. 272: 19283-19293, 1998). Estas experiências indicam que Nogo é o componente principal da mielina do SNC responsável pela inibição do alongamento axonal em cultura. Para além disso, mostrou-se que in vivo o anticorpo IN-1 aumenta a regeneração axonal após lesão da medula espinal, resultando em recuperação de comportamentos tais como contacto, colocação e comprimento do avanço (Schnell e Schwab, Nature 343: 269-272, 1990; Bregman et al., Nature 378: 498-501, 1995). Assim, há provas substanciais de que Nogo é um alvo molecular relevante de doença. Esperar-se-ia que agentes que interferem com a ligação de Nogo ao seu receptor melhorassem a regeneração axonal em estados clínicos nos quais foram danificados axónios, e melhorasse o estado do doente. 4 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ A modulação de Nogo foi descrita como um meio para tratamento de regeneração de neurónios danificados por traumatismo, enfarte e distúrbios degenerativos do SNC (Schwab et al., (1994) W09417831, Tatagiba et al., Neurosurgery 40: 541-546, 1997) bem como tumores malignos no SNC tais como glioblastoma (Schwab et al., (1993) Patente U.S. N.° 5250414;

Schwab et al., (2000) Patente U.S. N.° 6025333).

Foi sugerido que os anticorpos que reconhecem Nogo são úteis no diagnóstico e tratamento de lesões nos nervos resultantes de traumatismo, enfarte e distúrbios degenerativos do SNC (Schnell & Schwab, Nature 343: 269-272, 1990; Schwab et ai., (1997) Patente U.S. N.° 5684133). Para axónios do SNC, existe uma correlação entre a presença de mielina e a inibição da regeneração dos axónios ao longo de distâncias longas (Savio e Schwab, Proc. Natl. Acad Sei. 87: 4130-4133, 1990;

Keirstead et al., Proc. Natl. Acad Sei. 89: 11664-11668, 1992) . Após Nogo ser bloqueado por anticorpos, os neurónios podem novamente estender-se através das lesões causadas por danos nos nervos (Schnell e Schwab, Nature 343: 269-272, 1990) .

NgRl é um Receptor de Nogo que foi identificado através de pesquisa de moléculas que interagem com os 66 aminoácidos do domínio activo de Nogo, tal como descrito no Exemplo 7 de W00151520, um documento que faz parte do estado da arte apenas sob as condições do Artigo 54(3) EPC04-11-2009.

SUMÁRIO DO INVENTO

Foram identificados genes codificando homólogos (NgR2 e NgR3) de um receptor de Nogo (NgRl) em ratinhos e humanos. Foram identificados vários domínios nos polipéptidos codificados pelos genes de NgR2 e NgR3 que foram comparados com domínios nos polipéptidos NgRl de ratinho e humano. Esta comparação conduziu à identificação de uma sequência de consenso (sequência de consenso NgR) que caracteriza uma família de proteínas (família NgR). Com base nestas e noutras descobertas, o presente invento apresenta moléculas e métodos para modulação do crescimento axonal em neurónios do SNC. Assim, o presente invento proporciona um polipéptido 5 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ compreendendo uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo que consiste em: (a) aminoácidos 31 a 310 de SEQ ID NO: 2; (b) aminoácidos 31 a 395 de SEQ ID NO: 2; (c) aminoácidos 1 a 395 de SEQ ID NO:2; (d) aminoácidos 31 a 310 de SEQ ID NO: 2 excepto 20 ou menos substituições de aminoácidos conservativas por 100 resíduos de aminoácidos; (e) aminoácidos 31 a 310 de SEQ ID NO: 2 e até cinco aminoácidos no terminal N e/ou terminal C do referido polipéptido; (f) aminoácidos 31 a 395 de SEQ ID NO:2 excepto 20 ou menos substituições de aminoácidos conservativas por 100 resíduos de aminoácidos; (g) aminoácidos 31 a 395 de SEQ ID NO: 2 e até cinco aminoácidos no terminal N e/ou terminal C do referido polipéptido; e (h) aminoácidos 1 s 1 395 de SEQ ID NO: 2 excepto 20 ou menos substituições de aminoácidos conservativas por 100 resíduos de aminoácidos; em que o referido polipéptido diminui a inibição do crescimento axonal em neurónios do SNC humano. O presente invento proporciona também um polipéptido compreendendo uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo que consiste em: (a) uma sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica aos aminoácidos 1 a 420 de SEQ ID NO: 2; (b) aminoácidos 1 a 420 de SEQ ID NO:2 (c) uma sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica aos aminoácidos 31 a 420 de SEQ ID NO:2; e (d) aminoácidos 31 a 420 de SEQ ID NO:2; em que o referido polipéptido diminui a inibição do crescimento axonal em neurónios do SNC humano.

Os polipéptidos do presente invento podem ainda compreender um polipéptido heterólogo. O polipéptido 6 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT heterólogo pode ser seleccionado de entre o grupo gue consiste em Fc, Glutationa-S-transferase (GST), e uma etiqueta de Histidina (etiqueta His). 0 presente invento proporciona também um polinucleótido compreendendo um ácido nucleico codificando um polipéptido do presente invento. 0 polinucleótido pode ainda compreender um ou mais elementos de controlo da expressão operativamente ligados ao referido ácido nucleico. 0 presente invento proporciona também um vector compreendendo um polinucleótido do presente invento. 0 presente invento proporciona também uma célula hospedeira compreendendo um polinucleótido do presente invento ou um vector do presente invento, em que a célula hospedeira exclui uma célula capaz de formar um ser humano. A célula hospedeira pode ser uma célula eucariótica. 0 presente invento proporciona também um polipéptido receptor de NOGO de acordo com o presente invento expresso por uma célula hospedeira do presente invento. 0 presente invento proporciona também um anticorpo ou fragmento de ligação ao antigénio deste que se liga especificamente a um polipéptido do presente invento. Os anticorpos ou fragmentos de ligação ao anticorpo podem ser seleccionados de entre o grupo que consiste em anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais, anticorpos humanizados, e anticorpos humanos. 0 presente invento proporciona também uma composição compreendendo um polinucleótido do presente invento, um vector do presente invento, um polipéptido do presente invento ou um anticorpo do presente invento, e um transportador. 0 presente invento proporciona também um método in vitro de diminuição da inibição do crescimento axonal de um neurónio do SNC compreendendo o contacto de um neurónio com um polipéptido do presente invento ou um anticorpo do presente invento. 7

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT Ο presente invento proporciona também a utilização de um polipéptido do presente invento ou um anticorpo do presente invento para a preparação de uma composição farmacêutica para modulação da inibição do crescimento axonal. 0 presente invento proporciona também a utilização de um polipéptido do presente invento ou um anticorpo do presente invento para a preparação de uma composição farmacêutica para tratamento de uma doença do sistema nervoso central (SNC), um distúrbio ou ferimento num mamífero, em que a referida doença do SNC, distúrbio ou ferimento é seleccionado de entre o grupo que consiste em ferimento cerebral, ferimento da medula espinal, AVC, ou uma doença desmielinizante. Doenças desmielinizantes que podem ser tratadas incluem esclerose múltipla, desmielinização monofásica, encefalomielite, leucoencefalopatia multifocal, panencefalite, doença de Marchiafava-Bignami, degenerescência esponjosa, doença de Alexander, doença de Canavan, leucodistrofia metacromática e doença de Krabbe.

As composições farmacêuticas que são preparadas de acordo com este aspecto do presente invento podem ser formuladas para administração através de uma via seleccionada a partir do grupo que consiste em administração parentérica, administração subcutânea, administração intravenosa, administração transmucosa, administração intradérmica e administração transdérmica. A menos que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos aqui utilizados têm o mesmo significado que o vulgarmente utilizado por um perito na arte a que o presente invento se refere. No caso de conflito, o presente pedido, incluindo as definições, dominarão.

Os materiais, métodos e exemplos apresentados abaixo são apenas ilustrativos e não se pretende que sejam limitantes. Outras características e vantagens do presente invento serão aparentes a partir da descrição detalhada e das reivindicações. 8 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Fig. 1A-1B mostra um alinhamento de NgR2 (SEQ ID NO:2) e NgR3 (SEQ ID NO:4) com o NgR conhecido, NgRl (SEQ ID NO:5) e a Seguência de Consenso (SEQ ID NO:6).

Fig. 2. mNgR3 não se liga a hNogoA(1055-1120) . Células COS-7 foram transfectadas com vectores codificando myc-NgRl ou myc-NgR3, fixadas e coradas com anticorpos anti-myc ou AP-hNogoA(1055-1120).

Fig. 3. Um alinhamento das seguências de aminoácidos de NgRl humano, NgRl de murideo, NgR3 de murideo, NgR3 humano e NgR2 humano. A numeração começa com o aminoácido #1 do NgR3 de murideo. A sequência de consenso está listada abaixo. O domínio LRR NT está indicado por uma caixa sombreada; os domínios LLR 1, LLR 3, LLR 5 e LLR 7 estão indicados por caixas vazias; LLR 2, LLR 4, LLR 6 e LLR 8 estão indicados por caixas sombreadas; e o domínio LLR CT está indicado por uma caixa sombreada. Os aminoácidos a negrito em LLR 8 indicam locais de glicosilação conservados. Um ponto indica um resíduo de cisteína conservado em LRR4. A caixa no terminal C indica sinais de GPI putativos.

DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO A presente divulgação refere-se a moléculas e métodos para modelação do crescimento axonal em neurónios do SNC. A divulgação proporciona um polipéptido que contém um polipéptido contendo um domínio LRRCT rico em triptofano consistindo na sequência de aminoácidos:

NXi WXj C X3 CR ARX,L WX, WX^X,X,RXx0 S S SXu V

X12 C X13 X,4 p Xu Xtf xi7 Xlg Xu Xm D L Xj! Xj2 L Xjj X24 Xj, D X^X^X^C [SEQ ID NO: 19] em que X é quaisquer aminoácido da proteína ou um intervalo, e o polipéptido não inclui a sequência de aminoácidos do resíduo 260 a 309 de SEQ ID NO:5 (NgRl humano) ou SEQ ID NO:17 (NgRl de ratinho). 9

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

De preferência, X17 e X23 são (independentemente) arginina ou lisina. Nalguns casos a sequência de aminoácidos do domínio LRRCT é os resíduos 261-310 de SEQ ID NO: 2, ou os resíduos 261-310 de SEQ ID NO:2 com até 10 substituições de aminoácidos conservativas. Nalguns casos, o polipéptido contém a seguinte sequência de aminoácidos NTLRRCT: C P X! Xj C X, c Y X* X, P Xj X, T X* S C X, X10 Xu XQ Xu Xu Xu X* P Xi7 X» X19 P Xm X21X22 X23 X» F L Xjj Xjj N Xj71 Xjj Xjj X3, X^2 X^j X34 P X3S X36 X37 X38 X39 X40 X*1 X42 1» W Xjj Xjj S N Xjj Xjj Xjj Xjj I X^, X» X« Xj2 F X53 Xj4 X« Xse X57 L E Xjj L D L X» D N Xjj X^ L X& Xo X«

Xjj p Χβί T F Xj7 G L Xjj Xjj L Xjo Xjj L Xjj L Xjj Xjj C Xjj L Xjj Xjj L Xjj X79 Xeo Xsi F Xra G L Xj3 Xjj L Q Y L Y L Q Xjj N Xjj Xjj Xjj X,, L Χ,ο D 132 Λ133 '

M2S Λ129 J

X* Xjj F X* D L Xjj N L Xjj H L F L H G N X* X,J X,» X» X,oo X1Bi X,m X103 X104 F R G L X105 XlOÍ L D R L L L Η X107 N X108 X109 X1.0 XUi VHXjU X113 A. F Xju X115 L X116 R L Xji7 Xjjj L Xjg L F X120 N X121 ^ X121X123 L Xm Xl2J Xl2í X,„ L x„, X,„ L Χ,Μ X,M L Xm X,3J L R L N X1M N X13S W X13í C X137 C R X138 R X13, L W X140 W X141X142 Xl43 X144 R X,45 S S S XI4Í V Xjjj C Xjjj Xjj, P Xjj0 Xjjj X,j2 Xjj, X.JJ Xjjj D L Xjjj Xjjj L Xjjj XjJ, Xj( D Xjjj X162 Xjj3 C [SEQ ID NO: 18] em que X é qualquer resíduo de aminoácidos ou um intervalo e em que o polipéptido não é o polipéptido de SEQ ID NO:5 (NgRl humano) ou SEQ ID NO:17 (NgRl de ratinho). Por exemplo, X6, X37 e X38 podem representar um intervalo. Exemplos específicos de polipéptidos desta divulgação são SEQ ID NO:2 (NgR2 humano), SEQ ID NO:4 (NgR3 de ratinho) e SEQ ID NO:14 (NgR3 humano). Nalguns casos, o polipéptido contém: (a) um domínio NTLRRCT, e (b) menos de um domínio CTS completo, desde que um domínio CTS parcial, se presente, consistir em não mais do que os primeiros 39 aminoácidos do domínio CTS. Embora o polipéptido possa conter um domínio GPI funcional, um domínio GPI funcional pode estar ausente, p.ex., quando é desejado um polipéptido solúvel. Um polipéptido desta divulgação inclui opcionalmente uma sequência de aminoácidos de um polipéptido heterólogo, p.ex., uma porção Fc de um anticorpo. A divulgação proporciona também um ácido nucleico codificando um polipéptido acima descrito; um vector contendo o ácido nucleico, ácido nucleico esse que pode estar 10

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT operativamente ligado a uma sequência de controlo da expressão; e uma célula hospedeira transformada contendo o vector. É também proporcionado um método de produção de um polipéptido desta divulgação. O método inclui a introdução de um ácido nucleico codificando o polipéptido acima descrito numa célula hospedeira, a cultura da célula sob condições adequadas para expressão do polipéptido e a recuperação do polipéptido. A divulgação proporciona também uma molécula anti-sentido cuja sequência nucleotídica é complementar a uma sequência nucleotidica codificando um polipéptido seleccionado de entre o grupo que consiste num polipéptido consistindo nos resíduos 311-395 de SEQ ID NO:2, um polipéptido consistindo nos resíduos 256-396 de SEQ ID NO:14 e um polipéptido consistindo nos resíduos 321-438 de SEQ ID NO:4, em que o ácido nucleico tem de 8 a 100 nucleótidos de comprimento, p.ex., cerca de 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ou 90 nucleótidos. A divulgação proporciona também um ácido nucleico codificando uma tal molécula anti-sentido. A divulgação proporciona também um anticorpo que se liga a um polipéptido acima descrito. Os polipéptidos ou anticorpos desta divulgação podem ser formulados em composições farmacêuticas contendo o polipéptido ou anticorpo e um transportador farmaceuticamente aceitável. A divulgação proporciona também um método para diminuição da inibição do crescimento axonal de um neurónio do SNC. O método inclui o passo de contacto do neurónio com uma quantidade eficaz de um polipéptido ou anticorpo desta divulgação. A divulgação proporciona também um método para tratamento de uma doença, um distúrbio ou ferimento do sistema nervoso central. O método inclui a administração a um mamífero, p.ex., um humano, de uma quantidade eficaz de um polipéptido ou anticorpo desta divulgação. Doenças, distúrbios e ferimentos exemplares que podem ser tratados utilizando moléculas e métodos desta divulgação incluem, mas não se limitam a ferimento cerebral, ferimento da medula espinal, AVC, doenças desmielinizantes, p.ex., esclerose múltipla, desmielinização monofásica, encefalomielite, leucoencefalopatia multifocal, panencefalite, doença de Marchiafava-Bignami, 11

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT degenerescência esponjosa, doença de Alexander, doença de Canavan, leucodistrofia metacromática e doença de Krabbe. A divulgação proporciona também um método para a identificação de uma molécula que se liga a um polipéptido desta divulgação. 0 método inclui os passos de: (a) proporcionar um polipéptido desta divulgação; (b) contacto do polipéptido com a molécula candidata; e (c) detecção da ligação da molécula candidata ao polipéptido.

Uma parte da divulgação aqui contida proporciona os polipéptidos, polinucleótidos, vectores, células hospedeiras, anticorpos e fragmentos de ligação ao antigénio, composições, métodos e utilizações do presente invento. Estes aspectos do presente invento são expostos nas reivindicações anexas. A presente divulgação proporciona polinucleótidos purificados e isolados (p.ex., sequências de ADN e transcritos de ARN, tanto cadeias com sentido como anti-sentido complementares, tanto de cadeia simples como de cadeia dupla, incluindo variantes de processamento destas) codificando homólogos de NgR, aqui referidos como NgR. A menos que indicado de outro modo, tal como aqui se utiliza, a abreviatura em minúsculas (NgR) refere-se a um gene, ADNc, ARN ou sequência de ácido nucleico, enquanto que a versão em maiúsculas (NgR) se refere a uma proteína, polipéptido, péptido, oligopéptido ou sequência de aminoácidos. As proteínas específicas são designadas pelo número, p.ex., "NgR2" é um homólogo de NgR humano, "NgR3" é um homólogo de NgR derivado de murídeo e "NgRl" é o NgR conhecido identificado pelo Dr. Stephen Strittmatter. Os NgR conhecidos são aqui referidos como "NgR". Os polinucleót idos de ADN desta divulgação incluindo os do presente invento, incluem ADN genómico, ADNc e ADN que foi quimicamente sintetizado em todo ou em parte.

Trabalhos de referência padrão expondo os princípios gerais da tecnologia de ADN recombinante conhecidos dos peritos na arte incluem Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York (1998); Sambrook et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2a Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York 12 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ (1989); Kaufman et al., Eds., "Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology and Medicine", CRC Press, Boca Raton (1995); McPherson, Ed., "Directed Mutagenesis: A Practical Approach", IRL Press, Oxford (1991).

Tal como aqui se utiliza, o termo "axónio" refere-se a uma protrusão celular longa de um neurónio, através da qual são conduzidos potenciais de acção, para ou desde o corpo celular.

Tal como aqui se utiliza, o termo "crescimento axonal" refere-se a uma extensão do longo processo ou axónio, originário no corpo celular e continuado pelo cone de crescimento.

Tal como aqui se utiliza, o termo "distúrbio do sistema nervoso central" refere-se a qualquer estado patológico associado a função anormal do sistema nervoso central (SNC). 0 termo inclui, mas não se limita a, funcionamento alterado do SNC resultante de traumatismo físico do tecido cerebral, infecção virai, mecanismos auto-imunes e mutação genética.

Tal como aqui se utiliza, o termo "doença desmielinizante" refere-se a um distúrbio patológico caracterizado pela degradação da bainha de mielina da membrana celular do oligodendrócito.

Tal como aqui se utiliza, o termo "cone de crescimento" refere-se uma região especializada na ponta de uma neurite em crescimento que é responsável por sentir o ambiente local e mover o axónio em direcção à sua célula alvo sináptica apropriada.

Tal como aqui se utiliza, o termo "movimento do cone de crescimento" refere-se à extensão ou colapso do cone de crescimento em direcção à célula alvo do neurónio.

Tal como aqui se utiliza, o termo "neurite" refere-se a um processo que cresce para fora de um neurónio. Uma vez que é por vezes difícil distinguir uma dendrite de um axónio em cultura, o termo "neurite" é utilizado para ambos. 13 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Tal como aqui se utiliza, o termo "oligodendrócito" refere-se a uma célula neuroglial do SNC cuja função seja mielinizar axónios do SNC. “Sintetizado" tal como aqui se utiliza e é entendido na arte, refere-se a polinucleótidos produzidos através de métodos puramente químicos, em oposição a enzimáticos. Sequências de ADN "inteiramente" sintetizadas são portanto produzidas inteiramente por meios químicos e os ADN "parcialmente" sintetizados englobam aqueles em que apenas porções do ADN resultante foram produzidas por meios químicos. Pelo termo "região" entenda-se uma porção fisicamente contígua da estrutura primária de uma biomolécula. No caso das proteínas, uma região é definida por uma porção contígua da sequência de aminoácidos dessa proteína. 0 termo "domínio" é aqui definido como referindo-se a uma parte estrutural de uma biomolécula que contribui para uma função conhecida ou suspeita da biomolécula. Os domínios podem ser co-extensivos com regiões ou porções destes, os domínios podem também incorporar uma porção de uma biomolécula que seja distinta de uma região particular, para além de toda ou parte dessa região. Exemplos de domínios da proteína NgR incluem, mas não se limitam ao péptido sinal, domínio extracelular (i.e., N-terminal), e domínios de repetição ricos em leucina.

Tal como aqui se utiliza, o termo "actividade" refere-se a uma variedade de indícios mensuráveis sugerindo ou revelando ligação, directa ou indirecta; afectando uma resposta, i.e., possuindo um efeito mensurável em resposta a alguma exposição ou estímulo, incluindo, por exemplo, a afinidade de um composto para se ligar directamente a um polipéptido ou polinucleótido desta divulgação, ou, por exemplo, a medição de quantidades de proteínas a montante ou a jusante ou outras funções semelhantes após algum estímulo ou evento. Tais actividades podem ser medidas através de ensaios tais como inibição competitiva da ligação de NgRl a ensaios de Nogo em que, por exemplo, é adicionado NgR2 solúvel não marcado a um sistema de ensaio em concentrações crescentes para inibir a ligação de Nogo a NgRl expresso à superfície de células CHO. Como outro exemplo, pode-se avaliar a capacidade dos neurónios para se estenderem através de lesões causadas por danos nos nervos (tal como em Schnell e Schwab, Nature 343: 269-272, 14 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ 1990) após inibição de Nogo através de várias formas de NgR2 e/ou NgR3 como indicador biológico da função de NgR.

Tal como aqui se utiliza, pretende-se que o termo “anticorpo" se refira a anticorpos completos, intactos e Fab, Fab', F(ab)2, e outros fragmentos destes. Os anticorpos completos, intactos incluem anticorpos monoclonais tais como anticorpos monoclonais de murideo, anticorpos quiméricos, anticorpos anti-idiotipicos, anticorpos anti-anti-idiotípicos e anticorpos humanizados.

Tal como aqui se utiliza, o termo "ligação" significa a interacção física ou química entre duas proteínas ou compostos ou proteínas ou compostos associados ou combinações destes. A ligação inclui uniões iónicas, não iónicas, de hidrogénio, de Van der Waals, interacções hidrófobas, etc. A interacção física, a ligação, pode ser directa ou indirecta, sendo a indirecta através ou devida aos efeitos de outra proteína ou composto. A ligação directa refere-se a interacções que não ocorrem através ou devido ao efeito de outra proteína ou composto mas em vez disso são sem outros intermediários químicos substanciais.

Tal como aqui se utiliza, o termo "composto" significa qualquer químico ou molécula identificável, incluindo, mas não se limitando a, moléculas pequenas, péptidos, proteínas, açúcares, nucleótidos ou ácidos nucleicos, e tal composto pode ser natural ou sintético.

Tal como aqui se utiliza, o termo "complementar" refere-se a emparelhamento de Watson-Crick entre unidades de nucleótidos de uma molécula de ácido nucleico.

Tal como aqui se utiliza, o termo "contacto" significa colocar juntos, directamente ou indirectamente, um composto na vizinhança física de um polipéptido ou polinucleótido desta divulgação. O polipéptido ou polinucleótido pode estar num qualquer número de tampões, sais, soluções, etc. O contacto inclui, por exemplo, a colocação do composto num copo, numa placa de microtitulação, num balão de cultura celular ou num microarray, tal como um chip de genes, ou semelhante, que 15 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ contenha a molécula de ácido nucleico ou o polipéptido codificando o NgR ou fragmento deste.

Tal como aqui se utiliza, a frase "sequência nucleotídica homóloga" ou "sequência de aminoácidos homóloga" ou variações destas referem-se a sequências caracterizadas por uma identidade ao nivel nucleotidico, ou uma homologia ao nível dos aminoácidos, de pelo menos a percentagem especificada. Sequências nucleotídicas homólogas incluem as sequências codificando para isoformas de proteínas. Tais isoformas podem ser expressas em diferentes tecidos do mesmo organismo em resultado de: por exemplo, processamento alternativo do ARN. Alternativamente, as isoformas podem ser codificadas por diferentes genes. Sequências nucleotídicas homólogas incluem sequências nucleotídicas codificando para uma proteína de uma espécie diferente da humana, incluindo, mas não se limitando a, mamíferos. Sequências nucleotídicas homólogas incluem também, mas não se limitam a, variações alélicas de ocorrência natural e mutações das sequências nucleotídicas aqui expostas. Uma sequência nucleotídica homóloga, contudo, não inclui a sequência nucleotídica codificando NgRl. Sequências de aminoácidos homólogas incluem as sequências de aminoácidos que contêm substituições de aminoácidos conservativas e cujos polipéptidos têm a mesma ligação e/ou actividade. Uma sequência de aminoácidos homóloga não inclui, no entanto, a sequência de aminoácidos codificando outros NgR conhecidos. A percentagem de homologia pode ser determinada, por exemplo, através do programa Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, Versão 8 para Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison WI), utilizando as definições por defeito, que utiliza o algoritmo de Smith e Waterman (Adv.

Appl. Math. 2 : 482-489, 1981, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade).

Tal como aqui se utiliza, o termo molécula de ácido nucleico "isolada" refere-se a uma molécula de ácido nucleico (ADN ou ARN) que é substancialmente livre de ácidos nucleicos codificando outras proteínas com as quais está associada na natureza, i.e., um ácido nucleico que foi removido do seu ambiente nativo. Exemplos de moléculas de ácido nucleico

isoladas incluem, mas não se limitam a, moléculas de ADN recombinantes contidas num vector, moléculas de ADN 16 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ recombinantes mantidas numa célula hospedeira heteróloga, moléculas de ácido nucleico parcialmente ou substancialmente purificadas e moléculas de ADN ou ADN sintéticas. De preferência, um ácido nucleico "isolado" está livre de sequências que flanqueiam naturalmente o ácido nucleico (i.e., sequências situadas nas extremidades 5' e 3' do ácido nucleico) no ADN genómico do organismo do qual o ácido nucleico é derivado. Por exemplo, em várias concretizações, a molécula de ácido nucleico de NgR isolada pode conter menos de cerca de 50 kb, 25 kb, 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb ou 0,1 kb de sequências nucleotidicas que flanqueiam naturalmente a molécula de ácido nucleico no ADN genómico da célula da qual o ácido nucleico é derivado. Para além disso, uma molécula de ácido nucleico "isolada", tal como uma molécula de ADNc, pode ser substancialmente livre de outros material celular ou meio de cultura quando produzida através de técnicas recombinantes, ou de precursores químicos ou outros produtos químicos quando sintetizada quimicamente.

Tal como aqui se utiliza, o termo "heterólogo" refere-se a uma sequência nucleotídica ou de aminoácidos que é uma sequência diferente ou não correspondente, ou uma sequência derivada de uma espécie diferente. Por exemplo, uma sequência nucleotídica ou de aminoácidos de NgR de ratinho é heteróloga à sequência nucleotídica ou de aminoácidos de NgR humano, e uma sequência nucleotídica ou de aminoácidos de NgR humano é heteróloga a uma sequência nucleotídica ou de aminoácidos de uma imunoglobulina humana.

Tal como aqui se utiliza, um "polipéptido NgR solúvel" é um polipéptido NgR que não se ancora por si próprio numa membrana. Tais polipéptidos solúveis incluem, por exemplo, os polipéptidos NgR2 e NgR3 que não têm uma porção suficiente do seu sinal de âncora GPI para ancorarem o polipéptido ou são modificados para que o sinal de âncora GPI não seja adequado para resultar na substituição do péptido com uma âncora GPI. Em casos preferidos, são removidos até 5, 10, 20 ou 25 aminoácidos do terminal C de NgR2 ou NgR3 para produzir as respectivas proteínas solúveis. Tal como aqui se utiliza polipéptidos NgR solúveis incluem NgR inteiros ou truncados (p.ex., com deleções internas). 17 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Os polipéptidos NgR solúveis podem incluir a proteína NgR inteira até à putativa sequência sinal GPI (p.ex., do aminoácido 1 até cerca do aminoácido 395 de NgR2, e do aminoácido 1 até cerca do aminoácido 438 de NgR3). Noutros casos, o péptidos sinal das proteínas pode ser removido ou truncado (p.ex., pode ser removida toda ou parte da sequência sinal de NgR2, que abrange do aminoácido 1 a cerca do aminoácido 30 de SEQ ID NO:2; pode ser removida toda ou parte da sequência sinal de NgR3, que abrange do aminoácido 1 a cerca do aminoácido 40 de SEQ ID NO:4). Nalguns casos, são utilizados o NgR2 maduro (SEQ ID NO:8) e o NgR3 maduro (SEQ ID NO:9).

Os polipéptidos NgR solúveis incluem pelo menos uma das putativas porções de ligação ao ligando de NgR, incluindo a primeira região rica em cisteína (SEQ ID NO:10, a região de repetição de leucina (SEQ ID NO:12) e a segunda região rica em cisteína (SEQ ID NO:ll)). Nalguns casos, os polipéptidos NgR solúveis consistem em do aminoácido 1 até cerca do aminoácido 395 de SEQ ID NO:2, ou do aminoácido 1 até cerca do aminoácido 438 de SEQ ID NO:4.

Noutros casos, os polipéptidos NgR solúveis são proteínas de fusão que contêm os aminoácidos 30 até cerca do aminoácido 395 do NgR2 maduro ou do aminoácido 40 até cerca do aminoácido 438 de NgR3, os 10 aminoácidos C-terminais de uma região charneira da IgGl humana contendo os dois resíduos de cisteína que se pensa que participem na ligação dissulfureto intercadeias, e as regiões CH2 e CH3 de um domínio constante da cadeia pesada da IgGl humana. Este tipo de proteína recombinante é concebido para modular a inibição do alongamento axonal através da inibição da ligação do ligando Nogo a NgRl, ou através da inibição da interacção do ligando do NgR com o NgR da superfície celular. A porção NgR da fusão liga-se ao ligando Nogo e a porção IgGl liga-se aos receptores FcyRI (macrófagos) e FcyIII (células NK e neutrófilos). A produção dos polipéptidos solúveis aqui divulgada incluindo os que são úteis neste invento, pode ser alcançada através de uma variedade de métodos conhecidos na arte. Por exemplo, os polipéptidos podem ser derivados de moléculas NgR transmembranares intactas através de proteólise utilizando 18 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT endopeptidases específicas em combinação com exopeptidases, degradação de Edman, ou ambas. A molécula NgR intacta pode, por sua vez, ser purificada a partir da sua fonte natural utilizando métodos convencionais. Alternativamente, o NgR intacto pode ser produzido através de técnicas de ADN recombinante utilizando ADNc, vectores de expressão e técnicas bem conhecidas para expressão génica recombinante.

De preferência, os polipéptidos solúveis aqui divulgados incluindo os que são úteis no presente invento, são produzidos directamente, eliminando assim a necessidade de um NgR inteiro como material de partida. Isto pode ser alcançado através de técnicas convencionais de síntese química ou através de técnicas de ADN recombinante bem conhecidas em que apenas as sequências de ADN que codificam os péptidos desejados são expressas em hospedeiros transformados. Por exemplo, um gene que codifica o polipéptido NgR solúvel desejado pode ser sintetizado através de meios químicos utilizando um sintetizador de oligonucleótidos. Tais oligonucleótidos são desenhados com base na sequência de aminoácidos do polipéptido NgR solúvel desejado. Sequências específicas de ADN codificando para o péptido desejado podem também ser derivadas da sequência de ADN inteira através de isolamento de fragmentos específicos por endonucleases de restrição ou através de síntese por PCR da região especificada a partir de ADNc.

Uma molécula de ácido nucleico da presente divulgação, p.ex., uma molécula de ácido nucleico possuindo a sequência nucleotídica de SEQ ID N0:1, 3 ou um complemento de uma destas sequências nucleotídicas, pode ser isolada utilizando técnicas padrão de biologia molecular e a informação da sequência aqui proporciona. Utilizando toda ou uma porção das sequências de ácido nucleico de SEQ ID NOs:l ou 3 como sonda de hibridação, podem ser isoladas sequências de ácido nucleico de NgR utilizando técnicas padrão de hibridação e clonagem (p.ex., tal como descrito em Sambrook et al., eds., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" 2a Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989; e Ausubel, et al., eds., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, NY, 1993). 19 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Um ácido nucleico desta divulgação, p.ex. um ácido nucleico do presente invento, pode ser amplificado utilizando ADNc, ARNm ou, alternativamente, ADN genómico, como molde e iniciadores oligonucleotídicos apropriados de acordo com técnicas padrão de amplificação por PCR. 0 ácido nucleico assim amplificado pode ser clonado num vector apropriado e caracterizado através de análise da sequência de ADN. Para além disso, oligonucleótidos correspondentes a sequências nucleotídicas de NgR podem ser preparados através de técnicas sintéticas padrão, p.ex., utilizando um sintetizador de ADN automático.

Tal como aqui se utiliza, os termos "modula" ou "modifica" significam um aumento ou diminuição na quantidade, qualidade ou efeito de uma determinada actividade ou proteína.

Tal como aqui se utiliza, o termo "oligonucleotido" refere-se a uma série de resíduos de nucleótidos ligados que tenha um número de bases suficiente para ser utilizado numa reacção em cadeia da polimerase (PCR). Esta curta sequência é baseada em (ou desenhada a partir de) uma sequência de ADNc ou genómico e é utilizada para amplificar, confirmar ou revelar a presença de um ADN ou ARN idêntico, semelhante ou complementar numa determinada célula ou tecido. Os oligonucleótidos compreendem porções de uma sequência de ADN possuindo pelo menos cerca de 10 nucleótidos e tantos como cerca de 50 nucleótidos, de preferência cerca de 15 a 30 nucleótidos. Estes são quimicamente sintetizados e podem ser utilizados como sondas.

Tal como aqui se utiliza, o termo "sonda" refere-se a sequências de ácido nucleico de comprimento variável, de preferência entre pelo menos cerca de 10 e tantos como cerca de 6000 nucleótidos, dependendo da utilização. Estas são utilizadas na detecção de sequências de ácido nucleico idênticas, semelhantes ou complementares. Sondas mais compridas são habitualmente obtidas a partir de uma fonte natural ou recombinante, são altamente específicas e muito mais lentas a hibridar que oligómeros. Estas podem ser de cadeia simples ou dupla e cuidadosamente desenhadas para terem especificidade em tecnologias de PCR, baseadas em membranas de hibridação ou semelhantes a ELISA. 20

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT Ο termo "prevenção" refere-se à diminuição da probabilidade de um organismo contrair ou desenvolver uma condição anormal. O termo "tratamento" refere-se a possuir um efeito terapêutico e pelo menos parcialmente aliviar ou abolir uma condição anormal no organismo. O termo "efeito terapêutico" refere-se aos factores de inibição ou activação que causam ou contribuem para a condição anormal. Um efeito terapêutico alivia até certo ponto um ou mais sintomas da condição anormal. Em referência ao tratamento de condições anormais, um efeito terapêutico pode referir-se a um ou mais dos seguintes: (a) um aumento na proliferação, no crescimento e/ou na diferenciação de células; (b) inibição (i.e., abrandamento ou paragem) de morte celular; (c) inibição de degenerescência; (d) alivio até certo ponto de um ou mais dos sintomas associados à condição anormal; e (e) aumento da função da população de células afectada. Compostos demonstrando eficácia contra condições anormais podem ser identificados tal como aqui descrito. O termo "condição anormal" refere-se a uma função nas células ou tecidos de um organismo que se desvia das suas funções normais nesse organismo. Uma condição anormal pode relacionar-se com proliferação celular, diferenciação celular, sinalização celular ou sobrevivência celular. Uma condição anormal pode também incluir obesidade, complicações diabéticas tais como degenerescência da retina e irregularidades na tomada e no metabolismo da glicose e na tomada e no metabolismo de ácidos gordos.

Condições proliferativas celulares anormais, por exemplo, incluem cancros tais como distúrbios fibróticos e mesangiais, angiogénese anormal e vasculogénese, cicatrização de feridas, psoriase, diabetes mellitus e inflamação.

Condições de diferenciação anormais incluem, por exemplo, distúrbios neurodegenerativos, velocidades lentas de cicatrização de feridas e velocidades lentas de cicatrização de enxertos de tecido. 21 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Condições de sinalização anormais incluem, por exemplo, distúrbios psiquiátricos envolvendo excesso de actividade de neurotransmissores.

Condições de sobrevivência celular anormais podem também referir-se a condições nas quais as vias de morte celular programada (apoptose) são activadas ou abolidas. Várias proteina-quinases estão associadas às vias de apoptose. Aberrações na função de qualquer uma das proteina-quinases podem conduzir a imortalidade celular ou morte celular prematura. 0 termo "administração" refere-se a um método de incorporação de um composto em células ou tecidos de um organismo. A condição anormal pode ser prevenida ou tratada quando as células ou tecidos do organismo existem dentro do organismo ou fora do organismo. As células existentes fora do organismo podem ser mantidas ou criadas em caixas de cultura celular. Para células ancoradas dentro do organismo, existem muitas técnicas na arte para administrar compostos, incluindo (mas não se limitando a) aplicações orais, parentéricas, dérmicas, de injecção e aerossol. Para células fora do organismo, existem múltiplas técnicas na arte para administrar os compostos, incluindo (mas não se limitando a) técnicas de micro-injecção celular, técnicas de transformação e técnicas de transportadores. A condição anormal pode também ser prevenida ou tratada através de administração de um composto a um grupo de células possuindo uma aberração numa via de transdução de sinal a um organismo. 0 efeito de administração de um composto na função do organismo pode ser monitorizada. 0 organismo é de preferência um ratinho, rato, coelho, cobaia ou cabra, de maior preferência um macaco e hominóide, e de maior preferência um humano.

Por "amplificação" entenda-se números crescentes de ADN ou ARN numa célula em comparação com células normais. "Amplificação" quando se refere a ARN pode ser a presença detectável de ARN em células, uma vez que nalgumas células normais não há expressão basal de ARN. Noutras células 22 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ normais, existe um nível basal de expressão, portanto nestes casos a amplificação é a detecção de pelo menos 1-2 vezes e de preferência mais, em comparação com o nível basal.

As sequências de aminoácidos são apresentadas na direcção amino para carboxilo, da esquerda para a direita. Os grupos amino e carboxilo não são apresentados na sequência. As sequências nucleotídicas são apresentadas apenas através da cadeia simples, na direcção 5' para 3', da esquerda para a direita. Os nucleótidos e aminoácidos são representados da maneira recomendada pela Comissão de Nomenclatura Bioquímica IUPAC-IUB ou (para os aminoácidos) através do código de três letras. Ácidos Nucleicos 0 ADN genómico desta divulgação compreende a região de codificação de proteína para um polipéptido desta divulgação e pretende-se também que inclua variantes alélicas desta. É amplamente entendido que, para muitos genes, o ADN genómico é transcrito em transcritos de ARN que sofrem um ou mais eventos de processamento em que os intrões (i.e., regiões não codificadoras) dos transcritos são removidos ou "cortados". Os transcritos de ARN que podem ser processados através de mecanismos alternativos e portanto ser sujeitos a remoção de diferentes sequências de ARN mas ainda codificar um polipéptido NgR, são referidos na arte como variantes de processamento que são englobadas por esta divulgação. As variantes de processamento compreendidas pela divulgação são portanto codificadas pelas mesmas sequências de ADN genómico originais mas surgem de transcritos de ARNm distintos. As variantes alélicas são formas modificadas de uma sequência génica de tipo selvagem, resultando a modificação de recombinação durante segregação cromossómica ou exposição a condições que dão origem a mutação genética. Variantes alélicas, como genes de tipo selvagem, são sequências de ocorrência natural (em oposição a variantes de ocorrência natural que surgem de manipulação in vitro) . A divulgação compreende também ADNc que é obtido através de transcrição reversa de um polinucleótido de ARN codificando NgR (convencionalmente seguido de síntese da segunda cadeia de 23 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ uma cadeia complementar para proporcionar um ADN de cadeia dupla).

As sequências de ADN preferidas codificando um polipéptido NgR humano são expostas em SEQ ID N0:1 e 13. Um ADN preferido desta divulgação compreende uma molécula de cadeia dupla compreendendo a molécula de codificação (i.e., a "cadeia de codificação") juntamente com a molécula complementar (a "cadeia não codificadora" ou "complemento") possuindo uma sequência inequivocamente dedutivel a partir da cadeia de codificação de acordo com as regras de emparelhamento de bases de Watson-Crick para ADN. São também preferidos outros polinucleótidos codificando polipéptidos NgR, tal como mostrado em SEQ ID NO: 3, que compreendem o homólogo de NgR de murideo, NgR3. São também preferidas sequências nucleotidicas que codifiquem pelo menos uma porção de um polipéptido NgR que tenha pelo menos uma função biológica de um NgR. Mais preferidas são sequências nucleotidicas que codifiquem uma porção de NgR que codifique pelo menos o NgR maduro sem o sinal GPI C-terminal hidrófobo. Também preferidas são sequências nucleotidicas que codifiquem a porção de NgR que codifique pelo menos a região de ligação ao ligando de NgR.

Esta divulgação engloba ainda homólogos de outras espécies, de preferência de mamífero, do ADN de NgR humano. Os homólogos de espécies, por vezes referidos como "ortólogos" partilham, em geral, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% de homologia com ADN humano desta divulgação. Geralmente, a percentagem de "homologia" de sequência em relação aos polinucleótidos da divulgação pode ser calculada como a percentagem de bases nucleotídicas na sequência candidata que são idênticas aos nucleótidos nas sequências NgR expostas em SEQ ID NOs:l, 3 ou 13, após alinhamento das sequências e introdução de intervalos, se necessário, para alcançar a percentagem máxima de identidade de sequência. 24 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ A informação da sequência polinucleotídica proporcionada por esta divulgação torna possível a expressão em larga escala do polipéptido codificado através de técnicas bem conhecidas e rotineiramente praticadas na arte. Os polinucleótidos desta divulgação permitem também a identificação e o isolamento de polinucleótidos codificando polipéptidos NgR aparentados, tais como variantes alélicas e homólogos de espécies, através de técnicas bem conhecidas incluindo hibridação Southern e/ou Northern, e reacção em cadeia da polimerase (PCR). Exemplos de polinucleótidos aparentados incluem sequências genómicas humanas e não humanas, incluindo variantes alélicas, bem como polinucleótidos codificando polipéptidos homólogos a NgR e polipéptidos estruturalmente aparentados partilhando uma ou mais propriedades biológicas, imunológicas e/ou físicas de NgR. Genes de espécies não humanas codificando proteínas homólogas a NgR podem também ser identificados através de análise Southern e/ou PCR e são úteis em modelos animais para distúrbios de NgR. 0 conhecimento da sequência de um ADN de NgR humano torna também possível através da utilização de hibridação Southern ou reacção em cadeia da polimerase (PCR) a identificação de sequências de ADN genómico codificando sequências reguladoras de controlo da expressão de NgR tais como promotores, operadores, estimuladores, repressores e semelhantes. Os polinucleótidos desta divulgação incluindo os do presente invento, são também úteis em ensaios de hibridação para detectar a capacidade das células para expressar NgR. Os polinucleótidos desta divulgação, incluindo os do presente invento, podem também proporcionar uma base para métodos de diagnóstico úteis para identificação de uma ou mais alterações genéticas num locus de NgR que estejam subjacentes a um estado ou estados de doença, cuja informação seja útil tanto para diagnóstico como para selecção de estratégias terapêuticas. A divulgação aqui de um polinucleótido inteiro codificando um polipéptido NgR torna facilmente disponível ao vulgar perito na arte qualquer fragmento possível do polipéptido inteiro. Esta divulgação proporciona, portanto, fragmentos de polinucleótidos codificando NgR compreendendo pelo menos 6, e de preferência pelo menos 14, 16, 18, 20, 25, 50 ou 75 nucleótidos consecutivos de um polinucleótido codificando NgR. De preferência, os fragmentos de polinucleótidos desta divulgação compreendem sequências únicas 25 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT da sequência polinucleotídica codificando NgR, e portanto, hibridam apenas sob condições altamente rigorosas ou moderadamente rigorosas (i.e., "especificamente") com polinucleótidos codificando NgR (ou fragmentos deste). Os fragmentos polinucleotídicos das sequências genómicas desta divulgação compreendem não só sequências únicas à região de codificação, como incluem também fragmentos da sequência inteira derivados de intrões, regiões reguladoras e/ou outras sequências não traduzidas. Sequências únicas aos polipéptidos desta divulgação são reconhecíveis através de comparação de sequências com outros polinucleótidos conhecidos, e podem ser identificados através da utilização de programas de alinhamento rotineiramente utilizados na arte, p.ex., os tornados disponíveis em bases de dados de sequências públicas. Tais sequências são também reconhecíveis a partir de análises de hibridação Southern para determinar o número de fragmentos de ADN genómico com os quais hibridará um polinucleótido. Os polinucleótidos desta divulgação, incluindo os do presente invento, podem ser marcados de um modo que permita a sua detecção, incluindo marcação radioactiva, fluorescente e enzimática.

Os fragmentos de polinucleótidos são particularmente úteis como sondas para detecção de polinucleótidos NgR inteiros ou fragmentados. Um ou mais polinucleótidos podem ser incluídos em estojos que são utilizados para detectar a presença de um polinucleótido codificando NgR ou utilizados para detectar variações numa sequência polinucleotídica codificando NgR.

Esta divulgação engloba também ADN codificando polipéptidos NgR que hibridam sob condições moderadamente rigorosas ou altamente rigorosas com a cadeia não codificadora, ou complemento, do polipéptido em qualquer uma de SEQ ID NO:1 ou 3.

As condições rigorosas são conhecidas dos peritos na arte e podem ser verificadas em "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, N.Y (1998), 6.3.1-6.3.6. De preferência, as condições são tais que sequências pelo menos cerca de 65%, 70%, 75%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99% homólogas uma à outra permanecem tipicamente hibridadas uma com a outra. 26

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Um exemplo não limitante de condições de hibridação rigorosas é a hibridação num tampão de elevada salinidade compreendendo SSC 6 x, Tris-HCl 50 mM (pH 7,5), EDTA 1 mM, PVP a 0,02%, Ficoll a 0,02%, BSA a 0,02% e 500 mg/ml de ADN de esperma de salmão desnaturado a 65°C. Esta hibridação é seguida de uma ou mais lavagens em SSC 0,2x, BSA a 0,01% a 50°C. Uma molécula de ácido nucleico isolada desta divulgação que hibride sob condições rigorosas com a sequência de SEQ ID NO:l ou 3 corresponde a uma molécula de ácido nucleico de ocorrência natural. Tal como aqui se utiliza, uma molécula de ácido nucleico de "ocorrência natural" refere-se a uma molécula de ARN ou ADN possuindo uma sequência nucleotídica que ocorre na natureza (p.ex., codifica uma proteína natural). Tal como aqui se utiliza, "condições de hibridação rigorosas" significa: 42°C numa solução de hibridação compreendendo formamida a 50%, SDS a 1%, NaCl 1 M, sulfato de dextrano a 10% (p/vol), e lavagem duas vezes durante 30 minutos a 60°C numa solução de lavagem compreendendo SSC 0,lx e SDS a 1%.

Vectores

Outro aspecto da presente divulgação é dirigido a vectores ou vectores de expressão recombinante, compreendendo qualquer uma das moléculas de ácido nucleico descritas acima, p.ex. vectores compreendendo os polinucleótidos do presente invento. Os vectores são aqui utilizados para amplificar ADN ou ARN codificando NgR e/ou para expressar ADN que codifique NgR. Tal como aqui se utiliza, o termo "vector" refere-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de transportar outro ácido nucleico ao qual foi ligada. Um tipo de vector é um "plasmídeo", que se refere a uma volta de ADN de cadeia dupla circular na qual podem ser ligados segmentos de ADN adicionais. Outro tipo de vector é um vector virai, em que segmentos de ADN adicionais podem ser ligados no genoma virai. Certos vectores são capazes de replicação autónoma numa célula hospedeira na qual são introduzidos (p.ex., vectores bacterianos possuindo uma origem de replicação bacteriana e vectores de mamífero epissómicos). Outros vectores (p.ex., vectores de mamífero não epissómicos) são integrados no genoma de uma célula hospedeira após introdução na célula hospedeira, e são deste modo replicados juntamente com o genoma do hospedeiro. Para além disso, certos vectores são capazes de dirigir a expressão de genes aos quais estão operativamente 27 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ligados. Tais vectores são aqui referidos como "vectores de expressão". Em geral, os vectores de expressão de utilidade em técnicas de ADN recombinante estão frequentemente na forma de plasmideos. No presente fasciculo, "plasmídeo" e "vector" podem ser utilizados indiferentemente uma vez que o plasmídeo é a forma de vector mais vulgarmente utilizada. No entanto, pretende-se que esta divulgação e o presente invento incluam tais outras formas de vectores de expressão, tais como vectores virais (p.ex., retrovirus deficientes na replicação, adenovirus e virus adeno-associados), que têm funções equivalentes. A expressão de proteínas em procariotas é muito frequentemente efectuada em E. coli com vectores contendo promotores constitutivos ou indutiveis dirigindo a expressão de proteínas de fusão ou sem serem de fusão. Os vectores de fusão adicionam vários aminoácidos a uma proteína aí codificada, habitualmente ao terminal amino da proteína recombinante. Tais vectores de fusão têm tipicamente três objectivos: (1) aumentar a expressão da proteína recombinante; (2) aumentar a solubilidade da proteína recombinante; e (3) ajudar na purificação da proteína recombinante actuando como um ligando em purificação por afinidade. Frequentemente, em vectores de expressão de fusão, é introduzido um local de clivagem proteolítica na junção da porção de fusão e da proteína recombinante para permitir a separação da proteína recombinante da porção de fusão subsequente à purificação da proteína de fusão. Tais enzimas e suas sequências de reconhecimento cognatas incluem Factor Xa, trombina e enteroquinase. Vectores de expressão de fusão típicos incluem pGEX (Pharmacia Biotech Inc; Smith e Johnson, Gene 67: 31-40, 1988), pMAL (New England Biolabs, Beverly, Mass.) e pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, N.J.) que fundem glutationa-S-transferase (GST), proteína de ligação a maltose E, ou proteína A, respectivamente, com a proteína recombinante alvo.

Exemplos de vectores de expressão de E. coli sem serem de fusão indutiveis adequados incluem pTrc (Amrann et al., Gene 69: 301-315, 1988) e pETlld (Studier et al., "Gene Expression

Technology: Methods in Enzymology" 185, Academic Press, San Diego, CA. (1990) 60-89). 28 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Uma estratégia para maximizar a expressão de proteínas recombinantes em E. coli é expressar a proteína em bactérias hospedeiras com uma capacidade diminuída para clivar proteoliticamente a proteína recombinante. Ver, Gottesman, "Gene Expression Technology: Methods in Enzymology" 185, Academic Press, San Diego, CA. (1990) 119-128. Outra estratégia é alterar a sequência de ácido nucleico do ácido nucleico a inserir num vector de expressão para que os codões individuais para cada aminoácido sejam utilizados preferencialmente em E. coli (Wada et al., Nucleic Acids Res. 20: 2111-2118, 1992). Tal alteração das sequências de ácido nucleico desta divulgação pode ser realizada através de técnicas padrão de síntese de ADN.

Noutros casos, o vector de expressão de NgR é um vector de expressão de levedura. Exemplos de vectores para expressão em levedura S. cerevisiae incluem pYepSecl (Baldari, et al., EMBO J. 6: 229-234, 1987), pMFa (Kurjan e Herskowitz, Cell 30: 933-943, 1982), pJRY88 (Schultz et al. , Gene 54: 113-123, 1987), pYES2 (Invitrogen Corporation, San Diego, CA), e picZ (InVitrogen Corp, San Diego, CA).

Alternativamente, NgR pode ser expresso em células de insecto utilizando vectores de expressão de baculovírus. Vectores de baculovírus disponíveis para expressão de proteínas em células de insecto em cultura (p.ex., células SF9) incluem as séries pAc (Smith et al., Mol. Cell. Biol. 3: 2156-2165, 1983) e a série pVL (Lucklow e Summers, Virology 170: 31-39, 1989) .

Ainda noutros casos, um ácido nucleico desta divulgação, p.ex. um ácido nucleico do presente invento, é expresso em células de mamífero utilizando um vector de expressão de mamífero. Exemplos de vectores de expressão de mamífero incluem pCDM8 (Seed, Nature 329: 840, 1987) e pMT2PC (Kaufman et al., EMBO J. 6: 187-195, 1987). Quando utilizado em células de mamífero, as funções de controlo do vector de expressão são frequentemente proporcionadas por elementos reguladores virais. Por exemplo, os promotores vulgarmente utilizados são derivados de polioma, adenovírus 2, citomegalovírus e Vírus Símio 40. Para outros sistemas de expressão adequados para células procarióticas e eucarióticas, ver, p.ex., Capítulos 16 29

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT e 17 de Sambrook et al., (Eds.) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2a Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989.

Noutros casos, o vector de expressão de mamífero recombinante é capaz de dirigir a expressão do ácido nucleico preferencialmente num determinado tipo celular (p.ex., são utilizados elementos reguladores específicos de tecido para expressar o ácido nucleico). Elementos reguladores específicos de tecido são conhecidos na arte. Exemplos não limitantes de promotores específicos de tecido adequados incluem o promotor da albumina (específico do fígado; Pinkert et al. Genes Dev. 1: 268-277, 1987), promotores específicos linfóides (Calame e

Eaton, Adv. Immunol. 43: 235-275, 1988), em particular promotores de receptores de células T (Winoto e Baltimore, EMBO J. 8: 729-733, 1989) e imunoglobulinas (Banerji et al.,

Cell 33: 729-740, 1983; Queen e Baltimore, Cell 33: 741-748, 1983), promotores específicos de neurónios (p.ex., o promotor do neurofilamento; Byrne e Ruddle, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86: 5473-5477, 1989), promotores específicos do pâncreas (Edlund et ai., Science 230: 912-916, 1985), e promotores específicos da glândula mamária (p.ex., promotor do soro do leite; Pat. U.S. N.° 4873316 e Publicação de Pedido Europeu N.° 264166). Promotores regulados no desenvolvimento estão também englobados, p.ex., os promotores hox de murídeo (Kessel e Gruss, Science 249: 374-379, 1990) e o promotor da α-fetoproteína (Campes e Tilghman, Genes Dev. 3: 537-546, 1989) . A divulgação proporciona ainda um vector de expressão recombinante compreendendo uma molécula de ADN desta divulgação clonada no vector de expressão numa orientação anti-sentido. Isto é, a molécula de ADN é operativamente ligada a uma sequência reguladora de um modo que permita a expressão (através de transcrição da molécula de ADN) de uma molécula de ARN que seja ARNm anti-sentido de NgR. Podem ser escolhidas sequências reguladoras operativamente ligadas a um ácido nucleico clonado na orientação anti-sentido que dirijam a expressão contínua da molécula de ARN anti-sentido numa variedade de tipos celulares, por exemplo podem ser escolhidos promotores e/ou estimuladores virais ou sequências reguladoras que dirijam a expressão directa constitutiva, específica de um 30

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tecido ou específica de um tipo celular do ARN anti-sentido. O vector de expressão anti-sentido pode estar na forma de um plasmídeo recombinante, fagemídeo ou vírus atenuado no qual ácidos nucleicos anti-sentido sejam produzidos sob o controlo de uma região reguladora de elevada eficiência, cuja actividade possa ser determinada pelo tipo celular no qual o vector é introduzido. Para uma discussão da regulação da expressão génica utilizando genes anti-sentido ver Weintraub et al., "Antisense RNA as a molecular tool for genetic analysis", "REVIEWS-TRENDS IN GENETICS", Vol. 1(1) 1986.

Vectores preferidos incluem, mas não se limitam a, plasmídeos, fagos, cosmídeos, epissomas, partículas virais ou vírus e fragmentos de ADN integráveis (i.e., fragmentos integráveis no genoma hospedeiro através de recombinação homóloga). Partículas virais incluem, mas não se limitam a, adenovírus, baculovírus, parvovírus, herpesvírus, poxvírus, vírus adeno-associados, vírus de Semliki Forest, vírus vacínia e retrovírus. Vectores de expressão preferidos incluem, mas não se limitam a, pcDNA3 (Invitrogen) e pSVL (Pharmacia Biotech). Outros vectores de expressão incluem, mas não se limitam a, vectores pSPORT™, vectores pGEM™ (Promega), vectores pPROEX™ (LTI, Bethesda, MD) , vectores Bluescript™ (Stratagene), vectores pQE™ (Qiagen), pSE420™ (Invitrogen) e pYES2™ (Invitrogen).

Vectores de expressão preferidos são construções de ADN replicáveis nas quais uma sequência de ADN codificando NgR está operativamente ligada ou unida a sequências de controlo adequadas capazes de efectuar a expressão do NgR num hospedeiro adequado. As regiões de ADN estão operativamente ligadas ou unidas quando estão funcionalmente relacionadas umas com as outras. Por exemplo, um promotor está operativamente ligado ou unido a uma sequência de codificação se controlar a transcrição da sequência. Os vectores de amplificação não requerem domínios de controlo da expressão, mas em vez disso necessitam apenas da capacidade de se replicarem num hospedeiro, habitualmente conferida por uma origem de replicação e um gene de selecção para facilitar o reconhecimento de transformantes. A necessidade de sequências de controlo no vector de expressão variará dependendo do hospedeiro seleccionado e do método de transformação 31 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ escolhido. Geralmente, as sequências de controlo incluem, mas não se limitam a, um promotor da transcrição, estimuladores e uma sequência operadora opcional para controlar a transcrição, sinais de poliadenilação, uma sequência codificando uma ligação adequada ao ribossoma do ARNm e sequências que controlam a terminação da transcrição e da tradução. Tais sequências reguladoras são descritas, por exemplo, em Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990). Sequências reguladoras incluem as que dirigem a expressão constitutiva de uma sequência nucleotidica em muito tipos de células hospedeiras e as que dirigem a expressão da sequência nucleotidica apenas em certas células hospedeiras (p.ex., sequências reguladoras especificas de tecido). Será apreciado pelos peritos na arte que o desenho do vector de expressão pode depender de factores tais como a escolha da célula hospedeira a transformar, o nível de expressão da proteína desejada, etc. Os vectores de expressão desta divulgação podem ser introduzidos em células hospedeiras para produzir deste modo proteínas ou péptidos, incluindo proteínas ou péptidos de fusão, codificados por ácidos nucleicos tal como aqui descrito (p.ex., proteínas NgR, formas mutantes de NgR, proteínas de fusão, etc.).

Os vectores preferidos contêm de preferência um promotor que é reconhecido pelo organismo hospedeiro. As sequências promotoras podem ser procarióticas, eucarióticas ou virais. Exemplos de sequências procarióticas adequadas incluem os promotores PR e PL do bacteriófago lambda ("The Bacteriophage Lambda, Hershey, A.D. (Ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1973), que é aqui incorporado por referência na sua totalidade; "Lambda II", Hendrix, R.W. (Ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1980), que é aqui incorporado por referência na sua totalidade); os promotores trp, recA, de choque térmico e lacZ de E. coli e o promotor inicial de SV40 (Benoist et al., Nature 290: 304-310, 1981). Promotores adicionais incluem, mas não se limitam aos do vírus do tumor mamário de ratinho, da repetição terminal longa do vírus da imunodeficiência humana, do vírus de maloney, promotor inicial imediato de citomegalovírus, do vírus de Epstein-Barr, do vírus do sarcoma de Rous, da actina humana, da miosina humana, da hemoglobina 32

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT humana, da creatina muscular humana e da metalotioneína humana.

Sequências reguladoras adicionais podem também ser incluídas nos vectores preferidos. Exemplos preferidos de sequências reguladoras adequadas são representados pela sequência de Shine-Dalgarno do gene da replicase do fago MS-2 e do gene cll do bacteriófago lambda. A sequência de Shine-Dalgarno pode ser directamente seguida por ADN codificando NgR e resultar na expressão da proteína NgR madura.

Para além disso, vectores de expressão adequados podem incluir um marcador apropriado que permite a pesquisa das células hospedeiras transformadas. A transformação do hospedeiro seleccionado é efectuada utilizando qualquer uma das várias técnicas bem conhecidas dos peritos na arte e descritas em Sambrook et al., supra.

Uma origem de replicação pode também ser proporcionada através da construção do vector para incluir uma origem exógena ou pode ser proporcionada através do mecanismo de replicação cromossómica da célula hospedeira. Se o vector for integrado no cromossoma da célula hospedeira, o último pode ser suficiente. Alternativamente, em vez de utilizar vectores que contêm origens virais de replicação, um perito na arte pode transformar células de mamífero através do método de co-transformação com um marcador seleccionável e ADN de NgR. Um exemplo de um marcador adequado é di-hidrofolato-redutase (DHFR) ou timidina-quinase (ver, Patente U.S. N.° 4399216).

As sequências nucleotídicas codificando NgR podem ser recombinadas com o ADN vector de acordo com técnicas convencionais, incluindo terminais tornados cegos ou tornados desfasados para ligação, digestão com enzimas de restrição para proporcionar terminais apropriados, preenchimento de extremidades coesivas conforme apropriado, tratamento com fosfatase alcalina para evitar união indesejável e ligação com ligases apropriadas. Técnicas para tal manipulação são divulgadas por Sambrook et al., supra e são bem conhecidas na arte. Métodos para construção de vectores de expressão de mamífero são divulgados, por exemplo, em Okayama et al., Mol. Cell. Biol. 3: 280, 1983, Cosman et al. Mol. Immunol. 23: 935, 33

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 1986, Cosman et al., Nature 312: 768, 1984, EP-A-0367566 e WO 91/18982. Células Hospedeiras e Células Hospedeiras Transformadas

De acordo com outro aspecto desta divulgação e do presente invento, são proporcionadas células hospedeiras, incluindo células procarióticas e eucarióticas, compreendendo um polinucleótido ou um vector desta divulgação, p.ex. um polinucleótido do presente invento ou um vector do presente invento de um modo que permita a expressão do polipéptido NgR codificado. De preferência, a célula produz pouco ou nenhum polipéptido NgR endógeno. Os polinucleótidos desta divulgação, incluindo os do presente invento, podem ser introduzidos na célula hospedeira como parte de um plasmideo circular, ou como ADN linear compreendendo uma região de codificação de uma proteína isolada ou um vector virai. Métodos para introdução de ADN na célula hospedeira que são bem conhecidos e rotineiramente praticados na arte incluem transformação, transfecção, electroporação, injecção nuclear ou fusão com transportadores tais como lipossomas, micelas, células fantasma e protoplastos. Sistemas de expressão desta divulgação, incluindo os do presente invento, incluem sistemas celulares bacterianos, de levedura, fúngicos, vegetais, de insecto, de invertebrado, de vertebrado e de mamífero.

As células hospedeiras desta divulgação, incluindo as do presente invento, são uma fonte valiosa de imunogénio para o desenvolvimento de anticorpos especificamente imunorreactivos com NgR. As células hospedeiras desta divulgação, incluindo as do presente invento, são também úteis em métodos para a produção em larga escala de polipéptidos NgR em que as células são criadas num meio de cultura adequado e os produtos de polipéptido desejados são isolados a partir das células ou do meio em que as células são criadas, através de métodos de purificação conhecidos na arte, p.ex., métodos cromatográficos convencionais incluindo cromatografia de imunoafinidade, cromatografia de afinidade de receptores, cromatografia de interacção hidrófoba, cromatografia de afinidade de lectina, filtração por exclusão de tamanho, cromatografia de permuta catiónica ou aniónica, cromatografia líquida de alta pressão (HPLC), HPLC de fase inversa e semelhantes. Ainda outros métodos de purificação incluem os métodos em que a proteína 34 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT desejada é expressa e purificada como uma proteína de fusão possuindo uma porção etiqueta, marcadora ou quelante específica que seja reconhecida por um parceiro ou agente de ligação específica. A proteína purificada pode ser clivada para produzir a proteína desejada ou pode ser deixada como uma proteína de fusão intacta. A clivagem da componente de fusão pode produzir uma forma da proteína desejada possuindo resíduos de aminoácidos adicionais em resultado do processo de clivagem. 0 conhecimento das sequências de ADN de NgR permite a modificação de células para permitir ou aumentar a expressão de NgR endógena. As células podem ser modificadas (p.ex., através de recombinação homóloga) para proporcionar maior expressão através da substituição, no todo ou em parte, do promotor de NgR de ocorrência natural com todo ou parte de um promotor heterólogo para que as células expressem NgR a níveis mais elevados. 0 promotor heterólogo é inserido de um modo tal que fica operativamente ligado a sequências endógenas codificando NgR. (Ver, por exemplo, Publicação Internacional PCT N.° WO 94/12650, Publicação Internacional PCT N.° WO 92/20808, e Publicação Internacional PCT N.° WO 91/09955). Está também contemplado que, para além do ADN promotor heterólogo, ADN marcador amplificável (p.ex., ada, dhfr e o gene CAD multifuncional que codifica carbamoílfosfato-sintetase, aspartato-transcarbamilase e di-hidro-orotase) e/ou ADN de intrões podem ser inseridos juntamente com o ADN promotor heterólogo. Se ligados à sequência de codificação de NgR, a amplificação do ADN marcador através de métodos padrão de selecção resulta em co-amplificação das sequências de codificação de NgR nas células. A informação da sequência de ADN proporcionada pela presente divulgação torna também possível o desenvolvimento (p.ex., através de recombinação homóloga ou estratégias "knock-out"; ver Capecchi, Science 244: 1288-1292, 1989) de animais que não conseguem expressar NgR funcional ou que expressam uma variante de NgR. Tais animais (especialmente pequenos animais de laboratório tais como ratos, coelhos e ratinhos) são úteis como modelos para estudo das actividades in vivo de NgR e moduladores de NgR. 35 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ Células hospedeiras adequadas para expressão dos polipéptidos desta divulgação, incluindo os polipéptidos do presente invento, incluem, mas não se limitam a, procariotas, levedura e eucariotas. Se for empregue um vector de expressão procariótico, então a célula hospedeira apropriada será qualquer célula procariótica capaz de expressar as sequências clonadas. Células procarióticas adequadas incluem, mas não se limitam a, bactérias do género Escherichia, Bacillus, Salmonella, Pseudomonas, Streptomyces e Staphylococcus.

Se for empregue um vector de expressão eucariótico, então a célula hospedeira apropriada será qualquer célula eucariótica capaz de expressar a sequência clonada. De preferência, células eucarióticas são células de eucariotas superiores. Células eucarióticas adequadas incluem, mas não se limitam a, células de cultura de tecidos de mamífero não humano e células de cultura de tecidos humanos. As células hospedeiras preferidas incluem, mas não se limitam a, células de insecto, células HeLa, células de ovário de hamster chinês (CHO), células de rim de macaco verde africano (células COS), células 293 humanas, e fibroblastos 3T3 de murídeo. A propagação de tais células em cultura celular tornou-se um procedimento de rotina (ver, "Tissue Culture", Academic Press, Kruse e Patterson, Eds. (1973)).

Adicionalmente, pode ser empregue uma célula de levedura como célula hospedeira. As células de levedura preferidas incluem, mas não se limitam aos géneros Saccharomyces, Pichia e Kluveromyces. Os hospedeiros de levedura preferidos são S. cerevisiae e P. pastoris. Os vectores de levedura preferidos podem conter uma sequência de origem de replicação de um plasmídeo de levedura 21, uma sequência de replicação autónoma (ARS), uma região promotora, sequências para poliadenilação, sequências para terminação da transcrição e um gene de um marcador seleccionável. Vectores vaivém para replicação tanto em levedura como em E. coli são também incluídos aqui.

Alternativamente, podem ser utilizadas células de insecto como células hospedeiras. Num caso preferido, os polipéptidos desta divulgação, incluindo os do presente invento, são expressos utilizando um sistema de expressão de baculovírus (ver, Luckow et al., Bio/Technology 6 : 47, 1988; "Baculovírus 36 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Expression Vectors: A Laboratory Manual", 0'Rielly et al. (Eds.), W.H. Freeman and Company, New York, 1992; e Patente U.S. N.° 4879236). Adicionalmente, o sistema de expressão de baculovirus completo MAXBAC™ (Invitrogen) pode, por exemplo, ser utilizado para produção em células de insecto. Células hospedeiras adequadas são melhor discutidas em Goeddel, "Gene Expression Technology: Methods In Enzymology" 185, Academic Press, San Diego, CA (1990). Alternativamente, o vector de expressão recombinante pode ser transcrito e traduzido in vitro, por exemplo utilizando sequências reguladoras promotoras T7 e polimerase T7. O ADN vector pode ser introduzido em células procarióticas ou eucarióticas através de técnicas convencionais de transformação ou transfecção. Tal como aqui se utilizam, pretende-se que os termos "transformação" e "transfecção" refiram uma variedade de técnicas reconhecidas na arte para introdução do ácido nucleico estranho (p.ex., ADN) numa célula hospedeira, incluindo co-precipitação em fosfato de cálcio ou cloreto de cálcio, transfecção mediada por DEAE-dextrano, lipofecção ou electroporação. Métodos adequados para transformação ou transfecção de células hospedeiras podem ser encontrados em Sambrook, et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2a ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989), e outros manuais de laboratório.

Para transfecção estável de células de mamífero, sabe-se que, dependendo do vector de expressão e da técnica de transfecção utilizados, apenas uma pequena fracção de células pode integrar o ADN estranho no seu genoma. Para identificar e seleccionar estes integrantes, um gene que codifica um marcador seleccionável (p.ex., resistência a antibióticos) é geralmente introduzido nas células hospedeiras juntamente com o gene de interesse. Vários marcadores seleccionáveis incluem os que conferem resistência a fármacos, tais como G418, higromicina, di-hidrofolato-redutase (DHFR) e metotrexato. Ácido nucleico codificando um marcador seleccionável pode ser introduzido numa célula hospedeira no mesmo vector que o que codifica NgR ou pode ser introduzido num vector separado. As células estavelmente transfectadas com o ácido nucleico 37

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT introduzido podem ser identificadas através de selecção com fármacos (p.ex., as células que incorporaram o gene do marcador seleccionável sobreviverão, enquanto as outras células morrem).

Num caso preferido, os polipéptidos desta divulgação, incluindo formas de NgR2 e NgR3, formas solúveis de NgR, polipéptidos NgR quiméricos, fusões NgR/Ig e fragmentos e variações de cada um dos de cima são expressos em células de ovário de hamster chinês (CHO).

Para introduzir o fragmento de ADN codificando para a proteína ou o polipéptido NgR numa célula CHO para expressar a proteína ou o polipéptido NgR recombinante, é necessário construir o vector de expressão.

Os vectores para expressão em CHO incluem, mas não se limitam a, pAl-11, pXTl, pRc/CMV, pRc/RSV e pcDNAINeo. 0 promotor não está especificamente limitado desde que promova eficazmente a expressão em células CHO. Exemplos de promotores adequados são: SRa, SV40, LTR, CMV e HSV-TK. Destes, são preferidos os promotores CMV e Sra.

Para além dos promotores acima mencionados, os vectores de expressão podem conter estimuladores, sinais de processamento, sinais de poliadenilação, marcadores seleccionáveis e uma origem de replicação de SV40. Marcadores seleccionáveis adequados incluem, mas não se limitam ao gene da di-hidrofolato-redutase (DHFR) que proporciona resistência a metotrexato (MTX), o gene de resistência a ampicilina e o gene de resistência a neomicina.

Exemplos de vectores de expressão contendo cada um o ADN codificando para NgR, porções, fragmentos e construções solúveis deste, incluem o vector (tal como um descrito acima), no qual o promotor está operativamente ligado (de preferência a montante) à sequência nucleotídica codificando a construção de NgR desejada; um sinal de poliadenilação a jusante da sequência nucleotídica codificando a construção de NgR; e, de preferência, o vector inclui um gene de DHFR operável. De preferência, o gene de resistência à ampicilina está também operativamente contido no vector. 38 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ A célula CHO sem ο gene DHFR (Urlaub, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 77: 4216-4220, 1980) e CHO-K1 (Proc.

Natl. Acad. Sei. USA 60: 1275, 1968) são adequadas para utilização.

Os vectores de expressão de NgR preparados tal como acima são introduzidos em células CHO através de qualquer método conhecido, incluindo, mas não se limitando ao método de fosfato de cálcio (Graham e van der Eb, Virol. 52: 456-467, 1973) e electroporação (Nuemann et al., EMBO J. 1: 841-845, 1982) .

Os transformantes possuindo os vectores de expressão são seleccionados com base nos marcadores seleccionáveis acima mencionados. A selecção clonal repetida dos transformantes utilizando os marcadores seleccionáveis permite a selecção de linhas celulares estáveis possuindo elevada expressão das construções de NgR. Concentrações crescentes de MTX no meio de selecção permitem amplificação génica e maior expressão da proteína desejada. A célula CHO contendo o NgR recombinante pode ser produzida através de cultura das células CHO contendo os vectores de expressão de NgR expressando constitutivamente as construções de NgR.

Os meios utilizados na cultura de células CHO incluem meio DMEM suplementado com cerca de 0,5 a 20% de soro fetal de vitelo, meio DMEM e meio RPMI 1640. O pH do meio é de preferência de cerca de 6 a 8. A cultura é de preferência a cerca de 30 a 40°C durante cerca de 15 a 72 horas com arejamento.

Uma célula hospedeira desta divulgação, p.ex., uma célula hospedeira do presente invento, tal como uma célula hospedeira procariótica ou eucariótica em cultura, pode ser utilizada para produzir (i.e., expressar) a proteína NgR. Assim, a divulgação proporciona ainda métodos para a produção da proteína NgR utilizando as células hospedeiras desta divulgação. Num caso, o método compreende a cultura da célula hospedeira desta divulgação (na qual foi introduzido um vector de expressão recombinante codificando NgR), p.ex. uma célula hospedeira do presente invento, num meio adequado para que 39 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ seja produzida a proteína NgR. Noutro caso, o método compreende ainda o isolamento de NgR a partir do meio ou da célula hospedeira.

Em situações onde o polipéptido NgR se verificará principalmente intracelularmente, o material intracelular (incluindo corpos de inclusão para bactérias Gram-negativas) pode ser extraído da célula hospedeira utilizando qualquer técnica padrão conhecida de um vulgar perito na arte. Tais métodos englobarão, por exemplo e não como limitação, a lise das células hospedeiras para libertar os conteúdos do periplasma/citoplasma através de prensa francesa, homogeneização e/ou ultra-sons seguido de centrifugação.

Se o polipéptido NgR tiver formado corpos de inclusão no citosol, tais corpos de inclusão podem ligar-se frequentemente às membranas celulares interna e/ou externa. Após centrifugação, os corpos de inclusão encontrar-se-ão principalmente no material sedimentado. 0 material sedimentado pode então ser tratado a pH extremos ou com um ou mais agentes caotrópicos tais como um detergente, guanidina, derivados de guanidina, ureia ou derivados de ureia na presença de um agente redutor tal como ditiotreitol a pH alcalino ou tris-carboxietilfosfina a pH ácido para libertar, quebrar e solubilizar os corpos de inclusão. 0 polipéptido NgR uma vez solubilizado pode ser analisado utilizando em electroforese em gel, imunoprecipitação ou semelhantes. Vários métodos de isolamento do polipéptido NgR serão aparentes a um vulgar perito na arte, por exemplo, o isolamento pode ser alcançado utilizando métodos padrão tais como os expostos abaixo e em Marston et al., Meth. Enzymol. 182: 264-275, 1990.

Se o polipéptido NgR isolado não for biologicamente activo após o procedimento de isolamento empregue, vários métodos para "redobragem" ou conversão do polipéptido na sua estrutura terciária e geração de ligações dissulfureto, podem ser utilizados para restaurar a actividade biológica. Os métodos conhecidos de um vulgar perito na arte incluem o ajustamento do pH do polipéptido solubilizado para um pH habitualmente acima de 7 e na presença de uma concentração particular de um caotropo. A selecção do caotropo é muito semelhante às escolhas utilizadas para solubilização de corpos 40 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ de inclusão mas habitualmente a uma concentração inferior e não é necessariamente o mesmo caotropo que o utilizado para a solubilização. Pode ser necessário empregar um agente redutor ou o agente redutor mais a sua forma oxidada numa proporção especifica, para gerar um determinado potencial redox permitindo que ocorra baralhamento de dissulfuretos na formação da ponte ou pontes de cisteina da proteína. Alguns dos pares redox vulgarmente utilizados incluem cisteína/cistamina, glutationa (GSH)/ditiobis GSH, cloreto de cobre, ditiotreitol (DTT)/ditiano DTT, 2-mercaptoetanol (bME)/ditio-b(ME). Para aumentar a eficiência da redobragem, pode ser necessário empregar um co-solvente, tal como glicerol, polietilenoglicol de vários pesos moleculares e arginina.

Animais Transgénicos

As células hospedeiras desta divulgação, incluindo as do presente invento, podem também ser utilizadas para produzir animais transgénicos não humanos. Por exemplo, num caso, uma célula hospedeira desta divulgação é um oócito fertilizado ou uma célula estaminal embrionária na qual foram introduzidas sequências de codificação de NgR. Tais células hospedeiras podem então ser utilizadas para criar animais transgénicos não humanos nos quais foram introduzidas no seu genoma sequências exógenas de NgR ou animais recombinantes homólogos nos quais foram alteradas sequências endógenas de NgR. Tais animais são úteis para estudar a função e/ou actividade de NgR e para identificação e/ou avaliação de moduladores da actividade de NgR. Tal como aqui se utiliza, um "animal transgénico" é um animal não humano, de preferência um mamífero, de maior preferência um roedor tal como um rato ou ratinho, no qual uma ou mais das células do animal incluem um transgene. Outros exemplos de animais transgénicos incluem primatas não humanos, ovelhas, cães, vacas, cabras, galinhas, anfíbios, etc. Um transgene é ADN exógeno que é integrado no genoma de uma célula a partir da qual um animal transgénico se desenvolve e que permanece no genoma do animal maduro, dirigindo deste modo a expressão de um produto génico codificado num ou mais tipos celulares ou tecidos do animal transgénico. Tal como aqui se utiliza, um "animal recombinante homólogo" é um animal não humano, de preferência um mamífero, de maior preferência um ratinho, no qual um gene de NgR endógeno foi alterado através 41

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT de recombinação homóloga entre o gene endógeno e uma molécula de ADN exógena introduzida numa célula do animal, p.ex., uma célula embrionária do animal, antes do desenvolvimento do animal.

Um animal transgénico desta divulgação pode ser criado através da introdução de ácido nucleico codificando NgR no pró-núcleo masculino de um oócito fertilizado, p.ex., através de micro-injecção, infecção retroviral e permitindo que o oócito se desenvolva numa fêmea adoptiva pseudográvida. A sequência de ADN de NgR humano de SEQ ID NOs: 1 ou 3 pode ser introduzida como um transgene no genoma de um animal não humano. Alternativamente, um homólogo não humano do gene humano de NgR, tal como um gene de ratinho de NgR, pode ser isolado com base em hibridação com o ADNc do NgR humano (descrito mais acima) e utilizado como transgene. Sequências intrónicas e sinais de poliadenilação podem também ser incluídos no transgene para aumentar a eficiência da expressão do transgene. Uma ou mais sequências reguladoras específicas de tecido podem ser operativamente ligadas ao transgene de NgR para dirigir a expressão da proteína NgR para determinadas células. Os métodos para criação de animais transgénicos através de manipulação embrionária e micro-injecção, particularmente animais tais como ratinhos, tornaram-se convencionais na arte e estão descritos, por exemplo, nas Pat. U.S. Nos. 4736866; 4870009; e 4873191; e Hogan 1986, em

Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. Métodos semelhantes são utilizados para produção de outros animais transgénicos. Um animal transgénico fundador pode ser identificado com base na presença do transgene de NgR no seu genoma e/ou expressão do ARNm de NgR em tecidos ou células dos animais. Um animal transgénico fundador pode então ser utilizado para criar mais animais possuindo o transgene. Para além disso, animais transgénicos possuindo um transgene codificando NgR podem ainda ser criados para gerar outros animais transgénicos possuindo outros transgenes.

Para criar um animal recombinante homólogo, é preparado um vector que contenha pelo menos uma porção de um gene de NgR no qual uma deleção, adição ou substituição foi introduzida para deste modo alterar, p.ex., destruir funcionalmente, o 42 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gene de NgR. 0 gene de NgR pode ser um gene humano (p.ex., SEQ ID NO:l ou 13), mas de preferência, é um homólogo não humano de um gene de NgR humano. Por exemplo, um homólogo de ratinho do gene de NgR humano de SEQ ID N0:1 ou 13 pode ser utilizado para construir um vector de recombinação homóloga adequado para alterar um gene endógeno de NgR no genoma de ratinho. Num caso, o vector é desenhado para que, após recombinação homóloga, o gene endógeno de NgR seja funcionalmente destruído (i.e., deixe de codificar uma proteína funcional; também referido como um vector "knock out") .

Alternativamente, o vector pode ser desenhado para que, após recombinação homóloga, o gene endógeno de NgR seja mutado ou de outro modo alterado mas codificando ainda a proteína funcional (p.ex., a região reguladora a montante pode ser alterada para deste modo alterar a expressão da proteína NgR endógena). No vector de recombinação homóloga, a porção alterada do gene de NgR é flanqueada nas suas extremidades 5' e 3' por ácido nucleico adicional do gene de NgR para permitir que ocorra recombinação homóloga entre o gene exógeno de NgR transportado pelo vector e um gene endógeno de NgR numa célula estaminal embrionária. 0 ácido nucleico adicional de NgR flanqueador é de comprimento suficiente para recombinação homóloga com sucesso com o gene endógeno. Tipicamente, estão incluídas no vector várias quilobases de ADN flanqueador (tanto nas extremidades 5' como 3'). Ver p.ex., Thomas et ai., Cell 51: 503, 1987 para uma descrição de vectores de recombinação homóloga. O vector é introduzido numa linha de células estaminais embrionárias (p.ex., através de electroporação) e as células em que o gene de NgR introduzido se recombinou de forma homóloga com o gene de NgR endógeno são seleccionadas (ver p.ex., Li et al., Cell 69: 915, 1992).

As células seleccionadas são então injectadas num blastocisto de um animal (p.ex., um ratinho) para formar quimeras de agregação. Ver p.ex., Bradley 1987, Em: "Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach", Robertson, ed. IRL, Oxford, págs. 113-152. Um embrião quimérico pode então ser implantado numa fêmea adoptiva pseudográvida adequada e o embrião levado até termo. A descendência ancorando o ADN recombinado de forma homóloga nas suas células germinais pode ser utilizada para criar 43

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT animais nos quais todas as células do animal contenham o ADN recombinado de forma homóloga através de transmissão pela linha germinal do transgene. Métodos para construção de vectores de recombinação homóloga e animais recombinantes homólogos são descritos em Bradley, Curr. Opin. Biotechnol. 2: 823-829, 1991; Publicação Internacional PCT Nos. : WO 90/11354; WO 91/01140; WO 92/0968; e WO 93/04169.

Noutro caso, podem ser produzidos animais transgénicos não humanos que contenham sistemas seleccionados que permitam a expressão regulada do transgene. Um exemplo de um tal sistema é o sistema de recombinase cre/loxP do bacteriófago PI. Para uma descrição do sistema de recombinase cre/loxP, ver, p.ex., Lakso et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89: 6232-6236, 1992. Outro exemplo de um sistema de recombinase é o sistema de recombinase FLP de Saccharomyces cerevisiae (0'Gorman et al., Science 251: 1351-1355, 1991. Se for utilizado um sistema de recombinase cre/loxP para regular a expressão do transgene, são necessários animais contendo transgenes codificando tanto a recombinase Cre como uma proteína seleccionada. Tais animais podem ser proporcionados através da construção de animais "duplos" transgénicos, p.ex., através do acasalamento de dois animais transgénicos, um contendo um transgene codificando uma proteína seleccionada e o outro contendo um transgene codificando uma recombinase.

Os clones dos animais transgénicos não humanos aqui descritos podem também ser produzidos de acordo com os métodos descritos em Wilmut et al., Nature 385: 810-813, 1997. Em resumo, uma célula, p.ex., uma célula somática, do animal transgénico pode ser isolada e induzida a sair do ciclo de crescimento e entrar na fase Go. A célula quiescente pode então ser fundida, p.ex., através da utilização de pulsos eléctricos, com um oócito enucleado de um animal da mesma espécie da qual é isolada a célula quiescente. O oócito reconstruído é então cultivado para se desenvolver até mórula ou blastocisto e então transferido para uma fêmea adoptiva pseudográvida. A descendência nascida desta fêmea adoptiva será um clone do animal do qual a célula, p.ex., a célula somática, é isolada. 44

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Anti-sentido São também proporcionados por esta divulgação polinucleótidos anti-sentido que reconhecem e hibridam com polinucleótidos NgR. São proporcionados polinucleótidos anti-sentido inteiros e fragmentados. As moléculas anti-sentido fragmentadas desta divulgação incluem (i) as que reconhecem e hibridam especificamente com ARN de NgR (tal como determinado através de comparação de sequências de ADN codificando NgR com ADN codificando outras moléculas conhecidas). A identificação de sequências únicas de polinucleótidos codificando NgR pode ser deduzida através da utilização de qualquer base de dados de sequências publicamente disponível e/ou através da utilização de programas de comparação de sequências comercialmente disponíveis. Após identificação das sequências desejadas, pode ser efectuado o isolamento através de digestão de restrição ou amplificação utilizando qualquer uma das várias técnicas de reacção em cadeia da polimerase bem conhecidas na arte. Os polinucleótidos anti-sentido são particularmente relevantes para regulação da expressão de NgR pelas células expressando ARNm de NgR.

Oligonucleótidos anti-sentido ou fragmentos de uma sequência nucleotídica exposta em SEQ ID N0:1, 3, 13 ou sequências complementares ou homólogas destas, derivados das sequências nucleotídicas da presente divulgação codificando NgR são úteis como ferramentas de diagnóstico para sondar a expressão génica em vários tecidos. Por exemplo, o tecido pode ser sondado in situ com sondas oligonucleotídicas possuindo grupos detectáveis através de técnicas convencionais de autorradiografia para investigar a expressão nativa desta enzima ou condições patológicas relacionadas com ela. Em aspectos específicos, são proporcionadas moléculas de ácido nucleico anti-sentido que compreendem uma sequência complementar a pelo menos cerca de 10, 25, 50, 100, 250 ou 500 nucleótidos de uma cadeia de codificação de NgR inteira, ou a apenas uma parte desta. São adicionalmente proporcionadas moléculas de ácido nucleico codificando fragmentos, homólogos, derivados e análogos de uma proteína NgR de SEQ ID NO:2, 4 ou 14 ou ácidos nucleicos anti-sentido complementares a uma sequência de ácido nucleico de NgR de SEQ ID NOs: 1, 3 ou 13. 45

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Num caso, uma molécula de ácido nucleico anti-sentido é anti-sentido a uma "região de codificação" da cadeia de codificação de uma sequência nucleotidica codificando NgR. 0 termo "região de codificação" refere-se à região da sequência nucleotidica compreendendo codões que são traduzidos em resíduos de aminoácidos (p.ex., a região de codificação de proteína do NgR humano corresponde à região de codificação de SEQ ID N0:1, 3 ou 13). Noutro caso, a molécula de ácido nucleico anti-sentido é anti-sentido a uma "região não codificadora" da cadeia de codificação de uma sequência nucleotidica codificando NgR. 0 termo "região não codificadora" refere-se a sequências 5' e 3' que flanqueiam a região de codificação que não são traduzidas em aminoácidos (i.e., também referidas como regiões 5' e 3' não traduzidas).

Os oligonucleótidos anti-sentido são de preferência dirigidos a regiões reguladoras de uma sequência nucleotidica de SEQ ID N0:1, 3, 13 ou ARNm correspondendo a estas, incluindo, mas não se limitando ao codão de iniciação, caixa TATA, sequências estimuladoras e semelhantes. Dadas as sequências da cadeia de codificação codificando NgR aqui divulgadas (p.ex., SEQ ID N0:1, 3 ou 13), os ácidos nucleicos anti-sentido desta divulgação podem ser desenhados de acordo com as regras de emparelhamento de bases de Watson e Crick ou de Hoogsteen. A molécula de ácido nucleico anti-sentido pode ser complementar à região de codificação inteira do ARNm de NgR, mas é de preferência um oligonucleótido que é anti-sentido a apenas uma porção da região de codificação ou não codificadora do ARNm de NgR. Por exemplo, o oligonucleótido anti-sentido pode ser complementar à região em volta do local de início da tradução do ARNm de NgR. Um oligonucleótido anti-sentido pode ter, por exemplo, cerca de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 nucleótidos de comprimento. Um ácido nucleico anti-sentido desta divulgação pode ser construído utilizando síntese química ou reacções de ligação enzimática utilizando procedimentos conhecidos na arte. Por exemplo, um ácido nucleico anti-sentido (p.ex., um oligonucleótido anti-sentido) pode ser quimicamente sintetizado utilizando nucleótidos de ocorrência natural ou nucleótidos modificados de vários modos desenhados para aumentar a estabilidade biológica das moléculas ou para aumentar a estabilidade física do dúplex formado entre os ácidos nucleicos anti-sentido e com sentido, 46 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ p.ex., podem ser utilizados derivados de fosforotioato e nucleótidos substituídos com acridina.

Exemplos de nucleótidos modificados que podem ser utilizados para gerar o ácido nucleico anti-sentido incluem: 5-fluorouracilo, 5-bromouracilo, 5-clorouracilo, 5-iodouracilo, hipoxantina, xantina, 4-acetilcitosina, 5-(carboxi- hidroxilmetil)uracilo, 5-carboximetilaminometil-2-tiouridina, 5-carboximetilaminometiluracilo, di-hidrouracilo, beta-D-galactosilqueosina, inosina, N6-isopenteniladenina, 1-metilguanina, 1- metilinosina, 2,2-dimetilguanina, 2-metiladenina, 2-metilguanina, 3-metilcitosina, 5-metilcitosina, N6-adenina, 7-metilguanina, 5-metilaminometiluracilo, 5-metoxiaminometi1-2-tiouracilo, beta-D-manosilqueosina, 5'-metoxicarboximetiluracilo, 5-metoxiuracilo, 2- metiltio-N6-isopenteniladenina, ácido uracil-5-oxiacético (v) , wybutoxosina, pseudouracilo, queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracilo, 2-tiouracilo, 4-tiouracilo, 5-metiluracilo, éster metílico de ácido uracil-5-oxiacético, ácido uracil-5-oxiacético (v) , 5-metil-2-tiouracilo, 3-(3-amino-3-N-2-carboxipropil)uracilo, (acp3)w, e 2,6-diaminopurina.

Alternativamente, o ácido nucleico anti-sentido pode ser produzido biologicamente utilizando um vector de expressão no qual um ácido nucleico foi subclonado numa orientação anti-sentido (i.e., o ARN transcrito a partir do ácido nucleico inserido será de uma orientação anti-sentido a um ácido nucleico alvo de interesse, melhor descrito na seguinte subsecção).

As moléculas de ácido nucleico anti-sentido desta divulgação (de preferência oligonucleótidos de 10 a 20 nucleótidos de comprimento) são tipicamente administradas a um sujeito ou geradas in situ para que hibridem ou se liguem a ARNm celular e/ou ADN genómico codificando uma proteína NgR para inibir deste modo a expressão da proteína, p.ex., através da inibição da transcrição e/ou da tradução. A supressão da expressão de NgR ao nível da transcrição ou da tradução é útil para gerar modelos celulares ou animais para doenças/condições caracterizadas por expressão de NgR aberrante. A hibridação pode ser através de complementaridade de nucleótidos convencional para formar um dúplex estável ou, por exemplo, no caso de uma molécula de ácido nucleico anti-sentido que se 47

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ligue a dúplices de ADN, através de interacções especificas no sulco principal da dupla hélice.

Os oligonucleótidos anti-sentido de fosforotioato e metilfosfonato estão especificamente contemplados para utilização terapêutica. Os oligonucleótidos anti-sentido podem ainda ser modificados através da adição de poli-L-lisina, polilisina transferrina ou porções colesterol na sua extremidade 5' .

Um exemplo de uma via de administração de moléculas de ácido nucleico anti-sentido da divulgação inclui injecção directa num local de tecido. Alternativamente, as moléculas de ácido nucleico anti-sentido podem ser modificadas para atingir células seleccionadas e depois administradas sistemicamente. Por exemplo, para administração sistémica, as moléculas anti-sentido podem ser modificadas para se ligarem especificamente a receptores ou antigénios expressos numa superfície celular seleccionada, p.ex., através de ligação das moléculas de ácido nucleico anti-sentido a péptidos ou anticorpos que se liguem a receptores ou antigénios da superfície celular. As moléculas de ácido nucleico anti-sentido podem também ser distribuídas a células utilizando os vectores aqui descritos. Para alcançar concentrações intracelulares suficientes de moléculas anti-sentido, são preferidas as construções de vector nas quais a molécula de ácido nucleico anti-sentido é colocada sob o controlo de um promotor forte pol II ou pol III.

Ainda noutro caso, a molécula de ácido nucleico anti-sentido desta divulgação é uma molécula de ácido nucleico α-anomérica. Uma molécula de ácido nucleico α-anomérica forma híbridos de cadeia dupla específicos com ARN complementar nos quais, ao contrário da unidades β habituais, as cadeias correm paralelas umas às outras (Gaultier et al., Nucleic Acids Res. 15: 6625-6641, 1987) . A molécula de ácido nucleico anti- sentido pode também compreender um 2'-o-metilribonucleótido (Inoue et al., Nucleic Acids Res. 15: 6131-6148, 1987) ou um análogo de ARN-ADN quimérico (Inoue et al., FEBS Lett. 215: 327-330, 1987) .

As sequências de NgR ensinadas na presente divulgação, incluindo as do presente invento, facilitam o desenho de novos 48 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ factores de transcrição para modulação da expressão de NgR em células nativas e animais, e células transformadas ou transfectadas com polinucleótidos NgR. Por exemplo, foi mostrado que proteínas com dedos de zinco Cys2-His2, que se ligam ao ADN através dos seus domínios dedos de zinco, são passíveis de alterações estruturais que conduzam ao reconhecimento de diferentes sequências alvo. Estas proteínas de dedos de zinco artificiais reconhecem locais alvo específicos com elevada afinidade e baixas constantes de dissociação, e são capazes de actuar como interruptores génicos para modular a expressão génica. 0 conhecimento da sequência alvo de NgR particular da presente divulgação facilita o desenho de proteínas de dedos de zinco específicas para a sequência alvo utilizando métodos conhecidos tais como uma combinação de modelação com base na estrutura e pesquisa de bibliotecas de apresentação fágica (Segai et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 96: 2758-2763, 1999; Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 94: 5525-5530, 1997; Greisman et al., Science 275: 657-661, 1997; Choo et al., J. Mol. Biol. 273: 525-532, 1997). Cada domínio dedo de zinco reconhece habitualmente três ou mais pares de bases. Uma vez que uma sequência de reconhecimento de 18 pares de bases tem geralmente um comprimento suficiente para a tornar única em qualquer genoma conhecido, esperar-se-ia que uma proteína de dedos de zinco consistindo em 6 repetições em cadeia de dedos de zinco assegurasse especificidade para uma determinada sequência (Segai et al., (1999), acima). As repetições de dedos de zinco artificiais, desenhadas com base no promotor de sequências de NgR, são fundidas com domínios de activação ou repressão para promover ou suprimir a expressão de NgR (Liu et al., (1997), acima) . O promotor de NgR pode ser obtido através de métodos padrão conhecidos do vulgar perito na arte com a divulgação aqui contida e o conhecimento da sequência de NgR. Alternativamente, os domínios dedo de zinco podem ser fundidos com o factor de ligação à caixa TATA (TBP) com comprimentos variáveis da região ligante entre o péptido dedo de zinco e o TBP para criar activadores ou repressores da transcrição (Kim et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 94: 3616-3620, 1997. Tais proteínas e polinucleótidos que os codificam, têm utilidade para modulação da expressão de NgR in vivo em células nativas, animais e humanos; e/ou células transfectadas com sequências codificando NgR. O novo factor de transcrição pode ser 49 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ distribuído às células alvo através de construções de transfecção que expressem o factor de transcrição (terapia génica), ou através da introdução da proteína. Proteínas de dedos de zinco modificadas podem também ser desenhadas para se ligarem a sequências de ARN para utilizar em terapêuticos como alternativas aos métodos de ARN anti-sentido ou catalítico (McColl et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 96: 9521-9526, 1997; Wu et al.r Proc. Natl. Acad. Sei. USA 92: 344-348, 1995). A presente divulgação contempla métodos de desenho de tais factores de transcrição com base na sequência génica da divulgação, bem como proteínas de dedos de zinco feitas à medida, que sejam úteis para modular a expressão de NgR em células (nativas ou transformadas) cujo complemento genético inclua estas sequências.

Ribozimas e porções PNA

Ainda noutro caso, um ácido nucleico anti-sentido desta divulgação é uma ribozima. As ribozimas são moléculas de ARN catalíticas com actividade ribonucleásica que são capazes de clivar um ácido nucleico de cadeia simples, tal como um ARNm, para o qual têm uma região complementar. Assim, as ribozimas (p.ex., ribozimas cabeça-de-martelo, descritas em Haselhoff e Gerlach, Nature 334: 585-591, 1988) podem ser utilizadas para clivar cataliticamente transcritos de ARNm de NgR para deste modo inibir a tradução do ARNm de NgR. A ribozima possuindo especificidade para um ácido nucleico codificando NgR pode ser desenhada com base na sequência nucleotídica de um ADN de NgR aqui divulgado (i.e., SEQ ID N0:1, 3 ou 13). Por exemplo, pode ser construído um derivado de ARN L-19 IVS de Tetrahymena no qual a sequência nucleotídica do local activo é complementar com a sequência nucleotídica a clivar num ARNm codificando NgR. Ver, p.ex., Cech et al., Patente U.S. N.° 4987071; e Cech et al., Patente U.S. N.° 5116742. Alternativamente, o ARNm de NgR pode ser utilizado para seleccionar um ARN catalítico possuindo uma actividade ribonucleásica específica a partir de um banco de moléculas de ARN. Ver, p.ex., Bartel et al., Science 261: 1411-1418, 1993.

Alternativamente, a expressão do gene de NgR pode ser inibida através do direccionamento de sequências nucleotídicas complementares à região reguladora do NgR (p.ex., o promotor e/ou estimuladores de NgR) para formar estruturas helicoidais 50 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ triplas que impedem a transcrição do gene de NgR em células alvo. Ver geralmente, Helene, Anticancer Drug Des. 6: 569-584, 1991; Helene. et al., Ann. N.Y. Acad Sei. 660: 27-36, 1992; e Maher, BioEssays 14: 807-815, 1992.

Em vários casos, os ácidos nucleicos de NgR podem ser modificados na porção base, porção açúcar ou estrutura de fosfato para melhorar, p.ex., a estabilidade, hibridação ou solubilidade da molécula. Por exemplo, a estrutura de desoxirribose-fosfato dos ácidos nucleicos pode ser modificada para gerar ácidos nucleicos peptídicos (ver Hyrup et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 4: 5-23, 1996). Tal como aqui se utilizam, os termos “ácidos nucleicos peptídicos" ou "PNAs" referem-se a imitadores de ácidos nucleicos, p.ex., imitadores de ADN, nos quais a estrutura de desoxirribose-fosfato é substituída por uma estrutura pseudopeptídica e são apenas mantidas as quatro nucleobases naturais. Mostrou-se que a estrutura neutra dos PNA permite a hibridação específica a ADN e ARN sob condições de baixa força iónica. A síntese de oligómeros PNA pode ser efectuada utilizando protocolos de síntese peptídica de fase sólida padrão tal como descrito em Hyrup et al., (1996) acima; Perry-0' Keef e et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 93: 14670-14675, 1996.

Os PNA de NgR podem ser utilizados em aplicações terapêuticas e de diagnóstico. Por exemplo, os PNA podem ser utilizados como agentes anti-sentido ou anti-gene para modulação da expressão génica específica da sequência através, p.ex., de indução da paragem da transcrição ou da tradução ou inibição da replicação. Os PNA de NgR podem também ser utilizados, p.ex., na análise de mutações de um único par de bases num gene através, por exemplo, de fixação de PCR dirigida por PNA; como enzimas de restrição artificiais quando utilizadas em combinação com outras enzimas, p.ex., nucleases SI (Hyrup (1996), acima); ou como sondas ou iniciadores para a sequência de ADN e hibridação (Hyrup et al., (1996), acima; Perry-0'Keefe (1996), acima).

Noutro caso, os PNA de NgR podem ser modificados, p.ex., para aumentar a sua estabilidade ou tomada celular, através de união lipófila ou outros grupos ajudantes a PNA, através da formação de quimeras PNA-ADN ou através da utilização de 51 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ lipossomas ou outras técnicas de distribuição de fármacos conhecidas na arte. Por exemplo, podem ser geradas quimeras PNA-ADN de NgR que podem combinar as propriedades vantajosas de PNA e ADN. Tais quimeras permitem que enzimas de reconhecimento de ADN, p.ex., ARNase H e ADN-polimerases, interajam com a porção ADN enquanto a porção PNA proporcionaria elevada afinidade de ligação e especificidade. As quimeras PNA-ADN podem ser ligadas utilizando ligantes de comprimentos apropriados seleccionados em termos do empacotamento de bases, do número de ligações entre as nucleobases e da orientação (Hyrup (1996), acima). A síntese de quimeras PNA-ADN pode ser efectuada tal como descrito em Hyrup (1996), acima e Finn et al., Nucleic Acids Res. 24: 3357-3363, 1996. Por exemplo, uma cadeia de ADN pode ser sintetizada num suporte sólido utilizando a química de conjugação de fosforamidito padrão, e análogos de nucleósidos modificados, p.ex., pode ser utilizado 5'-(4-metoxitritil) -amino-5'-desoxi-timidina-fosforamidite entre o PNA e a extremidade 5' do ADN (Mag et al., Nucleic Acids Res. 17: 973-988, 1989). Os monómeros de PNA são então unidos de um modo passo-a-passo para produzir uma molécula quimérica com um segmento PNA a 5' e um segmento ADN a 3' (Finn et al., (1996), acima). Alternativamente, podem ser sintetizadas moléculas quiméricas com um segmento ADN a 5' e um segmento PNA a 3' . Ver, Petersen et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 5: 1119-1124, 1975.

Noutros casos, o oligonucleótido pode incluir outros grupos anexos tais como péptidos (p.ex., para se dirigir a receptores da célula hospedeira in vivo), ou agentes facilitadores do transporte através da membrana celular (ver Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86: 6553-6556, 1989; Lemaitre et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84: 648-652, 1987; Publicação PCT N.° WO 88/09810) ou da barreira hemato-encefálica (ver, p.ex., Publicação PCT N.° WO 89/10134). Adicionalmente, os oligonucleótidos podem ser modificados com agentes de clivagem desencadeados por hibridação (ver, p.ex., Krol et al., Biotechniques 6: 958-976, 1988) ou agentes intercalantes (ver, p.ex., Zon, Pharm. Res. 5: 539-549, 1988). Para este fim, o oligonucleótido pode ser conjugado com outra molécula, p.ex., um péptido, um agente de ligação cruzada 52

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT desencadeado por hibridação, um agente de transporte, um agente de clivagem desencadeado por hibridação, etc.

Podem ser utilizados métodos de sequenciação automáticos para obter ou verificar a sequência nucleotidica de NgR. Crê-se que as sequências nucleotidicas de NgR desta divulgação, incluindo as do presente invento, sejam 100% exactas. No entanto, tal como é conhecido na arte, a sequência nucleotidica obtida através de métodos automáticos pode conter alguns erros. As sequências nucleotidicas determinadas através de automação são tipicamente pelo menos cerca de 90%, mais tipicamente pelo menos de cerca de 95% a pelo menos cerca 99,9% idênticas à sequência nucleotidica real de uma dada molécula de ácido nucleico. A sequência real pode ser determinada mais precisamente utilizando métodos de sequenciação manuais, que são bem conhecidos na arte. Um erro numa sequência que resulte numa inserção ou deleçao de um ou mais nucleótidos pode resultar numa mudança de enquadramento na tradução de tal modo que a sequência de aminoácidos prevista diferirá da que seria prevista a partir da sequência nucleotidica real da molécula de ácido nucleico, a começar no ponto da mutação.

Polipéptidos

Esta divulgação proporciona também polipéptidos NgR de mamífero purificados e isolados codificados por um polinucleótido desta divulgação. É actualmente preferido um polipéptido NgR humano compreendendo a sequência de aminoácidos exposta em SEQ ID NO:2 ou SEQ ID NO:14. Outro caso preferido é um polipéptido NgR de ratinho compreendendo a sequência de aminoácidos de NgR3, tal como exposta em SEQ ID NO: 4 .

Os polipéptidos desta divulgação que proporcionam os polipéptidos do presente invento são expostos nas reivindicações anexas.

Um aspecto desta divulgação refere-se a proteínas NgR isoladas, e porções biologicamente activas destas, ou derivados, fragmentos, análogos ou homólogos destas. São também proporcionados fragmentos polipeptídicos adequados para utilizar como imunogénios para criar anticorpos anti-NgR. De 53 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ preferência, os fragmentos de proteínas NgR compreendem pelo menos uma actividade biológica de NgR. Num caso, proteínas NgR nativas podem ser isoladas a partir de fontes de células ou tecidos através de um esguema de purificação apropriado utilizando técnicas padrão de purificação de proteínas. Noutro caso, são produzidas proteínas NgR através de técnicas de ADN recombinante. Alternativamente à expressão recombinante, pode ser sintetizada quimicamente uma proteína ou polipéptido NgR utilizando técnicas padrão de síntese peptídica. A divulgação engloba também polipéptidos que têm pelo menos 99%, pelo menos 95%, pelo menos 90%, pelo menos 85%, pelo menos 80%, pelo menos 75%, pelo menos 70%, pelo menos 65%, pelo menos 60%, pelo menos 55%, pelo menos 50% ou pelo menos 45% de identidade e/ou homologia com o polipéptido preferido da divulgação. Adicionalmente, a divulgação engloba polipéptidos possuindo a sequência de consenso mostrada em SEQ ID NO: 6 (mostrada na Tabela 5) excluindo o NgR caracterizado anteriormente ("NgRl"), e polipéptidos compreendendo pelo menos cerca de 90% da sequência de consenso. O termo "percentagem de identidade de sequência" é calculado através da comparação de duas sequências alinhadas de modo óptimo ao longo da região de comparação, determinação do número de posições nas quais ocorre a base de ácido nucleico idêntica (p.ex., A, T, C, G, U ou I, no caso de ácidos nucleicos) em ambas as sequências para dar o número de posições correspondentes, dividindo o número de posições correspondentes pelo número total de posições na região de comparação (i.e., o tamanho da janela) e multiplicando o resultado por 100 para dar a percentagem de identidade de sequência. O termo "identidade substancial" tal como aqui se utiliza denota uma característica de uma sequência polinucleotídica, em que o polinucleótido compreende uma sequência que tem pelo menos 80 porcento de identidade, de preferência pelo menos 85 porcento de identidade e frequentemente de 90 a 95 porcento de identidade de sequência, mais habitualmente pelo menos 99 porcento de identidade de sequência em comparação com uma sequência de referência ao longo de uma região de comparação. 54

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Num aspecto, a percentagem de homologia é calculada como a percentagem de resíduos de aminoácidos na menor de duas sequências que alinham com um resíduo de aminoácido idêntico na sequência a comparar, onde podem ser introduzidos quatro intervalos num troço de 100 aminoácidos para maximizar o alinhamento (Dayhoff, em "Atlas of Protein Sequence and Structure", Vol. 5, pág. 124, National Biochemical Research Foundation, Washington, D.C. (1972)).

Uma determinação da homologia ou identidade é tipicamente feita através de um programa de computador de homologias conhecido na arte. Um programa exemplar é o programa Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, Versão 8 para UNIX, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison, WI) utilizando as definições por defeito, que utiliza o algoritmo de Smith e Waterman (Adv. Appl. Math. 2: 482-489, 1981). Empregando o suporte lógico GAP no pacote de programas de GCG, (ver Needleman e Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453, 1970) podem ser utilizadas as seguintes definições para comparação de sequências de ácidos nucleicos: penalidade de criação de GAP de 5.0 e penalidade de extensão de GAP de 0.3, a região de codificação das sequências de ácido nucleico análogas referidas acima exibe um grau de identidade de preferência de pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99%, com a parte CDS (de codificação) da sequência de ADN mostrada em SEQ ID NO:l, 3 ou 13. BestFit foi originalmente escrito para a Versão 1.0 por Paul Haeberli a partir de uma cuidadosa leitura dos artigos de Needleman e Wunsch (1970), acima, e Smith e Waterman (1981), acima. Podem ser utilizadas as seguintes definições de Bestfit para comparação de sequências de ácido nucleico: penalidade de criação de GAP de 8.0 e penalidade de extensão de GAP de 2, a região de codificação das sequências de ácido nucleico análogas referidas acima exibe um grau de identidade de preferência de pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou 99%, com a parte CDS (de codificação) da sequência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO:2, 4 ou 14.

Alternativamente, a homologia pode ser determinada através de análise de hibridação em que uma sequência de ácido nucleico híbrida com o complemento de uma sequência codificando as proteínas acima mencionadas sob condições 55 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT rigorosas, moderadamente rigorosas ou de baixo rigor. Ver p.ex., Ausubel, et al., (Eds.) "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, NY, 1993, e abaixo.

Os polipéptidos desta divulgação, incluindo os do presente invento, podem ser isolados a partir de fontes celulares naturais ou podem ser quimicamente sintetizados, mas são de preferência produzidos através de procedimentos recombinantes envolvendo células hospedeiras desta divulgação, p.ex., células hospedeiras do presente invento.

Uma proteína "isolada" ou "purificada" ou uma porção biologicamente activa desta é substancialmente livre de material celular ou outras proteínas contaminantes da fonte celular ou de tecido da qual a proteína NgR é derivada, ou substancialmente livre de precursores químicos ou outros químicos quando quimicamente sintetizada. A expressão "substancialmente livre de material celular" inclui preparações da proteína NgR em que a proteína é separada de componentes celulares das células das quais é isolada ou produzida de forma recombinante. Num caso, a expressão "substancialmente livre de material celular" inclui preparações de proteína NgR possuindo menos de cerca de 30% (por peso seco) de proteína não NgR (também aqui referida como "proteína contaminante"), de maior preferência menos de cerca de 20% de proteína não NgR, ainda de preferência menos de cerca de 10% de proteína não NgR e ainda de maior preferência menos de cerca de 5% de proteína não NgR. Quando a proteína NgR ou uma porção biologicamente activa desta é produzida de forma recombinante, é também de preferência substancialmente livre de meio de cultura, i.e., o meio de cultura representa menos de cerca de 20%, de preferência menos de cerca de 10% e de maior preferência menos de cerca de 5% do volume da preparação proteica. A expressão "substancialmente livre de precursores químicos ou outros químicos" inclui preparações de proteína NgR na qual a proteína é separada de precursores químicos ou outros químicos que estejam envolvidos na síntese da proteína. Num caso, a expressão "substancialmente livre de precursores químicos ou outros químicos" inclui preparações de proteína NgR possuindo menos de cerca de 30% (por peso seco) de 56 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ precursores químicos ou químicos não NgR, de preferência menos de cerca de 20% de precursores químicos ou químicos não NgR, ainda de preferência menos de cerca de 10% de precursores químicos ou químicos não NgR e de maior preferência menos de cerca de 5% de precursores químicos ou químicos não NgR.

Porções biologicamente activas de uma proteína NgR incluem péptidos compreendendo sequências de aminoácidos suficientemente homólogas ou derivadas da sequência de aminoácidos da proteína NgR, p.ex., a sequência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO:2, 4 ou 14 que inclui menos aminoácidos que as proteínas NgR inteiras, e exibem pelo menos uma actividade de uma proteína NgR. Tipicamente, as porções biologicamente activas compreendem um domínio ou motivo com pelo menos uma actividade da proteína NgR. Uma porção biologicamente activa de uma proteína NgR pode ser um polipéptido que tenha, por exemplo, 10, 25, 50, 100 ou mais aminoácidos de comprimento.

Uma porção biologicamente activa de uma proteína NgR desta divulgação, p.ex. uma proteína NgR do presente invento, pode conter pelo menos uma das características que é conservada entre as proteínas NgR (p.ex., uma cisteína conservada como o terminal N da proteína madura, quatro cisteínas conservadas no terminal N antes de uma região rica em leucina, quatro cisteínas conservadas C-terminais em relação a uma região de repetição de leucinas, oito repetições ricas em leucina e um terminal C hidrófobo) . Uma porção biologicamente activa alternativa de uma proteína NgR pode conter pelo menos dois dos domínios acima identificados. Outra porção biologicamente activa de uma proteína NgR pode conter pelo menos três dos domínios acima identificados. Ainda outra porção biologicamente activa de uma proteína NgR desta divulgação, p.ex. uma proteína NgR do presente invento, pode conter pelo menos quatro dos domínios acima identificados.

Para além disso, outras porções biologicamente activas, nas quais são suprimidas outras regiões da proteína, podem ser preparadas através de técnicas recombinantes e avaliadas quanto a uma ou mais das actividades funcionais de uma proteína NgR nativa. 57 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Num caso, a proteína NgR tem uma sequência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO: 2, 4 ou 14. Noutros casos, a proteína NgR é substancialmente homóloga a SEQ ID NO: 2, 4 ou 14 e mantém a actividade funcional da proteína de SEQ ID NO:2, 4 ou 14, contudo difere na sequência de aminoácidos devido a variação alélica ou mutagénese, tal como descrito em detalhe abaixo.

Assim, noutro caso, a proteína NgR é uma proteína que compreende uma sequência de aminoácidos pelo menos cerca de 45% homóloga à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:2 ou SEQ ID NO: 4 ou SEQ ID NO: 14 e mantém a actividade funcional das proteínas NgR de SEQ ID N0:2, 4 ou 14.

Espera-se que a utilização de células hospedeiras de mamífero proporcione tais modificações pós-tradução (p.ex., glicosilação, truncagem, lipidação e fosforilação) conforme seja necessário para conferir uma actividade biológica óptima a produtos de expressão recombinantes desta divulgação, incluindo os do presente invento. Formas glicosiladas e não glicosiladas de polipéptidos NgR estão englobadas por esta divulgação e pelo presente invento. A divulgação engloba também polipéptidos NgR variantes (ou análogos). Num exemplo, são proporcionadas variantes de inserção em que um ou mais resíduos de aminoácidos suplementam uma sequência de aminoácidos de NgR. As inserções podem ser localizadas num ou em ambos os terminais da proteína, ou podem ser posicionados dentro de regiões internas da sequência de aminoácidos de NgR. As variantes de inserção com resíduos adicionais num ou em ambos os terminais podem incluir, por exemplo, proteínas de fusão e proteínas incluindo etiquetas de aminoácidos ou marcadores.

As variantes de inserção incluem polipéptidos NgR em que um ou mais resíduos de aminoácidos são adicionados a uma sequência de aminoácidos de NgR ou a um fragmento biologicamente activo desta.

Os produtos variantes desta divulgação incluem também produtos NgR maduros, i.e., produtos NgR em que a sequência líder ou sinal é removida, com resíduos amino-terminais 58 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ adicionais. Os resíduos amino-terminais adicionais podem ser derivados de outra proteína ou podem incluir um ou mais resíduos que não sejam identificáveis como sendo derivados de proteínas específicas. Produtos NgR com um resíduo de metionina adicional na posição -1 (Met_1-NgR) estão contemplados, como variantes com resíduos adicionais de metionina e lisina nas posições -2 e -1 (Met“2-Lys_1_NgR) . As variantes de NgR com resíduos Met, Met-Lys, Lys adicionais (ou um ou mais resíduos básicos em geral) são particularmente úteis para maior produção de proteína recombinante em células hospedeiras bacterianas.

Variantes de Polipéptidos A divulgação engloba também variantes de NgR possuindo resíduos de aminoácidos adicionais que resultam da utilização de sistemas de expressão específicos.

Tal como aqui se utiliza, uma "proteína quimérica" NgR ou "proteína de fusão" compreende um polipéptido NgR operativamente ligado a um polipéptido não NgR. As proteínas de fusão de NgR do presente invento são expostas nas reivindicações anexas. Um "polipéptido NgR" refere-se a um polipéptido possuindo uma sequência de aminoácidos correspondente a NgR, enquanto um "polipéptido não NgR" refere-se a um polipéptido possuindo uma sequência de aminoácidos correspondendo a uma proteína que não é homóloga à proteína NgR, p.ex., uma proteína que seja diferente da proteína NgR e que seja derivada do mesmo organismo ou de um diferente. Dentro de uma proteína de fusão de NgR o polipéptido NgR pode corresponder a toda ou a uma porção da uma proteína NgR. Num caso, uma proteína de fusão de NgR compreende pelo menos uma porção biologicamente activa de uma proteína NgR. Noutro caso, uma proteína de fusão de NgR compreende pelo menos duas porções biologicamente activas de uma proteína NgR. Ainda noutro caso, uma proteína de fusão de NgR compreende pelo menos três porções biologicamente activas de uma proteína NgR. Dentro da proteína de fusão, pretende-se que o termo "operativamente ligado" indique que o polipéptido NgR e o polipéptido não NgR estão fundidos enquadrados um com o outro. 0 polipéptido não NgR pode ser fundido com o terminal N ou o terminal C do polipéptido NgR. 59 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Por exemplo, num caso a proteína de fusão de NgR compreende um domínio NgR operativamente ligado ao domínio extracelular de uma segunda proteína. Tais proteínas de fusão podem ainda ser utilizadas em ensaios de pesquisa de compostos que modulem a actividade de NgR (tais ensaios são descritos em detalhe abaixo).

Por exemplo, a utilização de vectores comercialmente disponíveis que expressam um polipéptido desejado como parte de um produto de fusão com glutationa-S-transferase (GST) proporciona o polipéptido desejado possuindo um resíduo de glicina adicional na posição -1 após clivagem do componente GST a partir do polipéptido desejado.

Noutro caso, a proteína de fusão é uma proteína NgR contendo uma sequência sinal heteróloga no seu terminal N. Por exemplo, a sequência sinal nativa de NgR (i.e., aminoácidos 1-30 de SEQ ID NO:2 e aminoácidos 1-40 de SEQ ID NO:4) pode ser removida e substituída por uma sequência sinal de outra proteína. Em certas células hospedeiras (p.ex., células hospedeiras de mamífero), a expressão e/ou secreção de NgR pode ser aumentada através da utilização de uma sequência sinal heteróloga.

Ainda noutro caso, a proteína de fusão é uma proteína de fusão NgR-imunoglobulina na qual sequências de NgR compreendendo um ou mais domínios são fundidas com sequências derivadas de um membro da família de proteínas imunoglobulinas. As proteínas de fusão NgR-imunoglobulina desta divulgação, incluindo as do presente invento, podem ser incorporadas em composições farmacêuticas e administradas a um sujeito para inibir uma interacção entre o ligando de NgR e uma proteína NgR à superfície de uma célula, para deste modo suprimir a transdução de sinal mediada por NgR in vivo. As proteínas de fusão NgR-imunoglobulina podem ser utilizadas para afectar a biodisponibilidade de um ligando cognato de NgR. A inibição da interacção ligando de NgR/NgR pode ser terapeuticamente útil tanto para o tratamento de distúrbios proliferativos e de diferenciação, bem como para modulação (p.ex., promoção ou inibição) da sobrevivência celular. Para além disso, as proteínas de fusão NgR-imunoglobulina desta divulgação, incluindo as do presente invento, podem ser 60 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT utilizadas como imunogénios para produzir anticorpos anti-NgR num sujeito, para purificar ligandos de NgR, e em ensaios de pesquisa para identificar moléculas que inibam a interacção de NgR com o ligando de NgR.

Uma proteína quimérica ou de fusão de NgR desta divulgação, p.ex., uma proteína de fusão de NgR do presente invento, pode ser produzida através de técnicas padrão de ADN recombinante. Por exemplo, fragmentos de ADN codificando para as diferentes sequências polipeptídicas são ligados uns com os outros enquadrados de acordo com técnicas convencionais, p.ex., através do emprego de terminais tornados cegos ou tornados desfasados para ligação, digestão com enzimas de restrição para proporcionar terminais apropriados, preenchimento de extremidades coesivas conforme apropriado, tratamento com fosfatase alcalina para evitar união indesejável e ligação enzimática. Noutra concretização, o gene de fusão pode ser sintetizado através de técnicas convencionais incluindo sintetizadores automáticos de ADN. Alternativamente, pode ser realizada amplificação por PCR de fragmentos génicos utilizando iniciadores âncora que dão origem a pontas salientes complementares entre dois fragmentos génicos consecutivos que podem ser subsequentemente ligados e re-amplifiçados para gerar uma sequência génica quimérica (ver, por exemplo, Ausubel et al., (Eds.) "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, 1992). Para além disso, estão comercialmente disponíveis muitos vectores de expressão que codificam já uma porção da fusão (p.ex., um polipéptido GST). Um ácido nucleico codificando NgR pode ser clonado num tal vector de expressão para que a porção de fusão seja ligada enquadrada à proteína NgR.

Variantes resultantes da expressão noutros sistemas de vectores estão também contempladas.

As variantes de inserção incluem também proteínas de fusão em que o terminal amino e/ou o terminal carboxilo de NgR é/são fundidos com outro polipéptido.

Noutro aspecto, a divulgação proporciona variantes de deleção em que é removido um ou mais resíduos de aminoácidos de um polipéptido NgR. As deleções podem ser efectuadas num ou 61 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ em ambos os terminais do polipéptido NgR, ou com remoção de um ou mais resíduos de aminoácidos não terminais de NgR. As variantes de deleção incluem, portanto, todos os fragmentos de um polipéptido NgR. A divulgação engloba também fragmentos polipeptídicos da sequência exposta em SEQ ID NO:2, 4 ou 14 em que os fragmentos mantêm propriedades biológicas (p.ex., ligação ao ligando e/ou sinalização intracelular) imunológicas de um polipéptido NgR. Fragmentos compreendendo pelo menos 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ou 40 aminoácidos consecutivos de SEQ ID NO:2, 4 ou 14 são contemplados por esta divulgação. Os fragmentos polipeptídicos preferidos apresentam propriedades antigénicas únicas ou específicas do NgR humano e seus homólogos alélicos e específicos. Fragmentos dos polipéptidos desta divulgação possuindo as propriedades biológicas e imunológicas desejadas podem ser preparados através de qualquer um dos métodos bem conhecidos e rotineiramente praticados na arte.

Ainda noutro aspecto, a divulgação proporciona variantes de substituição dos polipéptidos NgR. As variantes de substituição incluem os polipéptidos em que um ou mais dos resíduos de aminoácidos de um polipéptido NgR são removidos e substituídos por resíduos alternativos. Num aspecto, as substituições são de natureza conservativa; no entanto, a divulgação engloba também substituições que são não conservativas. Substituições conservativas para este fim podem ser definidas tal como exposto nas Tabelas 2, 3 ou 4 abaixo.

Tabela 1

Xaa# (com base num domínio NTLRRCT) Coluna I (Rl, R2, R3) Coluna II (apenas R2+R3) Xi G, R, M X2 A, D, C x3 H > x4 N, P, S x5 E, A, S Xe nada, K nada X7 V, Μ, P Xs T, V V 62

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Xaa# (com base num domínio NTLRRCT) Coluna I (Rl, R2, R3) Coluna II (apenas R2+R3) Xg Q, P Q Xio Q, A Q Xn Q, Η, N Xl2 G, N N Xl3 L, F F Xl4 Q, A, S Xl5 A, S Xl6 V, I Xl7 V, T, E, L Xl8 S, G Xl9 L, I X20 A, E, V, P X21 A, S, D X22 S, T X23 Q, E X24 IVL X25 Q,H Q X26 N, G N X21 R, L X28 T, G, R, S X29 f,l,t,h X30 L, V L X31 Q,R,P X32 Q,p,a P X33 G, A G X34 H,T, S X35 S, G, R X36 P, S,A X37 C, nada nada X39 R, nada nada X39 A, N X O M, L X41 V,L,T 63

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Xaa# (com base num domínio NTLRRCT) Coluna I (R1, R2, R3) Coluna II (apenas R2+R3) X42 Τ, I Τ X43 L, I X44 Y,F,H LO sP X Ν, V Ν X46 I r L X47 Τ, S, Α X48 F, Υ, Τ, R X49 Α, Η, Υ, D X50 Ρ,Α Ρ X51 Ν, S,G,Α X52 Τ, Α Τ X53 Ε, R, Τ sP LO X G, Η LO LO X F, L A56 V, Q, Η X57 Η, Α, L X58 Ε, Q Ε X59 G, S G X60 R, Α R Xei Q, Η Q Χβ 2 R, Η Η Χβ 3 Τ, S Χβ 4 L, V L Χβ 5 Α, Ε, D Χββ Ε, D, Α Χβ 7 Q,H Q CO X V, Ε, G Χβ 9 Κ, R Χ70 Η, Q Χ?1 Α, S, Τ Χ72 Υ,Η Χ73 Υ r D Υ Χ74 Κ, R

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT β 4

Xaa# (com base num Coluna I (Rl, Coluna II domínio NTLRRCT) R2, R3) (apenas R2+R3) X75 G,Q X76 S, Q S X77 A, S, E X -j co P,G P X79 A,G,P Xso G, N Xsi I,V,L x82 G, R X83 Η, V, A sP CO X S, A s Χδ 5 D, E Χδ6 H, S, A Χδ 7 I,L Χδδ E,L,Q Χδ9 Υ,Η,Α X co 0 Q,P Q X91 D, N X92 I, L, T X93 V, A, R X94 V, A, G X95 S, T S X96 K, R X97 L, I L X9 δ W, R, S X9 9 S, L Χιοο L, V L X101 G,T,P X102 Q,P,E X103 G,H,R Xl04 I,T,V,A Xl05 V, G, H Xl06 N, S Xl07 E, G, Q 65

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Xaa# (com base num Coluna I (Rl, Coluna II domínio NTLRRCT) R2, R3) (apenas R2+R3) Xl08 Q,R Xl09 L, V Xno Q,A Xlll W, G, H Xll2 H,R,P Xll3 K, A, H Xll4 H, R Xll5 D, G Xll6 H, R,S,G Xll7 T, M Xll9 T, I Xll9 F,Y Xl20 N, A Xl21 S, N Xl22 T,A, S X123 E, S, A Xl24 Q,P Xl25 G, T Xl26 D, E D Xl27 C, A Xl28 P,D Xl29 V, G, P, R Xl30 A, S Xl31 E,Q Q Xl32 F, Y F Xl33 G, A, D Xl34 A,P Xl35 D, A, V Xl36 G, D Xl37 A, E Xl38 S,P Xl39 E, A Xl40 L,F 66 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Xaa# (com base num domínio NTLRRCT) Coluna I (Rl, R2, R3) Coluna II (apenas R2+R3) Xl41 R,Q Xl42 R, K R Xl43 R, K R Xl44 F, A Xl45 G, V Xl46 A, D, E Xl47 T,P Xl48 A, V, S Xl49 T, S, L Xl50 E, G,P,Q Xl51 L, E, R Xl52 R, L R Xl53 G, D Xl54 Q,h,a Xl55 Q,R Xl56 K, R Xl57 L, A, R Xl58 R, A R Xl59 V, A, E Xl60 E, A, N Xl61 F, L F Xl62 R,Q Xl63 N, A, G

Polipéptidos variantes incluem aqueles em que substituições conservativas foram introduzidas através de modificação de polinucleótidos codificando polipéptidos do presente invento. Os aminoácidos podem ser classificados de acordo com as propriedades físicas e a contribuição para a estrutura secundária e terciária da proteína. Uma substituição conservativa é reconhecida na arte como uma substituição de um aminoácido por outro aminoácido que tenha propriedades semelhantes. Substituições conservativas exemplares são expostas na Tabela 2 (de WO 97/09433, página 10, publicada a 67 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ 13 de Março de 1997 (PCT/GB96/02197, apresentado a 9/6/96), imediatamente abaixo).

Tabela 2

Substituições Conservativas I

CARACTERISTICA DA CADEIA LATERAL AMINOACIDO Alifática Não polar GAP I L V Polar sem carga C S T M N Q Polar com carga D E K R Aromática H F W Y Outras N Q D E

Alternativamente, os aminoácidos conservativos podem ser agrupados tal como descrito em Lehninger (Biochemistry,

Segunda Edição; Worth Publishers, Inc. NY, NY (1975) , pág 77) tal como exposto na Tabela 3, imediatamente abaixo. Tabela 3 Substituições Conservativas II CARACTERISTICA DA CADEIA LATERAL AMINOACIDO Não polar (hidrófoba) A. Alifática: A L I V P B. Aromática: F W C. Contendo Enxofre: M D. Limiar: G Polar sem carga A. Hidroxilo: S T Y B. Amidas: N Q C. Sulfidrilo: C D. Limiar: G Carregada Positivamente (Básico): K R H Carregada Negativamente (Ácido): D E 68 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Ainda como outra alternativa, substituições conservativas exemplificativas são expostas na Tabela 4, abaixo.

Tabela 4

Substituições Conservativas III

Resíduo Original Substituição Exemplificativa Ala (A) Vai, Leu, Ile Arg (R) Lys, Gin, Asn Asn (N) Gin, His, Lys, Arg Asp (D) Glu Cys (C) Ser Gin (Q) Asn Glu (E) Asp His (H) Asn, Gin, Lys, Arg Ile (I) Leu, Vai, Met, Ala, Phe, Leu (L) Ile, Vai, Met, Ala, Phe Lys (K) Arg, Gin, Asn Met (M) Leu, Phe, Ile Phe (F) Leu, Vai, ile, Ala Pro (P) Gly Ser (S) Thr Thr (T) Ser Trp (W) Tyr Tyr (Y) Trp, Phe, Thr, Ser Vai (V) Ile, Leu, Met, Phe, Ala

Adicionalmente, prevê-se também que os residuos de aminoácidos que são conservados entre os membros da família das proteínas NgR da presente divulgação, tal como indicado pelo alinhamento aqui apresentado, não sejam particularmente passíveis de alteração. Por exemplo, as proteínas NgR da presente divulgação podem conter pelo menos um domínio que seja uma região tipicamente conservada em NgR. Exemplos destes 69 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT domínios conservados incluem, p.ex., domínio de repetição rico em leucina. Resíduos de aminoácidos que não são conservados ou são apenas semi-conservados entre membros das proteínas NgR podem ser facilmente passíveis de alteração.

Os NgR inteiros têm uma região LRR caracterizada pela sequência de aminoácidos de consenso mostrada em SEQ ID NO:19. Pelo menos alguns NgR inteiros incluem também um domínio de sinalização CT (CTS) e um domínio GPI.

As designações dos domínios NgR aqui utilizadas são definidas como se segue:

Domínio hNgRl SEQ ID: 5 mNgRl SEQ ID NO:17 NgR2 SEQ ID: 2 hNgR3 SEQ ID: 14 mNgR3 SEQ ID: 4 Seq. de sinal 1-26 1-26 1-30 - 1-40 LRRNT 27-56 27-56 31-59 - 41-69 LRR1 57-81 57-81 60-82 5-27 70-92 LRR2 82-105 82-105 83-106 28-51 93-106 LRR3 106-130 106-130 107-131 52-76 106-141 LRR4 131-154 131-154 132-155 77-100 142-165 LRR5 155-178 155-178 156-179 101-124 166-189 LRR6 179-202 179-202 180-203 125-148 190-213 LRR7 203-226 203-226 204-227 149-172 214-237 LRR8 227-250 227-250 228-251 173-196 238-261 LRRCT 260-309 260-309 261-310 206-255 271-320 CTS (sinalização CT) 310-445 310-445 311-395 256-396 321-438 GPI 446-473 456-473 396-420 370-392 439-462

Nalguns casos, os domínios acima são modificados. A modificação pode ser de um modo que conserve a funcionalidade do domínio. A modificação pode incluir adição, deleção ou substituição de certos aminoácidos. Modificações exemplares incluem substituições de aminoácidos conservativas. De preferência, tais substituições totalizam 20 ou menos por 100 resíduos. De maior preferência, tais substituições totalizam 10 ou menos 100 resíduos. Outras modificações 70 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ exemplares incluem adição de sequências flanqueadoras de até cinco aminoácidos no terminal N e/ou terminal C de um ou mais dos domínios.

Nalguns casos, a molécula de ácido nucleico isolada codifica um polipéptido pelo menos cerca de 70%, 80%, 90%, 95%, 98% e de preferência pelo menos cerca de 99% homólogo a SEQ ID NO:2, 4 ou 14.

Podem ser introduzidas mutações em SEQ ID NO:l, 3 ou 13 através de técnicas padrão, p.ex., mutagénese dirigida ao local e mutagénese mediada por PCR. Podem ser feitas substituições de aminoácidos conservativas num ou mais resíduos de aminoácidos que se preveja serem não essenciais. Alternativamente, podem ser introduzidas mutações aleatoriamente ao longo de uma sequência de codificação de NgR. Isto pode ser alcançado, p.ex., através de mutagénese de saturação. Os mutantes resultantes podem ser pesquisados quanto a actividade biológica de NgR. As actividades biológicas de NgR podem incluir mas não se limitam a: (1) interacções proteína:proteína, p.ex., com outros NgR ou outras proteínas da superfície celular envolvidas em sinalização relacionada com Nogo; (2) formação de complexos com um ligando de NgR; (3) ligação a um anticorpo anti-NgR.

Deve entender-se que a definição de polipéptidos da divulgação pretende incluir polipéptidos possuindo modificações para além de inserção, deleção ou substituição de resíduos de aminoácidos. Para fins de exemplo, as modificações podem ser de natureza covalente e incluir por exemplo, ligação química com polímeros, lípidos, outras porções orgânicas e inorgânicas. Tais derivados podem ser preparados para aumentar a semivida em circulação de um polipéptido ou podem ser desenhados para melhorar a capacidade de direccionamento do polipéptido para células, tecidos ou órgãos desejados. Semelhantemente, a divulgação engloba ainda polipéptidos NgR que foram modificados covalentemente para incluir um ou mais polímeros solúveis em água tais como polietilenoglicol, polioxietilenoglicol ou polipropilenoglicol. As variantes que apresentem propriedades de ligação ao ligando do NgR nativo e são expressas a níveis mais elevados, bem como as variantes que proporcionem receptores constitutivamente activos, são 71 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT particularmente úteis em ensaios da divulgação; as variantes são também úteis a proporcionar modelos celulares, tecidulares e animais de doenças/condições caracterizadas por actividade de NgR aberrante.

Composições de um polipéptido NgR quimicamente modificado nas quais o polipéptido NgR está ligado a um polimero estão incluídas dentro do âmbito da presente divulgação e invento. 0 polímero pode ser solúvel em água para prevenir a precipitação da proteína num ambiente aquoso, tal como um ambiente fisiológico. Polímeros solúveis em água podem ser seleccionados de entre o grupo que consiste em, por exemplo, polietilenoglicol (PEG), monometoxipolietilenoglicol, dextrano, celulose ou outros polímeros baseados em hidratos de carbono, poli(N-vinilpirrolidona)polietilenoglicol, homopolímeros de polipropilenoglicol, um copolímero de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polióis polioxietilados (p.ex. glicerol) e poli(álcool vinílico). 0 polímero seleccionado é habitualmente modificado para ter um único grupo reactivo, tal como um éster activo para acilação ou um aldeído para alquilação, para que o grau de polimerização possa ser controlado. Os polímeros podem ser de qualquer peso molecular e podem ser ramificados ou não ramificados, e podem também ser utilizadas misturas de tais polímeros. Quando o polímero NgR quimicamente modificado é destinado a utilização terapêutica, serão seleccionados para utilização polímeros farmaceuticamente aceitáveis.

Quando o polímero é para ser modificado através de uma reacção de acilação, o polímero deve ter um único grupo éster reactivo. Alternativamente, se o polímero é para ser modificado através de alquilação redutora, o polímero deve ter um único grupo aldeído reactivo. Um aldeído reactivo preferido é polietilenoglicol-propionaldeído, que é estável em água ou mono-Cl-ClO-alcoxi ou derivados ariloxi deste (ver Patente U.S. N.0 5252714). A peguilação de polipéptidos NgR pode ser realizada através de qualquer uma das reacções de peguilação conhecidas na arte, tal como descrito, por exemplo, nas seguintes referências: Focus on Growth Factors 3: 4-10, 1992; EP 0154316; e EP 0401384. De preferência, a peguilação é 72 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ realizada através de uma reacção de acilação ou uma reacção de alquilação com uma molécula de polietilenoglicol reactiva (ou um polímero análogo reactivo solúvel em água). Um polímero solúvel em água preferido para peguilação de polipéptidos tal como NgR é poliet ilenoglicol (PEG) . Tal como aqui se utiliza, pretende-se que "polietilenoglicol" englobe qualquer uma das formas de PEG que foram utilizadas para derivar outras proteínas, tais como mono(C1-C10)alcoxi- ou ariloxi-polietilenoglicol. A derivação química de polipéptidos NgR pode ser efectuada sob quaisquer condições adequadas utilizadas para fazer reagir uma substância biologicamente activa com uma molécula polimérica activada. Os métodos para preparação de polipéptidos NgR peguilados compreenderão geralmente os passos de (a) reacção do polipéptido com polietilenoglicol, tal como um éster reactivo ou derivado aldeído de PEG, sob condições através das quais o polipéptido NgR fica unido a um ou mais grupos PEG, e (b) obtenção dos produtos de reacção. Será aparente a um vulgar perito na arte seleccionar as condições reaccionais óptimas ou as reacções de acilação baseadas em parâmetros conhecidos e o resultado desejado.

Os polipéptidos polímero:NgR peguilados e outros podem ser geralmente utilizados para tratar condições que podem ser aliviadas ou moduladas através de administração dos polipéptidos NgR aqui descritos. No entanto, as moléculas de polipéptidos polímero:NgR quimicamente derivadas aqui divulgadas podem ter actividades adicionais, actividade biológica aumentada ou reduzida ou outras características tais como semivida aumentada ou diminuída em comparação com as moléculas não derivadas. Os polipéptidos NgR, fragmentos destes, variantes e derivados, podem ser empregues sozinhos, juntos ou em combinação com outras composições farmacêuticas. As citoquinas, factores de crescimento, antibióticos, anti-inflamatórios e/ou agentes quimioterapêuticos conforme apropriado para a indicação a tratar. A presente divulgação proporciona composições compreendendo polipéptidos purificados desta divulgação, p.ex. polipéptidos purificados do presente invento. Composições farmacêuticas preferidas compreendem, para além do polipéptido 73

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT desta divulgação, um diluente líquido, semi-sólido ou sólido farmaceuticamente aceitável (i.e., estéril e não tóxico) que serve como veículo, excipiente ou meio farmacêutico. Pode ser utilizado qualquer diluente conhecido na arte. Diluentes exemplares incluem, mas não se limitam a água, soluções salinas, monolaurato de polioxietileno-sorbitano, estearato de magnésio, metil- e propil-hidroxibenzoato, talco, alginatos, amidos, lactose, sacarose, dextrose, sorbitol, manitol, glicerol, fosfato de cálcio, óleo mineral e manteiga de cacau.

As variantes que apresentam propriedades de ligação ao ligando do NgR nativo e são expressas a níveis mais elevados, bem como as variantes que proporcionam receptores constitutivamente activos, são particularmente úteis em ensaios desta divulgação; as variantes são também úteis em ensaios da divulgação e a proporcionar modelos celulares, tecidulares e animais de doenças/condições caracterizadas por actividade de NgR aberrante.

Com o conhecimento da informação da sequência nucleotídica aqui divulgada, um perito na arte pode identificar e obter sequências nucleotídicas que codifiquem NgR de diferentes fontes (i.e., diferentes tecidos ou diferentes organismos) através de uma variedade de meios bem conhecidos dos peritos na arte e divulgados, por exemplo, por Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edição, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (1989) .

Por exemplo, o ADN que codifica NgR pode ser obtido através de pesquisa de ARNm, ADNc ou ADN genómico com sondas oligonucleotídicas geradas a partir da informação da sequência génica de NgR aqui proporcionada. As sondas podem ser marcadas com um grupo detectável, tal como um grupo fluorescente, um átomo radioactivo ou um grupo quimioluminescente de acordo com procedimentos conhecidos dos peritos na arte e utilizados em ensaios de hibridação convencionais, tal como descritos, por exemplo, por Sambrook et al., (1989) acima.

Uma molécula de ácido nucleico compreendendo qualquer uma das sequências nucleotídicas de NgR descritas acima pode ser alternativamente sintetizada através da utilização do 74

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT procedimento de reacção em cadeia da polimerase (PCR), com os iniciadores oligonucleotidicos de PCR produzidos a partir das sequências nucleotídicas aqui proporcionadas. Ver Patentes U.S. Nos. 4683195 para Mullis et al. e 4683202 para Mullis. A reacção de PCR proporciona um método para aumentar selectivamente a concentração de uma determinada sequência de ácido nucleico mesmo quando essa sequência não foi previamente purificada e está presente apenas numa única cópia numa determinada amostra. O método pode ser utilizado para amplificar ADN de cadeia simples ou de cadeia dupla. A essência do método envolve a utilização de duas sondas oligonucleotídicas para actuarem como iniciadores para a replicação dependente do molde, mediada pela polimerase, de uma molécula de ácido nucleico desejada.

Uma ampla variedade de metodologias alternativas de clonagem e amplificação in vitro é bem conhecida dos peritos na arte. Exemplos destas técnicas encontram-se, por exemplo, em Berger et al., "Guide to Molecular Cloning Techniques", Methods in Enzymology, 152 Academic Press, San Diego, CA.

As moléculas de ácido nucleico da presente divulgação, incluindo as do presente invento, e fragmentos derivados destas, são úteis para pesquisa de polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP) associado a certos distúrbios, bem como para mapeamento genético.

Anticorpos São também compreendidos pela presente divulgação anticorpos (p.ex., anticorpos monoclonais e policlonais, anticorpos de cadeia simples, anticorpos quiméricos, anticorpos bifuncionais/biespecíficos, anticorpos humanizados, anticorpos humanos e anticorpos com região determinante de complementaridade (CDR) enxertada, incluindo compostos que incluam sequências de CDR que reconheçam especificamente um polipéptido desta divulgação) específicos para NgR ou fragmentos deste. Os anticorpos e fragmentos de ligação ao antigénio que proporcionam um aspecto do presente invento são expostos nas reivindicações anexas. Os anticorpos preferidos desta divulgação e do presente invento são anticorpos humanos que são produzidos e identificados de acordo com métodos descritos em W093/11236 publicado a 20 de Junho de 1993. 75 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Fragmentos de anticorpo, incluindo Fab, Fab', F(ab'>2/ e Fv, são também proporcionados por esta divulgação e pelo presente invento. 0 termo "especifico para", quando utilizado para descrever os anticorpos desta divulgação, incluindo os anticorpos do presente invento, indica que as regiões variáveis dos anticorpos reconhecem e ligam-se exclusivamente a polipéptidos NgR (i.e., são capazes de distinguir polipéptidos NgR de outros polipéptidos NgR conhecidos em virtude de diferenças mensuráveis na afinidade de ligação, apesar da possivel existência de identidade, homologia ou semelhança de sequência localizada, entre NgR e tais polipéptidos). 0 péptido antigénico de NgR compreende pelo menos 8 resíduos de aminoácidos da sequência de aminoácidos em SEQ ID NO: 2, 4 ou 14 e engloba um epítopo de NgR para que um anticorpo criado contra o péptido forme um complexo imunitário específico com NgR. De preferência, o péptido antigénico compreende pelo menos 10 resíduos de aminoácidos, de preferência pelo menos 15 resíduos de aminoácidos, ainda de preferência pelo menos 20 resíduos de aminoácidos, e de maior preferência pelo menos 30 resíduos de aminoácidos. Epítopos preferidos englobados pelo péptido antigénico são regiões de NgR que se localizam à superfície da proteína, p.ex., regiões hidrófilas.

Entender-se-á que anticorpos específicos podem também interagir com outras proteínas (por exemplo, proteína A de S. aureus ou outros anticorpos em técnicas de ELISA) através de interacções com sequências fora da região variável dos anticorpos, e, em particular, na região constante da molécula. Ensaios de pesquisa para determinar a especificidade de ligação de um anticorpo desta divulgação, p.ex. um anticorpo do presente invento, são bem conhecidos e rotineiramente praticados na arte. Para uma discussão compreensiva de tais ensaios, ver Harlow et ai., em "Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press; Cold Spring Harbor, NY (1988), Capítulo 6. Anticorpos que reconheçam e se liguem a fragmentos dos polipéptidos NgR desta divulgação, p.ex. os polipéptidos do presente invento, estão também contemplados, desde que os anticorpos sejam específicos para polipéptidos NgR. Os anticorpos desta divulgação, incluindo os 76

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT anticorpos do presente invento, podem ser produzidos utilizando qualquer método bem conhecido e rotineiramente praticado na arte.

Para a produção de anticorpos policlonais, vários animais hospedeiros adequados (p.ex., coelho, cabra, ratinho ou outro mamífero) podem ser imunizados através de injecção com a proteína nativa ou uma variante sintética desta ou um derivado da anterior. Uma preparação imunogénica apropriada pode conter, por exemplo, proteína NgR expressa de forma recombinante ou um polipéptido NgR quimicamente sintetizado. A preparação pode ainda incluir um adjuvante. Vários adjuvantes utilizados para aumentar a resposta imunológica incluem, mas não se limitam a, adjuvante de Freund (completo e incompleto), géis minerais (p.ex., hidróxido de alumínio), substâncias de superfície activa (p.ex., lisolecitina, polióis plurónicos, polianiões, péptidos, emulsões em óleo, dinitrofenol, etc.), adjuvantes humanos tais como Bacille Calmette-Guerin e Corynebacterium parvum ou agentes imunoestimuladores semelhantes. Se desejado, as moléculas de anticorpo dirigidas contra NgR podem ser isoladas do mamífero (p.ex., do sangue) e ainda purificadas através de técnicas bem conhecidas, tais como cromatografia de proteína A para obter a fracção de IgG. 0 termo "anticorpo monoclonal" ou "composição de anticorpo monoclonal", tal como aqui se utiliza, refere-se a uma população de moléculas de anticorpo que contém apenas uma espécie de um local de ligação ao antigénio capaz de imuno-reagir com um determinado epítopo de NgR. Uma composição de anticorpo monoclonal apresenta assim tipicamente uma afinidade de ligação para uma determinada proteína NgR com a qual imuno-reage. Para preparação de anticorpos monoclonais dirigidos contra uma determinada NgR, ou derivados, fragmentos, análogos ou homólogos desta, pode ser utilizada qualquer técnica que proporcione a produção de moléculas de anticorpo através de cultura contínua de uma linha celular. Tais técnicas incluem, mas não se limitam à técnica de hibridoma (ver Kohler e Milstein, Nature 256: 495-497, 1975); a técnica de trioma; a

técnica de hibridoma de células B humanas (ver Kozbor et al., Immunol. Today 4: 72, 1983) e a técnica de hibridoma de EBV

para produzir anticorpos monoclonais humanos (ver Cole et al., (1985) em Monoclonal Antibodies and Câncer Therapy, Alan R 77

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Liss, Inc., págs. 77-96). Os anticorpos monoclonais humanos podem ser utilizados na prática desta divulgação incluindo a prática do presente invento e podem ser produzidos através da utilização de hibridomas humanos (ver Cote et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 80: 2026-2030, 1983) ou através de transformação de células B humanas com Vírus de Epstein-Barr in vitro (ver Cole et al., (1985), acima).

De acordo com esta divulgação, podem ser adaptadas técnicas para a produção de anticorpos de cadeia simples específicos para uma proteína NgR (ver p.ex., Patente U.S. N.° 4946778). Adicionalmente, podem ser adaptados métodos para a construção de bibliotecas de expressão de Fab (ver p.ex., Huse et al., Science 246: 1275-1281, 1989) para permitir uma identificação rápida e eficaz de fragmentos Fab monoclonais com a especificidade desejada para uma proteína NgR ou derivados, fragmentos, análogos ou homólogos desta. Anticorpos não humanos podem ser "humanizados" através de técnicas bem conhecidas na arte. Ver, p.ex., Patente U.S. N.° 5225539. Num método, as CDRs não humanas são inseridas num anticorpo humano ou sequência estrutural de anticorpo de consenso. Mais alterações podem então ser introduzidas na estrutura do anticorpo para modular a afinidade ou imunogenicidade. Fragmentos de anticorpo que contêm os idiotipos para uma proteína NgR podem ser produzidos através de técnicas conhecidas na arte incluindo, mas não se limitando a: (i) um fragmento F(ab')2 produzido através de digestão com pepsina de uma molécula de anticorpo; (ii) um fragmento Fab gerado através de redução das pontes dissulfureto de um fragmento F(ab')2; (iii) um fragmento Fab gerado através do tratamento da molécula de anticorpo com papaina e um agente de redução; e (iv) fragmentos Fv.

Adicionalmente, anticorpos anti-NgR recombinantes, tais como anticorpos monoclonais quiméricos e humanizados, compreendendo tanto porções humanas como não humanas, que podem ser produzidos utilizando técnicas padrão de ADN recombinante, estão dentro do âmbito desta divulgação e do presente invento. Tais anticorpos monoclonais quiméricos e humanizados podem ser produzidos através de técnicas de ADN recombinante conhecidas na arte, por exemplo utilizando métodos descritos no Pedido Internacional PCT N.° 78

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT PCT/US86/02269; Pedido de Patente Europeia N.° 184187; Pedido de Patente Europeia N.° 171496; Pedido de Patente Europeia N.° 173494; Publicação Internacional PCT N.° WO 86/01533; Pat. U.S. N.° 4816567; Pedido de Patente Europeia N.° 125023; Better et al., Science 240: 1041-1043, 1988; Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84: 3439-3443, 1987; Liu et al., J. Immunol. 139: 3521-3526, 1987; Sun et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84: 214-218, 198 7; Nishimura et al., Câncer Res. 47: 999-1005, 1987; Wood et al. , Nature 314: 446-449, 1985; Shaw et al., . J. Natl. Câncer Inst. 80: 1553-1559, 1988; Morrison, Science 229: 1202-1207, 1985; Oi et al., BioTechniques 4: 214, 1986; Patente U.S. N.° 5225539; Jones et al., Nature 321: 552-525, 1986; Verhoeyan et al., Science 239: 1534, 1988; e Beidler et al., J. Immunol. 141: 4053-4060, 1988.

De acordo com uma parte preferida desta divulgação, uma porção de um NgR é unida a uma porção Fc de um anticorpo para formar uma proteína de fusão NgR/Fc. De preferência, a proteína de fusão de Ig é solúvel. A proteína de fusão NgR/Fc pode ser formada através de técnicas recombinantes tal como descrito acima. Num caso, uma porção de um NgR incluindo a sequência de aminoácidos inteira de NgR excepto a região hidrófoba C-terminal é fundida com uma porção Fc de um anticorpo. Em casos preferidos, o NgR é um NgR humano e a Fc também é humana. De maior preferência, a porção Fc humana é derivada de um anticorpo IgG. Noutros casos, a sequência sinal N-terminal é omitida. Tais anticorpos são úteis na ligação a Nogo para impedir a sinalização de Nogo através do NgR.

Num caso, os métodos para a pesquisa de anticorpos que possuem a especificidade desejada incluem, mas não se limitam a, ensaio imunossorvente enzimático (ELISA) e outras técnicas imunologicamente mediadas conhecidas na arte. Num caso específico, a selecção de anticorpos que são específicos para um determinado domínio de uma proteína NgR é facilitada através da geração de hibridomas que se liguem ao fragmento de uma proteína NgR possuindo um tal domínio. Os anticorpos que são específicos para um ou mais domínios dentro de uma proteína NgR, p.ex., domínios abrangendo as regiões conservadas acima identificadas de NgR ou derivados, fragmentos, análogos ou homólogos destas, são também aqui proporcionados. 79 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Os anticorpos anti-NgR podem ser utilizados em métodos conhecidos na arte referentes à localização e/ou quantificação de uma proteína NgR (p.ex., para utilizar em medição de níveis da proteína NgR dentro de amostras fisiológicas apropriadas, para utilizar em métodos de diagnóstico, para utilizar em imagiologia da proteína e semelhantes). Num dado caso, anticorpos para proteínas NgR, ou derivados, fragmentos, análogos ou homólogos destas, que contenham o domínio de ligação derivado do anticorpo, são utilizados como compostos farmacologicamente activos (daqui em diante “Produtos terapêuticos").

Um anticorpo anti-NgR (p.ex., anticorpo monoclonal) pode ser utilizado para isolar NgR através de técnicas padrão, tais como cromatografia de afinidade ou imunoprecipitação. Um anticorpo anti-NgR pode facilitar a purificação de NgR natural a partir de células e de NgR produzido e forma recombinante expresso em células hospedeiras. Para além disso, um anticorpo anti-NgR pode ser utilizado para detectar proteína NgR (p.ex., num lisado celular ou sobrenadante celular) para avaliar a abundância e o padrão de expressão da proteína NgR. Os anticorpos anti-NgR podem ser utilizados como diagnóstico para monitorizar níveis da proteína em tecido como parte de um procedimento de testes clínicos, p.ex., para determinar a eficácia de um dado regime de tratamento. A detecção pode ser facilitada através de ligação (i.e., ligação física) do anticorpo a uma substância detectável. Exemplos de substâncias detectáveis incluem várias enzimas, grupos prostéticos, materiais fluorescentes, materiais luminescentes, materiais bioluminescentes e materiais radioactivos. Exemplos de enzimas adequadas incluem peroxidase de rábano, fosfatase alcalina, β-galactosidase ou acetilcolinesterase; exemplos de complexos de grupos protéticos adequados incluem estreptavidina/biotina e avidina/biotina; exemplos de materiais fluorescentes adequados incluem umbeliferona, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, rodamina, diclorotriazinilamina fluoresceína, cloreto de dansilo ou ficoeritrina; um exemplo de um material luminescente inclui luminol; exemplos de materiais bioluminescentes incluem luciferase, luciferina e aequorina, e exemplos de um material radioactivo adequado incluem 125I, 131I, 35S ou 3H. 80 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Outro aspecto da presente divulgação é dirigido a métodos de indução de uma resposta imunitária num mamífero contra um polipéptido desta divulgação através de administração ao mamífero de uma quantidade do polipéptido suficiente para induzir uma resposta imunitária. A quantidade será dependente da espécie animal, do tamanho do animal, e semelhantes mas pode ser determinada pelos peritos na arte.

Outro aspecto desta divulgação é dirigido a anticorpos anti-idiotípicos e anticorpos anti-anti-idiotípicos. Um anticorpo anti-idiotípico é um anticorpo que reconhece determinantes de outro anticorpo (um anticorpo alvo). Geralmente, o anticorpo anti-idiotípico reconhece determinantes do local de ligação ao antigénio do anticorpo alvo. Tipicamente, o anticorpo alvo é um anticorpo monoclonal. Um anticorpo anti-idiotípico é geralmente preparado através de imunização de um animal (particularmente, ratinhos) da mesma espécie e tipo genético como fonte do anticorpo monoclonal alvo, com o anticorpo monoclonal alvo. O animal imunizado monta uma resposta imunitária para os determinantes idiotípicos do anticorpo monoclonal alvo e produz anticorpos contra os determinantes idiotípicos do anticorpo monoclonal alvo. Células produtoras de anticorpos, tais como células esplénicas, do animal imunizado podem ser utilizadas para gerar anticorpos monoclonais anti-idiotípicos. Para além disso, um anticorpo anti-idiotípico pode também ser utilizado para imunizar animais para produzir anticorpos anti-anti-idiotípicos. Estes animais imunizados podem ser utilizados para gerar anticorpos monoclonais anti-anti-idiotípicos utilizando técnicas padrão. Os anticorpos anti-anti-idiotípicos podem ligar-se ao mesmo epítopo que o anticorpo monoclonal alvo original utilizado para preparar o anticorpo anti-idiotípico. Os anticorpos anti-anti-idiotípicos representam outros anticorpos monoclonais com a mesma especificidade de antigénio que o anticorpo monoclonal alvo original.

Se a ligação do anticorpo anti-idiotípico com o anticorpo alvo for inibida pelo antigénio relevante do anticorpo alvo e se o anticorpo anti-idiotípico induzir uma resposta de anticorpos com a mesma especificidade que o anticorpo alvo, 81

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT este imita o antigénio do anticorpo alvo. Um tal anticorpo anti-idiotipico é um "anti-idiotipo de imagem interna" e é capaz de induzir uma resposta de anticorpos como se fosse o antigénio original. (Bona e Kohler (1984) Anti-idiotipico Antibodies and Internai Image, in Monoclona and Anti-idiotipico Antibodies: Probes for Receptor Structure and Function", Venter J.C. et al., (Eds), Alan, R. Liss, New York, NY, págs. 141-149, 1984). Foi mostrado que vacinas incorporando anticorpos anti-idiotipo de imagem interna induzem respostas protectoras contra vírus, bactérias, e parasitas (Kennedy et al., (1986) 232: 220-223, 1047; McNamara et al., Science 226: 1325-1326, 1985). Foi também mostrado que os anticorpos anti-idiotípicos de imagem interna induzem imunidade a antigénios relacionados com tumores (Raychauhuri et al., J. Immunol. 137: 1743-1749, 1986; Raychauhuri et al., J. Immunol. 139: 3902-3910, 1987; Bhattacharya-Chatterjee et al., J. Immunol. 139: 1354-13601987; Bhattacharya-Chatterjee et al., J. Immunol. 141: 1398-1403, 1988; Herlyn et al. ,

Intern. Rev. Immunol. 4: 347-357, 1989; Chen et al., Cell Imm. Immunother. Câncer 351-359, 1990; Herlyn et al. , In vivo 5: 615-624, 1991; Furuya et al., AntiCancer Res. 12. 27-32, 1992; Mittelman, A. et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89: 466-470, 1992; Durrant et al., Câncer Res. 54: 4837-4840, 1994;

Mittelman et al., Câncer Res. 54: 415-421, 1994; Schmitt et al., Hybridoma 13: 389-396, 1994; Chakrobarty et al., J.

Immunother. 18: 95-103, 1995; Chakrobarty et al., Câncer Res. 55: 1525-1530, 1995; Foon, K. A. et al., Clin. Câncer Res. 1: 1205-1294, 1995; Herlyn et al., Hybridoma 14: 159-166, 1995;

Sclebusch et al., Hybridoma 14: 167-174, 1995; Herlyn et al., Câncer Immunol Immunother. 43: 65-76, 1996).

Os anticorpos anti-idiotípicos para NgR podem ser preparados, por exemplo, através da imunização de um animal, tal como um ratinho, com uma quantidade imunogénica de uma composição compreendendo NgR2 (SEQ ID NO: 2), NgR3 (SEQ ID NOs:4 ou 14), ou uma porção imunogénica destas, contendo pelo menos um epítopo antigénico de NgR. A composição pode também conter um adjuvante adequado, e qualquer transportador necessário para proporcionar imunogenicidade. Os anticorpos monoclonais que reconhecem NgR podem ser preparados a partir das células do animal imunizado tal como descrito acima. Um anticorpo monoclonal reconhecendo um epítopo de NgR é então 82 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ seleccionado e utilizado para preparar uma composição compreendendo uma quantidade imunogénica do anticorpo monoclonal anti-NgR. Tipicamente, uma dose de 25 a 200 yg de monoclonal anti-NgR purificado seria suficiente num adjuvante adequado.

Os animais podem ser imunizados 2-6 vezes em intervalos de 14 a 30 dias entre doses. Tipicamente, os animais são imunizados através de qualquer via de administração adequada, tal como intraperitoneal, subcutânea, intravenosa ou uma combinação destas. A produção de anticorpo anti-idiotípico pode ser monitorizada durante o período de imunização utilizando métodos de imunoensaio padrão. Os animais com títulos de anticorpo adequados reactivos com os anticorpos monoclonais alvo podem ser re-imunizados com o anticorpo monoclonal utilizado como imunogénio três dias antes da colheita das células produtoras de anticorpo. De preferência, são utilizadas células do baço, embora possam ser seleccionadas outras células produtoras de anticorpos. As células produtoras de anticorpos são colhidas e fundidas com células de mieloma para produzir Hibridomas, tal como descrito acima, e são seleccionadas as células produtoras de anticorpos anti-idiotípicos adequadas.

Os anticorpos anti-anti-idiotípicos são produzidos através de outro ciclo de imunização e produção de Hibrldoma através da utilização do anticorpo monoclonal anti-idiotípico como imunogénio.

Os anticorpos desta divulgação, incluindo anticorpos do presente invento, são úteis para, p.ex., fins terapêuticos (através de modulação da actividade de NgR), fins de diagnóstico para detectar ou quantificar NgR, e purificação de NgR. Portanto, estojos compreendendo um anticorpo desta divulgação, p.ex., um anticorpo do presente invento, para qualquer um dos fins aqui descritos estão também compreendidos.

Estojos A presente divulgação é também dirigida a estojos, incluindo estojos farmacêuticos. Os estojos podem compreender qualquer uma das moléculas de ácido nucleico descritas acima, 83 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ qualquer um dos polipéptidos descritos acima, ou qualquer anticorpo que se ligue a um polipéptido da divulgação tal como descrito acima, bem como controlos apropriados, tais como controlos positivos e/ou negativos. 0 estojo compreende de preferência componentes adicionais, tais como, por exemplo, instruções, suporte sólido, reagentes úteis para quantificação e semelhantes. Por exemplo, o estojo pode compreender: um composto ou agente marcado capaz de detectar proteína ou ARNm de NgR numa amostra biológica; meios para determinação da quantidade de NgR na amostra; e meios para comparação da quantidade de NgR na amostra com um padrão. 0 composto ou agente pode ser embalado num recipiente adequado.

Ensaios de Pesquisa A informação da sequência de ADN e de aminoácidos proporcionada pela presente divulgação torna também possível a identificação de compostos parceiros de ligação com os quais um polipéptido ou polinucleótido de NgR interagirá. Métodos para identificar compostos parceiros de ligação incluem ensaios em solução, ensaios in vitro em que os polipéptidos NgR são imobilizados e ensaios baseados em células. A identificação de compostos parceiros de ligação de polipéptidos NgR proporciona candidatos para intervenção terapêutica ou profilática em patologias associadas a actividade biológica normal e aberrante de NgR. A divulgação proporciona também um método (também aqui referido como um "ensaio de pesquisa") para identificação de moduladores, i.e., compostos ou agentes candidatos ou de teste (p.ex., péptidos, peptidomiméticos, moléculas pequenas (p.ex., moléculas de menos de cerca de 1000 Daltons) ou outros fármacos) que se ligam a proteínas NgR ou têm um efeito estimulador ou inibidor, por exemplo, na expressão de NgR ou actividade de NgR.

Num caso, a divulgação proporciona ensaios para pesquisa de compostos candidatos ou de teste que se liguem a ou modulem a actividade de uma proteína ou polipéptido NgR ou porção biologicamente activa deste. Os compostos de teste da presente divulgação podem ser obtidos utilizando qualquer uma das numerosas abordagens em métodos de bibliotecas combinatórias conhecidos na arte, incluindo: bibliotecas biológicas; 84

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT bibliotecas de fase sólida ou fase em solução paralelas espacialmente abordáveis; métodos de bibliotecas sintéticas requerendo desconvolução; o método de bibliotecas "uma conta um composto"; e métodos de bibliotecas sintéticas utilizando selecção por cromatografia de afinidade. A abordagem de biblioteca biológica está limitada a bibliotecas peptídicas, enquanto as outras quatro abordagens são aplicáveis a bibliotecas de compostos peptídicos, oligómeros não peptídicos ou de molécula pequena (Lam Anticancer Drug Des. 12: 145, 1997).

Exemplos de métodos para a síntese de bibliotecas moleculares podem ser verificados na arte, por exemplo, em: DeWitt et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 6909, 1993; Erb et al., Proc. Natl. Acad. Scl. USA 91: 11422, 1994; Zuckermann et al., J. Med. Chem. 37: 2678, 1994; Cho et al., Science 261: 1303, 1993; Carrell et al., Angew Chem. Int. Ed. Engl. 33: 2059, 1994; Carell et al., Angew Chem. Int. Ed. Engl. 33: 2061, 1994; e Gallop et al., J. Med. Chem. 37: 1233, 1994.

As bibliotecas de compostos podem ser apresentadas em solução (p.ex., Houghten, BioTechniques 13: 412-421, 1992), ou em contas (Lam, Nature 354: 82-84, 1991), em chips (Fodor, Nature 364: 555-556, 1993), bactérias (Ladner, Patente U.S. N.° 5223409), esporos (Ladner, acima), plasmídeos (Cull et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89: 1865-1869, 1992) ou em fagos (Scott e Smith, Science 249: 386-390, 1990; Devlin, Science 249: 404-406, 1990; Cwirla et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87: 6378-6382, 1990; Felici, J. Mol. Biol. 222: 301-310, 1991; Ladner, acima). 1. Ensaios Baseados em Células A divulgação proporciona também ensaios baseados em células para identificar compostos parceiros de ligação de um polipéptido NgR. Num caso, a divulgação proporciona um método compreendendo os passos de pôr em contacto um polipéptido NgR expresso à superfície de uma célula com um composto parceiro de ligação candidato e de detecção da ligação do composto parceiro de ligação candidato ao polipéptido NgR. Noutro caso, um ensaio é um ensaio baseado em células compreendendo pôr em contacto uma célula expressando uma forma ligada à membrana da proteína NgR, ou uma porção biologicamente activa desta, à 85

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT superfície da célula com um composto de teste e a determinação da capacidade do composto de teste para modular (p.ex., estimular ou inibir) a actividade da proteína NgR ou porção biologicamente activa desta.

Num caso, um ensaio é um ensaio baseado em células em que uma célula que expressa uma forma ligada à membrana da proteína NgR, ou uma porção biologicamente activa desta, à superfície celular é posta em contacto com um composto de teste e a capacidade do composto de teste para se ligar a uma proteína NgR é determinada. A célula pode, por exemplo, ser de origem em mamífero ou uma célula de levedura. A determinação da capacidade do composto de teste para se ligar à proteína NgR pode ser alcançada, por exemplo, através da ligação do composto de teste a um marcador radioisótopo ou enzimático para que a ligação do composto de teste à proteína NgR ou porção biologicamente activa desta possa ser determinada através da detecção do composto marcado num complexo. Por exemplo, os compostos de teste podem ser marcados com 125I, 35S, 14C ou 3H, directamente ou indirectamente, e o radioisótopo detectado através de contagem directa da radioemissão ou através de contagem de cintilações. Alternativamente, os compostos de teste podem ser marcados enzimaticamente com, por exemplo, peroxidase de rábano, fosfatase alcalina ou luciferase, e o marcador enzimático detectado através de determinação da conversão de um substrato apropriado em produto. Num caso, o ensaio compreende pôr em contacto uma célula que expressa uma forma ligada à membrana da proteína NgR ou uma porção biologicamente activa desta, à superfície celular com um composto conhecido que se ligue a NgR para formar uma mistura de ensaio, pôr em contacto a mistura de ensaio com um composto de teste e determinação da capacidade do composto de teste para interagir com uma proteína NgR, em que a determinação da capacidade do composto de teste para interagir com uma proteína NgR compreende a determinação da capacidade do composto de teste para se ligar preferencialmente a NgR ou a uma porção biologicamente activa deste em comparação com o composto conhecido. A determinação da capacidade do composto de teste para modular a actividade de NgR ou uma porção biologicamente activa desta pode ser alcançada, por exemplo, através da 86 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ determinação da capacidade da proteína NgR para se ligar ou interagir com uma molécula alvo de NgR. Tal como aqui se utiliza, uma "molécula alvo" é uma molécula com a qual uma proteína NgR se liga ou interage na natureza, por exemplo, uma molécula à superfície de uma célula que expressa uma proteína NgR, uma molécula à superfície de uma segunda célula, uma molécula no meio extracelular, uma molécula associada à superfície interna de uma membrana celular ou uma molécula citoplasmática. Uma molécula alvo de NgR pode ser uma molécula não NgR ou uma proteína ou polipéptido NgR da presente divulgação, p.ex., do presente invento. Num caso, uma molécula alvo de NgR é uma componente de uma via de transdução de sinal que facilita a transdução de um sinal extracelular (p.ex., um sinal gerado através da ligação de um composto a uma molécula NgR ligada à membrana) através da membrana celular e para dentro da célula. 0 alvo, por exemplo, pode ser uma segunda proteína intercelular que tenha actividade catalítica ou uma proteína que facilite a associação de moléculas de sinalização a jusante com NgR. Num caso preferido, a detecção compreende detecção de um fluxo de cálcio ou outro evento fisiológico na célula causado pela ligação da molécula.

Moléculas de ligação específicas, incluindo ligandos naturais e compostos sintéticos, podem ser identificadas ou desenvolvidas utilizando produtos NgR isolados ou recombinantes, variantes de NgR ou, de preferência, células expressando tais produtos. Parceiros de ligação são úteis para purificação de produtos NgR e detecção ou quantificação de produtos NgR em amostras de fluidos e tecidos utilizando procedimentos imunológicos conhecidos. As moléculas de ligação são também manifestamente úteis em modulação (i.e., bloqueio, inibição ou estimulação) de actividades biológicas de NgR, especialmente as actividades envolvidas em transdução de sinal. 2. Ensaios Livres de Células (a) Ligação directa: A divulgação inclui vários sistemas de ensaio para identificação de parceiros de ligação de NgR. Em ensaios em solução, os métodos da divulgação compreendem os passos de (a) pôr em contacto um polipéptido NgR com um ou mais compostos 87 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT parceiros de ligação candidatos e (b) identificação dos compostos que se ligam ao polipéptido NgR. A identificação dos compostos que se ligam ao polipéptido NgR pode ser alcançada através de isolamento do complexo polipéptido NgR/parceiro de ligação e separação do composto parceiro de ligação do polipéptido NgR. Um passo adicional de caracterização das propriedades físicas, biológicas e/ou bioquímicas do composto parceiro de ligação está também compreendido noutra parte da divulgação. Num aspecto, o complexo polipéptido NgR/parceiro de ligação é isolado utilizando um anticorpo imunoespecífico para o polipéptido NgR ou o composto parceiro de ligação candidato.

Ainda noutros casos, o polipéptido NgR ou o composto parceiro de ligação candidato compreende um marcador ou etiqueta que facilite o seu isolamento, e os métodos desta divulgação para identificar compostos parceiros de ligação incluem um passo de isolamento do complexo polipéptido NgR/parceiro de ligação através da interacção com o marcador ou etiqueta. Uma etiqueta exemplar deste tipo é uma sequência poli-histidina, geralmente em torno de seis resíduos de histidina, que permite o isolamento de um composto assim marcado utilizando quelação com níquel. Outros marcadores e etiquetas, tais como a etiqueta FLAG® (Eastman Kodak, Rochester, NY) , bem conhecidos e rotineiramente utilizados na arte, estão englobados pela divulgação. (b) NgR imobilizado

Numa variação de um ensaio in vitro, a divulgação proporciona um método compreendendo os passos de (a) pôr em contacto um polipéptido NgR imobilizado, ou um fragmento biologicamente activo deste, com um composto parceiro de ligação candidato e (b) detecção da ligação do composto candidato ao polipéptido NgR. Numa variação alternativa, o composto parceiro de ligação candidato é imobilizado e é detectada a ligação a NgR. A imobilização é alcançada utilizando qualquer um dos métodos bem conhecidos na arte, incluindo ligação covalente a um suporte, uma conta ou uma resina cromatográfica, bem como interacções não covalentes, de elevada afinidade tais como ligação de anticorpo, ou utilização de ligação estreptavidina/biotina em que o composto imobilizado inclui uma porção biotina. A ligação de um 88 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ composto de teste a NgR, ou a interacção de NgR com uma molécula alvo na presença e ausência de um composto candidato, pode ser alcançada em qualquer vaso adequado para conter os reagentes. Exemplos de tais vasos incluem placas de microtitulação, tubos de ensaio e tubos de micro-centrifuga. Num caso, pode ser proporcionada uma proteína de fusão que adiciona um domínio que permite que uma ou ambas as proteínas sejam ligadas a uma matriz. Por exemplo, e não para fins de limitação, proteínas de fusão GST-NgR ou proteínas de fusão GST-alvo podem ser adsorvidas em contas de glutationa-Sepharose (Sigma Chemical, St. Louis, MO) ou placas de microtitulação com glutationa derivada, que são então combinadas com o composto de teste ou com a proteína alvo não adsorvida ou proteína NgR, e a mistura é incubada sob condições que conduzam à formação do complexo (p.ex., a condições fisiológicas para sal e pH) . Após incubação, as contas ou poços das placas de microtitulação são lavados para remover quaisquer componentes não ligados, a matriz é imobilizada no caso de contas e os complexos são determinados directamente ou indirectamente, por exemplo, tal como descrito acima. Alternativamente, os complexos podem ser dissociados da matriz e o nível de ligação de NgR ou a actividade determinados utilizando técnicas padrão.

Outras técnicas para imobilização de proteínas em matrizes podem também ser utilizadas nos ensaios de pesquisa da divulgação. Por exemplo, o NgR ou a sua molécula alvo podem ser imobilizados utilizando conjugação de biotina e estreptavidina. 0 NgR ou moléculas alvo biotinilados podem ser preparados a partir de biotina-NHS (N-hidroxissuccinimida) utilizando técnicas bem conhecidas na arte (p.ex., estojo de biotinilação, Pierce Chemicals, Rockford, IL), e imobilizados nos poços de placas de 96 poços revestidas com estreptavidina (Pierce Chemical). Alternativamente, anticorpos reactivos com NgR ou moléculas alvo, mas que não interfiram com a ligação da proteína NgR à sua molécula alvo, podem ser derivados para os poços da placa, e o alvo não ligado ou o NgR aprisionado nos poços através de conjugação com o anticorpo. Os métodos para detecção de tais complexos, para além dos descritos acima para os complexos imobilizados com GST, incluem imunodetecção de complexos utilizando anticorpos reactivos com o NgR ou a molécula alvo, bem como ensaios ligados a enzimas que se 89 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT baseiam na detecção de uma actividade enzimática associada à NgR ou à molécula alvo. A detecção de ligação pode ser alcançada (i) utilizando um marcador radioactivo no composto que não está imobilizado, (ii) utilizando um marcador fluorescente no composto não imobilizado, (iii) utilizando um anticorpo imunoespecífico para o composto não imobilizado, (iv) utilizando um marcador no composto não imobilizado que excita um suporte fluorescente ao qual o composto imobilizado está unido, (v) determinando a actividade do NgR, bem como outras técnicas bem conhecidas e rotineiramente praticadas na arte. A determinação da actividade da molécula alvo pode, por exemplo, ser alcançada através de detecção da indução de um segundo mensageiro celular do alvo (i.e., Ca2+ intracelular, diacilglicerol, IP3, etc.), detecção de actividade catalitica/enzimática do alvo num substrato apropriado, detecção da indução de um gene repórter (compreendendo um elemento regulador que responda a NgR operativamente ligado a um ácido nucleico codificando um marcador detectável, p.ex., luciferase), ou detecção de uma resposta celular, por exemplo, sobrevivência celular, diferenciação celular ou proliferação celular. (c) Experiências de competição

Ainda noutro caso, o ensaio compreende pôr em contacto a proteína NgR ou uma porção biologicamente activa desta com um composto conhecido que se ligue a NgR para formar uma mistura de ensaio, pôr em contacto a mistura de ensaio com um composto de teste, e determinação da capacidade do composto de teste para interagir com uma proteína NgR, em que a determinação da capacidade do composto de teste para interagir com uma proteína NgR compreende a determinação da capacidade do composto de teste para se ligar preferencialmente a NgR ou a uma porção biologicamente activa desta em comparação com o composto conhecido.

Ainda noutro caso, o ensaio livre de células compreende pôr em contacto a proteína NgR ou uma porção biologicamente activa desta com um composto conhecido que se ligue a NgR para formar uma mistura de ensaio, pôr em contacto a mistura de 90 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ensaio com um composto de teste, e determinação da capacidade do composto de teste para interagir com uma proteína NgR, em que a determinação da capacidade do composto de teste para interagir com uma proteína NgR compreende a determinação da capacidade da proteína NgR para modular a actividade de uma molécula alvo de NgR.

Os ensaios livres de células da presente divulgação são passíveis de utilização tanto na forma solúvel como na forma ligada à membrana de NgR. No caso de ensaios livres de células compreendendo a forma ligada à membrana de NgR, pode ser desejável utilizar um agente solubilizante para que a forma ligada à membrana de NgR seja mantida em solução. Exemplos de tais agentes solubilizantes incluem detergentes não iónicos tais como n-octilglucósido, n-dodecilglucósido, n-dodecilmaltósido, octanoil-N-metilglucamida, decanoil-N-metilglucamida, Triton® X-100, Triton® X-114, Thesit®, Isotridecipoli(éter etilenoglicólico)n, sulfonato de 3 — (3 — colamidopropil)dimetilaminiol-l-propano (CHAPS), sulfonato de 3-(3-colamidopropil)dimetilaminiol-2-hidroxi-l-propano (CHAPSO) ou sulfonato de N-dodecil-N,N-dimetil-3-amónio-l-propano.

Moduladores

Os agentes que modulam (i.e., aumentam, diminuem ou bloqueiam) a actividade ou expressão de NgR podem ser identificados através da incubação de um putativo modulador com uma célula contendo um polipéptido ou polinucleótido de NgR e determinação do efeito do putativo modulador na actividade ou expressão de NgR. A selectividade de um composto que module a actividade de NgR pode ser avaliada através da comparação dos seus efeitos em NgR com o seu efeito noutros compostos de NgR. Moduladores selectivos podem incluir, por exemplo, anticorpos e outras proteínas, péptidos ou moléculas orgânicas que se liguem especificamente a um polipéptido NgR ou um ácido nucleico codificando NgR. Os moduladores da actividade de NgR serão terapeuticamente úteis no tratamento de doenças e condições fisiológicas nas quais está envolvida actividade normal ou aberrante de NgR. Os polinucleótidos, polipéptidos e moduladores de NgR podem ser utilizados no tratamento de doenças e condições associadas a desmielinização. Os polinucleótidos e polipéptidos NgR, bem 91 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT como os moduladores de NgR, podem também ser utilizados em ensaios de diagnóstico para tais doenças ou condições. Métodos da divulgação para identificar moduladores incluem variações de qualquer um dos métodos descritos acima para identificar compostos parceiros de ligação, incluindo as variações técnicas em que um composto parceiro de ligação foi identificado e o ensaio de ligação é realizado na presença e ausência de um modulador candidato. Um modulador é identificado nos casos onde a ligação entre o polipéptido NgR e o composto parceiro de ligação se altera na presença do modulador candidato em comparação com ligação na ausência do composto modulador candidato. Um modulador que aumente a ligação entre o polipéptido NgR e o composto parceiro de ligação é descrito como um estimulador ou activador, e um modulador que diminua a ligação entre o polipéptido NgR e o composto parceiro de ligação é descrito como um inibidor.

Noutro caso, os moduladores da expressão de NgR podem ser identificados num método em que uma célula é posta em contacto com um composto candidato e é determinada a expressão de ARNm de NgR ou da proteína na célula. 0 nível de expressão de ARNm de NgR ou da proteína na presença do composto candidato é comparado ao nível de expressão de ARNm de NgR ou da proteína na ausência do composto candidato. 0 composto candidato pode então ser identificado como um modulador da expressão de NgR com base nesta comparação. Por exemplo, quando a expressão de ARNm de NgR ou da proteína é superior (estatisticamente significativamente maior) na presença do composto candidato que na sua ausência, o composto candidato é identificado como um estimulador do ARNm de NgR ou da expressão da proteína. Alternativamente, quando a expressão de ARNm de NgR ou da proteína é inferior (estatisticamente significativamente menor) na presença do composto candidato que na sua ausência, o composto candidato é identificado como um inibidor da expressão de ARNm de NgR ou da proteína. 0 nível de expressão de ARNm de NgR ou de proteína nas células pode ser determinado através de métodos aqui descritos para detecção de ARNm de NgR ou da proteína. 92 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Pesquisa de Elevada Tiragem A divulgação compreende também ensaios de pesquisa de elevada tiragem (HTS) para identificar compostos que interajam com ou inibam a actividade biológica (i.e., afectam a actividade enzimática, actividade de ligação, etc.) de um polipéptido NgR. Os ensaios HTS permitem pesquisa de um grande número de compostos de um modo eficiente. Os sistemas HTS baseados em células estão contemplados para investigar a interacção receptor de NgR-ligando. Os ensaios HTS são desenhados para identificar "acertos" ou "compostos guia" possuindo a propriedade desejada, a partir dos quais podem ser desenhadas modificações para melhorar a propriedade desejada. A modificação química do "acerto" ou "composto guia" é frequentemente baseada numa relação estrutura/actividade identificável entre o "acerto" e o polipéptido NgR.

Outro aspecto da presente divulgação é dirigido a métodos de identificação de compostos que se ligam a NgR ou moléculas de ácido nucleico codificando NgR, compreendendo pôr em contacto NgR ou uma molécula de ácido nucleico codificando a mesma com um composto e determinação de se o composto se liga a NgR ou a uma molécula de ácido nucleico codificando a mesma. A ligação pode ser determinada através de ensaios de ligação que são bem conhecidos dos peritos na arte, incluindo, mas não se limitando a, ensaios de mudança em gel, Western blots, ensaio de competição radiomarcado, clonagem de expressão baseada em fagos, co-fraccionamento através de cromatografia, co-precipitação, ligação cruzada, análise de aprisionamento por interacção/dois híbridos, análise southwestern, ELISA e semelhantes, que são descritos em, por exemplo, Ausubel et al., (Eds.), "Current Protocols in Molecular Biology", 1999, John Wiley & Sons, NY. As proteínas NgR podem, por exemplo, ser utilizadas como "proteínas isco" num ensaio de dois híbridos ou ensaio de três híbridos (ver, p.ex., Patente U.S. N.° 5283317; Zervos et al., Cell 72: 223-232, 1993; Madura et al. , J. Biol. Chem. 268: 12046-12054, 1993; Bartel et al., BioTechniques 14: 920-924, 1993; Iwabuchi et al., Oncogene 8: 1693-1696, 1993; e Brent WO 94/10300), para identificar outras proteínas que se ligam ou interagem com NgR ("proteínas de ligação a NgR" ou "NgR-bp") e modulam a actividade de NgR. É também provável que tais proteínas de ligação a NgR estejam envolvidas na propagação de sinais através das proteínas NgR 93 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tal como, por exemplo, elementos a montante ou a jusante da via de NgR.

Podem ser utilizados outros ensaios para identificar ligandos específicos de um receptor NgR, incluindo ensaios que identificam ligandos da proteína alvo através de medição da ligação directa de ligandos de teste à proteína alvo, bem como ensaios que identificam ligandos das proteínas alvo através de ultrafiltração de afinidade com métodos de espectroscopia de massa de vapor iónico/HPLC ou outros métodos físicos e analíticos. Alternativamente, tais interacções de ligação são avaliadas indirectamente utilizando o sistema de dois híbridos de levedura descritos em Fields et al., Nature 340: 245-246,

1989, e Fields et al., Trends Genet. 10: 286-292, 1994. O sistema de dois híbridos é um ensaio genético baseado na natureza modular da maioria dos factores de transcrição utilizados para detecção de interacções entre duas proteínas ou polipéptidos. Pode ser utilizado para identificar proteínas que se ligam a uma proteína conhecida de interesse ou para delinear domínios ou resíduos críticos para uma interacção. Variações nesta metodologia foram desenvolvidas para clonar genes que codificam proteínas de ligação ao ADN, para identificar péptidos que se ligam a uma proteína e para pesquisar fármacos. 0 sistema de dois híbridos explora a capacidade de um par de proteínas que interagem para pôr um domínio de activação da transcrição em íntima proximidade com um domínio de ligação ao ADN que se ligue a uma sequência de activação a montante (UAS) de um gene repórter, e é geralmente efectuado em levedura. O ensaio requer a construção de genes de dois híbridos codificando (1) um domínio de ligação ao ADN que é fundido com uma primeira proteína e (2) um domínio de activação fundido com uma segunda proteína. O domínio de ligação ao ADN direcciona a primeira proteína híbrida para o UAS do gene repórter; no entanto, como a maioria das proteínas não possui um domínio de activação, esta proteína híbrida de ligação ao ADN não activa a transcrição do gene repórter. A segunda proteína híbrida, que contém o domínio de activação, não pode activar por si própria a expressão do gene repórter porque não se liga ao UAS. No entanto, quando ambas as proteínas híbridas estão presentes, a interacção não covalente da primeira e segunda proteínas prende o domínio de activação ao UAS, activando a transcrição do gene repórter. Por exemplo, 94

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

quando a primeira proteína é um produto do gene de NgR ou um fragmento deste, que se saiba interagir com outra proteína ou ácido nucleico, este ensaio pode ser utilizado para detectar agentes que interfiram com a interacção de ligação. A expressão do gene repórter é monitorizada à medida que

diferentes agentes de teste são adicionados ao sistema. A presença de um agente inibidor resulta na falta de um sinal repórter. Os compostos a pesquisar incluem (o que pode incluir compostos que são suspeitos de se ligarem a NgR, ou uma molécula de ácido nucleico codificando a mesma), mas não se limitam aos de origem extracelular, intracelular, biológica ou química. A função do produto do gene de NgR não é certa e não se encontraram ainda ligandos que se liguem ao produto do gene. 0 ensaio de dois híbridos de levedura é útil para identificar proteínas que se ligam ao produto do gene. Num ensaio para identificar proteínas que se ligam a um receptor NgR, ou fragmento deste, pode ser utilizado um polinucleótido de fusão codificando tanto um receptor NgR (ou fragmento) como um domínio de ligação a UAS (i.e., uma primeira proteína). Adicionalmente, um grande número de genes híbridos codificando cada um uma segunda proteína diferente fundida com um domínio de activação é produzido e pesquisado no ensaio. Tipicamente, a segunda proteína é codificada por um ou mais membros de uma biblioteca de fusão de ADNc total ou ADN genómico, com cada uma das regiões codificando a segunda proteína fundida com o domínio de activação. Este sistema é aplicável a uma ampla variedade de proteínas e nem é necessário conhecer a identidade ou função da segunda proteína de ligação. O sistema é altamente sensível e pode detectar interacções não reveladas por outros métodos; mesmo interacções transientes podem desencadear transcrição para produzir um ARNm estável que pode ser repetidamente traduzido para produzir a proteína repórter.

Outros ensaios podem ser utilizados para pesquisar agentes que se ligam à proteína alvo. Um tal método de pesquisa para identificar a ligação directa de ligandos de teste a uma proteína alvo é descrito na Patente U.S. N.° 5585277. Este método baseia-se no princípio de que as proteínas existem geralmente como uma mistura de estados dobrado e não dobrado e alternam continuamente entre os dois 95 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT estados. Quando um ligando de teste se liga à forma dobrada de uma proteína alvo (i.e., quando o ligando de teste é um ligando da proteína alvo), a molécula da proteína alvo ligada ao ligando permanece no seu estado dobrado. Assim, a proteína alvo dobrada está presente numa maior extensão na presença de um ligando de teste que se liga à proteína alvo, que na ausência de um ligando. A ligação do ligando à proteína alvo pode ser determinada através de qualquer método que distinga entre os estados dobrado e não dobrado da proteína alvo. A função da proteína alvo não necessita ser conhecida para que este ensaio seja realizado. Virtualmente qualquer agente pode ser avaliado através deste método como ligando de teste, incluindo, mas não limitado a metais, polipéptidos, proteínas, lípidos, polissacáridos, polinucleótidos e moléculas orgânicas pequenas.

Outro método para identificação de ligandos de uma proteína alvo é descrito em Wieboldt et al., Anal. Chem. 69: 1683-1691, 1997. Esta técnica pesquisa bibliotecas combinatórias de 20-30 agentes de cada vez em fase em solução para ligação à proteína alvo. Os agentes que se ligam à proteína alvo são separados de outros componentes da biblioteca através de simples lavagem da membrana. As moléculas especificamente seleccionadas que são retidas no filtro são subsequentemente libertadas da proteína alvo e analisadas através de HPLC e espectroscopia de massa de ionização por electrovaporização pneumaticamente assistida (spray iónico) . Este procedimento selecciona componentes da biblioteca com a maior afinidade para a proteína alvo e é particularmente útil para bibliotecas de moléculas pequenas.

Os métodos desta divulgação englobam também ligandos, especialmente neuropéptidos, que são ligados a um marcador, tal como um radiomarcador (p.ex., 125I, 35S, 32P, 33P, 3H) , um marcador fluorescente, um marcador quimioluminescente, um marcador enzimático e um marcador imunogénico. Moduladores que recaem dentro do âmbito da divulgação incluem, mas não se limitam a, moléculas não peptídicas tais como imitadores não peptídicos, efectores alostéricos não peptídicos e péptidos. O polipéptido ou polinucleótido de NgR empregue num tal teste pode estar livre em solução, ligado a um suporte sólido, originário na superfície celular ou localizado 96

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT intracelularmente ou associado a uma porção de uma célula. Um perito na arte pode, por exemplo, medir a formação de complexos entre NgR e o composto a testar. Alternativamente, um perito na arte pode examinar a diminuição na formação de complexos entre NgR e o seu substrato causada pelo composto a testar.

Outro aspecto da presente divulgação é dirigido a métodos de identificação de compostos que modulam (i.e., aumentam ou diminuem) a actividade de NgR compreendendo pôr em contacto NgR com um composto e determinando se o composto modifica a actividade de NgR. A actividade na presença do composto de teste é comparada com a actividade na ausência do composto de teste. Quando a actividade da amostra contendo o composto de teste é superior à actividade na amostra sem o composto de teste, o composto terá maior actividade. Semelhantemente, quando a actividade da amostra contendo o composto de teste é inferior à actividade da amostra sem o composto de teste, o composto terá actividade inibida. A presente divulgação é particularmente útil para pesquisa de compostos através de utilização de NgR em qualquer uma de uma variedade de técnicas de pesquisa de fármacos. Os compostos a pesquisar incluem (o que pode incluir compostos que são suspeitos de modular a actividade de NgR), mas não se limitam aos de origem extracelular, intracelular, biológica ou química. 0 polipéptido NgR empregue num tal teste pode estar em qualquer forma, de preferência, livre em solução, ligado a um suporte sólido, originário na superfície celular ou localizado intracelularmente. Um perito na arte pode, por exemplo, medir a formação de complexos entre NgR e o composto a testar. Alternativamente, um perito na arte pode examinar a diminuição na formação de complexos entre Nogo-R e o seu substrato causada pelo composto a testar. A actividade de polipéptidos NgR do presente invento pode ser determinada através, por exemplo, do exame da capacidade para se ligarem ou serem activados por ligandos peptídicos quimicamente sintetizados. Alternativamente, a actividade do NgR pode ser ensaiada através de exame da sua capacidade para se ligar a iões de cálcio, hormonas, quimocinas, neuropéptidos, neurotransmissores, nucleótidos, lípidos, 97

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT odorantes e fotões. Alternativamente, a actividade do NgR pode ser determinada através de exame da actividade de moléculas efectoras incluindo, mas não se limitando a, adenilato-ciclase, fosfolipases e canais iónicos. Assim, moduladores da actividade de NgR podem alterar uma função do receptor NgR, tal como uma propriedade de ligação de um receptor ou uma actividade. Em várias concretizações do método, o ensaio pode tomar a forma de um ensaio de fluxo iónico, um ensaio de crescimento de levedura, um ensaio de GTP não hidrolisável tal como um ensaio de [35S]-GTP S, um ensaio de AMPc, um ensaio de inositol-trifosfato, um ensaio de diacilglicerol, um ensaio de Aequorina, um ensaio de Luciferase, um ensaio FLIPR para concentração intracelular de Ca2+, um ensaio de mitogénese, um ensaio da actividade de MAP-quinase, um ensaio de libertação de ácido araquidónico (p.ex., utilizando [3H]-ácido araquidónico) e um ensaio para taxas de acidificação extracelular, bem como outros ensaios baseados na ligação ou função da actividade de NgR que são geralmente conhecidos na arte. A actividade de NgR pode ser determinada através de metodologias que são utilizadas para ensaiar a actividade de FaRP, que é bem conhecida dos peritos na arte. As actividades biológicas dos receptores NgR de acordo com o presente invento incluem, mas não se limitam à ligação de um ligando natural ou não natural, bem como qualquer uma das actividades funcionais de NgR conhecidas na arte. Exemplos não limitantes das actividades de NgR incluem sinalização transmembranar de várias formas, que podem envolver associação de fosfatidilinositol (PI) e/ou o exercer de uma influência sobre PI; outra actividade exemplar dos NgR é a ligação de proteínas ou polipéptidos acessórios que diferem das proteínas GPI conhecidas.

Os moduladores da divulgação exibem uma variedade de estruturas químicas, que podem ser geralmente agrupadas em imitadores não peptídicos de ligandos do receptor NgR natural, efectores alostéricos peptídicos ou não peptídicos de receptores NgR e péptidos que possam funcionar como activadores ou inibidores (competitivos, incompetitivos e não competitivos) (p.ex., produtos de anticorpos) de receptores NgR. A divulgação não restringe as fontes para os moduladores adequados, que podem ser obtidos a partir de fontes naturais tais como extractos vegetais, animais ou minerais, ou fontes 98 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT não naturais tais como bibliotecas de moléculas pequenas, incluindo os produtos de abordagens combinatórias químicas à construção de bibliotecas, e bibliotecas peptídicas.

Podem ser utilizados outros ensaios para examinar a actividade enzimática incluindo, mas não se limitando aos fotométricos, radiométricos, HPLC, electromecânicos e semelhantes, que são descritos, por exemplo, em Enzyme Assays: A Practical Approach, Eisenthal e Danson (Eds.), 1992, Oxford University Press. A utilização de ADNc em programas de descoberta de fármacos é bem conhecida; ensaios capazes de testar milhares de compostos desconhecidos por dia em pesquisas de elevada tiragem (HTSs) são minuciosamente documentados. A literatura está repleta de exemplos da utilização de ligandos radiomarcados em ensaios de ligação HTS para descoberta de fármacos (ver Williams, Med. Res. Rev. 11: 147-184, 1991; Sweetnam et al., J. Nat. Prod. 56: 441-455, 1993 para revisão). São preferidos receptores recombinantes para ensaio de ligação HTS porque permitem uma melhor especificidade (maior pureza relativa), proporcionam a capacidade de gerar grandes quantidades de material receptor e podem ser utilizados numa ampla variedade de formatos (ver Hodgson, Bio/Technology 10: 973-980, 1992.

Está disponível uma variedade de sistemas heterólogos para expressão funcional de receptores recombinantes que são bem conhecidos dos peritos na arte. Tais sistema incluem bactérias (Strosberg et al., Trends Pharmacol. Sei. 13: 95-98, 1992), levedura (Pausch, Trends Biotechnol. 15: 487-494, 1997), vários tipos de células de insecto (Vanden Broeck, Int. Rev. Cytol. 164: 189-268, 1996), células de anfíbio (Jayawickreme et al., Curr. Opin. Biotechnol. 8: 629-634, 1997) e várias linhas celulares de mamífero (CHO, HEK293, COS, etc.; ver Gerhardt et al., Eur. J. Pharmacol. 334: 1-23, 1997) . Estes exemplos não excluem a utilização de outros sistemas de expressão celulares possíveis, incluindo linhas celulares obtidas a partir de nemátodes (pedido PCT WO 98/37177). 99 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Em casos preferidos, os métodos de pesquisa de compostos que modulam a actividade de NgR compreendem pôr em contacto compostos de teste com NgR e ensaiar quanto à presença de um complexo entre o composto e NgR. Em tais ensaios, o ligando está tipicamente marcado. Após incubação adequada, o ligando livre é separado do presente na forma ligada e a quantidade de marcador livre ou não complexado é uma medida da capacidade do composto particular para se ligar a NgR.

Noutro caso, é empregue pesquisa de elevada tiragem para compostos possuindo afinidade de ligação adequada a NgR. Resumidamente, é sintetizado um grande número de diferentes compostos de teste peptídicos pequenos num substrato sólido. Os compostos de teste peptídicos são postos em contacto com NgR e lavados. 0 NgR ligado é então detectado através de métodos bem conhecidos na arte. Os polipéptidos purificados desta divulgação, p.ex. polipéptidos purificados do presente invento, podem também ser revestidos directamente em placas para utilização nas técnicas de pesquisa de fármacos acima mencionadas. Adicionalmente, podem ser utilizados anticorpos não neutralizantes para capturar a proteína e imobilizá-la no suporte sólido.

Geralmente, um NgR expresso pode ser utilizado para ensaios de ligação HTS em conjunto com o seu ligado definido. 0 péptido identificado é marcado com um radioisótopo adequado,

η ^ r ^ OC PO incluindo, mas não se limitando a, I, H, S ou P, através de métodos que são bem conhecidos dos peritos na arte. Alternativamente, os péptidos podem ser marcados através de métodos bem conhecidos com um derivado fluorescente adequado (Baindur et al., Drug Dev. Res. 33: 373-398, 1994; Rogers Drug Discov. Today 2: 156-160, 1997). O ligando radioactivo especificamente ligado ao receptor em preparações de membrana feitas a partir da linha celular que expressa a proteína recombinante pode ser detectado em ensaios HTS num de vários modos padrão, incluindo filtração do complexo receptor-ligando para separar o ligando ligado do ligando não ligado (Williams Med. Res. Rev. 11: 147-184, 1991; Sweetnam et al., J. Nat. Prod. 56: 441-455, 1993). Métodos alternativos incluem um ensaio de proximidade de cintilação (SPA) ou um formato FlashPlate no qual tal separação é desnecessária (Nakayama Curr. Opin. Drug Disc. Dev. 1: 85-91, 1998, Bossé et al., J. 100 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Biomol. Screening 3: 285-292, 1998). A ligação de ligandos fluorescentes pode ser detectada de vários modos, incluindo transferência de energia de fluorescência (FRET), análise espectrofotofluorométrica directa de ligando ligado ou polarização de fluorescência (Rogers Drug Discov. Today 2: 156-160, 1997; Hill Curr. Opin. Drug Disc. Dev. 1: 92-97, 1998).

Exemplos de tais respostas biológicas incluem, mas não se limitam aos seguintes: a capacidade para sobreviver na ausência de um nutriente limitante em células de levedura especificamente modificadas (Pausch Trends in Biotechnol. 15: 487-494, 1997); alterações na concentração intracelular de Ca2+ medida através de corantes fluorescentes (Murphy et al., Cur. Opin. Drug Disc. Dev. 1: 192-199, 1998). As alterações na fluorescência podem também ser utilizadas para monitorizar alterações induzidas pelo ligando no potencial de membrana ou pH intracelular; um sistema automático adequado para HTS foi descrito para estes fins (Schroeder et ai., J. Biomol. Screening 1: 75-80, 1996). Melanóforos preparados a partir de Xenopus laevis mostram uma alteração dependente do ligando na organização do pigmento em resposta à activação heteróloga de NgR; esta resposta é adaptável a formatos HTS (Jayawickreme et ai., Curr. Opin. Biotechnol. 8, 629-634, 1997). Estão também disponíveis ensaios para a medição de segundos mensageiros vulgares, incluindo AMPc, fosfoinositidos e ácido araquidónico, mas estes não são geralmente preferidos para HTS. Métodos preferidos de HTS empregando estes receptores incluem células CHO permanentemente transfectadas, nas quais podem ser identificados agonistas e antagonistas através da capacidade para transduzir o sinal para a ligação de Nogo em membranas preparadas a partir destas células através da putativa âncora GPI. Noutro caso, podem ser utilizadas células CHO permanentemente transfectadas para a preparação de membranas que contenham quantidades significativas das proteínas receptoras recombinantes; estas preparações de membrana seriam então utilizadas em ensaios de ligação do receptor, empregando o ligando radiomarcado específico para o receptor particular. Alternativamente, um ensaio funcional, tal como monitorização fluorescente de alterações induzidas 101 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ pelo ligando na concentração interna de Ca2+ ou potencial de membrana em células CHO permanentemente transfectadas contendo cada um deste receptores individualmente ou em combinação seria preferido para HTS. Igualmente preferido seria um tipo alternativo de célula de mamifero, tal como células HEK293 ou COS, em formatos semelhantes. Mais preferidas seriam linhas celulares de insecto permanentemente transfectadas, tais como células S2 de Drosophila. Ainda mais preferido seriam células de levedura recombinantes expressando os receptores de Drosophila melanogaster em formatos HTS bem conhecidos dos peritos na arte (p.ex., Pausch (1997), acima). A divulgação contempla uma variedade de ensaios para pesguisar e identificar inibidores da ligação do ligando a receptores NgR. Num exemplo, o receptor NgR é imobilizado e a interacção com um parceiro de ligação é avaliada na presença e ausência de um modulador candidato tal como um composto inibidor. Noutro exemplo, a interacção entre o receptor NgR e o seu parceiro de ligação é avaliado num ensaio em solução, tanto na presença como na ausência de um composto inibidor candidato. Em qualquer um dos ensaios, um inibidor é identificado como um composto que diminui a ligação entre o receptor NgR e o seu parceiro de ligação. Outro ensaio contemplado envolve uma variação do ensaio de dois hibridos em que um inibidor de interacções proteína/proteína é identificado através da detecção de um sinal positivo numa célula hospedeira transformada ou transfectada, tal como descrito na publicação PCT número WO 95/20652, publicada a 3 de Agosto de 1995.

Moduladores candidatos contemplados pela divulgação incluem compostos seleccionados a partir de bibliotecas de potenciais activadores ou potenciais inibidores. Existem várias bibliotecas diferentes utilizadas para a identificação de moduladores de molécula pequena, incluindo: (1) bibliotecas químicas, (2) bibliotecas de produtos naturais, e (3) bibliotecas combinatórias constituídas por péptidos, oligonucleótidos ou moléculas orgânicas aleatórios. As bibliotecas químicas consistem em estruturas químicas aleatórias, algumas das quais são análogos de compostos conhecidos ou análogos de compostos que foram identificados como "acertos" ou "guias" noutras pesquisas de descoberta de 102 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ fármacos, alguns dos quais são derivados de produtos naturais e alguns dos quais surgem de química orgânica sintética não dirigida. As bibliotecas de produtos naturais são colecções de microrganismos, animais, plantas ou organismos marinhos que são utilizados para criar misturas para pesquisa através de: (1) fermentação e extracção de caldos de microrganismos do solo, vegetais ou marinhos ou (2) extracção de organismos vegetais ou marinhos. As bibliotecas de produtos naturais incluem policétidos, péptidos não ribossómicos e variantes (de ocorrência não natural) destes. Para uma revisão, ver Cane et al., Science 282: 63-68, 1998. As bibliotecas combinatórias são compostas por um grande número de péptidos, oligonucleótidos ou compostos orgânicos como uma mistura. Estas bibliotecas são relativamente fáceis de preparar através de métodos de síntese automática tradicionais, PCR, clonagem ou métodos sintéticos sujeitos a direito de propriedade. De particular interesse são bibliotecas combinatórias não peptídicas. Ainda outras bibliotecas de interesse incluem bibliotecas de péptidos, proteínas, peptidomiméticos, de colecções multiparalelas sintéticas, recombinatórias e de polipéptidos. Para uma revisão da química combinatória e de bibliotecas criadas a partir desta, ver Myers Curr. Opin. Biotechnol. 8: 701-707, 1997. A identificação de moduladores através da utilização das várias bibliotecas aqui descritas permite a modificação do "acerto" (ou "guia") candidato para optimizar a capacidade do "acerto" para modular a actividade.

Ainda outros inibidores candidatos contemplados pela divulgação podem ser desenhados e incluem formas solúveis de parceiros de ligação, bem como parceiros de ligação como proteínas quiméricas ou de fusão. Um “parceiro de ligação" tal como aqui se utiliza engloba amplamente moduladores não peptídicos, bem como péptidos moduladores tais como neuropéptidos para além dos ligandos naturais, anticorpos, fragmentos de anticorpo e compostos modificados compreendendo domínios de anticorpo que sejam imunoespecíficos para o produto de expressão do gene de NgR identificado.

Outros casos compreendem a utilização de ensaios de pesquisa competitivos nos quais anticorpos neutralizantes capazes de se ligar a um polipéptido desta divulgação, p.ex. um polipéptido do presente invento, competem especificamente 103 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT com um composto de teste pela ligação ao polipéptido. Deste modo, os anticorpos podem ser utilizados para detectar a presença de qualquer péptido que partilhe um ou mais determinantes antigénicos com NgR. Estudos de ligação competitiva radiomarcada são descritos em Lin et al., Antimicrob. Agents Chemother. 41: 2127-2131, 1997.

Noutros casos, os polipéptidos desta divulgação, incluindo os do presente invento, são empregues como ferramenta de investigação para identificação, caracterização e purificação de proteínas reguladoras que interagem. Marcadores apropriados são incorporados nos polipéptidos desta divulgação através de vários métodos conhecidos na arte e os polipéptidos são utilizados para capturar moléculas que interagem. Por exemplo, as moléculas são incubadas com os polipéptidos marcados, lavadas para remover polipéptidos não ligados e o complexo polipeptidico é quantificado. Os dados obtidos utilizando diferentes concentrações de polipéptido são utilizados para calcular valores para o número, a afinidade e a associação do polipéptido com o complexo proteico.

Os polipéptidos marcados são também úteis como reagentes para a purificação de moléculas com as quais os polipéptidos interajam incluindo, mas não se limitando a, inibidores. Num caso de purificação por afinidade, um polipéptido é covalentemente ligado a uma coluna cromatografia. As células e as suas membranas são extraídas e vários subcomponentes celulares são passados pela coluna. As moléculas ligam-se à coluna em virtude da sua afinidade com o polipéptido. O complexo polipeptidico é recuperado da coluna, dissociado e a molécula recuperada é sujeita a sequenciação proteica. Esta sequência de aminoácidos é então utilizada para identificar a molécula capturada ou para desenhar oligonucleótidos degenerados para clonagem do gene correspondente a partir de uma biblioteca de ADNc apropriada.

Alternativamente, podem ser identificados compostos que exibam propriedades semelhantes ao ligando para o NgR desta divulgação, mas que sejam menores e exibam uma semi-vida maior que o ligando endógeno no corpo de um humano ou animal. Quando é desenhado um composto orgânico, é utilizada uma molécula de acordo com o presente invento como um composto "guia". O 104 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT desenho de miméticos para compostos farmaceuticamente activos conhecidos é uma abordagem bem conhecida no desenvolvimento de produtos farmacêuticos baseados em tais compostos "guia". O desenho de miméticos, a síntese e os testes são geralmente utilizados para evitar a pesquisa de um grande número de moléculas para uma propriedade alvo. Para além disso, dados estruturais que derivam da análise das sequências de aminoácidos deduzidas codificadas pelos ADN da presente divulgação são úteis para desenhar novos fármacos, mais específicos e portanto com uma potência farmacológica mais elevada. A comparação da sequência proteica da presente divulgação com as sequências presentes em todas as bases de dados disponíveis mostrou uma homologia significativa com a porção transmembranar de receptores acoplados à proteína G. Concordantemente, pode ser utilizada modelação por computador para desenvolver uma putativa estrutura terciária das proteínas do presente invento com base na informação disponível do domínio transmembranar de outras proteínas. Assim, podem ser desenhados novos ligandos baseados na estrutura prevista de NgR.

Esta divulgação refere-se ainda a novos agentes identificados através dos ensaios de pesquisa acima descritos e a utilizações destes para tratamentos tal como descrito acima.

Composições e Composições Farmacêuticas

Num caso particular, as novas moléculas identificadas através de métodos de pesquisa de acordo com esta divulgação são moléculas orgânicas de baixo peso molecular, caso em que uma composição ou composição farmacêutica pode ser preparada destas para administração oral ou parentérica. As composições, ou composições farmacêuticas, compreendendo as moléculas de ácido nucleico, vectores, polipéptidos, anticorpos e compostos identificados pelos métodos de pesquisa aqui descritos, compreendem tipicamente a molécula de ácido nucleico, proteína ou anticorpo e um transportador farmaceuticamente aceitável. Tal como aqui se utiliza, pretende-se que "transportador farmaceuticamente aceitável" inclua qualquer um e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes 105

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT antibacterianos e antifúngicos, agentes isotónicos e de retardamento da absorção e semelhantes, compatíveis com a administração farmacêutica. A natureza do transportador ou outros ingredientes dependerá da via específica de administração e da molécula particular a administrar. Exemplos de técnicas e protocolos que são úteis neste contexto encontram-se, inter alia, em "Remington's Pharmaceutical Sciences", 16a ed., (1980) Osol, A (Ed.). Exemplos preferidos de tais transportadores ou diluentes incluem, mas não se limitam a, água, solução salina, solução de Ringer, solução de dextrose e albumina de soro humano a 5%. Lipossomas e veículos não aquosos tais como óleos fixados podem também ser utilizados. A utilização de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente activas é bem conhecida na arte. Excepto na medida em que qualquer meio convencional ou agente é incompatível com o composto activo, a utilização deste nas composições é contemplada. Compostos activos suplementares podem também ser incorporados nas composições.

Uma composição farmacêutica desta divulgação é formulada para ser compatível com a sua via de administração pretendida. Exemplos de vias de administração incluem a oral e parentérica (p.ex., administração intravenosa, intradérmica, subcutânea, por inalação, transdérmica (tópica), transmucosa e rectal). As soluções ou suspensões utilizadas para aplicação parentérica, intradérmica ou subcutânea podem incluir os seguintes componentes: um diluente estéril tal como água para injecção, solução salina, óleos fixados, polietilenoglicóis, glicerina, propilenoglicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tais como álcool benzílico ou metilparabenos; antioxidantes tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes tais como ácido etilenodiaminotetraacético; tampões tais como acetatos, citratos ou fosfatos, e agentes para o ajustamento da tonicidade tais como cloreto de sódio ou dextrose. O pH pode ser ajustado com ácidos ou bases, tais como ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. A preparação parentérica pode ser fechada em ampolas, seringas descartáveis ou frasco multidose feitos de vidro ou plástico.

Composições farmacêuticas adequadas para utilização injectável incluem soluções aquosas estéreis (quando solúveis 106

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões estéreis injectáveis. Para administração intravenosa, os transportadores adequados incluem solução salina fisiológica, água bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) ou solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em todos os casos, a composição tem de ser estéril e deve ser fluida até ao ponto em que exista fácil capacidade de encher uma seringa. Tem de ser estável sob as condições de fabrico e armazenamento e tem de ser conservada contra a acção contaminante de microrganismos tais como bactérias e fungos. O transportador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propilenoglicol e polietilenoglicol liquido, e semelhantes) e misturas adequadas destes. A fluidez correcta pode ser mantida, por exemplo, através da utilização de um revestimento tal como lecitina, através da manutenção do tamanho da partícula necessário no caso de dispersão e através da utilização de tensioactivos. A prevenção da acção de microrganismos pode ser alcançada através de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal e semelhantes. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotónicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois tais como manitol, sorbitol, cloreto de sódio na composição. A absorção prolongada das composições injectáveis pode ser obtida através de inclusão na composição de um agente que atrase a absorção, por exemplo, monostearato de alumínio e gelatina.

Soluções injectáveis estéreis podem ser preparadas através da incorporação do composto activo (p.ex., uma proteína NgR ou anticorpo anti-NgR) na quantidade necessária num solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido de esterilização por filtração. Geralmente, as dispersões são preparadas através de incorporação do composto activo num veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários dos enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injectáveis estéreis, os métodos de preparação são secagem em vácuo e secagem por congelação que produz um pó do ingrediente activo 107 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma solução destes previamente esterilizada por filtração.

As composições orais incluem geralmente um diluente inerte ou um transportador edivel. Podem ser encerradas em cápsulas de gelatina ou comprimidas em comprimidos. Para fins de administração terapêutica oral, o composto activo pode ser incorporado com excipientes e utilizado na forma de comprimidos, trociscos ou cápsulas. As composições orais podem também ser preparadas utilizando um transportador fluido para utilizar como colutório, em que o composto no transportador fluido é aplicado oralmente e bochechado e expectorado ou engolido. Agentes de ligação farmaceuticamente compatíveis e/ou materiais adjuvantes podem ser incluídos como parte da composição. Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e semelhantes podem conter qualquer um dos seguintes ingredientes ou compostos de natureza semelhante: um aglomerante tal como celulose microcristalina, goma adragante ou gelatina; um excipiente tal como amido ou lactose, um agente desintegrante tal como ácido algínico, Primogel ou amido de milho; um lubrificante tal como estearato de magnésio ou Sterotes; um deslizante tal como dióxido de silicone coloidal; um agente adoçante tal como sacarose ou sacarina; ou um agente aromatizante tal como hortelã-pimenta, metilsalicilato ou aroma de laranja.

Para administração por inalação, os compostos são distribuídos na forma de um spray de aerossol a partir de um recipiente ou dispensador pressurizado que contenha um propulsor adequado, p.ex., um gás tal como dióxido de carbono ou um nebulizador. A administração sistémica pode também ser através de meios transmucosos ou transdérmicos. Para administração transmucosa ou transdérmica, são utilizados na formulação penetrantes apropriados para a barreira ser permeada. Tais penetrantes são geralmente conhecidos na arte, e incluem, por exemplo, para administração transmucosa, detergentes, sais biliares e derivados de ácido fusídico. A administração transmucosa pode ser alcançada através da utilização de sprays nasais ou supositórios. Para administração transdérmica, os 108

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT compostos activos são formulados em unguentos, pomadas, géis ou cremes tal como são geralmente conhecido na arte.

Os compostos podem também ser preparados na forma de supositórios (p.ex., com bases de supositório convencionais tais como manteiga de cacau e outros glicéridos) ou enemas de retenção para distribuição rectal.

Num caso, os compostos activos são preparados com transportadores que protegerão o composto contra uma rápida eliminação do corpo, tal como uma formulação de libertação controlada, incluindo implantes e sistemas de distribuição microencapsulados. Podem ser utilizados polímeros biodegradáveis, biocompatíveis, tais como vinilacetato de etileno, polianidridos, ácido poliglicólico, colagénio, poliortoésteres e ácido poliláctico. Os métodos para preparação de tais formulações serão aparentes dos peritos na arte. Os materiais podem também ser obtidos comercialmente em Alza Corporation e Nova Pharmaceuticals, Inc. Podem também ser utilizadas suspensões lipossómicas (incluindo lipossomas para células infectadas com anticorpos monoclonais para antigénios virais) como transportadores farmaceuticamente aceitáveis. Estas podem ser preparadas de acordo com métodos conhecidos na arte, por exemplo, tal como descrito na Patente U.S. N.° 4522811. É especialmente vantajoso formular composições orais ou parentéricas na forma de unidade de dosagem para uma fácil administração e uniformidade da dosagem. A forma de unidade de dosagem tal como aqui se utiliza refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para o sujeito a tratar; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de composto activo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o transportador farmacêutico requerido. As especificações para as formas de unidade de dosagem desta divulgação são ditadas pelas e directamente dependentes das características únicas do composto activo e do efeito terapêutico particular a alcançar.

As moléculas de ácido nucleico desta divulgação, incluindo as do presente invento, podem ser inseridas em vectores e utilizadas como vectores de terapia génica. Os vectores de terapia génica podem ser distribuídos a um sujeito através de qualquer uma de várias vias, p.ex., tal como 109 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ descrito na Patente U.S. N.° 5703055. A distribuição pode assim incluir também, p.ex., injecção intravenosa, administração local (ver Patente U.S. N.° 5328470) ou injecção estereotáctica (ver p.ex., Chen et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 91: 3054-3057, 1994). A preparação farmacêutica do vector de terapia génica pode incluir o vector de terapia génica num diluente aceitável, ou pode compreender uma matriz de libertação lenta na qual o veiculo de distribuição génica está embebido. Alternativamente, quando o vector de distribuição génica completo pode ser produzido intacto a partir de células recombinantes, p.ex., vectores retrovirais, a preparação farmacêutica pode incluir uma ou mais células que produzam o sistema de distribuição génica.

As composições farmacêuticas podem ser incluídas num recipiente, embalagem ou dispensador juntamente com instruções para administração. A dosagem destes compostos de baixo peso molecular dependerá do estado de doença ou da condição a tratar e de outros factores clínicos tais como peso e condição do humano ou animal e da via de administração do composto. Para tratamento de humanos ou animais, podem ser administrados entre aproximadamente 0,5 mg/kg do peso corporal a 500 mg/kg do peso corporal do composto. A terapia é tipicamente administrada a dosagens inferiores e é continuada até ser observado o resultado terapêutico desejado.

Outro aspecto da presente divulgação é a utilização da sequência nucleotídica de NgR aqui divulgada para identificação de homólogos do Nogo-R noutros animais, incluindo mas não se limitando a humanos e outros mamíferos e invertebrados. Qualquer uma das sequências nucleotídicas aqui divulgadas ou qualquer porção destas, pode ser utilizada, por exemplo, como sonda para pesquisar bases de dados ou bibliotecas de ácidos nucleicos, tais como, por exemplo, bibliotecas de ADN genómico ou ADNc, para identificar homólogos utilizando procedimentos de pesquisa bem conhecidos dos peritos na arte. Concordantemente, podem ser identificados homólogos possuindo pelo menos 50%, de preferência pelo menos 60%, de maior preferência pelo menos 70%, de maior preferência pelo menos 80%, de maior preferência pelo menos 90%, de maior 110 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ preferência pelo menos 95%, e de maior preferência pelo menos 100% de homologia com sequências de NgR.

Os presentes compostos e métodos, incluindo moléculas de ácido nucleico, polipéptidos, anticorpos, compostos identificados pelos métodos de pesquisa aqui descritos, têm uma variedade de aplicações farmacêuticas e podem ser utilizados, por exemplo, para tratar ou prevenir crescimento celular desregulado, tal como crescimento de células de cancro e tumores. Num caso particular, as presentes moléculas são utilizadas em terapia génica. Para uma revisão dos procedimentos de terapia génica, ver p.ex., Anderson Science 256: 808-813, 1992. A presente divulgação também ensina um método de agonização (estimulação) ou antagonização da actividade associada a um parceiro de ligação natural de NgR num mamífero compreendendo a administração ao referido mamífero de um agonista ou antagonista de um dos polipéptidos acima divulgados numa quantidade suficiente para efectuar o referido agonismo ou antagonismo. Um caso da presente divulgação, é então um método de tratamento de doenças num mamífero com um agonista ou antagonista da proteína da presente divulgação compreendendo a administração do agonista ou antagonista a um mamífero numa quantidade suficiente para agonizar ou antagonizar funções associadas a NgR. Métodos de determinação das dosagens de compostos a administrar a um paciente e modos de administração de compostos a um organismo são divulgados no Pedido U.S. com o N.° de Série 08/702282, apresentado a 23 de Agosto de 1996, e na publicação de patente internacional número WO 96/22976, publicada a 1 de Agosto de 1996, ambos aqui incorporados por referência na sua totalidade, incluindo quaisquer desenhos, figuras ou tabelas. Os peritos na arte apreciarão que tais descrições são aplicáveis à presente divulgação e podem ser facilmente adaptadas a ela. A dosagem correcta depende de vários factores tais como o tipo de doença a tratar, a composição particular a utilizar e o tamanho e a condição fisiológica do paciente. As doses terapeuticamente eficazes para os compostos aqui descritos 111 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT podem ser estimadas inicialmente a partir da cultura celular e modelos animais. Por exemplo, uma dose pode ser formulada em modelos animais para alcançar um intervalo de concentração em circulação que tenha inicialmente em conta a CI5o tal como determinada em ensaios de cultura celular. Os dados do modelo animal podem ser utilizados para determinar mais precisamente doses úteis em humanos. A semi-vida plasmática e a biodistribuição do fármaco e dos metabolitos no plasma, em tumores e órgãos principais podem também ser determinadas para facilitar a selecção dos fármacos mais apropriados para inibir um distúrbio. Tais medições podem ser realizadas. Por exemplo, pode ser efectuada análise de HPLC no plasma de animais tratados com o fármaco e a localização de compostos radiomarcados pode ser determinada utilizando métodos de detecção tais como raios X, varrimento CAT e MRI. Os compostos que mostram potente actividade inibidora nos ensaios de pesquisa, mas têm fracas características farmacocinéticas, podem ser optimizados através da alteração da estrutura química e de novos testes. A este respeito, compostos que apresentem boas características farmacocinéticas podem ser utilizados como modelo.

Estudos de toxicidade podem também ser realizados através da medição da composição celular do sangue. Por exemplo, podem ser realizados estudos de toxicidade num modelo animal adequado como se segue: (1) o composto é administrado a ratinhos (um ratinho de controlo não tratado deverá também ser utilizado); (2) amostras de sangue são periodicamente obtidas através da veia caudal de um ratinho em cada grupo de tratamento; e (3) as amostras são analisadas quanto às contagens de glóbulos vermelhos e brancos, à composição celular do sangue e à percentagem de linfócitos versus células polimorfonucleares. Uma comparação dos resultados para cada regime de dosagem com os controlos indica se está presente toxicidade.

Na terminação de cada estudo de toxicidade, mais estudos podem ser realizados através do sacrifício dos animais (de preferência, de acordo com as linhas orientadoras da American Veterinary Medicai Association, Report of the American Veterinary Medicai Assoe. Panei on Euthanasia, J. Am. Vet. Med 112 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Assoe. 202: 229-249, 1993). Os animais representativos de cada grupo de tratamento podem então ser examinados através de necropsia grosseira quanto a provas imediatas de metástase, doença invulgar ou toxicidade. São observadas anomalias grosseiras no tecido e os tecidos são examinados histologicamente. Compostos que causem uma redução no peso corporal ou nos componentes sanguíneos são menos preferidos, tal como o são compostos que possuam um efeito adverso nos órgãos principais. Em geral, quanto maior for o efeito adverso menos preferido é o composto.

Para o tratamento de cancros a dose diária esperada de um agente farmacêutico hidrófobo é de entre 1 a 500 mg/dia, de preferência 1 a 250 mg/dia, e de maior preferência 1 a 50 mg/dia. Os fármacos podem ser distribuídos menos frequentemente desde que os níveis plasmáticos da porção activa sejam suficientes para manter a eficácia terapêutica. Os níveis plasmáticos devem reflectir a potência do fármaco. Geralmente, quanto mais potente o composto menores os níveis plasmáticos necessários para alcançar eficácia.

Transcritos de ARNm de NgR foram verificados no cérebro e coração. SEQ ID NOs: 1 e/ou 3 permitirão, tal como detalhado acima, a pesquisa dos neurotransmissores/hormonas/ligandos endógenos que activem, agonizem ou antagonizem NgR e de compostos com potencial utilidade no tratamento de distúrbios incluindo distúrbios do SNC (p.ex., AVC) e distúrbios degenerativos tais como os associados a desmielinização.

Por exemplo, a activação do receptor NgR pode mediar a prevenção de crescimento de neurites. A inibição será benéfica tanto em lesão cerebral crónica como aguda. Ver, p.ex., Donovan et al. , J. Neurosci. 17: 5316-5326, 1997; Turgeon et al., J. Neurosci. 18: 6882-6891, 1998; Smith-Swintosky et al.r J. Neurochem. 69: 1890-1896, 1997; Gill et al., Brain Res. 797: 321-327, 1998; Suidan et al., Semin. Thromb. Hemost. 22: 125-133, 1996.

Farmacogenómica

Os agentes ou moduladores que têm um efeito estimulador ou inibidor na actividade de NgR (p.ex., expressão do gene de NgR) , tal como identificado através de um ensaio de pesquisa 113 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ aqui descrito podem ser administrados a indivíduos para tratar (profilacticamente ou terapeuticamente) distúrbios (p.ex., uma condição de doença tal como um distúrbio de desmielinização) associado a actividade de NgR aberrante. Em conjunto com tal tratamento, a farmacogenómica (i.e., o estudo da relação entre o genótipo de um indivíduo e a resposta desse indivíduo a um composto ou fármaco estranho) do indivíduo pode ser considerada. As diferenças no metabolismo de produtos terapêuticos podem conduzir a toxicidade grave ou insuficiência terapêutica através de alteração da relação entre a dose e a concentração sanguínea do fármaco farmacologicamente activo. Assim, a farmacogenómica do indivíduo permite a selecção de agentes eficazes (p.ex., fármacos) para tratamentos profiláticos ou terapêuticos baseados numa consideração do genótipo do indivíduo. Tal farmacogenómica pode ainda ser utilizada para determinar as dosagens apropriadas e os regimes terapêuticos. Concordantemente, a actividade da proteína NgR, expressão do ácido nucleico de NgR ou o teor da mutação dos genes de NgR num indivíduo podem ser determinados para deste modo seleccionar o agente ou agentes apropriados para tratamento terapêutico ou profiláctico do indivíduo. A farmacogenómica lida com variações hereditárias clinicamente significativas na resposta a fármacos devido à disposição alterada do fármaco e acção anormal em pessoas afectadas. Ver, p.ex., Eichelbaum, Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 23: 983-985, 1996 e Linder, Clin. Chem. 43: 254-266, 1997. Em geral, dois tipos de condições farmacogenéticas podem ser diferenciadas. Condições genéticas transmitidas como um único factor alterando o modo como os fármacos actuam no corpo (acção alterada do fármaco) ou condições genéticas transmitidas como factores únicos alterando o modo como o corpo actua nos fármacos (metabolismo alterado do fármaco). Estas condições farmacogenéticas podem ocorrer como defeitos raros ou como polimorfismos. Por exemplo, deficiência em glicose-6-fosfato-desidrogenase (G6PD) é uma enzimopatia herdada vulgar na qual a principal complicação clínica é hemólise após ingestão de fármacos oxidantes (anti-maláricos, sulfonamidas, analgésicos, nitrofuranos) e consumo de favas. 114

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Como caso ilustrativo, a actividade de enzimas metabolizadoras de fármacos é um determinante principal tanto da intensidade como da duração da acção do fármaco. A descoberta de polimorfismos genéticos de enzimas matabolizadoras de fármacos (p.ex., N-acetiltransferase 2 (NAT 2) e enzimas CYP2D6 e CYP2C19 do citocromo P450) proporcionou uma explicação quanto ao porquê de alguns pacientes não obterem os efeitos esperados dos fármacos ou mostrarem uma resposta exagerada aos fármacos e toxicidade grave após tomarem a dose padrão e segura de um fármaco. Estes polimorfismos são expressos em dois fenótipos na população, o metabolizador extensivo (ME) e o metabolizador fraco (MF) . A prevalência do MF é diferente entre diferentes populações. Por exemplo, o gene codificando para CYP2D6 é altamente polimórfico e foram identificadas várias mutações no MF, as quais conduziam todas à ausência de CYP2D6 funcional. Os metabolizadores fracos de CYP2D6 e CYP2C19 experimentam muito frequentemente uma resposta exagerada a fármacos e efeitos secundários quando recebem doses padrão. Se um metabolito for a porção terapêutica activa, o MF não mostra uma resposta terapêutica, tal como demonstrado para o efeito analgésico da codeína mediado pelo seu metabolito morfina formado através de CYP2D6. No outro extremo estão os designados metabolizadores ultra-rápidos que não respondem a doses padrão. Recentemente, a base molecular do metabolismo ultra-rápido foi identificada como sendo devida a amplificação do gene de CYP2D6.

Assim, pode ser determinada a actividade da proteína NgR, a expressão do ácido nucleico de NgR ou o teor das mutações dos genes de NgR num indivíduo para deste modo seleccionar agente ou agentes apropriados para tratamento terapêutico ou profilático do indivíduo. Adicionalmente, podem ser utilizados estudos farmacogenéticos para aplicar genotipagem de alelos polimórficos codificando enzimas metabolizadoras de fármacos para a identificação de um fenótipo de capacidade de resposta ao fármaco do indivíduo. Este conhecimento, quando aplicado à dosagem ou selecção de fármacos, pode evitar reacções adversas ou insuficiência terapêutica e aumentar assim a eficiência terapêutica ou profilática quando se trata um sujeito com um modulador de NgR, tal como um modulador identificado através de um dos ensaios de pesquisa exemplares aqui descritos. 115

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Monitorização da Eficácia Clinica A monitorização da influência de agentes (p.ex., fármacos, compostos) na expressão ou actividade de NgR (p.ex., a capacidade para modular proliferação e/ou diferenciação celular aberrante) pode ser aplicada não só em pesquisa de fármacos básicos, mas também em ensaios clínicos. Por exemplo, a eficácia de um agente determinada através de um ensaio de pesquisa tal como aqui descrito para aumentar a expressão do gene de NgR, os níveis proteicos ou sobrerregular a actividade de NgR, pode ser monitorizada em ensaios clínicos de sujeitos exibindo menor expressão do gene de NgR, menores níveis proteicos ou actividade subregulada de NgR. Alternativamente, a eficácia de um agente determinada através de um ensaio de pesquisa para diminuir a expressão do gene de NgR, dos níveis proteicos ou subregular a actividade de NgR, pode ser monitorizada em ensaios clínicos de sujeitos exibindo maior expressão de gene de NgR, maiores níveis proteicos ou actividade de NgR sobrerregulada. Em tais ensaios clínicos, a expressão ou actividade de NgR e, de preferência, de outros genes que tenham sido implicados, por exemplo, numa doença ou distúrbio, pode ser utilizada como uma "leitura" ou um marcador da capacidade de resposta imunitária de uma determinada célula.

Por exemplo, podem ser identificados genes, incluindo de NgR, que sejam modulados em células através de tratamento com um agente (p.ex., composto, fármaco ou molécula pequena) que module a actividade de NgR (p.ex., identificada num ensaio de pesquisa tal como aqui descrito). Assim, para estudar o efeito de agentes em distúrbios de desmielinização, por exemplo, num ensaio clínico, podem ser isoladas células e o ARN preparado e analisado quanto aos níveis de expressão de NgR e outros genes implicados no distúrbio. Os níveis de expressão génica (i.e., um padrão de expressão génica) podem ser quantificados através de análise Northern blot ou RT-PCR, tal como aqui descrito, ou alternativamente através de medição da quantidade de proteína produzida por um dos métodos tal como aqui descrito ou através de medição dos níveis de actividade de NgR ou de outros genes. Deste modo, o padrão de expressão génica pode servir como marcador, indicativo da resposta fisiológica das células ao agente. Concordantemente, este estado de resposta pode ser 116 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ determinado antes, e a vários pontos durante o tratamento do indivíduo com o agente.

Num caso, a divulgação proporciona um método para monitorização da eficácia do tratamento de um sujeito com um agente (p.ex., um agonista, antagonista, proteína, péptido, peptidomimético, ácido nucleico, molécula pequena ou outro fármaco candidato identificado através dos ensaios de pesquisa aqui descritos) compreendendo os passos de (i) obtenção de uma amostra pré-administração de um sujeito antes da administração do agente; (ii) detecção do nível de expressão de uma proteína NgR, ARNm ou ADN genómico na amostra pré-administração; (iii) obtenção de uma ou mais amostras pós-administração do sujeito; (iv) detecção do nível de expressão ou actividade da proteína NgR, ARNm ou ADN genómico nas amostras pós-administração; (v) comparação do nível de expressão ou actividade da proteína NgR, ARNm ou ADN genómico na amostra pré-administração com a proteína NgR, ARNm ou ADN genómico na amostra ou amostras pós-administração; e (vi) alteração da administração do agente ao sujeito concordantemente. Por exemplo, uma maior administração do agente pode ser desejável para aumentar a expressão ou actividade de NgR até níveis superiores aos detectados, i.e., para aumentar a eficácia do agente. Alternativamente, uma menor administração do agente pode ser desejável para diminuir a expressão ou actividade de NgR até níveis inferiores aos detectados, i.e., para diminuir a eficácia do agente. Métodos de Tratamento A presente divulgação ensina métodos tanto profiláticos como terapêuticos de tratamento de um sujeito em risco de (ou susceptível a) um distúrbio ou possuindo um distúrbio associado a expressão ou actividade aberrante de NgR.

Doenças e distúrbios que são caracterizados por maiores níveis ou actividade biológica (relativamente a um sujeito não sofrendo da doença ou distúrbio) podem ser tratados com Produtos terapêuticos que antagonizem (i.e., reduzam ou inibam) a actividade. Os Produtos terapêuticos que antagonizam a actividade podem ser administrados de um modo terapêutico ou profilático. Produtos terapêuticos que podem ser utilizados incluem, mas não se limitam a: (i) um polipéptido NgR, ou 117 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT análogos, derivados, fragmentos ou homólogos deste; (ii) anticorpos para um péptido NgR; (iii) ácidos nucleicos codificando um péptido NgR; (iv) administração de ácido nucleico anti-sentido e ácidos nucleicos que sejam "disfuncionais" (i.e., devido a uma inserção heteróloga dentro das sequências de codificação para um péptido NgR) são utilizados para "knockout" da função endógena de um péptido NgR através de recombinação homóloga (ver, p.ex., Capecchi, Science 244: 1288-1292, 1989); ou (v) moduladores (i.e., inibidores, agonistas e antagonistas, incluindo imitadores de péptidos adicionais da divulgação ou anticorpos específicos para um péptido desta divulgação) que alterem a interacção entre um péptido NgR e o seu parceiro de ligação.

As doenças e distúrbios que são caracterizados por menores níveis ou actividade biológica (relativamente a um sujeito não sofrendo da doença ou distúrbio) podem ser tratados com Produtos terapêuticos que aumentem (i.e., são agonistas) a actividade. Os Produtos terapêuticos que sobrerregulam a actividade podem ser administrados de um modo terapêutico ou profilático. Produtos terapêuticos que podem ser utilizados incluem, mas não se limitam a, um péptido NgR ou análogos, derivados, fragmentos ou homólogos deste; ou um agonista que aumente a biodisponibilidade.

Os maiores ou menores níveis podem ser facilmente detectados através de quantificação do péptido e/ou ARN, através da obtenção de uma amostra de tecido do paciente (p.ex., a partir de tecido de biopsia) e seu ensaio in vitro quanto aos níveis de ARN ou péptido, estrutura e/ou actividade dos péptidos expressos (ou ARNms de um péptido NgR). Métodos que são bem conhecidos na arte incluem, mas não se limitam a, imunoensaios (p.ex., através de análise Western blot, imunoprecipitação seguida de electroforese em gel de dodecilsulfato de sódio (SDS)-poliacrilamida, imunocitoquímica, etc.) e/ou ensaios de hibridação para detectar a expressão de ARNms (p.ex., ensaios Northern, dot blots, hibridação in situr etc.). A divulgação ensina um método para prevenção, num sujeito, de uma doença ou condição associada a uma expressão ou actividade aberrante de NgR, através da administração ao 118 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ sujeito de um agente que module a expressão de NgR ou pelo menos uma actividade de NgR. Os sujeitos em risco de uma doença que seja causada ou tenha a contribuição de uma expressão ou actividade aberrante de NgR podem ser identificados através, por exemplo, de qualquer um ou de uma combinação de ensaios de diagnóstico ou prognóstico tal como aqui descrito. A administração de um agente profilático pode ocorrer antes da manifestação dos sintomas caracteristicos da aberração de NgR, para que seja prevenida uma doença ou distúrbio ou, alternativamente, seja atrasada na sua progressão. Dependendo do tipo de aberração de NgR, por exemplo, pode ser utilizado um agonista de NgR ou antagonista de NgR para tratamento do sujeito. 0 agente apropriado pode ser determinado com base em ensaios de pesquisa aqui descritos. A divulgação ensina também métodos de modulação da expressão ou actividade de NgR para fins terapêuticos. 0 método modulador desta divulgação envolve pôr em contacto uma célula com um agente que module uma ou mais das actividades da actividade da proteína NgR associadas à célula. Um agente que modula a actividade da proteína NgR pode ser um agente tal como aqui descrito, tal como um ácido nucleico ou uma proteína, um ligando cognato de ocorrência natural de uma proteína NgR, um péptido, um peptidomimético de NgR ou outra molécula pequena. Num caso, o agente estimula uma ou mais actividades da proteína NgR. Exemplos de tais agentes estimuladores incluem a proteína NgR activa e uma molécula de ácido nucleico codificando NgR que foi introduzida na célula. Noutro caso, o agente inibe uma ou mais das actividades da proteína NgR. Exemplos de tais agentes inibidores incluem moléculas de ácido nucleico de NgR anti-sentido e anticorpos anti-NgR. Estes métodos moduladores podem ser efectuados in vitro (p.ex., através de cultura da célula com o agente) ou, alternativamente, in vivo (p.ex., através da administração do agente a um sujeito). Como tal, a presente divulgação proporciona métodos de tratamento de um indivíduo afligido com uma doença ou distúrbio caracterizado por expressão ou actividade aberrante de uma proteína NgR ou molécula de ácido nucleico. Num caso, o método envolve a administração de um agente (p.ex., um agente identificado através de um ensaio de pesquisa aqui descrito), ou combinação de agentes que modula 119 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ (p.ex., sobrerregula ou subregula) a expressão ou actividade de NgR. Noutro caso, o método envolve a administração de uma proteína ou molécula de ácido nucleico de NgR como terapia para compensar a expressão ou actividade reduzida ou aberrante de NgR.

Terapia Génica

Mutações no gene de NgR que resultem em perda da função normal do produto do gene de NgR estão subjacentes a estados de doença humana de NgR. A divulgação ensina terapia génica para restaurar a actividade de NgR para tratar esses estados de doença. A distribuição de um gene de NgR funcional a células apropriadas é efectuada ex vivo, in situ, ou in vivo através da utilização de vectores, e mais particularmente vectores virais (p.ex., adenovírus, vírus adeno-associados ou um retrovírus), ou ex vivo através da utilização de métodos de transferência física de ADN (p.ex., lipossomas ou tratamentos químicos). Ver, por exemplo, Anderson, Nature, suplemento a 392(6679): 25-20, 1998. Para revisões adicionais da tecnologia de terapia génica ver Friedmann, Science 244: 1275-1281, 1989; Verma, Sei. Am. 68-84, 1990; e Miller, Nature 357: 455-460, 1992. Alternativamente, está contemplado que noutros estados de doença humana, a prevenção da expressão, ou inibição da actividade de NgR será útil no tratamento de estados de doença. Está contemplado que a terapia anti-sentido ou terapia génica pode ser aplicada para regular negativamente a expressão de NgR. A presente divulgação ensina métodos tanto profiláticos como terapêuticos de tratamento de um sujeito em risco de (ou susceptível a) um distúrbio ou possuindo um distúrbio associado a expressão ou actividade aberrante de NgR.

As doenças e distúrbios que são caracterizados por maiores níveis ou actividade biológica (relativamente a um sujeito não sofrendo da doença ou distúrbio) podem ser tratados com Produtos terapêuticos que antagonizem (i.e., reduzam ou inibam) a actividade. Os Produtos terapêuticos que antagonizam a actividade podem ser administrados de um modo terapêutico ou profilático. Produtos terapêuticos que podem ser utilizados incluem, mas não se limitam a, (i) um polipéptido NgR, ou análogos, derivados, fragmentos ou 120 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ homólogos deste; (ii) anticorpos para um péptido NgR; (iii) ácidos nucleicos codificando um péptido NgR; (iv) administração de ácido nucleico anti-sentido e ácidos nucleicos que sejam "disfuncionais" (i.e., devido a uma inserção heteróloga dentro das sequências de codificação de sequências de codificação para um péptido NgR) são utilizados para "knockout" da função endógena de um péptido NgR através de recombinação homóloga (ver, p.ex., Capecchi (1989), acima); ou (v) moduladores (i.e., inibidores, agonistas e antagonistas, incluindo imitadores de péptidos adicionais desta divulgação ou anticorpos específicos para um péptido desta divulgação) que alterem a interacção entre um péptido NgR e o seu parceiro de ligação.

As doenças e distúrbios que são caracterizados por menores níveis ou actividade biológica (relativamente a um sujeito não sofrendo da doença ou distúrbio) podem ser tratados com Produtos terapêuticos que aumentem (i.e., são agonistas) a actividade. Os Produtos terapêuticos que sobrerregulam a actividade podem ser administrados de um modo terapêutico ou profilático. Produtos terapêuticos que podem ser utilizados incluem, mas não se limitam a, um péptido NgR, ou análogos, derivados, fragmentos ou homólogos deste; ou um agonista que aumente a biodisponibilidade.

Maiores ou menores níveis podem ser facilmente detectados através da quantificação do péptido e/ou ARN, através da obtenção de uma amostra de tecido do paciente (p.ex., a partir de tecido de biopsia) e seu ensaio in vitro quanto aos níveis de ARN ou péptido, estrutura e/ou actividade dos péptidos expressos (ou ARNms de um péptido NgR) . Métodos que são bem conhecidos na arte incluem, mas não se limitam a, imunoensaios (p.ex., através de análise Western blot, imunoprecipitação seguida de electroforese em gel de dodecilsulfato de sódio (SDS)-poliacrilamida, imunocitoquímica, etc.) e/ou ensaios de hibridação para detectar a expressão de ARNm (p.ex., ensaios Northern, dot blots, hibridação in situ, etc.). A divulgação ensina um método para prevenção, num sujeito, de uma doença ou condição associada a uma expressão ou actividade aberrante de NgR, através da administração a um sujeito de um agente que module a expressão de NgR ou pelo 121 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ menos uma actividade de NgR. Os sujeitos em risco de uma doença que seja causada ou tenha a contribuição de uma expressão ou actividade aberrante de NgR podem ser identificados através, por exemplo, de qualquer um ou de uma combinação de ensaios de diagnóstico ou prognóstico tal como aqui descrito. A administração de um agente profilático pode ocorrer antes da manifestação dos sintomas caracteristicos da aberração de NgR, para que seja prevenida uma doença ou distúrbio ou, alternativamente, seja atrasada na sua progressão. Dependendo do tipo de aberração de NgR, por exemplo, pode ser utilizado um agonista de NgR ou antagonista de NgR para tratamento do sujeito. 0 agente apropriado pode ser determinado com base em ensaios de pesquisa aqui descritos. A divulgação ensina também métodos de modulação da expressão ou actividade de NgR para fins terapêuticos. 0 método modulador da divulgação envolve pôr em contacto uma célula com um agente que module uma ou mais das actividades da actividade da proteína NgR associada à célula. Um agente que modula a actividade da proteína NgR pode ser um agente tal como aqui descrito, tal como um ácido nucleico ou uma proteína, um ligando cognato de ocorrência natural de uma proteína NgR, um péptido, um peptidomimético de NgR ou outra molécula pequena. Num caso, o agente estimula uma ou mais actividades da proteína NgR. Exemplos de tais agentes estimuladores incluem a proteína NgR activa e uma molécula de ácido nucleico codificando NgR que foi introduzida na célula. Noutro caso, o agente inibe uma ou mais das actividades da proteína NgR. Exemplos de tais agentes inibidores incluem moléculas de ácido nucleico de NgR anti-sentido e anticorpos anti-NgR. Estes métodos moduladores podem ser efectuados in vitro (p.ex., através de cultura da célula com o agente) ou, alternativamente, in vivo (p.ex., através da administração do agente a um sujeito). Como tal, a presente divulgação proporciona métodos de tratamento de um indivíduo afligido com uma doença ou distúrbio caracterizado por expressão ou actividade aberrante de uma proteína NgR ou molécula de ácido nucleico. Num caso, o método envolve a administração de um agente (p.ex., um agente identificado através de um ensaio de pesquisa aqui descrito), ou combinação de agentes que modula (p.ex., sobrerregula ou subregula) a expressão ou actividade 122 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT de NgR. Noutro caso, o método envolve a administração de uma proteína NgR ou molécula de ácido nucleico como terapia para compensar a expressão ou actividade reduzida ou aberrante de NgR. O presente invento não deve ser limitado no âmbito pelas concretizações específicas aqui descritas. De facto, várias modificações do presente invento para além das descritas aqui tornar-se-ão aparentes dos peritos na arte a partir da descrição anterior e da figura anexa. A seguinte Tabela 5 contém as sequências de polinucleótidos e polipéptidos exemplares da divulgação.

Tabela 5

A seguinte sequência de ADN NgR2 <SEQ ID NO:l> foi identificada em humanos: ATGCTGCCCGGGCTCAGGCGCCTGCTGCAAGCTCCCGCCTCGGCCTGCCTCCTGCTGATG CTCCTGGCCCTGCCCCTGGCGGCCCCCAGCTGCCCCATGCTCTGCACCTGCTACTCATCC CCGCCCACCGTGAGCTGCCAGGCCAACAACTTCTCCTCTGTGCCGCTGTCCCTGCCACCC AGCACTCAGCGACTCTTCCTGCAGAACAACCTCATCCGCACGCTGCGGCCAGGCACCTTT GGGTCCAACCTGCTCACCCTGTGGCTCTTCTCCAACAACCTCTCCACCATCTACCCGGGC ACTTTCCGCCACTTGGAAGCCCTGGAGGAGCTGGACCTCGGTGACAACCGGCACCTGCGC TCGCTGGAGCCCGACACCTTCCAGGGCCTGGAGCGGCTGCAGTCGCTGCATTTGTACCGC TGCCAGCTCAGCAGCCTGCCCGGCAACATCTTCCGAGGCCTGGTCAGCCTGCAGTACCTC TACCTCCAGGAGAACAGCCTGCTCCACCTACAGGATGACTTGTTCGCGGACCTGGCCAAC CTGAGCCACCTCTTCCTCCACGGGAACCGCCTGCGGCTGCTCACAGAGCACGTGTTTCGC GGCCTGGGCAGCCTGGACCGGCTGCTGCTGCACGGGAACCGGCTGCAGGGCGTGCACCGC GCGGCCTTCCGCGGCCTCAGCCGCCTCACCATCCTCTACCTGTTCAACAACAGCCTGGCC TCGCTGCCCGGCGAGGCGCTCGCCGACCTGCCCTCGCTCGAGTTCCTGCGGCTCAACGCT AACCCCTGGGCGTGCGACTGCCGCGCGCGGCCGCTCTGGGCCTGGTTCCAGCGCGCGCGC GTGTCCAGCTCCGACGTGACCTGCGCCACCCCCCCGGAGCGCCAGGGCCGAGACCTGCGC GCGCTCCGCGAGGCCGACTTCCAGGCGTGTCCGCCCGCGGCACCCACGCGGCCGGGCAGC CGCGCCCGCGGCAACAGCTCCTCCAACCACCTGTACGGGGTGGCCGAGGCCGGGGCGCCC CCAGCCGATCCCTCCACCCTCTACCGAGATCTGCCTGCCGAAGACTCGCGGGGGCGCCAG GGCGGGGACGCGCCTACTGAGGACGACTACTGGGGGGGCTACGGGGGTGAGGACCAGCGA GGGGAGCAGATGTGCCCCGGCGCTGCCTGCCAGGCGCCCCCGGACTCCCGAGGCCCTGCG CTCTCGGCCGGGCTCCCCAGCCCTCTGCTTTGCCTCCTGCTCCTGGTGCCCCACCACCTC

123 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

A seguinte sequência de aminoácidos <SEQ ID NO:2> é a sequência de aminoácidos prevista derivada da sequência de ADN de SEQ ID NO:1: MLPGLRRLLQAPASACLLLMLLALPLAAPSC PMLCTCYSSPPTVSCQANNFSSVPLSLPPST QRLFLQNNLIRTLRPGTFGSNLLTLWLFSNN LSTIYPGTFRHLQALEELDLGDNRHLRSLEP DTFQGLERLQSLHLYRCQLSSLPGNIFRGLV SLQYLYLQENSLLHLQDDLFADLANLSHLFL HGNRLRLLTEHVFRGLGSLDRLLLHGNRLQG VHRAAFRGLSRLTILYLFNNSLASLPGEALA DLP SLEFLRLNANPWACDCRARPLWAWFQRA RVSSSDVTCATPPERQGRDLRALREADFQAC PPAAPTRPGSRARGNSSSNHLY GVAEAGAPP ADPSTLYRDLPAEDSRGRQGGDAPTEDDYWG GYGGEDQRGEQMCPGAACQAPPDSRGPALSA GLP SPLLCLLLLVPHHL

A seguinte sequência de ADN NgR3 <SEQ ID NO:3> foi identificada em ratinho: ATGTCTTGGCAGTCTGGAACCACAGTGACACAATCTCCCGTGCAGGCTGCTCAGGTCTCA GGGTGCTGTGTGGAATTGCTGCTGTTGCTGCTCGCTGGAGAGCTACCTCTGGGTGGTGGT TGTCCTCGAGACTGTGTGTGCTACCCTGCGCCCATGACTGTCAGCTGCCAGGCACACAAC TTTGCTGCCATCCCGGAGGGCATCCCAGAGGACAGTGAGCGCATCTTCCTGCAGAACAAT CGCATCACCTTCCTCCAGCAGGGCCACTTCAGCCCCGCCATGGTCACCCTCTGGATCTAC TCCAACAACATCACTTTCATTGCTCCCAACACCTTCGAGGGCTTTGTGCATCTGGAGGAG CTAGACCTTGGAGACAACCGACAGCTGCGAACGCTGGCACCCGAGACCTTCCAAGGCCTG GTGAAGCTTCACGCCCTCTACCTCTATAAGTGTGGACTGAGCGCCCTGCCCGCAGGCATC TTTGGTGGCCTGCACAGCCTGCAGTATCTCTACTTGCAGGACAACCATATCGAGTACCTC CAAGATGACATCTTTGTGGACCTGGTCAATCTCAGTCACTTGTTTCTCCATGGTAACAAG CTATGGAGCCTGGGCCAAGGCATCTTCCGGGGCCTGGTGAACCTGGACCGGTTGCTGCTG CATGAGAACCAGCTACAGTGGGTTCACCACAAGGCITTCCATGACCTCCACAGGCTAACC ACCCTCTTTCTCTTCAACAACAGCCTCACTGAGCTGCAGGGTGACTGTCTGGCCCCCCTG GTGGCCTTGGAGTTCCTTCGCCTCAATGGGAATGCTTGGGACTGTGGCTGCCGGGCACGT TCCCTGTGGGAATGGCTGCGAAGGTTCCGTGGCTCTAGCTCTX3CTGTCCCCTGCGCGACC CCCGAGCTGCGGCAAGGCCAGGATCTGAAGCTGCTGAGGGTGGAGGACTTCCGGAACTGC ACAGGACCAGTGTCTCCTCACCAGATCAAGTCTCACACGCTTACCACCTCTGACAGGGCT GCCCGCAAGGAGCACCATCCGTCCCATGGGGCCTCCAGGGACAAAGGCCACCCACATGGC catccgcctggctccaggtcaggttacaagaaggcaggcaagaactgcaccagccacagg AACCGGAACCAGATCTCTAAGGTGAGCTCTGGGAAAGAGCTTACCGAACTGCAGGACTAT GCCCCCGACTATCAGCACAAGITCAGCTTTGACATCATGCCCACCGCACGACCCAAGAGG AAGGGCAAGTGTGCTCGCAGGACCCCCATCCGTGCCCCCAGTGGGGTGCAGCAGGCATCC TCAGGCACGGCCCTTGGGGCCCCACTCCTGGCCTGGATACTGGGGCTGGCAGTCACTCTC CGC

124 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT A seguinte sequência proteica <SEQ ID NO:4> é a proteína deduzida de SEQ ID NO:3: MSWQSGTT VTQSP VQ AAQ VSGCC VELLLLLL AGELPLGGGCPRDCVCVPAPMTVSCQAHNFA AIPEGIPEDSERIFLQNNRITFLQQGHFSPA MVTLWIYSNNITFIAPNTFEGFVHLEELDLG DNRQLRTLAPETFQ GLVKLHALYLYKC GLS A LPAGIFGGLHSLQYLYLQDNHIEYLQDDIFV DL VNLSHLFLHGNKL WSLGQGIFRGL VNLDR LLLHENQLQWVHHKAFHDLHRLTTLFLFNNS LTELQGDCLAPLVALEFLRLNGNAWDCGCRA RSLWEWLRRFRGSSS AVPCATPELRQGQDLK LLRVEDFRNCTGP VSPHQIKSHTLTTSDRA A RKEHHPSHGASRDKGHPHGHPPGSRSGYKKA GKNCTSHRNRNQISKVSSGKELTELQDYAPD YQHKFSFDIMPT ARPKRKGKCARRTPIRAPS GVQQASSGTALGAPLLAWILGLAVTLR

A seguinte sequência proteica <SEQ ID NO:5> é NgRl de humanos: MKRASAGGSRLLAWVLWLQAWQVAAPCPGA C CYNEPKVTTSCPQQGLQA VP VGIPAASQRI FLHGNRISHVPAASFRACRNLTILWLHSNVL ARIDAAAFTGLALLEQLDLSDNAQLRSVDPA TFHGLGRLHTLHLDRCGLQELGPGLFRGLAA LQYLYLQDNALQALPDDTFRDLGNLTHLFLH GNRISSVPERAFRGLHSLDRLLLHQNRV AHV HPHAFRDLGRLMTLYLFANNLSALPTEALAP LRALQYLRLNDNPWVCDCRARPLWAWLQKFR GS S SEVP CSLPQRLA GRDLKRLAANDLQ GCA VATGPYHPIWTGRATDEEPLGLPKCCQPDAA DKASVLEPGRPA S AGNALKGRVPPGD SPP GN GSGPRHINDSPFGTLPGSAEPPLTAVRPEGS EPPGFPTSGPRRRPGCSRKNRTRSHCRLGQ A GSGGGGTGDSEGSGALPSLTCSLTPLGLALV LWTVLGPC

125 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT A seguinte sequência de aminoácidos <SEQ ID NO:6> é uma Sequência de Consenso de NgR baseada em homologia com NgRl CPXXCXCYXXPXXTXSCXXXXXXXXPX XXPXXXXRXFLXXNXIXXXXXXXFXXXXXXXXLWX XSNXXXXIXXXXFXXXXXLEXLDLXDNXXLR XXXPXTFXGLXXLXLXLXXCXLXXLXXXXFX GLXXLQYLYLQXNXXXXLXDDXFXDLXNLXH LFLHGNXXXXXXXXXFRGLXXLDRLLLHXNX XXXVHXXAFXXLXRLXXLXLFXNXLXXLXXX XLAXLXXLXXLRLNXNXWXCXCRARXLWXWX XXXRXSSSXVXCXXPXXXXGXDLX X.L X X X D X XXCXXXXXPXXPXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXGXXXXXXXXXXXX PPXXXSXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXRXXX XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXLXXXXX XX X XX L

A seguinte sequência proteica <SEQ ID N0:7> é o domínio activo de 66 aminoácidos de Nogo: RIYKGVIQAIQKSDEGHPFRAYLESEVAISE ELVQKYSNSALGHVNCTIKELRRLFLVDDLV DS L K

A seguinte sequência proteica <SEQ ID NO:8> é a sequência de aminoácidos da NgR2 madura: CPMLCTCYSSPPTVSC Q.A NNFSSVPLSLPPS TQRLFLQNNLIRTLRPGTFGSNLLTLWLFSN NLSTIYPGTFRHLQALEELDLGDNRHLRSLE PDTFQGLERLQSLHLYRCQLSSLPGNIFRGL VSLQYLYLQENSLLHLQDDLFADLANLSHLF LHGNRLRLLTEHVFRGLGSLDRLLLHGNRLQ GVHRAAFRGLSRLTILYLFNNSLASLPGEAL ADLPSLEFLRLNANPWACDCRARPLWAWFQR ARVSSSDVTCATPPERQGRDLRALREADFQA CPPAAPTRPGSRARGNSSSNHLYGYAEAGAP PADPSTLYRDLPAEDSRGRQGGDAPTEDDYW GGYGGEDQRGEQMCPGAACQAPPD SRGPAL S AGLPSPLLCLLLL VP Η H L 126 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

A seguinte sequência proteica <SEQ ID N0:9> é a sequência de aminoácidos da NgR3 madura: CPRDCVCYPAPMTVSCQAHNFAAIPEGIPED SERIFLQNNRITFLQQGHFSPAMVTLWIYSN NITFIAPNTFEGFVHLEELDLGDNRQLRTLA PETFQGLVKLHALYLYKCGLSALPAGIFGGL HSLQYLYLQDNHIEYLQDDIFVDLVNLSHLF LHGNKLWSLGQGIFRGLVNLDRLLLHENQLQ WVHHKAFHDLHRLTTLFLFNNSLTELQGDCL APLVALEFLRLNGNAWDCGCRARSLWÈWLRR FRGSSSAVPCATPELRQGQDLKLLRVEDFRN CTGPVSPHQIKSHTLTTSDRAARKEHHPSHG ASRDKGHPHGHPPGSRSGYKKAGKNCTSHRN RNQISKVSSGKELTELQDYAPDYQHKFSFDI MPTARPKRKGKCARRTPIRAPSGVQQASSGT ALGAPLLAWILGLAVTLR

A seguinte sequência de aminoácidos <SEQ ID NO:10> é um motivo de cisteina conservado (Domínio de cisteína 1) da NgR e homólogos baseada na Sequência de Consenso: CPXXCXCYXXPXXTXSC

A seguinte sequência de aminoácidos <SEQ ID N0:11> é um motivo de cisteína conservado (Domínio de cisteína 2) da NgR e homólogos baseada na Sequência de Consenso: NXWXCXCRARXLWXWXXXXRXSSSXVXCXXP XXX X G X D L X X L X X X D X X X C

A seguinte sequência de aminoácidos <SEQ ID N0:12> é um domínio rico em Leucina conservado da NgR e homólogos baseados na Sequência de Consenso: RXFLXXNXIXXXXXXXFXXXXXXXXLWXXSN XXXXIXXXXFXXXXXLEXLDLXDNXXLRXXX PXTFXGLXXLXLXLXXCXLXXLXXXXFXGLX XLQYLYLQXNXXXXLXDDXFXDLXNLXHLFL HGNXXXXXXXXXFRGLXXLDRLLLHXNXXXX VHXXAFXXLXRLXXLXLFXNXLXXLXXXXLA X L XX L XX LR L A menos que indicado em contrário, X é qualquer aminoácido. Por exemplo, onde indicado X pode não ser um aminoácido. As características adicionais do presente invento serão aparentes a partir dos seguintes Exemplos. Os Exemplos 1-5 são reais, enquanto os restantes Exemplos são proféticos. 127

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Tal como mostrado pelos seguintes Exemplos, um gene codificando novos NgR foi identificado através de análise computacional dos dados da sequência de ADN. As proteínas codificadas por NgR2 e NgR3 têm uma putativa sequência sinal, oito domínios de repetição ricos em leucina numa região rica em leucina conservada (SEQ ID N0:12), uma região rica em cisteína não conservada (SEQ ID NO:10) N-terminal à região rica em leucina, um segundo domínio rico em cisteína (SEQ ID NO:11) C-terminal à região rica em leucina, e um putativo local de ligação a glicofosfatidilinositol (ligação a GPI). NgR2 e NgR3 diferem da sequência de NgR anteriormente identificada. Os homólogos de NgR, quando comparados com NgR conhecidos, mostram uma sequência de consenso (SEQ ID NOs:6). Os putativos NgR2 e NgR3 maduros são mostrados na Tabela 5 como SEQ ID NOs: 8 e 9, respectivamente.

Exemplo 1: Pesquisa por Tblastn da base de dados HTG A sequência proteica para a NgR humana (NgRl) (SEQ ID NO: 5) foi utilizada para pesquisar a base de dados genómicos de elevada tiragem (HTG) cuja utilização é familiar dos peritos na arte. A base de dados HTG é uma parte de GenBank, uma base de dados de sequências genéticas compreensiva de NIH, que inclui uma colecção anotada de todas as sequências de ADN publicamente disponíveis (Nucleic Acids Res. 28: 15-8, 2000). A base de dados HRG inclui sequências obtidas a partir de ADN genómico. Dentro do ADN genómico, os genes são tipicamente codificados através de múltiplos segmentos de ADN designados exões. Assim quando se alinha uma sequência de ADNc (ou uma sequência proteica codificada por uma sequência de ADNc) com uma sequência genómica, a sequência será quebrada em segmentos dependendo do número de exões no gene. O algoritmo BLAST, que significa Basic Local Alignment Search Tool (Ferramenta Básica de Pesquisa Local de Alinhamentos) é adequado para determinação da semelhança de sequências (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410, 1990). O suporte lógico para realização de análises BLAST está publicamente disponível através do National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). O algoritmo básico BLAST envolve primeiro a identificação de pares de sequências de elevado registo (HSPs) através da identificação de palavras curtas de comprimento W na sequência 128 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT de busca que coincidam ou satisfaçam algum registo limiar com valor positivo T quando alinhadas com uma palavra com o mesmo comprimento numa sequência da base de dados. T é referido como o limiar do registo da palavra de vizinhança (Altschul et al. , supra). Estes acertos iniciais de palavras de vizinhança actuam como sementes para iniciação de pesquisas para encontrar HSPs contendo-as. Os acertos de palavras são prolongados em ambas as direcções ao longo de cada sequência até o registo do alinhamento cumulativo poder ser aumentado. A extensão dos acertos de palavras em cada direcção é parada quando: 1) o registo do alinhamento cumulativo cair fora numa quantidade de X do seu valor máximo alcançado; 2) o registo cumulativo cair para zero ou abaixo, devido a acumulação de um ou mais alinhamentos de resíduos com registo negativo; ou 3) ser alcançado o final de uma das sequências. Os parâmetros do algoritmo Blast W, T e X determinam a sensibilidade e a velocidade do alinhamento. 0 programa Blast utiliza como defeito um comprimento de palavra (W) de 11, alinhamentos da matriz de registos BLOSUM62 (ver Henikoff et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89: 10915-10919, 1992) (B) de 50, expectativa (E) de 10, M=5, N=4, e uma comparação de ambas as cadeias. O algoritmo BLAST (Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90: 5873-5787, 1993) e Gapped BLAST efectuam uma análise estatística da semelhança entre duas sequências. Uma medida da semelhança proporcionada pelo algoritmo BLAST é a probabilidade da menor soma (P(N)), que proporciona uma indicação da probabilidade de uma coincidência entre duas sequências nucleotídicas ou de aminoácidos ocorrer por acaso. Por exemplo, um ácido nucleico é considerado semelhante a um gene de NgR ou ADNc se a probabilidade da menor soma na comparação do ácido nucleico de teste com um ácido nucleico de NgR for de menos de cerca de 1, de preferência menos de cerca de 0,1, de maior preferência menos de cerca de 0,01, e de ainda preferência menos de cerca de 0,001.

Para pesquisar a base de dados HTG com a sequência da proteína NgR, utilizámos uma variação do algoritmo BLAST conhecido como o programa tblastn, que compara uma sequência proteica de busca contra uma base de dados de sequências nucleotídicas traduzidas dinamicamente em todos os enquadramentos de leitura (J. Mol. Biol. 215: 403-410, 1990; 129 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997). Os resultados da pesquisa por tblastn indicaram a presença de genes na base de dados com uma identidade significativa com NgR. Para além de descobrir acertos com clones genómicos que contêm os genes de NgR humano e de ratinho, verificámos acertos com clones onde a identidade não era elevada, mas era mesmo assim muito significativa. Foram encontrados três clones humanos (Números de Entrada: AC068514, AC016869, AC013606) com um valor de e de 4e“43 e foi encontrado um clone de ratinho (N.° de Entrada AC021768) com um valor de e de le-78. Os três clones humanos pareciam todos codificar o mesmo gene, assim as análises posteriores foram confinadas a AC013606.

Exemplo 2: Previsão da sequência proteica de NgR2 humana (AC013606) A sequência proteica de NgR humana alinhou com duas regiões da sequência traduzida da sequência nucleotidica AC013606, indicando que o novo gene era codificado por pelo menos dois exões. Para definir o gene completo, utilizámos o programa de computador GENSCAN™ (J. Mol. Biol. 268 : 78-94, 1997) que pode identificar estruturas exão/intrão completas de genes no ADN genómico. A previsão de genes através de GENESCAN™ continha sete exões. Através da comparação destes exões previstos com a NgR, foi concluído que o novo gene humano contém dois destes exões e uma parte de outro (contendo a metionina iniciadora). O ADNc previsto (ARNm) codificado por estes três exões foi montado a partir de AC013606 (HTG11; depositada em Março de 2000; comprimento = 143899; GenBank edição 118.0; SEQ ID NO:15) através da combinação de nucleótidos dos três exões cujas coordenadas são: 123292-123322 (exão 1); 130035-130516 (exão 2); e 138589-139335 (exão 3) . A sequência para esta sequência de ADNc é SEQ ID NO:l (sequência nucleotidica da NgR2 humana; AC013606). A tradução deste ADNc proporciona a sequência proteica da NgR2 humana (SEQ ID NO:2).

Utilizámos a sequência proteica da NgR2 humana como sequência de busca contra a base de dados de EST humanas. Foram encontrados vários acertos de elevada significância indicando que o ARNm de NgR2 é expresso em vários tecidos incluindo cérebro fetal. Para além disso, duas destas EST proporcionavam apoio à estrutura do exão que deduzimos. Uma 130 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ EST (Ν° de Entrada: GB_EST19:ΑΙ346757) contém 565 nucleótidos correspondendo aos aminoácidos 84-271 da NgR2 humana (SEQ ID No:4). Esta abrange o segundo intrão situado entre os aminoácidos 171 e 172, e proporciona uma prova positiva para o processamento dos exões 2 e 3 ao nivel do ARNm. Outra EST (GB_EST26:AI 929019) contém 545 nucleótidos, parte dos quais corresponde aos aminoácidos 1-75 da NgR2 humana (SEQ ID NO:2). Esta abrange o primeiro intrão localizado entre os aminoácidos 10 e 11 e proporciona uma prova positiva para o processamento dos exões 1 e 2 ao nivel do ARNm.

Exemplo 3: Previsão da sequência proteica de NgR3 de ratinho (AC021768) A sequência proteica de NgR humana alinhou com apenas uma região da sequência traduzida da sequência nucleotídica AC021768, indicando que a maior parte do novo gene de ratinho era codificada por um grande exão. No entanto, após inspecção, faltava à proteína codificada por este exão uma metionina iniciadora. Para definir o gene completo, utilizámos o programa de computador GENSCAN tal como descrito acima. A previsão do gene através de GENSCAN continha dois exões; o grande encontrado através de inspecção visual e um curto na extremidade 5' que proporcionou uma metionina iniciadora. O ADNc previsto (ARNm) codificado por estes dois exões foi montado a partir de AC021768 (HTG14; depositado em Março de 2000; comprimento = 215980; GenBank edição 118.0; SEQ ID NO:16) através da combinação de nucleótidos dos dois exões cujas coordenadas são: o complemento de 164265-164325 (exão 1); e o complemento de 155671-156992 (exão 2). A sequência para esta sequência de ADNc é SEQ ID N0:3 (sequência nucleotídica de NgR3 de ratinho; AC021768). A tradução deste ADNc proporciona a sequência proteica de NgR3 de ratinho (SEQ ID NO:4).

Utilizámos a sequência proteica de NgR3 de ratinho como sequência de busca contra a base de dados de ESTs de ratinho. Foi encontrado um acerto de elevada significância indicando que o ARNm de NgR2 é expresso no coração. Este EST (GB_EST20:AI428334) contém 463 nucleótidos, parte dos quais corresponde aos aminoácidos 45-193 de NgR3 de ratinho (SEQ ID NO:4). 131

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Exemplo 4: Semelhança entre os NgR

Um alinhamento entre NgRl e os dois novos receptores é mostrado na Fig. 1A-1B. As semelhanças entre estas proteínas incluem: (1) 0 programa SignalP, que localiza a posição de clivagem da sequência sinal, prevê uma clivagem antes da primeira cisteína conservada em todas as proteínas. Assim, a proteína madura em todos os casos terá uma cisteína no terminal N. (2) Todas as proteínas contêm oito Repetições Ricas em Leucina (LRR). As LRRs são motivos de sequência curtos presentes em várias proteínas com diversas funções e localizações celulares. Estas repetições estão habitualmente envolvidas em interacções proteína-proteína. Cada LRR é composta por uma unidade beta-alfa. (3) Todas as três proteínas contêm um domínio N-terminal de repetições ricas em leucina (LRRNT), em que quatro cisteínas são conservadas. As LRRs são frequentemente flanqueadas por domínios ricos em cisteína em ambos os seus terminais N e C. (4) Todas as três proteínas contêm um domínio LRR C-terminal (LRRCT). Os LRRCTs das três proteínas NgR podem ser distinguidos dos de outras proteínas contendo LRRs, através do padrão de triptofanos e cisteínas que são completamente conservados neste domínio. (5) Todas as três proteínas contêm uma cisteína conservada no quarto domínio LRR. (6) Todas as três proteínas contêm um potencial local de gl icosilação conservado no oitavo domínio LRR. (7) NgR2 e NgR3 têm um terminal C hidrófobo, tal como NgRl, uma indicação de que provavelmente também sofrem uma modificação semelhante a NgRl, onde uma porção GPI está covalentemente ligada a um aminoácido C-terminal. Isto permite que a proteína permaneça presa à célula. 132

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Exemplo 5: Preparação de Proteínas Nogo

Foi desenvolvido um ensaio de ligação de Nogo que utiliza um método amplamente utilizado no exame da função de orientação axonal de semaforina e efrina (Flanagan & Vanderhaeghen, Annu. Rev. Neurosci. 21: 309-345, 1998; Takahashi et al., Cell 99: 59-69, 1999). Envolve a fusão de uma porção fosfatase alcalina (AP) placentária segregada com o ligando em questão para proporcionar um agente de ligação ao receptor biologicamente activo que pode ser detectado com um ensaio colorimétrico extremamente sensível. Para Nogo, é criado um vector de expressão codificando um péptido sinal, uma etiqueta His6 para purificação, AP e o domínio activo de 66 aminoácidos de Nogo. A proteína de fusão pode ser purificada a partir do meio condicionado de células transfectadas em quantidades de miligramas. Esta proteína é biologicamente activa como um agente de colapso do cone de crescimento com uma CE5q de 1 nM.

Alternativamente, pode ser preparada uma proteína de fusão glutationa-S-transferase-Nogo (GST-Nogo). Para GST-Nogo, é criado um vector de expressão (p.ex., um vector pGEX) codificando um péptido sinal, GST, e o domínio activo de 66 aminoácidos de Nogo. A GST-Nogo pode ser purificada a partir do meio de cultura e utilizada como uma proteína de fusão de GST, ou a GST pode ser clivada a partir da porção Nogo da proteína de fusão com uma enzima que reconheça o local de clivagem específico desenhado entre a porção GST e a porção Nogo da proteína de fusão. Tais locais são parte dos vectores de GST comercialmente disponíveis. Os locais de clivagem específicos e as enzimas podem ser utilizados de acordo com as especificações do fabricante.

Verificou-se que ΑΡ-Nogo é de facto ligeiramente mais potente que GST-Nogo, talvez porque a proteína é sintetizada numa célula eucariótica em vez de uma célula procariótica. A ligação de Nogo a homólogos de NgR imobilizados pode ser efectuada num ensaio tipo ELISA no qual ΑΡ-Nogo é deixada reagir com um homólogo do receptor imobilizado. A especificidade da ligação pode ser demonstrada num ensaio de ligação competitiva utilizando quantidades crescentes de GST- 133

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Nogo no tipo de ensaio para mostrar uma quantidade decrescente de ligação de AP-Nogo (conforme julgado no ensaio colorimétrico).

Exemplo 6: Ensaios de ligação em Células COS Transfectadas

Os homólogos da presente divulgação podem ser utilizados em estudos de transfecção em células COS para demonstrar a ligação de Nogo. Especificamente, sequências nucleotidicas codificando NgR2 e NgR3 podem ser transfectadas em células COS utilizando um vector adequado. As células COS-7 não transfectadas não se ligam a AP-Nogo. No entanto, a transfecção de células COS com sequências de ácido nucleico codificando NgR torna-las-á capazes de se ligarem a Nogo. 0 ALP sozinho não se ligará com qualquer afinidade estável a estas células transfectadas, indicando que qualquer afinidade de Nogo para NgR2 ou NgR3 seria devida aos 66 aminoácidos derivados de Nogo. Para além disso, a afinidade específica de Nogo para as proteínas NgR2 ou NgR3 pode ser testada em ensaios de deslocamento de AP-Nogo utilizando GST-Nogo. NgR2 e/ou NgR3 podem também ligar-se a homólogos de Nogo, que podem também ser testados utilizando este ensaio.

Exemplo 7: A Expressão de NgR em Linhas Celulares Humanas utilizando Northern Blot e uma Sonda Iniciada Aleatoriamente

Um Northern blot é adquirido a partir de uma fonte comercial ou são corridas amostras de ARN de células de interesse num gel de agarose e transferidas para uma membrana utilizando qualquer uma das técnicas bem conhecidas para Northern blotting. A membrana é sondada com um fragmento de NgR2 (SEQ ID N0:1) ou NgR3 (SEQ ID NO:3). A sonda é preparada a partir de 50 ng de ADNc marcado através do método de iniciação aleatória (Feinberg e Vogelstein, Anal. Biochem. 132: 6-13, 1983) . A hibridação é realizada a 68°C durante 1 hora em solução ExpressHyb™ (Clontech, N.° de Cat. 8015-1) seguido de lavagem com SSC 2x/SDS a 0,05% à temperatura ambiente e duas lavagens com SSC Ο,ΐχ/SDS a 0,1% a 50°C. A expressão de NgR2 e/ou NgR3 pode ser avaliada através da presença de uma banda com o tamanho apropriado na membrana. 134 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Exemplo 8: Clonagem de ADNc correspondendo a NgR

Para obter o clone inteiro correspondendo a NgR2 a partir de uma biblioteca de ADNc, pode ser utilizado o seguinte método. É gerada uma biblioteca de ADNc utilizando métodos padrão a partir de um tecido que se saiba conter NgR2. Um tal tecido foi identificado no Exemplo 2. lxlO6 unidades formadoras de placas fágicas da biblioteca de ADNc podem ser pesquisadas em duplicado em filtros OPTITRAN . Os filtros sao hibridados com oligonucleótidos marcados com 32P que são gerados a partir das ESTs correspondentes a porções de NgR2. A reacção de hibridação pode consistir em 400 ml de tampão de pesquisa de placas (Tris 50 mM pH 7,5, NaCl 1 M, pirofosfato de sódio a 0,1%, Polivinilpriolidina a 0,2% e Ficoll a 0,2%) contendo sulfato de Dextrano a 10% e 100 pg/ml de ARNt e 80 pmol de cada oligonucleót ido marcado com 32P a 65°C de um dia para o outro. Os filtros são lavados duas vezes com SSC 2x/SDS a 1% e duas vezes com SSC Ιχ/SDS a 1% e expostos a película. Os positivos em duplicado são purificados. O ADN de cada um destes clones é analisado através de digestão com enzimas de restrição seguida de electroforese em gel de agarose e Southern blotting. Os filtros são hibridados com os oligonucleótidos marcados com 32P utilizados para a hibridação original para confirmar que as inserções hibridam com a sonda. A inserção é então sequenciada para confirmar que representa o ADNc para NgR2. Métodos semelhantes podem ser utilizados para gerar um clone inteiro correspondendo a NgR3.

Alternativamente, um clone inteiro de NgR2 ou NgR3 pode ser obtido por um vulgar perito na arte empregando técnicas de PCR convencionais.

Exemplo 9: Análise de Hibridação para demonstrar expressão de NgR no cérebro A expressão de NgR em mamíferos, tais como o rato, pode ser investigada através de histoquímica de hibridação in situ. Para investigar a expressão no cérebro, por exemplo, são preparadas criossecções coronais e sagitais de cérebro do rato (20 pm de espessura) utilizando um crióstato Reichert-Jung. Secções individuais são montadas por descongelação sobre lâminas silanizadas, livres de nucleases (CEL Associates, Inc., Houston, TX) e armazenadas a -80°C. As secções são 135

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT processadas a começar com pós-fixação em paraformaldeído a 4% frio, lavadas em solução salina tamponada com fosfato (PBS), acetiladas utilizando anidrido acético em tampão trietanolamina, e desidratadas através de uma série de lavagens em álcool em álcool a 70%, 95% e 100% à temperatura ambiente. Subsequentemente, as secções são deslipidadas em clorofórmio, seguido de re-hidratação através de exposição sucessiva a álcool a 100% e 95% à temperatura ambiente. Lâminas de microscópio contendo criossecções processadas são deixadas secar ao ar antes da hibridação. Outros tecidos podem ser ensaiados de um modo semelhante.

Uma sonda especifica de NgR pode ser gerada utilizando PCR. Após amplificação por PCR, o fragmento é digerido com enzimas de restrição e clonado em pBluescript II clivado com as mesmas enzimas. Para produção de uma sonda especifica para a cadeia com sentido de NgR, um fragmento clonado de NgR clonado em pBluescript II pode ser linearizado com uma enzima de restrição adequada, que proporciona um substrato para transcritos escoados marcados (i.e., ribossondas de ARNc) utilizando o promotor T7 com origem no vector e ARN-polimerase T7 comercialmente disponível. Uma sonda específica para a cadeia anti-sentido de NgR pode também ser facilmente preparada utilizando o clone de NgR em pBluescript II através da clivagem do plasmídeo recombinante com uma enzima de restrição adequada para gerar um substrato linearizado para a produção de transcritos de ARNc escoados marcados utilizando o promotor T3 e a polimerase cognata. As ribossondas podem ser marcadas com [35S]-UTP para produzir uma actividade específica de cerca de 0,40xl06 cpm/pmol para ribossondas anti-sentido e de cerca de 0,65χ10δ cpm/pmol para ribossondas da cadeia com sentido. Cada ribossonda pode ser subsequentemente desnaturada e adicionada (2 pmol/ml) a tampão de hibridação que contém

formamida a 50%, dextrano a 10%, NaCl 0,3 M, Tris 10 mM (pH 8,0), EDTA 1 mM, solução de Denhardt lx, e ditiotreitol 10 mM. Lâminas de microscópio contendo criossecções sequenciais de cérebro podem ser independentemente expostas a 45 μΐ de solução de hibridação por lâmina e podem ser colocadas lamelas silanizadas sobre as secções a expor à solução de hibridação. As secções são incubadas de um dia para o outro (15-18 horas) a 52°C para permitir que ocorra hibridação. Uma série equivalente de criossecções é então 136 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ exposta a ribossondas de ARNc específicas de NgR com sentido ou anti-sentido.

Após o período de hibridação, as lamelas são lavadas das lâminas em SSC lx, seguido de tratamento com ARNase A envolvendo a exposição das lâminas a 20 pg/ml de ARNase A num tampão contendo Tris-HCl 10 mM (pH 7,4), EDTA 0,5 M e NaCl 0,5 M durante 45 minutos a 37°C. As criossecções são então sujeitas a três lavagens de elevado rigor em SSC 0,lx a 52°C durante 20 minutos cada. Após as séries de lavagens, as criossecções são desidratadas através de exposição consecutiva a acetato de amónio a 70%, 95% e 100% em álcool, seguido de secagem ao ar e exposição a película Kodak BioMax™ MR-1. Após 13 dias de exposição, a película é revelada e qualquer sinal significativo de hibridação é detectado. Com base nestes resultados, as lâminas contendo o tecido que hibridou, tal como mostrado através de autorradiogramas da película, são revestidas com emulsão de seguimento nuclear Kodak NTB-2 e as lâminas são armazenadas no escuro durante 32 dias. As lâminas são então reveladas e contrastadas com hematoxilina. As secções revestidas com emulsão são analisadas microscopicamente para determinar a especificidade da marcação. O sinal é determinado como sendo específico se os grãos auto-radiográficos (gerados através de hibridação da sonda anti-sentido) estiverem claramente associados a corpos celulares corados com violeta de cresil. Os grãos auto-radiográf icos verificados entre corpos celulares indicam ligação não específica da sonda.

Nalguns casos, tais como utilizando uma sonda para detectar um homólogo de NgR numa espécie heteróloga, para alcançar uma hibridação óptima, pode ser necessário diminuir as condições de rigor. Tais condições são bem conhecidas dos vulgares peritos na arte e são proporcionados exemplos acima. A expressão de NgR no cérebro proporciona uma indicação de que os moduladores da actividade de NgR têm utilidade para tratamento de distúrbios neurológicos. Algumas outras doenças para as quais os moduladores de NgR podem ter utilidade incluem depressão, ansiedade, doença bipolar, epilepsia, neurite, neurastenia, neuropatia, neuroses e semelhantes. Pretende-se que a utilização de moduladores de NgR, incluindo 137 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ligandos de NgR e anticorpos anti-NgR, para tratar indivíduos possuindo tais estados de doença seja um aspecto da divulgação.

Exemplo 10: Análise Northern Blot de ARN de NgR com uma Sonda gerada por PCR

As hibridações de Northern blot podem ser efectuadas para examinar a expressão do ARNm de NgR. Um clone contendo pelo menos uma porção da seguência de SEQ ID N0:1 pode ser utilizado como sonda. Iniciadores específicos do vector são utilizados em PCR para gerar um fragmento da sonda de hibridação para marcação com 32P. A PCR é efectuada como se segue:

Mistura: 1 μΐ 2 μΐ 2 μΐ 10 μΐ 1 μΐ 0,5 μΐ 83,5 μΐ plasmídeo contendo NgR iniciador directo (10-50 pM) iniciador inverso (10-50 pM) tampão de PCR 10x (tal como o proporcionado com a enzima, Amersham Pharmacia Biotech) dNTP 10 mM (tal como #1969064 de Boehringer Mannheim) polimerase Tag (tal como #27-0799-62,

Amersham Pharmacia Biotech) água A PCR é efectuada num Termociclador utilizando o seguinte programa: kO o O 5 min kO o O 1 min 55 °C 1 min 72 0C 1 min 72 °C 10 min 30 ciclos O produto de PCR pode ser purificado utilizando o Estojo de Purificação de PCR QIAquick (#28104) de Qiagen e a marcação radioactiva com 32P-dCTP (#AA0005/250, Amersham Pharmacia 138

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Biotech) pode ser feita através de iniciação aleatória utilizando "Ready-to-go DNA Labeling Beads" (#27-9240-01) de Amersham Pharmacia Biotech. A hibridação é realizada em Human Multiple Tissue Northern Blot de Clontech tal como descrito no protocolo do fabricante, ou num Northern Blot preparado correndo amostras de ARN de células de interesse num gel de agarose e blotting numa membrana utilizando qualquer um dos protocolos de Northern blotting conhecidos. Após exposição de um dia para o outro num ecrã Molecular Dynamics Fosfor Imager (#MD146-814) as bandas de um tamanho apropriado são visualizadas.

Exemplo 11: Expressão Recombinante de NgR em Células

Hospedeiras Eucarióticas A. Expressão de NgR em Células de Mamífero

Para produzir proteína NgR, um polinucleótido codificando NgR é expresso numa célula hospedeira adequada utilizando um vector de expressão adequado e técnicas padrão de engenharia genética. Por exemplo, uma sequência codificando NgR descrita na Tabela 4 é subclonada no vector de expressão comercial pzeoSV2 (Invitrogen, San Diego, CA) e transfectada para células de Ovário de Hamster Chinês (CHO) utilizando o reagente de transfecção FuGENEô™ (Boehringer-Mannheim) e o protocolo de transfecção proporcionado no folheto do produto. Outras linhas celulares eucarióticas, incluindo células de rim embrionário humano (HEK 293) e COS, são igualmente adequadas. As células expressando estavelmente NgR são seleccionadas através de crescimento na presença de 100 pg/ml de zeocina (Stratagene, LaJolla, CA) . Como alternativa a FuGENEô™, o vector de expressão pode possuir o gene para a di-hidrofolato-redutase (dhfr) e a selecção de clones com pressão do fármaco metotrexato (MTX) permite uma transformação estável de células CHO. Opcionalmente, NgR pode ser purificado a partir das células utilizando técnicas cromatográficas padrão. Para facilitar a purificação, é criado anti-soro contra uma ou mais sequências peptídicas sintéticas que correspondem a porções da sequência de aminoácidos de NgR e o anti-soro é utilizado para purificar por afinidade Nogo-R. O NgR pode também ser expresso enquadrado com uma sequência etiqueta (p.ex., poli-histidina, hemaglutinina, FLAG) para facilitar a purificação. Para além disso, será apreciado que muitas das utilizações para 139 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT polipéptidos NgR, tais como os ensaios descritos abaixo, não requerem purificação de NgR a partir da célula hospedeira.

B. Expressão de NgR em células CHO

Para expressão de NgR em células de ovário de hamster chinês (CHO), é preparado um plasmídeo possuindo a sequência de codificação de NgR relevante, utilizando um vector que também possui o marcador seleccionável di-hidrofolato-redutase (DHFR). 0 plasmídeo é transfectado para células CHO. A selecção sob pressão do fármaco MTX permite a preparação de transformantes estáveis de um NgR (NgR2 ou NgR3) num plasmídeo de expressão possuindo um marcador seleccionável tal como DHFR. C. Expressão de NgR em células 293

Para expressão de NgR em células de mamífero 293 (células de rim embrionário primárias, humanas transformadas), é preparado um plasmídeo possuindo a sequência de codificação de NgR relevante, utilizando o vector pSecTag2A (Invitrogen). 0 vector pSecTag2A contém a sequência líder da cadeia IgK de murídeo para secreção, o epitopo c-myc para detecção da proteína recombinante com o anticorpo anti-myc, uma poli-histidina C-terminal para purificação com cromatografia de quelato de níquel, e um gene resistente à zeocina para selecção de transfectantes estáveis. 0 iniciador directo para amplificação deste ADNc de NgR é determinado através de procedimentos de rotina e contém de preferência uma extensão a 5' de nucleótidos para introduzir o local de clonagem HindIII e nucleótidos coincidindo com a sequência de NgR. 0 iniciador inverso é também determinado através de procedimentos de rotina e contém de preferência uma extensão a 5' de nucleótidos para introduzir um local de restrição Xhol para clonagem e nucleótidos correspondendo ao complemento inverso da sequência de NgR. As condições de PCR são 55°C como temperatura de ligação. 0 produto de PCR é purificado em gel e clonado nos locais HindIII-Xhol do vector. 0 ADN é purificado utilizando colunas de cromatografia Qiagen e transfectado em células 293 utilizando meios de transfecção DOTAP™ (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN) . As células transfectadas transientemente são testadas para 140

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT expressão após 24 horas de transfecção, utilizando western blots sondados com anticorpos anti-His e anti-péptido NgR. As células transfectadas permanentemente são seleccionadas com Zeocina e propagadas. A produção da proteína recombinante é detectada a partir tanto das células como do meio através de Western blots sondados com anticorpos anti-His, anti-Myc ou anti-péptido NgR.

D. Expressão Transiente de Nogo-R em células COS

Para expressão do NgR em células COS7, uma molécula polinucleotídica possuindo uma sequência nucleotídica de SEQ ID NO:l pode, por exemplo, ser clonada no vector p3-CI. Este vector é um plasmídeo derivado de pUC18 que contém o promotor HCMV (citomegalovírus humano)-intrão localizado a montante da sequência de poliadenilação da bGH (hormona de crescimento bovina) e um local de clonagem múltipla. O iniciador directo é determinado através de procedimentos de rotina e contém de preferência uma extensão a 5' que introduz um local de restrição Xba I para clonagem, seguido de nucleótidos que correspondem a uma sequência nucleotídica de SEQ ID NO:l. O iniciador inverso é também determinado através de procedimentos de rotina e contém de preferência uma extensão a 5' de nucleótidos que introduz um local de clonagem SalI seguido de nucleótidos que correspondem ao complemento inverso de uma sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1. A PCR consiste num passo inicial de desnaturação de 5 min a 95°C, 30 ciclos de 30 seg de desnaturação a 95°C, 30 seg de ligação a 58°C e 30 seg de extensão a 72°C, seguido de 5 min de extensão a 72°C. O produto de PCR é purificado em gel e ligado nos locais XbaI e Soll do vector p3-CI. Esta construção é transformada em células de E. coll para amplificação e purificação do ADN. O ADN é purificado com colunas de cromatografia Qiagen e transfectado para células COS7 utilizando reagente Lipofectamine™ de BRL, seguindo os protocolos do fabricante. Quarenta e oito e 72 horas após a transfecção, o meio e as células são testados quanto a expressão recombinante. 141

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT Ο NgR expresso a partir da cultura de células COS pode ser purificado através da concentração do meio de crescimento celular até cerca de 10 mg de proteína/ml e purificação da proteína, por exemplo, através de cromatografia. O NgR purificado é concentrado até 0,5 mg/ml num concentrador Amicon com uma membrana YM-10 ajustada e armazenado a -80°C. NgR3 pode também ser expresso utilizando este método e a sequência nucleotídica de SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:13. E. Expressão de NgR em Células de Insecto

Para expressão de NgR num sistema de baculovírus, uma molécula polinucleotídica possuindo uma sequência nucleotídica de SEQ ID NO:l, 3 ou 13 pode ser amplificada por PCR. O iniciador directo é determinado através de procedimentos de rotina e contém de preferência uma extensão a 5' que adiciona o local de clonagem NdeI, seguido de nucleótidos que correspondem a uma sequência nucleotídica de SEQ ID NO:l (ou SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO: 13, respectivamente) . 0 iniciador inverso é também determinado através de procedimentos de rotina e contém de preferência uma extensão a 5' que introduz o local de clonagem Kpnl, seguido de nucleótidos que correspondem ao complemento inverso de uma sequência nucleotídica de SEQ ID NO:l (ou SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO: 13, respectivamente). O produto de PCR é purificado em gel, digerido com NdeI e Kpnl, e clonado nos locais correspondentes do vector pACHTL-A (Pham-dngen, San Diego, CA) . O vector de expressão pAcHTL contém o promotor forte de poli-hedrina do vírus da poli-hedrose nuclear de Autographa californica (AcMNPV), e uma etiqueta 6xHis a montante do local de clonagem múltipla. Um local de proteína-quinase para fosforilação e um local de trombina para excisão da proteína recombinante que precede o local de clonagem múltipla estão também presentes. Claro que, muitos outros vectores de baculovírus podiam ser utilizados em vez de pAcHTL-A, tais como pAc373, pVL941 e pAcIMl. Outros vectores adequados para a expressão de polipéptidos NgR podem ser utilizados, desde que a construção do vector inclua sinais localizados apropriadamente para transcrição, tradução, e tráfico, tais como um AUG enquadrado e um péptido sinal, conforme necessário. Tais vectores são descritos em Luckow et ai., Virology 170: 31-39, entre outros. 142 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ Ο vírus é criado e isolado utilizando métodos padrão de expressão de baculovírus, tais como os descritos em Summers et al., (1987) "A Manual of Methods for Baculovírus Vectors and Insect Cell Culture Procedures", Texas Agricultural Experimental Station Buletim N.° 1555.

Num caso preferido, pAcHLT-A contendo o gene de NgR é introduzido no baculovírus utilizando o estojo de transfecção "BaculoGold™" (Pharmingen, San Diego, CA) utilizando métodos estabelecidos pelo fabricante. Isolados individuais do vírus são analisados quanto à produção de proteína através de radiomarcação de células infectadas com 35S-metionina 24 horas após a infecção. As células infectadas são colhidas 48 horas após a infecção, e as proteínas marcadas são visualizadas através de SDS-PAGE. Os vírus exibindo elevados níveis de expressão podem ser isolados e utilizados para expressão em maior escala.

Para expressão de um polipéptido NgR em células Sf9, uma molécula polinucleotídica possuindo a sequência nucleotídica de SEQ ID NO: 1 (ou SEQ ID N0:3 ou SEQ ID NO: 13) pode ser amplificada por PCR utilizando os iniciadores e métodos descritos acima para expressão de baculovírus. 0 ADNc de NgR é clonado no vector pAcHLT-A (Pharmingen) para expressão em Sf9 de insecto. A inserção é clonada nos locais NdeI e ΚρηI, após eliminação de um local Ndel interno (utilizando os mesmo iniciadores descritos acima para expressão em baculovírus) . 0 ADN é purificado com colunas de cromatografia Qiagen e expresso em células Sf9. Experiências preliminares de !Western blot de placas fágicas não purificadas são testadas quanto à presença de proteína recombinante do tamanho esperado que reagia com o anticorpo específico de NgR. Estes resultados são confirmados após mais optimização da purificação e expressão em células HiG5. F. Expressão de formas solúveis de NgR2 e NgR3 como proteínas de fusão NgR-Ig

Para gerar uma proteína de fusão NgR2-Ig, podem ser utilizados métodos padrão tal como descritos na literatura (p.ex., Sanicola et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 94: 6238-6243, 1997). Por exemplo, um fragmento de ADN codificando NgR2 143

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT sem a sequência codificando o terminal C hidrófobo (sinal âncora de GPI) pode ser ligado a um fragmento de ADN codificando o domínio Fc de IgGl (que pode ser IgGl humana), e o fragmento quimérico pode ser clonado num vector de expressão para gerar um plasmídeo. 0 plasmídeo pode então ser transfectado para células de ovário de hamster chinês para gerar uma linha celular estável produtora da proteína de fusão. A proteína de fusão é então purificada a partir de meio condicionado utilizando métodos padrão. Por exemplo, o meio condicionado clarificado da linha celular pode ser carregado por gravidade directamente sobre Sepharose com Proteína A. A coluna pode então ser lavada com cinco volumes de coluna de cada um de PBS, PBS contendo NaCl 0,5 M e fosfato de sódio 25 mM, NaCl 100 mM (pH 5,0). A proteína ligada pode então ser eluída com NaH2PC>4 25 mM, NaCl 100 mM (pH 2,8) e imediatamente neutralizada com uma fracção de 1/10 do volume de Na2BPC>4 0,5 M (pH 8,6). Métodos semelhantes podem ser utilizados para gerar uma proteína de fusão NgR3-Ig.

Exemplo 12: Sistema de Aprisionamento por Interacção/Dois Híbridos

Para ensaiar quanto a proteínas que interagem com NgR, pode ser utilizado o método de pesquisa de bibliotecas de aprisionamento por interacção/dois híbridos. Este ensaio foi descrito pela primeira vez em Fields et al., Nature 340: 245, 1989, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Um protocolo está publicado em "Current Protocols in Molecular Biology", 1999, John Wiley & Sons, NY e Ausubel, F. M. et al., 1992, "Short Protocols in Molecular Biology", quarta edição, Greene and Wiley-interscience, NY. Estão disponíveis estojos em Clontech, Paio Alto, CA (Matchmaker Two-Hybrid System 3).

Uma fusão das sequências nucleotídicas codificando todo ou um NgR parcial e o domínio de ligação ao ADN de GAL4 do factor de transcrição de levedura (DNA-BD) é construída num plasmídeo apropriado (i.e., pGBKT7) utilizando técnicas padrão de subclonagem. Semelhantemente, uma biblioteca de fusões do domínio activo de GAL4 (AD) é construída num segundo plasmídeo (i.e., pGADT7) a partir de ADNc de potenciais proteínas de 144 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

ligação a NgR (para protocolos sobre formação de bibliotecas de ADNc, ver Sambrook et al., 1989, "Molecular Cloning: A

Laboratory Manual", segunda edição, Cold Spring Harbor

Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY) . A construção da fusão DNA-BD/NgR é verificada através de sequenciação, e testada quanto à activação autónoma do gene repórter e toxicidade celular, ambas as quais impediriam uma análise de dois híbridos com sucesso. Controlos semelhantes são efectuados com a construção AD/fusões da biblioteca para assegurar a expressão em células hospedeiras e a falta de actividade de transcrição. As células de levedura são transformadas (ca. 105 transformantes/mg de ADN) com ambos os plasmídeos de NgR e da fusão de biblioteca de acordo com o procedimento padrão (Ausubel, et al., 1992, "Short Protocols in Molecular Biology", quarta edição, Greene and Wiley-interscience, NY. A ligação in vivo de DNA-BD/NgR com AD/proteínas da biblioteca resulta em transcrição de genes repórter do plasmídeo de levedura específicos (i.e., lacZ, HIS3, ADE2, LEU2) . As células de levedura são plaqueadas em meio sem nutrientes para pesquisar quanto a expressão dos genes repórter. As colónias são duplamente ensaiadas quanto à actividade de β-galactosidase após crescimento em meio suplementado com Xgal (5-bromo-4-cloro-3-indolil-p-D-galactósido) (o ensaio de filtro da actividade de β-galactosidase está descrito em Breeden et al., Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 50: 643, 1985). Os plasmídeos AD- biblioteca positivos são recuperados a partir dos transformantes e reintroduzidos na estirpe de levedura original bem como outras estirpes contendo proteínas de fusão DNA-BD não relacionadas para confirmar interacções proteicas NgR/biblioteca específicas. O ADN inserido é sequenciado para verificar a presença de um enquadramento de leitura aberto fundido com AD de GAL4 e para determinar a identidade da proteína de ligação a NgR.

Exemplo 13: Anticorpos para Nogo-R São empregues técnicas padrão para gerar anticorpos policlonais ou monoclonais para o receptor NgR e gerar

fragmentos de ligação ao antigénio destes ou variantes destes úteis, incluindo variantes "humanizadas". Tais protocolos podem ser verificados, por exemplo, em Sambrook et al., (1989), acima, e Harlow et al., (Eds.), Antibodies A 145 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1988). Num caso, polipéptidos NgR recombinantes (ou células ou membranas celulares contendo tais polipéptidos) são utilizados como antigénio para gerar os anticorpos. Noutro caso, um ou mais péptidos possuindo seguências de aminoácidos correspondendo a uma porção imunogénica de NgR (p.ex., 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou mais aminoácidos) são utilizados como antigénio. Péptidos correspondendo a porções extracelulares de Nogo-R, especialmente porções extracelulares hidrófilas, são preferidos. O antigénio pode ser misturado com um adjuvante ou ligado a um hapteno para aumentar a produção de anticorpos. A. Anticorpos Policlonais ou Monoclonais

Como um protocolo exemplar, NgR recombinante ou um fragmento sintético deste é utilizado para imunizar um ratinho para criação de anticorpos monoclonais (ou um mamífero maior, tal como um coelho, para anticorpos policlonais). Para aumentar a antigenicidade, os péptidos são conjugados com Hemocianina da Lapa (Pierce), de acordo com as recomendações do fabricante. Para uma injecção inicial, o antigénio é emulsionado com Adjuvante Completo de Freund e injectado subcutaneamente. A intervalos de duas as três semanas, alíquotas adicionais de antigénio de NgR são emulsionadas com Adjuvante Incompleto de Freund e injectadas subcutaneamente. Antes da injecção final de reforço, uma amostra de soro é tomada dos ratinhos imunizados e ensaiada através de western blot para confirmar a presença de anticorpos que imuno-reagem com NgR. O soro dos animais imunizados pode ser utilizado como anti-soro policlonal ou utilizado para isolar anticorpos policlonais que reconheçam NgR. Alternativamente, os ratinhos são sacrificados e o seu baço removido para geração de anticorpos monoclonais.

Para gerar anticorpos monoclonais, os baços são colocados em 10 ml de RPMI 1640 livre de soro e são formadas suspensões de células individuais através de moagem dos baços em RPMI 1640 livre de soro suplementado com L-glutamina 2 mM, piruvato de sódio 1 mM, 100 unidades/ml de penicilina e 100 pg/ml de estreptomicina (RPMI) (Gibco, Canadá). As suspensões celulares são filtradas e lavadas através de centrifugação e ressuspensas em RPMI livre de soro. Timócitos tomados de três 146

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ratinhos Balb/c ingénuos são preparados de um modo semelhante e utilizados como Camada Alimentadora. Células de mieloma NS-1, mantidas em fase logarítmica em RPMI com soro fetal bovino (FBS) a 10% (Hyclone Laboratories, Inc., Logan, UT) durante três dias antes da fusão, são também centrifugadas e lavadas.

Para produzir fusões de hibridoma, as células do baço dos ratinhos imunizados são combinadas com células NS-1 e centrifugadas, e o sobrenadante é aspirado. O sedimento celular é deslocado batendo no tubo, e 2 ml de PEG 1500 a 37°C (50% em HEPES 75 mM, pH 8,0) (Boehringer-Mannheim) são misturados no sedimento, seguido da adição de RPMI livre de soro. A partir dai, as células são centrifugadas, ressuspensas em RPMI contendo FBS a 15%, hipoxantina de sódio 100 μΜ, aminopterina 0,4 μΜ, timidina 16 μΜ (HAT) (Gibco), 25 unidades/ml de IL-6 (Boehringer-Mannheim) e 1,5χ106 timócitos/ml e plaqueadas em 10 placas de cultura de tecidos de 96 poços de fundo plano Corning (Corning, Corning, NY) .

Nos dias 2, 4 e 6 após a fusão, 100 μΐ de meio são removidos dos poços das placas de fusão e substituídos por meio fresco. No dia 8, as fusões são pesquisadas através de ELISA, testando a presença de IgG de ratinho que se liga a NgR. Os poços de fusão seleccionados são ainda clonados através de diluição até serem obtidas culturas monoclonais produtoras de anticorpos anti-NgR.

B. Humanização de anticorpos monoclonais anti-NgR O padrão de expressão de NgR tal como aqui relatado e o potencial dos NgR como alvos para intervenção terapêutica sugerem indicações terapêuticas para inibidores de NgR (antagonistas). Os anticorpos neutralizantes de NgR compreendem uma classe de produtos terapêuticos úteis como antagonistas de NgR. A seguir estão protocolos para melhorar a utilidade de anticorpos monoclonais anti-NgR como produtos terapêuticos em humanos através da "humanização" dos anticorpos monoclonais para melhorar a sua semi-vida sérica e torná-los menos imunogénicos em hospedeiros humanos (i.e., para prevenir uma resposta de anticorpos humanos a anticorpos anti-NgR não humanos). 147 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Os princípios de humanização foram descritos na literatura e são facilitados pelo arranjo modular de proteínas de anticorpo. Para minimizar a possibilidade de ligação do complemento, é preferido um anticorpo humanizado do isotipo IgG4.

Por exemplo, é alcançado um nível de humanização através da geração de anticorpos quiméricos compreendendo os domínios variáveis de proteínas de anticorpo não humanas de interesse com os domínios constantes de moléculas de anticorpo humanas. (Ver, p.ex., Morrison et al., Adv. Immunol., 44: 65-92, 1989). Os domínios variáveis de anticorpos anti-NgR neutralizantes de NgR são clonados a partir do ADN genómico de um hibridoma de células B ou de ADNc gerado a partir de ARNm isolado a partir do hibridoma de interesse. Os fragmentos do gene da região V são ligados a exões codificando domínios constantes do anticorpo humano e a construção resultante é expressa em células hospedeiras de mamífero adequadas (p.ex., mieloma ou células CHO).

Para alcançar um nível de humanização ainda maior, apenas as porções dos fragmentos génicos da região variável que codifiquem regiões determinantes de complementaridade que se ligam ao antigénio ("CDR") dos genes de anticorpo monoclonal não humano, são clonados em sequências de anticorpo humano. (Ver, Jones et al., Nature 321: 522-525, 1986; Riechmann et al., Nature 332: 323-327, 1988; Verhoeyen et al., Science 239: 1534-1536, 1988; e Tempest et al., Bio/Technology 9: 266-271, 1991). Se necessário a estrutura de folha β do anticorpo humano rodeando as regiões CDR3 também é modificada para espelhar mais a estrutura tridimensional do domínio de ligação ao antigénio do anticorpo monoclonal original. (Ver Kettleborough et al., Protein Engin. 4: 773-783, 1991; e Foote et al., J. Mol. Biol. 224: 487-499, 1992).

Numa abordagem alternativa, a superfície de um anticorpo monoclonal não humano de interesse é humanizada através da alteração de resíduos da superfície seleccionados do anticorpo não humano, p.ex., através de mutagénese dirigida ao local, enquanto se mantêm todos os resíduos interiores e de contacto 148 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ do anticorpo não humano. Ver Padlan, Mol. Immunol. 28: 489- 498, 1991.

As abordagens anteriores são empregues utilizando anticorpos monoclonais anti-NgR neutralizantes de NgR e os hibridomas que os produzem para gerar anticorpos neutralizantes de NgR humanizados úteis como produtos terapêuticos para tratar ou paliar condições em que a expressão de NgR ou a sinalização de NgR mediada pelo ligando seja prejudicial. C. Anticorpos Humanos Neutralizantes de NgR de Apresentação Fágica

Anticorpos neutralizantes de NgR humanos são gerados através de técnicas de apresentação fágica tais como as descritas em Aujame et ai., Human Antibodies 8: 155-168, 1997; Hoogenboom, TIBTECH 15: 62-70, 1997; e Rader et ai., Curr.

Opin. Biotechnol. 8: 503-508, 1997. Por exemplo, regiões variáveis do anticorpo na forma de fragmentos Fab ou fragmentos Fv de cadeia simples ligados são fundidas com o terminal amino da proteína menor de revestimento pIII de fago filamentoso. A expressão da proteína de fusão e a incorporação desta no revestimento maduro do fago resulta em partículas fágicas que apresentam um anticorpo à sua superfície e contêm o material genético codificando o anticorpo. Uma biblioteca fágica compreendendo tais construções é expressa em bactérias e a biblioteca é pesquisada quanto a anticorpos do fago específicos de NgR utilizando NgR marcado ou imobilizado como sonda do antigénio. D. Anticorpos humanos neutralizantes de NgR de ratinhos transgénicos

Anticorpos neutralizantes de NgR humanos são gerados em ratinhos transgénicos essencialmente tal como descrito em Bruggemann et al.r Immunol. Today 17: 391-397, 1996 e

Bruggemann et al., Curr. Opin. Biotechnol. 8: 455-458, 1997.

Ratinhos transgénicos possuindo segmentos do gene V humano na configuração da linha germinativa e que expressam estes transgenes no seu tecido linfóide são imunizados com uma composição de NgR utilizando protocolos de imunização convencionais. São gerados hibridomas utilizando células B dos 149

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ratinhos imunizados utilizando protocolos convencionais que são pesquisados para identificar hibridomas segregando anticorpos humanos anti-NgR (p.ex., tal como descrito acima).

Exemplo 14: Ensaios para Identificar Moduladores da Actividade de NgR

Expostos abaixo estão vários ensaios não limitantes para identificação de moduladores (agonistas e antagonistas) da actividade de NgR. Entre os moduladores que podem ser identificados por estes ensaios estão compostos ligandos naturais do receptor; análogos sintéticos e derivados de ligandos naturais; anticorpos, fragmentos de anticorpo e/ou compostos semelhantes a anticorpos derivados de anticorpos naturais ou de bibliotecas combinatórias semelhantes a anticorpos; e/ou compostos sintéticos identificados através de pesquisa de elevada tiragem de bibliotecas; e semelhantes. Todos os moduladores que se ligam a NgR são úteis para a identificação de NgR em amostras de tecido (p.ex., para fins de diagnóstico, fins patológicos e semelhantes). Moduladores agonistas e antagonistas são úteis para sobrerregulação e subregulação da actividade de NgR, respectivamente, para tratar estados de doença caracterizados por níveis anormais da actividade de NgR. Os ensaios podem ser efectuados utilizando putativos moduladores simples e/ou podem ser efectuados utilizando um agonista conhecido em combinação com antagonistas candidatos (ou vice versa). A. Ensaios de AMPc

Num tipo de ensaio, os níveis de adenosina-monofosfato cíclico (AMPc) são medidos em células transfectadas com NgR que foram expostas a compostos moduladores candidatos. Os protocolos para os ensaios de AMPc foram descritos na literatura. (Ver, p.ex., Sutherland et al., Circulation 37: 279, 1968; Frandsen et al., Life Sciences 18: 529-541, 1976;

Dooley et al., J. Pharmacol. Exp. Therap. 283: 735-41, 1997; e George et al. , J. Biomol. Screening 2: 235-40, 1997). Um protocolo exemplar para um tal ensaio, utilizando um Ensaio de Activação de Adenilil-Ciclase FlashPlate® de NEW™ Life Science Products, é exposto abaixo. 150 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Resumidamente, a sequência codificando NgR (p.ex., um ADNc ou ADN genómico sem intrões) é subclonada num vector de expressão comercial, tal como pzeoSV2 (Invitrogen), e transientemente transfectada para células de Ovário de Hamster Chinês (CHO) utilizando métodos conhecidos, tais como o protocolo de transfecção proporcionado por Boehringer-Mannheim quando se fornece o reagente de transfecção FuGENE 6. As células CHO transfectadas são semeadas em microplacas de 96 poços do estojo de ensaio FlashPlate®, que são revestidas com cintilante sólido ao qual se ligou anti-soro para AMPc. Para controlo, alguns poços são semeados com células CHO de tipo selvagem (não transfectadas). Outros poços na placa recebem várias quantidades de uma solução padrão de AMPc para utilizar na criação de uma curva padrão.

Um ou mais compostos de teste (i.e., moduladores candidatos) são adicionados às células em cada poço, com água e/ou meio/diluente livre de composto servindo como controlo ou controlos. Após tratamento, o AMPc é deixado a acumular-se nas células durante exactamente 15 minutos à temperatura ambiente. O ensaio é terminado através da adição de tampão de lise contendo AMPc marcado com [ I], e a placa e contada utilizando um contador de cintilações de microplacas de 96 poços Packard Topcount . AMPc nao marcado das células lisadas (ou dos padrões) e quantidades fixas de [125I]-AMPc competem pelo anticorpo ligado à placa. Uma curva padrão é construída, e os valores de AMPc para os desconhecidos são obtidos através de interpolação. As alterações nos níveis intracelulares de AMPc das células em resposta à exposição a um composto de teste são indicadoras da actividade moduladora de NgR.

Moduladores que actuem como agonistas de receptores que se acoplam ao subtipo Gs das proteínas G estimularão a produção de AMPc, conduzindo a um aumento mensurável de 3-10 vezes nos níveis de AMPc. Agonistas de receptores que se acoplem ao subtipo Gi/0 das proteínas G inibirão a produção de AMPc estimulada por forscolina, conduzindo a uma diminuição mensurável nos níveis de AMPc de 50-100%. Moduladores que actuem como agonistas inversos reverterão estes efeitos nos receptores que são constitutivamente activos ou activados através de agonistas conhecidos. 151 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ Β. Ensaios de Aequorina

Noutro ensaio, as células (p.ex., células CHO) são transientemente co-transfectadas tanto com uma construção de expressão de NgR como com uma construção que codifica a fotoproteina apoaquorina. Na presença do cofactor celenterazina, a apoaquorina emitirá uma luminescência mensurável que é proporcional à quantidade de cálcio intracelular livre (citoplasmático). (Ver geralmente, Cobbold, et al., "Aequorin measurements of cytoplasmic free calcium," Em: McCormack J.G. e Cobbold P.H., eds., "Cellular Calcium: A Practical Approach". Oxford, IRL Press (1991); Stables et al., Anal. Biochem. 252: 115-26, 1997; e Haugland, "Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals". Sexta edição. Molecular Probes, Eugene, OR (1996)).

Num ensaio exemplar, NgR é subclonado no vector de expressão comercial pzeoSV2 (Invitrogen) e transientemente co-transfectado juntamente com uma construção que codifica a fotoproteina apoaquorina (Molecular Probes, Eugene, OR) para células CHO utilizando o reagente de transfecção FuGENE 6 (Boehringer-Mannheim) e o protocolo de transfecção proporcionado no folheto do produto.

As células são cultivadas durante 24 horas a 37°C em MEM (Gibco/BRL, Gaithersburg, MD) suplementado com soro fetal bovino a 10%, glutamina 2 mM, 10 U/ml de penicilina e 10 yg/ml de estreptomicina, tempo ao fim do qual o meio é mudado para MEM livre de soro contendo celenterazina 5 μΜ (Molecular Probes, Eugene, OR) . A cultura é então continuada durante mais duas horas a 37°C. Subsequentemente, as células são desprendidas da placa utilizando VERSEN (Gibco/BRL), lavadas e ressuspensas a 200 000 células/ml em MEM livre de soro. São preparadas diluições dos compostos moduladores de NgR candidatos em MEM livre de soro e dispensadas para poços de uma placa de ensaio de 96 poços opaca a 50 μΐ/poço. As placas são então carregadas num luminómetro de placas de microtitulo MLX (Dynex Technologies, Inc., Chantilly, VA). O instrumento é programado para dispensar 50 μΐ de suspensões celulares a cada poço, um poço de cada vez, e ler imediatamente a luminescência durante 15 segundos. Curvas de resposta à dose para os moduladores candidatos são construídas utilizando a área sob a 152

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT curva para cada pico de sinal luminoso. Os dados são analisados com SlideWrite, utilizando a equação para um ligando de um local, e são obtidos os valores de CE50. Alterações na luminescência causadas pelos compostos são consideradas indicativas da actividade moduladora. Moduladores que actuem como agonistas em receptores que se acoplam ao subtipo Gq das proteínas G dão um aumento na luminescência de até 100 vezes. Moduladores que actuem como agonistas inversos reverterão este efeito em receptores que são constitutivamente activos ou activados através de agonistas conhecidos. C. Ensaio do Gene Repórter de Luciferase A fotoproteína luciferase proporciona outra ferramenta útil para ensaio de moduladores da actividade de NgR. Células (p.ex., células CHO ou células COS 7) são transientemente co-transfectadas tanto com uma construção de expressão de NgR (p.ex., NgR em pzeoSV2) como com uma construção repórter que inclua um gene para a proteína luciferase a jusante de um local de ligação de um factor de transcrição, tal como o elemento de resposta a AMPc (CRE), AP-1, ou NF-kappa B. Os níveis de expressão da luciferase reflectem o estado de activação dos eventos de sinalização. (Ver geralmente, George et al., J. Biomol. Screening 2: 235-240, 1997; e Stratowa et al., Curr. Opin. Biotechnol. 6: 574-581, 1995). A actividade da luciferase pode ser quantitativamente medida utilizando, p.ex., reagentes do ensaio de luciferase que estão comercialmente disponíveis em Promega (Madison, WI).

Num ensaio exemplar, células CHO são plaqueadas em caixas de cultura de 24 poços a uma densidade de 100000 células/poço um dia antes da transfecção e cultivadas a 37°C em MEM (Gibco/BRL) suplementado com soro fetal bovino a 10%, glutamina 2 mM, 10 U/ml de penicilina e 10 yg/ml de estreptomicina. As células são co-transfectadas transientemente com uma construção de expressão de NgR e uma construção repórter contendo o gene da luciferase. Os plasmídeos repórter CRE-luciferase, AP-l-luciferase e NF-kappaB-luciferase podem ser adquiridos em Stratagene (Legally, CA) . As transfecções são efectuadas utilizando o reagente de transfecção FuGENE 6 (Boehringer-Mannheim) de acordo com as instruções do fornecedor. As células transfectadas com a construção repórter sozinha são utilizadas como controlo. 153

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Vinte e quatro horas após a transfecção, as células são lavadas uma vez com PBS pré-aquecido até 37°C. MEM livre de soro é então adicionado às células sozinho (controlo) ou com um ou mais moduladores candidatos e as células são incubadas a 37°C durante cinco horas. Posteriormente, as células são lavadas uma vez com PBS gelado e lisadas através da adição de 100 μΐ de tampão de lise por poço do estojo de ensaio de luciferase fornecido por Promega. Após incubação durante 15 minutos à temperatura ambiente, são misturados 15 μΐ do lisado com 50 μΐ de solução de substrato (Promega) numa placa de 96 poços branca opaca e a luminescência é lida imediatamente num contador de cintilações e luminescência Wallace modelo 1450 MicroBeta (Wallace Instruments, Gaithersburg, MD).

Diferenças na luminescência na presença versus ausência de um composto modulador candidato são indicativas de actividade moduladora. Os receptores que são constitutivamente activos ou activados através de agonistas dão tipicamente uma estimulação de 3-20 vezes a luminescência em comparação com células transfectadas com o gene repórter sozinho. Moduladores que actuem como agonistas inversos reverterão este efeito.

D. Medição do cálcio intracelular utilizando FLIPR

Alterações nos níveis de cálcio intracelular são outro indicador reconhecido da actividade do receptor e tais ensaios podem ser empregues para pesquisar moduladores quanto a actividade de NgR. Por exemplo, células CHO estavelmente transfectadas com um vector de expressão de NgR são plaqueadas a uma densidade de 4xl04 células/poço em placas de 96 poços de parede negra Packard especialmente desenhadas para discriminar sinais de fluorescência emanando dos vários poços da placa. As células são incubadas durante 60 minutos a 37°C em PBS modificado por Dulbecco (D-PBS) contendo 36 mg/1 de piruvato e 1 g/1 de glicose com a adição de soro fetal bovino a 1% e um de quatro corantes indicadores de cálcio (Fluo-3™ AM, Fluo-4™ AM, Calcium Green™-1 AM ou Oregon Green™ 488 BAPTA-1 AM) , cada um a uma concentração de 4 μΜ. As placas foram lavadas uma vez com D-PBS modificado sem soro fetal bovino a 1% e incubadas durante 10 minutos a 37°C para remover corante residual da membrana celular. Adicionalmente, é efectuada uma 154 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ série de lavagens com D-PBS modificado sem soro fetal bovino a 1% imediatamente antes da activação da resposta de cálcio.

Uma resposta de cálcio é iniciada através da adição de um ou mais compostos agonistas do receptor candidatos, ionóforo de cálcio A23187 (10 μΜ; controlo positivo) ou ATP (4 μΜ; controlo positivo). A fluorescência é medida através de FLIPR de Molecular Device com um laser de árgon (excitação a 488 nm) . (Ver, p.ex., Kuntzweiler et al. , Drug Dev. Res. 44: 14-20, 1998). O obturador da câmara detectora é regulado para 2,5 e a duração da exposição é de 0,4 milissegundos. A fluorescência basal das células é medida durante 20 segundos antes da adição do agonista candidato, ATP ou A23187, e o nível de fluorescência basal é subtraído do sinal da resposta. O sinal de cálcio é medido durante aproximadamente 200 segundos, tomado leituras a cada dois segundos. O ionóforo de cálcio A23187 e ATP aumentam o sinal de cálcio 200% acima dos níveis basais. Em geral, NgR activados aumentam o sinal de cálcio pelo menos cerca de 10-15% acima do sinal basal.

E. Ensaio de Ligação a [35S]-GTPyS É também possível avaliar se NgR sinaliza através de uma via medida por proteína G. Como os receptores acoplados à proteína G sinalizam através de proteínas G intracelulares cuja actividade envolve a ligação de GTP e hidrólise para produzir GDP ligado, a medição da ligação do análogo de GTP não hidrolisável [35S]-GTPyS na presença e ausência de moduladores candidatos proporciona outro ensaio para a actividade moduladora. (Ver, p.ex., Kowal et al.,

Neuropharmacology 37: 179-187, 1998).

Num ensaio exemplar, células estavelmente transfectadas com um vector de expressão de NgR são criadas em caixas de cultura de tecidos de 10 cm até subconfluência, lavadas uma vez com 5 ml de solução salina tamponada com fosfato livre de Ca2+/Mg2+ gelada e raspadas para 5 ml do mesmo tampão. As células são sedimentadas através de centrifugação (500 xg, 5 minutos), ressuspensas em tampão TEE (Tris 25 mM, pH 7,5, EDTA 5 mM, EGTA 5 mM) e congeladas em azoto líguido. Após descongelação, as células são homogeneizadas utilizando um homogeneizador Dounce (1 ml de TEE por placa de células) e 155 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT centrifugadas a 1000 xg durante 5 minutos para remover os núcleos e as células não destruídas. O sobrenadante do homogenato é centrifugado a 20 000 xg durante 20 minutos para isolar a fracção membranar e o sedimento de membranas é lavado uma vez com TEE e ressuspenso em tampão de ligação (HEPES 20 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, MgCl2 10 mM, EDTA 1 mM). As membranas ressuspensas podem ser congeladas em azoto líquido e armazenadas a -70°C até à utilização.

Alíquotas de membranas celulares preparadas tal como descrito acima e armazenadas a -70°C são descongeladas, homogeneizadas e diluídas em tampão contendo HEPES 20 mM, MgCl2 10 mM, EDTA 1 mM, NaCl 120 mM, GDP 10 μΜ, e ascorbato 0,2 mM, a uma concentração de 10-50 pg/ml. Num volume final de 90 μΐ, os homogenatos são incubados com concentrações variáveis de compostos moduladores candidatos ou GTP 100 μΜ durante 30 minutos a 30 °C e depois colocados em gelo. A cada amostra, foram adicionados 10 μΐ de guanosina 5'-0-(3 [35S] tio) trifosfato (NEN, 1200 Ci/mmol; [35S]-GTPyS) até uma concentração final de 100-200 pM. As amostras são incubadas a 30 °C durante mais 30 minutos, é adicionado 1 ml de HEPES 10 mM, pH 7,4, MgCl2 10 mM a 4°C e a reacção é parada através de filtração.

As amostras são filtradas sobre filtros Whatman GF/B e os filtros são lavados com 20 ml de HEPES 10 mM gelado, pH 7,4, MgCl2 10 mM. Os filtros são contados através de espectroscopia de cintilações líquidas. A ligação não específica de [35 S ] — GTPyS é medida na presença de GTP 100 μΜ GTP e subtraída do total. São seleccionados compostos que modulem a quantidade de [35S]-GTPyS que se liga nas células, em comparação com as células de controlo não transfectadas. A activação de receptores através de agonistas dá um aumento de até cinco vezes na ligação de [35S]-GTPyS. Esta resposta é bloqueada por antagonistas. F. Libertação de [3H]-Ácido Araquidónico A activação de NgR pode também potenciar a libertação de ácido araquidónico nas células, proporcionando ainda outro ensaio útil para moduladores da actividade de NgR. (Ver, 156

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT p.ex., Kanterman et al., Mol. Pharmacol. 39: 364-369, 1991).

Por exemplo, células CHO que estejam estavelmente transfectadas com um vector de expressão de NgR são plaqueadas em placas de 24 poços a uma densidade de 15000 células/poço e criadas em meio MEM suplementado com soro fetal bovino a 10%, glutamina 2 mM, 10 U/ml de penicilina e 10 pg/ml de estreptomicina durante 48 horas a 37°C antes de utilizar. As células de cada poço são marcadas através de incubação com [3H]-ácido araquidónico (Amersham Corp., 210 Ci/mmol) a 0,5 pCi/ml em 1 ml de MEM suplementado com HEPES 10 mM, pH 7,5 e albumina de soro bovino livre de ácidos gordos a 0,5% durante 2 horas a 37°C. As células são então lavadas duas vezes com 1 ml do mesmo tampão.

Os compostos moduladores candidatos são adicionados em 1 ml do mesmo tampão, sozinhos ou com ATP 10 μΜ e as células são incubadas a 37°C durante 30 minutos. O tampão sozinho e as células falsamente transfectadas são utilizados como controlos. Amostras (0,5 ml) de cada poço são contadas através de espectroscopia de cintilações liquidas. Agonistas que activem o receptor conduzirão a potenciação da libertação estimulada por ATP de [3H]-ácido araquidónico. Esta potenciação é bloqueada por antagonistas. G. Velocidade de Acidificação Extracelular

Ainda noutro ensaio, os efeitos dos moduladores candidatos da actividade de NgR são ensaiados através da monitorização de alterações extracelulares no pH induzidas pelos compostos de teste (ver, p.ex., Dunlop et ai., J. Pharmacol. Toxicol. Meth. 40: 47-55, 1998). Num caso, células CHO transf ectadas com um vector de expressão de NgR são semeadas em copos de cápsulas de 12 mm (Molecular Devices Corp.) a 4xl05 células/copo em MEM suplementado com soro fetal bovino a 10%, L-glutamina 2 mM, 10 U/ml de penicilina, e 10 pg/ml de estreptomicina. As células são incubadas neste meio a 37°C em C02 a 5% durante 24 horas.

As velocidades de acidificação extracelular são medidas utilizando um microfisiómetro Cytosensor (Molecular Devices Corp.). Os copos de cápsulas são carregados nas câmaras do sensor do microfisiómetro e as câmaras são perfundidas com tampão de corrida (MEM livre de bicarbonato suplementado com 157 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ L-glutamina 4 mM, 10 unidades/ml de penicilina, 10 pg/ml de estreptomicina, NaCl 26 mM) a um caudal de 100 μΐ/minuto. Os agonistas candidatos ou outros agentes são diluídos no tampão de corrida e perfundidos através de uma segunda via de fluido. Durante cada ciclo de bombagem de 60 segundos, a bomba funciona durante 38 segundos e está desligada durante os restantes 22 segundos. O pH do tampão de corrida na câmara do sensor é registado durante o ciclo de 43-58 segundos e a bomba é reiniciada aos 60 segundos para iniciar o ciclo seguinte. A velocidade de acidificação do tampão de corrida durante o tempo de registo é calculada através do programa Cytosoft. Alterações na velocidade de acidificação são calculadas através da subtracção do valor limiar (a média de 4 medições da velocidade imediatamente antes de um modulador candidato) da medição da velocidade mais elevada obtida após a adição de um modulador candidato. O instrumento seleccionado detecta 61 mV/unidade de pH. Moduladores que actuem como agonistas do receptor resultam num aumento na velocidade de acidificação extracelular em comparação com a velocidade na ausência do agonista. Esta resposta é bloqueada através de moduladores que actuem como antagonistas do receptor.

Exemplo 15: mNgR3 não se liga a hNogo-A(1055-1120)

Para testar funcionalmente o NgR3 de ratinho (daqui em diante, mNgR3) quanto à sua capacidade para se ligar a hNogo-A (1055-112 0) , foi criado um vector de expressão de ADNc para uma proteína mNgR3 marcada com um epitopo myc. O ADNc de NgR3 de ratinho foi amplificado por PCR a partir de ADNc de cérebro adulto de ratinho, da sequência sinal até ao codão de terminação e ligado no vector pSecTag2 para que o vector codifique uma sequência sinal seguida de uma etiqueta myc seguida da sequência de mNgR3 madura. Este plasmídeo foi transfectado para células COS07, e a expressão de uma proteína etiquetada com myc do tamanho previsto foi verificada através de análise immunoblot. Estudos de ligação de fosfatase alcalina-hNogo-A(1055-1120) e imuno-histologia de myc foram conduzidos tal como descrito (Fournier et al., supra).

As células expressando mNgR3 expressam a proteína etiquetada com myc mas a ligação a AP-hNogo-A(1055-1120) não foi observada sob as condições empregues (Fig. 8). 158

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Exemplo 16: Identificação de ADNc de NgR3 humano parcial e sequências proteicas 0 programa tblastn foi utilizado para pesquisar o homólogo humano de NgR3 de ratinho. A sequência proteica de NgR3 de ratinho (SEQ ID NO:4) foi utilizada para pesquisar uma base de dados de etiquetas de sequências expressas (EST) humanas privada de Incyte produzindo um acerto altamente significativo: Molde Incyte ID 190989.1. Esta sequência (937 nucleótidos) contém um enquadramento de leitura aberto de 312 aminoácidos no segundo enquadramento inverso que exibe 88% de identidade com os resíduos 66 a 381 de NgR3 de ratinho (SEQ ID NO:4), indicando fortemente que é parte do homólogo de NgR3 humano.

Uma busca de SEQ ID NO: 4 contra a base de dados de EST humanas pública em Genbank também produziu um acerto com uma EST de 465 pb (número de Entrada: R35699; número da Versão: R35699.1; GI: 792600). Existem várias deleções e inserções de um único nucleótido dentro desta sequência que causam erros de mudança de enquadramento. Toda a sequência de confiança contida nesta EST pública está presente na EST de Incyte (Molde ID 190989.1) .

Para obter mais sequência nucleotídica que prolongaria a sequência de aminoácidos na extremidade do terminal carboxilo, o clone N.° 38319 do Consórcio I.M.A.G.E., que corresponde ao N.° de entrada Genbank R35699, foi adquirido em Incyte Genomics Inc. e sujeito a mais análise da sequência de ADN. Este clone consiste num fragmento Notl/HindIII contendo a sequência de interesse, clonada nos locais Notl/Hindi 11 do vector Lafmid BA (http://image.llnl.gov/image/html/libs/ lafmidBA.shtml). 0 clone foi recebido como uma punção de agar, que foi riscada em placas de LB-agar contendo 50 yg/ml de ampicilina para isolar colónias individuais. Foram criadas seis colónias em meio LB com antibiótico e foi preparado ADN plasmídico utilizando o Sistema de Purificação de ADN Promega Wizard Plus Miniprep (Promega #A7500). Estes ADN foram subsequentemente digeridos com as enzimas de restrição Notl e HindIII para confirmar que os clones continham uma inserção. A inserção de um isolado foi sequenciada utilizando uma combinação de iniciadores específicos do vector e específicos 159

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT do gene produzindo uma sequência nucleotidica parcial de NgR3 humano de 1176 nucleótidos (SEQ ID NO:13). Uma tradução desta sequência proporciona uma sequência parcial para NgR3 humano de 392 aminoácidos (SEQ ID NO:14).

A sequência nucleotidica de SEQ ID NO:13 difere da sequência de EST de Incyte em três posições. As posições nucleotidicas 12-13 em SEQ ID NO:13 são CG, enquanto os nucleótidos correspondentes no Molde ID 190989.1 de Incyte são GT (i.e., as posições 12-13 do complemento do Molde ID

190989.1 de Incyte). Adicionalmente, a posição 641 em SEQ ID NO: 13 é um C, enquanto o nucleótido correspondente na sequência do Molde ID 190989.1 de Incyte é um A (i.e., a posição 641 do complemento do Molde ID 190989.1 de Incyte). Isto resulta em duas mudanças nos aminoácidos quando se compara SEQ ID NO: 14 com o ORF codificado pelo Molde ID 190989.1 de Incyte; SEQ ID NO:14 contém uma valina na posição 5, enquanto o ORF codificado pelo Molde ID 190989.1 de Incyte contém uma leucina; SEQ ID NO:14 contém uma alanina na posição 214, enquanto o ORF codificado pelo Molde ID 190989.1 de Incyte contém um ácido glutâmico. A sequência nucleotidica de SEQ ID NO:13 difere da sequência da EST pública (número de Entrada: R35699; Versão número: R35699.1; GI: 792600) em duas posições (dentro dos primeiros 200 nucleótidos da sequência de confiança). As posições nucleotidicas 12-13 em SEQ ID NO:13 são CG, enquanto os nucleótidos correspondentes na EST pública são GT (i.e., posições 12-13 da EST pública; número de Entrada: R35699; Versão n° : R35699.1; GI: 792600) . Isto conduz à alteração de um único aminoácido quando se compara SEQ ID NO: 14 com o ORF codificado pela EST pública: SEQ ID NO:14 contém uma valina na posição 5, enquanto o ORF codificado pela EST pública contém uma leucina.

Uma análise Bestfit da sequência de aminoácidos humana parcial com a sequência de aminoácidos de ratinho inteira indica que a sequência de aminoácidos de NgR3 humana está completa na extremidade do terminal carboxilo e que partilham 89,54% de identidade. Um alinhamento de todas as proteínas NgR é mostrado na Figura 9. Embora na sequência de aminoácidos de NgR3 humana estejam em falta os primeiros 25 aminoácidos, pode 160 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ser determinado que a proteína NgR3 humana contém as seguintes características em comum com as outras sequências de NgR: (1) oito domínios de Repetições Ricas em Leucina (LRR); (2) um domínio LRR carboxi-terminal (LRR-CT); (3) uma cisteína conservada no quarto domínio LRR; (4) um potencial local de glicosilação conservado no oitavo domínio LRR; e (5) um terminal carboxilo hidrófobo.

Tal como apreciarão os peritos na arte, poderão ser feitas numerosas alterações e modificações às concretizações preferidas do presente invento sem se sair do espírito do presente invento. Pretende-se que todas essas variações recaiam dentro do âmbito do presente invento.

Chave para a Listagem das Sequências: SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO: 6 SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 10 SEQ ID NO: 11 SEQ ID NO: 12 SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 15 SEQ ID NO: 16 SEQ ID NO: 17 SEQ ID NO: 18 SEQ ID NO: 19 sequência de ADNc de NgR2 humana derivada da sequência genómica AC013606 sequência de aminoácidos de NgR2 humana sequência de ADNc de NgR3 de ratinho derivada de AC 0 217 6 8 uma sequência de aminoácidos de NgR3 de ratinho uma sequência de aminoácidos de NgRl humana uma sequência de aminoácidos de consenso para NgR resíduos de aminoácidos #1055-1120 de hNogoA (Nogo-66) uma sequência de aminoácidos de NgR2 humana madura uma sequência de aminoácidos de NgR3 de ratinho madura uma sequência de aminoácidos do LLRNT de NgR de consenso uma sequência de aminoácidos do domínio LRRCT de NgR de consenso uma sequência de aminoácidos do domínio LRR de NgR de consenso uma sequência nucleotídica de NgR3 humana parcial uma sequência de aminoácidos de NgR3 humana parcial uma sequência genómica codificando uma sequência de NgR2 humana uma sequência genómica (cadeia complementar) codificando um NgR3 de ratinho uma sequência de aminoácidos de NgRl de ratinho uma sequência de consenso para o domínio NTLRRCT de

NgR uma sequência de aminoácidos do domínio LRRCT de NgR de consenso 161 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS <110> BIOGEN, INC. YALE UNIVERSITY STEPHEN M.STRITTMATTER, RICHARD L.CATE, DINAH W.Y.SAH,

<120> HOMÓLOGOS DO RECEPTOR DE NOGO <130> A116PCT <140> <141> <150> 60/238,3 61 <151> 2000-10- 06 <160> 16 <170> Patentln Ver <210> 17 <211> 1260 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 1 atgctgcccg ggctcaggcg cctgctgcaa ctcctggccc tgcccctggc ggcccccagc ccgcccaccg tgagctgcca ggccaacaac agcactcagc gactcttcct gcagaacaac gggtccaacc tgctcaccct gtggctcttc actttccgcc acttgcaagc cctggaggag tcgctggagc ccgacacctt ccagggcctg tgccagctca gcagcctgcc cggcaacatc tacctccagg agaacagcct gctccaccta ctgagccacc tcttcctcca cgggaaccgc ggcctgggca gcctagaccg gctgctgctg gcggccttcc gcggcctcag ccgcctcacc tcgctgcccg gcgaggcgct cgccgacctg aacccctggg cgtgcgactg ccgcgcgcgg gtgtccagct ccgacgtgac ctgcgccacc gcgctccgcg aggccgactt ccaggcgtgt cgcgcccgcg gcaacagctc ctccaaccac ccagccgatc cctccaccct ctaccgagat ggcggggacg cgcctactga ggacgactac ggggagcaga tgtgccccgg cgctgcctgc ctctcggccg ggctccccag ccctctgctt gctcccgcct cggcctgcct cctgctgatg 60 tgccccatgc tctgcacctg ctactcatcc 120 ttctcctctg tgccgctgtc cctgccaccc 180 ctcatccgca cgctgcggcc aggcaccttt 240 tccaacaacc tctccaccat ctacccgggc 300 ctggacctcg gtgacaaccg gcacctgcgc 360 gagcggctgc agtcgctgca tttgtaccgc 420 ttccgaggcc tggtcagcct gcagtacctc 480 caggatgact tgttcgcgga cctggccaac 540 ctgcggctgc tcacagagca cgtgtttcgc 600 cacgggaacc ggctgcaggg cgtgcaccgc 660 atcctctacc tgttcaacaa cagcctggcc 720 ccctcgctcg agttcctgcg gctcaacgct 780 ccgctctggg cctggttcca gcgcgcgcgc 840 cccccggagc gccagggccg agacctgcgc 900 ccgcccgcgg cacccacgcg gccgggcagc 960 ctgtacgggg tggccgaggc cggggcgccc 1020 ctgcctgccg aagactcgcg ggggcgccag 10B0 tgggggggct acgggggtga ggaccagcga 1140 caggcgcccc cggactcccg aggccctgcg 1200 tgcctcctgc tcctggtgcc ccaccacctc 1260

<210> 2 <211> 420 <212> PRT <213> Homo sapiens 162 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ <400> 2

Met Leu Pro Gly Leu Arg Arg Leu 1 5

Leu Leu Leu Met Leu Leu Ala Leu 20

Leu Gin Ala Pro Ala Ser Ala Cys 10 15

Pro Leu Ala Ala Pro Ser Cys Pro 25 30

Pro Pro Thr Vai Ser Cys Gin Ala 45 Ser Leu Pro Pro Ser Thr Gin Arg 60 Arg Thr Leu Arg Pro Gly Thr Phe 75 80 Leu Phe Ser Asn Asn Éeu Ser Thr 90 95 Leu Gin Ala Leu Glu Glu Leu Asp 105 110 Ser Leu Glu Pro Asp Thr Phe Gin 125 His Leu Tyr Arg Cys Gin Leu Ser 140 Gly Leu Vai Ser Leu Gin Tyr Leu 155 160 His Leu Gin Asp Asp Leu Phe Ala 170 175 Phe Leu His Gly Asn Arg Leu Arg 185 190 Gly Leu Gly Ser Leu Asp Arg Leu 205 Gly Vai His Arg Ala Ala Phe Arg 220 Tyr Leu Phe Asn Asn Ser Leu Ala 235 240 Asp Leu Pro Ser Leu Glu Phe Leu 250 255

Met Leu Cys Thr Cys Tyr Ser Ser 35 40

Asn Asn Phe Ser Ser Vai Pro Leu 50 55

Leu Phe Leu Gin Asn Asn Leu Ile 65 70

Gly Ser Asn Leu Leu Thr Leu Trp 85

Ile Tyr Pro Gly Thr Phe Arg His 100

Leu Gly Asp Asn Arg His Leu Arg 115 120

Gly Leu Glu Arg Leu Gin Ser Leu 130 135

Ser Leu Pro Gly Asn Ile Phe Arg 145 150

Tyr Leu Gin Glu Asn Ser Leu Leu 165

Asp Leu Ala Asn Leu Ser His Leu 180

Leu Leu Thr Glu His Vai Phe Arg 195 200

Leu Leu His Gly Asn Arg Leu Gin 210 215

Gly Leu Ser Arg Leu Thr Ile Leu 225 230

Ser Leu Pro Gly Glu Ala Leu Ala 245

Cys Asp Cys Arg Ala Arg Pro Leu 265 270 Vai Ser Ser Ser Asp Vai Thr Cys 285 Arg Asp leu Arg Ala Leu Arg Glu 300 Ala Ala Pro Thr Ara Pro Glv Ser 315 320 Asn His Leu Tyr Gly Vai Ala Glu 330 335 Ser Thr Leu Tyr Arg Asp Leu Pro 345 350 Gly Gly Asp Ala Pro Thr Glu Asp 365 Glu Asp Gin Arg Gly Glu Gin Met

Arg Leu Asn Ala Asn Pro Trp Ala 260

Trp Ala Trp Phe Gin Arg Ala Arg 275 280

Ala Thr Pro Pro Glu Arg Gin Gly 290 295

Ala Asp Phe Gin Ala Cys Pro Pro 305 310

Arg Ala Arg Gly Asn Ser Ser Ser 325

Ala Gly Ala Pro Pro Ala Asp Pro 340

Ala Glu Asp Ser Arg Gly Arg Gin 355 360

Asp Tyr Trp Gly Gly Tyr Gly Gly 163 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ 370 375 380

Cys Pro Gly Ala Ala Cys Gin Ala Pro Pro Asp Ser Arg Gly Pro Ala 385 390 395 400

Leu Ser Ala Gly Leu Pro Ser Pro Leu Leu Cys Leu Leu Leu Leu Vai 405 410 415

Pro His Hls Leu 420 <210> 3 <211> 1383 <212> ADN <213> Mus sp. <400> 3 atgtcttggc agtctggaac cacagtgaca caatctcccg tgcaggctgc tcaggtctca 60 gggtgctgtg tggaattgct gctgttgctg ctcgctggag agctacctct gggtggtggt 120 tgtcctcgag aetgtgtgtg ctaccctgcg cccatgactg tcagctgcca ggcacacaac 180 tttgctgcca tcccggaggg catcecagag gacagtgagc gcatcttcct gcagaacaat 240 cgcatcacct tectccagca gggccactte agccccgcea tggtcaecct ctggatctac 300 tccaacaaca tcactttcat tgctcccaac accttcgagg gctttgtgca tctggaggag 360 ctagaccttg gagacaaccg acagctgcga acgctggcac ccgagacctt ccaaggcctg 420 gtgaagcttc acgccctcta cctctataag tgtggaetga gcgccctgcc cgcaggcatc 480 tttggtggcc tgcacagcct gcagtatctc tacttgcagg-acaaccatat cgagtacctc 540 caagatgaca tctttgtgga cctggtcaat ctcagtcact tgtttctcca tggtaacaag 600 ctatggagcc tgggccaagg catcttccgg ggcctggtga acctggaccg gttgctgctg 660 catgagaacc agctacagtg ggttcaccac aaggctttcc atgacctcca caggctaacc 720 accctctttc tcttcaacaa cagcctcact gagctgcagg gtgactgtct ggcccccctg 780 gtggccttgg agttccttcg cctcaatggg aatgcttggg actgtggctg ccgggcacgt 840 tccctgtggg aatggctgcg aaggttccgt ggctctagct ctgctgtccc ctgcgcgacc 900 cccgagctgc ggcaaggcca ggatctgaag ctgctgaggg tggaggactt ccggaactgc 960 acaggaccag tgtctcctca ccagatcaag tctcacacgc ttaccacctc tgacagggct 1020 gcccgcaagg agcaccatcc gtcccatggg gcctccaggg acaaaggcca cccacatggc 1080 catccgcctg gctccaggtc aggttacaag aaggcaggca agaactgcac cagccacagg 1140 aaccggaacc agatctctaa ggtgagctct gggaaagagc ttaccgaact gcaggactat 1200 gcccccgact atcagcacaa gttcagcttt gacatcatgc ccaccgcacg acccaagagg 1260 aagggcaagt gtgctcgcag gacccccatc cgtgccccca gtggggtgca gcaggcatcc 1320 tcaggcacgg cccttggggc cccactcctg gcctggatac tggggctggc agtcactctc 1380 cgc 1383 <210> 4 <211> 461 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 4

Met 1 Ser Trp Gin Ser 5 Gly Thr Thr Vai Thr 10 Gin Ser Pro Vai Gin 15 Ala Ala Gin Vai Ser 20 Gly Cys Cys Vai Glu 25 Leu Leu Leu Leu Leu 30 Leu Ala Gly Glu Leu 35 Pro Leu Gly Gly Gly 40 Cys Pro Arg Asp Cys 45 Vai Cys Tyr Pro Ala Pro 50 Met Thr Vai Ser 55 Cys Gin Ala Hls Asn 60 Phe Ala Ala Ile Pro 65 Glu Gly Ile Pro Glu Asp 70 Ser Glu Arg Ile 75 Phe Leu Gin Asn Asn 80 164 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Arg Ile Thr Phe Leu Gin Gin Gly His Phe Ser Pro Ala Met Vai Thr 85 90 95 Leu Trp Ile Tyr Ser Asn Asn Ile Thr Phe Ile Ala Pro Asn Thr Phe 100 105 110 Glu Gly Phe Vai His Leu Glu Glu Leu Asp Leu Gly Asp Asn Arg Gin 115 120 125 Leu Arg Thr Leu Ala Pro Glu Thr Phe Gin Gly Leu Vai Lys Leu His 130 135 140 Ala Leu Tyr Leu Tyr Lys Cys Gly Leu Ser Ala Leu Pro Ala Gly Ile 145 150 155 160 Phe Gly Gly Leu His Ser Leu Gin Tyr Leu Tyr Leu Gin Asp Asn His 165 170 175 Ile Glu Tyr Leu Gin Asp Asp Ile Phe Vai Asp Leu Vai Asn Leu Ser 180 185 190 His Leu Phe Leu His Gly Asn Lys Leu Trp Ser Leu Gly Gin Gly Ile 195 200 205 Phe Arg Gly Leu Vai Asn Leu Asp Arg Leu Leu Leu His Glu Asn Gin 210 215 220 Leu Gin Trp Vai His His Lys Ala Phe His Asp Leu His Arg Leu Thr 225 230 235 240 Thr Leu Phe Leu Phe Asn Asn Ser Leu Thr Glu Leu Gin Gly Asp Cys 245 250 255 Leu Ala Pro Leu Vai Ala Leu Glu Phe Leu Arg Leu Asn Gly Asn Ala 260 265 270 Trp Asp Cys Gly Cys Arg Ala Arg Ser Leu Trp Glu Trp Leu Arg Arg 275 280 285 Phe Arg Gly Ser Ser Ser Ala Vai Pro Cys Ala Thr Pro Glu Leu Arg 290 295 300 Gin Gly Gin Asp Leu Lys Leu Leu Arg Vai Glu Asp Phe Arg Asn Cys 305 310 315 320 Thr Gly Pro Vai Ser Pro His Gin Ile Lys Ser HiS Thr Leu Thr Thr 325 330 335 Ser Asp Arg Ala Ala Arg Lys Glu His His Pro Ser His Gly Ala Ser 340 345 350 Arg Asp Lys Gly His Pro His Gly His Pro Pro Gly Ser Arg Ser Gly 355 360 365 Tyr Lys Lys Ala Gly Lys Asn Cys Thr Ser His Arg Asn Arg Asn Gin 370 375 380 Ile Ser Lys Vai Ser Ser Gly Lys Glu Leu Thr Glu Leu Gin Asp Tyr 385 390 395 400 Ala Pro Asp Tyr Gin His Lys Phe Ser Phe Asp Ile Met Pro Thr Ala 405 410 415

Acg Pro Lys Arg Lys Gly Lys Cys Ala Arg Arg The Pro Zle Arg Ala 165

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 420

Pro Ser Gly Vai Gin Gin Ala Ser 435 440

Leu Leu Ala Trp Xle Leu Gly Leu 450 455 425 430

Ser Gly Thr Ala Leu Gly Ala Pro 445

Ala Vai Thr Leu Arg 460 <210> 5 <211> 473 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5

Met Lys Arg Ala Ser Ala Gly Gly Ser Arg Leu Leu Ala Trp Vai Leu 15 10 15

Trp Leu Gin Ala Trp Gin Vai Ala Ala Pro Cys Pro Gly Ala Cys Vai 20 25 30

Cys Tyr Asn Glu Pro Lys Vai Thr Thr Ser Cys Pro Gin Gin Gly Leu 35 40 45

Gin Ala Vai Pro Vai Gly lie Pro Ala Ala Ser Gin Arg Ile Phe Leu 50 55 60

His Gly Asn Arg Ile Ser His Vai Pro Ala Alà Ser Phe Arg Ala Cys 65 70 75' 80

Arg Asn Leu Thr Ile Leu Trp Leu His Ser Asn Vai Leu Ala Arg Ile 85 90 95

Asp Ala Ala Ala Phe Thr Gly Leu Ala Leu Leu Glu Gin Leu Asp Leu 100 105 110

Ser Asp Asn Ala Gin Leu Arg Ser Vai Asp Pro Ala Thr Phe His Gly 115 120 125

Leu Gly Arg Leu His Thr Leu His Leu Asp Arg Cys Gly Leu Gin Glu 130 135 140

Leu Gly Pro Gly Leu Phe Arg Gly Leu Ala Ala Leu Gin Tyr Leu Tyr 145 150 155 " 160

Leu Gin Asp Asn Ala Leu Gin Ala Leu Pro Asp Asp Thr Phe Arg Asp 165 170 175

Leu Gly Asn Leu Thr His Leu Phe Leu His Gly Asn Arg Ile Ser Ser 180 185 190

Vai Pro Glu Arg Ala Phe Arg Gly Leu His Ser Leu Asp Arg Leu Leu . 195 200 205

Leu His Gin Asn Arg Vai Ala His Vai His Pro His Ala Phe Arg Asp 210 215 220

Leu Gly Arg Leu Met Thr Leu Tyr Leu Phe Ala Asn Asn Leu Ser Ala 225 230 235 240

Leu Pro Thr Glu Ala Leu Ala Pro Leu Arg Ala Leu Gin Tyr Leu Arg 245 250 255

Leu Asn Asp Asn Pro Trp Vai Cys Asp Cys Arg Ala Arg Pro Leu Trp 166

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 260 265 270

Ala Trp Leu Gin Lys Phe Arg Gly Ser Ser Ser Glu Vai Pro Cys Ser 275 280 285

Leu Pro Gin Arg Leu Ala Gly Arg Asp Leu Lys Arg Leu Ala Ala Asn 290 295 300

Asp Leu Gin Gly Cys Ala Vai Ala Thr Gly Pro Tyr His Pró Ile Trp 305 310 315 320

Thr Gly Arg Ala Thr Asp Glu Glu Pro Leu Gly Leu Pro Lys Cys Cys 325 330 335

Gin Pro Asp Ala Ala Asp Lye Ala Ser Vai Leu Glu Pro Gly Arg Pro 340 345 350

Ala Ser Ala Gly Asn Ala Leu Lys Gly Arg Vai Pro Pro Gly Asp Ser 355 360 365

Pro Pro Gly Asn Gly Ser Gly Pro Arg His Ile Asn Asp Ser Pro Phe 370 375 380

Gly Thr Leu Pro Gly Ser Ala Glu Pro Pro Leu Thr Ala Vai Arg Pro 385 390 395 400

Glu Gly Ser Glu Pro Pro Gly Phe Pro Thr Ser· Gly Pro Arg Arg Arg 405 410 415

Pro Gly Cys Ser Arg Lys Asn Arg Thr Arg Ser His Cys Arg Leu Gly 420 425 430

Gin Ala Gly Ser Gly Gly Gly Gly Thr Gly Asp Ser Glu Gly Ser Gly 435 440 445

Ala Leu Pro Ser Leu Thr Cys Ser Leu Thr Pro Leu Gly Leu Ala Leu 450 455 460

Vai Leu Trp Thr Vai Leu Gly Pro Cys 465 470

<210> 6 <211> 440 <212> PRT <213> Sequência Artificial <2 2 0 > <223> Descrição de Sequência Artificial: Sequência de consenso <220> <221> M0D_RES <222> (3)..(4) <223> Aminoácido variável <220> <221> M0D_RES <222> (6) <223> Aminoácido variável <220> <221> M0D_RES <222> (9)..(10) <223> Aminoácido variável 167

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (12)..(13) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (15) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (18) .. (25) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (27).. (29) l <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (31) .. (34) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (36) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (39)..(40) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (42) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (44) .. (50) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (52).. (59) i <223> Aminoácido variável 168

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > MOD_RES <222> (62) . . (63) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (66).. (69) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (71)··(74) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (76)..(80) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (83) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (87) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (90) . . (91) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (94) .. (96) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (98) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (101) <223> Aminoácido variável 169

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > MOD_RES <222> (104)..(105) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (107) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (109) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (111)..(112) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (114) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (116)..(117) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (119)..(122) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (124) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (127)..(128) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (136) <223> Aminoácido variável 170

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > MOD_RES <222> (138)..(141) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (193) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (146) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (148) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (151) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (154) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (162)..(170) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (175)..(176) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (184) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (186)..(189) <223> Aminoácido variável 171

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > MOD_RES <222> (192)..(193) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (196)..(197) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (199) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (202)..(203) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (205) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (208) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (210) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (212)..(213) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (215)..(218) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (221) <223> Aminoácido variável 172

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > MOD_RES <222> (223)..(224) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (226)..(227) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (232) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (234) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (236) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (238) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (243) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (246) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (248)..(251) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (253) <223> Aminoácido variável 173

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > MOD_RES <222> (257) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (259) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (261).. (262) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (264).. (267) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (269) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (272)..(273) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (275)..(27 D <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (279)..(28 D <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (283) . . (28 7) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (289) . . (29 0) <223> Aminoácido variável

174 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > MOD_RES <222> (292) . . (328) <223> Aminoác ido variável <2 2 0 > <221> M0D_RES <222> (330) . . (341) <223> Aminoác ido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (344).. (346) <223> Aminoác ido variável <220> <2 21 > MOD RES <222> (348).. (399) <223> Aminoác ido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (901) . . (428) <223> Aminoác ido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (431) . . (439) <223> Aminoác ido variável <400> 6

Cys Pro Xaa Xaa Cys Xaa Cys Tyr Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Thr Xaa Ser 15 10 15 175 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Fro Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Xaa 20 25 30

Xaa Xaa Arg Xaa Phe Leu Xaa Xaa Asn Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 45

Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Trp Xaa Xaa Ser 50 55 60

Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 65 70 75 80

Leu Giu Xaa Leu Asp Leu Xaa Asp Asn Xaa Xaa Leu Arg Xaa Xaa Xaa 85 90 95

Pro Xaa Thr Phe Xaa Gly Leu Xaa Xaa Leu Xaa Leu Xaa Leu Xaa Xaa 100 105 110

Cys Xaa Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Gly Leu Xaa Xaa 115 120 125

Leu Gin Tyr Leu Tyr Leu Gin Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Asp 130 135 140

Asp Xaa Phe Xaa Asp Leu Xaa Asn Leu Xaa His Leu Phe Leu His Gly 145 150 155 160

Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Arg Gly Leu Xaa Xaa 165 170 . ‘ Π5

Leu Asp Arg Leu Leu Leu His Xaa Asn Xaa Xaa Xaa Xaa Vai His Xaa 180 185 190

Xaa Ala Phe Xaa Xaa Leu Xaa Arg Leu Xaa Xaa Leu Xaa Leu Phe Xaa 195 200 205

Asn Xaa Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Ala Xaa Leu Xaa Xaa 210 215 220

Leu Xaa Xaa Leu Arg Leu Asn Xaa Asn Xaa Trp Xaa Cys Xaa Cys Arg 225 230 235 240

Ala Arg Xaa Leu Trp Xaa Trp Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa 5er Ser Ser 245 250 255

Xaa Vai Xaa Cys Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Asp Leu Xaa 260 265 270

Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro 275 280 285

Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 290 295 300

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 305 310 315 320

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 325 330 335

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Pro Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 340 345 350 '

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 176

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 355 360 365

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 370 375 380

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg 385 390 395 400

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 405 410 ' 415

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa 420 425 430

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu 435 440

<210> 7 <211> 66 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7

Arg Ile Tyr Lys Gly Vai Ile Gin Ala Ile Gin Lys Ser Asp Glu Gly 1 5 10 15 His Pro Phe Arg Ala Tyr Leu Glu Ser Glu Vai Ala Ile Ser Glu Glu 20 25 30 Leu Vai Gin Lys Tyr Ser Asn Ser Ala Leu Gly His Vai Asn Cys Thr 35 40 45 Ile Lys Glu Leu Arg Arg Leu Phe Leu Vai Asp Asp Leu Vai Asp Ser 50 55 60 Leu Lys 65 <210> 8 <211> 390 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8

Cys 1 Pro Met Leu Cys 5 Thr Cys Tyr Ser Ser 10 Pro Pro Thr Vai Ser 15 Cys Gin Ala Asn Asn 20 Phe Ser Ser Vai Pro Leu 25 Ser Leu Pro Pro 30 Ser Thr Gin Arg Leu Phe 35 Leu Gin Asn Asn 40 Leu Ile Arg Thr Leu Arg 45 Pro Gly Thr Phe 50 Gly Ser Asn Leu Leu 55 Thr Leu Trp Leu Phe Ser 60 Asn Asn Leu Ser 65 Thr Ile Tyr Pro Gly Thr 70 Phe Arg His Leu 75 Gin Ala Leu Glu Glu 80 Leu Asp Leu Gly Asp 85 Asn Arg His Leu Arg 90 Ser Leu Glu Pro Asp 95 Thr 177 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Phe Gin Gly Leu Glu Arg Leu Gin 100 .

Leu Ser Ser Leu Pxo Gly Asn Ile 115 120

Tyr Leu Tyr Leu Gin Glu Asn Ser 130 135

Phe Ala Asp Leu Ala Asn Leu Ser 145 150

Leu Arg Leu Leu Thr Glu His Vai 165

Arg Leu Leu Leu His Gly Asn Arg 180

Phe Arg Gly Leu Ser Arg Leu Thr 195 200

Leu Ala Ser Leu Pro Gly Glu Ala 210 215

Phe Leu Arg Leu Asn Ala Asn Pro 225 230

Pro Leu Trp Ala Trp Phe Gin Arg 245

Thr Cys Ala Thr Pro Pro Glu Arg 260

Arg Glu Ala Asp Phe Gin Ala Cys 275 280

Gly Ser Arg Ala Arg Gly Asn Ser 290 295

Ala Glu Ala Gly Ala Pro Pro Ala 305 310

Leu Pro Ala Glu Asp Ser Arg Gly 325

Glu Asp Asp Tyr Trp Gly Gly Tyr 340

Gin Met Cys Pro Gly Ala Ala Cys 355 360

Pro Ala Leu Ser Ala Gly Leu Pro 370 375

Leu Vai Pro His His Leu 385 390

Ser Leu His Leu Tyr Arg Cys Gin 105 no

Phe Arg Gly Leu Vai Ser Leu Gin 125

Leu Leu His Leu Gin Asp Asp Leu 140

His Leu Phe Leu His ály Asn Arg 155 160

Phe Arg Gly Leu Gly Ser Leu Asp 170 175

Leu Gin Gly Vai His Arg Ala Ala 185 190

Ile Leu Tyr Leu Phe Asn Asn Ser 205

Leu Ala Asp Leu Pxo Ser Leu Glu 220

Trp Ala Cys Asp Cys Arg Ala Arg 235 240

Ala Arg Vai Ser Ser ser Asp Vai 250 255

Gin Gly Arg Asp Leu Arg Ala Leu 265 270

Pro Pro Ala Ala Pro Thr Arg Pro 285

Ser Ser Asn His, Leu Tyr Gly Vai 300

Asp Pro Ser Thr Leu Tyr Arg Asp 315 320

Arg Gin Gly Gly Asp Ala Pro Thr 330 335

Gly Gly Glu Asp Gin Arg Gly Glu 345 350

Gin Ala Pro Pro Asp Ser Arg Gly 365

Ser Pro Leu Leu Cys Leu Leu Leu 380 <210> 9 <211> 421 <212> PRT <213> Mus sp. 178

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <400> 9

Cys Pro Arg Asp Cys Vai Cys Tyr Pro Ala Pro Met Thr Vai Ser Cys 15 10 15

Gin Ala His Asn Phe Ala Ala Ile Pro Glu Gly Ile Pro Glu Asp Ser 20 25 30

Glu Arg Ile Phe Leu Gin Asn Asn Arg Ile Thr Phe Leu Gin Gin Gly 35 40 45

His Phe Ser Pro Ala Met Vai Thr Leu Trp Ile Tyr Ser Ásn Asn Ile 50 55 60

Thr Phe Ile Ala Pro Asn Thr Phe Glu Gly Phe Vai His Leu Glu Glu 65 70 75 80

Leu Asp Leu Gly Asp Asn Arg Gin Leu Arg Thr Leu Ala Pro Glu Thr 85 90 95

Phe Gin Gly Leu Vai Lys Leu His Ala Leu Tyr Leu Tyr Lys Cys Gly 100 105 110

Leu Ser Ala Leu Pro Ala Gly Ile Phe Gly Gly Leu His Ser Leu Gin 115 120 125

Tyr Leu Tyr Leu Gin Asp Asn His Ile Glu Tyr Leu Gin Asp Asp Ile 130 135 140

Phe Vai Asp Leu Vai Asn Leu Ser His Leu Phé Leu His Gly Asn Lys 145 150 155' 160

Leu Trp Ser Leu Gly Gin Gly Ile Phe Arg Gly Leu Vai Asn Leu Asp 165 170 175

Arg Leu Leu Leu His Glu Asn Gin Leu Gin Trp Vai His His Lys Ala 180 185 190

Phe His Asp Leu His Arg Leu Thr Thr Leu Phe Leu Phe Asn Asn Ser 195 200 205

Leu Thr Glu Leu Gin Gly Asp Cys Leu Ala Pro Leu Vai Ala Leu Glu 210 215 220

Phe Leu Arg Leu Asn Gly Asn Ala Trp Asp Cys Gly Cys Arg Ala Arg 225 230 235 240

Ser Leu Trp Glu Trp Leu Arg Arg Phe Arg Gly Ser Ser Ser Ala Vai 245 250 255

Pro Cys Ala Thr Pro Glu Leu Arg Gin Gly Gin Asp Leu Lys Leu Leu 260 265 270

Arg Vai Glu Asp Phe Arg Asn Cys Thr Gly Pro Vai Ser Pro His Gin 275 280 285

Ile Lys Ser His Thr Leu Thr Thr Ser Asp Arg Ala Ala Arg Lys Glu 290 295 300

His His Pro Ser His Gly Ala Ser Arg Asp Lys Gly His Pro His Gly 305 310 315 320

His Pro Ero Gly Ser Arg Ser Gly Tyr Lys Lys Ala Gly Lys Asn Cys 325 330 335

Thr Ser His Arg Asn Arg Asn Gin Ile Ser Lys Vai Ser Ser Gly Lys 179 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ 340 345 350

Glu Leu Thr Glu Leu Gin Asp Tyr Ala Pro Asp Tyr Gin His Lys Phe 355 360 365

Ser Phe Asp Ile Met Pro Thr Ala Arg Pro Lys Arg Lys Gly Lys Cys 370 375 380

Ala Arg Arg Thr Pro Ile Arg Ala Pro Ser Gly Vai Gin Gin Ala Ser 385 390 395 400

Ser Gly Thr Ala Leu Gly Ala Pro Leu Leu Ala Trp Ile Leu Gly Leu 405 410 415

Ala Vai Thr Leu Arg 420

<210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sequência de consenso <220> <221> M0D_RES <222> (3)..(4) <223> Aminoácido variável <220> <221> M0D_RES <222> (6) <223> Aminoácido variável <220> <221> M0D_RES <222> (9).. (10) <223> Aminoácido variável <220> <221> M0D_RES <222> (12).. (13) <223> Aminoácido variável <220> <221> M0D_RES <222> (15) <223> Aminoácido variável <400> 10

Cys Pro Xaa Xaa Cys Xaa Cys Tyr Xaa Xaa Pro Xaa Xaa Thr Xaa Ser 15 10 15

Cys

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 180 <210 > 11 <211 > 50 <212> PRT Λ 00 \—1 CN1 V Sequência Artificial <2 2 0 > <223> Descrição de Sequência Artificial: Sequência de consenso <220> <2 21 > MOD_RES <222> (2) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> <223> (4) Aminoácido variável <2 2 0 > <221> M0D_RES <222> <223> (6) Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > M0D_RES <222> (11) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > M0D_RES <222> <223> (14) Aminoácido variável <2 2 0 > <221> M0D_RES <222> (16) . . (19) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > M0D_RES <222> (21) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > M0D_RES <222> <223> (25) Aminoácido variável <2 2 0 > <221> M0D_RES <222> <223> (27) Aminoácido variável 181

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (29) . . (30) <223> Aminoácido variável <220> <221> MOD_RES <222> (32) .. (35) <223> Aminoácido variável <220> <221> MOD_RES <222> (37) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (40)..(41) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (43)..(45) <223> Aminoácido variável <220> <221> MOD_RES <222> (47)..(49) <223> Aminoácido variável <400> 11

Asn 1 Xaa Trp Xaa Cys 5 Xaa Cys Arg Ala Arg Xaa 10 Leu Trp Xaa Trp 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Arg 20 Xaa Ser Ser Ser Xaa 25 Vai Xaa Cys Xaa Xaa 30 Pro Xaa Xaa Xaa Xaa 35 Gly Xaa Asp Leu Xaa 40 Xaa Leu Xaa Xaa Xaa 45 Asp Xaa Xaa

Xaa Cys 50

<210> 12 <211> 196 <212> PRT <213> Sequência Artificial <220> <223> Descrição de Sequência Artificial: Sequência de consenso <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Aminoácido variável <220> 182

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <2 21 > MOD_RES <222> (5).. (6) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (8) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (10) .. (16) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (18) .. (25) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (28) . . (29) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (32) .. (35) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (37) .. (40) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (42)..(46) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (49) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (53) <223> Aminoácido variável <220> <221> MOD_RES <222> (56)..(57) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (60) .. (62) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (64)

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 183 <223> Aminoácído variável 184

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

<220> <2 21 > MOD_RES <222> (67) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (70)..(71) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (73) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (75) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (77).. (78) 1 <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (80) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (82)..(B3) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (85) .. (88) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (90) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (93)..(94) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (102) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (104)..(107) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES 185

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <222> (109) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (112) <223> Aminoácido variável <220> <2 21 > MOD_RES <222> (114) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (117) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (120) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (128)..(136) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (141)..(142) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (150) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (152)..(155) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (158) . . (15 9) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (162) . . (16 3) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (165) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (168) . . (16 9) <223> Aminoácido variável 186

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (171) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (174) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (176) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (178)..(179) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <2 21 > MOD_RES <222> (181)..(184) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (187) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (189)..(190) <223> Aminoácido variável <2 2 0 > <221> MOD_RES <222> (192)..(193) <223> Aminoácido variável 187

ΕΡ 1 325 130/PT <4 0 0 > 12

Arg Xaa Phe Leu Xaa Xaa Asn Xaa 1 S

Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20

Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40

Xaa leu Asp Leu Xaa Asp Asn Xaa 50 55

Thr Phe Xaa Gly Leu Xaa Xaa Leu 65 70

Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa 85

Tyr Leu Tyr Leu Gin Xaa Asn Xaa 100

Phe Xaa Asp Leu Xaa Asn Leu Xaa 115 120

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 130 135

Arg Leu Leu Leu His Xaa Asn Xaa 145 ISO

Fhe Xaa Xaa Leu Xaa Arg Leu Xaa 165

Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa 180

Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 10 15

Xaa Leu Trp Xaa Xaa Ser Asn Xaa 25 30

Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Glu 45

Xaa Leu Arg Xaa Xaa Xaa Pro Xaa 60

Xaa Leu Xaa' Leu Xaa Xaa Cys Xaa 75 80

Phe Xaa Gly Leu Xaa Xaa Leu Gin 90 95

Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Asp Asp Xaa 105 110

His Leu Phe Leu His Gly Asn Xaa 125

Phe Acg Gly Leu Xaa Xaa Leu Asp 140

Xaa Xaa Xaa Vai His Xaa Xaa Ala 155 160

Xaa Leu Xaa Leu Phe Xaa Asn Xaa 170 175

Leu Ala Xaa Leu Xaa Xaa Leu Xaa 185 190

Xaa Leu Arg Leu 195 <210> 13 <211> 1176 <212> ADN <213> Homo sapiens <400> 13 gagggcatcc ccgtggacag cgagcgcgtc cagcccggce acttcagccc cgccatggtc tacatccacc ccagcacctt cgagggcttc aaceggcagc tgcggacgct ggcacccgag ctctacctct acaagtgtgg gctcagcgce agcctgcagt acctctacct gcaggacaac gtggacctgg tcaacctcag ccacctgttt cegggcacct tccggggcct ggtgaacctg cagtgggtcc accacaaggc attccacgac aacaacagcc tctcggagct gcagggtgag ctccgcctca acggcaaecc ctgggactgt ctgcagaggt tccggggctc cagctccget ggecaggacc tgaagctgct gagggccgag ccgcaccaga tcaagtcaea eaegctcacc cactcacccc acggccccac caggagcaag aggaagccgg ggaagaactg caccaacccc gccgggaaac aggcccccga gctgccagac tttgacatca tgcctacggc ccggcccaag atccgtgccc ceagcggggt gcagcaggcc ctggcctgga cactggggct ggcggtcact ttcctgcaga acaaccgcat cggcctcctc 60 accctgtgga tctactcgaa caacatcacc 120 gtgcacctgg aggagctgga ectcggcgac 180 accttccagg gcctggtgaa gcttcacgcc 240 ttgccggccg gcgtctttgg cggcctgcac 300 cacatcgagt acctccagga cgacatcttc 360 ctccacggca acaagetgtg gagtctgggc 420 gaccgtcttt tgctgcacga gaaccagctg 480 ctccgcaggc tgaceaccct cttcctcttc 540 tgcctggccc cgctgggggc cctggagttc 600 ggttgtcgcg egcgctccct gtgggaatgg 660 gtcccctgtg tgtccçctgg gctgcggcac 720 gacttccgga actgcacggg accagcgtcc 780 accaccgaca gggccgcccg eaaggaaeac 840 ggccaccegc acggcccccg gcccggccac 900 aggaaccgca atcagatctc taaggcgggc 960 tatgccccag actaccagca caagttcagt 1020 aggaagggca agtgtgcccg caggaccccc 1080 tcctcggcca gttccctggg ggcctccctc 1140 ctccgc 1176 188

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

<210 > 14 <211> 392 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 Ο Ο > 14

Glu Gly Ile Pro Vai Asp Set Glu Arg Vai Phe Leu Gin Asn Asn Arg 1 5 10 15

Ile Gly Leu Leu Gin Pro Gly His Phe Ser Pro Ala Met Vai Thr Leu 20 25 30

Trp He Tyr Ser Asn Asn Ile Thr Tyr Ile His Pro Ser Thr Phe Glu 35 40 45

Gly Phe Vai His Leu Glu Glu Leu Asp Leu Gly Asp Asn Arg Gin Leu 50 55 60

Arg Thr Leu Ala Pro Glu Thr Phe Gin Gly Leu Vai Lys Leu His Ala 65 70 75 80

Leu Tyr Leu Tyr Lys Cys Gly Leu Ser Ala Leu Pro Ala Gly Vai Phe 85 90 95

Gly Gly Leu His Ser Leu Gin Tyr Leu Tyr Leu Gin Asp Asn His Ile 100 105 110

Glu Tyr Leu Gin Asp Asp Ile Phe Vai Asp Leu Vai Asn Leu Ser His 115 120 125

Leu Phe Leu His Gly Asn Lys Leu Trp Ser Leu Gly Pro Gly Thr Phe 130 135 140

Arg Gly Leu Vai Asn Leu Asp Arg Leu Leu Leu His Glu Asn Gin Leu 145 150 155 160

Gin Trp Val His His Lys Ala Phe His Asp Leu Arg Arg Leu Thr Thr 165 170 175

Leu Phe Leu Phe Asn Asn Ser Leu Ser Glu Leu Gin Gly Glu Cys Leu 180 185 190

Ala Pro Leu Gly Ala Leu Glu Phe Leu Arg Leu Asn Gly Asn Pro Trp 195 200 205 189

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT

Asp Cys Gly Cys Arg Ala Arg Ser Leu Trp Glu Trp Leu Gin Arg Phe 210 215 220

Arg Gly Ser Ser Ser Ala Vai Pro Cys Vai Ser Pro Gly Leu Arg His 225 230 235 240

Gly Gin Asp Leu Lys Leu Leu Arg Ala Glu Asp Phe Arg Asn Cys Thr 245 250 255

Gly Pro Ala Ser Pro His Gin Ile Lys Ser His Thr Leu Thr Thr Thr 260 265 270

Asp Arg Ala Ala Arg Lys Glu His His Ser Pro His Gly Pro Thr Arg 275 280 285

Ser Lys Gly His Pro His Gly Pro Arg Pro Gly His Arg Lys Pro Gly 290 295 300

Lys Asn Cys Thr Asn Pro Arg Asn Arg Asn Gin Ile Ser Lys Ala Gly 305 310 315 320

Ala Gly Lys Gin Ala Pro Glu Leu Pro Asp Tyr Ala Pro Asp Tyr Gin 325 330 335

His Lys Phe Ser Phe Asp Ile Met Pro Thr Ala Arg Pro Lys Arg Lys 340 345 350

Gly Lys Cys Ala Arg Arg Thr Pro Ile Arg Alá Pro Ser Gly Vai Gin 355 360 365

Gin Ala Ser Ser Ala Ser Ser Leu Gly Ala Ser Leu Leu Ala Trp Thr 370 375 380

Leu Gly Leu Ala Vai Thr Leu Arg 385 390

<210> 15 <211> 143899 <212> ADN <213> Homo sapiens <220> <221> modified_base <222> (2044)..(2144) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (6609) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (6625)..(6729) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (14153)..(14252) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (19512)..(19611) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida 190

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <221> modif ied_ Joase <222> (22595).. . (22694) <223> d-f t / Cf g, outra ou desconhecida <220> <221> modif ied_ Joase <222> (27825).. . (27924) <223> cif t / Cf g, outra ou desconhecida <220> <221> modif ied_ _base <222> (34953).. .(35052) <223> cif t / Cf g, outra ou desconhecida <220> <221> modif ied_ _base <222> (40783) . . .(40882) <223> cif t / Cf g, outra ou desconhecida <220> <221> modif ied_ _base <222> (49000).. . (49099) <223> cif t f Cf g, outra ou desconhecida <220> <221> modif ied_ Joase <222> (62884).. .(62983) <223> 5.f t r Cf g, outra ou desconhecida <220> <221> modif ied_ Joase <222> (75528) . . .(75627) <223> 3-r t, C, g, outra ou desconhecida <220> <221> modif ied_ Joase <222> (87944)., .(88043) <223> 3-r t f Cf g, outra ou desconhecida <220> <221> modif ied_ Joase <222> (111030). ..(111129) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <400> 15 cttagcccct 60 ataacaaaag 120 aatcttaggt 180 ccatgggaac 240 ctaagctggt 300 tgtgagcatg 360 ctaggccgtt 420 gcaggaagaa 480 tctacaccca 540 acggttcgga 600 agagtgagtg 660 cagtgagcac 720 tgatgtaggt 780 gggaagttca 840 caaaatgggg 900 aagcacatac aggtgacatt acagaactga cagttatgcc aggcactgta ataccatcct caaacagctg tatgatgtag attgggtatt aaecceatta tacagggaac aaagtgactt tccaaaggtc atgccattca aaggagggtg tggacgcagg ctgtctgact ctggagtctg aggtgttaat gctgcctcct agcccaagtg aaaaacagct gatccactct tcatttactt ggcatctgtg ccctgagcca agctctgagc aacagaaaca gaagctctgc attaggagct tcaatgccgg gtaaaggagt gctggaaacc gctgggatgg ccgccgagea gaaggtgggc tctgtgtgac tggttcctct acactctggc ctggctgcct gatcaagctg agtgggctgg ccctggacca caaggtgaca ggtgacctct tgtgaccacc atgggccaga ggctcagcca gaaggccccc agcctggagg tgccttcatg tcaccccagg atgttcgggg cacctcagaa aaccttcctg tctggtcaag gtgccggcct tgggggatag tgatggtggg tcctcatatt tcatggttga gtatttattc gcacccctct tcagtcctta caacacccca ggggcatgct cctcatttac agatgggcac atcaaagctc agctaacgct gattcagggt taccctgctg gattcctggg attggggagg gaggagcttc 191

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT acaaggtctc tgggcctgtc gggtagctgg tttcctcagg gccccttgca acctctgagc 960 ttattgcatc aggtgcagcc aggcccgtga gcctcctggc aggggtcctc cacacctggc 1020 tgtcttttgc cccctgctgg tcacaggagg agctgcagca cctgcctggg ctgcttctca 1080 ggagggtaca tgaagatccc aggaccgcca gctccatgat aagtggaagg agctccttgg 1140 agtcaggagc gggagttgag gagtttgagt cctgctctcc agttataggc tatgtgactt 1200 gtgtagatca cctaaccttg ctcttgattt ccttacctct taaactagca ctaaaagcac 1260 cccacaaact gtaaagttag ttgtgatgat tgaatgacac catgggtgtg gaagctcttt 1320 gtaaagtgca aaacggtgtg cagtttgagg gtggttaccc ccagtgccga ttctcagagg 1380 gcaacatggc taagggcacg agctggagtt aggctgacct gctgcttcca gccctgtgag 1440 cttgagcaag tcatttaact tcctgagctg cagtttcctc atcagçaaáa tgtgataagg 1500 atagggttgt tgtaagatct tattaaatgg ggtaataaat gtcaagtãtg tâgeeeãtag 1560 tgagtgcttc agagtttttt tcttttgttt ctttcccccc cgccccgaga tggagcctta 1620 ctctgttgcc caggctggag tgcagtggca tgatcttggc tcactgcaac ctccgcctcc 1680 cgggttcaag caattctcct gcctcagcct cccaaatagc tgggactaca ggcgtgcacc 1740 accatgctcg gctaattttt gtatctttag tagagacggg gtttcaccat gttggccagg 1800 ctggtctcga actcctgacc tcatgatgct cctgcctcag cccccgaaag ttttgggatt 1860 acaagtgtga gcccccgtgc cctgccaggt tttttttttt tttttttttt tgtaaaacac 1920 - ccacagggta ttgctgttge ctgggctgga gtgcggtagt gcaatcatag ttcactgcag 1980 ccttgacctc ctgggctcaa gtgatcctcc tgcctcagcc tcctgagtag ctgggaatac 2040 aggnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 2100 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnttttgta ttttaagtag 2160 agacagggtt ttcccaatgt tggccaaggc tggtctaaaa ctcccaacct caggtgatcc 2220 acccacctca gcctcccaaa gtactgggat tacaggcgtg agacaccgtg cccagccagg 2280 aggcttattt tcttgataaa ttacccagtc tcaggtattt ctctacagcg atgcaagaac 2340 agcctaatac atccaggctc agcatcagtg gacccaggtg ggagagctta agatgtcaag 2400 gtctgaatgc cgcttccaca cacctttggg acctagggac tccctctctt tttctttttt 2460 cagtagaaga tgttatcttc tcctttctct gaccagtagt tggtgatggt ttcagagata 2520 gtttttcagt caagatatat ttcagtggct tcactgagcc caagttccct cgcctctcta 2580 ggactttatt tccttgtttc tagaagaggg ataacacata ttttctaagg tggttgtgag 2640 attaagggag ctggtaccgg gtggtgcata aggacaggat agagcaatgg tgagaccact 2700 caaaaagcga aaagCtgacc tgcgagggtg acacttatca aatcagcaca cagtgggagt 2760 ggaaggaatg tccctcatca gttacaatat ttggagagtg caagttatag aaaacccagc 2820 cctggccggg cgcggtgggt catgcetata atcccagcac tttgggaggc tgaggcaggt 2880 ggatcacgag gtcaggagtt caagaccagc ctgaccaacg tggtgaaacc ccacctctac 2940 taaaaataca aaattagctg ggcgtggtgg tgtgtgcctg taatctgagc tactcaggag 3000 gctgaggcac gagaatcact tgaaaccggg aggtggagtt tgcagtgagc cgagatcgca 3060 ccactgcact ccagcctggg caacagagcg agactccatc tcaaacgaaa aaaaaaaaag 3120 aaagaaaacc cagetctaac tggcttaaac agtaagaaga tctattatat tatccatctc 3180 aggcagcagc aagcccagag gtaggggact ccaaggttgg ttgatccagg gcttaacgat 3240 gtcatcaaag acccaggttc tttctgtctc ggcacctctg tctgcagggc cagcttcatc 3300 ctaagccaga ttgttcttgt cttgattaca agttggctgc tgggccagca gacgctgcct 3360 gcctccctgt tcatcttcag aagtagaaag tggcccttcc ccagtcatgg aatgaaagag 3420 tttcctttct gtctgggatt gcttaggtcc acccacctga agccaatgac tgtcaccagg 3480 aaggtaatat acactgattg tcttaagtca gggttccfcga gccagtcttg ggcaaggagt 3540 gtgatactgt catgattgtc ttgggctcat cagggcagct ctgcagatga gatcaaactc 3600 caagctacat tattctgaac agtgggaagt aggaaagaga cattttggga gatacaaaac 3660 acaatgtcta tcccatatcc ctaggtccag gtcacagtgt cttggttgga catcaaatgt 3720 agaaaaagaa agactgtcca tccatttatc tacctattca tctggttttt gatttttttt 3780 aaattttatt ttaagacatt ctcactctgt cacccagact ggagtgcagt ggCttgatca 3840 tggctcatgg cagcctcaac ctcecaggct caagtgaccc tcccatgcte aagtgatcct 3900 cctacctcag cctcccaagt agctagaact aaaggtgcat gccaccacgc tcagttaatt 3960 tttgcatttt ttgtagagat ggggtttcgt catgatgccc atgctagtct ggaattcctg 4020 aactcaagca atatgcctgc ctttgcctcc caaaatgctg ggattgtagg catgagccac 4080 tgctcctggc tcatctgttt aataatttat gaaacaacta ctgggtgctg agcacggggc 4140 caggggctgg agatctagca gggaccaggc agatctctgc gaagtcgttg gtttcttaaa 4200 ggttttgctc ataattcccc ttttcttttc tetttcgttt tttttctttt ctttctttct 4260 ttctttcttt tttttttttt gagacagagt ctcactctgt tacccaggct ggagtgcagt 4320 ggtgcgatct cagctcactg caacctctgc ctcctgggtt caagcgattc tcctgcctca 4380 gcctcccgag tagctgggac tacaggcgcc tgccaccatg cccggctaat ttttgtgttt 4440 ttagtagaga ctgggtttca ccatattggc caggctggtc ttgaactcct gaccttgtga 4500 tccgcccgct tcggcctccc acagtgctgg gattacaggc gtgagccacg gcgcccagcc 4560 agtttccctt ttcaatgagg cctccctgac ctccatactc tactcctcca cctggcccac 4620 teagctctac tttttcttcc ccatagcact caagacctcc taacatacta cgtaagttat 4680 ttatttacta ggcttactgt gtattgtctg tcttcctcta ctagaatgta aactccatga 4740 192 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gaatagaaat ttttgccttt ttatttagtg tggtgtctgc agcccctggc ttagtccctg 4800 gcatacaaca gtcactccac ccacagttgc tgaataagtg actaaaggtc cctgccctca 4860 tattgttatg agggagtgtg catgttgtta gagaaaaatc tgaggcacaa taaaatttta 4920 tagagtttaa gttttctttt ttaagcaatc cacgaattgg ggtagtttca. gaggtagttt 4980 ttcagtcatg acgtatttca atggcttcac tgagcccaag ttctttcaec tctctaggac 5040 tttatttcct tatttctaga acggggataa caeatagttc ataaggcagt tatgagagta 5100 agggagctgg tatggggtga tgcataagga caggatagag cagtggtgag accgctcaga 5160 tgacaaagcg tcagagacca gtatttacga cggaaatgtg gaagcatgat aaagaaatta 5220 tttgggctgg gcacaatgac tcacaactaa taaaactttg ggaggccaag gtgggaggat 5280 cacttgactt gcagaaggtc aaggctgcag tgagctgtga ttttgçcact gcactccagc 5340 ctggtcaaca gagtgagacc ctggctcgaa acgttatttg attggttaca gttatacagt 5400 tgccttattt ggtctattcc atttgaaagt tcctagttct ataattttaa gtttgttggc 5460 tgtttctgat tggttaagct taagttttgt tttcctttaa tacagttaag tgccccataa 5520 tgacattttg gtcaaggaca gaccacatat acagtggtgg tcccataaga ttataatgga 5580 gctgaaacat tcctattgtc tatggcgtag tggtcctgat gttgtagcgc aatgcattag 5640 ttatatgttt gtggcaatgc tggtgtaaac acacctactg cactgccagt gatataaaag 5700 aatagcacat acagttatat atagtacata atatctgata atgataatac ataactatat 5760 tactggttta tatatttact atattattta tctttatttt atttttgaga c&gagtctca 5820 ttctgtcacc caggctggag tgcagtggcg egatcttggc tcaccgcaac ctccgcttcc 5880 tgggttcaag tgattctcct gcctcagtct cctgagtagc tgggattaca ggtgtgcacc 5940 atgacaccct gctaatatgt tttgtatttt tagtagagat ggggtttcac catgttggcc 6000 aggctggtct tgaactactg acctcaagtg atcaccccgc ctcggcttcc caaagtgctg 6060 ggattacagg cgtgagccac cacgcatggc ctatttataa ttattttaga gtgtacgcct 6120 tatacttata aaaaaaagct aactgtcaaa cagcctcggg caggtccttc aacagatatt 6180 ccagaagaca ttgttatcat aggagatgac agctccgtgc atattattgt ccctgaaaac 6240 cttctagtgt ggaagtggaa gacagtgata ttgatgatag gacccagtgt aggcctaggc 6300 taatgtgtgt gtttgtgtct ttgcttttaa caagaaagtt- taaaaagtta aaataaaata 6360 caaaaatttt taaatagaaa aaagctgccc aggaacaatg gctcacacct gtaatcccac 6420 cattcgggga ggccaaggtg ggtggattgc ttgagctcag gagttcaaga ccagcctggg 6480 caacatggtg aaaccccatc tctacaaaaa atacaaaaat tagccgggtg tggtggcatg 6540 cggctatagt tccagctaat cgaggggctg aggtgggagg atcactgggg gggaggtggt 6600 tgaggctgna gtgagctgtg attgnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn rmnnnnnimn 6660 nnnnnmmnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 6720 nnnnatattc ttaaaaaaat ttttttttat ttttgagaca gaatttctct cttgttgccc 6780 aggctggagt gcaatggcgc tatctcagct cagggcaacc tccacctcet gggttcaagc 6840 gattctcctg ccttagcctc ccaggtacag gcgcccgcca ccatgctcgg ctaatttttg 6900 tatttttagt agagatgggg tttcaccatg ttgtccaggc tggtcttgaa atcctgcctc 6960 aggtgatcca cccccctcgg cctcccaaag tgctggaatt tacaggcgtg agccactgtg 7020 cctggcctcc tttacatttt tttaaattta attttaattt tttaattttt aatttctcat 7080 atatatatat ttttaagact agccaagtga agcagtggga gtggaaaagg aactggtttt 7140 gatcaatagg tgtaaacacc actgcactgg gaccagccta ttttacattc ctgttagcag 7200 tgatgagggt tcactttctt tgtagcctca acaatatgtg tcgttgccca tctttttttt 7260 ttttcttttt tttttttttg agatggagtc tcactctgtt gcctaggctg gaatgcaatg 7320 gcatgatctc agctcactgc aacctccgcc tcccaggttc aagtgattct tgtgtctcag 7380 cctcctgagt agatgggatt acaggcgtcc accaccacgc ccggctaatt ttttgtattt 7440 tcagtagaga tggggtttca ccatgttggc caggttggtt tcgaactcct gacctcaagt 7500 gatccgccca cctcggcctc ccaaagtgct gggattacag gcatgagcca ccgcgcccgg 7560 cctgcccatc ttttttttgt tatagccatc ctagtggatg taaagttttt ttgtgatttt 7620 gatttgtgtt tccctactga tcaatgatgt tgagcatctt ttcctgtgct tafctggcttt 7680 tggtatatct ttggagaaag gtctattcag gtcctttgcc cactttaaaa ttaggttatc 7740 tttctattac tgagatgtaa gagttcttta tgttctagat ataagtctcc tacatatgat 7800 ttgtaaaaat tttccttcca ttattgggtt gtctttcact ttcttttggt gtcctttagt 7860 gcacaacagt ttttaatatt gaagtccaat tttctatttt tctcttttgc cacttgtatc 7920 ttggtgtcat gtttaaggaa ctattgccta atctcaggtc acaaagabtt acacctgtgt: 7980 ttocttcttt ccttccttcc ttccttcctt ccttctttcc ctccctccct ctctccctcc · 8040 otccctctct ccctccctcc ctccttccct tcotccctcc ctccctcctt ccttccttcc 8100 ttccttcctt ccttccttcc ttccttcctt ccttcctttg tccttctgec ggaatcttgc 8160 tctgtcaccc aggctggagt gtagtggcac gatcttggct cactgcaacc tctgcctcct 8220 gggttcaagc aattctcctg cctcagcctc ctgagtagct gggactacag gcacacacca 8280 ccatgcccag ctaatttttg tatttttagt agagacgggg tttcaccaca ttggccagga 8340 tggtttcgat ctcctgacct egtgatccac ccgccttggc ctcccaaagt gctgggattg 8400 caggtgtgag ccaccatgcc cggcctgtgt tttcttagag ttttgtagtt ttagctctta 8460 tagttagatc cttgatccat tttgagttga ttttgtatat agtgtgagat atccacctgg 8520 tgttgtaaat tgcccagaag tgggtatgct tctaaatctg gctgttaggg attactagag 8580 193 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gtgaccaaag tgaatttttt ctttgtttct tttttttttt ggagacagag tctccgtcac 8640 ccaggctgga gtgcaatggc ttcatcttgg ctcagtgcaa cctctgcctt ctggtttcaa 8700 gcagttctcc tgcctcagac tcctgagtag ctggtattac aggcgtgtac caccatgctt 8760 ggctaatttt tgtattttta gtaaagatgc agtttcaect gttggccagg cttttctgga 8820 actcceggcc tcaagtgatc catctgccte tacctcccaa agtgctggga ttacaggtgg 8880 gagccaccgt gcccagtcct tttctcagaa tttatttgtt tttttttgtt ttgtttcatt 8940 tttgagatag ggtctcactc tgtcagctag gcaggagttc agtggtgtga tcattgctgc 9000 agccttgaac ttctggactc acgtgatctt cccacctcag cctcctgagt agctaggatt 9060 acaggcatgt gcttccacac ctggctaatt ttttaatttt ctaggactta tttgtccatt 9120 cttgcaaagc agggtacaac atgcctatct ctacctacct ctcttccctt caagggactc 9180 cagccaaaat ccttgaggct ctcgggctga ctgtgggtgc tgttgcctga tctgcctcag 9240 tcatgctgca tgatcaaaag tgtccgtttt ctgcttcCtg gaactttatt cactttgggt 9300 gtcagtcttc ctctgcagtg tcccaagaac acagaattag accaggaatc tgtgttgcca 9360 tagtgtgtgg aaagaggcag acttccaact ccgctatgtg ctgttgggtg attgaagctt 9420 aattttcttt ctatctttct ttcttttctt ttcttttttt ttttttggag atggaatctc 9480 gctctgttgc ccaggctgga gtgcagtggt gcgatctcac ctcactgcaa cctccgcctc 9540 ccaggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcctgagtag ctgggattac aggtgcatgc 9600 caccatgccc ggctaatttg tgtaatttta gtagaaacag tgtttcacca tattggtcag 9660 gctggtctcg acctcctcac ctcaggtgat ccacccgcct tggcctccca aagtgtcggg 9720 attacaggcg tgagccaccg tgcctggcac ttaattttct taatacctca attaccccat 9780 atggtaaaat gggactagta atccatacct tatagcgctg ttgtgaaaat gaaatgaggg 9840 taagcagata aaatttcaga ctacggatgg gattgttact acattctgaa cctggctttg 9900 ctgttatttg ctatgtgacc ttatcttctc tggatctcca ttctttccaa gtctataaaa 9960 caaagtggac aattgtcaac ctttcttcca aagagcaatg atttaaggat caaatgatgt 10020 catttaacaa aaatatgaag agctcaacaa atgaggaact cattattatt attacaatta 10080 ttattatttt agaaataggg tcttgttctc ttgcctaggc tggagtccag tggtataaac 10140 acagctcaat gcatcttcag cctcctggat aeaagtgatc ctcatgtctc atccccctaa 10200 gtagctggga ccacaggcat gtaccaccac gcacggctaã ttttttattt tttattttta 10260 ttttttgaga cagtcttgct ttgtcgccea gactggagtg cagcagcgca atcaccgctc 10320 actgcaacct ccgcctcctg ggttcaagtg attctgctgc ctcaacctcc caagtagctg 10380 ggattacagg cctgtgccac catgcccggc taattttttt gtatttttgg taaagacggg 10440 gtttcaccat gttgcccagg ctgatctaga acccctggcc tcaagtgatc cccctttctt 10500 ggcctcctaa agtgctagga ttacaggcgt gagcctctgc acctggcctc ggctaatttt 10560 ttattttttg tagagacagg ttctcactat gttgccaggg ctggtcttga actcctgggc 10620 tcaagtgatc ttcccacctc agcctcccaa agtgctgaga ttacagatgt gagccactgt 10680 gcctggcctg gaactcatta ttgaagcatt cactagtatc aactttgggg ttacctggcc 10740 acatcctctg acctacctat aagggtatca cagctaacgg agcctctgtt tctcagaatt 10800 taggcagaag cagttcaatt tatcacaaac tactctatat ccagcataag tgcccaaata 10860 aaacaattgc taaagttctt taggcattta ctgtttgtta gttagatatt tagtcctcac 10920 tacaaatetg tgatacaggt attattttta ttaaccccat tttatagaag agaaacctga 10980 agctcagaga tgctaagtaa cttgtgcaag gtcacacagc tagtaaataa agggcagagt 11040 aaagatttag tttcacattg gactccagaa cctttctact gggactcatg ggaatagtgt 11100 ggatgtccct gaccttcagt ggcccagggc tctcctgggg gaatccagcc atagacaaga 11160 caccagcgag agcecaatcc taagattttg tttgtttgtt tttgagacaa ggtctcactc 11220 tgtcaccaga ctggagtgca gtggcatgat caatgctcac tgcaaccttg atctcccagg 11280 ctcaagcaat cctcccacct cagcctcctg agtagcttgg actacaggtg cacaccacca 11340 cacctgacta attttaaaat tttatttaat taattactta ctattatttt ttgagacagg 11400 gtatcacttt gtcacccaag ctggactgca atggtgtggt ctcagctcat tgcgtcctcc 11460 acctcccagg ttcaagtgat cctcccacct cagcctctgg agttgcaggg actgcaggtg 11520 tgcgccacta tgctcagcta atgtttttat tttttgtata gatggggtct cactatgttg 11580 ccagggctag tctcaaactc ttggactcaa gcgatcctcc tgtcttggcc tcccaaagtg 11640 ccgggattac aggcataaac caccacaccc aacccctaag gtgtttttgc tgaatgtgac 11700 catgtcagag gcaggaaagg gaagcatcat ggggttagga aaggaacact gagcagggag 11760 acaaagaaaa tgggatcatt ttgtgagtgt tcgctgtgtg tgtatgtgtg acaattctca 11820 gagccagcct ctcaggtggt tgagaccaca gtccecattt cccagatgag ataatggagc 11880 ctcagagagt ttctgcagca cagctagtgg aattagaatt tgaacccggc tcttccagac 11940 tccaggtgct tcacaaccat cccaaaccta gtcatttgca gtttaccttc atgattttac 12000 catttccctt tgccatagct agtgttattt acttaataat tccttttgaa tcagtctgct 12060 taaaaaaaaa tagcttcatt ctaaagtgta atattcttgg aatatcgggt ttgctgttac 12120 ccacccccac acgttataca tatacatgta tgtttctaat acatatatat gtacgtatat 12180 acgtgtatcg ttttttgtta ttttttttgt tgttgttagt tttttttaga tggagtctct 12240 etctgtagcc caggctggag tgcagtggtg tgatttcggc tcactggaac ctctgcctcc 12300 tgggttcaag cgattctcct gcctcagcct ctggagtagc tgggattaca ggcacccacc 12360 actacacccg gctaatgttt gtatttttag tagagacagg gtttcaccat gttggccagg 12420 194ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tgggtcttga actcctgatc ttataggtgo gagctactgc aataactatg aaacctgaaa acatgctgtg cataccacat aatcactgtc ccatcctatg atgccaaaga ccttttctgt ttgggctggc tctcctttta aagccttcct tatgaatgaa gaatgaatgt atgaattgac gtggaagagc acatgtcctt tggcccatgt aacacagagg cttgagtttg aatctgagcc ggacccttac catttataaa attaaatggg attetctata tgggattgtt tgtgagggaa gtctaattca gggactgcaa ggtaaagcag ggcaggtgta gtatgacctt gagaaggcaa tgcctagatc ttctaacttt tcacccaggc tggagtgcag tcacgccatt ctcctgcctc gcccggctaa tttttttttt atggtctcga tctcctgact acaggcttga gccaccgcac tggattttta tgtgataact ataagggtca acattgccag gtgcagcctc tggtctaaaa acagtgctgt tgtatagtaa ataaacctgt agagaggccg nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gggtagatca cctgaggtca ctctacaaaa ataaaaaaat cgggaggctg aggccggaga atcatgccat tgcactccag aaaaaaaaag aaaaaagaaa attggttcct gagagtagcc cctggcttgg gccaatgaaC tccaccacta gggaggtetc tggccagtcc tcctacagtc atagtgatca aggccgttac catttgtggg tcttttggaa gggctgcctg tccctgctcc ctgtactttt tttttttttt tgccgtggcg tgatctctgc acctcagtct cctgagtagc gtatttttag tagagacagg tcaggtgatc cacccgcaca gcccggtcct accaatctgc ggcatagttc tgagaagcat agctcttggc agagacatct gtgcagcaaa ttttgtctag atttcaattt ttaagaaatg agtgtcccct taatttctta cagaccctgg ggtgacagaa ggagaggatg atctacagag ttgccagccc tgaagctatg cctcaactgg ggccattttt atcatctgcg ggggtgggga cattaaactt tctacaacgc catattaata gcacaaagtt gtagattttt cacacattaa ggctgtggca ggaggattac agcactgcac eccagcctgg tcaagtgatc cacctgcttt ggctggccaa tgtatgtttt aactgctcca tgttacttcc attgggaaac actgetttcc cttcgcttta tttgtctata tgtcattaac atggacacag gttcagaatt tggattttta ctcgttggtc aaactcataa actaagtcat tagcatttca tctggcactg atgtgtgctt ccctttggtg cagtggaaaa tgcctgtaag aagctggcta atggggacca ttgtactcac gaaaatattg gcacaaagta attgtcattt gattatcaaa atggaaatgc cagctgaggc gaatagcaat gtctgggaat gccctggcaa aaggggatgg ttatttttat ttttattttt tggcgcgatc tcggctcact agcctcccaa gtagctggga gtatttttag tagagatggg ttgtgattta ccctccttgg ctggccgatc ttctaacttt cctgatttta aactggcacc cagagcaaaa catgggtggg tcatctttgt atttcttctt· atatccagta agtgggtgtá ggcacagttg ctcatgtctg nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nntagtccca ggagttcaag accagcctgg tatctgggca tgattgcagg attgcttgaa cctgggaggc cctaggtgac ggagcaagat agaaaaagaa acaatgaatg aaccttattg gtcatcceag gaggaagaat aatggcaaat aagcttgaaa tccagtgacc aagtagataa gtggagggtt tctgcaatca gactcagaaa gagcagagaa gaggaaggaa ctgagccatg gagggctggg ttttttgaga cagagtctcg tcacagcagc atctgcctcc tgggattaca ggtgcccacc gtttcactgt gttgggcagg tgcctcccaa agtgctggaa acattttaat tgacaagggt cccacaagga tgcctctgag ggcaaattca aggcttgaga agcttggtca gttaaaattt ttgcattaaa atgttattta gtgtgtctga gttgagagcc gactggtggg agatgggagg tgctggagag actctgtatg ccttgaggtt gggcaaggtg ctccccagag gacatttgga gaggggctac tgacatctgg ccaggacagc ccctccacaa gaggaacctt gatctagatc agatgagaaa gcttgtgcct ttgagcccag gaattcaggg gtgacagagc aagattttgt ggcttcccaa agtgctggga taatacacat tcaaataacg tgaacccatc ttgagtgctc ctggcttcca agcccagctt aatgttgggg ttgggggttg ctctaagagg tcttggcatc tccaactact cagagtgatc aaggctgatc gataaaacag cgggaatgga ttctccgtta gggaaactta ctgagctaac ctgttgactt tggagattat actgaattgc tttgcttctt cctttagggt tattgcatgg ggtgtaaatt tgcacgctag gacttaggag caggaacagt caggcatttg ctaataattg taaaagagag gtgaggacgt cctccactca gctacagtca tgagacggag tcttgctctg gcaagctccg cctcccgggt ctacgggcgc ccaccaccat gtttcaccgt gttagccagg cctcccaaag tgctgggatt ttaaagagaa gcaagacatc caattataat ttacaacact ggcaactgct ggtcaccggt gctttacgca ttgtcccagc gaatgaataa accaatgcag taatctcagc acnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gcactttggg aggccaaggt ccaatatagt gaaaccccgt tgcctctaat cccagctact ggaggttgta gtgagccgag tctgtctcaa aaaaaaaaaa agtgtgaggc tcatggtagt ceacgaagtg aaatggtacc gggggtctat gcctccaccc aggtttttag gtcctggacc tggtccgttg ggctacggag tggcctctca gttacttctc tttaggtctt ctcaccctct gtggaatatg gggaataaat ctccgtcgcc caggctggag cgggttcaag ttattcttcc accacgcccg gctaattttt ctggtctcaa atacctgacc ttacaggcat gagccaccgt caccctccac tcatgtgcca ttcacectga caagtccact catgctggcc tctctttaaa tgatgttttg ttttgcatta tcttgaatag taaatttctt tcccctgcct gattctagtc tgaggagggg agtgttggtt gagcttttca tgctgcctgt gcatatccta gatcagagat aacatgtgga gacatttttg tgagtagaga ccagagggac taaagagtta tttgacctca cacagcacag aagaaaggat gtaatccctg tgactcagga ttacagtgaa ctatcatcgc ctcttaaaaa aaaaaaagat 12480 12540 12600 12660 12720 12780 12840 12900 12960 13020 13080 13140 13200 13260 13320 13380 13440 13500 13560 13620 13680 13740 13800 13860 13920 13980 14040 14100 14160 14220 14280 14340 14400 14460 14520 14580 14640 14700 14760 14820 14880 14940 15000 15060 15120 15180 15240 15300 15360 15420 15480 15540 15600 15660 15720 15780 15840 15900 1596016020 16080 16140 16200 16260 195

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gaggacaggc acagtggctc atgcctgtaa tcccagcatt ttgggaggcc gaagtgggtg 16320 gatcacgagg tcaggagttc aagaccagcc tggccagcat agtgaaaccc catctctact 163B0 aaaaatacaa aaaattagcc agctacttgg gaggctgagg caggagaagc gcttgaaccc 16440 gggaggtgga gcttgcagtg agccaaaatc ttgccattgc actccagcct gggcgacaga 16500 gcaagactcc gtctcaaaaa gaaaaaaaaa aaagatgaga aagaggaagg gagagaaaaa 16560 agagagagag gaaagaaaga gagaaggttt tggagtcaaa aagacttaga aattccagtt 16620 cttccacttc ccatggaacc ttggcaagtt gccttctctc tttctctgaa tctcacattt 16680 tgcctctgtg aagtaggggt ggtacctggt ggagatgatg oggagatgag ggtgaggggt 16740 gtgttgcaca ctatgcccct aggatgggtg agagcttggg agcactgaac ctccctttcc 16800 cctcttgttt cttcccccca ttgteteeea ccagcfcçcct gggatctcca cttcactctc 16860 tgggattcca ccagcaggag gctactcctg gagttaaggc gtgttgttca gactggggca 16920 ttttaggggg cataaataat aattatgcct ggacaatgga cataacatct agggccttct 16980 gaagcaaacc agggtgtggg gtacccaaac aaggcagtag gccccaggag gcaggtccct 17040 gcagtcccag cagagagcag ggcacagggt tgagaagact gagcaaactt cattatcagc 17100 tcctttgtcc cccactctgt cctggagcaa tcattctggc ctcttcccac ttccccaaaa 17160 acccagtata aaggctgctt ctggcccctg aagccagagg cactgagagt ggaggtctca 17220 gactcttgga aggtgagttc ttttctggct gcccaggcag gaccagtgta ggccctggga 17280 agaagcagca cctcataggg caaacacgta ggaggcctgt ccttaggaac atcatagcta 17340 agcagacctg tccccgcagg ggcaggagtc tgggctaagg gtgatactgg agagcagcaa 17400 cggagactgg aagacaaatg aaatttggta cctgagttat ccctcccacc attccttttc 17460 tagactctcc agctcagggt ctgttcatgg caagaggaga aagcaatctt gtttgctctt 17520 taatcaaaca attaaacaaa tattccctct atactatgtg ccaggggcta tactagacac 17580 acaaagacag ccccaagaag gacggtggag tagtgtcctc gctaaaagac agtagatatg 17640 caatgcctct tgctcctgcc ctttctcctg ctgggaacag tttctgctct tcatctgggt 17700 aagtctctcc cttccctcct catgcgtctt tccctttttt cctttttcct acactcccct 17760 ccccccgctt ttatttgcac tcatgaggcc aggaccacag ccttccctct ttagctgata 17B20 cagctcatct ccggtaagat atcaottgga ctcagaactgtaacctggaa ctttctcttt 17B80 tttgtttgat ttttttttgt tgttgttgtt tttgtttttt tttttgtttg ttttttgttt 17940 tgttttgaga cggagtctcg ctctgttgcc caggctggag'tgcagtggcg cgatctcggc 18000 tcaccacaaa ctccgcctcc egggttcaag caattcttct gcctcagcct cctgagtagc 18060 tgggactaca ggcacatgcc accacgcctg gctaatcttt gtatttttag tagagatggg 18120 gtttcaccat atttgccagg ctggtctcaa actcctaacc ttgtgattcg cccgccccgg 18180 cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtga gccaccgcac ccggcaaact gtaacctgaa 18240 ctttcagaag gaaaaaccac ccacctgtta agatgaaggg ctggtgactg ccccaggctt 18300 ctcacacgtg ctttctccca ccttcaaaac acacactcgt ggtgtcggcc agaagtcagg 18360 ttcttgtcca tttgtgggtg tgacccgaga gatctctcct tacctaacac caaggaaatc 18420 ctccagtctt gtcttcaggt ggaattccta ggaaagctcg agcgacgttg ctggagctgt 18480 ccacggtgct ggaactagga agctcttgac ctgatggcag gttacctctt cttcccagag 18540 aatgatgccc cccatctgga gagcctagag acacaggcag acctaggcca ggatctggat 18600 agttcaaagg agcaggagag agacttggct ctgacggagg aggtgattca ggcagaggga 18660 gaggaggtca aggcttctgc ctgtcaagac aactttgagg atgaggaagc catggagtcg 18720 gacccagctg ccttagacaa ggacttccag tgccccaggg aagaagacat tgttgaagtg 18780 cagggaagtc caaggtgcaa gatctgccgc tacctattgg tgcggactcc taaaactttt 18840 gcagaagctc aggtaagtag tagggaggct actgcggagg acctggggga aaagagagta 18900 cattcagtct tctgttccct attcatttag gctagtggtt ctcaaagcct cgcatgcatc 18960 agaatcacct ggagttgttg ttaaaacaca gctttctggg cctcacctgc acgacttctg 19020 atttaggagg gctgaggtga agcctgagaa tttgcattta caacaaatcc ceaggtgatg 19080 atgatattgt tggtctgggg agaaccaccg atttaaacaa aaggctttgg tgttagaaac 19140 gcctgtgtta aattctggtt ctgcctttta ttagctgtgt tacctgggea agttgctttg 19200 cctttcaaag ctttagcacc ttcatttgta aaacgaagat atatagcacc aacttcttag 19260 agttgtggtg agcattaaat gagataatac atgaaaagtg tttggaatag tcactgggct 19320 gtaataaact ctcaataagc ggtggttata attattatga gtattatcat ttcctgtagg 19380 attgtcctga cagctaatta agaagcaaaa gataggatta agggaggcaa gtaggtttat 19440 ttttaacctg aaaagggatg ccgggctctt gcctggagac tcagaaactt gaaataaatg 19500 agagggaatt cnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nimnnnimnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 19560 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ngaattctct 19620 gttagcacat agccagaaca tctagaaggg gtggtaggag tggggattag aggttccagc 19680 tggaggcaat ggcacttgca aaggctttgt tgaagtggcg taagtgtgga ggtggagcat 19740 tcaggaaagg agagcttcag cttcagtgtg gctggagtgc tgggtgtgaa gagaggtgaa 19B00 gatgaggctt ggaggctggg cagattttgc tccaaaagag cttggtgaae tgtgataagg 19860 agtttggatt ttctcctact aaggacaaca gcaaactatt gaagagttta aatcgttcag 19920 tgacaatgac acgtttgcgt tttggtggot cactcgagct gccagocagg tagacagtgg 19980 cagaagatgg aagataaagc actaaagggt gatgaggcag gaagccagtg aggagagaaa 20040 ggggacgatg tgagtgacag taaatcattt gttgggttgc tattgtgtgc taagctctgt 20100

196 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gctaaattct caatcgttcc gcagcatgca ctgctctagg tcaacaatat gatccctatg aaaagggtat cagcactttg ggccaacatg cacgcctgta gcagaggtta accctgtctc taaactgcta aaagaattag taatcccagc cagcctgacc gtggtgcatg cgggaggcag agcaagaccc ctgcattcct acctcccatc tgtgtgcctt aaatgtcttg ggtattcatg tctaataaac gtgtaaagtc ctctctetca gcaagcatcc ggcagcctct tccttcccca agagaccctg tacatgtagt atacatatac cctacatcaa taggtaaaga gtgggaggac tctcaactaa gctcaggagg acggtcacaa aaaaaaaaaa tggaacttct gtttaaagct nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tgaactcctg tgtgcaccac tatatataaa ttttagagat tcctcctacc gagttatttt gagcctggag agtcacatag gtggaaggtc caagagcctc gcggatcatc ccaggagcat ctggctgagc aaggtggcag caacccgctt gtgggatgta gaaggggtga ccagttgggt cccctcattg ggcactgtcc tcacgtgtat cagctgaaga agttgtccag actgggggaa tgttggcctg agcaagtggg aagaaataac ggaggccgag gtaaaacccc atcccagcta cagtgaactg aaaaaaagaa gtcctcaggt gatgtcagct actttgggag aacatggcga cctttagttc gggttacagt tgcctcgaaa gctcggcaac actgatgtct ctgctctggg tggtaggcaa cctgtgtata agaacacagc tgtcttgttt ctttcttact atgttgtgag acccagcaag cttgagcttt agacagaaca tttaagctac catgtacata gaatgtgtca ggccaggcat tgcttgagcc aaaaaaaaaa ctgaggtggg aactgcactc aaaaggaaag attctagagg ccttcagcat nnnnnnnnnn nnnnattttt ggctcaagca catgcctggc tatatatata agggtcttgc tctgcctttc taccacacga gcaagtgaat ttagtgtcac tggggctcag tgctccccca ttctacatgg ggtgaggcac tcccctcacc agacaggtag ctcagggggc agagtctggg tagtgtccac tctactcctc gctacatcat tcggagatgc tatttcagct agctgaggct ccaggattct atggtcccta ctacatgtga atgggggtgg aattaggccg gagggtggat atctctacta cttgggsggc agattgcacc aacaaaacaa gcatttttgc tcttttgaaa gctgaggtgg aaccccgtat cagctactea gaaatgagat aaaagaaaaa agcctgatgg tccctcgctg tgcccagatg cctcaaagat atcctctccc aagggtaatg gtttccctct gtcttgtcct ctgacctatg gaactgagtc cagatgacgg ctcagctaag tatgttttgg actgtttcag ggcaccattc agggctcaea caggagttga aattagttgg aagatcgctt tagcctgagc aaagaaaaaa gggatggttt ctggggaaaannnnnnnnnn tagagatagg atcctcctgc ttatttcata atttctgtat tatgttgacc aaagtgttgg agcataggac ctgaactttc tccccccaag gggcgccccc cfettcctgtg ctgctgtgaacgctgaggcc atacgtttcc ggctatgaaa gggactcctc ttcagaggaa tgagtgccag cgtcttcggg ggactggcgg caggtgacct aatccatcta ctcaaaagct aacttagaca gtgagatatg agagctgtgg agtggacagt gccaggggtg cacttgaggc aaaatgeaaa tgsggcacga actctactcc gtaggtactt ttatcagttt atttgggcca gtagatcacc ctactaaaaa ggatgctgag tgcaccactg gaaaatttgg tggatgggca tcatcatctg aattggatgc cactggggcc ttgagtgtgt ggatgctact cttgatcttc tccctttgtt- aagaggcccá actcatcata cagccctggc ctatacccta gataatttgt ttgtctgaga caggtacttg tctataatcc gaccagcctg gcacagtggc gagcccagga aacagaaaaa ataggtaaag ttcacagtag ggttnnnnnnnnnnnnnnnn gtcttgctat ctcagcctcc tatatatatt ataaataaat accaggtctt gattacaggc atacatccaa ccgtctttga aactgcatga tgctgtctcc gagcctcctc caagatgctg cctgggggtt ctacccacag gcagggccct taggcctggg ggctattttg ttcctgaccc gccatgcagc atcaaggact gcctgtacag acaactctgt agtaacttgc ccagaggcca tgtcgagttt aaagcgccca aggagggctg gtggctcacg caggagtttg aattagctgg gaatcscttg agcctgggag tctgccatag taaaaatcag gaagcggtgg cgaggtcagg tacaaaaatt gcatgagaat cactctagcc aagatctgac gaggctcagt cttgacatgt tatatgagaa tccaatgatc actacacctg tctaaggtta ctctcattct tactctgatg tgtggtggta tgggtgagct tgatgctttg tctcctgaga tactcagcaa ctatatttag gaatacatca cagcactttg ggtaaaatag acatgcctgt gtttgaagct gaccctgtct atccttgatt aagtctgtgt nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn gttgcccacc tgagtagctg tttatatata aaatatatat gaactcctgg gtgagccatg aaatgttctg agaaaccagt gctgggacaa ccagggtctg accatgggca gagtaccttg gggggcacag agacaaatga ggctcacgcc cccacccagg gtgctctctg cactgccctt tgttgtgcct gcgtggacgc ggatggtgac aaggcaggta ctaagttcat cttttaacca catatttcat aagtgagtta gaacacacat cttttaatce agaccagccc gctggtggtg aacccsggag acagagtgtg ggaggattca agaatgtctc ctcacgcctg agttggagac agctgggctg cacttgaacc tgggagacag aacagttgac tgtctgccaa aggcatttgg aacattctgt cctccttcct gatacttgct aattacaaga ctctctctcc aagcaagcta aggaactgag tggagacaaa caggcttgtg tagagtataa tagataacca tcattttaca attaacagaa ggaggcccag tgagacactg ggtgccagct ccagtgagcc caattaaaaa cttgccctct tgacagcgct nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn aggctggtct ggaatacagg tgtatattta atatatatat gctcaagtga gcacctaact agctgagcaa ctctctccaa tcagagggca tccccttacg tgacccagct tgactggtgg gcgggtcacc acagcaacaa caccccactgtaaccctttt gcctccgctg cccatcctgc tctcacctgc cccaactcag agcaagtggt 20160 20220 20260 20340 20400 20460 20520 20580 20640 2C7QC 20760 20820 20880 20940 21000 21060 21120 21180 21240 21300 21360 21420 21480 21540 21600 21660 21720 21780 21840 21900 21960 22020 22080 22140 22200 22260 22320 22380 22440 22500 22560 22620 22680 22740 22800 22Θ60 22920 22980 23040 23100 23160 23220 23280 23340 23400 23460 23520 2358023640 23700 23760 23820 23880 23940 197 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ caggcagtgc ttttcatttt ctctgtgcgt agaaccctag gagatcaggg gfcacctcccc agggacctgg cttgcttaat aataagaata caccttgcct tgtttagtcc tacaacacct ttgcagttga ggaaaccgag gtacagggtt cagctttcag tggcagcctc cagaacctgt gggctagaat aggtagagtt ggtatattag aggcttggca ttttaaaaca acaaacactt atcagggaga gactcagccg gctgattctg gctgtcagcc agggctgcag tcatctgaag ttcaattacc cccatggcct ctccataggg gagcaagagg gctaagcgac agagaccccg ataccatcac ttctgttacg ttctattata ggagactgga caaagcaggg gaataccagg ctggagacca ccattgaggg tttttttttt cccaggctgg agtgcagtgg cacgatctca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagta gattctgtga ctgcttttgc tctttttgtg aggatgggag aaagagactg ggagagaagg agcctggccc tggcactgag ccttcctcct ctagcagggc ccttctgtcc aggacacatg ctctctcctg ggctggcctc agtgcccttg tcaggccaag ctgctgtccc caggagggca ctgaggactt ctgatgagag acggtgtgag cttggttctc aaaccttcaa gtgtgcatga tgcagatttg cagatatccc cgctgagatt catgttaaga aagcacccgc tttgatgcgt gaaacatgga gctagagaac gtgggtttct tgttttctgc tgccctgaca tcgaaggcac cagggagtcc tgggaacgta gaggcagcag ggttgctacc aaatccatca gaccacgcta cagtgccttc accctgacca acctgctgct caacttacac ctccaggtac ccaccttcat tccaaaggga tggtccatcc agcacctgcc ctggatctat tttccgggtt ctccaggaag tgggaattga ggcccagttg gcctcttcgc ctctcctaac ctcttcactc tctctttttg cattgttcga ggtttcttcc actcagcctg ttgggctgaa atgccttcct gagctttgca gggagggccc caggcatccc ctaatgcacc tcacttcctt aaaggcagec tatcctgctg tagaggaagc tgaaatacct ggcttgatga ggcccccaga atggcctcee etccatgccc ttgccttata attttcctct tcatgttgga cccctgctgg gcgctgctga gggactctcc acaataatga tgacaaaatg acaaccatta aggatccttg accatcactc cctgagttca gctctctttc cttcatctgc tcaagccaga tcacactcca tgttcactcc atcctcagta tctgaccctt cttgteacct ccactgetgc cctggattat tgtggcagcc tttagtctcc tatttttaac acaggggctg cagtcacctg tggtgtcctg tctcatctgt ctcagagtaa CCCtÇCâ&yC u Cty ÇCCCCcL ÇCãCttCãCw ctctgccaca gccacagtgc ttccfcagtgc gcatctttgc atgtactagt ccctgtttct gcccaatctt accttctctc cttcttcagg gcctcccttg gctgtcccat gtacaattgc tttttctcag cgtttatçac taacactctg ctgctccatg ggaatgccac ctcctcgatg tatctccagc acctagagca gtgcctggca acagaataca gtggacagtc ctgcgaggtc ggggctcagg gagtttgagc cacttgccaa gctcagtggc cctgaagttg gagcatttgc ttacatccag cagcttgttg ctttctccca attttacaga tgaggaaact gaggctagga gctaatgcag agtgctgact gtgcacttgg ctttgaggta gatgcgttaa tatcttcatt gcacagttag gtcattcacc caagatcaca gttataaggg tacacgctaa agtcttgtta atatttattg ctgtataaca aatcacccca ctcatctcat acagtttctg acagtcagaa agtcacagtc tctcatgaag acatagtcag ggctgactgg ggttggagáa tctatgtcag ctgctcagga cacagcacct gctttccctt tatcttctct cacataatct cagacgtagc ggcacagagc aaccctgata tactgtggaa aggcaggatc cttgagggct gtcttgttgg tttttttatt gagacagtct tgctctgtcg gctcactgca acctctgcct cccaggttca gctgggattc accatggagt cttgaaccca ttcatccaaa cagtccctgt ttatcctaag aaatccagtg gcctccctcc ctgctagcag etaccctctg ctcctaatgg tgagggtccc ggccgcctgt cctcacccca gcctactgac attgtgccgg agagaggaag cgctggacag tctgcttatg tctagggcag ggacaccttc agcttcccac ttcccacctt ccttcccatc gaatcactta gtgggggata tttgtccaaa ctgagggccg agatgaggcc tgtgaatctg gtgtcattgg gtaggggagc aacaetttga atgggtttcc catagaaaca tggatttctg atctgaaggg ggaggggcca ggccaagaac ccagtgactt cccgtactcc tcagggacgg ctgcaagatc caaaagctca ccaatgccat tgtgggtttt ggcatcacct gtctcatcaa ccttcccctc tccctgcctc ccgaggctcc ttccaggaag cgcagttctg gtcttctgat tgtttctagt agattgggtt ggcgaggggg cctacccctc cttcctccag cctccacaca gttttagttt gtgacctttg tcctgcacac tgggagtctc tatgctgcag tgtgagtctg accgtgatca gagaacccca gggaagggtt tctctctgag accctctgat ggcagggagc taattgactc cccctgttgg agtcttccct cactttggtt ctatgtctgc tgtttgaaac accctgaaga aatttcccaa gggcagccat cagtccccac ttgcatctct ctcctggttt cctgtgtatg tgatggagta acaggacatt tcaagtgctc cgttggtgca ggcagcaggc gcctcactgc agcggtctcg gcagagggca accctggagt ttccttgatg tttctctccc cagccagcag cagcttctac acaccccaaa ctctccagtc ctagccacca acatctctag cacatctgcc ctggccccgc tgtctcagtc tcaggacata agtctcttca catcactctg aagccaaagg ctttactatg gcctaaaaag eceetetagc tccccctcct ccattgttca tccggaagtc tcaagtgtgt tccctgcttg agaacattct tctccagata tctgcaaggt tctttccctg actgtcctct tctcagtgag aacctcccta ctgcccgctt ctctgcttgg cctatctctt gcttattgtc tgaccgccac gcaggaatct gttgacttgc ttgatcgtgg catagtaggt tctcagctaa atgtttgttg aatgccatcc ctgttattag tggaggaagt tatcacacat acaggaggtg tgagaaccca cctcaaggct ggggaccaaa gagcccatgc 24000 24060 24120 24160 24240 24300 24360 24420 24480 24540 24600 24660 24720 24780 24840 24900 24960 25020 25080 25140 25200 25260 25320 25380 25440 25500 25560 25620 25680 25740 25800 25860 25920 2S9B0 26040 26100 26160 26220 26280 26340 26400 26460 26520 26580 26640 26700 26760 26820 26880 26940 27000 27060 27120 27180 27240 27300 27360 27420 27480 27540 27600 27660 27720 27780

198ΕΡ 1 325 13 Ο/PT aaagagcecg aacgcttaag caccaccctg nnmmnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnncccact accacaatta cttttgcacc cacataaata cctgcaatcc cagcactttg ggaggctgag agaccagcct ggccaacatg gtgaaacccc ggtgtggtgg cgcgtgcctg taatcccagc aaatcatgcc actgcactcc agcctgggcg aaataaataa ataaatattt accatgtttt tsaaaaçaçç catgggaggç fcgggeaeagt gggcaagcgg ggaggatccc ttaaggccag agccctgtct ctacaaaaaa taaaaaaatt ccagctcctc gggaggcaga gggagaggtt gagccaggac caagacacta cactccagcc caaacaaaca aacaaaagcg acctgtgggt aaagcagagc ttggagggct caagcgattt tgaatccaaa gttaattccg tctatçatat ctctgcccac tecagccact cacgtgtaat tgggccagtt gagggtgcag ttcagaaaga tgatgaccac gaaggccaca ccggcatcgt gtgggggaga ctgcctggcc ccagacccca aaagaagttc tcttctccec ttgtccttgt agaagtttag agtcagactc agaagaccca cctagagagc tatgaaatag tctccacaaa atctctgaaa tttccattat cttaaaaaaa cattcatgtt catgttcgca caaaaatgtc tgctctaggt ttaccgggcc taatcgtgtt gggaaaaggc aaacccagac tgctcatgct cacgtgcaac aactgggggg gttggggaga teaaceeeag ggcaggtaag ttctcaattg tcttatggaa gaagctgatg caccatctgt gataattaat gtctgctctc ccctcaggct gaccttggtg ccttttcctc cctaggggca atgtgtggag gtaagatctg gctcttcaaa gcccaccctc catgcctgcc caccagaaca caaactcctt tggagacact gagcaaaagt aacggtatgc agtttggtac tgcccaccgt ggtcctttga tatttgacag aggaaattga ggtcccctgg ottcgaggta caccaggttg cactttgtga ccttggacca aaccacccat ccaaaggetg aataaagcca gagagtcagg tgattctgta ggtgaagcta aaccactgaa catctgagat ctttctggaa gtcacgtgag cagggagacc agctgagaaa gcttgctgtg ggatgatgac agagaaagga gagcggagaa ctcactcggc cccacccggt tcttgtgtca ccttgattcc tgggaacgta atggcagaag acgtggagcg caggttccca aacatgttgg ggtggggaca ccgtgaccct tgcccagcat gagacgcagc agaaaagccc caaggtaaaa ctctgccccc tgcctacaca gtcacagtgc cctcagagag acattttgtt aattttgttt eacctetgaa aaacacatgg aataggtget ggctcatgcc tgtaatccca gcactttggg ggagttcaag accagcctgg acaacatggt ttagctaggc atggtggcat gcgcctgtaa aatcgcttga acctgggagg tggaggttgc gcctgggtga cagagcgaga ctatgtcccc gaaacagtga tcttgtccaa cccatttgag tgtactcaag ttcacagagc acattaatgg aacccaaggc tgtgaccatg gctgtgtccc gttgacgtcc cagcccagtt tctgcctaat tggaaataag ggagggaact gagccagggc cagagcaggg tcagaaccca caccaggaga cctggccagc ggggnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gcgcctggcc cattactttt aatggcaaaa gttaccatgg gctgagcatg gtggctcagg ccaggcggat cacttgaggc caggagttca gtctccacta aaaaatacaa aaattagctg tattcaggag gcagaggttg cagttcactg acagaatgag actctgtcte aaaaataaat gaccacctgt tatgtgccaa ctgtattact ggçtcâsgcc tgtaatçgga qactttagaa gagttcaaaa ccageetagg taacacagta aactgggcat ggtggtgtgt gcctgtaacc cgcttgagcc cagcagtttt aggttgcagt tgagtgacag agcaagacac tgcctctaaa aggtaggaac aggctcatag tacagatgag gccaagcaga ggtccaagcc gaggtctctc caccacagcc ctctctgccc cagggagagt tgacttcctc aggggcagga aaggcttcga taaggcaggc caggccagac caggtgaaca agatcagctg tgagaggagg gggcaggccc ccaaggtaga tcccaggcct cagaggcctt gcccaatttg cagatgagga aaccaagacc tcattccttt ttctttttca cttgaggccc gcctgaagtt gctggccact ggctcaaaat tacatacatt tttgcctatg actccacaaa catttcatag tacgtacaaa ggaaacttag tatcctgccc- cttcctggca cattccccag cagccttttc tcacctttcc caggtcctcc gggaggtgca' agtgctctgc ccaagggctc aatgagattc tgtgcaaatg tgtcagccct cctcttgtcc tccccatacc atctgaccag cctgctcaaa cctttttctc tgcagtcttg ggacagagct tcaaagggcc acacccccaa cactacttca gttgaaaaga agggagaact actgatggcc cccccaccca tgcgctctct accttcttta gtactctttg taaagtgcaa ggaggttgag gagcatggca tggctcaaag ggcccccatc ttgcactgag ctaaaacttt acctgtccag gatccagcct ggcataaact cctctctgga aggtgtggaa aaatgtggcc gaccttgaac gcatgtgaag gggctggact ggtttttcag cagtgtgtga gccagttccc tgacagagta cagagaaaaa gaatcagagg gcccaggaga gagggggaag gcctgcattg gtcagacccg tgggtcagca ctagctgctg agacaaaaag aaaacccagg tggcctcata aggcgtaaga gccaatcatg agggccatta gcagctgagg agggaaagca gcacccatga tcccagccct gctccataca atagctccag caaacagaaa aatcaatgtg ggaaactgta cctttagctt eaaaaaggct cccagacacc aattccaggt ttcccaagtt tgttacgtaa taagaaacae tgatcttggc tgggcgcagt aagccgaagc tggtgggaag cttgaggtca gaaaccccat ctccaccaaa aatacaaaaa tcccacctac tccagaggct gaggcaggag agtgagccga gatcgcacca ctgcacttta accccccaaa aaaaaagaaa agaaaagaaa atgagacaat tgagacccag ggaggaaaag ctttctcccc attgtcgttg tcccagccct ggtaataggc agtgcctctt aaccctctcg caggacaaat cacatcctgg gaggtgaggg agacagtctc cagaggaggt ggctctgacg gaatttaatt gatcatgtgt tccactcacc 27840 27900 27960 28020 28080 28140 28200 28260 28320 28380 28440 28500 28560 28620 2B680 2B740 28800 28860 28920 28980 29040 29100 29160 29220 29280 29340 29400 29460 29520 29580 29640 29700 29760 29820 29880 29940 30000 30060 30120 301B0 30240 30300 30360 30420 30480 30540 30600 30660 30720 30780 30840 30900 30960 31020 31080 31140 31200 31260 31320 31380 31440 31500 31560 31620

199ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tgcctcagcc aagccctcag ctcctctggc cccaccatcc gatccgtaca aagcctaaac ctcaacagct ctggtaaaaa cagcactttg ggaggccgag gagcaacacg gtgaaacccc cgtgcacctg tagtcccagc aggcagaggt tgcagtgagc agactccgtc tcaacaacaa ccttccccct teccctgaag ttttcctgca ccctgcatcc gcctggagag gggcagggec taccgtgggt aaggcgaggc ggcaacagca gctgggcccg agagcagcgg cccagggggc gccagcgccg gaccctgcca agccgctgga caagccccac agggatttag ggccctgggc gggagaaagg gatccgcttc ggcggctgct ggggagaggt gagataaaca gtccgagcca taacactcct aagcctttaa cacacataca ccactcacca aatttcatat ggttcaacct agggacgggg tcacacaccc gctgctccct ccccctcaag cgactgacat aatttattag aatgtaacct ccagcaggga ctagaacaga gctccatgga acaccccgac acacagccte cctgcacagt ttctcacaca cagcccactc atactgccct tgctgccagg ccaggcctgt ccaaagccat tcagggacag gcagcagatg agggcatttg tccgccttca tcccacctat tccacgtccc gggaggccag agacacaggg aagggcgagg acggtccctg tcctcccgtt ggtcgggggc caaagcggtc aaggaaccaa tggtgaagcc ctgcgctgct catcctgggt gctcagcaca tgacaccagg cctgctttca aatcccatgc atggggctgc tccagaaatg cacagcctga ggcttcaact tgtaatatgc actcagtgtc catatctaga ggcaaaggca attaaaatgg cccggcgtgg caggcagatc gcttaagcet tctctaaata aaaaaaagaa taaatgatag tctgataaaa cactgttata agtcagttaa aatgagaacc aggcactgcc taacggtaaa ctgccaactt acaaagggct gcttcgcttt nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nntccctccc ttccttcctt ccctceatct gcacttggtg aaagtttcaa ggctgtcaaa ggagacttac ataaaataag ggccttttgc tctgctgaat cagatagcta ttatgaagca ctccaaagtt ggcaggggaa ggcaaagtca tccccaagtc actagatccc acactccaca gagggggaaa aggcgtttag gccgggcgca gcgggtggat tgcctgagct gtctccacta aaatacgaaa tactcgggag gctgaggcag cgagatcgcg ceaetgcact aaaaaaaaaa atggtgttta tagçtggctç aggaaaaacc gtgaggcacc actgccaagg ccctcccctc caaggggcca cggccggcta accccgggct caagactcag cacgggacgt ggggccggcc agagggagcg ttggctggag attacaggag ccggccgcca gggagggtct caagttgcac agcagggaga cttcctttag agctgtgaaa gaaattcagc caaaaccacc gcccggccag gaaccttccc cgcgtttaca cactcacata catgtaatag gtcaagcçat agtacactca caaacacacc actctcccac gacatggcaa atcatgttac ccagttttat tttacttgtt tattgggtta-ggatgactcg gtcagtcctg cattcatggg ctctgtacac atceaeacae acacagcctc cteaettgat ctagtgatet caccccactc aetctgccct gacactcacc gtgagtgaag cgccaggaat atcaacggag gggagctgtg ggaagccaag tcttttcttg tggggccaca ggecatgagg gtgcaggacg ggttggcctg tgagcacccc ccccatagcc cagccacctc catgaggatc cccagtggca caggttgagc atctcgtcct ggtgttggtg ctgctctcag aacagctggg cacaggagac oaagtgcctt tgggggtacc gcagccatta gtacctgacc agctcaaatg aaatactgga caagcttagg gggttgtgga aaggcagtga gtggtactct tagttcatgc ctgtaatccc acaagtttga gaccagcctg atttagaaag aacactaaaa taatagctaa tacttattga taaagtatcc cgttccctag ctccagtccc ctctagaagt ggagttgtga caagttaagg actcaatgct cannnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tccctccctc cctcccttcc tctccacacc tggtatcatc ttctcctgtg tggagaggtg ccaatctttc cagcccacca atctgattta agtaggaagc agggggccct ggaatctgca tgagacacgc ctcaaaggtg ggatgccctt cgcacacacc acagctgaga aggaccttag ctgagactct gaagggaggc gtggctcaca cctgtaatcc caggagttcg cgaccagcct aaattagccg ggcgtggagg gagaattgct tgaacctagg ccagcctggg cgacactgcg aacacatata actaaattat tctacccact caggcagaog acgccaggga aggctgccag caaacgctgt ctgcgcccag ggcggccttg cagcgtgcgt cctcgtccaa gtctgggcca gggagaggct gaggggcggt gcggggacat agcagggagg gaggtcaaga gccggagaga aggggctgcg cagaggggcg tgtccccggt tggaattaaa cagtcaggca gcccttctca ctccaacctc cctaagcctt aataaacaca ctttgagcaa gtgcacgacg aggtgtcgac taccaactca tggctttcac gcgtgcacac gctatctcaa tttcttccca gcacctatga tctgtgcccs tcacccccaa attgtgctgt agtccaggac acaaacacac acattaacat aeacetgctc tttgcagcca gcgtccacag gcccctcecc caccccactc gggggaactc tgaacgttag gcagatgcca acagagctgg aaaggggaaa ggcgggagct ggggtaaaca agaggacaga caactcacct cagtgaagca ggcactgtgg ccctcccctc cccctgcagc acctgccaac cagccgcacg gggtggtggc gctgagcacg gctggtcaca gcctggccac ctgaggaggg ggaagggagg agcaçjcccac agtcaggcgg ctagagtcac atctcctctg ctgggagagt cttgtgcaca cataaaagta tttactaagt cccccaacaa gaagtgcccc aatggctata acaagaattc accactgtgg gaggctgaga ggcaacatgg taaaacccca cttagaggaa gctttcccga gcacttaact atgctccagg gtgatgaagc tgaggcacag ccacttggag gacttgtcct agaaaagcta gtgataggag nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ttccttcctt ccttccttcc atacagaagc agagaggact agcactgagg aaggggtggg atcccttgcc cagtgtttct tgattcctga gcccctcaga ttttagcaag cggaggtggg gagtggttct gtggggggca 31680 31740 31800 31860 31920 31980 32040 32100 32160 32220 32280 32340 32400 32460 32520 32580 32640 32700 32760 32820 32880 32940 33000 33060 33120 33180 33240 33300 33360 33420 33480 33540 33600 33660 33720 33780 33840 33900 33960 34020 34080 34140 34200 34260 34320 34380 34440 34500 34560 34620 34680 34740 34800 ov 34920 34980 35040 35100 35160 35220 35280 35340 35400 35460

200ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gaaaggaaaa tgcaaagggg tggaaagggt gatgccaggt caagccagac cggggaggag cgaagcagac acttgcaggg cgtggagacc ctggagagcc ctcatccccg ggcaccagcg gtccatcact cccccggcca ttctacccca cagtccccag ccttCgctat ttgcgatccc çtcgeeeetg ggagggcggc gaccccgcca ccccgtcccg ggattgcgcg gcagggtctg cgcatatatg cccccctttc aggcttcgaa attcctcgtt cgcaccctct cccctcccca ccagctogot tccgcocctg cagacgccct tetcctagga ggccagaggc aagcttcgag ggctgcagat aacgcttgca cgggcagagc aagccccggg .accctcggag ccagccgcag cgcacgtggc gcttaccccc actattcgca aattgaggat agccagccga acccgctggt aaaaagtcag tgttggaagt ctttgccaag tctccagacc tctçtcttat taacttctca aatgctgtct tacagagcca actcttggcc ccaggagcag gctatccttt ccacagactg cccttgggtg tgtgccttaa caacaccaac ctcttaggct atcctaaacc aatgttagtt tgtcccagag gcacaagcag ctcttgtcct cactgatggt ttatttattt actttaaagc aaggaagctc aaaatttgca actttcggca ggccctaggg tctaaagcat tctgtcctaa aaatcctggg aagtaggggg gttgggaaca gggaggtgag ctagttaatg cccagctgag caccaaccgc caaagacagg taagacttgc aagcagcagc gacecccaac ccctaaccca agggctgtgt ctctctcaca gcacatggga cctcaggçgt accgctagaa ggagataaga aacccctcta ggatagggac gaaggttttt tttcctcctt taaatctacg gccatggctc cttttggttg ctcaggcctt gcggtcacct cagagccgct tgctggagcc gggcacggta aatagcagga ggcccagatt agtcatctgc ccttagcctc agccagaata aatacagcta ttaatgttca gcaattctgc agggcctggt gggtgcccac cactgtagga gtctgggctg tctgaccttt ggagatgtta agacacagtt caaggaactg gacacgcggg ctctgactcg gcaaataatg gcaattctta gaaggggtca cacttgggga gtggggagta acagatagag ggggccacag ccaaggtgag tgcaccccgc cctctcttcg cooaaccttg tttctggggg gccttcccgg gaggctcaac gagcccacca acgctcctcg tcctagctea tctgcataaa agaactcgtt ccccaccccg ççcattaaçr efcçgçgaççc cggcgggggt ctgggggtga ccacagggca gaggccaggg tgggaaaaga cggggagggg ccctatcctc cggcccccgc gccatctgtt ccactccgca cccagccccc tccccaagcc ggccggaatt tctgcctcca accccccacc aaccaccacc aggacgggag tcggggaggg aagaggcagg ggttttccct ccacgcagcg ccgcctgccg acccccgggt ccgctcctgg cccggacaca gagtgcagag gggtgctagc caattctgat cgggagtctg ggctcagagc cctgaggaca ggttttccta agagaaacaa agacaaaggg acctttggag gtgggggagá ctgagaaccg gaaagaagct ccgaggttcc aaattgagct cctctctggg cttgtttcct atagtttgga taaaatgaga ttcccttcat ttggggactt gtgcagggct ggataaataa gtcttctctt gatatagata ctcactttaa tgttaaaggt taaagtttta agataaaata atgctatggt gggaagtttg tcctctgtat ggagaaaagc caggagctgg actccctcca ccagacagcc agaggcgaac cctgggtgaa gaaggatggg cgcaoaccag ccagtctctc accagagagg gaacctgccc ggacacagct ggcacctcag ttcacacata cacagacaca agcctgtttg ccgatccccc ggcaocctgg tctcctccaa tgtcttcagt caatggagcg tttgcagtct ttacaaaaat tatgtgcatg ttacaggtag gattgcctgt catccaggtc aagcaccttc agtgggccca atagaagagg taggaaggca cacctttagg gcaaggagag ccacagggag gagaaggcgg gtacttatta tgtgtagtca aaagtggctg agatgagact accatatggc actcactagg gtcaggctgc tcccgaaatg accaatggga tcccgttcag ggatgcacag cctggtggac gttcacatcc cactctgcat ctgagtgcct cottctcagg aggtttcaga caataccgag gaggcaaagt gagtggagac acaggtcagc agccagaaac tggcaatctg agaccgagga gtgggtcaga gaggaagcct acgcagatac ctggataggc aggtccgacc ttgtccctcc gctccaatta acatgttttt agcccgtttc ccgccgcttc gggççgcfcèç tggçggtçct ggggcgcgcc ctggggcaga ctctccggga aaaaggcagg ggcttctcct gggagactcc acccctcctc ctccccgcca gegccgcgac aaacacggct ccggggagtg ggggagtgag tctcccaccg gggtccggct accgttgcga gggccggtga tgtagggcga gtttaaagga cccgggtcgc cgccccccgc ggcacaccaa ggacctggcg ctcgcgctca gcctccccag accccggcaa gcctactgaa tttgtacttt acaaaaacaa agcagggatc tgcgatgtga tctgaaaacg gaggggacag agggaaaatg gcttagctgg tggccaaggc ctctgaggtc tgggacctcc tttctgcaga ccaccaccta acactgtgtg acagcgacaa gaaagaatga tagctgtgta gaacagacag gctctaacct ccagggctta ggtatgtctt tctgcaggat attttaaagc ttcacgfctat aaatgtaaat atagtataac ggagactcca aaaaagtgtt agtcatacct tagcattctt cagcttcctg gatgtacccc agcactaagg gcagggcatg gggctggcat gccaagcgtc ggtgtgggga agacaccccc acttcccttt ttatttcctc tcctggccct ggaaggggcc gcccctttcc ttctgaaagg tgcatgtgtg cacactcatg caagaggtac caggaggcag cccaaggagg aagaaagctc ttgacttagg gggcgttttt agaacttctc ttggtattta aaaagccata tggggcactc ccttggtctg agaagtctat tcccattggc ggcgtactcc acaggaatcc caggagtgag agaaacagag tcaagtaggt ccatttttct ccaggtcctg ttgttccaec agtatctcac tctcaggtat aacaagtggc taggtatgag gaaggcacag gggccttctg ggctcacccc ggtggcgaga ggaggctctc agaaggcttg gaaggcccag tactcactgt gtgactttgg gctgttgtgg cgaagatgta 35520 35580 35640 35700 35760 35820 35880 35940 36000 3606Q 36120 36180 36240 36300 36360 36420 36480 36540 36600 36660 36720 36780 36840 36900 36960 37020 37080 37140 37200 37260 37320 37380 37440 37500 37560 37620 37680 37740 37800 37860 37920 37980 38040 38100 38160 38220 38280 38340 38400 38460 38520 38580 38640 38700 38760 38820 38880 38940 39000 39060 39120 39180 39240 39300 201 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ agttaaaaaa aagtatgcat eatgcttagc acatagtgag tgcttggtaa atagaagcag 39360 ttatttcatc acaattcttt gggaggaggg tttacgtgtg ggtggcccca cagggcagat 39420 gaaagatcag cgtcagggag gcagatgagt tcaatgtaag gaaaagactt actaacagca 39480 gcagggctgc ctcgtgcagg agtgggtgcc ctaccactga gggtatctaa gctaagaggg 39540 aagggtcccc tttcaggggt gctggagaca ggatcccaca ctaggtagaa ctggattgga 39600 ccaatggtgc ctgaacacag geccaagagt caggactggc cacttcacaa agcacctgga 39660 gtttactaaa aacagactcc taggaggtca ggcactgtgg ctcacgcctg taaccccagc 39720 actctgggag gccaaggtga gaagatcatt tgaggccagg agtttaagac tagcctgtgc 39780 aacatggcaa gaccctgttt atctgtacaa aatttttttt taaaaaatta gccaggtatg 39840 gtagccaCca cctgtggttg cagctactca gaaggctggg gccggaggat cgcttgagcc 39900

caggaatcag aggctgcagt gagctgtgat tttaccaccg cactccagac tgggcaacag 39S6C aacaagacac cttctctaca aaaaaaaaaa aacaataggg ccgggcgcgg tggctaaggc 40020 atgtaatccc agcactttgg gaggctgagg agggcagatc acgaggtcgg gagatcgagg 40080 ccatcctggc tagcacggtg aaaccccgtc tctactaaaa atccaaaaaa aaaaaaaaaa 40140 ttagctgggc gtggtggtgg gcgcctgtgg tcccagctac ttgagaggct gaggcaggag . 40200 aatggcatga acccgggagg cggagcttgc agtgagccga gatcgcacca ctgcactcca 40260 gcctgggcaa cagaatgaga ctccgtctca aaaaataaaa ataaaaataa ataaataaat 40320 aaaataacaa taaattaaaa acaaaaacag actcctacgg tcaggctgag atatcctgat 403B0 tcaggggact ggggaatctg tatttttaac actccgtgag gggttctaaa aggcagacaa 40440 cttggaaacc tgcagattag agacctctga ggtgcctcCg gctgagatga gtgagggatg 40500 gcaccacata caaggcccta cccctgcccc caggagagtg gctcctgctc cccccacacc 40560 aaccctcgct ctcacccaga agggctctcc tttcaggggt cccaccatcc ccatgaaaag 40620 tggctgctga agcaaggcga acacagcact ggtgagggac tgcaggcctg tcagcgtccc 40680 aaaaggggtt ggatgggaac ctgtccccaa aacgggagat caaagggtgg tgggggcctt 40740 tcagcccagg caagaacttt ttcttttcct tcccaacatg ggnnnnnnnn rninnnrinnnn 40800 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnimn nnnnnnnnnn 40860 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nncactccag çttgggtgac· agagtgaaac cctgtctcaa 40920 aagaaaaaaa aatcttaaag aataaggata taaagaaagá aaatattttt gtgtagctgt 40980 tcaatgtttg tatttcaagc caagtgttat tacaaaacag tcaaaagttt ttaaaaattt 41040 aaaagtttat aaagtaaaaa agctaagtaa gctagggtta atttttttat cgaacaaaga 41100 aaaatatctt tgtataaact tagtgtagtc taagtgtaca ttgtttttat tttatttatt 41160 ttttattttt ttgaaatgga gtttcactct tgttgcccag gctggagtgc aatggcatga 41220 tcttggctca cggcaagctc tgtctcctgg gttcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc 41280 aagtagctgg gattataggc acccgccacc atgcatggct agtttctttg catttttttt 41340 ttgaaatgga attttgctct ttgacccagg ctggagtgca atggtgcaat ctgggctaaa 41400 tgcaacctcc acctcccagg ttcaagagat tctcctgcct cagcctcctg agtagctggg 41460 attacaggca tgcaccacca cactcggcta atttttgtat ttttagtaga gacagggttc 41520 tcaactaaag agaaccatgt tggccaggct ggtctagaat tcctgacctc aggtgatcca 41580 cccacctcgg cctcccaaag tgctgggatt gcaggcatga gccaccatgc ccagccagta 41640 tacagtgttt ataaagcctc cagtagtgta cagcaatgtc ctagaccttc acattcactt 41700 actactcact cactcactca cccagagcaa ctgccagtcc tgcaagctgc atgcatgata 41760 agtgccctat ataggtgaac cattttttaa tattttatac tatattttta ctgcaccttt 41820 tctatgatta gctacacaaa tgcttaccat tgtgttacaa ctgectacag taatcagtac 41880 agtactatgt atgggtttgt agcctaggct ataccatgtt gcctãcgtgt gtagtcgtct 41940 atactgtcta gtttgtacac tctatcatgt ttgcataaag ataaaatcac ctaatgacac 42000 atttctctga gtgtattcct gttgttaagc aacacatgta taaacattta caagaaatag 42060 ctcaaatttt tttttctttt gatacagggt cttgctttgt cacccaggct ggagtgcagt 42-120 ggegcaatct cggcgcactg cgacatctac ctccccggtt caatcgattc tccggcctta 42180 gcctcctgag tagttaggac tacaggcacg caccaccacg cctggctaat ttttttgtat 42240 ttttattaag agatggggtt ttgccatgtt ggctaggctg gtctcgaact cctgacctca 42300 ggtgatctgc ccgccttggc ctcccaacat gctgggatta caggcatgag ccaccatgcc 42360 cagccattac gtttttttgg ttgtttaatt tttttttttt taagagacag attctcactc 42420 tgtcatcaag gctggagtgc aatggcacaa ccatagctca ctgcagcctc caactcctgg 42480 gctcaaggga ccctcctgcc tcagccttcc cagtaactga gactacaggt gtgagccacc 42540 atgctcagct aattattttt tatcttttat tttttgtaga ggggggatct ttctatqttg 42600 ctcaggtttg tctcaaactc ctgggctcaa tcaattctcc tgctttggcc tcccaaaggg 42660 ctgggattac aggtgtgagc ctgaaaacct tctagtgtgg aagtggaaga taggcccagg 42720 ccacttatgt tttcaagtta agcaaggttt aggtcactta tgaagcctga ctagttttgt 42780 ttgcttaagg gatctgcagg cctgacctcg gttttcattt gttttaacag tgtotatgtg 42840 tatgtgtgtg tttatgtacg tgcatgatgg ggggaaagct cagaaatcaa gtaagccaaa 42900 cacaaacatg taattataag cagggataaa ttctatgatg aagaagtatg ggecacggga 42960 gagtacttgt gccagtctgg tgatcaggaa caatgtcctt tgggaagtga catttgagcc 43020 atgccctgaa gtacggtagg agttggttag gggtgaggca gtaagaccca gagctggggc 43080 ttcctgcaca agctcagctg ggcactgagg acccagtgga ctctgctaca gggcagtgag 43140 202ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gagcagaaag gctgaggaag agaggctgat gggggaaaat gcaagactcc atccctgtaa gcagtctcag ctactcaaga gcagtgcgcc acgattgtgc caaaactgaa tgaataggct ggctgaggtg ggtggatcac aaacccgata caaaaattaa gaggctgagg catgagaatg gcaccactgc aetccagcct aataacaatt aaaaaaaaat ggtcacttta gtaaagggag atacgacagt catggaaatg ctgccctgcc ttggccactt ttctcagtga gtagctctca atggaatgca taaaagatgg atgttcatgg agccctggga tggggctcag aggaggaagg ggaggtttat ggagaaaggg gcaagcctca actctgtaga gtctgtggto ttggggacat catgaagcgt atctcttcgc accaatactg aagatcttta ttgagaaato aggaeaagtg tggctcacgc ctgtaatccc tgagtttgag actagcctgg agccaggcgt ggtggtgcat tcacatgaac ccaggaggcg ctcttggcaa cagagccaga gtagactttg tgtttttctc acacctccag tcttgcctca gtgtactttt tgattgtcct tcagtccctc cccatcccga caetcaatae atcttgcatc gagcctcatt atagccgttc tctccgagtt tcgcttgtca tgggtggctt gctttatctg aatatggctt aatggtggac gaggtgeaca agttagaggg gggaggcctg tccagctgct gctgcagccc aggtgttctg tctgtctctg acttgtcaac ctcttccaaa agccttgggc ctgcgccact cacctgctct gcctcttagg tatcacttcc ctagttactc cttggaggta aggccaagcc cagcctaaag gtgggggtgg caatggagtt gcaaactcta gagaaccgtg acaggaatca gcatcccaca gaggggtata gggaggagcc ggcacatctg tgttttcttt tcttgctctg tcgcccaggc cctectgggt tcaagtgatt acaccaccac acccagctga ccaggcttgt cttgaaatcc tggtattata ggtgtgagcc gggataatgt gcattttgtg ataagttttc ccccagggag caagattcag cctctcaaaa actaggagag ggcaagtgag gctccaattc ctagtgatag ttcaagttct gagattgtta ctgtttgatg aogtcccaca gctgggtgtg gtggctcaca cggtagagct caggagtttg aaagctttta aaaattagct ggctggggta aggattgctt cactgtactc caacctagga gtgtgcggtg gctcactcct ctgtgattgg gagtttgaga ctgggcatgg tggctcacat tcttgaaccc ggggggcaga gggagacagc gagactccat taaaaggcca gggagcactg aacaatggct ccteccagga ctagggccca ggcagaccat cctggccctc tgcatgcccc tttagtgcca gggctctcgg ggctgtgata gcccagagct gggagctcag tgcaagttca acttgttcaa agacacacag tgaccatcca aggcttggac cttggtgggg gccaggccet tgtcgctccc cttcctgctg cgtcccccat ccttgctgag gtaaagttct cttttttttc agtcagggcc aggacaaaaa agcactttgg gaggccaagg ccaacatggt gaaacctcgt gcctgtaatc ccagctattc gaggttgcag cgagctgaaá ctacctctca aaacaaaaac aaaagcactg tcaagccagt gggtcagttt ccagcctccc aaatccagag tctgtggcct atcccaggga gccgcaggtg etegetggac ccaatecatt gttcctgttg aectttccag gcatttctcc aatcccatca aaattttcag atttgacttc cctgtcaggg gtagagaaaa ttagacaagt ccagccacaa ccacggttga gggtggagca gctgccctag ctgcctggct taatggcact atgagattgc ctctgactgc aacacggagt ggcgctaggc gtgtgcctaa cctgatccca aatacttacc tctgcttctc accggggact gacgcttcct acatgacttc ggggggggct cagggagggg taaataggag tgattattct gcccatgttc agctatgaag agcagggtct tgagttcata tattttattt tgaatttaat tggagtgcag tggcgcggtc ctcctgcctc agccteecga tttttgcaat tttagtagag tgacctcaag tgatctgcta actgcgctcg gccacatctg gaagcttggg ccgtttgtgt gacactgttc eacttaggga tggagacagc agttccaggc tggtgtttgg gatgtgggga gaaaccatta agctacttgg acacacctta caacaccgcc ctgtgggtac ctttatgaac cttgtaatcc cagggctttg agaccagcct gagcaacata gggtgtggtg gtatgcatct gagcctagga ggtggacgct gacaaagcga gatcctgtct gtaatcccag cacttttgga ccagcctggc caatatggtg ctgtaattcc agctactcgg gggtgcagtg agctgagatc ctcaaaaaáa aaataataat gcagcctgtc caaggtttca cctctgggat ctcagcattg ctcagggaaa acaagtggct agggtetcag caccaagctg gcttacatcc tacgatgacg aggggtttga atctcatgag tttctctttt ttggttgaga ggagtgtttc agtgtgggac aaagatcatg acttcgacca cccaaacaca cctgacaggt atgctctgct gtccctctcc agaggatggg ttctcttctg attttctgaa agtcoctctc acagtgtggg acgagtgtgg tggcggatca cttgaggtca ctctacaaaa tacaaaaatt gggaggctga ggcaggagaa ttgggccact gcactctggc aaaaacaaac gacaaacagt gcccgcagca gtgggcctag tggacacttc ccccaggtat gacctggttt gtcacagctc tgtgcagaag aggcacacca ggcttggtga tgtacagact atcaatctgc cagcttggct tgtactttgg acctctttgt aggtctctcc tttgtccctt tattgaggag ccctgacttt ccagcccaag ctgcagtgta tacaggaagg cttccttctt ttggtagaag aaagaaaggc acataattaa cctgggtctg ctgggtatca ctccccatcc tcacttaatt tctctgtgct aggtgtggga tgacacctga ccgaaaccaa acgaaaagca aggcttgcgg gggctggagc atgtggaagt gctttgcttt gtcccttccc tttctttcca aatggaaact gaggctccgg ttagtgccct ttcctccata tttttttttt tttggcagag tcagttcact gcaatctccg gtagctggga ttacaggtgt acagggtttc acagtgttgg gccteggcct cccaaagtgc tgttttaaat gagaggaaag ctaggactct tatgatcttc gtcaggaccc ccagtcctta ctgggctggg ttctgttcac agtattatga aaacagagat catcttaaaa ccaagagcgg gccgttatta ggaagaagct aggaatttgc tttttcaaat 43200 43260 43320 43380 43440 43500 43560 43620 43680 43740 43800 43B60 43920 43980 44040 44100 44160 44220 44280 44340 44400 44460 44520 44580 44640 44700 44760 44820 44880 44940 45000 45060 45120 45180 45240 45300 45360 45420 45480 45540 45600 45660 45720 45780 45840 45900 45960 46020 46080 46140 46200 46260 46320 46380 46440 46500 46560 46620 46680 46740 46800 46860 46920 46980 203

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT cccagagaag taagattaaa gaattcaaga atgactgacc gttcagagct ctcccaatag ggtagagctc aggaatctaa tggctcatgc ctgtaatccc gagtttgaga ccagcctggc agccaggcat ggtggcagac ttgcttgaac ctgggaggca ctgggcaaca gagggagact acatactgtt acaggcacag cagctatata actaccacct cctcctcagc agaggtaaca tctaactttt ctatcaatta aggcatgatg actcatgcct ttgagcccag gagttggaga aaaataaatt agctggtcat gagaggagaa tctcttgagc gcactgcagc ctaggtgaca cgcggtggct caagcctgta gtcaggagat ggagaccatc aaaaaagaaa gaaaaaaaaa ttgggaggct gaggcaagag gatcgcacca ttgcactcca ggaaaaagaa aaaatatata tatcacatct gcgaaattaa atgcagtatt ccgtcgtgtg catttgggct gttaccaggt cactacttct ggtgagcgta cctgatcata aggtaggtgt cttttttgtg tatttctggt ggtggaaggg aagcaggagt cacctggttg gcatggagct tatgtggtta gctccatgca gacaacaaaa gctgatgtgg nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnrui nnnnnnnnnc ggaoatttgg taatgtctgc actagtatct ttttggtaga ggcctctgta acaaaaaagt agtaggcgct aaaacataag ctggtgtgat tagctctggg agaggtggag gagggtggta gatccaggtg aaaaacggtc tggctggatg agatggtgaa aggggtgaag gatgaccaga ctgagaaagt gaccacaaaa gtgtgtgttg agttcagtct ggagaagcat cttgggtgac ggagatgaag acttgggaat atgacataac ccgtggtggg atccccaata tttaaccatc aatggccaca aaggctactg atcactactg cagaggtcaa ggggtagtca gtgggcacct acaagactgc titootâdaa ccacttgctg gaggagcttg taacctccaa gaaacacaaa atggttggcc cctagaaatg gtctgttgag cccaggctaa actttaagtg atcctgacaa acttctgagt atctcctcaa ttatttatca gctaccttaa ataaatgaat gaatcaatcg gaggctcaga aaatacctgt gttggctgtt ctccatcctt atacagaatg gggagcaaac tcacccctga actgcacccg aatccatttt aaaattaaag agcactttgg gaggccgagg cacatggtga aaccccgtct acctgtagtc ccagctattc gaggttgcag taagccaaga ctgtctcaaa aaaaaaaaaa accttaagtg tacagcccaa atatcaagac acattccagg gacccacacc tctcctgctc gttttgccca ttcttgagct gtaatctcag cactttggga ctactctgga caacatagtg ggtggtgcgt gcctgtagtc ctgggaggtt gaggctgaag gagtgagatt ctgcctcaaa atcccagcac tttgggaggc ctggctaaca cggtgaaacc ttagccaggc atggtggcgg aatggtgtga acccgggagg gcctgggcga cagagtaaga tacattgtgt actttttggc tctacactgt gtgtatgaaa actacgggac aatttgctta tctggctgtt atgaataaag tgcactcatt tcgcttatgt gttggctttg taatgtgctg' tagagcggaa catgagggtg cggtttctgg ctcacacatg ggcttctcct ttggcgttgc atgaacccgg gcttctgcaa atttaaaggc ttcagttcan nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn cagcagtggt tctcaactga agacattttt tgattgtcac ggctagagag gctgctaaac atccagtcaa aaatgtccac gagactgtgc ctgagagcaa ttttagaaag ctcattttgg agactggagg cagggaaagt agcaggtgac taggaaagtg gaaagcacta taactaacta gtcctgccfct gcaggtctag agtgaagcag gtttgtgcgt gagatgtgtt ggactcacaa catatgtgtg agtctgcagc gatctgcgta tatatttggt tgtgcagaat taggagagac tggaagaata agaggagcct agaagggaag cagttcttaa gtaggataag aactgaagaa gggcaaaagc agttttggtg ggaggaagag ggtgttgagg gctttggtgc aaagcagaga atcatccata tcctggctca ccatcccact tctcctctgc gcgctacctc ctcaagcaag cactgaaaat gtgtgtctct tatattgcct tgttttacta acctccctgc aactagagat atgatccaga gcetggtaga agaatcgaaa taaatgcatg gaaaaatttg gttttagggt ttgggaagaa agaaggcaca gaccatcagt tatctotgtg tatatcgggg ctgggcgcgg tgggaggatc acgaggtcag ctactaacaa tacaaaaatt ggaaggctga gtcagaagaa ttgtgccact gcactccagc aaaaaattaa agtatgtcat tgaaatttta cacatctata aactcagact CCãtcãtãuC cggtggtaat taaccactat tcacacagat atacattgtc ggccgagacg ggagtatcac agacccccga ctcbacaaaa ttagctattt gagacgctga tgagccgtga ttgcaccact aaagaaaaaa tatggccggg caaggcgggc ggatcacgag ctgtctctac taaaaataca gctcttgtag tcccagttac cagagcttgc agtgagccga ctctgtctca aaaaaaaaaa atctggttta ttttgctcaa ggttggttct ttttgttgtg tccgtattcc tatcggtggg ttgctatgga tattcttgta aaatatcttg ggtggaatta acttggttat gctgaattcc fcctcfctcagg gaatctggag ttgtgactga actgetggta ctactgttgg ggcaggtgtg aatacattaa caacgacaga nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gcatagtttt gcctcagagg agcccagccg agaaggtact atctaacaat gcacaggaca agtgttgaga ggtttaggta gaaggagtaa ttggaaagtg ctgcttgtag aeagtgeatc aatttgggag ccactgaaat gcagaggcaa tggggatggg atgtgtggat gatgggcagg ttggaaggtg atggtttctc gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt tgtccatggg acatccaagt tcagaaacag gcctggggct agcttgagcc acaagagtag gtgcaccaag aagccaggtg gccaacagaa attgggaggg gaagggggaa gtgaagaggt tgtctgttgg gtttggcaat gagcaatagg gataacagaa aagtggccag cgagtctaca agccagctca ctcattgact aattccagca ctaccaggag ttatcctatc ctafcctgtca ccttctctgc ctgccgtcac tccattcatg ttagttctac atatgctcgt tctgtttgcc tctctttaag tatttgttga ggcttgtgtc catggtggat tgtgctctga tctaaactca 47040 47100 47160 47220 47280 47340 47400 47460 47520 47580 47640 47700 47760 47820 47880 47940 48000 48060 48120 48180 48240 48300 48360 48420 48480 48540 48600 48660 48720 48780 48840 48900 48960 49020 49080 49140 49200 49260 49320 49380 49440 49500 49560 49620 49680 49740 49800 49860 49920 49980 50040 50100 50160 50220 50280 50340 50400 50460 50520 50580 50640 50700 50760 50820 204

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gctaaacttt tatgtaatgg acaaggtcct cagtaagaaa tgtgtaacaa tcggagaagg agtggagctg gacaagagcc actatgtggg aaatatggtc ggaaggtaga actgagtgtt ttcctgagga ggggccttcc aatggggaac gccattcace gttggccaag gtcacttttc ctggcttcct tttctcagtg cccgttcctg agggagatgg tttagcagct cccagcatgg ggctgtgtgc tctgttccct tgctctcagg tgaagccagt cttcaggaag ggcagttcct aatccatcat tgcctgtcaa gttcttccag tcaaagaatc taattgcagg ctgcagggtg ctggagctgt aggggcatcc tggtgcacac cagtaccagg cctaaaçttg ctgtcaggtc ctccaagctc cagtgatgag gggtatcgtt ttgaaattca agagcctggg caaaagtaga ggtagcattc gtcagggctc caggactgaa tggagccaaa gaccttgtgt agtgcctctg gaggccttct tgcttcttot tattaggaac tggaatccaa acatgtgaat acttcataaa gcagctatta agccaccctc gctaagctgt tgagggtccc ctccaggggg aaaaactcct tgttgtcatg gcaagattat aagtaccaaa cttatctgag ggaccaggat tgatcatgaa aagactttga gcaggggcta agatggggca catggtctct agcgggaaga agatctcaca tgttgtccag cttgcagtgg cccagttaac tgagggtggg atggtctgag tccatcttac tgggaccctt gecttgaggg tcaaacaact ctaggtttto tcatctggag ggagttgcag tcctcgaggc gatggagaat agagcccbgt tttccttaaa atttacagtc aagggccaag aaaaaaatca tcatggaggg gttcatggtc tggggaggga ggtggttttt caagagctcc atgtttttct tctgaccctg ggatgagccc ccctttggaa tgtagtaact tcaacatttc ctcttgctca agtcctgagc caagtgggcc catcagtctc atttactaag ttaatggcag aggaaacgga gtcaggctgc ctggcaccca tgggtactgc tgg ctttgataga ttttgtcttc gaaaccacag tatctcattc tgatgatatg agtgctagac tcagacactg ggatttcaga tgaacagtca taaagttcaa tctafcgacct aagtttgctt atcattttgg taggagagtg gaggtggcct gacaagggtc agactttgca atgggaagca gtgaggtggc ggggaggcaa gggagcagag acccatctga tgecaatcgt gccgatttca cgttagctct aagcagttga gagagaatcc ggagagaatg ctctctgctg ctctgccaat ctgtattagt catgtttatt tgctcagggt tttagggttc ggctgaggtc tgcccacatt ttcccttgga ctcttttatg gtcaactgtg ccagggatta caggacttta ctcagtaaag tttggacctt ccttgaagcc tgcaggbgga ttagtcttta ttggtattga cctgttgcaa gacagcttgt cccgagaafct gtgctggtat ttagggctag ttggggaagg aaggcactgg acaccacagt ccttgtgagt ttgaaagttt caattactaa gcagcagaaa gtagctcatg agaacaggtc ggatgttgta aactccagga ctttttggtc gcccagtcat aaaaatgaga gaaggggtga atttctcaca aggtacagaa ccagtcaatt ctgtatactt tcctggattg actggtttcc gttgattagt gggcagagtt tctgaaggag taaatgttct gggtgggtgg tttaaccagt acttgtcatg gatggtggta tggggacaat agcagagata ttactgcaaa gttcctggag gacgtgggga cttggtctat cagaacaacc ttcaccagct tcagccccag tggagcagaa gtgggatctc taccttcgtt ccctacaccc cttctattot agctcatcgt ctcacaaggc tcttccaggc ctgttttctt gcttgccacg· ttgaatcaoc ggatcacctg' gcatgtaaca tgcacagtgc ttggtgaaga ttagaggttc caccctagaa tattcatagt ggtgagggct agctgtcatg caccatctcc cagcccactc accaggagct agatcagaaa ggagaggatt aaaggaggat aggeagggct accccaaggc tgtgatgcag accgttcaac gattaatgct ataccagttt ctctccttgg aaattgcagg tagggaggat gggctcagac actcaatctt actagctcca atgcgttagc ggcctgtcct ggtgactggg ctacccagtg agtttaagga tgagtctgac ccagtgaatg tatgacctaa aagaatgggc eaattgatta ataggcagtg agagataata tgtggaaata gcttctttta acaaatgctt ccagtgagtt atgggtttgg ggcctgtgat gggagaagta gacatattcc gggaaagagg ctgtgotggt gtcaattgtt gcccagtcca tttatctgcc agatcaggtc catgtaacta tggcctgaat attttccagc actgtaaatt gcataacaaa gagttcatca taaaatcaag tcacgtggtt gctgactgtc tgcgtggtct cacatggttg attagatcat tcacacaacc accaggggac acagtggaat tcttgccttt acatcacacc ttccaggttg gaatagtgtg tgttgggggt aaggtgatct ttgtagaaga acagcacact agattaaatg gactgagtct gcctaagatt gaggàttaaa ctccagctct ggaaagaatg ctcatttatg ggtcacactc ctgtgctaaa ctgatctaag aagggccgga cccactgctg cctggatcaa gtcaacgcca "SttCâââãt tgcaaaggaa ccaccaagat cagctcacag aggtaggtat acttgcccag ttggactgtc ttgatgaaat aagagagact tccctctcat attaattcat aacaagacag aacaagaaac aatgtgatga gaaagagttc tagottggcc tgagcttgta gttaattgct acatgttatc gacggactgg ttctaagctc ataatgtcac tcgtttctaa ggggcatcca tatctcccga ccgtggggat cctggagtct gaagggccac caaacctccc agctcctcag tcaccgtggg ttgcctcaaa gcagtgtggg atgttgtctg gtggcagaat agatgagggc tttccatcct gactctctga acccatagag acaggagtaa aactgaattc gtcattcttg tgggaagtca atgttttcta aaaagctctg agctgcatat tgggcatggg ctgctctgcc gcagacccct cccccacaag cagaggtgat gtttaggaac caggatcctg eggagatgat tcgotcccat tgcttatcag tcattggcac aaagaccctg tgctgcatca tagaaaaatc aaaccagaca ctgagaccta tgtatcctgc ccgccagaga cttgaataga gctgaaaatc ccataggaaa catgcatgct tgtcatccct gacacgacac bgactccaga tttcagggtt tccctaggag caccttatga 50880 50940 51000 51060 51120 51180 51240 51300 51360 51420 514S0 51540 51600 51660 51720 51780 51840 51900 51960 52020 52080 52140 52200 52260 52320 52380 52440 52500 52560 52620 52680 52740 52800 52860 52920 52980 53040 53100 53160 53220 53280 53340 53400 53460 53520 53580 53640 53700 53760 53820 53880 53940 54000 54060 54120 54180 54240 54300 54360 54420 54480 54540 54600 54660 205 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ cagtaatcct ctgtccaaca gceaaagagg tcctgtgggg agggcttgca gatgggagtg 54720 cgcagagccc agctcaaagc tcctgactag gctcttgttg agtattcctt tgattcctgc 54780 ttctgtcttt ttaaatcaat ggagacaggg gagggttatc tccatcctcg gctcaagatg 54840 aaatgcatcg ttoctcgttt ttctoattcc ttccoaatgt gtgtactgtt aactttagtt 54900 atgaaggaaa ttacagtgtc ctgtgcatat accaaggctg tccaacctcc acacotttgc 54960 tcaagctgtt ccttctactt gaaatgcctg tttccttccc ttctaattgc atctttccat 55020 ccaggtagga atcagctcct tggttcatgg agccttttct gctctgtttt actatgcatg 55080 gacttccttc tgaattagca gaggatgttt cctagcttgg tcttaaccct tctccttttg 55140 tttgacctca atttactcat cttacaaatt aggttgtaag ctaattgaat acaggatcta 55200 tgcttcac-te tgattttato tcc-acctggã tagc-ateatt tttçfaçaeáe aageaggeat 55260 atgggagggg agagaagttt ggtgccagaa agaactggat ttgaattcta accctgttgt 55320 ttacgtgagt acgttactta accattaatt acttcaatgt atatttatta agtacctact 55380 atgtgccggg cactgCacta agcaccaagg atacaatggt gagtaaagag atgcagcctt 55440 caccatcacg aaggaagaca gatgttaatc cattaaccaa gtaatctcac aagaaaagta 55500 aaatgactaa ctgataagga caagcccctg gagctacaag agggtgtata cagggcatcg 55560 atccaataag ggcagtgttg cggggagatc aggagccaca cagagcctgg gttgtctcac 55620 ttggaaaatg gggtatcaac cacctacctc actaggtttt taaaatcagg ttaaatgagg 55680 taatacttgc catgaacagt attttgttga ttgatgattg attgaaacgg agtctcactc 55740 tctcgcccaa gctggagtgc agtggtgcaa tctcagctca ctgcaacctc tacttcctgg 55800 gttcaagtga ttctcctgcc tcagactccc aagtagctgg gattacaggc agccacccct 55860 atgcctgact aatttttgta tttttagtag agacaaggct ttgcaatgtt gaccaggctg 55920 gtctcaacct cctgacctca aaagatccac ccacctcagc ctcccaaagt gctgggatca 55980 caggcatgag ccactgeatc cagccacttg ccatgcatgg catttaaaaa tgttcagtaa 56040 atgttaccat aatgaaggct ggtaçgttgg ccaactgagt ggtctgattc agaaggaaag 56100 aagttagaca tacgtgaaca tttcctgtac ttgaagatcc tcaggacagt gactcctaga 56160 cccatcttcc atcaeagtca gctgggaagc ttttaaaaaa atgcagacat ctgaccttca 56220 cgctagacct attagccaag cagaagtttc tgggcagggc- atctgcatat ttttaaaaat 56280 ctttaataag gcagcctcaa aattacagat tcagcacgcá tttaccataa ccactgaaga 56340 aatgcaaagt tataaaaaga agataaacaa caatctgtct cctgctttct tccctctcct 56400 cccctgcttc tggaggcaac aaggtcaact atttggtgtg attcctttta gcattccctc 56460 catcaatggt cacataagga tgctcacaga taagcaccta tgcgggggtt ttttttttcc 56520 ttgtaaaaot attcacatao taaatacttt cctcagtatc ttgccttttt tcacttcatg 56580 tcaoagaaao atctcttcag gtttatagat acaggtccag otottctttt catagccata 56640 taacattctg tagaatagag aggacacatt ttactcagtg tccgattgat ggatatcaat 56700 attgttttca tttctacaaa tagtcaagga ataacataac tctgtaaaag ttttattact 56760 tataggcgca tttatgccta aaggatagtc tcaaaagagt gaaactgatc aaatgtgcat 56820 ttttttattt taataggtat ggacagattt gttctcaaaa tgtttgtggc agttcaaaac 56880 accagtaaaa caggggagat atgtattttg gaaaagcacc caaggcgatt ctgaagtgta 56940 gcccaggata agaaccattg cccagagctg ttccagatgg cccctgggtt cctgaagtgg 57000 gtatcgggag agaaatcttc actgaatgaa tgagtgggct ccccagggaa gtgatgaaat 57060 ggtccttatc agccttgcta tctccctctg acagaggcaa actctctctc cctgggggaa 57120 gttcctccaa ggcctctata taagaagtct ttgtgagagg aagcaaagaa ggacctgggc 57180 ettgggaaga tctaaagacc caggaaggtc tctgggtggg tgagtgcttt ctctgctgtg 57240 gtggagctgg tgacagttta ttctcceagg aggtccctgg ctgtggctga cagtttctgg 57300 agggctggoa ggcgtctacc tgtggctttc aggttatgag gatgtcagca ggggcagcct 57360 tcatcctctg ccttgcacat tccttctgcg ggatgtgaaa gtgctccttg gctggggaaa 57420 ggagatggtg gagacatgga ggagggtgtg ggtggcttct tgaactctga ggaggggaca 57480 taccttctaa gtcctatgtg ttcctaggaa agccaataat cattgcttct cccgcctttt 57540 ttatgtcata gactctgagg gacccattaa gtacaaacaa ataagcgtaa tagtcccttc 57600 tttacttccg ggcctgaagg aaagccagcc tcagccaccc ctcagggttt gctgcgttct 57660 gtttagaaag aggtccttgc gtcctggatc ctggagcatc aggagctggg cttggcatga 57720 gcttttctgg cccatcctga tttctattca ggocttcttt ttctccacct cactcccacg 57780 gtcccctaat ggtgtgattg tgatgtgtgt gcatgtgtgt ctgtgtgtgt caatgacaaa 57840 ctgtgttctc cgttgcagga taaagccaag atgaaactcc ccttacttct ggctcttcta 57900 tttggggcag tttctgctct tcatctaagt aagtgttttt tgccttcagt cttfcctttct 57.960 ctgttttttc cctttctatg gtagatgggg tcagagttac acacccaccc ccttotttga 58020 tcgtcttcta tttctgaatt tctgtgtgct taaagggatg gggactctat ggccaggagt 58080 tgaaaggatt tctcaaggcg tctgttatgt ctgtggtctt ggttctactg tgacattcoc 58140 aattttgtcc tttctccatt atgcttactt tgagcttact gagtgccttc tctcctttaa 5B200 ctctcttagc atcgcoatga agtaggtggt attgtatacc catttcacag aaatacagct 56260 ggtggatgat ggaaccagta cccaagccca tgactgcocg actctaagtc catgctctta 56320 accaccttga ccttgtcagg cagettgggt tcccctcata gagactgggt tccaggttcc 56380 ccttcccagg cagagttgag cactctgatg cccagggcaa ggtgtgagct gtctgtggtt 56440 ctggggagga acaaggggag atgtgaagga aggacactta gctatcctcc ctgccagggt 58500 206 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ctgagacttc cacctttgag acccctttgg gtgctaagac gctgcctgag gatgaggaga 58560 caccagagca ggagatggag gagacccctt gcagggagct ggaggaagag gaggagtggg 58620 gctctggaag tgaagatgcc tccaagaaag atggggctgt tgagtctatc tcagtgccag 58680 atatggtgga caaaaacctt acgtgtcctg aggaagagga cacagtaaaa gtggtgggca 58740 tccctgggtg ccagacctgc cgctacctcc tggtgagaag tcttcagacg tttagtcaag 58800 cttgggtgag tggcctatgg ctgaggctga ggtgggagca tggaacgggt gtgggatatg 58860 cccccagcat tgctatcact ggctcttttt cccattgagg gccctggggg tgtcagtaga 58920 acctgagcct cagagaggtg ttggggtaag aggggagggc cacctacaaa cagaagttgc 58980 attttggtct ccaaccttca aatggttgtg gcaggggagg gagggaatga attgtgggga 59040 ctcaagaccc atgtgaattc atgtaggaag gatgctccat tctttgtcfct ttatcctgcc 59100 ctgtagttta cttgccggag gtgctacagg ggcaacctgg tttccatcca caacttcaat 59160 attaattatc gaatccagtg ttctgtcagc gcgctcaacc agggtcaagt ctggattgga 59220 ggcaggatca caggctcggt aagagaagtg tgaacactaa atggggtgca cctgctgatc 59280 tcagceagea ctcagcttge atcagatttg tctgtttttc tcctgtataa tctccagaag 59340 aaccagggat agatggacac ccacagacaa cactgagggg gctgcctggg cattcaggga 59400 agagctaagg atttagaatc aggaggtttg ggtccaagtt cctttccatc tctcactatc 59460 tatgtaactt aagttagctg ggcatggtgg tgcatgtctg taatcctagc tacttgggag 59520 gctgaggcag gagagtcact ggaacctggg agacagaggt tgcggtgagc cgagatggag 59580 ccattgcact ccagoctggg caacaagagc gaaactccgc ctcaaaaata aataaataaa 59640 taaataaaat aaaaaaaaaa ttaaaacaag accatgagtt tgtttcctca tctctaggat 59700 gagttggcaa cccttgttct accttttgtt agggctggaa ggacaagcct gtcaetggga 59760 tgcatagaat ctgatggtga taattgccgt ggatcagcat ttcagatgac taggacagtt 59820 cccatcatgg tccagcaggg aagggcccat tgcccggtgg gcagcagaaa gagctggcag 59880 atacggggcc aggtctgctt ctctgccttc cctctgcccc atcccttctt cccctcttgc 59940 tttctccagg gtcgctgcag acgctttcag tgggttgacg gcagccgctg gaactttgca 60000 tactgggctg ctcaccagcc ctggtcccgc ggtggtcact gcgtggccct gtgtacccga 60060 ggtgaggtgg ggctggggat gaacgatgga aaggtctggg agatgggaag tgccccaagg 60120 aggagatgct acaaagagcc tgaccctttg tgggagaggc ttcctgggtc ttttatatac 60180 tctgactcca cagcagtgtg tgggtgggaa aagaggccct cctgtgggtt gagttgggat 60240 ggacaagagg ctgaaagtcc ctttctgttc tgccttcaca ggaggccact ggcgtcgagc 60300 ccactgcctc agaagacttc ctttcatctg ttcctactga gctggtccca gccagcagtt 60360 cagagctgcc ctctcctggg cagctgcctc ccctcctctg cttgccatcc ctccctccac 60420 ctccctgcaa taaaatgggt tttactgaaa tggatttatt ttctcctctg atcgcggatc 60480 cactctgctt agcectcatt gaaacttctt ccttatcatc tctccccaca ccacaacttt 60540 catagaagtg tcagaagcta ctactccttg aggaggagga tggagggtgg agttgggtct 60600 atggagcctt ttggagatgg aggaatgggc tcagctagtt ctcttcatag aacacctgat 60660 tactgggcac ctgcatagtg ctgccaggac ctttcaaggt tgtaggtaga ctcccaatgg 60720 cccagtttgc atctctgtaa ccaaaggcct tttctctctc tctctccaac cccagaactg 60780 tggttggttt tatatgtaag gaagttaaca tgtccctggg aacagtccac aacattcagg 60840 aatgaatgta taagtaccgc aatccccggc ccctcaagtg gaataaatct aacatgtatt 60900 gggcaccatt tcccagtggc ctgctgtggt agttggcctt attccatgca tttttatggg 60960 etgccttccc ttcctcaact gcattctctg ctccttccta ctctctgcaa ctcccaaata 61020 aacacttgta cgcaactccc tctctcagga tctccttctg gggaaacctg atataagaca 61080 gcttgccatg cgtoagactc tgaatgaggc ctgggaatac aagaêatagt cctctggcac 61140 ttgggatata tggttatttg taacataggc acaaaaacat ctactagttg ttatcgctta 61200 ttgagcaccc acaacatacc ccetgctgtg gcaggcacct tgcctagatg acctcatgtg 61260 atcaataatt atgagcccta ttttacagaa ccaggctcag agaagttagg atctgtcaaa 61320 agacttgccc aagactgaac cCctaaatgc aactcatatt gaaattcaac tctgctccaa 61380 agcatgttac tttaaccctt gtgcttttac agctggctac tctcccctta tggtcacacg 61440 gggatgaagc acggggggag gaaagccaga ctgtctcact cttgggttca tcttgggaca 61500 caggacacca gcccagctgg aggtgaggga gctttaatca gaggggaggg aggaaggcat 61560 tctcaacccc ttcfcgtacta gggaggtoag cagaagaaaa taattcaatg ttctaaagcc 61620 atttttttct ccagcattcc tccaattcat agatcttcat atgggattag gggcteagag 61680 aggggtgaaa caagaactet atttttttgg agtgtggtat agagaaggga tgctacttct 61740 ctaaggtcac atagtaagtt gagaaagaga gagaaatcaa actcaggttc atttcaacta 61800 ttgttccaca agaatctgtt gatttcaaag atggtggact atgggttcat ccctgtggtg 61860 agtgctgtga ggatgcagct gaggtggaac tttcactcct tgccctcttg gactttatat 61920 tctggtgtgg aaaggcattg cttcccttat ttcaatatta acaacaaagg gtaataatat 61980 tccccattta ttaagcattt actaggtgtc aggtactgtg ctaaatgtta ggtgaacttt 62040 gtcttgttcc tcataaatct ctgccgctgt gggtgtgtac tttgacagaa gtttgacttc 62100 cagtccacag agatcttett tgggggagta atatcaagaa ggggcacgaa ggaagctgca 62160 gggctcctag tcccatcctg tatctcgacc taggcatgtt tacattggtg cattcactgt 62220 gaagtttccc tgagcagtcc actctatagt gtgctttata ggagcacatt gtacatccat 62280 tgaaaaattt ttcttggccg ggcacggtgg ctcatgtctg taatcccagc actttgggag 62340 207 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gccgagacag gcggatcacc tgaggtcggg agtttgagac ctgcctgacc aacatggaga 62400 aaccccgtct ctactaaaaa tacaaaaaaa ttagccgggt gtggtggcac atgcctgtaa 62460 tcccagctac tcaggaggtt gaggctggag aatcgcttga acctgggagg cgaaggttgc 62520 agtgagccga gatcgtgcca ttgcactcca gcctgggcaa caagagcgaa actccgtctc 62580 aaaagaaaga aagagatttt ttctttttct taaaaagtaa aaatcatgaa ataaggggac 62640 tgggctaata ttccaaaata tgggtttgtg tgtgaatttt cctctccagt aagatactaa 62700 ctaagctctg tgaaactgtt tatctatggt tctttatcat tgaatccttg gagttcotta 62760 cactgtgcag agcacagagt aggggctcaa tcaacagtgc actcattgct ttttcataga 62820 caagggccac cctcactcaa ctcatgtgcc aggcatagtt ctgagagctt tgcttaagct 62880 gatnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 62940 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnggtcact aatttggtat 63000 agagttatgt tcattgattt cattttattt tgtttctgat ttttaaagat tgttttactt 63060 gttttcttcc tattattatt ttattttatt tgtaaaacat ttacatatca gacatttaca 63120 ttttcccaaa ggtaaaactg tgaaacaaga tatattcaaa gaagtttact ttccctctct 63180 gtttcCtgCa ccccttttcc tcttctttag gtaaccattt ttattttttt aaatataaac 63240 attgtgtagg tgtatataca tgtattagtc tgttttcatg ctgctgataa agacctatct 63300 gagactggga agaaaaagag gtttaattgg acttacagtt ccacatggct ggcaaggcct 63360 cagaatcatg gcaggaggtg aaaggcactt cttacacggt ggtggcaaga gaaaaatgag 63420 gaagaatcaa aagtggaaac ccctgataaa cccatcagat ctcgtgagat ttattcacta 63480 tcacaagaat agcgtgggaa agactggccc ccatgattca gttaccctcc cccactgggt 63540 cccacccaca atacgtggga attctgggag atataattca acgtgagafct tgggtgggga 63600 cacagccaaa ccatatcaat acatttccct ctcttttaga taaaaggtag tatactgtat 63660 acactattct gcagagtttt tttttttttt gatgtaactc tatcctgagg gtgctctgta 63720 gcagggacct ctcatgcctt ttaaccactg cctgggtetc cattacatgg ctgcagcata 63780 gttgccacag cattcctgta ctgatgacta tttggattgt ttccagtctt ttgctattac 63840 cagtagtgtt acaaagagga tctggctaca tgttcagggt ggggaggggc agatgtgtag 63900 cctgtcagga gggtattgca gtaatccatg actgagttaatggtagttta aagctaggat 63960 gagtcagtgg ggttggagag aagtgggcac atttgaatgá tatgtaggag gtgaatgatc 64020 agcattattg atgagtttga ggtggggcat gtggggaaag gattcgagga tgactcccag 64080 gtttctgttg ggacagtgga tggatagtgg ctcctcccct ttttccaatc ttccttggcc 64140 cttcgctgac ttctgttggg ttggcctaca gagagcttct ttttcctctc tgttcgccca 64200 ggttcctcca ctttggcggt ggccctctgc tcgacggtgc cttcgctggc cctgacatcc 64260 ctgctgtgcc tgggcttcgc cctctgtgcc tcagtcccca tcctccctct ccagtacctc 64320 accttcatcc tgcaagtgat eagcegetec ttcctctatg ggagcaacgc ggccttcctc 64380 acccttgcgt aagtggcctt ggggcgggct ctgtggagac ggacacactg gggcaaagag 64440 aagctggagg taaagaaatt gggaggcaag goggggcctg gaggcagtca ggtgcgggag 64500 actgggtttg ggggcaggtg tggagggggt gagaccagag gtggtgggaa ggatagaaca 64560 ttcatgcact tgagccttta catctgcggt gccctctccc tctgttttct acctggtgaa 64620 ctcgtattca tcctctgagg cccacttctg tttcagttct ccagggaaga aatggaaaag 64680 tgtcttccct tctttgtgcc cttagtactc tagtcttact tcctttgcfca gtgcgtgcat 64740 tgtctggcat gccatccatt tacatgcctg tcttttcttt cctggtgcag cctgcatgag 64800 ggtcctgtct gtttttccag ggccccgcat gtgccttctt ctgggttctg tgggtcaaat 64860 gtctgagcag agctgaagag ggaaaggcca gacaggtgtg gttggagggc aggcctagga 64920 caggggaget ggggacaagc ggccgacagc ccccagaggc caggcttctg cttggaggga 64980 gggtccctga agctcactgg aacccctctg gtttctctcc ccagtttccc ttcagagcac 65040 tttggcaagc tctttgggct ggtgatggcc ttgtcggctg tggtgtctct gctccagttc 65100 cccatcttca ccctcatcaa aggctccctt cagaatgacc cattttacgt gagtactggg 65160 aggatgggga tccctggcag gaggcctggg ccttaggcct tggctgcccc aaatctggct 65220 gtgatggcct gggtatgtag catggtgcag cfctcccaaag ggtctgtgtt attcaagtat 65280 ttggggcaaa agtatttgtg tgtgtgggga aacagacatt ctggagtagg gtggggaatb 65340 ctcacgaaac ttcaagcaaa atcctgagac ctcaaaggtg tttcctgctt gtggtgagtg 65400 caggcccacc ctggcctctc ccctaggccc acacagggtt tccacagttg gccccaggga 65460 caggacctct gtgctttcac ctctgtgtcc ttacacctgg agggatgctc tgaggtcctg 65520 ctctaggagg tggtcgtgag tctectgctc tttgcagaaa ctgaggctca aagaggttac 65580 ttacgtgttc agaggcacca gctaaggagc aaaagtcaac tttgaattct gtgttttgac 65640 tactgcacag ctctatttgc ctcatttttt afcttttaaag eagcaaatct tagaatagga 65700 gtttaaatcc atcacttgga gaaaagaaag actaaatgtt ttttgttttt gttttggaga 65760 cacgatcttg ctttgtcacc caggctggag tgcagtggca caatctcggc tcactgcagc 65B20 ctcgatctcc tggactoaag cgatcctctc atctcagcct cctgagtagc tgacactaca 65680 ggcatgtgcc accatgccaa gcttatttta ttttattttt ttgatagaca ctggggtttc 65940 gctatgttgc ctgggctggt tttgaattcc Cggcctcaag cgabccaccc gtctctgcct 66000 tccaaaatgc tgtgattaca ggcgtgaacc actgtgcatg gccaaaagag taaacttgaa 66060 atctgaggcg aatgacttga ttgtgacatc aggtgaccca gtaatcagct gtgtattcta 66120 gcfcggtgcct ctaccagett cecatgtgae cttgaacatg teattgaatg ctcgctaggc 66180 208 208 atattcctcc tctaccccaa ccgatagtgc cagggcacca tagtgtctgg gtgaaaagta tcattggtca tggaatggac cagtgcttgc ttcctggatt tcacctcact tctgctctcc attcttctga cattettcca cccctttctg agtccctctg caattgcata gttcagaagc ttcatcttcc accacctttg aggacctcgt acacacacac acacacacac acacacaaaa gaaaagaatc teagttgcça agcagaCtga gaacttettt atttçaaaac agaagtgtcç tccaggggag atgaectggg ggaggaagtg ccgaagccta tatgtgcctg gatcctctgc gttgtcatgg cctcagctat gcttcctggc aactcacagc tctgggaaaa agaggagcag gccactgatg ctggatgacc ttggcctgac tctgtaaaat tgagatgaat tttggtgttg ggttttagga atagtgacag agteaggcca cttgaccgaa ggatttctga cagactatct tatttacttt gggcatttaa aagaaaattt gcttctgtgt ctaaggcaac tactgtttcc gtgtgtgtgt gtgtgtgttt gtgtgtatgt tgagagggta gggaatctgg ctacacatct ggaaccctga ctatgaCtca ccccgctggt ccaggaaccc ctctgcttcc tcttcctctc actcctcact acacaccccc agctagaagc gtttcaattc tgcccctcag cagctgggca cccacctgca aagtgeagtt aatcatttct tcattgcaac tgcctagcac atggtaggag tgacccttgg ggaggacggg ggcaaagagg caggtgggtg ggatgggaga atctggggca agagggacta ggaaagaaca gtgggaggca aggcaggttc atccatccat tcattcaaca gccctgtcct gggtgctggg gctataaaga tcctcctgtg gatgtegggg tgtaatttcc caccaaagtt ctagtggtgt ctattagcag gttaccctgc tcaaaagctt tcagcagctc ctagcctggc attcaaggct gtcactagtg ctcctaccaa cagcggggea gagcccaccc tgtgtgtgca ccagttcctc tgcgtgggtg ctggtctgct gggatcctgc tcaaaatgtc ccagcatgto tgagtccctg gcacttggtc cacatcatga ccctcccacc ccttgcctgg tcgcctggct ctaattaatc tgtgcttacc atgaatgatc gttgaatgag tggattcttg agaaaaacac atgggggtgg gggaggtgca aaatctcagc tctgtcactt actttgtcag tcagtatggt gggagaaata gacatgcctc tcgagtgctt ggcatgtggt gggttgaaca aaagccaaaa aaagatgcct aatgtccacc tatttgggat attatttggc aatcaaaaaa tcttgaaaac attagactaa gtgaaagaag ttaaatatga aatatcgggc cagggtgcag gatgccaagg tgggcagatc acttgaggcc cgaaaccccg tctctactaa aaattagccg tacttggttg gotgaggcac aagaattggt caagatcgtg ccactgcact ccagcctgga aaaaaaaaaa ggaaaaagaa aaaaagaaat aagtagattc atgattgggt aggcctgggt ggaaggggtt tcttttgggg tgatgaaaat caataaaact gttatttaaa ggaagaaaag gacttctgtg agaatcagaa atgatttctg agaagtgacc acgtgcgcaa ctctcatcgt tatttattta tttattttga aacaggttct tgtgatctca gctcactgca gcctcgacct

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ctctgtttct ttatctgtga aatgggcttg agaatgaaaa gtaactgaaa gtccttcctc gaatataaac tcggtagact tctggtccct ttcattgagc aacagttctg ttgttcagaa ctgcaggtga atgtgatgtt catgcttgcc gtatatcggg aatgccgtac ttggaaagaa cctcactttt cagccccgag gatggttttg gtcccaaaag actttgccta tcccagcaaa taaagacaca caaggacgtc tgcgcagcaa tatçacaeag actcaaagca aaggeatgtg cettgcactt agccttggca gacccttgac tgtcaactat ttctttaggc ctgtttggct cacgggttaa attttcaggt gaagagtgag tctccctcaa gagtgcagcc ttggctagag acagggttcc ctgggcccag tctcagccca cctggtctgg tcteagaatc acttttccca aaagttcttc ctggagcaga tgtcctagaa ccccaagggc catgggagcc agctgacctg ttggggatgt tttcaagaag ggatataagt ctctcgggaa taattttata gaaaaataaa atctctctag gctttgggcc ggggctgtgt gtatgtttct gaggaggccc taccctggca agtgtggcag ctggacccag aggtggggca cctgggatgt gggcccagag acttcctccc cacatcctta actaacttta gcagaaccct gctggatgga atcagaaatt cctagtttga agccccttaa ceactctgag tcaetagttc atctctgatg gcgattgtga gaatgtaaag cacatgaggg tttgctcctg tgtttactca gagaagttga gggtgcagga ggagagatgg cacctgctgt ctcattccca ccttgctagg gggggatggg ggtggaaggc agggggtggc aatgtttatt gagcacctgc cacgtgtcag tgcagaaggg tctgaaaccc agctcttcct aggggccagg agcctgggtc tgagggcgga cgtttaaato taatggatgg atttggtctt cccactgtcc acaggacaaa aatccagatg tgatctcaae çtctcccctt cectctttac ctgtggacca agattcccag tctctgggtc gctcaccctg cctcagcttg tgaaatccat atcttctcca aaaatcatta ctcaggcttt acacccttcc tggtgactgg catttgcctc gcagcatact ccaggaggca aggtctgttc atccacatgg taccagctaa ttcttgttga ttttggcctc agaaccaatt agaaggagcc gtgtggtgca gtggaaaaaa acccttctgg ctctgtgact ttggatggac cacttctttg tctgggctgt tgtaaggatt acaaattagg gatcacagct agcattacag atgatatatt agttggtgaa cggacaaagg aaatgtacca agtactgaca cctgctacaa cacggatgaa ccagacacaa gaaactgcta atgattccat tggctcatgc ctgtaatccc agcactttgg aggagttogt gaocagcctg gccaacatgg agtgtagtgg catgcacctg taatcccagc tgagcctggc aggtggaggt tgcagtgagc tgacacagtg aggttccgtc tcaaaaaaaa ttccagaata ggccaatctg tagaggcaga gtggaggcca tgggtagtga tggctaatgg gggtggactt atggtatgtt aattatacct atgcctggat tccccaggaa gtgtacagta gggaagatgg gcgagaggag agtaagtggg tctgccctga gagccttcct cctgcaactt cactctgtta ccctggctgg agtgcagtgg £6240 £6300 £6360 £6420 664Θ0 66540 66600 66660 66720 667 80 66840 66900 66960 67020 67080 6714 0 67200 67260 67320 67380 67440 67500 67560 67620 67680 67740 67800 67860 67920 67980 68040 68100 68160 68220 68280 68340 68400 68460 68520 68580 68640 68700 68760 68820 68880 68940 69000 69060 69120 69180 69240 69300 69360 69420 69480 69540 69600 69660 69720 69780 69840 69900 69960 70020 209 209 tcctgagtag ctgggactac aggcgcatgc atttatttat ttatagagat tggggagtct ctggactcaa gtgatcctcc caccttggcc cactgtacct ggcacctcct gcaacttctt actcagagct ttcacaagtt ttgatttcaa ctcctgtaac cagcctcagt agagaggaac acagtgccaa gctgggccct tccatcaggg acagcataaa ataggaattg tgtgatgatc catatgatca gccccatttc atagatgaag gagctqgtat ttaaaçcagg tctgtctggc tttactttac atttcttctt cttttcttct tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcctcttctt cctcttcttc ctcttcttcc cttcctcttc ttcctcttct tcttcttctt tcttcttctt cttttttttt tgaggtgggg atcatcatac ctaaatgcag ccttgaactc tccaaaagtg ccaagatttc aggcatgagc taagaaagat atcatttaaa acagacgaga accattaatt ggaccactca gagataatca catttgactg gatgtatgtg ataatttaaa aatagtagcc aaaaacatga ttttaaatgg acgccttgtt tatccccatc oaccccctac tcctagatga cggtgagcca gagggcagcc aaaaacactc agaaggcgag ctgttgtcaa tattccagag aatgacctca tacccgctaa tttagctgaa ggtgctggca ggtcctgccc agaatcagag atgatttcta gggaaaatgg acaggcacag ctctcatctt tctgccctga gtttgtttgt ttgtttgttt cagatagggt ggcaagatca tggctcactg aagcctcgac caaagcttgg agtgatggtc ccagtggtta tcaggggatt gatgactctc aaatgcttca cctctgacat tctttgggaa gaacattttc ctctggtgat aaggagttca cagacaggac atggcttgtg ttcacaccag accctccagg ttgtttgttt gttttttgag acagagtctc cgatctcagc tcactgcaac cttcgcctcc ctgagtagct gggactacag gtgtgcacca agagactgtg tttcaccatg ttggacagga ccgcctcggc ctcccaaaat actgggatta ttgagttttt atgttctaat cccaaacatc tgggtccagt gtcacctccc aggcctgcag gctctgggct ttgcaggcac tgatcagctg cctcacctgt aatggaaata ggtaccacgg tgggaataaa aggtagcagc agcttgggct agttcctccc cacacaagct ctggcactta aaaatggagt aacaatagga atactttata gtcaagcact tcaaagggga cctggcatgt gtagcaggtg tgctgtgtgt ggctgcaggt gcgtgcacca cacttcacac cttgtggagt aaaacctccc tgcaagcact cgctttagct tttattactt ggaatgggaa aacttcaaag ccaaatctta agccaaagtc aatgaaaaat ttttgtctcc ccagcagtca atggagagaa ggcagggcta tgaattcctt tcagagccct tgggtcctgt tatcacgttc ttagattggg tgcctttgtt tgetacetat aatgcctacc acgtgaaaag tgctcggccc tggcacatag tttattacat acgcaaaatc acattacagg tttttgtttg tttgttttga gacagagtct cacgatcttg gctcaecgca acttctgcct gtagctggga ttacaggcat gtgccaccac gagacggggt ttcaccatat tggccagact caactcagac tcecaaagtg ctgggattac

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gccaggctca agcaatcctc ctgtttgagc caccacatct ggctaatctt ttatttattt cactctgttg ctcaggctgg tgtcaaacgc tcecaaagtg ttgggattat gggtgtgagc cctcaagtgg aaccaatgag gaagcaagca tcagcaacgg gcttccaatg caacccttct tggaggtgaa ttggccccca tcacaccccc ggagaacaca tgccgtgtaa gggacagcca ccttttaagc ctattcagcc cagggaagtg aaaqtcaggt tcacccatta gcacattgtg tcccaaggtc acattcattt agacattacc tcttcttctt ottcttcttc ttcttcttct tcttcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcttcttcct cttcttttct tcttcctctt cttcttcttc ttcttcctct tcttctttct tcttgctcta ttgcccaggt tgaatgcagc etggccttaa gcaatccccc tgcctcggcc caccatgccc agcctgcatt tattctcttg aaataaagag ggacatgaaa aagacgcatc tggttaacat gttggtatgt tccctcccgt tgatctcata agcttttcct tatgtaatca ctgctcacaa ccccatctcg tggttctgcc tccctttccc cttccctgcc tgtgtggggg ttggtcagca gattggagag tgcaaataat gtgggcttat cacaaaagag caccttçgga tcactatcca taatctggtg ctaactgtac aggtgctgct aagaacaett ctattctgtg gcgagaggga gtaagcagga gaaacaaccc gagccttcct cctgccacgt ggttttgttt ctcactctgt cacccaggct ggagtgtagt ctcccaggct caagcagtcc tccccaaatt tgtctaggag ccctttttcc tgccagcccc ggtgtgacat gggcacagca gtgagtcatt catccaggct tccaggcata agatccagtc aatgtctgag tgtatcttaa acccaggacc gattttgagg tgttttgttt gtttgtttgt tctctgtcgc caggctggag tgcagtggca cggttcaagc gattctcctg tctcagcctc ccacacccgg ctaatttttg tatttttaat tggtcttgat ctcttgacct cgtgatcctc caggcatgag ccaccgtggc ccgcccaatt tgctcacagg cccctcagca tattctttcc gctggctaga gcagtagggt gtgtgggaaa tgtgacctta accaccctga acctcagttt cagtttgttg caaggactag agagtaacct ctggagatgg actgtccaag accaacttcc gattcctggt acctccgctg cttcatctgt gagttgtaag gattgagtgg ctggatgaac agtgagtgat caatataaac cacctggctt gttattagta acatctgtgt gcccttcaga ctggaatgcc actattatag ttcaggatag tgtctccacc gaacaaaaca acacaagttc gcaaaaaaaa aaaaagactt tcgagttacc atcaatcttc atattcaatt tttgcgatac tccaagcaca cagaaatgtc aattaccagg gggctgggga agagtgcagg cagacagatc tgtccttgta ggagtcatga agcatcttag tcagagagta ataaggataa gtaaggctct taggtccttc attaatggca getactaatt tcaagtacgc tacatgacag tgaaacagtt cgctctgtca cccaggctgg agtgcagtgg tcaagcaatt ctcctgtctc agcctcccga gccagctaat tttttttggt atttttagta ggtctcaaac tcctgacctt gtgatctgcc 70080 70140 70200 70260 70320 70380 70440 70500 70560 70620 70680 70740 70800 70860 70920 70980 71040 71100 71160 71220 71280 71340 71400 71460 71520 71580 71640 71700 71760 71820 71880 71940 72000 72060 72120 72180 72240 72300 72360 72420 72480 72540 72600 72660 72720 72780 72840 72900 72960 73020 73080 73140 73200 73260 73320 73380 73440 73500 73560 73620 73680 73740 73800 73860 210 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tggcatgagc caccgcacct ggctgtgaaa cagttttatt gtgtttctgt ggaatgtgtc 73920 ctacccaacc tatagctaac tcctatagtt ccctcagttc tcagctcaga tatcccttcc 73980 tttetgtaet gttacctagt actggttttc atagcaccag gtacctctct ggcatagagc 74040 ttgtcacagt tgoagtttaa tgtaccatca taggatttta aaaatattca gttgtgtctt 74100 ccattaggct ttcatttggg aactccacgc aggcagcagc tgtatatttt gtattgccta 74160 ctgtatcctg agaactttgt accctactta gcacagaatg gaggctcagt aaatactgga 74220 catgagagag agagagagag agagaggaga gggagagaga gagagagaga ttcaacctac 74280 aatcccagct ctgagcttct agttccctga tggtgaggac tgtgatgtgt ctcacacggt 74340 aatgagcact tatgcagaag aggctcagaa aatttctcct catggccaac ggaagactca 74400 gagttctttt ccaagctcca ccgtttgctg gcatgcaaaa tttggactat cacttaagtt 74460 ttccaagcct: tgctttttct atccctaaca taggacaata ttcagcattg ttgtttgttt 74520 gttgggggca ccatgtttca ggcacttagt agattattgt accaccacat ttcaattggt 74580 cctcctcaag ccctgcaaca tctgtgaggt ggtcatcctt aacaactcac agatgagcaa 74640 caggagactg gggggatgag ggaactgcca aggaggtcca gettatgggc agcagagcca 74700 agaatggaac cagggtcttt tattttttta tttttttatt tttatttttt aaccagggtc 74760 ttttaacatc cgaggaccac attctttgtg ctttccaaat catcacctgc cccatgcaac 74820 ttacagggta agttacatta aacaacgtat gtaaatggct ttgtgctagt tattcaccac 74880 cacaggggaa gtgagtcacg gacaagagtg cagccgctcc attcggatcc tggctctgac 74940 acttacctgg aaaatgactt aaccattccc aggatcagct gtttgtctgt aatttaggta 75000 gtttaatggc acttgtgtcc tagagttgtt tagaaggttg aataatatgg agcacttaac 75060 atacttagca cctagaaaca cttcctaaat attagttgct gctgttgtta tcgttattaa 75120 aatttctgcc taagatctca tttcagggag cccaactcaa tctttgacaa gcttaaacaa 75180 aaattgcttt tcttcattta ttcacttaca cagcaaacat gaattgagcc tgtactgtgt 75240 ttccagaacfc gtgcaggacc agagaggcac aggtgaagga agcaaggctc tggctctact 75300 ggggaaacag caagaagatt gctacaatga ggtgggaaga gggctggact agagagaagc 75360 cctgattagt gtccttgcta cctttctctg ggagagccaa ggcaggcttc ctggaagagg 75420 tgatccttgg ctgaaacttc gatgaagaaa aggaaagagc gcagtggtta gggaggaaag 75480 ggcattctgg gcagatgaaa tgacatgtga caaaatatgg gtgatcannn nnnnnnnnnn 75540 nimnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 75600 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnngca ctccagcctg ggtcactgag tgagagaccc 75660 tgtctcaaaa aaattaaaaa aaaaaagtcc agaagaacat ttgggtctca ctctgtggcc 75720 caggctggag tatagtggca eaatcatagc tcactgcaca ttcaaactcc tggcctcaag 75780 tgatcctcct gccttagcct tgaaataagc ttggattaca gatgagccac cacacccagc 75840 cagaccatta ttcataatag ccaaaatgtg aaaacaaccc aaatctccat caactgaeaa 75900 atggataaat agaatggtgg ttgatccata caatggagta tttactcagc aataaaaaga 75960 agtcctgata catgctacaa ggatgaacct cgaaaacatt atgctaagtg aaagcagcca 76020 atcacaaaag gctacatatt acaagattcc atttaaatga aatgttcaga ataggtaaat 76080 ctaactttta tcacaggcaa agctatgaca ggaaatagat gagtggttgc ctagtgcttg 76140 ggggcagagg tgggggtgag gcgagtgagt actgctaatg gtacagagtt acttttgggg 76200 ataaagaaac tgttctgaaa tggactctgg tgatggttgc actactctga acatactaaa 76260 actgttaaat tatatacttg aaatgggtga cttgtgaggc atggaaatta tatcttaata 76320 aagctgtttt acatatttta catatttaaa aatgcaggtg gagggatgag ccctctaaag 76380 agaagcagga gtttgaggag gttctaaata ttgtgtggtg ggtactgagg catataaatt 76440 tgtcagacet catcaaaatg tatgatgtaa tcttcaagaa agttgatttt aaagaaacac 76500 caccagcacc aggtggagaa ggcaggaaga agttacacaa ggggtaggcc aagagtggtg 76560 gctcatgtct ataatcccag cactgcggga ggccgagctg ggtgggtgac ttgaggtcag 76620 gtgttcgaga ccagcctggc caacatggtg aaagcccgtc tctactaaaa atacaaaaat 76680 tagccagacg tgctcgcgtg aacccagggg gagaaggttg cagtgagcga agafccatgcc 76740 aatgcactcc agcctgggtg acagagtgag actctgtctc aaaaaaaaaa aaaaaagtta 76800 cataggggac agtggcaggt gtcaagggca ggcagggtct ctcctatctc caggataaac 76860 tcatagggga cttagatgcc atgtgggtcc ctaatagccc tccacttggt tcttgcagcc 76920 actcttatgt gtatcatttc atgtcaggcc tcttcttccc aacccaccca gcoatcccag 76980 cctggctgcc aaccccacct cctccagccc ctgtcacccc ataattgggg ccaggaggca 77040 tgggagagtc gccatctctc ggtgccatct gttgcatctt tacagataac catggctgga 77100 tgcggcagat cctggggtgg agcagccgct gttcagagca gtgabcaaga cctccccatc 77160 tccacccctc aaggaatcgg ttttcttcca tagccacatc aggtgctgtg caggaaggag 77220 ttgaaacgag aagccaggag caacgagaag gacactaaca tttattaagc actgcagact 77280 ctcacagcac tcccacggaa tcgatattat tatccccatt ctgaagacca ggcaacfcgaa 77340 gctcaatgtt taaggaactc accgaagtea ccaactgata aaagtgatgg aagctgggat 77400 tcaaatccaa gctaaacttc cttccaagct tactccacaa cacagaggtt ggggaaaggg . 77460 gataaaaaga gaggggagcc caattccatt tccacccagc Ccctgaggcg gagcttgtca 77520 gcacagctct ctccttccca gaataggaag atacccatca gaggcaagtc ctagacacca 77580 gcagtggtaa ctccctgccc caaggcagct gcagacagoo tatggctgta gttaotgctc 77640 ccaaagagtg ttagaattcc cactcccagc ttcggggcea ctcacacaag gtgattgaag 77700 211 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tggaaaccag caaatgagta cctttatatt aaattcctct aggactctgc ccactggatt gaagaggtcg ctaacctttt attttcaggc cagggagccc ggccatccac cctgcacaga catcatggtg catagagccc ccagaggtgc gtctgcgcgc agggccgggc gcagagcgcg ctagaagctg gcccctccaa gtatcaggtg ggagacceag gcagggctcg gagggggctc gcggatgggc cgccgcggcc agcgacaact agaggggagg ggggotttgg aagcagagga gaaaagaaaa gcaagtaacg tctcagccga ctccggtcac tcgcggcgcg tctgcgtgca cgctgtctcc agctgggctC ctgcgccccg acgcgcacgt tacatttcca gccctctgta cagggccgcc agagtggcac tgactaccct aattcggtta aaatgctaag tttcagaaga ctctoagcct taatgagaag atgctgagct tttacctacg aaaatttttt cccagaactt ctgga CââCã ggtgtgcacc gagatggagg aagactctgt taaaagggaa agacagggca atttaaacct tagaggtagg ccagaaggag tggccaaagc agactctcca atttgaaaac catactccac cccagcacgt ctattagtcc agataaatga agaagtgagg ctggcttcca atacctgggc cagcccagga cagcgcctcc aacagagcgc gcacccgaga tgggcttccc acgcggcacg tgcagcttcc tgctggggag ctctgaagca gcaggaagaa gacctctcot acccacgacc gacgggctct gggcaccagg ggacttcggc tggcgggcgg gctgcagcct gggatgagac aagtaccagt gtCcaagcgc agtgcagcga gggaaggacg gtctttcctt cgcatagccg cggcaaatga tccggagtcc ggacccggcc tcggaagaag ggatgaagtg aggtgggggc gactcgcccg ccctggaccc tccttgttca ttgggtgggg gggtttcttt gggttaccta aaatggaacc catagcattt cctggtgato ccctgagcct taatctcatt taatacctag taacaaacct taaaaaaaga tgggaggcca' tggtgaaacc tgcagtctea ctgcagtgag ctcaaaaaca cccctgaaca ctttccaaaa catagctttt atgcagagtc aatggcaaga acatgtcagg caatgccctc ctgggggctc tttgtgcagc ctccttcaaa cagggtctgg aacagtgggc ctgtccaact cctgcccctt acgtgctgga gtacagcaga ggtacgcctg tgggtgaagg cctctcgggc agccggtgcc gggctcccgc tagcaggctg aaagtccgca ccgcgggccc gggcaagttc tccctctggg ctacagtctc cctcggttce ctttgcacct aggaagtctg gtgtgtttac cggcgggagg cgaggaaagc cacttcttcc tccaggaggt gcggggaccc cgcttggcga gggaagcetg gagaccctac gcagccagca cgtgggccca gccacggagc cgggggaact gatctgcgga gggggctccc ctggtcccgg ccatcttctc aaacaaagtg ttttgaactg ggagttagtc gggcaagtta tacctaactg ggcatagtaa ggatgettcc cagtatcctc acatgtgagt gtgatgggtt gcacattctg gtgatactgg aggcaggagg ccgtctctac gctacccagc ccaagatcat aaacaagaat gatgagccac taaaaatact cacagaggga aggtcggcct gcaaaggctt ctctgatggt ctagagtaaa ccagctcctg tctcccttgt gagctctaga atgaccagca agagtgccac gctgaccctg tgccatccct atagaagccc gaagaagagg ttgcagcgtg gccccccagt cagcccgcga aaggagctgg tgagccacta ccgçgttctc tctgcccagg atgtccggac aaggctaccc gccgggcgac tcgggccaag ctcctccccc cggaacccgc gcggctgctg caaagggagg agagggaacg ggagaggaga agggggactc ccgctggaac gggaggaaga gatgggacac gcagtgtcgg gcgcgccccc gctgcggacg gccctgagcc ttcagcctga gggaacccgc gttgatàgtt ttcttttccc acactctccc ccccaagccc cgattcggct tgcagctgga agatcgaggt cctctctgag cccaaaggaa gcataatgtt agatcaacaa atctgtaaaa ttaattgtgt gataggtgca cacatgtacc tggccaggtg atcg.cttgag aaaaaagaaa aggctgaagt gccactacac gactacagaa caagccaaga gttattaatt gaaactgcag ggcatttaag agctgtggga ttaacttctt tgaggctatg aaaagggaag cttatgatag cctgaggctg ggacacctgg ccaatctccc ctttctgtcc ccccccagcc tcgttcttca ttctcçagca ggggccatgc ggccccaggg ggagcccctc ctccgcgcgc tcggaaacaa tcacccaggc tccccagagg tctcgcgcca tacgacccca agcaagccct ccaacagctg gcgcgcccct ttgcccccct actttataag gaaagagccc cgggcagcgc agggcaagaa ggtattctca tctggcaaac gaagagtcgg tgtgccgcgg cgggagccgg tccccgccca ectecgggag gcgccggcgc cagcccggtg cgggcgccag gtatttacac ctccccttag tctggcacag ccagactaac gaagccgact agcagtgttt ctgagtcttg cctcagctto tcgcgattgt aattgttgct ttgattgact tagactacta gttaagagtg ataaaccacc ccagaactta tggtggttca cteaggagtt aaaaaaf a rtr· gggaggatca tccagcctgg agctccaaga gaggaactaa cctcaagaca gcttgaagct tacggctcct atggcacaag aaaatgcaat taactttgtc gatgtggggc ccctattaag tcagaggctt cattcagtga cctgaagttt acctggccac cacccagccc gaatgatcaa cagccgtgca tggccccgag aagggtcctg atggaggccc actagcagtg ggaaggtcct cagggcgctc acagcaaggg ggaaagaccc tcttccagtt ccccctttcc ccacgtggag cactcactcc ccagccccgg ggcagcggtg cagctccccc gggggcgggg agacccagag tctgtgaaac gcgcagctct aggggtcaga gaccgcgggc cctcggtgtc cgctgctcac egeaacgctt tggggtcttc gcctcgcctc aggtctgcga gcgtccggag gtcgagtttc ccccagcacc atcaggcagc gaccgcgatt tccgagaggc actttttaao ctcctcttta gatgcaggta gctgtcatta ccaggtaaat tggtgtggag ctgctaatgc atggcataca aaataaaaat tgcctgtaat cgagaccaac ctgagctgga gtgacagagt aggcctcaga tggctaccat tcatggtccc ggagcaaggt tccattcctc gagttctcgg actgcctccc 77760 77820 77880 77940 78000 78060 78120 78180 78240 78300 78360 78420 78480 78540 78600 78660 78720 78780 78B40 78900 78960 79020 79080 79140 79200 79260 79320 79380 79440 79500 79560 79620 79680 79740 79800 79860 79920 79980 80040 80100 80160 80220 80280 80340 80400 80460 80520 80580 80640 80700 80760 80820 80880 80940 81000 81060 81120 81180 81240 81300 81360 81420 81480 81540 212

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT agaacttcca gatcaaggtc aaactcctca gctctacaca gggggaccta gagtcaactt 81600 tctaagctag gagagtcatg gatccctttg agaatacaaa agacagtggg cgcggtggca 81660 gtggctcatg cctgtaatcc caacattttg ggaggctgag gcaggaggat cacttgagcc 81720 caggagttca agacctgctt ggtcaacata gtgagacccc tatttctaca aaaaattcag 81780 ctgagcatgg tggcatgtgc ctgtagtctc agttactggg gaggctgaag taggatgatc 81840 cctgagcctg ggaggtccag gaagctggag tgagccgaca tctcgccact gcactccagc 81900 ctgggtgaca gagaecctgt ctcaaaaaaa aaaaaaaaaa gaagaaatat gttattgatc 81960 tactcttgac aaaaatgctt gtgtgaacat ggacacacac actcatcaac attcacattt 82020 caaggttttc atggaccctt tccatgaggc tctagtggtc catggaccçc catggctgga 82080 açacttgctc ttcctcatct caacçcacat ttccatagag ttgaactgtc tgctgcatga 82140 ggacacaggc ctcatttggt gtgttcattc actgctgtgt atcccagcac ccagaacagc 82200 acctcaccta aggggcactc agcacatgtg cagtgaagag tcagtcagct ggtttcacac 82260 ctcccagtct ttgcacctgc tattccttct tgtgggaatg acagatttcc ttcatttctt 82320 tttttttttt ttttgacaga ttccagctct gttgcccgag ttggagtaca gtggcacgat 82380 ctcagctcac tgcaacctct gcctcccagg ttcaagcaat tctcatgcct cagcctccca 82440 agtagctggg attacaggtg cacaccacca cctgtgagct gatatttttt tcttttcttt 82500 tettttttcc tgagacagag tctcactctg ttgcceaggc tggagtgcag tggcgtgatc 82560 tcggctcact gcaagctcca cctcccgggt tcaagtgatt ctcctgcctc agcctcccaa 82620 gtagctgaga ctacaggcgc gcaccaccat gcctggctaa tttttgtatt ttttagtaga 82680 ggcggggttt caccatattg gacaggctgg tctcgaactc ctgacctcgt gatccgccca 82740 cgttggcctc ccaaggtgct gagattacag gtgtgagcca ctgcactcgg ccattttttg 82800 tattttttta gtagagatgg ggtttcacca tgttggccag gctggtcttg aactcttggc 82860 ctcacgtgat ccacccacct tggccaccca aagtgttggg attacaggca tgaaccactg 82920 cgctcagcct ccttcttcat ttctaatgta ctcatccttc acaactcagc tcaagtttca 82980 cttctctctg gaagctctac tctaggctgg attcagggcc ttgtccacat acccaccaaa 83040 tactctgctt acctctatgg aagtccccac actgatctag aataatcagc ttagttttct 83100 gcccccatcc cgccccatga gatgtacatc ttgtgggggc·aggaaccacc acgtggtagg 33160 tgatttgtgt gcctgctgcc tatcacaggg cctggcgcct' aataagcttg cggccaacat 83220 ttgttgaata aatgaaaagg gaatggtggg aaaggaagct'gaaaaggtag gctaaaatca 83280 gtttggaatt acctctggga ggccaaggac tttcagtctt gcagggtagg taacaggaaa 83340 ctcctggatt ttgttttctt ttggttttgt ttgtttttaa tgaagggtag cgttatcgtc 83400 aggtttttgt gtttaattaa tggagcatat attggaaagg acagagacct taaagcagtt 83460 aggagaccac cataatagtt cacattttgc agccataaaa aggaatgagg ccaggcatgg 83520 tggctcactc ctgtaatctt atcacttcgg gaggttgagg caggcggatc acctgaggtc 83580 aggagtttga gaccagcctc accaacatgg agaaacccca tctctactaa aaatacaaaa 83640 ttatccaggc gtggtggtac atgcctgtaa tcccagctac tcaggaggct gaggcaggag Θ3700 aatagcttga atctgggagg cagaggttgc ggtgagccga gatcgtgcca ttgcattgca 83760 ggtacatgga tgaagctgga agccatcatc ctcagcaaac taacacagga acagaaaacc 83820 aaacaccgca tgttctcact cataagtagg agctgaacat tgaaaacaca tggacacaga 83880 ggggaacatc acacactagg gcccgttggg gagtgggggt tggggggtaa ggggagggaa 83940 cttagaggac gggacaatag gtgcagcaaa ccaccatgac acacgtatac atatgtgaca 84000 aacctgcaca ttctgcacat ggatcctgtt ttgttttaag aagaaataaa gaaaaaacca 84060 agaagaaaca aacaaacaaa aataattccc atttaaaaca ataaaaaata ggccaggcat 84120 ggtgactcag gtctataatc ccaacacttt gggaggccaa cgcgggcaga tctcttgagc 84180 ccaggagttc aaggccagcc tgggcaacat ggcaaaaccc tgtctctaca aaaaatataa 84240 aacaaacaaa caaaatagcc aggagtggtg gtgcatgcct gtcaccccag ctactcaggt 84300 ggctgaggtg ggagaatcac ttaagcctgg gaggcggagg tagcagtgag ctgagatcgt 84360 gccactgcac tccacctgga gcaacagagc aagattttgt ctctaaataa ataaataaaa 84420 taataaaaaa cagagaagag gaaagacacc tgagatatat ttccatatct gaatcaatag 84480 gatttatcaa cgttctcctc tacccccaaa actaattcct tcctaaactc tgttctcctg 84540 acactactca taggttaagt ataacagcat tatcacattg gctgtcatgt gggctcctgg 84600 ctagaggctg cttcacagct taatggacaa gagcactgag acagggtggg tctaaatcct 84660 ggctctgcag ctgattattt gtgtgatttt gtccaaatca ctccatctca tgagcctcac 84720 tcttctagtc tgttaagtgc tgaaaataaa agtatccaat tcaattcatt atttaatgaa 84780 ttatttagec fcaacddâtd^ ctattataaa tatttaggct gggcacàgtg gctcacgcct 84840 gtaatcccag cactttggga ggccaaggtg ggcagatcac ctgagtcagg agtttgagac 84900 cagcctgacc aacatggtga aaccccgtct ctactaaaaa tacaaaaatt agctgggtgt 84960 ggtggcatgt gcctgtaatc ccagctactc aggaggctga ggcaggagaa cgcttgaacc 85020 caggagacag aggctgcagt gagccaagat cgtgccactg cactctagcc tgagcaacag 85080 agcaagactc tgtctcaaaa aaaaaaaaaa aatctctgca tgaagaatgt acataaaatg 85140 gtgcagccat ttcggaaaac agtttggcag gtcctcaaat agttaaacat agagttacca 85200 ctatagccca gcaattccac tcctaaatat actacaccca agagaattga gaatatttgt 85260 taacacaaaa atgtgtatac aagtatttat agctgtatta tteattacag ctaaaaagtg 85320 caaacatccc agcagtccat cagctgatga acggagaaac aaaatgtggt atacccatac 85380 213

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT aatgtcatat tatttggcca taaaaaggaa gtactgaCac acgctacaac atggatçaac 35440 cttgataatg ttattetaag tgaaagaaac cagacacaaa agaccacata ttgtatgact 85500 gcatttatat gaagtgccca gaataggcaa atccacagag acagaaagta gattagtggt 85560 tgccagagac tggagggagg agataatggg aaatgtggaa tgactgctaa tggtatgggg 85620 tttcttcttg gggtaatgaa aatgttgtac aattagataa tggtgatcat tgtaaaactt 85680 tgtgaatata caacatgctg aattttatac tttattatat tttatttttt ttgagacaag 85740 gtctcgctct gtcacccagg ctggagtgca gtggcacgat ctcagctcac tgcaatctct 85800 ctgcctccca ggctcaagca atcctcctgc ctcagcctcc tgagtacctg acactacagc 85860 atgtgctacc atgcctggac aatttttgca tttttagtag agacagggtt tcgctatgtt 85920 gcccaggctg attttgaact cctggactca agtgctccgc ccacctcagc ctcccaaagt 85980 gctaggatta caggtgtaag ccaccactcc cggcctaaat tgtattcttt aaaagactga 86040 attgtatggt gtgcgaatta tatctcaatt taaaaaaaac aaaacaaaac aaaaaaaaaa 86100 cctttgcgtg tgtcaggcac tagggattcg atgctgaata agacacagac cctaccctca 86160 gagaacacag agcccagcag gagagagtca cagatgaatc aagtgttaca tcatctatag 86220 gaagcgccat ggaagaaaga catggtgcca tgagaacata cgcttagaga agggaatttc 86280 atctagactg gggctcaggg aggaatcttt cagggtgatg cttgtgctca gagttttcca 86340 tgtcagaatc agtagaattt atcaaccctc cagaggagga aacagcaaat gaaaaatctt 86400 acaacaggag gatgcggaga cattccgaga gctgatcaag ggctggtgtg aacaaagcac 86460 ataggatgca gagcctgtgg tgtgaggttg cagctggaaa ggtaaaacac taattacatt 86520 ggatcttctg agacaataaa gagtatgcaa taatctcaaa cgaccgaaac tgaccttcct 86580 cctccctaac ttgcttgctt ccactgttgc ccgtatcata aaagcaccac cctcttctac 86640 ccagtggctt aagacacgaa actcaagtca tcccaggctt tctccccacc tcactctcca 86700 catccagcct atcagcgagc ttgtgggtct taccacgtaa agacttctca tctccagcta 86760 ctaccatccc ccaagcccag atcaccatca gctcaggcct ggactcctgc aacctttcta 86820 accgggtctt cccaatccta cccccgcaac atgaccccaa tagcccatca gaatggacta 86880 atcgagatgt agatttgatc aggccacatc ccttgaaagg cttcctgtga ccctcgggga 86940 aatgcacaaa ctcccaatga tggcccctga gtcctgtgcc atctgggtct gccctctgcc 87000 ctctgtgtct ttgccatggt aacctccttc acacccattá atactccatg ctctctccta 87060 cctcaagttc ttcctgggct ggaacattct ctgcactagc ctagccaact aaccctttag 67120 atcttttgtfc tgtttgtttg tttgtttgtt tgtttttgag acagtcttgc tctgttgcca 87180 ggctggagtg caatggtgca atctatctcg gctcactgca acctctgcct gccgggttca 87240 agcaattctt ctgccttagc gtcctgagta gctgagacta taggcaccta ccatcacgcc 87300 cggctaattt ttgtattttc agtggaggtg ggttttcacc atgttggcca ggctggtctc 87360 gaactcctgg cctcaaatga ccaccctcct cggcctccta aagtgctggg attacaagca 87420 tgagccactg tgcccaggca acacttcaga tcttaatgat catttccttt aagtgcctga 87480 cctcttgtag taactagcct gactccagca atgaatcctt ttgcaatgta acctatataa 87540 catctgagtt tccctttgat aaaactcatc atatatttgt tcctctgaca gttcagaggg 87600 caagggcctt tgcccacctt cctcaccact atcctctcac cacttaacac agaactcacc 87660 acccaccatg cctcctgcct gacaaattcc taaccatcct tcaaatctca ctcacctatt 87720 accttctggg aggcagtctt ccctgagcac caagacaatg ggacacattc ctttatacac 87780 cctgctgaac atctcttttt tgaggggcgg gtagagatga gtgtctcact atgctgccca 87840 ggctgacctc aaactcctgg cctcaagcga tcctcctgcc ttggcctccc aaaatgctgg 87900 gattacaggc atgagccact gtacctgacc gcaactgggt tagnnnnnnn nnnnnnnnnn 87960 rmnnnnnimn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 88020 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnncctgggc aacaaagacc cttcctctac aaaaaaaaaa 88080 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaattatttt aaaCtagcca gacatggtag tgcatgcctg 88140 tagtccaagc tacttgggag gctgaaggga gaggatcact tgagcccagg aggttgaggc 88200 tgcagtgagc cgtgatcgta ccactgtact ccagcttggg caacagagtg agacctcatc 88260 cctaaaaata aagaagaaaa tatggcaatt tgactgtaca tctctaatgg gatatatcct 88320 aaggatgaga aaggaataag gaaggacaga aaaaaggaaa caaagaagta gcaacagtat 88380 ttagcaattg tattgttatc aagtaacatc aatattggta aaaccagtaa ttatatttaa 88440 aatactatat atgtgtatgt acatttacat atgcatatgt taggaaccaa gtttatcaga 88500 ggaagagaaa gggctacaaa tgtaaaatca aggaaataaa aatttgaata aaaatatcag 88560 tattaagtat ttatgatatt tttcttataa aaaaattata tatatgttaa ctctatccaa 88620 aacccaaaag cagtgacaac ecaggagcaa taaaaaacct cagcatccag actgtagtct 88680 ctaccatttc caattaaaga aacccagggc tagttgggaa aaatgacaat ttcatgtcta 88740 gggcaagaaa cacaeetagt gaaatggacc tgaacattta attgtgttag aaagtaagga 88800 aactctctag aaataatgtg atttcatcta aaagacacag attctgggct ggtaaagttt 88860 tcaatggcca aaggtgagac aatttgagca tcaagaagaa tcatgacaga acagattaaa 88920 acatgtcaaa tatattttaa aatgaaatat tataaaagaa acaattagta gccatccctg 88980 aaggtcacta gggcaccaac tcatatttca aactggtaaa taaatgtgta agccaagcat 89040 ttatttctgg gtaacaaaat agtaaggaat gtttttcttt ctagaagaat tctagtgatt 89100 aaaagtagaa gatagaaata gaaaatcatc cttttggcca ggggcagtgg ctgtaatccc 89160 agaactttgg gaggccaagg caggtggatc actggagatc aggagtttga gaceagcctg 89220 214

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gccaacatgg tgaaacccca tctctactaa aaatacaaaa attagccagg tagtgggtgc 89280 ctgtaatgcc agctactcgg gatgctgagg caggagaatc gcttgaacct gggaggcgga 89340 ggtcgcagta ggctgagatt acgccactgc actccagcct aggcaacaca gtgagactct 89400 gtctcaaaaa aaaaaaaaga aagaaaagaa aatcatcctt ttgcgatcct aatgaaataa 89460 tgggcctagg cattgatcat taatggctcc taaaatcact aagtatatgg ttgatgggaa 89520 actttatagt ggatggatca gactcgcaat gtctaaacca gttgatcaat cttaacatcg 89580 taacaagaca acagacacca ggggctgctg acaggagaac agaggaaacc catagctcta 89640 ccactgagtt attcacggca aaaaaaaaaa aaaaaaaatt aaactgcgtt tcctccaagc 89700 ttctaatcct gttgtttaca ggaaataccc aaggaaagga atacttttaa atgacacatt 89760 aaaacaacgc caaatccaaa atatggggaa atgacccagt ttcttçaaca aataaacaag 89820 aaaaggtagg ggggaggact gttctagatt ttaaaagcta tagaagacac agcaaccaaa 89880 tacactgcat ggaccaggca tggatcctaa ttggaacaaa ccaactgtaa aaggatgtat 89940 ttgaaatgat tggaggaatt tgaacagtga ctgcacagta gatgatatga agaaattatt 90000 gttatttttt aggtgtgatc atgattttat ggtgatgttt aagtaaaaga ggccttattt 90060 gctagagata catgtacggg tatagagaaa tatttacgga tgaaatgata cgatgtctga 90120 gatttgcttt gaaaactcta gcaggtgtgg gagaagcagg tgcatgggtg ggggaaggga 90180 tagatgaaat aagtatgcaa aatgttagtc tacttttgtc cctcctgacc cagcaggtta 90240 aaatacctca gcatacctct actcctccaa ccaggtccaa ggatcaggcc aaaactccct 90300 gatgtggtaa acagcctgac cccttcttac ctctctctct ccagccactt ccctaagatt 90360 ccccagtgct ctgtgcccta gccagcccga ctcatctgcc cagattcctc aatgtttoac 90420 tctctcattc accattttga ccccactgtg ctcctgggcc actctccaag gccccgcctc 90480 ttcatctcct ccctccttac tcatcettca ggtcttggct taggtgccat tccctccagg 90540 aagccttccc tgacaccaat cceatcctca cctagaacag attatgtgcg cttctttgtg 90600 ccccccatgg ccccctgtgg gtttgcttca cggattataa ctgcctgact acctgccttt 90660 ctccaccctc tagactgaga acaccttgag aaaaagaaca catctatctt gtctgtcatt 90720 gaatccctgg tgtctggcac catggctgac acataactat cactcagtga ctagtgtttt 90780 aatgaatgaa tgagtgcaac tagacagggt taagaacaaa· agagaagacc aggcatggtg 90840 cttcacgcct gt.tatcccag cattttggga ggctgaggcg ggcagatcac ccgaggtcag SQ900 gagttcaaga ccagcctgac atggtgaaac cccgtctcta ctaaaaagac aaaaattagt 90960 gggggatggt ggcacacgcc tgtaatccca gctacttggg aggctgaggc aggagaatct 91020 cttgaaecca ggaggtgcag gctgoaatga tctgagatoa caccactgca ctccagcctg 91080 ggcaacagag taagactcta tcacaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa gagcgagaga 91140 agatgtcatg gggtaaatga agaectccct tcctggttcc ctgaccagcc cctgccctcc 91200 cccgcatctc acctgtcttt cttgcttcct tctggtactt ctgtttaagc cggtccatga 91260 gcaggccatt ccagggggca cacagcactc cgaactgagt gaaggcaaag gcatttgtgt 91320 aggtgctgac tgcagaagga agagagaggt tggttgatga gaagtttcca aaactccctt 91380 ccaggcaggg actctcccac cttacccttg tctgcatgtc cctcctcccc acaccatcag 91440 accctcctct ggtgtgtaca gccctgctgg gaggctctgt gttcccagct gggacatgca 91500 gatgggctac ctcccagccc taccacatac ctcgtgccat gtccccaccg gccatgttgg 91560 tcagçaagga gttgagagtg ccaatgaaga ggtagtgcca caactgtatc acagacagcc 91620 acaccaggtg ccaggcaaag cgccgagaga aagcgtagct ccagaaggag cggagttcct 91680 gcttctgccc tgcccctggg gtctctaatg gggagaggag gatctgggcg tgaattacga 91740 ggaaagtgga caggtaggat ggggagtgtg gaggcttcaa tggaacattt cagatccggg 91800 eccaccttct acccttggct cccagaactc acccggcgtg ctctgcacct gcctcggact 91860 cacacatccc cacctccctg ctttgtcatg ctggccctac caccttggat gaccctctgt 91920 gttcttctct attgaaatcc gatctgtctc tcacagcctg gtcaatgaca cttcttgcag 91980

Caataccttc ctgatctttc tcagcgagaa aggtgaaagg aacgacaagg agaggagaaa 92040 gtcagaaggg agaggagaat gagtgtggat actctgttct aacctgctcc tcagcacctc 92100 cctttctttt gataccagta tcctgagttt ctttgggaaa tcttcctcta ccctaatctt 92160 catggtccag atgggaccat gaattcagtg ttctgttcct ctctc&aggt taaccaatga 92220 gatggbtcct cctaacaagg cagaccggcc atgagtttag attaggatgg acttaatcta 92280 aaataggtcc tacaccctgg caagttcaat gtcctccctt gattttggaa gcttcccaga 92340 aeectattct tctttcttta aaataaataa ataaatacat gttttggatc caattgtcag 92400 atggtaaaaa taaaaacaaa aaaatcaatt ttattctgta tatttaagat atacaatatg 92460 aggtcatagg atacatatag ctactaagat ggttactaca gt-taagcaaa tcaacatatc 92520 catcatctca catttctacc tgttttgtga caagagcagt taaaatctac ttgtttagga 92580 aagtcccaaa cacaatgcag tttgatgacc tacagtcttc gtgctgtgca ttagatctct 92640 aggcctgttc atcctgctca tctgctcctt tttgtccttc gacctgcafcc tcccatctcc 92700 tctcccaccc cgttcttatt tctactgtag ctagctgcgg tttgtgatgt gtgtaaccaa 92760 agacgcagaa cagagaggaa ggaaaggaag cagtgataga gttgggacaa taagagaggg 92820 cggacccagg agacctggag aaatgggggc actgtaccag acttagtgca atggcatcac 92880 agaagagggc agaaccgagg agtgggggga agggaaggca acccatggca ggcgggctfcc 92940 aaggggtggg gaagtgatag gatgcgaaat agagaaaaga gggacagaaa agagacgaaa 93000 gccctggacc ctccattaag tgagagggtt gggaagatgc ctaaggccct ttttctgtcc 93060 215 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tgcctttcct gattctgggt aaggagaggc ttgggtctgg tgaaaggaac tcctttgact ctttgtggtg ccattcccag aggactgtga gccgaacctg ccaccgcact ttggaatcac ttaaatcaga atgtctggag ctagtgattc taataagcag ttcaaatccc agctctgcct gagcctcatt ttttgcattt gatgaaatca gagagcacat ttcctctact ccttgtggca atttccccca atttgaatga ccttgtgaac tgcttcagcc aaatctcaag aacgcttgtg atgagcccac gctggcttgc ccaaacctat gtgagtgagg atcagatgta tgaatgagcc agccagctac ccacagactt tttgagatag tttgttatgc tcctgtgata ggtttgcttt cccacaatca ccagatagtc gtgcccccgg ggcatcagga gaagatgaag gaggccctga gaaaaagtca gtgtcacacc aagcaaacta agggtccatc atggaatatt attcagcctt tcccagcact ttgggacgea catagtgaga ccctcacccc catacacctg tagtgccagc gtttgaggct gcagtgagtc gaccttgcct ccaaataaaa cacggatgaa ctttaagagc tagtgcttta gaagaccaag gggaaacagc aagacctcat gtgcacgcct gtaattccag tacatgcctg taatcccagt agttccagac cagcctggcc agtggggcat ggtggcacgc tcgcttgaae ccgggaggcg ctgggcaaca gagcgagaet tgttatgtat attttattgc gttttctaag gagtcctagt cctggtacac acatgccccc aegacccatc cccacagccg cagtgccttt tttcecccaa aaattcatct tacaaaacac cttggtgact ggtatgacat accaccgacc tagcccaacc gtgcagtgaa ttgctcaata gaattcctgt tcctgctccc catggtggct catgcctgta aggtcaagag ttcaagacca caaaaataag ctgactgtgg ggagaattgc ttaaacccac tccagcctgg gagacaaagt aggaaagaaa gatgaggcag gtgactctta tgccaggagt ccctccaaac ctccaaagct agagatcctc ttctctgccc ctaagcccag agagaagtcc cactcagcca tctgtggtgt catggttgcc acaactccag ttgtttttao tctgctttca ccctggggga gctctggagg aggagagatg ggttagccag gtagctccct gttttcatgc ggcacaggct atggaaacaa agactcagac tggagggaat cttttagcca ctctgatgcc gtgagagcca ggcttccttt caaagtttag gaagcabgaa cttcctagca acagaaagat agaaaatgga gataaggata ggggtctgac aattagtaag aatgactgca aaaatgatca gactgcagct ctatttcccc aaaagaatgc agcagaagtg catttctgca ctctttcaga tggaggatga cagccacgtg ccatcctagc atagccagcc ctgtcaaaat catctacatc gtgaaaaata ataaatgctt agcaatagct aacagatgca accctgtcca tcccacccta cttacccata gctgtagttg ggaaagtgcg tgctacatgc ggctgatgcc tttttcataa cacgttcata gcagcactat agcagatgaa cagctaaaca aaaaaaggaa agaggcaacc-cgaggatcac ctgagcccag ttctctagaa aatttttatt tactcaggag gctgagtggg atgactgggc cactgcaccc aaaaaaaagg aaaggaaaga actatgcagg gccaagcfcca acaggaggat tgcttgagtc ctctactaaa aataaataaa ctacttggga ggctgaggtg actttgggag gctgaggcaa aacatggtga aaccccgtct acctgtaatc ccagctactc gaggttgcag tgagccaaga ctgtctcaaa aaaaaaaaaa atacaaaaac atcagcagaa acaagccatc acctactatc acccacccca agacacaccc gtggagcctc ctcgtgtggc cgacagcaaa ggccttttgt accaatgggg agcttgccag caaagagaat ccctaagttc tcctcccatt ttacagagag aattgacaga gtaagcagca tttccccttc caactctaga atttcagcac tttgggaggt gcctggccaa catggcgaaa tggcacgcct atagtcccag taggcagaga ttgcagtgaa gagactccaa ctcaataata ccatctgggt tctccagggg agaaaggctt gagtgcctca tatgggacta agctagactc ccataacctg caggcagtgc caggttggat ggcttgagat gctggcttta gtcctccagc ctatcacatc ctcacaccac ccttgcgtca gggaagaaaa tgaggggcca ggaaaggcac cagggctcac cttccttcgc tcagctgttt ccttctcttc aagccccaee agcaaggcca agcatggtga atcccacatt caggttgcag accagaccag tctaagatct ctatgtgaat aagagtaggg caggcccagg ggctcagaçt fcaacccttct tctcagagga ttattgtgag tgagcagcaa aggaatgccc catttcttca cctcctctgt atgcccfcgaa tctgggccag gctgtgccaa ttccaagctt accctgaaat cacggtgtga acccaggcat ccctgtcact cccatgtaat cctccaaatg tggccctgat cagcggaact aacattttag gctgctgagt ctgctccagt cctcctcctc gggccaatga ggggctctgg gggggcagtg ggtatgggat caggtactgc agacagagat agaagctgca gaaggagaag tcacaatagc caaaggatgg taatgtgatc tatacacaca atgctggctc acacctacaa ttcaagacca gccttgacaa taattagctg ggtgtggtçg aggatttctt gagcccagaa cagcctggac aatgaaacat aattctgaca catgctgcaa gtggttcctg cctgtaattc caggagcttg agaccagcct taaatcagct gggcgtgatg agaggatatg attacatgat gcagatcacc tgaggccagg ctactgaaaa tacaaaaatt gggtggttaa ggcaggagaa tcctgccace gcactccagc ggttaagata gtaaatttta gaggcagggg ctggaaccct ctgtaagctg attagggaca ggcagtagag gagtcctcat tccccagaga tcttctagcc tcaaagaaaa ttttacacaa tcatctccct ctttattctc ctcaacagct cagtttgaaa tgacgttgag gtccagagag gcaaagtcag attaaactaa gagacaggag agaggctggg caaggaaggc ggattacttg ccccatctct actaaaaata ctactcagga ggctgaggca ccaagatccc accaatacac aaaaaaaaaa aaaaagagag aaggagggag aacccagaaa ggggctcagt ctctgcataa atgtctgggt ggtgactgcc caactgcctg tgacctaaca ccacactctt cccttccttt ttgctgcctc ataattgaag aacattcaat gaggaagact gtccccttga atcttccact 93120 93180 93240 93300 93360 93420 93480 93540 93600 93660 93720 93780 93840 93900 93960 94020 94080 94140 94200 94260 94320 94380 94440 94500 94560 94 620 94680 94740 94800 94860 94920 94980 95040 95100 95160 95220 95280 95340 95400 95460 95520 95580 95640 95700 95760 95820 95880 95940 96000 96060 96120 96180 96240 96300 96360 96420 96480 96540 96600 96660 96720 96780 96840 96900 216

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT atatacactc cctttatetc attaaaaagg actggatcat atgctgacct ccacctatca 96960 ctagcaacgg gtaaatggat tgccatggtt ggctttaatc aatcaggatt catcccctgg 97020 gctaagcggg tcactgccca gataaaactg ttcgcaatga ataagacaga atggttgttg 97080 attgacctct aatagccttg gcaacagttc atcccctgat accccaacat cagccactgg 97140 gacagctgga caagcctctg tgtctgcccc tgctgtaccc actagccact tgccaccttc 97200 ttgtccaaac tagaagctca cagcagcaaa cgccccactc taaaggtccc ccagcctcta 97260 cccaacactg gcccaagcac attatgacca ctgccacaaa agcttgggca agtctgaaga 97320 aggggcttag cggttacaag ctcaggctct agaaccgaca agcctgggtt caagttccag 97380 tatcatggct actagctgca gaaccttcaa caagcttttt aacctcagag actcaaatgc 97440 ttcatctgta aaatgggggt aacacagtac ctacctcacc gagttgatgg agacaaataa 97500 tgcaggttca caagacaagt gtctggcata tacaagtgcc cagtgaatgc aggcfcgtcgc 37560 tatatttacc ttaataataa ggaagactgc cgaggaagag teaaatgctc cattgtacag 97620 agtgatgatg gtcgaacggt gttggccaaa taggttccca atctggggat gataggacta 97680 gcctggatca cttatttatt catgaaacag atacttcctg agcacccagc atgtggcaga 97740 ccctccttat acccaaactc accctccacc gctagagctc ccacctcagc ttgggccaac 97800 cccatctgag gcagccaatt atagaaaagg gtctctcott ccctccacct tcccgccacc 97860 ctgccgagtg cctgggatta gggaaggctc ccacctgcag gttggtgatg agaaacagga 97920 ttcccccaat ggtgagcatt ggcatggcca ggaagagcag cacggctgag cctggaccat. 97980 caaagtcaga ggtagggtgg tgtcatagtg caacccaaac atggagcccc aaactctgct 98040 cccacctgct ccaaattccc aacaatcctg gtatccaggc cccaattcta gccagcgttc 98100 cagcgtcctt caagggcttt taggataccg gccaaggctt ccccagatat ctctgtggaa 98160 gtcttctgag ccaccttctt cccaaccaaa gttggtcctc agtctgtggc aggccaggaa 98220 gtctacagac agaggcagag ctctaagtga agccacctct ctcttccctc agtaaaccac 98280 aagctgectc tccctttcat ccttgacact cctggaaaag aagaccctgg actcaggtcc 98340 ctggctcaac cctctagccc attccctaat tcatggtatt ggccttgagc ttcaatcatc 98400 tgtttaatgg gaacaacagC tcctgctctt cctgtctcag gtgctatgag aactgagtga 98460 gaaaaggacc atggtctttt ctttgttcac taaactctga- gcacttcttt ggtgccaggc 98520 attgtgcttg gcactggaaa tgcaagatga atcagatagt ccttgccctt aaatagactg 98580 acatgcaaac aaatggttat aacaggtctg gtaagtgtga gaccacagca aaaaagctca 98640 agagctgggc taggggaacc cttgacaaat tcttcctccc caaaccagac ttctgcccac 98700 cattattctg gccacaacct atgcctgtcc tattatttgc taaaatgttt taagttgact 98760 cacttttatc caaaaagtat ctatttttaa aggacacttt atatcactac tgtagatgaa 9Θ820 aacactggca ttacttgtca tgaatagaaa gtaactgtca aaataaatac aatgaaagga 98880 aaacaatgtt attcaattgt agctggatgc atttgacctt agaatgttca aagcctaaga 98940 cctgctcttc ccatcagtgt taaaatcaca ctggccccac atgaagacat tctbtcatga 99000 aatcagaagg actgaaagag aaataaaaag ggaatagcfcg ttctaccagg tgatttgatg 99060 tttgttagtg tagttcacgt agtatgcgtg tgcccctaac atcctcttaa ctaccgtgct 99120 ataccttaag aagcactgcc aagagctaat tttagagtat tcacacagtt taccattcaa 99180 tttctgtctt tataaaatgt acatctctcc tactactaaa ggttggagac tcctttcaca 99240 atagagtcct tatgggctca atgctttttt caaaactgaa aagccctaCa CCatggagga 99300 agaggaggafc tgttgctcag acgatttgca ggcacgagtc aaacattacc cagccaccac 99360 ctccacattc agttgcttaa aaatcattta caggctttta gagtagatga tgctggtttg 99420 ataaggagag tggtttgaaa taattggttt gaggtgctgg gccatctcat gagatctgtg 99480 tgaacaaaga cactcagcct ctgtgtttgc ccagcatgag tgcagacaat ctcatgaCgc 99540 tgtcagcttt agcatagctt acacacacaa gagtaatgta ctttctttcc taaaccaaaa 99600 attgagccac gggtctaaca ctaggaagga atattgggag gcatctcgtg gccaccataa 99660 ccaaggcaat gacagaaaga agagtgaggg atcaggaggc ctgcacatca ggcccacctc 99720 ccacttgott tctctgtggc catggacatg tctttgcaag gggtcctgct gtggcttcag 99780 tttctcctct gtgtaatggg tggaagggtg gtggaaaata aaccagattg gagttccaga 99840 cttaacagac tggtgaaatt ttaaaacaaa gattttgagt acaatagggt tgtcaacttt 99900 taccctgcta agtaaggata tttgcaaaat ggbcattcat ataatcattt cattaaaaag 99960 agaaagagaa cattttaaca cataggagaa ggatgtaaag gttttttgtt gttgttttgt 100020 tttttagggt tttttgtttg ttttttggta gagtctcact ttgtcaccca ggctggagtg 100080 caatggtgtg atcttggctc actgcaacct ctgcctcctg ggttcaggca attctcctgc 100140 ctcagectcc tgagtggetg ggattacagg cgcgcaccac catccagcta atttttgtat 100200 tttttttagt agagaaggga tttcaccatg ttggccaggc tggtcttgaa ctcctgacct 100260 cagatgatcc acccgcctca gcctcccaaa gtgctgggat tacaggagtg agccactgca 100320 cctggccaga tgtaaagttt tgaataaatt ctactctctg aagtaatccc tctccatcat 100380 ccttgctttt cacattttct caataaactg fctttcacaga ccagcaatag ctcaagatcc 100440 ttccaggatt ctttcaagct gcagatctct gaataaccat gtggtctgta tatcttgcct 100500 atagccctct gctcacacct gccccagcca ccaggtgcct ctgagcttgc atccctccca 100560 cccacctgac agcactcacc tgcagaggtg aaggctatga tgagtgtggc ggtggtgtag 100620 aaaaatctga aacacataac aggaaaagca gaatattgtc aaggagggag aaacctggga 100680 gaaaaaacat gattctgctc agccagccca caagtgtagg acttgaccgc accctcagcc 100740 217

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tgggatgcaa cgggcactga tgcctctgag gcgatgagat tgagatgtgg tcctgacctc ccaaggctag catggaaagt cttggacaat acttagccag gacagaatgg gcaaagcgaa aaccccttgg agaaaggggt tagtgcctgg ctcctcactc tgtgaccttg ggcaaggcgc tataaaaaga aatgatcgga ctgatctagc ccaaggttat caggctccct tagcatttgg aaagcaatat cctaaggctg gagaagaggg gtagcaggga gccaaggacc aagaaggact aaattgtaag ggactggctt tactctggct cccgtctctc tctctgacag ccaatctcac ctgtatcagc ccccagcagg ccgctgatta aggatgcagc aacacactgt gtgtgagatc ggaaaccccc ccagtctccc ctccagtcag ccaaagaaac ttcctattag ctaagcccct gggggcggtg aggaggatga ggatgaagcc gatgaggaca aggatccttg gggtgaagga ttgtaaccct ggctccaagc cagcccttac agcacgtgat agggaagcca catttatgca ggggctgtgg tgaagtgggc aagtctagag agctgctggg agcgagctgc aggtgtggtg ggatttcact ccaagctagg ctgctgcctg ctggcctttg ggacttacat ggctatgagg atgtagccag tggggaatgt catgaagttg gagaacctct catcctgggc tttgcagtct agccttcctg ccaaatgagc acacaggctg tcgcaaactt gtcccttaag ctgagttgaa ctggtgcctc cctcccaggc acttcccaga tctcatcata gaaagagggg tgggcagggg tgggagccag acttaacttc cttagaaaag gcattgccaa tcggcccagc atctggtcca aagacaaaca ctagtgaagg ccagccaaag agcccagtca gcagtgtggc cacgtgcagg ggagtggatc ttcaaatccc actttgtcct gogtttgagc acttggaaaa ttcctctggc tggttgtttc aggcctgggc aaaaaccatc aagatagagg ctgctggaag aggaggcctg tgtgaggtgc attaagaggc aggatgatca tactccaata catcafcctta ggcactgcat ggtcttgatg gccacctgga gtcacaggtg gagcaggtgg agaagcggag ctcctgcgct gacagcaact caaccaggtg cagaggcagg etgccaagtt ggtgttatct tcagtttact aggaacttgc ccaaggtcac agggctagtt aaataccccc aactcccatg accctcgcct tcctcgcatc aacttctacc aggaaagcct cccgctccag cctgcggcct gccctccccg ggcgccccat ggcgcccgaa aggggaccct tctccgcgcc ctfctccgcac gggccaggtt tcccctgctc gcctccgccc cctcctgccc tctccatcac ttccttcttc tttteccttg cootcttgaa acttctccct ctagaacccc cctcgctgcc tttcagcctc ccagccccct aatgctgtta otcgctcagg cccacctagg cacagacagc acatgagggc atagggacac cgctgggttg gcagggaaca tatttttcct gtttcacact cccagagctg ccaaaaaaat aggactgagg gcttttcaga aaccatcccc aaacccctta gatgactccc tgcctcaccc gccagactgc attgattaac cattcattgc attgctcatc ggagcttgtg atcagcgtga tccagcccag agcacgtgag ctgacgtctt aagctcagtt tggggagage ttettgcgta ccccaggctc aaaaccaggc gcaagaagcc atggacagtg cattttgctc attctgaggc gagctcagct gacgatgtga ttggcttggg ggtcctccca cctggaagcc ccaacagccc tctgcaaatc aaggccttga gttctaactc tgtccttctc tgggcctcag gagccttttc tcagagtgct atgatttcag gactacagtc gggtcttgta aggcatggag taaaaaaaaa aggggacaaa ggaaggggag gaaaggggag gaggtacagt cattctgcat ccaaaggctt gtttccggaa aggcaggccc agccagccct atgtgcctce ctgggagcac ctgotctgag ecactgagcc tggccacaga gcacgagatt acgtcccgaa ccttctgact catctgcaca aagggacctg aaattccacc agtggcaata agggagtgat tggctgttgg ggcggggagg tgggcaacct ggatgtgagg ctgtgcaggg agagaagagc aattttaggt tttgctaatt aggaagtcac cctggcctcc ggctcaattc gagcagggaa cgaggtaagg aaatggaagt agagtcccgc tgcctggggc tgttcctaac cctggcaggg tggccgggct gtctgactct aaggattcct cttacccacc tttgcctggg cgtgccacgg tggtcttgaa ccggtcaaag ttcatgaagg accccagggt gaagatgagt ggagtagaaa aaaggtctcc cat-gcatccc ggctcccctc· cacctcagac agcttgtcgg atgtggctgc ccctaattac ccctcaggag tcaagtgggg tgagagctgc tgacccttcc gcagagtcct tcctgctcct tgccaccacg tcatccctgc ccttaccagc ctgccctgtg cacagatcct taaagtaatc ttcattcttg aggacgccag caaagcccag gcattccagc ggcaggccct ggcccgccat gagcagaagt cctggacgga tcacaggcgc cgtaagcctg aagccaagcc cttcctttcc cgtiagctctc agcgggtgat tctctggatc ctgtagaata cgggaaaggg aaaggtagac tagagttatt tggccgetgg cagcaaatgt ggggaataaa ttgagtaacc acgtggcaag tagagaggca agataaacga cttacccaat agctcoccgg cgaattctga ataccgtccc ctaaaataat gagatttcat acagaagaca caaactcccg gacaatgaaa caaaagctcc catggatttc tagtcacgac gcaggccatt ctactgccag aggactcgca aacctggtcc ccgccgccct ccgggggccg ctccccgcca gcctccgeac cagaggagcc cgaggggcca ggccgcgctc tcgccctacc cgcctgctcc gcgccggggc cgcattcgcg cctctcgcag cccctcccag gcccggaagg ggctggggca gacctcccac ctcacagcct cccgcgccct ttttacctct ctagaacccc agcggtgtct ttccctccct tgcctctgcc tcccctaacc aagttagttg gaaaatgtca cacccagcac ccagaggaca acacactcta tttgtgcatt ttgccttgac atttgctcac cagcttaacc gtctctccca cccaaccaca gaatcaggaa gccaagaacc tggaggactg ccccatattt tcactcccaa ccgcccccca ggttctgaaa gagccttccc cccatttttt attaatcaàa gacatatata ggccttacta agcagctgcc ttactatcct ctttggcctg tgtggccgtt tccttgccaa ttagatgcag tctgcagact cccaacccca 100800 100860 100920 100980 101040 101100 101160 101220 101280 101340 1C14G0 101460 101520 101580 101640 101700 101760 101820 101880 101940 102000 102060 102120 102180 102240 102300 102360 102420 102480 102540 102600 102660 102720 102780 102840 102900 102960 103020 103080 103140 103200 103260 103320 103380 103440 103500 103560 103620 103680 103740 103800 103860 103920 103980 104040 104100 104160 104220 104280 104340 104400 104460 104520 104580

218ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gctacctgga tcccctgagg tttaagagga agaaatagag caccaccaaa gcacaaaaga gaagggtggc tggggtcctg tctttggctg ccccacctgt aaaagaagta taagatgggt gtagggtagt agattttcta ggaggaattt caaaggaact tctgaaacgt atgctctcat gtcttttctt aaaataacat acaaacaggg cttaagatgc ttaatgcatg ccctatcttc gtgtggaagt agcaagggag gttaatctgc aggagcctgc tgaagcacgg gacacggggc cttgactctt agagcctcca cactaacaca agtcttactg cccatgttct ttggttcgaa tcctgcgtgg ctccaatgag ggtctgacgg tgcacccgat acaccttttt ttttttaatt tgtgccaagt gccgggattc ctcttgtggg agagacagac aggcagatgc tagcacagca ggaaccagct agagcacagg tctaagtgag ggcatraaga cccttaatat otctcctatc cacagaggca tcatctgctt gttcccactg gatggcttca tggtaaggac cagtccaggg agggagcata gaactggatc tttccttccc atcatcagca gacagagtgg gaagatggat tataagtgag ctgcactcca ctcaagagca ccaccttcca tcctctgaac aacctcagcg tcctaccctc tgacatcact ataaagggct ttgatttcgg tcacaatggg ctcatgbaaa ttctacagcc tgttttggaa cagagaaaat tctaatcctc agccaattac tggtatctct tatggattaa agataatgta tactgttgtt aacaaatatt tagggagaat ttcaaagtgt aagtaatggg tgagctcagt tagatgacac ccaaatgcac gcttggattg tcctgtaagc gatggagtct tagagctggc gagggtgggg aactactaca tttctcttta acagaggtga cactctggcc cctcagagca cagcctggat cagcctccct actggaagca ctgggccagg cttatgaggc tactgctacc caactgttta ctggtaactg cactgacaat atctaaacct ggaggcacgt cctacccctg tgagcactga ctatgtatct cgataggtgt tgttattagc aactccccca acatcaccag ctgaaactaa tgcttttttt tcaccaaggc tggagtgaaa tcaagtgatt ctcctgcctc gcccaggaac tccagctatt gttacgatag gggacagcca taaaagtctg caaccaccct taccccaagc tactcactag aagacgagga caatagtacc gtatgaggtc cctgcatggc gtctgcagtt atgtagacag tgcccacggt cattctacaa caccccgtct taacaaacat tatttatggg agaaaatcca aagattttct attttactgc tgctctggca tacattttag aaacagaaaa aagtcaaagt cagaaagatc tagctcatgg aggtcgtcca gggttctgtc ctccacatct cccatcaatg aactgatggg acaggaaatt ttccagcagc tagaaaaggc gattaatgag taacatcaga gtcttcatcc ttttctcttc gactgattgg ttcaacaaat gtagagaaga gattcagtgc aaagaaaccc aagatttctg cattgaaagg cacggaacct gtggtgaaga aagtggaaag attcagccca catcaatcaa tatccgtggc cactgctcta-ccaagccatc gccattctcc cttaactgct caaaaccctt tctggggatg ccagccatga tcctgcatcc tactgcccaa agtctggata tccaggatcc atgtttaggt tagggaaaga tcattcccct ggcacaaaca atgcagtccc tgcctgtcca agggcaattg ccactctctg ttctaaattt gtatatgtag atacgccaaa cacataaaca ttaaaatgtt tggttttcca gtcagaaagc aaaaggtaaa ttgaggcagt gccaaaaata gagcttccgt ctcctcatct tgaaaactgc ccaattagta attgacttac tggaaaacaa tcctaaccta aaaaagaaat ttaccttgct taagaagtcc tcagtacaac cccccaagac tgtgggaagt ctgttcatga tcttcagggt atctcctagt tagccaagta aatatgaggc atctgaaagg atacccaaag gccagctcag cttcagtgga ttcaccatgc agaaaacaga cctaagagaa agcagagccc caccctccca agccccagct cacttcccga tagactttgc gcaactctaa ggactaggct agaagaaaaa taaggaatat gattcgaagc gctttttgct atctattatc tgggccaact gtagcagtgt caggactggg tttttttttt tttttttttt tggtgtgatc tcagttcact agcctcccga gtagctggga ccaagcccac tcctcttttt gaactgagga ttttccagct agtgacttga ctgaatggag ttatacaacc tgaggcaagc ttaattatag gaattgtcat gcaggtgcta taggcagatt agccagagaa gcagctctgg agctgcagta ccttcccaac ttggacatta gagaaaacaa caaaaatata gcatcccagg aagacacaaa gactctgaaa tctcctgggg ggatcagtaa aaagagacag attttagaat gctatctgta catccaggac caccttatct tgttacctct tctgcagaag acgtggcctc agaatatcct ctgaaccatt agatgctatt ctgatcactc gagagaagtg attataataa gcctccttcc tcatcatctc acatgtggta cctcaggctc ctgctctcaa ggggctcatt gagtgtggga atggtcttcc caacaaaaca ataacattta atttgaggcc agcgtcgcca tcatgtccta ttgatttcac tgcagacact catcatctct tgcaagagtt tatttccatg ctgaggtcca gtcaactggc gacattgctt tgaggggaag gtaccaatgc tggaggtggt accctatgga tgtttttatg gggtttgcca aagagggcag atggctagta toctctagtc cagacctctc tcctcaaact ggcagagtcc agatattctc ataaactctg agccattcac aacaaacata agctttcctt cctacggtct tgaaaggggt tgcaaacatc atttcacctg atacaagcac actgctatcg ataaaattgg aatcgagctg cactattaat aaatagcagc agaggaaata aagtcaeatt aaattagggg gaaaaccact caccctagag aactgatctc tgtctgggct taaggcaggg gccacagtag acaggaaggg gtgttcaaag cagttctcag ctccttgctc tggggagacc aggcactgga gggtgggggc tgctagaggc agcagaggat gctcccccac cagaccagat caagccceac cacaccaggg ccacttctat gttcatcaag tagaaaggaa tgcctcagtg ggggaacact gtgtcaacat caataatacc tgctgggoac taatctgtca ctgaatctca gaggcctaga gggacgaagc atagaaacct gatgctctga tgagacagca tctcactctg gcagcctcca cttcccaggt ttacaggcgt gcaccaccat 104640 104700 104760 104820 104880 104940 105000 105060 105120 105180 105240 105300 105360 105420 105480 105540 105600 105660 105720 105780 105840 105900 105960 106020 106080 106140 106200 106260 106320 106380 106440 106500 106560 106620 106680 106740 106800 106860 106920 106980 107040 107100 107160 107220 107280 107340 107400 107460 107520 107580 107640 107700 107760 107820 107880 107940 108000 108060 108120 108180 108240 108300 108360 108420 219 219 agatggggtt tcgecatgtt ggccagactg ctgccttggc cccacaaagt gctaggatta atgctcttaa tctgtgccct acccagcctt catgagttct ggaatcgggt tgatgggggt gtaattcttt cagacagcac ccttgattaa tctgtgtctc cctgccctgc tcacacagac aagaggaaat ggatccagga gaaggagacg cattgagagc tttgcccaac accccaaaga tgaacactgg acttttgttg tggaaaaagg ttccatggtg ctggaggatg gggaagtggg tggggtggga ggggaacctc cacttgccag gatactcaag gcatggcatt agaccagaag actgcggact gtagacagag cactggacaa ctctggagcc ccctgggtgg gctgccccgg acctctgtga agcgagtgct gaacctctct tgtacagagg ctgacattaa gcagggatct gctgcacggg agagggcaga aaaggcctat ggaagctgaa gtggcctgag agtgactcag tcttatagat tgtacatgca gctctcctcg ccactctcaa ggaaagagcc ctatctgcaa aacacagact caatccttat tccttttaag agcaggectc aaatgtgtgc ctttctagaa ataatgacaa cagtaatgac agtcatttac taagagctat atgtaatata tattattatt gaggtactat cattatgcca actttaaaga aacttggcca agtcactcag ccagtaaatg ccatgttttc accattatgc tgaagtacct ggaatcctgt cttgatgttc ccttccccat tgatagtata'tcttttcata ccattctttg tccctcccct acccctccct gggagcttag cacactaaac aaactcataa gagactgatt cactgagaaa tgaaaccacc cagcagatgg tctttcagga aggacaggct tttgggaaag tacaaagtca gagggaaggg agttgatgga tataaagcct ccatcctgcc aaggatcaga ctctcctttg gacagtgctg gatttttctg catttatcat gattgtggaa ggctttttgt atttaataga actgaaaggc aatttcccat atactagttg tgttgccctt tgcagagaat cttccttata atggagggac agagatggta ggtttgaatc ctggctctgt tacttataag agtttcccct tctctgaatt ggggatataa ttcaatgagg gaatacacat aaagtgctca nnnnnntinnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gagacagggt tttgccatgt tggccaagct cccgcctcgg cctcccaaag tgctgggatt acacctttta aacaaccaga tttcattcat tgtgggtgaa ggtggcactg ggagaagtta cccacactcc tcaaattagc ctgagtctcg ggcaaaccat tccccagccc tgccctctca cagctgttgt tacccgtgtc ctccatgttc atgtgtataa ttattatatc tatatttcat attattaaat tgttctgtac attattttat aagaacatat agacctggcc aggcacagtg ggctgagatg ggtggatcac ttgaggtcag aaacccccat ttctactaaa aatacaaaaa tcccagctac ttgggaggct gaggcaggag agtaagccga gatcacgcca ctgcactcca ataaaaaaaa aaaaggaatg tatagacctt gttctaaaat ttgtgtaacc aatctcctat atatgaaact tacaaacaag gttgcattga ttctagaata attgcaggat aaactcctaa cattttacat ttaatagata tttgtcaaat ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gcccagctaa tttttttgca ttttttgtag gtctcaaact cctgggctca agtgttctgc caggcgtgag ccaccatgcc cagccagctg cctgggaggc ttcccaagag ctacacagag accagttatt actaatagga atgaagatgg aacaagagag tagtgctgcc tctctgtgat accacaccca cccacacgca tgatcatgaa actcctgagt gaaaacaacg gggtttttca tgaaaagagc aggaaactgc tggggccgat caaagggaag ccggaagaga ctggaacagt tagggattag ctggagggag aaggagaagc gagagcacat gtaggatggg aaccccagat caagtctgtg gtgaaattag ggaaggctcc ggaagtggga gacccagggt ccagtcctgg gcacctttct ctcttggggc ctccattcct tagcootgac ttgctgaaat gctgggacto gtcgtggggt gctgcaatgt tcctccagat atggtgagtc cgccctggga gcctctgctt aaaccacgga agttcccggg gctgatgggt tgggctgcaa aaccgcaaga tgggctgtga aaagcattct gccctccagg tcttaaagca acaaaattgc ctcaggggca tcagggaggc ttctcaatga aagcaocctt ttgggtatta tgagtgctgo ttttgggaca ggcattgggc tgatgcccac agccacccca taaggaggcg tgaagaaact gaggcctcaa gagatgaagt ggaagagata gacttcccag tatccagagc cttttcctgt gccaatgtga tctgcctcca acagaagtcc tctctgtgtc ctcttcagcc gacatctctg ttatactact ccaatggtgt ttgttgtgat taagtatagg ggaaatgacc gataaacctg aaatgeaatt tattaattaa gaatcctaag gctgactggt cagcacaatc gaaatcaata ccagaaggtt ctttgttgag ttgacacata ggtgaagctt gacatacctc atatccaagg cagggagcca tctgggtgtc gatcctatga agatcttacc tttctggctg ttccttgttt gcttagatta atttctgcgt tgagacccac tgaagaggaa taatcaatac tcacttctgt gttgtcactg tatcctcatg aaaacatgga cttggaagcc agaccgtctg ctctgcaacc tcgggcagat tacctaagtc tagcacccac ctcaacatct gtcaagagga gaacagtgte tgccatctgg taageagtcn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnc taatttttgt atttttggta ggtctcaaac tcccgacctc aggtgatcca acaggcatga gccaccacgc caggccccac cgggaagtgc ctgtggggct ggtgtggaca ggattctcca tgacctctgt tactcatatt aggacagtct gatggctggg caaaccctgc accagagtcc ttccgataca tgattctggg ttccagagat atccatgcat gcatcggcat cccacaagct tttgacatca atagtagcat taacttggta tctctggtae tgctcaatat gctcacatct gtaatcccag cattttggga gagttcgaaa ccagcctggc catcatggtg ttagccaggt gtggtggcag gcgcctgtaa aattgcttga acctgggagg cagatgttgc gggtaggcaa caaagcgaga ctctgtctca ctttattctt tttgatggct gtaggtggat tgataatatt taagttatgt cttcagcatc ctatccatct gtaaatgtct ttttgaacat aatgagaatt tctgggtcaa agaggatatg 108480 108S40 108600 108660 108720 108780 108640 108900 108960 109020 109080 109140 109200 109260 109320 109380 109440 109500 109560 109620 109680 109740 109800 109860 109920 109980 110040 110100 110160 110220 110280 110340 110400 110460 110520 110580 110640 110700 110760 110820 110880 110940 111000 111060 111120 111180 111240 111300 111360 111420 111480 111540 111600 111660 111720 111780 111840 111900 111960 112020 112080 112140 112200 112260 220 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tgtettccaa agtggtcgta ccaattaaca tttccccaca ccctggagag atgaaaaatt gaagctgttg gccgttatat aaccctcgtc agagaggtta gttagtgggt gcaaacatac cgatagcaga ggagggtgac tatagttaac gaatggagga cttaaaatat tccaacacat ccaccctgaa tgtgccagat cttgtttgtt agtatttgga tgggagaaat gataaatgct gaacattata cattctatat atgtaacaaa atataatgta tcagtaaaga gagggctggg tttggcaggc cagggtggga ggatagcttg catagcgaga ctctgtctcc acaaaaaata atgcatgctt atagtcccag ctacttggga gagtttgagg etgcagtgag cctacgactg aggaagacca tgtttctaaa agaaataaat aaaagcagag tggtaagaga aaggactttg ctgttaetta cccatcgtgt gataagcaaa aacatataaa atagaagtaa aaatcatacc gagataatgt atataaagct tctggaataa ggaaattcat tgttgtagtg ggcagccttc ctttgatctg gatttggctc aggcaagacc aggtataggg tggtctgagc ttccccagca accaggcagg tgctgataag accggaatgg cccaaagggg ggtgtacaaa acgatctcgt tttatcgcgc actgaaaaac aaaaccaaca gcttttacaa aaaatgctaa agtaggcatt tttaaaatta ctaagtcata gtacataatg tagcgataca ttaatgactg aagttcttta tcagctcaaa ttctgcaatt acacaggctg gtaaaattag gcaggagggc taacctcgct gataatgttt gtttttatct cacagagttg gaggatgatc tggctgtgac acctgtcacc caggctggct gggcaggtgt cccctttctc actgcacact tggtcaaaga ggaagacctt agggtatatg agcacctgtt ctgfccctgcc acaagatttt attgtgcatg gtagcatgag ctaggaggac tgcttgagcc caggagtttg gtctcaaaaa aaagaaagaa agaaagaaaa acgtgctcac ttctctcttt ggaatgtagt tcatcacagt gagcacaggc taaagcatct tttgttttta cagaactcat tatgttgtga tcttcaagta aaaggaaaac cacccatcat catattctcc agactttgtc aacatgaata tgcaaattct tttatcctga cttttataaa tttctgcata ttctttataa ttatcatttt aactgcagtt ttcttaacca tttcactgtc gcctggagct tttttttgtc tattgcatta ttagtcagtc aaaaagtaat aatattttca tccagagttt tgcacactgc tcccagagat agtgctgggt gatggtgttt ataaacttct cacacggctt tcatttctat ctctttgatc tgtttactct ctgcataccc tcttgggtga ctgttgaagt cttgaggctt gttttataaa ttaattgctt ccagccagat ttggccactg aactaeaccc tggacagatt aaattaattg gtcactggco taotgtgttt gatcctatag tcccccacta ccagtagcag gaggctccat ccatttgccc cacctcctac aataccccac agtggcttca acccacagaa tttaagggga cagaaatgag aaaagcgttg ttcacatggg ggtgcctata aggaaatggg ggagggttgg cagagtctct tgccccatga tagagggttc tcacggccac tctaggcagg gcttcccaat ttacccactc tgctgaacac agatgttacc ccccgacctg taatgaatga gagtgccttt tatgggccca ctttggagtg catggtggag attaataagc ctgggggtgg ggggggagaa aattagatag aagtaataag ttctaatgtt aacaatgtat tgtatatttc aaaatagcta agaaataata aatgcttgtc tgcggccatg Cttggaagct aagcagggtt gaacctggtt tgaggtgata gatatcctaa ataccctgtc atatcacacg tatcccataa atatgtacaa cacggtggct cacatçtgfca atcccagcaa aggccaggag ttcaagatca gcctgggcaa aaaataaaaa cgaattagcc aggcgtggtg ggctgatgca ggaggattgc ttgagcccag eaccactgca ctctccagcc taggcaacag taaataaaat aaataaaaat aaaaagactg gggctcaaca gtactagcct tgaaccctgg tgccttaacc cctgtgtgcc tcactttctt cacttcaagg gtcattataa aaagccaata tgcctggcac acagtaggag tttaataact tgaatctgtg tcctctttgt ccactaatgg tggggaaggg cagagactga gggcaactgg gagtgaggct gggaaaggtc tgggagacag gaggctggag cataaggcag ttcagttttt atgactcctt tatactgCta atgttttcat tatttaatga atgattccaa ggggattctt cacatgttta aaaattgagt fcgatttaaat tgtgagccac agctatcccc aaaatcatga aacatcaacá tacaatgcca attccagaat gggttgaaac ccagcttttt tgctaactgt gaatctcaga Cgtctagtct gtaaattgaa ttgtgaagat Ccaataaaat cacaacatgt ccactgatct ccagagttga ttcggctgat cctcaccact ccgcatgcat tcctcccgaa tcctgataga ggaggaccat tctCcagtca agaatctccg aaggagctct cagtaaaatc cctgtaatcc cagctactca ggaggccgag agaccagcct gcgcaacata gtgagaccct gaataataat agtaataaat cacctgtgca aagtgtacct aataaatgtg atcattgtaa tgactttatt ctataagcaa taaaagagga aaataatttt ccaacattaa caaagaacat tctcccaacc ttcaataatt ttcaattttg cttacttcac atggtcgcaa tcagtgttca caaatatgat gttataaacc ggtctccatg gtggctgcat aatattgeat tgactatgtt tggggaaatg gaggataatg ccagggtcat tattcttaag atcaaatccc agcagtgaga aggctcttgt tatattttac tagattgttt gtaggaacac agacgtcatc caaccttgcc gctaatttaa taagtatgaa atgctatcct attaacaggt tgaactattt tccaagtatt agtagtoatc cacttccttc acctgtttat tgtgagcgag cacttcagag ccaatagaca aggctcetga gcaggggaat gcatgatcaa gagaaaatgg gctgagaggc agagatatgt tgggggcctg aactggggca acggcctgag gtgtccccca tattagagct tgcggcactt atacatgtac tcactctccc ttgcaaatct aaggaattgt tctgtcctgt tcacttactg atcacctaat gaagggatgc catccccaac agagttgtgc aaaatgcaac agggaatcat tcaaattaag agagtctaca gcaactaatc gcttccccaa ccccacctcc atectagaet catagcacct tgcaccatga ttgtttgatt 112320 112380 112440 112500 112560 112620 112680 112740 112800 112860 112920 112980 113040 113100 113160 113220 113280 113340 113400 113460 113520 113580 113640 113700 113760 113820 113880 113940 114000 114060 114120 114180 114240 114300 114360 114420 114480 114540 114600 114660 114720 114780 114840 114900 114960 115020 115080 115140 115200 115260 115320 1153B0 115440 115500 115560 115620 115680 115740 115Θ00 115860 115920 115980 116040 116100 221ΕΡ 1 325 130/ΡΤ agcacctcce acagtagact gtgtttctga ctgcagggct gtgccaggtg cacaaaataa tcagcaagtt cagagtcaag tgggataggg aaacaatggg actcaacttt ctaaccaaga ggttaagact ggtgtggagc ttcattaaag agcctggctt tgcagctttt aagtcatgta ccagctgccc ctaacacctt gcaggggcag acagcctggg aggcaecacc ccactagtgc cctagcctcc caactgcaag catcaatctt ctaggttcaa atttaqaatg atccagctcc gccaggcccg gtggctcacg cctgtaatcc cacttgagga cagaagttcg agaccagcct aaaatacaaa attagccagg catggtggta tgaggcagga gaattgettg aacecaggag attgcactcc agcctgggca acaagagcga gcagcttccc tccacttccc aaccacagct atgcacatga atatccaacc aacatgtcta ccccttggcc accctttggc catgggttca agcccacaaa gggccgggaa gtccacttgg ctaagtgtgg tctagaagag agatgcagct cttcttgccc ccatggaggg aaactggcta acagggctca gggaaggact ctttttgacc ctgtttctcc atctgtaaga aggggacatt atcagccagc acacgtaagt tcatgacatg tataaataat aggccaggcg tggtggctca aggaggatgg atcacaaggt caggagtttg aaaaatacaa aaattggccg ggtgtggtgg gctgaggcag gagaattgct tgaacccggg ccattgcatt ccagcctggg tgacagagca catacataca tacatacata catacataca accctaaaaa tgagacaggg aaagagaaaa aatttaggtt ttcttgcctg ttttagaaag ccaggcagaa caaggtgtgg aactcactgt gtccctccac ctcccagcac agtaggcagc gcctggtgac cagtgggaga gctgaggagc aatctgattt tcccccaggg cccacatcac tgggatctag ctgagaggct ccatttttgg ctggatgata cgaagatgta gctttgcagg ccttcaatga tgggacactg aagcccacag tcggaggcag agaccaggct agaactcagg cacagtgggc agccctagca agtgccaggt tagtacacgt gggtaggaag tcatatctaa cactccttat gagaccacag gtgctgggtg tgggaggcca aggcaggcag attgcttgat tagtgagacc cccacctcta ccaaaattag agctacttgg gaggctgagg tgggaggact agccaggatc atgccactgc acaccagcct gtctcaaaat aaataaataa atgacagcag caatgcctat ttctccaggt agtcactagg accaaataca gggtcagcta ctctgttatg aaacaactct atgagctggg aacaagtatc ttatctatgt atttatctat ctattcattt agtcaccagg gatggcctca aacttgagct tttattgatt gattgattga ttgattgact tcgacagggc tggtcttgaa ctcetagtct ttgctgggat taccaacacg agccaccatg actggggttt gaaaaggtaa gcgacttgcc gagccagggc acaaacccat caaagcctgt acactaaccg ccaagtgttc tacacagtga ggaggttctg tggactcact cggtgggtat cattgagagt agctgcgctg ttagtaagtg gtgccaataa acccctcctt ctacctggtc atggggtggg cgggggcggg tgtcctcctc tctccagaga tcttggcttc ccgtggggct taggtcagca acatttgctg agcacctact acaaagccaa agacaácatg gaccctgaac aggctctctt cactggaagg taactccaag gaactccagg gagctaaaat tctgacttct aagaaaagat tcacccagac ttgagttcat acctttgatg aagttatgtg acctctccac ggctggagtg caaagggagg cactggtacc aagccgggca acctctgccc ccaaggcatc gcacttggaa aggaacctca cctttgaaat ttgaagttct atacagaaat acagccaqca cagcactttg ggaggctgag gtgggtggat gaccaacatg gtgaaacccc gtttctacta cacgcctgba atcccagcta cttgggaggc gcagaggttg aagtgagcca agatcgfcgce aactccatct caaaaaaaaa caaaacacac ccatctcaga caacaagggg cctcatgtcc aggcccaacc acaccctctc caaacatctg tgcactggca gaaaggtagt tcagagaaga gctttttgag attccagggt ccaggataac tctgggaggc acattccttg gtcttaggga gatgagggcc aaagcagagc cctctaaagc agatctaaga gcagcactac ctctctgagc aatagactct ccccgctaga gttactctac aagcaagggc t.taatatata cccgttgtac cacttgtaac cccagcactt tgggaggccg agatcagcct ggtgaaacct catctctacc cgtgcacctg-tagtcccagc tacttgggag aggcagagtt tgcagtgagc caagatctca agactgcatc tcaaaataaa taaatacaca tacatacata catacaatac atggacaggg acatgttctg acaaccttgc cctttatact ggcctggaca ggagccctgt tcccctcagg ggaagggttc tgggtgacaa gtgcagcccc acgtgtctcc attgactggc tcaggagcag ccagggtggg gtctgaagga atccctagaa gtgcccagag ctgggaaagt ggaggcagca tagcttctag tttgggagtc acagagacac actctctaga acatggagtc caagatattc aggagaggtc tgtcccagtt actcagccat acttttaatt tggaccagga ttccttttac agggtggaac tgtgaaggtc atccgagggg gaactgaccc ccagacctgg ctctgccact cagtggttca cacctgcaat cccagcactt tccaggagtt cgagaccagc ctgggaaaca ccaggcgtgg tggtgtctgc ctgtagtccc gcttgagcct gggaggcgga ggttgcggtg ggatgacaga gtgagacaga atgacacact atcatcattt ttctttctgc ctctagactg ataaaagtaa aaataatatt atcagcattt ttctttcatg ctttgtttct tttaagcctc gtccttcttc ctcccatctt atttatttat atttatttat tttgagacaa ggtccttcta aggaactagt gtcaccaccc cccaatttct ggttaatttt gaggcagggg tctcgctaag taagcaatcc gcccgcctca gcctcccaaa cccagcccct cccatcttct gaataggaaa caaggtcccc tccctagcta gagagcttca gctctcgccc attgagccac cggacctcgt aggtgacaaa gaggtgaagg gaagagccag gcccagaggg aagggggatc ttgggtggca agaactcgga agtccagact catccagtct tcctttccaa agccagctgt tctccagaca cttctcaggg aaaatccgac gctgagccca gcagatccac ctagagccac cagagggcgg 116160 116220 116280 116340 116400 116460 116520 116580 116640 116700 116760 116820 116880 116940 117000 117060 117120 117180 117240 117300 117360 117420 117480 117540 117600 117660 117720 117780 117840 117900 117960 118020 118080 118140 118200 118260 118320 118380 118440 118500 118560 118620 118680 118740 118800 118860 118920 1189ΘΟ 119040 119100 119160 119220 119280 119340 11S400 119460 119520 119580 119640 119700 119760 119820 119880 119940

222ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gccagcactg cggccaaggc ccagtgtcca agagtccagc agcccaactc atgttcaggc agaattactg ccaaaatagt acctcatttt accaagcact cgatgaccgg gtagcctcac attgtctagg gtcacctgga ctccccccaa ccctaaccgg gtaagagggg tcagagtgct atgagaccag ccagccaccc gctggaaaca cgacaatgga tgggggtgga gggggtgagt gcggggatga gcagaggggc ctttcctcgc agctcgtccc cttgggggcc cggggtcccc gacagcacac ctgagtcagc gtgatattte gctecccggg acccagcgac agattgtgcc acccccaaca ctccctcccc tcggggtggg tcctggggaa ctgggtgagg gaagacggga acgagagggg cgggaaagga ccgaaaatgg aaccagcagg ggaatgaaac tggggaagag acgagagaca gagacgcagg gacagtgaga aagacagaag gagagagagt gagggaggga cgggggagaa aaccagagaa agcagagaat gaatgggaag cactgcattg gaccctggca aggggcttct gtgctcgcgg cacctgcggc tccagcagcc gctcccccga gggccccgag gagtcaagac ctgggtcaac ctgctgatac cgcctgtgac tccgcccctc tttaaaaggg gctttgggtc ctctcctgca acatacacaa aaaaacgcac cactaagggg catacacaca gcgcaaaacc tcgcacagcc ttcagcggct cacccgtgtg caaagggtaa cgggcaagca cacgctcata tgcactcgat gcacactggg cttgaggtct ggacagaaat gctggaggct gggtgaccca gaagctcatc cggcgttcct ctaaactacc gcgaggacga tcgaacacag gagggggtta gaaagccgct cagcaaacga gggaggagcc cctcgctgtc cccactctcc gactctcgag cggacagcgc cagccttccc cgccccgtcg ggcccgcagc ccgggcggcg tcccgggecc bcccggagcc gagtgggagc gccctccccc gggctcaggc gcctgctgca gggagagaag cagggcgtcc ggtaacctgg ggaaggggaa tctcagcagg agggcacttg ggtgggacgc agggggcagg tgtccccgct ccacctgctc actcagcaac tcctcctgcc atgtgggtag ggggctgtct ttgaagaccc ageacaccaa cagaggccga gtcctcgatc atgatgtgtc tgattctact aacgacatta gctacctacc ttctcatgcc tggggtgcct cgtacagatg aggaaactga gaactctgat ctccagactc agctaggtgg ggtggggaca ctacagagaa gaccaaatgc acccaccagc cagccaccta tgacacgagt tccctgccct cagcagataa ttatgggaaa tgcgactgcc tggagccagg aggaggagga gctccccccc tcccacccct ccccgaagag ccgccgccca cccgcccctc agccagcccc actgcgctcc gcggctoatt ccggggaagg gccgccgcct ccaggccctc acgcagggtc ctgtcctgcc gccccagaga cttttctttc aatttagggg cacagagagg gggcacccga gagccgaggt ggggagagaa agggaggcag gagccccgcg gggaggagga accgggcagg gaaacagacg gggaacagag agacagagac-atcgaatgag aacgcgagaã aataagacca acatttatca cggataggaa aggaggagcc gagcggcagc ccagggggct ccaaccccgc cagcgctgcc cctatcctac gccggggcgg cgccctgcag cctttgtagg caggccatga agggccagag ggtagaggaa gttcacgcga cccccgcggg agataaggtc acacccgcac gcgcgcccat ccgggcacat atttctttcc tcacgtttcc caccagctca cacactcacg tgcccccccc tcctgagtca cacctgcaca cttgcacgca caaactcttg gggagtggaa ggaaaagtgg gggacactgg cgcgagggac ttctcctgga aagttgggag gcattocccc aagaagggat tcctccgggt cgcttaagcg cccgcctcct agtggtcgag agcgagtgcg ggaaggagtg ctcggctagc agcctgggca agctagcggg gcgcgggcgc cgccccgccc cgtcccgtcg cagggtagag cgccgcggcc ccgeggggtc cccgccgtgc cgctgccccc tcccccgagc aggtaagaac gccagcggcg cctctttcag ggattgaggg aagctcagcg ctggggccgc gctgggagcc cgcgggcgcg tggacccggc ccggagcggg cgggggacgc tgaggactcg cggtgcctca gcaetttctg ggggaggtag gaggcgcaga agcccggcca agcctccagc tcaaaatgtc taactgcaga gggacaatca ttgccaccaa acccctccac acaccaacac ggagacttaa tgcagcctcg ggcacaagga aggggagtac aaatttccaa ttcgtccccc gcaaatgtgg atggggggag attgtggcac ctactgtaaa aaagtcttca gtqggcacct caaaaagctg gtagtctagt ccgtgacacc tgtataaggg gattcccgga cggggcttcc agcttcgggg ttccgcctgc egcgggcccc gggaaccgat agcgtctgtc tccgcatctt ggaggcagct cggcaaacaa acgccaaacc ccaccctgct cccccaggcg caggccctag tcctggaaat agggggagcc tgtttctacc tgatccgaaa agctgggggg ccgagaaggt gcccacgggc cgggagcctg agacaccgag acacacagag gagagacgaa gacacagaga agtagagaca gaaaaggtcc cacgaaatat gagtaagagt gaacgagaga ccgtggaggg agagccgact gtatgccagg gcggcgcggg cagcggggcg cagcagcccc ggcaccgccg tggccaccgt acccgaagcg ctccgcggac gcgccgggcc gaagtgccta ggtgatgggt gggctccagt gagaccataa agccaacagt cttctcccca tcccctcccg gacacatcat ctcgcacccg cttgtaaatg acccatcccc aagatcgcaa gacatgcacg ctggcggact cccgcttccc caagcccgta agcatccttg cgcgcacgtg catatactat tcttatagtc aatcttggag cbgtcccagg gcggctgggg gcgggggagg gggggaacag gacaagtcca ttctctagaa gagtggcgcc ggggggaggg gggcggggtg aaagggttaa gtcggcaagc ggggtggttg ggaagagctt cacggacaga cggactgacg tgggcgtcga cggccagccc gggccgatgg ctcctcccga cggccacgca gcccggggac atccggcggg ctcagggagc atcgagacaa gatgctgccc ggagagcgga gggcatcctg tggggcagtt ggggaggtgg gcccccgccg ccagggctgt tgcgaggagc tcgtgaccga gagggaggct caggfctccgc ggccggetgg ggaagcgccg gccacctggg aagacaggag gggaaatcca agtggccctc 120000 120060 120120 120190 120240 120300120360 120420 120480 120540 120600 120660 120720 120780 120840 120900 120960 121020 121080 121140 121200 121260 121320 121380 121440 121500 121560 121620 121680 121740 121800 121860 121920 121980 122040 122100 122160 122220 122280 122340 122400 122460 122520 122580 122640 122700 122760 122820 122880 122940 123000 123060 123120 123180 123240 123300 123360 123420 123480 123540 123600 123660 123720 123780 223ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tctggtagga gagatggagg aagggtgtgg gccagagact aggagaactc aaagatggag gggggagggg gagaaggaat ggtgaagacc aaggaagagg agactatgga cagggaceca gggaccctgg ggactggaat gggatggtga ctagagaagg atggatggga gaggggctgg agggactggg gattgggggt tccacgtggg aagccctcca gtggctggtg ggccagatgg gacagagggt gaggactttg gctcctgtgc tgccatttat accacggtgg ctgcttattt cagctctaaa cctccgtcac accaccacct ccatcceact tgcccgcagg ccccagccct gtctgggacc ctgtgcccct atcctttcct gggaccactc ctgcccccta ctttgggtcc cggcccaaag agtggcctgt ttgatagcca gagtcctgga cttcagcctt ccgggatcaa ttctggccat atattctgga tctagaacaa ccgcaactgg ttcctfcgcct tgaccctgaa gcacctgggt gcaatttctc cgtggtttct gcggaggatg tgggcttgat gtccctcttt ggccactgtg tcatgtttct ttgacctcca ggggattatg tgcagtgcct aggacaaaat ctgcagctct agccatcccc aggctgctac aaagggcttt ctgagaaaga caatgaaggc aactcacact tcccctcccc taggtggcca ccgaggtatc ctecaccggg aattcacaaa ggaggcctgg gcctggaggg gggaagggac gtggcaagaa ggggagagag ggaaaggcac ccctggagtg ctcgctccag cctcccctcc tccttgcctc gttacagctg ctttgcacgg gcagcagctg ttatggagga ccactatcat gggctggggg aggagagtgg ggaaagagaa ctagggagag aaagaggagt cggaaggaac cctgatgcca ctgtctctcc tggggcagcg gggctagcgg ccatcagggc ggatcagaga aggatttggc ggtgactctg acaggaaggg tccetgccaa cactttgctg tcatcacctc agtagaactg gaaatctcca gttctaagcc tgtgcttcca cactccacct accccacgtg ggtctaagaa aggggtgaga agggccgaga tgtcactgag tattacatca acgcggagga cagccagcac gacactcacg gtggggccca ccgcacctgt gtgctccccc gcgctagaaa gaggatagtt gggggtgggg tggggagggg aaagtggtga gggaagctca aaaggttaga tgggaaaagc gaaggagagg aaagaccaga gaatcctggg atggaggtag ggaaaaggag aatggaaaga ggtatcagga accggcgaag agaggaggga agaggaggag gctgcccagg gatgagacaa ttcccaaagc gcctgcctgc ggggtgcttt gagctcaggg gaaggggagt gacagcctcc ttatccggcc cggacgttgg tggggtgtta cattctggca ccgcgtcagt gcctccccag cctcagctcc cacctcctca tccctgaagc agcccgttgg ccttccagag cgagaggcct tgcaccagcg actctgccct agttttcttc tcctcaagtt gggctgagaa ctttgtttct cagtggtccc tcagtgaaca taceatgttc tggcctctct caggggtcat ctcttcttga aagcctagga ggtgaaagtt tagccaaaca gactcagcat tcctgtcttt acctcaaggg tggccacctc ttaaagaaag tccaatctgg gttccacctt ggggctccct tccttcatct tgtgttgtgt tcaatgtata aggtgcttct tggtttcctc tgctgacttt agaggagggg cctctgtcca tgaagtagtg gagctgtaga gacctggtca agccctcaat ggtgttacct eccctttcca getctgatac atgaaggcca ggagtggagc aaggagtggt ggtgctgagg agaaaagggc acacactggg agctctctag tcccccaacc ccccagcagg cctggggcag cagtgagagc cgctgcgtga cagtggcaag ggccagaaat gcccccagca ccgggtcgct aggtgagccc tggttggggg gagaagtagt ctaatgtggg aggcaccctt gccagctcct ggggaatggg ecttgcctct gtcagtccgg aggctggggg tcaoactctg gtgagcttgt ttcttttggt gtcaagtcct aagtgecctg gctgggcatc tgtgaccttg ggtaagtcgc atgcttgaac cagaggaatc ccaaacctca acectcatga ctgcctggtt cagatgaggg actcgggagg agaaagtaat aacgcggagg tggtgtgaac cacccagcct acacacgcac gcaccgacgc agcaccgacg aaagcgagga gcagcacact ctctggagga ggaacaccag ctactgattg agtgacagat tcagggggag agggatagga aaggaggagg gagatggagc gtggagggaa gtgggaccca tcaggggagg gatgggaaga cgggaaagag aatcaggact tcagaaacca gagaaggatg agggttggag acagggaacc gaagagaaag gctgagagag agaggçttct ggtaaccact cacatttctt ctctcaggga ccctgggggt ggctgtgagg gagggtgggc aaacaggctg attctgcagc cgctgccgcc gagtgagaag ctgtttgcag gcccctgcgt cactggcatc gcccctgccc cctcagcatc gtgtggagcc cttgcttctc ctgctgcctt tccagggagc gtgggtgggt agcctggatc ccttcttcta caggggcctc gagccttggt actccaaggt gatacttttg gctctggaca tggctccctc ccctggtcag ctcccacatg taatcactac gcagagagag ctggagtccc tgtggetggc eeagccctag cagtgtctca cacattcagg atcagagtgt ctctctgaca gtactagctg catgacctga gcaaattggg ggccacaata aagaagttaa cctgtacaaa ctaccctgct gtactctccc gtgagcagag agggtggggg gagggatgaa atgaaggctt ggaggcctgg ggtgctcaga atgatgtgag gggtcggctc tctgtgcatc ttgccccagt cgtggtcctc gggagagaca aggagtgaga acagggggtg cagggcaggg actgagggcg ccccagtccc accacctctg tgaageccag agccccctcc attátggatg agctccttgg ggcaacagag tcactgttat cttcagagag cctgcaggga agacatggga acaagatgga caggtgggga gcaggagagt gcagagttta ccctcaaggc gagattgcac atccttecct aaagctctgt aatcctccag ggataagggg taggattaag tagggaagtg gagatcagag aagagacttt tctggccctt ttgctctctc tgagctccag gaggggacct ttgcggcttt aacccactca gggtccccac gtaagagaca ttgctcctcc cgtgaaacgc cgcacggggg gaatggaaca gcagccgctg ggggcccggc gctcacacac cagcgccagg aggggccggg gggagtgtgg atcttccacc ggcagctggg atgccagcgc 123840 123900 123960 124020 124080 124140 124200 124260 124320 124380 124440 124500 124560 124620 124680 124740 124800 124860 124920 124980 125040 125100 125160 125220 125280 125340 125400 125460 125520 125580 125640 125700 125760 125820 125880 125940 126000 126060 126120 126180 126240 126300 126360 126420 126480 126540 126600 126660 126720 126780 126840 126900 126960 127020 127080 127140 127200 127260 127320 127380 127440 127500 127560 127620 224

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT cacactcggg gcctgtcagt cccatgcgtg gagcacctgg ctcacgccac tacccaaaat gcaacctcag gagcgtgaca caacacacac gccttggaga ccccacactc aaaatcacca cccaaggagc cccaggatgt cagagtgcag agcctaggac gttgcttgaa gcagaaggtg cctggctttg ggggtgcagg ctcccttttt aggagtcacc tggaaatcat aagaaagtgt tatcagctat agtgacggca aaggccaggg tatgagtaca gacacctgca ctccactctc catcagtatc ataataagga tggatcatat aaaaaaaaaa gctttggctg gatgcggtag gccaaggtgg gaggattgtt tgaggceagg gaccccatgc ctacaatttt tttttttttt tgtcacccag gctggagtgc agtggtgcga gttcacacca ttatcgtgtc tcagcctccc atgcccggct aaattttttt tttgtatttt aggatggtct cgatctcctg acctcgtgat attacaggcg tgagccaccg cgcccggcca ggcacgggcc tgtggtccca gctcctcagg agtgatccaa gctgcaataa gctgtgatcg caagaccctg tctccaaaag aaaaaaagaa agcctggggt gtaaaatgca gattcccagg aggactggct ggtggcctca cttagagacc ggctctgact ctgcaagggc gaaaagtaca tggcaagacc agaccccaga gtgagtccat ccaagttact tccagtcatt ctccaatggg atgtctggag acattttggt tgtcacaact tagaagacag agatgctgct aaatgcctta ccggcccaac tgtcaatact gaggcagaga tctagacaag gtcaaacatg caatagtgaa ccaatttgca gtgctttcta caatggcctt tcagaaagtg gaagtggcca ggccacttga catgggagca ecagggctct aggcctttat ggtcttgttg tgttgcccag gctggagtgc aaactcctgg gttcaagcga tcctcctgcc acatgccacc atgcctggct aatttttttt tgttgcccag gatagtctca aactcctggc aagtgctggg attacaggtg tgagccacca ttggggggct ggcccccagc tggcactcct tcccctcccc acagctcccg cctcggcctg ggcggccccc agctgcccca tgctctgcac ccaggccaac aacttctcct ctgtgccgct cctgcagaac aacctcatcc gcacgctgcg cctgtggctc ttctccaaca acctctccac agccctggag gagctggacc tcggtgacaa cttccagggc ctggagcggc tgcagtcgct gcccggcaac atcttccgag gcctggtcag cctgctccac ctacaggtga gcctgccctg ctctctgtgg gcccctctgc tccccgaccc acccttcctg cctcagcatc tccatttctc ctccaggggc tttacttttt cccttctgcc tctctctctc tctccctcta actccacaac gtctatccct ttccatccat cactgcctct tgcctcttct gtctgtctcc cttcacacac cgtgtgtgta tctgtctctt tctgtgatct cccccagggt cccctgccca aaggcctttg gcccacatca cggtgaagta gagagagaag aagttgcgct tctctccaat tcactgggca gattcccatt ttccaaacct gtcatctcaa 'tgttatgcag ctggagaatg gatgctctga attgttatta ttattgatct aattattgtt aaatcatccc actccatttc cccaggaagc aaaatcttcc cttggctaca gagcctccgg caeacctggc tgagcagcae tgcatttggt cacagataca tacacacatt cacgcacacg aaaaccacca ctaagcaagt gcaatttgca acccctcagt ctctcccagg gtctctgaac aaacaagtct tcctcccctc tgccttcaaa ttcagtcact gtgtgcccag ggaatgactg ccccaggcaa aactgccaga agaaaatccc agaggtcaag ctagttccgg cctagaactt atgatgggag gccctgcacc cctattaaaa tagcccccag gctctçtggg cctgcttttc ccaaccttca aaagttactt tgggggaaaa cttatgcctg aaatcccaac actttgggag agtttgagac cagactgagc aacatagcaa tttttttttt tttgatacag agtctcgctg tctcggctca ctgcaagctc cgcctcccgg aagtagctgg gactacaggc gcccgccacc tagtagagac ggggtttcac cgtgttagcc ccacccgcct cagactccca aagtgctggg aaaattttta aaaaattagc tgggtgcagt aagctgaggc aggaggattg cttgagccca taccactgca ctccagcctg ggcgatggag agaagttttt aagtaactgc gaatgaggag ctgtcccccc aggaattctg catagttcct cgacccttaa ggcccctccc ggcacaaaga ggaaagtaag ggcactgggc accagtgggc ttcacacggg cctcagatct ccaaagggtc gtgactttgc cccccagggg acatttggca ggaggcaggg tgctgctggc atctagtggg tatagggctg cccccacaac gaggaactat aaccctgacg ttagtctttt gacattaatc aacaggaatg aagagatgat cattcttcaa ttggcattat tttttaatat atgagaagcc ggctataacg ttgtcccctg agcccccaga ttttattttc tattttttcc cctgaaacag aagggtgtga tcgttgctca ctacagcctc tcagcctccc aagtagttgg gactacaggc tttttcttgt aaagacaggg atctccctta ctcaagcaat cctcctgcct tggcctccca tattcagccg ggtctaggcc ttttaccaag gccctggaag cccacctagt aagttctgct cctcctgctg atgctcctgg ccctgcccct ctgctactca tccccgccca ccgtgagctg gtccctgcca cccagcactc agcgactctt gccaggcacc tttgggtcca acctgctcac catctacccg ggcactttcc gccacttgca ccggcacctg cgctcgctgg agcccgacac gcatttgtac cgctgccagc tcagcagcct cctgcagtac ctctacctcc aggagaacag cccccaccct cagccccttt ctggtttcct tggcgtgcgt ccctcctctc tccccaggcc tctgtctatg tctcttttct ctcttacatt tctctacctg tttaggtccc ttgctgttcc cttcacctct ctgcctctgc ctgtctgtct ctcactaact tgcctccccc atctgtcttc ccactccgca tacaccccca tgtctgtctg cacgtgtttg ccttcagggc actctgcctt cagetgtttt tctcacccac cctcaagtct gcagagccac agccactggc atcccacaga atgggacggg agaagcccac accccttcta tgcaggggaa gaaagaaaag ggtaaatctc aaatggaagg aataccagta attgttattc tattgttgtt atgctgactg tttgacacgc aataacacac cctccaaacc accctgagag ctggaagggg gtgaaaatat ccaaattctg 127680 127740 127800 127860 127920 127980 128040 128100 128160 128220 128280 128340 128400 128460 128520 128580 128640 128700 128760 128820 128880 128940 129000 129060 129120 129180 129240 129300 129360 129420 129480 129540 129600 129660 129720 129780 129840 129900 129960 130020 130080 130140 130200 130260 130320 130380 130440 130500 130560 130620 130680 130740 130800 130860 130920 130980 131040 131100 131160 131220 1312B0 131340 131400 131460 225ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ccctctccct acttgaacct ccagttatca atctgctagt eaatagccat aacaacctaa tacagtagtg aacagaacag gagggaaaga agtaaaatgc ttgcctaaat agtgacagta gccacagtgc caagcacttt ttttttttac ctcctcagac catctcctag ggattttgaa gtgcttggca tacggtaagt aacgagcctt atttaacatt atgtgggtca acttcaagga acagtttatg aagtgcactc fctttcacctc cttgttaaca gatatagtca cctccaatca gtcttctcac catcatgttg tagggacatg gaatgaatgt tcatggtctg gctacaaggg aagcacacag tttggactca tttggacaaa ttacttaacc ggatagtact taataataat tggagtgcag tagtgcgatc ttcctgcctc agcctcctga tttttgtatt tttagtagag gacctcaggt gatccactca ccatgcccag ccaataataa atttagcaca aggattaaaa actactacta ctactactaa atgctttcaa aatctcctta gggcctgagc ttgaatcccc ctaaccctct ctgaacctca ttccaccaag aatggctgta gctggtgtgg tggcccatgt acttgaagtc aggagttcga aaatacaaaa attaggcagg taaggcagga gaatcacttg actatactcc agcctgggtg aaaagcccat agttcagtgc ctcaggccaa caacagcaat caggtggaca ttggggtctt atggtaccag gcatcatggg gaaaacacag cctctgcctg aggtgaggaa acatgggctg ccaggcctgc cccaaagggg gaatggggaa gggccaggca gtatctacca catgccaggc gtggccctgt tctcccagag tgttttcttt cttttttttt agtggcacga tctcggctca tcagcctccc aagtagctgg tttttagtag agacggggtt ggtgatctgc ccaccttggc gccgacactt gttttctctt ttttgttttg tttttgtttfc cgcaatcttg gctcactgca tccccagtag ctggaactac agagacgggg tttcaccatg acccgectcg gcctcccaaa ctgaatggtt taaaaatagt ccacacctct aatttgctct ggacccatct gtgaaatggg aggagataot actgagctca tagctatcca ttaacaccag ccaaggtcac ccagctagta ggaacgtgct tcctctgcct tggaaaatca ggtcagtgct caaacatact gagcacccac accaaacccc ctgccttcac acggtatatt ggaaaaatat atagcagtag ccgccaccac ataggtatcc actctgccat ctcagttttc tcatctgtac agcattaaat gcatgaataa gctatataaa tgcttgttaa ggtttcagtg aagtggccca ttatactaag gtcatgagtg agccacctca tctcatttct atçqagaagc tgaggctggg taaatctttt caaccattgt agcctcacaa caacctggtg tcctgaggcc acacacccag gacagtactc tggagtacaa gcaagaccta ggttcaaatc tctctcagtc tccatttcct cttttttttt tgagacgacg teggctcact gcaacctctg gtaactaaga ttacaggcat aagggtttca ccatgttggc cctcggcctc ccaaagtgct tccttattta agaagttttg tgtaaggcat ttagcacata tactgagatc aaatactact tcaatatata ttagttattt gatctactat tttctgactt cttactttat ctgcaaactg aataggaaac gagttagtgt ctgcaatccc agcacttcgg gaccagcctg gccaatatgg cggggtggca ggtgtctgta aacctgggag gtggaggttg acagagcaag actctgtctc tgaagaaatc atgttattat caggacctga ggtcagcaaa ctgaaatggg aagtgtttgt aaggaagcaa cttcacacct tgaactgcct ggtagggctg gggtgagatc cgcagggtgc agctttggag gaaactccac ctgtgccagg tgagttcatt aatgttccag gtgccaggga catattccct actcaagtgt tttgagacga agtctcgctc ctgcaacctc tgcctcccag gattacaggc atgtgctacc tcaccatgtc ggccaggctg ctcccaaagt gttggattac tcagtcatta cagtggcctg tgagacagtc tcactatgtc gcctcacctc ctggggtcaa agacatgtgc caccatgtcc ttgcccaggc tggtctcaaa gtgctgggat tacaggcatg ctttatgctc aagcagatca atggctttgt gcaagttatt gataacctgt accttggcga cagcccaatg tctggtacaa ggaggacacc aactgaagct aggaacatga cctagaattg catccagggc tagtgcctaa gatgatgcta atgataataa tacgagctag atgctaagaa agagatacca ttcccatgag gtcttatatt attcttattg ttagtgggta cacagggtca ttacaagcgt gtgacatttt aatggggtag caagagcacc tttgtaaagc acttagaata aatactattt taaaaaaaga acttggactc catcctgaag agtcccagaa attgcacctc acagcccagt tgggagatta ggccctgaag accctataga cggtgtgacc ggaggcttat atagggacag ttaggggcac gaagagctgg cgcttgaacc ttgagcaggc tcatttttga ctggctccta tatatatgac catctctaaa atggcaatca tcccactcta tcgcccagge cctcccaggc tcaagtgatt gtgtcactac acccagctat caggctggtc ttgaactcct gggattacag gtgtgagcca taaggattaa aatgtaaggc tgggcactat aataataatt acaaattgat catgcattta aggaggaatt tggagtcaga atttaacttt aagcaggttg ggaataatga aaataatacc atagaaagcc catagttcag gaggccaagg tgggtggatc tgaaaccctg tctctactaa atcccagcca ctagggaggc cagtgagctg agatcgtgct aaaaaaggaa aaaaaaaaaa gaccccatcc tccattgact ggcttgggca gaggggacct tctctacgcc cctggcatga ggccttttat egaggagatg ggctgggaga tgccacaggc aggtgtgacc caagátggag cagággacca cagcttttca catcaacaga tatttactga ttcaggagag aacagaaaca agccagatga taaagacact tcttgctcag gctggagtgc gttcaagcga ttctcctgcc atgcctggct aatttttgta gtcttgaact cctgaccaca aggtgtgagc caccgcaccc catggttttt gtttgttttg acccagctgg agtgcagtgg acaattcccc catcttagcc agctaatttt tctattttat ctcctgaact taagcaatcc agccaccgta cacagctggc gatctcagtt tgaattccag taaccactct gagcctcgat gcaggggttg tgaggattaa agtgagtatc caatgaatgg cagcaaaata aaagcacagt gcccaggtct gtctgactcc 131520 131580 131640 131700 13Π60 131820 131880 131940 132000 132060 132120 132180 132240 132300 132360 132420 132480 132540 132600 132660 132720- 132780 132840 132900 132960 133020 133080 133140 133200 133260 133320 133380 133440 133500 133560 133620 133680 133740 133800 133860 133920 133980 134040 134100 134160 134220 134280 134340 134400 134460 134520 134580 134640 134700 134760 134820 134880 134940 135000 135060 135120 135180 135240 13S300 226ΕΡ 1 325 130/ΡΤ agagtgcagt tgttcagagg ttggacccta ggcgagtcac agataataat agtatccacc gtagcacaga gcttggcaca gccgatgatg acgatgatac cacagagtag acactcggta aattcataaa aatcagatgc tcacagatga aaagacccag aagcagctca tttgattagt aagaacagga tgctgtcagg cagagagctg tgaaccggcc ggatgacttt agcagaggct aggggcgggg ggagggetag ttttaacagt ggagagagga ggatttggca acagcttgga gaagggaggg gcaggacttt agaaattctg tgggccaaaa ctctggaact ttggtctact tgctcactct cccccaaccc tgtcctactc ttgctgacac agggattcca agcctacccc tgagtcaggc tgaggccagg gggtggtggc agcagggggc ggacggatct caatgtggcc agggcggaag ocagatggga tgggtgtagg ctgggagtca gtggcaggca tggggaggaa gggaacaggc cccctgggtg agacctectg gaacctgctg cagtgaggtc agggagctga ccccagtgct ctcctctaaa aagtcagctg atcatcagaa ccactggccg tgggccacac caaggtcctt tctgcactaa gacagcgcct ctaaggggag cctcbggggg tggagcbgat ttcccccagg gagctcctct tattgtcata gtagccacca cttaacagca tttatcatcc gaatattgta catactgagg acagctaggg aaaaggcaag cttcataatt ggaccaaatc tctttatgtg aaccatcctc ccccatttta cagatgagga taatggctaa caaacaaaaa ctcatggaac tcatagaact ttcatttaat ctctacatta tgcccacggt ggcatcagtt ccagtctcca tacttcacca gccacactgg cttccctggg. ctcctgaatt agaaactctg aatacacccg aaagtttagg aggttagagg aggcagaatc cttctgccac ggtgcacccc tgcctcaggc ccattctctt gcggacctgg ccaacctgag gagcacgtgt ttcgcggcct cagggcgtgc accgcgcggc aacaacagcc tggcctcgct ctgcggctca acgctaaccc ttccagcgcg cgcgcgtgtc ggcegagacc tgcgcgcgct acgcggccgg gcagccgcgc gaggccgggg cgcccccagc tctctggagt tggaagccac ttcacttctc tgaggctcca tcatagggtt gtgacaatta tggtaagagc tcaatcagtt ccatcctaga ctgatgagct cagctctgtg gaatgaatga agatgggatc ttaaagatca gcccagagag gtgcttggag gtcagagcca agagctggga gaagcaggca gggatgctgt agtggggagg caagggaaat ctcagcccag agggagggga ggctgtgaaa çtcaagagct aggaccggat ttgaaagcta tggggggagg aggcaatgga ttgcagagaa acaaaaggag cctggggctg tgggtcaaag cttctgacct cccgaggtcc ccggcccctt atcgatcctc ttcataaaaa gaggaacccc ctggatgggc ctggaagaga gaggtgcaag gagccagctg ggagaatggt ggtgtcagag aagaggaggg ctcttggcac gggggcgaga acaggcagga atgccctccc ccaacctgag agcgtctccc caggcagtga-aactggcctg agcagagtgg accacagtga tgccctgcac agtcctgctt ccctctctgg aaagtgagct gggctgatgg tcccctggtg agctggttat acacccgccg ccccccgctg tgtggcctga ttaggtgact tagtaatgca atgtggcttc gcccctcacc ccaataccca tttaaagaaa agggacagga tttattgatg gttgactatg aaccctcctt tagcctgctg aacctgagac tccatgaggt ctggattttg aactagggct cctgtgtgct gggcacgtgt tggaatcctc agaacaaacc aacaggcaca gagagatgac caaaaacaaa aattaaaaaa ccacaaggaa aggtgttcta tacagatgag gaaactgagt aatgacagat ccaagatttg aaccagaagt tctgaaactc gaacctgtag acatggggat ccccccgccc caccccgctc aaccactgac ctcaccaata caaatccagg atgctatgaa cttccctccc ccggccaagg cttctgtgcc ccactccacc ccacctcttc ctccacggga gggcagcctg gaccggctgc cttccgcggc ctcagccgcc gcccggcgag gcgctcgccg ctgggcgtgc gactgccgcg cagctccgac gtgacctgcg ccgcgaggcc gacttccagg ccgcggcaac agctcctcca cgatccctcc accctctacc gttccactgc atattagctg tctcgtaatc tctgaaatgg agttactata taggatctgt acctgcttga caatgctgac ctgtaagcgg gggtgcctgg ggcacatccc agaactcacc cctatcctaa gtcccttgtt ctgcgcaagg tcacacagcc gtttggaggg aggcaaggtt gttaagattc caaatggatg gtggtttttg aaatggaaga gatagggagg ggagataggg tattaatgca tagagaacgg cattcaagga agtggcaacg ccccaaggca gaggctcaga aggagaggag gttagaatca gcacctgaat tccctaggat cccaaaatgt ggattacccc tgaccataca tctctgggtg atttaggtgt tttgagtggc acaagagcac caggccatgg gaggcctgag ccaggatttg gcagccgaga aggttgaggg gctcagttcc tgtagcgaag gcacaggaag gtggaggctg gcctccgacc aggctcctgg gggagggaga gccacagtca atgctcctgt tctgagaccc aagaggggag gacctcaagg caagccctta tctctttgag gtgccaaggc attagctccc aatgcagagt ccaggaatcc ttaattctga accatagttc ccctagcacc aggcaggtgg cttcctctcc tcccctgccg gcctagtagc agtactttgg cccaattgtt actgagcccc cacctgccag atactgtacc agggggttat acataataag taaaacttgc ctaaaataac ctaagtgctg agcctgtggg ccagcacttc cctcatatga caggaagtag gtatactcat tggcttggcc aagttaagaa aaaaaaagaa taatggctaa agcaccttca tacatgctgc cacagatatc ctgagtgact aaatcagaaa ggctggctcc aaactgtggt cctgccaatg tcccaggctc caccccaaac agagatccgc aggggatcct ccactttttc cacagcaaat tcaaaaggtc aaccctttct ccccagcggg gtctgcaccc ccacccagga tgacttgttc accgcctgcg gctgctcaca tgctgcacgg gaaccggctg tcaccatcct ctacctgttc acctgccctc gctcgagttc cgcggccgct ctgggcctgg ccaccccccc ggagcgccag cgtgtccgcc cgcggcaccc accacctgta cggggtggcc gagatctgcc tgccgaagac 135360 135420 135480 135540 135600 135660 135720 135780 135840 135900 135960 136020 136080 136140 136200 136260 136320 136380 136440 136500 136560 136620 136680 136740 136800 136860 136920 136980 137040 137100 137160 137220 137280 137340 137400 137460 137520 137580 137640 137700 137760 137820 137880 137940 138000 138060 138120 138180 138240 138300 138360 138420 138480 138540 138600 138660 138720 138780 138840 138900 138960 139020 139080 139140

227ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tcgcgggggc gccagggcgg ggacgcgcct ggtgaggacc agcgagggga gcagatgtgc tcccgaggcc ctgcgctctc ggccgggctc gtgccccacc acctctgact gcggtgctga tcccgtccac ccggggctgc ggctccggcc cctccctttc ccctcccagc tcctctcctc ccccctgggc tgtcctgact tgtggcagcc gccctcccca gttctggcca ttaactcttc ggcagccgct gacccgcact cctaagggcc cagagcgtct tccaccagca gagcctttgg ctttggggga tgcctcagtc agggccaggc tcaacctcct gacactggag gaatactttt gcacctggag agaactttcc tctccactgt tgtttgggaa aaaaaattta ttaaaaaatt acttgggacc ccgaaagcgg gatgaggtct ttggagaagg ggagccgtcc cccgccatca cgctcccccg ccatgaggag gagctgaagc gccaagagtg ggtgctggtg gcacctcttc caaccctgag tggtctggcg cctgaggaac acagccctct tccagaccct gttccttcag gtcacataca cactcetggt cacagacagc ggcaetgctc cctcagggaa acacagcccc accaaggctg ggtttccgcg tacacttgcc agcgtacaca cctgcacaca gcaaccctgt aggtagaagc catcagggat gaaccaggtc agggaccgag gaactcgggt gatcagaggg gcttgaggta caatcagaac cttcatcttt gaagagctca ggctaagaag gacttgggtt gcacttggag agaagtttgg tagtttgaat gtggtcgctt gcacctgtaa tcccagctaa ggccaagaat ttgagaetag cctggacaac ttttaagaat ctagtttgga gtggggtgtg gggaggctga ggtggaoaga tcacttgagg ggcagaaacc ccgtctctac taaaaattca ctatagtccc aggtactcag gaggctgagg gactctgtct aaaaaaaaaa aaaatctagc gcctagatgc tagggcttga ggaagcaggc aaatgatctt gagaagaaga gaagaaagga tagactccgg ttaagggtgt ggggtgggct ccagggagct cggagtctgg ggtcttgcag taatgggttg gattggaggg acagccagac gcctgggcag ggggagggga gctgctggta ttatcattgt gaaatattca tgggccatcg aagaggagtg tgtgagcoto aggaagaagc acccctccca ccaccagccc agaeagaccc cccgagctct cacacacact cgcaccaagc ccacccacgg gtcccacaaa caggcaggtg gcacacccac tcaatcagga cccagcagag ccccaaactc tccaaacaac ccagattcac ggatgttcaa ggccatccag cccaaccccc tagaaaggaa gggatttgtc tgagattcct cctcccacat tctgagtgta cccccattct ttgtaattaa ctcctccctt tctctaattt cccagccaca gtctatccot tccttoccat cattacctca tgcctggaat ataaaag&aa atggaatctc tccctccctc ccacccagcc aatttgcata tgttatgatg tcactcagga taaaggtaaa acaccttagc agagcatcaa ttctagcctt ttctctcaca atctcatccc catactggcc accagttatc atgtatgtga aaaatttctc agtctctcct gaagtaggaa cagagccctt tcccaaggcc aagactgcac gcagcagaca gaggctcagg ctctggctcc accttgggaa gcacagccag gtttcagtcg actgaggacg actactgggg gggctacggg cccggcgctg cctgccaggc gcccccggac cccagccctc tgctttgcct cctgctcctg gatcgaagag gccagtgtcc gatccccgct ccagtcgccc caccttccct ggccttgctg cccggggagc aggccgcctc tccttgcctg ccaagagggc gtgtgtggtg gctcagccct cccatcccaa ggctggggtg gggcccccca cacagcggac accagagggg cttttgtctg aagctccccc agggagcccc acccaggacc tgaccctgac ccctgcttac cctagtcccc ctcctaagtc taccctggac actttttagg ggcccctgcg tggtgaagat caaaagaagt ctattatttt atctactgta agatttgttg cagaatgtaa ggattgcagg gccaggaggg aagagcttcc tggtggctgg aggtggtgtg cctgcattct aggtgaggcg cagtgtggca tcttcatttg tccaggggaa gagctgcagc taagcctggg gaagacctgc tgtctggtta gaaacaagag cagttctcct gcaaggagga cccaacatgg ctttgggtaa atgtgaacaa atgccagagc aaacacctta gcaaacagag tccttggcta agtgcccttg tgcagtgcac gggtatgtgg tctctctctc agctcctgtg agagaagcag gtttccaaac aggctagaag acaggaatcc caaattggga tgcattactg ctggtgtgtg· gaagagaggc tggggactgg gggatttagg ggtgagtctc atcagactga ttggagctaa' gaatctagct tgggcagggt ttgggaggct gacgtgggag gatcacttga atatcgagac tgagtctctt aaaaatgttt atgtctcaac gtctgtaatc ccagcactct tcaggagttc aagaccagcc tggccaacat aaaaaattag ccaggcgtga cggcgggtgc cacaagaatc actccagcct gggtgacaga ttgggaggtg ggaatagaaa gatagagggg tgaggttctg tgattctggc tagggaggtc gaagaaatca gcatctaagc ctgaggcagg gggggagagt gagagcagct ggtcagaaac gggcttgtgt caggctggct gtgaggaggt aagagctctg gtggaggagg ggctgctggg aattagaggc aggctgtcca ggtcatagaa gtccagatgc tatttcagaa cagtgaaagc ctgaagcaaa gccactctcc accaaccccc acggacgccc atcacgtgca cacccacact agagccatgt agcacgtgca agcacaccaa tcccctaaat tctgacatgc acactgacat atcacctcca gcgatctcac atgcgcagac caccttgacc cacacaccct gagataggag accaatgctc tgatggggaa actgaggcca ctatcccctg aaaaaagcaa aattcattca gcattttcgt ctgccagaca cccagcctag cctgcatcta ttcagttacc cagtccccca tctccccacc acctccctgc tccagctact actgcgataa cctcctcgct ggtttcctac ataccgtggt gaccagattc atctgatcaa gcctgtaatg gcttcctaat gcctataggg agatccctca gagtctggta ccaactgctt aaaccttcac tccagctaga acgtttgtat aacccaccaa ccgactttga gtgcccccct acctcttccc cctcctcaga tctcagactc ctctctgacc atatacaggg gttcttcaaa ctccaagcag acggctgccc ccgactggcc tctagaacag agaatgagca tctaaccgcc 139200 139260 139320 139380 139440 139500 139560 139620 139680 139740 139800 139860 139920 139980 140040 140100 140160 140220 140280 140340 140400 140460 140520 140580 140640 140700 140760 140820 140880 140940 141000 141060 141120 141180 141240 141300 141360 141420 141480 141540 141600 141660 141720 141780 141840 141900 141960 142020 142080 142140 142200 142260 142320 142380 142440 142500 142560 142620 142680 142740 142800 142860 142920 142980 228

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tggggagagg actaggacac ttacacccag agtagggggg attttcgatc cctaatccga aggacactgt ggaagggaaa accaggtggc aggcccaagg ccagatagac ttgtcagatg gcccttctcc aaccccattg ctctggagaa acggttttgg taagctgtgt gaccttgggc tgtttttgtt ttgtaagctg tcagtgcaat agcccatggc aagttctgcc tccctcttcc tcgaaggtag gaactttggt aagatccttt ggcctttgta tgcaaggctg gtggagtgag agtgggcagt ggagagagg cagatgataa ggtfctataag ggacggttct cagccctgtt gaggaactcc tctccaatga tttcccaaca gactctgaga tccagctggg gtcaggtttc ttctgaaaac tgagcatctc cccctgcagg agggcaggcc gacagtagaa gggtaaatga aagttactta acctctctga gggacaatag tgccagccta aaagtgacct acatgcttgc agcttttctt ccaaccccaa tggttctccc ctttctcttc gaaacttcag gtgaggaggt agaggaggat agatggcgaa cccttaagcc tctaaggttc tccctagctg cgggcfcccca aatacagact tgggactctc gtecaggagg ceagggatag tatatgaatt tttaatgctt ctttcacctc tgtacatgat tgggacagat attcagtggc cctagttatg ttcccactag acattagagt tctgtgggtt aatcaatttg ttgtggggac tgttattatt ctctttcctc agatgtctct ggctattgct aggcccaaac tccccacctc ggcagagaaa taagaaagtg gccctagcag aggggaggga 143040 143100 143160 143220 143280 143340 143400 143460 143520 1435B0 143640 143700 143760 143820 143880 143899 <210> 16 <211> 215980 <212> ADN <213> Mus sp. <220> <221> modified_base <222> (1001) .. (1100) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (2123) .. (2222) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (3728)..(3827) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (5168)..(5267) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (7481)..(7580) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (8849)..(8998) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (10375)..(10474) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (12270)..(12369) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida 229 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <221> modified_base <222> (13438) .. (13537) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (15902) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (15939)..(16038) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <221> modified_base <222> (18223) . . (18322) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (20974) . . (21073) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (24403) . . (24502) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (27574) . . (27673) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (30892) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (30901) . . (31000) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (34443)..(34542) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (38205)..(38304) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (42373) ou desconhecida <223> a, t, c, g, outra 230

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (42386) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (42393) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (42461) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (44809). .(44908) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (51380). .(51479) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (56740) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (56765) . . (56864) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (62818). . (62917) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (68518) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (68534). .(68633) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (74552) . . (74651) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_base <222> (81446)..(81545) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida 231

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (88519). .(88618) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (93791) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (93794) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (96565) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (96570). .(96573) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (96579) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (96590) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (96596) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (96602) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (96616) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (96629) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (96633) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida 232

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > modified_ _base <222> (96668) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modified_ _base <222> (96715).. (96814) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modified_ _base <222> (104447). .(104546) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modified_ _base <222> (114521) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modified_ _base <222> (114527). . (114626 ) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modified_ _base <222> (127063) . .(127162) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_ _base <222> (139133) . .(139232) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_ _base <222> (151051) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_ _base <222> (153242). .(153341) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modified_ _base <222> (164706) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modified_ _base <222> (164708) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modified_ _base <222> (1164710) . . (164809) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida 233

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (182242) ..(182341) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (192158) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (192192) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <220> <2 21 > modif ied_ _base <222> (198842) ..(198941) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (199437) ..(199438) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <2 21 > modif ied_ _base <222> (208276) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (215974) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (215976) . . (215977) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida <2 2 0 > <221> modif ied_ _base <222> (215979) <223> a, t, c, g, outra ou desconhecida 234

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT <400> 16 ttgggggtat aaacccagaa gtgggattac tgcaccatac- aataatcctc taacttcaag 60 caatttttcc acaatggttg tatcatttta cattcccact ggctacgaga agggttccca 120

cttctacaca tcttcaccac catttctgtt tttgtttttg agtaacagct gectaatgac ISO tgtgaagtgg tatcttatct cagtgttgat ttgcatttct ctgatcatta atgtgggaag 240 gcatcgtttc atatgtttat tggctgtttg tgtatcatct tctttggcga tgttgattca 300 agttatttgc ttgttttttt aattggagtt ttaaaaaatt gttgttgagt tgtgggagtt 360 cttcattagc tctgcatatt aataccctga tgaaaatgat taacaagtat ttgcttccat 420 tttgggggct tccattctgg gctgttttta ttcttttgat actcttttga ttctcaacag 480 tttaatctga ctaaaattca gtttatttct tcttttaatg gccatgctat tgacacatcc 540 cgtaatcact gccaaatcca gtcatgaaga gtttctttca agagatttat agttttagct 600 ctttaagttt gtcatgtctg tttcacttaa ttttgtatag tgtacaaaag tctaacttca 660 ttcttttcta tatggcttgc tactagtata cgaagagcta aatttctctt tccttgagtc 720 tcaacctctg atgtgtagca atttcttcag aggaaaacat ggtgggaagt tccttaaaca 780 taggatgctc catggaggtg aaatagttca tcctacaggg aagcttgtta aacacaggaa 840 gtacatactc agcagctcta gtaagtgagt gaaactgact ggaggcacta ggtccctcct 900 tccctacgca tatagaagct gtaaggattg ggaagagata ctgtcaggtc agctcagctg 960 ctgcccggaa gaagctcaga cccactggcc tggctccaag nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 1020 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 1080 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn atcactottt actcaggcca cctacacgct gtttatagoc 1140 tgcctttgtc tctttggcta tacttcctgt ttatgtctat gcctcccctc tttctttttc 1200 tttctcttct cttctcatct catctcatct ttcttcaggg gggagcctgg tctagaactc 1260 acaaagattt gaetgtctct gtctccttgc actaattaaa aaatctttta caagcatctt 1320 ttagcaattc ttacagggaa attttggaat gttaaactct gattgttagc gggctgaaga 1380 taacaatagc tctgatgata aattgcttgc caggcaagtg tgaaaatctg agtttgatcc 1440 aaaaagccgg gtacagaggc caaagagtcc ataatcctag taggggeagg aatcagggat 1500 gggtgggtcc ctggggtttc ctggtttgtc agcgtagccc aattgggaat agccaggttt 1560 cagtgaacga tgctttctgc aagctgagag aggtccttgt tcaatctctg tgacccaact 1620 ggagggagaa gagagccagc tctccagaag tggtcctctc aactttgtgc atgcatgtcc 1680 atgttcacac agggaatgga taatgcttaa aaggaagacc ggcagggggt tggtaatgca 1740 cctcctttgg tgacatgctt tcctcttgtt catgctgctc caggtgtggt cggcagcacc 1800 aaaaaccagg tgtatgtttg taatcccagt attctctggt cgtcagtagg aaatgaaaag 1860 cgaggtcatc ttcgtataga gttagcaaac tctaagccag cctcggctac atgagacttt 1920 gtctcaaaac aaaggaaaaa tcaaggagga cggctcccga gcactgtcac ctgaagctga 1980 cctctggcct ccacatgcat gtgcgcaaac acatgtcctg cacaaacaca cagacacccg 2040 catctgctcc ccgacaaaag aacctgaaac cagtatactt tgagaatttc ccattcatag 2100 ttaccattgt gtgttccttg tgnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 2160 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 2220 nnggtggtgc ctttctctta cccagtctag aagggctgga ggcagggtgg atggggcact 2280 235 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ttgaactcec aeetaggcaa aaaacccagt gatctctggg ccagtgtgtt gtttgcaagg 2340 gaataaggta gagagccgcg gaggaagaca ttgggggetc tatgagtatg tgaaggggtg 2400 cacacaccac acacacacat tttttttgtt ttaaatttac aaacattaaa ataggctgta 2460 atgtggctca gtgggtagaa aaacctgctg tctaagcctg gtacgagttc aatccctgac 2520 aagctggaag gagacaacca accacaactg ctagcagcca gaagcactgc ttgetaacac 2580 tcaagagagc ctggagtgga agacactgga tccccagcag gcaagcctgc aagaagatgt 2640 gccttgccta gacaacggca gaacaaacat caaggctggc agagctgtcc aggactgttc 2700 atattaatca tgtatagata agagggaatg gcacagacag aacaattcaa cacacggggt 2760 atgaaaggaa aggaacaagg cacacaaagg acaaagaacc tageatacaa gaaagcctaa 2820 gcagagagtg gcacttccea gaagggagtc ataaaataga ctgaattcat taaaacaaga 2800 gccaaagata aacggctcaa aaaactcacg gaaaacaggt caaaataacg tcacccatct 2940 gacagttgat actgtcaact taaccgtatc tagaactcca gcaggcacat ctccaggcat 3000 gcccctgaag gggtctttgg actaggttaa ctgacgtggg agtgacacca tctatggacc 3060 gaagcctcag acagaataaa aaggagccag tgagctgagc gtcagtgctc attgcttctg 3120 gcttcctgtc tgtggctgca gcgagacacg gtgcttcctg ctttagctgc catgacagac 3180 cacaccctca aaccgtgaac caaaataacc tcctctctac attgctttta ccaggcattt 3240 ggtcacacca atgagaaagg ttaactaata cagcactcaa tacttaaaaa cataaacacc 3300 aaccttgttt gcatgtgtga gactttgaag ctcacgggcc agttatgccc aatgccaggt 3360 ctgctggcta agggtgagag tgcacaccta taatcccagc tgctgtggaa tcagcaaaag 3420 cgctacagat ggaaggcagc cagggcagct gagactgact caaaetgata gaggtgggag 3480 gcatagagaa aaccagatta atagagtgtt ccccactatg caagaagccc tgggtttcag 3540 gacgagagaa ctaagaatac agaagtctac tgtgtagaag cactgctagg tcacacagaa 3600 acatcactca agtgtctctg gatgctacac ggagggcgtg tgaagtattg cttcctgatg 3660 atctgtatct actacagcac tgctgtttta gtatgcgctc ctccactaca gctcctcacc 3720 acaccaannn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 3780 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnaat taatcaaaga 3840 aaacacacac caccagttag agaaagttaa tcaggccgaa tggcggcttt cccctgtatc 3900 caggctaccg tcaggacggc tcactgccac tggcaactct gcctgaacaa agcccgcagc 3960 caacgtgggc Ctcaggggct ctaaacactg caatcaaagg ttgtgtgtgg gggtgggggt 4020 gctgctgcta ttcaaggatt cccaaagctt agatgtattc aCcatactca caggaaagcg 4080 tgttcaaccc ateactcatg agcagtcggt accggggtga cctattccct gtagaaatgg 4140 gacggatgtt ctggaaaagt tgacagaaaa gttgattcat taggcaggct ctttgcccaa 4200 gccctgaggg taagcaaagc taactggcag gagactaggt ttgccattaa tctgagacaa 4260 gatgaaccac ttgcccatcc tcctgacacc taaatactaa tgaaagaaca atggattgag 4320 ctggcattat taaaaacgat agaaacagaa gtatcaatag tcatgtgttc tttctcccat 4380 atgtcaaaac aatgtgtaag atggcatcga acacatgcag aaactgttta gggaacatgc 4440 tgaaaatatg aagtaaaatt aaaattggaa agaaagacaa tttgcctaaa gcagctcaga 4500 gctggagaag ggaccgaggc agagataaca gcaacgtgtg gacatacgga tctggggcag 4560 agcagtcacg gactcagccg gaaagggtgg ggcagcctct gaaggaagtt aaggtaaata 4620 gagccacaag gtgattggcc caggagtggt gccaccttca cctcctgcct caaagtctga 46ΘΟ aggaatgatc ctggagtctc ccatctattg atatatgaaa ttcacagtat gttttagaac 4740 ccactgaatg atgggtagat taactaaaag aaatttaagc ggggtggtgc aggtctttta 4800 atcccagcac ctgggaggca gaggcaggtg gatctctgtg agttcgaggc cagcctggtt 4860 ccaggacagc cagagataca tagagaaacc ctgactcgaa aaaacaaaat taaaagctca 4920 tcaaaacaac aacaacaaca aaaaaaacaa aaaaacaaaa caaaacaaca aaacacccta 4980 tagtacctgt tggtgagttt gagtgagtga gtgagtgtgt gctagagaga ggggcgggga 5040 aagtgtgttc tggaaatggg agaaagagaa tgtgcatgtg tgtttctggg atgtagacaa 5100 aactacatgt cttccatcaa atgcaatgtt taattatcta tgagttgaac catcttcatt 5160 ctgctaannn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 5220 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnaac aaaaataaac 5280 caaaccagta aacaaaatcc tgtaagataa agcctaagac aagacacttc ctggggctgg 5340 ggagttgott agaccataag gagttcataa tccaggcgtg agagcccgag ttcaggtccc 5400 tgggcttcca agtcaggagg agaccaagga atcaacaagt ctcgactttg gtctctagtc 5460 ccatgcacac acacgcgtgt aaatacgtag atgttcactc acacacagaa gactgcacct 5520 ggctctctca catctcagcc aacatataaa gcctgcatta tcagaacatt ctaggttcta 5580 gtttcagtca actcttacac agaatggCca tcatactccg tctacaactt ctcctgatct 5640 acccacgtgt cattgcttca gtattaacaa aacccagaat aaccagctgc gtagatcctc 5700 cctgatgccc cagtcattgt cttactgaga ctactaagtc acaaggtagc actetggatc 5760 caaaaagcaa tatccaattg agagttacaa cctataagga ggagtttacc ttcattatag 5820 ggcactggat ccccaatctt taatccaacg tcttcagcag atttcataac ttccaagtcc 5880 atcaaaacaa ctactttcct acaaagacag acacaagtta gaattaagaa ctctgcagcc 5940 tttcagatga gttactaaga agcttacttt agtagttgtc tggctaaaac tgtatccttt 6000 accaaccttt tctcattctg gactaacttg agaagtatta attcctaagt aaatacttca 6060 ettattcttt ccccacatct ccaatgtttt tgtctttaat ttattatagg gcaattcatt 6120 236

ΕΡ 1 325 130/PT tcctatctag ttccctgatt aaaacagtag accttgctgc atgccattat cctcatggag 6180 gcactgatac aatttagatt attaaataca aaaccctaaa acacaaaaag atgatttett 6240 tttaaaacaa gattttaaaa aaagcatgtg ctacgcttcc ttctgccact aagcctacac 6300 atggtcctct gactgaattt ttcccctcat tctgcttcat ctaatatgtg cttttcaaac 6360 ctggaattga accagggact tattcatgct aggcaaatgc tctaccatag agctataccc 6420 ctccaactcc catctcaaat atcatttcca aagacatttt cttggtctct tatttagatc 6480 aggtttcttt gtcctcctgc agctatgact tcattccttc agaacactcg tcttagcttt 6640 aagttctgta ttaattagtg attgttttca ttctctctgc tagaatgcac tttcaataaa 6600 ggcaggtagc cagccacagt gcttaattaa gcaacagccc aacgatgtca ttcactacat 6660 actgggacaa gatgcctaac atcatctgca gataaagacg aactaçtggt gtcaggagac 6720 agctaagggg tccagggctt gggcacgctg agtgtgagca ctggagtccg ggtgcccaga 6780 aacgcacata aatgcaatat ggatgtggca atctacctct aattccttct ttaagacagt 6840 ggctctccag agcaagctgg ctagcaagac aagccatatc agtgagctct gggcttgacc 6900 aagaccctgc ctccaggtgt aactcccaag caaaaggatg atggctcaca aatctcaggc 6960 tatcatgttc atgtacaaaa tgtcaaccgg catacacaca tgcacacaca tgaaaactgg 7020 gagaaaataa gaagaattgc aaccaaaaaa tgtaatttga ggacacataa ttgcaggcgg 7080 ggagtggggg gatgacagaa ggtgaactga gtggaccgag ggaaagctgt gctageggca 7140 atgagaagaa gggtggggca gtctgagcaa gggttoagca atcaccacgc tttactgtct 7200 gcacagcctg gctgtagaat gctgggcttt atcacacaga attattcagt atgtgctatc 7260 tttacagtaa agttattcta tcaggctatg ctacttcaat agaacaagcc tgaaaaagtg 7320 gtctgctgct gagaacctga caaagatgac ctgttagaac tgtctgccaa gCgtggaatt 7380 ccagcactgg ggaccaggag ctcgagggtc aecccagatg cagggagtta gaggccagtc 7440 ttggcaacat aacatcatgc ttcagaaatt aaaaacaaaa nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 7500 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 7560 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn catgagatag ttaataaact gaagaaagcc atacaaggag 7620 taaagtagat agttgcaagc atgaaçaaag acaaaccact tgagcttttc ttttgtcgta 7680 aggaggaaac cagacaggtc cagagagatg gctcagagat taagagcact gactgctctt 7740 ccgaaggtcc tgagttcaaa tcccagtaac cacatggtgg ctcacaacca tctgtacagc 7800 tacggtgtac tcatatacat taaataaata aataaataaa taaataaata aatcttaaaa 7860 gaaaaaaaaa aaaaacctaa ccaatcagcc aggcgatggt gacacatgtc tttaatccca 7920 gcacttggga ggcagagaca ggtggatttc tgagttcgag gccagcctgt tcttcagagt 7980 gagttccagg acagccaggg tgatacagag aaaccctgtc tcaaaaaaca aacaaacaaa 8040 caaacaaaca aacaaaaaag gaggaagcca gacaggatgc actttatacg tgaatggaat 8100 tgacaaaaga caagttctat aagtgttagg gaaaggggga ggacaacggg ggttcatgtc 8160 tgtggtggaa cacgtattag aaggctctgg gtatcctgtt tccgacaaac aggcactccc 8220 aatcacacag gccactggat gtctcaggca gagaaagatg tgatagattg actttttaac 8280 aatcaeagae tgtgtggaaa atatttgtaa ggttgtcatt gtcacccagg atagagctga 8340 tggttattca aacgaggatg ggacaacaga aatgggagag agggatgtga gaaccatttt 8400 çaaccagggt gatttactgc gcacgtgtat agggtctaca gggagtggga tatgtagagg 8460 aggcctatgt tcctaacttt ggtaatgagc ttattacagt Cactatgcac agcctggaag 8520 atactggaaa aggtgcaggc taggctagaa aggtactaac tgagggtttg acagcccctt 8580 ggatgtcagg atgcagcaag cctacctctg tatgtagtca atcccttctc aggctatggg 8640 tcctgcagat catccgtctc tgtatccatt attcccagtc catcçtctga gtggctccct 8700 ctCatccagt ttaacaaaat gctgactgca agctcccaag cccagggctc tggctccttt 8760 actccttgtt attgtacttt accctgtttg cttgggatag agtgtgccct ttataaacat 8820 ttgtgaaagg gggaatgaag aagaataann nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 8880 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 8940 nnnnnnnnag agagctcaat ggttaggagc actggatgct cttccaaaqg tctccagttc 9000 aattcccagc atcaccatgg cagctcacaa ctgtctgcaa ttccagttcc aggggattca 9060 acactcagaa acataagtgt aggcaatcta cgtaacataa aaataaataa atgagctgga 9120 aaagaaaaca tgtttcaaaa tatacaagta atggggctgg aggagatgtc tcaatgggta 9180 agatcattgg ctgctctttt ggaggttctg ggttcaattc ccaccaccca catgacagct 9240 cacaactgtc tgtaactttg gtcctgtggg agctgatgcc ctcttctggt gtgcagacat 9300 acatgtagac aaaacacctg catacataaa ataagttttt aaaaaagtta cacatacacc 9360 cgtgtgtaat ataacacaca ctggcttaac ttcctcagca ctgactgttc accatacgga 9420 ttcccatgag gttttggttg cattctatca ccgaaaaaaa aaaaaaaaaa ttagaagaaa 9480 gtatatacat ataaacctct ccctaaaata aagttttctt Ctctaaaagt acatccttat 9540 ttttttattt tttttttttt ttaagaaatg ggaacaacag ttctgctcac actgtatttc 9600 tagcatgtaa catcttgcaa gtacttaacc gtattctata tcagctcaac acacttacta 9660 ccgaagactc aagatcacaa aaaaaaaaaa aggacccaga ctggataatt aaacgtttct 9720 tctgttgtag taagcgacct cttccttaga agatactaca gtaatgctga agaaatgaca 9780 catctactgt aatctgttct ctgggattcc aacttgtttc ctctgctact cctcccttgg 9840 cggcaatgtt cgtctgcatc cggctgagct cctcgctgcc ttgttaaacc tccttcctga 9900 acttccgacc tgtagttccc gctctacagt gcaagcgagt ggataaggaa gcgcatacct 9960 237

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gccgtctttc agggtgttga cgatgaactt gtggacctgg cagacacagt tgctggccag 10020 ctgccctccc tcgaccaggg tgttcagctg cgtggccagc atgaacgctg caaaagcaga 10080 gagagagggg ctcagtctcc aagcctttcc ttaacccgaa agctcatcac aaggagaacc 10140 attaaataca gctgtttaaa actcctccgc cctgcagaga ggaaagcagc atcaatccgc 10200 cccatgtaaa agtctgaggc tcttcctaaa tggtatctgt ttctcacagt ctccaaatca 10260 tttttactgt aattctagtt tctggggaaa gacctttctc ggtctttagc cccgtgacta 10320 gagacaacag gcaaatattc cagaaaggcc çccattttct ttttaaagct tctanmmnn 10380 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnannn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 10440 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnngcacat cttgtgaagt gtccacatct 10300 ttcggtccct cgaatttggg tttcttctgg gacgtggtag catgtgactg tcactccagt 10360 gcttggagca gcagaggggt caggaactcc aggctggcat tagctgcaga gctggagcag 10620 gtcctggaga acagaaactt tggttgcagc attaatgaac tagaagaatt tttttgtctt 10680 ctgttaaata taaatacctc cattatctto tcataaacag tgttgccttt ttatttaagt 10740 ttttaaggat caggcacaga gactccatgc cagactacca ctcaaccact gagctacacc 10800 cccaacttgc ctttctgcta ttttttaaat tgtatcagtg gccaccaaac atggggagag 10860 gtcagggggc tacgtggagg aattgtttct ctcctaccaa gtgggcccca ggtttcaaat 10920 tcaggtgacc tggcttggca gcaagcacct ttacccetaa gecatctcat tggcttcatc 10980 ttttaatggc cccttcccct gctctgaggc aggctctccc tatatagccc tggctggcct 11040 caggctcgca ggtccaccag tgagcaccag gtttctgctt gtccttacct ccccagcact 11100 gtggttataa gcatgtgcca ctgtgtcaaa ctcagtcact aagctttgcc aagccatagc 11160 ccageecttg agtttactgt ttgtctgtgt ggtgatttgt caaaccactt ttgttccact 11220 gaggtatttt gteaagtttg acaaaattag ttgagtatgt aggtcttttt ttctggaatc 11280 ttctgttata gcttagtctg gtcttgaact catgatcttg cctcaacctc acgattattg 11340 aggattattg agatggacag gctgtgtgac catgctcggc tgtgtgfcttt agcatgcatt 11400 agtcatttga aaaacgttgg ctcatgacac tttacaggtc ttccatgttt gatatgtttt 11460 atttaatcca aagtaattcc agcaccagag gctgagacag gaggatctca aggtcaacct 11320 agagatgcat agcaggcggg gccccactcg gttaggttaa· tatcatcact gacttcagga 11580 gaaaagtctt aagtattggg gactaaaagc aggaggatct gaagttcaag gtcatcttta 11640 ggaacttagc agacttgagg ccagcttggg cgctgtggga ccctgttttt aaaccagaaa 11700 acaaattgaa aggaaaaaaa aaaaaagctg gaggaagtga atgtgagtgt tcacatagtc 11760 ctgtttccac aagaaaacag ggttactttt ggcaacaaat aggtgctttc tttgaaggct 11820 ggcatttttg tgacttgtca ttggagaaat gatttaatta agacttttot actgagtgcc 11880 tctgaagagg otcttttaaa tttagtttaa ttttatctca ttgttagtgt ggtgtgcttg 11940 tgcacacaga aggcagcttt ctagagtctt ttcactetct cctccacagc tcctggagtc 12000 aaactcaggc cctggctagg caagctctta ggacagtgtt agctgtagct tattaagttt 12060 ttaagaattt ttataagact ctgtttttct ttctcaggtc atgatacagc aggaaaatac 12120 atccataaag cccatcctgc aggtcattgt aagtaecggc atgtgtgttt agcataatga 12180 agatggttca cttatagtta attaaacatt ggattggatg gaagacatgt agttttggtt 12240 acttcccaga aacacaaatg cacattcttn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 12300 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 12360 nnnnnnnnng aattcagagc tgatatgtag tactaactcc tactcaatga atcctttgtt 12420 cttctattcc ttcattacat tactgttaat agtggtaact atgtaccaaa gagtcaaata 12480 actcttggac catecaaggc agaaggaagg ctggcaaaaa tgtatgatga tctgggatgg 12540 gaatgtactt cagtttgtac aggaggccct tggttcattc catttctggc aatgcataga 12600 cctgtaggat ctcagcactg gtggggggtg gggggtgagg gtgaaggggc gggaggttaa 12660 aggcagaata gtcataaatt caaagtctgg gtcctggaaa gaggactaaa cgattaagag 12720 ctttagctgt tcttctagag aacctggtgt gatccccagc acatggtgcc tcacgactgt 12780 ccgaaactct gattctaggg ggatctgaaa accctcttct gccctctgta gatacagaac 12840 acacatggtg cacatacata catgcaaccc aaacaaccca tatacataaa atattttttt 12900 ttcaaaaaga cattcaaatt cttcctcggc tatatagtgt ttaccaaacc tcaaaaacaa 12960 aacaaaacaa aacaaaacaa agaatcatta atgttttgcc ttcatgtatg tctgcccacc 13020 acggacatgc·ctggtaccca gggagattaa aagaagacat tagctcccct ggaatggaga 13080 taggtatgat ctaccacttg ggtgctggga acctgggtcc cctgcaaaag cagtaaatct 13140 ttttaacccc taagctgtct ctcccaacgc ctaaagattc ttgtaacaca gcatgatgag 13200 cactggcaag catagcatgg taatctgact tcagggcgcc agattttgag cttaatgctt 13260 gattattaga agtaacgtac tagatttaat gcctggagct tcaagcaaca aaattaactg 13320 aágaataaaa ataaaaaccc tgccagccat gatggtaatc ccagaacttg agaggcagag 13380 gcaggtgatc tctgtgtttt gcaaggccag ccacaatcta catagcacgt tgcagtannn 13440 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 13500 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnncga ataaatetac acatgtaaaa 13560 agaaattcaa agaaacaaat gccaaataaa tacacatatt gtaataaaga gataattgtc 13620 taaaaaactc aaggctttaa atggtaagat atcatattct tggatgaaaa gatctaatgt 13680 caaaatatat caatttaatg caattatgta Cattcaggag atctctggtt ggcttttgaa 13740 cttgatagca ctcttataat tcacaCagaa gaaaaaaaac catgaaaact gccaaacatt 13800 238 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ attagaatac tccacaçatg gtattttggc agcacataca tcgaagggct gtgaaagatg 13860 tgtagatcat ccacgccttg ctagggagag ggcgggtgtg tgtggggggt atagctgttt 13920 gggaaaataa cctggtaatt cctcattagt taaatcatag tcagaacctg gactagcaac 13980 ttctctctaa aatacattca ccctcagcat ctgcattgcc aggaaaccac tcctagcagg 14040 atctgtacgt ggatcaaggt agtagcatct gcatttaatt gacattctcc taaatgcttt 14100 aaattatctc tagattactt atagtagcca agatgatgca aattatgtta cactgtatta 14160 tctggggcgt aacaagaaaa tgtctctact caggttcatt caggtgcagt acttcccctg 14220 aatacttctg aatacacgga tcaagaagco acagaaagag ggctaaccat atacaagcat 14280 atagtacact aataaccatg tacaaccata tagtacacta atattcagtg cattactcaa 14340 aatgcaaaca gatggaaaca atccaacagc ctgtaagctg aaaaaçaaga taagcaaaat 14400 gtgctgggcc tagaggccca ggtctataat tccaactaag gtcgaggcag gaggatctca 14460 agttcaaggc cagcctagac aacttagcaa gaccttgtct caaaacaaaa agtaaagagg 14520 ctgaggatat agctcagtat agagcatctg cttagcatgt gcactgacag ccgtatcaca 14580 gaggaaaaaa aaaaataagc aaaatgtgat ctgtctgcac aacaggatat cacagccccc 14640 taccacaggg gaacgacaca gtaacacaac aaaaacttag ccctgaaaat actatggtaa 14700 ataaagaagt gtcactgagg atcaggaaat gcatgactcc atttacatta tatagaaatg 14760 agaagatcag tgagcctcta ggactcaaga gatttgggat tggcagctaa agggtactgg 14820 gtttctttat gggggtaaga aaacattcta aacttaactg tgagaatgac tactcaacaa 14880 tgtcaagtgt tcaaaaatca tacttttttt tttttttggt ttttcaagac agggtttctc 14940 tgtgcagtcc tggaactcac tctgtagacc aggctggcct cgaattcaga gattcacctg 15000 cctctgcctc ccaagtgctg ggattacagg catgcgccac cattgtccgg ctcaaaatca 15060 tacttttaaa aattgcccag tgactcatga atacaateag aggcgggaga ggacagtggc 15120 aaactcagga taccagtgtc ttttatgtct gctgcccaac tatcaatttc ccatagttac 15180 cagagaactt tttggtttgt ttcatcttat ttgttgcttt tggtagaatc tcaatatagt 15240 aagatacaag gctggcctca tactatatag ctgaggacga ctttgaactt ctaatcctcc 15300 tgcttccatc tcccaagtgg tgggattaca ggggtgtaco gotatgccca gcaagcacaa 15360 agccatttga accacaccce agccttttca gagaaacctg' tacaagcctt agtgccttag 15420 catattaagg caacaaaaga cataatgcgt ggctaccatà gagtgtttgc ctaccatgtg 15480 tgaggctcta ggctaaatgt ccagcactta taaaaaagag' ttaaaaacac tcatgactca 15540 aggatgacta tgcagtcttg tgtacaaagc cccgcattca atccccagca ccgtgcacat 15600 caggcaggct ctgtagagga cccagcttaa ggtcatcctt aggtaagtta gaggccttag 15660 atggctacat tagatgagac cctttctcat aaacagaata aataatttaa agctcctgat 15720 caaacactat gccttcccat cacactcaga ataaagcact ctactggccc tttaaggact 15780 gcccatctgg aagagaaacc taagttacat tccttgcttg tgtcatatgt gataacaaac 15840 tcactggaaa tacgaaaata cagtcttaag cttggtcaga aagcttcccc agcaacatga 15900 tntcagagga cataatgcag aaagtggaca aatgcaaann nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 15960 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 16020 nnnnnnnnnn nnnnnnnnaa tcagaggaca tctttcagga gttagttctt tcctccctct 16080 atagctttca gggatcaaac tcaagtgtgt actgagcgct tatgcccagt gcgccatcgc 16140 accaggcctg cttctttgtt ttttatgggt ctgaatcaat tagcaccatt acaacaatgt 16200 tgacaatcag caagtacctt tctctacctg gctagtaaga gaagtaagtg cctttggtgt 16260 gtgaacgcag tttctcttgt gaagtgcatg gacttgatct ttgctcacaa cgttttttag 16320 gtccttaagt tgcttgggtt ttatgggaaa ggctcttggg ttttttgaaa agattttact 16380 acaacttgat ataatcatta tttttaatcc tttaaatagt atgacttatt ttaacagatt 16440 aatattgaac tgttctttca ttcttacata ataaatcctg ccttaaaaaa taatcctctt 16500 agcttccttt ctctattttc aaatttgttt tatatttttg catgattttg aacatttata 16S60 aaagtaggca gacaaeacag tagaaccaag tccccatata gctgtgcaea tagctteaga 16620 ttattgcctg ataataggtc ctgttttgtc tctgttttct cacagggatg tgttattgtg 16680 tgtgtgtaca catacataca tatatgtatg tatgtatgta tgtatgtatg taatgaactc 16740 cctttaacaa aacaagtact gggctgggaa gacagcacag ttagttatgt gtttaaccgc 16800 acaagcatga caaccagagt tgagatcccc accaaccgca taaaaagctg ggcatagtgg 16860 cattgacctg tagccctggt gctggatgaa agctggggag gcaggtagat cggcagagct 16920 tactggcaac aaatctgccc agtaggtaag ctctgggctc agacatccta tataggaaaa 16980 agatgaaggg cgaggcgcag cggcacacac ctttcgtggt agtgcttgag aggcaggggc 17040 aggccagtict: ctgtgaccag cagcctggcc tacatgtcaa gttgcaggac agccagagcc 17100 accacctact gagactgtct cagaaataag ttttttaaaa aattgagatg aaggagctgg 17160 taagatggct tagaaggtaa aggcacttat cactaagcct gaagccccga gtttgaccct 17220 ggaccccaca ctgtagaacc aactcctcca agttcttctc agacctccag cagagcacaa 17280 gtgtatgcag acacacacac taagtaagtg aatgtaaaaa acatgacgta gtggcactgg 17340 cctttaaacc cagcattggg aggaagaagc gggtggatct cttgagtttg agaccagctt 17400 agcctacata aggaatttca aggcagccag ggctacctag aaagtagctg tttatgaatg 17460 aatgaataga aggaaggaag aaagagagac agactfcaaaa aatatatgct ggagagtaac 17520 agaagaggac accggcttgc tggtgtcttg acctctggct tgtacacata cacatgtgta 17580 gtgcatacac ccacatacaa ttgtactcag acacacacaa acatgtactc attcatatac 17640 239

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT bgcaeaccbc aacactcaga aaatgaaaaa acaggtacca tttacacctc cgtgttcggt 17700 ttccaaccac bcabatgtat gggttgtaaa tgcttatatc tgtatgtgtc tgtatatttg 17760 tgtatacatt caaagttgag tcaggatcca acgtaaactt ggatagtagt gggttgatgg 17820 tctggaagcc tgctcgcagc tgtctttttc tcctcgtacc ttttcccctg tttgtttcta 17080 egacagcagg bcabtbgbct ctaagtgtta gtttcccatc ctctctcttt tgctgatggt 17940 agccttgtag tagtcacctg tgttctctgt aaaatggctt tgccgtgtta tttcaatatg 18000 ctabcatcct catcttgcta tatttcattc aatatatgta tatattacaa gatagattaa 18060 aattatttta attttatgct tatgaatgtt ttgcctaagt atattgcacc ttgtgtgtct 18120 agbgbccaca gaactcagaa gaaagtgtca catattctgg aactggaatt gcaggtggtt 18180 gtaagccacc atgtgggacc tggaaaccaa atccaggcgc cannnnnnnn ηηππηηπηηπ 18240 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn niumnnnnnn 18300 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nncctttggt caaagatcct cagbbbcgac tttgatbacc 18360 cagacttcct gtttctctca tggaacagtt tccccctgag atttactagt ggaagaaagg 18420 cactcaaaaa goagggagcc ctcgtacaaa tgagacttcc tagctatata attaggccga 18480 gatgcacaca tccacagtca ttacccttct tcagagcctt tgtcabgbca agtgtatttc 18540 gcccatgtga actttagaac tggcttgttg tgtttcataa aaagtgtagt tgggctcttg 18600 attgggattg tgttaaattt atagattcat ttagggagag ctgacaactt tacagtatta 18660 aatgtbbbca tccgcggaaa aggttgtctt gccacttact tgggctttct tttatgccct 18720 taagtaaagg tttatagttt tctttatatc agtcttgcac atttcctgtt agatttattt 18780 ttgcttgtaa ggtttccttg gtbggtattg tgtataaaca ttttctccca attacabacc 18840 ataatbgabg gttaggagta baaabaaaag gbagaabbbb aaaabbgcbg babgaabgac 18900 tgcbbtgcba baabbcaaca bcbtbtcatb tttabgccaa tcbacbbgac abgbbtaggt 18960 taaabgabga batctgtaca gagtaatcct ctgabccagb abbbgcacab cbbactbtct 19020 aacgbccaba gcatagatac acatcttata ctgbbgagba catabatabb baaggbabbb 19080 accatagtcb tataatatgc agcgbgcbtt ggbbcaagac agbtgcccbg bgbbccbcaa 19140 catbaacabb tbtbbcabca caaabacaca bbgaccbbba tcaaabbbbt aaaactatcb 19200 tgagagaaat gaccabbbbt ctbaabctgb taabgtaaaa- btttbataaa aatagttata 19260 aabaatatba gccbacabat bbctbcbgtb ctctbtttca actcbbagaa bcagagtabg 19320 gbagbcbcag actaaaccag gagcbbccba bcbgtbbcbc tgttcttaag bcacbbatab 19380 aatgtaagga bgctgbgtat abctgccagc taggccbbab atacaaaagg cacccabcac 19440 aaccbbcbaa aacagtctta ccactbagag accabgttca aacabatggg ccbttgaggt 19500 aabbgccaca ttcaagctat aatattgtta bctaagggaa tatcbbcact bcbagcagab 19560 gccbaaaaab atctaaaggt aaacacbggb aatbgcbgbg bbbgbbgabg cbgcbcbtcc 19620 tcctccbccb ccbccbcbbc cbccbcbbcb bccbccbccb cbbcbbccbc cbcctgctbc 19680 bccttbbcbb catccbcctt tctbttcbba bbbtbgaggc abgabtbcac cabgbagccc 19740 taggtaaccc gtaacttact atgtatgbag accaggcbag cctcbgtctc cbgagtgcbc 19800 atatbaaagg bgbgbabcac cababccagc aacacbbgcb tbgagabggb bagaggaaaa 19860 aaaaababac gtaaabaaag atggabgcca abbacbaaab bgbbactbcc agbcaaacbt 19920 bgtaccbagb ctaaggccaa aatagggabb bttbbbcbac bbbgcaagbb ggcbccabba 19980 açaggctttb cttctcbbgg bcbcacbaga baggaaggag agagaggagg gaaggagaga 20040 aagcggbtga ggagbgggag gbagbgbgac cgagaatacc cagtaggcbc ababatbtaa 20100 ababttggbc ccbagbbgab agaactgttb agaaagatta ggaagcabgb cbbaggggcb 20160 tbgaggbbbc aaaabbbaab gctagaccca gbcbttcaag ggagggggcg gbctgbcbcb 20220 cbctgccbgc tgcabgcaga gcbctcagct acbacbcbag bgbcãagccb gbgtgcbbcc 20280 tgcctcaabg abcabaaabt aactgbaagc aagcctccaa ttaaatgctt bctbbbatag 20340 tbaccgbgab cabggtgtct ctbcacagaa atagtaacct gtggtgattt baatabgccb 20400 ggaccaggga gbggcacbbt baggaggaab ggccttgbta agaggaagtg bgbctcbgbg 20460 ggggtgggca atgagaccet cgbccbaacc atgtgagaac cactcbtctc cbatbggccb 20520 tcagabgaag abgbagaacb ctcagatcca cctgcaccab gtctgcctgg aagcbgccbb 20580 tgbbcccacc ttgctgcccc aabtaaatgb tgtacttata agaattgtbb bbggggggct 20640 ggagagabgg ctcagcagbb aagagtactg actgctcbtc cagaggbccb gagtbeaabb 20700 cccagcaacc acabggtggc bcacaaccat ctgtaatggg abctgabgcc accbbcbggb 20760 gbgbcagaag acaggacagt abacccacab acabbaaata aabaaabaaa baaabaaaba 20820 aabbcbbbbb aaaaaagaab bgctbbggbc abggbgbcbg bbcacagcag taaaacccta 20880 acabaacccb gacbaagaca acaagtgagg aaaggtgbtg bgbgacactc bggabctcbg 20940 gaagcbcacc tcagcatgaa gcbbgtcgaa gcgnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 21000 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 21060 nnnnnnnnnn nnnabcbaag tacactgtac bgtctbcaga cacaccagaa gagggbgtca 21120 gatcteatga cagaggbtgt gaactcagac cttbggaaga gcaabcagbg cbcbbaactg 21180 cbgagcatcb ctccagccca aaataattct bactagbaac abggaacaab caagbbbbab 21240 tabatgabac ababtaatca acbtabaagb acabgattab gcacabbbab catatcgbgc 21300 aaccabcacb gctgbcgtbb bgbbbtgbtt tgttcbbttg aggcccggbb bctgbgbbgb 21360 tcbggaacbc actcbgtaga ccaggctggt cttgaacbca abgatcbgcc bgccbcbgcc 21420 tcccaagbgc bgaaaacaaa bgbgbgcacc accaccbcbg gctabcacbg ctgtctbttt 21480 240 240 tgcatgtgtg tataagcatg taacgtatgc ctttcaggag ttagttcttt cctcccactg gacttgcatg gcaagtgcct ttaccacaga atataaaaag atcatatgcc gggcaaaaac ggaccatata atattgtggg ggagtggatg gtctgtactt cagacccatg ggaattggca atagtctgtc taaaaactag agatcacagc tgttcctctt cagagactgt ccaccaagct tgagctgagt ttccaggtta cagcacagta gcctaacagt acacatgtct gctttcttca gcatatttgt ctgtttggct tatttcactt ggtggcacac gcctttagtc ccagcactcg gatgccagcc tggtctacaa agtgagttcc gtctcaaaaa accaaaaaaa accaaaacaa aatccaaccc cccccaaaaa aaaaaccaaa gtttttgagg tttaatttat tgcatgtcac taatatttca ctatccattc acgtatttgt aaatagcccc cataggcttc tacagttgaa gggaattgaa ggtgtggcct tattggagta tttgaggtcc cagcaacaag gttgctctga atctggctgg aattcagaca tgcccttaat aagttagttt ataaaaagaa gcacccatgt attagagaaa gatctgctgt cacagagcag atggcagagg gagagggagg aggggttttc gagctagaac aggtgaagac agaacaagcc cagattgcca atgttaatag gctaagcaga attgaat cag ·· ttagcttgga aaggagtttg agaatccagá aagaactaga aaagatgagc acatcttaga cctagattag actgcatgga tagcagacgg agagagtaat aagccttgga gacatggata tgaacctctc agccacttct gtcatctagg aaaggctaag ggcaggcaag tgcatggctt ttgagaggcg agctctgaga ttgctgctta attacgacat gccttttctt gctttagccc atcctattgg gcatatttcc aattaatgct gtttagatga ataaatgatt tttaggaaga aagctttagg agatagttta agaatcaaga atagaatgtg gctgggcagt ggaggcagag ataggcggat ttctgagttc aggacagcca gggctacaca gagaaaccct agtaaaggct gcataataaa gaatacaatg gcttgggaca aatttgtgat caaggaaaaa gccacaagtg tgtgatatga tgaacaagac aataaaacac tgctttgaaa ttaactatca ttttatctat gagataattt tctaaagaac agaaagaaat aaggtgtggc atctgggctc gtgtgtatgt atgtatgtat gtttatctat gtatatgtgt atgtatataa gtatgcatga ggttgggccc ccnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tctgtaaacc atgctggcct tgaactcaga ggattaaagc atgtaccacc acaacccagc tgggtctttt acctgtatgt atgtgtgtgc cagaagaggg tatcagatcc cctggaactg aacctaggac ttctaaaaga gcagcaggtg gtcccatgga tttggggggc tttgtttcat tcatgcttga atttactatg aagccctgec gtctacagct gctaggattc gaggtcttgt acaataaaaa aagaaagaga gacctaaatg taaagattta tttatttatt tattacatgt cagaagaggg agtcagatct cattacagat ttgaacttcg gaccttcgga agagcagtcg gccccgagat aaataaatta taatgtatgc tcttgcctgt tactccttcg ctctcccttc ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ttttttttta acagttattt atttcgtgca catggtatgc atgtggaggt cagaggacaa tgggttctag gaaccaaget caggttgtta gccatcctgc tggccctact ataggtcctt caaacaaaaa ataaacctca aaaaacaaaa aagtcctgaa cgaatgtgtt ctgttgacat aagccttcct ctggtcctgt gaggatgctg tttctcctct ggatgactgt aaecceagat accctgccta cttaagctgt acacaatgaa gacactgtcc atcagtgaga gcacagccta cgtttccaga accaagcctt gctggataga gataaaaagt tttcaaggag ggccaggtgt ggaggcagag gcaggcaaat ttctgagttc aggacagcca gggctataca gagaaaccct aacaaacaaa caaacaaaca aaaagccaaa ccaaaaacca aaaaacaaca acaacaaaaa agaatttcac tgtttaaaaa aatggctgaa aggcattcat gtgtgtagtg gtttaaataa tgcttagtca ttgagtagca gtactagaga ggagtggcct tgttgcagga attgtgtcac tcacatccaa agacattcta ggtctatgtg acacaccttt aatcccaaac aatgaaggta ttgaaagtga cgtttaatta agagtgatga agaggaaaga gaggcagcat aagagggagc accagggcat ttgtacagag acaggttgca agagaatgag aaggagccag gagattagga gcattttagt cagaaactga gagaagtcaa agcagcaaca gctgagttaa actagccaac ttactcagca gcaaafcctca gaggctaaaa ggctagacgc ttccagggct aggcctaggt gacaacagtt aatacagaag actatgtaca ccagcgtcat gcctgtctgc attgttagga caacttttcc agagatggtc cactgttttt gggaaggttc caagagactt catcccagga gtcactgtta tttagtataa tgactcctga tgcagatcaa cataaagatg aactttcaca ttataaaatt cctgatttga tttaaataat gttggtttgc cagaaagatg taataacgtc ggtggcagat gcctttaatc ctagcacttc gaggacagcc tggtctacag agtgagttcc gtcttgaaaa acaaaacaaa aagaaaagta agctttcaca actacaccaa aaagagacat tattcattct agatcaggtc caaggatgaa catggataaa ctgttgtttt gagcttaaag acattctact gtaactttcc tttttataaa ttgtgtctat aaaggtatag aaggacagag tgctceatcc acceaaataa atatgtgtgt atgtatgtat atacatacat gtgtaggtag acacttggga agttgatgag acaagtgaga nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nngaattcac gaacegtgtg cctctgcctc taaagtgctg tagtttaaat gtttcttatt tttttgttta accatgtgga tgcatggtgc ccttagagtc gagtgacaga gggttgtgag ctgggacttg ctcttaatag ctgagcctta tctccaggcc tttattttgt tttgagacag ggtgtgtagc tcccctcaaa gtaaagatcc tcctgcctct accacatgct cagcacagcc atgattcata gccttagaga taaataaatt attttttttt aatgcacact gtagctgtct tcagaccccc ggttgtgagc caccatgtgg ttgctgggat ggtgctctta cccactgagc catctcacca gtaaggtggg atcatctcag tctccgggaa 21540 21600 21660 21720 21780 21840 21900 21960 22020 22080 22140 22200 22260 22320 22380 22440 22500 22560 22620 22680 22740 22800 22860 22920 22980 23040 23100 23160 23220 23280 23340 23400 23460 23520 23580 23640 23700 23760 23820 23880 23940 24000 24060 24120 24180 24240 24300 24360 24420 24480 24540 24600 24660 24720 24780 24840 24900 24960 25020 25080 25140 25200 25260 25320 241 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tattcatgct tgggtaactg gccctggctg attgatgaga gctgatttcc ccactgccct 25380 gcggcaggga ccactgcgcc cacagggctc cctcaggatc ctcagtacag agctgcacag 25440 ctgggtggaa gtagagggct gcatatataa cacgatctca actttatttc tttaaataaa 25500 aattttattt aaattttata cagctctata taaacgaagg aactattgaa ggttcagcaa 25560 ggacctgcca acggttgtca agggtaatgg cgatgtagtg attttttttc ccccttccat 25620 tttacttcca tactttctac attaccccac aactggcaag tattatttta aaatgaaagt 25680 aaatagtgac agatgacttt gaaggaaaat tgaatcggta aaaagaaagc tgagagacca 25740 cccgggaagc ccaggctaaa tgtaatctgg gtcaggcctc ccaggcctgg ggtctcaaga 25800 tggtcagctg agggaccctg gtgaccctct tgggccagca gggacgggga ggagccggaa 25860 gctgagtacc caaagtgctc ctctgggctc caagggcctg cacagagact gtgtgggaat 25920 caaaggatac aggcatgagg actgaggcct gacgaaccca gctatcattc gtcctagaac 25980 aggaggcaga gctccaagag tccaaccaag aggcaggaag ctttgggacc cgagatgggc 26040 gatgggatta gaaaggcatg tttgcaaata ctttcaaatt tacgatgcac actcactgga 26100 aaccccaccc ctgggtgtcc cttccctgcc tcttgccaca cccaatagct gacatcactg 26160 gagaaagtcc caagaccagg ctggctggag ctcctgatag gttccaccct cctgcagagg 26220 gccctcgaag actagcttgc tcgcccacac cgccagatgt ctgtgtcttt ctctcttttg 262B0 cctcccaccc tcgtctcttc ctceaacctc agtggagggt cccctgcttc ctggggaaag 26340 tagaacttgc cagtgctcac tgtaatgtcg tccctgtagg tgtcatggtc ccccattact 26400 gggagcaggt atgcctcaga tctccctcta ttcgctgccc tttcaggctg tctcagtttc 26460 tctctgacag ttcctctcct cctgaatcct gcttgttggc atgcgaacag gctcaatatc 26520 ttccatctca aaaaacaaac actgggaagg tgttgagaga cagagagcat gggtaatggg 26580 tgccccagct tggctgggaa ggggtaactt acaatgctct actgcccagt agggtagctg 26640 cagttgtcaa ttaattgtaa atttcaaaat agctagtaga gaggatttta gatgttccca 26700 atcccaacac aaagaaatga taaacattca aggcgatggg tatgctaatt gctctgatct 26760 gatcaccgca cattgtatac atgtttttga aatgtcaggc tgtaccccat aaatatgtac 26820 aattaccgtg cagtgattca agataaaaac tataatttta aaaagctaaa aacagaagga 26880 aatagctgcc cttgaccccc ccacccccac aaggtccttc- ctgtttgtcc agccacttaa 26940 tgtcagagct tcctgtggga gggtggtttt ggtgtacacá gacactcctt cctccctcct 27000 tccccataag aggagtcacc cctgtcccac gatgccatgc agggccacat gcgtgatatt 27060 aaccagtaag atgtgagcag ggatgatacc tgtctcttat aacaaacgga aaaaaaacca 27120 caccaaacca aaaacaaaca aacaaacaaa caaacaaaaa cagggttggt ctgtccctgt 27180 gtcttttccc acataaagtt aagcacacaa agtagccacc atttatttat ttgtcccctc 27240 ccccacccct ccccgagaca atgtttctct gtataacagc ectagctgtc ttggaactca 27300 ttttgtagac caggctggcc tggaactcac agagacacag agattcacct gcctctgcct 27360 cccaaatgca gggattaaaa gcatgagcca cgaactaacc agtaccccag agctcttgac 27420 tctagctgca tacgtatcaa aagatgacct agttggccat cactggaaag agaggcccat 27480 tggacacgca aactgtatat gcctcagtac aggggaacgc cagggccaaa aaaatgggaa 27540 tgggtgggta gggaagtggg ggggagggta tggnnnnnnn nnnnimnnnn nnnnnnnnnn 27600 nnnnnnnnnn nnnnnrmnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 27660 nnnnnnnnnn nnnggcagga tcctgtgttc atgtgcaaca ctcgatgcaa gctgtgtagC 27720 gtttggttct gagcacctga aggggaccaa gcaggctgat gcccaggcca cgggttcttt 27780 ctggccccac tgcccactcc caccctctgg catccccatg atgaacatgg ccacagatca 27840 cactactctg ctcctctccc agatccacgg agccataggg tccccagatt catctctgca 27900 gctaacaagc tgggcagtgt cacctccctc aaggttcctt tcctgctctg agcagcagtg 27960 tctcccacag tgagacactc atgtccactg gaagatattg tagccattaa attcctgtgc 28020 taaaataact agggggactt gtcaatcact acactcttag ccccggactt ctgactcata 28080 gagggtggtg acagctcagg gacctgeatt ctaecaaata gccatgtgtc cctgatggag 28140 gaactgcccc tggacaacct ctgcagcaac tgaaccctct gtggtctcct agttcttctg 28200 gacaggtgtg accccagtac ctagtgccag gtgagagagt gctagggcca cactaagggg 26260 tgacaggaca aggttggagc tggtagatgt ttgggccacc aaagagaaca ggtcagtagt 28320 aaaagccatc atggcctgag ccagcctgcg agtctcctct gcagttggga cactcttgca 28380 gtgtcctggg gacctcttga gggtagcatg gtcaccaaaa tcctacaagg acagatcaga 28440 agtcagtgag gtcaagggaa cagctctagg ttctctgtgt ccctcacgga cctttttttt 28500 tttttttttt tttttaagat ttatttattt attatatgta agtacactgt agctgtcttc 28560 agacagctcc agaagagggc atcagattbc gttacggatg gttgtgagcc aecatgtggt 28620 tgctgggatt tgaactcagg accfctcggaa gagcagtcgg tgctcttaac cactgagcca 28680 tctctccagc cccctctcag tcctgatgcg acagggcagc aaaggccttg tcccagatct 28740 gaggagagtc atgctgaagt ccttcctacc ccaccccttc cgaacccctg aacatcagcc 28800 ccataacfcac fcgactccccc aeecccatfcc cctbgcttcc actgatecgg tcctcctctt 28860 ccctctggcc ccacccattc ttccocagcc ccacctgatt gtacctggtt gtceaacttg 28920 aagagggcag gcaggggcag cttctgctgg gcctgctcao tcactggotg tagaaatgag 28980 aaaggagatg aagaaaaggc ccttcccatg ggtccccatc ttgccaagac ataggtgagt 29040 ccctttggct cttcccccta aacetctcac ttttgagtac ctgctggccc gggagatcca 29100 cggcgctcac cggagagaac tgttgagaaa agggagaaca gagaactcag cgttcctccc 29160 242

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tctccaccct tctggcctct cccagatttg cccccgcccc ccagcatctc cttcagcctg 29220 actgaccact tcccactcag acctcagctc tgcctcaccg tgaaacaggg accttgcagg 29280 caggacaagc tgagtacgag gagcccccgg agcagtgcca tgttcctgta tccagaacag 29340 ggagtgttag ttcctacctc acgctcgaag gccaagcagt agactgctat ccatgggttc 29400 cttgaccgca ccaggctgcg gaacctggac tcaaaacata gcagctgtgg acctcactca 29460 ctctgagagg tgggatttcc ataagctttt tttttcacct gtacatttag tcttcattct 29520

Cttcgtctta cactgtggat cagtcctggg ttcaaattta aagccctcat cttgcaagag 29580 gaccttgcgc atctcccttc atgcctttgg ctttaccctg tcttggtaat tcatggcaga 29640 agttcttcct gctcccatgt agatgttgag gacccaaata agaatctctg taaatactga 29700 gcatgatgcc tggcccccac cctagcaaag ccacctgacc tgttgttcát ttcatccagc 29760 ctttctcagg ctgccctggt cctacccaaa ggctctgaga gctaatctgg gctggcaggg 29820 cagccagaaa cttctttgtt gaccaatgaa tgactggccc agacaccttt ggacttacgg 29880 gaactacaag cctcatccca cttctgctcc aagttctgat ccagggtgct tcggggaagc 29940 ccagctggcg gaagggggga ggctctcagc ctagagagcc ttcctttcca tcctcagccc 30000 cctacccagg ccttatttca ggcaccagct cttctaaaag gtccttctgt tatccctaga 30060 cctccacaac tgtgttcaag aaccttcagc cagggcctca tctccaatct ggatatatga 30120 tttttctcgc caagagtagg cctccaggtt ttggagttct agaggtttct cctggagctg 30180 cctggacctc tgctcctcac caccccagga cgctgtgaag ctgcaggctc cctgaataaa 30240 ttcatccaga ccccttgcca aggtgccagc tgtctacttc ctctgctgcc caagcagcag 30300 gctgcaccac ccctccatcc tacctcttca ggcttcttag cgcagcacac gcagcacacg 30360 gtgttctcct ggaccagctt gctccccacg ctcccccagt gcagccagca gggcctagct 30420 ctctcctccc acaggacctt tgctctcagc caacccccgt tcagcttgtg ttcagtgctg 30480 gtaaatattg acctgtacat ccggttaaac attgatatgg gggccagaag accctttccc 30540 aCcaaggcta cccagaaccc tgcctgagcc tggagaaggg gtttacagga gcagataagt 30600 gaggaggttg ggcctggcaa gccttctaat gatccctcaa cataggggat tatccacagt 30660 cagtgaggct cagagaggct gtgtggcctg tgtaagggcg cagagtgggc tccagagtca 30720 cagceaaagt cecaccaeca ccaccaccac caccaccacc'accaceacea ctaccaccac 30780 caccaccacc accaccacca ccaccaccac caccaccact' accaccacca ccaccaccac 30840 caccaccacc accaccacca ccaccaccac cacctcatct acccatacta anttgaggct 30900 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnann nnnnnnnmin nnnnnnnnnn 30960 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tctatgaggg ttacatttta 31020 gaacatctct ccttttttcc tttttgagac aatcttacta tatttaggct ccccttgaac 31080 gtgtgajtcct tctgcctctg cctcccaagt gctgaggtta caggcatgca cagtcacatc 31140 tgcctacaca atgtcttagc agcccttagc agcaccaggg gtcaggaagc cctcaactgt 31200 ccctttagct ggcttctctt gtgaagggct atgtcttctt ccccttccta gcatggagac 31260 ggctcttagc cccagagcct tccttccttc aggttaaaca gcaccagttt ttggtgggac 31320 ctcccatttc cctctatctc cctaagcaac gaccttttct gctctgactc tcatctggca 31380 cttggaccac aagaeaaaac tgcagcctgg gctgtgtgtc ctcgcacatc attcctgtgc 31440 ccccctggag tcaggtctag gggaggaaga cagggttcac gactcagaaa agaccactgg 31500 ctgtcctagt gtgccctcac ccatcctata gcacgcacat gctgatgtgc cccctccgct 31560 ccatcaccat cctctcatgt acacgtgccc tccctcgcca gacacatgca tcactaactt 31620 ttctgacttc ccagaaaaat atctgatctg agaagttagg agtctgccat catcagctat 31680 ggtccttaaa attaagtcag acaatccatg ggacatgaag ggcaacaacg agaagactcc 31740 tcgttccttg ttcactctgc ttttggcagc accaccagca ggaaccaacc tggctctccc 31800 taatccctca tctatagcag gtctcccggt gggaatttta gggacctctg tgttctcatc 31860 caggggcact gccactcagc tgctcaggga gagacccctt agaacaacaa agaaatcaat 31920 goagatttag gcttcttgtt tcccttccca gcccctecca teacaggcaa cagcctccct 31980 tggctgagcc tcaggaggct gatttatcag agaggtgctc agagaggcac ctctggtccc 32040 tctgggtagg tagcaactga gacaggagga gatggtcacc ctgggcatcc tctaccagga 32100 agtaaatgag atacccttgc agatgggacc cctgaagttc ctcccggggg cgggggtggt 32160 ggtggtggga gtctaagtca cagatctttg ttaccacgtg gttagactga ggactgaatc 32220 tgaggtggga aatctgatgt gcatggggaa acacagaggt ccaatgctgg ccaagagcta 32280 caagcaggga caggtgctag ggggatgtct gaatgttcca ccccaagcca caggaataac 32340 ggaaatggag actctaaagg gcagaaagtg agggtgtgca gcaggggctg cacaggacac 32400 atgcaaggcc ctggctgcaa taactgggtt ggggaggcag tcattggcta gccaggggca 32460 ccaggacagt gatgccatcc tgtccaaagg gcagtgCcca agccagattt ctaggctcca 32520 99999a99a9 ggtccgggga gaggggtcaa gattctcccc ctctgagtca aggttggcct 32580 tcccatgtgc cccaaatcag gaggcacaga aactgggatg ttgtggtctc acatccaagc 32640 tgagaagaca agtgggagcc agtacatgtg tttcagatta aacccagtcg gagacaaaca 32700 tgttgctcct cctcctccca gagccaagct gccttcaagc cacatggcag tgaatatgcg 32760 gacagtgcag gggaggacac ctctctctcc actggctcaa ggacagtttc aaggggttca 32820 ggctggctgg ctcatggcta cgccgctcac cccctggaca gtttggggtt tttccctcct 32880 gaaatcttgg aatctgaatc agcctgagat accccataat tgtacctccc aacaccccca 32940 gaaaggtcag ccctgcagaa cagaactctt tggtccccac ccatccccct cagccctgga 33000 243

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ggctgaactg atgggcagct aaggtccaga cagtggctgg etcttggaaa gcctgtctct 33060 ttcctttgac tcagaccact ccctgccgtg gcttacatca ggaggtgcaa gggctgcagg 33120 agggcagcca gaccccacaa accagctagg ctaaatggtg cttattgttc gcaagaggcc 331B0 atgacctcat ttgtctccca gctcttttgg taagagagaa tgagaggaag ctggacagag 33240 aacctagcag gcctcaggca gcccactgct ccttgctgta agggaaccag caccgatggt 33300 tctgaaaagc agcgatccga atggagtcag gctgagctgc aggaagctca ccttccttgc 33360 tcactgctgg tggaagcaac ttcaggaaga gcccagccta tgggactata gctcctccgg 33420 ggtactgctg agtccagccc cagagcttag ctccctgctt cccaccaccc accaccacat 33480 cctttcccaa caccattcaa aaccccagtc cagcctctcc tactggtcta cagtgagcgg 33540 ctaatagagt cctgggcctc tgtcccccca attctctctc ccctctcafcc tgttcacctt 33600 ggttcctaaa ctgcaggggc tactataacc ctacctccac ttccttgcac ccctcttttc 33660 tgctctctgg ggtgcccctg ccactcccag tccctctagc cagggagcct cttccatatc 33720 tgtcttcccc aggctagacc aggcgctgcc ttacctgtgg ttgcggcagc ttctctcaca 33780 gcctgcactc tgaggggctc caggaagcag tgaggggagt agctgcctct caaccagcgt 33840 ccagcaggct tcagattaca gctactcttt tcttaaagtg acctgactcc atttggaatc 33900 tgtgattgca tcattgtctg gtgttaactt taacccactg ctgcccttcc gccatgtggc 33960 tccaagacca cacgttggcc accctcctct cccaccacat ctcccttgga tctttatctc 34020 tcttcattgg gaccttcatt gggacatgat ggctaacttc aggggcactt gggccagcct 34080 ggggtaggtc atgagtctga acttgaacat ctgaaaggat tggctgagag gcaggctgca 34140 tggagagaot gtgagoeagc cggtatggag atgctgggtt cttccaggcg cttggctotg 34200 gctcactgca ggtgggagca aggtgattct tctcccctcc tcacctggaa aatgaaggaa 34260 tgggactgta cctgacagct ctgaaggttc caaaggacag tggggtgggg actagagagt 34320 tggcccagtg cttatgagca ctggctgctc tcgcagagga cctgagttct gttcccagct 343B0 cacatagcaa ggactcgaaa ctgcttggaa ctccagctcc agagaatctg acgctatctg 34440 ctnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 34500 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn. nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnatgtcagg catggtggtg 34560 catgccttta atectagaac tcaggaggca aagcagatgg- acatctgaat ttgaggcccg 34620 cattgtctac atagcaagtt ctaggctagc caggtacatc ataagaacct ttctcaaaaa 34680 ataaataggg ccagttggca aaatttagct tgccctccta' acacaagaac ccaaagteaa 34740 ccccagcaac catgtaaaaa gaagcaaggt gtggtggcac ttgcttgtga tccagcattg 34800 tcaaggtgga gacagacgga tccatggggc tcactggcca gccagctagc tggtctactt 34860 agtatgctcc cagccagtga gagactgaaa aataaataaa taaataaggg gttaggaaga 34920 ggtaacatgg tggctcagtg agaaaagata cttgtcatac aagcctagca accctcaatt 34980 ttcagtggcc actaaaggtg gaaggagaga accaactcca aagaattgtc tcctgacagt 35040 tttatgctgt ggtacacaca cacgcacaca cacacttgtt acatgcatat gcatacaatt 35100 aataatttaa aatgttatgt gtatgggtgt tttgcctaca tgcatatctt tctgtgcacc 35160 acatgtgtgc aatgcctgtg aaggctagaa gaggacatca gatcccctcg gagttacaca .35220 gggttgttag ctaccatgtg gattctggga acaaaaccat gggttttcca aaagaggctc 35280 ttaatcactg agccatctct ccatcccctc aatagtatat atttctgggg ctggagagat 35340 ggctcagagg ttaagagtat tgactgctct tccagaggtt ctgagttcaa ttcccagcaa 35400 ccacatggtg gctcacaacc atctgtaatg gaatctgatg ccctcttctg ctgtgtctga 35460 agacagctgc agtgtactca tatacataaa gtaaataaat aaaccttttt tttttttgtt 35520 ttgttttttt tgtttttcga gacagggaga cagggtttct ctgtatagcc ctggctgtcc 35580 tgaaactcgc tctgtagacc aggctggcct tgaactcaga aatccgcctg cctctgcctc 35640 ccaagtgctg ggattcaggg tttgcgccac cgccaccacc tccaaggctg ctgctgcggc 35700 caccaccacc ccaccaccac actacctgac tatttaactt ttaaaggcag ccatctcatg 35760 gaaaatgaca cctagcattg tcctctggtc cctacatgac cccatgtgca aacacatacc 35620 tgcataaaca cacataaata cataagtaaa cttagtctgg ttgttttgga aatgtgctat 35880 ggtttggatt gtgtcccccc aagggaaaaa ttgggtccca gagtagtact attggaagag 35940 agtagaactg ttagggttta ggcctggtgg gaaçtggcca tggctagaga gacatgccaa 36000 ccaaggggaa tctctggctt catcttttcc ctttgctttc aggtcctaag acagtcacaa 36060 ggctgcttca ccacatgccc agaagcaagg ggagcagtca tggctgggac cgctaatgca 36120 gctgttgatt tccccagata tttgtagtag taagagacag gtgaggaacc ccacagcaag 36180 tgttagtaat tgtgtgtgga ggtgccctcc ggggacgggg gccctcctgg ggcaggacgt 36240 tcctcttcct catccacctg cactccgaga acaggaaatg gtgactttgg cagagcttaa 36300 gcagagcccg ttcatgttac aagtatgtaa attcataagg accagtttct ctccatatga 36360 aacagcttca aacaggagaa ggaagaagca aacattaagg aaaagctctt ttattgcaga 36420 ggctacactg aagctaccgg ccgccttcct ggaatgtata atcagcttcc ctctgggggt 36480 tctgtagagc actgagacat taagtactac tggggtccag gattctgcct atgaagagga 36540 gggcccccgt gtccgtgtcc ctcagaacaa agaggaaagg ttggttaagg tgatagtcta 36600 gcgggaaggt gaggcggacg ggctggaggc ctgggctggg gctgcttcct gccccctctt 36660 cattccactc gaaagcagcc ctgtgttcca cttgggtgag cttcacgggt ttgccagtaa 36720 tcttgctgaa gtcgggtgat tcaaacaacg actgtagctc tgtggagatt cagagattcc 36780 attaacacca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cactccctgt ttgtgtaggc 36840 244 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tgattttcaa gaaagcaagc tagaagtgga gtacctcaca gtgacttgtg agctatgagg 36900 cactctgtga caggctcagt gacctacctg agaacttata gccaagatgg ctgaagccag 36960 acctggcctg agagaatgtt ttgggctgtt ataggacaca tagagataca cacacacaca 37020 acacacacac acaccaagga ctgagtctaa tgggaggtgg ttcttcattc ccctcccctg 37080 taatggtgtc acatgttccc tgagccaccc tacaaagaaa gccacaggac tcagttctgt 37X40 cagcaaggtg gcaggctcca agactcagcc ccgagcgcaa agtggccttg caaacatact 37200 catgtcctgc agagacttgg taagttcgcc ttcgaagctc agcttcagct tggggacagt 37260 cagcacagct tggatagtct tcagttctcg gtcgatgtca tgaatgaact cagaggtgag 37320 gctctcttct atcatggtca agttctgggt cacggtcagg ggcaggaaga agatgatgct 37380 catacttcct gtcaagggca gctgggcaat ctaacccaac agagatgcgc acaggttagt 37440 tgtgagccag aaaaaacaaa acaaacaaac aaaaaaacac caacagctgc cttcccctct 37500 gctgtaacgg ggccccagcc ttgtgctccc cagcctcagc ctgggctgta ggctactggt 37560 tactggcagt: ccttccatga gtagggagtt ttcttetcag cctaaaaccc acagaagttt 37620 aatgaacaca cgtttgtttg tggttccgct acggtttcta ttgtgataaa acatgactga 37680 aagcaacttg gagaggaaag ggtttatttc atctgacaat tcgcagggtg tcttctcatc 37740 actaagggga ctcagggcag gaactgaagc ggaagccgtg gaggaacgct gctttctggc 37800 ttgctccccg tggcttctta gcctgctttt ttatgctatc cagaaccact tgcccaggag 37860 tgacactgcc cattgtgggc tgggcccccc cacatcaatc actaatctag aaaatgaccc 37920 acgggtttgc ccagaggcca gtctggtggg ggcattttat caattgagtt tcacccttcc 37980 aaatgactct aacttgtgtc aagttgacca cacgaatcag ggcctggttc ttaggagctg 38040 aagfcggaatg teccccagag actgcctgcc agcactgctg accatttgct ttgtatagag 38100 cattgaacca gaaatgaaca ataaaatgga tcctttgaac agatgtgttg atcctagggc 38160 ctgtggacac agcgactggg cttcccagag cccccatgga atcannnnnn nnnnnnmmn 38220 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn rmnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 38280 nnnnnnnnnn nnnnnnrumn nnrmtggcct catcaggtat cagagagaga gagagagaga 38340 gagagagaga gagagagaga ggataaaagg ttagcccagt ggtggtggca cataccttta 38400 attccaacac ttgagaggca gaggcagggg gagctctgtg ggccagtttg gtttacagag 38460 taagtttcag aatagccagg gctacacaga gaaaccctgt cttgaagaga aacacacaca 38520 cacacacaca cacacacaca cacacacaaa taagatcttt aagaagaaaa gaaaggatag 38580 tggggaaaca tctgagcaga ggaagaaatg gggtgcgcag gacacccacc ctcagaggag 38640 gccctcactg gaggtgtctg cacaggagaa cacttgcact cagcttgccc tagggcgtca 38700 gaactcagaa ttcagtttca aagcactgac aggagcagtg actggggacc ccaggttgaa 38760 tccccccttt atctaaaatg agtaagaacc aaaaaaacaa aagtgtttgg gatttggaat 38820 ctgggttatt fcgcatctaca aaagaggtct tggggaggaa aeecagttct acccctggaa 38880 ttcatcagtt tcctataccg ctgactacac aggggctgaa ggtaatctca atgttttcat 38940 aactggtgtg gtgctacttg ctcatgatcc caacacttgg aaggtaggtc agaagttcaa 39000 gagcagtctt gactactcag tgaatttgag gctagcctgg gctacatgaa aactcataaa 39060 acaataaaag aaaagaaaag gtggcgagtg aggtggccca tcaggtaaaa gtgccaacca 39120 cctcgcctga aagcctccac acggaagggg aaagccagct tctacatgtg gtcctctgcc 39180 ctccgcatgc accatggctc gtgcaccccc acacccaccc acccacccac ccacatgaca 39240 taaatacttg taatgattag tttctgaaga acaatatttt cgttgatctt gtttagggaa 39300 caaagttcgt gcacattgac ctgtcgaccg tgtagtacgg gatccgctcc aggaagctaa 39360 agattttggg atgcttcatg ttgcagctac tctgatgaac agtgttgctt tctgggccag 39420 gtaatggtgg catatacctt tgatcccagc acttgggagg cagaagcatg tagatctctg 39480 tgagttcgag atcagcctgg tctacagagt gagttccagg atatccaagg ctatacagaa 39540 aaacccctgt ctctaaaaat cactaattta aaaaaaaatt cctttctaaa cctatataac 39600 aaatgttttg taggctgcct taacaaagcc caatggccat tcagagaagg ctcaaaagag 39660 aaagtttagg ggactctaca agcatcctca ggaaggccac agaaagcaga gcctgggcca 39720 gtgagacttt gcagtgggca aggttcagct ctttatgtag gaagaagaga gtcaacagtc 39780 agagtccagc tttccataaa acctgtgcag ggcctctagg caaagccctg tgttaggggc 39840 aaaggcattt gcagtctaag cccggtgaca tgagctcaat ccttggaacc caggtggaag 39900 gagtgtgctg actccacaaa tttgtcctct gatctataca tgtatgcacg tgcacgcaca 39960 ctcacataca tgtccacatg cacacatgca tatacatgcg catgcgtgca cccacacaca 40020 gggtcaaaag cagcaagaga tgccctgtga aaaacgtctc attcagtctc ccatcatcca 40060 gtgccacact ctgagcacag gtggtactga tatcgttcct gattgatcga tcagttgatt 40140 tgagaccccg cctcactatg tagcccaggc tggcctggaa ctcacagtga tcctcttgct 40200 cctgcaagat gagcccatca tgcccaccat gttactgaag caataccatg ctctataaag 40260 caaacctagg caggcaggat ggtggactcc tgtaatctca ggacttgaaa agtagaaggg 40320 agatgaggag ttcacatcaa fcctcccgtat gcgttggagg ctggagtggc tgttccctgg 40380 gcgcttctgc cagcacctga ccaatgcaga tgcagatgct cacagccaac catcagactg 40440 agctcgggac cccagtgagg gtgctggggg gaggactgga ggagctgaga cgggattgca 40500 agcccatagg aagaacaatg tcagctggcc aaaccaccca gagctcccag ggactagacc 40S60 acgaaccgag gactgcacat gaagggatcc atggctccag atgcatatgc agcagaggac 40620 agccttgtct gacagcatgg gaggggaggc cattggtcct gtggaggttt gatgccccag 40680 245 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tgttggagga agaggcaaaa agaaaaaaga acccccaagc atacgtgcaa gtgcacatgt ccaacctaaa tgtaacatta aaggcagcca gctgcagggg ctgtaaotcc aggtgtgcac catgtggatc ggtggtgcac aagaccagcc gtctcaaaaa gaggcagagg ggacagccag acagaaaact cttccagggg acagacatgc aactaataat tagcacttgg agtgagttcc ataaaaaata aggcgttcca tccctcagct tctgtgagtt aatagaaaca gactcagtgg aaaatttatt gggagcctag aattaagagc actgtagctg agccaccatg taagtactga ctgagaccaa ttctccagtt gagtagacca cagatgggaa tggtgctgtg tgattattgg tggggtttgc tcttcgocat cagtoctggt ctattaatta ggaactctac catgtgtgac ccaatgttct ctgatagggt cattctagct ctcctggggc cacagatgca agatcaccct gacaacactg ttgctgcgga gagagagtca ggtctcagga ggattcaatc tttttgtgac tgtttgcgct ctcatctcct cctcagtagc cattttctcc tgctggagcg gggatggggg tgtctctgaa cccacagggt tccatggcat aattccatca gacctacacc aagttagaaa catcaaaaca cctgaattct agctccctgg acatacacat tgggaggagc gcctttaatc tggtctacag aacaaaacag caggtggatt ggctacacag ccageccagt atccaatgcc acataggcaa ttaaagaaaa gagacagagg aggacagcca aggccaagta tagggctagg gcatgtggta caaggccagc tcntacctag ctaagagcat taaatgttta gtttgagtcc ataagaactt tcttcagaca tagttgctgg gccatctcta gaactaaagc ctgatcagct gaggccccat tttcagacca gctgccacag ctatgccagg cctgtctgag gtgaggotcc gctggagtot attaattaat ccatcataca cgcatgcatc acttctaaat ccttgcctgg gtctggaggg tgcacctgaa tgatgggaaa ctactggaaa gcagtccaac accagacaac gagacagaga ctgagggtat tgaacacagg acacccctaa tatgtctaca ctgaaaccac aggcagcaga cacccttaag gtggggcagg agaaggcaga agtaaaaagt ggaaggagag acgcagaaac ttcaggagac caaagaagga tctctcttca gtgtaaatca gttctcagaa gatccaacac caataaaaat tgagaggcac ccagcacttg agttagttcc ccgggcggtg tctgagttcg agaaaccctg ttccagcaca ttcttctgac aacactcaca aaataaggaa caggcggatt gggctacaca attcttggaa aatgaggctt octttaatct ctggtgtaca agcccngcca tgactgctct ttacttgtat ccaaatcacc ctttttaaag caccagaaga gaattgacct cagctcttat tgggagattg cccgtaccag ctaaacagcc atgtcatttc ttggtgtggc aaccagtctc gccatgggac ctggggtcac actgagattt cacgtgacaa tggcgactat agccctgact gcatgcacca catgcatgaa ccctcaatcc aaaggggact gccttctgga ggtggtttca agacagacga aaggtacgag cacacagaga agtctactgt aaaaaagggg agtcactgcc cagtctcggc tgcagcaagt gcagagctct taccctatct agtgggtggg tgggatgggg acttgtcact aaatgagtcc gcaaagacag agaagcagca caaactataa cactgtgtag acgagaaaac cctgcatcaa ccatttctgg caaaaccagg tgggtgaata ggaggcagag aggacagcca gtggcacacg aggccagcct tcttgaaata cacaççgtga ctctgtgggc aaataaaata gccgggggtg tctgagttcg gagaaaccct gaatcccaag agcgagagca aggctctccc tagctagttc aanaaagggg tccagaagtc tattatttaa aagaaaaaat aattcttatt gggcattgga caggacctct caggttgata aaaaatgcag gggtctaacc tgcctgcagc ccaggacatc aggatcaggg tcaagcagca tcttctgttt ccagccgtcc aocattaaac ccccagcgtc gaagaacaat gctaaaagtg aacgcctccc gctgtggaca actgtgttcg gcttaagagg agcaactggc gtctaggttc tctaaacttc ctactcccat gagacagaga agagcatttc gggggggact tacttccctc tcccacttcc gacttgtgtt gtcttctcgg tctctgtctc taggtgggga gggttgtgga aagcatgagg cacaagttat acaatgagtt gagttgttgg ggaaaaaggt atactgtaca cagaaacaac gccaagagáa cctccatcag gatgaagggg caataaaaaa gcaggcgaat ggtctacaca cctttaatcc ggtctacaaa aataagcatt ctcacaacat accaggattg aatctagcaa gtgtcgcacg aggccagcct gtcttgaaat gggacactaa acttcgctgg gaagcagagg caggacagaa agacctgaga ntgagttcaa atttaaataa gttatcattg tattttatgt tcccattaca agaagagcag aaatttaatc accaccaagg aggcctgtgt agctcctctc aacacagcag gctggcattg gctcttctcc gatggtcgcc ctgctgcctt agcaacgttt catatgggtg gtgacagaaa gacaagcccg acaggaccag cgaggcatta cgctgttcca gctcctacca tgccaaaggc tgtgggattc caaggcacag acaacataca gagagtctaa cccagcatat tcgattatct accgccatga tcctcccctc gactgccaca agcttcttct tgcttgttga gcaccttcat ggggtaagaa atatgagtca tttctgatct gggtgtggtg aaatctaagg ggtcgaccaa aggaagagaa tcaagagaag tcaaaactgt catcactcac tagggaggtg tttggtgcat ttctgagttc gagaaaccct cagcacttgg gtgagttcca tgttgctgtt cataactcca catacagtgc aaaaaatttt cctttaatcc ggtctacaaa aaataaataa gtgtatataa tgtatgaaag cagaaggatt agggcgatat ccagagagat ttcccagcta ataagtaaat ctaataatca atgtaagaac gatggttgtg tctgtgctct tcgtggagcg ccctgctcat ctgcttccct tctaggtgga ccaaatttat gcacagtgct tatgccatgc ttcctcatcc gactccatgc ctctaaaata tggaaaatga atgctaacat aagcgaaagc aggtgcagct ttcgcaagaa gcaccagtgc agcctactgc tctggacaag caggaaatta ctggtagaac aaaaagcaga agagagtcag acaagaccct caaattctcc agtaaagagc tgcttctgtg cggaaactct ctcttgtcgc tccttggacc 40740 40800 40860 40920 40980 4X040 41100 41160 41220 41280 41340 41400 41460 41520 41580 41640 41700 41760 41820 41880 41940 42000 42060 42120 42180 42240 42300 42360 42420 42480 42540 42600 42660 42720 42780 42840 42900 42960 43020 43080 43140 43200 43260 43320 43380 43440 43500 43560 43620 43680 43740 43800 43860 43920 43980 44040 44100 44160 44220 44280 44340 44400 44460 44520

246ΕΡ 1 325 13 Ο/PT cttttccttt ctatgaacaa cgcccccact gtggagaaaa ctctagctcc atgacttaaa aaaatattca gtcaactcct tgctatgact cceagatcca nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn agagcagcca gtgttcttaa accaccacca ccaccaccac ggttggttag tttagtctgt agaaactcct gaaagtgaag aaatgtgaca tgtaaataca acagtctgta gcctgaatta cctttgcaag gagaagggca tatcagattt tattgctttc ggaaagccta atcttcatag aacagcacac gtgtatgagc gagtacgata gcacgtgtat tactgtgtag gtctcagggg acagagtcat cctgccagcc ttcaaggcta actcactgac tggacatctg tgctggtagg aagcatcacc aaggagttcc aggtggggtg ggtgagcctt gtctactcca tgaccaaaat tctagttttc tttcfcttctt caggaatgca agagctctgc ctttcctttt agattttafct tatgtgtacg tatcagtatg tctgggttac aggagtttcg aatcaccccc acccccaccc acagacaagg gcctgcaaga acctgagttc actgtctgga ttgtcctctg ctctccccat gaataaataa aactaaaatt tgggcaacaa taacaccgag gaaaaaacaa acacatttcc gggataaaaa cacectgaca tgtctacaac atgacctgtc cctggaggta gaagctgata ggagtactag cctaggggct aaatttagaa aatgcactac attgaggttc cttcttccaa agcatattgg gattatagat catattcaga aattaactca aaaaattctt acaaccatcc cagctacagt gtacacacat tcaggctggt gagatggctc gttcaaatcc cagcaaccac cttctggagt gtctgaagac aaaaaaaaaa aaactatgaa gtaacccaac agaaaaacac aaagagaaca gcagaggatg cgagacacca aaatcacaat agctgtgtcg ttaaatacca tgaaatccaa gctactgggt acgccagagt taactcagag tgcacaggag agatggctca caattcccag cacceacgtg aatgcccttt tcacagtacc tgcatacata cacaggcaaa cgggcgtggt ggcgcatgct tgagttcgag gtcagcatgg aaaccctgtc ttgaagaaaa aatatctcct taaaggatct cccagggcct tgcacatgct gcatctctgt gctgtcaaat tgccattcaa aatggatgac tccacttggt agcccaggaa nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnngg ttactgggat ctgctgagcc atctctccag caccccacca ccaccccgcc gagacaggag ctgtcccttt gcctacaaaa cagccacact tgctaaaata attcgttaag cagacacgac acgagccatg gaagcttcca tccttgctag tctttctgtt tttctttatc cccatgtatg tgagcacttc accacagcat aggtgtgtga agagttcaga ggagaactga tggaacttgg gctcagcctt cagctttctc tttttctctc tctgagttat cagaactgct aacaccatcc ccactcggct accacctcaa ccagcaaata gtgatttatc gttaggatct ggtgacggtg gctgaccaaa ttttcttttt cttttacccc caagtgagct acattcccag tcgatttatt tgtctatgtt ccatgggtat acagaaacct agctgtcctg tgggttctca agccttcgag ttcaattctc tggctcagca ggtaacgaag acccgcgtaa agggggaagg gtgtgccatg gaatgaacag agcttagtaa cttttatgtt agtagaaagg caagcatgta tgtacatcgt tctgggagtc aaaattaacc tggggaggaa acccagggaa gtcagggcag cagaagccat ggagctgctt gtactgccca cagtgggcta aggtttgcac acaggccaat aaggacttta gcttgcatta attctcataa aaaaaagaca atgtgaacca gaagctctga ataacaaaaa tctgatgccc ataaataaat aaataaatat agtgggtaag agcacccgac atggtggctc agaaccatcc agctacagtg tacttacata gaactatgaa ctacaagaag ttgcctggcc tgcgtttggt agggcatccfc gacttgagtc gataaaagag atcaacaagt cgcaggaagt gaagaggagc ggactgaggg aggacaacag agcagcttgg gtagctttaa gtggttaaga gcattactcc ggcacttaca atcatccata aggcatgtac acagtgcaat acttacataa aatactaagc tttaatccca gcacttggga tctacagagt gagttccagg taaaaaaaaa aaagaaaaaa cttctagttc agggtccccc cagcaggagc tccatccagt atacacttcc agcccttacc ctcaaagcca gagtcagcgg tgaactcann nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ttgaactcag gacctttgga ccaccaccac caccaccacc ccacctgctc attcctgatt tctatagtgg aaggtgaata tatttgttgg aaaatactgt tcagtgaaca accttaaaac acagaggctg aaataagacg caaatctttg fctccaagctt atatttgttt atttgttggg agcatatgtg tgtgaacacc gtaccacagc acatgtgtgt gagagtccgt cttttcctcc ggtggcaagc tcctttatcc tgttatgtct atccactctg tgtgagagca ggagtaactt tggatgacga aggggaaaaa tttacctcct atacatggat catgggagtg attacagctg aagaaacagc tacacctggc acggtactaa ggattgaacc atctgttttt ccatttcttt tgtgtgtatg tgtgtatgct gagaaggcca gaagagagtg aatgcagcag caccaccacc atcatcacaa aaacacacac ctcgtgtcat aagcctgaga gaagaatcaa ctctatgatg ccctcccaaa cacacatcaa gaaagtggtt tttacatgcg tgtcactgaa cagcattgaa tgagttaggg tttctatgct gctgtttatt tcagctttta aaattcaaac aggtcagaag ctggcttgct ctagcacaca ggctctccca cagcaatcat ctggtagggc cattttctca tgttgacata aaaactagcc tttagattcc cacataacac aagtaagagt taaaactatg tcttctggag tgtctgaaga ttaaaaaaat atatgaaaaa tgctctttcg aaagtccaga gtaataagat ctgactccct taataaataa ataaatctta tcaggaatag ggcbgggggt ctctagcacc accaacgtag aagtgacaag tgataatcct tgggctttat ctgaataaag tgagtctggt aacacaggcc ctagctcaag gcccacctgg tgagactctg cccaggccag tcttgcaaag gacctgagtt actttagttt caggggatce tacatacata catgcatgca agataaatct taaaagaagc ggcagaggca ggtgtatttc acagccagga ctacacagag atcttaaaag aaaaggagag 44580 44640 44700 44760 44620 44880 44940 45000 43060 45120 45180 45240 45300 45360 45420 45480 45540 45600 45660 45720 45780 45840 45900 45960 46020 46060 46140 46200 46260 46320 46380 46440 46500 46560 46620 4 6680 46740 46800 46860 46920 46980 47040 47100 47160 47220 47280 47340 47400 47460 47520 47580 47640 47700 47760 47820 47880 47940 48000 48060 48120 48180 48240 48300 48360 247 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gactggagag atggctccac agttaagaac acttgttctg aggtctacag agtgagttcc 48420 aggacagcca ggactataca gagaaaccct gtttcgaaaa accaaaacca aaacaacaac 48480 aacaacaaca acaaaaccac ttgttcttac agaggacttt ggtttgattc tcagaatcca 48540 catgatggtt cacaaccatc agttgcaggg atccaaggtc ctgtcttctg tgggcaccag 48600 gcatatatgt ggtgtacata catgtataca ctcatataca taaaataaaa agttttaaaa 48660 aggaggctgg gtttgtagcg cagaggtaga ggtaaaaaga ctctagcttg tttaatgttg 48720 acatgaaaaa aaaaagacat ttagattcct gcatcacacc atatccaaaa attaactcaa 48780 tgtgaatcat aagctctgaa agtaagaata agcctagtat gcactgtaag gctctgggtt 48840 cactccccag cactgcaaaa gatcatgaaa ccagaaatgc agatcctctg aaccacagca 48900 tgggaatgta actcagccga tgcagtgctc acctgtcgta tacagagcàc aggataaatt 48960 gattgtggtg gtgcatacct ataagctcac tacgtggaaa gtagaggcag gacgaccaaa 49020 ggttcagtga catccttggt cacatagaga atttgaggcc agtctggtct gctggtctat 49080 ttggaatgct gtctcaataa ataaaagaaa gaaagaaaaa gaaaagaaga agtcctatga 49140 ttgtcttaac ctctgacctc tgtgttcatc aagtctcctc ctcaggaact cactggtcat 49200 cttgtgaaaa cctaccccag agtctctgtt cagaggaccc aggctccagc tgtggttacc 49260 acataggatt tttatactag aaaaataaaa tgaataagta tgtatttttt aaaaaggtgc 49920 agagctggat atggtggtgt ctagttatag catccagaac tgagacagga tagccatgag 49380 gttgagaaca gctagactat acggtctcaa caaacaaaag taagggatct gagtagatga 49440 ggttttaatt tttttctttg tgtttgttac ctaacgtgta tggttgtttt gaatacatgc 49500 atgtctgtgt atcacttgtg tgcctgaaac ccaaggaagc cagaggaggg catcgggtcc 49560 cccggaagta ttattacaga aggttgtgag cagccatgtg ggtgctggga atcaaatctg 49620 aaagagccac ctcgggctgg agagatggct cagtggttaa gagcactçaa tggctgctct 49680 tccagaggtt tggagatcaa atcccagcaa ctacatggtg gctcacaacc atatgtaatg 49740 ggatccgatg ccctcttctg gtgtgtctga agacagctaa agtgtactca aataaataga 49800 tcaaaaaaga aaaaagaaac agccacctct ccactcCccc tttttaaaat cctcttgcct 49860 ctgtccctta atgttaataa cacaggtata tgatactatg ccttgtttat gaatagaaaa 49920 tacacgtgct aaageaagtg tgaaccttaa atacattatg- ctgagtaaaa ggagtgagtt 49980 gcacacaaga cttttctgct caagagtatc tgtatgaagt attgaacatg tgaactctga 50040 aatcgggagc tgaggaagat atggggagtt ctaatggcta caacatttct ttttggaatg 50100 atgaggatgt tctagaactc aaaaatggtg ataactcagc atatatacta aaactcattg 50160 aattgtacac tttaaatgaa tgcaataaaa cttgtetcag taatgtggtt tagaagatgt 50220 acagacatgt gtgtgtgtgt gttaaaacat ttcttggcat ggcaataaaa atacagtttt S0280 agecaggtgg ttgtggctca aaaaataatg aCaataacaa taataaaaat aatgaaaaca 50340 gaggctggag agatggctca gcggttaaga acactgactg ctcttccaga ggtcctgagt 50400 tcagttccca gtaaccacat ggtggttcac agacatctgt aatgggatct gatgccctct S0460 tctgatgtgt gtctggaaac agctacagtg aaagtcattg caaggacttt acaatagtga 50520 ccatgataac attgaagcta gacttgctac tactgctgag tgtgtctgct ggctctttct 50580 aaggagtaat gttagctttt tgtcctaaat ttgtttcctt cctttcctct ctccctctgc 50640 tgttttttct tacccctctt ttactttgct ttcccctctc atctcctctc ttaacagagt 50700 tgtcctatgc agcccaaatg ccatcttcct gcctcagcct ccccagtgtt gaaaaatact 50760 ctttccacag gttatgttag gagactggag tctgctcagt cggggaggga gcctgggtca 50820 agttctgagc tcaattcctt ttctttcttt ctttctctct ttctttcttt ctttctctct 50880 ttctttcttt otttctttct ttctttcttt ctttctttct ttctttcttt taagacaggg 50940 tttctttgta taccctggct gtcctggaac tcactttgta gctggcctgg aattcagaaa 51000 tctgcctgcc tctgcctccc aagtgctggg attaaaggtg tgcaccacca ctgcccagcc 51060 ctgggctcaa ttcttaacat tgtggagaga aaagtattgt agctgttctg gccacctgga 51120 attactttgt ttctgatctt ttgctgcagt caaatccttc tcatccatct ttcctcgtca 51180 ggctataata tagactctcc ttgcaatact tggaaatgct ctacagtcag ctacatcctc 51240 agtcctgctc etatattttt tcctaagctt ccttctaagg tctttattgg tttatgattt 51300 acacagaaca tttttttttc ttgtctatag catgcgttag agtgatcgtt gccagataga 51360 ggaaagagaa atgagagaan nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 51420 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnt S1480 cagctactga ttcctcctcc tccctcctcc ttcctccctc ctccccagcc tcatgctctg 51540 ctcatcttgg acttctgcgc atgtcctcag cccagacctt ctgctcttgc ttctcctctc 51600 cccagcagcc ccccagttct cttcctgaaa cttctgaggt actctccatc acctcctttg 51660 gctcctgctc tgattggtgt cacctgctgg ataggcttgc tcctgactcc actgttcgtg 51720 tctcaattag ggaccctcac cctctgatat accacacatt tccctagtgt ctccacctec 51780 cacccccacc ctatacgcac atacacactt agctgcatca ggatcctaca ccagggactt 51840 cttacccttc taatcctccc caccggacac tgcccaggga cactqgggct ccagagggct 51900 attgccacac ggacacacag gagatctcat caaggagatg tgcctacccc agagggtagc 51960 tctcaccatt cacaagcaca ccacttctgc ctccagcttc tactctctcg caggaagtàg 52020 ccagcccggt gccaagtatc cccaactaca tccccaaaat tctcagacac tgccagcctc 52080 cagctgtcag cctggccccg gctggcgggc gcctgctcct ggcatagcga ctagggtgta 52140 attagaaacc cgctagctcc ctaattgcca gttctgagct gtccttgtta ccggctgccc 52200 248 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gaggcacaca tagaggaaaa ggctgagagc tgagccaggc tggcatggag gtagccctag 52260 tagacctaga gaggactggc atgtggccag ggaccaaacg tggcacagag agggctcagt 52320 gcaatctgcc ccgtgggtgc ctcccagcca catccatttg cccagaactg tgacgtcaaa 52380 ccagcccggc ccattcattc tttattcagg tggcataaaa atcactacaa aaactttaca 52440 aaagagtctt gggagctaaa gggtcccttc cttgcctcag tccccaagat tcctggcagg 52500 ggaggacaag agagagaaga aggaggaaga ctcctggcag tgttggcatc tccaaatacc 52560 agaggggtga cttgggtgac aggacacagg ttggggacct gaatgtcttc agcaagggac 52620 actcttgtag ggtaggtcag cctccaacca tgaagtataa caccaaggcc agtctaagct 52680 tgggagacca acacttgtct ctccttttcc cacccagggt gtctggaata tgtctaaaga 52740 tggcctctcc agcctctgct fcacaaatgtg gagggaccct aagttaggga cttgcctaac 52800 ctacctctag ccaaaactgt gtccacaagt gccagcccac aaaagatcac cccctgagcc 52860 cettgggaag aaatgaagat tccccatgcc tgccttcctc caggccccac cccacctgct 52920 gcaagagaac agcttctaca ctggtgatgg tccttccggt cccaccctat cccacaaagc 52980 tggttagaaa gagtcacagg agctgagagg ctgatccagg tggggactca ggatgctgct 53040 gcccagggcc cctcctcact tgggggagct gaactggggg tagtcttcct ccatgcgggg 53100 tgcaagtttc aagtcaggac caaaggtctt gcctccatgg aagtcagctt tgtcattctg 53160 gectatgagc ctgttgtcag gggaatctcg ctgttcctgg agctggggca gcgcgctggg 53220 gttagggttc ctcacactgc ccacaaagag gggcacgcct atggtgtcct ccatgatgaa 53280 gaagaggaag ggtcggttca cagtgaagga ggagagggac attcgattca tggctacgct 53340 ggtagctgcg gctgcctoca caccagcctc gctgagctcc atggtagact gatgttgcac 53400 gctagacacc accagattct gctcagagat cccacgaagg tctgggccct ggaacaattc 53460 ctgcaggcct gcccagaaca gcagatgact ggtcagtgct gccccaaggc tatgtggatc 53520 tgtctagcat cctggctaaa gggaacactt gaacccagcg gttgattgga atctgttaga 53560 cctcagtcta gacaacactt ctagaaacct tttttttttt tttttttttt ttttaaatca 53640 ggatctgcgc taggtacagg acagaaagtc tagaggagca tatcaaatgc tcccatccag 53700 gaagcagggc cacctctggc tcaggcacac tggcagctcc cgtactctgc ccagaccacc 53760 taggggcaoc ctatccceaa gctccttacc cagttggctg- agggtggcca ccaggtccag 53820 ctgctgttgo agatggagtt taggcagcca caccttggtg ggcctctcct gcagcgaggg 53880 atggtacaga gtatcccagg tcaggttggc tagtacctcg gacacgttcc actcaaaata 53940 agtgggcatc acgaccacaa agctcatgtt gttcttaaag gggaaatgag ccacctacag 54000 ataagaaaag gagagaacat gaggaccaga cagcacctgg acctgtctgg agtctgggcc 54060 aaaattactt ctgtactttt gagacaagag ccagaaattc agggttagca tgctttcact 54120 taaotggtga agtggaataa taccacttac ccctttgcaa ggtgacatgg gaccaaatga 54180 gataatgctt ttacacctct ctgtgtgcac acataagcat atatgtttgt atcggtgtga 54240 gtgtgtttgc tcatgggtat atggagtcag aagtaggtaa acatcagtcg tcttcctaca 54300 ttgctctcca cttttttttt tttttttttg gtgttgccat ctttttgttg ttgttatttc 54360 aagacaggct ttctctgtgt agccctggct gtcctggaac tcactctgta aatcaggctg 54420 gcctcgaact tgcagagacc cacctgcctc tgcctcctga gtgctgggat ctaagatgtg 54480 tgtaactaca catagctccc tcttttttgg acacagggtc tcatggatcc caagctggct 54540 ttgaaatgac tgtttggggc tggagagatg gctcagcggc taagaacact gactgctctt 54600 ccaaaggtcc tgagttcaaa tcccagcaac cacatggtgg ctcacaacca tccgtaacaa S4660 gatctgactc cctottctgg agtgtctgaa gacagctaga gtgtacttac atgtaataaa 54720 taaattaatc ttttttaaaa agagaaagaa atgatggcta catacttctc tctcgtctct 54780 ctgccccaag tgctgggatt acagagctgt acaacaagcc caagtttgtt gtgttttaga 54840 catgctaatg tatcccaggc tgtcctcaga ctctctatgt aattcagaac gaccttgaac 54900 ttcttttaag gtttattttt atcttatgtg tatgggtatt ttgcctgagc atttgtctgt 54960 gtaccgtgtc cttgcagtac cctcacagtc cagaggaggg caccatttcc cectgaactg 55020 gttgtgagct gcatggtggg tgctgggaat caaaccctgg tcctctgcaa gagaagccag 55080 taagtactct taactgctga gccacttctc caccttgagc ttttcttcct cctatctcga 55140 tctaaaagta ctagggatgg cggatgtgcg ttcatgtgcc tggtttatgt gttgctaagg 55200 gttgaacaaa gggcttcgtg catgccaggc aagcactcaa caactgagct acacatcccg 55260 acagactttg actcttctag tagtagtgtc tccactacag cctgagttct ctaCctgctg 55320 tcagcaagct gtacaaacaa gctatgggcc ttcctgtcct tgcctctcag ttctctccgc 55380 aggtggggct actggctttc aaaatgaccc atagaggagc cacagcaaac agtaggaagc 55440 ttgcccctcg tctttcaccc tctcccagag agtcagctat aattcgagtt tttttttcct 55500 ctctctctct ttaaacagga tctggttatg tggccctaac tatcttcaac ttcagtcttc 55560 ctgcttcaac cttctgagtg ctgggattat ggtgtaagcc accacactca gctcacacaa 55620 cctttttttt tttttttttt tttaaagaat ccatgcagtt aggacagcat ggaaatgacc 55680 aggctcaggc ctccctgggt accagcataa tgcctgcagg cgggtcctct gccagtgggg 55740 ggatggaaag atggagccag aggatctttc ctctctgaac ctcaatgtcc cacagtgaga 55800 cactcatgtc cactgggaga tactgtagta ttcaaggaag aagcaacagg aaggtgagag 55860 ctaagtggag ctgagcaggc tcgtatcctc tcaccacggg ctacagagaa gtctggctgc 55920 cccctccaca tggctcctcc ctgcagaact ggcaatgctg ggcccggctt gcccagtcaa 55980 actaaccaac agaatggatg agcatgtgtg gtgccacaca cctgggaccc cagcactcag 56040 249 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ acagctgggg gaacaaacaa tactctagcctggcacggag atctatgaag tgggctccgc atattttctt aaacccttcattgccagcca tcgaagagga gtggaagaaa caggcagagg ctatnnnnnnnnnnnnnnnn ggaaaaagga ctaatgattg atataaaaac tttctgtctc aagaggaaat acagaaacta acagggtttc tcgaactcag gcgccaccat tttaaaaaaa tgcccttgcc tcagcactca tacataacaa aggggccact aactgtcctc tttgtaattt tatgaacatt caattacgtg gtctattcgt ctcccagttg aaggattaca atctttgcat agggagtagg tccctgtggg aggctctaag ctattcactc tgagtccttc caatccaagg taactgcagc taatgcgaaa gagacattea agaatctata gagaaaattt gtcaactttt gctccttcct gtaggctttg gaaagatgtt tgaattgtat cagagagaca ggttcgtggt ggttagttag ttttttacaa ggaaatatta gtagccgatc tcgtaggtat gagtggggat ctcctctggt ggaggatctc attttgttta cttgccagcg cagaagggtc aactagcccg aaggagtcaccttcatccaa cactgtgtgg taaaacccca tgaggagatg ggagctacct aaggcaaagt tatgacaccg tctttctggg gcaggagccannnnnnnnnnnnnnnnnnnn atcttaaatt atgtggaaag acaggctgaa aggttcctac aaaccctttc taactaatat tctgtatggc aaatccacct tgcctggctg aaaatggcca ataaattatg tgagcctgag gatcctgtcc gcaaagacag ctctctgtaa caattagttt ttcaaggcac ccaccagcaa agttctgatc agtgttctca gtgttaacta aaattctttt tctggccact aagggcacat tggtcctgag ttotcatttt tattgttttt tacacttttg tgatatggta tattgagtaa actctgacac aataactcac tagcaactgt aattatgcag gctgcctacc gaggggcgga aatgcagttt ttacatgccc acatagttct gtttcctttg gattcctggc aaccgtttgc tttccctcct ttacatgtat gcagttagaa ggccttttgt ctatcactat tgcttctgaa aagagcaggt ccttgaccac atgagtccaa tcctgttato ggttaggcta tcagaatgtt gaactcctct gcacagagaa aacctcaaag acccagggac ccagactgac cgtgcatcat tgaggctcgg tgtaacataa nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn agaagatgcc tcacgaggga caaaccacaa cttgacttcc ctccccacat agttggtttt cctggctgtc gcctctgcct gttttctttt tggcatataa taaaaatttc gcagaggcag aaataataac tatgacaaaa ttttcagttt tttaataata ttgatacata tgttagcttc ttgttatatc ttgaatttca ggatagactt taatcaaagt gatgagtgtc ctgtgttgta ctagctaact gcagagcact cttttactta ctaaagaatc catacatatt tttttaaaaa cagcacccta gaagctgaca tctaatagàg acgctgatta tttaaccgtt caggcactca gtagaattat tgtccctgtc tatatttaat ttcattacat acgcggacag ctttaagagt gcttaaaccg catacctatt gcctctagtt gtgccccaag cctgccactg cttctttggc aggctgttag tgttaacttt agcgaacttg tcagccacag gaagcaaggg cagagcaata cttcccttac cagttacctg aagctgtgtc cagactttac ctgtatctca gtccaccgac gtcaaacttg aatcagcctn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ttgataagat tggtgtcacc agcagtagtc ctcagtgaag agtttttggt ctttttttgt ctggaactca ctgcctccca ttttttaata tataaaaaga catatggaca gaggatggtg aacagtaata ccactggccc ctaattttta gaaacaagct cctcagattt cttttttccc cctttttatt ttagcagctg tgacaaagaa tcctcaaaag caggccacag acaggattcc gcccttggct taccaggtag aatcccattt actcattttt ctctcttcct tcaatactca ctcagttcct ttactcactg cctgccagtt ttcagacgac ctcagtgctc aaccagctaa tgactaaaat ccccatagca tttttccttt ttgtatccag tgacaccaca cagtgttttg aagctgtgat tctggcatat aaatgaaatg gctgttgtgt ccagaaaacc ctgagaaact agcttgggtc tgttaaccaa tgtaacattg atgatgggcc aagccttagc agctttgaaa gagcagggcc gcacgtgaca ctggatagac ctcccagtac ggttgctcça actgtgaacc gtcctccaga ctgcctgtct nnnnnnnnnn nnnnaaccaa tggcatgtag ctgggcagat ctcaatggct gcatgtcaca tatgatgtta ttgttttgtt ctttgtagac agtggtggga catttataat agtgcttaca tcagtctcaa agctcaaggc atttcataca tgcctaattg cataactacc aagtgctaag gccctccagg taccatctga gtttccctgg tttcattaat ctatgagaac cctctctctg tacaggtgtg tgtcttaaca ttcccttgat ctatgtcctg gaaatgcgcc atatgcaaaa attatccact attttttaga gagccttcct tgttgcagtc atcagtagtt aaattgttgg attagcacat gcacttagag tgagtcattt acagataata gtcgaacatt actagttact gttgtctgat cacatttcac cataatttaa gtttgtctat ttgcgtgtgt ttcacacagt ctgctgtgtg ccataaccaa ttacatgtct ctcatctttt tcagaccctc caaggatcag tgagacagct cccgacttcc ctggtcctct aaaaetcaat acageataat caggcctcgt gcaggaacca gctcatccag aacctgcagc tgcctagaac nnnnnnnnnn ggcaggtctt gtatgtctca ggcctggggt tctgctttag tgagagttgt tatgtcaaca ttgttttgag caggctggcc ttaaaggcat gcattttaga aatcaccatg gcttacaatc cagcttagtc tagaactaga tattttaaat atgtattctt aatattttca tgagcagtac ttctgtttca gttccaacac ggcacagaag atatcttatt ttcccatctc cgtggttctg agccttgctc taccagataa gaagtacgaa agggacactt tgtcacctat aataggtgac aataattaga ctgccggagg atttttttct gagaatgcaa tgcctgcacg gttccagaag aagctctgat ggattccctg ggattgtctg ttcacatgat tctgataagc cgtttcccac ccagattatt gcctttctag tacaaagacc gatgaacctg tgttttctgc ttccccgcgt atcagttagc cccaggtcca gctgcctgtt 56100 56160 56220 56280 56340 56400 56460 56520 56580 56640 56700 56760 56820 56880 56940 57000 57060 57120 57180 57240 57300 57360 57420 57480 57540 5760057660 57720 57780 57840 57900 57960 58020 58080 58140 58200 58260 58320 58380 58440 58500 58560 58620 58680 58740 58800 58860 58920 58980 59040 59100 59160 5922059280 59340 59400 59460 59520 59580 59640 59700 59760 59820 59880 250ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ttttgggggg tttttttggt ctctcttccc agcctctcaa ctttgctttt tttaaaatag agccgtgcac atggtatgag atcactgcct agaggcccct acaaaagagg ttgtctgagg ttctctgaga tttcagagca cctgagactg cagagcagtt ggggttttgc acacacttaa tcgttctagt agccaaccaa gggagataat cttaggagtg aaagcacccc actggtaatc tttgagtggc acacagacat tggggaccag agtttgcgat agccatgact cagatgggct acaaggacgg gacaaatgtc aacgagagca tcattaccaa gtcagcctcc tgaaccactc gccaccgtcc gggcagcaca gagccagoct ttctttccac ggacaggaat cagcagatat aagggcaatg catccttggg tgagggcagt gagccatatc ggagcacttt cttggcttct cccgtgtttt gttgtttttt ggctagtgtc tatcactgag gactaggcca gcccctcggt ggtaatctct ctccagggcc ctgagttctc agtacttctt gcagctgcag ctcccagatg gtaaatctct gctgttccca accattcctg cttcccttct acaggttgta tttcctaata ggaccaaaaa aaaaaaaaaa aaagttgtgc atcaggccta gaagaaggat ctcaagtcgg tccaaggagc tatttcagag gttcaattcc atctctctgt atccgaccca catagttttc catgagagca gacccttggg cattcatgcc ceaatgcaaa agtaaatgga attggctgtg ccagcatgtt ttgttttgtt tgccctctgc tacctctcoc gtgctccctc gatcotgctc aacctagagt tcacttcaga ttotcaaatg cagtgatatt agatgattat cctttgagcc atctagaatt tattctaaag nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tgccttaaga gttctttgtt ggagttctgg ctgttgtttt gtgtgtatgc gcgcgtgotc tgtaggtcct ggggatcaga tacaggcccc ccatggacaa ctcacacctg tgaccctacc aagccagcct ggactacaca cccgttttaa aacactgggc agcttcatta acggcctagt tttattactt tttctctgga acagtggctg ctgccaaagg tgtctgtcat etaattctag caatgtacat aaaataataa tttgtttaag ccaagatcag atgttagaat tacaagcatg agctttgcca tagcaacaga gaactcacat atgtgtgaat ttcttccttc cttgcagttg cataagacta ccttcaataa gtgactacct tcaataaaac tccaaaaatt ttagacaaag ggCgcgtaag taaataaact agagcagttg aaccaaagca ctatgcttct gcgtcctaca cctttttgat tatttttttt aatggttagg cttcggtgtg gagteatgtt ceatctgatt tcaggcccag ctgctcagtt ctgacgcaca tttccttctg cagcaggcag atacgccttg ctgcaggcce aacaccagtg gaggatcgca aaaggacagg taccctgctg tgcctcacac gggcccagtg cctctactca ccaataaaaa aggtcttctg cctccatgcc ttgtagacag ttcttcctgc cccagcagct ctgagatgat agggcagagt ccaggacccc aacccagcac agagtaggca ttgactctct· tcacgagagc cggatgggcg tgactgccgc tgtggggcct' ggaagccttc tgttgtaaga ggggcagggc tccagctaaa tgtaactcct ccctacatgt ttttccctat aagtgacaca aaaaaagccc tagaaattta gcacttgggt actggtaacc aggccagtct caagtgacac atggtttaat ctgggçaccc gctggcctca tcagacacac cctcagcctt tgacccagag tgctactgcc aggtaatggt atggtctcca caccagagca ttgaaaattg taaagccaag ttgtgtttta ggcagcgtct aggtgtgcca ccatgctggg actcttgaga cagtcttcct gcccaggctg gcctcaaact tacaggccta cacctggctt atatctctct tctgcttctt ctgactggcc tcagaattgc nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnaca tatgggaatt tatgggaatg ttaatcttta ttcatcttgc aacttgcaaa attgcaaaat ctctgttagg cttggtggta ctttttcttt gaaaacctgt accaeteatg aggaagaggt gtgagtaaag gctatctata aaggtgaaac aaaagtcaat tatctttaaa actgtatgca acatttaaaa gtactttagg actggagttc actcccaagc gggatctgac accctcacag ttaaaaaaat gaaataaaat ttatatggcc caggctgagc catccctcag catacctttc aatctaacct aactaagcat ggaagttcat agagaccggc tcgtgctagc tgactgtact aacatgcaca gacagtttgc atggacagac ggtttgctta ggtaggatga agaaggctgc gagctacact gacaggatgc cctagacttc aaacatcgtg agtattatga aactgtct&g ataaattcta gtcttggggt tgotcattca ctttgcttcc tctgtcggat ccggctgcag catcttctgg ggaatagatg ttcttgcact tccagggtct ccacaggcat cttccctgtt tgtccttcac tggcactgtc agattctgca ctgctatggt ctcacatgaa aaggataagg tcctctgagt otttcctgga gctgtaataa aaaagcccgt cctatcctga aaatgagcga tggaaacgta tccactttca acccaacctc atataggcta caccatgcca gtcacgtgat tggtgtgact aggaactgtg ttgctgagag gcagcagagg gtcacgctga gacactgaga cttgcagagc gctcatgcag ggttgtcagt cgccaggaga cgcccggtcc tgcagaaaac aaatcttaaa ttacacaaag cttgctcaaa taagtcatca ctagcactca ggaggctgag cccatctaag agatcaccat agattgtgga ttttctgtct tctgtagtaa ctgtgggaaa ggaagagcca cagtggagag gtagacactg gagtcttcaa tggcattctc attiagaaata ggtcaagaat gaagccttcc ctctgtgtag ccttggctcc cctaagcgcc ctgtgcatta tctactctgt atccccagat Cgagatcctc gtgtcccagc tccctgatag attcctagta cctctcttcc tgcagggttg catccttotg cctttagnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tagtgtcaac tttcaaattc ttccacagaa cccatccagc gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt tcagtctcct ctttccaccc ggtgctttac tgagccatct ttctggcttg ggtgtgatag aggaggacta acagaattgg tactcaccac atggcaagac taatttcaca taaagtcaat ggttagtact tggtttcaat ggctggagag teagttaaga acccaggtgg caatcacaac actcacaggc agtggaacac accaggcaag gtggcacacg 59940 60000 60060 60120 60180 60240 60300 60360 60420 60480 60540 60600 60660 60720 60780 60840 60900 60960 61020 61080 61140 61200 61260 61320 61380 61440 61500 61560 61620 61680 61740 61800 61860 61920 61980 62040 62100 62160 62220 62280 62340 62400 62460 62520 62580 62640 62700 62760 62820 62880 62940 63000 63060 63120 63180 63240 63300 63360 63420 63480 63540 63600 63660 63720 251

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT cctttaaccc cagcactcag gaggcagagg caggcagatt tctgaattcg aaggcagcct 63780 ggtctacaga gtgagttcca ggacagccag ggctatacag agaaaccccg tctcaaaaaa 63940 aaaaaaaaaa aaggacttta aattgggctg gagagatgga ttaaaagcat tggctgctct 63900 tcccagaggt cctgggttca attcccagca ctcaaatggt ggctcacaac tgtctatatc 63960 aacgcaatct aacaccctct tcaggcatgc aggttacatg tagacaaaac atccatatgc 64020 ataaaataca taagtaaatg agtcttttaa tgtatactag aagctgggtg gtggtgcatg 64080 cctttaatcc cagcacttgg gaggcagagg caggtggatc tctgagttgg aggccagcct 64140 ggtctgagta aatagagcct tgtacttcta cttatcacta cagttacatt ttataacttt 64200 gggccctagt gcttccattt tccactgttt gcttaaccac tggggcctga agcttttgtg 64260 ctgacacttt tgttcgctaa tcatcaggca accaatggtc tctacactcc atcaccatca 64320 acacaaacaa aacaaaacac aacactacgg atcctggcat ggtggaacat ctttagcccc 64380 agtacgtggg cttgagttca aggccggcct ggtctacata gcaagttcta ggatagtagg 64440 gatagtcttt aaaacaaaac actattttat ttatgaacaa aacatgtaaa gaaagaaaaa 64500 aaactgcaaa tttatctatg aatgaagtct aagtaatact tcaatattgg aaatagcttt 64560 ctaaaatatt tttatttaaa gaaaactcag caaattattc aaacaacctt ataaacgttc 64620 gttataaaag taaagaatta tttgcaattg ccttaagggt ccaaggtggc agcctcttaa 64680 aattcagaac aatccaagct tcacattcca gttcaacatt tctacagccc taacgtafctc 64740 aaatacctcc attctgacaa ctgtttcccc tcttcttttc ttctaagctg cttagatgtc 64800 tgtcccaggc ttttcatgat tttagtcatt cacacaacta gcaaacatta tctagggact 64860 aaaacttgcc agatactggg atatcaccct aaagggggac tgaaagtagc tgcaggctac 64920 agtctctaca atctcctgaa tgaaatacaa agtagctaat atttaccaaa taaacatgta 64980 cacctgtgat gattgctagc tgtactagca gaagctaaac actaaatcta gaaactcagt 65040 cctccaacta gccccttgct cggcttcagc ctcattttta caaacaaggg aaagagtttg 65100 gaatgttgcc caaagccata cataagtgaa caaaaaggag ttggagtctc caaatgcatg 65160 gatttgggct agttactttg ccaaccaact cagtaacaac tgagctgaac aggaacactg 65220 tggtagcaaa agaaactgga actatcaatg gcctctagag caaaaatata tttaaaaaga 65280 aaaaaacaaa caaggcctgg caaggagact gtgagaagag tgtgctgact gaaattgact 65340 agttcagcca acaaaagact attccagggc tggtgagatg gctcagtggg taagagcacc 65400 cgactgctct tccgaaggtc aggagttcaa atcccagcaá ccacatggtg gctcacaacc 65460 atccgtaaca agatctgact ccctcttctg gagcgtatga agacagctac agtgtactta 65520 catataatca ataaataaat ctttaaaaaa aaaaaagact attccagtgg ggatggaaaa 65580 gttaagtgtg gagttaaaat atacttcaac tggtgatgga ctaggtgtcc agagtcgggc 65640 aaaaggatgc tctgtggtag aggtgcctgc tgtgtaagcc cagctacctg agctcaatcc 65700 acagaatcca cagcggagtg ggaagagaaa caacgtccca gagttgtcct ctggcatccg 65760 acgcacattc gccatcccca agatgtcata catatgtgta catactacac actggcgcac 65820 gcgcacacac actctttttt aaaattcaga cttagaggga cataaaggat ttgctctgat 6S880 atatgttcaa ttgaaaatga ctttgaagat agagggcaga tcgaaggaag ctcagcagga 65940 aagaattaat aacatgcagg tgaagggcta taaactagtc tgcagagggc cttggctcga 66000 caaaaaaatc tatggggttt gccggtaaaa taaggaaaaa gttgtcaaca tgaaacacag 66060 aacactagca agagaggagt gttagcagaa agaagccaac aagctcaaac aattaggtcg 66120 gctgaaaaat tttaaaatgt cttctgattt ggctactggg aagccactgg tgacttcggt 66180 cagcgttttc tctctcgtga ccagagagat gtctagtagc aataatgagt taggaggatg 66240 taaaagaagt aaaacagccg aaaacaagtc caaaaagttt ggggtgatgg agaaagggag 66300 gaaacagagg ccgcegaaga tagacagcgg catgtttatt tgtcttgttt tcttagatgt 66360 aaacaaacta aaaaaactcg tgagttcttc tgccagtacc gggttgcctc cagcatcctc 66420 tgatggtctt agagaccccg ggatgctccc ccgcggccgt ataatttcct ccctgacgct 66480 ctcccgatcg acagcggctc cctccccggg tcctctttgc accgctccaa ggccgcgctg 66540 ctagggccat cgagcccgct cagggtcgtc tccttacctc gatggccccc tcgctcaggt 66600 gtcccaccat ggctgcaccg ctaactcccg cgctcgcgct cttgcaccgc ctgagcttct 66660 ctgccggggt cccgcgggct gctcaacgat tggctagagc aactgtgcgt gccgatccgc 66720 ceecagcgtg agcgcggtgc gaggggcggg cctagacgcc gatagccacc gcattggcta 66780 ccgcgcggca ggcagagcac gbgactcttc cgaggccggg ttcgaggcct agtggcggga 66840 tggcgggacg tgagggcggg gcgctgggtc gcagtgcgcc tgtgtcagcg cggtgctact 66900 gagttgttcc cccgccagct gtcggaactt tgcccgccca gtcctttggc ggacagacag 66960 aatggcaacc cagggaacag tcggagctct cccctggtaa ctgctgctaa atatagtcaa 67020 agcagtgacc tgggtacttc ttcacgcagt gcgtgcccgg cgccggtgcc aggcccagag 67080 cttggcactg tgggataaac aaggtaaatc agactcagtc tccgccctct tgagttccac 67140 ctgagagttg tggccgcaag gaacccagcc tcaaggatgg tagacgcgat atgggccaca 67200 catgtggagc tccagagtgg gggtcaaaaa tcaatcaggc tttcgagagg cgatgcggtt 67260 tgaactgagt taaagtgtgt gtagaaattt gtcaggtgga ttccagtgag gatagtgatg 67320 ttcctaaaag cccaaatggc ctatgcaaaa gtattggaga gcctggcgtg ctggctggct 67380 ctgatctgtt tgtaatccca gcctttggga tgtagaagca gcaaaagttc aaggtcaccc 67440 ttaacaccgt tgagttcgag gtcaacctga actaaatgag accctgaaaa atcaaaattt 67500 gggacccagg cgtggtggca ttcgaggtaa aagcaggcag atctctgagt tcgaagccag 67560 252 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ccaggctaac ataagatccg gtetcaaaaa aaaaaagtaa taaaaataaa aagggagaga 67620 ggctatatga actgaaagaa agacctggag atcaaaacag aaaactgagc cgtctaagaa 67680 atgaaaatat ttaacttcat agttgctgga gtaagaagtc tggaaaactt tgggcaacta 67740 aggtaaacag gtctagaaag actggaatag tagccatcta ctggtatttt gatctctgtt - 67800 tgtacaacca caacctacta tagtttctca aacagttcca aagaatatgt ctgggtgaat 67860 tggtaccaca ccacagatta actctccttc agcatatcaa cagctataga aaaccccaga 67920 agaaatgatt ttggttgcgt gtcacttggt aggatgaaat ctcgattttc tagaactatg 67980 cattaataga aagctgaatc ttcatgttct gactttacag agctgcggca gcatggatct 68040 accggtggat gaatggaagt cctacctact taagaagtgg gcttcactcc cgaagtctgt 68100 gcaggacaca atttctacag cagagacttt gagcgacatc ttccttccfct cttcttccct 68160 tcttcagtaa gtgaatggaa acttcaggga aattttggtc tggaaaatgt tctgccttgt 68220 catttggtct gaatatctct tttttatagg agagagtagc tttatattct ttatagtatg 68280 gggcatttag cagttactgt tggttttcac gtttctccct agtctgtgat tactagaatg 68340 ggtaggcact aactgctttc cCcttttggc atgtgttata cttaaggaat gtagtatctt 68400 gctgtcgtcc cagtgctgtc actcatagga tctggtgcag gttgtgtagc tgcccctaga 6B460 agctcattca gtcctaatgg ggagaaagaa ccctggcact tggttagttg agacccanaa 68520 cttctcaagt tctnmumnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn πηηηηηπηηπ 68580 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnntttagtt 68640 tccaagtgcc actttactgc aatgtgtcac cacatccaga gttctgtgtt tgtttatttg 68700 tctgtttttg agacagggtt tctctgtgta gccctggctg tcctggaact cactctgtag 68760 accaggctac cctcaaattc actgagatct gcctgcctct gcctccagag tgctgctgta 68820 cactaccacc acccatccag ctttctatat tggttttcct atggcgtttt aaaatagcca 68880 ttatacgtgt gtttatcatc taaagtcctg gtcccaaaag gagatgagag gggctgctaa 68940 ggtgaaaagg attacaaacg cttafccaatt ctgttcaaaa attaaacctc agagtgggat 69000 tagctgcttc tttcattaga attgctatca gaattcactc aggccttgtt tgcgtgtgtt 69060 attgaagaag tctcttcctc atcaggtcag tgactcctta gctcaagtac atgcaatatg 69120 cagtattgat aaefcgttctc gcttaggaat aaaaatagaa ctgacttcca cagggaaatg 69180 atgtgctgag ctgtagcaac gaatcttgca caaactctgt cagcagggac cagctagtct 69240 ctcgcctgca ggaccttcag caacaggtct gcatggccca gaagcttctc cgaaccggta 69300 aaccaggtga gattggctcc ctcgccctag gcctcagccc ttcccttgtt tattttggta 69360 tcaccttgcc ttactgagca gtcctcaata aatgactgag gacttgaatt taattatccc 69420 agcaccagcc acaagatggc tatgtaqgcc agtgagacca gactgtgacc agctgttact 69480 ctggtgccct tgaaagtctt cctgatggtt taagctgtgt ctgctgcgcc agatagttct 69540 agcagctcga gcaccagaaa ggctgtctga cttccatggg ctttgtgtgg ctccagaggt 69600 ccaatgccat catctgattc ccagcttaag gacctaagct ccgagaaggt tgctctgccc 69660 tcagcagcag cagcaagtcc tgagtgctgc ctgggctcgt ggtgtgactc aggagtagag 69720 ctcggtagct agcctgagct gagagctgag agaaagaaag gactcctctc ttttcagaaa 69780 gggatttgca gaactcgatg ttagaccctg acatggtagg aatctgtttt gactattcta 69840 gcctagattc tgaagttgac ctttagccta gagtcaagaa aactaatgat tacaggagga 69900 atgtagagtt ggttgttaaa tgttggttgg aaaatggatg ttagaagccc agggtaaatg 69960 tgaggaagcc tcatctaaca cctcttttac tgaaagagaa aacataagca accaacagct 70020 tccctggaat gcccggctgt tgactccgtg agataaagag gcattttcac tttgacctaa 70080 ccgatagaga ccttgcaacg tggtctctcg tgtccaggac tagatctgta tctgttgtga 70140 ggcatttttc ctttgaatcc atagagcaag ccattcagca gttgttgcgg tgccgggagg 70200 ctgctgagag cttcttgtca gcagagcaca ccgtactggg ggaaattgaa gatggcctgg 70260 cccaggccca tgctacctta ggtatgctac cttaggtata gccggagttc tccttccctg 70320 ccgtgtgttc agtgcggccc ttgccttgte tgtttggttc tctcttgcca tctgaattga 70380 cgctcttctc octcccattc tgcattcctt gcccccagag ccttaggcta atggtgtttc 70440 ttttccggaa tgagacattt ctcttctcac agggaactgg ctaaagtccg ctgcccatgt 70500 acagaagagt ctccaggtgg ttgaaactcg ccatgggcca tccagtgttg aaattggcca 70560 tgagctcttc aaactggccc aagtcctatt caatgggtag gcctttcttt ttcctagtgt 70620 ttggccaggg cacacagtgc totgtgtttt cctaggtgct tctgtgtatg gctttttgct 70680 acagtgcttt aaagcatgtt gaaactcttt tatttcctct ttaggacaga tatttgccct 70740 ctgcttcact gatagacttt aagctttgaa ttccttcctg aggatgtgga gaaagccatt 70800 aggtctgcat ggagcttccc agggaggatt tggaggcagc ctcacccgcc tctagcattc 70860 ctgtctgctt aatcacacct cccttggctg cctcagtccc tgctctctca actccagggc 70920 tcggcccttt ccctggtttg cctcttattc cttttaaagc agtggttttc aactagaagg 70980 gattgcaaat ggcatttggc agtgtttaga gacagttttg attgttatgg ctgccagcat 71040 ctagtaaagg ctaaacctac agtgcacagg accgcctcca cagtggagag acccaagtta 71100 gctatgtgaa ggctgagaat ccctgctttg gagattaaaa aaggaagctg agggaaccac 71160 tcagttggaa gcacccttgg tggcatgcac aaggccctgg ttctgtccct agctctgcac 71220 aaaaaataga atacaaggaa gagtaaccct aatgagctgg tccctcaccc agtgtgccac 71280 tgaggtcact tgaagggaag tctagcccca atttagtatt ttttgtggct gccatacctc 71340 cagccttgat caaatctcat ggtatacatt ggtaagaaaa agggtttgaa acatagacct 71400 253

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gatactcgga catggaaaca gtatgtttgg ggcaatatca gagagagggc atcagtcggg ctggataagc ttttataaat gctggttaag ccagagtcta tcacaaacat acacagtttt tgtctcttat ctatactttc agatggtaag gtgccccctg taagaccctg ggggatgcag aggagtccac tttcgttgag actaaggaag ggttggcagt gcctgaagct ctgagtgcca actgtggccc tgagagtgag gaggtccggg actcgtcatt cgtccctgtg gggcccttgg gagctctggt gatgactgag atgttctgtt ccttcccacc tgacctgagc ctagtgtctg cactcacctg ccatgctggc tgctgcttgc atgcccagaa aagactaaat ccagtatcta cgggcttggt ggcacacgcc tttaatccca caaggccagc ctggtctaca aagtgagttc tcttgaaaaa ccaaaaaaat aaaaaataaa aaagggttgt cactgatctg caggcagctc tctcactaaa cgatgaatct gtttccctgg gtgctgtgtt ccactccagt gagaacttca aatatatagc aagaaatcag tatgactgct atatcctgct tccttaaatt tttcattaag ataaatacgt cttactgttg gcagtttctt accagtgtcc taattcttac tcagtggctt agcactgatg caaggcaacc cCgtagcatg acctgaaagc agaccactct ggctgtttca gtctagcctc aaacaacatc ctcctgcctc ggccaccttg cccagcttga gactgcttct aagtccaggg cactccagga ggagccgtga atgagtctgt ctgcagggca ctccaggagg gggaagccgt gagtctgtct gcagggcact cactccaggg ggagccatga gtctgtctgc ctcattggta gactgtgagg ctacatctcc tgctgctcat ggtttccaac tgagacagag ggtagtaata gtccagacca caagggacag gtacattatt gctgatgacc agtttgtttg catacactct gctttttaga acttgctcat tgtcatggca ttacagtgag gaaataaaca agaagctggt gttaaaagac agtattcaaa gagtcfccctg ctgtctgtta atttaccctg tttggggtag agctttttca ggaaaaaagt tagtccaaac tcatgccttg tgttttattc gtgctcttcc tcaaaggata tatttaacgt aagctttttt tagatgcttt gtaagatggc ggaagtcctg ggtttgattc tcagcagcta tgatgccctc ttctggccta tgtgagcact caaagcactc atacataaaa ctaaattcaa cttgagaata cctgtgctta tattataatc ctattatctc agcactcaga agattgagac aaaacacctg tctcaaaagt aaaagggctg ctgcttctcc agagggcctc atttcagttc tgtaactcca ggtccatgag atccaacacc attatacaga gagagagaga gagagagaga nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ntctagagtg tttcaggttt ctctctatta tgctgcctgg aactttctat atccactact tctgectctc agtactggta ttcaagatct tagatttcca aagaagccgt aaaacagaaa gaaatcaggt acacttagag caagttgtca aaactttgct cttaattcta gggctgtagc caacttggtc gagcccttgc tggggtttga attgatttga acccagtaga aatgacatat tacaaggtgt ggccttgttg aggtctctct gctcaagctc tgcccagggt tcagagagag cgaaggacct gatagacgag ttagacacga gcattccaca gtgagcagct gttttgaatt tgcccaattt tgtcaggatc ctcaaatctg ctttgcagta tgcccgtgaa accctgaggg cagaggaact cagacccttt tggacccgac tttgtgttct ctgcacagaa ggaactgaca agcttccctt tctggcttca tctggaaggc agaaaggatc ctgttggtgc agctccggga aatgaggtcc tgcttactgg tgtagagcaa tcatcçtcac cctcaagaag ggcttggagc Cctcatcaga gaggacggga gcacagagag cacttgaaaa cagattgaga aagagctaac tgccctctga tggaaacccc aaggctgctt taaagggttg tcactgcagc gcactcggga ggcaggcgga tttctgagtt taggacagcc agggctacag agaaaccctg aataagtaaa aaataaataa ataaataaat atgctagcct aggcttttgg ctcgatttca aacattccta tggtttctag tagtaatgaa attcttagtc ttgtattata aCtgaaaaat tacctcaaga gacatacaat tccacttaca actggtgata tataatttgt gaatggagaa cctgggatgg caactctgta ttggtttcct toattgagtg ttcttggcac tcactgtcca aettcatagc acaggcctcc ttgttagcac cttgcagaca gaatcttact ctgtaagcca agccttccaa' gttctaggtt tataggaaaa tactgccatg tctcttcagg ctcacacatg gtctgtctgc agggcactcc agggggagcc agccgtgagt ctgtctgcag ggcactccag ccagggggag ccatgagtct gtctgcaggg aaggcattcc aagagcagcc atgggcgtca agatgccccg agtgctgtgg ttgtgagcac ggaaggactt tgcccctttc cctaaggatg atagctatgg ggttttctga ctcatcctta gatgagttag tgggaaagaa gacccaagtc cctagccatg cccaaggagc agccgttgac gtcctgaagg tgcctggcag cagcttttca catctgcgga ctgggaactg ggcagcattt acaaggaggt gacttgaaag gtttgttttg ttagtcctac agacaactct atagttattc ctaaaagccc tgtcacactt tgtaaaatag tttatatatc aggccttatt ctgtgcatgg tcagtggtta agagcatgta ctgctcttct acaccagctg ttattccagt tcctgggatc gcatgtgcgt agtgcacaga caaatgcagg aaaactcttt cattgtctca tgtgacctag tagtatgagc cagccacggt agcaacacac tagatggtca agagctagag tctgggttac aaaaagtgtc tcagcagcta agagcacaca ctaataccca caccgagtga ctcaaccacc tctggtcgtc tgcataagct cctacactca gnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tttttgtttt tttttttttt gagacaaggt gtagaccagg ctggactcaa acttatagtg ttgaaggcat gtgtcaccac accccactac agcctagaaa aggttaataa gtactgattt ctgtagaatg tcagcatgtg acatttgtga aagagagaag ctgtcaaaag acttgaactg atgaagctgt gtgtttactc cccagcactg ttcgtatatt tgaatgttta cctcatgggg gaggaattgt caatttgggg gtgagctttg agaaagggag cctcctcctg gctgtctaca 71460 71520 71580 71640 71700 71760 71820 71880 71940 72000 72060 72120 72180 72240 72300 72360 72420 72480 72540 72600 72660 72720 72780 72840 72900 72960 73020 73080 73140 73200 73260 73320 73380 73440 73500 73560 73620 73680 73740 73800 73860 73920 73980 74040 74100 74160 74220 74280 74340 74400 74460 74520 74580 74640 74700 74760 74820 74880 74940 75000 75060 75120 75180 75240 254 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gaggacatag tctcctggct gccttcagat caagatgtag aactcttggc tcctccagca 75300 ccaagtctgc ctgcacaatg ccatgcttcc taccatgatg ataatgaact gaaectctga 75350 aactgtaagc cagccccaat taaatgtttg tctttataag agttgccttg gtcatggtgt 75420 ctcttcataa caataaaagc ctaactaaaa cacattcctg ctgggcagtg gtggtgcacg 75480 cctttaatcc cagcacttgg gaggcagagg caggaggatt tctgagttcg aggccagcct 75540 ggtctacaga gtgagttcca gaacagccag ggctacacag agaaaccctg tctcaaaaaa 75500 aaaacaaaaa caaacaagca aacaaatgcc agcatttggg aggtagagtt aagaagattg 75560 ggagtacaaa gtcgtctcag ctagtatgtt tgaggccagc atggaccaca tgagacgttc 75720 tcaaaacgaa agaaacgaat gaatagataa acatttgagt gtccagtttt ttcctttctt 75780 tcttgctttg tttttggcgg tgctgaggat taaacccagg accttgttca tactaggcaa 75840 gcattctcea ctgaggaaca cectggcgag tgcctagtct gtctgtctge etgcctgcct 75900 gcctgcctgc otgcttgtta tgtgtatgag tggtaacctg catgtctgtc tgtataccac 75960 agacatgcct ggtatctgca gaggccagaa gaggatgttç gatcgcctgg aactgggatt 76020 acaaatggtt gtaagctgcc atgtaggtat tcagaattga acctggtgct ctgaaagagc 76080 agccagtgct cttgttgttg gttttattgg gggcaggagg tagttatttg gttggttggt 76140 tggttggttg gttggttggt tttcttgaga cagggtttct ctatgtagcc ttggctgtcc 76200 tggaacttgc tctgtaggct caaactcaga gatctgectg cecctgcctc ccgagtgetg 76260 ggataaagtc atgtgccacc aactccagac aagcagccag tactcttaac cactgagcca 76320 tcattccagc ccttctttgt gttttgagat ggtcacaaag tacaactcag actgagctct 76380 tgatcaccct ccctcagcct cctgactgct gggggttaca ggtgtgtcac tgtcctcaat 76440 tetgagtgtc agatcttgaa aacccattct cgtgaccttg atccttaaaa caaaccctgg 76500 gagaatgagt tctgataact atttctcact cctcttcaag aaaaggaaag ccagagaaag 76560 gggggggggc aagccccaga aacattgata acttgcccaa agttacacag caaaattcag 76620 acagcctgca catctcagtg gccatctgtg ccatatccac cctgcccttc tctgacctcc 76680 ccacctccat ccctacagac cttgcagttg agatcagagt ccaagccgta tcgtaagatg 76740 gccttaggat ctgacatcat ggggactctc acggtcctgt cctcgtccaa atgaaaatcc 76800 tggagggtcg tctttctcga gtcaaacttg gttacccact gccctggaag gaaacagatg 76860 gagcatcctg agccactgtc cccagaaagg ccacaggtcc acgctgtgcg tccactggcc 76920 aaagcaacct gagctgtcag cagcaagaac acaggagccg ctgggtccca gcatgtgtgg 76980 cacagaccat aggctccatg caccacgggt tctggctatc ctcctgtagt aaactcagaa 77040 ataagtgggt gttctctctc tgacttggat caccacgctc cttctgttta aagtggcctt 77100 taatatgctg gtgtgtggta cgtgcctgot ctcctgtccc ctggggactt ggagtaggaa 77160 gccccagggc tttcctctaa gttaggatcc actcttgcta ctactccata agatggtcac 77220 aaagcaacgt aaaatggaaa ttaatcaaac cattcctgcc acaagaataa aacagatctc 77280 aggggaggcc tgtggaaggg tctcctgagg ccttaccact gtctagaagg aagttgacag 77340 cagttcttga gcaggggtgc gactccagga gttgggggct gctctgagag caggacagca 77400 tgtattgtag agtgtctggg agggagctgt gttatcctta ccgtgaagat gaggacacgg 77460 gctcatgggg gcagagccag gattaaacct ggtctgattc aaaaagccag agatctgtgc 77520 ccagccccac gcagccattt cactggtcaa ctaattcaga aacacttggt ctgatatgct 77580 catatgctac aagcactgtg gccttcagat ctccctctgg cctggtacct gcattcaggt 77640 tcaccaccat caccacacac acacacacac acacacacac acactcggcc agagacaagt 77700 ggggaagccc tcacccttga agtaagccac gccaaggaga aggatgctga gggcactggg 77760 catttccctc gtggaccggg caatcttccc tttcatctgg gcctgcaccc agttgttaat 77820 ctcctgaagg tctactcgag ggttgcccgt gaggatccgg ggcctggtcc cataggactt 77800 ctccagaggg gcaacaaagc tggatttgac tcgaagttct tgagaggaaa cagatcaaag 77940 atgagagctg aatcagcacc ctcactttga aagcatgcca gaccccagct tcctgctcag 78000 catcttcctt tgacttgctg gggcatctgc cggcttgccc agaccctggc tagggaacag 78060 tggattccac cgtttgcatt ccccgtccca ggccctcctg ctgtctccca gagcccactt 78120 cctctttctg ttcctctgtg gtctcactgg ctctttcctg cccaccagtg ccaggcctcg 78180 cctgageaca eacagcctat tgtttagaca tcatggaagc atacagacaa cccaggccaa 78240 tgaagcaact tcacgecagg cataatgggg cgtgcctgcc cttcagaagc agaggcagct 78300 ttatgagttg ggggaccagc tgagactcta tagactttga gaggtggggt gggggtgggg 78360 ctactgactc ctctcaaaca caattctgga agcactcttg aggttcttct caggggcagt 78420 aacagaggca aggagctcct tgtaggtgct gtggatgtca gggttggtga tcaggtcgta 78480 gtagagagcc cggtgaatga cagactctgt tcgatgttca gctcctgcca gagagaaaag 78540 gatgccaagc ttcataactg cccgtgaggc ccgcatcagg atagggacgt tagacatcaa 78600 tccttttgtc ctctgagagc ccgaggaggc cgatattgca gatgttttag ctggacaaga 78650 tcttcagggc gtggaaagaa ataatgaccg ccttgctagg aagagctcta agacagggca 78720 aggttatcag agctacagag agaagagtgg gatgtggtcc tgaagttctc ecatogtaac 78780 ctaccctgtt ctgaggagga gccagctctg ctcacggcag ctgtacccct agaacctggt 78840 taaatgacta aaacaegata ggaggccact taaggaacca aggtcgagtg ccacttacaa 78900 agtggtaggg attgtgtgtg tggcccccac cgcccctttc ctgttcctct gacggcggca 78960 gcatggaaac tctgagtggg ggaaattcag gtccaectgc agccttcttc agttgacact 79020 cacccagaga aagggcagag agggccgtgg ccacgctgag tggagacagc aggacgttgc 79080 255 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ccgttgggct ggcactggat ctgccagctt gttcacaggg tgctgtccgg gactggggag agtacatcac ctcctggttg gaatgagtgt gtgctctctg gcaacacaaa agggcttgcc tttaaaataa aacttgtagg gttcaaggac ctgggttcag acactgggga ggcagagatg tcagcgtatt ccatctcagt ttgactacta gcctactctg cacccctctc tgtccccttc aaacccaccc tcagaccagt gttctgctgt gacgccctcc gaggaatttg tcgttttctg gcttttttgt tttgttccca aatgettggc cacccagctg tttttagttt tctgtttggt gacaggattt cgctatgtga cttagattca gagatccacc ctgtacctac caacctcaaa gtaacatgtg tgagggcctg gaataagtga ctggctagtg acttaaagcc cacaatccag cccaccccta cttcctccgt tattcttgtc tcgatgttaa tggatccagg gctgcctccc acctcagagc tgctggggac aggagtagca ccagggcctg ccctcaccca caccctcccc gcagagtgag cccttcccct tcttccgtcc ctgacctgcc atcaggagac ccaccttccc tcaggcccca agacaatgct cggccagctc ctttggtagg atagacttac agaacatctg ctatgttaaa gacacacaca tagccttgaa gttgcagcta tgagccatca tgcctgactt gggtatgaac cagggccaca nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnntctta tttttagctt tgtgtcttcc atttgcttct gagggggtag gactcaagaa taaggaagtt acaggtgggc gtgagatggt gcaagatttg tctgtgggta aggatgacca tagtggggcg gagccccaga caaggggctc ggagactagt actcagtagc cgaacttgat acgccatccg ttccatggct gccgagagat aggggcgtgg aggccaggaa gccccaggca gggccccttc gaggtcccgg ctgacctgcc cagaccatgg gtttcgggga ctgcactggg ctggatgtgg cçgaacattt gctggtcggg tgcggaactt ggcctggaag actgaagttg gggagtaccc agtgggagaa ttctccaggc tgtggcagtt tgggcacggg tcctagtagc aaggccttgt tggaccggga tgctggaggt ttgctgtgag ctcaggcggt acagatcgta accttgaaga aggggtcctc ccctgggtta gaatacaagg ggttggtcct ctagtccctg actccacaac ctgtgtgctg agacctgaac tgtggtctga gctggggaga tagcacagta tccccagagc tgggcacggg ggcaggtcct ggggctcatt gaggggtcct gtttcagagg tgtctgtttc tgtctgtctg cctctgcagg gaacttcctc cttccctatt cagcttgctg ctgtctttcc tgacaagcca acctgttttc agtgtcagcc gggctttgga tcaaagctgg tacctcccgt ccctgttgct ttttggtttt gattttttgt ctctagctgt cctgggactc tgcctctgcc tcctaagtgc ggaagtgtcc atggatagag ggcttcaccc ccaacagaga gcaagacagt attgtctaag gtctaatatg cccatctgcc atagtggcag ctcctctgga agtaaccaag gcctagaaga tgcactgtct cttctgctgt gttctggctg ctgccgtgcc catcccggaa ctacaagaga tgccactgca cattgcacac ccctccagct ctcagcccca cctgcacttc tccttgagct atctaagctc cagcacaggg ctagcacaaa cacacaccaa atttggaacc ctgtctcagg gtctggtcct gctatccacc cactttcttc taggtaggtt ccctacttca tttgcctcct gactcccttc ttctatttca ctgccnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gtttgttttt cttacttgag tctacctaat aaagtttctt gggattctcc cataagctgt agagctcggc tctgcctgac ggccctcagg agttggctct gtaggtgaga gatgagggaa ctagtcaggt gggggtaaac ggtgttggag aagacctcta gccagaaagc cccaaactgc tcacccgagg tggccccatg acaagccagg aaaagttaca cagcagggtg gaaaagctag gcaccgggtg ccaggatcag catcctgggg actccttgtg ggctgcagct gctgcccacc tcgtttcgct gatacacagc ggggactgac aaagcactga gaaccttttg gaatggaact tggatctagg tctgggagaa tcctcaaatg gtcaccgacc agtgtcagtg ggtgagtgta attctaggtt cctcccccat gaattaagga cctgagaaaa gccgaagttg gagacagctg ctcctccacg ggctcgcccg accagtaggg aggcacagtg gggccatgag tctgaggtca ggaggtgggg agtgggaagg gaacctgaag cctggcccac gataaagtac cagcatgcaa ggtgcatgct tataatccca ggccaatcag cctgaactaa gcctgaggàa tgactctggg tctgtctgtc tgtctgtctc accaccacca acccccaaag gctggtccta gtctgcctag tcccctctga ctagacccga tcttccttat gagactttct gctcttacat acgttaggca tttcggtttg gaggactttt tgtttgtttg tttgttttga actatgtaga ccaggctgge tgggattttt agattttaat ttcagtacta catcatgtgt agggggagtt agtaggtgag gtcactaagc cttaagccac ttgtccttgt gtgacatgac tcctgaaagg agagggaaga gtgaaggcca aagcccaccc cccacctacc caccctactg cgagcagggc tccagtccag aacaagagag caaacgactc tgcacaggga caagagtcag agtggaccct tgacttgagg gtgcccccat gttggttcct aagacccagc agcaggctct ggcttttccg tggaggcaca atgggagcag agcccaggtc aatagttctc tgaccaaagc cttgtgtatg tagcccaggc gagtactaca atgccaggtg agagcaattc ttagttaaga nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn acctggggag gggaggtgta ggtgatgttt gggggggggg tccgtttggg tagtactatg tggcgtgctc tgaggtaaag gttggccctg taccttctgg ccagaacaga aggtgaaagt tagatgactt tctggaaccc atgtgttgta aggcctctga taaacccaag caggagcggg gctgcgccaa tcaatgagca gcacgctgga aagataatac atcccgattc tgccggaggg agaaactgac tgaaacctag gctggcgctt cettcacgge ccgaaatctg ttcgggaccg ctactctetg gagtaggggc ggggcggggg tggaaaagag ggtttgggtt gtggatgggt attgacctta gctctttgtc caattaatga tcacccaccg cagaaaaggc tgaatcggga ctttggaatg gagcagatgt gtgggacttg agatatctag 79140 79200 79250 79320 79380 79440 7950079550 79620 79680 79740 79800 79860 79920 79980 80040 80100 80160 80220 80280 80340 80400 80460 80520 80580 80640 80700 80760 80820 80880 80940 81000 81060 81120 B11BO 81240 81300 81360 81420 81480 81540 Θ1600 81660 81720 81780 81840 B1900 81960 82020 82080 B2140 82200 8226082320 82380 82440 82500 82560 82620 82680 82740 82800 82860 82920 256 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gctgtgcatc agctctgagc gaggagcctc cgotgcagat ggagttgata tgctgtggaa ctgtcaccat ttggcggtaa gactctgaag aactcaaggg cccaacctct ctcttcagtg ctgaaaacct atcctctcag acttggattg ctcctgggca ctgcccaagg agtttggttc aaaaaaaaaa aaagccagga atgaaagcta gtaagagaac ctctggtcca gggctgctca eaggattgga ggcagtccta aaaaatgctt aataaatact aatttttaaa aagctgatac catgcgtggg tgtccctagg ataaggagct ctgaaccttg aaccttgcct gcaggtagtg cactatgtgg gcttctctat ggtatccctg etacggaagc tactgctgct etcccataag tgggccagcc tggccaccct ggtcctcttc tggttgtccc ggcagcacta ccagctgtct ctggtcaccg tgggcagcat aagcatctcc ttgcagtctc agccctaccc gtttatcctc gttgccagga acacttccac tctcagtctg ccccagggag gtggggctgg gaagaggaga caaggactag actgtatcat cagagagaga gagagagaga gaacattgta tgagatctcc aactttaaaa gtcccacagt ctttacatat atctctttta aaattcaaag tctttttaca aacagtttct tccttcaaga gggaaaatat caatctccaa cogtccaatg tctgggatac cttgggtcac ttctccagcc aggccctttg tacctgtact ccactgctgc tgctgctctt aaacgctgca tgaccccttc agtcctgggc gtggcacatg ctgataatgc tagcacttgg ggccagcctg ggctacaaga gactctgttt agagaaagaa aaaactggac atgacagccg gttcaatgcc aagttggcag tgcctagttt tggctgactg aacaccttac ccagcaactt aggagcttcg ctgaggagag aacattgaac atgatttcat cagtctcttg tgaatgtgat ttatcctggt ctgcagtgtg gtgtggagtt ttaaggtttc tctggctctt ttctttcctc tctctggtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt cggggggtgg agggggctgg agagatggct aaggtcctga gttcaaatcc caacaaccac aatctgatgc cctcttctgg agtgtctgaa taaataaata ttaaaaaaaa aagaagttgg atatctctgg atccccetgc ctctacctct gcaccaggcc aggctagaac attctctgat gatcagaaaa cagacccagg gggccacaga caggcctgat aacctgcggt tttttgtttg gctggcctgq aattcacaga gatccacctg tcacaggtgt gtgccaccac acttggccta tggtactgag gatagaatag actctcacca catgggctct ccttccccaa aggaaaaata caaacccagg tcttgtgtga tggctcagca ctggtgataa cttatagcct tgttatgctc gtatgfcgtgc ccacacaaac acacaatcaa cccctttaat cccagcactt gggaggcaga ctggtctaca aagtgagttc caggacagcc taaccaaaaa aaaaccactt taaatattat ggtctgcaga ccaggctggc cttgaactca acattaaagg atgtcccacc actgcctggc tgttttgttt tgttttttct aaaaaatttt ggagactctg aagtcagggc cagccaggtc ccacaaagaa accctctctc aacaaacaaa gacacacact tgtaatctaa gcccttgaga tgtggtgcat toaagagcag cctgggtggg atagtcttct ccggtgcctt caggttattt ccagacattg gcccaggcct gggaccttct ggagaggcca ggtagtaagg gagcatgtcc ttctgtcctc tgacttttcc acaaagcccc agttggaggg aggttttgac tggctagcca tccccacaaa cctccagctg atcataaaaa gggtatgcta tgcaaatagt gtggcttggg tgccccctag ataagggtca gcagaaaggt gggtaatata aagtgaataa ataaaaaata ctggaaggat gaggcagaga gtagaaaaaa gggacttgtt gggcacaggt catgcaaagc agctgcctca goaccgctgt tgtgtctggc cttctggagc tgaactccat ctgtttgcat gcoceatcct tggccttcag agtaagcagt cgccttctgc ctctgggatg gatgagtctg cttgctctgg ttctgctttg tgtggctggg acagggatcc gaattctgac caaggatatc atgcacaagg aaaccaagac acgtgagcct aaaggtgtgg aagttttctc ttctgtcagc tggtagccca ctgcatagtc tactatgtag gagagagaga gagagagaga gagagagaga attacagtca ggaaatcagg agatctaaat tcttaaaatt tcaatctctt taaaatatcc attaaaagtc tcaactgtgg gctccactaa cagggcacag tcacaatcaa aagcaaaagt aactcacgat cttctgggct octccaaggg tagcacacgc gtcatcctct aggctccaga ggtggtcatc tcatggtact ggcatctcca cttcaagaga gaagactaga gcctggcaaa gaatgacaag cagaaggatc agaagtccaa caacaaacaa acaaacaaac aaaccaaaga gaacattatc tgacattcat aaggtcctga gataagggtc tagccactct ggtaatacca gctgatagac tctgccttcc agcaaaaggg cctattgtat atgaataaat tgctgtgcaa tgctttgagt catttttctt ggctccagtg gtggaagctt tgagttggga gggtttcctg ccggtttttg ttttgtttgc ctggtggggt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt tagaagttgg cagcggttaa gagcgccaac tgctcttcca atggtggctc acaaccatcc gtaacaaaaa aacagctaca gtgtgcttac atataataaa catggatgat gtagtgaaga ctggcattag tagacactgt gagtatggaa gtgtaccacc ctacaaatac ctagagtatt attectctat aatgtcttag taggtaaaaa cacttgcttt ttctgggggg cgggagaggc tggctggctg cctctgcctc ctgagtgtca ggtaccagga actgcctgag tttgagcatc agtactcaca gctcttctga cttccacatg tgccctgcag aatgtaagaa ttaaaaaaaa aaaaaaaaag tcaaagctac ctcccgccac agctgaccac tcctttgacc tccacgggca tgctgtacac gaaataaatg cagccaggcg aggtggcaca ggcaggtgga attctgagtt cgaggccaac agagctacac agagaaaccc tgtttcgaaa ttttattttg ttttgtttat cctggaactt cagagatcca actgcttctg cttcccaagc taaagattta ttttttcttt ctttttgttt tttaaaaaga accatccctc ctagcactca tactgagtga gctctagggc agccagggct caaaagagaa cagacccaac cagacctgag ggctgagaag ttcaaggcta gccacaagtg ctacagaaaa agaaagaggg agagagagaa 82980 83040 83100 83160 83220 83280 83340 83400 83460 83520 83580 83640 83700 83760 83820 838B0 83940 84000 84060 84120 84180 84240 84300 84360 84420 84480 84540 84600 84660 84720 84780 64840 84900 84960 85020 85080 85140 85200 85260 85320 85380 85440 85500 85560 85620 85680 85740 85800 85860 85920 85980 86040 86100 86160 86220 86280 86340 86400 86460 86520 86580 86640 86700 86760 257 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tggttaatga agatgactct ggaaaagtga aactcaagag aaagcccctc agatttgctt 86820 aagacgagtt gagggtggag aaccgccaaa gcggacgagc cagacagaga ctgccaacaa 86880 agttcaatcg gttcaggtac attacttcca aaacgccatt gccacatcag gatgcttcaa 86940 tcagccaaac caacgcagcg actattgact tctgcatttc agagacttcc gtctctgtcc 87000 agggcaatgt cactttagct ttcctttgca gaaaggaaaa gtccctgcct ctgatgtggt 87060 agatcctcac acaccttctg ccagatccag acactggtat gactcagcct cggggagctc 87120 tatctacaga gataagggta caaggcgtgt gtgtttaaag tatgtgttta aaagtacaaa 87180 gtgagagtcc ctggaaaggg ctccctgccc tcaccatcac cgaaagcaca aaccttaggg 87240 taatatctga cattcctgga aatgtatgta tgtattcatt atgtagccct gactgtcctg 87300 gaatggggta taaaccagga tggcttcaca tctcagagac ccatttgcct ctgcctccca 87360 agaactaaga ttagaggcat gcactaccat acttggctca tgatttactt aactttattt 87420 tatgttcacg aatgttagcc tgcatgtatg tgtgtgcacc atgtgcatgc ctggtgcccc 87480 agaggccaga agaaggtgtt ggttggattt cctggagatg aagtcccaaa caactgtaag 87540 cagtceaatg tgtgtgctgg agatgaaact tggttcatcc acaagagcag tatgtgctct 87600 taactgtgga ggcatatctc cagcctcaga tttcccagtt aatgtttgct ttcgcaccca 87660 ggcccatctg cgcatgcgct ggagacctcc tttaccgcct tgagcctcat tggccaattg 87720 tggctgggag acttgcagat cccaagtggt acaagagaag aataaactgg tgtgctatga 87780 actcacctct tctctgtagc cattggctga gcatactttg cctcaaccta ccgcccttcc 87840 ttcccctaat cctaaatctt tgccctctcc aaatgtgctc ctcccccgca gtaatccagt 87900 ggtcgctggg gctctagaga gatggggggg gggggagcaa cgggtacagc ttaaggcagc 87960 tgcagcagaa cttttttgct gtatattgag tcttaaaaat tcatataaac tttgtgttct 89020 gtttctaaat ataaccccat cCgtttcaac acaaaatgca acaacaaaat gtttcaaatt 88080 gctatttgga ataattaaaa aatttcaata cttgatttaa aaatgcttta actttttaaa 88140 taaattttaa atgttattat ttttaaaaag ttacaagttt aaaaaaaaga aagatagaaa 88200 tcacataatg aaattaacca tacgcaagtg aggctcggtg cactggtaca cagttacagt 88260 agccatttgg agtggaggcc atggcgcttc acattgaatt ttatactttc tttatagaat 88320 attttttatg cacctatcta ctactgataa caaaacaccc-atgagagagt tagaattaga 88380 catcaattag ctttgatcct ctgtcataac tcgtgtccac tccctgcctt agtcctacct 88440 catccctgtc ctcttttcta catcttatac tgaatccaca oactcagttg tttacacaaa 88500 cacatacatc acCgtccann nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 88560 nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnag 88620 tgcctggctc tgttttgctg ttgttgtttt tgtttgtgtg tgtgtttaga tttggtttgg 88680 tttggtttga ttttgttttt ttttagagaa tcttactatg tagctcaggc tgtccttgaa 88740 ctcacagaga tctcttgtct ctgccttooa agtgctgaga ttaaaggtat acaocacctt 88800 acctggcccc tttcatctat ctatctatct atctatctat ctatctatct atctatcatc 88860 tatctatcta tctaaaattt atctgtgtgt gtctgtgtgt acattcccca gagcctgtgt 88920 ggtagtcaat aagtaaccct cagaagttgg ctttctctaa tccttggatc aaacttgaat 88980 tgttaggctt ggtagcaagc atgtttaccc actgagccat ttatgacccc atggcccagc 89040 atcttccatg ggttctgggg acacaaatgt gtactttgat gtttacagga caagcgctta 89100 accaaccaag toattttccc agccccatcc tgactcccat taagtgttct ttcccccaac 89160 ccaggaccaa atctagagga gtgtccatgc ccaacaaaca ctctgccaag cctctcccct 89220 tactgctctt ctcccfctccc ttccttcatt tcttcgttcc ttcttttctt tctttttgaa 89280 acaggtcttt tctctgcatc ccaagctagc cttgaacttg tgatgtagct caggctggct 89340 ttgaactcac agctgtcctc ctacttcagc ttcccaaaca ctgggattat agacctatgc 89400 taccacacct ggctcatttt tcaaataaat aaaaagaaaa tcaaaaagtt cctagaacag 89460 tcacaggatt cacaaaaact ttggaaggag actaaaaatg gatttttaaa aaatgcttga 89520 agcacaaaga gttgttgaaa gaagagagaa gaggaaaagt tagcttagta ggtagaagtc 89580 aatcaagcct cacaccctga gttcaattcc tgaccctatg gtagaaggag aagagcaatg 89640 ccggaaacat tatcctctga cctccagacc cgctgtggca cgtgcatgca cacacacaag 89700 caggagccct tggagggaag tcctagaaat gaatcttact gaagcaggtc tgccaggccc 89760 tgtgctcagc cattttattt ttcctttgtg tacccgacac gettccattc tcaaagttgt 89820 gagtctgaga ggaagtactc actgtgtccc cagtgagctt ctgtcttacc ctgggtcact 89880 tagatggggt cacttagtgg tagccttggt gtggagaaag agaacacagg tccgagtagc 89940 cagtagacct gagtctttat atctgcaaag ggtgttgggg cataatcaaa tctccccccc 90000 tccccggggt cctgatacca ggttgtatta agtgtatgtg catggtcctt ccaagtcttg 90060 acacatcatc caactccaag tggctttctc atttttcctt gccagtagcc tcttggtgag 90120 gaaatggctg aggaaaacag agttgcagaa agacagggcc atggcctgge tgcaggcttt 90180 ctctgagtct gaagagggtc agcgactctg agaaatgaag ctatttctga gtgagagggg 90240 ccaaagaagg aacacggcag agggagagcc cccgaggaga tggagacaga agccggagag 90300 ggaccctgtg cgaggctgga ggggaggaag aggggggagg agtgagaccc actgtcatct 90360 gttgggcaga gaggggctac attcatctgc agtatggtgt agaggggaca gagagtgatg 90420 gtaacaggaa aaatttgggg ttgagggggg cagcctgtag ggctgggccc cagcagtgta 90480 cagctaggta gagtacacag taactcccag aattctctgg ctccactaaa tccctgttcc 90540 gctccgtgca gagtaaaacc cacacagggt ggatttcagt ctcctttgca cccccctcca 90600 258

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ccccccctcc acccccagct ctggtcacag gtaaaagagg ctggtgagga catcggaaag gctccgtgac actttaaatg cctcagataa agatgatggg tcagggacct cagcgcctct acaccacgga gacccctgtg accccctcgt agctgctgga gcgcaagcct caaggcctgt tcccaataaa cccctttccg oocaggatta gatctgccac cttatcacac acatacaaaa aaagcctcat tctctgctta acccaagtga cctgatgata acaacccttg caatccaata ttatgctgat agaaatgtac tctgcatgtg atggggctgg ctggggcttt gcacatcatt cccacacttg gttgcacaag gcagaatgac tgtgtctctg tgtgtgtaaa acgcctctct tcaatggctg cacaattgtc ctttctcttt ttcagtgcct ttcctctgtg ggtttgtcct gtctgtcctt gggttgtctg gctagaacac ttttttttaa agatttattt atatgtaagt gagggagtca gatctcgtta ggatggttgt tccagacctt cggaagagca gtcgggtgct acatcattgt cttgcccacg actgctctcc acccec&ggc accgggacac aacatcttct tttcttcttc caagcaggtc tcccaggaaa catgtctcgc tgcctctctt ttcgggaacc gcaggggctc taagctgcot gggoaaagga tggaaagcac tgtgacccaa gcacattttg catgccattg atgtgcacgc tgccacacag caccctcctg gtgcttagga actaacggct gacgggggcg ggccacagca gcgcaggctg tctcgtagag gtaaggggcc cactgaaatg agatctcctt tgtccccata cctcagcccc ctcctctggg gcagcctcaa gcccagcacc ctagaagcoo tcttacgtta ggggatgaca gggaggagga aaggaaaagg gaggggagag tcacaaagag ccctcttttc tggctttttg gatgtttatg tattttttta gaacccgtat gatttatata ggaagtgcag tgagttaagg gaacacagac ttgtaaaggg ttttgtaaca aggaagcaga aggtaaaaaa aaaaaaaaat caatggccca ggcggaactc ctgcttgaaa atccgatgag ccagagtgtg gccatagctg actaaagtgt gcactggcct ttccttgaca aagtggttgt tattctagta cttaggaggc ccagcctgga ctgcatagca acacccagtt gggagggcaa catttggaat gtaaataaat tagtgagtta gttcagcggt taagagcgct tcccaacaac cacatggtgg ctcacaacca gtgtttaaag tcagctacaa tgtacttaca ggccagagca agtagaggtc ctgagtttaa atctgtacaa ttacagtgca ctcatataca aagaaagagg gtggggcagg ggagggaaga acagagatga gettcatgtg gaaacacagg ggggggctac agtgagagta tcatgagttc aaaatacata ngcnaaaaaa aaaaaaaaaa agtcccagca cttagaggac tgaggcaggg agctgtatge agtcctgatc ctatcccctc agacagacag agagaaaeae aaagaaaggg ttgctattca gaccccatga cctgagctca ccaactccae agagctgttc tatgatctct tgttgtgoac acatgcacag attagaaaaa agaaaagaaa ggctggottc ttccacgtca ccaggtcctt cccagtccag tgggggctga ctttcccaac gcagtgtcca gcaaactcaa ccttcctggc tccctcacca atgcgggggc ccagtcagag ttgggggtgg ggcagatctt Cctgtaccct ccactagcaa agtgccagac aacagtgaga gactctcctg gtggcaggca gaggctcaga caccaggata aagaataaaa gcagagggag aatgccaatg tggcccagct gctagttatg agtctactgc tgctgccttg gtggacacgc cttgctcaag ccgagtccct atcccttgag gatggttacc atcctgggac cacctatatg gcagatccct gtgtccttct gaggggaact cgggtttctg tcagcttcct gggagcctgc cttgctcacc ctgagacccc gggactcaga gatgttgact acatgaacgt aggatgttat gcctggtgtg tgagtgtgtg ctggagccct cctgtctgtc tgcctcttgt ccaaggacct ctgtatgggt gtgtccttca gctagccccc tgtcactgag aaagtcttct agacatcatt gtcttttttt tttttttttt acactgtagc tgtcttcaga cactccagaa gagccaccat gtggttgctg ggatttgaac cttactcact gagccatctc accagccccg agaatggtgg gcaggaggat gtgacccccc acacgtgtag gtcttgtgca ctggctttgc tggcacttac agagattgaa gagtttaata ccccagaggg agcageagaa accagggctg gcagggggta gcatggagcc ttagccaatt cagcagtaat gtcaaattct gccgttcagg aaaccagtga· cacaaaggca cagccttctc ctaatgagaá atgagagctg aaaggagaga gcactgcgtg' ttggaggagg ctgacccact tcacttaaat tagccaccac tcceaacact acgcttcttt ctttttttct tctttttctt cactttttag agctgtaaac caccctggtc ggaggtagag atcaggaagg agggagggag agggaaagag atcgagaçag catgcattca actgcactgt gagttattta gccaacaata ttattaacag cctgaaagga gagagacgga ggggcaatta agagagcaga aagagatacg tccaatcaaa ggtgcttcag gtattttcca tgtcccatta gaagctgaca ctggatggag gaaggtgaga agggagggac acagaccagg ggtcatgagg cccagggttg gaaggacccc aaggatgcac ctatagctag gcgtggtggc tgaggcagga ggatçaccat gagtgtatgc tcaaaataac aacaaaagga agtgggggtg aaaacatttt ttttaaaaaa agaaaggggc gactgctctt ccgaaggttc tgagttcaaa tccataagga gatctacgcc ctcttctggt tataataata aataaattct ggagtgaggg ttcccagcaa ceacatgatg gctcacaacc taaaataaat aaataaatct ttaaaaaaag agaagaaagg taagaagcta aataaaaggc cctgtagtec tggcactcag gtggggttgg aaggtcaact tgggtgagac cttgtctcaa acatagccag gcatgatggt atacatttat cagaaagaaa aggaattcaa gatcaggctg cccccccccc ecagagacag acagacagac gccttcagat ggctcagcaa ttaaaggcgc aagcctggga cccaaggtag aaggcaagag atatgaatgc tggggcatgt gcctacacta gaggaggaag aaaaacataa gattgtttca gtgtgagagg agggtctggc occtttgtag actgaggcag cggaggaggc aataacggag ctctacagcc tgtcctgatc cacagagaag attggctccc aggctcctgg gccccccccc 90660 90720 90780 90840 90900 90960 91020 S1080 91140 91200 91260 91320 91380 91440 91500 91560 91620 91680 91740 91800 91860 91920 91980 92040 92100 92160 92220 92280 92340 92400 92460 92520 92580 92640 927 DO 92760 92820 928B0 92940 93000 93060 93120 931B0 93240 93300 93360 93420 93480 93540 93600 93660 93720 93780 93840 93900 93960 94020 94080 94140 94200 94260 94320 94380 94440

259ΕΡ 1 325 13 Ο/PT acacctgtgg agtgctaggt gatttgotaa tgttgggcaa catttgccca cgtggggttc ttggctcttt ggtaatagac gggttgcccg tggctccctg cgcaaatggg agagcatgga agcttggaag cagcaggtgt actccagttt tttggcacaa gaaacccgca gttgaggaac aggctggggt gtgaagaaga agaggcagag tccctgagtg accccagcaa acaaaatccc tactgtgtgc cactaaccat tttcttctga gactgtgata gactctccaa ccccagctga cagttetaea etggttgaga tcattttoct gtccccaaag tgccaggggc caccccatgt aagactgcct ggtgggaggt agtgctgagc ggaaaatggc ctagcatgtg caaggaaggg ggttcatgct ggtattctca ccatcctcag ctacatagct acaaacaaca acaaagcagc ccatctcaaa aagcaagtag ctatcaagtc atgtatatat gatggctcag cagttgagag gcacccacat ggcagctcac acacagatat ccacgcacat aaattggaag taaaactctc gaagggggag ggcataggtg tttggggttc attatgcaat gtgggggcca aaggtctcct tattactatt agtgtgtggt ggatgtctgt ggtctgagga tctggtagtc aggtttgcaa aaccttattt tttgcattga gaccctcctg ttcctgcctc tntccggatt gctgcncacc ccgctggncc ctcccccccc nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn agctctaact gctgttaaat caccagcaag gcccaggtcc tggaaacgga cggaaagggg aggactetgc tccttccccc tgctttctga ccgcttagcg gcaatgaaac actaatgcag ttatttcctt tatgtagaaa aaaagaaatt tctcttatga tctctctctc tctctctctc: atgaatgcac acaaagtagc gcaaatggtg gtgactggga aatccctttg cattcaaacc tcctcctcct tacctgtctt tacccttaag gacaattata tttgatgaag tcgatattaa agaagggttt gggttcgatg gcttttggct agggtagaaa ggatgcccag agaaggtgga taaaagcagg gatgagctgg tgaccacagc tcctgccctc taatcgcttc agaaagccag ttattccagg caaggactga gtgccggcag ggcgggacct ctggggggaa aggctaccgt atgactagca ggagggcgga cagctggggt gtctggccag acagaggctg tggatgctaa ctgggaacgg gcctgtggcc ggaacaagct ggctgagccc agcgggtaag ggtgccatgg gcccatgcag ggaagccaca gggctccctg ggtctcccct atccataatt tgaggtttat cagcctaacc ctcccccact gtggcgggga cgggttggga gccccttgtt ctgcagctca acactcacgg ctctctcagc cctagacaat ggctggtcca ctccactagg ctggcaatgt gagataagga aagggatggt agaatgggct gggaggtaao cctgggttcc atccccagca acattcagga ggtacagtca agcttgagac cagcctgggc agaaggccaa ctggcaagag catgtatctt ctttcatttt gcatgtatgt ttgtatgata cacttggatg ctctttcaaa aactgtctgt aattccagtc aaacaccaat gcacataaaa· taaggagaca aaagggactg tgtggtgtgt ttaacatgca gtatacatgt gtgggtgcaa cctcaatccc tctctgcctt gtgatgtgtg tgggtgtgtt tgctctctta ccatgttcgt agctagtgtc tttatctgcc acatggaact tcctgagttg ccccntgtcn nnntcacang tccccgccnc ccnagcctcc cccccccccc cccccccccc nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnncagaca tcacactcct tcacatcccc agcttgactt agagcaaagc catggaagca gaaccagaca catgcctgoc gtgcaactgg gaagacaagg ggagcctgtg tgggcttttc attaagccag gtgcatcttt atatgttgtt actaatagca ctgatacata tgtctcctgt gcatgtgtgt ccccccccat attatttctt agtctggcca tgcaattctt cgggctgctt gctgtggcca cccatccttt gcagacaatt ctcttccatc agcaaacacg agagatgctt tatttacata tcaaagtttt aaaatcttaa agagatggag atacttattc aggatggggg agggagggtc gcgctaggag tggaaccagt ccctccccca gtctctctgt attggaatgt gttgctcacc cccaaaccga tcatggcatc agctgtgcag aaacagctcc tttatctctt ggcagatggc gcttggaggg gggagtcctg ctgaagaagg agccatggca gcaatatggg aggcagtcta caggcagatt tccagtgagc aagaggcaag tggtgataat gagcccatgt gctcatgaag catcccctcg agttccaggc tacctaacca gtctcccggc agagaçctca aaggctgagc gtcttctcta gctgcccctc gtgtgtgtga agccctctcc gtaacacagt aacacaggct tccttagaga gcctgttttc tttgtaagct tatctgagga tctctgtcac tgtagtacag ctcccctggg gttcccacac tctgttgcta gagtacttgc ctacagaacc caggcgtggt ggaagagcag aagttcaagg tatgtgagac tttgtctcca gagtattacg taaagtaaat tttttacatt ctataaaggc tgaaagtagg gggctggata gaacctgggt tcaattccta tcaggggatc tggcaccctc taaataattt ttaaaaaaag aggggaagtg ggaggggcat gaatacactt ctataaaagc gatgtaagct gtgcatatgt attttcattt aaattataat aagccctcac ggcaatcaga gtgggttctg tggatggaac gagccacctt gctggccttc cctggacagc aagtccccaa aggacacacn gcttantggg tgcctccccg cccctcgccc cttccccccc ccccnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn cacacactca aattaaatat acgctaggac tctaaggagg atcctccccc ctccacacaa acagcagcct agccaagccc ggaggcaaag ccccagccgg attatgattt ctgctgattt atttattcaa tctaaagatt ggaggagcag agatgtgata gtggtagcta tgcctaggcc gtgtgtgtgt gcgtgtgtgt ctgtgggatc tccagactca gccttttctc ttgccagccc gccctttcac ctggagtcct atcctcaata actagccaat ggtgttcttt ccttgagtct aagtcaaata gctccctttt ctagaggatg ggtgtagagg tgatgttgct ttaaaaggta cctcctcaag ctaatgaatc cagaagtgtc tgcctttgac gaaccgccag cattaggagc ctccactgct cagaaaacct tgccaatcag gaggccaaag gttatggcgc gcagaaaaag ttctctcttt gatgctttgg 94500 94560 94620 94680 94740 94800 94860 94920 94980 95040 95100 95160 95220 95280 95340 95400 95460 95520 955B0 95640 95700 95760 95820 95880 95940 96000 96060 96120 96180 96240 96300 96360 96420 96480 96540 96600 96660 96720 96780 96840 96900 96960 97020 97080 97140 97200 97260 97320 97380 97440 97500 97560 97620 97680 97740 97800 97860 97920 97980 98040 98100 98160 98220 98280 260 260 gccttacctg gttctcgaag cccccgctgt tcggaaattt gtagagtggg gaaagaggtg ctggcttccc tattaggacc cctggcttct ccctaaaggt ggacgctcct tactttcttc ctgagtgaga aacaggaaag ttacctttcc gcttcaggct aacaagggga agccagacat atctgccatg atgctggcct gctccfctgga tcttagctgc agaccctcca tccacaattg gcaaacccca tgagccctgc gatccatgct ctcatcctgg gattaaaatc acaaagccct ttctaagtgg cccccccccc ataattctcc gaagcacgct ctctcaagtc atttacactt ctgaggactc ccctggcetc ggtacaccgg aaaggcttcc aaggtaaatg octtgttacc ctgctgagct gtctccccac ttcatttgca tataagaaaa ggccaaacct ggcceggcac gatgaatgaa tgtgtgaggg tcctggggcg tgtctgtaac acgtggtcca gcctctgaag aaaacaccca caaagtgttt cbcagagtga agattcacgg cctctctcte ccatgtagga tgaacgagtg aaggcaagag ggttctatct cccaaccaga ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ttactgcctg cacttgactt gacctaggca aaaatagcag cgagatacag ttagaaggaa aaaaaaaaag ccccaaacca caacacaacc cggaagtgtg gtttctaaag agctgttttc ttcccaagct ctacagcgtg gtggctctaa ctttttaatc atagcaggag tcccaattag cgtgttgggt aatctttcaa agttccgtgg ccacagagag cagaggcaat attcagcata aagccctaga ttgtgggcct gtgcacacat gfcgtgtcaac gcacatgtgg cttgtggagg actctcaaga tgaggtgtgt gcaccccagg ccttttgatt ctcaaagctt agagggactg tgtgtgtgga ggggtgttgc tcacagtgca gaaacccaaa ccaggagccc acatgccaac aaacaggctg cacactcttg ctagtacatc atggggatga gggaccaagt gctttgcaag acagcaggca cagagttctg gtaccccaga ctcagccgcc acecagggec agctctgatc tggcttgacc tgttgttgtt tttggaagtg ctgatgtcaa tgcagaattc agcagagtgg aaaaagagga gagggaggaa aagggggggg ggacgggacg ggccgaggcc ggcaggcaac aagacaatga ccacaaggtc cctgtaacta cactaactgc tgacccccag ggcttagcca atatagctga gacccagtct tggtgctgtg aagtaaacag ggaagagttg gacatgggtc tccattctct ctcctcatcc ggaggcagtg gccaggcagc catgcccacc gatgccatcc ttctgggagg ttcaggcacc tctccttccc tgggtgccta gaggtgctgt gtctgcatcc cctgccatct gagagaggcc actgggactt ggtagagagg ttctccacac ggaggaaatt ggtctttagg gacactgaag gcagtttcct ctgttcagtg aacccacgtg acagagctcg catgacaact tgccggctct caactcccat ctcaagcact gtaaggttta ggagagcccc agatgtaagt atggatggga gggagtcatt gcctaccctt ctgaactcta acatggtcca gcttttccat aggagacgec agacctggca ggggagcaag cctttgtttc tgacccattt gccactgagg aacttgcata caagaaactg cctctgggcc tctcctggac ctcccagggg acaactgggc aacagatcct tccaggtggc tgcagtgaca tttatgacat agaaaggcct cagtctcagg atttcacaca ctgtatttcc ggaccaggga aggcgagcat cttctgctcc ccccaaacaa gtgtgggaat attttttttt tctgctccat gaactcaCac agttttcaga taccgaggag cctgtgctga aattagaccc cgaaaaatag gttagctgac aattacttgt agtgtgatgt agtggcagga gcgcaggatg ggctgccagg gctgcagtct aaacttactg tctcttaacc tctcgagtcc ctgggtttct tgccgggatg ccatctccct cctctggtgg gctggtggaa agcgtaatga ateaacgctt gaagaggcca gactcgggat gccatgtaag fcacacagcat cgccagccac tacacggagc tgatttattt acctcccgtg aaagagacaa caatcatcat catgccgeag cttcctgcgt ggcacggcag caccccctcc ctctccgctg catcaagcac gctgccttgc caggatgaca gcagcccact ctcagcctct cttacagatc atgacctcct gccccgtgag gfcctgtcacc cgaaaaccac gggctgcagc ctctctatgg gggaggctga ggaaatgaat tccgtaggta taggaaatca gacgctgcta gtaattaagg agcgaagcat aggtgcgtga gatgttattt aaatgttgcg tcatttaaag agtgtcctgg tgcttcagtt atgcagggct gtggacgggt ggcaattagg ctggcacggg tagagctcac gagggagggt ggggacacac cttccggtaa ttgctgctgg gcagctctgg ccccgccccc gccctcactc cccacccccc acttctttcc tgacagctct gcagcttaca gggcttgttg cccttaccca gaaaatcacg ttggaagaaa agaggaatga aagagaaagc cagaaaagtt catattaggt tcggatctgc ggccgagaga atccatgacg gtccgcgcgc atataaccct gtggcaacag aacagggccc gccacaagag cttcttgagt tgccacctgc caggagacag tggatcatct gtccttagag cacaagccag gcctgattct ccaatattga agatgtcaac agaggttccc taaagaatga tgcttctatt tccatgctaa fccagcttcag tcggaacagc cggaccgtta ccttagctct gctgttctcc ccgcagaggg aagggcgggg tcacccagca ttgccactcc ccccaccctc gacccctctt gggttgatct gctcctgaaa aacagtgttg gctcaagttt gtatgtcacc gctggctcag ccagcttatc tccccggtgc tttcaagatc aacgaaagaa aaactttgtt tcaagagcag agtgtggtgc caactctgat ttcagcatga caactcacfcg cccgtgacaa ccagtacttg gctgttgtgg gatgcggagg gaagtggatg aeaacagctg tatccaggtc caaacagagt ctggcagaaa atggctgaga gccttgggct gcatccctcc tcccctcctg ttttcaaggt ggtttttgga aatgtccttc ctgtgggttg tgtgcctttfc cctggggcct gtgcagatgg ccctgtgttc ctggtgctgc tgttgagatg ataggaaccc aggcactaaa cacacaatgt ggttgtatct gactagaagc caggaggcat ttgagggtaa aggagtgtaa ggactgtgta aagagatgag gggaggcagg agtcccaatg ccagcaaata caatggactc tcctggtcga gagaattcaa gatggcagag ggacaggctg tctgagtttc ctatggctgc 98340 98400 98460 98520 98580 98640 98700 98760 98820 98860 98940 99000 99060 99120 99180 99240 99300 99360 99420 99480 99540 99600 99660 99720 99780 99840 99900 99960 100020 ÍOOOBO 100140 100200 100260 100320 100380 100440 100500 100560 100620 100680 100740 100800 100860 100920 100980 101040 101100 101160 101220 101280 101340 101400 101460 101520 101580 101640 101700 101760 101820 101880 101940 102000 102060 102120 261

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ttcaaggccc atctagaaaa gagacgtgct tcccatgaat ccccacttcc ctctctctca accgataaat gactagaaat tcacactgtg gggacacatt gagaaatggc ctagcagcca ctaatacata cacacacaca ggctcagcaa catggtggct acagatacaa gaaagaaaga aaagaaagaa acttccaggg gaagctgtag gtagacaacc caacgcctca taggacactc agacctatct catccaactc atctgctctg gaggactttg ctctaccctg ctgtgcccac agactgagaa aaatgtctta tttgtgtgtt taactaagga caggtgtgtg tgcatattag tttgagacaa accagaagaa atttgaacfcc agtccttgag gcttcagcct cttccttccc cttcccttcc cttcctttcc taatcctggc nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn cgacaacacc ccaattttta atagctcctt gtcctagaac atgatagact aaagtcatcc ctcaaaaaga gggaggcaga ccaçgacagc agtgaacccc tgtttaccca tgtttgaatg ggcagtattg gagtttaaag tggcctgctc ctgtttcctc tatactacac tctagagatg cctccatctg atgagacctt tggtggtggc agaaaggctt aataatgatg ggtcataagc ctagctcaag acatgatgct catggaccgc etggtagtta tgttgggcag catacataca cacacacaea ttaagagcac cacaaccatc tgtactcata aagaaagtgt agaaagaaag ctataggcaa acaacctgtg tgtggcctgg ccctctgtgc tacatcaaga ttacatgtga actatgtgac agagtcccct gatctgcaaa aaaccctttt aagaagtccc cattgtgtct ctgcctttat tgtttgtttt tgactttaaa ccaccgtacc gtaagcatgc tgtctttttt ggcattggat aggacctctg acaatgtctt cctaaatact tttcccttcc cttcccttcc ctctctctct tgtcttggaa nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ggcgccgctg aaaccagtgt actttgtttt tcaatgtgta gatggtgtaa ttggctatgt aataaatgta ggcaggcaga cagggctaca aacagtactg ggtgtaccca agagaaaagt gctggagagg cttcctccac ttggctccgg ccccacccct tggtgatctt tcctttcatg aactttagga ggagcctgca agtagtagaa tgggtgcaca aegatg&aaa agagtagagg gttgtgtgtg gtggtctgca aggttacaca agtatgcttg cttacaacta tacatacata cacacacact tgactgctct tgtaatggga tacattaaat aaacgaggaa aaggaaagga cctgtggcct gcctggggaa ggaagctgta ccaatttcct tgatcttgtc ggtcactcca agagtcatct gcctgccegt gccacatctt ctctgaggtg ggggagaagg cacctaaaat tccttttcct cttctgagat cttctgatcc ccagctttat taccaacttg tttttaatta cctattagag gaagagcagt gctatatggc gggattacat cttttccctt cttcccctcc ctctccccct cttgctctgt nnnnnnnnnn nnnnnnaaga cctccactgc ttcaagccgg gctttgacgt aattaggctg aactccactt tgtgagtttg ttgccgggca ttttctgagt cagagaaacc

ccggacagtC caaggtgtgt ttcccatcag tgatggggag gaagaccact cctcagttta ctccctgtct gactgtattt gctgggacct aacttcttgg ctttgttaag ctctgatgaa tggctataac taattctctg aaaaccacag gcagggttgg gatgtgttgg tgctatttaa ctgatcttcc actatgactt catacataca ttaaagaaaa tacagaggtg tctgatgccc aaataaataa aattcctaat attctgaggg ggggaagctg gctgtagaca gacaacctgt gttctctaag tcaagatgtt caggttctag agagatttgt gggaactccc ccaaaaccat gcttttagag gacccaaggg cggtggtcgc ccgctccatc gtagcccagg- tttcttcccfc ttgagactat gctatattcc tatgagtaca atggttgtga cagtgctttt acatattggc gtgagccatg ccctttccct cctcccttcc ctttcttttc agaccaggct nnnnnnnnnn agaagaagaa catccacctg tacactgaag tttgtgacat gccttgaact aggaggcaga aggaccaacc tggtggcaca tcgaagccag ctgtctccaa tggtgtcttt gagcagctct ctcgggtgtg gtgtagcctt gggctgatct tctaaaattt gtattccctg cagtttacct ggctcagaaa cttaaaggtg caccctgggt cagttagtta tcagtggcga tgactgttct acagaaattc ttcctgggtg gctgcatcca aaactccaag agaagacctg ctgagctcca tacatacata aaattctggg ctgagttcaa tcttctggtg gaaagaaaga taaaaaagaa agaatctgcc tagacaacct acctgtggcc ggcctgtggc gacacatgcc taacaaaatt acatattttt gtccaggaca cagtggtcct tttcctcttt aggcaggtct ccagtgctga aaggaccaag ttactcctca ctggccttca ccacttccag gattcaggct cagcctttct ctgtatctgt gccaccatgt aaccgctgag ctcaaactca gtgtttggct tttccctttc cttcccttcc tttcagagag ggcttgnnnn nnnnnnnnnn gaagaagaag agacaggact tagtagtccc ggtgtgatgt tgcttctgcc ggtgggagga ttggctacat cgcctttaat cctggtctac aaacaaaaaa cctaagtctc atacccagag tgaatactcg ccggtggaga tgttaccaac acatgttacc ccctctagtg cttgttctct tttctaaggc tatttctgac ggtggtggtg atgccattga ttcaaccttt tagctaccct ggaagggcta agctctgttc aagctctctt cgtacacaca ttggagaggt ctctcaacca tgcgctgaag aagaaagaaa agaaagaaag ccttttccta gtggcctggg tggggaagct agcatcatgt atcaaatgca acatctgcaa gaggagccac gactggctgt taagggccct tggagagcta cagcagggca actatcgctg caggctctat tttttgtttg gctcactatg agtcctgggg ccatacttca ttctttcttc tttcagacac ggttgttggg ccatctcgcc gaatccttcc tctagccttt ctttccttcc cttcccttcc tttctctgtg nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn acaacaacga caaatçcaga acttgggatt agtcttggct tcctgctggg tcagaaattc gatatcctat cccagcactt agagtgagtt caaacaaaaa ctttcaactc gtgatacggt gtccccagtt tgggctttgg agaattggat tgatcaaaaa gtgctggctg ctctgctgac actgagcctt ttagtatgca gtggtggtgg 102180 102240 102300 102360 102420 102480 102540 102600 102660 102720 102780 102840 102900 102960 103020 103080 103140 103200 103260 103320 103360 103440 103500 103560 103620 103680 103740 103800 103860 103920 103980 104040 104100 104160 104220 104280 104340 104400 104460 104520 104580 104640 104700 104760 104820 104880 104940 105000 105060 105120 105180 105240 105300 105360 105420 105480 105540 105600 105660 105720 105780 105840 105900 105960 262ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ccctagctct tatctaccga cggaacgtta gtcacttccc tggctagtca ctgaggaaaa tcagcaagaa agaagctgac gctaagtggt ttcaagaagt ctacactgtt ttgtagatga aactggaatt tgtttggcta gggatatttg gggacacttc gtagaggcca gggtggtact ctctcgatca aaacatcaac ttggccttga ggtgggtggg agaggcctcg agtgaggagg gcttgttgaa acttttcttt tctgccaagt cagtcccggg cttggagctg gggcaacaca taagtggcat ctgagaagtt atcagctgac ctaggaagga ggattctgac ccactaggct tccctgcatc atccgcagga ctccccagca gtggcctccc atctcctcag aagtctgaat ttgatgaaga àaagatcatg ccacccatgg cggggttgag gtaagaagga ggatgtggtt ctggggcgga aggcaggaag tttgaagcaa gcccagcagt ctatctcagg cttccctctc gctcttagaa atgactcaaa ggagggagtg aagaggtggt gccaagtcat tgggttcatt cccctaggga aggagccgcc ggcctgagtc agagaagcgt ggtttctggt tgatactact tctctaaaag tgagggcgaa ttcagcgact aagacgagac ctagacetcc agtgaagatt ctcgagctag ctctccagtg gaaaaaaaaa aagtcctatt gtggctggct tccatcttta ttagctcagg cctcctgtga tgtagccctt taaggacttc acagagcgcg ctgcattctg gcactgcaaa aatacacgcc gctggtctaa gcaagtcgcc ttggttagtt ggtaggcgtg ccaatcagag cccagacgcc tgggtgtggt cacgttgccc ctcgtgcgtc acgacgccgc ggaagagaca gagcggtcgg agcaaccccc gcacccagca aaccgcggta accgggtgat ggggagggga gagggggcgg ccgagtagtg tgtctggacg ttggagaagt aactggggag cgccctttgg tttgaggatg gaggggtgcg gaggtgcatt cctggcaggg aaggggtcgc ttatgtaagg ggggagggga aaaggttagg gtttcaccgc ctggaaactc tacccgcacc gtcacctttg cacctccccc ctgactgcct gggaagccgg cctctctccc cacctcctgg cgttcccacc tccctctggc atccctgcac aagcaeccat ttcgcctact tcagtattgt cggcagctgc ctgtgggcca agcaaatgtg ccaactgtgg ttcttcttaa ccccctacaa agaaaacacc attccgaagc attcagtggt tctcaaccag tggtcgtcat aattgggatc gaccttccta ctatgaacag agtgctaagç ttgagaaatc aggaggttag agagtggaat gaacagggct cctatgctag cttccaagcfc tggctagagc acttcgeact aagtttgtcc tttacctggg tcttcccagg aaaagtgggg tgagtgggta agagagcaac tgaagcagca tatcttccac agcctttctt gcccctggag cacccacatt cactaactga cagtggtgac aagtaaggga cagatgttgg agaagcatac attttacccg ggggaagggc agaaaaaagg agggctgatt cgtcccctgg tctccttaaa gacacaatat caccttagtg gagcccatac atttctttgt ctcagatgct agtcaagaac cccaggccac cccagtcttg tccctttaaa tcggtttttg cccatccooc tcttcattgg tctccacctt ttcggagggc gggactgaat ttggtaaaga tcttccccta tcctttgtta agaacgtgcc attcactaga aaagatttca gggcctgtgc gggtgacatt aagactgggg ccgtgcgagt tgtggaaaaa aaaaaagact gttctactca ctcctgttgc atcagttttg aggctaaaag cccgcgaccg agtcagagat ggaagctgag tgtcaccgta tatacttcct tctgctcttt taggccgagg gttagccaca gcttagagaa gctcctccag tgaatgggcg ggagtaagca agcaatgggc ggtgattggc cagctgatcg gagactggag ccgtgcggac aggtcgcagt tcaggtgggt gtgatctggg ggggaaagta gggtcctgac cggggacagg ggcgctcttg tttaaagaga gagtcccgga gaatatgaga ggccagaggg cccgagctga ccatttagcc gcctctaccg gcgctgactg tgggcggtcc ggcccctcct aaggagtagg gggcggcggt gggttgggcg gaggttgggg ccccctccca gcctaactgg ctagtatgtc cggtagagag ctggctgggt ggggcgcctg ccaactcttg gcccctcccc cctagtttca gtctccaact ggggtttaca gaatctgggg gtttccagaa gtacccattt ccagcccatg ccaagtgagg gtctgctgga tttctactgt gaàaccacaa attttattat tcactgccag tcagcactgg ggtggatttg gactccccag atgtgctact ggcacctagg ggcagccatg tacataaatt tcaggçtgaa accctgtcat aaaatcagaa gggccaccac ggataatgga gaatagggca cctgctcaat ttcccccaac tggagtgace etgactccag agtgggttaa aagtcaaaga aaggcaggag gaccccatca aagagctggt ccaggagact gtttaggctt gggctcagtt cagccggccg ccaggacagg aggaaatatc tcccattcca ggagaggcgt cactcttggg ctatggttgg ggttccatta agatggagaa ggacagacac ggtcgaacaa tcagctgtta tctgaacgtt gaactcagga ttaatttaac acagaagcgg ctcacttaga aagcttagat aagtttctct ttgggggtgg taagcaattc agcagctttt gcctttcaga ctctgattgg tgaaatcact tccctaagta gggtgttaat cttagaaccg atttttaaaa agacgcttcc ccttgagaag ccgtgggctc ctaaacccac gagggataga tgtccctata ccccgaagac gacagtggtc cctatacccc tcgggtgttc tgctgcatcg ttcgcgfcgct ccaccttcgc aagttccaag aaggaggggc cagtttaaaa atgccaactc agaacttcat tgaccggaat aaactgtagt ttgacgtaaa ccttttcagc cattggccag gcaagggggt ggcctccttg gaggtgctgg cgcccccgag cctgggtggt tcattcgcag ccggtgtgtg ctgggcgctg gattttgctc ctctgtccac gacccggtca tcccgggggg ggccacaccc tgcccttctg ggagaggagc ctggactctc caggagtcgt ggcagaaggt ccgggggcgt ctaaccccga tagggaggat ctggacgagc ggtcagggcc agttcaagtc ctcgttccct cccggggatg gcggaggcct tatgcaaccc ggggcggaca ggaggagtgc ctgtcttgga cagagagaag gcccctagcc cgggcttggc ggttagtcat cgctgggctc acggcctccg gttaggctaa catttggcct gtcaccctgg 106020 1060B0 106140 106200 106260 106320 106380 106440 106500 106560 106620 106680 106740 106800 106860 106920 106980 107040 107100 107160 107220 107280 107340 107400 107460 107520 107580 107640 107700 107760 107820 107880 107940 108000 108060 108120 108180 108240 108300 108360 108420 108480 108540 108600 108660 108720 108780 108840 108900 108960 109020 109080 109140 109200 109260 109320 109380 109440 109500 109560 109620 109680 109740 109800

263ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ctgttagagt aggctagaag gggtcagtgc cetgggccca tcagcagcca gtgaaccetg gagactgatc acctaggaga ggaacttgaa agttgcccac aggcaaagtc tccttggccc gaaccaccet ctcgggctcc ccatgctgta gggccccggc cttggaactt ggaacaaagt cagatgtacc cggaatgtgc cagccacect acccatacet tcctgagagc ccctgctgac aaccctcctt gctgctgaat atttctgaag tacatttttt atgccgaaga tgctgggctc aggggcacaa agcaagtgca gaaggtactg aaagtcagct acccagcttt cctgtttttt ccctcacctg gctgagccgc aaagctgcca gttgaagaac gcagcagctt tgcctatcat cggggtgatg gctttatggg gcccagtgaa agatttaggt ctccccaaga ttagttgatg tgtttactga gacttccttg cacacacaca cacacacaca cacacacttt cctttccatg actccgttct aagtagtcat tcgagacagg gtttctctgt tggcctcgaa ctcagaaatc tgccaccacc gcccggctgt tgggtttagg ggtacttacc ccatagataa gtaggcagga tcttcttctt ctcgtggatg caccccctga ctactcaccc gtcccaggca agctcgtggg ccaaggcttt ccctccacct tgccatttat tttctgcctt gcaagaaatt gtcaggggag cctgattcat tctcacgtat tcctaacaga agatgggttc ggagttctag cctgttcccc ctaatccagc cccactgcag cgggctgggg aggctgagtc cgcttgcttt ctttcctcct atggctctgc tgtcctcatc caacagaggc aggcacaaga acattggtca gagaggcacg gcctcagtga aagacacgtg tgaagggcct ccaggaagta aggagcatga gccacctctg gtaacactgt gggaaaacat aacatgcacc aagccctggt ggtctgcaat cccggcactc ctgctataca atgagttctg caaaataaaa taaagcattg tccctgatca taatacaaca tggcagtacc aaccattgtg gtatcctaaa ataaggattt tggaacgcag ctgtttgttt tagggcttgc ctaagtaaat gtcttacaga agaaaaattg gtatgagttt gtgactgttt accatecaat tgagtggaaa ctgtcatggt gccagagagt ccccgccccg cagccaaggg tggcctgaac agagctatcc aggaagatcc gacaaagttt cctagtgtaa tctttccact ttctatctgg cagtggccat cagccctcta gcctgccacg ttttactgct gattcatgcg tcagacgtgg aggggccggc aagcggaatg cctggcatct ccetcceetc ctgcctttgg cttccaactc tagtgcccct tccctaagaa caagtcattt tttttaactt gggacttggg cttagcaggt tgccaagagt tttagaagcc tcttgcttct agagccaggt ttggatggcc tttttcctcc ccttcctttt agtagttctt cagtggcaag tgttgccctc tgcccctggc ccggaaggtg acagaactgg agggaaaccc tggtcctctg taaaggcact gtctataaat tctgtgtggc agtgggaaga taggcctgcc tttcttatct cacacacaca catacacaca aggtccaaaa gtaaatgtac-ttgtgtattt actttttttg atagccctgg ctgtcctgga tgcctgcctc tgcctcccaa atttacattt ctttatttat cttacacctg tggatttttc gggcattaaa agtccaccag gaaacgaaac agctcttcac agctcagggg gattaggatg aggctagtcc tctactggct aaagcaaaac tgtagctctt tgctttccag gatagtgaga atgggttgta tgatatgagt gggcttggtc tctgattgtg a9999gtaca ggaggctgtt atttgtgaga aactgaaagt tctaagctga gggataggat ggctcacaca ttgcgacaaa cccttccctg gccacagtgt caacatggag cctcagaggt cagtggagga cctggcctgg tagaagcctg gagaacacca cttccagcca tctcctctca tggtcccatc tctaccctgc aaaggaaata cacagcaaat atctatgact ggggttgtag tctgtcttct gcattgcata tggaggtggt ggcaaaggag agccagcctg ggctatatga gttagtaatt caaagaaagc agcaaatgaa agccagaaga agagatgcct ttggacctgg ggttataaaa tgttcatctc ggaagtccat tccttttctg tatattcatc tgatggtggt agtggaaata taaatattga ttaaaatatg aacacatact tataaatact gaataetaaa tgatggagca gctggtcaga cacctgcttg gcacaaactc tgggcagaga gaagtggaca atacttccca agaggctttt ctctgaaaat agaaatccca gtccttggac tgactgtgca cccccagccc cctccctgag ttggaactgt gggggcgggg agacagcctg gaattcatac ctagtçctga ggaagctgcc tcagetgtcc tccctcagac cccatttcta accctacaca gagttgatca cagagctcat ttctacaccc tgccctttga tgccagctcc tagtctgtaa tattcaagaa cccctcatta tctgggtcgc tggccctgtc aggaacctgt gcctcccaca ctttatgtcc tgacccagct ttcgtggagg aagaggagaa ggtgggaagg tctggacagc gggagccctt acccccacCg tggggaatag gtgactccac aatagaagga aaagtctgtc tcatcatcac catgccaaca catacacaca cacacacaca tcaggaaggg ggacattgaa tttatttgtt tgattgactt actcactttg tagactaggc gtgctgggat taaaggcgtg ttttagtctg gcccagattt cacctgtata atggggaatc tggtgactca gagcctgggc atgaactgtt gtccttcccc gaaggaaagg ctatggttaa tctcaccatg catgggtggt ggttgggttc tagcaaccac ctctgctcaa tactgtgcag cccttctgct gcctctagct gttcaccttt ggcccagtct tgttgtattt gacaggagga cataggggag actagatcat gtgtaaggga ctgtagcaga gattgccctt ccctcgacct gtccctccag cactgggtac gagaaagggc agcctggaag aaccacaagg gcctatccgg ggaaagagag cagccagcca ggacctgcct tcctgggaga agtttctata aacagcctca tcaaaaagag attcaaatgt ctcagttggt aggtttgctt aaactgaaca ggttggccca cctacattca aggtaatcct gactgtctca aaaaataaaa agatgtggct gaaaccgttt aggctcctgt gccttgtgtg tagtttgctg tcttagaaat agggttgtaa tagagaaaaa ctgtcatgaa aatgtatagc gttctgtgca gccatccaaa atactaaaaa gattataaaa tgtaatatat ttttttaaaa aagattatga aaagtatgag 109860 109920 109980 110040 110100 110160 110220 110280 110340 110400 110460 110520 110580 110640 110700 110760 110820 110880 110940 111000 111060 111120 111180 111240 111300 111360 111420 111480 111540 111600 111660 111720 111780 111840 111900 111960 112020 112080 112140 112200 112260 112320 112380 112440 112500 112560 112620 112680 112740 112800 112860 112920 112980 113040 113100 113160 113220 113280 113340 113400 113460 113520 113580 113640

264ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tttgtgactg tttttaaaat aaagtggatt caaaatgtta attttcccct tgttttttct ttaaataaaa tacaaaagac tgcctgtgag tggcaggaat gccgtctctt cactccctct ctttgtgcac cagagtgtgg ctggagctgc acgctgtttg ctagaagagc agcaaatgct catgtttaga ttttggagaa aagaaaatgt ttgcttggga tgtgtgtgta tgtgtgtgtg ctccaccaca ctaaagtcaa tacacacagg aagcattcct agaataagaa agaagggaaa nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn aacatagctt aaagaattct ttaattttta atgggaaaaa gttaatgcaa acaggacaga taaaagtcat ctatttatac atgcacacat acaaacagag taaataattt taagctctaa tgctgctttt gccattcttt ttagaaaagt aaggagcaca cgtcagcaca cagcaatgtc caactcactt ggactggtac cacctgaagg ctgcagcagg aagccttagc tgcagtggaa tatttctcga agtgaatgta caaaaaaatc caacttttgt ggttaggggc acaagctccc actctgacta ctacacctgg ggttgtatag caaattttta aaagatttat ttttatgagt gatcccatta cagatggttg ttggaagagc agtcagtgct taaaagttta aaattaattc tgtgtttgaa gtatatatgg ttgattcttt cctttcaotg cagctgagct atcttgtggg agaaggaatt catgtaattg gtatgatatg gtaagaaaaa cagatcacta tgttcaagga taatcaaaat gatcccatcc cctgtaacct caagtccccg aggacaacag gatatctgag gaacaaaacc aacaacttca actctgggac acagtgtcac agcttccacc tgggacacaa ctagcggaga ggctgcaagg gggtgcatga tgtgaaactt gaagccatgg ccaacaaccc gtaatgaatg ctatgtctaa gaaacttgga cagaaaagcc ttaaaagaaa tttcacaaaa aagcatcaac taagaggagt tcgggctggt gagatggctc ttcaaatccc aacaaccaca ttctggagtg tctgaaggca aagtattaaa aaatatgcaa ttttgttcct gttgtttgtt tgctaaatag tggaagatga tggcctaggc tactctgcct atgaatgcat acttgtaata agaatggttg tttttgtatg gtctttctaa tttttaaaCa aaataaatgt tttaaaattt ccaacattgt cttctgaaag gtaattttta aaaaatatat gtgcacattc tgcagaggcc gatcttctga tgtggatgct cctagccact aaagccatct tttgcttgta ggaggatggg tacctattgc ttcttgagtg tacactggag ctaggaatca ttctatgaac ttcattaatt ctgactttct gactgtcagc tgctcaaaac ctgtcactct nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnncccc tattttacca agagaaaaaa aaaaaagtcc gtaatatcaa agaaatccat ttatcttggc caaattaaac gagatgaaat gtgaattagc tctttttatt cttaagccta aattcaaaaa atagtgaaac ctgataaaag tcccaaaggg tcctatgagc tggtgacctg ctggaccatb tgtgaggagc ggggtgaggc tggcgatggg· ccagttccgg caggttttcc cctatgcaaa cacacaggaa caggcaccat ggcacgcatc gagacaggct cccttcattg aaggagtatc tgctctccta cttttaggtg ggttctgagg ttcaccaagc eagacaaccg acagtgtggc tgtcttcaga tgagccacca tgtggttgct cttaaccgct gagccatctc tcattatgca cgtçccacag ggatgtagtt atgtgacggc tgggtcctcg gagcgtcaat ccaccaaact tatttttaaa aaatagaaaa gcagagttga ccaagaaaaa acctctacaa tggtgtccca gaaaagggtc agacctgcta cagagaagct ggcagcacag cagagctgtg aaggagtccc agtgagcgtg ccatgatgaa catcatgaag acactacagc ttccacctgg tgtcacacac tacagcttcc gtggagggca ggtacaaggg acaaagaacc aataagttag cagcactctg gaggcaggca agagatgata aagtcccatg aaatgtaaca aatgcatggt aggcacagaa tgtaaggtga caggaacagt gtattttaac agcggttaag agcaccgact tggtggctca caaccatcca gctacaagtg tacttacata taattggaat tattctttgc ttoogagcct gtttcatgta ccttgaactt ctgattcccc gactcaggct cagtgaattt tattttttaa aaaaacactg gtgggatagt acaattgtga ttgtgcattg ctttcatatg ttactctttt atgagtgttt cagctagcgc taacttctga ttgtatgtta tattatgtgt agaagagggc atcagattcc cagaatcgca ctcaggtcct ctccctctag tcctcattgt ctacaccaag tgccaggtga tgtgtgtgca tgcttgtgtg tatccagggg ccttttcaag gtctgaatcc acctactcto cagctaagga ggtgtggctt ntggggnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn agcattgcag gataaataag actaatgttc aatgttttaa gtctacggca tattaatgtg cacagtaaca cgttttgaac gtgcgcgcgo aggtgcacac ccaaataact ctttaagcag cccttcaggc tatgacagaa tgtcataatc tgtatccttc agttttacac ccaagtcaca cccacgctgg tcctgagcaa caccactttg gactgtgtcc aaatggcttt gaggcaccat aagggcagtc attcccgttt tggaggtcag atgataatct tcttcccacc acacttgcca agggcactgc catcagagac atttgaacgc agatcatcat ttttttaact ttttttaaaa cacaccagaa gaagacatca gggaattgaa ctcaggacct tccagccctt atttaacttt ggaagtgtaa cataagcaca cagaggacaa ctctgtgaag agggtcagca ggcattttac aagctagaag ttggttaaag agagggagga gaggaggtga gtaaatctag tcgtgttcca ctaaãacaaa gcccaggaag ggggggaagg agggagaggc cccaatgatc tccgtgatac tagcagaagc cagaggcctc atgtgtggac aaaagggtgc gacaaaaagt cacacactac acagtcagat tatttttctt aacaggggtg agtgggatcg gaaagagaga tgaagacata ggagggtctc catgccaaag agagttacaa agtcagagga aggtggggaa aggtggggat aagcgagcga ctaccagata tacctttata aaaaaaatac gctcttccaa tggtcctgag taacaaaatc tgatacggtc taataagtaa ataaataaat aattctacta tgaatggagt atccaaacbg gcctggaacc tgtctccacc tcccaagtgc tcaaacactg cttcaacctt 113700 113760 113820 113880 113940 114000 114060 114120 114180 114240 114300 114360 114420 114480 114540 114600 114660 114720 114780 114840 114900 114960 115020 115080 115140 115200 115260 115320 115380 115440 115500 115560 115620 115680 115740 115800 115860 115920 115980 116040 116100 116160 116220 116280 116340 116400 116460 116520 116580 116640 116700 116760 116820 116880 116940 117000 117060 117120 117180 117240 117300 117360 117420 117480 265ΕΡ 1 325 130/ΡΤ gacccctaac ttccatctct ctggggcttg ctggctggtg ctgctgctgc tgctgctgct gtgcaaaccc agtcaagaga tggctcttag aggagcagac tttttgtctg cgcatagtaa gctttcagtt ttaatgaggt agtaaagtca ctgggctcaa tcatcaacag gacggtgtgt gaaaacctaa aagcagttca gtttacaaag ggttctaccc tggtggaaaa tatgagttga gcagggagag atgagaacag aggaggggga ccgagcacgc tgtatttgcc cttcaccctt aattgcctac cactatttct tggctctgaa ggctgaagcc caaaggcagc taaaaaaaaa acaggcagga agtctccctt cctgctgggc ctcctgaggt tttggcaaaa ttactcttaa aatacattca gcacaaagtt acagagagaa aaagtgagac agcccttcct ttacagctca cagtctatgt gaagcatttt tgaaggaaag tagaaatgag acctatcttc cagcgaagtt gcacctcacg aaggtgcttg tctccttcca ccagagtcct cctgctgagc cctttcccca agcctcattc tcagaaccat gactcaattt ctataaaaag gacccgagtt ttgttcccac gggagoagag gtaggcagat gttcagtaag ggagcctgta ccgctgcagt ggcatctgct ttgaagctgg aggtcaaggc acagtaaaca tatattttac tttaatccca gcactcggga tctacaaagt gagttccagg aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaattttcat tttttataaa aagtctccaa cttgataatc agcagtcgct aagtccgggt aagaggacca gaagttcaag tgggatgcgt gagaoacacc ggaacaagag ttaagtgcgt catctttaac atctttggct agttcatgta cttcatcatc ctctaattat atagaacata agtaaccttt atctcttgca gaattccaga gcattgtaaa agctgcccac aagacctcaa aaaaccattc tacaaagcag tgcaaatcaa gctatcccag tggtcccaag ccatgaggga agctatcatt cttacagtct caaacccacc aacttcccaa agcctgccat ggtagtgcac ctctgccagg agttccatgc ggtgaggccc tgtctcaact caatatttct cagttcctac tatgaataat aagtatatta acagcacaga tacaggacac tgggtcccat cttacccatt gtgtcgctgc agaggctggg gctgctgccc atatcctgga tttcaacacc agcagtaaat tgcaccacgc tgcacaccct agactggttc catttccctt tctccctgaa gccttgccca tctgtgatac taccactatt tcgtggcagg atccattaga attgtctctc aagtgctttg tttcccccaa aeaaagcaac aagagtctca ggtaccgtga agttcagaag cagccgtgtc ttctaaagca gcaaataaga tatacaaatg tttaccaagt aaaataacga gtttatgggg agcctcgttt aggctgctca aaaatgtccc agagctcctg gccactgagg ctctcccttc cccaactcac cgggcatgct gtagctcaag gaatgagacg gagaagatta aatagaattg acctatttac ataggagagg gccttcccat tatcactcaa taaaatcagc aagagaaagg cacacagtga cctgctgcat cttgccttct ttaaaaagaa-cagctatgtg gagggcagag agggatggca caaaggcacc gcctctcctt ttctacagtc ttctgctgcg catgtctgac ataactgagg agccggcttg atggggcgtg cgtgctagag cccaggcctc aatagccagg accacagaag acactgtgcc catagccaca gctacccagg cágcataggt accataggta tacaattaaa aaaacaaggc ggcagaggca ggcggatttc acagccaggg ctacacagag aaaaaaccaa aaacccaaca aattacagtt ataattttta tgaggctggg ggtgtagctc agtcccttgc ctgtatccca gtgctcctcc tcttcaggta agtaacagca actactgcct tactcccgta actgtctgca gagaagagaa aacctggtat atgcagttaa tttgtaaaca agatgtggta attaggaaaa aatctggtac aagagacagt tagcagcaat tgcccttcaa atcaatcagt ctatagctaa taacgtaggc tccgtttata gaagccagat cgtaattctt actagattac agoaggctcc attatggcaa gtgagctctg gcaagcattt tcttaacaàa acctgtaatc tcagcatgtg cagcctggtc tagacagttg cccaaaccac tgaaaacaag tgacagaaaa tggacacaat tacagtacct agtttaagtc acacacagct gcaagcgtga cccagactcc cattctgtgg gaagggactg cttgctgctg gatcaaaaca ggccaattca accttaggaa aacccacctt gtgtctgcaa agggctcact tcaactgttt agaattgaca tttctccttc aagaacctgc tccatagcaa caaatcgatg agagaaagca gggtggtaag gcttcaaagg aaaaggagac cttattttgc aactgacagc agtgctagtg aactgtcaca aaggcaacag ggagataaaa cgcgccaccc tgtcggagtg tgaagaatgt taacattgta tttgatttta cttctgtgat cctggagtgc ttgtagatga aaacactaaa actggtgcgc tccaactgta agttctaact acatgcccat ggaatfccatt taattgtgtt gctggagaca attatgcttt agttcatcct ggcccaggct actgacaatg ctcagacacc cagcccagtt tgagttgctc agtagtacac aagacacagt ttaaaaggtg tgtggtattt gctggtatgt accatcctga gggaatcggg gggcttgaca gatgccttta tccaaattac ctgaggtagg tgaactggat atggtcactc gttggtagag aaaacataaa aggtgaggac ggactaggca cagcccaaec tgagetetaa gtgtaaccac ggcaagcggc aggctgagcc acaagactca gacccccatc tcaaagttga cgggtgtggt ggcgcatacc: tgagttcgag gccagcctgg aaaccctgtc tcgaaaaacc catgtaccta ttctaacata gttgaacata atacaatgat atttagtaga gtacctgcct gtgcttgggg aacaggcaga atgaggagtc tgagccagcc ggagtgctca ctctggacca caatgatgga gacagtacgt tcctcagctc gttctggcta accaatcctg gcagcaaCaa gctactaatc cacttaatag cccaaatcaa atgatggcaa ttaacgcatt gtaacgcagc ggaaaaatct ttctaaagcc ataacctgtt ttgggccacc aggctctgct ggctacacac gccctcggtg acctgctcat ggcagagaaa aattcacaaa cacaaagaat aaataaatag ggaggcagag gcaggcagat caagatcaac aacgctatat taagacgata tggatcaatg taggctgggt ataattccaa tgagcaagat attatcgcca aggatttaaa ggcacccatc 117540 117600 117660 117720 117780 117840 117900 117960 118020 118080 118140 118200 118250 118320 118330 118440 118500 118560 118620 118680 118740 118800 118860 118920 118980 119040 119100 119160 119220 119280 119340 119400 119460 119520 119580 119640 119700 119760 119820 119880 119940 120000 120060 120120 120180 120240 120300 120360 120420 120480 120540 120600 120660 120720 120780 120840 120900 120960 121020 121080 121140 121200 121260 121320 266ΕΡ 1 325 130/ΡΤ cctacagtat atgcagcatt catttttgct caatatggca aattcttact agcctgggct gcgctggact agcttccaga ctttgctgtg gtgaaaggtg acaatactcc tggcttggta aaaaaagcac agagctcaca ctcacagaaa tcaagaagaa aacaagtcca cttcagaggc gacagacctc actcagaaca taaagacaca gaagatgggc gctçgggtac gctgtaacaa cattcccagt taacccagca gtgtacccag gaggtaattc ttgggttcaa attaggatca aaccacagag ttggttaaat gggagggggg ggagggaagg gtaaacaagt ttcaggctca aattttttta aagaggacag ccatgtgggg tacaggagca taaagaaacc ttaaactgtg taggagccca cccattgcac aattaaaaca aacattaatg gttaagagca cagcgcccat agctaacgcc ctcttttggc gcccgcaaac attcaaagaa gattctttca tttttttgag ctctgcagac caggctggcc ggaattaaag gtatttaaca aaagcgtttt gttgtttttt acataattaa aaatgccaat gattcactca cacaacttat atgaagactt ctggatacat tctttgtgtc agacattagt cttcctacct attgcagtgg tggactacaa ggcagcaagt tataagtgtg tgtgggcact caatattagg catcaagagc cttgaagcaa aagaaactca acatacacac acacacacac gcggtgagga actgtaaaaa gacaagccag ggcctctgcc atgccaggga ccactctaac agaagetgta gagagttgat gatatgggtc agccatgctc ageaeacacc ggacctggca tggtccacca tagtggctgc gtggctgcaa agaggacaaa agaactggga agtacccgct acagaaggag agactggtta aaactggtgc ccatcactac aaaaagacta cagagtacgc gaagcaagcc agactggaga tgttaaaaaa aaaaaaaaga aggaggcaga ggcaggtgag agtgggttcc aggaaagcca agagaggaag tggatccaag cagcgttatt aaatgacagc aagatgaaaa aataaacaca gctcattctt gttatccaaa gactagagtg agacactgct aactggagtt tgagggaggg aggcctgaag cccgaaggtt ttacaaacag tttaaacaca gactgtctag ttttatttcg gcagtaataa aatgtatatt gtgtttgctc actaactcca ggatgtaaat ctaactttgg ctgtttctga agccacgaca acaatgccaa aaaataccaa tctgagccaa aaaaaccgac aaacaagcaa acaaacagca caaaaaccaa aaggcaaagg caagctatag ccatgatact tgctggcatg actgggaaga gcagaggaga atgtctaact atcacttctg gcaaaaaaag actgcggctt ctggtggatc agcacacttt tatagtcaga aaacaacaga acagccacac gggagaagct agaatcccag gtcggggtat aaggtaagac aaaaaagaca gcgtagagaa gcatttgcat ttggttactt ttatctataa agggcagcag gccatagttt tgattacaaa cttgttaaag aaacagggct atggaggctc tcagccatct cttcaagagc actgcatgca aaatacaaac fcgctataaaa acagggtttc tctgtgtagc tccaacccag agatctgcct cacacattat acatatcttc gttaagtttc aattaaaaaa gtgaaataaa taatatatac atacttaaat acaattttca tagaaacgta ccctgaaaat gtgagtgtet aaacttgcat ttctcgctaa acctggaacc cccagcaatc ctcctgtctc agccttgtta catggctgct tcttaactgc taagccatct cagatggtca gagtttacac tcacacacca aggcttagtg taaggtgtca ggaaagctct ctcatcagct ottagtaact atggagotgg gatgggctcg ttgatggatt ctaaagtagg tagtgagtgg ccccacaccc agtcaataaa acaaaaacaa tcgtggttgg gagctgtccc agtctctgga actgatcaac gggacagaag cagactctga tcggaggaaa tctgaaacat aacagcagta attgaattgg accctggcta tcatcaaccc aaaggaaaca aaaagttatt aagccagaca tgggggtgca gcaggaggat ccatgagttc ggcaacaaag aaaccctgtc agcaagagag agagagcaga agaaaagatg ggcccgacca agttctaaat atcattttaa caaactaaag caggggtggc ttaaaaaagc aatagatgca agtgggcccg ggaagcctgt gaactgagaa catctcaaga ataccagcaa taaattgtca cacactttga atcatccatc tgcattttga tgcatggtgg gtggacttct gacgtaagag ttctcggcct cccctgaagc gtcccatggt ggtttgagta aaaaaccaaa accaaaacca actccctatt ttttgaagaa cataacaggc taacaacaac ggctcttaaa catttacaag gctctt:catc catcaattct gaccagtgtg ctcactcatt gtgtctgcca atcacaggca cccactctgc ccgcacactg ttttttcctt cttgcagtgc gcacggagac aaaaggatct cagaactgct ggggggcggg cattcaggat gcagaggttg tttatttcac aaaaataaat ctagctatct tttatgtaaa ggcgaatagc cctggtagga tgggtgcaca atgcagtggg gtcacgcagc tctactcaaa gcagagatga tggctcagtg gcttetccaa ttccagggga catggtacgc ttacctacat cccatatatg accatcttaa cctggctgtt ccagaacttg gcctctgcct ccacagtgct cttcttcttc ttcttttttt ctacatagtt ttataggcaa atatataaca ttctgtaata caataatgaa aagctttgaa cgcaaatgac ggttttcatt aaaçrgctetc ttctctatca tggggctcct gttccttggc acctttcttg gaaccaatgt gggactagaa ctctggtctt ttctaccctg attagaattt acacacacac acacacacac accactgtga aaagggaagt gcacaaaatg gtgtcctctg atggttgcct acagcaaacc agaggccctg ttattaaagg gggaatcgat ttcctttatc acccatgagt atgtgtggac aaacaaacaa ataaacgttc gcacttatgg caggaagaca tctagagtct gcttgttatg aggtgatcag gacagagatc aactcgacgc atactggtcc gcacaacatt cagaaaacag aggcgattct ggcactattg taacaaaact tcccagagca cgtttttaac cctagcactc gaggccagcc tggtctgtac tcaaaaatca ctgactgggg gagagtgggg gtttggatgt atgacatccc agaaatggca taatggctgt gtgtctgctg cgggatttac ggccagccag cgctaaccat taatcagcgt gcctataaac ccaacctgcg caaagcacag gcacaatctc gctttatgac agataggctg 121360 121440 121300 121560 121620 121680 121740 121800 121860 121920 121980 122040 122100 122160 122220 122280 122340 122400 122460 122520 122580 122640 122700 122760 122820 122880 122940 123000 123060 123120 123180 123240 123300 123360 123420 123480 123540 123600 123660 123720 123780 123840 123900 123960 124020 124080 124140 124200 124260 124320 124380 124440 124500 124560 124620 124680 124740 124800 124860 124920 124980 125040 125100 125160 267 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ acagçcatac cacaaagatc gggaagaaga cgaoacagct gagcctagtg acaggccgtg cacagcatgg ccagagtgac agggtcacag tggaaaaggg aagaaggcaa agagcaccac agggcccagc atccctctcc cacctgacag gtacaactat aaatactcct tcctagtgta gaagcacaaa cataacactg taagttacca agttgagaca tcaaacacac gtttgatcct ctctttacaa agtctccaca tttataaacc gccagaggcg gcggcacaat ggtggctgag ggtccaggga gcactagtga atteaagtaa ctacaggagc ctagacaccc tgtaaggtca tcagggggct gatgagatgg ctcagtggct gagttcagtt cccagaaccc gtatcaggca taaacatttc tatcctccaa gcacagacac aaaaaatctc tcgtggacag acagcaaaaa agcaaagcaa atccaaatat gcgaaaagga aaaccccagg tcgctttagc atccaaaaaa accgaaacag aaaaggcatt tgattattaa accattcact cttaataaaa atgttaccaa cgatgaacag gaacacaaac tggctgggca gatagctgcc agactgggct ggcatgagaa gatccaaggt gctgcctcoc ccccccccct ggaggagggg tttgacacag ggtctcactc tgctggcctc aaaactcttc tgcctcagtt ctcacccagt tttaatgcca tttaacagta acaaagaaag atcacacaga caaacatcac gatgtaggct ggtctcaaac ttgcacaaga tgctatcacc catggtggca tttcggaagc tcctcagcta ccatgggtgt gaggccagcc cacatctgta accccaccac tcaggaggct acttaaaaat aaataaaaac ataaataagg nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnggaaaaca tgtcatcttg aagggttgaa atcactgagg attttattaa aaaacaaaac tccttctgga ctgtgccagg gaacccactg ccagcagaca gtaacatggc tgcttacgca gacaccacac gcttacttat aatatcaaac ataagtacca agcgatggga aaaataacct gcacatggtc ctaacctcag ctgcagactt gtgggtactg agcagagccc tgtgcctgtg ccagggaacg ggcgggaaga gatggaaagt ggagctaggg ttgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtat tgcatgtgtg tgtgtgtgta tgtatgtatg catacaatgg ctatgcttat gtgtctttta gaacacattt ctaaaatttg gaatacttgt caggaaatgg gtaggagagg caggagagat ctttcctggc aocaactagg tcactcacaa caggcaccag gcaggaaagc ggccccacat aaataaaaac ggagcagaag ctgggcctgg gtggatattt tgtgagttcc gggtctacat caaaaactgg gggctggtga gatggctcag ggtccaaagt tcaaatccca gcaaccacat tcttctggag tgtctgaaga cagcaacagt aaaaaaaata cctttaaaaa aacaaaacaa agggaaagcc acactcgatg gcgcaagcgt aggatcacag cgggacggag gccagcctca agaccccggt ctcaaaacaa aacaaaacaa gccacaaaac accttcttct tcccaatcct tggtaatttt ttgtttgctt ttcaaggcag aactcactct gtagaccagg ctggcctcta tggattttga tttgggggtg tgtgggtgat ccaaagaaaa aacacccccc ccccaaagta aacgggattc ttgcacaaca ttttacaaat ataàgctcaa aacatgcaca ctgcaaacac caatacagca acagagacag taagaaacat gagagaaaag ttaacccgcg attccatatg agaaaaccag gaggacgcag ctgaaacact gacagagttt accaaagggt atcgtaatct gaagtttaga cacgttgaga atttaataga aggggaatta aattattggt aacagaaaag aaatacactt gtatcagaat tgttgtctga gcagcaggat caagtctgga gaagcccctg acattaaaca ttaaataaga aagacggatt gtactactaa gataccaaaa ccaaactgac aagggcatgc actgctcttg cagaggacct gttcgcccac ctgtaatgta ccagagaccc acataaacat aattaaaaat aaatcttaaa atactgaacg aaatctaatc aggtagactc taatacaatg caaatccaga cttatcccag ttcaatcatc ataattcacc gtattagcta taaatacagg gaaagcattt gacaacattg acaggagaaa gaagtaaaat ctcctcaacc cagtggcaca tcctgaaacc ccagcaccca ccaagggtaa gaggcaccca aacacttaat gtgtcactta aatccgtaat taaatttctg tgtggcacag gctagcctga atggagtcaa ccagagtgag gggaaacaat catgagccac caaggttaaa cgctgcctga aaagaacaag acaggtgctg tttgagacta ggtctctagt aaagaatact tttgccatca agatcaaggt agaggcagga ágatcagtag tacaaggtca aaggcagcac gtgagccagc tgtggaagca gaagcaggaa gttcaagcca cacaagagcc ttggagagag ggnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn cccattagac tgctgaagag actgagaaat aatggctaat gacaaaactg cttaaggaga ggagtactgt gctcccttca gcattaacta cccaacttca aggataatca agcttgctac acacttcctg tatgctgggc atcacctcta tgtgagcgct acagggcctg gccaatgaac agtaatgggc aatccactcc ccagacactt agaacggacg tgactaagtc aattcacaga gaggacgctg ctcaatgggc agagcttcag cccgatgacg tgaatatggc taatgccata gtatgtgtat gtggtgtgta tgtatgtgtg tgtgtgtatc caaaatggtt ataaaaatcc ccacaagtaa aaaattttaa gtaatcttag tggggaagct atctgagccc cagcatgaat ggcttagtgg ttaacacaca catggtggcc ccaggatctg acagcctctc ctggcctcct ccctgcaggt aaaacatttg tactgaaact aagtccttta cctccagcac cgggaagcag agtaaaaact tgtcgccaag taaaacaaaa tgggtaagag cacccgactg ctcttccaaa ggtggctcac aaccatccgc aacaagatcc gtacttacat atattaataa ataaatcttt aaactcccac taaaataatt ggaaaagtcc gtgatcacag tattctgtag gtaaggcaag gctacacagg ccggtctggg ctacagtgtg aaaaagcgtt cacattatca tatactcaag tgaatgctat cgaatttggt tacttttttt ggtttctctg tgtagccctg gctatcctgg actcacagag atgtaattct ttttcaaagc accacaggga cacttgggcc ccaaaccaaa tgaacatcaa ctgtatataa aactaacagt 125220 125280 125340 125400 125460 125S20 125580 125640 125700 125760 125820 125880 125940 126000 126060 126120 126180 126240 126300 126360 126420 126480 126540 126600 126660 126720 126780 126840 126900 126960 127020 127080 127140 127200 127260 127320 127380 127440 127500 127560 127620 127680 127740 127800 127860 127920 127980 128040 12B100 128160 128220 128280 128340 128400 128460 128520 128580 128640 128700 128760 128820 128880 128940 129000 268 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ teatataagc taagtagcct gcaggtacat ggttatggaa acagctttat catacagact tctttcagta gatgccattt gagaaaaaaa aaaaaacaaa acattctttg gattttcaac atgtaaacga aaatatgtta aatcttaaaa aaccttaaag cagacgccac tgctctttgg ggtcagggaa gcacggctgc aggcccccag agcagcacat tccctgaggg aagccttgtg cgtcctcacc agcaccaaga acagccaact ataataagct cataaaaaat cctgaaaggc tgcccaagcc tgaaaatctg atatgaaaac agagggcaag acagataaaa ggcaaactat actttaaaag tcaattccag ctatctgtgt ggaaggactt ctcgggacgg actatctgct aagaccttgt gggtgattta aacagcgtgg agggcagaaa aagaaaggaa agtgcaggaa acaatggcaa aagctcctcc tccgtggcct ctacacgcat ccaagcgata tggagggagg agggaaggac actatacaca ggtaccaatc cccacgaact agaaaacaca gcttttacta actagtctat tttttttttt accttagcta gtgtctttct tatgtttggc ataatttctg ctctgcatta aataaaccta gtgtataaga aggcaaatga gtaaaggtaa agtcagttaa tgttcatttg ttttgactgt gtggtgtgca tgccaggcgc attcgtggag gtcagaggac aaccgcatgg agcaggtctt ctccttccac caccccaggg gtcgcagggg tcccagggat ggaactcggg tggtcagatt tgcttggcaa gggcttcact cactgaggcc ccccaagggt cccaattcac ctgtttactc taatgtatat atttttgaga cagggtcttg ctatgtagtc caggctagct ttgaactcac tgtggacact agctggcctg gaggtctgag tgaacctcct gtttccaccc aagtgctggg acaacagaca gcaaccatca aggcaaaatg aagtcttccc ttcacaccaa agtggcttcc tatgaccttc tcctgacaac cccaaacagc aagtgcccgg atatgcactt gcgtttctct ttttttactt caagctttga ctccactttc ctaaaaggtg tttactaggc tgaagcacac ttcaggagac accctgtagc tctggagtga ccggaaacac accagctctg atgcaaaaac aaaaaacagc gacggggatg gggcaaaggt ggcttgtgct tctgtgcaat ggcattccct gacgcattac ctcacaccag atacatacag aaaagacaaa ggtaagtcct cactcagtgc gcgcatccac cacacccaaa gcaagcattc aacagctcag tggcataagg ccagcattat cacagcgcgg acaaacacaa agccaacctt ctctttgagt tccccaaggt acatagtgtt ctgtccaagg atggcctctg cagactcctg gaaacacgtc acccactggt tctcttqaaa atctgcaata tttgcctaaa aaacacaact ctattatttc agcgaataaa taacaaaagg aagacacccc aaggacgagg'gaagattatc ttttcctact taaagtaact tccaagggag aaatgacatt gccgccacac acagcccccg actctttggt taacggttcc cccttatgag gaagtattca cttctggtca ccccgtgttt cacttttagt acagtatcta atgaattaca ggagccactc aataccttta tcataaagtg ggctttgtgt taggtgattc tgaccaagcg taggctatgc aaatgctctg agcacactta ggggaggctg ggccgtgcta gccctgcCac atgcaggtaa tgcCacgcca gtcttacgcc acaggaagaa gcttaaaatg tggtcgaact caatctgcta gaggtgtgag tttagacctc gggagacggg ccaagtaaac ttccgcagat gtcggagcat cagacagagc tgtcccctcc tgatgcaaaa ggcttcgcac ggcaagtttt taatgagcct ccatggtaat agtgggttcc tctctctcct cctcccttat caatatgctfc gacatctttt agttttttga gacagcaaat aacgtagccc aatctgcccg catacttact gggcagccac agctggccct gaactcctcc tgcgtctcct ttaccccgta acaagtgctg gggttacaga catatgccgc catgttcagt gtaagtgacc gctgcccagc agggcaaagt cttccttatt tacaaagcag cagccaagcc ctgcagccca ggcctatctg atttcctcag cacaccccca agggtctcac cgatggcagt cagtccatga acaccgtagg cttctcacaa tccacactac tcaccgataa gatcatgcgg tatttgaaat tgggsaattc ccggtcacac ttctcacagc ggtacaaccc attctgctgg tcaatcactt tcttattgca gtcctgggtt gggcaggcct ggtacataca gttctctttg cggagaaaca ccaccgctgc cacagtgctg aaatagtccg cctgcaggcg aaaggaagac cgccatcagc aagcaacaca ggtctggaac aggcaactca aagctgctct tccttgcaag tggtgagcgc gtgtacatcc tagctcccac gctcacgagc gatatgcaga atcactaact ctggtttcag aaatcacacg tgctacacgc agaacccaaa gaagtaacaa accggcactc acgcacctca ctttttccat tttggagacg gcggctcact agctagcctt gaactcagag tttggtctgc ctctgtctct atagagtgcc tggctaccac acctgggcac tttgttttcg agacagggtt tctccggaac tcactctgta gaccaggctg gcctcaaact cagaaatcca cctgcctctg cctcccaagc gctaggatta aaggcatgtg ccatcagcgc ctgacccaat tctttttatt tatagttatt atttgttaca tatgtgtatc agtgtgtatg acgtccatat gtatatgact gtgtgcagtg tgcacatgtg tgcaggtcag aggacaactc tcaggagtca gttctctcct cctactgtgg cgtttgggga actcaggttc caagatagca ggaaaagtgc ctttaacagc tgagttatct cgacactgac atgtaatgat tcagtgtgca cacagtggtt ttgcatgtag tcatataaac cacagcgtgc atgtgcaggc taggaaacaa cctgtgggag ttggtgatct cccctcacca tgtgagtgag ggagaggaac tcaggctgtc aggctcggtg gcagtgcctt tactcactga gttcccttgc tggccaagca ttatttataa gatggtgatg tctaccctta tctttaggga tcagtaagtt tttccccaag acaagccaga aaaacctttt aggcccaatg agccattcag tcagtctcta ctgccactcc tcaacctgtc tgtggggcag gacaagccac agacaacctg aagacggaag gtgagccaat aaaatcttac tgacagtaac agccagccag ctcacaggct tgacaggcaa ttcttggact gaatgcgttt aagagaatgc agaattaccc atgactaaga tcttctaaat ggaaaaatgt ctggttaagt aacccagcaa ggagctaagt 129060 129120 129180 129240 129300 129360 129420 129480 129540 129600 129660 129720 129780 129840 129900 129960 130020 130080 130140 130200 130260 130320 130380 130440 130500 130560 130620 130680 130740 130800 130860 130920 130980 131040 131100 131160 131220 131280 131340 131400 131460 131520 1315B0 131640 131700 131760 131820 131880 131940 132000 132060 132120 132180 132240 132300 132360 132420 132480 132540 132600 132660 132720 132780 132B40

269ΕΡ 1 325 13 Ο/PT cacgcaagcg aatcatgtca cctgcccccg tatacagacc aggcatttgc catttaaaga agtggaagag cgaatacata agctggttgc ccaggggatc tgcaggatgc gtggatttga tggaacatgc gaaatagctt tcaaagccca tccgttgtct gatgtttaat ggatcgagca aataatggag tccaagagaa cagtggttaa gtggtggctc ggctacagtg aggaagagga gccagtctgt gctacattat caggcctgag aactcaagcc cctggcccag cggcccctcc caaacctagg tgtgctgtga cacctagtcc ccctcctcct aactgggctc cccctccccc aagggacatt gcccaatcag ctcagtgaga taaaattgac gaaggtagca ctacacgatt ccaacagagt aatccgtctc çacggctcat ccactcttag gaacttgtag tgtgatcaca ggggttgtgc gtctctggtc agacccacac taaatattgt ctgtttttct ggtactacag ctcaatcctt cttaaaaagc tgggaatgac cagCgacaac attctacccc caçcgcgcag taattgcttt ggctttcagg ctcaatagca ctctggttta gtggatacct agtacctaca gacccccacc agctgttatc cactatgcct gacgaagcta cttgcttagc agaaggctta ttaatttccc tgatgtcctc ctcgggccac gtttggtccc atgctctacc ttaggaggat atttaaaagt gtctttagtt tctcaagatç cacagtgaaa cagtggcgag cgcaggttag gagcactgac acaaccatcc tacttacata ccactgagca ggcatggcag gtccctctac gtcccaggta cctgccgttc gttctcagat actcctgtgg ggagaaagaa atgcaccagc actcaagaaa ccacccgcaa acattgacag caccctcggc tttgtttcat ttatagaact atttgtttat tatacttctt aggacaggct ggtggtaact agcggtggcc accactacta caggagtgaa agccaagatc atcaatgaca gttactgaca tcagagtctg agacttctgt cactgaggat tattggttta tgagtctctt ctattcaatt ctacacaaca tagatatggt aatgtacagg acaacagaag cacatcagct ctgttaaagc ctctggctct ccaccatctc aaggcttggc ccagagcccg gctttgcctc aaatccagat cggggtctca aaattcagag ggctctcact gaaaccagtt atgcacaagc gaggaggggg agtccccaca ttctgacctc tatgctggct tgggacccae cgcaaattaa gcctaaggaa ttgagtgctg taagagagca tcctgtgata tgagacagtg cgatattttg accaaggtag tgctcttctg gtaataatat taataaataa cacattgaaa caggaattac actggccgtg aggacacagc tctgggtgtc ttagcctcat tcagagatgg acaaacgtac cccgagctgc tgeaatgccg ggtcagacaa cagccatgaa ctcaagcctt gagtctgcca caatcagaag ggaaatatca gaccatctat agtggcagag aaagctgccc caaggcaagc gccgctcaag cagagccagg taaagatcgc gtattttgtt gtgaaatatg ggagaaaaac cctacaatgc gccttaagtg catcagactc aaattctacg tccttaagct ccctcaggat gtggaggttc caacaaagag atgtgaccag gcccacagtg cttgccgtac ctatgttcat agaagacata aaaacagctt agcacagata tgaaccetgc ctagcctgaa ctgtgtagtc acccacttgc ggttgtacca tagacagctt tgttggtttt tggtggtgga tggtggctcacttggggaca caggggtgaa aaggaagagt aaacttaaaa cttctctgcg tcacgtgttc actgggtgag gcattataag aggaagaaaa ggaatacaat gaagaggatc aaggtcatga ctgatgccct ataaatcttt tggaagatgc agtctgttcaactgaaaagccctgacctgg tggagcgagg gcaaagtttt aaacaccatc tgctgacagg gccccctcgg ttgctccttc actgccaaag caaaggcagc caccccaatc aaaatgtttt gcattatctg aggttaaatt tggctaatct gacagtgagc ccacacagga agtcacatcc tttaacttca agacaggcag taatccttgc cgggggacag aacaccttaa caaccaacaa aacgctagct acagacaccc aaaacaaaaa acacagctgg tgggctaggt gaagtgctct taacaagctc tccattgttc ctccagagac caaactgaag ctggcgggat caggggatcg atgcetegaa ggcagcagtc acccctgagc acaggttttg ttcaaagata ctggctgtcg ctcccaagtg gaggagcaaa tggggctgtg aaccctcagc gagatgggttcaacatccattgcgactcatggtgcttgct ttgacttcta tttaaagaggttttcaggtg tgtatgccca aagtaactga ttgctgtgga cctatattgt agaaataaat actgggctgg gttcaaatcc cttctggagt aattaaaaaa aactgaaatg aaacccagca agcaacgtgg cactaggaaa ggtgcgaggt ccagttggtg taaggcttgt aacttcacat ctctcaccta catctcgtgt taccacagac aacagcaagc accaaaatga catgggagaa ctgtgttaga catttatatg gaaggaaaag ctgagatgaa ctgactccct gtcagaggac cacaggcatc cctctcttat ctgggtaggg acatgcctgt tgtagacaca accagaccaa atcagcacag cagatggatg tgaggagcgt aaaccacaca aaagtatttt tccaaggcag tcctcatctc tcactgtact tcagcagagC atgctctcag caaggtcagc tgggtttgtt gaagtatagg cacatgctgatgagttgcac gtttatgtte ggctacctac tagcgctctc ttgggattaa acaatgtggc ggtgtagctc gtgacagaac agaggttaag aactgcagtt ttggctcaca gccaagctgg tacactgagg aagctgtaga agattcagac gttctggctg gagtctagcc tgacagtgat atacgaggac gattcaaata agagatggct cagcaaccac gtctgaagac aaaaaaaaaa caataccaga cggacctgag taccctggag caggtgtaaa accttgtctc ttgccccctc ccttctgagt ccttctcaaa ggtctcagca ccttcaatgc cctttcccta cacactggca accagatgaa aatcttttaa gatttgcatt aaattattat aggccaggga aacacctcaa aaggagactc aaggtccata ggcaaccaaa agtaaaaggt ggggtatact ttgtgatttc caattaacct tgccatggct ttacacagcc ctctaagtag gaaatatgag tgcccaccct ctttgaccac agtttaatgc ctgagtgctt ttaccgagtc aagaaagtac cactgttctt acttagattc ggtttaagag aaccactcca cagtgtccag aaaacctacc 132900 132960 133020 133080 133140 133200 133260 133320 133380 133440 133500 133560 133620133680 133740 133800 133860 133920 133980 134040 134100 134160 134220 134280 134340 134400 134460 134520 134580 134640 134700 134760 134820 134880 134940 135000 135060 135120 135180 135240 135300 135360 135420 135480 135540 135600 135660 135720 135780 135840 135900 135960 136020 136080 136140 136200 136260 136320 136380 136440 136500 136560 136620 136680

270 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT agccacgaag ggaccgagag gctgccgaga aagaagaacg acagacctcc cacacagcga ccctcaggac accttccctg ttcactgtga aagaacactt gcaagcacgc ctcaaccctg tgtgaaatcactcattattg cttcagggcg ctcagtccat agttcagcct gaaagaactt agggagagca ttttgacagt gctgcagaca aaacaaaagc gcctcgagat atcccggaac cacacgtgtg aggaatagct gaagcccaca cctaagtgac gctttcaagc aacttaacta tgaatctgce ggggagagag tgttttaccagaggtactgg agaattgagc ctggcccctg ccgcagacta ctcggcaggt agtctctgca tttaggagca cagaaggaaa nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn atctctatat aatcccattt tctagaagag ggcagcttat ataagcgcag atggttgtga tgccttceac cttagtactt ttctatcatt gcgtgaagta cccctgtgtc tgtgtgcaca ccttgaaata gatgagatgt cccctcttct gcagtgctgt aggcaaagtg tttgtttgtt tagaattcta gcaagatCctcaggtattct cttataggcc gctccgtcca gccgtcaaac tacaggatgg cactcgggaa aggtcttcaa tcggctcagt acatgtccafc ttttaatcga tgtaagagcttagtcacgca gacgcaccta aactgaactg aaggtcatct ccctttgaga caaagcccgc gtcagctctg gtccacttgc cattagaact tagacaccat ttgcagaatc agctcagcca gatctggaagcctcgggatg catgcataca taatattccg ggaaggcgtg ggcttacttc tgactgcact aatggctaaa atcacagtta ccccaaagct gcatgtatgt atcactgaca ccaagtcctc cattttgctt gttaaagctg atcaccccag gacggagact ctttatctca gccacaatga nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn atgaatgagt acaggtggtg caatcagtgc ttttaattgt gcactcatag gccatctgat ctagaattac tcaacatagt ctctacaccc tgagttagagtctgagacag gcgctctcaa acagatttct ttttgaagga acagagaaga actctaaggt cagactcatatgtttgtttc ttgttgatta tcccatattc cactgagctg tctgggatgt ccgaagtcag ttgtcagcct ttttatggag ggagcattgo atacttactg gcaaggactc caaatagata atcttcatag cccatcaagg tcaccceaaa ctagtgcgtc tgggtaagtg catagtcatt agtaatacac cccacaatgc actcaacacc tcattgaaag gcgctgctag cctcggagca ccacatatac cccgagccta acaaaggtgt gagaagacaa cacgaaaata ataatgaaac ctgaactcca acagtcagga gttacttttc accttaccca agatatctgc ttgcccttcc gtgagcatca cgggagtcac tcaaagaaca taagtaaagc agtagctgct ggcttcaact atttacagtc tgtctgaccc ccgccatgtt nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn atcctgtagt gtgagccatc tcttaacccc tttaaatcac aggtcagaga atgagcacca agtatatgca gtaaatcgga aggcttcatt tcagacaatc gggaggattc ccatttgttg ccattttgtt actttctagt aggaaacagg aacgtgcgtc accagtccat ttcttcttta tattcacaaa cttcagaccc tacagcattt caggattcac agactcgggc gcaaatcaaa aagagtcagt actacaagaa gatagcacaa acatcttctctttctcttag ctcttgcaga ctcctctttacactggagac tttagccttg atggccatct Cttaacagcg ctgcaaaaga agccttccaa gtcttcttac cagtagctct gccctcgctc acagtccaag agttacattt cagttgtaag ttcctgtgcctcgccccaccattcttacat ctaatattct atgattcagc gctggtgcca tgtcaggcaa gacaagctgc tgtgctacac cggtatcatg ctgagtgtct agatggttat gcgagtgctc ctagtgagta gctccttctg gtgcccctag caccaatctg tgtgccccagccteggagct nnnnnnnnnn nntttttatt tatcttcaga aCgtaattgc tgagccccct gtatatgttt tgtaagatgc agtggacttg attagctgct gagcactcct gggacgtgtg agtgctctcttcctgttgga ccatttcaaa tgttcccttc agttactcgg aaattccaag caaccagcagtgttttgctt ttagtcggat caaaagactg atagcagcag gtctgaagaa aatgacagtg tcctttgatg cgcacgcaca caatgtctgt gctgcaataa ctccctgagc cccacagagt1 caacttctct ttccaatgat aaacacggca aaaaatcacc ctctctaggt tcacagggaa gágaactgtt ggccaagtca actgtgctca cttgttcact gatttcaccc tcaacagcga tgtaaagaga tcaagctatc ttaacacata aacctggcca aagttattct cttatcaaaa gggtcccgag actcttcctc aaaatgttcc tatgttacag aggaaattag cgtgacaaga gcttatttta gatgcctgag gtgctactct ttaaatgctg taaatgatca ctggaggcaa caatgtaatt tattgctaca atagcatcaa gagccccacc nnnnnnnnnn aattatgtat cacaccagaa tgggaattaa cccttttttt ctgtatgtag ctttggagct ggtcctctgg cagccacccc tggtgcaaag atgccagcga gctctgagtg tcacatagtg tacagtgact tttcgtcaca tggaaaagga aaaaggagta ttgaacaagg tggttagttg tggatttggg tttatatgtc caagcttagt ctgatgaaca ctggatgaga gccatcacgg catcactgac ggactctaag ccgatcatct taaagcccca tgtggtcacc gttgttcgac gtctgaaaca gggacgaaag actctttgcc caccgatccc ggacagaagt tgttagcgat gggcaagcta tggctctcac tcaataaggg tgcagaagca gagcaggcca ccctcacagg agctctggta aaacgaggga ccctagttta ccagcctttg catttttaga tgatgggctg acgcccgcaa aacaagtcat atggataaga tttctgatac ggaagaagag cgtgtgtggg gtgaccagga gttggtgctg agcagtctct gaagccctcc acccgccctg agagcgctgc gacgcgtccc aggtctccaa cgnnnnnnnn nnnnnnnnnn agatatagat gagggcatca actcaggacc tttttttttt ctatgttcac ggacttaaac accgccttgc ctcagtcctc attctgtgtg tgattcattg ggtctccctg catagagccc tcagagtctt aagacctgag caatgatgct cacagatgct cggaagatag ggttggttgg aaaaatgtag ctgaattttg ggccctttgc ttttagctta 136740 136800 136860 136920 136980 137040 137100 137160 137220 137280 137340 137400 137460 137520 137580 137640 137700 137760 137820 137880 137940 138000 138060 138120 138180 138240 138300 138360 138420 138480 138540 138600 138660 138720 138780 138840 138900 138960 139020 139080 139140 139200 139260 139320 139380 139440 139500 139560 139620 139680 139740 139800 139860 139920 139980 140040 140100 140160 140220 140280 140340 140400 140460 140520 271 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tgctcctatg aatgcctctg caggtgaatc gatatgtagt aaaaagaaag agaaagaaga tgttaacata tttaaattat tgctggccac cagatgtgag ctcttcgcct gtcgttcttc gaactgcatg tagagtcaca cagtgttctg ctgagtcatc caccacgctg ctgagtcatc ctgtgttatt cagagatctg attaaaagaa gggaagaagg acgtgagctc gctccacgct ggttcagagt actttccgaa tgtaatggtg cccatggaaa ctcaggctca ctgcagggaa catacacata catcagtcta atggagaggg tgcaatttta gtaaaagtaa tcataaccag tgtgagaatg ccactctttc caagtaattt agatctaata aatattttta gggtcaagcc tgaaagaatg tttgttagta aagagttgca cagccccata aacagcctag tgactttggc atccttgggt caagtgggcc tgagttcagt tctgacctca cactcgggag atttacagtt tcagtggtag agagagagag aaggaaggaa gaaagaaaga gaaagacaaa gagggcatag cctagcaccc actactgtgt agtaatctgt ctagcctaga ttagtaaata gctgagtttg tctgagttca aagactctgt aaagaaagaa aaatgagtgg ctactattaa tattttatat cacacataca acacgcctct ctacaatcaa ctggccagtt tgcacttggt ggttatgtat gatttaactg tctccagccc gatttaactg tctccagccc ctaactcttg tatgggctta tagagtgagc tcaggagttg tatgagaccc accacttgcc attgtgcaca aaatattaaa taagaaagta gttgcttaat cgagtgctta tccaaaaccc attttaaaaa ggctacacaa agatgcactt tagagagctg taaatgttac tgaagtaccg tgtttttctt ccttcacgat tccatagcta ttggcataat tgtacagcca tctgagtgac tgggaatgct ttataeattt aaaatatatg atctaccttg tatggtggcg tccgaaagcc acgtcactca aatgagatgg cttcagattc gtacacatgt gcagaggcag atataaagaa agcgcttgcc agagagggag ggaaggaagg aagagagaaa gcaaagcaaa atcagtgtta taccgcaaaa actttcacta tcttggtttt acacacagag gctaggtttt gtggcacttg aggcagcctg ctcaataaag agaaagaaag atttgccata caacaacaaa gtatggtgtg taggcagtga cctaggccta gctctcccaa gagcgcgcac acccagggag gggttctagg ctgagtcatc caccaagctg ctgagtcatc caccacgctg cttccttgga aaacaagaat ctaggagttt aaggctagtc tgtctaggag taacacgcat ccctgtatct gctacatcat tttggcttca gaaaacaggt ctgcccttgc tcttttggcc taaaataaat gaccttgtct cctattccat ctattttctt tttggaaaat ttaacatttc ttacaaaatt ttattgtacc actctgtgtt atttggcatt gtgttttgtt gctgaattgt catttcttaa atttaggggg gtgtggtttc ttaaatatac ttaacctcgg ttcctggaat tgtgcacaca ctccatgtat tgcaagataa catggtacgt gaggatctct actctgtttt tagcaagcgc agggaaaggg aaggaaggaa gaaagaaagg actaaataaa taatgcttac tatttgctct gcaacataat atttttcttt aactctcttt tagctagcca cctttagttc gtctacataa taaacagcca aaagaaagaa gcctagtcaa tactttacac ggaagctgtt aggttctttt tgtaagcagc taaacgtgtg aagagtatgg cccagaagag aatcaaaccc tctccagccc gatttaactg tctccagccc gatttggaag accctgagaa atgtccaact ggcacactcc agtcttagct aggagaaaga gacgcccaag ttaaaagtca ccactctaca gttttatggc aaaaataaga agagaccatg tctgcaggca cttttaaaat caagaagaaa gaagctgcta tcttttaaag atagagaagt tgcttctatc gggataatgc cattttctca ctgttacaga atgatgctat tgggatgaat tctcaggaaa gcaacactgg ataggaaata ttttcctgtc tgtatataag gttacttgag tccagctcca tacacatttg aaaggcagtt caggagagga gtgtagtatg gagttttagg gaaaaacaaa aaggccctgg agagggagag gaaagaaaga gaaagaaaga atacatacaa ctagcatgcg gtcttgctaa gagaatgttc gccaaattga atgaactcaa ccttgctagc cagcactcag caagttccag gaatgactta agaaagaaag actagatttt taaccatgac gcagagtggc gccaagacaa accagttctg cagaaggatc gttttcacct ggcatcatat atgtcctctg caccatgatg ctgagtcatc caccacgctg cagaactgag aattccttct cttgatctct tatgttccaa ttgtgacaag aaggggtaaa gtttccgttc atagtcaacc aacttgtaaa ctttgcatcc caggagggac gcaggcagtg accacattaa gagctctaga gaaatgaagg ttttggtgat taatgcttgt ataaagagta cggccagcca tgcacttact cagtattaaa gaagaaatgt aataagcatc tagcacaaga ggactagtta ttattattac tgctcatata ccctagttta gcatatgtag aactgctctt agggatgcag gtttttaatc atgcaaaggt ccaacccctg cacatgcaca ccagcctggt acaggggttg gttcagtcct ggaggagagg aagaaagaaa aaggggaagg tatattaaat taaaactctt attatattgc actatcccac tgggtgaaca gtttcttatc ttacaactag gaggcagaag cctggccagg aatattgcta aaagaaagaa cttggttata aagctatatt agttggctac gttaaccaat ggctcagggt ctgttgcagc acatttatgt cccctggaac gaagaacagc gatttaactg tctccagccc gatttaactg gctttgaaca attggctttt gattttatat gcttcaggaa tttgaggcta gtgaggtgtg ccagccctgg cttggaatta agcccttctt taaatgttac tgcaaagatg ggtctcccta cacatgcaca acgagtttga tttgctgtgg tatggtactt tgttttgact aaaaaaaaag gagtttttcc gttttgtagc ttttcagctc acttaattta tttctgtata gtaaagtgtg acatccattc atactattat gttcaatttc gtctcacttc gtgaataaaa gcagagaaca tgcctctggc ttaggaactc ctggatgaca cgagttgtcc gaagtcccag ctacaaaacg gggatttagc caactctgga gaaaggaagg gggaaagaaa aagaaagaaa tttaagactt ggcttctaaa tagttgtcag tcctctgtca agtatttcag cttttatgat 140580 140640 140700 140760 140820 140880 140840 141000 141060 141120 141180 141240 141300 141360 141420 141480 141540 141600 141660 141720 141780 141840 141900 141960 142020 142080 142140 142200 142260 142320 142380 142440 142500 142560 142620 142680 142740 142800 142860 142920 142980 143040 143100 143160 143220 143280 143340 143400 143460 143520 143580 143640 143700 143760 143820 143880 143940 144000 144060 144120 144180 144240 144300 144360 272

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ctccagaggt ttgtttttgt gggtttatta tttggttggt tggttggttt tgctttactt ttttgttttt aatttaatgg actggttcca agaaactggc tttgaacttc tggtcttcct cacgtgccac cacatctaac aatatctggg ccagcattac tttgactctt catagtttct ttaagagttt gatccagggc tggagagatg ccagaggtcc tgagttcaat tcccagcaac gatctgatgc cctcttctgg tgtgtctgaa taaataattc tttaaaaaaa aagagtttga ggatcataaa ttcaaggtga gcctgggtga cactgctgta ttcatttcct cattgatctt cagaaggttc agtattcttt ttttcccaat ttatctgaga tgcagagtcc cctttattcc tctcattcaa ggcctaacac tgaggacatt ctcttccatc tgggtcagta tgaagtgagt gcagtggaaa atgagctcct ctctgttctt acactgacat ccacccagac ccattctctc cacaaacaat atgtagttga caagaagtag ttccaatagg ccagcacttc tgtgtccata gattccaaaa tgtgtccaga tattacctcc caaagacttg aaagatggct tgatggctct acatagcagc tcacaatagg ctataacgtc cctctacagg cagaaagcac agacatacat aagatattaa ataatagccc acgcttgagc gtcatcatgg gcagtgtaaa agtaaaggtg agctgactgt gagtggcttt cttctcatcc gcattatatc cgtggatttt aagttaggaa tagtgcacgc ctttaatccc agcactcagg gagtttacag agagtgtcta ggcagccagg taaacaaatc agatctgtat ttcaggaaga aggtccttaa ggacaggaaa gtattccaca ctggagttaa ggactgttgg aatagttgaa agaagaacaa gaatctatct gggcatggtg actgaggcat gctatgtgtt tgtggctaac gagctgctac taaaacctaa aaaacaaaaa tttttaaaaa aagagtgggc agaatgtctc aaaaactgct gctgctgctg ctgctgcata taaattttgt tgtatacttt agctgtgctg tcattttaaa ttggcactgt acagaaatta tcatttttcc atttatacag aagcaatgta ggtttgatta cagaaactat caaagtattc gactgtagat ccaaaggaca agtggagaaa ccctatattg atcatctctt ttacttctaa gagttccttt catcacttta gatatataat gtcatctctc tttcagatga gaaacaaaga tcacacctag cctcttactc actccatgaa aatctcacta tgtagttctg gttgtcctag actcacagag atctgatagc ctctgcctgc aagccoagca aaatttaoct tcttaatttt ctattgagcc agtcatggtg agacaggctt gacaggccta tgggttcggg gcagcctgat agggttaaag ttttgagaca aaactttgtg taataagaca aatcagacat aatattataa cactcaggag gtgagatcaa tccccagcat aatgggaggg gaggaggaag gaagagagaa tgtaatttaa ggcctaagct ctcgactgaa tcatggtttt ctgtcttcgg tacatagtga tccttttgtt ttcaggcatg tcttaaagac gaaagactgc agcccaagat gatggtgcgt ctccaggagg' caagacagac catcagtgat ctggtgcttt cctcttacca gattctgcaa caagaaaagg agactctccc agaacccatc atagccctgg gggaagagaa cacacagatt gtgttttttg tttggttggt tgtttgtttg tttcttattc atttttttat ttctttattt tgtggccaag gatagcctca actttgtagc tcatctacct cccaagtgat gggattaagg tttctttatt ggagtttgaa agggattcct tccagagtta ttacactttc atttgttaca gctcagtggc taagagcacc aactgctctt cacatggtgg ctcacaatcg tctgtaatgg gacagctaca gtgtaatcat ataaataaaa tccatttaca ctggacttct tgaggcagca actggcagaa gtggcagaag ctgtgtctca cagaggtttg ctaacgggaa gtaagtggaa tctattcagt ctttagtagt agatccctca tgtgaccatc tcgttgtttt tcagggagtg tcactgtgct atgccaatcg ctctgcagcg attgaagaac ctggtgtcct gcctgtggct ctgcacacat tgaaatcaac tagcttgcaa ttctgactca tgtcacctct cataggtgac ctatgtcatt gtccacagtg catggatttg tcagctagat gtgctgctga tagtatttta ttcgtttgtt tcttctaaat aagccaggca tccagaggct gggtttgatt cccagcccca atttccaagg ggtctgactt cctgttctgg gcaggcaaaa cacataaaca taattgaaag ttattcctct gatgatacag ctctcctgaa ccccgccctg cccaggggca tcagtgaggt cctaactgct gcaacatcat caactgtgga atgacaaaga'ttagatctat ggccaggcac aagcagaagt aggtggatct ctgtcagttt gctatataga gaaattctat ctggaaagaa tgcctatgag ctgtttgaca tgtgtgatag tgtgtgcatt ttacagaaat tggttataca tgttcacact cagtgttctt caaatcaaat atgcacaact gtattcctaa catgtagaag ctgggctaca tagtcaatat tggacagtca tctaataatc tgggatttta tattttcctt tgattttgtt cagatggcca cagaacctag gcacacagct aatatttgac tatacgtata tcaactttgg aaaaaaagta tcccagttta acagccatat tagtctagac acattaaact ctgtattaaa tattcagtct tatctacagg tctaaatgat gaaaaaagat tcaagaatct aacttaggaa gaattttccc tttatcccct taatagtggc catttáttga acatacccag ttatctcatc ctaaaatgac ctgttgatga cattgaaaaa tctaacttgc ctgcataaga tattcctttt ttttttttcc tttgagacag aactcaatat atagaccagg ctagcctcaa cgagtgctag ggttaaatgg atgtgtcacc ctaagacgtt tctcctctta aaaaatggaa aatctttaat ctcagcactt aggaggcaaa ctatagagag agttctatgg gttaaagttt tcaaaaacaa acaaacaaag ccagactgct acaagtatta gtgtcactca attaaaaagt aatgagggga ggaggggaga gaaggaaatg aaaggaaaga tctcaaagca gaacacagga gttgtccact tttaatgacc cttttcatgc agagtggaaa ccaagggtca tcctggaatt atagtggaag caggtatgca tgggtatcct aagacagaat gcctggtgaa cctggggaga ctcgaaagca gcctcactgc caagccaacc aggaatgtcc agcatctgaa aataaagatc cctgcagctc tcaccaatgc cttcgaggat tctggggcct ccctctctgt cagcttatgc 144420 144480 144540 144600 144660 144720 144780 144840 144900 144960 145020 145080 145140 145200 145260 145320 145380 145440 145500 145560 145620 145680 145740 145800 145860 145920 145980 146040 146100 146160 146220 146280 146340 146400 146460 146520 146580 146640 146700 146760 146820 146880 146940 147000 147060 147120 147180 147240 147300 147360 147420 147480 147540 147600 147660 147720 147780 147840 147900 147960 148020 148080 148140 148200 273 273 acacaccctt ctggtgaagg cattgccttg tgtctgaagc agccaggaat gggctgctcc agatttgaag acctgtttac agtgaagaga tatggaagta gaacacagat agcgtgcagg gcagatttga gcccaggcaa attggtattt aataaatcag agctttgagc tctaagacag fcctcttaaaa caagaggcaa caggctacat caatacjcaac gcttttttca catgtatgtg gccactgagc atttattcat ctaccatgtg tcctgaacca tattatatgt tagagatgat gcagtcagtg tggtttccat gaacttggtg aatgatggtg catactacac tggagagtga aagaaaagtc tttctccccc gccggaggat aggacgacat atgttttgcc gggcatcaga ggaatcaaac tttattacat cccccccccc tctagttaat cagattaata tacactgtcc tgccaattta agcagtagga agttagtctc cctctcaggg gtgagtggaa atgggtgaga ctctgacaat ttattggcag ggacagaggt cccaggaatc tttcaccaag gagaaggaga tcaagacact tctgccttca tggctcggct ggtttggttt

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tgaaaggccg ccatctagtt gccacaaaag acattctccc aggagaactg aagatgcttt tgtaagtgtc cttatcccag gagaaatgcc acgacctcat agaacaagtg ggataccaga gttaccagtg gagacctcta ctgtcaccga acactttggc cacagtacct tgtggcagct gcagctatgc caagtattgc gtatgcagca ggcatgggac ctctaccata gcacagagtg ttctcttggg tcacactcgg ggtcttctgc catgttgccc tgagaatgac tcttttagcc atgttgatag agttgtaagg atgctttgtg acgaggttgg tagcacagac ctgaaagcaa gaatctggtc aaggcatttg attacacaag tcagggagag agagcaagat aggtgaaccc ccaattcctg gatgcaatgf caatggaaag attataatgo tatcttoagc cttttgcccc atactgaaaa gcatagccca tcatctgtgc catcagtgte tccgcactgt gcagacaact caaagctgac cccaaacctt aaagtcccct aagctgaaag cagtgacccc agggctgtgt ctgtttgggg agcagccatg ctgcgacaca tgctacagct gcagtgtaat taacatccat atgtcacaca ggtaagtcag aaatggtttt tacttacatt caagagctaa tgtttaagga gaaaaacact ataaaggaag cctggcatca tgacctaaaa ggaaaacaca gccgtcttat atatcattat gctattgaga acatttctgt gaacccagag cttgggaggt ggagatagga tgattaggag ctttagctat aeagcacgtt tgaggtcagc ctgaactaca tgagaacttg acttgagcca gagccaggtg gtggtggcac atgcatttaa ttctagtact aggcaggcag atccctgaat ccagcctcgt ctatatagtg agatccccac agtaagatcc tgtttcaaat aaataaatat aacaaaaaca gcaataataa aaattaattt tttagatgta tttatttatt ttatgtatga gtacaccatt gacacaccag aagagggcat tggatcccat tacagatggt tgtgagccac gttgctggga attgaactca acacctctgg aagagcagtc ggtgctctta catctctcca gtccattaat taaaaattta aaactagagt atttttaaac tttgtgtgtg gtatacatac tataatacag gttcataagt caattctctt tgtcttggag atcaaactca ggttcttagg catgggagca agtatttact tctccctagc catttctagt attcttttct'tttgtcttga aagatttatt aagtacactg tagctgcctt caaataccgg aaaggggaat caggtcttgt tgtgagtcac catgtggttg ctgggatttg aactcaggcc ctccagaaga ctcttaactg ctgagetatc tccagcccca tttttagtat tcttattaag tttatccaaa gatgccttta agggcctggg aagatggctc agtgggcatt tgtgagcatg aagaccagag ttcagatccc tagcacccag gcagatgctg gcctgcctga gattccagga caacggagac agacaggggc cctagctaac actagctgag ctgtgtgctc aagagagcag ccctggotta ctgtgcagga ccatctccac aggcaagcac acacctgagc acacagacat gcacaaagga cttttaaggt ggtggtggtg ttgttgtttg ggggtctttt gttttgtttt tccctcattg tgatggcaca ttcctttaat ctcacatctg ggacaaagag ctttgtgaac tggaggtcag cctgttotac atagcaagce catttcagcc agatataccc tgtctcaaac agacaaaaat tatttatttt atatatttga tgcatgtatg tctatgcaca ttatgtctgg tgcccatgaa agccagaaga tctctcagaa ctggaatttc agacacttat caagtactgc ctgagtgcta caaggtcttc tggaagagca gcaagtagtc tttttttttt ttaatatttt attttcctca attacatttc caatgctatc ccaaaãgtcc cccataccct ccccgagcag oaagtattct tcattgctgg gcoatctooc catctccttt taagctgaaa gggagggagg tagatgttgc ccaaacttag gatttattga ctctgttagc ctaactacac tatagaagct tattctttag actttcacat agattttgcc atcctttttg ngtgtatatg tctacagatc ttaattcagc tacagtgttt ataggtattc tttgtgacgt ggatctttta cccatcttaa tttgaaagct gacatttatg tggcctatgg tcctgttaaa tcacatttca tgtggtacac attttggggt ctatctgcgg ttccgcatct cacacttttc tgtccagaag ctgctgcaca ctgggctgga aggatgaagt ggagtccaga ttctgcagca tcccggtcca gctgggagtg aatgctgggg tcaggaggag gggccttctc caagggcctt cttagtgtta cagctctagg caaaggcctt cttagcctgt gcatagtttt ttattcgaga tgagcttgta tgcatacact taaatcagag gttatccact cttagggaag gagataggaa tacccaaggt cattggctga aggataacgt actgagatgc tcattagcac ggggaggcat tcaggtgctt gctgactggg tttcttaggg ggttgagagg gtagcagtga gttatgtatg gcagagggta taggggtttc aggctcccca gacaaagaag agccctgctg ataagggaag tcccccattt tgagccactt cagaaggcta gatagacttt gtccttaatt agcagggccc aacaagtgtc tgttttcttt ttggctcttt gagccactgc tacaaaatat ccaaatctgg gccaggaagc agtaaaggtg tttgcctcta agcetgaagg cctgagtttt cacttgattt ttgttttttt gagacaaggt ttctcagcat agccctgggt attctggaac 148260 148320 148380 148440 148500 148560 148620 148680 148740 148800 148860 148920 148980 149040 149100 149160 149220 149280 149340 149400 149460 149520 149530 149640 149700 149760 149820 149880 149940 150000 150060 150120 150180 150240 150300 150360 150420 150480 150540 150600 150660 150720 150780 150840 150900 150960 151020 151080 151140 151200 151260 151320 151380 151440 151500 151560 151620 151680 151740 151800 151860 151920 151980 152040 274 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tcactctgta gcttagatta gatggctcag gcaaccacat ctgaagacag aagaacacta ttcattctag gaaaggccac ttctacctgt gatggttgtt gccaccacat agttacccat gcacatattt agcccagttt aaaaacaaac ttgggcgtgt ttgggaggca gaaaccctgt gttaatatga ggagacattc cnnnnnnnnn nnnnnnnnnn aaccgtcagg attaaagcac gagaggcaca ctgggagaag agcagctatt tctgcagggg ttgtgtctat gtgtgtgtgt gtcagtgctc ggccaggctc taggaaataa aattggattc tatgcagagc gactgggctt tgcccgtcct gctactgaaa cagggccctc ctcctgaggc ccatccaacc agaaacctct gctaatgtct tgtgttgcat tgattcttgc gcccagggac tttttttctt tagtttataa tttatatatt taagtggaca aaatgtcatc ccgggggctg gtggcatagg tctgagattg tccaaaacca agcttcttca cactgtgctg atacccttcc cggtggctga aaaaaaagaa agtgctgggt ggccaggagt aeggatgggg gtcaaagctg gatcaggctc aagttgtgcg tgggtaagag ggtggctcac ctacgggtgt ttcacaaggt gggaaaaatc agcacgtgfca ttttgaggca ctatttctgc aagcatggca

caagccatcC aatcccagca acaaatcaag atccttctgt caaaaatcac gaggcaggag ctcaaaaaaa aatagcagaa catactgaaa nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ctcagaggca caaatcttgt catagcttcc cttgaagctc cagcagctgc aaagacaagg gtgggtgagg gtgtgacaga cctttggctc gcccacccca aaaacagggt agcatttctt acaagagact gcctgcaggc ggggtcatcc caccctcatc agtaggtcac cagagctcag cattggacta tccccagctc gcagcttcta ataaaaacga tgcttctctt tattgttgct gctagaagtt acatgataag tatatatata taggtataaa cactggcgat cctgagacgt gttggacagg ctggttgccc gcagggtcct aggggcgcat gagtggatac cgtctacggc aggcttcagc agaaagaaag gacggagccc ggggccccaa gtcctgcgag aacttgtgct aacttgaatt ccaacactgc cacccgactg aaccacctgt acttacatat acaacaacag tttttaaact tccaggttag gtctcttgtt ctctcatgtt ccagcactga tgctagcccc ctcaggaggc tcccagaata gttccagtca aagtagcaag gatctctgtg ccaagcaaaa ctcaagatag tatatgcaga nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ggatggcagt actaaaaaça gggcccttgc aagaactggc ggctcttggg agatggcact gaagtgccgt gacagaaagg ctcctgccaa ccaaagccca tcttgtccaa actcctcagt gtgcttgcca tgccttctgg aggaggagca tgctaaggcc tggccaaaga agcctccctg acactgtaga cgcctagctt cagtaggggt ggtgatgttc ccttcccgac ggctggggtt accgatacag acatacagtt tatatattat actgcacctt ctctcctttg caggaatgag gcaggttaac cagctggctc tcagcccttc gtcccgacac ggtccagagg tgtacatttt agccttttcc aaaagaagaa tgggtcctca gggccgtgcc cacacttgcc gatagtcggg cagagatctg ccacctaaaa ctcttccgaa gatgagatct aataataaat tgtactagga ttagtgtgta gagtcaactt tctgccctac gccctatgca gccaagggca agaaaatgta agaggcaggc gccaaggcta caatgactgc gtgtaatggg agtttagoac atagaattac ctaatgaaac gcctgatgct nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gatgtgtttt gccctctgct cctctgctct cgctgttgcc caagcttgga gagctgggta' gtgtgtgtgt gagagtgcat aaagcatgct ggatctgcca gagaattttt atcctctctg gaaacccttg gctgacccct ggaccactgt actagatttt gcctagatgt gcctgcacaa cgctgccttg gcctccagca gacggggtgc taagtatcta tcttcccact ctgaacaaaa tccttaattg tggtaaggag gtgggtgtgt ctgtgtgact gtgattggtt aggcattacc taagtgatct tgggagagcc tctccaaatg cactaatgac cgctcggtca gggcttataa tgaaacccag aaaaattctg gcggagagtg tgaggatgcc cttcctcttg ggcatagtcc cctgcttcta aaaatatgag ggtccgaagt gatgccctct aaatcttaaa aactttaaaa agaaagagag ttcagaagcg actttgtaca tgctgagctt ggcatctggc tttttgacag agatctctgt catagagaaa tgtaacaata caggccttta agccagggct aagttaacca aaaggattct tgcctagcaa nnnnnnnnnn ngcctgggca ggggcacaag ctcgatctgc cccggtcagt tttgtgctga agtagctcgt gccaggatgt 'gtgtgtgtgt gttcttgtgt gtgttctcag ccccattaag attattattt gtagggaatt ggccaacagc gagtctggcc gatacagggt tttcccactg taaaactgca agtgctaaga tctgccagct ccctgacatc tccggggtgc agaatgttgg gacacctttg ttgccgcagt agcaaatata tgggttgggg gggcagagtg ctcattgcga cttggacccc cccatggata cagacaagag ttgttctgag accaggcttc tcactttgcg ggacagccga tccaccagga cagatcttcc ttccttgctg actgccagcc tgctgcaccc ggtcgtgcgg tgcagttcgg catcccgagt gggctggtga tcaaatccca tctggtgcat aaaaaaaaaa tagcccatca aggggctgta gagtctcccc tgaacttcaa actgatgcca tcacatggag gtgtggtggt gtctgaagcc ccctgttttg atatgaggat gtctcagcac gttacacaga gggtattggt attttataaa ctgaactaca nnnnnnnnnn agagtaagoa gccccotttc agagatacga tcctggactc cgccagaacc tccttctcct gggaagtaaa gtgtgtgtgt gttcctgtga agtcaagctt aatgcggggt tttctctctt caggtctgtc cctattccct ctctgacctc tcctgagatg ccagactact gctaaagcct aggacattgt tgaaaacccc cacttctctc cagacaggcg tcccctgaag cccccagcaa tttttgtttt ggttcccgta gacctgtgca aggatatata gtacagttct agcaggtctg gggactgagg ccaagagtgc tcctgctcct cgcagagccc tgcctttgac gtgagacgtg agggtccaga acttaggaaa gacatgtggc ccagtatcca cactgggggc tgggcatgat taagctcttt 152100 152160 152220 1522B0 152340 152400 152460 152520 152580 152640 152700 152760 152820 152880 152940 153000 153060 153120 153180 153240 153300 153360 153420 153480 153540 153600 153660 153720 153780 153840 153900 153960 154020 154080 154140 154200 154260 154320 154380 154440 154500 154560 154620 154680 154740 154800 154860 154920 154980 155040 155100 155160 155220 155280 155340 155400 155460 155520 155580 155640 155700 155760 155820 155880 275 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ cccagagctc cttcttgtaa ggccccatgg agacttgatc cagcttcaga gccacggaac attcccattg ctcagtgagg cttgtggtga gccccggaag gagattgacc gtagagatac acacttatag cgttcgcagc ggtgttggga gctgaagtgg gtcctctggg gggcgcaggg gagcagcaac ggggctgccc aatgactctg cagggcattt tctctaattc ttgtgaacac tagctgcctt tatttaaata aataagcgcc gtttcctcat tgaggggctg tgccagatcg attgccaggc tgtagcttcc attttcggat ctcattatgg ccagcaggcg ggccaggcag gttcagctgg ttcttgctgc cccacttggg gacttctgac gctgttggga ggcttcagct aattgggttc taggacccct cggcccttag tgtctagatg ccagcctctg ctgccctgtg tccctgcttg cggtcccctg tttatgctgg cttttcttcc accattcgac ttcccctgtg ggaagtccct · gctctattta agtttataaa actggggttt tgcagaacca caatggacca ctggaagcat tccacatgcc tgaggggctc ctgagcaagc accttagaga cctgacctgg gacggatggt tggtgaggag tcctggcctt cttcgcagcc aggcgaagga ctgttgttga acccactgta atgccttggc aggtccacaa tgcaggctgt aggtagaggg tgtcggttgt gcaatgaaag ccctgctgga atgccctccg tagcacacac agcagcaatt agaggaggtg ttggctcaca ggggccaagg catccgaaca aggcgagtcg agcaaggaat attcctcaaa tctttcacac gagttaaaca tgagtgacac aggctgcatg tgtggctgta ctctaattgg gtgtccagcc acgattgtca cgtcaggaag ccacgaccta gactcttggg tagctgtgct gtcccaggcc gccccccccc gttatgggct agaatgtttc agttgtgatt ttctgggccg acagcatgca ttactctgtc tcctagggat ccaccageac gcttgcaccc ggaaagcctg atgagacaca ccggcctgca atttgtacag ttctcccacc tggggagatt ggaaaaaaaa cataccgtgg tccctctaaa ggctcagttc caaggacctt actaatagga agggatgtta agccactctg tgtcctagtc tctggttccg agccaggcgg gctccttgcg acactggtcc gccgcagctc attcccacag actccaaggc agagaaagag gctggttctc ccaggctcca agatgtcatc gcaggccacc cgtgaagctt ctccaaggtc tgatgttgtt ggaaggtgat ggatggcagc agtctcgagg ccacacagca gagatagatg gaggttctgt cccacattat cttcttcaga gcctccggct gactctaaca ataaagaaag tgtggtacaa cagttcacag cagggctgac ctcctctccc aaaccgggcc gcattaatta tgtggtcggg ttacctgcct atggggacag tgtcgcctca agagccaggg cagagcaagt cagggactgc cattcccaac cccagagagt tagcacataa tcagagcaat ggccatgccc ggctataacc gatcttcctc cctgtgctgc tcacactggc tctcttccag gactctaggt gcagagcctt gctgcaggca ctcatcggag tactgtggct acccccctta aatcaaactg caagtggagg agggcaatgg ccctgttatc gtccttgtag tgtaggctca accttccaag catccatgtc agccctggcc gttcctgtgg atggccatgt ggcagccctg tgtgcagttc gggggtcgcg ggaacgtgcc caccaggggg ggtggttagc atgcagcagc tagcttgtta ttggaggtac aaagatgcct caccaggcct tagctcctcc ggagtagatc gcgattgttc aaagttgtgt acaaccacca ccctggtggg gggaacagag cctctgtatt ctcctcacct ctgtcagccc ctgggtccgg aagcaaatct cattgagtcc aaacttcaaa ggctgtgtgt gcacgaggct ccattcacac ttgcctcttg ggcattcgtt taataggcct ttttccaggg gctccaggcc gttggcctct cccctggggg ggaaggagca ccaggccccg agaaacagca ggcagctgct aaatcatcgc tatgacctca tgcaggccct atctctgcct ctcagcatcc agagggaggc tgcacagtcc gaaggccatt tcaaggacat cttcactggg ggtaggggtt tttacagagg gctctgtctc cataggggcc aaccaaacct aggcaggcgg ggggacaaag tcaaggctat gacagtcact ggacagctgg cctccatctc tttgaaagcc acttctggac ctggtgcagt gggtggcctt tcagaggtgg cggaagtcct caggggacag cggcagccac gccagacagt ctgtggaggt aaccggtcca ccatggagaa tcgatatggt gcgggoaggg tggaaggtct agatgcacaa cagagggtga tgcaggaaga gcctggcagc cccagaggta gagagacaga ggtggaatgg gtatgcaggg ctttagctct caccgcaggg ctctgccact ggagtcctga atggtaccaa cctacaactc acagacaagg tcccttgggg ccccccctcc actgtccaga aatggatcct atgctcatta tcacagctgc tacgggcgcc tgccccttct aatatgagct gggaccttct gcagagtagg tcgtaagttg tctcgtccct atataattta gcagcagggg ctgcagtgct caatttcctg tgggtgtggc acagtcggag acagacccac cttgccagaa tcatgatgct gggtcctgtg gcagtgggct gcttttgttg tgtgcacccc tccaaggaat caggtgtgga cagaacggca ggactctagc catcactagg tcctgcagtg tctctgtcct ttctaatggg agtggtatta tccttgcctg tcttgcctgc tgtccctgga taagcgtgtg ccaccctcag cagagctaga agtcccaagc caccctgcag catggaaagc ggttcaccag acaagtgact tgtcctgcaa cgctcagtcc cgggtgccag agccctcgaa ccatggcggg tgcgctcact tgacagtcat gctctccagc acagcagtga gggactggca gtcccttgga gtccctaaag tggaacacac cgctcactgt atgatcactt agcatgcctc ctccatggct cacatttctg ttcacagtac tgtgctggag gcatttcctc taaaataatt tggaagccgc cccaagtggc caccctgaag tttccagctt gagctgaatc gaccaggctt ttgccacctt acagctccca gtaatcaccc gtttttgcat tggcacagca ttctgcccac ctccaaaacg ctccagcctg ggaggggagc agctccaacc cctttcccaa tgccccacat aaaatgaaag tatcactaat taccctcaac aaaagaatct acaggctaca cttagtaacc tgaaggtagg caagacctga aggcctaagg aagtgctctt ttagtatttt gggggggtgt ctccaggacc agtcagtagg 155940 156000 156060 156120 156180 156240 156300 156360 156420 156480 156540 156600 1S6660 156720 156780 156840 156900 156960 157020 157080 157140 157200 157260 157320 157380 157440 157500 157560 157620 157680 157740 157800 157860 157920 157980 158040 158100 158160 158220 158280 158340 158400 158460 158520 158580 158640 158700 158760 158820 158880 158940 159000 159060 159120 159180 159240 159300 159360 159420 159480 159540 159600 159660 159720 276ΕΡ 1 325 130/ΡΤ tgccaatcct atggcgcctt attaatgtac aggaatccaa cttgggcagg cttcccctcc tcccacgcac acttgccccc atcatgccec gaaattaaga cttggtcact tttgaactag gctcagacct tgggtcagct catggtccca atgtgcaaag agcccccaag accagaacca aggggccctg gtctttaatg agcatcagtg ccctgccttc tcgaaatggg agcacccaag ggtcagtggg ggccttcagt tgttaaccga ctggggctgc ctccttcctg ctcagcctcc cagggctgtg agcctcgttt cccacagata ccaaaccaag taaagatggt ctctggggaa actcgctatt gccctgcctc agtcaggaag ccccaggtct ccgtccctcc tacctggacc agcgatttgc acagcacgac tgctccctgc gtctctggag tcatagtagg ggagaacaga ccgtttgttg aaatagactg atgctaaaga cagaaatgtc aggtgcttgg aagtgagttc taaaaatctt acacacacac gggctgaact tgtctgtgta tggatggaga actcacatct cccaggccca gcccagcatc agcaccccag cccaggccca aggattgtca ccagcaggtt ctatgccccc tctatgaggc caacaatgag gatggagcct gtctctgtgg aggggccctg gctgccttct acttgagggg aggaggtgcc cttcatcgtg gtgagctccc aaggggctct tagtctagga gagccatgga atttgcatat gcggtggcaa gaggggccta aggaaagcct gatcccctct gtaacaccag ggctgagaag ggtctgctct cagcacacac tcaacagaag ggcaagcccc aaactcttcc tgggaccaga cctggtagga gcactggggt gggaaagggc gaatactgta acctcagctc gcatcaacag ggcctgtctg tagcaccctg gccaccagaa aaaagccctt ccggaagcca ggctggttgc agctggagaa aggctggggc tctagccagc ctgggtcagc tttttcaggc ggggctgccc ctctacccct tctctctgaa gctttgtagg cctccctccc tgcccccagc atgctctctt gctgtgggga tggcgcctca ggccacttgg gctcggccct gaagacaaga actgctgtgc agagcggccg gagccagagg cctaagttga tcctcacctg caaaatgggg ctggtaccca cctgcccttc ctcttctctt cctctccggc ccctttacat cagctgcctg attctgctgg ctagatttta gctaccattc acccagtagc ctcaccccta cacctccttc ggctgctcct tagtctgcat ttctcccagc ccagaggccc cacatgccag ccctcagcct ggttcccagt gtgtctgcag aaggagcttc tttcctggga ataagtcact tgtttccttt acacagtagg tgctcattaa aattgaatga tgacactcag tgctcgataa atgttggttg cacctgaact tggctcacat gatgagcact ctgagaagga ggactgggga gtttcccaag aaaaaaaaag ttagteacte tgggtttatg aagagaggaa gaggcaaaga cagatggagc taggacagcc aaggctacat agtgggggag cagtcaagga acgttagtat aatatcatac cagagtgtta gtgtgtgcta gatgtgtacc tgaggtgttt catggttgtg tttgctaggc acctctggag actgagagtg gcaccccgac ccagcatccc ccacgcccag catcccaggc acccagcacc ccaggcccag gcaccccagg tccaagcact tcttcctagg gaggcaagca ccttgggagc cccgccccac ttgccatgca ttttaacatt cacctcttct gccagactca gcggaaggga gaagacccag ttctgcttcg ttactctcaa acagcctccg tcattccttc agacagtgtg ggaagggctt taccctggtg ggtaccagga ctgctatccc tgggctacca cccttctgca acctgccaga gttcagctgc cttggctggg gcatgcaagc aagggagcta tgccaagctg agcatgaaaa taggtggcaa ggctaaggca ctgtgcttct caccccctct agctgggctc gggtggccag ctaaacccag acctcacaag ctaacgagga agatctgacg catttgcaca gaagaaaatg cacagcaggg ggacaggtcc tccctgatgc ctggagtagg tccaaagggt caggacagct aagtagaggc atccccatgg ctgcttcttg gccatgtagc ctggccagct gctcttctct tggcggcctc aggccaggcc cacttgtgcc'acttgtgttc aagctggcca gggaacagct geagcctcct atccatggct atcctggctg ctccttttaa cagtcattgg aagctcagcc ccacatctcc atctgtctaa ctcctccgtt cacaacttct ggaggaacac ctcagaatca gaatgtatcc agtatctatc ctcctggatg ccctcccccc aacaggaact agggtagtcc cctccagagt gcccatctaa tgcctctccc tggctacaca ccctcctgcc tttgtccatg ggctgcttcc cagagaagcc cattttactc tacagcacgc atgtccgctg ccact'£tgtt cagttctggg ggagggaatt gaagccctag gctcaagcct taattagtcc tgggagactc caagactcct taggcccatc cccaatacca gtcctttcct gtatgggatt ttcagcacta taaaaggggc caggaccaaa gccagatatg gtggggcaca tctgtgagtt tgaggccagc agagaaaccc acttgacttg ggaaacacac acacacacac tatggctctg tgcctgcagt gtggatattt gagctctgta atgtgtacac aggtgttggc atttgcatgt gtctgagttc acaacccagg gcccttttat aggcccagca ctccagaccc ccagcacccc agacccagca catcccaggc ccagcacccc caatgcccag caccccgacc ctgtatcacc tgattgcctg gcaaattagc tcaagcgcct ttccactctc gcctccggcc ttccattcat gacaatgagc gagtataggg gtcagcattg gtttttgacc aggggaatct gcagtggcct gccacctcac gcggaatagc aatggtgcag agagcttggc ccagtttagt ctgggaatat aggtgcccag taccaagcta taaagcagcc gctgcagctt cccctgggca caatctctct gagcaatcga agctgcactc taaacacagg gggctcccat gtgagtagaa tgcttgcagg agtcctccag ctgaaaccat ccatcttggg ccgtggctca cacttatcat ccccccgcaa agggaaagtg ctagaagctg gaccttgctg ctgttccatc actcttgagc gacctcttgg ctgatgagtg accttctcaa ggggcctgga agagccttca aaggaagtga gggcaagggg aactggaata acctttcaaa tctttaatcc ctattctaca ccacccaaat acacacacac ccaggaatga tttatgtgca ctgttgcata atgcacataa cctgcagcac agcaccccag tcccaggccc gacccagcat cagcatccca 159780 159840 159900 159960 160020 160080 160140 160200 160260 160320 160380 160440 160500 160560 160620 160680 160740 160800 160860 160920 160980 161040 161100 161160 161220 161280 161340 161400 161460 161520 161580 161640 161700 161760 161820 161880 161940 162000 162060 162120 162180 162240 162300 162360 162420 162480 162540 162600 162660 162720 162780 162840 162900 162960 163020 163080 163140 163200 163260 163320 163380 163440 163500 163560 277 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ggcccagcac cagcacccca atcccaggga cagggacagc tggaggcagc cctcattgct tcccagtacc gtctggggtt cagcacatcc tggagcctac

Cgggagtcat gtatgggaat ctgcacggga aactcaggat ccagggctaa tctgtcatec ctacttctcc aatcttctgc tcccttttac tttctncncn nnnnnnnnnn aaattgaact ccttgtgatc tagtggttct aggcattgct tcttaagatg agcatgtgct acaaaaccaa attgggacac gaggatgaaa aaaatatata ttgactgtat cccaaaattc caggaatgct acacttccag atgtccttgg aagtatttat ctaggcctag cagcctttag tgattcagtc gtcttttctc tctaatctct ttctctcttc tgtgccgctc ctgtgctgca ctctcttctc tttgtctgcc tttaccttca tgagagtaaa tctccataaa ctgccatgtg aataagcatt cgactacatt agtgaatttt ttatattaag tttcttcata cttatggaaa cctcccatct tgaactcctc gagataaggg catgacccct ctagtgatgt agcctatgaa cgaccccaga cccaggccca ggcccagcat cagcacccca accccaggcc acatactgaa ttcagcacct aggattcccc ggcagcccca tgcccattag cctgtatagc ttcacctagg aggtaaggag gattgtgtca ggtccagaat gacccttcct ccatctgtgc cagcatccca taggtttgag caccaccact nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tacagaggaa agaaagctat ggggactgaa tatgctaagc cctataacca caaaaacaca acaacaacaa atttatacta agcccctgca gtgtatttat atctttgaaa ctgagttgga ctgatctaat gaggcagaaa agaggctacc ttgactgatg ccctggaagc gacttgctgc cccctgttcc ttggcctctg tgtctccttc catccttctc tactctccct ctctcttctc ctgagggttg actcaattag ttgtttcaaa gatgtgtgct taacagaatc gtgaagagaa ttcttgggag ttgccatgcc aaggcagcca aattgggaac tacaacttag ctgaagaata agagattgtt accctagagt cctcctaaaa tagttacgta aaacttgtac aaatttggct gctctggtct gcatccaagg cccagggaca ggcccagtat cagtatccca gatagggaat gctctcctca tcagctgagg tgctaattgg gcctaacctt tctgtattga caactccaga agcatagtga ctgtggttcc ccagagctct tggacggttt ctaacagctc tgcccgcacc ggccccaggt aatcctcttc nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn acacaaatga agattaaacc cccaaggaag tgacaaaggc tgggtggagc cataaagatt aaagtactta ttctcgttct gaacaacgca gtaaaacata agaaccagca ggttcaatgc caatggattg caaggtgagg tcatccttga taactgtcat ttctagcttc tgagatcacc gggctcaaac aattgctctg acactctctt tgtaaagctc ctcagctcta cggtaccacc ggcagatcct acatcacttt ttaaaggtga aataaggctg ttagggttca tgcagagagt ttggattaga ttgagactgt aggctgtggt aaaaaagcag tttttatagt aaaattttta cccggaacac tcgaaccctc caacctcaaa gattcccttg tttccctgcc ggtcgtcgat atgttccatg cccagcatcc gcaccccagg cccagggaca gggacagcac gtctctgagg cactcggaat aatgggtagc actgacagtt gcctgcaggg ggcactcccc tgggcacaaa gcctggctgg âÇjãCuÇfCCdâ taagagagca cttggctttc tctgtggaaa ccagctcact tgaggctgtg ctcctcttcc nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn gctgtaatga ccagcccttt gacagctgct tttctgaatg aattctctaa gtttactgaa atagctcatc' atcacacgac cacaatgaaa cataaacaca gagtgctatg agagttcata accaactgat cctaactgga tccttccctt cttggaggct catacaatct gtttcctgtt tcctctcccc cttggtctca gcttgttctg tcccggtaaa ctgcactgct tgtgtctccc atcctgtcaa caagcaggag gtactaaggg agccaactct caatacgatc taaggatgtg gtcattcctg ggagggctga tggactgtta agtagaaagg tagcttttta ctgaactctt tcctgaactc ccaactaaaa atgaaccggg gcagaacccc cagctctccc tctcctctac tgctttcttg cagggacagc cccagcatcc gcaccccagg cccaggcaca cctcttatct caaacaccct taccattttg tctcctgaga gtgtgctgta caagctatga aatctctcca gcacctgaga gacatcttgg gatgctgaga tactctgtcc acatgaggcg gtgtgccctc ggtttccctc tcctcttcct nnnnnnnnnn nnnnnnnnna cagaaaagga ttgcctttgt tggaatgttg catatggtag gagtctgtct gcagtatttg agtaggaaaa tattaagaag ttgaatagag taaaaagaat gtttataaat ctcttaggaa agattaataa ggaagtttgt tctccgcttc tactggctcc aatccaagcc ctttctgaac gatgatttta aactaactct tctttactgt cctgcctcct ctccacagct ttacgtagct acctttctct tgcctcctct tgtgtctctt agctagaaat aaatatcctg ctcttgaggt tgacactgtg gcgatggatt ctagctacgt acagttttgg tgttgctatg cttcacccca ttcaccccag actgttccaa tacattgcca ttgtcccttg cccttgagtt accactaggt ctgttgttct accccaggcc caggtccagc cccagtatcc gtatcccaca tggtccttac gtgcaggttc gcttttgtct gcaatttggg ggggcaggga cccatgccag ataagggtag cctgagcagc ctttcãcccc ggcacttaac tctgtcccag tatgagctct atgttactca catctgtccc cctcctcctc nnnnnnnnnn caaaggacgc atactatttc ttttcatatt gagacctctc tatctattca gaacttctta caacagtgaa agaacaacaa attaaggtgt aataaagaaa agaaaactct gaaaagttcc gtaactaaat tctgaaggca caccagaggc ctggctgtaa atcagctaac tagaatgttc tctagctggc ttcacaatct agcaatcttt gtctagtttg cctccccctc ctcctgtatc tccctttcct gattcttcac acaaaccaac tttcagccag agtttctttt agacagctgg ttcagatggg acaaaggact aatacactgg ttagctggat cagaaggagg accaaaatac gaacccgacc aatgctttcc gaacattttt aataatagga acagaacccc ttactatata gcatgagttt attaaatctt 163620 163680 163740 163800 163860 163920 163980 164040 164100 164160 164220 164280 4 £4 94 A 164400 164460 164520 164580 164640 164700 164760 164820 164880 164940 165000 165060 165120 165180 165240 165300 165360 165420 165480 165540 165600 165660 165720 165780 165840 165900 165960 166020 166080 166140 166200 166260 166320 1663B0 166440 166500 166560 166620 166680 166740 166800 166860 166920 166980 167040 167100 167160 167220 167280 167340 167400

278ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gccttctaca tgagtgcttg acagcgcgac ggtctgatgt gctcagtgag tgtccaccgt cctggtggac tcccacctcg agaccgtggg ctcgtgcaga tgtggtcgac ctcttgttgt tgactctgga gaaagggtcc cacctgaggg aggaaggggg tcceacctcc cccagtctga ttgacgacct ctgcagctgc ctcggagtcg tgccactcag agtactggcc cagagaaccc cttgggatga tcctcataga acctcgtgga gtaggggacg gacggcccac cagtcttcct cagaggggca agaaaaagct aagcagaaaa aagaaataga ttttggccgc acagggcagt attgcaaaga tcctaaccct taactttgtc cagtactcac ctggtagtaa tgacccactc taaccaaact aggcccctgt aacccaaaaa aagcaggaat ccacccccat ctcatatcca caccacttct gggaggttaa taagctctct tttgcctgcg agggcggaca ccaccctgtt agcttaccct gtcaccaggg ctaaaaaggc gcaaaagatg ccccacggca gctttgcaac ggaaagaaga cgctagcatt tagccagggg caaaaaaatt ttttgagtac agtgagggtc cacccagagg ttgtgttctg accgcgctcc ccgttcaccc ccctttggag tgcccagttg ttcaagtccc gggtctcaat goagagtcgc gtctactgtt gcattggaag gtggcagacc tgcttttgac tcaccctgat gtgggtcaag tgcagccgga cctctggata cccaccacag ccgaggccga agcacatgtg tttttcctct ctctggactt ttgtcagcag ggcgagaaaa cgaggctttc cctccttgtc caatttggct tgagcgtcta gagagccgct gcaaaggctg agtctatcat ggagagggaa agttgtgaat gaaaccgcaa gaaaggacac agaagatgat cgtggagggg taacccccta attttacccc ctttctggtg aaaggctcaa tgcctgcctt tgoagtctct ggggttggct ttcggtaaaa gaggttgctg gccggttcaa caaaagggtc cccacctgag tttgcaccct gactggtcaa tgacgaggcc actacagtat aactgagaggacaaatctgt gctcacagag ggtacgtgag cctagcagca acaccaaaga accagacttg agtattgaca agatcctgtt ggtotcagtg tcccttcggg tcctagaccc tttctaagtt gagagggaac tgggagacgt gccaagagac cgagatcgtg acctcgcgtt cggccggcct cgccgtttct tttctagaaa gaggtgcggg ttttgcgcct ttgtcactaa cagatcccct ccttggacce aagtctggcc gactcccaac ggaccaatag agccccgggg agagggccag tctgatttat actgggctco cttttgcagg aatgttctgg cccttgaacc tatcgccgga aaggtaagag atggaggcat gtagccatgg gaggggctcc aagagggaaa aatagacggg gatagacagt ggtggcaaaa tgggctagag tagggaagtc actcccgtca ggcaagctag tggacgacca atacctgagt gtccaattta gtcctcaaca tcaggttggc aaacaagtgc caatacccca ggccaaggag aaaccaggga ctggacattc agaacatggt aagagtcagc ctaacttgga ctccatcggg gtagatgatc ctcctcacag caaactgagg gcccggaaaa tttctgggga cctctatatc gcttttgagg actaagcctt caagcactgg gctagtggat tcttcttggg tccgcggctg tcccggggct ggtctttcat tttggtgcat tggccgggaa acttagaggt aaggttcttt gttctgtttt tggtgcgatc gcagtttcgg ttttgcggat gcggggtgga taaggataga cgtgtccagg cccaggaaaa acaggggagg accagggacg catttggggt tgcgagatcg tgggtttgag ggttcgagtc ccacctcgcg ttttgttgcg tggtcaogag atcgtgggtt: cgagtcccac tagaaaggcc atctgattct ttgagttgct ggtttctttt ttgtcttagt · ctcgtgtccg tgggacaatc tgtgtccact cccctttctc tcagagccca caaccagtcg gtggaagtca ccgagtggcc aacgtttaga gtaggctggc tcgctgccgt caggcgaatt gtttttcagg acattgtgac ctggcagaat ctcgtccaat caaactcttc gaaactgacg gtcgcggttg catcagcacc ccccaagatc tatccagaga ctccccctta ccccctgccc caacagccac cgagaggggc tcagggaccg gcgggggaga aggaaggggg gccagactca acagttgcct caccaggacc taatgatctc attcctttac ataattgaaa aactaaccac cctcccttct ttgagtcact tatgttctcc catcaaccca ttctttttac aacagaagaa agaaaaagaa gagaggacgg cacacccact gccctcccta gccccaactg ggactacaac accgcggaag ctctagtggc aggtctcaga ggagccgcta aggtcttgca ggggcagact gaaccaccct ataggagata cacccctttt gaccccttgt ccttcattgg tcagtccgct cccgacatta aagatcatac gctccaagat ttagtaaaag cagaagaaga gaggcaggag agagagaaga atcgccgtca ggagagaaat ctgagtaaaa caggaaaagg taaaataggg ctcctgggca agataccact ggaaaaagac caatgcgcct attgccctaa aaagcgggag cgatccaagg ggggctcaga ccccctccct gagcctaggg acttcctgat agacaccgga gcagaacatt gctccaaaaa gaccatggta attggagcca aacgagctct tcagatagac aaaaatatag gccctgctcc cctcttgggg cgcgatctgc cttcagaagg cccacaagta agctggggaa cagaaaaaga gtaccggttg catgaagaac taactgcgtt ccccaatgtc tgggcagaac ctccggttgt ggtagaactt aaagctgatg tgagcaagga agctagaaaa ggcatccggc ttttagtggc ctgtcagtcc ccctggaata ccaatgacta tcgcccggta caagacctcc accccacagt cccgaacccg tacaatttat atacagtcct agacttaaaa gatgcottct tcctgtttgc ttttaaatgg agggacccag ctaggctacc acaggggttc aaaaattccc atcttgcgcc ttttcgcgct cgaaaccctc tcttggtcgc ggcggcctcg aaggagctgt aactgagtga cttggggtat cgagtttcgg taaecttcct ggggtatacc ctccgagggg agaotgttat gatgatccca tcgccaacta ctgctggett ttgtagactc tggattccag ctttgactaa ggaaggggtt cctttcaagt ctatcaagtc gtctctaatg actgccccca tcgtcctata tgtggacgag agagcgggtg gaccctgaaa aagacctgta gcctatttgt ggcccacatg tctgaaagct attgcagcag 167460 167520 167580 167640 167700 167760 167820 167880 167940 168000 168060 168120 168180 168240 168300 168360 168420 168480 168540 168600 168660 168720 168780 168840 168900 168960 169020 169080 169140 169200 169260 169320 169330 169440 169500 169560 169620 169680 169740 169800 169860 169920 169980 170040 170100 170160 170220 Π0280 170340 170400 170460 170520 170580 170640 170700 170760 170820 170880 170940 171000 171060 171120 171180 171240

279ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tagccctgct cccctcatgc egaatgacac atcetcaacc atggacatcc agagctccca ggagctgcgg tcggcacaaa atcgttaata atctacaggc attctggccc ggccacccaa aaaacaagtt tgaggatggg tttttgaaag accaattcac aagtccccaa tcactaatgc gagtgtattg tgttagtatt ctgcccagat aggtaatcgg ctcagttggg tagagaagat gaaaagactg actccttttg gtttccgact gtgattagga gtaccccacg cttgagccac gttgacggaa gaagaaaacc ctgcgccgca gtcctgggag cctctggatt caattgggac cccaaatggg agctgcacat cgggggggca ctggaagccc gtcaaacgaa cagagcaccc cgagaacgga atacattcca ggcagtgaca tggctccccc taccctccct taggaacaga ctaaccctaa aaggaatagc gaaaaaacag tacctcagga gtcagtatct gtgtgtctat ccagactett gaaaaagaga gagtaggtac gcagttatgg ttaacttccc aaaaaaagag ggagtaatca agaaaaagcc ctcctctcca tgcatcctta gatcaaagat cttagaaagt actatcagag cagctaccct tcgctgaaga gttggtacao tggtagacgg aggctgaact tctacactga agcgagggct tgttagaagc aaaggagaaa gctcaagggg aggtataaca aaaaatagaa ceacctggga cctgaagtca aactaaagcc ggaggtagac tgtagacacc tgtggccaag gtccgacaat catcgattgg aaataggacc ggtggctctc aagttctgta ctgaocctgt cccagatttg ggttccgagt ggtggaaggg togoctcctg acgacgacaa ggcgccactc gtgcttaatg tggtggcctg ctctcagatc atagggagca ttttatgttt tcagattact tcctctaaat ggagaaagaa tcaggaccat aaacaacacc ctaagagatc ctcgtagggc aaaggtcccg aggaactaat ggaccgtctg tatgactcaa tcagatcagg aaagttgact taaagggcac ggtgcctccc gtctgttttt gtatcatgat acccgttacc aggaaccgct atattgatct tgtccgaagt gactctgtgc aagattctat aacaaagatg ctatagcagg ataagttagt gctgacaaac tgacaatggg atcgtgcgac agccacctga cctgctgcta aatgagcgtg tctccctcta acaaatgatt aactgggacc agaagtgacc ggacggcagc agtttcctga gaaaaaggta atttgggcaa tatagcgctt atacaagccc cagccgatat gcttttgcta attgacctcg gctggtaaag catacatgca cctaaaaagg acttggtggc caagggcaac ccatgatctt aactgaaaaa taaaagagct atggtagacc ttaactcccg aagaaggaat gttgaaaaaa tgatgagact gtggctcaaá agattataga tacagagaac ctggaaagag tttactgaag ttaaacotga ttttcaggat gggttgaggc aagatccttg aagaaatcct ggaccagcct ttgttgccea aaattacact gtgcttaccg ttaaaagaga ccttgactaa cttcctcttg cgctcaaaca tggaggacct cccccottaa cttaccctcc tctttgctta ggaccaaccg aaagcagcct tggagacaaa gtcttggtca accctatttg gtgttactga gatccacgcc tcccacgtca ttggacagtg gcagtcactg tagacctagg gaaccttaac aaaaggaaaa cattgtatgg atctcacgcc tgacatctgt atactgatct tagcaaccca catatgggtg ttcggggcag gccctggtca gggtcagagc tttgtggtaa atggacatgt gggacctaat cacggtaaaa acccctataa atatcaagag gcaaagataa atactgtaac gtctaagttg gcttaaagga ctgggttcat tttcacgatc ccaacaaggt ccttataaaa actgtaccag ctccaccaac actctcctca taaagcctac gtcagtctag tccaaggagc tcatgctggt tatgctatgc acttataata ctacttcaga ctagcagcag tttcaggaag ctctgtaatc agacccagaa ctagacacag tgtgggcttg aatagttcca aagatttctg aatagttctt ttttagataa ttaactttgg cagttctatt gccttaatta agaccccccc tagaactata gaacagtcta ggtgctgcaa aatagaaggg tgccttaaaa gaagaatgtt ggetaaactt agagaacgcc gtttgaaagc tggtttaata acctttaatt acacttatgc agcttttatt agaaaaagga acagcaggtg accgttgtag cagataagat gacaaatgcc taacctttgc gccccctgcc ccgtcccagt acatcaatgt tgactgacca accctggcct tagaggggaa gcaaaaggct gcgctttgcc tgaaggaaca tccgagaggc taaaggtaag ccgcacacat ccatggggcc acattaaaaa caaagaaaaa tagccatcat ccactgcccc cgaatggcag acttagtggc ggtgatccgc ccaaaagccc agtgatcccc ccccatactt aaaatttgta aaaggactac aattaaaaat tcccgatacc ctcctgcaaa ccatgtgcat acaacgggga gaccatcctg aatgtatggt aacaagtatc atttcccact aaaacagaga gccaagattt gaaatcccta ggtaagtcag ggcttggcca ccctcaaagc tcaggacagg attagccatt gagaccggca cccctggtcg tttcgggctc tggaagctgg tggaacatta ttcatttaaa ggccctaaaa ataccccagg gaccaccgca gacggcatcg aaccggtagc caacccctac tgcggtaaaa agagggccgc cagtcaagat acaatcctct taagcttcgt cctcatgctc caattcaaca gcaaccactg cagtccatcc aagttagcgg caggatcccc ccccctgagg agcggtgtgt ttctaccgag ctaatcttag aaaaggcttc aacaaaaatg gaaacgacag gagatgctta cgaggtagtg gctatgataa agtgggtgcg cttttaaaaa cccctacgta taaggttcac aataggtggg gttggcgagt agattgacag tgagagaccc caggggcccc ccagtcgtac tccacagccc aacacagtgg cttggcttcc ccaccgcccc ttttttagtt ctaaatagaa ctctagcccc ccttattata tcattctcaa tgcctttggg agggctttgt ctgggccggg catccagtct agcaaaagcg caataccggt ctcactcctt cattttggtt cagcttattc atttgaacat cgggtccgot aggattggga gtagcagctg aatactatga agaactacgt taaccaaatt agaagaatct aattagactt attattcctt gtttttatgt tgaccattca tagatatacg taaaagagaa agtcccottg gctcaccact ttttgcttac ttttgggecc taaacgcagt ccaggttatg 171300 171360 171420 171480 171540 171600 171660 171720 171780 171B40 171900 171960 172020 172080 172140 172200 172260 172320 172380 172440 172500 172560 172620 172680 172740 172800 172860 172920 1729ΘΟ 173040 173100 173160 173220 1732BO 173340 173400 173460 173520 173500 173640 173700 173760 173820 173880 173940 174000 174060 174120 174180 174240 174300 174360 174420 174480 174540 174600 174660 174720 1747B0 174840 174900 174960 175020 175080

280 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gtactaaggc tatctcctaa cagaacccgaagaatgcatt tagaacattt caaataatag tgacagaacc ttttactata gtgcatgagt ctattaaatc tgtcccgggg cagaggaaaa agacaagatg tgtgtggtgg tacctctgtc cagataggaa ctcaatagga gctggccagg ctctçtgagt aggagcctgt tttaatcccc attggagcta agcttatctc ectccacaca cagctgcaca tattagtttg ccttaaaaca aagagtactt agcaatagcc atgagcacca ttcagccttc aaggctaaac ttgtagttat ccagtcacct ataatggtat agccatcgca attataaatc ccatcctaga ggacattgag tgttggacta gggtgtgtgg atttcgaggc tgtttcaaca taatacatgt ttctgctagc ggtcctcctg ggttttggtc catctggcaa tgtgagattt ttttcattcc tgtcaatcca ctagggtggt agaaaatggc gaccttgctg ccttaggagt accaaatgtg aaaatagatt aactggacaa cataatgagt ctcatgtagt tgcacgctgg acagaatagc gaggaagagt gttaattgac aacaatatcg ggtccttcag aagaagtggg gaatgaagaa cccctcccat ctagagattg cctgaactcc tcaccctaga ttgagataag ggcctcctaa gacatgaccc cttagttacg ccctagtgat gtaaacttgt taagcctgta aaaaatttgg ttcgacccca gagctctggt ttgccttcta cattttgagt cttgagtgct tgagtgaggg atgtattctg cctcatgggt gaacagctca acctgctggc acaggaaaca gagagctgcc cgtcaggccc tacatcttaa ccaagtatca aaccaccagt gtgtgttcca ggatgtggac agagctgcac acctttaatt tcaaggcaag cctgggctat ttcaaaacaa acaaaaccaa atgacctcaa atagccaaac gtgagatggc tcaacatatg tggggacaca cataatggga tatgcctccc acaaataaga tggtcatgca tgcctataat agatcgcata gcaagcagta caaaaatcaa ttaagcaaca tgtagtaagg acaataccaa ttccgagtgc tcagggatgt gggtaeactg ctctcagagc ctaactgctc aggcattcag tactgctcag catggotgtg gcagaattca agagttatag cttaaaggtt ggatgcacca tccaccctaa tccccaaaga ccagcccatg gccttgaact tgttggtgag gtattccttt ctgaagacca gcagctctcc cctcatggac tcagccgcta cccagacaat actatgtaag cacacaoctc tactcccagc ctggtctata gagtgaattc aaaccaaaac cgtaaattca gggtaccagg ggttgaactc ctagtgaagc tgaggcaggt agctttcctt tgagagccta ttaagaggtt ctggacttgg atgtcttgac aaaggagatc tgcecctcac cactgcagga tgagaactgg ggaaaactga tcacaccaga cctaaccaac cactttgctg ggctcatcct taacgactgc taagaagcag cagtctgaag tctttaaaat attgcttgct gtcacctatc aagaaatatg gcatcaatac tattacagag tgcaagggaa atgttggtac agttcatgaa tagtttgctt ttttttttct ctatggtctc aaactcacca caatgCaago atgtgccacc tctgtgatga ttaacttcaa ctcagtgact gggtgggcta atggaaagat caagtccatt gaggttgaaa actcgctcta taaaaatttt tactgaactc ttcccggaac actcctgaac gttcgaaccc tcccaactaa aacaaccgca aaatgaaccg tagattccct tggcagaacc actttccctg cccagctctc ctggtcgtcg attctcctct ctatgttcca tgtgctttçt acggtctcag tgtcttcttg tctcccttcg ggggtctttc tcagggggtt tccctcagca aggagggtgC gggaaaggac tacagtctta caggcctacc aggatctaca gtttattaaa ttgtagggga taaaaataca aaggagaaca cagttgttta ccatcactcg taagagggaa acaattctag attagccaga accataaaaa açcatttctg agctctcctc agtccaaacc aaagtccttc ccaaaaatat gaggaccaat ttctacaagt aaatatatat aataaaaaga ccagcactcc agaggctgag ggctagacag ggctacatag ataacagtaacaaccacaac aaatgttcct' ttaaggacag ataaatactt'agaaaacttc tgcccagaaa gttgtttatc aggtcacttc tgtagtagcc gtacttggca ttatcatttt catcatgaaa gtttccacca agtgcctttg gggtgataaa cttctggcca tctcataatg cttgatggtc otgtctcago gctgataata caagcaaatt aggagtcctc aatgcagact ctagattcgc aacctattca ccaatcccat tttaatacac acgcaagagg cagaggcagg caggccagcc agggctacac ttctatcagc tctatttcct aaagtcttca tgtttacgta acagccggtt ctttactgct caaagaactc tttttttctt atctgtagct gtcatatcac acttgtgttt gctgcagtgt ctgcagatct attctgcctt ctttgtattt gggctttgaa tgccaagagt tctgctgact catccttggc ctgcagttta tctttccttc cagaaatttt gtgtttgtta tggtagaata atattctatc aggaagcaga ccactgcaaa aagtgtaaat aagaaaaaaa tcagccagtt gaggttctac aaaatggctg ctttccttcc ctttcctttc ctgtaaatca ccttgaactt aggcctggct cacacatttg tcatcaactt gacataacca agggcatgct cataagggat gtgagcagca acacgccctg agattagagc ttcttcaccc tcttcacccc aaactgttcc ggtacattgc ccttgtcccc cccccttgag acaccactag tgctgttgtt ggtccgcggc aaaactactt aattcaggga aagtgttcat accactgacc agaacactac aggaacacat aaagcttaac gcaggttcat gctacatcgt aggctttggg aaactgcaaa tgacaactgt taccctctga aagaagtcta gcaggaggat tgtaaacctg aaaaacccaa ttctggaatc ccctggagaa ctggattcat aatgtctaaa gtgactggtt agttcctgat ttatattcaa taaaatgctg otgtgtttgg cttcaagctt ggcccagctg gacaagccac atattcatct cagatctctg agagaaaacc tagagaattc gcaagtttcc ccttgcaaat taggtctcca agacattcaa cccttctggc tttagttgac tttgtccatt tttgttttct tccccaggaa agtctatcta ttttgagttg cgtcccattt aaataataaa tcagaattgt ggggtgggaa cttacaaggt ctgatccttc gtttttcaat agaatcgtct tatcctgatt aacagaagtc 175140 175200 175260 175320 175380 175440 175500 175560 175620 175680 175740 175800 175860 175920 175980 176040176100 176160 176220 176280 176340 176400 176460 176520 176580 176640 176700 176760 176820 176880 176940 177000 177060 177120 177180 177240 177300 177360 177420 177480 177540 177600 177660 177720 177780 177840 177900 177960 178020 178080 178140 178200 178260 178320 178380 178440 178500 178560 178620 178680 178740 178800 178860 178920

281ΕΡ 1 325 13 Ο/PT ttctgaagta taagaggaga cgtgtttatt ctctgtctgt aacatgaact gcaccctgga tatgctaaga tattttatcg agctttggaa ctgaacctaa atctgatttt gatggtaaaa agactcagaa aagaagttag tgtcattgtt ctgaatgtaa ccaggctaga atctgaagga tttgagacag ggtttctctg ctggcctcga actaagaaat gtgccaccac accaggctag tgttcctgcc aatgtaccaa tagtaaacca gaataactta cccaaccatt tttggaattc tttttcagct tttttcaagt ggttctgatt agcatttcaa tgcggtaagc agccacacac ccaggtttgt ttctctatcc cattggggca cgtgcaactc gatttggcaa tgtcaccctc caacacaaca cctctcatct aagagcaccg actgctcttc tcacaaccat ctgtaatggg tgtactcaca tatattaaat atgtacctca gagtccaaat cattttctta ttgaggttac cttgacacag cagacaagca ctctggtggc acttcctgcc agaagcaaag gacctactct tacatgcatg cacatggtac tcattaaaaa gaaaaatcag gctttgaaag ccaagaagtg aaccttttga caaaactaaa taatggcagc agtgggatta tagtgttttt gtgtttattc acctttgtgt gggtcctaga ggcttacaca gtaggtggtc ccagctcact ggccttcttt gggttcatgg ccagtgctct ccatccttag ctgtggtcct ttagtttgat catctctctt aacgagtttt ctacttctgt agttatgatc ctcacagtoc tattgcctga ccctgctogg ttgactggtt ttgttccaat cctccagact gcagggatta tgtgatcatg tggtgctcag gggtggaaag attccaagaa agaaatgtca gggacatttc tttatatagg ttaacctgaa aactctaagc aactaaggaa acccttcaag ccccacccaa tacgcacaag taacatcata acacaactta aaaagagagg acatgggaag gttggaggca nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nagagagaga gcctattatg gctgagtcag aactagccta cgctgtccca gatttgcctt gctgcctcat gctaatcagt cagctgggcc agagccacta gtgctttttt ttttttttta aatccttgea ataggctgca aagcttgatg agagcaagca tcttgaccgt agatgtgatg attgcaaggc aaacaaacct cagcaataga aatgaaactt ggctgttata attcactagg tcatgtgttt gtttctggat gacttgaatt ccgttttaga gtgcctcagc tgaaaataca actcctctat tttttgtttg tgtagccctg actgtcctgg ctgcctgcct ctgcttccca gaactcgtct attacacatt atagtcaatt gattcctgtt tctagccaaa gtctgcctat tgtgagggga atccacagat tgcaggtcat gattcagtgg aatgaggcaa gcagagggca tcttgcttgg aggcttagtc taggcctctc tcttaaattc aaacacggag tgtgactcct ctcccttctc cctagggtca caagaattgc cattagggct tgaaggttct gagttcaaat atctgattac ctcttctggt aaataaatct aaaaaaaaaa gcttcttcct cccctgacta tgcttctctg cttctaccct gttctttaaa gcagggctca atgactgatg atctaaggtt ccaaagccgt cctctgacca acacacatac acagaagtaa ggctcagcaa actttccgtg gatattaatt atagttattc aaatataaca gagtgtattt gtttcttttt tagattattg atattccaca gcatgtgtgt gattgaactc aagtcatcaa aggcttgtat ctttggaagg gtttaaaaaa agaaaaaaaa ttatcttaaa atcaactgca aggagaaaaa catacagCtg tgaagatata atcagctcac tcaacaaact acccaagctg ggtgggtcag aagcotaago tgcatccaca ttoaoatcct ttttagtata tgtgctgctg atgttcttga ctgccacaga cactcttgca cccaaggctc ccagaggaag aagaaagtca tagacctctg aagtetcaag aggggaaaaa attcttacag tgttgggggg ggggtagtct gctggttatc caaaacaaac tggatgggca gattgcattt ccatgaattt aagagagagc gnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn tcgttggttg cttctaatca gctgagacac tgtccaccca tgggggccct tgaaatgaaa tgaggttgtg aaaatagccc agggçjagtct ggtcctttgg aatgttccct gctttaggct agacaggcaa gaatatcatc ggcaagcaag ccaggatcca gctgtcttgg cttcctggga tttcctcttc caagttgctt agaacaggcc cataactgcc atagggacca ctggaagtga atgatagatt tatcaatttg gacattccag agaaaactga aagagtacag ggaagaaagc cttgtttgtt tggttggttt aactcacttt gtagaccagg agtgctggga ttaaaggcgt aacacccctc tttaattaac tatttaccac atgtttctgt tagccatatt ttcatcagtt gctgtagacc gctttagaca gtcatgaaat taatttagtg tattgtcaca gcacagcaca agtttctggc tctaaacgcc caaacatagt tagacattac ttccccatct gcggttccca gttttacctc tcacactcca ggtgagatgg ctcagaggtt cccagcaacc acatggtggc gtgtctgaag acagctacag aaaaaaagaa ttgccattaa cactcacgct ggcctgagtc ggctccttct gctgcctatc ggaccagtga gactgatcgg aagcctagaa cccacgaggt ccatgtgtaa actgcacatg aaagagattt aaattgaaaa tagaaaacta gagtacttag attatagcag agatttctaa tttttgtaat gtaagtttac ttattatttt tattaattat ggaattggat ttctgcttcc gcttgcacag taggtggtca caagcatttt acttcctgtg agtccttttt tgtttaatta aacttttatc tggtaaaaag gatggcttta tcctgcaggc atcacactca agcctctgcc agcagctcca aacaacagcc gggcgtggct acctcgctgc ttcctggtga gtgtggttct aaacaatctt tttgcctctg gcactaatat ttactgaaca ggggaacatg gaggaagagg gaggtgagac tgcatctcct aacaaggcct gaaagtctta gggtccaacg ttagacaaag tccccaggga acactcctct' tggtcagtcc tgaagccata aggaatacac acatacacac aaagcaaagt gggaaggggt nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ttagaaaacc actctcttag ctgtcccaga gcaaggccat gtcaccagca ggctccggaa tgcagtggtt cctgggcctg agcagagtta acagtcatca cagtgctgtg cgctacttct cctgttttgc cctcaggcaa 179930 179040 179100 179160 179220 179280 179340 179400 179460 179520 179580 179640 179700 179760 179820 179880 179940 180000 180060 180120 180180 180240 180300 180360 180420 180480 180540 180600 180660 180720 180780 180840 180900 180960 181020 181080 181140 181200 181260 181320 181380 181440 181500 181560 181620 181680 181740 181800 181860 181920 181980 182040 182100 182160 182220 182280 182340 182400 182460 182520 182580 182640 182700 182760 282

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT attctgaagt ctggcaaatg aaagatgtgg gatttgaaca cagacttgtt tggccaaaga attctcactc tacttctgcc tgtgccacct tcctctcatg cacggggagg ggaggggagc ccacctccca tgctcagggg ctaggaagtg gggagaagat ggatgtcctc aaagcagggt gagaatgaag tagaagccag cttcaaatct aaactaagca atgttttatt tccatttccc tgaacataaa gttcagttac atttggttta aaaaaaaaaa tccctacaca actggttctt gagaaatgtc aagtgctaca attcagtgga tgtggatgaa acaatcaaaa tgttgaacac ccccaaacag atacaaacct tcatcaaagt ctcttccaaa ggctgggtct gaaaagagcg actcatgttc cagcccagtt ggctccttct catgtgagct ccgacttcca aagactgctt gcaccaggag gaaatataat agatgtcctt tttaaggggg gtggggtctg tctgacaacc tcccacagtg actgtggata cagcccagtt agtagagttc tcgcctagca agcgtgcggc cctgggcttg agatctagca ccctaaggca tagtggtaca tgcccatgac cacagcactt gggacgtaga ggcágaagga tcagttcaag gtcagatgag gggtggggag gcattccttt aatgccagca tttgagaggc agaaacagat gaatttgtga gttcaaggcc agcctggtct acagactgag ttccaagaca gccaaggcta cacagagaaa ccctgtcttg tcaggaaaaa agatagtggg agagaattca aggttatctt ggactgcata agactttgat tccaaaataa acaaaaatgg agcatgaatg cttgcaactg tggacaatat tgggttcata catattctgt tttgtcacct acataccaat tatacaaatc agattcagct gggcccactg gtgcatgttt gttcccagca tctgggaggt agagatgggc agagctctat gactttaagg ctagcctggt ctacaaagta agttctagga cagccaaccc tacagagaga tacactactt ctaaatcaat caatcaatcc atcagtcaat catgggctgg agagatagct cagtgatcaa tagtgccatt cttccagagg acctgggttt gattcccagc acccacatgg cagctcacag atgtctgtaa ctccaatccc aagggacatg acaacttcta ctggtctctt tggtcaacag gcatgcacgc agcatacaat atatatatgg gtaaaatgct atatatataa aaatcagatt cacaaatcaa gtaeagaaag agatcaacta taatgaaaca accataacac atactgtttt aaaagctacc tttcctgtct gacatctgac ttcttgcgtg acccagtgcc tccacaatga gacaagcaga tggtgtagtc cctgtgaccc aggattaggc aaccactgcc cctgggaagc cattcctagt aacaggatca aatcccacag tgctccactg taccccgcca gaggacgtga agcctccctt ccccggctgt ctgtgcagca ccgcccagat gcttggtgtc' actgagtgac catcggagcc caactgagga gtgcctcagt gctcctcagg gcagtgtgca attgaaactt gcatgtgatt tctggaattt gtcatttgat atttccagac tccagctgac cttggataac agcacagagg gcagaactgc agaggaaaag gggcactact gtgactgtta tcccctgcat gattatagaa gggtctgtgc tttctcttac aaatcattgc ggcctctctt cacttccctc ctttgaagtc gaaaaaaata gatgcatcct cacagtacag gatggcaggt acgaggcggg ttccgggact gaggcaggac tcatcatgca gectctttcc ctcaactaca ccgccgcccc tgcagagttc cctctgatca aatcagtttc aggcctggaa agaaacggcc actcaggctg gggatgtggt tccattagag gcctgcatgc acgaagctct ggatttgatc ttcagcacgg gcataagccc agtatggtag tatctgttta gcatggtgtg gaggtatacc tatctctgca cagggagacc agaagttcag agttatcctt gcacttacag taagttcaaa gctagcttgg gcaacatgaa gttttgtctt aacaaaacga aacaagaggg gccggggaga tgcttcgctg tgctgagtca tttgctgcca agtttgatga cctgagtttg gtcccttgag cttatggtgg aaggagagaa atgacgcttg aactccacgc acatgccaca gcccacgcat gaatgtgtat acacacacac actaagtgga taaatgttaa aaataaataa atcaaaggaa tggccactca aaatctacca tcgttgggaa gggaggggaa aaggcaggcg agggagatag ataaccctga tatgaacacg gaaagagcca gtgtgccacc aaagctgccc agtgtgccac caaagctgcc cagtgtgcca ccaaagctgc ccagtgtgcc accaaagctg cccagacttg attacagatt tggccaggga cacaggaggc cagcaggagc agccaggttc cacctcagag gtggagccac aaacctggaa atgaaacgtc tttccctttc ttcagaccac agcagtgaca gctgtcctgc agagtctgga gggctggcag ggctcatcca ctctagtgtg cctgtggcca gaacaggcct cagtcacagg tgcttttcca aggtcttagt gtctaattaa ggttagcagc caaattggag agagaagggt gctggacttt actctgctgt aaggactttg ggcattgttc cattccgtga tcaaatacca ctggctctgc caaccaccat gtcagtgggt cttcagaggt agaagaactc atcctttttt gagaggtttg gtctggtcct tgtctaatgc aaaatgcctg gggcaccagg ttaatgtcaa ctcaaaggca agtgctggtc cagcatgtgt ggaatcctaa gttcaatacc catcagagcc ccaagcccta gaggacagac atgctttaaa aaaaagtcat gctttaaaaa aattctgttg agggggctgg agaaatagct cagcagttaa gagcactagc tgctctttca gaggacccag attccgttcc taacattttc atggtggctc aaagctgtct ataattcaag tcctagaggg gaatctgttg ccctctctgg ttttctcagg caccaagaac acatgtggtg caaacataca cgcaggcaaa acactcatac atatgaaaca ttttttataa acctgctcgg atgtggtggc tcatgccagc gatgctctca gcactcagat ggcagaggca gggggatttt gtgttgagcc cagcctgagc tatagaatga gatgctgtct caaaaagaaa aaaaaaacaa aaaaaaacaa aaaacaaaaa caaatctgtg ggcttaatca ttcctagcca gaaggagctg gctccagcaa caatggatcc ctagagctct gctttgcccc ctggtctgga gagcttgctc tagaaaggaa ttctccatag accacatttc tattttgggg accactctqg gcctgcacat ggaaaaatgg agagttgagg tttacatggt catttttttt gttgttacag taatgagagc tttgaaatga 182820 182880 182940 183000 183060 183120 183180 183240 183300 183360 183420 183480 183540 183600 183660 183720 183780 183840 183900 183960 184020 1840B0 184140 184200 184260 184320 184380 184440 184500 184560 184620 184680 184740 184800 184860 184920 184980 185040 185100 185160 185220 185280 185340 185400 185460 185520 185580 185640 185700 185760 185820 185880 185940 186000 186060 186120 186180 186240 186300 186360 186420 186480 186540 186600 283

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT tcacaaaagg aaaataggaa aatatgcctc aaccgaatcc taaaaggaat gttcaagtaa ttatggcaac tgacatttaa aagtaacagg tgcaaagtct tgcaggaact tcatgctaaa gtcataaata tagcttattc ccaaatcctt ctaatgagga aatatttcca caaaaaccca ttctaatata atttatcaat ttaaacacat taaaatgata aatagcaata gtggtgaggg atccaaagca gtgtagctat atttaaatac tctcatccgc agatacagtc tagactcaga taggacagac gaaggggggc aataagaaat tattaggctt tgttataaga ttacatcaaa aaaaagcaac tacttggggt ttgcgcctgg ttgcataatg aacaattttc attcaatcag gaacccggca caggctcata gtttttatct ttgcagggag agaaagcagt cgggaggcat gacctgactt taaacagttt ctctctggag ggattgctct caaagactct cggactcctg agcatggatc tccggccctt ctcactgctt tgcataccag gaggactgaa gtttggctcc aaccacccaa actcatttcc gacttggttg ggattcataa aataaggcag aggcagagaa tacccaaaat ggaactgcat tttcatgcac tttggaaaac tggcacagct gacattggct gcaccaagac ccagggctga ggcctaatcc gccgctcacc aatcccggct ggagccgcag cacagtcgca ctatgctctc ccgtggggag tttgtgaaac tgttttcgaa aacctgggat gtaattcaaa actaattacc ctgagcacat tgcctactga ttgtgcgctg cagctcactc taacttccag gctaaatcag gcagccacag gacccccatc cctgacttcc aggcgaggag agggtcttgt agttctggct gccgaattat gcattattta atttaggcta gaatgacctc catttcctct tcttcaattc gtggccccca tatccttgat cgtcccaccc cacttggcta tttctgggtt tgcaaggtgg tcaggtccac accaacatga gcggcgcaca gccgccatca acaggcatgc acacaccggc agacatgtgc cagagtaatt aggcctaggc agttcctgaa aatgagttct cttcctttgg gggtgctaaa gggtgatgtg gctgaaacca tttctgcagc tggggagctg cagtcggaag aggcacaatt çgtacactcc cagaaataga cagatgaggg catggcgggt ttttagacat ttaggaatat aagtttgaca gagtgatatt accgggttta ccacaccacc gccacccaag ttatcacatg caacaagaga gggagccggt ctatctttgt ttgtgaggaa ttgagtgtac aacactccaa ttagtcggtg aagcaggggt aactgcgctc gaacaccagc tcgaggaaca ccaaaaaggc ccgaattcca cagggcttaa gtattaagcc tggcgctcag caatctcatt tattatttct tatcccctgt atctgactca cattctcctg ctcccctcct cctgcctatg catgctfctgc gaccccctcc actggactct ctcaccccac tttatcaagt gttctgttgg tgagccttct gtttctattt cctttacatt tcttgtageg actgagggtc ctggtagttt tagagttgga accacgcacc áagcaaaaat tgcacccacc ctcgcccaaa gccagattta ttgctcctgc aaaagetacc acttggcaga agatcaagtc acagggcggg atggggcggg tagggtggag tcaatattta acctaactgg taatttgctg ctaaaaagag ccgaggcaaa ttattatagc aaaaaaaaaa atatggctca tgcgaagttg atttgggcaa gtttctttct ccaccctctc attatgcttt aattttaatt agccaaatag agaatttcta ccctgcaagg agctgaacta cttaccatta agaaccccca tccgatattt tgcataatgt gccactctgt agcattccat gtggggggca aaaaccagga gattaaacat ctcaatccat tgtagaggaa aacacactgt gcagcatatc cttgactgta agggtattaa gacaggaaac ttcagaagaa ataaaatttc gcagttcata tgttttaatc tggggaggaa gggctgcctc tgtgtactga accagacagt gatctcagca gagatagetc ctactcaaag cccagctcca cctgctggag aaaccttgta tgtcctagtg gctgtgtacc taaagttaca gttgaaaggg gctctgtaag ataccagagt ttacaggcaa gtaaggtcct agcagatggt tcttgaatca gggatttaga aattgctatt cggtgaccag aggacaaggt cattgtttaa gtcaaatttt caagtttccc agcagtctaa acggagggtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg aatagaaaac ttaaagactg aaccaatcat agaggaagga acggccaggg cgagccagct gcctttatcc gagggtttag tgaggctccc aagagctctc ttcacttggc tcagtcccag gccgctccgg-gagggggagc gacatcaagc gatcatttaá atgtttaaaa tatgcacatg ttgaaacatt tatgccatca tcttggatcc tggtgtttct ataaactgct tcagcgattt gcgctgcctc cagccctggg ttggtggaga gcggcccgtt tctccagaga gccgtttgtc tgctcttatc cgtgttcata attctcatct tttccctcec gagtcttcct ccctcattcc ttttctgatt ggtccaaata tatagacaaa catcttcatc tgggagccaa tgtggtgagt cagtcatcct aaggtgtgtg agagaggtag ctgagagagc acgtgccctg cagctcaggc acatgcgctt tccccagcaa accctgcttg gcaaattcat ttcccccttt tccagaataa ccagcatgcc agtggctaga agcctgagat caagcctgtg ggcagaagct aaccttgggc ctgggatcaa gaaatgagca ctggtttata ctgcctcctt attagcgctt tgaagatgcc aaaagtaggt tggatfcccca cagtcagctg actagagcca ttaagagact cttcattatc agccataatg caagagaatt ttcattccat ccaaaggaaa tgagcagccc agcgtgaagc taacatcccc tgcaggattg cctctgcgat gagcagtctg cctgtgtacc tggcttgcaa cgattaatga caaaggacac tcatagaggc ccaaagaaat caaggtctag gccattctcc ctacaaagat ccaacactca atttcccagg ctcagtaagc catcctggtt tgaaacgggc gtcttcacaa cgacagctgg taattcgcaa atacttggaa ctactccttg gaactacttg cttgcattaa agctgtgaga aggaaccaca tctcacatgg gagacaccca ggttagatat gttagatgac ccagcaacat gccttccccc cttccctcag atgttcctgg catcttataa tgtaaagtgt atcttctcta agcctcactt agaagtgcag gctagcaggt gacggtgagg cgaataattg aagctccaag agttaccagc tgacaattac gccatgaagg gaacgctgcg 1B6660 186720 186780 186840 186900 186960 187020 187080 187140 187200 187260 187320 187380 187440 187500 187560 187620 187680 187740 187BOO 1B7B60 187920 187980 188040 188100 188160 188220 188280 188340 188400 188460 188520 188580 188640 188700 188760 188820 188880 188940 189000 189060 189120 189180 189240 189300 189360 189420 189480 189540 189600 189660 189720 189780 189840 189900 189960 190020 190080 190140 190200 190260 190320 190380 190440 284

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT agggctctgc atttcctagt cacccgcact gggagctaaa ggttccatta ggagcacggg tgatgcagcc cagttaagcc cgctaacacc gcgcggctca ggccctcacg ccacgagccc cctgcgcgtg cctacactgc aaatggacct ggcttggcgt gggtctgatc cttcaagagt aaagtccatg ggaacaaatc ctcctcttaa aacaccccaa ttgctaggct aactctgata tgaaggagga tggtgccatc ttctgaattg caaaccattt tctttttttt ctcttcttaa actatgcaag ttaataacac cagcatatgg ttcaattcgt catttgactg gcttcccaca aactttaata gagcgtgaga tgagacaaaa atgggagttt ttagtggtfcc tatggagatg gtagaagtgg tgcaccccaa aaattttagg tcgagttgag ttttttttta tggctccctg aaccaccgaa tacaagctct aattaccgac ttaaaagttt attagggact aattatacat aggttatgaa cagctccaag ggatcactta ccatcttccc gggtctctcc tttttttttt aactcacttt ctcctgagtg tgaagttccc tccggctcag aacccccaca gcaaggctac tgtcggaggg tgtcctttgc gccttggtgg atgcctccct atttacctgc agagaccctc gcccatcaga gtgattcagc gccactttta gggtatataa cctcacgcct actaagtgtg ggtgcctggt gttatgtcac tgctctcgta gaactgtaag aaagtaactt ttgtgtctgt ccactgacat gtcattcaga cctagggtac ttgtggatta acatcaacag cttgaacaaa tccggccttt ttatttcatt ctaaggttac tgagatgaag aatgttgctc acagaatgag ctgtgcacat cctcagatag acaggcatct gcccggcttt aggattttct caggaatggg gaatattaat tgaggcatgg atttatggag tagcttataa tgggggtggg gcctatgttt ccaatagaaa cagtggtgtc aagtccactt cagcgagagg agggaactgc gagcaagcta tgggtaatcc acacaatcac ttttgggtgg tgagatttgt atggccaggt tcataagctc ggctacccac aacatggctt aatgtggact tntttggttt gtagaccagg ctggaattaa agtgacctgg aattttgggg ttgggagagg acagcaagaa tgtgaggcct tccattactt ctgcaatctg ccccaccctc cagcctttgg acagaagcac agaacccagg cccataaatt ttgaaataga gagataatcc gcctgcaagg gaggtatgga tggtggcacc tgggtatggg aggttcctgc ccacttactc gtgtggcagc ctgtctgtct gtctcagtcc ctggttttga tcgaccagac tttgtgtata tatttagcat tgaaaatcaa taatacagtt gcttaaccag ccaaccacgc aacaatcaac tctaattaag ccttggctcc aggccgtgag agcccagaga tcccggaaag caaccaggaa cacagaaaga gacacaagcc atcttggcta ctaagctggg ggcttgctgc aactactcag gtggggcaag agggttgatc tgacctctgc aacggagaga gcttgggact ctccagtttt acagcacaca tctgaagaag actagggagc ttttgagttg tttactcgag caactgctgg aaggttgggt aaacaagtct ggacaagcac ctatgttgct caaatcatga ttcgagacag ctggcctcgg aggtgtatgc atgtcaactg ggacaaggta cagaggcaga gctgtctcaa tgggggccag aatcagaatc catttaagag cctgcatccc tgggacacag ctgaatgtac cttatgctaa tacacatccg aaagatgcct catgttgtct tagccaccaa taaaaaaaaa gtttggggag ctttgagagt caccatgttt tcaggtctct cagctaagca gtcattccat tcttggtatc gcttgcaatc tgggagtagc aagatctgat caacttaata acagcagtac cctcgtgttg agttaactgg taggaaggag ataacaggga ccggãgaçfcc attttaaaca agaacaattg agcttcccga accacggctg gcagaggaaa cacctgaagg cccaggcacc agttaaatat ctgtcatttt aggtagtttt actataagta gctgcaacca ggagtagtgg gcttccaagt tcaaggggcc ttctcataca tcaacaaccá ctacagcntg ggtttctcca actcagaaac taccacgccc aagttggatt ccttgattta ggcagaggca aaccaaagac aacaaggtgg gccatcacag ctaagtggga tccatttacc gcttagtggc tttcagcgct ggagccagaa tacagccaaa attotggagt ttgatgtggt gccacaccca tgtcccaaga gcagtggacc ttgtagcttt cctctgccat ttcagtcctg agggctgtgg ttatatagtc atatattcac etcctgcctc aggttctgtt ggcccgaccg aactcatttg ctgttctcct cggtgacccc aagggttaat aggaaagggc cagagcagtc citcãgâãcfa aacagtgcag catctgcaga ggcaagccca actgaagcta gtccaatcag cagggcattg agcccatcgg aggctgggtt taatgacggc ggaagaacag tttcacacga acaatgagtg agggtcctgg ctcaaatata tggagagtta aggaccggct gggcagggtg gggttttttt tatagccctg ccgcctgcct ggccgagtcc ttactgtgat actgggcact gaaagttggt atctttcttg tcaaggaaga atatagctag taaactcagg tgtttccagg ttagcgctgc gcagagcacg agtagaagca cccacttgaa gctaagtggt gctagggaga caacctctat cctcacgaat atttggtctt gctccccttc tatggacacc gagtcttatc ccgactgctt ctgagaattg tl*aana(»99/t tgcctcaagg ctcttagctt actcccttcc gtaaagccat agagcagcgg CCCCGCcccc aataaaacca cactcgcaca cttgtaacaa gãgctcgctt gaggccagag aggctagccc gaagcctcta taaataagcc agcttcattt agtagagcct ttggttacct atctgcattt acaaacttcc ttcaccatta ggcaggtggg ttttctcaag taatgcagaa ctcctaaggc agacaaataa acctccaaca aattaggggt tttttttttt gctgtcctgg ctgcctctgc gtcttgataa gactactgag acacgactgt tggaggctag atceaaatcc ccactgactc gagattttaa ggtgggccca gatctgctta tcggggoacc cacggctcag gctggcaaga gtgatccaga acaggagggt taacccagga ttatacacac ctgcaaacat gcaggaggaa cagttaactc tggtcctcta atagcaatga gggattatgg aaccacttta

StCtCMttãã cgataggatc tctacagtga ctttaagtga ctccccacct ctctcagcct agccgtagaa gtctgggaga aacctgtctt gtgcaaagga 190500 190560 190620 190680 190740 190800 190860 190920 190980 191040 1311G0 191160 191220 191280 191340 191400 191460 191520 191580 191640 191700 191760 191820 191880 191940 192000 192060 192120 192180 192240 192300 192360 192420 192480 192540 192600 192660 192720 192780 192840 192900 192960 193020 193080 193140 193200 193260 193320 193380 193440 193500 193560 193620 193680 193740 193800 193860 193920 193980 194040 194100 194160 194220 194280 285

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT gagagagagg ctgagtttct acttctataa ataaaccctC ggcaggcgga tcactaaagg aacacaagtc aatataaacc tttagacatg gggctgccaa acttcacttt tcgacagtat attaattatg tagtcaatag ccatgggttt cattagcgta ttaaatacca cgatcaatat tatttatact tttcgaagac aagccactca gggaaaaaat ggtgggggga ggaggaggaa caatttgacc ctgtagttca aaaaaagtca gaacagcaca cbagagabba gcaagggttt aatggaaggc ataaaacact ggaaatatgg acagaaatca gatccctgcc ttcatttttc tgccttttac aaagagactg gagggaattc agaaactatt taaaataaag gcaaaatgat tagagcccct ccctccccbc agctgcttaa cactggggtt gtggtggacg caaaataagc abbgagcbct aagtgataga tgagaatcag aacaggaaca gtgtttttga ggcaaaatat gtccaagaga attcaaagaa ctgtgggcca gaatcbactb aggcagtcct ctgggacccg aatccctcac aggcgttaac agtggaacca atttccaagg cagcccfcgcfc ggtgatctga tttttgagta gggaaatctg ttaaacatcg tcccacgagg gagcccagct ctttcactcc ccacgggttt ctacatgcag ctgtgctaga tctgctgaag tggccggtga ggaggtgtgg ggattggttc agcgacctca gaggacattc ttgttcacta gccctcgtgc actggggcga tgaccgaatg ctgtgagcag gagatatcaa aggccggcta ctggactgaa aacbagabca ccatctctaa cctgcaattt gtcaatctca gacagcaatg aagactgtga ttttctagtc aacgctttgfc aagcaaggtc agatagaggc tccataaaaa ttgttcaggg ttcaggcaga gaatcaagtg taactcaatc cctatctcct gagattaggg aagggaagga aggctgtgtc tactaaacca gtgagcctca agcaaagcct gtctgttctc agcaaggtga gccacccacc aaagatgcca acagctaagg gccagggatg tagtgcaggg tgctgtgata tcaacagctg ggagacagaa acaggaggat caggacttca aggtagtttg ggctataaaa tataagcttg aagctaccca cttgaagact gtccccaaca aaacaaacaa gctgggtatg gtggtcgatg cttgtatttc tagtgtatga gacgaaggaa gaaagctcaa gcccgagacc tgcttgggtt acatagggaa gatggtgcct caaaaacagg acagccgagg agcagacaga cagggcagac agggtgcatc gatctaaatc cacabacctg gatttaaagt aatatccggg agactggtct gtgagggccg ttccagagat ttaataaaga cccaccctga ctgagtatgg gcaacaccca tgggtggccc aggggtccag actgaataaa gggaaaatgg gaggaagttc agctggtagt gtttccaagt attaggacca cagcctggcc cctggcatgt" gctggccagc tagtctagct ccagtatcaa gcttcaggcc agcggcaggg cactggacag ttcccacaca cgacacacac acacacagag cactagcatt cacctcctgg tctcttcttg acaacagata aaatgtaact ggctgccaca gtgagagtcc cctaccttcc tcaccgttaa ggatggtaca aactgtgagc cagcagcagc cabbbcbcca gtaacttgct ttccacagat actgttatag cactaagaaa agcaactgaa acatggggtg ctgtgacccc ttggcaccac aaagccatgg caagcbgaag tgcacacatc acaggccagg cctgaagatg ctgggggact gcaatgctgc ctggattctg gcagagatgt gcagcagatg ccaagaggtg ggctgcagca accagagata atbaababga ttaggaacac actgagcagg catgctcttg ccgaatgaaa agcctcgcag tgtaatgact gttttcttcc tcgatcacgg tctccacgtt tcagagttgg cttggtgtta ggctgccgcg taaacatcaa tccaaccccg aggggccaga tcatcggtgt tcctgggctc aatcgccttt ccttttgtgt tttcattcat ttaaagatgc attccagggt tgcaaacatt agtgagaatc abcbccaggc ctcagtctaa tctctgagtc tgtaatgagt taacatcttt ccctagbgaa tatttattat gaaggctaaC taattgcttt ccagttacaa gaatcettta cagtcaaaga aagtaggatc cacaaagata bactgbbbab tcaaacaaag caaaggaaac aaagcttctt tcttaaattc tatttaacat agctttaata aaggtacaca ggtccgcctg gcaaccgaac ggtaactgat gcaaactgaa gccatgctct gtagcagcct ggatgtccca gtgccacctc tgtctgcagg ctttgtcgga tttactaaga ttctgttatc ttcaaacagg gattgtgtct caagtaactg accccactat gtggataatg aagtaaatta tgcaatttgg gggtttgctt ttccccaagg ggacagcaag ccagtgctta tcagccgtcc tcagaggaga caattctgat taatatcaga gtcabctgac tcagbctatt aaacctabca aaccctgaag gaaggatabb cagatabtaa cgataggccb btgatbaaba abtcbacctt gtbgccabtc taagcattaa caaccabgca gbaacbcbgc aaaacagacc cbbtgattcc aggcagacgc accctcbgaa cacctgggtb cbcccctact cbbcbccccc caggaggaac bcaagacaaa aaggbgccac cacbggaaaa gcacactcca ggbbacataa tbtgcctcab babccagagb ggggbbaabg acbbgbgaca taatbbcbgt bbgaagabaa caaaabttca tgaaabccga caaagccgga aggcaggagg aggggactgc bgccacacta ccggbggctg agaactggag cggaaggttc acacacagcc ctctgagctc acbgtctttg cbtabcagtg agtcccaaga ggggcccaga bgggtbgcca gcctocccta gaggatcbbc abbgbggagc bgtcccabgg ggcgggaagg aagccabtct atttcbgbtc bbcbcbcbbc çgtbctggcc accagbggba ctbgcbccca tcacabgttc ttcctgabgt bcgcgabcag ccgbctgcca tagtctctga agbccacggg cbbcacgtcc abcacagbgg ccbtaatbcg agabbcatcc tbtagaaaag agagaagcbg bbbgtgagtg gcagagcctg gcgtgcagcg gaagagagaa cbbtcbttgc tbcagbggcb bcaatgagtc cagcaggaag aaggaaagbb bacaagbcbc agagagaaag tgctgtgact bccbggagtt gggccagatc cbcbbccaca gaccctbtcc ccatccbagg bgccctgbgc bcagacctag cabccbcccg gagaagccbc bgtcbtbcba tgggtgcagb gggggcccag agcagacagg taacbcaccc taaagcabca cbbbcabcba gaggagcbct gtggtagbag 194340 194400 194460 194520 1945Θ0 194640 194700 194760 194820 194880 134940 195000 195060 195120 195180 19Ξ240 195300 195360 195420 195480 195540 195600 195660 195720 195780 195840 195900 195960 196020 196080 196140 196200 196260 196320 196380 196440 196500 196560 196620 196680 196740 196800 196860 196920 196980 197040 197100 197160 197220 197280 197340 197400 197460 197520 197580 197640 197700 197760 197820 197880 197940 198000 198060 198120 286ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ggactgaggc tccatcccag ccagcctacc ggtgataacg cacttgtctc cacaagtcta ccgctgttta ctccatggct aagcttgcaa ctagatagat cCggacatca tttgtttaat annnnnnnnn nnnnnnnnnn ctcctgctgg cacagtgtca gaactcgagt gattccctgg tgtaccgatg gagaacagca gagggggggt aagttccaca agaaacagat ttttctcctt tatatctaag cattatggat agaacagtca tgagttaggt caatgatact ttgctggtct gttatgtacc gtttctctgg ctcagaaatc cccagtttaa ctggatgttc cctctgcctc ttttttaatg cccagagcgg ttttaaaggc cacacccgta tgctggtctg cagtttgagc gcagagaagc aacaggaaat cttctctact aaattaaact gcctggttct gcctcactag tggcctgttc cagaaccaaa ctcttcagca acgtgcggtt tggagctcag tgcggagggg ctgcacccta cactgcgagg aatggcccag cccttcctca tgatgcccgg gcgttggctg gggtgaagca gactcgagtg cgtgcccttt ggctgcccag ttetgctcca gctctgggca gaagacagaa aatccctaca tatgttcatt taatacaaca cagaatgcac aaactctgcg cttgaactaa acagtgtctt gctgggggcc ttcatgcttc caagtatggt taggagcccg ttaggttcag agtcattctc caacagct.cc aacacagaaa ggggcaggac ggactgtcca ggattagttt aaacacttgt attctgagtt ttagaaccta nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ggttacaggc ttgagccacc agctggatat gatggcacat tggtgaaata gtccaccagg tcacatgctt taaggaaaga catgcttgca gccacccaca agtgaacaaa caaacaagcc gtaaagctct tggcaggtgg tgtaaggtca tgtgatcgag gcagtctgtc atatctaaac cctttctttt ttctctccct tacactgtag ctgtcttcaa ggttgtgagc catcatgtgg gtgctcttaa ccgctgagcc tttgtgtagc cctgggtggc ctgcctgatc tgtcttaatc ggaactaaca gagatctgcc accacacctg gagtttaagg gtagtcctgg ctgtcctgga cgcctgcctc tgcctcccaa gggttttttt ttgtttgttt tggaactcac tctgtagagc ccaagtgctg ggattaaagg tgtgtatttg tatgggtgtg aagtgttctt aaccgctgaa accaaactct taggtaggag cacacccgta cacaccacat gcctgtgtat gagctggaac acaggctctc tggtttctgt atctgcaagg ctgtgaccac ctcaggagag tatttccttt tcccagaaca ttgtgtgcca ccttggtttg cagagtagca gctgctggca gagctgacac atccgcgtct cagagtctgc aggatgatct tcctctgcat cgagcctcgg acgaagcccc ggggtgggga caagagcaag gtttccgtgt ctgggagatc cgctggtgct tcgcgctccc taagaaaacc cccaggcttt ccccccgctc ctcgttcatc agggccgtgg ccaggctcag gggagcagaa ggcggaaagt ggacctgaca tggaggagct cagctggccc tggcgccggg gctagtctcc gggagcgccg gaagtcagga ctttactgca gaggtgcatg ggctgcggaa gaggaggggt cctgtagccc aattaccgga acctgtggcg aggttacttc tctgctcttc accattcctg ctctcccttg atctacccga ctttctgaca actaaaatat ctattcacag gcactaagct gctgcagggg agacggcaga gttcctcctc tgaggcagaa cagggtgaca cctagggaca catgtgctta gtaattaatt actacatgca actgcctggg ttggcctctc gcctctgcca tgcatgcctc tgcctgtctc tccgttggta gtgctgtgag ggtcgacagt ggatagatgg gtaagcaggg ttcatcatgg ctatgcagct caggtggggc acttttacca gcacgtgcta aactgtggga aacaagagtc cacacataac nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ngccttgaac ttgcttctgc atgacagctt tagcaatagc tttgtaaatc gcttgcaata ctaacctcca aagattccct taaaagagct tgctgcccaa gcctgaatct acttgccgaa gatgtcctct gagtgccacg cacccacaca agtgcactgt ctcacacagt gggggggggg ggattgtgac cagaataatt ctggctcctg gtaacactcc ataagtgggg tacatctggg cctccaacag tccttgnnga cattgttgtc gtatctctgg gtagtctttc ttctctttta aaaaattatt tatttattat acacaccaga agagggtgtc tgtcagatct ttgctgggat ttgaactcag gaccttcaga atctctceat-cccccaaccc ctttctcttt gttaccttaa ctacactggc tttgaacttg attttgagat agggactcac tacatagcct tgtttctgcc ttgcaaatgc tgggaataaa gttttttgtt tgtttgtttt tcgagacagg actcgctctg tagaccaggc tggccttgaa gtgctgggat taaaggcgtg tgccaccacg tttcctgaga cagggtttct ctgtgtagct aggttagcct tgaactcaga aatctgactg cgtgtgccat cactgcccag tgattttttt tgggtgcttg tggaagccag gtgtcagatc ccatctctct tccctcttcc ctaactctga actatacaca cacacacaca cacacacaca gaccatgcct gagcacacaa gtggttttat caaaaccttt gtcgggagat ccgcagtctg tctctgtcct gtgtcgcatc ttgactagag gctggctggt gctctgccat ctacattttc taagaacgcc agaettttgt gcctgggcca agtggcaagt tattaaccaa gtgctttgga tgggagcatt gagagggtgt atgcctaaag ttggctaaag ggctggcatt tctgagatga aggagaaatc agagagggga gaaggtccag ttaagggcgg ctggtttgcc cacgtagccc ctaaaggcag taggagagac tgagccttgg aggcgggatc tcgcccggcc ctttagagac acatgacccg catcagctga cccgtcacgg cgccctgctg cgccccggag cgcaggaccc ctttcctttg tcgctggttc gcgcagtcac ccagtcttcc cggcctggca ccccggaagc ccttgcgctg cccccaggcg gccaggacca ggttcttaca gcagggtccg agggctggtc gctccggagc gtggagagag atctgaacat gggcactcat gtagtggccc tagtgtccac actgggaccc tgtccccggg ctgagggcct acgttcggta cagaggctgc ccccaggctg acggagaetg tcctacccgc tgggtggagg tgaaactctc actcggttca tgcaggaggt ccatgcatac cacacttatg gacagcctta 198180 198240 198300 198360 198420 198480 198540 198600 198660 198720 198780 198840 198900 198960 199020 199080 199140 199200 199260 199320 199380 199440 199500 199560 199620 199680 199740 199800 199860 199920 199980 200040 200100 200160 200220 200280 200340 200400 200460 200520 200580 200640 200700 200760 200820 200B80 200940 201000 201060 201120 201180 201240 201300 201360 201420 201480 201540 201600 201660 201720 201780 201840 201900 201960

287ΕΡ 1 325 13 Ο/PT cagccacagc gagggtgtat cagggatggg ggctttgctg gcatgatgta tcttctcttc ggctctgtct cctgagcgct tgggacaggc gaaagaactt cctcãtgcãg gctgccctgg caagttccga ggcatttgtt tgacgtgctc gctctgtgga gatgcagacc ttgctctatc ggaatttgtg tcactggatt gaatgtgtgt gctatttgat tccactcatc ttcaggacaa tggctggact tctggattcc agcatcacct caaagctgcc cttcagtccc cctagggagc gagcctcttc caccagggtc gggtctctgc actcctacag actgtttgag cagcccctto tcttttatat tctgtggcag cctgcctttc cctatttgaa gcctctcatc cgactgtttt gctgccccat cctggtcggg tgcctttggg cccagactac cttccaagct cctgggccag tggggatgat ggacttgaag ggaggaggac gctgtccatg gccgctgaca ctgagggggc accagatcca ctgtgtgtga aaagccatac tactcgaggg aagtggtggt aagagtgttc gagaggcagg ggtgcaggcc gccagcctgg tcgaaaaaaa actgccccct ggatgcacct ccctgcccct gagtcgcccg gttaccttca cgtgttctga ttgcaccaca tacgagatgc attaagtctg cggggccttg gtggtggact ctcaacaagg gcaggtggtg tctgacafcca catgtccgag tggacaccgg caccctgaca gctgcccatc gatcttacct ctgcacctgg cagccacacc ccccggctgt cttataaatg agagataggc atctccctcc ggcctgttgt gggttggacc atacaggcct cagttggagg catcgagaca cggatactgc atacgccact ctgagcggac tataggccgg agctccgtgg caggcccggc cagctgggtg gtgctgtcgc cccgttgcca ggtgcctatg gtggcccagt gtcctccagg accactgagg gaagagattc aggtcgggcg ggactctacg ctgagtgata ggcggtgccc cagagcgaag caggaggatg gagacggtgg gagcagacag atgggtcagg ctgtagcasg gtggaaagtg cttgggctga ccctgggtgt tgagatgtga cagacaggga gaaaggctaa tttaatccca tctacaaagt aaaaaaaaaa cagctctacc tgccctagac tcttgccagt gggtgaatcc ctcggggcag ccctgcctgc agatgctcta tgtggtacac gccctgccaa gctgaccaac gggccatgga tgcctgtcac ttgctgtaga cgagaagcta cttccgagga tgaaaaccag aaaaagaggg ggaagggaga tgctagactg ggtccatggc ttaccacacc ttatgggcgc gagataagca attggacttc caggaagtgg ggagccaccc cgtactatgt atacaaggcc cgcagtggga accccacgag atgagtgcat acccgagttc tgcccgacct ggatgtgccg gagccctcct ggagagctgg ttggctacaa actccagggc tggacgetca cacccatctg cccaacgcct ggctggatct tggtccagcc tattcgggag gtgcgggcag gcttgtcgta ctgggacagg agaagatgat ccgggaaagc aggtgaccag ctttttctgc accctcgggg ctggggaggg tgaagagggc tggaagagct ggagaaagtg agcctgaaaa gcctcacgcc tgcaggtcct gggtgtcctg agcctgatgc acctttgtgg ecaaggacat ccccgtgtct ccaaaagtcc catggtgtcg tttcccaggg attaccccca tccccttccc tccatacttc gtgtggagga tgaggtccag cggtgttaaa tgacatcact tcatgtctga ggagcacacg aggccctggg ccccaaaaat agagcccctg ccgcctgcat tggtggtgcg gctgggcttg tactggctgg ggtggaggct atgaggaaag tgagctcccg agatggatgg gcagccggct tcagcttcca tgaccaggcc tggctgaatc tccacagccc agagcagtac cagcgaagcc ctgcggacaa gaacagcgtc gctctgagga agaggaggag aagtcacggg aacatccgag tggctcctgg tgatgggaga aaggcaaaga acaaaagatc tgcttttcct tcaggctctc cacagccaca gtcagacaca gggcttagat ttagctttca ggctgggagt ggagttgagt cttatctcta gccccagaag atggagccag aactggccgg acagtgtgtg tgtaccfcctg aatggttttc ttaagagagc gcactcagga ggcagaggca gagttccagg acagccaggg aaagagtgta gaagggtgga tctatacgac aagctctcca atcccatgtc tatcaaatgt cccagccttt tgcgagctga ccttatgtgc aattctccct agccaagcca aggtgctctt cgccaggggc tggcctgtgg tgcagtgagc tccggctgga gagggctctg aagagaaaaa actgagtgtc ccacctgcca cgaatc.agca acttccacta ÇstCCCwuCt utC3CCvM§t ttccgagacc ttcgtaaatc acctatgaga tgacccggca catgttcctc accacatctc cgtcgcacac cgcgctcggt tatcctgcca ccatggagcg tacacggacc cctctatctt gcctggtgca gttctaacca gaggtgtccc aagacctgca aaagaagctg tgaaggagaa accagctatg gcgtggtaca cctgccctgg cccctgaacc gccacaggcc aggaggacat gaggccactc catgtgagac ttagaacagg ctacagaagc ccaggctctt cctccagtca tctcgaccag gccgtaggag aagattgtcc ttccagaggg ggtaacttcc tggccaaagg cagccacctg tgcacctgca ttggctgaga tggtgtttgc gtacgctttg aggctgttcg ctgcagcctg tgctagacac aagaagggca agctagaccc cccagcccag eccagcCcct ccagcactgc acaagttcat ggtcgggagc tggcgtttgc cccgagggct tagagaccct gctgtgtaca cagcctggta gccaacaagt acctcctgaa ggccgcttct acctgtacac caggcottcc tcacccacct tcccaggagg agggcaaagg gtgtccgggc ctggctcctg gcttcctcag gactggggct gacctgccgg acacggagga caggaggctg aggccgtgag tcccagggcg aggagagggg aagtcagggg acagcagcca gaggaaggct gtgtggtgtt ctcactctgt ctgacacgat gacagagaag aggaagagga ctccttggtg agcccgtggg atatgctggg tgtgggtcca gtgcatggaa tgtggaagtg ggagacagaa agctccttta ggtagagcac ttgtctggta aagtattaag aaataaaagc aacagtcggg tggaagtggg aggctctcat ggttccatca ccagaagggc tgggcttggt ggcggatttt tgagttcgag ctatacagag aaaccctgtc agccagggac aagtctgtac 202020 202080 202140 202200 202260 202320 202380 202440 202500 202560 202620 202680 202740 202800 202860 202920 202980 203040 203100 203160 203220 203280 203340 203400 203460 203520 203580 203640 203700 203760 203820 203880 203940204000 204060 204120 204180 204240 204300 204360 204420 204480 204540 204600 204660 204720 204780 204840 204900 204960 205020 205080 205140 205200 205260 205320 205380 205440 205500 205560 205620 205680 205740 205800

288 ΕΡ 1 325 13 Ο/PT aagaaggaac ttgggagcat ccagtttctg gggaccttga ttgctagcag agccacagcc ttatctgatg agctcaggac tggctgtctg ccaagcttgg cgcctgctga catcttgtta ccagccaggc ttctgcccat cactccctga gcagggcctg aagagcccag tattgaatga ctgccctcca ctggcttctc gtccaccgtc agcagtgacg gccagtccta ggtgacatcg cctgtatgga gaacccgttc tccctggttc gtcaaacccc gtcttggggg ttccaggagg tctaggtagc cccagggagc ggctgctggc agcggtgaca tcatggacat tctgccccgc cctccttcgt cacagggtag ccaggaaggg ctaggaagct ttgggggtag tggcacaggt tctgagacta gcctggtcta tctgacttaa gaaaagagtc cactttccca gcatgcagga tgggggctgg aaagaatagc ggttagattc ccagctgcca ccaccctcct tcggtctctg aaaaaacacc catacacata ctctgaotaa gctaoactgc agccttacat gcagctcctg aagggctggg aactcttgca gtcctatgcg tgaaaaccat atggtccagc agcacctgag catgagcttc ggcagcaggt ggccaggcca gggcagtgga ctggatccta agggctgtac cgacgaccag tggaccccac gcgtacacaa tctacgtacc cacagagttg gtgactacat tcagcaatgg aatcttttta ctttaactcc agctccttcc ttgctcaggc ttcttncatg tgtgagtgtg gaggtgacag catctctcta gatccagttt ttttgtagac agggtctctc gctggccttg agctcacaga gtgtaccact cctgcctggc cctccectgt gctgggatta cgtaggaatt ttaggatcag ttatctatct tagttaggat acttggggag gaaaaggttt gcaggaactc gaggcagaag tggcttgctc agtctggtgt tatgcctggc tgtcctagaa ccccfcgcctc tgcatctcaa gggtggcact acccactgta cctccatagg ccaatctggt ctgtagctga tgccaaattg accaaacaaa ccaaacaact cagcaggaaa ggctcaggag gatggtctcc agaagctacc ttatgggatg ggcgctgtac gaatattttg ctcctacaga teattgtgtg tctgatgcta tgccgaaagg atgacctctc ccatggctag gtgaatggac gagttggctg ggtggggtgg cttttcctgc cctgcagata ccccacagta gcctctcgcc tgttggtaag gtctgtggtt ccttagccct ctctaggcga ggtctcaccc attaagctgg atagaagcca ccccacagtc aacgctgctg cccttccttg acacccctcc actgaatgcc tgtcggggcc tgtgctcagc tcacctacca gtacctgccc ggcttggggg tgggggcaag tctgtggggt gacctgtccc aactcaaacc ccagccgact ctgacgcaga aaatcatcgt attagccacg aggtcttgct gcccctgctg cttgggagag cagggagaag cagataccgg ctttcattcc agcacccaga cagagagagc tccaggctat gtggttcatt ctgggttgtg ggagctatgc ttgagttcca tcagggttta agagcactgg catggtagct cataaccatc tgggcactgc aaacatgtgc aaattagacc aaaaaagttc ttccctgtgc ctcagtttcc ttatttgaag ttcctggtaa ctttgattct aggttcccca cagtctcatc gccctcatct tgagccagtg gccaccttct aggcaggcag cttctgggct cccactgaat ctgtggtctt tgagggccag ctgccagagg cctgctggaa gagctgcaga tttctcctgo ctgttgggta ctcttccctg gggtgggccc tttttatttt gacatggggt agcttccacc gtctcctgtt ttcttatttt taaatgacct aataacagtt ggggggtcag ttggttttgt gggcttttat tgtgtagcct ggccatcctg gattcacotg cctctgcctc tttgtttttg ttaaccacca caggtgtgtg ctatcacacc agtgaccaga tttggtccta ctctgttgaa aatcatggtg attttgtotg acaactctca ctgaagcaaa agccatggaa accccctccc cacccacctc ctcactctgt agactaggct gtgctaagat taaaggcggg aattggtccc ttcccatatc gggggaattt tctcagttga ataaaacaaa tctcaaacca aaccaagaca gtgacttata ctggccattc aagtctgggg tgcaaaggaa tgaacagctt tgggcttctc tctgagtagg attgtaagtt cccagaggca gaatggtgcc tggcatacac tgcaggtcct gcccgaggag ccaggatggg atggtcaggc ggtggggtgg gaagggtgag cagcctgcaa gatggtccgc atgtggcccg gaacctgctg agtgctggag accaggttcc ctccttccct aacttcccag gttttcttgg gtaagtgggg tcagaaggçc ggcttccctc gtagggccca ctcgacagca ggcaacatct accagaagag tgcctcctcc acattgccta tacatcagct acctggtcag gatccaagga ccagccccag tccctcatct attctgtggt gaacagccgc aaggaggccg atacctctct gacacgaccc gcctgtgctt ggcttcctca ccacetggct gagggggccc ectgagtcat ggttctgatg ggagggcaag tttctgtgag ctaaggctcc atagtaagac ggtgtggctt ggtgatggga gcccttcaga aaaacaaaaa ttgctcttcc agaggatcca cggcagttct atggaacctg acagacatac atgcaggcag atgttctctc ctacctgtag tcccctggtc tggactgatc attggtcaag tccttcaggg gtggggccca ggcccggact gcttgcgcat cgggcaggag tccaagtctt ctctcatctg gggtgggcca ggccaggcca cctacccgca ggatctgcca cgaccttctc tgatgggcag aggtgttcac cctggaaatg ttgcccatca cgttcctttg cgatgctttc acctccagag ctcatttagc ccaggctgac ggcattgtag tcatgtggca gtgtgtgtgt gtgatatctg cagatgcctt gcctgatgag gtgtgtgttt gtttgtctgt gaactcattc agtagaccaa ccagtgctgg gattaaaggc tcctcctgcc tcagcatctg cagctaacag tggatttaaa gggcccaatt tccacagtga gaacatcatt accaaatgca ggtcaccaag ggaagtcagg gaactctggc ttgttcctca cccacaatgg tttctctgct ggcctcaaac tcaagagatc tgccatcacc cctgccccag agttgttaaa taagaaaact gggtttctct tctcaaatga ccaccaccaa caacaataaa aagagaatct gaacattttc aacagaatgt aggggaatat gctgggtttt gtggcttccc atgggccacc ctgtagttgg ggacacatct gtcttattct gtgtgtgtct ctatagagac 205860 205920 205980 206040 206100 206160 206220 206280 206340 206400 206460 206520 206580 206640 206700 206760 206820 206880 206940 207000 207060 207120 207180 207240 207300 207360 207420 207480 207540 207600 207660 207720 207780 207840 207900 207960 208020 208080 208140 208200 208260 208320 208380 208440 208500 208560 208620 208680 208740 208800 206860 208920 208980 209040 209100 209160 209220 209280 209340 209400 209460 209520 209580 209640 289

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT agcactcatg gacgagaact ctaagctctg ccctgtaggt agggctctat catggctagt ccactcaggg gccccagagt caacaggaat cgggaactgg ecacttccac ggccgccctg ctggccgctg ccagcaccgc ctgtgatggg tgttcgacgg acgtacaatg ggacttagaa tcagttgctg agtatggctt tggaggaggg cagactgttc tgagattgtg tttgaagtag aagacccttc atgcctgccc gactgcagga tctaggtacc cagccctgtg ggagggtcag gcagtgatgg tgggtggagg gtgttgtggc ttctacgagg tgaggtccta ggtgtccctt agctcaggaa cctgatgctc ggatcagggg ttactgcctg gcaggaaeag cagagctcag gcagtgggaa acagggaagg gtctctaaat tagtcccagc atgccaggtg cagggggttc acacacacga catgttagta tttatttttt atcgcaacac acagagcaag acaaaatatt ggctgtcctg tgcttctgcc ttatagattt aggggtcaga ccatgctggg ctagagtttt tttcgagaca gctggcctcg gtgcgccacc ttgttttgtt tctacgtatc taataaccca ggtagatagc gacatcatcc ctggaaagca gccggccctg acctttggga cctgggccac gaagacaacg ctggcgtact cagatccgcc agcagtgaag tacaactatg aaaagcgtct gcagtgcacg ctgctttact gcgtattttg tctgtgggac caggcgtctg tggcttcttg tcagggcaga tggggctgga ttttctgagg ccagggctct gcacagtgga cacacaccag agccaggctt agtcaggaaa tgggtggggc gcctactggt atggcgacgg gctgaaccct tggcttctcc ctggccagcc tcctttcatt ataactactc ccagctgcac cacagcgatg tcacgccctg gagaccactg gcgcaggcct caggttctgg ctctcctccc caggctgccc cccaacattc tctcggagtc ttctttgaga aacacccttt acacaaataa cgattggatg ggtcttaaaa tcaggagcag tttcagggca taaaagattt gaactcactg tcctaagtgc ggtgttttgc ggcgagtatc actgggtcat tttcccccct gggtttctct aactcagaaa acgcctggct tttttctttt gataaaggaa gagtagccca taccttgcca ggaaaatcat tgagcccgag aatgggaccc gtgtcctggt tgggctccct ccctgaagcg ggcagtacga tgcagagctt acttctttct gggacgggac tctacgtggg tctgggaccc gtgccttagc acggggaaga ccaagtttga ccttctacct tacgacgtca cggaggtcgc cccttgactt gtcactgggg ttgatagcca tccttcagac catcaccatg gcaggtcagg gacactcagg gctggcacgg ttcgtgggcc gcacttgaac gggcttgttc tcgggcttca catgaagggg tctacttagg ggggacattc aggaggcagg ttctaatgag tccgtgaccc agcagagtcc gcgcatcgtg gaggggagaa ccgccgtcca ccagctctat taagaaagtg ttctctgagc ggacctgagt atggcttctg aaataaatgt tggcagtgcc ttttaaaaga aggcaggtgg gccaaggtta acttacttct tatagaccag tgagattaaa ctgcttgtgt agctcttcct ttgcaagagt ggctgtcctg acataggcct tccgoctgcc cagaatctgt ctttttttgt gctgttttgg gtcagtacct tcttccctga ccccaaccat ctctcgaaac tcagagtggg tggaaatcgc ctctggagtg ggagctgcct gatcggtgtg cccagggcac gagtggcagc caatgagacg ccagcttgag cttcacaggt caggcctctg ttcagtgagg atccactccc gtaagaacca cctgtcgtcg agctagttag cactgtggaa aatgggatgc ctaagtcccc agccgggtgc gccagctccg aggggtgcag ggactccacc atggggcttt tgaatggggt acaatctcct gctcgttggc tggtgctcct acattctaca gcctggtctg agtggggtgg ctaggggcag taaccottgt agttcaggtt atgccccctg ttcctgcctc atagggctgc gatggaggtg ccaggacccc tcaggatggc accagttctt ttggttctca tggacacata taaaagaaga tcacagaatc ttggtttagg atctctatgg cacagagaaa tatttgagct getggcacct gtagtgttat atatatgcac ggaactagag tacaagtact aagtagaatc ggctgtcctg tctggctctc ttttaaatga ttttgttttt ggggaggaaa tgccttggct tcttagaact gagttggtcg ccagccagca agctgtctcc atccagatcc ggtagtagcg cggagtgcqc agccagcagg acgggggccg aaggaccgga gcttcccgcc gccccgcagt gagcgggccc ggaacgggac caggaagaga ccaacttacc aaaatttaga ttgtaaagag agcatgctat gcagcaagat aggtgtgggg agatgtgtcc ccctgacggc actccactct ttcctgggct aggaacgctg tctcttccgg gagctgcagt cctatagcat cgtcagcccc agatacccge gatcaaggtg ggagaggaca gaaaatggcc gaatcagggc ccatatttgt aaataaagcc ctgggctgtc ctatattcaa ttgtgggagg aaagacaggc aggggaccct tctggggtca ttcctatggg gcactgtcta ttcttatgtg cagcggcacc tgtgggactt agtggtggta gtttgaggcc ctctttctca aggatctccc taaactcacg accatgcccc taccttcatg ttatggaagg tctgagccat tgttcttgtt gaactcactc agaatactgg gagtaatagt tggctcattt caggcttaca tctgttgttt ttccccactc gggagctggc tggaacccac aggacgatgg ctgactctca gaggcctcag atgggctgag atgcccactt tcasatgcgt ctgtgcgcct tcatctatgc atgtggtgag aggtgaggcc ctagtgcgaa agaagagtca agcaatcggc agattccacg aagtatcgag gtgaagagag gagaaagccc tgagttggag tttttcagga tgtggctgtc gcgctttgtg actgggggtc cagtgacagg ggatggagtg agggtgggtg gagttccgac agtggccgga acgggcctgg actgactgcc ggtttatgct ctcgtaggcc tagaactgac cttgcttgga aggaggctgt ctgatggggg tcatagacct atttctccct actgttgctt gggtctcagt tcctgggtgt aagtaaggac gctctggctc gcctgcacgc ttgtacctca tatttattta cacaccatta agcctggtct aaaaataaaa tattagccct aagatcctcc actattttct cagtgctaat ttgggagtca ctccagcccc ttgttttgtt tgtagaccag aattaaaggt tacaggtttt gttttatttg 209700 209760 209820 209880 209940 210000 210060 210120 210180 210240 210300 210360 210420 210480 210540 210600 210660 210720 210780 210840 210900 210960 211020 211080 211140 211200 211260 211320 211380 211440 211500 211560 211620 211680 211740 211800 211860 211920 211980 212040 212100 212160 212220 212280 212340 212400 212460 212520 212580 212640 212700 212760 212820 212880 212940 213000 213060 213120 213180 213240 213300 213360 213420 213480 290 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ ttttgagaca ggtetcactc tgaaececta ctgactttaa acttgttttc tgagtgctgg tctgatggtt gttaataaca atattattta atatcaccca gacagtggct ggtctggaaa cacagagatc tgcctcccga gttcagaaat ggtgagtacc caagcctcca ttgatgctat gggcagcgtg ctcatcagct cctcttccga acagaagccc acgcaccact acaagtcagc cggcagcgag gtggtcaccg gcactgtagc gccaccctct caggccacca caaagctcag tctggctttg ctgcccacga aacgccacct cctcctggca tagggccagc caggagttgg ggcccgctcc tcattcttga tctcgaagcc tacccacatg gcctgctgtc tgggattgca gcttcatgaa actcgggaga tactgttcct tgtgatcccc attgctcccc agttctgcct aggaaatgaa aggagttggg cctttgctca ctctgtttct cccttgggta ggaaactgct ccaggctcag gagggctggc caggacctac attcattcag ccaggtcttc agtatgggac gggaaggggt tatatgggcc cagctggtcc cctaaccaca gcgtttgtgc cttcagccgg ggacaggagg cagcgggaat catctctgta tctgccatct cttgagtgtt cgtttggaga actagttgca gtctatgtaa ataaggtcaa tgaggctgtg ttgtgttttg ctttgcctag ccaaggagct ggggaactgg tatatgtcac tggcttggct ttttttcaga tggtctcaag ccttcctgct tgaaacagag tagtgggctt ttttttaaag gcattgattt ttatacgtgt caccatactt gtgtctggtc cctgcggagg cgaagttaat gaatggttat gagccacatc gcaagagcag ccagtgttet tacccactga ttgatacaag gtctggtagc tcaaacttga cctacctacc ctcttctctc taccttccaa catgcccacc agtttgcctt gatggcacca aaacacagca agagggtaga ggcagccatt tgggttgggt ggccttgggt cagttttccg gctgaagagg tgggaccctg ggagggccgg tggaacctag gctggaggga gccaaccagg gctcctgcag cctccccttc ccttgggtag tggtggtggt ggtggtggtg gtgggggggg ggtggcctgg agcttgctat gtagaacaca atttatgggc ttgtgctatt ttgcccagcc gcttttcttt tggagatagg ctctcactgt tcactgtgta ggccaggctg accttgaatt taaaagcact ctgggatggt tttggagttt ctgtccctcc cgctctctgc aggctgtaga ccattccttg actgtttgga aggagctgga gtccgaccca atccacaccb ttgacctgta caacaagatt ggtgtctgÇt ccctgcttga ttccgagaac ttccgtggca cgctcactag cctgctgggc tcggacaatg gcatcatccg ctgagggcag ggcgagatga catctctcag gattcttcta ggcaagcccc aggctctggc cagctcctga atctccaaag ccttgaagtg aaccagcaag aattggggca aggaaagcac tctggattca catggggaca gggcagctcc gccagcttcc tctagccacg ctctccttag cctgtctagg gttctgatgg tactgggact gactttcagg gcttggtctg gggttttagc cagaaaaaag gggatgtgag aacagggcta aggaatgaat ccatgccttg ccttggtacc ggaggcagcc cttgggacca gcatccctag tctcgggttc tgcccagggg atgggcagac agcctgagat gtggcccctg ctgccttctc fcaaattcttt ggaagagcca cggagctgag gctgggctca ggcagctctg cctcagcetc tgtatatgtc·actgtgcctg gcttatggct tgcctcaggt tggccttgat cttgggatga ataggcatga cccaccaggt ccaattttta atggttgttt tgcccacttg tacatatgca tcagaagagg gcatcgggat cacctggaac tcgatgctga agattgaacc tggatccttt gccatctcta agccccacac ccagcttctt tatgcagccg aggaggttga cctggtattc gtgctgatat tatacatagg catggatagt gagtcaggaa agtccaaacc tggtagttgc gtcctctggc tgccttggat acagagcttc aatggttcac ccttggggaa agggaacact cctccagctg ggtctctcca gccctcgcct atcctggact tgctacagtt aggtgaacag ctgtggtggt ggtggtggtg gtggtggtgg gggngnngnt 213540 213600 213660 213720 2137B0 213840 213900 213960 214020 214080 214140 214200 214260 214320 214380 214440 214500 214560 214620 214680 214740 214800 214860 214920 214980 215040 215100 215160 215220 215280 215340 215400 215460 215520 215580 215640 215700 215760 215820 215880 215940 215980 <210> 17 <211> 473 <212> PRT <213> Mus sp • <400> 11 Met 1 Lys Arg Ala Ser 5 Ser Gly Trp Leu Gin Ala 20 Trp Arg Vai Cys Tyr Asn 35 Glu Pro Lys Vai Gin Ala Vai 50 Pro Thr Gly Ile 55

Gly Ser Arg 10 Leu Leu Ala Trp Vai 15 Leu Ala Thr 25 Pro Cys Pro Gly Ala 30 Cys Vai Thr 40 Thr Ser Cys Pro Gin 45 Gin Gly Leu Pro Ala Ser Ser Gin 60 Arg Ile Phe Leu

His Gly Asn Arg Xle Ser His Vai Pro Ala Ala Ser Phe Gin Ser Cys 65 70 75 80 291 ΕΡ 1 325 130/ΡΤ

Arg Asn Leu Thr Ile Leu Trp Leu 85

Asp Ala Ala Ala Phe Thr Gly Leu 100

Ser Asp Asn Ala Gin Leu His Vai 115 120

Leu Gly His Leu His Thr Leu His 130 135

Leu Gly Fro Gly Leu Phe Arg Gly 145 150

Leu Gin Asp Asn Asn Leu Gin Ala 165

Leu Gly Asn Leu Thr His Leu Phe 180

Vai Pro Glu His Ala Phe Arg Gly 195 200

Leu His Gin Asn His Vai Ala Arg 210 215

Leu Gly Arg Leu Met Thr Leu Tyr 225 230

Leu Pro Ala Glu Vai Leu Met Pro 245

Leu Asn Asp Asn Pro Trp Vai Cys 260

Ala Trp Leu Gin Lys Phe Arg Gly 275 280

Leu Pro Gin Arg Leu Ala Asp Arg 290 295

Asp Leu Glu Gly Cys Ala Vai Ala 305 310

Thr Ser Gin Leu Thr Asp Glu Glu 325

Gin Pro Asp Ala Ala Asp Lys Ala 340

Ala Ser Ala Gly Asn Ala Leu Lys 355 360

Pro Pro Gly Asn Gly Ser Gly Pro 370 375

Gly Thr Leu Pro ser Ser Ala Glu 385 390

Gly Gly Ser Glu Pro Pro Gly Leu 405

Pro Gly Cys Ser Arg Lys Asn Arg

His Ser Asn Ala Leu Ala Arg Ile 90 95

Thr Leu Leu Glu Gin Leu Asp Leu 105 110

Vai Asp Pro Thr Thr Phe His Gly 125

Leu Asp Arg Cys Gly Leu Arg Glu 140

Leu Ala Ala Leu Gin Tyr Leu Tyr 155 160

Leu Pro Asp Asn Thr Phe Arg Asp 170 175

Leu His Gly Asn Arg Ile Pro Ser 185 190

Leu His Ser Leu Asp Arg Leu Leu 205

Vai His Pro His Ala Phe Arg Asp 220

Leu Phe Ala' Asn Asn Leu Ser Met 235 240

Leu Arg Ser Leu Gin Tyr Leu Arg 250 255

Asp Cys Arg Ala Arg Pro Leu Trp 265 270

Ser Ser Ser Glu Vai Pro Cys Asn 285

Asp Leu Lys Arg Leu Ala Ala Ser 300

Ser Gly Pro Phe Arg Pro Ile Gin 315 320

Leu Leu Ser Leu Pro Lys Cys Cys 330 335

Ser Vai Leu Glu Pro Gly Arg Pro 345 350

Gly Arg Vai Pro Pro Gly Asp Thr 365

Arg His Ile Asn Asp Ser Pro Phe 380

Pro Pro Leu Thr Ala Leu Arg Pro 395 400

Pro Thr Thr Gly Pro Arg Arg Arg 410 415

Thr Arg Sex His Cys Arg Leu Gly 292

ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 420

Gin Ala Gly Ser Gly Ala Ser Gly 435 440

Ala Leu Pro Ala Leu Ala Cys Ser 450 455

Vai Leu Trp Thr Vai Leu Gly Pro 465 470 425 430

Thr Gly Asp Ala Glu Gly Ser Gly 445

Leu Ala Pro Leu Gly Leu Ala Leu 460

Cys

Lisboa, 2010-05-24

Claims (19)

1. ΕΡ 1 325 130/ΡΤ 1/4 REIVINDICAÇÕES 1. Polipéptido compreendendo uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo que consiste em: a) aminoácidos 31 a 310 de SEQ ID NO:2; b) aminoácidos 31 a 395 de SEQ ID NO:2; c) aminoácidos 1 a 395 de SEQ ID NO: 2; d) aminoácidos 31 a 310 de SEQ ID NO: 2 excepto 20 ou menos substituições de aminoácidos conservativas por 100 resíduos de aminoácidos; e) aminoácidos 31 a 310 de SEQ ID NO:2 e até cinco aminoácidos no terminal N e/ou no terminal C do referido polipéptido; f) aminoácidos 31 a 395 de SEQ 10 NO: 2 excepto 20 ou menos substituições de aminoácidos conservativas por 100 resíduos de aminoácidos; g) aminoácidos 31 a 395 de SEQ ID NO:2 e até cinco aminoácidos no terminal N e/ou terminal C do referido polipéptido; e h) aminoácidos 1 a 395 de SEQ ID NO: 2 excepto 20 ou menos substituições de aminoácidos conservativas por 100 resíduos de aminoácidos; em que o referido polipéptido diminui a inibição do crescimento axonal em neurónios do SNC humano.
2. 2. Polipéptido compreendendo uma sequência de aminoácidos seleccionada de entre o grupo que consiste em: a) uma sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica aos aminoácidos 1 a 420 de SEQ ID NO:2; b) aminoácidos 1 a 420 de SEQ ID NO: 2; c) uma sequência de aminoácidos pelo menos 70% idêntica aos aminoácidos 31 a 420 de SEQ ID NO:2; e d) aminoácidos 31 a 420 de SEQ ID NO:2; em que o referido polipéptido diminui a inibição do crescimento axonal em neurónios do SNC humano.
3. 3. Polipéptido de qualquer uma das reivindicações 1-2 compreendendo ainda um polipéptido heterólogo. ΕΡ 1 325 130/ΡΤ 2/4
4. 4. Polipéptido da reivindicação 3, em que o referido polipéptido heterólogo é seleccionado de entre o grupo que consiste em Fc, Glutationa-S-transferase (GST), e uma etiqueta de Histidina (etiqueta His).
5. 5. Polinucleótido compreendendo um ácido nucleico codificando o polipéptido de qualquer uma das reivindicações 1-4.
6. 6. Polinucleótido da reivindicação 5, compreendendo ainda um ou mais elementos de controlo da expressão operativamente ligados ao referido ácido nucleico.
7. 7. Vector compreendendo o polinucleótido de qualquer uma das reivindicações 5-6.
8. 8. Célula hospedeira compreendendo o polinucleótido de qualquer uma das reivindicações 5-6 ou o vector da reivindicação 7, em que a célula hospedeira exclui uma célula capaz de formar um ser humano.
9. 9. Célula hospedeira da reivindicação 8, em que a referida célula hospedeira é uma célula eucariótica.
10. 10. Polipéptido receptor de NOGO de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4 expresso pela célula hospedeira da reivindicação 8 ou 9.
11. 11. Anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antigénio que se liga especificamente a um polipéptido de qualquer uma das reivindicações 1-4 ou 10.
12. 12. Anticorpo ou seu fragmento da reivindicação 11, em que o referido anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antigénio é seleccionado de entre o grupo que consiste em anticorpo policlonal, anticorpo monoclonal, um anticorpo humanizado e um anticorpo humano. ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 3/4
13. 13. Composição compreendendo o polinucleótido de qualquer uma das reivindicações 5-6, o vector da reivindicação 7, o polipéptido de qualquer uma das reivindicações 1-4 ou 10, ou o anticorpo da reivindicação 11 ou reivindicação 12, e um transportador.
14. 14. Método in vitro para diminuição da inibição do crescimento axonal de um neurónio do SNC compreendendo o contacto de um neurónio com o polipéptido de qualquer uma das reivindicações 1-4 ou 10 ou o anticorpo da reivindicação 11 ou reivindicação 12.
15. 15. Utilização do polipéptido de qualquer uma das reivindicações 1-4 ou 10 ou o anticorpo da reivindicação 11 ou da reivindicação 12 para a preparação de uma composição farmacêutica para modulação da inibição do crescimento axonal.
16. 16. Utilização do polipéptido de qualquer uma das reivindicações 1-4 ou 10 ou do anticorpo da reivindicação 11 ou da reivindicação 12 para a preparação de uma composição farmacêutica para tratamento de uma doença, distúrbio ou lesão do sistema nervoso central (SNC), num mamífero, em que a referida doença, distúrbio ou lesão do SNC são seleccionados de entre o grupo que consiste em lesão cerebral, lesão da medula espinal, AVC ou uma doença desmielinizante.
17. 17. Utilização da reivindicação 15 ou da reivindicação 16, em que a referida composição farmacêutica compreende ainda um transportador.
18. 18. Utilização de qualquer uma das reivindicações 15 a 17, em que a referida composição farmacêutica é formulada para administração através de uma via seleccionada de entre o grupo que consiste em administração parentérica, administração subcutânea, administração intravenosa, administração transmucosa, administração intradérmica e administração transdérmica.
19. 19. Utilização da reivindicação 16, em que a referida doença desmielinizante é seleccionada de entre o grupo que ΕΡ 1 325 13 Ο/PT 4/4 consiste em esclerose múltipla, desmielinização monofásica, encefalomielite, leucoencefalopatia multifocal, panencefalite, doença de Marchiafava-Bignami, degenerescência Esponjosa, doença de Alexander, doença de Canavan, leucodistrofia metacromática e doença de Krabbe. Lisboa, 2010-05-24