PL193076B1 - Zastosowanie adenowirusa mającego funkcjonalny gen kinazy tymidynowej - Google Patents
Zastosowanie adenowirusa mającego funkcjonalny gen kinazy tymidynowejInfo
- Publication number
- PL193076B1 PL193076B1 PL349489A PL34948999A PL193076B1 PL 193076 B1 PL193076 B1 PL 193076B1 PL 349489 A PL349489 A PL 349489A PL 34948999 A PL34948999 A PL 34948999A PL 193076 B1 PL193076 B1 PL 193076B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- tumor
- adenovirus
- patients
- gene
- thymidine kinase
- Prior art date
Links
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 title claims abstract description 35
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 title description 15
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 17
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 35
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 5
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 4
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 23
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 17
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 10
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 6
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- KRCQSTCYZUOBHN-UHFFFAOYSA-N rabeprazole sodium Chemical compound [Na+].COCCCOC1=CC=NC(CS(=O)C=2[N-]C3=CC=CC=C3N=2)=C1C KRCQSTCYZUOBHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 4
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 4
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 3
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 2
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 2
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 2
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 2
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 2
- 238000010855 neuropsychological testing Methods 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 1
- 241000713862 Moloney murine sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 206010002224 anaplastic astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003263 anti-adenoviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 201000007201 aphasia Diseases 0.000 description 1
- 230000035045 associative learning Effects 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 238000007428 craniotomy Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- JXSJBGJIGXNWCI-UHFFFAOYSA-N diethyl 2-[(dimethoxyphosphorothioyl)thio]succinate Chemical compound CCOC(=O)CC(SP(=S)(OC)OC)C(=O)OCC JXSJBGJIGXNWCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003976 gap junction Anatomy 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 206010019465 hemiparesis Diseases 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011545 laboratory measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 230000003924 mental process Effects 0.000 description 1
- 239000012569 microbial contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000003557 neuropsychological effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001373 regressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 230000037152 sensory function Effects 0.000 description 1
- 230000006403 short-term memory Effects 0.000 description 1
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000001321 subclavian vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/861—Adenoviral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
1. Zastosowanie adenowirusa maj acego funkcjonalny gen kinazy tymidynowej do wytwarza- nia leku do traktowania jamy po nowotworze mózgu. PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy zastosowania adenowirusa mającego funkcjonalny gen kinazy tymidynowej.
Leczenie złośliwych glejaków jest wyzwaniem dla lekarzy i naukowców.
Terapia genem kinazy tymidynowej, z zastosowaniem genu kinazy tymidynowej z wirusa Herpes Simplex (HSVtk), jest jedną z najbardziej obiecujących odmian leczenia w usiłowaniach osiągnięcia zmian przeżywalności pacjentów ze złośliwym glejakiem.
Terapia genem HSVtk jest oparta na zdolności kinazy tymidynowej do katalizowania fosforylacji gancyklowiru (GCV).
Fosforylowany GCV działa jako toksyczny analog nukleotydu, prowadząc do śmierci docelowych komórek.
Zjawisko to jeszcze bardziej nasila się dzięki efektowi sąsiedztwa, gdy sąsiednie komórki są także niszczone, nawet bez transfekcji. Uważa się, że efekt ten jest spowodowany uwalnianiem toksycznych analogów nukleotydu z transfekowanych komórek do sąsiadujących komórek przez połączenia szczelinowe.
Retrowirusy i adenowirusy stosowano jako wektory w terapii genowej. Obydwa te wektory mają pewne zalety oraz ograniczenia stosowania. Transfer genów za pomocą retrowirusów jest szczególnie wskazany w przypadku nowotworów mózgu ze względu na to, że retrowirusy mogą infekować tylko komórki proliferujące, podczas gdy normalna, nie dzieląca się tkanka mózgowa, pozostaje nienaruszona. Skuteczność transferu genów przez retrowirusy jest stosunkowo niska, ale można ją zwiększyć stosując komórki pakujące retrowirusy zamiast wyizolowanych wirusów.
Czas transdukcji teoretycznie może ulec wydłużeniu, a liczba transfekowanych komórek może wzrosnąć. W przypadku zastosowania retrowirusów transfekowany gen wbudowuje się do genomu komórki docelowej i tak można osiągnąć długotrwałą ekspresję genu.
Nieoczekiwanie stwierdzono, że leczenie w przypadku nowotworów mózgu z zastosowaniem terapii genem kinazy tymidynowej można prowadzić z większą skutecznością, gdy jako środek przenoszący gen stosuje się adenowirusa.
Wynalazek dotyczy zastosowania adenowirusa mającego funkcjonalny gen kinazy tymidynowej do wytwarzania leku do traktowania jamy po nowotworze mózgu.
Korzystnie adenowirus jest wolny od białek innych niż naturalnie związane z adenowirusem.
Korzystnie gen kinazy tymidynowej stanowi gen kinazy tymidynowej wirusa Herpes Simplex.
Korzystnie lek zawiera stabilizator, przy czym korzystnym stabilizatorem jest gliceryna.
Wynalazek dotyczy zastosowania adenowirusa szczególnie w przypadku, gdy nowotworem mózgu jest złośliwy glejak.
Zgodnie z wynalazkiem adenowirus zawierający gen kodujący kinazę tymidynową oraz zawierające go leki znajdują zastosowanie zwłaszcza w traktowaniu jamy po nowotworze mózgu. W szczególności stosuje się również gangcyklowir lub równoważny związek w trakcie terapii.
Genem kinazy tymidynowej jest zazwyczaj gen pochodzący z wirusa Herpes Simplex (HSVtk).
Wykazano, że genowy konstrukt adenowirus/gen kinazy tymidynowej lepiej nadaje się do transferu genów niż retrowirusy.
Konstrukt ten można stosować w leczeniu nowotworów. Leczenie może obejmować następujące etapy:
(i) podawanie adenowirusa zawierającego gen kodujący kinazę tymidynową do ściany jamy po nowotworze; oraz (ii) podawanie związku tworzącego po ufosforylowaniu związek cytotoksyczny.
Związkiem stosowanym w etapie (ii) może być gancyklowir lub jego pochodna. Ten sposób można stosować w zwalczaniu nowotworów, w szczególności nowotworu mózgu, np. złośliwego glejaka. Środek stosowany w punkcie (i) można podawać wielokrotnie, korzystnie osobno 40-80 razy.
Środek terapeutyczny korzystnie formułuje się bez dodatku białek (innych niż białka związane z adenowirusem). Uważ a się , ż e jest to korzystne szczególnie w przypadku ś rodków, do których dodaje się albuminę dla zmniejszenia działania enzymów rozkładających na składniki czynne. Korzystnie środek ten zawiera glicerynę jako stabilizator.
Ilość produktów czynnych, którą należy podać pacjentowi, może określić fachowiec w oparciu o podaną tu informację oraz czynniki zwykle brane pod uwagę, takie jak droga podawania, leczony stan oraz jego nasilenie, itd.
Następujący przykład ilustruje wynalazek.
PL 193 076 B1
P r z y k ł a d
W tym przykł adzie porównano bezpieczeń stwo i skuteczność terapii genem HSVtk z zastosowaniem komórek pakujących retrowirusy i z zastosowaniem adenowirusów w leczeniu złośliwych glejaków. W testach terapia genowa z zastosowaniem komórek pakujących retrowirusy nie spowodowała wzrostu przeżywalności pacjentów ze złośliwymi glejakami w porównaniu z grupą kontrolną poddaną transfekcji z użyciem lacZ.
Progresję nowotworu stwierdzono u wszystkich pacjentów z zastosowaniem obrazowania metodą rezonansu magnetycznego (MRI) w trzy miesiące po usunięciu nowotworu i transferze genów. Jednakże terapia genowa z zastosowaniem adenowirusów znacznie polepszyła wyniki pacjentów. Także u trzech z siedmiu pacjentów leczonych z zastosowaniem adenowirusów badanie metodą MRI wykazało, że nowotwory pozostały stabilne.
Retrowirusy i linia komórek pakujących retrowirusy
Linię komórek pakujących PA317/tk przygotowano w sposób opisany w Poptani i inni, Cancer Gene Ther. 5: 101-109 (1998). Pokrótce, 1,2 kb HSV1-TK cDNA (McKnight, Nucleic Acid Res. 8: 5949-5964 (1980)) podklonowano do retrowirusowego plazmidu pLXSN (Miller i inni, Mol. Cell. Biol., 5: 2985-3902 (1986)) aby stworzyć plazmid pLTKSN. Ekspresja HSV1-TK jest kierowana przez 5' LTR mysiego wirusa mięsaka Moloneya. Wektor zawiera także wewnętrzny promotor SV40, który kieruje ekspresją genu oporności na neomycynę (NEO). Linię komórkową PA317 stransfekowano plazmidem pLTKSN drogą wytrącania fosforanem wapnia. Linia komórkowa PA317/3.0D5 (PA317/tk) wytworzyła
106 cfu/ml retrowirusów, co oznaczono w teście fibroblastów 209F (Yla-Herttuala i inni, J. Clin. Invest. 95: 2692-2698 (1995)). Przed iniekcjami komórki pakujące namnożono, trypsynizowano i rozcieńczono do 109 komórek/10 ml Optimem (Gibco BRL). Stwierdzono, że komórki były wolne od mykoplazmy, innych zanieczyszczeń mikrobiologicznych oraz wirusów typu dzikiego.
Retrowirusy BAG zawierające β-galaktozydazę (lacZ) wytworzono w φCRIP. Miana retrowirusów wynosiły 6 x 105 cfu/ml i stosowano je w postaci niezagęszczonego supernatantu hodowli (DMEM, 0,5% NCS, Gibco).
Adenowirusy
W adenowirusach HSVtk, kasetę ekspresyjną zawierającą wzmacniacz ludzkiego wirusa cytomegalii (hCMV) oraz element promotorowy - cDNA HSV 1-TK - sygnał poliadenylacji małpiego wirusa 40 (SV40) podklonowano do plazmidu pAdenogal (Barr i inni, Gene Ther. 1: 51-58 (1994)) aby stworzyć plazmid pAdCMVTK. Zlinearyzowany pAdCMVTK i sub360 DNA adenowirusowy (McClane i inni, Hum. Gene Ther. 8: 739-746 (1997)) kotransfekowano do komórek 293 (ATCC CRL1573) i zrekombinowany adenowirus, AdCMVTK, powstał na drodze rekombinacji homologicznej. Klon wirusa oczyszczono przeprowadziwszy trzy rundy testu łysinkowego i po każdej rundzie potwierdzano obecność kasety ekspresyjnej TK w genomie adenowirusa metodą PCR. AdCMVTK na dużą skalę wytworzono w komórkach 293 i lizat wirusa oczyszczono i zagęszczono w gradiencie CsCl, poddano dializie i przechowywano w -80°C.
Miana wirusów oznaczono w teście łysinkowym w komórkach 293. Preparat wirusa zanalizowano pod względem integralności ekspresji kasety TK drogą trawienia enzymami restrykcyjnymi, a następnie analizy metodą Southerna. Brak kompetentnych replikacyjnie wirusów typu dzikiego potwierdzono stosując test cytopatyczny wobec komórek Hela (ATCC CCL-2) i A549 (ATCC CC185). Stwierdzono także, że preparat wirusa był wolny od zanieczyszczeń mikrobiologicznych oraz lipopolisacharydu (test Limulus, Sigma).
W lacZ, skierowany do materiału genetycznego adenowirusa cDNA β-galaktozydazy pod promotorem β-aktynowym i wzmacniaczem CMV, wklonowano do E1-wydeletowanego regionu genomu adenowirusa metodą rekombinacji homologicznej. Adenowirusy zagęszczono do miana 3 x 1010 pfu/ml przez ultrawirowanie. Oczyszczone wirusy zebrano i poddano dializie wobec 5 mM Hepes (pH 7,8) i ostatecznie wobec 5 mM Hepes (pH 7,8) zawierającego 20% gliceryny.
Pacjenci
Piętnaście nowotworów u 14 pacjentów poddano terapii genem HSVtk. Ponadto 7 pacjentów kontrolnych transfekowano kontrolnym znacznikowym genem lacZ 4-5 dni przed usunięciem nowotworu. Wszyscy pacjenci mieli wynik w skali Kamofskyiego powyżej 70. Średni wiek pacjentów wynosił 51 lat (zakres 20 -70 lat). Nowotwór był nawracający w 13 przypadkach (59%). Wszyscy pacjenci otrzymywali kortykosteroidy i leki przeciwpadaczkowe oraz stosowano radioterapię w przypadku nowotworów de novo.
PL 193 076 B1
Operacja i transfer genów
Wszystkich pacjentów poddano krianiotomii i usunięto nowotwory. Usunięcie było tak radykalne, jak tylko było to możliwe pod mikroskopem. Diagnozę złośliwych glejaków potwierdzono zbadawszy zamrożone skrawki histologiczne podczas operacji. Po usunięciu nowotworów komórki pakujące retrowirusy HSVtk (109 komórek/10 ml) lub adenowirusy (3 x 1010 pfu/10 ml) wstrzyknięto do ściany jamy po nowotworze w objętościach 0,1-0,3 ml, na głębokość 10 mm, drogą 30-70 iniekcji/pacjenta. Leczenie z zastosowaniem GCV (5 mg/kg/dzień) prowadzono podając dożylnie GCV przez żyłę podobojczykową dwa razy na dzień przez 14 dni. Leczenie rozpoczęto w 14 lub 5 dni po usunięciu nowotworu i transferze genów odpowiednio u pacjentów, którym podano retrowirusy lub adenowirusy. Gen β -galaktozydazy podano siedmiu pacjentom z grupy kontrolnej przez cewnik, który umieszczono stereotaktycznie w nowotworze. Cewnik pozostawiono na miejscu do czasu usunięcia nowotworu podczas kraniotomii. Wektory do transferu genów (retrowirusowy BAG, miano 6 x 105 cfu i adenowirusowy, miano x 108-3 x 1010 pfu) wstrzykiwano do nowotworu przez trzy kolejne dni, a nastę pnie nowotwór usunię to po 1-2 dniach. Pacjenci ze znacznikowym genem β-galaktozydazy nie byli leczeni GCV. Wszyscy pacjenci byli leczeni z zastosowaniem radioterapii zgodnie ze standardową praktyką kliniczną.
Obrazowanie metodą rezonansu magnetycznego
Pacjentów leczonych HSVtk badano metodą MRI w pierwszym dniu po operacji, 4, 8 i 12 tygodni po transferze genów oraz w późniejszym okresie co dwa miesiące. Obrazowanie MRI przeprowadzano z użyciem 1,5 T Magnetom Vision (Siemens) i obejmowało ono T1-ważone (580/14/1 = czas powtarzania/czas echa/dostęp) sekwencje osiowe, koronowe i strzałkowe także po środku kontrastującym (gadopentetatodimeglumina 0,1 mmol/kg); turbo-T2-ważone (5400/99/2) i FLAIR (osłabiony płynem odzysk inwersji; TR = 9000, TE = 119, AC = 1) sekwencje. Wszystkie obrazy uzyskiwano badając ciągłe przekroje w odstępie co 5 mm i matrycę 256 x 256. Na podstawie MRI wykonanego w pierwszym dniu po operacji, usunięcie chirurgiczne nowotworu określano jako całkowite usunięcie, gdy usunięto ponad 98% objętości nowotworu; subtotalne usunięcie nowotworu, gdy usunięto ponad 66%, ale mniej niż 98% objętości nowotworu; oraz częściowe usunięcie nowotworu, gdy usunięto mniej niż 66% objętości nowotworu. Na podstawie kolejnych wyników MRI określano zachowanie nowotworu jako: progresywne, gdy zaobserwowano nawet niewielkie oznaki odrostu nowotworu, stabilne, gdy stan nowotworu pozostawał taki sam oraz regresywne gdy objętość nowotworu zmniejszała się.
Analiza próbek krwi, moczu i tkanek
Próbki krwi i moczu analizowano standardowymi metodami przed transferem genów, w pierwszym dniu po operacji oraz co tydzień podczas hospitalizacji, z wyjątkiem różnicowego zliczania leukocytów, które wykonywano co drugi dzień podczas podawania GCV. Przeciwciała przeciwwirusowe oznaczano przed transferem genów i w dwa tygodnie po transferze genów. PCR i testy na obecność wirusów typu dzikiego wykonano pobrawszy próbki osocza i moczu przed transferem genów i w 3, 5, 7 i 21 dni po transferze genów.
Diagnozę histologiczną wykonano z użyciem zamrożonych skrawków histologicznych podczas operacji i później potwierdzono z użyciem parafinowych skrawków histologicznych metodą barwienia hematoksyliną-eozyną i GFAP (Boehringer). Aktywność proliferacyjną nowotworów zmierzono przez barwienie Ki67 (Dako). Po wycięciu nowotwory transferowane lacZ zanalizowano przez wybarwienie X-gal w sposób opisany w Puumalainen i inni, Hum. Gene Ther., 9: 1769-1774 (1998).
Neuropsychologia
Testy neuropsychologiczne wykonano w celu określenia funkcji poznawczych oraz jakości życia przed operacją i co drugi miesiąc po leczeniu. Funkcje pamięciowe określano z zastosowaniem skali Wechsler Memory Scale (WMS), która zawiera siedem podtestów badających zdolności pamięci krótkotrwałej, test uczenia skojarzeniowego, opóźnienie przypominania sobie, skupienie i elastyczność procesów umysłowych. Jakość życia oceniono według standaryzowanej oceny zaburzeń snu, podatności na zmęczenie, funkcji pamięciowych, zaburzeń somatycznych, nastroju, funkcji czuciowych i ruchowych, napięcia, aktywności, depresji, podrażnienia, braku efektywności oraz niepewności. Pacjentów transfekowanych LacZ nie poddawano testom neuropsychologicznym.
Statystyka
Analizę statystyczną wyników MRI wykonano z zastosowaniem testu Kruskala Wallisa dla
SPSS. Wyniki pacjentów analizowano dokładnym testem Fishera dla SPSS. Statystykę analiz laboratoryjnych i neuropsychologicznych wykonano z zastosowaniem Anova dla SPSS.
PL 193 076 B1
Wyniki
W poniższej tabeli zestawiono wyniki doś wiadczeń terapii genowej. Wszystkich pacjentów leczono przez usunięcie nowotworu. Komórki pakujące retrowirusy (PA317/tk) zastosowano u siedmiu pacjentów, a adenowirusy (Adv/tk) u siedmiu pacjentów. Jeden pacjent (#) był poddany powtórzonemu leczeniu komórkami PA317/tk dla dwóch różnych nowotworów.
W sześciu przypadkach nowotwory były powstałymi de novo, w innych przypadkach były one nawrotami po poprzednich operacjach (op), radioterapii (rd) lub chemioterapii (ch). Nowotwory były umiejscowione w płacie skroniowym (temp), potylicznym (occ), czołowym (front) lub ciemieniowym (pariet). (Sin) oznacza stronę lewą, a (dx) stronę prawą. Przeciwciała przeciwko wirusowi oznaczono w krwi obwodowej przed terapią i w dwa tygodnie po terapii genowej.
Diagnoza potwierdziła glejaka (gb) u 82% pacjentów, u dwóch pacjentów stwierdzono gwiaździaka anaplastycznego (aa) i u dwóch stwierdzono skąpodrzewiaka anaplastycznego (ao). Aktywność proliferacyjną nowotworów oceniono przez immunohistochemiczne wybarwienie ki67. Tożsamość nowotworów potwierdzono przez barwienie immunologiczne kwaśnego włóknistego białka glejowego (GFAP).
Wyniki podano w miesiącach i (*) wskazuje śmierć pacjenta. Różnica według dokładnego testu Fishera pomiędzy pacjentami leczonymi retrowirusami i adenowirusami pod względem przeżywalności była znacząca (p < 0,05).
Pierwsze pooperacyjne badanie metodą MRI (poop.) wykonywano w 1 lub 2 dni po operacji wycięcia nowotworu i podaniu terapii genowej, a drugie pooperacyjne badanie metodą MRI wykonywano w 3 miesią ce póź niej. Usunię cie nowotworu był o cał kowite (cał k.), gdy usunię to ponad 98% masy nowotworu, subtotalne (subtot.), gdy usunięto 66%-98% i częściowe (część.), gdy usunięto mniej niż 66% nowotworu.
W kolejnych badaniach metodą MRI wzrost nowotworu okreś lano jako progresywny (prog.), gdy stwierdzono nawet niewielkie oznaki odrostu nowotworu. Różnice w progresywnym wzroście pomiędzy pacjentami leczonymi z użyciem retrowirusów i adenowirusów według wyników MRI były znaczące (p < 0,05); Kruskal Wallis test. NA = nie analizowano.
Transfer genów był bezpieczny klinicznie zarówno w przypadku wektorów retrowirusowych, jak i adenowirusowych i nie stwierdzono żadnych poważ nych skutków ubocznych. Jednakże napady padaczkowe wzrosły u dwóch pacjentów otrzymujących adenowirusy, ale obu tych pacjentów doświadczyło wcześniej objawów padaczkowych.
U jednej pacjentki odnotowano częściowy odwracalny niedowład połowiczny i afazję jako powikłania powstałe w wyniku usunięcia dwuogniskowego guza czołowego. Poddano ją terapii genowej z uż yciem komórek pakujących retrowirusy, w połączeniu z usunięciem nowotworu. U dwóch pacjentów stwierdzono reakcje gorączkowe po transferze genów za pomocą adenowirusa z otwarciem komory. Temperatura ciała wzrosła do 39,0°C, ale reakcje te były krótkotrwałe i odwracalne bez jakichkolwiek pozostających objawów.
Nie stwierdzono większych zmian w rutynowych pomiarach laboratoryjnych. Tylko u jednego pacjenta zaobserwowano łagodną i odwracalną leukopenię podczas leczenia GCV bez objawów. Przeciwciała przeciw adenowirusowi wzrosły znacząco u 3 z 7 pacjentów leczonych Adv/tk; u dwóch także obserwowano reakcje gorączkowe.
Nie stwierdzono znaczących zmian w działaniu wątroby i nerek. Nie stwierdzono dostarczenia ogólnoustrojowego wirusów w próbkach osocza i moczu metodą PCR i w testach na obecność wirusów typu dzikiego. Próbki pośmiertne od jednego pacjenta zanalizowano metodą PCR, co wykazało, że nowotwór i wszystkie inne zbadane tkanki dawały wynik negatywny względem transgenu 6 miesięcy po transferze genu.
Wyniki kolejnych MRI wykazały brak skuteczności lub niewielką skuteczność terapii genowej z uż yciem komórek pakującymi retrowirusy. U wszystkich pacjentów zanotowano progresywną chorobę w trzy miesiące po wycięciu nowotworu i terapii genowej. W przypadku terapii genowej z zastosowaniem adenowirusów wyniki MRI były znacząco (p < 0,05) lepsze ze stabilną chorobą u 3 z 7 pacjentów w trzy miesiące po leczeniu.
W porównaniu z grupą kontrolną leczoną lacZ, nie stwierdzono jakiegokolwiek wzrostu prze ż ywalności pacjentów w grupie, której podano retrowirusy. Różnica pomiędzy wynikami dla pacjentów, którym podano retrowirusy i adenowirusy, była znacząca (p < 0,05).
PL 193 076 B1
| Nr pa- cjenta | Wiek/ /płeć | Dg | Umiejscowienie guza | Ki67 | GFAP | Wcześniejsze leczenie | Terapia genowa | Wirus ab | 1 .poop MRI | 2.poop. MRI | Miesiące przeżycia |
| 1 | 67/M | gb | occ dx | 20% | + | - | Retro/LacZ | rubella | NA | NA | 3* |
| 2 | 37/M | gb | front sin | 20% | + | op+rad+ch | Retro/LacZ | - | NA | NA | 10* |
| 3 | 63/K | gb | temp dx | 25% | + | - | Adv/LacZ | - | NA | NA | 7* |
| 4 | 44/K | ao | front sin | 25% | + | op+rad | Adv/LacZ | - | NA | NA | 5* |
| 5 | 45/M | gb | temp sin | 40% | + | - | Adv/LacZ | - | NA | NA | 12* |
| 6 | 32/M | ao | front dx | 14% | + | op+rad+ch | Adv/LacZ | adeno64 | NA | NA | 10* |
| 7 | 39/K | aa | temp dx | 15% | + | op+rad | Adv/LacZ | - | NA | NA | 11* |
| 8 | 36/M | gb | temp sin | 15% | + | - | PA317/tk | - | część. | prog. | 13* |
| 9# | 64/M | gb | occ sin | 14% | + | - | PA317/tk | - | subtot. | prog. | - |
| 10 | 44/K | gb | temp dx | 15% | + | op+rad | PA317/tk | - | subtot. | prog. | 7* |
| 11# | 65/M | gb | occ sin | 14% | + | op+rad | PA317/tk | - | subtot. | prog. | 8* |
| 12 | 45/K | gb | temp dx | 20% | + | op+rad | PA317/tk | - | subtot. | prog. | 9* |
| 13 | 70/K | gb | front sin, multif | 25% | + | - | PA317/tk | adeno64 | subtot. | prog. | 4* |
| 14 | 20/K | gb | temp et pariet dx | 30% | + | op+rad | PA317/tk | - | subtot. | prog. | 7* |
| 15 | 56/M | gb | temp et pariet dx | 25% | + | op+rad | PA317/tk | - | subtot. | prog. | 4* |
| 16 | 49/K | gb | temp dx | 10% | + | op+rad | Adv/tk | adeno64 | część. | prog. | 12* |
| 17 | 60/M | gb | temp dx | 20% | + | - | Adv/tk | - | subtot. | prog. | 10 |
| 18 | 61/M | gb | pariet sin | 30% | + | - | Adv/tk | ade- no>256 | część. | prog. | 9 |
| 19 | 39/M | aa | front sin | 40% | + | op+rad | Adv/tk | ade- no128 | część. | stabilny | 8* |
| 20 | 65/M | gb | parietoocc dx | 20% | + | - | Adv/tk | - | całk. | stabilny | 8 |
| 21 | 59/K | gb | fronto- pariet sin | <1% | + | op+rad | Adv/tk | - | subtot. | stabilny | 7 |
| 22 | 56/M | gb | pariet sin | 20% | + | op+rad | Adv/tk | - | subtot. | prog. o | 6§ |
Zastrzeżenia patentowe
Claims (6)
1. Zastosowanie adenowirusa mającego funkcjonalny gen kinazy tymidynowej do wytwarzania leku do traktowania jamy po nowotworze mózgu.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym adenowirus jest wolny od białek innych niż naturalnie związane z adenowirusem.
3. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, w którym gen kinazy tymidynowej stanowi gen kinazy tymidynowej wirusa Herpes Simplex.
4. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym lek zawiera stabilizator.
5. Zastosowanie według zastrz. 4, w którym stabilizatorem jest gliceryna.
6. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym nowotworem mózgu jest złośliwy glejak.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9824437.9A GB9824437D0 (en) | 1998-11-06 | 1998-11-06 | Gene therapy |
| PCT/EP1999/009017 WO2000028059A1 (en) | 1998-11-06 | 1999-11-05 | Adenovirus-mediated gene therapy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL349489A1 PL349489A1 (en) | 2002-07-29 |
| PL193076B1 true PL193076B1 (pl) | 2007-01-31 |
Family
ID=10842035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL349489A PL193076B1 (pl) | 1998-11-06 | 1999-11-05 | Zastosowanie adenowirusa mającego funkcjonalny gen kinazy tymidynowej |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6579855B1 (pl) |
| EP (1) | EP1135513B2 (pl) |
| JP (1) | JP4733833B2 (pl) |
| KR (1) | KR20020013473A (pl) |
| CN (1) | CN1184321C (pl) |
| AT (1) | ATE341639T1 (pl) |
| AU (1) | AU749451B2 (pl) |
| CA (1) | CA2348624C (pl) |
| CY (1) | CY1106198T1 (pl) |
| DE (1) | DE69933468T3 (pl) |
| DK (1) | DK1135513T4 (pl) |
| ES (1) | ES2273521T5 (pl) |
| GB (1) | GB9824437D0 (pl) |
| HU (1) | HUP0104046A3 (pl) |
| NO (1) | NO330776B1 (pl) |
| PL (1) | PL193076B1 (pl) |
| PT (1) | PT1135513E (pl) |
| WO (1) | WO2000028059A1 (pl) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0910950D0 (en) | 2009-06-24 | 2009-08-05 | Ark Therapeutics Ltd | Filtration |
| GB0916997D0 (en) | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Ark Therapeutics Ltd | Combination therapy |
| US20130296407A1 (en) * | 2011-01-18 | 2013-11-07 | Ark Therapeutics, Ltd. | Combination Therapy for Cancer |
| GB201100804D0 (en) * | 2011-01-18 | 2011-03-02 | Ark Therapeutics Ltd | Drug combination |
| CN110917362A (zh) | 2012-02-07 | 2020-03-27 | 全球生物疗法有限公司 | 核酸输送的区室化方法及其组合物和应用 |
| WO2014193622A2 (en) * | 2013-05-08 | 2014-12-04 | Finvector Vision Therapies Limited | Treatment of operable high-grade glioma with sitimagene ceradenovec gene therapy and ganciclovir |
| CA2920261C (en) | 2013-08-08 | 2018-04-03 | Global Bio Therapeutics, Inc. | Clamp device for minimally invasive procedures and uses thereof |
| DE102019000490A1 (de) | 2019-01-23 | 2020-07-23 | HAEMES Verwaltungsgesellschaft mbH | Verwendung von Oligonukleotiden für die Behandlung von Tumoren |
| JP2023510115A (ja) | 2019-12-20 | 2023-03-13 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 新規ｉｌ２アゴニストおよびそれらの使用方法 |
| US11673930B2 (en) | 2020-05-12 | 2023-06-13 | Regeneran Pharmaceuticals, Inc. | IL10 agonists and methods of use thereof |
| CN117597365A (zh) | 2021-05-04 | 2024-02-23 | 再生元制药公司 | 多特异性fgf21受体激动剂及其应用 |
| WO2023004282A2 (en) | 2021-07-19 | 2023-01-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Il12 receptor agonists and methods of use thereof |
| WO2023086812A1 (en) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Cd20-pd1 binding molecules and methods of use thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0662441B2 (ja) * | 1986-02-18 | 1994-08-17 | 花王株式会社 | 抗腫瘍物質徐放性製剤 |
| US5631236A (en) * | 1993-08-26 | 1997-05-20 | Baylor College Of Medicine | Gene therapy for solid tumors, using a DNA sequence encoding HSV-Tk or VZV-Tk |
-
1998
- 1998-11-06 GB GBGB9824437.9A patent/GB9824437D0/en not_active Ceased
-
1999
- 1999-11-05 CN CNB998129305A patent/CN1184321C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-05 DE DE69933468T patent/DE69933468T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-05 EP EP99971860A patent/EP1135513B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-05 ES ES99971860T patent/ES2273521T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-05 KR KR1020017004945A patent/KR20020013473A/ko not_active Application Discontinuation
- 1999-11-05 JP JP2000581225A patent/JP4733833B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-05 AU AU13851/00A patent/AU749451B2/en not_active Ceased
- 1999-11-05 HU HU0104046A patent/HUP0104046A3/hu not_active Application Discontinuation
- 1999-11-05 PL PL349489A patent/PL193076B1/pl unknown
- 1999-11-05 DK DK99971860.4T patent/DK1135513T4/da active
- 1999-11-05 WO PCT/EP1999/009017 patent/WO2000028059A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-11-05 PT PT99971860T patent/PT1135513E/pt unknown
- 1999-11-05 CA CA2348624A patent/CA2348624C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-05 AT AT99971860T patent/ATE341639T1/de active
- 1999-11-05 US US09/830,725 patent/US6579855B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-05-04 NO NO20012220A patent/NO330776B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-13 CY CY20061101473T patent/CY1106198T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO330776B1 (no) | 2011-07-11 |
| PT1135513E (pt) | 2006-12-29 |
| CY1106198T1 (el) | 2011-06-08 |
| CA2348624A1 (en) | 2000-05-18 |
| CN1325450A (zh) | 2001-12-05 |
| DE69933468D1 (de) | 2006-11-16 |
| PL349489A1 (en) | 2002-07-29 |
| CN1184321C (zh) | 2005-01-12 |
| CA2348624C (en) | 2012-07-31 |
| AU1385100A (en) | 2000-05-29 |
| WO2000028059A1 (en) | 2000-05-18 |
| GB9824437D0 (en) | 1999-01-06 |
| DE69933468T3 (de) | 2012-01-19 |
| DK1135513T3 (da) | 2006-11-27 |
| HUP0104046A2 (hu) | 2002-01-28 |
| DK1135513T4 (da) | 2011-11-21 |
| JP4733833B2 (ja) | 2011-07-27 |
| DE69933468T2 (de) | 2007-01-11 |
| US6579855B1 (en) | 2003-06-17 |
| ATE341639T1 (de) | 2006-10-15 |
| JP2002529097A (ja) | 2002-09-10 |
| KR20020013473A (ko) | 2002-02-20 |
| EP1135513A1 (en) | 2001-09-26 |
| AU749451B2 (en) | 2002-06-27 |
| HUP0104046A3 (en) | 2003-09-29 |
| ES2273521T3 (es) | 2007-05-01 |
| NO20012220D0 (no) | 2001-05-04 |
| EP1135513B1 (en) | 2006-10-04 |
| ES2273521T5 (es) | 2011-12-28 |
| NO20012220L (no) | 2001-05-04 |
| EP1135513B2 (en) | 2011-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4213201B2 (ja) | 固型腫瘍、乳頭腫および疣贅の遺伝子治療 | |
| US6979677B1 (en) | Inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation | |
| Germano et al. | Adenovirus/herpes simplex-thymidine kinase/ganciclovir complex: preliminary results of a phase I trial in patients with recurrent malignant gliomas | |
| US7182944B2 (en) | Methods of increasing distribution of nucleic acids | |
| Tai et al. | Gene transfer of glial cell line-derived neurotrophic factor promotes functional recovery following spinal cord contusion | |
| US20040229833A1 (en) | Therapeutic use of cis-element decays in vivo | |
| Goodman et al. | Adenoviral-mediated thymidine kinase gene transfer into the primate brain followed by systemic ganciclovir: pathologic, radiologic, and molecular studies | |
| JP2003277272A (ja) | ＤＮＡ損傷剤およびр５３を含有する組成物 | |
| US9149543B2 (en) | Methods and models for rapid, widespread delivery of genetic material to the CNS using non-viral, cationic lipid-mediated vectors | |
| PL193076B1 (pl) | Zastosowanie adenowirusa mającego funkcjonalny gen kinazy tymidynowej | |
| JP2022504260A (ja) | ＧＭ１ガングリオシドーシスおよびＧＭ２ガングリオシドーシスの処置のためのｒＡＡＶベクター | |
| US6423692B2 (en) | Method of enhancing the effectiveness of DCK phosphorylated molecules | |
| JP2003518077A (ja) | 血管形成および血管透過性の調節剤および阻害剤 | |
| Maria et al. | Gene therapy for pediatric brain tumors | |
| US20230190959A1 (en) | Nucleic acid-based compositions and methods for treating small vessel diseases | |
| CA2332634A1 (en) | Repression of cell transformation with human pea3 | |
| MXPA01004410A (es) | Terapia de gen mediada por adenovirus | |
| Davidson et al. | Adenoviral-mediated gene transfer: potential therapeutic applications | |
| Duzgunes | Sitimagene ceradenovec, a gene therapeutic for the treatment of glioma | |
| ES2354811T3 (es) | Factor inductor del factor nuclear kb. | |
| Leone et al. | Aspartoacylase Gene Transfer to the Mammalian Central Nervous System with Therapeutic Implications for |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RECP | Rectifications of patent specification |