CN110698444B - 一种苯丙素类化合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种苯丙素类化合物及其制备方法和应用,该化合物的分子式为C27H22O10,分子量为506。通过本发明制备方法得到的该化合物纯度高,纯度达98%,稳定性好,且具备良好的生物活性。通过体外凝血活性实验的方法,发现该化合物对凝血酶激活的血小板聚集具有较强的抑制活性,具备开发抗凝血药或抗血栓药及医药器材的潜力。
Description
技术领域
本发明属于天然产物化学技术领域,具体涉及一种从风轮菜中分离出的化合物及其制备方法以及医药用途,该化合物分子式为C27H22O10,分子量为506。
背景技术
唇形科(Labiatae)风轮菜属Clinopodium Linn.植物全球有20余种,主要分布于欧洲、中亚及亚洲东部。风轮菜和荫风轮被《中国药典》2010年版收载为断血流药用,具有收敛止血之功效,主要用于治疗崩漏、尿血、鼻衄、牙龈出血、创伤出血等出血症及单纯性紫癜、原发性血小板减少性紫癜等症。我国风轮菜属药用植物资源丰富且在民间拥有悠久的药用历史,具有广阔的开发利用前景。
断血流为唇形科风轮菜属植物灯笼草(荫风轮)和风轮菜干燥地上部分。味微苦、涩,性凉,归肝经,具有收敛止血的功效,用于崩漏、尿血、鼻衄、牙龈出血、创伤出血,适用于临床上各种出血症,尤其对妇科出血性疾病有较好的疗效。断血流为民间传统用药,现代研究发现断血流中含有三萜及其皂苷、黄酮类、挥发油、苯丙素等多种化学成分,具有止血、抗菌、降血糖、抗氧化、抗炎等药理作用。
目前风轮菜属药用植物中含有黄酮、三萜及其皂苷、挥发油、苯丙素等多种成分,其中黄酮、皂苷是该属植物的主要活性成分。黄酮类是风轮菜属植物的主要成分之一,目前该属植物中得到20多种化合物。风轮菜属植物中黄酮类分母核主要是黄酮和二氢黄酮结构,多见3、5、7、3’、4’位羟基取代,有些以7-O-糖苷的形式存在,主要是单糖苷和二糖苷,所连接的糖基以葡萄糖和鼠李糖较多见。三萜及其皂苷是风轮菜属要用植物的另一重要活性成分。该属植物中三萜及其皂苷主要有2种结构骨架:(1)齐墩果烷行,(2)柴胡皂苷型(含有13,28-氧环)。
风轮菜属植物中的风轮菜和灯笼草被成为断血流用于止血。据报道,对该药材的研究主要集中在该药材的促凝血或止血作用,较少对该药材中抗凝血活性成分的研究。
心脑血管血栓性疾病是一种常见的疾病。中国心肌梗死平均发病率约为每10万人中有42人,而且随着营养状况的改善,发病率呈增长趋势。中国也是脑血栓病人高发地区,目前患病人数已超过1000万,每年新发病例约150万人,每年死亡者达100多万。在存活者中,约25%的人不同程度地丧失劳动能力,其中重度致残高达40%以上。更为重要的是,近年来以冠状血栓和脑血栓为主的血栓栓塞性疾病的发病率呈上升趋势,严重危害人类的健康。因此,对这类疾病的防治研究十分重要。
发明内容
本发明的目的是提供一种从风轮菜中分离出的具有抗凝血或抗血栓作用的苯丙素类化合物。
本发明的另一个目的是提供制备该化合物的方法。
本发明的再一个目的是提供该化合物在制备抗凝血或抗血栓药物及医疗器械中的应用。
有鉴于此,本发明的目的之一是获得了一种苯丙素类化合物,该化合物可用以制备抗凝血或抗血栓药物,该化合物可从断血流中获得。
本发明为实现其目的采用的技术方案是:
一种苯丙素类化合物,所述化合物其结构式如式(Ⅰ)所示:
该化合物的化学式名称为:
Benzo[a]naphthacene-2-carboxylicacid,5,6,8,13-tetrahydro-1,6,9,14-tetrahydroxy-3-(2-hydroxypropyl)-7-methoxy-8,13-dioxo-(9CI)。
相应地,本发明还提供了上述化合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将风轮菜用醇或醇溶液提取浓缩后得浸膏;
(2)将浸膏加水,并依次使用不同的有机溶剂分别萃取,浓缩后得中等极性有机溶剂组分;
(3)取中等极性有机溶剂组分上树脂柱层析,依次分别以不同的从低浓度到高浓度的醇/水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,得目标化合物一级组分;
(4)取一级组分在硅胶柱上进行层析,依次分别以不同的从低浓度到高浓度的两相有机溶剂为洗脱机进行梯度洗脱,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的二级组分;
(5)取二级组分进行反相C18柱层析,依次以不同的从低浓度到高浓度的醇/水(v/v)溶液为洗脱剂洗脱,合并含有相似组分的洗脱剂,得目标化合物三级组分;
(6)取三级组分经制备色谱分离纯化,得到纯的式(Ⅰ)目标化合物。
为了更好的实现本发明,步骤(2)所述的有机溶剂选自石油醚、氯仿、二氯甲烷、丙酮和正丁醇,中等极性溶剂为正丁醇,有机相:水相=4:1(v/v)比例萃取。
为了更好的实现本发明,两相有机溶剂包括但不限于二氯甲烷/甲醇等同极性的有机溶剂,合并含有相似组分的洗脱剂。
为了更好的实现本发明,步骤(1)、(3)或(5)中,所述醇/水溶液中醇为甲醇或乙醇。
为了更好的实现本发明,步骤(6)中所述高效液相色谱分离纯化采用:流动相为15~45%乙腈/水(v/v),色谱柱为waters XBridge BEH C18 OBDTM色谱柱,检测波长为200~280nm,流速为2mL/min。
为了更好的实现本发明,步骤(6)中所述高效液相色谱分离纯化采用:流动相为35%乙腈/水(v/v),色谱柱为C18色谱柱,检测波长为210nm。
根据本发明的再一方面,提供含有本发明化合物的药物组合物,可以通过将本发明添加药学上可接受的载体或附形剂或可选的其他成分而制成适于临床使用的药物组合物。
根据本发明的再一方面,提供本发明化合物在制备活血化瘀药物中的应用,其具有抑制血小板聚集的作用。
根据本发明的再一方面,提供本发明化合物在治疗心血管方面疾病药物中的应用,其具有抑制凝血酶激活的血小板聚集的作用。
为了更好的实现本发明,提供本发明化合物用于制备抑制二磷酸腺苷激活的血小板聚集的药物。
为了更好的实现本发明,可以该化合物为活性成分,加上辅料可以制备成药物制剂或医疗器械。
本发明还一方面提供含有治疗有效量的权利要求1的化合物或其衍生物的药物组合物。
为了更好的实现本发明,所述药物组合物中权利要求1所述的化合物或其衍生物的含量大于60%,尤其95%以上。
本发明的有益效果是:
1、本发明通在HPLC的PDA检测器对化学成分的初步预测的基础上,设计了风轮菜活性部位的提取、分离流程,得到了式(Ⅰ)的化合物。该化合物是风轮菜的醇提物有小剂量止血,大剂量活血的双向作用。活血成分则是以式(Ⅰ)化合物的大剂量才表现出抗凝血作用的水溶性较好的二氢黄酮类成分。
2、本发明制备方法得到的式(Ⅰ)化合物纯度高,纯度达98%,稳定性好,且具备良好的生物活性。通过体外凝血活性实验的方法,本发明的化合物能作为抗凝血药或抗血栓药,其对凝血酶激活的血小板聚集具有较强的抑制活性,尤其对血栓、心血管疾病等具有较好的疗效。
附图说明
图1显示为本发明获得的化合物的核磁共振二维HMBC和1H-1H COSY谱图;
图2显示为本发明获得的化合物的高分辨质谱图(HR-ESI-MS,负离子扫描);
图3显示为本发明获得的化合物的高分辨质谱图(HR-ESI-MS,正离子扫描);
图4显示为本发明获得的化合物的13C NMR谱图;
图5显示为本发明获得的化合物的1H NMR谱图;
图6显示为本发明获得的化合物的1H-1H COSY谱图;
图7显示为本发明获得的化合物的HSQC谱图;
图8显示为本发明获得的化合物的HMBC谱图;
图9显示为采用实施例2所述方法制备的化合物的色谱叠加图;
图10显示为加入本发明获得的化合物后血小板最大聚集率(二磷酸腺苷为诱导剂);
图11显示为加入本发明获得的化合物后血小板最大聚集率(凝血酶为诱导剂);
图12显示为分别加入本发明获得的化合物和阿司匹林后血小板最大聚集率。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明,但本发明的实施方式不限于此,在不脱离本发明上述技术思想情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段,做出各种替换和变更,均应包括在本发明的范围内。
本发明以断血流药材为原料,经提取、萃取、柱层析分离、浓缩等过程获得一个新化合物,其结构式如式1所示:
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种苯丙素类化合物的制备方法,包括如下步骤:
材料来源:风轮菜购自绿源生物科技有限公司,该药材的标本样品保藏在福建中科生物有限公司药物研发中心药学室。
(1)以风轮菜地上部分为原料,干燥,粉碎得到的粗粉10kg后将粗粉采用100L、60%乙醇水溶液提取,所得提取液旋转蒸发至干,得粗提物浸膏980g;
(2)使用适量纯水溶解浸膏配成浓度为50mg/mL的水溶液后,依次使用氯仿、正丁醇分别萃取,具体按照有机相:水相=4:1(v/v)比例萃取,采用振荡器120rpm的振幅震荡15min后静置4小时,共萃取三次,得正丁醇浸膏300g;
(3)取正丁醇浸膏260g上D101大孔吸附树脂柱层析,依次分别以0%、10%、30%、60%、100%(v/v)乙醇/水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,得含有目标化合物的一级组分58g
(4)取一级组分53g在硅胶上进行柱层析,依分别以3%、10%、20%、40%、100%(v/v)二氯甲烷/甲醇溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的二级组分12g;
(5)取二级组分10g进行反相C18柱层析,依次分别以25%、40%、60%、75%、100%(v/v)甲醇/水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,根据薄层追踪,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的三级组分210mg;
(6)取三级组分180mg经制备型高效液相色谱分离纯化,色谱柱为waters XBridgeBEH C18 OBDTM色谱柱,色谱柱的尺寸规格为10*250mm,填料粒径为5μm,使用时柱温为室温,选流动相为25%乙腈/水(v/v)的梯度洗脱,检测器为PDA检测器,检测波长为254nm,流速为2mL/min,根据紫外吸收光谱收集目标峰洗脱剂,旋蒸浓缩至干,得到目标化合物82mg。
(7)目标化合物的结构解析,最终经过质谱、核磁共振谱图及比旋光度等数据(见表1,图1-图8)综合鉴定了该化合物的结构如式(Ⅰ)所示。该化合物为黄棕色胶状固体,比旋光度为(c 1.0,MeOH),高分辨质谱(HR-ESI-MS)m/z[M-H]-=505.1067,[M+Na]+=529.1101,[M+H]+=507.1291,核磁共振一维氢谱和碳谱数据见附表1,核磁共振二维HMBC和1H-1H COSY谱图相关信号如附图1所示。
表1化合物的核磁氢谱(1H NMR 600MHz DMSO)和核磁碳谱(13C NMR 215MHzDMSO)数据归属
实施例2
一种苯丙素类化合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)以断血流(风轮菜)地上部分为原料,干燥样品粉碎得到5kg,然后采用50L、60%甲醇水溶液提取,所得提取液旋转蒸发至干,得粗提物浸膏480g;
(2)取粗提物浸膏450g使用纯水配成浓度为100mg/mL的水溶液,依次使用氯仿、正丁醇分别萃取,具体按照有机相:水相=4:1(v/v)比例萃取,采用振荡器120rpm的振幅震荡15min后静置4小时,共萃取三次,得正丁醇浸膏145g;
(3)取正丁醇浸膏130g,用D101大孔吸附树脂柱层析,依次以0%、20%、45%、70%、100%(v/v)乙醇/水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,得含有目标化合物的一级组分23g;
(4)取一级组分20g,采用硅胶柱层析,依次以6%、15%、30%、50%、100%(v/v)二氯甲烷/甲醇溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,根据薄层追踪,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的二级组分4g;
(5)取二级组分3.5g,采用反相C18柱层析,依次以30%、50%、65%、80%、100%(v/v)甲醇/水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,根据薄层追踪,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的三级组分78mg;
(6)取三级组分60mg,分别采用高效液相色谱分离纯化,色谱柱为waters XBridgeBEH C18 OBDTM色谱柱,色谱柱的尺寸规格为10*250mm,填料粒径为5μm,使用时柱温为室温,选流动相为35%乙腈/水(v/v)的梯度洗脱,检测器为PDA检测器,检测波长为210nm,流速为2mL/min,根据紫外吸收光谱收集目标峰洗脱剂,旋蒸浓缩至干,得到目标化合物S1、S2、S3、S4、S5、S6,六份制得的目标化合物均纯度>98%,RSD<0.2%,得率>91%。图9显示为目标化合物S1、S2、S3、S4、S5、S6的色谱叠加图。
实施例3
一种苯丙素类化合物的制备方法,包括如下步骤:
(1)以断血流药材(风轮菜)地上部分为原料,干燥样品粉碎后得到粗粉5kg,采用70%乙醇水溶液提取,所得提取液旋转蒸发至干,得粗提物浸膏430g;
(2)取410g粗提物浸膏使用纯水配成浓度为100mg/mL的水溶液,然后依次使用氯仿、正丁醇分别萃取,具体按照有机相:水相=4:1(v/v)比例萃取,采用振荡器120rpm的振幅震荡15min后静置4小时,共萃取三次,得正丁醇浸膏135g;
(3)取正丁醇浸膏125g,用D101大孔吸附树脂柱层析,依次以0%、30%、60%、85%、100%(v/v)乙醇/水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,得含有目标化合物的一级组分21g;
(4)取一级组分18g,采用硅胶柱层析,依次以10%、20%、40%、60%、100%(v/v)二氯甲烷/甲醇溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的二级组分3.6g;
(5)取二级组分3g,采用反相C18柱层析,依次以40%、60%、75%、90%、100%(v/v)甲醇/水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱,根据薄层追踪,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的三级组分69mg;
(6)取三级组分60mg,采用高效液相色谱分离纯化,色谱柱为waters XBridge BEHC18 OBDTM色谱柱,色谱柱的尺寸规格为10*250mm,填料粒径为5μm,使用时柱温为室温,选流动相为45%乙腈/水(v/v)的梯度洗脱,检测器为PDA检测器,检测波长为280nm,流速为2mL/min,根据紫外吸收光谱收集目标峰洗脱剂,旋蒸浓缩至干,得到目标化合物31mg。
实施例4化合物(Ⅰ)抗凝血或抗血栓作用的生物学实验及分析
1,材料
血浆:购自医院的血液,其指标为富含血小板的血液,一次购买为300CC。
试剂:式(Ⅰ)所示化合物,15mg。
2,方法
实验一:
购自医院已加入抗凝剂的血液,通过200g离心力进行离心收集上清夜为富血小板血浆(PRP),用台式B液洗去血浆中其它组分(包括thrombin和纤维蛋白原等),得到乏血小板血浆(PPP)作为血小板聚集的相对对照物。加入式(Ⅰ)所示化合物,使用二磷酸腺苷(ADP)作为血小板聚集实验的诱导剂,采用血小板聚集仪进行实验并按照试剂盒的要求进行凝血活性检测,每个样品浓度重复三次,取血小板聚集率的平均值。对照组为未加入化合物溶剂的富小板血浆(PRP)组别,其结果如图10所示。
实验结果:采用凝血指标血小板聚集率作为指标,如图10所示发现随着式(Ⅰ)所示化合物浓度的增加,最大血小板聚集率降低,当式(Ⅰ)所示化合物浓度越大时,其最大血小板聚集率与对照组有差异性。式(Ⅰ)所示化合物随着浓度的增加抗凝血活性逐渐增强,血小板最大聚集率与式(Ⅰ)所示化合物浓度有关,表明化合物具有抗凝血活性。
实验二:
购自医院已加入抗凝剂的血液,通过200g离心力进行离心收集上清夜为富血小板血浆(PRP),用台式B液洗去血浆中其它组分(包括thrombin和纤维蛋白原等),得到乏血小板血浆(PPP)作为血小板聚集的相对对照物。加入式(Ⅰ)所示化合物,使用凝血酶(thrombin)作为血小板聚集实验的诱导剂,采用血小板聚集仪进行实验并按照试剂盒的要求进行凝血活性检测,每个样品浓度重复三次,取血小板聚集率的平均值。对照组为未加入化合物溶剂的富血小板血浆(PRP)组别,其结果如图11所示。
实验结果:采用凝血指标血小板聚集率作为指标,如图11所示发现随着式(Ⅰ)所示化合物浓度的增加,最大血小板聚集率降低,呈现依赖性递减关系且与对照组有显著差异性。式(Ⅰ)所示化合物随着浓度的增加抗凝血活性逐渐增强,说明了血小板最大聚集率与式(Ⅰ)所示化合物浓度有关,呈负相关性,表明化合物具有很强的抗凝血活性。
实验三
购自医院已加入抗凝剂的血液,通过200g离心力进行离心收集上清夜为富血小板血浆(PRP),用台式B液洗去血浆中其它组分(包括thrombin和纤维蛋白原等),得到乏血小板血浆(PPP)作为血小板聚集的相对对照物,加入式(Ⅰ)所示化合物且化合物浓度为66.67ug/ml,阳性对照物为阿司匹林(Aspirin)配制成66.7ug/ml。凝血酶(thrombin)作为血小板聚集实验的诱导剂,采用血小板聚集仪进行实验并按照试剂盒的要求进行凝血活性检测,每个样品浓度重复三次,取血小板聚集率的平均值,对照组为未加入化合物溶剂的富血小板血浆(PRP)组别,其结果如图12所示。
实验结果:采用凝血指标血小板聚集率作为指标,如图12所示,式(Ⅰ)化合物组和阿司匹林组均与对照组有差异性,表明式(Ⅰ)化合物与阿司匹林均具有抑制血小板聚集的抗凝血特性。而阿司匹林组与式(Ⅰ)化合物组相比,式(Ⅰ)化合物组的最大血小板聚集率低于阿司匹林组,有显著差异性,式(Ⅰ)化合物的抗凝血活性要优于阿司匹林的抗凝血活性。
实验结果表明,本发明的式(Ⅰ)化合物具有很强的抗凝血活性,其抗凝血活性要优于阿司匹林的抗凝血活性。
尽管已经对上述各实施例进行了描述,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念,则可对这些实施例做出另外的变更和修改,所以以上所述仅为本发明的实施例,并非因此限制本发明的专利保护范围,凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围之内。
Claims (4)
2.如权利要求1所述的化合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)以风轮菜地上部分为原料,干燥,粉碎得到的粗粉10kg后将粗粉采用100L、 60%乙醇水溶液提取,所得提取液旋转蒸发至干,得粗提物浸膏980g;
(2)使用适量纯水溶解浸膏配成浓度为50mg/mL的水溶液后,依次使用氯仿、正丁醇分别萃取,具体按照体积比为有机相:水相=4:1的比例萃取,采用振荡器120rpm的振幅震荡15min后静置4小时,共萃取三次,得正丁醇浸膏300g;
(3)取正丁醇浸膏260g上D101大孔吸附树脂柱层析,依次分别以体积比为0%、10%、30%、60%、100%的乙醇/水为洗脱剂进行梯度洗脱,得含有目标化合物的一级组分58g;
(4)取一级组分53g在硅胶上进行柱层析,依次分别以体积比为3%、10%、20%、40%、100%的二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的二级组分12g;
(5)取二级组分10g进行反相C18柱层析,依次分别以体积比为25%、40%、60%、75%、100%的甲醇/水为洗脱剂进行梯度洗脱,根据薄层追踪,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的三级组分210mg;
(6)取三级组分180mg经制备型高效液相色谱分离纯化,色谱柱为waters XBridge BEHC18 OBDTM色谱柱,色谱柱的尺寸规格为10*250mm,填料粒径为5μm,使用时柱温为室温,选体积比为25%的乙腈/水为流动相进行洗脱,检测器为PDA检测器,检测波长为254nm,流速为2mL/min,根据紫外吸收光谱收集目标峰洗脱剂,旋蒸浓缩至干,得到目标化合物。
3.如权利要求1所述的化合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)以风轮菜地上部分为原料,干燥样品粉碎得到粗粉5kg,然后采用50L、60%甲醇水溶液提取,所得提取液旋转蒸发至干,得粗提物浸膏480g;
(2)取粗提物浸膏450g使用纯水配成浓度为100mg/mL的水溶液,依次使用氯仿、正丁醇分别萃取,具体按照体积比为有机相:水相=4:1的比例萃取,采用振荡器120rpm的振幅震荡15min后静置4小时,共萃取三次,得正丁醇浸膏145g;
(3)取正丁醇浸膏130g,用D101大孔吸附树脂柱层析,依次以体积比为0%、20%、45%、70%、100%的乙醇/水为洗脱剂进行梯度洗脱,得含有目标化合物的一级组分23g;
(4)取一级组分20g,采用硅胶柱层析,依次以体积比为6%、15%、30%、50%、100%的二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱,根据薄层追踪,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的二级组分4g;
(5)取二级组分3.5g,采用反相C18柱层析,依次以体积比为30%、50%、65%、80%、100%的甲醇/水为洗脱剂进行梯度洗脱,根据薄层追踪,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的三级组分78mg;
(6)取三级组分60mg,分别采用高效液相色谱分离纯化,色谱柱为waters XBridge BEHC18 OBDTM色谱柱,色谱柱的尺寸规格为10*250mm,填料粒径为5μm,使用时柱温为室温,选体积比为35%的乙腈/水为流动相进行洗脱,检测器为PDA检测器,检测波长为210nm,流速为2mL/min,根据紫外吸收光谱收集目标峰洗脱剂,旋蒸浓缩至干,得到目标化合物。
4.如权利要求1所述的化合物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)以风轮菜地上部分为原料,干燥样品粉碎后得到粗粉5kg,采用70%乙醇水溶液提取,所得提取液旋转蒸发至干,得粗提物浸膏430g;
(2)取410g粗提物浸膏使用纯水配成浓度为100mg/mL的水溶液,然后依次使用氯仿、正丁醇分别萃取,具体按照体积比为有机相:水相=4:1的比例萃取,采用振荡器120rpm的振幅震荡15min后静置4小时,共萃取三次,得正丁醇浸膏135g;
(3)取正丁醇浸膏125g,用D101大孔吸附树脂柱层析,依次以体积比为0%、30%、60%、85%、100%的乙醇/水为洗脱剂进行梯度洗脱,得含有目标化合物的一级组分21g;
(4)取一级组分18g,采用硅胶柱层析,依次以体积比为10%、20%、40%、60%、100%的二氯甲烷/甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的二级组分3.6g;
(5)取二级组分3g,采用反相C18柱层析,依次以体积比为40%、60%、75%、90%、100%的甲醇/水为洗脱剂进行梯度洗脱,根据薄层追踪,合并含有相似组分的洗脱剂,得含有目标化合物的三级组分69mg;
(6)取三级组分60mg,采用高效液相色谱分离纯化,色谱柱为waters XBridge BEH C18OBDTM色谱柱,色谱柱的尺寸规格为10*250mm,填料粒径为5μm,使用时柱温为室温,选体积比为45%的乙腈/水为流动相进行洗脱,检测器为PDA检测器,检测波长为280nm,流速为2 mL/min,根据紫外吸收光谱收集目标峰洗脱剂,旋蒸浓缩至干,得到目标化合物。
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风轮菜属植物化学成分和药理作用研究进展;陈凯等;《海峡药学》;20121231;第24卷(第7期);第6-10页 * |
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