PL245499B1 - Sposób otrzymywania seskwiterpenów-pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego Petasites hybridus (L.) G.Gaertn., B.Mey. & Scherb. - Google Patents
Sposób otrzymywania seskwiterpenów-pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego Petasites hybridus (L.) G.Gaertn., B.Mey. & Scherb. Download PDFInfo
- Publication number
- PL245499B1 PL245499B1 PL442527A PL44252722A PL245499B1 PL 245499 B1 PL245499 B1 PL 245499B1 PL 442527 A PL442527 A PL 442527A PL 44252722 A PL44252722 A PL 44252722A PL 245499 B1 PL245499 B1 PL 245499B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- petasin
- derivatives
- sesquiterpenes
- separation
- methanol
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 241000485481 Petasites hybridus Species 0.000 title claims abstract description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- ISTBXSFGFOYLTM-NZEDGPFZSA-N petasin Chemical class O=C1[C@H](C(C)=C)C[C@]2(C)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)C(\C)=C/C)CCC2=C1 ISTBXSFGFOYLTM-NZEDGPFZSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 19
- 235000001436 butterbur Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 claims abstract description 18
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 235000003823 Petasites japonicus Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- ISTBXSFGFOYLTM-CQWFINJSSA-N Petasin Natural products O=C(O[C@H]1[C@@H](C)[C@]2(C)C(=CC(=O)[C@H](C(=C)C)C2)CC1)/C(=C/C)/C ISTBXSFGFOYLTM-CQWFINJSSA-N 0.000 claims abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- RVNUBTNISVJUOW-UHFFFAOYSA-N petasinone A Natural products O=C1C(C(C)=C)CC2(C)C(C)C(OC(=O)C=COC)CCC2=C1 RVNUBTNISVJUOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 8
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 19
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 4
- HHRQDCTVPDWUBI-UHFFFAOYSA-N Isopetasin Natural products CC=C/C(=O)OC1CCC2=CC(=O)C(=C(C)C)CC2(C)C1C HHRQDCTVPDWUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ISTBXSFGFOYLTM-RSYQGVQLSA-N [(1r,2r,7r,8ar)-1,8a-dimethyl-6-oxo-7-prop-1-en-2-yl-1,2,3,4,7,8-hexahydronaphthalen-2-yl] (z)-2-methylbut-2-enoate Chemical compound O=C1[C@@H](C(C)=C)C[C@]2(C)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)C(\C)=C/C)CCC2=C1 ISTBXSFGFOYLTM-RSYQGVQLSA-N 0.000 description 3
- OFDHBFFGRFCQOW-KSEJUSODSA-N [(1r,2r,8ar)-1,8a-dimethyl-6-oxo-7-propan-2-ylidene-2,3,4,8-tetrahydro-1h-naphthalen-2-yl] (z)-2-methylbut-2-enoate Chemical compound O=C1C(=C(C)C)C[C@]2(C)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)C(\C)=C/C)CCC2=C1 OFDHBFFGRFCQOW-KSEJUSODSA-N 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- ADRDEXBBJTUCND-UHFFFAOYSA-N pyrrolizidine Chemical class C1CCN2CCCC21 ADRDEXBBJTUCND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930002356 pyrrolizidine alkaloid Natural products 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001088 anti-asthma Effects 0.000 description 2
- 230000002460 anti-migrenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000924 antiasthmatic agent Substances 0.000 description 2
- 235000019537 butterbur extract Nutrition 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 2
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 1
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 1
- 240000006915 Petasites Species 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003082 hepatotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D11/00—Solvent extraction
- B01D11/02—Solvent extraction of solids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D11/00—Solvent extraction
- B01D11/04—Solvent extraction of solutions which are liquid
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D11/00—Solvent extraction
- B01D11/04—Solvent extraction of solutions which are liquid
- B01D11/0492—Applications, solvents used
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
- B01D15/16—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the fluid carrier
- B01D15/166—Fluid composition conditioning, e.g. gradient
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/30—Partition chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Zgłoszenie rozwiązuje zagadnienie izolacji seskwiterpenów, pochodnych petazyny, przy zastosowaniu techniki odśrodkowej chromatografii podziałowej (centrifugal partition chromatography, CPC) oraz preparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej (preparative high performance liquid chromatography, prepHPLC). Przedmiotem zgłoszenia jest sposób otrzymywania seskwiterpenów, pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego (Petasites hybridus (L.), który charakteryzuje się tym, że suchy ekstrakt poddaje się rozdzielaniu przy użyciu odśrodkowej chromatografii podziałowej z dwufazową mieszaniną rozpuszczalników o składzie heksan, metanol, woda. Separację przeprowadza się w trybie zstępującym, a rotację kolumny podczas eksperymentów doprowadza się do maksymalnej liczby obrotów, zaś rozdzielanie prowadzi się w temperaturze 25°C – 35°C, a stężenie nastrzykiwanego ekstraktu wynosi od 25 do 50 mg/ml, natomiast frakcje zawierające seskwiterpeny (pochodne petazyny) zbierane są pod kontrolą detektora UV-VIS, a seskwiterpeny, pochodne petazyny izoluje się, a uzyskane frakcje poddaje się oczyszczeniu, a w pierwszym etapie frakcje uzyskane metodą CPC zawierające odpowiednie seskwiterpeny, (pochodne petazyn) odparowuje się do sucha i rozpuszcza w metanolu, a uzyskany roztwór poddaje się oczyszczeniu przy użyciu preparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania seskwiterpenów - pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego (Petasites hybridus (L.) G. Gaertn., B. Mey. & Scherb.). Lepiężnik różowy (Petasites hybridus (L.) G. Gaertn., B. Mey. & Scherb.) z rodziny Astrowate (Asteraceae) jest rośliną leczniczą znaną już od czasów antycznych.
W tradycyjnej medycynie europejskiej jego właściwości wykorzystywane są do leczenia m.in. migreny, astmy, czy alergicznego nieżytu nosa. Za składniki aktywne ekstraktu z liści i kłączy lepiężnika uznawane są seskwiterpeny, pochodne petazyny. Jednakże, ograniczeniem w zastosowaniu rośliny jest obecność alkaloidów pirolizydynowych, które charakteryzują się działaniem hepatotoksycznym, kancerogennym oraz mutagennym.
Dotychczas opatentowane zostały m.in. dwie metody otrzymywania ekstraktów wolnych od alkaloidów pirolizydynowch:
• Koch V., Rittinghausen R. Composition Containing Pyrrolizidine-Alkaloid-Free Petasites.
US6551626B1. US Patent. 2003 April 22;
• Steiner R., Hauk A., Tratz W. Method for Producing Medicinal Plant Extracts.
WO/1999/018984. International Patent. 1999 April 29.
Metody dotyczyły ekstrakcji liści oraz kłączy lepiężnika różowego i w obu przypadkach stosowano technikę ekstrakcji nadkrytycznej dwutlenkiem węgla (ang. supercritical CO2 extraction, scCO2).
Wynalazek rozwiązuje zagadnienie izolacji seskwiterpenów, pochodnych petazyny, przy zastosowaniu techniki odśrodkowej chromatografii podziałowej (ang. centrifugal partition chromatography, CPC) oraz preparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej (ang. preparative high performance liquid chromatography, prepHPLC). Zastosowanie układu ciecz-ciecz oraz brak fazy stałej jako fazy stacjonarnej (technika CPC) zapewnia pozyskanie czystych związków w krótkim czasie, a wykorzystanie techniki preparatywnej HPLC pozwala uzyskać związki o bardzo wysokiej czystości. Obie techniki pozwalają na efektywną izolację substancji aktywnych z grupy petazyn z kłączy lepiężnika różowego.
Sposób izolacji petazyn według wynalazku składa się z trzech etapów (od materiału roślinnego do substancji o wysokiej czystości).
W pierwszym etapie (ekstrakcja) wysuszone, sproszkowane kłącza poddaje się ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami z zastosowaniem metanolu (100%) jako ekstrahenta, korzystnie trzykrotnie po 30 min, w temperaturze pokojowej, przy czym stosunek masowo-objętościowy (m/v) ekstrahenta do materiału ekstrahowanego (kłącza lepiężnika różowego) wynosi od 5:1 do 20:1, korzystnie 10:1 (m/v). Po ekstrakcji trwającej do 1,5-godziny i odparowaniu w wyparce próżniowej otrzymuje się ekstrakt suchy.
W drugim etapie (separacja CPC) ekstrakt poddaje się separacji przy użyciu odśrodkowej chromatografii podziałowej z dwufazową mieszaniną rozpuszczalników o składzie heksan, metanol, woda, które występują odpowiednio w stosunku objętościowym (v/v/v) od 10:7:3 do 10:9:1 korzystnie 10:8:2, separacja może być przeprowadzona w trybach wstępującym (ang. ascending, ASC) i zstępującym (ang. descending, DSC), korzystnie w trybie zstępującym, kiedy to faza górna układu dwufazowego stanowi fazę stacjonarną. Stężenie nastrzykiwanego ekstraktu w stosunku do mieszaniny rozpuszczalników wynosi od 25 do 50 mg/ml korzystnie 40 mg/ml. Rotację kolumny doprowadza się do maksymalnej liczby obrotów, korzystnie 1700 obr/min. Rozdzielanie prowadzi się w temperaturze 25-35°C korzystnie 26°C. Przepływ fazy ruchomej może być zmienny, korzystnie 10 ml/min. Otrzymywane poprzez rozpuszczenie ekstraktu w próbce mieszaniny rozpuszczalników o takim samym składzie jak dwufazowa mieszanina rozpuszczalników, tylko w fazie górnej lub tylko w fazie dolnej stosowanego układu rozpuszczalników, korzystnie w mieszaninie o równym stosunku obu faz o objętości 10 ml frakcje zawierające seskwiterpeny (pochodne petazyny) zbierane są korzystnie pod kontrolą detektora UV-VIS, korzystnie przy długości fali 230 nm. Po czym seskwiterpeny, pochodne petazyny izoluje się w czasie do 40 minut.
W trzecim etapie (separacja prepHPLC) uzyskane frakcje poddaje się oczyszczeniu metodą preparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej (prepHPLC). Frakcje uzyskane w trakcie etapu drugiego - separacja CPC (zawierające mieszaninę seskwiterpenów, pochodnych petazyny) odparowuje się do sucha i rozpuszcza w metanolu w stężeniu od 35 do 45 mg/ml, korzystnie 40 mg/ml. Tak uzyskany roztwór poddaje się oczyszczeniu przy użyciu prepHPLC, z elucją gradientową, z mieszaniną acetonitrylu i wody, stanowiącą eluent o stężeniu od 40 do 70%, korzystnie 60% acetonitrylu. Przepływ eluentu wynosi od 2 do 4 ml/min, korzystnie 3 ml/min. Oczyszczenie jednego nastrzyku (50 μΊ) roztworu zawierającego pochodne petazyny trwa do 15 min.
Proponowana metoda pozwala uzyskać pochodne petazyny (neopetazynę, petazynę i izopetazynę) o wysokiej czystości ponad 95% i wydajności procesu na poziomie 6,25% oraz w krótkim czasie. Nadaje się do zastosowania w warunkach na skalę przemysłową. Efekty te są możliwe dzięki zastosowaniu odśrodkowej chromatografii podziałowej CPC z układem rozpuszczalników: heksan, metanol, woda, preparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej i ekstraktu suchego z kłączy lepiężnika różowego jako źródła związków.
Seskwiterpeny, pochodne petazyny, wyizolowane z kłączy lepiężnika różowego ze względu na swoje właściwości lecznicze mogą być wykorzystane do dalszych badań biologicznych celem poznania ich molekularnego mechanizmu działania, a co za tym idzie do projektowania leków o potencjalnym działaniu przeciwmigrenowym, przeciwastmatycznym i przeciwalergicznym. Jednocześnie zastosowana procedura zapewnia eliminację alkaloidów pirolizydynowych. W czystej postaci otrzymane związki mogą posłużyć jako wzorce w analizie chemicznej i w standaryzacji ekstraktów z lepiężnika.
P rzy kła d
W pierwszym etapie (ekstrakcja) wysuszone, sproszkowane kłącza lepiężnika różowego poddano ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami z zastosowaniem metanolu (100%) jako ekstrahenta, trzykrotnie po 30 min, w temperaturze pokojowej, w stosunku 10:1 (m/v) między ekstrahentem, a materiałem roślinnym. Po 1,5-godzinnej ekstrakcji i odparowaniu w wyparce próżniowej otrzymano ekstrakt suchy.
W rozdzielaczu przygotowano dwufazowy układ rozpuszczalników będący mieszaniną heksanu, metanolu i wody w stosunku 10:8:2 (v/v/v). Po wytrząśnięciu i rozdzieleniu faz, fazę górną i dolną zebrano osobno do dwóch, odpowiednio opisanych butelek. Butelki umieszczono w łaźni ultradźwiękowej na 10 minut w celu pozbycia się pęcherzyków powietrza. Po wypełnieniu kolumny fazą górną układu dwufazowego, stanowiącą fazę stacjonarną, włączono obroty kolumny do wartości 1700 rpm, w temperaturze 26°C, w trybie zstępującym (ang. descending, DSC). Następnie wypełniono kolumnę fazą ruchomą (faza dolna układu dwufazowego). Po osiągnięciu przez układ stanu równowagi, czyli momentu w którym nie wypływa faza stacjonarna, do kolumny zadozowano 400 mg suchego ekstraktu z kłączy lepiężnika różowego rozpuszczonego w mieszaninie rozpuszczalników złożonej z 5 ml fazy górnej i 5 ml fazy dolnej (stężenie rozpuszczonego ekstraktu 40 mg/ml). Zbierano jednominutowe frakcje przy szybkości przepływu 10 ml/min przez okres 30 minut. Detekcję związków prowadzono poprzez pomiar absorbancji pod kontrolą UV-VIS przy długości fali λ=230 nm. Frakcje identyfikowano z zastosowaniem wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). Frakcję zawierającą seskwiterpeny, pochodne petazyny (neopetazynę, petazynę i izopetazynę) odparowano do sucha i poddano oczyszczeniu metodą prepHPLC, poprzez zadozowanie frakcji rozpuszczonej w metanolu w stężeniu 40 mg/ml, z zastosowaniem 60% acetonitrylu w wodzie jako eluentu. Przepływ fazy ruchomej wynosił 3 ml/min, detekcję związków prowadzono przez pomiar absorbancji przy długości fali λ=230 nm. Po separacji metodą CPC 400 mg ekstraktu i oczyszczeniu otrzymanej w ten sposób frakcji (25 mg wydajność procesu 6,25%) metodą prepHPLC w czasie do 15 min otrzymano:
• 0,6 mg związku A (neopetasin) o czystości 95,8%, • 3,4 mg związku B (petasin) o czystości 98,7%, • 2,8 mg związku C (isopetasin) o czystości 95,5%.
Proponowana metoda jest procesem szybkim, tanim, przyjaznym ekologicznie, pozwala zredukować koszty i czas izolacji, jest odpowiednia do przeniesienia warunków na skalę przemysłową. Seskwiterpeny wyizolowane z ekstraktu lepiężnika różowego mogą być wykorzystane do dalszych badań biologicznych celem poznania ich molekularnego mechanizmu działania, a co za tym idzie do projektowania leków o potencjalnym działaniu przeciwmigrenowym, przeciwastmatycznym i przeciwalergicznym, a także w analizie i kontroli jakości ekstraktów z lepiężnika jako wzorce.
Claims (11)
1. Sposób otrzymywania seskwiterpenów, pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego - Petasites hybridus (L.) obejmujący ekstrakcję z użyciem metanolu, znamienny tym, że suchy ekstrakt otrzymany w wyniku ekstrakcji metanolem gdzie stosunek masowo-objętościowy (m/v) ekstrahentu do materiału ekstrahowanego kłącza lepiężnika różowego wynosi od 5:1 do 20:1, korzystnie 10:1 (m/v) poddaje się rozdzielaniu przy użyciu odśrodkowej chromatografii podziałowej (metoda CPC) z dwufazową mieszaniną rozpuszczalników o składzie heksan, metanol, woda, które występują odpowiednio w stosunku od 10:7:3 do 10:9:1 (v/v/v), gdzie stężenie ekstraktu wynosi od 25 do 50 mg/ml w stosunku do mieszaniny rozpuszczalników, rotację kolumny doprowadza się do maksymalnej liczby obrotów, zaś rozdzielanie prowadzi się w temperaturze 25-35°C, korzystnie w czasie od 30 do 40 minut, po czym uzyskane frakcje poddaje się oczyszczeniu metodą preparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej, gdzie frakcje uzyskane metodą CPC zawierające seskwiterpeny - pochodne petazyny odparowuje się do sucha i rozpuszcza w metanolu w stężeniu od 35 do 45 mg/ml, korzystnie 40 mg/ml, a uzyskany roztwór poddaje się oczyszczeniu przy użyciu preparatywnej wysokosprawnej chromatografii cieczowej, z elucją gradientową, z użyciem mieszaniny acetonitrylu i wody stanowiącej eluent o stężeniu od 40 do 70%.
2. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że frakcje zawierające seskwiterpeny - pochodne petazyny uzyskuje się poprzez rozpuszczenie ekstraktu w próbce mieszaniny rozpuszczalników tylko w fazie górnej lub tylko w fazie dolnej stosowanego układu rozpuszczalników, korzystnie w mieszaninie o równym stosunku obu faz o objętości 10 ml.
3. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że po rozdzieleniu frakcje odpowiadające eluowanym związkom - pochodnym petazyny, zbiera się przy prędkości przepływu 10 ml/min.
4. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że separacja może być przeprowadzona w trybach wstępującym i zstępującym, korzystnie w trybie zstępującym.
5. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że stężenie nastrzykiwanego ekstraktu wynosi korzystnie 40 mg/ml.
6. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że mieszanina rozpuszczalników w składzie heksan, metanol, woda, występuje korzystnie w stosunku 10:8:2 (v/v/v).
7. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że rozdzielanie ekstraktu prowadzi się korzystnie w temp. 26°C.
8. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że frakcje zawierające seskwiterpeny (pochodne petazyny) zbierane są pod kontrolą detektora UV-VIS przy długości fali 230 nm.
9. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że przepływ eluentu wynosi od 2 do 4 ml/min.
10. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że przepływ eluentu wynosi korzystnie 3 ml/min.
11. Sposób według zastrzeż. 1, znamienny tym, że metanolowy roztwór zawierający frakcje oczyszcza się z użyciem mieszaniny acetonitrylu i wody stanowiącej eluent o stężeniu 60% acetonitrylu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL442527A PL245499B1 (pl) | 2022-10-14 | 2022-10-14 | Sposób otrzymywania seskwiterpenów-pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego Petasites hybridus (L.) G.Gaertn., B.Mey. & Scherb. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL442527A PL245499B1 (pl) | 2022-10-14 | 2022-10-14 | Sposób otrzymywania seskwiterpenów-pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego Petasites hybridus (L.) G.Gaertn., B.Mey. & Scherb. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL442527A1 PL442527A1 (pl) | 2024-04-15 |
| PL245499B1 true PL245499B1 (pl) | 2024-08-12 |
Family
ID=90716770
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL442527A PL245499B1 (pl) | 2022-10-14 | 2022-10-14 | Sposób otrzymywania seskwiterpenów-pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego Petasites hybridus (L.) G.Gaertn., B.Mey. & Scherb. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL245499B1 (pl) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL122936B1 (en) * | 1978-08-18 | 1982-09-30 | Inst Przemyslu Fermentacyjnego | Method of preparing of extracts from vegetable raw-materials containing chamazulene and sesquiterpene and flavonoid compounds |
| DE19702168A1 (de) * | 1996-03-28 | 1997-10-02 | Zeller Max Soehne Ag | Verwendung von Extrakt aus Petasites hybridus sowie Verfahren und Vorrichtung zur Gewinnung des Extraktes |
-
2022
- 2022-10-14 PL PL442527A patent/PL245499B1/pl unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL122936B1 (en) * | 1978-08-18 | 1982-09-30 | Inst Przemyslu Fermentacyjnego | Method of preparing of extracts from vegetable raw-materials containing chamazulene and sesquiterpene and flavonoid compounds |
| DE19702168A1 (de) * | 1996-03-28 | 1997-10-02 | Zeller Max Soehne Ag | Verwendung von Extrakt aus Petasites hybridus sowie Verfahren und Vorrichtung zur Gewinnung des Extraktes |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PETER SIEGENTHALER; MARKUS NEUENSCHWANDER: "Pharmaceutica Acta Helvetiae; Volume 72, Issue 2, April 1997, Pages 57-67", SESQUITERPENES FROM PETASITES HYBRIDUS (FURANOPETASIN CHEMOVAR): SEPARATION, ISOLATION AND QUANTITATION OF COMPOUNDS FROM FRESH PLANT EXTRACTS * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL442527A1 (pl) | 2024-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | Preparative separation and purification of liensinine, isoliensinine and neferine from seed embryo of Nelumbo nucifera GAERTN using high‐speed counter‐current chromatography | |
| Samimi et al. | Supercritical fluid chromatography of North American ginseng extract | |
| CN106866602A (zh) | 一种应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法 | |
| Destandau et al. | Centrifugal partition chromatography elution gradient for isolation of sesquiterpene lactones and flavonoids from Anvillea radiata | |
| CN102924467A (zh) | 一种从鸦胆子中提取纯化鸦胆子素d的制备方法 | |
| CN105131063B (zh) | 从全缘叶绿绒蒿花中同时分离纯化多种黄酮类成分的方法 | |
| CN108516965A (zh) | 一种5α-还原酶抑制剂—荨麻裂环木脂素F及其制备方法 | |
| PL245499B1 (pl) | Sposób otrzymywania seskwiterpenów-pochodnych petazyny z kłączy lepiężnika różowego Petasites hybridus (L.) G.Gaertn., B.Mey. & Scherb. | |
| CN114539192B (zh) | 松香烷型二萜化合物及其制备方法和应用 | |
| CN115677816A (zh) | 一种新的呋甾皂苷单体及其制备方法 | |
| CN110343114A (zh) | 一种水鬼蕉碱的分离制备方法 | |
| JP4117029B2 (ja) | ハルパゴフィタム プロカンベンス及び／又はハルパゴフィタム ゼイヘリ デンスから精製された抽出物、その製造方法及びその使用 | |
| CN109694366A (zh) | 一种分离提纯甘木通有效成分的方法 | |
| CN103965157B (zh) | 一种二倍半萜内酯类化合物的制备方法 | |
| Yang et al. | Preparative separation and purification of kaempferol, isorhamnetin, and quercetin by high-speed countercurrent chromatography | |
| CN104557471B (zh) | 从大花红景天中同时制备克级高纯度酪醇、大花红天素及红景天苷的方法 | |
| CN110698444B (zh) | 一种苯丙素类化合物及其制备方法 | |
| CN106957310A (zh) | 一种山楂叶中黄酮类单体的高效制备方法 | |
| KR20100022883A (ko) | 길경 추출물로부터 고속향류크로마토그래피를 이용한 길경 사포닌―고 함유 분획물 및 이 분획물로부터 고순도 플라티코딘 ｄ을 대량으로 분리 및 생산하는 방법 | |
| CN106187984B (zh) | 一种口山酮类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN104804014A (zh) | 一种Icetexane型二萜二聚体类化合物及其制备方法和应用 | |
| Yu et al. | A strategy based on isocratic and linear-gradient high-speed counter-current chromatography for the comprehensive separation of platycosides from Platycodi radix | |
| JP2019085412A (ja) | 牛蒡子抽出物の製造方法及び純化方法 | |
| CN108440461B (zh) | 威灵仙在分离制备5-羟甲基糠醛中的应用 | |
| CN100422188C (zh) | 逆流色谱法从雷公藤中分离制备雷公藤生物碱单体的方法 |