PL196047B1 - Sposoby wytwarzania pochodnych witaminy B 12 do wiązania z polimerem, nanocząsteczką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem, oraz pochodna witaminy B 12 - Google Patents

Sposoby wytwarzania pochodnych witaminy B 12 do wiązania z polimerem, nanocząsteczką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem, oraz pochodna witaminy B 12

Info

Publication number
PL196047B1
PL196047B1 PL99344686A PL34468699A PL196047B1 PL 196047 B1 PL196047 B1 PL 196047B1 PL 99344686 A PL99344686 A PL 99344686A PL 34468699 A PL34468699 A PL 34468699A PL 196047 B1 PL196047 B1 PL 196047B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
spacer
group
derivatives
mixture
carbonyldiimidazole
Prior art date
Application number
PL99344686A
Other languages
English (en)
Other versions
PL344686A1 (en
Inventor
Greg Russell-Jones
John Mcewan
Original Assignee
Biotech Australia Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biotech Australia Pty Ltd filed Critical Biotech Australia Pty Ltd
Publication of PL344686A1 publication Critical patent/PL344686A1/xx
Publication of PL196047B1 publication Critical patent/PL196047B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7135—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/714—Cobalamins, e.g. cyanocobalamin, i.e. vitamin B12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A61K47/551—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds one of the codrug's components being a vitamin, e.g. niacinamide, vitamin B3, cobalamin, vitamin B12, folate, vitamin A or retinoic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H23/00—Compounds containing boron, silicon, or a metal, e.g. chelates, vitamin B12

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

1. Sposób wytwarzania pochodnych VB 12 do wiazania z polimerem, nanoczastka lub srodkiem leczniczym, bialkiem lub peptydem, znamienny tym, ze obejmuje etapy poddawania grupy 5'OH VB 12 lub jej analogu reakcji i z dwufunkcyjnym karbonylowym elektrofilem, a nastepnie poddawania tak wytworzonego zwiazku posredniego reakcji z nukleofilowa czasteczka dystansujaca, przy czym stosu- je sie dwufunkcyjny karbonylowy elektrofil wybrany z grupy skladajacej sie z karbonylodiimidazolu, fosgenu, trifosgenu, weglanu N,N'-disukcynoimidylu, karbonylodipiperydyny, 1,1'-karbonylodi(1,2,4- -triazolu), di(2-pirydylo)ketonu lub weglanu di(1-benzotriazolilu), a nukleofilowa czasteczka dystansu- jaca jest podstawiona grupa aminowa lub grupa hydrazydylowa. PL PL PL PL PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem niniejszego wynalazku ogólnie są nowe sposoby wytwarzania pochodnych witaminy B12 (VB12) do wiązania z polimerem, nanocząsteczką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem. Przedmiotem wynalazku jest także nowa pochodna witaminy B12.
Mechanizm doustnego dostarczania peptydów opisano w międzynarodowym zgłoszeniu PCT/AU86/0299 (W087/02251) w oparciu o ostatnie prace jednego z twórców wynalazku. Mechanizm wykorzystuje do transportu substancji aktywnej ze światła jelita do układu krążenia co najmniej jedną cząsteczkę nośnika, z którą połączona jest substancja aktywna. Witamina B12 (VB12) i jej analogi działają jako idealne cząsteczki nośnika dzięki wykorzystaniu naturalnego systemu wychwytu VB12 do transportu kompleksu substancji aktywnej/VB12, w którym pośredniczy wiązanie VB12 do czynnika wewnętrznego (IF). Raz dostarczony do układu drenażu limfatycznego lub osocza kompleks, zasadniczo zachowuje aktywność biologiczną wyjściowej substancji aktywnej.
Ostatnio do wykrywania i leczenia komórek nowotworowych zastosowano koniugaty VB12 zlekami, cytotoksynami i środkami MRI. Dla normalnego wychwytu komórkowego witaminy B]2 (kobalaminy, Cbl, VB12), witamina musi najpierw związać się z białkiem osocza transkobalaminą II (TCII). Po związaniu Cbl z TCII powstały kompleks TCII-Cbl wiąże się z wysokim powinowactwem z receptorami na powierzchni komórek i zostaje wprowadzony do wnętrza komórki w procesie nazywanym endocytozą za pośrednictwem receptorów (RME, receptor-mediated endocytosis). Wewnątrz komórki, Cbl ulega modyfikacji enzymatycznej tworząc dwa koenzymy, które są wykorzystywane w dwóch zasadniczych szlakach przemian metabolicznych. Jeden szlak przemian obejmuje metylowanie homocysteiny w syntezie metioniny de novoi jest katalizowany przez syntazę metioninową. Drugi szlak przemian obejmuje przegrupowanie metylomalonylo-CoA do sukcynylo-CoA i jest katalizowany przez mutazę metylomalonylo-CoA.
Ostatnio wykazano, że rozrost komórek białaczki ludzkiej i mysiej in vitro jest zależny od zarówno TCII, jak i Cbl (McLean, G. R., Quadros, E. B., Rothenberg, S. P., Morgan, A. C., Schrader, J. W. i Ziltener, H. J., 1997 „Antibodies to transcobalamin II block in vitro proliferation of leukemie cells”, Blood, 89, 235-242). Kilku badaczy skupiło się obecnie nad wykorzystaniem koniugatów Cbl zarówno do obrazowania promieniotwórczego, jak i do ukierunkowanej chemioterapii raka (Smeltzer, C. C., Pinson, P. R., Munger, J. M., West, F. G. i Grissom, C. B., 1999 „Cytotoxicities of two new cobalamin bioconiugates”. Proceedings Ninth International Symposium on Recent Advances in Drug Delivery Systems, str. 232-3; Canon, M.J., Munger, J. M., West, F. G. i Grissom, C. B., 1999 “Synthesis and uptake of radiolabeled cobalamin bioconiugate”, Proceedings Ninth International Symposium on Recent Advances in Drug Delivery Systems, str. 230-1; Pinson, P. R., Munger, J. M., West, F. G. i Grissom, C. B., 1999 “Synthesis of two doxorubicin-cobalamin bioconiugates”, Proceedings Ninth International Symposium on Recent Advances in Drug Delivery Systems, str. 228-9).
Aby witamina VB12 mogła uczestniczyć w transporcie farmaceutyków przez warstwę komórek nabłonka jelit oraz do układu krążenia, najpierw farmaceutyki muszą zostać kowalencyjnie połączone z cząsteczką VB12. Podobnie, aby VB12 mogła dostarczyć środek przeciwnowotworowy do nowotworu, środek musi zostać kowalencyjnie połączony z cząsteczką VB12. Żeby to nastąpiło, sama cząsteczką VB12 musi najpierw zostać zmodyfikowana z wytworzeniem grupy funkcyjnej odpowiedniej do koniugacji. Pochodną kwasu karboksylowego VB12 łatwo uzyskuje się metodą łagodnej hydrolizy kwasowej propionimidowych łańcuchów bocznych struktury pierścienia korynowego1 (patrz fig. 1). Ta hydroliza powoduje powstanie kwasów monokarboksylowych „b”, „d” i „e” pochodnych VB122. Wydzielone pochodne kwasy monokarboksylowe można następnie sprzęgać wprost z grupami aminowymi białek lub peptydów przy użyciu handlowo dostępnych karbodiimidów, takich jak 1-etylo-3-(3-(dimetyloamino)propylo)karbodiimid (EDAC) lub dicykloheksylokarbodiimid (DCC), przez co peptyd łączy się z VB12 przez wiązanie peptydowe1,3.
Drugi sposób koniugacji peptydów do VB12 stanowi osiowe podstawienie grup funkcyjnych na atomie Co pierścienia koryny cząsteczki VB12 (patrz wzór 1). W tym sposobie osiowy ligand CN z VB12 może zostać zastąpiony sfunkcjonalizowanym łańcuchem alkilowym. Tej podstawionej grupy funkcyjnej można następnie użyć do koniugacji z peptydem lub białkiem przy użyciu tradycyjnych technik chemicznych. Jednak główną wadą tego sposobu jest to, że powstały koniugat zawiera wrażliwe na światło wiązanie Co-C. Tak więc, należy pilnować, żeby nie wystawiać roztworów alkilokobalamin na światło widzialne.
PL 196 047 B1
Wczesna praca Toraya i Fukui4 pokazała wykonalność koniugacji z VB12 przez wiązanie estrowe do 5' OH ugrupowania rybozy ligandu nukleotydowego. W swojej pracy Toraya i Fukui badali możliwość zastosowania tej chemii dla uzyskania ligandu powinowactwa do oczyszczania dehydrazy diolowej. W celu wytworzenia wiązania 5'O-estrowego autorzy poddali VB12 reakcji z 54-krotnym nadmiarem bezwodnika bursztynowego w dużej objętości DMSO (VB12 w stężeniu 5 mg/ml) z dodanym dużym nadmiarem pirydyny (128-krotnym wagowo). Ci autorzy stwierdzili, że utworzone wiązanie było nie tylko nietrwałe przy pH zasadowym, ale także nieskuteczne do oczyszczania enzymu.
Annunziato i współpracownicy5 opisują inny sposób wiązania z 5'OH rybozy. Ci badacze poddali izocyjanian p-maleimidofenylu reakcji z VB12 i z kolei użyli aktywowanej cząsteczki VB12 do reakcji z tiolowaną fosfatazą alkaliczną.
Z kolei Habberfield i współpracownicy połączyli pracę Toraya i Fukui4 z pracą Annunziato i in.5, jak również Russell-Jones i in.3,6 i wytworzyli koniugaty G-CSF, EPO i interferonu zgodnego z 5'O-glutaroilową pochodną VB12. Uzyskane koniugaty określano jako aktywne po podaniu szczurom pompą dodwunastniczą koniugatów wstępnie skompleksowanych z IF szczura.
W sposobie, który opisali Habberfield i współpracownicy, 5 g cyjanokobalaminy (VB12 - M.cz. 1356) rozpuszczono w 1000 ml DMSO i dodano 200 g bezwodnika glutarowego (M.cz. 116) w 160 ml pirydyny. Wydajność produktu wyniosła około 65%. To oznacza 468-krotny nadmiar molowy bezwodnika glutarowego wobec VB12.
W pracy Toraya i Fukuii4badacze użyli 200 mg cyjanokobalaminy rozpuszczonej w 40 ml DMSO plus 8 gramach bezwodnika bursztynowego (M.cz. 100) do sprzężenia z grupą hydroksylową. To oznacza 54-krotny nadmiar molowy bezwodnika przy wydajności produktu równej 90%. W sposobie sprzęgania, który opisali Russell-Jones i współpracownicy3,6 monokwas VB12 wytworzono działaniem kwasu przez 72 h, a następnie oczyszczanie na Dowex 1X8 i Dowex 1X2, z wydajnością zaledwie około 5%. W celu związania monokwasu VB12 z niektórymi peptydami i białkami często potrzebne było dalsze tworzenie pochodnych.
7 5
Poza sposobami, które opisali Toraya i Fukui4, Habberfield i in.7 oraz Annunziato i in.5, istnieją inne sposoby, które można zastosować do uzyskania wiązań kowalencyjnych z grupą 5' OH VB12. Te sposoby ogólnie stosuje się do wytwarzania żywic powinowactwa przez modyfikację reszt cukrowych pozostałych w agarozie. Te sposoby obejmują reakcję z tlenkiem etylenu (eter diglicydylowy 1,4-butanodiolu), benzochinonem lub chlorkiem cyjanurowym. Próbowano stosować te sposoby do syntezy pochodnych VB12, jednak albo wydajności były tak niskie, że sposób nie nadawał się do zastosowania przemysłowego, albo stosowane ilości odczynników były tak wysokie, że podobnie sposób nie nadawał się do stosowania przemysłowego.
Celem niniejszego wynalazku jest pokonanie lub co najmniej złagodzenie jednej lub więcej z wyżej wymienionych wad rozwiązań ze stanu techniki. W szczególności, przedmiotem niniejszego wynalazku są nowe sposoby wytwarzania pochodnych VB12 jako cząsteczek nośnika, które wykorzystują grupę 5'OH VB12 do wiązania chemicznego z cząsteczkami dystansującymi. Korzystne jest, aby pochodne VB12 były łatwe do otrzymania, uzyskiwane z wydajnościami od dobrych do wysokich i łatwe do oczyszczenia. Przedmiot wynalazku stanowi także pochodna VB12 otrzymana sposobem według wynalazku.
Obecni wynalazcy nieoczekiwanie stwierdzili, że pochodne VB12, które są przydatne do sprzęgania z polimerami, nanocząstkami i środkami farmaceutycznie aktywnymi, są łatwo wytwarzane w reakcji grupy 5'OH ugrupowania rybozy cząsteczki VB12 z elektrofilem karbonylowym.
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania pochodnych VB12 do wiązania z polimerem, nanocząstką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem obejmujący etapy poddawania grupy 5'OH VB12 lub jej analogu reakcji i z dwufunkcyjnym karbonylowym elektrofilem, a następnie poddawania tak wytworzonego związku pośredniego reakcji z nukleofilową cząsteczką dystansującą, przy czym stosuje się dwufunkcyjny karbonylowy elektrofil wybrany z grupy składającej się z karbonylodiimidazolu, fosgenu, trifosgenu, węglanu N,N'-disukcynoimidylu, karbonylodipiperydyny, 1,1'-karbonylodi(1,2,4-triazolu), di(2-pirydylo)ketonu lub węglanu di(1-benzotriazolilu), a nukleofilowa cząsteczka dystansująca jest podstawiona grupą aminową lub grupą hydrazydylową.
Innym przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania pochodnej VB12 do wiązania z polimerem, nanocząstką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem znamienny tym, że obejmuje etapy poddawania cząsteczki dystansującej kwasu karboksylowego reakcji z dwufunkcyjnym karbonylowym elektrofilem, a następnie poddawania tak wytworzonego związku pośredniego reakcji z grupą 5'OH
VB12, przy czym stosuje się dwufunkcyjny karbonylowy elektrofil wybrany z grupy składającej się
PL 196 047 B1 z karbonylodiimidazolu, fosgenu, trifosgenu, węglanu N,N'-disukcynoimidylu, karbonylodipiperydyny, 1,1'-karbonylodi(1,2,4-triazolu), di(2-pirydylo)ketonu lub węglanu di-(1-benzotriazolilu).
Pochodne VB12 wytworzone sposobami według niniejszego wynalazku także są chronione.
Pochodne te idealnie wiąże się z polimerem zgodnym biologicznie lub łączy z nanocząstką. Te polimery i nanocząstki można mieszać z farmaceutycznie dopuszczalnymi nośnikami i/lub rozcieńczalnikami otrzymując kompozycje farmaceutyczne do podawania terapeutycznego leczonym.
W niniejszym opisie i następujących po nim zastrzeżeniach, o ile tekst nie wymaga inaczej, to określenie „obejmują” i jego warianty, takie jak „obejmuje” lub „obejmujący”, należy rozumieć jako zakładające włączenie podanej jednostki lub etapu albo grupy jednostek lub etapów, ale nie wyłączenie dowolnej innej jednostki lub etapu ani grupy jednostek lub etapów.
Niniejszy wynalazek zostanie obecnie opisany w odniesieniu do załączonej figury, gdzie: fig. 1 przedstawia cząsteczkę VB12 ukazując trzy miejsca możliwej koniugacji środków i peptydów do VB12.
Te miejsca koniugacji są następujące:
a) koniugacja osiowa przez podstawienie na atomie Co pierścienia korynowego;
b) koniugacja wprost po modyfikacji kwasowej ε-propionimidowego łańcucha bocznego; i
c) koniugacja do grupy 5'OH ugrupowania rybozy reszty nukleotydowej.
Pochodne VB12według niniejszego wynalazku są przydatnedo koniugacji lub wiązania z polimerami, nanocząstkami, środkami terapeutycznymi, białkami i peptydami i innymi takimi środkami farmaceutycznie aktywnymi. Sposoby wytwarzania tych pochodnych VB12 umożliwiają otrzymanie pochodnych z wydajnościami ogólnie dobrymi do wysokich i z dobrą czystością.
W ogólności pochodne te otrzymuje się rozpuszczając VB12 lub jej analog w rozpuszczalniku, korzystnie odpowiednim rozpuszczalniku niewodnym, takim jak suchy DMF, suchy THF lub suchy DMSO i aktywując grupę 5'OH VB12przez reakcję z karbonylowym elektrofilem, korzystnie 1,1'-karbonylodiimidazolem w 1-5-krotnym nadmiarze molowym. Można stosować ilości powyżej 5-krotnego nadmiaru molowego, jednak ogólnie nie jest to wymagane. Korzystnie VB12 rozpuszcza się wwysokim stężeniu w DMSO. Aktywowany związek pośredni VB12może wtedy zostać sprzężony wprost zpeptydami lub białkami, lub może zostać poddany reakcji z diaminowymi cząsteczkami dystansującymi, lub cząsteczkami amina-cząsteczka dystansująca-kwas, bądź też z łańcuchami aminoalkilowymi z wytworzeniem hydrofobowych pochodnych VB12 przydatnych dowstawiania do hydrofobowej powierzchni mikro-lub nanocząstek albo do lipidów lub liposomów.
W korzystnym wykonaniu cząsteczką dystansującą jest oktadecyloamina.
W kolejnym korzystnym wykonaniu cząsteczką dystansującą jest diaminoetan.
W jeszcze innym wykonaniu cząsteczką dystansującą jest diaminobutan.
W dalszym wykonaniu cząsteczką dystansującą jest diaminoheksan.
W kolejnym wykonaniu cząsteczką dystansującą jestdiaminododekan.
W następnym korzystnym wykonaniu cząsteczką dystansującą jest diaminooktadekan.
W jeszcze innym korzystnym wykonaniu cząsteczką dystansującą jest aminokwas lub peptyd.
W jeszcze kolejnym wykonaniu cząsteczką dystansującą jest dihydrazyd, w szczególności wybrany spośród dihydrazydu kwasu bursztynowego i dihydrazyd kwasu adypinowego.
Alternatywny sposób według niniejszego wynalazku także wykorzystuje grupę 5'OH VB12 do wytwarzania pochodnych estrowych 5'OH VB12. W syntezie pochodnych estrowych 5'OHnajpierw wytwarza się aktywny elektrofilowy związek pośredni w reakcji cząsteczki dystansującej kwasu karboksylowego z dwufunkcyjnym elektrofilem karbonylowym z wytworzeniem aktywnego elektrofilowego związku pośredniego. Następnie VB12 lubjej analogi poddaje się reakcji z elektrofilowym związkiem pośrednim, dzięki czemu grupa 5'OH VB12 atakuje elektrofil karbonylowy i zastępuje grupę opuszczającą, z wytworzeniem pochodnej VB12.
Korzystnie VB12 wiąże się zaminokwasową cząsteczką dystansującą lub z lipidem kwasowym przy wytwarzaniu pochodnej estrowej 5'OH VB12.Tepochodnemają tę dodatkową zaletę, że łatwo je wytwarzaći dają cząsteczki dystansujące lub wiązania, które są łatwo rozszczepiane przez esterazy osocza odtwarzając naturalną in vivo.
W korzystnym wykonaniu cząsteczką dystansującą kwas karboksylowy jest N-Boc-Phe.
W innym korzystnym wykonaniu cząsteczką dystansującą kwas karboksylowy jest N-Boc-Gly.
Dla umożliwienia zaatakowania słabego nukleofilu 5'OH przez mocno elektrododatnią grupę karbonylową w połączeniu z dobrymi grupami opuszczającymi przyłączonymi do grupy karbonylowej twórcy wynalazku zastosowali karbonylowe elektrofile.
PL 196 047 B1
Sposoby według wynalazku przezwyciężają problemy rozwiązań ze stanu techniki, gdzie do przyłączania środków sieciujących do cząsteczki VB12 używano mocnej zasady, która mogła spowodować denaturację VB12.
Korzystnie, dwufunkcyjnym karbonylowym elektrofilem jest karbonylodiimidazol.
Przedmiotem wynalazku jest także pochodna o wzorze (I) lub jej sól:
VB12-5'O-CO-NH-R1 (I) w którym R1 oznacza grupę heksylową, dodecylową, tetradecylową, heksadecylową, oktadecylową, aminoetylową, aminobutylową, aminoheksylową, aminododecylową, t-butylo-Phe, sukcynoilohydrazydylową, adypinoilohydrazydylową, Gly-OMe lub Gly-OH.
Pochodne VB12 według niniejszego wynalazku można połączyć z polimerami lub związać z nanocząstkami lub tym podobnymi otrzymując kompleksy witamin zgodnie z normalnymi sposobami znanymi specjalistom i opublikowanymi w literaturze patentowej i naukowej. Przykłady takich sposobów można znaleźć, na przykład, w europejskim opisie patentowym nr 0 220 030, australijskim opisie patentowym nr AU-664365 i opisach patentowych Stanów Zjednoczonych Ameryki nr nr US-5 449 720 i US-5 548 064.
Kompleksy witamin stosuje się do dostarczania leczonym środków lub substancji aktywnych, w szczególności hormonów, leków, proleków, enzymów, białek, peptydów, toksyn, immunogenów lub analogów DNA lub RNA. Leczonymi korzystnie są kręgowce, korzystniej zwierzęta weterynaryjne, domowe i gospodarskie oraz ludzie.
Polimery lub nanocząstki wytworzone z pochodnych VB12 według niniejszego wynalazku można przygotowywać jako kompozycję farmaceutyczną łącząc polimery lub nanocząstki z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem i/lub rozcieńczalnikiem zgodnie z normalnymi technikami farmaceutycznymi znanymi specjalistom. Kompozycje farmaceutyczne można przygotowywać w dowolny dopuszczalny sposób odpowiadający pożądanemu trybowi podawania określonemu przez specjalistów. Główne korzyści sposobów przedstawianych w niniejszym opisie obejmują wzrost wydajności otrzymywania pochodnych VB12 oraz oszczędności nakładów dzięki zmniejszeniu zużycia chemikaliów stosowanych podczas aktywowania VB12 lub uzyskiwanego kwasu aktywowanego.
Niniejszy wynalazek zostanie dalej opisany w odniesieniu do następujących przykładów, które w żaden sposób nie ograniczają jego zakresu.
Przykład 1. Wytwarzanie 5' OH-(heksylo)-VB12
Materiały: VB12 otrzymano z firmy Roussel-Uclaf.
VB12 M.cz. 1355, 4 CDI M.cz. 162,2 DMSO
Stały 1,1'-karbonylodiimidazol (CDI, 260 mg) dodano do cyjanokobalaminy (1,0 g, 0,74 mmola) poprzednio rozpuszczonej w dimetylosulfotlenku (12 ml) w temperaturze 30°C i mieszaninę mieszano przez 25 minut. Heksyloaminę (2,7 mmola) dodano w jednej porcji i mieszanie kontynuowano przez kolejne 24 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę ekstrahowano fenolem/dichlorometanem (1:1, 2x20 ml) i ponownie ekstrahowano wodą (2 x 20 ml z fenolu/dichlorometanu 1:4).
Mieszaninę oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na fenylosefarozie (50 g), wymywając niezmodyfikowaną VB12 przy użyciu 25% etanolu, a produkt przy użyciu 60% etanolu. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość ponownie zawieszono metodą działania ultradźwiękami przez 5 min w acetonie (50 ml). Mieszaninę przesączono i substancję stałą przemyto acetonem i wysuszono na powietrzu: wydajność 60%; temperatura topnienia 213-215°C (rozkład); MS (ESI) masa obliczona dla C70H101N15O15CoP 1482, stwierdzona 1505 (M + 23)+; UV (H2O) λ361(ε= 10500).
Przykład 2. Wytwarzanie 5'OH-(dodecylo)-VB12
Stały 1,1'-karbonylodiimidazol (CDI, 260 mg) dodano do cyjanokobalaminy (1,0 g, 0,74 mmola) uprzednio rozpuszczonej w dimetylosulfotlenku (12 ml) w temperaturze 30°C i mieszaninę mieszano przez 25 minut. Dodano w jednej porcji dodecyloaminę (2,7 mmola) i mieszanie kontynuowano przez
PL 196 047 B1 kolejne 24 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę ekstrahowano fenolem/dichlorometanem (1:1, 2x20 ml) i ekstrahowano z powrotem wodą (2x20 ml z fenolu/dichlorometanu 1:4). Mieszaninę oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na fenylosefarozie (50 g), wymywając niezmodyfikowaną VB12 przy użyciu 25% etanolu, a produkt przy użyciu 60% etanolu. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość ponownie zawieszono metodą działania ultradźwiękami przez 5 min w acetonie (50 ml). Mieszaninę przesączono i substancję stałą przemyto acetonem i wysuszono na powietrzu: wydajność 52%; temperatura topnienia 215-218°C (rozkład); MS (ESI) masa obliczona dla C76H113N15O15CoP 1566, stwierdzona 1589 (M + 23)+; UV (H2O) λ361 (ε = 16900).
Przykład 3. Wytwarzanie 5'OH-(tetradecylo)-VB12
Stały 1,1'-karbonylodiimidazol (CDI, 260 mg) dodano do cyjanokobalaminy (1,0 g, 0,74 mmola) uprzednio rozpuszczonej w dimetylosulfotlenku (12 ml) w temperaturze 30°C i mieszaninę mieszano przez 25 minut. Dodano w jednej porcji tetradecyloaminę (2,7 mmola) i mieszanie kontynuowano przez kolejne 24 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę ekstrahowano fenolem/dichlorometanem (1:1, 2x20 ml) i ekstrahowano z powrotem wodą (2x20 ml z fenolu/dichlorometanu 1:4). Mieszaninę oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na fenylosefarozie (50 g), wymywając niezmodyfikowaną VB12 przy użyciu 25% etanolu i produkt przy użyciu 60% etanolu. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość ponownie zawieszono w acetonie w płuczce ultradźwiękowej na 5 min (50 ml). Mieszaninę przesączono i substancję stałą przemyto acetonem i wysuszono na powietrzu: wydajność 46%; temperatura topnienia 228-233°C (rozkład); MS (ESI) masa obliczona dla C78H119N15O15CoP 1595, stwierdzona 1618 (M + 23)+; UV (H2O) λ361(ε= 13000).
Przykład 4. Wytwarzanie 5'OH-(heksadecylo)-VB12
Stały 1,1'-karbonylodiimidazol (CDI, 260 mg) dodano do cyjanokobalaminy (1,0 g, 0,74 mmola) uprzednio rozpuszczonej w dimetylosulfotlenku (12 ml) w temperaturze 30°C i mieszaninę mieszano przez minutę. Dodano w jednej porcji heksadecyloaminę (2,7 mmol) i mieszanie kontynuowano przez kolejne 24 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę ekstrahowano fenolem/dichlorometanem (1:1, 2x20 ml) i ponownie ekstrahowano wodą (2x20 ml z fenolu/dichlorometanu 1:4). Mieszaninę oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej na fenylosefarozie (50 g), wymywając nie zmodyfikowaną VB12 przy użyciu 25% etanolu i produkt przy użyciu 60% etanolu.
Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość poddawano działaniu ultradźwięków przez 5 min w acetonie (50 ml). Mieszaninę przesączono i substancję stałą przemyto acetonem i wysuszono na powietrzu: wydajność 48%; temperatura topnienia 223-227°C (rozkład); MS (ESI) masa obliczona dla C80H121N15O15CoP 1623, stwierdzona 1646 (M + 23)+; UV (H2O) λ361 (ε = 20000).
P r z y k ł a d 5. Wytwarzanie 5 'OH-(oktadecylo)-VB12
Materiały: VB12 otrzymano z firmy Rousell-Uclaf.
VB12 M.cz. 1355,4 CDI M.cz. 162,2 DMSO
VB12 (1,0 g, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w suchym DMSO (20 ml) w temperaturze pokojowej. Dodano stały karbonylodiimidazol (CDI; 400 mg, 3,3 równoważnika) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Mieszaninę reakcyjną podzielono na 4 równe części i dodano do 500 mg oktadecyloaminy (Aldrich) rozpuszczonej w acetonie, etanolu, dichlorometanie lub chloroformie.
Mieszaninę reakcyjną pozostawiono na 2 godziny, po czym sprawdzono metodami TLC iRP-HPLC dla określenia ilości powstałego produktu (5'OH-(oktadecylo)-VB12).
Następnie produkt oddzielono od nie przereagowanej VB12 dodając równą objętość wody iDCM, a następnie odwirowując na szybkoobrotowej wirówce Beckman (5K, 10 min). Usunięto fazę DCM i oddzielono produkt od nie zmodyfikowanej VB12 metodą kolumnowej chromatografii rzutowej (izopropanol 50%, amoniak 2%, woda 48%), po czym liofilizowano: wydajność 66%; temperatura topnienia 220-223°C (rozkład); MS (ESI) masa obliczona dla C82H125N15O15CoP 1651, stwierdzona 1674 (M + 23)+; UV (H2O) λ361 (ε = 17500).
PL 196 047 B1
Pr zy kł a d 6. Wytwarzanie 5'OH-(aminoetylo)-VB12
VB12 (1,0 g, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w suchym DMSO (20 ml) w temperaturze pokojowej. Dodano stały karbonylodiimidazol (CDI; 400 mg, 3,3 równoważnika) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Do mieszaniny reakcyjnej dodano diaminoetan (3,3 równoważnika). Mieszaninę mieszano przez 12 godzin, a następnie wylano do acetonu/octanu etylu (1:1, 200 ml) i odstawiono. Sklarowaną ciecz zdekantowano, a pozostałość ponownie zawieszono w acetonie (50 ml) poddając działaniu ultradźwięków przez 5 minut. Mieszaninę przesączono na filtrze ze spienionego szkła i substancję stałą przemyto acetonem. Produkt oczyszczono metodą chromatografii rzutowej na kolumnie z krzemionką stosując mieszaninę izopropanol 50%, amoniak 2%, woda 48%. Następnie produkt liofilizowano: wydajność 63%; temperatura topnienia 206-210°C (rozkład); TLC (iPrOH 30/n-BuOH 45/H2O 25/NH4OH 2), Rf = 0,22; MS (ESI) masa obliczona dla C66H94N16O15CoP 1441, stwierdzona 1441 (M)+; UV (H2O) λ361 (ε = 19900).
Pr zy kł a d 7. Wytwarzanie 5'OH-(aminobutylo)-VB12
VB12 (1,0 g, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w DMSO (35 ml) w temperaturze pokojowej. Dodano stały karbonylodiimidazol (CDI; 400 mg, 3,3 równoważnika) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. W jednej porcji dodano stały diaminobutan (3,3 równoważnika). Mieszaninę mieszano przez 12 godzin, a następnie wylano do acetonu/octanu etylu (1:1, 200 ml) i odstawiono. Ciecz sklarowaną zdekantowano, a pozostałość w acetonie (50 ml) poddawano działaniu ultradźwięków przez 5 minut. Mieszaninę przesączono na filtrze ze spienionego szkła i substancję stałą przemyto acetonem. Produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej (krzemionka, izopropanol 50%, amoniak 2%, woda 48%), po czym liofilizowano: wydajność 70%; temperatura topnienia 242-244°C (rozkład); TLC (iPrOH 30/n-BuOH 45/H2O 25/NH4OH 2), Rf = 0,08; MS (ESI) masa obliczona dla C69H98N16O15CoP 1469, stwierdzona 1469 (M)+; UV (H2O) λ361 (ε = 15500).
Pr zy k ł a d 8. Wytwarzanie 5'OH-(t-butylo-Phe)-VB12
VB12 (1,0 g, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w DMSO (35 ml) w temperaturze pokojowej. Dodano stały karbonylodiimidazol (CDI; 400 mg, 3,3 równoważnika) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. W jednej porcji dodano stałą t-butylo-Phe (3,3 równoważnika). Mieszaninę mieszano przez 12 godzin, a następnie wylano do mieszaniny aceton/octan etylu (1:1, 200 ml) i odstawiono. Ciecz sklarowaną zdekantowano, a pozostałość w acetonie (50 ml) poddawano działaniu ultradźwięków przez 5 minut. Mieszaninę przesączono na filtrze ze spienionego szkła i substancję stałą przemyto acetonem. Produkt oczyszczono metodą kolumnowej chromatografii rzutowej (krzemionka, izopropanol 50%, amoniak 2%, woda 48%), po czym liofilizowano.
Pr zy kł a d 9. Wytwarzanie 5'OH-(aminoheksylo)-VB12
VB12 (1,0 g, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w suchym DMSO (20 ml) w temperaturze pokojowej. Dodano stały karbonylodiimidazol (CDI; 400 mg, 3,3 równoważnika) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Do mieszaniny reakcyjnej dodano stały diaminoheksan (3,3 równoważnika). Mieszaninę mieszano przez 12 godzin, a następnie wylano do acetonu/octanu etylu (1:1, 200 ml) i odstawiono. Ciecz sklarowaną zdekantowano, a pozostałość w acetonie (50 ml) poddawano działaniu ultradźwięków przez 5 minut. Mieszaninę przesączono na filtrze ze spienionego szkła i substancję stałą przemyto acetonem. Produkt oczyszczono metodą chromatografii kolumnowej (izopropanol 50%, amoniak 2%, woda 48%), po czym liofilizowano: wydajność 98%; temperatura topnienia 230-233°C (rozkład); TLC (iprOH 30/n-BuOH 45/H2O 25/NH4OH 2) Rf = 0,11; MS (ESI) masa obliczona dla C70H102N16O15CoP 1497, stwierdzona 1497 (M)+; UV (H2O) λ361 (ε = 17000).
Pr zy kł a d 10. Wytwarzanie 5'OH-(aminododecylo)-VB12
VB12 (1,0 g, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w DMSO (35 ml) w temperaturze pokojowej. Dodano stały karbonylodiimidazol (CDI; 400 mg, 3,3 równoważnika) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, a następnie dodano diaminododekan (3,3 równoważnika) w jednej porcji. Mieszaninę mieszano przez 12 godzin, a następnie wylano do acetonu/octanu etylu (1:1, 200 ml) i odstawiono. Ciecz sklarowaną zdekantowano, a pozostałość ponownie zawieszono w acetonie (50 ml) i poddawano działaniu ultradźwięków przez 5 minut. Mieszaninę przesączono na filtrze ze spienionego szkła i substancję stałą przemyto acetonem. Produkt oczyszczono metodą kolumnowej chromatografii rzutowej (na krzemionce, stosując izopropanol 50%, amoniak 2%, wodę 48%), po czym liofilizowano: wydajność 68%; temperatura topnienia 156-158°C (rozkład); TLC (iprOH 30/n-BuOH 45/H2O 25/NH4OH 2) Rf = 0,27; MS (ESI) masa obliczona dla C76H114N16O15CoP 1581, stwierdzona 1581 (M)+; UV (H2O) λ361 (ε = 33000).
PL 196 047 B1
Pr zy kł a d 11. Wytwarzanie 5'OH-(sukcynoilohydrazydylo)-VB12
VB12 (1,0 g, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w DMSO (35 ml) w temperaturze pokojowej. Dodano stały karbonylodiimidazol (CDI; 400 mg, 3,3 równoważnika) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, a następnie w jednej porcji dodano stały sukcynoilodihydrazyd (3,3 równoważnika). Mieszaninę mieszano przez 12 godzin, a następnie wylano do mieszaniny aceton/octan etylu (1:1, 200 ml) i odstawiono. Ciecz sklarowaną zdekantowano, a pozostałość w acetonie (50 ml) poddawano działaniu ultradźwięków przez 5 minut. Mieszaninę przesączono na filtrze ze spienionego szkła i substancję stałą przemyto acetonem. Produkt oczyszczono metodą kolumnowej chromatografii rzutowej (izopropanol 50%, amoniak 2%, woda 48%), po czym liofilizowano: wydajność 68%; temperatura topnienia 206-208°C (rozkład); TLC (iprOH 30/n-BuOH 45/H2O 25/NH4OH 2) Rf = 0,36; MS (ESI) masa obliczona dla C68H96N18O17CoP 1581, stwierdzona 1581 (M)+; UV (H2O) λ361 (ε= 15700).
Pr zy kł a d 12. Wytwarzanie 5'OH-(adypinoilohydrazydylo)-VB12
VB12 (1,0 g, 1,0 równoważnik) rozpuszczono w DMSO (35 ml) w temperaturze pokojowej. Dodano stały karbonylodiimidazol (CDI; 400 mg, 3,3 równoważnika) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, a następnie w jednej porcji dodano stały adypinoilodihydrazyd (3,3 równoważnika). Mieszaninę mieszano przez 12 godzin, a następnie wylano do mieszaniny aceton/octan etylu (1:1, 200 ml) i odstawiono. Ciecz sklarowaną zdekantowano, a pozostałość w acetonie (50 ml) poddawano działaniu ultradźwięków przez 5 minut. Mieszaninę przesączono na filtrze ze spienionego szkła i substancję stałą przemyto acetonem. Produkt oczyszczono metodą kolumnowej chromatografii rzutowej na krzemionce (izopropanol 50%, amoniak 2%, woda 48%), po czym liofilizowano: wydajność 73%; temperatura topnienia 208-210°C (rozkład); TLC (iprOH 30/n-BuOH 45/H2O 25/NH4OH 2) Rf = 0,33; MS (ESI) masa obliczona dla C70H100N18O17CoP 1555, stwierdzona 1555 (M)+; UV (H2O) λ361 (ε= 21100).
Pr zy kł a d 13. Wytwarzanie VB12-glicyny z wiązaniem estrowym
Boc-fenyloalaninę (1,57 g, 0,0059 mol) i karbonylodiimidazol (1,01 g, 0,0062 mol) rozpuszczono w DMF (6 ml) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę przy energicznym wydzielaniu się CO2. Do roztworu estru aktywnego dodano kroplami roztwór VB12 (1,0 g) w DMSO (10 ml), a następnie DIEA (1,2 ml, 0,89 g, 0,0069 mol) i mieszanie kontynuowano w temperaturze pokojowej przez noc. Nie przereagowane Boc-Phe, CDI i DIEA usunięto dodając 90 ml acetonu dla wytrącenia VB12. Następnie produkt oczyszczono metodą chromatografii rzutowej na kolumnie z krzemionką (2,5x 50 cm) stosując mieszaninę rozpuszczalników zawierającą 45% butanolu, 30% propan-2-olu, 23% DW i 2% NH4OH. Oczyszczony produkt liofilizowano, a suchy proszek odbezpieczono dodając nie rozcieńczony TFA (1 ml/100 mg) przez 10 minut. Następnie produkt wytrącono dodając octan etylu i wysuszono.
Pr zy kł a d 14. Wytwarzanie VB12-glicyny z wiązaniem estrowym
Boc-glicynę (1,57 g, 0,0059 mol) i karbonylodiimidazol (1,01 g, 0,0062 mol) rozpuszczono wDMF (6 ml) i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę przy energicznym wydzielaniu się CO2. Do roztworu estru aktywnego dodano kroplami roztwór VB12 (1,0 g) w DMSO (10 ml), a następnie DIEA (1,2 ml, 0,89 g, 0,0069 mol) i mieszanie kontynuowano w temperaturze pokojowej przez noc. Nie przereagowane Boc-Gly, CDI i DIEA usunięto dodając 90 ml acetonu dla wytrącenia VB12. Następnie produkt oczyszczono metodą chromatografii rzutowej na kolumnie z krzemionką (2,5x 50 cm), stosując mieszaninę rozpuszczalników zawierającą 45% butanolu, 30% propan-2-olu, 23% DW i 2% NHOH. Oczyszczony produkt liofilizowano, a suchy proszek odbezpieczono dodając nie rozcieńczony. TFA (1 ml /100 mg) przez 10 minut. Następnie produkt wytrącono dodając octan etylu i wysuszono.
Pr zy kł a d 15. Wytwarzanie kwasu VB12-glicyny
Cyjanokobalaminę (1,0 g, 0,74 mmola) i 1,1'-karbonylodiimidazol (CDI, 260 mg) dodano po kolei do dimetylosulfotlenku (12 ml) w temperaturze 30°C i mieszaninę mieszano przez 25 minut.
W jednej porcji dodano OMe-Gly (2,7 mmola), a następnie trietyloaminę (200 μΐ) i mieszaninę mieszano przez 24 godzin w temperaturze pokojowej. Mieszaninę wylano do octanu etylu (30 ml) i odstawiono. Ciecz sklarowaną zdekantowano, a pozostałość poddawano działaniu ultradźwięków przez min wacetonie (50 ml). Mieszaninę przesączono i substancję stałą przemyto acetonem. Następnie pozostałość rozpuszczono w 0,1M HCli mieszano przez 30 min. Następnie surowy kwas oczyszczono na żywicy Dowex 1X4 eluowanej 2% kwasem octowym: wydajność 95%; temperatura topnienia 239-242°C (rozkład); TLC (iprOH 30/n-BuOH 45/10 25/NH4OH 2) Rf = 0,41; MS (ESI) masa obliczona dla
C66H90N15O17CoP 1456, stwierdzona 1456 (M)+; UV (H2O) λ361 (ε = 19800).
PL 196 047 B1
Pr zy kł a d 16. Określanie względnego powinowactwa doIF różnych pochodnych 5'O- VB12
Odczynniki
Bufor IF: BSA (bez VB12 i IF) (Sigma A-3902) rozpuszczono w stężeniu 1 mg/ml w buforze 0,1M fosforanu potasu o pH 7,5.
57
CoVB12: roztwór podstawowy Co (50 μΐ) (Kodak) rozcieńczono do 50 μΐ roztworu podstawowego w 25 ml buforu IF otrzymując roztwór 1 ng 57Co VB12/25 ml. 250 ng nie promieniotwórczej VB12 dodano do 25 ml promieniotwórczego roztworu 57co VB12 otrzymując roztwór 10 ng/ml.
Świński czynnik wewnętrzny: świński IF (Sigma) rozpuszczono w buforze IF w stężeniu 200 jednostek/ml i zamrożono w próbkach po 500 μl (porcje po 100 jednostek międzynarodowych) aż do chwili użycia. Węgiel aktywny pokryty BSA: BSA (1%) dodano do równej objętości zawierającego 5% węgla aktywnego roztworu 0,1 M buforu fosforanu potasu o pH 7,5 i mieszano łagodnie przez 30 minut.
Procedura
Dziesięciokrotne rozcieńczenia VB12 lub pochodnych VB12 w buforze IF prowadzono aż do stężenia 1 ng/ml. Do każdej próbki dodano równą objętość rozcieńczonego IF i inkubowano przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Do każdej próbki dodano równą objętość węgla aktywnego pokrytego BSA, i zmieszano przed odwirowaniem. Po odwirowaniu każdej próbki oddzielono ciecz sklarowaną i pastylkę osadu i oznaczono zawartość 57Co VB12 metodą zliczania w liczniku gamma. Dane przedstawiono jako % hamowania wiązania 57CoVB12w porównaniu z niezmodyfikowaną VB12.
Związek % wiązania w odniesieniu do witaminy B12
heksylo-5O-VB-i2 49
dodecylo-5O-VB12 35
tetradecylo-5'O-VB12 4,2
heksadecy-5'O-VB12 0,78
oktadecylo-5'O-VB12 0,57
aminoetylo-5'O-VB12 40
aminobutylo-5'O-VB12 27
t-butylo-Phe-5'O-VB12
aminoheksylo-5'O-VB12 25
aminododecylo-5'O-VB12 31
sukcynoilohydrazydylo-5'O-VB12 37
adypinoilohydrazydylo-5'O-VB12 29
fenyloalanylo-5'O-VB12
glicylo-5'O-VB12
HO-Gly-5'O-VB12 25
Specjaliści zrozumieją, że opisany niniejszym wynalazek może być poddawany zmianom i modyfikacjom odbiegającym od przykładowo opisanych. Należy rozumieć, że wynalazek obejmuje wszystkie takie zmiany i modyfikacje. Wynalazek obejmuje także wszystkie etapy, cechy charakterystyczne, kompozycje i związki omawiane lub powoływane w niniejszym opisie, osobno lub razem oraz dowolne i wszystkie połączenia dowolnych dwóch lub więcej takich etapów lub cech charakterystycznych.
Odnośniki literaturowe
1. Russell-Jones G. J. “The use of the vitamin B12 transport system as a carrier for the oral delivery of peptides, proteins and nanoparticles.” Proc. 23-rd International Symposium on Controlled Release o f Bioactive Materials, 1996.
2. Anton, D. L. Hogenkamp, H. P. C., Walker, T. E., and Matwiyoff, N. A. “Carbon-13 nuclear magnetic resonance studies of monocarboxylic acids of cyanocobalamin. Assignments of the b-, dand e-monocarboxylic acids.” J. Am. Chem. Soc., 102: 2215, 1980.
PL 196 047 B1
3. Russell-Jones, G. J., Westwood, S. W i Habberfield, A. D. “Vitamin B12 mediated oral delivery systems for Granulocyte-Colony Stimulating Factor and erythropoietin.” Bioconj. Chem., 6, 459465, 1995.
4. Toraya, T. and Fukui, S. “The synthesis of several immobilized derivatives of vitamin B12 coenzyme and their useas affinity absorbents for a study of interactions of diol dehydrase with the coenzyme.” J. Biol. Chem., 255, 3520, 1980.
5. Annunziato, M. E., Patel, U. S., Ranade, M., and Palumbo, P. S. “p-Maleimidophenyl isocyanate: A novel heterobifunctional linker for hydroxyl to thiol coupling.” Bioconj. Chem., 4, 212, 1993.
6. Westwood, S. W., and Russell-Jones, G. J. “Vitamin B12 mediated delivery systems for GCSF and EPO.” (US-08/064873; US-5548064), 1993.
7. Habberfield, A. D., Kinstler, O.B., and Pitt, C. G. “Conjugates of VB12 and proteins.” (US-5574018), 1996.

Claims (17)

1. Sposób wytwarzania pochodnych VB12 do wiązania z polimerem, nanocząstką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem, znamienny tym, że obejmuje etapy poddawania grupy 5'OH VB12 lub jej analogu reakcji i z dwufunkcyjnym karbonylowym elektrofilem, a następnie poddawania tak wytworzonego związku pośredniego reakcji z nukleofilową cząsteczką dystansującą, przy czym stosuje się dwufunkcyjny karbonylowy elektrofil wybrany z grupy składającej się z karbonylodiimidazolu, fosgenu, trifosgenu, węglanu N,N'-disukcynoimidylu, karbonylodipiperydyny, 1,1'-karbonylodi(1,2,4-triazolu), di(2-pirydylo)ketonu lub węglanu di(1-benzotriazolilu), a nukleofilowa cząsteczka dystansująca jest podstawiona grupą aminową lub grupą hydrazydylową.
2. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że dwufunkcyjnym karbonylowym elektrofilem jest karbonylodiimidazol.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą jest oktadecyloamina.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą jest diaminoetan.
5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą jest diaminobutan.
6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą jest diaminoheksan.
7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą jest diaminododekan.
8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą jest diaminooktadekan.
9. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą jest aminokwas lub peptyd.
10. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą jest dihydrazyd.
11. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że dihydrazydem jest dihydrazyd kwasu bursztynowego.
12. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że dihydrazydem jest dihydrazyd kwasu adypinowego.
13. Sposób wytwarzania pochodnej VB12 do wiązania z polimerem, nanocząstką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem, znamienny tym, że obejmuje etapy poddawania cząsteczki dystansującej kwasu karboksylowego reakcji z dwufunkcyjnym karbonylowym elektrofilem, a następnie poddawania tak wytworzonego związku pośredniego reakcji z grupą 5' OH VB12, przy czym stosuje się dwufunkcyjny karbonylowy elektrofil wybrany z grupy składającej się z karbonylodiimidazolu, fosgenu, trifosgenu, węglanu N,N'-disukcynoimidylu, karbonylodipiperydyny, 1,1'-karbonylodi(1,2,4-triazolu), di(2-pirydylo)ketonu lub węglanu di(1-benzotriazolilu).
14. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że dwufunkcyjnym karbonylowym elektrofilem jest karbonylodiimidazol.
15. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą kwas karboksylowy jest N-Boc-Phe.
16. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że cząsteczką dystansującą kwas karboksylowy jest N-Boc-Gly.
PL 196 047 B1
17. Pochodna VB12 o wzorze (I) lub jej sól:
VB12-O-CO-NH-R1 (I) 1 w którym R1 oznacza grupę heksylową, dodecylową, tetradecylową, heksadecylową, oktadecylową, aminoetylową, aminobutylową, aminoheksylową, aminododecylową, t-butylo-Phe, sukcynoilohydrazydylową, adypinoilohydrazydylową, Gly-OMe lub Gly-OH.
PL99344686A 1998-06-12 1999-06-11 Sposoby wytwarzania pochodnych witaminy B 12 do wiązania z polimerem, nanocząsteczką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem, oraz pochodna witaminy B 12 PL196047B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AUPP4050A AUPP405098A0 (en) 1998-06-12 1998-06-12 Novel methods of preparation of vitamin b12 derivatives suitable for conjugation to pharmaceuticals
PCT/AU1999/000462 WO1999065930A1 (en) 1998-06-12 1999-06-11 Vitamin b12 derivatives and methods for their preparation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL344686A1 PL344686A1 (en) 2001-11-19
PL196047B1 true PL196047B1 (pl) 2007-11-30

Family

ID=3808296

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL99344686A PL196047B1 (pl) 1998-06-12 1999-06-11 Sposoby wytwarzania pochodnych witaminy B 12 do wiązania z polimerem, nanocząsteczką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem, oraz pochodna witaminy B 12

Country Status (10)

Country Link
US (1) US6150341A (pl)
EP (1) EP1086118A4 (pl)
JP (1) JP4794735B2 (pl)
KR (1) KR20010071450A (pl)
AU (1) AUPP405098A0 (pl)
CA (1) CA2334598A1 (pl)
IL (1) IL139848A0 (pl)
NZ (1) NZ538085A (pl)
PL (1) PL196047B1 (pl)
WO (1) WO1999065930A1 (pl)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5739313A (en) * 1995-11-13 1998-04-14 Regents Of The University Of Minnesota Radionuclide labeling of vitamin B12 and coenzymes thereof
US6806363B1 (en) * 1999-04-16 2004-10-19 Mayo Foundation For Medical Education & Research Cobalamin conjugates useful as antitumor agents
AUPQ071299A0 (en) * 1999-06-02 1999-06-24 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Vitamin directed dual targeting therapy
MXPA02003772A (es) 1999-10-15 2005-04-28 Mayo Foundation Conjugados de cobalamina, utiles como agentes para obtencion de imagen y como agentes terapeuticos.
US7591995B2 (en) * 1999-10-15 2009-09-22 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging and therapeutic agents
AU4243400A (en) * 1999-10-15 2001-04-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging agents and as antitumor agents
IL153586A0 (en) * 2000-06-28 2003-07-06 Ward Page Faulk Targeted delivery of cytotoxic drugs a) to activated lymphocytes in patients with transplanted organs, b) as radiosensitizers to cancer cells in patients undergoing radiation therapy, and c) in vitamin-binding proteins as drug carriers in the diagnosis and treatment of cancer
US20040028686A1 (en) * 2001-06-28 2004-02-12 Faulk Ward Page Targeted delivery of cytotoxic drugs a) to activated lymphocytes in patients with transplated organs, b) as radiosensitizers to cancer cells in patients undergoing radiation therapy, and c) in vitamin-binding proteins as drug carriers in the diagnosis and treatment of cancer
EP1754712A3 (en) * 2000-10-25 2009-01-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transcobalamin binding conjugates useful for treating abnormal cellular proliferation
EP1334114A2 (en) * 2000-10-25 2003-08-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research Transcobalamin binding conjugates useful for treating abnormal cellular proliferation
GB2374010B (en) * 2001-02-26 2004-12-29 Council Scient Ind Res Novel vitamin B12 - biodegradable micro particulate conjugate carrier systems for peroral delivery of drugs, therapeutic peptides/proteins and vaccines
EP1399215A4 (en) * 2001-06-08 2004-12-22 Utah Ventures Ii L P TISSUE-SPECIFIC ENDOTHELM MEMBRANE PROTEINS
CA2461705A1 (en) * 2001-09-28 2003-04-03 Mayo Foundation For Medical Education And Research Coadministration of transport protein with conjugated cobalamin to deliver agents
US7232805B2 (en) 2003-09-10 2007-06-19 Inflabloc Pharmaceuticals, Inc. Cobalamin conjugates for anti-tumor therapy
BRPI0418010A (pt) * 2003-12-22 2007-04-17 Solidago Ag derivados da cobalamina úteis para diagnóstico e tratamento de proliferação celular anormal
WO2006124870A1 (en) * 2005-05-17 2006-11-23 Cargill, Incorporated Granular lecithins, granular lysolecithins, process for their production and compositions containing them
US20110092416A1 (en) * 2007-03-05 2011-04-21 Robert Patrick Doyle Vitamine B12 - Peptide Conjugates for Oral Delivery
WO2008109068A2 (en) * 2007-03-05 2008-09-12 Syracuse University A conjugate of insulin and vitamin b12 for oral delivery
WO2011130716A2 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Access Pharmaceuticals, Inc. A nanostructures containing vitamin b12 for facilitated delivery of drugs across biological barriers
WO2012030745A1 (en) * 2010-08-30 2012-03-08 Access Pharmaecuticals, Inc MULTIVITAMIN TARGETING OF RNAi THERAPEUTICS
KR20140026396A (ko) * 2011-03-08 2014-03-05 어섹스 팔마큐티칼스 인코포레이티드 생물학적 막을 가로질러 활성물질의 전달을 위한 표적화된 나노담체 시스템
WO2014005601A1 (en) * 2012-07-02 2014-01-09 Pharmathen S.A. A process for the preparation of solifenacin or a salt thereof
CN103163306B (zh) * 2013-02-05 2015-06-17 北京九强生物技术股份有限公司 25羟维生素d检测试剂盒及其制备方法
WO2015126841A1 (en) 2014-02-18 2015-08-27 Plasmatech Biopharmaceuticals, Inc. Nutritional and therapeutic mucoadhesive formulations
CN106749461B (zh) * 2016-11-11 2020-10-27 暨南大学 可自主装形成纳米微粒的维生素b12衍生物及制备方法与应用

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4209614A (en) * 1978-05-30 1980-06-24 E. R. Squibb & Sons, Inc. Vitamin B12 derivative suitable for radiolabeling
DK158224C (da) * 1985-08-23 1990-09-24 Danske Sukkerfab Fremgangsmaade til fremstilling af indolderivater
US5807832A (en) * 1987-06-09 1998-09-15 Biotech Australia Pty Limited Oral delivery of biologically active substances bound to vitamin B12
IE921050A1 (en) * 1991-04-02 1992-10-07 Biotech Australia Pty Ltd Oral delivery systems for microparticles
ATE208039T1 (de) * 1991-05-22 2001-11-15 Dade Behring Marburg Gmbh Bestimmungsmethoden unter verwendung von induzierter lumineszenz
US5294536A (en) * 1992-04-23 1994-03-15 Pb Diagnostic Systems, Inc. Conjugates
DE4239815A1 (de) * 1992-11-26 1994-06-01 Boehringer Mannheim Gmbh Verbesserte B¶1¶¶2¶-Konjugate
EP0698040A4 (en) * 1993-05-20 1999-01-07 Biotech Australia Pty Ltd LHRH ANTAGONISTS
US5548064A (en) * 1993-05-24 1996-08-20 Biotech Australia Pty Limited Vitamin B12 conjugates with EPO, analogues thereof and pharmaceutical compositions
US5449720A (en) * 1993-05-24 1995-09-12 Biotech Australia Pty Limited Amplification of the VB12 uptake system using polymers
JPH06336494A (ja) * 1993-05-27 1994-12-06 Nippon Oil Co Ltd 疎水性ビタミンｂ１２誘導体
JPH10502334A (ja) * 1994-04-08 1998-03-03 レセプタゲン・コーポレーション 受容体調節剤およびこれに関連した方法
US5574018A (en) * 1994-07-29 1996-11-12 Amgen Inc. Conjugates of vitamin B12 and proteins
AU730969B2 (en) * 1995-10-19 2001-03-22 University Of Washington Discrete-length polyethylene glycols
JP3705657B2 (ja) * 1996-09-05 2005-10-12 信越化学工業株式会社 Ｎ，ｎ−ジアルキルカルバミン酸２−ニトロベンジルエステル類の製造方法
AU6946998A (en) * 1997-04-24 1998-11-13 American Home Products Corporation Process for the synthesis of 4-{6-(hexylcarbamoyloxy) hexylcarbamoyloxy}-piperidine-1- carboxylic acid 4-phenoxyphenyl ester
US5972917A (en) * 1998-05-29 1999-10-26 Bone Care Int Inc 1 α-hydroxy-25-ene-vitamin D, analogs and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
PL344686A1 (en) 2001-11-19
WO1999065930A1 (en) 1999-12-23
IL139848A0 (en) 2002-02-10
CA2334598A1 (en) 1999-12-23
JP2002518405A (ja) 2002-06-25
US6150341A (en) 2000-11-21
KR20010071450A (ko) 2001-07-28
JP4794735B2 (ja) 2011-10-19
AUPP405098A0 (en) 1998-07-02
EP1086118A4 (en) 2002-05-02
EP1086118A1 (en) 2001-03-28
NZ538085A (en) 2006-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL196047B1 (pl) Sposoby wytwarzania pochodnych witaminy B 12 do wiązania z polimerem, nanocząsteczką lub środkiem leczniczym, białkiem lub peptydem, oraz pochodna witaminy B 12
CN1092987C (zh) 使用多糖将治疗剂传递到受体
US7531162B2 (en) Transcobalamin receptor binding conjugates useful for treating abnormal cellular proliferation
JP7011080B2 (ja) 修飾オリゴヌクレオチドおよび修飾オリゴヌクレオチドの合成に使用可能な化合物
JP2005508332A (ja) 薬剤を送達するための、輸送タンパク質とコンジュゲートコバラミンとの同時投与
US20230148277A1 (en) Disulfide bond containing compounds and uses thereof
Wierzba et al. Vitamin B12 suitably tailored for disulfide-based conjugation
CN111620927A (zh) 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
KR102440763B1 (ko) 항체-약물 접합체의 중간체를 제조하는 원-포트 방법
US20190117680A1 (en) Dendrimeric platform for controlled release of drugs
US20120129919A1 (en) Polycationic amphiphilic cyclooligosaccharides and the use thereof as molecular transporters
US20080194801A1 (en) Robust multidentate ligands for diagnosis and anti-viral drugs for influenza and related viruses
CN111670053B (zh) 一种抗体药物偶联物中间体的一锅法制备工艺
AU2003204343B2 (en) Vitamin B12 derivatives and methods for their preparation
AU4490099A (en) Vitamin B12 derivatives and methods for their preparation
WO2002042318A2 (en) Transcobalamin receptor binding conjugates for neutron capture therapy
EP1754712A2 (en) Transcobalamin binding conjugates useful for treating abnormal cellular proliferation