PL228509B1 - Sposób otrzymywania 6-acetamidoflawonu - Google Patents

Description

RZECZPOSPOLITA

POLSKA

(12)OPIS PATENTOWY ₍i₉₎PL ₍u)228509 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 414934 (51) Int.CI.

C12P 13/02 (2006.01) C12P 17/06 (2006.01) C12R 1/01 (2006.01)

Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia: 24.11.2015 (54)

Sposób otrzymywania 6-acetamidoflawonu

	(73) Uprawniony z patentu: UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCŁAWIU, Wrocław, PL
(43) Zgłoszenie ogłoszono:
05.06.2017 BUP 12/17	(72) Twórca(y) wynalazku: MONIKA STOMPOR, Trębowiec Duży, PL MIROSŁAW ANIOŁ, Wrocław, PL
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono:
30.04.2018 WUP 04/18	(74) Pełnomocnik:
	rzecz, pat. Anna Olszewska

σ>

m oo

CM

CM

Q_

PL 228 509 B1

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania 6-acetamidoflawonu o wzorze 2 przedstawionym na rysunku.

Sposób, według wynalazku może znaleźć zastosowanie w przemyśle chemicznym i farmaceutycznym do wytwarzania naturalnych związków flawonoidowych, wykazujących działanie przeciwnowotworowe.

Znane są sposoby otrzymywania 6-acetamidoflawonu na drodze syntezy chemicznej (Casano G., Dumetre A., Pannecouque C., Hutter S., Azas N., Robin M., Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2010, 18, 60126023.; Agrawal N. N., Soni P. A. Indian Journal of Chemistry, 2005, 44B, 2601-2603; Simon L, Srinivasan K. K., Rao M., Kumar N., Reddy N., Biswas S., Moorkoth S. International Journal of Pharmaceutical Chemistry, 2015, 241-246, doi: 10.7439/ijpc).

W dostępnej literaturze nie znaleziono doniesień o sposobie otrzymywania 6-acetamidoflawonu z udziałem szczepu bakterii z rodzaju Rhodococcus.

Istota wynalazku polega na tym, że, reakcję wymiany grupy aminowej na grupę acetamidową substratu prowadzi się za pomocą systemu enzymatycznego szczepu bakterii z rodzaju Rhodococcus przy czym substrat, jakim jest 6-aminoflawon, dodaje się po upływie 12-96 godzin a reakcję prowadzi się w temperaturze 10-44°C. Mieszaninę transformacyjną ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, ekstrakt osusza się za pomocą środka suszącego i odparowuje rozpuszczalnik oraz oczyszcza chromatograficznie.

Korzystnie jest, gdy szczepem jest Rhodococcus sp. DSM 364.

Korzystnie jest, gdy substrat dodaje się po upływie 72 godzin.

Korzystnie także jest, gdy proces redukcji prowadzi się wodną kulturą, przy ciągłym mieszaniu, w temperaturze 15-34°C.

Dodatkowo korzystnie jest, gdy rozpuszczalnikiem organicznym jest octan etylu.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w komórkach bakterii z rodzaju Rhodococcus następuje reakcja wymiany grupy aminowej substratu na grupę acetamidową, w wyniku czego otrzymuje się 6-acetamidoflawon.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie 6-acetamidoflawonu jako głównego produktu reakcji, z całkowitą wydajnością izolowaną na poziomie 86% przy zastosowaniu szczepu Rhodococcus w temperaturze pokojowej, przy ciśnieniu atmosferycznym, w środowisku wodn ym i w pH bliskim obojętnego.

Wynalazek jest bliżej objaśniony na przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d 1. Do kolby płaskodennej o pojemności 2000 cm³, w której znajduje się 250 cm³ sterylnej pożywki zawierającej 1% peptobaku, 0,2% ekstraktu drożdżowego, 0,2% hydrolizatu kazeiny, 0,6% chlorku sodu, 2% glukozy, wprowadza się szczep Rhodococcus sp. DSM 364. Po 48 godzinach wzrostu dodaje się 25 mg 6-aminoflawonu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm³ acetonu. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 72 godziny w temperaturze pokojowej. Następnie uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu, osusza za pomocą siarczan (VI) sodu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymuje się 64 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie na żelu krzemionkowym, używając jako eluentu mieszaniny heksan:aceton 5:1 v/v).

Na tej drodze otrzymuje się 21,5 mg produktu z 86%-ową wydajnością.

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi:

¹H NMR (600 MHz, DMSO-d_e) δ (ppm): 10,27 (1H, s, NH), 8,34 (1H, d, J = 2,6 Hz, H-5), 8,09 (2H, ddd, J = 9,5 Hz, J= 7,8 Hz, J = 1,2 Hz, H-2', H-6'), 7,96 (1H, dd, J = 2,6 Hz, J = 9,0 Hz, H-7), 7,76 (1H, d, J = 9,0 Hz, H-8), 7,62-7,57 (3H, m, H-3', H-4', H-5'), 7,01 (1H, s, H-3), 2,09 (3H, s, -CH3).

HR ESI-MS m/z: 278,0818 [M-H]+

UV (MeOH) λ: 300.3; 269,6; 201,4 nm.

Claims (6)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Sposób otrzymywania 6-acetamidoflawonu, o wzorze 2, na drodze transformacji mikrobiologicznej, w którym jako substrat stosuje się 6-aminoflawon, znamienny tym, że reakcję wymiany grupy aminowej na grupę acetamidową prowadzi się za pomocą systemu enzymatycznego

   PL 228 509 Β1 szczepu bakterii z rodzaju Rhodococcus, przy czym substrat, jakim jest 6-aminoflawon o wzorze 1, dodaje się po upływie 24-96 godzin a reakcję prowadzi się w temperaturze 10-44°C, po czym mieszaninę transformacyjną ekstrahuje się rozpuszczalnikiem organicznym niemieszającym się z wodą, po czym ekstrakt osusza się za pomocą środka suszącego, odparowuje rozpuszczalnik i tak powstały surowy produkt, oczyszcza się chromatograficznie.
2. 2. Sposób, według zastrz 1, znamienny tym, że reakcję wymiany grupy aminowej na grupę acetamidową prowadzi się za pomocą szczepu Rhodococcus sp DSM 364.
3. 3. Sposób, według zastrz 1, znamienny tym, że substrat dodaje się po upływie 48 godzin.
4. 4. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że proces wymiany grupy aminowej na grupę acetamidową prowadzi się wodną kulturą, przy ciągłym mieszaniu.
5. 5. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że proces wymiany grupy aminowej na grupę acetamidową prowadzi się w temperaturze 15-34°C.
6. 6. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że rozpuszczalnikiem organicznym jest octan etylu.