PL213595B1 - Tkanina, zwlaszcza do wytwarzania opatrunków - Google Patents
Tkanina, zwlaszcza do wytwarzania opatrunkówInfo
- Publication number
- PL213595B1 PL213595B1 PL386185A PL38618508A PL213595B1 PL 213595 B1 PL213595 B1 PL 213595B1 PL 386185 A PL386185 A PL 386185A PL 38618508 A PL38618508 A PL 38618508A PL 213595 B1 PL213595 B1 PL 213595B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- fabric
- flax
- polynucleotide encoding
- construct
- chalcone
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 239000004744 fabric Substances 0.000 title claims description 36
- 235000004431 Linum usitatissimum Nutrition 0.000 claims abstract description 37
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims abstract description 37
- 241000208202 Linaceae Species 0.000 claims abstract description 35
- 108010004539 Chalcone isomerase Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 108010060641 flavanone synthetase Proteins 0.000 claims abstract description 24
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 17
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 claims abstract description 14
- YEDFEBOUHSBQBT-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroflavon-3-ol Chemical compound O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)C1C1=CC=CC=C1 YEDFEBOUHSBQBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 16
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 16
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 16
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 14
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 10
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 claims description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 15
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 abstract description 14
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 abstract description 14
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 abstract description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 13
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 abstract description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 239000004753 textile Substances 0.000 abstract 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 36
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 25
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 25
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 24
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 16
- 229930015704 phenylpropanoid Natural products 0.000 description 14
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 11
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 11
- -1 sinapic Chemical class 0.000 description 11
- 229930013686 lignan Natural products 0.000 description 10
- 235000009408 lignans Nutrition 0.000 description 10
- 150000005692 lignans Chemical class 0.000 description 10
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 7
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 7
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 7
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 7
- 150000002995 phenylpropanoid derivatives Chemical class 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 235000004426 flaxseed Nutrition 0.000 description 5
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 4
- 240000006240 Linum usitatissimum Species 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 4
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- HUJXHFRXWWGYQH-UHFFFAOYSA-O sinapine Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(=O)OCC[N+](C)(C)C)=CC(OC)=C1O HUJXHFRXWWGYQH-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 3
- 101710202365 Napin Proteins 0.000 description 3
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 3
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- 230000003244 pro-oxidative effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 3
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 3
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 208000018380 Chemical injury Diseases 0.000 description 2
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N aldehydo-D-galacturonic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 description 2
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 description 2
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 description 2
- 150000004636 anthocyanins Chemical class 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- MKEJTKXMLIOTOD-NAXRMXIQSA-N (2E,4E,6Z,8E)-9-(3,3-difluoro-2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)-3,7-dimethylnona-2,4,6,8-tetraenoic acid Chemical compound C\C(\C=C\C1=C(C)C(F)(F)CCC1(C)C)=C\C=C\C(\C)=C\C(O)=O MKEJTKXMLIOTOD-NAXRMXIQSA-N 0.000 description 1
- MJYQFWSXKFLTAY-OVEQLNGDSA-N (2r,3r)-2,3-bis[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl]butane-1,4-diol;(2r,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O.C1=C(O)C(OC)=CC(C[C@@H](CO)[C@H](CO)CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 MJYQFWSXKFLTAY-OVEQLNGDSA-N 0.000 description 1
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- 241000609240 Ambelania acida Species 0.000 description 1
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 1
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N Chalcone Natural products C=1C=CC=CC=1C(=O)C=CC1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N D-Octopin Natural products OC(=O)C(C)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N IMXSCCDUAFEIOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMXSCCDUAFEIOE-RITPCOANSA-N D-octopine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H](C)[NH2+][C@H](C([O-])=O)CCCNC(N)=[NH2+] IMXSCCDUAFEIOE-RITPCOANSA-N 0.000 description 1
- 108010066133 D-octopine dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 1
- 101100288095 Klebsiella pneumoniae neo gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 101150106031 TRI gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000010905 bagasse Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 1
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 235000005513 chalcones Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 101150020935 dfrA gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930003949 flavanone Natural products 0.000 description 1
- 150000002208 flavanones Chemical class 0.000 description 1
- 235000011981 flavanones Nutrition 0.000 description 1
- HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N flavonol Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002216 flavonol derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011957 flavonols Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000011505 plaster Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000007348 radical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000019149 tocopherols Nutrition 0.000 description 1
- DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N trans-chalcone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- QUEDXNHFTDJVIY-UHFFFAOYSA-N γ-tocopherol Chemical class OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 QUEDXNHFTDJVIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
- A61L15/34—Oils, fats, waxes or natural resins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
- A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
- A61L15/38—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest tkanina do opatrunków zawierająca zmodyfikowany genetycznie len oraz sposób wytwarzania opatrunków. Wynalazek znajduje zastosowanie w medycynie.
Uszkodzeniom ciała powstającym w wyniku urazów mechanicznych, fizycznych i chemicznych towarzyszy zaburzenie równowagi pro- i antyoksydacyjnej w komórkach skutkujące nadmiernym gromadzeniem się reaktywnych form tlenu (RFT) i w konsekwencji stresem oksydacyjnym. Nadmiar reaktywnych form tlenu jest przyczyną wielu chorób. RFT reagują niespecyficznie ze składnikami komórek, uszkadzając je oraz modyfikując, co prowadzi do powstania wolnych rodników substancji organicznych białek, lipidów, kwasów nukleinowych i cukrowców. Pierwszym celem ataku RFT są lipidy oraz białka błonowe, co w efekcie prowadzi do peroksydacji lipidów. RFT powodują defekty w komórkach, przyspieszenie procesów starzenia się oraz zakłócenia produkcji energii (ATP) co jest wyjątkowo niebezpieczne w przypadku komórek układu nerwowego oraz mięśniowego. Przypisuje się im rolę sprawczą w procesie starzenia, chorobach serca, nowotworach, chorobach degeneratywnych jak katarakta, stwardnienie rozsiane. Szczególnie niebezpiecznym procesem jest peroksydacja lipidów, ponieważ nie kończy się utlenieniem pierwszego składnika, lecz dochodzi do reakcji łańcuchowej, co w efekcie prowadzi do zmniejszenia aktywności różnych białek błonowych, a tym samym powodując zmiany przepuszczalności błon i nawet zniszczenie całej komórki. Dlatego też, do miejsc uszkodzonych i akumulujących RFT należy dostarczyć substancje neutralizujące (antyoksydanty) ich niszczące działanie. Antyoksydanty mają charakter enzymatyczny (dysmutaza ponadtlenkowa, katalaza, peroksydaza) i nieenzymatyczny (ferrytyna, flawonoidy, glutation, karotenoidy, kwas askorbinowy, tokoferole, transferyna). Zadaniem antyoksydantów (przeciwutleniaczy) jest utrzymanie homeostazy procesów pro- i antyoksydacyjnych. W uszkodzonych komórkach zazwyczaj aktywność enzymatycznych elementów bariery antyoksydacyjnej jest niewystarczająca, pozostaje zatem działanie takich związków jak niskocząsteczkowe antyoksydanty. Wśród naturalnych antyoksydantów największą grupę stanowią flawonoidy, a wśród nich, grupą o najsilniejszych takich właściwościach są katechiny oraz kwercetyna.
W dotychczasowym postępowaniu miejsca zranione są przykrywane jałowymi kompresami z gazy bawełnianej. Gaza bawełniana jednak jest czystą celulozą nie posiadającą znaczenia bioaktywnego koniecznego do zapobiegania reakcjom wolnorodnikowym i nie wpływa leczniczo na opatrywane nią uszkodzenia ciała. Ze stanu techniki wynika więc potrzeba dostarczenia materiału i sposobu zabezpieczenia i jednoczesnego wspomagania leczenia uszkodzeń ciała w wyniku działania wymienionych czynników wiodących do zaburzenia równowagi pro- i antyoksydacyjnej w komórkach i skutkującej nadmiernym gromadzeniem się reaktywnych form tlenu (RFT) i w konsekwencji stresem oksydacyjnym. Wspomnianą potrzebę zaspokaja niniejszy wynalazek.
Przedmiotem wynalazku jest tkanina charakteryzująca się tym, że zawiera zmodyfikowane włókno lniane otrzymane z lnu posiadającego komórki zawierające polinukleotyd kodujący syntazę chalkonu (CHS), polinukleotyd kodujący izomerazę chalkonu (CHI) i polinukleotyd kodujący reduktazę dihydroflawonolu (DFR), korzystnie komórki transformowane wielogenowym konstruktem kodującym syntazę chalkonu (CHS), izomerazę chalkonu (CHI) i reduktazę dihydroflawonolu (DFR), przy czym włókno lniane zawiera emulsję oleju lnianego lub ekstrakt z wytłoków nasion. Korzystnie polinukleotyd kodujący syntazę chalkonu zawiera sekw. nr 1, polinukleotyd kodujący izomerazę chalkonu zawiera sekw. nr 2, polinukleotyd kodujący reduktazę dihydroflawonolu zawiera sekw. nr 3.
Korzystnie tkanina zawiera włókno lniane otrzymane z lnu posiadającego komórki zawierające polinukleotyd kodujący transferazę glukozową (5UGT), korzystnie komórki transformowane jednogenowym konstruktem kodującym transferazę glukozową.
Korzystnie, polinukleotyd kodujący transferazę glukozową zawiera sekw. nr 4, natomiast wielogenowy konstrukt zawiera sekw. nr 5.
Wynalazek wykorzystuje związki antyoksydacyjne oraz ich pochodne do neutralizacji RFT w uszkodzonych tkankach. Związki te są dostarczane do uszkodzonych tkanek za pośrednictwem tkaniny wykonanej z włókna lnianego pochodzącego z roślin transgenicznych, w których zwiększoną syntezę antyoksydantów w nasionach i włóknach uzyskano metodami inżynierii genetycznej. Tkanina do opatrunków według wynalazku wykonana jest z włókna lnianego pochodzącego z lnu oleistego odmiany Linola niemodyfikowanego i modyfikowanego metodami inżynierii genetycznej. Włókna lniane zawierają około 70% celulozy natomiast pozostałość stanowią ligniny, hemicelulozy i pektyny. Ligniny są polimerami kwasów fenolowych takich jak kwas synapinowy, ferulowy, koniferylowy i kumarowy. Dimerami lignin są Iignany i niewielką ich ilość posiadają włókna lniane. Pochodne lignin są składowymi
PL 213 595 B1 większego szlaku metabolicznego, dobrze znanego, o nazwie szlaku fenylopropanoidowego. Wszystkie pochodne szlaku fenylopropanoidowego posiadają silne właściwości przeciwutleniające likwidujące wolne rodniki. Zwiększenie zawartości związków fenylopropanoidowych we włóknach lnianych i innych częściach lnu (nasiona) można uzyskać metodami inżynierii genetycznej na co najmniej dwa sposoby, przez nadekspresję genów syntezy tych związków lub ich glikozylacji, która zmniejsza ich reaktywność i zwiększa rozpuszczalność w komórce a przez to zwiększa ich akumulację.
W pierwszym ze sposobów do lnu wprowadza się trzy geny syntezy flawonoidów, które należą do szlaku fenylopropanoidowego, a mianowicie syntazę chalkonu (CHS), izomerazę chalkonu (CHI) i reduktazę dihydroflawonolu (DFR) w orientacji sensowej i pod kontrolą promotora. Trzygenowy konstrukt wytwarza się przez wprowadzenie trzech DNA kodujących enzymy CHS, CHI i DFRA w zmodyfikowany wektor binarny.
Zwiększenie poziomu enzymów spowodowało zgodnie z oczekiwaniem zwiększenie syntezy antocjanów. Nieoczekiwanie jednak uzyskano wzmocnienie akumulacji innych jeszcze związków ze szlaku syntezy fenylopropanoidów, których biosynteza nie jest bezpośrednio związana z manipulowanymi enzymami. Pośród tych nieoczekiwanych związków są fenolokwasy o bardzo silnych właściwościach przeciwutleniających oraz lignany.
Przeanalizowano zawartość wybranych związków fenylopropanoidowych w łodygach stanowiących źródło włókna i w nasionach roślin transgenicznych W92 z nadprodukcją trzech enzymów CHS, CHI i DFR. Zarówno w łodygach jak i w nasionach roślin transgenicznych z nadekspresją genów syntezy flawonoidów oznaczono zwiększoną ilość antocjanów, flawanonów i flawonoli (kempferol, kwercetyna), wszystkie oznaczone związki należą do silnych antyoksydantów. W obu przypadkach odnotowano znaczną nadprodukcję związków fenylopropanoidowych w roślinach transgenicznych w porównaniu z kontrolą (Fig. 2 i 3.)
Wykonano również oznaczenia innych ważnych z punktu widzenia medycznego antyoksydantów takich jak ligniny i kwasy fenolowe (Fig. 4 i 5). Nieoczekiwanie nadekspresja trzech genów, kluczowych dla syntezy flawonoidów spowodowała dramatycznie zwiększoną akumulację kwasów fenolowych i lignanów w nasionach pochodzących z roślin transgenicznych. Zwiększeniu ilości związków fenylopropanoidowych towarzyszył wzrost potencjału antyoksydacyjnego (zmniejszenie IC50) zarówno łodyg, które są źródłem włókna jak i nasion.
Nieoczekiwanie wzrostowi zawartości związków fenylopropanoidowych towarzyszy zmniejszenie zawartości pektyn. Zmniejszenie ilości pektyn jest korzystne ponieważ ogranicza czas potrzebny do wyroszenia słomy i poprawia jakość włókna.
Według drugiego sposobu wzbogacenia nasion roślin lnu w antyoksydanty można dokonać również przez wprowadzenie jednego genu kodującego transferazę glukozową kontrolującą wiele gałęzi szlaku fenylopropanoidowego przez ich modyfikację zwiększającą ich rozpuszczalność w komórkach i zmniejszającą ich chemiczną reaktywność. Do transformacji roślin użyto tego samego wektora jak dla CHS, CHI i DFR. Wprowadzony gen transferazy glukozowej znajdował się pod kontrolą swoistego dla nasion promotora napinowego dobrze znanego specjalistom.
Nasiona akumulowały głównie kempferol i kwercetynę w formie glukozydów, których było 2-3 razy więcej w roślinach transgenicznych niż w kontroli. Nieoczekiwanie jednak związków tych w roślinach transgenicznych z nadekspresją transferazy glukozowej było znacznie więcej niż w roślinach transgenicznych z nadekspresją trzech genów syntezy flawonoidów. Nieoczekiwanie również pojemność antyoksydacyjna uległa zmniejszeniu (wzrost parametru IC50) w roślinach transgenicznych akumulujących glukozowe pochodne fenylopropanoidów. Generalne znaczenie glukozylacji polega na tym, że glukozylowane związki są lepiej rozpuszczalne w roztworach wodnych i posiadają zmniejszoną chemiczną reaktywność. Mogą być zatem akumulowane w komórce w dużych ilościach nie wpływając na inne procesy komórkowe a w miarę potrzeby są deglukozylowane przy pomocy komórkowych glikozydaz. Akumulacja nieglukozowych pochodnych flawonoidów ze względu na wysoką reaktywność może mieć negatywny wpływ na antyoksydacyjny status roślin oraz na ich produktywność. Nieoczekiwanym i korzystnym skutkiem nadprodukcji transferazy glukozowej była zwiększona (około 2-krotna) produktywność nasion przez rośliny transgeniczne (Tabela 1).
PL 213 595 B1
T a b e l a 1. Wydajność produkcyjna roślin kontrolnych (C) i transgenicznych (numerowane)a
| Linia | Waga nasion na roślinę (g) | Waga nasion/ koszyczek (mg) | Ilość nasion/koszyczek | Średnia waga nasiona (mg) |
| C | *4.28 ± 0.31 | 42.04 ± 2.92 | 8.00 ± 0.40 | 5.26 ± 0.28 |
| U2 | *8.03 ± 1.01 | 38.23 ± 4.82 | 7.63 ± 0.74 | 5.01 ± 0.29 |
| U3 | *8.88 ± 0.78 | 45.77 ± 4.03 | 8.21 ± 0.57 | 5.58 ± 0.25 |
| U4 | *7.99 ± 0.51 | 44.87 ± 2.89 | 8.22 ± 0.57 | 5.46 ± 0.18 |
| U5 | *8.22 ± 1.25 | 42.15 ± 6.43 | 7.19 ± 1.03 | *5.87 ± 0.18 |
| U14 | *10.29 ± 0.72 | 47.87 ± 3.35 | 8.42 ± 0.64 | 5.69 ± 0.26 |
a Średnia wartość ±SD, P < 0.05; * statystycznie istotne
Nieoczekiwanie również, chociaż podobnie do roślin z nadekspresją trzech genów, zawartość lignanów (SDG) oraz kwasów fenolowych dramatycznie zwiększyła się w nasionach roślin transgenicznych co jest korzystnym z medycznego punktu widzenia. Nieoczekiwanie, ale podobnie jak w przypadku nadekspresji CHS/CHI/DFR, zmniejszyła się zawartość pektyn w łodygach roślin transgenicznych z nadekspresją transferazy glukozowej co jest korzystnym dla uzyskania dobrej jakości włókna w procesie roszenia.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie tkaniny według wynalazku do wytwarzania materiału opatrunkowego.
Opatrunek wykonuje się ze zmodyfikowanej tkaniny otrzymanej z lnu posiadającego genetycznie zmodyfikowane komórki zawierające trzygenowy konstrukt zawierający cDNA kodujący enzymy syntezy flawonoidów, a mianowicie syntazę chalkonu (CHS), izomerazę chalkonu (CHI) i reduktazę dihydroflawonolu (DFR) lub zawierające jednogenowy konstrukt posiadający cDNA kodujący transferazę glukozową. Korzystnie, materiał opatrunkowy przygotowuje się z tkaniny lnianej zawierającej emulsję oleju lnianego.
Wzmocnienie aktywności antyoksydacyjnej sterylnej tkaniny lnianej według wynalazku uzyskuje się przez zwilżenie emulsją oleju lnianego pochodzącego z nasion roślin o wzmożonej syntezie fenolopropanoidów wytworzonych przy użyciu trzygenowego lub jednogenowego konstruktu.
W korzystnej realizacji wynalazku materiał opatrunkowy przygotowuje się z tkaniny lnianej zawierającej ekstrakt z wytłoków nasion.
Wzmocnienie aktywności antyoksydacyjnej sterylnej tkaniny lnianej uzyskuje się przez zwilżenie ekstraktem z wytłoków nasion.
Opatrunek wykonuje się z tkaniny suchej lub tkaniny zwilżonej emulsją oleju lnianego lub zwilżonej ekstraktem z wytłoków nasion (Fig. 13). Jednowarstwowa sterylna gaza przylega bezpośrednio do miejsca zranionego; na gazę nakłada się od 1-3 warstw tkaniny lnianej, na który nakłada się kilka warstw gazy zmoczonej sterylną lub co najmniej przegotowaną wodą lub płynem fizjologicznym. Całość mocuje się plastrem samoprzylepnym lub bandażem.
Sterylna tkanina według wynalazku umieszczona w środowisku wodnym uwalnia antyoksydanty a w tym lignany, pochodne kumarowe, flawonoidy, proantocjany i inne związki fenylopropanoidowe.
Korzystnie włókien lnianych wykorzystywanych do wytwarzania przędzy nie poddaje się procesom chemicznym, które uwalniają związki o aktywności antyoksydacyjnej, takim jak przykładowo ługowanie lub bielenie. Nieoczekiwanie okazało się bowiem, że postępowanie technologiczne polegające na ługowaniu włókna słabymi alkaliami usuwa związki o działaniu przeciwutleniającym (lignany, kwasy fenolowe). Zatem włókna stosowane do wytworzenia przędzy, która stanowi podstawę opatrunku nie podlegały ługowaniu, bieleniu ani innym procesom chemicznym uwalniającym związki o aktywności antyoksydacyjnej.
Wynalazek dostarcza nową tkaninę lnianą i sposób przygotowania opatrunku, który dzięki zastosowaniu zmodyfikowanego genetycznie lnu umożliwia leczenie uszkodzeń ciała dzięki wydzielaniu związków przeciwutleniających zapobiegających stresowi oksydacyjnemu i w rezultacie śmierci koPL 213 595 B1 mórki. Tkanina sucha lub nasączona olejem lnianym lub nasączona ekstraktem z wytłoków nasion lnu z roślin modyfikowanych jest przeznaczona do uzupełnienia opatrunków stosowanych do bezpośredniego opatrywania ran wynikających z urazów mechanicznych, fizycznych, chemicznych, zabiegów chirurgicznych i innych zabiegów oraz uszkodzeń wymagających stosowania sterylnych kompresów.
Przedmiot wynalazku uwidoczniono na rysunkach, na których fig. 1 przedstawia schemat szlaku fenylopropanoidowego.
Fig. 2 przedstawia zawartość wybranych związków fenylopropanoidowych w łodygach roślin kontrolnych stanowiących źródło włókna (C) i transgenicznych (numerowane).
Fig. 3 przedstawia zawartość flawonoidów w nasionach roślin kontrolnych lnu (C) i roślinach transgenicznych.
Fig. 4 przedstawia porównawczą zawartość lignanów (SDG) oraz fenolokwasów (ferulowy, synapinowy i kumarowy) w nasionach roślin kontrolnych (linia czarna) i trzech liniach transgenicznych (linie kolorowe) nadekspresjonujących enzymy szlaku fenylopropanoidowego (CHS, CHI, DFR). Dramatyczny wzrost ilości analizowanych związków można zauważyć we wszystkich modyfikowanych roślinach.
Fig. 5 przedstawia potencjał antyoksydacyjny ekstraktów łodyg i nasion mierzony parametrem IC50 w Iuminometrze i w postępowaniu dobrze znanego specjalistom.
Fig. 6 przedstawia skrawki łodyg lnu (powiększenie 20-krotne) niemodyfikowanego (C) i modyfikowanego (W) barwione przeciwciałami na obecność wiązań glikozydowych (JIM 7) oraz na obecność kwasu galakturonowego (LM 5) charakterystycznych dla pektyn. Barwienie wykonano standardową techniką immunodetekcji dobrze znaną specjalistom.
Fig. 7 przedstawia zawartość flawonoidów oraz wielkość potencjału antyoksydacyjnego (IC50) w nasionach z roślin kontrolnych (C) i nadprodukujących transferazę glukozową (numerowane).
Na fig. 8 przedstawiono porównawczą zawartość lignanów (SDG) oraz fenolokwasów (ferulowy, synapinowy i kumarowy) w nasionach roślin kontrolnych (linia czarna) i dwóch liniach transgenicznych (linie kolorowe) nadekspresjonujących transferazę glukozową. Dramatyczny wzrost ilości analizowanych związków można zauważyć we wszystkich modyfikowanych roślinach.
Fig. 9 przedstawia skrawki łodyg lnu (powiększenie 10- i 20-krotne) niemodyfikowanego (C) i modyfikowanego (U) barwione przeciwciałami na obecność wiązań glikozydowych (JIM 7) oraz na obecność kwasu galakturonowego (LM 5) charakterystycznych dla pektyn. Barwienie wykonano standardową techniką immunodetekcji dobrze znaną specjalistom.
Fig. 10 przedstawia włókna ekstrahowane NaOH uwalniają kwasy fenolowe i SDG.
Fig. 11 przedstawia oznaczenia właściwości antyoksydacyjnych włókna w układzie komórkowym metodą immunodetekcji oraz barwieniem błękitem trepanu.
Fig. 12 przedstawia konstrukcję genową użytą do transformacji lnu UGT/NAP. NAP- promotor specyficzny dla nasion; OCS - terminator syntazy oktopinowej.
Fig. 13 przedstawia schemat opatrunku z tamponem lnianym suchym lub z emulsją oleju lub warstwą wytłoków.
P r z y k ł a d 1
Przygotowanie konstruktu wielogenowego
Do komórki lnu wprowadza się konstrukt wielogenowy W92 (sekw. nr 5) zawierający cDNA trzech genów kodujących enzymy syntezy flawonoidów, a mianowicie syntazę chalkonu (CHS) - sekw. nr 1, izomerazę chalkonu (CHI) - sekw. nr 2, reduktazę dihydroflawonolu (DFR) - sekw. nr 3, w orientacji sensowej.
Geny te zostały umieszczone pod kontrolą wirusowego wirusowego promotora 35 S w wektorze binarnym.
Przygotowanie konstruktu UGT/NAP
Do utworzenia konstruktu zastosowanego do agrotransformacji wykorzystano cDNA (klon Ssci 17) o długości 1617 pz, otrzymane od prof. Tadeusza Rorata z Instytutu Genetyki Roślin, Poznań (Rorat i wsp. 1998). cDNA genu transferazy glukozowej (5UGT) - sekw. nr 4 (EMBL/GenBank, nr. AY033489) wklonowano do wektora pBinAR/NAP w miejsca BamHI/Sall. Powyższe cDNA wklonowano do wektora w orientacji sensowej pod kontrolą specyficznego dla nasion promotora napinowego, (NAP) i terminatora oktopinowego (OCS). Konstrukt jednogenowy zawierający gen kodujący 5UGT, wytworzono w oparciu o wcześniej przygotowany wektor binarny pBinAR/NAP. W wektorze binarnym znajdowała się kaseta genowa w skład, której wchodzą promotor napinowy, miejsce klonowania MCS oraz terminator z sygnałem poliadenylacji.
PL 213 595 B1
Wektor zawierał dodatkowo gen fosfotransferazy neomycynowej (nptll) warunkujący oporność na kanamycynę (Kanr).
Wprowadzenie konstruktów genowych do bakterii
Wprowadzenie do komórek roślinnych konstruktu wielogenowego lub jednogenowego dokonuje się przez inkubację (przez 2 dni w ciemności) liścieni i hypokotyli lnu z 50 μΙ kultury Agrobacterium tumefaciens zawierających wielogenowy lub jednogenowy konstrukt. Po inkubacji i odpłukaniu w sterylnej wodzie liścienie i hypokotyle przenosi się na stałe podłoże (pożywka indukująca kallus i zawierająca antybiotyk, jako marker selekcyjny, kanamycynę lub hygromycynę) w celu uzyskania niezróżnicowanej tkanki kallusowej. Uzyskaną tkankę kallusową hoduje się na podłożu regeneracyjnym (pożywka indukująca pęd i zawierająca kanamycynę lub hygromycynę) które stymuluje różnicowanie się komórek i uzyskuje się wykształcone łodygi. Otrzymane pędy hoduje się do osiągnięcia odpowiedniej wielkości i przenosi na podłoże indukujące tworzenie korzeni i nie zawierające antybiotyków, finalnie ukorzenione rośliny przenosi się do ziemi. Wbudowanie konstruktów do genomu lnu i stabilność ich ekspresji sprawdza się technikami PCR i poprzez PCR i Nothern blot z użyciem sond, które stanowiły radioaktywnie wyznakowane geny CHS, CHI i DFR, 5UGT.
Wpływ konstruktu na poziom antyoksydantów oceniono na podstawie analizy HPLC w której oceniano poziom flawonoidów oraz kwasów fenolowych. Charakterystykę uzyskanych roślin przedstawiono na figurach 2-11.
P r z y k ł a d 2
Tworzenie opatrunku lnianego
Z łodyg roślin transgenicznych wytworzonych z zastosowaniem konstruktu trzygenowego wydzielono włókno lniane. Włókna lniane uzyskano z roślin niemodyfikowanych i transgenicznych z nadekspresją trzech genów (CHS, CHI, DFR) metodą roszenia na sucho dobrze znaną specjalistom. Wyroszone włókna lniane poddano międleniu i mechanicznemu czyszczeniu w standardowym postępowaniu. W zwykłym procesie technologicznym na sucho z włókien uzyskano przędzę przez czesanie i skręcanie włókien. Na Fig. 11 przedstawiono analizę w wysokosprawnej chromatografii cieczowej (UPLC) ekstraktów (5% NaOH) włókien lnianych z roślin transgenicznych, jest to standardowa procedura oczyszczania włókna z pektyn, hemiceluloz i lignin.
Włókna stosowane do wytworzenia przędzy, która stanowi podstawę opatrunku nie podlegały ługowaniu, bieleniu ani innym procesom chemicznym uwalniającym związki o aktywności antyoksydacyjnej.
Z przędzy wytworzono tkaninę w zwykłym procesie technologicznym, w którym parametrami regulowanymi są gęstość tkaniny, grubość, szerokość i długość. Tkaninę bez dodatkowej obróbki przycina się do żądanych rozmiarów i sterylizuje na sucho w autoklawie.
Weryfikację właściwości antyoksydacyjnych włókien lnianych dokonano w badaniach in vitro na komórkach w hodowli.
Oznaczenia właściwości antyoksydacyjnych włókna w układzie komórkowym. Bioaktywną funkcję antyoksydantów włókna lnianego wyznaczano w układzie in vitro, w którym komórki fibroblastów chomika inkubowano w płynie hodowlanym z dodatkiem zmielonych włókien lnianych. W komórkach fibroblastów wywoływano apoptozę czyli genetycznie programowaną śmierć przez dodanie nadtlenku wodoru lub doksorubicyny do medium hodowlanego. W przypadku działania nadtlenkiem wodoru oznaczano w komórkach sposób dystrybucji aneksyny V jako uznanego markera apoptozy metodą immunodetekcji. W przypadku doksorubicyny zliczano komórki barwiące się błękitem trypanu czyli komórki obumierające. Obie techniki są powszechnie stosowane i dobrze znane specjalistom. Wyniki przedstawiono na Fig. 10.
W obu przypadkach indukcji apoptozy, a mianowicie nadtlenkiem wodoru i doksorubicyną widoczny jest pozytywny wpływ włókien, odnaleziono czterokrotnie mniej komórek martwych wtedy, gdy w medium hodowlanym znajdowały się włókna roślin transgenicznych wzbogaconych w antyoksydanty.
P r z y k ł a d 3
Tworzenia opatrunku lnianego.
Wzmocnienie aktywności antyoksydacyjnej sterylnej tkaniny wytworzonej jak w przykładzie 2 uzyskuje się przez zwilżenie emulsją oleju lnianego pochodzącego z nasion roślin o wzmożonej syntezie fenolopropanoidów wytworzonych przy użyciu trzygenowego Iub jednogenowego konstruktu.
Emulsję lnianą uzyskuje się w następujący sposób. Do 50 mg oleju lnianego dodaje się lecytyny sojowej do końcowego stężenia 1% oraz Tweenu 80 do stężenia 0.7%. Następnie po dodaniu 2 ml sterylnej wody zawierającej 2.25% glicerolu całość intensywnie zmieszano a następnie homogenizoPL 213 595 B1 wano przez 5 min. Mieszaninę rozbijano ultradźwiękami w sonikatorze Microson™ przez 10 min przy mocy 4 W.
Emulsję filtrowano przez filtr Acrodisc (0.45 um) w temperaturze pokojowej.
P r z y k ł a d 4
Tworzenia opatrunku lnianego.
Wzmocnienie aktywności antyoksydacyjnej sterylnej tkaniny wytworzonej jak w przykładzie 3 uzyskuje się przez zwilżenie ekstraktem z wytłoków nasion. Wytłoki nasion uzyskuje się przez wytłoczenie oleju na zimno w prasie hydraulicznej w standardowym postępowaniu. Analiza zawartości lignanów w oleju pokazuje, że tylko do 10% lignanów zawartych w ekstraktach nasion przechodzi do oleju. Pozostałe 90% lignanów znajduje się w wytłokach nasion.
Ekstrakt z wytłoków nasion lnianych uzyskuje się w następujący sposób. SDG i kwasy fenolowe uzyskuje się z wytłoków poprzez kilkukrotną (najczęściej trzykrotną) ekstrakcję 80% metanolem w temperaturze 80°C (1/10 w/v). Po odparowaniu metanolu ekstrakt poddaje się hydrolizie alkalicznej w 0,3 M NaOH przez okres 48 h w temperaturze pokojowej. Po zneutralizowaniu (6 M HCI) ekstrakt liofilizuje się i osad rozpuszcza się w sterylnej wodzie.
Opatrunek lniany tworzy się z tkaniny lnianej wytworzonej jak w przykładzie 3 i zwilżeniu wodnym roztworem pochodzącym z wytłoków.
PL 213 595 B1
Wykaz sekwencji <110> Szopa, Jan <120> Tkanina, zwłaszcza do wytwarzania opatrunków <130> PK/0653/RW/AR <160> 5 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 1170 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 1
| atggtgacag | tcgaggagta | tcgtaaggca | caacgtgctg | aaggtccagc | cactgtcatg | 60 |
| gccattggaa | cagccacacc | tacaaactgt | gttgatcaaa | gcacttaccc | tgattattat | 120 |
| tttcgtatca | ctaacagtga | gcacaagact | gatcttaagg | agaaatttaa | gcgcatgtgt | 180 |
| gaaaaatcaa | tgattaagaa | aaggtacatg | cacttaacag | aggaaatctt | gaaagagaat | 240 |
| cctagtatgt | gtgaatacat | ggcaccttct | cttgatgcta | ggcaagacat | agtggtggtt | 300 |
| gaagtgccca | aacttggcaa | agaggcagcc | caaaaggcta | tcaaggaatg | gggccagccc | 360 |
| aagtccaaaa | ttacccattt | ggtcttttgc | acaactagtg | gtgtggacat | gcctgggtgt | 420 |
| gactatcaac | tcactaagct | acttgggctt | cgtccatcgg | tcaagaggct | catgatgtac | 480 |
| caacaaggtt | gctttgctgg | tggcacggtt | cttcggttag | ccaaggactt | ggcggaaaac | 540 |
| aacaagggcg | ctcgagtcct | tgttgtttgt | tcagaaatca | ccgcggtcac | cttccgtggg | 600 |
| ccaaatgata | ctcatttgga | tagtttagtt | ggccaagccc | tttttggtga | tggggcaggc | 660 |
| gcgatcatta | taggttctga | tccaattcca | ggagtcgaga | ggcctttgtt | cgagctcgtt | 720 |
| tcagcagccc | aaactcttct | cccagatagc | catggtgcta | ttgatggcca | tctccgtgaa | 780 |
| gttgggctta | cattccactt | actcaaagat | gttcctgggc | tgatctcaaa | aaatattgag | 840 |
| aagagccttg | aggaagcatt | taaacctttg | ggcatttctg | attggaactc | tctattctgg | 900 |
| attgctcatc | caggtgggcc | tgcaattttg | gaccaagttg | aaataaagtt | gggcctaaag | 960 |
| cccgagaaac | ttaaggctac | aaggaatgtg | ttaagtgact | atggtaacat | gtcaagtgct | 1020 |
| tgtgtactgt | ttattttgga | tgaaatgaga | aaggcctcag | ccaaagaagg | tttaggaact | 1080 |
| actggtgaag | ggcttgagtg | gggtgttctt | tttggatttg | ggcctgggct | aacagttgag | 1140 |
| actgttgtcc | tccacagtgt | tgctacttaa | 1170 |
PL 213 595 B1 <210> 2 <211> 726 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 2
| atgtctcctc | cagtgtccgt | tactaaaatg | caggttgaga | attacgcttt | cgcaccgacc | 60 |
| gtgaaccctg | ctggttccac | caataccttg | ttccttgctg | gtgctgggca | tagaggtctg | 120 |
| gagatagaag | ggaagtttgt | taagtttacg | gcgataggtg | tgtatctaga | agagagtgct | 180 |
| attccttttc | tggccgaaaa | atggaaaggc | aaaacccccc | aggagttgac | tgactcggtc | 240 |
| gagttcttta | gggatgttgt | tacaggtcca | tttgagaaat | ttactcgagt | tactatgatc | 300 |
| ttgcccttga | cgggcaagca | gtactcggag | aaggtggcgg | agaattgtgt | tgcgcattgg | 360 |
| aaggggatag | gaacgtatac | tgatgatgag | ggtcgtgcca | ttgagaagtt | tctagatgtt | 420 |
| ttccggagtg | aaacttttcc | acctggtgct | tccatcatgt | ttactcaatc | acccctaggg | 480 |
| ttgttgacga | ttagcttcgc | taaagatgat | tcagtaactg | gcactgcgaa | tgctgttata | 540 |
| gagaacaagc | agttgtctga | agcagtgctg | gaatcaataa | ttgggaagca | tggagtttct | 600 |
| cctgcggcaa | agtgtagtgt | cgctgaaaga | gtagcggaac | tgctcaaaaa | gagctatgct | 660 |
| gaagaggcat | ctgtttttgg | aaaaccggag | accgagaaat | ctactattcc | agtgattgga | 720 |
| gtctag | 726 |
<210> 3 <211> 1122 <212> DNA <213> Arabidopsis thaliana <400> 3
| atgccccttc | acctccggtg | cagtgcgaca | gtttgcgtca | ctggagctgc | tggatttatt | 60 |
| ggctcttggc | ttgtcatgag | actcc ttgaa | cgcggttaca | atgttcacgc | tactgttcgt | 120 |
| gatcctgaga | acaagaagaa | ggtgaaacat | ctgctggaac | tgccaaaggc | tgatacgaac | 180 |
| ttaacactgt | tgaaagcgga | cttgacagta | gaaggaagct | ttgacgaggc | cattcaaggc | 240 |
| tgtcaaggag | tatttcatgt | agcaacacct | atggatttcg | agtccaaaga | ccctgagaat | 300 |
| gaagtaatca | agccaacagt | ccggggaatg | otaagcatca | ttgaatcatg | tgctaaagca | 360 |
| aacacagtga | agaggctggt | tttcacttca | tctgctggaa | ctctcgatgt | gcaagagcaa | 420 |
| caaaaacttt | tctatgacca | gaccagctgg | agcgacttgg | acttcatata | tgctaagaag | 480 |
| atgacaggat | ggatgtattt | tgcttccaag | atactggcag | agaaagocgc | aatggaagaa | 540 |
| gctaaaaaga | agaacattga | tttcattagc | atcataccac | cactggttgt | tggtccattc | 600 |
| atcacaccta | catttccccc | tagtttaatc | actgcccttt | cactaattac | tgggaatgaa | 660 |
| gctcattact | gcatcattaa | acaaggtcaa | tatgtgcatt | tggatgatct | ttgtgaggct | 720 |
| cacatattcc | tgtatgagca | ccccaaggca | gatggaagat | tcatttgctc | gtcccaccat | 780 |
| gctatcatct | acgatgtggc | taagatggtc | cgagagaaat | ggccagagta | ctatgttcct | 840 |
| actgagttta | aagggatcga | taaagacctg | ccagtggtgt | ctttttcatc | aaagaagctg | 900 |
| acagatatgg | gttttcagtt | caagtacact | ttggaggata | tgtataaagg | ggccatcgat | 960 |
| acttgtcgac | agaagcagct | gcttcccttt | tctacccgaa | gtgctgaaga | caatggacat | 1020 |
PL 213 595 B1
| aaccgagaag gttgcaaatc | ccattgccat ttctgctcaa | aactatgcaa gttgaagtct | gtggcaaaga ag | gaatgcacca | 1080 1122 | |
| atacagaaat | gttaagcaat | |||||
| <210> 4 | ||||||
| <211> 1617 | ||||||
| <212> DNA | ||||||
| <213> Arabidopsis thaliana | ||||||
| <400> 4 | ||||||
| gtcaaagatt | tctctcacac | aatactaaag | tctactttca | ttcatttgac | ctcgaacttt | 60 |
| gaacttaggt | tctattttaa | gtttgtgagt | gtaaaaatgg | tgcaacccca | tgtcctcttg | 120 |
| gtgacatttc | ccacacaagg | tcatatcaat | ccatctcttc | aatttgccaa | gaagctaatc | 180 |
| aaaatgggca | ttgaggtgac | attcaccact | agtgttttcg | cccatcgtcg | tatggcgaaa | 240 |
| accgcgactt | ccaccgcacc | caagggatta | aacttggcgg | cattctctga | cggatttgat | 300 |
| gatggtttca | agtctaacgt | ggatgattct | aaacgttaca | tgtcggagat | aagaagtcgt | 360 |
| gggtcccaaa | cattaaggga | tatcattctg | aagagttcag | acgagggacg | ccctgtcacg | 420 |
| tccctcgtct | acactcttct | gctaccttgg | gcagctgagg | tagcgcgtga | actccacatc | 480 |
| ccatccgcgt | tactatggat | tcaaccagca | actgtgctag | acatatacta | ctattacttc | 540 |
| aatggctatg | aggatgaaat | gaagtgtagc | tcaaatgatc | caaattggag | tatccaatta | 600 |
| ccaaggcttc | cattactaaa | aagccaagat | cttccatctt | ttttagtttc | atctagctca | 660 |
| aaagatgata | agtatagttt | tgctctacca | acatttaaag | agcaactaga | cacattagat | 720 |
| ggtgaagaaa | atccaaaggt | acttgtgaat | acatttgatg | cattagagct | agagccactc | 780 |
| aaagctattg | gaaaatacaa | tttaattgga | attggaccat | tgattccttc | atcattcttg | 840 |
| ggtggaaaag | attcattgga | atctcgattt | ggtggtgatc | tttttcaaaa | gtcaaatgat | 900 |
| gactacatgg | aatggttaaa | cacaaagcct | aaatcatcaa | ttgtttatat | ctcatttggg | 960 |
| agtctattga | atttatcaag | aaaccaaaag | gaggagattg | caaaagggtt | gatagagatt | 1020 |
| aaaaggccat | tcttatgggt | aataagagat | caagaaaata | taaaagaagt | agaaaaagaa | 1080 |
| gaagagaaat | taagttgcat | gatggaatta | gagaagcaag | ggaaaatagt | accatggtgt | 1140 |
| tcacaacttg | aagtcttaac | acatccatct | ttaggatgtt | ttgtctcgca | ctgtggatgg | 1200 |
| aattcgactc | tggagagcct | gtcatcaggt | gtacctgtgg | tggcatttcc | tcattggaca | 1260 |
| gatcaaggga | ctaatgcaaa | gtggattgaa | gatgtttgga | agacaggtgt | caggatgaga | 1320 |
| gtgaatgaag | atggtgtggt | tgagagtgaa | gagataaaaa | ggtgcataga | aattgtaatg | 1380 |
| gatggtggag | aaaaaggaga | agaaatgaga | aagaatgcac | aaaaatggaa | agaattggca | 1440 |
| agagaagctg | tgaaagaagg | tggatcttca | gaagtgaatc | taaaagcttt | tgttcaagaa | 1500 |
| gttggcaaaa | gttgttgaat | aattaaattt | cttgatgaga | aattgttttc | ctaattgtaa | 1560 |
| ttttcttctt | ttttttcaca | ataaaattaa | gagttctata | aaaaaaaaaa | aaaaaaa | 1617 |
<210> 5 <211> 9156 <212> DNA <213> artificial sequence <220>
PL 213 595 B1 <223> konstrukt wielogenowy W92 <400> 5
| tggcaggata | tattgtggtg | taaacaaatt | gacgcttaga | caacttaata | acacattgcg | 60 |
| gacgttttta | atgtactggg | gtggtttttc | ttttcaccag | tgagacgggc | aacagctgat | 120 |
| tgcccttcac | cgcctggccc | tgagagagtt | gcagcaagcg | gtccacgctg | gtttgcccca | 180 |
| gcaggcgaaa | atcctgtttg | atggtggttc | cgaaatcggc | aaaatccctt | ataaatcaaa | 240 |
| agaatagccc | gagatagggt | tgagtgttgt | tccagtttgg | aacaagagtc | cactattaaa | 300 |
| gaacgtggac | tccaacgtca | aagggcgaaa | aaccgtctat | cagggcgatg | gcccactacg | 360 |
| tgaaccatca | cccaaatcaa | gttttttggg | gtcgaggtgc | cgtaaagcac | taaatcggaa | 420 |
| ccctaaaggg | agcccccgat | ttagagcttg | acggggaaag | ccggcgaacg | tggcgagaaa | 480 |
| ggaagggaag | aaagcgaaag | gagcgggcgc | cattcaggct | gcgcaactgt | tgggaagggc | 540 |
| gatcggtgcg | ggcctcttcg | ctattacgcc | agctggcgaa | agggggatgt | gctgcaaggc | 600 |
| gattaagttg | ggtaacgcca | gggttttccc | agtcacgacg | ttgtaaaacg | acggccagtg | 660 |
| aattaggccg | gccgaattcc | catggagtca | aagattcaaa | tagaggacct | aacagaactc | 720 |
| gccgtaaaga | ctggcgaaca | gttcatacag | agtctcttac | gactcaatga | caagaagaaa | 780 |
| atcttcgtca | acatggtgga | gcacgacacg | cttgtctact | ccaaaaatat | caaagataca | 840 |
| gtctcagaag | accaaagggc | aattgagact | tttcaacaaa | gggtaatatc | cggaaacctc | 900 |
| ctcggattcc | attgcccagc | tatctgtcac | tttattgtga | agatagtgga | aaaggaaggt | 960 |
| ggctcctaca | aatgccatca | ttgcgataaa | ggaaaggcca | tcgttgaaga | tgcctctgcc | 1020 |
| gacagtggtc | ccaaagatgg | acccccaccc | acgaggagca | tcgtggaaaa | agaagacgtt | 1080 |
| ccaaccacgt | cttcaaagca | agtggattga | tgtgatatct | ccactgacgt | aagggatgac | 1140 |
| gcacaatccc | actatccttc | gcaagaccct | tcctctatat | aaggaagttc | atttcatttg | 1200 |
| gagaggacag | gtaccgggcc | ccccctcgag | gtcgacggta | tcgataagct | tgatatcgaa | 1260 |
| ttcctgcagc | ccaattccgt | aatttaacta | ctagtaagtc | cactaaaatt | aacaaatctt | 1320 |
| aagtccgact | ttccaacttc | catatctgat | aatggcaagt | gaagcagttc | atgccccttc | 1380 |
| acctccggtg | cagtgcgaca | gtttgcgtca | ctggagctgc | tggatttatt | ggctcttggc | 1440 |
| ttgtcatgag | actccttgaa | cgcggttaca | atgttcacgc | atctgttcgt | gatcctgaga | 1500 |
| acaagaagaa | ggtgaaacat | ctgctggaac | tgccaaaggc | tgatacgaac | ttaacactgt | 1560 |
| tgaaagcgga | cttgacagta | gaaggaagct | ttgacgaggc | cattcaaggc | tgtcaaggag | 1620 |
| tatttcatgt | agcaacacct | atggatttcg | agtccaaaga | ccctgagaat | gaagtaatca | 1680 |
| agccaacagt | ccggggaatg | ctaagcatca | ttgaatcatg | tgctaaagca | aacacagtga | 1740 |
| agaggctggt | tttcacttca | tctgctggaa | ctctcgatgt | gcaagagcaa | caaaaacttt | 1800 |
| tctatgacca | gaccagctgg | agcgacttgg | acttcatata | tgctaagaag | atgacaggat | 1860 |
| ggatgtattt | tgcttccaag | atactggcag | agaaagccgc | aatggaagaa | gctaaaaaga | 1920 |
| agaacattga | tttcattagc | atcataccac | cactggttgt | tggtccattc | atcacaccta | 1980 |
| catttccccc | tagtttaatc | actgcccttt | cactaattac | tgggaatgaa | gctcattact | 2040 |
| gcatcattaa | acaaggtcaa | tatgtgcatt | tggatgatct | ttgtgaggct | cacatattcc | 2100 |
| tgtatgagca | ccccaaggca | gatggaagat | tcatttgctc | gtcccaccat | gctatcatct | 2160 |
| acgatgtggc | taagatggtc | cgagagaaat | ggccagagta | ctatgttcct | actgagttta | 2220 |
| aagggatcga | taaagacctg | ccagtggtgt | ctttttcatc | aaagaagctg | acagatatgg | 2280 |
| gttttcagtt | caagtacact | ttggaggata | tgtataaagg | ggccatcgat | acttgtcgac | 2340 |
PL 213 595 B1
| agaagcagct gcttcccttt tctacccgaa gtgctgaaga caatggacat aaccgagaag | 2400 |
| ccattgccat ttctgctcaa aactatgcaa gtggcaaaga gaatgcacca gttgcaaatc | 2460 |
| atacagaaat gttaagcaat gttgaagtct agaactgcaa tcttacaaga taaagaaagc | 2520 |
| ttgccaagca atatgtttgc tactaagttc tttgtcatct gtttgagggt tttcaaaact | 2580 |
| aaatcagtaa atttttcaat gcgggggatc ctctagagtc gacctgcagg catgccctgc | 2640 |
| tttaatgaga tatgcgagac gcctatgatc gcatgatatt tgctttcaat tctgttgtgc | 2700 |
| acgttgtaaa aaacctgagc atgtgtagct cagatcctta ccgccggttt cggttęattc | 2760 |
| taatgaatat atcacccgtt actatcgtat ttttatgaat aatattctcc gttcaattta | 2820 |
| ctgattgtcc aagcttggcc ggccaagctt ggacaatcag taaattgaac ggagaatatt | 2880 |
| attcataaaa atacgatagt aacgggtgat atattcatta gaatgaaccg aaaccggcgg | 2940 |
| taaggatctg agctacacat gctcaggttt tttacaacgt gcacaacaga attgaaagca | 3000 |
| aatatcatgc gatcataggc gtctcgcata tctcattaaa gcagggcatg cctgcaggtc | 3060 |
| gactctagag gatcccccgg gctgcaggaa ttccatttga caagggaatt cagcactaaa | 3120 |
| acattttact tgtcctaaac tagactccaa tcactggaat agtagatttc tcggtctccg | 3180 |
| gttttccaaa aacagatgcc tcttcagcat agctcttttt gagcagttcc gctactcttt | 3240 |
| cagcgacact acactttgcc gcaggagaaa ctccatgctt cccaattatt gattccagca | 3300 |
| ctgcttcaga caactgcttg ttctctataa cagcattcgc agtgccagtt actgaatcat | 3360 |
| ctttagcgaa gctaatcgtc aacaacccta ggggtgattg agtaaacatg atggaagcac | 3420 |
| caggtggaaa agtttcactc cggaaaacat ctagaaactt ctcaatggca cgaccctcat | 3480 |
| catcagtata cgttcctatc cccttccaat gcgcaacaca attctccgcc accttctccg | 3540 |
| agtactgctt gcccgtcaag ggcaagatca tagtaactcg agtaaatttc tcaaatggac | 3600 |
| ctgtaacaac atccctaaag aactcgaccg agtcagtcaa ctcctggggg gttttgcctt | 3660 |
| tccatttttc ggccagaaaa ggaatagcac tctcttctag atacacacct atcgccgtaa | 3720 |
| acttaacaaa cttcccttct atctccagac ctctatgccc agcaccagca aggaacaagg | 3780 |
| tattggtgga accagcaggg ttcacggtcg gtgcgaaagc gtaattctca acctgcattt | 3840 |
| tagtaacgga cactggagga gacatttttg ctctactttt acgaattcga tatcaagctt | 3900 |
| atcgataccg tcgacctcga gggggggccc ggtacctgtc ctctccaaat gaaatgaact | 3960 |
| tccttatata gaggaagggt cttgcgaagg atagtgggat tgtgcgtcat cccttacgtc | 4020 |
| agtggagata tcacatcaat ccacttgctt tgaagacgtg gttggaacgt cttctttttc | 4080 |
| cacgatgctc ctcgtgggtg ggggtccatc tttgggacca ctgtcggcag aggcatcttc | 4140 |
| aacgatggcc tttcctttat cgcaatgatg gcatttgtag gagccacctt ccttttccac | 4200 |
| tatcttcaca ataaagtgac agatagctgg gcaatggaat ccgaggaggt ttccggatat | 4260 |
| taccctttgt tgaaaagtct caattgccct ttggtcttct gagactgtat ctttgatatt | 4320 |
| tttggagtag acaagcgtgt cgtgctccac catgttgacg aagattttct tcttgtcatt | 4380 |
| gagtcgtaag agactctgta tgaactgttc gccagtcttt acggcgagtt ctgttaggtc | 4440 |
| ctctatttga atctttgact ccatgggaat tcggcgcgcc aagcttggac aatcagtaaa | 4500 |
| ttgaacggag aatattattc ataaaaatac gatagtaacg ggtgatatat tcattagaat | 4560 |
| gaaccgaaac cggcggtaag gatctgagct acacatgctc aggtttttta caacgtgcac | 4620 |
| aacagaattg aaagcaaata tcatgcgatc ataggcgtct cgcatatctc attaaagcag | 4680 |
| ggcatgcctg caggtcgact ctagaggatc ccccgggctg cagattttta tttgcaagtg | 4740 |
| caatatcaaa ctaaagcaaa tacattcatg gcaaacgaaa taaattcaac cccaagaaac | 4800 |
PL 213 595 B1
| aaaataaaca attacacttc aattcatata agcccaaccc acttaagtag caacactgtg | 4860 |
| gaggacaaca gtctcaactg ttagcccagg cccaaatcca aaaagaacac cccactcaag | 4920 |
| cccttcacca gtagttccta aaccttcttt ggctgaggcc tttctcattt catccaaaat | 4980 |
| aaacagtaca caagcacttg acatgttacc atagtcactt aacacattcc ttgtagcctt | 5040 |
| aagtttctcg ggctttaggc ccaactttat ttcaacttgg tccaaaattg caggcccacc | 5100 |
| tggatgagca atccagaata gagagttcca atcagaaatg cccaaaggtt taaatgcttc | 5160 |
| ctcaaggctc ttctcaatat tttttgagat cagcccagga acatctttga gtaagtggaa | 5220 |
| tgtaagccca acttcacgga gatggccatc aatagcacca tggctatctg ggagaagagt | 5280 |
| ttgggctgct gaaacgagct cgaacaaagg cctctcgact cctggaattg gatcagaacc | 5340 |
| tataatgatc gcgcctgccc catcaccaaa aagggcttgg ccaactaaac tatccaaatg | 5400 |
| agtatcattt ggcccacgga aggtgaccgc ggtgatttct gaacaaacaa caaggactcg | 5460 |
| agcgcccttg ttgttttccg ccaagtcctt ggctaaccga agaaccgtgc caccagcaaa | 5520 |
| gcaaccttgt tggtacatca tgagcctctt gaccgatgga cgaagcccaa gtagcttagt | 5580 |
| gagttgatag tcacacccag gcatgtccac accactagtt gtgcaaaaga ccaaatgggt | 5640 |
| aattttggac ttgggctggc cccattcctt gatagccttt tgggctgcct ctttgccaag | 5700 |
| tttgggcact tcaaccacca ctatgtcttg cctagcatca agagaaggtg ccatgtattc | 5760 |
| acacatacta ggattctctt tcaagatttc ctctgttaag tgcatgtacc ttttcttaat | 5820 |
| cattgatttt tcacacatgc gcttaaattt ctccttaaga tcagtcttgt gctcactgtt | 5880 |
| agtgatacga aaataataat cagggtaagt gctttgatca acacagtttg taggtgtggc | 5940 |
| tgttccaatg gccatgacag tggctggacc ttcagcacgt tgtgccttac gatactcctc | 6000 |
| gactgtcacc atttttgctt gaaaaagttt ggtatttttt tttttttatg aattcgatat | 6060 |
| caagcttatc gataccgtcg acctcgaggg ggggcccggt acctgtcctc tccaaatgaa | 6120 |
| atgaacttcc ttatatagag gaagggtctt gcgaaggata gtgggattgt gcgtcatccc | 6180 |
| ttacgtcagt ggagatatca catcaatcca cttgctttga agacgtggtt ggaacgtctt | 6240 |
| ctttttccac gatgctcctc gtgggtgggg gtccatcttt gggaccactg tcggcagagg | 6300 |
| catcttcaac gatggccttt cctttatcgc aatgatggca tttgtaggag ccaccttcct | 6360 |
| tttccactat cttcacaata aagtgacaga tagctgggca atggaatccg aggaggtttc | 6420 |
| cggatattac cctttgttga aaagtctcaa ttgccctttg gtcttctgag actgtatctt | 6480 |
| tgatattttt ggagtagaca agcgtgtcgt gctccaccat gttgacgaag attttcttct | 6540 |
| tgtcattgag tcgtaagaga ctctgtatga actgttcgcc agtctttacg gcgagttctg | 6600 |
| ttaggtcctc tatttgaatc tttgactcca tgggaattcg gcgcgccacc aggtgagctt | 6660 |
| ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca | 6720 |
| caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact | 6780 |
| cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct | 6840 |
| gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc caaagacaaa | 6900 |
| agggcgacat tcaaccgatt gagggaggga aggtaaatat tgacggaaat tattcattaa | 6960 |
| aggtgaatta tcaccgtcac cgacttgagc catttgggaa ttagagccag caaaatcacc | 7020 |
| agtagcacca ttaccattag caaggccgga aacgtcacca atgaaaccat cgatagcagc | 7080 |
| accgtaatca gtagcgacag aatcaagttt gcctttagcg tcagactgta gcgcgttttc | 7140 |
| atcggcattt tcggtcatag cccccttatt agcgtttgcc atcttttcat aatcaaaatc | 7200 |
| accggaacca gagccaccac cggaaccgcc tccctcagag ccgccaccct cagaaccgcc | 7260 |
PL 213 595 B1
| accctcagag | ccaccaccct | cagagccgcc | accagaacca | ccaccagagc | cgccgccagc | 7320 |
| attgacagga | ggcccgatct | agtaacatag | atgacaccgc | gcgcgataat | ttatcctagt | 7380 |
| ttgcgcgcta | tattttgttt | tctatcgcgt | attaaatgta | taattgcggg | actctaatca | 7440 |
| taaaaaccca | tctcataaat | aacgtcatgc | attacatgtt | aattattaca | tgcttaacgt | 7500 |
| aattcaacag | aaattatatg | ataatcatcg | caagaccggc | aacaggattc | aatcttaaga | 7560 |
| aactttattg | ccaaatgttt | gaacgatcgg | ggatcatccg | ggtctgtggc | gggaactcca | 7620 |
| cgaaaatatc | cgaacgcagc | aagatatcgc | ggtgcatctc | ggtcttgcct | gggcagtcgc | 7680 |
| cgccgacgcc | gttgatgtgg | acgccgggcc | cgatcatatt | gtcgctcagg | atcgtggcgt | 7740 |
| tgtgcttgtc | ggccgttgct | gtcgtaatga | tatcggcacc | ttcgaccgcc | tgttccgcag | 7800 |
| agatcccgtg | ggcgaagaac | tccagcatga | gatccccgcg | ctggaggatc | atccagccgg | 7860 |
| cgtcccggaa | aacgattccg | aagcccaacc | tttcatagaa | ggcggcggtg | gaatcgaaat | 7920 |
| ctcgtgatgg | caggttgggc | gtcgcttggt | cggtcatttc | gaaccccaga | gtcccgctca | 7980 |
| gaagaactcg | tcaagaaggc | gatagaaggc | gatgcgctgc | gaatcgggag | cggcgatacc | 8040 |
| gtaaagcacg | aggaagcggt | cagcccattc | gccgccaagc | tcttcagcaa | tatcacgggt | 8100 |
| agccaacgct | atgtcctgat | agcggtccgc | cacacccagc | cggccacagt | cgatgaatcc | 8160 |
| agaaaagcgg | ccattttcca | ccatgatatt | cggcaagcag | gcatcgccat | gggtcacgac | 8220 |
| gagatcatcg | ccgtcgggca | tgcgcgcctt | gagcctggcg | aacagttcgg | ctggcgcgag | 8280 |
| cccctgatgc | tcttcgtcca | gatcatcctg | atcgacaaga | ccggcttcca | tccgagtacg | 8340 |
| tgctcgctcg | atgcgatgtt | tcgcttggtg | gtcgaatggg | caggtagccg | gatcaagcgt | 8400 |
| atgcagccgc | cgcattgcat | cagccatgat | ggatactttc | tcggcaggag | caaggtgaga | 8460 |
| tgacaggaga | tcctgccccg | gcacttcgcc | caatagcagc | cagtcccttc | ccgcttcagt | 8520 |
| gacaacgtcg | agcacagctg | cgcaaggaac | gcccgtcgtg | gccagccacg | atagccgcgc | 8580 |
| tgcctcgtcc | tgcagttcat | tcagggcacc | ggacaggtcg | gtcttgacaa | aaagaaccgg | 8640 |
| gcgcccctgc | gctgacagcc | ggaacacggc | ggcatcagag | cagccgattg | tctgttgtgc | 8700 |
| ccagtcatag | ccgaatagcc | tctccaccca | agcggccgga | gaacctgcgt | gcaatccatc | 8760 |
| ttgttcaatc | atgcgaaacg | atccagatcc | ggtgcagatt | atttggattg | agagtgaata | 8820 |
| tgagactcta | attggatacc | gaggggaatt | tatggaacgt | cagtggagca | tttttgacaa | 8880 |
| gaaatatttg | ctagctgata | gtgaccttag | gcgacttttg | aacgcgcaat | aatggtttct | 8940 |
| gacgtatgtg | cttagctcat | taaactccag | aaacccgcgg | ctgagtggct | ccttcaacgt | 9000 |
| tgcggttctg | tcagttccaa | acgtaaaacg | gcttgtcccg | cgtcatcggc | gggggtcata | 9060 |
| acgtgactcc | cttaattctc | cgctcatgat | cagattgtcg | tttcccgcct | tcagtttaaa | 9120 |
| ctatcagtgt | ttgacaggat | atattggcgg | gtaaac | 9156 |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (10)
- Zastrzeżenia patentowe1. Tkanina, znamienna tym, że zawiera zmodyfikowane włókno lniane otrzymane z lnu posiadającego komórki zawierające polinukleotyd kodujący syntazę chalkonu (CHS), polinukleotyd kodujący izomerazę chalkonu (CHI) i polinukleotyd kodujący reduktazę dihydroflawonolu (DFR), korzystnie komórki transformowane wielogenowym konstruktem kodującym syntazę chalkonu (CHS), izomerazę chalkonu (CHI) i reduktazę dihydroflawonolu (DFR), przy czym włókno lniane zawiera emulsję oleju lnianego lub ekstrakt z wytłoków nasion.
- 2. Tkanina według zastrzeż. 1, znamienna tym, że polinukleotyd kodujący syntazę chalkonu zawiera sekw. nr 1.PL 213 595 B1
- 3. Tkanina według zastrzeż. 1, znamienna tym, że polinukleotyd kodujący izomerazę chalkonu zawiera sekw. nr 2.
- 4. Tkanina według zastrzeż. 1, znamienna tym, że polinukleotyd kodujący reduktazę dihydroflawonolu zawiera sekw. nr 3.
- 5. Tkanina według zastrzeż. 1, znamienna tym, że zawiera włókno lniane otrzymane z lnu posiadającego komórki zawierające polinukleotyd kodujący transferazę glukozową (5UGT), korzystnie komórki transformowane jednogenowym konstruktem kodującym transferazę glukozową (5UGT).
- 6. Tkanina według zastrzeż. 5, znamienna tym, że polinukleotyd kodujący transferazę glukozową zawiera sekw. nr 4.
- 7. Tkanina według zastrzeż. 1, znamienna tym, że wielogenowy konstrukt zawiera sekw. nr 5.
- 8. Zastosowanie tkaniny jak określono w zastrz. od 1 do 7 do wytwarzania materiału opatrunkowego.
- 9. Zastosowanie według zastrz. 8, znamienne tym, że materiał opatrunkowy wytwarza się z tkaniny lnianej zawierającej emulsję oleju lnianego.
- 10. Zastosowanie według zastrz. 8, znamienne tym, że materiał opatrunkowy wytwarza się z tkaniny lnianej zawierającej ekstrakt z wytłoków nasion.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL386185A PL213595B1 (pl) | 2008-09-29 | 2008-09-29 | Tkanina, zwlaszcza do wytwarzania opatrunków |
| PCT/PL2009/050028 WO2010036135A2 (en) | 2008-09-29 | 2009-09-29 | A textile, particularly for the production of wound dressings |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL386185A PL213595B1 (pl) | 2008-09-29 | 2008-09-29 | Tkanina, zwlaszcza do wytwarzania opatrunków |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL386185A1 PL386185A1 (pl) | 2010-04-12 |
| PL213595B1 true PL213595B1 (pl) | 2013-03-29 |
Family
ID=41600335
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL386185A PL213595B1 (pl) | 2008-09-29 | 2008-09-29 | Tkanina, zwlaszcza do wytwarzania opatrunków |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL213595B1 (pl) |
| WO (1) | WO2010036135A2 (pl) |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3868955A (en) * | 1973-10-05 | 1975-03-04 | Personal Products Co | Aldehyde polysaccharide dressings |
| US6562743B1 (en) * | 1998-12-24 | 2003-05-13 | Bki Holding Corporation | Absorbent structures of chemically treated cellulose fibers |
| GB2408207A (en) * | 2003-11-24 | 2005-05-25 | Johnson & Johnson Medical Ltd | Wound dressing for the controlled release of therapeutic agents comprising also an inhibitor of a protease enzyme & a linker group cleavable by such an enzyme |
| EP1609462B1 (en) * | 2004-04-22 | 2015-07-29 | La Prairie Group AG | Cosmetic or dermatological preparation comprising a nutrient medium phase |
| US20070141934A1 (en) * | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Nonwoven webs containing bacteriostatic compositions and methods of making the same |
| US8277837B2 (en) * | 2006-01-11 | 2012-10-02 | Entegrion, Inc. | Hemostatic textile |
| WO2008079898A1 (en) * | 2006-12-20 | 2008-07-03 | Pharmwest, Inc. | Methods and topical formulations comprising colloidal metal for treating or preventing skin conditions |
-
2008
- 2008-09-29 PL PL386185A patent/PL213595B1/pl unknown
-
2009
- 2009-09-29 WO PCT/PL2009/050028 patent/WO2010036135A2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL386185A1 (pl) | 2010-04-12 |
| WO2010036135A2 (en) | 2010-04-01 |
| WO2010036135A3 (en) | 2010-12-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2008245794B2 (en) | Production of proanthocyanidins to improve forage quality | |
| Buanafina et al. | Expression of a fungal ferulic acid esterase increases cell wall digestibility of tall fescue (Festuca arundinacea) | |
| Mierziak et al. | Crossbreeding of transgenic flax plants overproducing flavonoids and glucosyltransferase results in progeny with improved antifungal and antioxidative properties | |
| US9131648B2 (en) | Genes encoding chavicol/eugenol synthase from the creosote bush Larrea tridentata | |
| BRPI0616844A2 (pt) | célula de planta geneticamente modificada, uso da mesma, planta, processo para produção da mesma, material de reprodução de plantas, partes de plantas colhìveis, processo para produção de hialuronano, composição, bem como seu processo de produção | |
| Wang et al. | Agrobacterium-mediated transformation in the high-value medicinal plant Echinacea purpurea | |
| AU2002360228B2 (en) | Compositions from the grasses lolium perenne and festuca arundinacea | |
| SK286416B6 (sk) | Gén na fukozyltransferázu | |
| Vailhé et al. | Effect of Modification of theO‐Methyltransferase Activity on Cell Wall Composition, Ultrastructure and Degradability of Transgenic Tobacco | |
| RO122151B1 (ro) | Procedeu de modificare a nivelurilor concentraţiilor de compuşi metabolici secundari, din plante | |
| US7855319B2 (en) | High level antioxidant-containing foods | |
| PL177743B1 (pl) | Sposób uzyskiwania nowej barwy rośliny ozdobnej i wektor binarny zawierający rekombinowany gen chimeryczny | |
| US7807880B2 (en) | Modification of plant lignin content | |
| Konishi et al. | Down-regulation of UDP-arabinopyranose mutase reduces the proportion of arabinofuranose present in rice cell walls | |
| NZ588516A (en) | A method for the production of a human protein in a plant, in particular a human recombinant lysosomal enzyme in a cereal endosperm | |
| PL213595B1 (pl) | Tkanina, zwlaszcza do wytwarzania opatrunków | |
| CN116199758A (zh) | 梨转录因子PbrMYB24及其促进石细胞中木质素和纤维素合成的应用 | |
| CN107858369A (zh) | 一种提高植物对抗有害昆虫能力的基因及其应用 | |
| WO2007119639A1 (ja) | リグナンメチル化酵素をコードする遺伝子 | |
| US6479732B1 (en) | cDNA of 4-coumarate: coenzyme a ligase and process for modifying lignin in plants | |
| JP5123948B2 (ja) | コーヒー豆穿孔虫、ヒポセネマス・ハンペイ（Ｈｙｐｏｔｈｅｎｅｍｕｓｈａｍｐｅｉ）由来のベータ−マンナナーゼ、およびその使用 | |
| CN103748225A (zh) | 在植物或树木中增强细胞壁特性 | |
| Czemplik et al. | Optimizing biomedical and industrial products development based on flax. | |
| CN114760836A (zh) | 使用腋生分生组织的植物原位转化方法 | |
| CN105039360A (zh) | 一种提高花青素含量的方法 |