CN109970839A - 三萜皂苷类化合物及其制备方法和医药用途 - Google Patents

三萜皂苷类化合物及其制备方法和医药用途 Download PDF

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Abstract

本发明属于天然药化技术领域，涉及一个化合物的结构、制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明从大火草(Anemone tomentosa(Maxim.)Pei)全草中提取、分离、纯化，得到了1个三萜皂苷类化合物，命名为tomentoside T3，药效学实验表明，tomentoside T3对乳腺癌细胞和前列腺癌细胞的增殖显示出了显著的抑制作用。

Description

三萜皂苷类化合物及其制备方法和医药用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及三萜皂苷类化合物及其制备方法和医药用途。具体涉及大火草中的三萜皂苷类成分及其制备方法和医药用途。
背景技术
大火草(Anemone tomentosa(Maxim.)Pei)为毛茛科 (Ranunculaceae)银莲花属植物。银莲花属全属有150余种植物，主要分布在北温带。我国有50余种，主要分布在西南部、西北部高山地区。银莲花属植物的药用价值在我国有悠久的历史记载，主要以植物的根、茎或全草做药，具有祛瘀消肿、除湿活血、清热解毒等功效，因此，具开发和使用前景。《中华人民共和国药典》收录的多被银莲花(A.raddeana)的根茎，即为民间传统中药“两头尖”，从中提炼所得的银莲花素A是医治风湿病的常用中药。新近研究表明，银莲花属植物中含有大量三萜皂苷类化合物，具有解热、镇痛、抗菌、抗炎、抗肿瘤等活性。
大火草又名野棉花、土白头翁、大头纠等，主要分布于四川西部和东北部、青海东部、甘肃和陕西。性温，味苦，有清热解毒，排脓生肌，消肿散瘀，消食化积，截虐，解毒，杀虫等功效。可用于治疗各种顽癣，秃疮，疮疖痈肿，无名肿毒，跌打损伤；还可用于化痰，止咳，解毒，治痰饮咳嗽，气喘，痒子等疾病；民间常将其作为痢疾，疟疾，小儿疳积，小儿驱虫的常用药。目前国内外有关大火草的化学成分已有报道，其中关于香豆素和黄酮等成分的报道较多，研究发现大火草的化学成分包括挥发性成分、甾体、萜类、黄酮类、黄酮苷类、皂苷类和酯类等，其中皂苷类化合物在该属植物中广泛存在,是大火草的特征性成分。但目前国内外关于大火草中皂苷类成分的活性研究鲜少报道。大火草中含有大量的三萜皂苷类成分，本发明旨在于从大火草中寻找具有抗肿瘤活性的三萜皂苷类化合物。
发明内容
本发明的目的在于提供三萜皂苷类化合物及其制备方法和医药用途。
本发明提供的三萜皂苷tomentoside T3，结构特征在于由1分子齐墩果酸通过羟基与2分子木糖通过脱水缩合而来，其具有如下结构。
本发明还提供了所述三萜皂苷类化合物tomentoside T3的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)大火草(Anemone tomentosa(Maxim.)Pei)用水-乙醇 (100:0～0:100)提取，回收提取液得粗提物；
(2)上述步骤(1)所得粗提物悬浮于水中得混悬液，依次用等体积的乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到不同极性部位的浸膏；
(3)上述步骤(2)所得乙酸乙酯或正丁醇浸膏经硅胶柱色谱法分离，以乙酸乙酯/甲醇/水或者二氯甲烷/甲醇/水混合溶剂梯度洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得馏分经制备液相色谱法或者ODS开放色谱分离，以甲醇-水混合溶剂为流动相，得到tomentoside T3。
本发明提供的所述三萜皂苷类化合物tomentoside T3的制备方法，所述植物为毛茛科(Ranunculaceae)大火草(Anemone tomentosa (Maxim.)Pei)的干燥全草。
本发明提供的所述三萜皂苷类化合物tomentoside T3的制备方法，步骤(1)中所述的提取方法为加热回流或加热超声提取1～3次。所用溶剂为：水-乙醇(100:0～0:100)，优选40％～75％乙醇，更优选 40％～70％乙醇。药材：溶剂的重量体积比为1:6～1:12，优选1:8～1:10。
本发明所提供的所述三萜皂苷类化合物tomentoside T3的制备方法，步骤(2)中所述的溶剂乙酸乙酯或正丁醇与混悬液的体积比例为1:1-1:3。
本发明所提供的所述三萜皂苷类化合物tomentoside T3的制备方法，步骤(3)中所述乙酸乙酯/甲醇/水或者二氯甲烷/甲醇/水混合溶剂的体积比例为100:0:0～3:1:0.1，优选比例为80:1:0～4:1:0.1。
本发明所提供的所述三萜皂苷类化合物tomentoside T3的制备方法，步骤(4)中所述流动甲醇/水混合溶剂的体积比例为90:10～70:30，优选87:13～77:23。
本发明对化合物tomentoside T3体外抗肿瘤活性进行了初步测试和评价，所选肿瘤细胞系包括乳腺癌细胞(MDA-MB-231)和前列腺癌细胞(PC-3)。结果表明，化合物tomentoside T3具有明显的抗乳腺癌或前列腺癌的作用。因此，本发明中制备的化合物tomentoside T3可在开发抗肿瘤药物方面应用。
本发明首次提供了以大火草根茎为原料，大量富集、制备、鉴定新化合物tomentoside T3的方法，并且评价抗肿瘤活性，阐述了其在开发抗肿瘤药物中的应用。
附图说明
图1本发明tomentoside T3的1H NMR谱；
图2本发明tomentoside T3的13C NMR谱；
图3本发明tomentoside T3的HSQC谱；
图4本发明tomentoside T3的HMBC谱；
图5本发明tomentoside T3的HRESIMS谱。
具体实施方式
下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此限制本发明。
实施例1
(1)大火草干燥根茎1000g，粉碎后用70％乙醇加热超声提取 1次(用量为8 L)，减压回收提取液的粗提物；
(2)步骤(1)所得70％乙醇粗提物经依次用等体积的乙酸乙酯和正丁醇进行萃取；
(3)步骤(2)中所得的正丁醇萃取物，经硅胶柱色谱进行分离，经二氯甲烷/甲醇/水100:0:0，30:1:0，15:1:0，4:1:0，4:1:0.1混合溶剂梯度洗脱；
(4)步骤(3)二氯甲烷/甲醇/水15:1:0馏分，进行制备液相分离，210nm检测，流速为8mL/min，流动相为甲醇：水＝83:17，得到tomentoside T3(tR＝55.0min)。
根据tomentoside T3的理化性质和波谱数据鉴定了其结构(核磁谱图和高分辨质谱图见附图1-5)。
tomentoside T3的结构鉴定数据如下：
白色无定型粉末。HR-ESI-MS给出m/z：765.4472[M+COOH-H]- (calc forC41H65O13,765.4488)，结合1H、13C谱数据确定分子式为： C40H64O11。1H NMR和13C NMR数据见表1。
tomentoside T3的NMR数据归属见表1
表1 tomentoside T3的NMR数据a
a 600 MHz for 1H NMR and 150MHz for 13C NMR in C5D5N，o overlaped
实施例2
(1)大火草干燥全草2000g，粉碎后用40％乙醇加热回流提取 2次(用量为20L)，减压回收提取液的粗提物；
(2)步骤(1)中所得40％乙醇粗提物依次用等体积的乙酸乙酯和正丁醇进行萃取；
(3)步骤(2)中所得的乙酸乙酯萃取物，经硅胶柱色谱进行分离，经乙酸乙酯/甲醇/水100:0:0，30:1:0，20:1:0，10:1:0，4:1:0.1混合溶剂梯度洗脱；
(4)步骤(3)中所得乙酸乙酯/甲醇/水20:1:0馏分，经ODS 开放色谱柱分离洗脱，流动相为甲醇：水＝85:15，得到tomentoside T3。
实施例3
(1)细胞培养
所有细胞均在37℃，5％CO2饱和湿度的培养箱中常规培养， PC-3培养液为含10％牛血清、青霉素和链霉素的RPMI-1640细胞培养基；MDA-MB-231的培养方法同PC-3，MDA-MB-231采用L-15 培养基。
(2)MTT法测定
收集处于对数生长期的细胞，对其进行计数，将细胞制成细胞悬液，接种在96孔培养板内，每孔接种180μL细胞悬液(6×103细胞)，然后加入不同浓度的受试样品(100，30，10，3和1μmol/L)，溶剂对照组为不含药品的培养液，各浓度设3个复孔，每孔加入量为20 μL。置于37℃，5％CO2的培养箱中培育72h后，每孔加入20μL MTT 工作液，继续培养4h后，离心，弃去上清液，加入150μL DMSO，振摇10min，酶标仪测定在570nm处的吸光值(OD值)，计算细胞抑制率。计算公式：细胞抑制率＝(对照组OD值-样品组OD值)/ 对照组OD值×100％
(3)供试品的制备方法：
称取1mg待测样品，用适量DMSO溶解，制成澄清溶液1000μL。
(4)实验结果
表2 The cytotoxic activity of tomentoside T3 in vitro
。

Claims (10)

1.三萜皂苷类化合物tomentoside T3，其特征在于：具有如下结构：
。
2.一种权利要求1所述tomentoside T3的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
(1)大火草(Anemone tomentosa(Maxim.)Pei)全草用水-乙醇(100:0～0:100)提取，减压回收提取液得粗提物；
(2)上述步骤(1)所得粗提物悬浮于水中得混悬液，依次用等体积的乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到不同极性部位的浸膏；
(3)上述步骤(2)所得乙酸乙酯或正丁醇浸膏经硅胶柱色谱法分离，以乙酸乙酯/甲醇/水或者二氯甲烷/甲醇/水混合溶剂洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得馏分经制备液相色谱法或者ODS开放色谱分离，以甲醇-水混合溶剂为流动相，得到tomentoside T3。
3.按照权利要求2所述的三萜皂苷类化合物tomentoside T3制备方法，其特征在于：所述植物来源为毛茛科(Ranunculaceae)银莲花属植物大火草(Anemone tomentosa(Maxim.)Pei)。
4.按照权利要求2所述的三萜皂苷类化合物tomentoside T3的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的提取方法为加热回流提取或加热超声提取1～3次，所用溶剂为体积比为40％～75％的水-乙醇，药材：溶剂的重量体积比为1:6～1:12。
5.按照权利2所述的tomentoside T3的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的乙酸乙酯或正丁醇与混悬液的体积比例为1:1-1:3。
6.按照权利2所述的tomentoside T3的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述洗脱溶剂乙酸乙酯/甲醇/水，二氯甲烷/甲醇/水比例为100:0:0～3:1:0.1。
7.按照权利要求2所述的tomentoside T3的制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述甲醇-水混合溶剂的体积比例为85:15～70:30。
8.药物组合物，包含权利要求1所述的三萜皂苷类化合物tomentoside T3。
9.权利要求1所述的三萜皂苷类化合物tomentoside T3或权利要求8所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为乳腺癌或前列腺癌。
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