PL228517B1 - Sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3- on-17-olu - Google Patents
Sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3- on-17-oluInfo
- Publication number
- PL228517B1 PL228517B1 PL413209A PL41320915A PL228517B1 PL 228517 B1 PL228517 B1 PL 228517B1 PL 413209 A PL413209 A PL 413209A PL 41320915 A PL41320915 A PL 41320915A PL 228517 B1 PL228517 B1 PL 228517B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- androst
- propionate
- concentration
- sequence
- formula
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 26
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 10
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ULJOJMSGJSWPSE-BQDNHOQLSA-N [(8r,9s,10r,13s,14s)-10,13-dimethyl-3-oxo-6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] propanoate Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CCC(OC(=O)CC)[C@@]1(C)CC2 ULJOJMSGJSWPSE-BQDNHOQLSA-N 0.000 claims description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 241000029117 Sterolibacterium denitrificans Species 0.000 claims description 4
- PDMMFKSKQVNJMI-BQDNHOQLSA-N [(8r,9s,10r,13s,14s)-10,13-dimethyl-3-oxo-1,2,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] propanoate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CCC(OC(=O)CC)[C@@]1(C)CC2 PDMMFKSKQVNJMI-BQDNHOQLSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 4
- AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(6+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+6].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 3
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 10
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- HZNVUJQVZSTENZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(C#N)=C(C#N)C1=O HZNVUJQVZSTENZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 3
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- DCQLZTSRKLWEAB-UHFFFAOYSA-N ac1ndudu Chemical compound O1C(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC(C(OCC(C)O)C2OCC(C)O)C(COCC(O)C)OC2OC(C(C2OCC(C)O)OCC(C)O)C(COCC(C)O)OC2OC2C(OCC(C)O)C(OCC(C)O)C1OC2COCC(C)O DCQLZTSRKLWEAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- NOEMICWEDLSYHV-SNZQGMLHSA-N (4R,5S,8S,9S,10S,13S,14S,17R)-4,8,10,14-tetramethyl-17-[(2R)-6-methylheptan-2-yl]-1,2,3,4,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-tetradecahydrocyclopenta[a]phenanthrene Chemical compound CC(C)CCC[C@@H](C)[C@H]1CC[C@@]2(C)[C@H]1CC[C@H]1[C@@]3(C)CCC[C@@H](C)[C@@H]3CC[C@]21C NOEMICWEDLSYHV-SNZQGMLHSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 102000003983 Flavoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010057573 Flavoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000544334 Jerzego Species 0.000 description 1
- 101100161224 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) ksdD gene Proteins 0.000 description 1
- 241000203720 Pimelobacter simplex Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 1
- -1 androst-1,4-diene propionate Chemical compound 0.000 description 1
- 238000005899 aromatization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- UETZVSHORCDDTH-UHFFFAOYSA-N iron(2+);hexacyanide Chemical compound [Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] UETZVSHORCDDTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 230000009329 sexual behaviour Effects 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(21) Numer zgłoszenia. 413209 C12P 33/02 (2006 01)
C12R 1/01 (2006.01)
Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia: 21.07.2015 (54)
Sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3-on-17-olu (73) Uprawniony z patentu:
(43) Zgłoszenie ogłoszono:
30.01.2017 BUP 03/17 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:
30.04.2018 WUP 04/18 m
co
CM
CM
Ω.
UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCŁAWIU, Wrocław, PL INSTYTUT KATALIZY I FIZYKOCHEMII POWIERZCHNI IM. JERZEGO HABERA POLSKIEJ AKADEMII NAUK, Kraków, PL (72) Twórca(y) wynalazku:
AGNIESZKA RUGOR, Kraków, PL MACIEJ SZALENIEC, Kraków, PL TOMASZ JANECZKO, Wrocław, PL MONIKA DYMARSKA, Wrocław, PL EDYTA KOSTRZEWA-SUSŁOW, Wrocław, PL (74) Pełnomocnik:
rzecz, pat. Anna Kasperowicz
PL 228 517 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3-on-17-olu.
Metoda, według wynalazku może znaleźć zastosowanie w przemyśle chemicznym i farmaceutycznym do wytwarzania leku stosowanego w terapii hormonalnej (A. S. Clark, E.V. Harrold, A.S. Fast; Anabolic - androgenic steroid effects on the sexual behavior of intact male rats. Horm Behav 31, 1997, 35-46).
Biotransformacje są ekologiczną alternatywą względem klasycznej syntezy chemicznej w uzyskiwaniu aktywnych związków i są coraz częściej stosowane w przemyśle biofarmaceutycznym, zwłaszcza do produkcji leków steroidowych (M.-M. Chen, F.-Q. Wang, L.-C. Lin, K. Yao, D.-Z. Wei; Characterization and application of fusidane antibiotic biosynethsis enzyme 3-ketosteroid-A1-dehydrogenase in steroid transformation. Appl Microbiol Biotechnol 96, 2012, 133-142). Wprowadzenie wiązania podwójnego między pierwszym i drugim atomem węgla w pierścieniu A związku steroidowego może zwiększyć aktywność biologiczną nowo powstałego związku. Chemiczne metody otrzymywania 1-en-steroidów są wielostopniowe i mogą prowadzić do spontanicznej aromatyzacji pierścienia A (Y. Li, F. Lu, T. Sun, L. Du; Expression of ksdD gene encoding 3-ketosteroid-A1-dehydrogenase from Arthrobacter simplex in Bacillus subtilis. Lett Appl Microbiol, 44, 2007, 563-568).
Znana jest chemiczna metoda otrzymywania propionianu androst-1,4-dien-3-on-17-olu z propionianu androst-4-en-3-on-17-olu w wyniku zastosowania 2,3-dichloro-5,6-dicyjano-1,4-benzochinonu. Konwersja tego procesu wynosi 81% (K. Chen, C. Liu, L. Deng, G. Xu; A practical A1-dehydrogenation of A4-3-keto-steroids with DDQ in the presence. Steroids 75, 2010, 513-516).
W dostępnej literaturze nie znaleziono metody mikrobiologicznego uzyskiwania propionianu androst-1,4-dien-3-on-17-olu.
Istota wynalazku polega na tym, że regioselektywne wprowadzenie podwójnego wiązania między pierwszym i drugim atomem węgla w substracie, którym jest propionian androst-4-en-3-on-17-olu, w wyniku którego otrzymuje się propionian androst-1,4-dien-3-on-17-olu, prowadzi się przy zastosowaniu preparatu enzymatycznego o aktywności AcmB pochodzącego natywnie ze szczepu bakterii Sterolibacterium denitrificans Chol-1S DSM: 13999 o sekwencji SEQ ID 1 albo pochodzącego z dowolnego mikroorganizmu wytwarzającego białko enzymatyczne o sekwencji aminokwasowej oznaczonej w bazie GenBank kodem akcesyjnym ABV59992.1, tj. o sekwencji zgodnej z SEQ ID 1 albo przy zastosowaniu preparatu enzymatycznego o sekwencji aminokwasów zgodnej w minimum 75% z sekwencją SEQ ID 1, która to sekwencja została zmieniona przez co najmniej delecję, insercję, substytucję albo kombinację wyżej wymienionych, niezależnie od mikroorganizmu, w którym podlegał on ekspresji bądź nadekspresji. Stosuje się od 0,1 do 1 mg substratu na 1 ml preparatu. Substrat, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą, wprowadzany jest do mieszaniny reakcyjnej złożonej z buforu utrzymującego pH w granicach od 6,0 do 7,5; akceptora elektronowego enzymu: heksacyjanożelazianu III potasu o stężeniu od 5 do 20 mM oraz z 2-hydroksypropylo-b-cyklodekstryny o stężeniu objętościowym od 2 do 10%, po czym produkt oczyszcza się metodą chromatograficzną.
Korzystne jest, gdy stężenie heksacyjanożelazianu III potasu wynosi 12,5 mM.
Korzystne również jest, gdy stężenie 2-hydroksypropylo-b-cyklodekstryny wynosi 8%.
Korzystne także jest, gdy oczyszczanie prowadzi się metodą SPE z polimerowymi kolumienkami chromatograficznymi Strata-X, stosując izopropanol jako eluent.
Korzystne również jest, gdy proces dehydrogenacji prowadzi się w temperaturze od 20 do 45°C.
Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie propionianu androst-1,4-dien-3-on-17-olu, o wysokiej aktywności anabolicznej, jako jedynego produktu reakcji, z wydajnością izolowaną 57% (konwersja według GC >99%), w temperaturze pokojowej.
P r z y k ł a d 1: Procedura przygotowania preparatu enzymatycznego poprzedzona jest dwoma etapami prowadzącymi do pozyskania natywnego preparatu enzymatycznego z aktywnością AcmB: hodowlą bakteryjną oraz izolowaniem z masy bakteryjnej preparatu enzymatycznego o aktywności AcmB. Hodowlę bakterii Sterolibacterium denitrificans Chol-1S (DSM: 13999) prowadzi się w środowisku beztlenowym według procedury opisanej w literaturze (Y.-R. Chiang, W. Ismail, M. Muller, G. Fuchs; Initial steps in the anoxic metabolism of cholesterol by the denitrifying Sterolibacterium denitrificans. J Biol Chem. 282, 2007, 13240-13249). Preparat enzymatyczny o aktywności AcmB pozyskuje się w warunkach tlenowych w formie homogenatu bakteryjnego (preparat enzymatyczny „homogenat” stanowiący białka rozpuszczalne i solubilizowane), otrzymanego w wyniku rozbicia komórek, solubilizacji białek z błony i ultrawirowania celem odseparowania frakcji błonowej. Do bioreaktora o pojemności 15 ml, zawierającego 100 mM buforu fosforanowego o pH 7,5; wprowadzono 12,5 m M heksacyjanożelazianu
PL 228 517 B1 potasu, 8% 2-hydroksypropylo-3-cyklodekstryny (w/v) oraz 2,56 mg propionianu androst-4-en-3-on-17-olu rozpuszczonego w 2-metoksyetanolu, tak by finalne stężenie 2-metoksyetanolu w reaktorze wyniosło 1,25% (v/v) oraz 0,3 ml preparatu enzymatycznego o aktywności AcmB „homogenat”. Transformację prowadzi się w temperaturze pokojowej przy ciągłym wstrząsaniu przez 48 godzin. Produkt oczyszczano metodą SPE stosując polimerowe kolumienki chromatograficzne Strata-Xp z 40% izopropanol/H2O i 100% izopropanolem jako czynnik elucyjny. Na tej drodze otrzymano 1,46 mg propionian androst-1,4-dien-3-on-17-olu (wydajność 57%, stopień konwersji >99%).
Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:
1H NMR (600 MHz) (ppm) (CDCI3) δ: 0.86 (s, 3H, 18-H); 1.10-1.01 (m, 3H, 7-Ha, 9-H, 14-H); 1.14 (t, 2H, J = 7.6Hz, 20-H); 1.24 (s, 3H, 19-H); 2.32 (q, 3H, J = 7.6Hz, 21-H); 1.20 (dt, 1H, J = 12.9, 4.5Hz, 12-Ha); 1.37 (ddd, 1H, J = 24.6, 12.3, 6.3 Hz, 15-He); 1.52 (dddd, 1H, J = 19.7, 8.3, 6.6, 2.8Hz, 16-He); 1.71-1.60 (m, 3H, 8-H, 11-He, 15-Ha); 1.74 (ddd, 1H, J = 13.3, 7.2, 4.2Hz, 11-Ha); 1.80 (ddd, 1H, J = 12.8, 4.0, 3,1Hz, 12b); 1.98-1.93 (m, 1H, 7-He); 2.18 (dtd, 1H, J = 13.8, 9.4, 6.3Hz, 16-Ha); 2.37 (dddd, 1H, J = 13.3, 9.2, 4.1,2.6Hz, 6-Ha); 2.47 (tdd, 1H, J = 13.4, 5.0, 1.2 Hz, 6-He); 4.60 (dd, 1H, J = 8.8, 8.2 Hz, 17-H); 6.07 (bs, 1H, 4-H); 6.23 (dd, 1H, J = 10.1, 1.9 Hz, 2-H); 7.04 (d, 1H, J = 10.1 Hz, 1-H).
13C NMR (151 MHz) (ppm) (CDCI3) δ: 186.43 (C-3), 174.58 (C-20), 168.90 (C-5), 155.73 (C-1), 127.75 (C-2), 124.14 (C-4), 82.24 (C-17), 52.42 (C-14), 50.10 (C-9), 43.66 (C-13), 42.97 (C-10), 36.73 (C-12), 35.54 (C-8), 33.24 (C-7), 32.89 (C-6), 27.94 (C-21), 27.66 (C-16), 23.84 (C-15), 22.52 (C-11), 18.90 (C-19), 12.28 (C-18), 9.39 (C-22).
P r z y k ł a d 2: Alternatywną metodą otrzymywania enzymu AcmB jest przeprowadzenie hodowli E. coli (np. E. coli K38/pGP1-2) genetycznie zmodyfikowanej tak, by uzyskała zdolność do syntezy enzymu np. zgodnie z protokołem opisanym w publikacji (Y.-R. Chiang, W. Ismail, S. Gallien, D. Heintz, A. Van Dorsselaer, G. Fuchs; Cholest-4-en-3-one-A1-dehydrogenase, a flavoprotein catalyzing the second step in anoxic cholesterol metabolism. Appl Environ Microb, 74, 2008, 107-113). Rekombinowany enzym oczyszczony na kolumnie powinowactwa typu Ni-NTA a następnie odsolony na kolumnie PD-10 jest bezpośrednio używany do reakcji. Dalej postępuje się jak w przykładzie 1. Otrzymuje się produkt jak w przykładzie 1.
P r z y k ł a d 3: Preparat enzymatyczny otrzymany jak w przykładzie 1, przy czym zmieniono kod genetyczny mikroorganizmu w wyniku czego otrzymano białko o sekwencji zgodnej w 75% z SEQ ID 1. Dalej postępuje się jak w przykładzie 1. Otrzymuje się produkt jak w przykładzie 1.
P r z y k ł a d 4: Postępuje się jak w przykładzie 1, z tym że preparat enzymatyczny o aktywności AcmB pozyskany w warunkach tlenowych w formie homogenatu bakteryjnego, podczyszcza się w punkcie przebicia kolumny na złożu DEAE-Sepharose - preparat enzymatyczny „po oczyszczeniu” jak w artykule (J. Demier, G. Fuchs; Molybdoenzyme that catalyzes the anaerobic hydroxylation of a tertiary carbon atom in the side chain of cholesterol. J Biol Chem. 287, 2012, 36905-36916).
P r z y k ł a d 5: Postępuje się jak w przykładzie 2, z tym że preparat enzymatyczny o aktywności AcmB pozyskany w warunkach tlenowych w formie homogenatu bakteryjnego podczyszcza się w punkcie przebicia kolumny na złożu DEAE-Sepharose (preparat enzymatyczny „po oczyszczeniu”) jak w artykule (J. Dermer, G. Fuchs; Molybdoenzyme that catalyzes the anaerobic hydroxylation of a tertiary carbon atom in the side chain of cholesterol. J Biol Chem. 287, 2012, 36905-36916).
P r z y k ł a d 6: Postępuje się jak w przykładzie 3, z tym że preparat enzymatyczny o aktywności AcmB pozyskany w warunkach tlenowych w formie homogenatu bakteryjnego podczyszcza się w punkcie przebicia kolumny na złożu DEAE-Sepharose (preparat enzymatyczny „po oczyszczeniu”) jak w artykule (J. Dermer, G. Fuchs; Molybdoenzyme that catalyzes the anaerobic hydroxylation of a tertiary carbon atom in the side chain of cholesterol. J Biol Chem. 287, 2012, 36905-36916).
Claims (5)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3-on-17-olu, znamienny tym, że do preparatu enzymatycznego o aktywności AcmB pochodzącego natywnie ze szczepu bakterii Sterolibacterium denitrificans Chol-1S DSM: 13999 o sekwencji SEQ ID 1 o wzorze 3 albo pochodzącego z dowolnego mikroorganizmu wytwarzającego białko enzymatyczne o sekwencji aminokwasowej oznaczonej w bazie GenBank kodem akcesyjnym ABV59992.1, tj. o sekwencji zgodnej z SEQ ID 1 o wzorze 3, albo do preparatu enzymatycznego o sekwencji aminokwasów zgodnej w minimum 75% z sekwencją przedstawioną wzorem 3, która to sekwencja została zmienionaPL 228 517 Β1 przez co najmniej delecję, insercję, substytucję albo kombinację wyżej wymienionych, niezależnie od mikroorganizmu, w którym podlegał on ekspresji bądź nadekspresji, dodaje się propionian androst-4-en-3-on-17-olu o wzorze 1, w ilości od 0,1 do 1 mg/ml preparatu enzymatycznego, który to substrat rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszającym się z wodą, wprowadzany jest do mieszaniny reakcyjnej złożonej z buforu utrzymującego pH w granicach od 6,0 do 7,5; akceptora elektronowego enzymu, który to składa się z heksacyjanożelazianu III potasu o stężeniu od 5 do 20 mM oraz z 2-hydroksypropylo-3-cyklodekstryny o stężeniu objętościowym od 2 do 10%, po czym produkt oczyszcza się metodą chromatograficzną.
- 2. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że stężenie heksacyjanożelazianu III potasu wynosi 12,5 mM.
- 3. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że stężenie 2-hydroksypropylo-3-cyklodekstryny wynosi 8%.
- 4. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że oczyszczanie prowadzi się metodą SPE z polimerowymi kolumienkami chromatograficznymi Strata-X, stosując izopropanol jako eluent.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces dehydrogenacji prowadzi się w temperaturze od 20 do 45°C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL413209A PL228517B1 (pl) | 2015-07-21 | 2015-07-21 | Sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3- on-17-olu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL413209A PL228517B1 (pl) | 2015-07-21 | 2015-07-21 | Sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3- on-17-olu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL413209A1 PL413209A1 (pl) | 2017-01-30 |
| PL228517B1 true PL228517B1 (pl) | 2018-04-30 |
Family
ID=57867712
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL413209A PL228517B1 (pl) | 2015-07-21 | 2015-07-21 | Sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3- on-17-olu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL228517B1 (pl) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL441592A1 (pl) * | 2022-06-29 | 2024-01-03 | Instytut Katalizy I Fizykochemii Powierzchni Im. Jerzego Habera Polskiej Akademii Nauk | Odwodorniona pochodna dipterokarpolu, sposób jej wytwarzania na drodze enzymatycznej oraz zastosowanie |
-
2015
- 2015-07-21 PL PL413209A patent/PL228517B1/pl unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL441592A1 (pl) * | 2022-06-29 | 2024-01-03 | Instytut Katalizy I Fizykochemii Powierzchni Im. Jerzego Habera Polskiej Akademii Nauk | Odwodorniona pochodna dipterokarpolu, sposób jej wytwarzania na drodze enzymatycznej oraz zastosowanie |
| PL248345B1 (pl) * | 2022-06-29 | 2025-12-01 | Inst Katalizy I Fizykochemii Powierzchni Im Jerzego Habera Polskiej Akademii Nauk | Odwodorniona pochodna dipterokarpolu, sposób jej wytwarzania na drodze enzymatycznej oraz zastosowanie |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL413209A1 (pl) | 2017-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lin et al. | Regiospecific chlorination of (S)-β-tyrosyl-S-carrier protein catalyzed by SgcC3 in the biosynthesis of the enediyne antitumor antibiotic C-1027 | |
| CN113493756B (zh) | 一种基因工程菌及其应用 | |
| Girhard et al. | Cytochrome P450 reductase from Candida apicola: versatile redox partner for bacterial P450s | |
| JP2020517251A (ja) | コリネバクテリウムグルタミクムを用いた３’−フコシルラクトースの生産方法 | |
| JP7364611B2 (ja) | ステロイドの２１－ヒドロキシル化 | |
| EP2130907B1 (en) | Transformed strain derived from strain deficient in multidrug efflux protein, and bioconversion method using the same | |
| CN107281204A (zh) | 一种非对称的1，2，4，5‑四嗪分子的应用 | |
| US20060211095A1 (en) | Process for the fermentative production of S-adenosylmethionine | |
| JP7072809B2 (ja) | 組換え微生物、その製造方法及び補酵素ｑ１０の生産における使用 | |
| CN112094797A (zh) | 基因工程菌及其制备9α,22-二羟基-23,24-双降胆甾-4-烯-3-酮的应用 | |
| PL228517B1 (pl) | Sposób wytwarzania propionianu androst-1,4-dien-3- on-17-olu | |
| KR100256025B1 (ko) | 스테로이드를 변환시키기 위한 다중유전자 시스템의 제조에 유용한 발현 카세트 | |
| CN114752572A (zh) | 甲酸脱氢酶突变体及其应用 | |
| CN108138126A (zh) | 一种分枝杆菌基因工程菌及其在制备甾体化合物中的应用 | |
| EP2141236A1 (en) | Process for production of lipstatin and microorganisms therefore | |
| PL228071B1 (pl) | Sposób wytwarzania 17a -metyloandrost -1,4 -dien -3-on -17 -olu | |
| PL228070B1 (pl) | Sposób wytwarzania octanu androst -1,4,6 -trien -3-on -17 -olu | |
| Tiwari et al. | pH-rate profiles of L-arabinitol 4-dehydrogenase from Hypocrea jecorina and its application in L-xylulose production | |
| EP0340878A1 (en) | Process for the biochemical oxidation of steroids and genetically engineered cells to be used therefor | |
| KR102747996B1 (ko) | 7-Keto-LCA에서 우르소데옥시콜산으로의 전환율을 증진시키는 루미노코쿠스 나버스 균주 유래 7-beta-HSDH의 변이체 및 이를 이용한 우르소데옥시콜산 생산방법 | |
| TW200406419A (en) | 5-Androsten-3 β- ol steroid intermediates and processes for their preparation | |
| CN115349012B (zh) | 用于进行提高谷氨酰胺生产力的转化的重组载体和使用其的菌株 | |
| CN108690836B (zh) | 一种环己酮单加氧酶及其在合成拉唑中的应用 | |
| KR101282331B1 (ko) | 신규한 라이보스-6-인산 이성화효소 또는 그 돌연변이체에 의한 알로스 생산 | |
| PL241477B1 (pl) | Sposób wytwarzania (25R)-spirosta-1,4-dien-3-onu z diosgenonu |