PL195242B1 - Polipeptyd, polinukleotyd, wektor, komórka gospodarza, kompozycja obejmująca polipeptyd, kompozycjaobejmująca polinukleotyd, kompozycja obejmująca wektor, zastosowanie polipeptydu, zastosowanie polinukleotydu i zastosowanie wektora - Google Patents
Polipeptyd, polinukleotyd, wektor, komórka gospodarza, kompozycja obejmująca polipeptyd, kompozycjaobejmująca polinukleotyd, kompozycja obejmująca wektor, zastosowanie polipeptydu, zastosowanie polinukleotydu i zastosowanie wektoraInfo
- Publication number
- PL195242B1 PL195242B1 PL98339366A PL33936698A PL195242B1 PL 195242 B1 PL195242 B1 PL 195242B1 PL 98339366 A PL98339366 A PL 98339366A PL 33936698 A PL33936698 A PL 33936698A PL 195242 B1 PL195242 B1 PL 195242B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- fragment
- region
- hbv
- amino acids
- polypeptide
- Prior art date
Links
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 title claims abstract description 132
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 130
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 123
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 121
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 176
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 117
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 40
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 claims abstract description 36
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 13
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 108010044241 tetanus toxin fragment C Proteins 0.000 claims description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 4
- 101150018266 degP gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101150007310 htrA gene Proteins 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims 1
- XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N Aspergillomarasmine A Chemical group OC(=O)C(N)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 64
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 63
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 22
- 230000004044 response Effects 0.000 description 20
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 15
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 13
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 12
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 11
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 101100111953 Arabidopsis thaliana CYP734A1 gene Proteins 0.000 description 5
- 101150100308 BAS1 gene Proteins 0.000 description 5
- 101100165166 Barbarea vulgaris LUP5 gene Proteins 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100523490 Dictyostelium discoideum rab8A gene Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N almurtide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CO[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@@H](NC(C)=O)C=O NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 2
- 229920003134 Eudragit® polymer Polymers 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700015872 N-acetyl-nor-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150010882 S gene Proteins 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical group C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- -1 for example Chemical class 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N (2s)-2,5-bis(3-aminopropylamino)-n-[2-(dioctadecylamino)acetyl]pentanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CC(=O)NC(=O)[C@H](CCCNCCCN)NCCCN)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N 0.000 description 1
- YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N (4R)-4-[[(2S,3R)-2-[acetyl-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4-[(1R)-1-carboxyethoxy]-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)O)C(N)=O)C1[C@H](N)[C@@H](O[C@@H](C(=O)O)C)[C@H](O)[C@H](O1)CO YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 1-(2-azaniumylacetyl)pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 101000948583 Bacillus subtilis (strain 168) GTP pyrophosphokinase YjbM Proteins 0.000 description 1
- 101100404144 Bacillus subtilis (strain 168) nasD gene Proteins 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 1
- 229920000623 Cellulose acetate phthalate Polymers 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000714177 Murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Chemical group 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 101150075200 S-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000002096 anti-tetanic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 229940081734 cellulose acetate phthalate Drugs 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 108010004164 hepatitis B surface antigen presurface protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010077284 hepatitis B surface antigen presurface protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N mifamurtide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 1
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 1
- 108700007621 mifamurtide Proteins 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 101150044129 nirB gene Proteins 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Chemical group 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 150000003148 prolines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
1. Polipeptyd zawierajacy (i) fragment C toksyny tezcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach zlaczony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia watroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym poli- peptyd ten indukuje przeciwcialo, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV. 7. Polinukleotyd kodujacy polipeptyd zawierajacy (i) fragment C toksyny tezcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach zlaczony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia watroby typu B (HBV) lub jego frag- mentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 amino- kwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwcialo, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV. 8. Wektor zawierajacy polinukleotyd kodujacy polipeptyd zawierajacy (i) fragment C toksyny tezcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach zlaczony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia watroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwcialo, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie zwiazany z sekwencja regulatorowa. 12. Kompozycja obejmujaca polipeptyd, znamienna tym, ze zawiera polipeptyd zawierajacy (i) fragment C toksyny tezcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach zlaczony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapa- lenia watroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwcialo, które rozpozna- je region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV oraz farmaceutycznie dopuszczalny nosnik lub rozcienczalnik. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest polipeptyd, polinukleotyd, wektor, komórka gospodarza, kompozycja obejmująca polipeptyd, kompozycja obejmująca polinukleotyd, kompozycja obejmująca wektor, zastosowanie polipeptydu, zastosowanie polinukleotydu i zastosowanie wektora. Szczegółowo wynalazek dotyczy polipeptydów fuzyjnych pochodzących z antygenu powierzchniowego wirusa zapalenia wątroby typu B i jego zastosowania w kompozycji farmaceutycznej.
Wirusowe zakażenie wątroby i wynikające z tego choroby włączając chroniczne choroby wątroby, marskość wątroby i raka wątrobowokomórkowego, są głównym problemem zdrowotnym na świecie. Systematyczne szczepienia osobników przed ryzykiem ekspozycji na wirusa były główną metodą kontrolowania zakażeń. Pierwsza szczepionka oparta o wirus zapalenia wątroby typu B (HBV) była wytwarzana przez oczyszczenie i inaktywację antygenu powierzchniowego (HBsAg) HBV, otrzymanego z osocza nosicieli chronicznych. Wkrótce po tym nastąpiło wytworzenie HBsAg przy zastosowaniu techniki rekombinacji DNA. Jednakże, znacząca część osobników nie wytwarzała odpowiedzi na HBsAg obecny w preparatach szczepionek i sądzi się, że osobnicy ci pozostają wrażliwi na zakażenie HBV.
Przedmiotem wynalazku jest polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV.
Korzystnie polipeptyd według wynalazku zawiera fragment C toksyny tężcowej o co najmniej 100 aminokwasach, ewentualnie polipeptyd według wynalazku może zawierać pełnej długości fragment C.
Także korzystnie, polipeptyd może zawierać fragment regionu pre-S1 o co najmniej 20 aminokwasach i/lub fragment regionu pre-S2 o co najmniej 20 aminokwasach, bardziej korzystnie polipeptyd zawiera aminokwasy 20 do 47 lub 21 do 47 regionu pre-S1, także korzystnie polipeptyd zawiera aminokwasy 1 do 26 lub 14 do 32 regionu pre-S2.
Fragment C toksyny tężcowej, albo jego fragment, może być przyłączony do regionu pre-S1 lub jego fragmentu wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV), i/lub regionu pre-S2 HBV lub jego fragmentu przez „zawiasowy” region łącznika. Podobnie, jeżeli obecne są oba fragmenty regionu pre-S1 i fragment regionu pre-S2, mogą one być połączone razem przez „zawiasowy” region łącznika.
Przedmiotem wynalazku jest także polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV.
Przedmiotem wynalazku jest również wektor zawierający polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie związany z sekwencją regulatorową.
Korzystnie w wektorze według wynalazku wspomniana sekwencja regulatorowa zawiera sekwencję promotorową htrA.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto komórka gospodarza zawierająca wektor zawierający polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie związany z sekwencją regulatorową.
W korzystnym wykonaniu, komórka gospodarza stanowi ją komórka bacterium.
Polipeptydy, polinukleotydy, wektory i komórki gospodarzy według wynalazku mogą być stosowane do zapobiegania i leczenia zakażenia wirusowym zapaleniem wątroby typu B. Dlatego, w dalszym aspekcie, wynalazek dotyczy kompozycji obejmującej polipeptyd, charakteryzującej się tym, że zawiera polipeptyd obejmujący (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6
PL 195 242 B1 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub rozcieńczalnik.
Następnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja obejmująca polinukleotyd, charakteryzująca się tym, że zawiera polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub rozcieńczalnik.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja obejmująca wektor, charakteryzująca się tym, że zawiera wektor zawierający polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie związany z sekwencją regulatorową oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub rozcieńczalnik.
Przedmiotem wynalazku jest również polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV do stosowania w sposobie wytwarzania przeciwciał u człowieka, które rozpoznają epitopy w regionach pre-S1 i/lub pre-S2 HBV.
Przedmiotem wynalazku jest także polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV do stosowania w sposobie wytwarzania przeciwciał u człowieka, które rozpoznają epitopy w regionach pre-S1 i/lub pre-S2 HBV.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie polipeptydu zawierającego (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania zakażeniom HBV u ludzi lub zwierząt.
Następnym, przedmiotem wynalazku jest zastosowanie polinukleotydu kodującego polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania zakażeniom HBV u ludzi lub zwierząt.
Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie wektora zawierającego polinukleotyd kodujący polipeptyd obejmujący (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie związany z sekwencją regulatorową do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania zakażeniom HBV u ludzi lub zwierząt.
Polipeptydy według wynalazku mogą być stosowane do indukowania odpowiedzi przeciwciał u zwierzęcia w celu wytworzenia przeciwciał które rozpoznają epitopy z regionów pre-S1 i/lub pre-S2 HBV. Dlatego niniejszy wynalazek dostarcza sposobu wytwarzania przeciwciał które rozpoznają epitopy w obrębie regionów pre-S1 i pre-S2 HBV który to sposób obejmuje podawanie polipeptydu, polinukleotydu lub wektora według wynalazku ssakowi. Otrzymane przeciwciała mogą być przeciwciałami poliklonalnymi lub przeciwciałami monoklonalnymi, lub ich fragmentami. Przeciwciała te mogą być stosowane w sposobie leczenia zakażeń HBV u człowieka lub zwierzęcia.
Poza potencjalnym zastosowaniem leczniczym polipeptydów, polinukleotydów, wektorów według wynalazku, mogą one być także zastosowane jako narzędzia do oznaczenia na przykład, antygenowych
PL 195 242 B1 determinanat w regionach pre-S1 i/lub pre-S2 powierzchniowego antygenu (HBsAg). Uważa się, że oba regiony pełnią ważną rolę w wzmocnieniu odpowiedzi anty-HBsAg, co zapobiega przyczepianiu się wirusa do hepatocytów i ujawnia przeciwciała skuteczne w uprzątaniu wirusa, stymulując komórkową odpowiedź immunologiczną omijając genetyczny brak odpowiedzi tylko w stosunku do regionu S.
A. Polipeptydy
Polipeptydy według wynalazku zawierają fragment C toksyny tężcowej lub epitop zawierający jego fragment przyłączony do fragmentu regionu pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) i/lub fragmentu regionu pre-S2 HBV.
Gen strukturalny toksyny tężca był sklonowany i zsekwencjonowany (Fairweather i wsp. (1886), J. Bacteriol, 165, str. 21-27). Fragment C jest polipeptydem 50 kDa generowanym przez rozszczepienie papainą i zawiera lub zasadniczo odpowiada 451 aminokwasom w zakończeniu C. Fragmenty fragmentu C toksyny tężcowej, które zawierają epitopy mogą być także stosowane w polipeptydach według wynalazku. Fragmenty te będą zawierały co najmniej 5 lub 6 aminokwasów, korzystnie co najmniej 10 aminokwasów, bardziej korzystnie 15, 20, 50 lub 100 aminokwasów. Szczególnie korzystne fragmenty obejmują aminokwasy 80 do 180, który jest dobrym epitopem komórek B i aminokwasy od około 83 do 103 i 409 do 420, które są dobrymi epitopami komórek T (numeracja zakłada, że aminokwas 1 fragmentu C jest aminokwasem 864 kompletnej toksyny tężca).
Korzystnie, fragment regionu pre-S1 i pre-S2 zawiera co najmniej 5 aminokwasów, korzystnie 6 aminokwasów, bardziej korzystnie 10, 15 lub 20 aminokwasów. Fragment może obejmować, na przykład aminokwasy 1 do 19, 20 do 39, 40 do 59, 60 do 79, 80 do 99 lub 100 do 119 w pre-S1 lub 1 do 19, 20 do 39 lub 40 do 55 w pre-S2. Odpowiednie fragmenty, które mogą być stosowane w polipeptydach według wynalazku są opisane w przykładach. Szczególnie korzystne fragmenty obejmują aminokwasy 20 lub 21 do 47 w pre-S1 (miejsca wiążące hepatocytów) i aminokwasy 1 do 26 i 14 do 32 w pre-S2.
Ponadto, sekwencja aminokwasów fragmentu C toksyny tężca i fragmenty pre-S1 i pre-S2 mogą być modyfikowane dostarczając polipeptydów według wynalazku. Na przykład, modyfikacja może być prowadzona w celu wzmocnienia immunogeniczności polipeptydów według wynalazku. Podstawienia aminokwasów mogą być przeprowadzone na przykład z podstawieniem 1, 2 lub 3 do 10 lub 30 sprawiając, że modyfikowany polipeptyd pozostaje epitopem.
Konserwatywne podstawienia mogą być wykonane, na przykład według poniższej tabeli. Aminokwasy w tym samym bloku w drugiej kolumnie i korzystnie w tej samej linii w trzeciej kolumnie mogą być podstawione każdy z każdym.
| Alifatyczne | Nie polarne | GAP |
| ILP | ||
| Polarne - bez ładunku | C S T M | |
| N Q | ||
| Polarne - z ładunkiem | D E | |
| K R | ||
| Aromatyczne | H F W Y |
Fragment C toksyny tężca może być przyłączony do fragmentu regionu pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub fragmentu regionu pre-S2 HBV poprzez „zawiasowy” region łącznika. Podobnie, jeżeli obecne są oba fragmenty regionu pre-S1 i fragment regionu pre-S2, mogą one być połączone razem przez „zawiasowy” region łącznika.
Region „zawiasowy” łącznika jest regionem przeznaczonym do promowania niezależnego fałdowania zarówno fragmentu C toksyny tężcowej, fragmentu regionu pre-S1 i fragmentu regionu pre-S2, dostarczając zarówno rozdzielenia przestrzennego jak i czasowego pomiędzy domenami.
Region zawiasowy typowo jest sekwencją kodującą dużą proporcję aminokwasów proliny i/lub glicyny. Region zawiasowy może składać się z jednej lub więcej jednostek dwupeptydu glicyna-prolina. Alternatywnie, region zawiasowy może zawierać zakończony karboksylem fragment C toksyny tężca.
PL 195 242 B1
Region zawiasowy może, na przykład zawierać aż do około piętnastu aminokwasów, na przykład co najmniej 4 i korzystnie od 6 do 14 aminokwasów, ilość aminokwasów nadaje elastyczność pomiędzy różnymi domenami polipeptydowymi.
W jednej postaci wynalazku, region zawiasowy może zasadniczo odpowiadać domenie zawiasowej przeciwciała immunoglobuliny. Region zawiasowy przeciwciał IgG jest bogaty zwłaszcza w proliny (T.E. Michaelson i wsp., (1977) J. Biol. Chem. 252, str. 883-9), które są uznawane za dostarczające giętkich połączeń pomiędzy wiązaniem antygenu i ogonem domeny.
Glicyna może być podstawiona innymi aminokwasami, zwłaszcza bez przestrzennych łańcuchów bocznych, jak alanina, seryna, asparagina i treonina.
W korzystnej postaci wynalazku region zawiasowy jest łańcuchem czterech lub więcej aminokwasów o sekwencji objętej wzorem:
-[X]p-Pro-[Y]q-Pro-]Z]rw którym Pro oznacza prolinę, X i Y każdy oznacza glicynę, lub aminokwas mający nieprzestrzenny łańcuch boczny; Z oznacza każdy aminokwas; p oznacza dodatnią liczbą całkowitą; q oznacza dodatnią liczbą całkowitą od jednego do dziesięciu; i r oznacza zero lub dodatnią liczbą całkowitą większa od zera.
B. Polinukleotydy i wektory
Polinukleotydy według wynalazku zawierają sekwencję kwasów nukleinowych kodującą polipeptydy według wynalazku. Polinukleotydy według wynalazku mogą zawierać DNA lub RNA. Mogą one także być polinukleotydami które zawierają wewnątrz syntetyczny lub modyfikowany nukleotyd. Ilość różnych typów modyfikacji w oligonukleotydy są znane ze stanu techniki. Obejmują one szkielety metylofosfonianowe i fosforotiolowe łańcuchów, dodatek akrydyny lub łańcuchy polilizynowe przy zakończeniu 3' i/lub 5' tych cząsteczek. Do celów niniejszego wynalazku, zrozumiałym jest, że opisane polinukleotydy mogą być modyfikowane każdym sposobem dostępnym w stanie techniki. Modyfikacje takie mogą być prowadzone w celu wzmocnienia aktywności in vivo lub okresu trwania polinukleotydów według wynalazku.
Korzystnie polinukleotydy według wynalazku zawierają polinukleotydy kodujące każdy z opisanych powyżej polipeptydów według wynalazku. Będzie zrozumiałym dla fachowca, że liczne różne polinukleotydy mogą kodować ten sam polipeptyd jako wynik degeneracji kodu genetycznego.
Polinukleotydy według wynalazku mogą być włączone do rekombinacyjnego wektora zdolnego do replikacji. Wektor ten może być stosowany do replikacji kwasu nukleinowego w dopasowanych komórkach gospodarza. Dlatego zatem, w kolejnej postaci wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania polinukleotydów według wynalazku, polegający na wprowadzaniu polinukleotydu według wynalazku do wektora zdolnego do replikacji, wprowadzeniu tego wektora do dopasowanej komórki gospodarza i hodowaniu komórki gospodarza w warunkach które doprowadzają do replikacji tego wektora. Wektor może być odzyskiwany z komórek gospodarza. Odpowiednie komórki gospodarza obejmują takie bakterie jak E. coli, a także drożdże, linie komórkowe ssacze i inne komórkowe linie eukariotyczne, na przykład komórki owadzie Sf9.
Korzystnie, polinukleotyd według wynalazku w wektorze jest związany operacyjnie z sekwencją regulatorową, która jest zdolna do zapewnienia ekspresji sekwencjom kodującym w komórkach gospodarza, to znaczy wektor jest wektorem ekspresyjnym. Termin „związany operacyjnie” odnosi się do leżących obok siebie składników, przy czym opisane składniki są w takim do siebie stosunku, który pozwala na funkcjonowanie w sposób zamierzony. Sekwencja regulatorowa „związana operacyjnie” z sekwencją kodującą jest ligowana w ten sposób, że ekspresja sekwencji kodującej jest osiągana w pod warunkiem zgodności z sekwencją kontrolną.
Wektory takie mogą być transformowane lub transfekowane do odpowiedniej komórki gospodarza jak opisano powyżej w celu dostarczenia ekspresji polipeptydu według wynalazku. Proces ten może obejmować hodowanie komórki gospodarza transformowanej wektorem ekspresyjnym jak opisano powyżej w warunkach dostarczających przez wektor ekspresji sekwencji kodującej te polipeptydy. Ekspresjonowane polipeptydy mogą być odzyskiwane in vitro. Transformowane komórki gospodarza, w celu zapewnienia stabilnej ekspresji polinukleotydów, mogą być także stosowane in vivo. Na przykład, komórki gospodarza takie jak atenuowane bacterium transformowana w celu ekspresji polipeptydu według wynalazku, może być stosowana jako szczepionka. Atenuowane bacterium może być wybrane z Salmonella, Bordetella, Vibrio, Heamophilus, Neisseria i Yersinia. Bardziej korzystnie atenuowane
PL 195 242 B1 bacterium stanowi bakterię jelitową taką jak E. coli lub Salmonella, takie jak S. typhis, S. typhimurium lub S. eneriditis.
Wektorami mogą być na przykład plazmidy lub wektory wirusowe dostarczone z miejscem inicjacji replikacji, ewentualnie promotorem ekspresji tego polinukleotydu i ewentualnie regulatorem promotora. Wektory mogą zawierać jeden lub więcej znaczników genów, na przykład gen oporności na ampicilinę w przypadku plazmidu bakteryjnego lub gen oporności na neomycynę w przypadku wektora ssaczego. Wektory mogą być stosowane in vitro, na przykład dla wytwarzania RNA lub stosowane do transfekcji lub transformacji komórek gospodarza. Wektor może być także adaptowany do zastosowania in vivo, na przykład w metodzie terapii genowej.
Promotory/wzmacniacze i inne sygnały regulacji ekspresji mogą być wybrane tak aby były zgodne z komórką gospodarza dla której przeznaczony jest wektor ekspresji. Na przykład, promotory prokariotyczne mogę być stosowane, zwłaszcza te odpowiednie do zastosowania w szczepie E. coli (takich jak E. coli HB 101). Zwłaszcza korzystną postacią wynalazku jest promotor którego aktywność jest indukowana w odpowiedzi na zmianę w otaczającym go środowisku, takim jak warunki beztlenowe. Korzystnie stosowane są promotory htrA lub nirB. Promotory te mogą być stosowane zwłaszcza do ekspresji polipeptydów w atenuowanemu bacterium na przykład do zastosowania jako szczepionka. Wtedy gdy ekspresja polipeptydów według wynalazku jest prowadzona w komórkach ssaczych, zarówno in vitro jak i in vivo, mogą być stosowane promotory ssacze. Można także stosować specyficzne tkankowo promotory, na przykład promotory specyficzne wobec komórek hepatocytów. Stosować można także promotory wirusowe na przykład wirus mysiej białaczki Moloneya long terminal repeat (MMLV LTR), promotor wirusa mięsaka Rousa, promotor SV40, promotor ludzkiego cytomegalowirusa (CMV) IE, promotory wirusa opryszczki pospolitej lub promotory adenowirusów. Wszystkie te promotory są łatwo dostępne w stanie techniki.
C. Podawanie
Polipeptydy według wynalazku mogą być podawane przez wstrzyknięcie bezpośrednie. Korzystnie polipeptydy są łączone z farmaceutycznie akceptowalnym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem w celu wytworzenia kompozycji farmaceutycznej. Odpowiednie nośniki lub rozcieńczalniki zawierają izotoniczne roztwory soli, na przykład sól buforowaną fosforanem. Kompozycja może być sporządzona do podawania dojelitowego, domięśniowego, dożylnego, donosowego, podskórnego, doocznego lub śródskórnego. Typowo każdy polipeptyd jest podawany w dawce od 0,01 do 30 pg/kg wagi ciała, korzystnie od 0,1 do 10 pg/kg wagi ciała, bardziej korzystnie od 0,1 do 1 pg/kg wagi ciała. Możliwe jest także zastosowanie, wytworzonych przeciwciał stosując polipeptydy według wynalazku jak opisano powyżej, do leczenia lub zapobieganiu zakażeniom HBV. Neutralizujące przeciwciała lub ich fragmenty, które posiadają pozostałość specyficzności w stosunku do antygenów HBV, mogą być podawane w podobny sposób do polipeptydów według wynalazku.
Polinukleotydy według wynalazku mogą być podawane bezpośrednio jako nagie konstrukty kwasów nukleinowych, korzystnie zawierające ponadto sekwencje flankujące homologiczne do genomu komórki gospodarza. Jeżeli kaseta ekspresyjna jest podawana jako nagi kwas nukleinowy, ilość podawanego kwasu nukleinowego jest typowa w zakresie od 1 pg do 10 mg, korzystnie od 100 pg do 1 mg.
Wychwyt konstruktów nagiego kwasu nukleinowego przez komórki ssacze jest wzmacniany wieloma znanymi technikami transfekcji, na przykład takimi które obejmują zastosowanie czynników transfekcyjnych. Przykłady takich czynników obejmują czynniki kationowe (na przykład fosforan wapnia i dekstran-DEAE) i lipofektanty (na przykład lipofectam™ i transfectam™). Typowo, konstrukty kwasu nukleinowego są mieszane z czynnikiem transfekcji w celu wytworzenia kompozycji.
Korzystnie polinukleotyd lub wektor według wynalazku jest łączony z farmaceutycznie akceptowalnym nośnikiem lub rozcieńczalnikiem dla wytworzenia kompozycji farmaceutycznej. Odpowiednie nośniki lub rozcieńczalniki zawierają izotoniczne roztwory soli, na przykład sól buforowaną fosforanem. Kompozycja może być sporządzona do podawania pozajelitowego, domięśniowego, dożylnego, donosowego, podskórnego, doocznego lub śródskórnego.
Drogi podania i opisane dawkowanie są przeznaczone tylko jako wskazówki, a lekarz praktykujący będzie mógł łatwo określić optymalną drogę podania i dawkowanie dla każdego pacjenta i każdych warunków.
D. Sporządzanie szczepionek
Szczepionki można sporządzać z jednego lub więcej polipeptydów według wynalazku. Mogą one zawierać także jeden lub więcej immunogennych polipeptydów HBV, na przykład immunogenne polipeptydy znane ze stanu techniki. Zatem szczepionka według wynalazku może zawierać jeden lub
PL 195 242 B1 więcej polipeptydów według wynalazku i ewentualnie, jeden lub więcej polipeptydów wybranych z HBV S, polipeptydów pre-S1, pre-S2 i ich fragmentów immunogennych.
Polipeptydy według wynalazku mogą tworzyć szczepionkę w postaci obojętnej albo jako sole. Farmaceutycznie akceptowalne sole obejmują dodatek soli kwasowych (utworzonych z wolnych grup aminowych peptydów) i które są wytwarzane z kwasów nieorganicznych takich jak na przykład, kwas chlorowodorowy lub fosforowy, lub kwasów organicznych takich jak kwas octowy, kwas szczawiowy, kwas winowy lub maleinowy. Sole utworzone z wolnych grup karboksylowych mogą także pochodzić z zasad nieorganicznych takich jak na przykład, wodorotlenki sodowy, potasowy, amonowy, wapniowy lub żelazowy i z zasad organicznych jak izopropyloamina, trójmetyloamina, 2-etyloaminoetanol, histydyna i prokaina.
Sporządzanie szczepionek które zawierają immunogenne polipeptyd(y) jak czynnik(i) aktywy(e) są znane fachowcowi. Typowo, takie szczepionki mogą być sporządzane jako nadające się do wstrzyknięć, zarówno jako roztwory płynne lub zawiesiny; postacie stałe odpowiednie do rozcieńczania lub do zawieszania w płynie przed wstrzyknięciem. Preparat może być także emulgowany lub białko może być kapsułkowane w liposomach.
Szczepionka może zawierać atenuowane bacterium zdolne do ekspresjonowania polipeptydu według wynalazku.
Aktywne immunogenne składniki są często mieszane z zaróbkami, które są farmaceutycznie akceptowalne i dopasowane do czynnika aktywnego. Odpowiednimi zaróbkami są na przykład woda, sól dekstroza, glicerol, etanol lub podobne i ich kombinacje.
Ponadto, jeżeli to konieczne, szczepionka może zawierać mniejsze ilości substancji pomocniczych takich jak czynniki zwilżające lub emulgujące, czynniki buforujące pH i/lub adiuwanty, które wzmacniają skuteczność szczepionki. Na przykład adiuwanty które mogą zawierać ale nie są ograniczone do: wodorotlenku aluminium, N-acetylo-muramylo-L-treonylo-D-isoglutaminy (thr-MDP), N-acetylo-nor-muramylo-L-alanylo-D-izoglutamina (CGP 11637, tutaj cytowny jako nor-MDP), N-acetylomuramylo-L-alanylo-D-izoglutaminylo-L-alanina-Ż^T.Ż^dipalmitynylo-sn-gliccro-S-hyyrokkyfoslOrylooksy)-etylamina (CGP 19835A, tutaj cytowany jako MTP-PE), i RIBI, która zawiera trzy komponenty ekstrahowane z bakterii, monofosforylolipid A, dwumykolan trehalozy i szkielet ściany komórkowej (MPL+TDM+CWS) w 2% emulsji skwalen/Tween 80. Skuteczność adiuwanta można określać mierząc ilości przeciwciał skierowanych przeciwko immunogennemu peptydowi zawierającemu antygenową sekwencję HBV wynikającą z podawania tego polipeptydu w szczepionkach które zawierają także różne adiuwanty.
Szczepionki konwencjonalnie są podawane pozajelitowo, przez wstrzyknięcie, na przykład, zarówno podskórnie jak i domięśniowo. Dodatkowe preparaty, które są odpowiednie do innych dróg podawania obejmują czopki i preparaty donosowe. Doustne preparaty mogą być dostarczane zwłaszcza do podawania atenuowanego bacterium. Tradycyjne lepiszcza i nośniki do czopków mogą zawierać na przykład glikole polialkenylowe lub trójglicerydy; takie czopki mogą być utworzone z mieszanin zawierających czynnik aktywny w zakresie 0,5% do 10%, korzystnie 1% do 2%. Preparaty doustne obejmują zwykle stosowane zaróbki jak na przykład farmaceutyczne rodzaje mannitolu, laktozę, skrobię, stearynian magnezu, sacharynian sodu, celulozę, węglanu magnezowy i tym podobne. Kompozycje te mają postać roztworów, zawiesin, tabletek, pigułek, kapsułek, preparatów stale uwalniających lub pudrów i zawierają 10% do 95% czynnika aktywnego, korzystnie 25% do 70%.
Szczepionka, na przykład zawierająca atenuowane bacterium korzystnie ma postać liofilizowaną, na przykład w postaci kapsułkowej, do doustnego podawania pacjentowi. Takie kapsułki, tabletki lub pigułki do podawania doustnego pacjentowi mogą być dostarczane z otoczką jelitową zawierającą na przykład, Eudragit „S”, Eudragit „L”, octan celulozy, octanowy ftalan celulozy lub hydroksypropylmetylocelulozę. Kapsułki te mogą być stosowane jako takie, lub inaczej, liofilizowany materiał może być odtworzony ponownie przed podaniem, na przykład jako zawiesina. Odtworzenie korzystnie jest dokonywane w buforze przy odpowiednim pH w celu zapewnienia żywotności organizmów. W celu zabezpieczenia atenuowanej bakterii i szczepionki przed kwasem żołądkowym, korzystnie podaje się preparat dwuwęglanu sodowego przed podaniem szczepionki.
E. Dawkowanie i podawanie szczepionek
Szczepionki podawane są w sposób dostosowany do dawkowania preparatu i w ilościach skutecznych profilaktycznie i/lub terapeutycznie. Podawana ilość wynosi generalnie od 5 pg do 250 pg antygenu na dawkę, w zależności od leczonego osobnika, zdolności systemu immunologicznego osobnika do syntetyzowania przeciwciał i stopnia pożądanego zabezpieczenia. Precyzyjne ilości wymaganego do
PL 195 242 B1 podawania czynnika aktywnego mogą zależeć od oceny praktyka i mogą być indywidualnie dobrane dla każdego osobnika.
Szczepionka może być podana jako dawka pojedyncza lub korzystnie w schemacie dawek wielokrotnych. Schemat wielokrotnego dawkowania jest dawkowaniem w którym pierwszy raz szczepienie może przebiegać w 1 - 10 osobnych dawkach, po których następuje podawanie innych dawek w następujących po sobie przedziałach czasowych wymaganych do utrzymania i lub wzmocnienia odpowiedzi immunologicznej, na przykład w 1 do 4 miesięcy dla drugiej dawki i jeżeli potrzeba następną(e) dawkę(i) po kilku miesiącach. Reżim dawkowania będzie także co najmniej w części zdeterminowany przez potrzebę indywidualną i będzie zależał, od oceny lekarza ogólnego.
Ponadto, szczepionka zawierająca antygen(y) immunogenne HBV może być podawana w połączeniu z innymi czynnikami immunoregulatorowymi, na przykład z immunoglobulinami.
F. Sporządzanie przeciwciał przeciwko polipeptydom według wynalazku
Immunogeniczne polipeptydy przygotowywane tak jak opisano powyżej mogą być użyte do wytworzenia przeciwciał, zarówno poliklonalnych jak i monoklonalnych. Jeżeli wymagane są przeciwciała poliklonalne, wybrany ssak (na przykład mysz, królik, koza itp.) są immunizowane polipeptydem immunogennym niosącym epitop(y) HBV. Surowica z immunizowanego zwierzęcia jest zbierana i traktowana zgodnie ze znaną procedurą. Jeżeli surowica zawierająca przeciwciała poliklonalne dla epitopu HBV zawiera przeciwciała w stosunku do innych antygenów, to te przeciwciała poliklonalne mogą być oczyszczane metodą chromatografii immunopowinowadztwa. Techniki wytwarzania i procesowania antysurowicy poliklonalnej są znane ze stanu techniki.
Przeciwciała monoklonalne skierowane przeciwko epitopom HBV w polipeptydach według wynalazku mogą być łatwo wytwarzane przez fachowca. Ogólna metodologia wytwarzania przeciwciał monoklonalnych przez hybrydomy jest dobrze znana. Unieśmiertelniane komórki wytwarzające przeciwciała mogą być kreowane przez fuzję komórki i także innymi technikami jak bezpośrednia transformacja limfocytów B onkogennym DNA, lub transfekcja wirusem Epstein-Barr. Panel przeciwciał monoklonalnych produkowanych przeciwko epitopom HBV może być badany w badaniach przesiewowych na obecność różnych cech, na przykład izotypu lub powinowadztwa do epitopu.
Przeciwciała, zarówno monoklonalne jak i poliklonalne, które są skierowane przeciwko epitopom HBV są szczególnie użyteczne do diagnozowania i które są neutralizowane są użyteczne w pasywnej immunoterapii. Przeciwciała monoklonalne mogą być zwłaszcza stosowane do zwiększania przeciwciał antyidiotypowych. Antyidiotypowe przeciwciała są immunoglobulinami które niosą „obraz wewnętrzny” antygenu czynnika zakażającego przeciwko któremu pożądana jest ochrona.
Techniki do podwyższenia przeciwciał antyidiotypowych są znane ze stanu techniki. Te przeciwciała antyidiotypowe mogą także być użyteczne do leczenia HBV jak też do ujawnienia się regionów immunogenicznych antygenów HBV.
Możliwym jest także zastosowanie fragmentów tych, opisanych powyżej przeciwciał, na przykład fragmentów Fab.
G. Próby immunologiczne
Zarówno polipeptydy według wynalazku jak i wytwarzane przy zastosowaniu tych polipeptydów przeciwciała mogą być użyte w metodach prób immunologicznych, na przykład te które reagują immunologicznie z surowicą zawierającą przeciwciała, na przykład do wykrywania obecności przeciwciał HBV, lub obecności wirusowych antygenów w próbach biologicznych włączając w to na przykład próbki krwi lub surowicy. Zwłaszcza, można stosować polipeptydy i przeciwciała według wynalazku do mapowania wysoko immunogenicznych regionów za pomocą regionów pre-S1 i pre-S2 HBsAg. Projektowanie prób immunologicznych podlega dużej zmienności i wiele tych prób immunologicznych jest znanych ze stanu techniki. Na przykład, w próbie immunologicznej można wykorzystać jeden wirusowy antygen, na przykład polipeptyd według wynalazku; lub alternatywnie próba immunologiczna może wykorzystywać kombinację antygenów wirusowych obejmujących polipeptyd według wynalazku. Można także stosować, na przykład przeciwciało otrzymane stosując sposób według wynalazku lub kombinację takich przeciwciał skierowanych na antygen wirusowy lub kilka antygenów wirusowych. Protokoły mogą być oparte na przykład na kompetycji lub reakcji bezpośredniej lub na próbach typu kanapkowego. Stosowane immunologiczne protokoły mogą też wykorzystywać, na przykład trwałe podłoża lub też mogą być oparte o immunoprecypitację. Większość badań stosuje znakowane przeciwciało lub polipeptyd; znacznikami mogą być na przykład cząsteczki fluorescencyjne, chemiluminescencyjne, radioaktywne lub barwiące. Próby które wzmacniają sygnały z sondy są także znane; przykłady takich
PL 195 242 B1 prób to próby wykorzystujące biotynę i awidynę i znakowany enzym i badania z udziałem prób immunologicznych, takie jak próba ELISA.
Wynalazek będzie opisany w odniesieniu do następujących przykładów, które mają na celu jedynie ilustrację a nie ograniczenie wynalazku. Przykłady odnoszą się do figur. Wynalazek w szczegółach został opisany na rysunkach na których figury oznaczają odpowiednio:
Opis figur
Figura 1 oznacza schemat klonowania plazmidu pTECH3
Figura 2
a) Całkowita odpowiedź immunoglobulinowa, anty-Fragment C, 14 dni po dawce piętnującej (□) Fragment C-SAS1/S2 i (O) Fragment C-BAS1/S2 oczyszczonych białek fuzyjnych. Prawidłowa odpowiedź mysiej surowicy (nie immunizowanej) (Δ).
b) Całkowita odpowiedź immunoglobulinowa, anty-Fragment C, 7 dni po dawce przypominającej (□) Fragment C-SAS1/S2 i (O) Fragment C-BAS1/S2 oczyszczonych białek fuzyjnych. Prawidłowa odpowiedź mysiej surowicy (nie immunizowanej) (Δ).
Figura 3
a) Całkowita odpowiedź immunoglobulinowa, anty-S1 (aa61-81 peptyd), 14 dni po dawce piętnującej (□) Fragment C-SAS1/S2 i (O) Fragment C-BAS1/S2 oczyszczonego białka fuzyjnego. Prawidłowa odpowiedź mysiej surowicy (nie immunizowanej) (Δ).
b) Całkowita odpowiedź immunoglobulinowa, anty-S1 (aa61-81 peptyd), 7 dni po dawce przypominającej (□) Fragment C-SAS1/S2 i (O) Fragment C-BAS1/S2 oczyszczonych białek fuzyjnych. Prawidłowa odpowiedź mysiej surowicy (nie immunizowanej) (Δ).
Figura 4
a) Całkowita odpowiedź immunoglobulinowa, anty-S1 (aa12-24 peptyd), 14 dni po dawce piętnującej (□) Fragment C-SAS1/S2 i (O) Fragment C-BAS1/S2 oczyszczonych białek fuzyjnych. Prawidłowa odpowiedź mysiej surowicy (nie immunizowanej) (Δ).
b) Całkowita odpowiedź immunoglobulinowa, anty-S1 (aa12-24 peptyd), 7 dni po dawce przypominającej (□) Fragment C-SAS1/S2 i (O) Fragment C-BAS1/S2 oczyszczonych białek fuzyjnych. Prawidłowa odpowiedź mysiej surowicy (nie immunizowanej) (Δ).
Figura 5
a) Całkowita odpowiedź immunoglobulinowa, anty-S1 (aa12-47 peptyd, obecny w cząstkach S-preS1), 14 dni po dawce piętnującej (□) Fragment C-SAS1/S2 i (O) Fragment C-BAS1/S2 oczyszczonych białek fuzyjnych. Prawidłowa odpowiedź mysiej surowicy (nie immunizowanej) (Δ).
b) Całkowita odpowiedź immunoglobulinowa, anty-S1 (aa12-47 peptyd, obecny w cząstkach S-preS1), 7 dni po dawce przypominającej (□) Fragment C-SAS1/S2 i (O) Fragment C-BAS1/S2 oczyszczone białka fuzyjne. Prawidłowa odpowiedź mysiej surowicy (nie immunizowanej) (Δ).
Przykłady
Przykład 1 - Otrzymywanie konstruktów ekspresji
Plazmid pTECH-3, podstawowy wektor ekspresji stosowany w tych przykładach był otrzymany jak pokazano na figurze 1 z pTECH-2 i pTEThtrA-1 jak opisano w naszym wcześniejszym zgłoszeniu PCT/GD95/00196. pTECH-3 zawiera sekwencję kodującą fragment C toksyny tężcowej i zawierającą region zawiasowy, związany operacyjnie z promotorem htrA. Konstrukty opisane w poniższej tabeli były zestawione następująco:
Tabel a 1
| Konstrukt | Sekwencja Hepatitis B |
| pTECH3/S1 | pre S1ayw21-47aa |
| pTECH3/S2 | pre S2ayw1-55aa |
| PTECH3/S1/S2 | pre S1ayw21-47/preS2ayw1-55aa |
| pTECH3/SB | Sayw120-147aa |
| pTECH3/SAS1/S2 | pre S1adw21-119/S2adw1-55aa |
| pTECH3/BAS1/S2 | pre S1adw42-119/S2adw1-55aa |
| pTECH3/WS1/S2 | pre S1adw1-119/S2adw1-55aa |
PL 195 242 B1
Plazmid pMBdS1RN/44 (zawierający gen ayw pre-S1 (20-47)/S wirusa zapalenia wątroby typu B) stosowany był jako matryca dla wytworzenia pTECH3/S1, pTECH3/SB i pTECH3/S1/S2. pMByS2/8 (zawierający gen ayw pre-S1 (1-55)/S wirusa zapalenia wątroby typu B) stosowano jako matryca dla pTECH3/S2 i pTECH3/S1/S2 i pRIT12793 (zawierający cały gen adw pre-S1/S2 w pBR322 wirusa zapalenia wątroby typu B) stosowano dla pTECH3/SAS1/S2, pTECH3/BAS1/S2 i pTECH3/WS1/S2. Następujące pary primerów stosowano do klowania PCR, stosując standardowe warunki, wykonanie insertu - sekwencja pre-S1/S2 wirusa zapalenia wątroby typu B do pTECH3:
Primer Sekwencje
MGR178(SB) MGRI79(SB) MGR1O4(S1 i S1/S2) MG238(S2 i S1/S2) MGRI105(51) MGK1O6(S2) MGR252(SAS 1/S2) MGR254(BAS 1/S2) MGR243(SA i BAS1/S2) MGR50(W3 1/S2)
ACTCTAGATGCAAAACCTGC
TAACTAGTAATACAGGTGCA
ATGTCTAGAAATCCTCTGGGATTC
AAGCTTATGCAGTGGAATTCCAGA
CGAACTAGTGTTGGGATTGAAGTC
AGGGTCACTAGICCTCGAGAAGAT
TCTGTTGCTAGCCCTCTGGGATTC
TCAAACGCTAGCGATGGGACTTC
TTGCTAGCGTTCAGCGCAGGGTCC
CCCGCTAGCATGGGAGGWFGGTCA
Każdy fragment PCR był trawiony enzymami restrykcyjnymi, oczyszczany na żelu i ligowany do fragmentu 3,76 kbp pTECH3. Pierwsze cztery konstrukty wytworzone były przez trawienie plazmidu pTECH3 przez Xbal/Spel/ClAP wytwarzając fragment 3,76 kbp. Odpowiedni fragment HBV PCR który był wstępnie cięty przez Nhel był następnie ligowany do fragmentu 3,76 kbp. Ostatnie dwa konstrukty wykonane były przez trawienie plazmidu pTECH3 przez Xbal/CIAP w celu wytworzenia fragmentu 3,76 kbp, który następnie był ligowany do odpowiedniego produktu HBV PCR wstępnie ciętego za pomocą Nhel.
P r z y k ł a d 2 - Ekspresja polipeptydów i Western Blotting
Plazmidy były transformowane do E. coli szczepu HB 101 stosując technikę standardową. Ekspresję połączonych fuzją polipeptydów indukowano szokiem temperaturowym przy 37°C. Ekspresję testowano metodą western blotting komórkowych ekstraktów E. coli z fragmentem przeciwciała przeciwko fragmentowi C toksyny tężcowej i specyficznych przeciwciał dla każdej sekwencji insertu (patrz tabela 2).
P rz y k ł a d 3 - Wytwarzanie przeciwciał poliklonalnych przeciwko konstruktom polipeptydowym
Polipeptydy fuzyjne wytwarzane w przykładzie 2 z plazmidów pTECH3/SAS1/S2 i pTECH3/BAS1/S2 oczyszczano z ekstraktów komórkowych E. coli na chromatografii powinowadztwa stosując fragment C antytężcowej toksyny jako liganda unieruchomionego na kolumnie 4B sepharose. Oczyszczone białka wypreparowywano do wstrzyknięć lub podawania myszom (B10, samice, wiek 6-8 tygodni) stosując techniki standardowe i jak opisano poniżej szczegółowo.
Schemat
Grupa 1 Immunizowanie myszy (dawka piętnująca) dootrzewnowo I/P 5 pg oczyszczonego Frag C-SAS1/S2 białka fuzyjnego. Próba skrwawiania 14 dni po dawce piętnującej. Immunizowanie myszy (dawka podtrzymująca) I/P 5 pg oczyszczonego Frag C-SAS1/S2 białka fuzyjnego. Próba skrwawiania, 21 dni po dawce piętnującej. Wykrwawianie myszy 7 dni po dawce podtrzymującej.
PL 195 242 B1
Grupa 2 Immunizowanie myszy (dawka piętnująca) dootrzewnowo I/P 5 pg oczyszczonego Frag C-SAS1/S2 białka fuzyjnego. Próba skrwawienia 14 dni po dawce piętnującej. Immunizowanie myszy (dawka podtrzymująca) I/P 5 pg oczyszczonego Frag C-SAS1/S2 białka fuzyjnego. Próba skrwawienia, 21 dni po dawce piętnującej. Wykrwawianie myszy 7 dni po dawce podtrzymującej.
Całkowitą odpowiedź przeciwciała oznaczano w próbie ELISA przeciwko oczyszczonemu fragmentowi C, pre-S1 (aa61-81), pre-S2 (aa12-24) peptydy i pre-S1 (aa21-47) zawartych w cząsteczkach S-S1. Odpowiedzi są zilustrowane na figurach 2, 3, 4 i 5.
W skrócie, odpowiedzi były wykrywane dla obu komponentów białek fuzyjnych - pre-S1 i pre-S2 i fragmentu C białka nośnikowego.
T ab e l a 2 - Western Blots
| Western blot | ||||||
| Konstrukt | Sekwencja wirusa zapalenia wątroby typu B | Frag C(a) | S1 (20-47)(b) | S1(61-81)(c) | S2(d) | S(c) |
| pTECH3/S1 | pre S1ayw21-47aa | + | + | ND | ND | ND |
| pTECH3/S2 | pre S2ayw1-55aa | + | ND | ND | + | ND |
| pTECH3/S1/S2 | pre S1ayw21-47aa/preS2ayw1-55aa | + | ND | + | ND | + |
| pTECH3/SB | S1ayw120-147aa | + | + | + | + | ND |
| pTECH3/S2AS1/S2 | pre S1adw21-119/S2adw1-55aa | + | + | + | + | ND |
| pTECH3/BAS1/S2 | pre S1adw42-119/S2adw1-55aa | + | + | + | + | ND |
| pTECH3/WS1/S2 | pre S1adw1-119/S2adw1-55aa | + | + | ND | + | ND |
(a) królicza surowica poliklonalna anty-FragC AB96-05 14/3/97 1:100 (b) monoklonalne mysie anty-S1 (20-47) 18/7/97 (z speake) 1:1000 (c) królicze poliklonalne anty-S1 RA2138 Rabbit 9393 27/7/87 1:400 (d) supernatant komórkowy monoklonale mysie anty-S2 1-901 Harv. 20/11/97.Fre 26/11/97 1:10 (e) poliklonalne mysie (SWR/J) anty-HB147 (VRU, Imperial College) 1:50
ND = nie oznaczano
Claims (19)
- Zastrzeżenia patentowe1. Polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV.
- 2. Polipeptyd według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera fragment C toksyny tężcowej o co najmniej 100 aminokwasach.
- 3. Polipeptyd według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera pełnej długości fragment C.
- 4. Polipeptyd według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiera fragment regionu pre-S1 o co najmniej 20 aminokwasach i/lub fragment regionu pre-S2 o co najmniej 20 aminokwasach.
- 5. Polipeptyd według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, znamienny tym, że zawiera aminokwasy 20 do 47 lub 21 do 47 regionu pre-S1.
- 6. Polipeptyd według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, znamienny tym, że zawiera aminokwasy 1 do 26 lub 14 do 32 regionu pre-S2.
- 7. Polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV.
- 8. Wektor zawierający polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusaPL 195 242 B1 zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie związany z sekwencją regulatorową.
- 9. Wektor według zastaz. 8, znamiennytym. że wspomniana sekwencja regulatorowa zawiera sekwencję promotorową htrA.
- 10. Komórka gospodarza zawierająca wektor zawierający polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie związany z sekwencją regulatorową.
- 11. Komórka gospodarza według zastrz. 10, znamienna tym, że stanowi ją komórka bacterium.
- 12. Kompozycca obejmująca pollpeptyd, znamienna tym, że z^\^i^i^^ pollpeptyd z^\^i^r^^j^(^'/ (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub rozcieńczalnik.
- 13. obejmuiąca pollnukleotyd, znamiennatym, że z^\^i^i^^ pollnukleoryd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub rozcieńczalnik.
- 14. οΡθ-ιγι^οθ wektorT tym. że wektorzawierający ροΝηυΜβotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie związany z sekwencją regulatorową oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik lub rozcieńczalnik.
- 15. PoNpeptyd zawierający (ί) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach, przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV do stosowania w sposobie wytwarzania przeciwciał u człowieka, które rozpoznają epitopy w regionach pre-S1 i/lub pre-S2 HBV.
- 16. Polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV do stosowania w sposobie wytwarzania przeciwciał u człowieka, które rozpoznają epitopy w regionach pre-S1 i/lub pre-S2 HBV.
- 17. Zastosowanie pollpeptydu zawierający (ί) fragment C toksyny tężcowee, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania zakażeniom HBV u ludzi lub zwierząt.
- 18. Zastosowaniepollnukleorydu kodLuącego pollpeppyd zawierający ® fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania zakażeniom HBV u ludzi lub zwierząt.PL 195 242 B1
- 19. Zastosowanie wektora zawierającego polinukleotyd kodujący polipeptyd zawierający (i) fragment C toksyny tężcowej, lub jego fragment o co najmniej 6 aminokwasach złączony z (ii) regionem pre-S1 wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach i/lub z regionem pre-S2 HBV lub jego fragmentem o co najmniej 6 aminokwasach przy czym polipeptyd ten indukuje przeciwciało, które rozpoznaje region pre-S1 i/lub region pre-S2 HBV operacyjnie związany z sekwencją regulatorową do wytwarzania leku do leczenia lub zapobiegania zakażeniom HBV u ludzi lub zwierząt.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9720033.1A GB9720033D0 (en) | 1997-09-19 | 1997-09-19 | Hepatitis B virus polypeptides |
| PCT/GB1998/002852 WO1999015671A1 (en) | 1997-09-19 | 1998-09-21 | Hepatitis b virus polypeptides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL339366A1 PL339366A1 (en) | 2000-12-18 |
| PL195242B1 true PL195242B1 (pl) | 2007-08-31 |
Family
ID=10819394
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL98339366A PL195242B1 (pl) | 1997-09-19 | 1998-09-21 | Polipeptyd, polinukleotyd, wektor, komórka gospodarza, kompozycja obejmująca polipeptyd, kompozycjaobejmująca polinukleotyd, kompozycja obejmująca wektor, zastosowanie polipeptydu, zastosowanie polinukleotydu i zastosowanie wektora |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040258709A1 (pl) |
| EP (1) | EP1015593B1 (pl) |
| JP (1) | JP2001517447A (pl) |
| KR (1) | KR100637282B1 (pl) |
| AT (1) | ATE241013T1 (pl) |
| AU (1) | AU751646B2 (pl) |
| CA (1) | CA2304255C (pl) |
| CZ (1) | CZ297131B6 (pl) |
| DE (1) | DE69814884T2 (pl) |
| ES (1) | ES2199460T3 (pl) |
| GB (1) | GB9720033D0 (pl) |
| HU (1) | HUP0003511A3 (pl) |
| NO (1) | NO20001397L (pl) |
| PL (1) | PL195242B1 (pl) |
| WO (1) | WO1999015671A1 (pl) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0009470D0 (en) * | 2000-04-17 | 2000-06-07 | Univ Southampton | Materials and methods relating to immune responses to fusion proteins |
| EP1281761A1 (en) * | 2001-07-27 | 2003-02-05 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Hepatitis B virus pre-S1 derived synthetic polypeptides and their use thereof. |
| JP4764820B2 (ja) * | 2003-06-23 | 2011-09-07 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | ワクチン用担体タンパク質 |
| CN100537762C (zh) * | 2004-06-24 | 2009-09-09 | 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 | 一种嵌合型病毒样颗粒疫苗载体蛋白及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10299017I2 (de) * | 1987-06-22 | 2005-05-25 | Medeva Holdings Bv | Hepatitis-B-Oberfl{chenantigen enthaltendes Peptid. |
| EP0389983A3 (en) * | 1989-03-31 | 1991-01-16 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies to pres2 and pres1 polypeptides of the hepatitis b viral envelope |
| WO1994001132A1 (en) * | 1992-07-07 | 1994-01-20 | Merck & Co., Inc. | VACCINE COMPRISING MIXED preS1+preS2+S AND CORE PARTICLE |
| CA2141427C (en) * | 1992-07-31 | 2008-07-22 | Mohammed Anjam Khan | Expression of recombinant fusion proteins in attenuated bacteria |
| EP0712442B1 (en) * | 1993-07-30 | 2002-03-27 | Medeva Holdings B.V. | Vaccine compositions |
| GB9401795D0 (en) * | 1994-01-31 | 1994-03-23 | Medeva Holdings Bv | Vaccines |
-
1997
- 1997-09-19 GB GBGB9720033.1A patent/GB9720033D0/en not_active Ceased
-
1998
- 1998-09-21 CZ CZ20000978A patent/CZ297131B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-09-21 KR KR1020007002945A patent/KR100637282B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-09-21 PL PL98339366A patent/PL195242B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-09-21 CA CA002304255A patent/CA2304255C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-21 WO PCT/GB1998/002852 patent/WO1999015671A1/en active IP Right Grant
- 1998-09-21 EP EP98944071A patent/EP1015593B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-21 HU HU0003511A patent/HUP0003511A3/hu unknown
- 1998-09-21 ES ES98944071T patent/ES2199460T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-21 JP JP2000512962A patent/JP2001517447A/ja active Pending
- 1998-09-21 AT AT98944071T patent/ATE241013T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-09-21 AU AU91744/98A patent/AU751646B2/en not_active Ceased
- 1998-09-21 DE DE69814884T patent/DE69814884T2/de not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-03-17 NO NO20001397A patent/NO20001397L/no not_active Application Discontinuation
-
2004
- 2004-07-15 US US10/892,018 patent/US20040258709A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1999015671A1 (en) | 1999-04-01 |
| EP1015593B1 (en) | 2003-05-21 |
| AU751646B2 (en) | 2002-08-22 |
| NO20001397L (no) | 2000-05-05 |
| AU9174498A (en) | 1999-04-12 |
| CA2304255C (en) | 2009-07-07 |
| PL339366A1 (en) | 2000-12-18 |
| ATE241013T1 (de) | 2003-06-15 |
| US20040258709A1 (en) | 2004-12-23 |
| EP1015593A1 (en) | 2000-07-05 |
| CZ297131B6 (cs) | 2006-09-13 |
| GB9720033D0 (en) | 1997-11-19 |
| HUP0003511A3 (en) | 2003-08-28 |
| CA2304255A1 (en) | 1999-04-01 |
| CZ2000978A3 (cs) | 2001-01-17 |
| KR20010024176A (ko) | 2001-03-26 |
| DE69814884T2 (de) | 2004-03-11 |
| HUP0003511A2 (hu) | 2001-02-28 |
| JP2001517447A (ja) | 2001-10-09 |
| KR100637282B1 (ko) | 2006-10-24 |
| NO20001397D0 (no) | 2000-03-17 |
| ES2199460T3 (es) | 2004-02-16 |
| DE69814884D1 (de) | 2003-06-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wu et al. | Expression of immunogenic epitopes of hepatitis B surface antigen with hybrid flagellin proteins by a vaccine strain of Salmonella. | |
| Thanavala et al. | Immunogenicity of transgenic plant-derived hepatitis B surface antigen. | |
| JP3355351B2 (ja) | 遺伝的に工作されたイムノグロブリン | |
| JP2599350B2 (ja) | 膜結合性タンパク質を含有するワクチン類 | |
| US6328974B1 (en) | Immunogenic compositions that potentiate growth hormone activity | |
| AU4704899A (en) | Antigenic complex comprising immunostimulatory peptide, cd4, and chemokine receptor domain for hiv treatment and immune disorders | |
| US11352416B2 (en) | Mosaic chimeric viral vaccine particle | |
| IE60671B1 (en) | Monoclonal antiobodies to HIV and related peptides | |
| RU2763001C1 (ru) | Однодоменное антитело и его модификации, специфически связывающиеся с RBD S белка вируса SARS-CoV-2, и способ их применения для терапии и экстренной профилактики заболеваний, вызываемых вирусом SARS-CoV-2 | |
| JP5187883B2 (ja) | 抗原ペプチドおよびその利用 | |
| PT85137B (pt) | Processo de preparacao de um polipeptido de composito imunogenico, de melhoramento da imunogenicidade de um imunogenio e de atenuacao da falta de capacidade de resposta a uma vacina do virus da hepatite b | |
| ES2267812T3 (es) | Materiales y metodos que relacionan respuestas inmunes con proteinas de fusion. | |
| US4857634A (en) | Peptides useful in vaccination against enteroviruses | |
| Srikumaran et al. | Anti-idiotypic antibodies induce neutralizing antibodies to bovine herpesvirus 1. | |
| PL195242B1 (pl) | Polipeptyd, polinukleotyd, wektor, komórka gospodarza, kompozycja obejmująca polipeptyd, kompozycjaobejmująca polinukleotyd, kompozycja obejmująca wektor, zastosowanie polipeptydu, zastosowanie polinukleotydu i zastosowanie wektora | |
| JPH02211881A (ja) | ＨＩＶに対する中和抗体を誘発するかまたはかかる抗体によって認識され得る免疫原配列を含むＨＢｓＡｇ抗原の形態学的特徴を有する組換えハイブリッドＨＢｓＡｇ粒子、かかる粒子をコードするヌクレオチド配列及び核粒子を含むワクチン | |
| EP0082789B1 (en) | Immunological composition and method for hepatitis b virus | |
| Morenkov et al. | Immunological characterisation of glycoprotein E of Aujeszky's disease virus | |
| EP0370090B1 (en) | Immunogens and biologically active peptides derived from shared sequences from antigens and anti-idiotypic antibodies or antibodies specific for cellular receptors of the antigens | |
| Zuckerman | Subunit, recombinant and synthetic hepatitis B vaccines | |
| MXPA00002577A (en) | Hepatitis b virus polypeptides | |
| CZ285194A3 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| Sperlagh et al. | Monoclonal anti-idiotypic antibodies that mimic the epitope on gp120 defined by anti-HIV-1 monoclonal antibody 0.5 β | |
| Thanavala | An idiotype approach for a vaccine against Hepatitis B surface antigen | |
| US20030026808A1 (en) | An IMMUNOLOGICAL PROCESS FOR INCREASING THE HDL CHOLESTROL CONCENTRATION |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20090921 |